KR20040021692A

KR20040021692A - 화장용 조성물 및 피부 처리 방법

Info

Publication number: KR20040021692A
Application number: KR10-2004-7001982A
Authority: KR
Inventors: 레베카 수잔 진저; 앤드류 이즌 메이어스; 줄리아 사라 로저스; 폴라 레이첼 예이츠
Original assignee: 유니레버 엔.브이.
Priority date: 2001-08-10
Filing date: 2002-08-08
Publication date: 2004-03-10
Also published as: WO2003013462A1; AU2002324040C1; MXPA04001289A; GB0119583D0; AU2002324040B2; ZA200400890B; EP1414400A1; CA2456780A1; CN1622798A; JP2005503379A; US20030039672A1

Abstract

본 발명은 3개 이상의 이중 결합을 갖는, 바람직하게는 헥사데카트리엔산일 수 있는 불포화 C16 지방산 및(또는) 그의 유도체를 포함하는 조성물을 국소 도포함으로써 노화된 피부, 민감성 피부, 건성 피부, 박리성 피부, 주름진 피부 및(또는) 광손상된 피부를 처리하는 화장 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 이러한 화장 처리에 적합한 조성물에 관한 것이다.

Description

화장용 조성물 및 피부 처리 방법 {Cosmetic Composition and Method of Treating Skin}

본 발명은 3개 이상의 이중 결합을 갖는 고도로 불포화된 C16 지방산, 특히 헥사데카트리엔산을 포함하는 화장용 조성물, 및 이 조성물을 사용하는 것을 포함하는, 피부의 상태 및 외관을 향상시키는 화장 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 피부의 상태 및 외관을 향상시키기 위한 국소용 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

피부는 피부 질환, 환경적 혹사 (바람, 냉방, 중앙난방 등) 또는 정상적인 노화 과정 (자연 노화) (이 과정은 피부가 태양에 노출 (광노화)되면 가속될 수도 있음)을 통해 손상된다. 최근 수년 동안, 피부의 외관 및 상태를 개선하는 화장 조성물 및 화장 방법에 대한 요구가 크게 증가해 왔다.

소비자들은, 잔주름, 주름, 처짐, 색소 과잉침착 및 노인성 반점 같은, 피부의 자연 노화 및 광노화의 시각적 증후를 치료하거나 지연시키는 "노화 방지" 화장품을 점점 더 많이 찾고 있다.

또한, 소비자들은 흔히 화장품으로부터 노화 방지 이외에도 다른 유익한 효과를 얻기를 기대한다. "민감성 피부"의 개념은 소비자들에게서 민감성 피부, 건성 피부 및(또는) 박리성 피부의 외관 및 상태를 개선시키고, 발적 (red) 피부 및(또는) 자극된 피부를 진정시키는 화장품에 대한 욕구를 불러 일으켰다. 소비자들은 또한 반점, 여드름, 흠집 등을 치료하는 화장품을 원한다.

많은 사람들은 그들의 피부에 색소가 침착되는 정도에 관심을 갖는다. 예를 들어, 노인성 반점 또는 기미가 있는 사람들은 이러한 색소침착성 반점이 덜 뚜렷해지기를 바랄 수 있다. 다른 사람들은 햇빛에 노출되어 유발된 피부의 색소침착을 감소시키거나, 이들의 선천적인 피부색을 미백화하기를 원할 수 있다. 이러한 요구를 충족시키기 위해, 멜라닌세포에서 색소 생산을 감소시키는 제품을 개발하기 위한 많은 시도가 있어 왔다. 그러나, 지금까지 확인된 물질들은 바람직하지 못한 부작용, 예를 들어 피부 자극을 나타내는 경향이 있다.

결국, 이러한 물질들은 화장용으로는 적합하지 못하거나, 원하는 것보다 적은 피부 미백 효과를 발휘하는 농도에서 적용될 수 있을 뿐이다. 여러가지 피부 미백 물질들의 조합을 이용하는 것은 유해한 부작용을 감소시키기 위해 고려될 수 있지만, 이러한 조합을 사용하게 되면 경쟁 효과로 인해 피부 미백 작용이 감소되기도 하는 실질적인 위험이 존재한다. 따라서, 화장용 피부 미백 제품의 효과를, 특히 이러한 제품이 피부를 자극하지 않게끔 향상시킬 필요가 있는 실정이다.

본 발명의 가장 넓은 측면에서, 본 발명자들은 바람직하게는 3개 이상의 이중 결합을 포함하며 4개 또는 5개의 이중 결합을 포함할 수도 있는 고도로 불포화된 C16 지방산을 사용하면 피부 보호상의 이점을 갖는 국소용 조성물을 제공하는 데 유익할 수 있음을 밝혀냈다.

