MXPA02001030A - Composicion para el cuidado de la piel. - Google Patents

Abstract

Una composicion topica que comprende: (a) acido linoleico conjugado y/ derviados del mismo; (b) un acido retinoico, retinol, ester de retinilo y/o un inhibidor de LRAT/ARAT; y (c) un vehiculo dermatologicamente aceptable. Tales composiciones para el cuidado de la piel son utiles para tratar y/o prevenir condiciones de la piel normales, pero no deseables, seleccionadas del grupo que consiste de piel arrugada, colgada, fotodanada, piel seca y manchas de la edad y calmar piel sensible.

Description

COMPOSICIÓN PARA EL CUI DADO DE LA PIEL CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones tópicas para aplicación a la piel humana y a su uso para mejorar la condición y apariencia de la piel.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La piel es sometida a deterioro a través de desórdenes dermatológicos, abuso ambiental (viento, aire acondicionado y calefacción central) o a través del proceso de envejecimiento normal (cronoenvejecimiento), el cual puede ser acelerado por exposición de la piel al sol (fotoenvejecimiento). En años recientes, ha crecido enormemente la demanda de composiciones cosméticas y métodos cosméticos para mejorar la apariencia y condición de la piel. Los consumidores han buscado cada vez más productos cosméticos anti-envejecimiento que traten o retarden los signos visibles de piel cronoenvejecida y fotoenvejecida, tales como arrugas, l íneas, colgajos, hiperpigmentación y manchas de la edad. Los consumidores también buscan frecuentemente otros beneficios de productos cosméticos además de anti-envejecimiento. El concepto de piel sensible también a elevado la demanda del consumidor de productos cosméticos que mejoren la apariencia y condición de piel sensible, seca y/o reseca y para calmar piel roja y/o irritada. Los consumidores también desean productos cosméticos que tengan un efecto de control de aceite/sebo.

Muchas personas están preocupadas por el grado de pigmentación de su piel. Por ejemplo, personas con manchas de la edad o pecas pueden desear que tales manchas pigmentadas sean menos pronunciadas. Otros pueden desear reducir el obscurecimiento de la piel provocado por exposición a la luz solar o para aclarar su color de piel natural. Para satisfacer esta necesidad se han hecho muchos intentos para desarrollar productos que reducen la producción de pigmento en los melanocitos. Sin embargo, las substancias hasta ahora identificadas tienden a tener efectos laterales no deseables, por ejemplo irritación de la piel. En consecuencia, tales substancias no son adecuadas para uso cosmético, o pueden ser aplicadas solamente a una concentración a la cual su efecto aclarador de la piel es menor al deseado. Puede considerarse que usar una combinación de diferentes substancias aclaradoras de la piel reduce los efectos laterales adversos, pero existe un riesgo substancial que al usar tal combinación , la aclaración de la piel es reducida también debido a efectos de competencia. Por lo tanto, existe la necesidad de una mejora en la efectividad de productos cosméticos aclaradores de la piel, en particular de manera que no irriten la piel. Las composiciones cosméticas y dermatológicas para el cuidado de la piel mejoran la condición y apariencia de la piel , que comprenden esteres de triglicéridos de cadena larga de ácidos grasos esenciales poliinsaturados, los ácidos libes y sus sales de álcali o amonio son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, GB 21 81 349 A describe inter alia una composición compuesta de triglicéridos de ácido linoleico para mejorar ta suavidad y elasticidad de la piel. Un producto comercial , Linola Fett n, iafeA .Í-i i ej Dr. August Wolff Gmbh, está disponible para el tratamiento de enfermedades de piel seca, y dermatosis, el cual contiene inter alia una mezcla de los isómeros 9, 1 1 de ácido linoleico conjugado. El retinol (vitamina A) es un compuesto endógeno que ocurre de manera natural en el cuerpo humano y es esencial para la diferenciación de células epiteliales normales. Los derivados de vitamina A naturales y sintéticos (retinoides) han sido usados extensamente en el tratamiento de una variedad de desórdenes de la piel y han sido usados como agentes de reparación o renovación de la piel. El ácido retinoico, por ejemplo, ha sido empleado para tratar una variedad de condiciones de la piel, por ejemplo, acné, arrugas, psoriasis, manchas de la edad y decoloración. Ver, por ejemplo, Vahlquist, A. et al. , J. Invest. Dermatol. , Vol. 94, Holland D. B. y Cunliffe, W.J. (1 990), pp. 496-498; Ellis, C. N . et al. , "Pharmacology of Retinols in Skin" (Farmacolog ía de retinóles en la piel), Vasel, Karger, Vol. 3, ( 1 989), pp. 249-252; Lowe, N . J . et al. , "Pharmacology of Retinols in Skin" (Farmacolog ía de retinóles en la piel), Vol. 3, 81 989), pp. 240-248, solicitud de patente de PCT no. WO 93/19743. WO99/26588 describe cremas cosméticas anti-envejecimiento para la piel que comprenden ácido linoleico conjugado y opcionalmente ascorbato de retinoilo, el cual es un éster de ácido retinoico. Otras diversas solicitudes de patente incluyen descripciones de composiciones conteniendo ácido linoleico y retinol y/o sus derivados. Estas incluyen WO-A-98/13020, US.-A-5J59.556, US-A-5, 723, 139, EP-A-742 ,005 y US-A-5,451 ,405.