본 발명에 이르러, 본 발명자들은 3개 이상의 이중 결합을 갖는 고도로 불포화된 C16 지방산 또는 그의 유도체를 포함하는 국소용 조성물을 피부에 적용함으로써 자연 노화 또는 광노화로 인한 정상 피부의 증상, 예를 들어 잔주름, 주름, 처짐, 색소 과잉침착 및 노인성 반점을 효과적으로 치료 및 예방할 수 있음을 밝혀냈다. 또한, 본 발명자들은 바람직한 측면에서 3개의 이중 결합을 포함할 수 있는 상기 불포화 C16 지방산을 화장용 조성물에 사용하여 피부에 노화 방지 이외의 다른 이익도 제공할 수 있으며, 예를 들어 민감성 피부 및(또는) 자극된 피부를 진정시키고, 피부 탄력을 향상시키고, 피부의 건조/박리를 감소시키고, 피부를 미백화할 수 있음을 알아냈다.

따라서, 본 발명의 제1 측면에 따라, 3개 이상의 이중 결합을 갖는 고도로 불포화된 C16 지방산 및 그의 유도체를 유효량 포함하는, 인간 피부에 적용하기 위한 국소용 조성물이 제공된다.

본 발명에 따라 사용하기에 적합한 고도로 불포화된 지방산은 3개 이상의 이중 결합을 포함하며, 4개 또는 5개의 이중 결합을 포함할 수도 있는 C16 지방산이다.

바람직한 C16:3 지방산은 히라곤산 (hiragonic acid)으로도 알려져 있는 헥사데카트리엔산 (C16:3 (c7, c10, c13))이다. 이 산은 광합성 잎, 예를 들어 평지 잎, 양치류 지질, 은행나무 잎, 감자 잎, 토마토 잎 및 시금치에서 생성되는 것으로 알려져 있다. 상기 산은 또한 브라시카세애 (Brassicaceae) 식물, 예를 들어 양고추냉이, 양배추, 순무, 차이니스 머스타드 (Chinese mustard), 꽃양배추 및 물냉이의 잎에서 생성될 수도 있다.

고도로 불포화된 C16 지방산의 다른 적합한 것으로는 하기와 같은 것들이 포함된다:

헥사데카트리엔산 (C16:3 (c6, c9, c12)). 이 산은 미세 조류인 스켈레토네마 코스타툼 (Skeletonema Costatum)으로부터 얻을 수 있다 [Virron et al; Analytica Chimica Acta 409 (200), 257-266];

헥사데카테트라엔산 (C16:4 (c4, c7, c10, c13)). 이 물질은 오스트레일리아 해산 스펀지인 캘리스펀지아 (Callyspongia) 종으로부터 얻을 수 있다 [Urban and Capan, Lipids 32 (1997), 6,675-77];

10-히드록시 헥사데카트리엔산 (c7, t11, c13). 이는 렘나 마이너 (Lemna Minor)(개구리밥)로부터 얻을 수 있다 [Previtere and Monaco, Phytochemistry 22 (1983), 1445-1446];

7-히드록시 헥사데카트리엔산 (t8, c10, c13). 이는 엘로데아 카노덴시스 (Elodea Canodensis)로부터 얻을 수 있다 [Previtere et al, Phytochemistry 24 (1985), 1838-1840]. 이 물질은 또한 10-히드록시 헥사데카트리엔산의 공급원일 수도 있다 (상기 참조);

헥사데카테트라엔산 (C16:4 (c6, c9, c12, c15)). 이는 남극해 빙상 규조류인 스타우로네이스 암피옥시스 (Stauroneis amphioxys)로부터 얻을 수있다 [Gillin et al, Phytochemistry 20 (1981), 1935-37]. 이 물질은 또한 C16:3 (c6, c9, C12)의 공급원일 수도 있다;

헥사데카펜타엔산 (C16:5 (c4, c7, t9, t11, c13)). 이는 해양 미세 녹조류인 아나디오메네 스텔라타 (Anadyomene stellata)에 존재할 수 있다 [Mikhailova MV et al, Lipids 1995, 30, 583].

해양 식물성플랑크톤 (실린드로테카 클로스테리움 (Cylindrotheca closterium) 및 짐노디니움 미키모토이 (Gymnodinium mikimotoi))은 또한 12번 위치에 이중 결합을 갖는 적합한 C16:3 불포화 지방산을 포함하는 것으로 기재되어 있다 [예, C16:3 (c6, c9, c12), Journal of the Japanese Society for Food Science and Technology, Nippon Shokuhin Kagaka Kogaku Kaishi 46:(1), 29-33, 1999].

적합한 C16:3 오메가 3 지방산 (예, C16:3 (c7, c10, c13))은 또한 코디움 (Codium) 종 (미세 녹조류)에 존재할 수도 있다 [Phytochemistry 48:(8) 1335-1339, Aug. 1998].

아나바에나 (Anabaena) 및 노스토크 (Nostoc) 속의 비-공생 (free living) 질소 고정 시아노박테리아도 C16:4 시스-4 및 C16:3 시스-6 지방산의 공지된 공급원이다 ["Differentiation of Free living Anabaena and Mostoc Cyanobacteria on the basis of fatty acid composition", Caudales R., Well J.M., International Journal of Systematic Bacteriology 42:(2) 246-251, April 1992].

본 발명에 따라 사용하기에 바람직한 물질은 3개의 이중 결합을 갖는 C16 지방산이며, 본 발명에 따른 조성물에 사용하기에 특히 바람직한 물질은 헥사데카트리엔산 (C16:3 (c7, c10, c13))이다.

본 발명의 다른 측면에 따라, 고도로 불포화된 C16 지방산 및(또는) 그의 유도체를 포함하는 국소용 조성물을 피부에 적용하는 것을 포함하는, 주름진 피부, 처진 피부, 노화된 피부 및(또는) 광손상된 피부의 치료/예방; 피부의 콜라겐 침착 증가, 피부의 데코린 생산 증가, 조직 회복의 증대; 피부 미백화; 차단층 형성 증대를 통한 피부 상태 및 탄력의 향상; 건성 피부 및 박리성 피부의 치료; 자극된 피부, 발적 (red) 피부 및(또는) 민감성 피부의 진정; 및 피부의 조직성, 매끄러움 및(또는) 견고성 향상으로부터 선택되는 하나 이상의 피부 보호 이익을 제공하는 화장 방법이 제공된다.

본 발명은 또한 주름진 피부, 처진 피부, 노화된 피부 및(또는) 광손상된 피부의 치료/예방; 피부의 콜라겐 침착 증가, 피부의 데코린 생산 증가, 조직 회복의 증대; 피부 미백화; 차단층 형성 증대를 통한 피부 상태 및 탄력의 향상; 건성 피부 및 박리성 피부의 치료; 자극된 피부, 발적 피부 및(또는) 민감성 피부의 진정; 및 피부의 조직성, 매끄러움 및(또는) 견고성 향상으로부터 선택되는 하나 이상의 피부 보호 이익의 제공을 위한 국소용 조성물의 제조에 있어서 고도로 불포화된 C16 지방산 및(또는) 그의 유도체의 용도를 포함한다.

따라서, 본 발명의 방법 및 고도로 불포화된 상기 C16 지방산의 사용은 탄력이 향상된 매끄럽고 유연한 피부를 촉진시키고, 피부색을 향상시켜 주름 및 노화된 피부의 외관을 감소 또는 지연시키는 노화 방지 이익을 제공할 수 있다. 외관, 조직 및 상태, 특히 피부의 광채, 투명도 및 전반적으로 어려보이는 외관에 대한 전체적인 향상이 달성될 수 있다. 본 발명의 방법 및 그의 이용은 또한 민감성 피부 및(또는) 자극된 피부를 진정시키고 가라앉히는 데 이롭다. 고도로 불포화된 C16지방산은 또한 멜라닌 생산을 감소시키기 위해 인간 피부에 국소 적용됨에 따라 피부를 미백화하는 국소용 조성물에 유용할 수도 있다. 따라서, 본 발명의 방법은 이롭게는 광범위한 피부 보호 이익을 제공한다.

본원에서 사용되는 용어 "치료(treating)"의 범위에는 잔주름 피부, 노화된 피부, 광손상 피부 및(또는) 자극된 피부와 같은 전술된 피부 증상을 감소, 지연 및(또는) 방지하고, 피부가 주름지는 것을 방지 또는 감소시키고 피부의 유연성, 견고성, 매끄러움, 유순함 및 탄력 및 피부 미백화를 증대시킴으로써, 피부 상태를 전반적으로 향상시키고 피부의 외관 및 결을 개선하는 것이 포함된다. 본 발명에 따라 불포화 지방산 및(또는) 그의 유도체를 사용하는 화장 방법 및 그의 용도는 이미 주름지고 노화되고 광손상되고 자극된 상태의 피부를 치료하거나, 정상적인 노화/광노화 과정으로 인해 전술한 바와 같이 악화된 변화를 방지하거나 감소시키는 데 유용할 수 있다.