'' ' HJl'li í ....?t*~l I Sin embargo, sigue siendo una necesidad composiciones cosméticas efectivas alternativas para aplicación tópica a la piel para tratar/retardar los signos visibles de envejecimiento y piel dañada, tal como arrugas, líneas, colgajos, hiperpigmentación y manchas de la edad. Hemos encontrado ahora que el tratamiento y prevención efectivos de condiciones de la piel normales (pero cosméticamente no deseables) debido al cronoenvejecimiento o fotoenvejecimiento, tales como arrugas, líneas, colgajos, hiperpigmentación y manchas de la edad, pueden obtenerse a través de la aplicación de composiciones cosméticas a la piel, las cuales consisten de un ácido graso específico - ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo, en combinación con ácido retinoico, retinol o un éster de retinol (un éster de retinilo) y/o un inhibidor de la enzima acil CoA retinol transferasa (ARAT) o la enzima lecitina retinol acil transferasa (LRAT) (de aquí en adelante referidas como inhibidores LRAT/ARAT). También hemos encontrado que el uso de tales composiciones cosméticas proporciona ventajosamente además, beneficios para la piel además de anti-envejecimiento, tal como calmar piel sensible y/o irritada, controlar la secreción de aceite/sebo y aclarar la piel. La técnica discutida antes no describe la combinación sinérgica de ácido linoleico conjugado con ácido retinoico, retinol o un éster de retinilo y/o inhibidores de LRAT/ARAT, ni el uso de tal combinación específica para tratar arrugas, piel sensible, piel seca, controlar la secreción de aceite/sebo o aclarar la piel .. .¿ .í.i. . .t,.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN De acuerdo con un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una composición tópica que comprende: (a) ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo; (b) ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor de LRAT/ARAT; y (c) un vehículo dermatológicamente aceptable. De acuerdo con un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona un método cosmético para proporcionar al menas un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratar/prevenir arrugas, colgajos, piel seca, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo, comprendiendo el método aplicar a la piel una composición tópica como se describe antes. La presente invención también abarca el uso de las composiciones inventivas para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; y controlar la secreción de aceite/sebo. De acuerdo todavía con un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona el uso de ácido linoleico conjugado y derivados del mismo en combinación con ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor de LRAT/ARAT en una composición tópica cosmética para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida y/o fotodañada; reforzar la deposición de colágeno en la piel, reforzar la producción de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; y controlar la secreción de aceite/sebo. Las composiciones inventivas, métodos y usos, proporcionan de esta manera, beneficios anti-envejecimiento, los cuales resultan en la promoción de piel suave y flexible con elasticidad mejorada y una aparición reducida o retardada de arrugas y piel envejecida, con color de piel mejorado. Se logra una mejora general en la apariencia, textura y condición, en particular con respecto a la apariencia radiante, clara y joven general de la piel. Las composiciones inventivas, métodos y usos también son benéficos para calmar y apaciguar piel sensible y/o irritada, para aclarar la piel y para controlar la secreción de aceite/sebo. De esta manera, la presente invención proporciona ventajosamente un amplio rango de beneficios para el cuidado de la piel. El término tratar, como se usa en la presente, incluye dentro de su alcance reducir, retardar y/o prevenir las condiciones normales de la piel antes mencionadas, tales como piel arrugada, envejecida y/o fotodañada, y/o piel irritada e intensificar de manera general la calidad de la piel y mejorar su apariencia y textura al prevenir o reducir irritación, arrugado y aumentar la flexibilidad, firmeza, suavidad y elasticidad de la piel. Las Í??A,?? - ?.A . . ?ÍSÍAA.*., __, i**. t . .. .. . t i . É ?mi composiciones, métodos y usos de acuerdo con la invención pueden ser útiles para tratar piel, la cual ya está en una condición arrugada, envejecida, fotodañada, irritada o para tratar piel joven para prevenir o reducir aquéllos cambios no deseables antes mencionados debido al proceso de envejecimiento/fotoenvejecimiento normal.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El ácido linoleico conjugado (de aquí en adelante referido como CLA) es un ácido graso de cadena larga (C18) diinsaturada. CLA comprende un grupo de isómeros posicionales y geométricos de ácido linoleico, en el cual son posibles varias configuraciones de dobles enlaces cis y trans en las posiciones (6, 8), (7, 9), (8, 10), (9, 1 1 ), (1 0, 1 2) o (1 1 , 1 3). De esta manera, existen veinticuatro isómeros diferentes de CLA. La invención también incluye derivados del ácido libre, los cuales comprenden así porciones de ácido linoleico conjugado. Los derivados preferibles incluyen aquéllos derivados de substitución del grupo carboxilo del ácido, tal como esteres (por ejemplo, esteres de triglicéridos, éteres de monoglicéridos, esteres de diglicéridos, fosfoésteres), amidas (por ejemplo, derivados de ceramida), sales (por ejemplo, sales de metales alcalinos y metales alcalino-térreos, sales de amonio), y/o aquéllos derivados de substitución de la cadena de carbono de C 18, tal como derivados alfa hidroxi y/o beta hidroxi. En el caso de derivados de esteres de triglicéridos, todos los isómeros posicionales de substituyentes de CLA en el esqueleto de glicerol están incluidos. Los triglicéridos deben contener al menos una porción de ílÍ.iÍL?-í. í-^-f CLA. Por ejemplo, de las tres posiciones esterificables en el esqueleto de glicerol, las posiciones 1 y 2 pueden ser esterificadas con CLA y por otro lípido en la posición 3 o como una alternativa, el esqueleto de glicerol podría ser esterificado por CLA en las posiciones 1 y 3 con otro lípido en la posición 2. Los isómeros más preferidos de CLA para usarse en la presente invención son el isómero cis 9 trans 1 1 (c9 t1 1 ) o trans 10 cis 12 (t10 c12). De preferencia, al menos 1 % en peso del CLA total y/o porciones de CLA presentes en la composición está en la forma del isómero c9, 11 1 y/o t10, c12. Más preferiblemente, al menos 20% y muy preferiblemente al menos 40% en peso del CLA total y/o porciones de CLA presentes en la composición, está en la forma del isómero c9, t1 1 y/o isómero t10, c12. En una modalidad particularmente preferida, el ácido linoleico conjugado es enriquecido en el isómero c9 t1 1 o t10, c12. Por "enriquecido" se quiere decir que al menos 50% en peso del CLA total (y/o porciones de CLA) presente en la composición, está en la forma del isómero cis 9, trans 1 1 o trans 10 cis 12. De preferencia, al menos 70%, más preferiblemente al menos 80%, y muy preferiblemente al menos 90% en peso del CLA total y/o porciones de CLA presentes en la composición, está en la forma del isómero c9, t1 1 o t10 c12. El CLA y/o derivados del mismo comprendiendo las porciones de CLA de acuerdo con la presente invención, están comercialmente disponibles como aceites que son ricos en triglicérido de ácido linoleico conjugado, tal como aceite de Tung o como el aceite de ricino deshidratado (Unichema). Un producto de mezcla de isómeros está k? ?*? .t»t ? ~. .,i^*. ... disponible de Sigma y un CLA enriquecido en isómero c9 t1 1 está disponible de Matreya Inc. De manera alternativa, CLA de acuerdo con las modalidades preferidas de la presente invención puede prepararse de acuerdo con el método descrito en WO 97/18320, cuyos contenidos son incorporados en la presente por referencia. Un método preferido de preparación se describe en el Ejemplo 1 más adelante. Donde sea que el término "ácido linoleico conjugado" o "CLA" se use en esta especificación, se entenderá que los derivados del mismo comprendiendo porciones de CLA también están incluidos. Las "porciones de CLA" se refieren a porción o porciones de acil graso de CLA de un derivado de CLA. El CLA, a ser empleado de acuerdo con la presente invención, está presente en la composición tópica en una cantidad efectiva. Normalmente, la cantidad total del activo está presente en una cantidad entre 0.0001 % y 50% en peso de la composición. Más preferiblemente, la cantidad es desde 0.01 % hasta 10% y muy preferiblemente desde 0.1 % hasta 5%, con el fin de maximizar los beneficios a un costo m ínimo. Las composiciones de acuerdo con la presente invención también incluyen específicamente ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor de LRAT/ARAT. El término "retinol" incluye los siguientes isómeros de retinol: todo- trans-retinol, 1 3-cis-retinol, 1 1 -cis-retinol, 9-cis-retinol, 3,4-didehidro- retinol. Los isómeros preferidos son todo-trans-retinol, 1 3-cis-retinol, 3,4- didehidro-retinol, 9-cis-retinol. El más preferido es todo-trans-retinol, debido a su amplia disponibilidad comercial. ÍA m.¡í ?.?A**á*Á.