본 발명은 또한 고도로 불포화된 (예, C16:3) 유리 지방산의 유도체, 특히 상기 지방산의 모노히드록시 유도체를 포함한다.

한 실시양태에서, 본 발명에 따른 불포화 지방산 잔기는 7번, 10번 및 13번 위치에 이중 결합을 갖는 것이 편리하다. 바람직한 유도체로는 상기 산의 카르복실기의 치환으로부터 유도된 것들, 예를 들어 에스테르류 (예, 레티닐 에스테르, 트리글리세라이드 에스테르, 모노글리세라이드 에스테르, 디글리세라이드 에스테르, 포스포에스테르), 아미드류 (예, 세라미드 유도체), 염류 (예, 알칼리 금속염, 알칼리 토금속염 및 암모늄염); 및(또는) C18 탄소쇄의 치환으로부터 유도된 것들,예를 들어 알파 히드록시 및(또는) 베타 히드록시 유도체가 포함된다.

가수분해되는 경우 본 발명의 주제 물질인 고도로 불포화된 지방산을 제공하는 트리글리세라이드 에스테르 유도체의 경우, 글리세롤 주쇄상 불포화 C16 지방산 치환체의 모든 위치상 이성질체가 포함된다. 트리글리세라이드는 하나 이상의 고도로 불포화된 지방산 잔기를 포함해야 한다. 예를 들어, 글리세롤 주쇄상의 3개의 에스테르화가능한 위치들 중에서 1번 및 2번 위치가 고도로 불포화된 C16 지방산으로 에스테르화되고 3번 위치가 다른 지질에 의해 에스테르화되거나 또는 글리세롤 주쇄가 1번 및 3번 위치에서 C16 지방산에 의해 에스테르화되고 2번 위치에서 또 다른 지질로 에스테르화될 수 있다.

따라서, 불포화 산 트리글리세라이드 중 풍부할 수 있는 오일은 본 발명에 사용하기에 또한 적합하다.

고도로 불포화된 지방산의 적합한 공급원은 넓은 형태로는 다양한 식물 공급원 중에 존재하는 글리세롤의 모노- 및 디-사카라이드 에스테르 종류에 해당하는 모노- 및 디-갈락토실 디글리세라이드이다.

고도로 불포화된 지방산이 본 명세서에 언급되는 경우, 고도로 불포화된 C16 지방산 잔기를 포함하는 그의 유도체가 또한 포함되는 것으로 이해해야 한다. "고도로 불포화된 지방산 잔기"는 지방산 유도체의 고도로 불포화된 지방 아실 부분(들)을 의미한다.

본 발명에 따라 사용되는 고도로 불포화된 지방산은 본 발명의 국소용 조성물 중에 유효량 존재한다. 통상적으로, 활성제의 총량은 조성물 중 0.0001 중량％내지 50 중량％의 양으로 존재한다. 최저 비용의 이점을 극대화하기 위해서는 활성제의 총량이 보다 바람직하게는 0.01％ 내지 10％, 가장 바람직하게는 0.1％ 내지 5％이다.

본 발명에 따라 사용되는 조성물은 또한 고도로 불포화된 활성 지방산 또는 그의 유도체에 대한 희석제, 분산제 또는 담체로 작용하는 피부학적/화장품용으로 허용되는 비히클을 포함한다. 비히클은 피부 보호 제품에 통상적으로 사용되는 물질, 예를 들어 물, 지질 또는 고상 완화제, 실리콘 오일, 유화제, 용매, 습윤제, 증점제, 분말제 및 추진제 등을 포함할 수 있다.

비히클은 일반적으로 조성물의 5 중량％ 내지 99.9 중량％, 바람직하게는 25 중량％ 내지 80 중량％를 차지하며, 다른 화장 보조제의 부재하에 조성물의 나머지 부분을 차지할 수 있다.

고도로 불포화된 지방산 활성제 이외에도, 피부에 이로운 다른 특정 활성제, 예를 들어 선스크린제, 다른 피부 미백제 및 피부 선탠제가 포함될 수도 있다. 비히클은 또한 방향 물질, 유백제, 보존제, 착색제 및 완충제와 같은 보조제를 추가로 포함할 수도 있다. 다른 바람직한 보조제로는 공지된 다른 유익한 피부 보호제, 보습제, 피부 상태를 향상시키는 것으로 알려진 작용제, 특히 항산화제, 예를 들어 BHT, 토코페롤, 아스코르빌 아세테이트, 케르세틴 및 녹차 폴리페놀을 들 수 있다.