El éster de retinilo es un éster de retinol. El término "retinol" ha sido definido antes. Los esteres de retinilo adecuados para usarse en la presente invención son esteres de CT -CSO de retinol, de preferencia esteres de C2-C20, y muy preferiblemente C2-C3, y esteres de C16 debido a que están más comúnmente disponibles. El éster preferido para usarse en la presente invención es seleccionado de palmitato de retinilo, acetato de retinilo, propionato de retinilo y linoleato de retinilo, debido a que éstos son los más comercialmente disponibles y por lo tanto, los más baratos. El éster de retinilo también es preferido debido a su eficacia.

Inhibidor de LRAT/ARAT El retinol es un compuesto endógeno que ocurre de manera natural en el cuerpo humano y es esencial para la diferenciación de células epiteliales normales. Los esteres de retinol se hidrolizan in vivo para producir retinol. Se cree que los esteres de retinilo y retinol se convierten metabólicamente en la piel en ácido retinoico de acuerdo con el siguiente mecanismo Ester de retinilo Retinol i Acido retinoico Sin embargo, la mayoría del retinol aplicado de manera endógena es convertido rápidamente en esteres grasos inactivos para almacenamiento en células epidérmicas (queratinocitos). mAj.J^.t La esterificación de retinol en esteres de retinilo inactivos se logra en células mediante la transferencia de un grupo acilo graso de una acil ' CoA, catalizada por la enzima acil CoA retinol transferasa (ARAT), o mediante la transferencia de un grupo acilo a partir de fosfatidil colina, 5 catalizada por la enzima lecitina retinol aceil transferasa (LRAT). Estas reacciones de esterificación son muy eficientes en queratinocitos - la mayoría (95%) de retinoides celulares están en la forma de esteres grasos de retinilo. El término "inhibidor de LRAT/ARAT" en la presente solicitud, 10 significa así un agente que inhibe estas reacciones de esterificación y de esta manera, potencia la acción de retinol al aumentar la cantidad de retinol disponible para conversión a ácido retinoico. Los inhibidores de LRAT/ARAT dentro del alcance de la presente invención, son identificables como aquéllos compuestos los cuales a una 15 concentración de 1 00 µm , inhiben al menos 20% de esterificación de retinol catalizada por LRAT o ARAT como se mide mediante el ensayo microsomal in vitro descrito más adelante en el Ejemplo 3. En una modalidad preferida de la invención, el inhibidor de LRAT/ARAT es un compuesto que a una concentración de 100 µM inhibe al menos 40% y 20 muy preferiblemente al menos 50% de la esterificación de retinol catalizada por LRAT o ARAT. El ensayo microsomal in vitro empleado para determinar si un compuesto es o no tal inhibidor de LRAT/ARAT, es como se describe en el Ejemplo 3 más adelante. De esta manera, si un compuesto pasa este ensayo microsomal in 25 vitro, es decir, inhibe suficientemente una esterificación de retinol -^^^^^ ^ • • catalizada por LRAT o ARAT como se mide por el ensayo microsmal in vitro, se incluye en la presente invención aún si no se menciona de manera específica en la presente. Ejemplos de tales inhibidores de LRAT/ARAT incluyen amidas de ácidos grasos, amidas de ácidos hidroxi grasos, ceramidas, emlinamida, imidazolidinonas e hidrocarburos insaturados, alifáticos, cíclicos, terpenos y surfactantes de hidroxietil imidazolina grasa.

Compuestos insaturados, alifáticos, cíclicos Los compuestos insaturados, alifáticos, cíclicos adecuados son seleccionados de acuerdo con la prueba de ensayo microsomal in vitro descrito antes. Un compuesto insaturado, alifático, cíclico preferido es seleccionado de aldehidos insaturados alifáticos cíclicos, cetonas, alcoholes y esteres, tales como alfa damascona, beta damascona, delta damascona, isodamascona, damascenona, alfa ionona, beta ionona, alil alfa ionona, isobutil ionona, alfa metil ionona, gamma metil ionona, brahmanol, sandanol, alfa terpineol, liral, safranato de etilo, y mezclas de los mismos. De preferencia, con el fin de maximizar el rendimiento a un costo mínimo, un compuesto insaturado alifático cíclico es seleccionado del grupo que consiste de damasconas e iononas. Muy preferiblemente, el compuesto insaturado alifático cíclico es una a-damascona y/o a-ionona.

Diterpenos l »A .l ,4.^ .1.-.»^ ,.; , .. -*..*.?.&^A ti .