본 발명의 방법에서 사용되는 국소용 조성물을 제조하기 위해, 피부 보호 제품을 제조하는 데 사용되는 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 활성 성분을 일반적으로는 통상적인 방법으로 피부학적으로 허용되는 담체에 혼입한다. 활성 성분을 적합하게는 우선 조성물에 혼입되는 분취량의 물 또는 기타 용매 또는 액체에 용해 또는 분산시킬 수 있다. 바람직한 조성물은 수중유적형 또는 유중수적형 에멀젼이다.

조성물은 크림, 겔 또는 로션 등과 같은 통상적인 피부 보호 제품 형태일 수 있다. 조성물은, 헹궈내는 동안에도 활성 성분이 피부에 잘 부착되도록 하는 전달 시스템을 함유할 수 있는, 소위 "워시-오프 (wash-off)" 제품 (예를 들면, 목욕용 또는 샤워용 겔)의 형태일 수도 있다. 가장 바람직하게는 제품은 피부에 적용한 직후에 헹궈내지 않아도 되는 피부 도포용 제품인 "리브-온 (leave-on)" 제품이다.

조성물을 통상적인 방법으로 단지(jar), 병, 튜브, 롤-볼 (roll-ball) 등과 같은 임의의 적합한 형태로 포장할 수 있다.

본 발명의 방법은 치료를 요하는 피부에 대해 1일 1회 이상 수행할 수 있다. 피부 외관의 개선 효과는, 피부 상태, 본 발명의 방법에 사용된 활성 성분의 농도, 조성물의 사용량, 적용 빈도 및 달성 이익에 따라 통상적으로 2주 내지 6개월 후에 나타난다. 일반적으로, 소량 (예를 들면, 0.1 내지 5 ㎖)의 조성물을 적합한 용기 또는 도포기로부터 피부에 적용하고, 손 또는 손가락 또는 적합한 장치를 사용해서 피부에 펴 바르고/바르거나 문지른다. 이어서 조성물이 "리브-온" 제품인지 "린스-오프 (rinse-off)" 제품인지에 따라, 임의적으로 헹구는 단계를 수행할 수 있다.

본 발명을 보다 쉽게 이해시키기 위해, 단지 설명을 위해 하기 실시예를 제공한다.

하기에서 본 발명은 단지 예로서 설명될 것이다.

하기 실시예는 헥사데카트리엔산 (C16:3 (c7, c10, c13))의 노화 방지 효과를 입증한다.

본 출원인의 동시계류중인 유럽특허원 제 99908956.8호에도 기술되어 있듯이, 레틴산을 국소투여함으로써 생체내에서 제I형 프로콜라겐 및 데코린의 수준을 높일 수 있다. 이를 위해서, 상기 특허원중 "비교를 위해, 레틴산을 국소투여한 후 생체내 피부에서의 제I형 프로콜라겐 및 데코린의 수준 향상의 규명 (Identification of procollagen I and decorin upregulation in skin in vivo following topical retinoic acid treatment for comparative purposes)"이라는 제목이 붙은 부분이 전부 본원에 포함된다.

실시예 1

인간 피부 섬유아세포중 제I형 프로콜라겐 및 데코린 합성의 측정 방법

피부 섬유아세포-조절된 배지의 제조

2차 계대배양된(P2) 1차성(primary) 인간 포피 섬유아세포를 12-웰 플레이트에 10000 세포/cm²으로 접종하고, 10％ 송아지 태아 혈청이 보충된 둘베코스-변형 이글 배지 (Dulbeccos Modified Eagles Medium (DMEM))에서 5％ 이산화탄소 및 4％ 산소로 이루어진 대기중에서 24 시간동안 두었다. 이어서 세포를 무혈청 DMEM으로세척한 후, 신선한 무혈청 DMEM에서 추가로 60 시간동안 배양하였다. 이어서 섬유아세포 단층을 다시 무혈청 DMEM으로 세척하였다. 시약 및 비히클 대조물질을, 최종 부피가 0.4 ㎖/웰 (신선한 무혈청 DMEM)이 되게 세포에 첨가하고 (이것을 3벌 제조), 추가로 24시간동안 배양하였다. 이 섬유아세포-조절된 배지를 바로 분석하거나, 나중에 분석할 경우에는 액체 질소에서 급속동결시키고 -70 ℃에서 저장하였다. 이어서 세포수를 세고, 도트-블롯 (dot-blot) 분석으로부터 얻은 데이타를 세포수에 대해 표준화시켰다.

피부 섬유아세포-조절된 배지중 제I형 프로콜라겐 및 데코린 단백질의 도트-블롯 분석

비히클 (대조물질) 또는 시약으로 처리된 피부 섬유아세포-조절된 배지 샘플 을 20 mM 디티오트레이톨 (200 mM 원액을 1:10으로 희석한 것) 및 0.1％ 소듐 도데실설페이트 (10％ 원액을 1:100으로 희석한 것)로 보충하고, 잘 혼합한 후, 75 ℃에서 2분 동안 배양하였다. 175 cm²플라스크에 10000 세포/cm²으로 접종되고 전술한 바와 같이 무혈청 DMEM에서 유지된 섬유아세포로부터 순수 섬유아세포-조절된 배지를 단계적으로 희석함으로써 분석 기준을 마련하였다.

분석 샘플을, 바이오-라드 (Bio-Rad)의 96-웰 바이도-도트 장치 (Bio-Dot Apparatus)를 제품설명서에 제시된 대로 사용하여, 미리 습윤된 이모빌론-P (Immobilon-P) 전사막 (transfer membrane) 시트에 적용하였다 (이것을 3벌 제조). 웰 하나당 배지 약 200 ㎕를 적용하였다. 이 배지를, 중력이 있는 상태에서 막을통해 여과한 후 (30분), 막을 PBS (200 ㎕)로 2번 세척하였다. PBS 세척물을 중력이 있는 상태에서 막을 통해 여과하였다 (15분씩 2번). 이어서 바이오-도트 장치를 진공 매니폴드에 부착하고, 세번째로 및 최종적으로 PBS로 흡입 세척하였다. 이 장치를 떼어내고, 막을 회수하여 재빨리 원하는 대로 절단한 후, 4 ℃에서 차단 완충액에서 밤새 놓아두었다.

데코린 분석용 막을 PBS 중 3％(w/v) BSA / 0.1％(v/v) 트윈 20 (Tween 20)으로 차단하는 반면, 제I형 프로콜라겐 분석용 막은 PBS중 5％(w/v) 탈지분유 / 0.05％ 트윈 20으로 차단하였다. 그 다음날, 실온에서 2시간 동안 인간 제I형 프로콜라겐에 대한 1차 항체 (MAB1912; 래트 단클론성; 미국 캘리포니아주 테메큘라 소재의 케미콘 인터네셔날 인코포레이티드 (Chemicon Int. Inc.)) 또는 인간 데코린에 대한 1차 항체 (래빗 다클론성; 바이오제네시스 (Biogenesis))를 1:10000으로 희석한 것으로 막을 프로빙하였다. 이어서 막을 TBS/0.05％ 트윈 20 (5분씩 3번)으로 세척하고, 실온에서 1시간 동안¹²⁵I-결합된 항-래트 또는 항-래빗 F(ab')2 절편 (아머샴 (Amersham))을 1:1000으로 희석한 것과 함께 배양하였다.

이어서 이모빌론 스트립을 다시 TBS/트윈 20 (5분씩 3번)으로 세척한 후, 실온에서 공기중에서 건조시켰다. 건조된 막을 셀로판으로 감싸고 몰레큘라 다이나믹스 (Molecular Dynamics) 저장용 포스포르 스크린 (storage phosphor screen)에 16시간 내지 18시간 동안 노출시켰다. 노출이 끝나면, 노출된 스크린을 이미지콴트 (ImageQuant, 등록상표) 소프트웨어를 사용하여 포스포르이메이저(phosphorimager)(몰레큘라 다이나믹스 포스포르이미저 SF)로 스캔하였다. 이미지콴트의 정량화 도구를 사용하여 컴퓨터-보조 이미지 분석법으로 도트 세기를 평가하고, 세포수에 대해 표준화하고, 데코린과 제I형 프로콜라겐 합성에 대한 다양한 시약의 효과를, 비히클-처리된 대조물질의 값인 100의 임의 단위와 비교하여 결정하였다.

결과를 표준화하기 위해, 시험 물질의 효과를 임의의 단위 100으로 나타낸 비히클 처리된 대조군 값에 대해 상대적으로 결정하였다. 결과를 하기 표 1에 수치로 나타냈으며, 이 결과는 헥사데카트리엔산이 대조군에 비해 인간 피부 섬유아세포에서 데코린과 제I형 프로콜라겐 둘 다의 합성을 유의하게 상향조절한다는 것을 암시한다.