Los diterpenos adecuados son seleccionados de acuerdo con la prueba de ensayo microsomal descrita antes. Un compuesto de diterpeno preferido es geranil geraniol, el cual es un potente inhibidor de la esterificación de retinol. 5 Surfactantes de hidroxietil imidazolina grasa Los surfactantes de hidroxietil imidazolina grasa incluidos en la presente invención pasan la prueba de ensayo microsomal in vitro descrita antes. Las hidroxietil imidazolinas grasas preferidas tienen la siguiente 10 estructura general: en donde R es una cadena de hidrocarburo lineal o ramificada, saturada o 15 insaturada, alifática, que contiene desde 8 hasta 20 átomos de carbono. De preferencia, R es la hidroxietil imidazolina grasa contiene desde 8 hasta 1 8 átomos de carbono, más preferiblemente de 1 1 a 1 8 átomos de carbono. Muy preferiblemente, la hidroxietil imidazolina grasa es oleil hidroxietil imidazolina, debido a su disponibilidad comercial y eficacia. 20 Amida de ácido graso De preferencia, la amida de ácido graso contiene al menos 6 átomos de carbono. Los ácidos grasos adecuados incluyen ácidos grasos lineales o ramificados, saturados e insaturados. Los ácidos grasos adecuados 25 contienen, de preferencia desde 8 hasta 24 átomos de carbono, de preferencia desde 12 hasta 20 átomos de carbono, y muy preferiblemente desde 12 hasta 1 8 átomos de carbono, debido a que las amidas de ácido graso de cadena más larga son más benéficas para acondicionamiento de la piel. En la modalidad más preferida de la invención, se emplean las amidas de ácidos grasos esenciales debido a que los ácidos grasos esenciales proporcionan nutrición para la piel. Ejemplos de ácidos grasos esenciales incluyen, pero no están (imitados a, linoleico, . linolénico, araquidónico, gamma-linolénico, homo-gamma-linolénico y mezclas de los mismos. El ácido linoleico es más preferido debido a que también es un precursor para ceramida. Las amidas preferidas incluidas en la presente invención son mono-y di-alcanol amidas, en particular de ácidos grasos esenciales. Las alcanol amidas están más comúnmente disponibles que las alquil amidas.

Las amidas de ácidos grasos más preferidas son seleccionadas de mono- y dietanolamidas y fosfatidiletanolaminas de ácido linoleico, ácido palm ítico y aceite de coco, dietil cocamida, linoleamidil dimetilamina, dimetil linoleamida, dietil linoleamida, dimetil palmitida, miristoil sarcosina.

Am idas de ácido hidroxi graso La estructura de una amida de un ácido hidroxi graso es como sigue: en donde R, , R2 y R4 cada uno es seleccionado independientemente de hidrógeno y cadenas de hidrocarburo lineales o ramificadas, saturadas o ^ ltm., *^ ^ . , . i* >,^.,. . insaturadas, alifáticas, las cuales pueden ser hidroxiladas, conteniendo de 1 a 20 átomos de carbono; R3 es -(CH2)n, donde n es un entero de 0 a 18; De preferencia, R, , R2 y R contiene cada uno independientemente de 2 a 20 átomos de carbono, más preferiblemente de 2 a 1 5 átomos de carbono, muy preferiblemente de 3 a 13 átomos de carbono. De preferencia, la amida de ácido hidroxi es una amida de ácido a- o ß-hidroxi, es decir, n es 0 o 1 . Las amidas de ácido hidroxi graso más preferidas para ser incluidas en las composiciones inventivas son: lactamida-monoetanolamida, amida de ácido ß-hidroxi de C13 (2-hidroxi-C13-amida), N-hidroxietil-2-hidroxi-C16 amida, 1 2-hidroxi-N-(2-hidroxietil) octadecanamida y monoetanolamida de aceite de ricino.

Acido carboxílico de triterpeno policíclico (PTCA) Un ejemplo adicional de un inhibidor de LRAT/ARAT adecuado es un PCTA, el cual pasa el ensayo microsomal in vitro. De preferencia, el PTCA es un ácido monocarboxílico de triterpeno pentacíclíco. Muy preferiblemente, PTCA es seleccionado del grupo que consiste de ácido ursólico, ácido oleanólico, ácido glicerretíníco y glicirrízico. Los PTCA están comercialmente disponibles de Aldrich y Sigma.

Extractos de plantas conteniendo PTCA son adecuados para usarse en la presente invención, por ejemplo, Rosmarinus officinalis (romero), Diospyros spp. (placaminero) , Forsytia suspensa (forsitia) , Lavandula angustifolia (lavanda), Prunella vulgaris (sanícula), Paeonia lactifolia, Glycyrrhiza glabra (orozuz). Se debería entender que dependiendo del pH de la composición, PTCA puede estar presente en la composición como una sal, por ejemplo, sal de metal alcalino o metal alcalino-térreo.

Ceramidas Las ceramidas pueden ser, por ejemplo, ceramidas que ocurren de manera natural, fito ceramidas, ceramidas de cadena corta, pseudoceramidas o neoceramidas. La estructura general de estas moléculas se describe en EP A 71 1 558, cuyo contenido se incorpora en la presente por referencia. El derivado de ceramida más preferido es acetil esfingosina debido a su eficacia. El ácido retinoico, retinol, esteres de retinilo y/o inhibidor de LRAT/ARAT pueden incluirse en las composiciones inventivas en una cantidad que varía desde 0.0001 % hasta 50% en peso de la composición, de preferencia desde 0.01 % hasta 1 0%, muy preferiblemente desde 0.1 % hasta 5%.

Vehículo dermatológicamente aceptable La composición usada de acuerdo con la invención también comprende un vehículo dermatológica/cosméticamente aceptable para actuar como un díluyente, dispersante o portador para los activos. El vehículo puede comprende materiales comúnmente empleados en los productos para el cuidado de la piel, tales como agua, emolientes líquidos o sólidos, aceites de silicón, emulsificantes, solventes, humectantes, espesantes, polvos, propulsores y similares. El vehículo usualmente formará desde 5% hasta 99.9%, de preferencia desde 25% hasta 80% en peso de la composición, y puede, en la ausencia de otros auxiliares cosméticos, formar el resto de la composición.

Materiales de beneficio para la piel opcionales y auxiliares cosméticos Además de los activos, también pueden incluirse otros activos de beneficio para la piel específicos, tales como bloqueadores solares, otros agentes aclaradores de la piel, agentes bronceadores de la piel. El veh ículo también puede incluir además auxiliares tales como perfumes, opacantes, conservadores, colorantes y amortiguadores.