데코린 및 프로콜라겐 생산
헥사데카트리엔산 농도	프로콜라겐 수준	데코린 수준
1％ 에탄올(0)	100	100
1 μM	91.0	108.7
10 μM	184.2	115.4

실시예 2

3차 계대배양된(P3) 인간 포피 각질세포를 0.03 mM 칼슘의 둘베코스-변형 이글 배지 (DMEM)에서 96-웰 플레이트에 4000 세포/웰로 접종하였다. 처리전에 세포를 3일간 성장시켰다. 처리 비히클은 DMSO이었다. 처리 4일 후, 세포를 수확하고, 포스페이트 완충된 염수(PBS) 100 ㎕로 3회 세척하였다. 이어서 세포를 1％ 트리톤 X100, 50 mM 트리스 pH 8.0, 0.02 mM 류펩틴, 0.2 mM 펩스타틴 중에서 추출하였다. 이어서 추출물 60 ㎕/웰을 DNA 농도 (ng/웰)에 대해 분석하였다 (피코 그린 (Pico Green) DAN 분석, 몰레큘라 프로브 (Molecular Probes)).

그 다음, 세포를 PBS 200 ㎕ 중에서 세척한 다음 2％ SDS 100 ㎕로 세척하고, 20 mM DTT를 각 웰에 첨가하였다. 이어서 플레이트를 티터테크 (Titertek) 플레이트 밀봉재 (ICN)으로 밀봉하고, 공기가 밀폐된 습한 환경 (즉, 습한 종이로 라이닝된 밀봉 샌드위치 박스)내에서 60 ℃로 밤새도록 배양하였다. 이어서 추출물을 도트-블롯 장치 (바이오-라드)를 사용하여 중력이 있는 상태에서 PVDF 전사막 (바이오-라드)을 통해 여과하였다. 이어서 막을 증류수에서 세척한 다음 은으로 착색하였다 (바이오-라드 실버 스테인 키트 (Silver Stain kit)). 이어서 착색된 도트 블롯막을 포레틱스 (Phoretix) 분석 소프트웨어 (포레틱스 인터내셔날)를 사용하여 분석하였다.

결과를 하기 표 2 및 3에 나타냈다.

각질화된 외피 (envelope)
μM 헥사데카트리엔산	평균	SD	대조군(％)
0	17995	8860	-
0.1	17617	3664	98
0.5	24009	9571	133
1	36017	15579	200
10	40997	8617	227

DNA 결과 (ng/웰)
μM 헥사데카트리엔산	평균	SD	대조군(％)
0	1.66	0.189	-
0.1	0.98	0.23	59
0.5	1.48	0.18	89
1	1.27	0.18	76
10	1.13	0.26	68

상기 결과는 각질화된 외피의 생산이 1 μM 내지 10 μM의 헥사데카트리엔산의 사용에 반응하여 어떻게 증가하였는지를 보여준다. 이는 각질세포 분화가 증가하였음을 암시하며, 헥사데카트리엔산이 원위치 피부의 차단층 형성 및 탄력을 향상시킴을 시사한다.

실시예 3

하기 제제는 본 발명에 따른 방법 및 용도에 적합한 워터 크림 (water cream) 중 오일을 기재한다. 나타낸 비율(％)은 조성물의 중량 기준이다.

	중량％
미네랄 오일	4
헥사데카트리엔산	1.15
브리즈 (Brij) 56^*	4
알폴 (Alfol) 16RD^**	4
트리에탄올아민	0.75
부탄-1,3-디올	3
크산탄 검	0.3
방향 물질	적정량
부틸레이트화 히드록시 톨루엔	0.01
물	합하여 총 100
^브리즈 56은 세틸 알콜 POE(10)임^*알폴 16RD는 세틸 알콜임

실시예 4

하기 제제는 본 발명에 따른 에멀젼 크림을 기재한다.

전체 화학명 또는 CTFA 명칭	등록 상표명	중량％
헥사데카트리엔산		2.0
디소듐 EDTA	시퀘스테렌 (Sequesterene)Na2	0.05
마그네슘 알루미늄 실리케이트	비검 울트라 (Veegum Ultra)	0.6
메틸 파라벤	메틸 파라벤 (Methyl Paraben)	0.15
시메치콘	DC 안티폼 에멀젼(DC Antifoam Emulsion)	0.01
부틸렌 글리콜 1,3	부틸렌 글리콜 1,3	3.0
히드록시에틸셀룰로스	나트로졸 (Natrosol) 250HHR	0.5
글리세린, USP	글리세린 (Glycerine) USP	2.0
크산탄 검	켈트롤 (Keltrol) 1000	0.2
트리에탄올아민	트리에탄올아민 99％	1.2
스테아르산	프리스테렌 (Pristerene) 4911	3.0
프로필 파라벤 NF	프로필 파라벤 NF	0.1
글리세릴 히드로스테아레이트	네이처켐 (Naturechem) GMHS	1.5
스테아릴 알콜	라네트 (Lanette) 18 DEO	1.5
이소스테아릴 팔미테이트	프로타켐 (Protachem) ISP	6.0
C12-15 알콜 옥타노에이트	헤테스터 (Hetester) FAO	3.0
디메치콘	실리콘 플루이드 200(Silicone Fluid 200)(50 cts)	1.0
콜레스테롤 NF	콜레스테롤 NF	0.5
소르비탄 스테아레이트	소르비탄 스테아레이트	1.0
부틸레이트화 히드록시톨루엔	엠바녹스 (Embanox) BHT	0.05
토코페릴 아세테이트	비타민 E 아세테이트	0.1
PEG-100 스테아레이트	Myrj 59	2.0
소듐 스테아로일 락틸레이트	파티오닉 (Pationic) SSL	0.5
히드록시카프릴산	히드록시카프릴산	0.1
레티닐 팔미테이트	비타민 E 팔미테이트	0.06
알파-비사볼롤	알파-비사볼롤	0.2
물, DI		적정량,총 100

상기 실시예 3 및 4의 국소용 조성물은 둘 다 노화 또는 광노화에 의해 악화된 피부에 적용되는 경우 주름진 피부, 노화된 피부, 광손상된 피부 및(또는) 자극된 피부의 외관을 향상시키거나 또는 젊은 상태의 피부에 적용되는 경우 상기 악화성 변화를 방지하거나 지연시키는 데 도움을 주는 적합한 화장 처리를 제공한다. 본 발명의 조성물은 통상의 방식으로 가공할 수 있다.

Claims

(a) 3개 이상의 이중 결합을 갖는 유효량의 고도로 불포화된 C16 지방산 또는 그의 유도체 및 (b) 피부학적으로 허용되는 비히클을 포함하는 국소용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 지방산이 3개, 4개 또는 5개의 이중 결합을 갖는 것인 화장용 조성물.
제2항에 있어서, 상기 지방산이 3개의 이중 결합을 갖는 것인 화장용 조성물.
제3항에 있어서, 상기 불포화 C16 지방산이 (c7, c10, c13), (c6, c9, c12), (c7, t11, c13) 또는 (t8, c10, c13)의 이중 결합 배열을 갖는 것인 화장용 조성물.
제4항에 있어서, 상기 불포화 C16 지방산이 헥사데카트리엔산 (c16:3 (c7, c10, c13))인 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불포화 C16 지방산이 히드록시 C16 불포화 지방산인 화장용 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 피부상에서 가수분해되어 3개 이상의 이중 결합을 갖는 고도로 불포화된 C16 지방산을 제공하는 모노- 또는 디-사카라이드 글리세린 에스테르를 포함하는 화장용 조성물.
제7항에 있어서, 상기 모노- 또는 디-사카라이드 글리세린 에스테르가 모노- 또는 디-갈락토실 글리세라이드인 화장용 조성물.
3개 이상의 이중 결합을 갖는 불포화된 C16 지방산 및(또는) 그의 유도체를 포함하는 국소용 조성물을 피부에 적용하는 것을 포함하는, 주름진 피부, 처진 피부, 노화된 피부 및(또는) 광손상된 피부의 치료/예방; 피부의 콜라겐 침착 증가, 피부의 데코린 생산 증가, 조직 회복의 증대; 피부 미백화; 차단층 형성 증대를 통한 피부 상태 및 탄력의 향상; 건성 피부 및 박리성 피부의 치료; 자극된 피부, 발적 (red) 피부 및(또는) 민감성 피부의 진정; 및 피부의 조직성, 매끄러움 및(또는) 견고성 향상으로부터 선택되는 하나 이상의 피부 보호 이익을 제공하는 화장 방법.
주름진 피부, 처진 피부, 노화된 피부 및(또는) 광손상된 피부의 치료/예방; 피부의 콜라겐 침착 증가, 피부의 데코린 생산 증가, 조직 회복의 증대; 피부 미백화; 차단층 형성 증대를 통한 피부 상태 및 탄력의 향상; 건성 피부 및 박리성 피부의 치료; 자극된 피부, 발적 피부 및(또는) 민감성 피부의 진정; 및 피부의 조직성, 매끄러움 및(또는) 견고성 향상으로부터 선택되는 하나 이상의 피부 보호 이익의 제공을 위한 국소용 조성물의 제조에 있어서 3개 이상의 이중 결합을 갖는 불포화된 C16 지방산 및(또는) 그의 유도체의 용도.