Preparación, forma, uso y empague del producto Para preparar la composición tópica usada en el método de la presente invención, puede emplearse la manera usual para preparar productos para el cuidado de la piel. Los componentes activos generalmente son incorporados en un portador dermatológica/cosméticamente aceptable en una manera convencional. Los componentes activos pueden ser disueltos o dispersados primero convenientemente en una porción del agua u otro solvente o líquido a ser incorporado en la composición. Las composiciones preferidas son emulsiones aceite-en-agua, agua-en-aceite o agua-en-aceite-en-agua.

La composición puede estar en la forma de productos ' para el cuidado de la piel convencionales, tales como una crema, gel o loción, cápsulas o similares. La composición también puede estar en la forma de un producto así llamado de "lavado", por ejemplo, un gel para tina o regadera, conteniendo posiblemente un sistema de entrega para los activos para promover la adherencia a la piel durante el enjuague. Muy preferiblemente, el producto es un producto "que se deja puesto", esto es un producto a ser aplicado a la piel sin un paso de enjuague deliberado poco después de su aplicación a la piel. La composición puede ser empacada en cualquier manera adecuada, tal como en un tarro, botella, tubo, bola giratoria o similar, en la manera convencional. También se prevee que las composiciones inventivas podrían empacarse como un conjunto de dos composiciones separadas, una conteniendo el ácido linoleico conjugado y la segunda conteniendo el compuesto de ácido retinoico, retinol, éster de retinilo/inhibidor de LRAT/ARAT, a ser aplicado a la piel de manera simultánea o consecutiva.

La composición de cuerdo con la presente invención también puede ser formulada en una forma adecuada para ingestión oral, tal como una tableta, cápsula o similar. El método de la presente invención puede ser realizado una o más veces al día para la piel que requiere tratamiento. La mejora en la apariencia de la piel usualmente se volverá visible después de 3 a 6 meses, dependiendo de la condición de la piel, la concentración de los componentes activos usados en el método inventivo, la cantidad de composición usada y la frecuencia con la cual se aplica. En general, una i ^ .A?~l^ítM*á ,L „ „,.. , .. .... ,„ a,»^.. -i ÚL a pequeña cantidad de la composición, por ejemplo, de 0.1 a 5 es aplicada a la piel a partir de un recipiente o aplicador adecuado, y se esparce sobre y/o frota en la piel usando las manos, dedos o un dispositivo adecuado. Un paso de enjuague puede seguir de manera opcional, dependiendo de si la composición es formulada como un producto "para dejarse puesto" o "de enjuague". Con el fin de que la presente invención pueda entenderse más fácilmente, los siguientes ejemplos están dados a manera de ilustración solamente.

EJEM PLOS Eiemplo 1 Este ejemplo ilustra la síntesis de ácido linoleico conjugado comprendiendo el isómero c9 11 1 y el isómero t1 0 c1 2.

Producción de isómeros mixtos de CLA "Analar Reagent" (AR) hidróxido de sodio (0.6 kg) se disolvió en 6 kg de propilenglicol de grado farmacéutico mediante mezclado y calentamiento a 80-85°C. La muestra se enfrió y se adicionaron 2 kg de aceite de cártamo. Usando equipo de escala piloto estándar, la mezcla se sometió a reflujo durante 3 horas con agitación rápida a 1 70°C. La mezcla de reacción se enfrió a aproximadamente 95°C, el ag itador se redujo a una velocidad intermedia, y la mezcla se neutralizó usando 1 .280 litros de ácido clorhídrico 35.5% disuelto en agua desmineralizada (8 litros), manteniendo la temperatura a aproximadamente 90°C Se permitió que la <*--*-- *"*'***— aaa iMlMM^Ai*. mezcla de reacción se asentara y la fase acuosa se eliminó. La fase oleosa se lavó con 2 x 1 litro de 5% de solución de sal de AR y por 2 x 1 litro de agua desmineralizada a 90°C, desechando cualquier material jabonoso. El aceite enriquecido en CLA se secó a 100°C bajo vacío antes de drenarse a aproximadamente 50°C y se filtró a través de un sistema de Buchner conteniendo un filtro Whatman y una capa delgada de auxiliar de filtro celite-hyflo. El aceite de CLA de isómeros mezclados se almacenó bajo nitrógeno a -25°C hasta que fue requerido. La composición del aceite producido por este método se expone en la tabla 1 a continuación: TABLA 1 ?.^, ? ?..A. ^?. ^.. . *.. ...a,.,.-...., . 2. Producción de CLA enriquecido con isómero c9 t1 1 (I) Preparación de lauril esteres: El CLA preparado a partir de cártamo (2.0 kg) se adicionó a 2 x equivalentes molares de alcohol laurílico (1 -dodecanol: 98% ej Aldrich Chemicals), junto con 5.96 kg de agua desmineralizada. La temperatura se ajustó a 25°C y 1 % (p/p) de Geotrichum Candidum (ej Amano Pharmaceuticals, Japón) se adicionó premezclado con un poco de agua, y se mezcló vigorosamente. La reacción se detuvo a las 44 horas. El recipiente se calentó a 80-90°C, la capa acuosa se drenó y el aceite se lavó con agua desmineralizada y se secó a 1 00°C bajo vacío durante 30 minutos. El aceite se enfrió a 50°C y se filtró a través de un sistema de Buchner conteniendo un filtro Whatman y una capa delgada de auxiliar de filtración celite-hyflo.

(I I ) Separación de los esteres de CLA de c9,t1 1 enriquecidos: Se removió alcohol laurílico residual a 1 30°C a 25-35 ml por minuto mediante destilación molecular. El residuo se separó de manera gruesa en los lauril esteres (enriquecidos en CLA c9,t1 1 ) y ácidos grasos (enriquecidos en CLA t1 0,c12) mediante evaporación a 1 58°C a una velocidad de flujo de 25-35 ml por minuto. Cualquier ácido libre restante en el residuo de lauril éster fuer reducido medíante una destilación adicional a 1 71 °C a una velocidad de flujo de 30-40 ml por minuto. Se neutralizaron 2790 g de residuo de lauril éster a 90°C usando 330 ml de hidróxido de sodio AR 4M , seguido por la separación del aceite de la fase acuosa, 3x lavados del aceite en agua caliente desmineralizada, un lavado de álcali 0.1 M adicional y dos lavados de agua caliente. La muestra de aceite de lauril éster enriquecido se secó como antes. (lll) Saponificación de los lauril esteres de CLA c9,t1 1 enriquecido: Los lauril esteres de CLA enriquecido en c9,t1 1 , fueron saponificados usando hidróxido de sodio de AR/96% de etanol de grado alimenticio y se re-acidificaron usando ácido clorhídrico concentrado de AR. La mezcla de reacción conteniendo los ácidos grasos libres de CLA enriquecidos se secaron a 100CC y se filtraron como antes a aproximadamente 50°C. Se evaporó alcohol laurílico a 132°C a 25-30 ml por minuto. Con el fin de remover cualquier alcohol laurílico residual, se esterificaron alcoholes libres a los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción, usando lipasa de Mucor miehei S P392 (5% , lote lux 01 10 ej Novo Nordisk). Los ácidos grasos conteniendo CLA enriquecido en c9 t1 1 fueron separados de los lauril esteres usando destilación molecular bajo vacío a 1 55°C a 1 5-20 ml por minuto. La composición del CLA enriquecido en c9 t1 1 producido mediante el método anterior se expone en la tabla 2 a continuación : _l_M_á___Í_Éa Máa¿?^?liÍBiillftfaa*^^tlllil?1ri-1- - I unir.. l l? -v 'll-1-.fl-l --r -r'f- TABLA 2 (I I) Separación del CLA enriquecido en t10, c12: Se removió alcohol laurílico a 130°C a 25-35 ml por minuto mediante destilación molecular. El residuo se separó de manera gruesa en los lauril esteres (enriquecidos en CLA c9,51 1 ) y ácidos libres (enriquecidos en CLA t1 0, c1 2) mediante evaporación a 158°C a una velocidad de flujo de 25-35 por minuto. , Aislamiento del CLA enriquecido en t10, c12 Los ácidos libres de CLA del paso (I I) anterior fueron destilados nuevamente a 160-165°C y 20-30 ml/min para reducir el contenido de éster. El alcohol laurílico residual fue reducido además mediante una destilación a 1 31 °C y 25-30 ml/min de velocidad de flujo. Con el fin de remover cualquier alcohol laurílico residual, se esterificaron alcoholes libres a los ácidos grasos presentes en la mezcla de reacción, usando lipasa de Mucor miehei SP392 (5%, lote lux 01 1 0 ej Novo Nordisk). Los ácidos grasos conteniendo CLA enriquecido en t10, c1 2 fueron separados de los lauril esteres usando destilación molecular bajo vacío a 1 55°C a 1 5- 20 ml por minuto. La composición del CLA enriquecido en t1 0,c12 generado mediante este método se expone en la tabla 3 a continuación: *?A A ? »..Í, ?t? »*.«...- ».* . „ TABLA 3 Ejemplo 2 - Preparación de triglicéridos de CLA t10, c1 2 CLA enriquecido en t10, c1 2 (1 0 g) preparado de acuerdo con el ejemplo 1 se mezcló con 1 .01 g (10.1 %) de glicerol (Pricerine 9083 glicerina CP de Ellis and Everards) y se adicionó 0.5 g (aproximadamente 5%) de lipasa no específica de Mucor Miehei SP392 (Mucor Meihei Ej Novo Nordisk, lote lux 01 10). Los materiales mezclados se agitaron bajo vacío en un evaporador rotatorio a 60°C con un ligero sangrado de nitrógeno. >áá < *--•» - ' — - Después de 96 horas, la reacción se paró al filtrar la mezcla a través de una capa delgada de auxiliar de filtración celite super-cel en un filtro de Buchner que recolecta la fase oleosa de triglicérido de CLA, cuya composición se expone en la tabla 4 a continuación: TABLA 4 Ejemplo 3 Este ejemplo demuestra cómo los (inhibidores de LRAT/ARAT dentro del alcance de la presente invención pueden ser identificados usando el ensayo microsomal in vitro de la esterificación de retinol.

Método de esterificación microsomal in vitro de retinol : Los microsomas son obtenidos como se describe en: J.C. Saari y D. L. Bredberg , "CoA and Non-CoA Dependent Retinol Esterification in Retinal Pigment Epithelium" (Esterificación de retinol dependiente de CoA y sin CoA en epitelio de pigmento retinal), J . Biol. Chem. 23, 8084-90 (1 988) . Una solución conteniendo amortiguador de fosfato de sodio 0.1 M de pH 7, 5 mM ditiotreitol, 2 mg/ml de albúmina de suero bovino, 40 mM de palmitoil CoA, 40 mM de dilauroil fosfatidil colína, 10 mM de retinol y un compuesto de prueba o blanco de solvente, se incubó durante 1 hora a 37°C con una fracción microsomal aislada de células epiteliales de pigmento retinal bovinas. Después de la incubación, la reacción se extinguió mediante la adición de un volumen igual de etanol, y los esteres de retinilo formados (palmitato de retinilo de la reacción catalizada con ARAT, y laurato de retinilo de la reacción catalizada con LRAT) se extrajeron con hexano. La capa de hexano se removió, se evaporó bajo nitrógeno y el residuo se analizó mediante H PLC en una columna de fase inversa de C 1 8 de 3.9x300 mm , usando una fase móvil de 80% metanol en tetrahidrofurano y detección de fluorescencia (325 nm de excitación, 480 nm de em isión) para cuantificar los esteres de retinilo. La cantidad de éster formada en la presencia del blanco de solvente se tomó como 100%, y esto se usó para calcular el porcentaje de inhibición de la formación de éster para los compuestos probados. Como un control, se inactivo una alícuota de microsomas al hervir durante 5 minutos, lo cual resultó en al menos 95% de inhibición de formación de esteres.

Los resultados que fueron obtenidos se resumen en la Tabla 5. ltL.M?..A.A . ?* TABLA 5 15 20 Puede verse que la acetil esfingosina, LODEA, LOM EA y surfactante de hidroxietil imidazolina son inhibidores de esterificación de retinol potentes, mientras que otros surfactantes y otros compuestos heterocíclicos son esencialmente inactivos. La hidroxietil imidazolma caprílica (R = CH3(CH2)6) no inhiben suficientemente LRAT. La prueba de ensayo microsomal in vitro se corrió en los compuestos listados en las Tablas 6A y 6B. Los compuestos en la Tabla 6A fueron probados a una concentración de 1 00 µM. Los compuestos en la Tabla 6B son probados a una concentración de 1 0 µM . l t t«.A ** **».^ . , * .i ¡Lé TABLA 6A TABLA 6B Puede verse de los resultados en las Tablas 6A y 6B que ciertos compuestos insaturados, alifáticos, cíclicos, en particular las iononas y las damasconas, son inhibidores potentes de esterificación de retinol catalizada con LRAT y ARAT. Estos contienen el sistema de anillo de trimetil ciclohexeno presente en el retinol. La prueba de ensayo microsomal in vitro fue conducida con compuestos insaturados, alifáticos, cíclicos adicionales. Los resultados que fueron obtenidos se resumen en la Tabla 7. Los compuestos en la Tabla 7 fueron probados a una concentración de 100 µM. *k,A_ á ,i..._ .J TABLA 7 Como puede verse de los resultados en la Tabla 7, no todos los compuestos insaturados, alifáticos, cíclicos inhiben o inhiben suficientemente la esterificación de retinol catalizada con LRAT y ARAT. La prueba de ensayo microsomal in vitro fue conducida con un compuesto de diterpeno, geranil geraniol o farnesol . Los resultados que fueron obtenidos se resumen en la Tabla 8. báatAjL?*?.*Auátfc . j~?f* . . .

TABLA 8 Obtenido de TCI America (Portland, Oregon). También disponible de Sigma y CTC Organics (Atlanta, Georgia). 2 Disponilbe de Givaudan, Co. , Bedoukian Co. o Dragoco Co.

Puede verse de los resultados en la Tabla 8, que tanto el geranil geraniol como el farnesol inhiben la esterificación de retinol. El geranil geraníol es un inhibidor de esterificación substancialmente más potente que el farnesol.

Eiem plo 4 Identificación de sobre-regulación de procolágeno-l y decorina en la piel in vivo siguiendo a tratamiento de ácido retinoico tópico para fines comparativos El colágeno, la proteína de matriz de la piel predominante es conocida por impartir resistencia a la tensión a la piel. La decorina es un proteoglicano, el cual es conocido por ser importante para la deposición controlada y correcta de colágeno en la matriz extracelular de la piel.

£ .A,A.,t,? t £,t. «. f^nfcü !,; j, , También se sabe en la técnica que los niveles de colágeno y decorina en la piel son reducidos significativamente con piel envejecida y/o fotodañada. Muchos estudios han mostrado que los niveles de colágeno tipo I en la piel son disminuidos con la edad y/o con fotodaño incrementado, (por ejemplo, Lavker, R. J . Inv. Derm . , (1 979) , 73, 79-66; Griffiths et al. N. Eng. J. med. (1993) 329, 530-535). En el caso de la decorina, se ha mostrado que la expresión de mRNA y la expresión del proteoglicano es reducida enormemente en piel fotodañada in vitro (Bernstein et al . Lab. Invest. (1995) 72, 662-669). La reducción de los niveles de estas proteínas de la piel está asociada de acuerdo con esto con una disminución en la resistencia a la tensión de la piel, provocando arrugas y flacidez. Es bien sabido en la técnica que el ácido retinoico es un potente activo anti-envejecimiento e induce la reparación dérmica de piel fotodañada. Se ha mostrado que la borradura de arrugas y reparación dérmica siguiendo al tratamiento tópico de la piel con ácido retinoico surge a través de nueva deposición y síntesis de colágeno en la piel (por ejemplo, Griffiths et al. N. Eng . J . med. ( 1 993) 329, 530-535). Es ampliamente aceptado que el fortalecimiento de la matriz dérmica al reforzar el n ivel de colágeno en la piel usando ácido retinoico proporciona beneficios anti-envejecimiento/reparación dérmica. El procolágeno I es un precursor de colágeno. La producción incrementada de procolágeno I en respuesta a una aplicación de compuesto de prueba, es un marcador de un nivel de colágeno incrementado. - i iMg Se reclutaron dos grupos de mujeres con grados idénticos o casi idénticos de fotodaño suave a moderado en cada antebrazo exterior. Se les suministró con ácido retinoico al 0.05% en una base humectante (Retinova®) y también con una crema humectante igualada en color con características sensoriales similares (loción Dermacare®) , pero sin ingredientes activos, como un control de placebo. Cada participante de los dos grupos aplicó Retinova® a un ' antebrazo exterior y placebo (Dermacare®) al otro antebrazo exterior. El grupo 1 aplicó los productos diariamente a sus antebrazos exteriores durante 14 semanas y el grupo 2 aplicó los productos a sus antebrazos exteriores durante 28 semanas. Al final de los estudios, se tomaron dos biopsias de punción de 4 mm de espesor completo de las áreas tratadas de cada antebrazo. El análisis inmunohistoquímico del tejido de biopsia tomado a los participantes se realizó para identificar el efecto del tratamiento de ácido retinoico en la expresión de los componentes de matriz extracelular de la piel, decorina y procolágeno-l , como se compara con los antebrazos tratados con placebo. Se realizó el siguiente procedimiento: MATE RIALES Amortiguador de dilución de anticuerpo para secciones de cera estuvo compuesto por solución salina amortiguada de Tris (TBS), 3% de albúmina de suero bovino (BSA), 0.05% de Tritón X-1 00 y 0.05% de azida de sodio. Se obtuvieron anticuerpos primarios para procolágeno-l (amino terminal) de Chemicon I nternational I nc. (cat# MAB 1 912, lgG 1 de rata) y se usaron en secciones de cera a una dilución de 1 : 800, durante la noche a 4°c, después de que la sección había sido pre-tratada con tripsina (0.5 mg/ml, 25 minutos, 37°C). Los anticuerpos primarios para decorina se obtuvieron de Biogénesis (policlonal de conejo) y se usaron en secciones de cera a una dilución de 1 :800, durante la noche a 4°C. Los anticuerpos secundarios biotinilados anti-rata, obtenidos de DAKO (cat# E0468, policlonal de conejo), se aplicaron a secciones de cera a una dilución de 1 :400. Los anticuerpos secundarios biotinilados anti-conejo, obtenidos de Amersham (cat# RPN 1004, policlonal de burro), se aplicaron a secciones de cera a una dilución de 1 :400. Se usó fosfatasa alcalina conjugada con estreptavidina, obtenida de Zymed (cat# 43-4322), a una concentración de 1 :2500. El cromógeno Fast Red fue obtenido de DAKO (cat# K597) . La contramancha nuclear de hemotoxilina Gills #3 H obtenida de Sigma (cat# GHS-3) se filtró y se usó sin dilución. La tripsina fue obtenida de Sigma (cat# T-71 86) y se montaron portaobjetos con Glycergel de DAKO (cat# C563).

MÉTODOS Secciones de cera del tejido de biopsia se montaron en portaobjetos recubiertos con silano y se hornearon durante 18 horas a 55°C. los portaobjetos fueron des-cerados a través de xileno y alcohol y se llevaron a agua y entonces se transfirieron a TBS. Se usó una pluma DAKO® para rodear las secciones. Las secciones fueron procesadas para recuperación de antígeno usando tripsina donde fuera necesario, como se indica para cada anticuerpo. Donde fue necesaria la recuperación de antígeno, los portaobjetos fueron incubados durante 25 minutos a 35°C con tripsina a ? Jy^y|¡^^! £ ^ ? &&¿aL.^A 0.5 mg/ml (Sigma Cat# T-71 86). La proteasa fue enjuagada subsecuentemente (2 x 2 minutos) con TBS. Siguiendo la recuperación de antígeno, si fuera necesario, o de otra manera directamente después de rodear las secciones, se bloqueó la unión de anticuerpo no específica con soluciones al 5% de suero de huésped de anticuerpo secundario en TBS/0.5% de BSA/0.1 % de azida de sodio como la solución bloqueadora durante al menos 20 min a temperatura ambiente en una cámara húmeda. Se drenó el exceso de solución bloqueadora, pero no se permitió que las secciones se secaran. Las secciones fueron incubadas entonces con el anticuerpo primario (diluido de manera apropiada como se indica antes) en una cámara húmeda durante la noche a 4°C. El anticuerpo se drenó subsecuentemente de las secciones, sin permitirles secarse. Los portaobjetos fueron lavados entonces con TBS para remover el anticuerpo primario no unido - un enjuague de un minuto, seguido por tres lavados de cinco minutos - y entonces se incubaron con el anticuerpo secundario apropiado (diluido apropiadamente como se indica antes) en una cámara húmeda durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución de anticuerpo se drenó subsecuentemente de los portaobjetos sin permitir que la sección se secara. Los portaobjetos se lavaron en TBS, un enjuague de un minuto seguido por 4 lavados de 5 min , con el fin de remover el anticuerpo secundario no unido. Para el anticuerpo secu ndario biotinilado, las secciones se incubaron subsecuentemente con conjugado de estreptavidina durante 45 min a 37°C y entonces se lavaron en TBS para remover el conjugado de estreptavidina no unido. El cromógeno se adicionó y el color se desarrolló con observación para evitar sobre- jttA.lt ? ? t ?__U_ i . ..... manchado. Las secciones fueron contra-manchadas entonces y se montaron. Las diferencias en la expresión de procolágeno-l y decorina entre los sitios tratados con ácido retinoico (Retinova®) y placebo (Dermacare®) fueron determinadas mediante valoración visual de las secciones inmunohistoquímicamente manchadas usando microscopía luminosa. Este análisis identificó sobre-regulación marcada tanto de procolágeno-l y decorina en la piel fotodañada, siguiendo la aplicación tópica de ácido retinoico (Retinova®, como se expone en la Tabla 9 a continuación.

TABLA 9 Efecto de tratamiento de ácido retinoico en la expresión de procolágeno I y decorina en la piel in vivo tJL? *.?*± .ii?*A . - *-<"- «*% .

De esta manera, los componentes de matriz extracelular, procolágeno-l y decorina, son marcadores claramente identificables de reparación dérmica inducida por ácido retinoico.

Ejemplo 5 Procedimiento para medir la síntesis de procolágeno-l y decorina en fibroblastos dérmicos humanos Preparación de medio acondicionado de fibroblastos dérmicos Los fibroblastos de prepucio humano primarios en el paso 2 (P2) fueron sembrados en placas de 1 2 cavidades a 1 0000 cé|ulas/cm2 y se mantuvieron durante 24 horas en una atmósfera de 5% de dióxido de carbono y 4% de oxígeno en medio Eagles modificado de Dulbeccos (DMEM) complementado con 1 0% de suero de ternera fetal. Después de este tiempo, las células se lavaron con DMEM libre de suero y entonces se incubaron en DMEM libre de suero fresco durante unas 60 horas adicionales. Las monocapas de fibroblastos se lavaron entonces nuevamente con DMEM libre de suero. Los reactivos de prueba y controles de vehículo fueron adicionados a las células por triplicado en un volumen final de 0 4 ml/cavidad de DMEM libre de suero fresco y se incubaron durante unas 24 horas adicionales. Este medio acondicionado de fibroblasto fue ya sea analizado inmediatamente o congelado por chasquido en nitrógeno líquido y se almacenó a -70°C para análisis futuro. Las células fueron contadas entonces y los datos del análisis de dot-blot fueron estandarizados subsecuentemente a número de células. Íaá ufca¿¿* tt** HdlMllMlfltata MlMl .-». .» — . „,. ,... --«ffld i ^ . . .^ . , ,,^ - . ^^¿ .^^ .

Ejemplo 6 Ensavo de dot-blot para proteína de procolágeno-l y decorina en medio acondicionado de fibroblastos dérmicos Las muestras de medio acondicionado de fibroblastos dérmicos tratados con veh ículo (como un control) o reactivos de prueba, fueron complementados con ditiotreitol 20 mM (dilución 1 : 1 0 de solución madre 200m M) y 0.1 % de dodecilsulfato de sodio (dilución 1 : 1 00 de solución madre 1 0%), se mezclaron bien y entonces se incubaron a 75°C durante 2 minutos. Se generó un estándar para el ensayo mediante dilución serial de medio acondicionado de fibroblastos puro a partir de fibroblastos sembrados a 1 0000 células/cm2 en un matraz de 1 75 cm2 y se mantuvieron en DMEM libre de suero como se describe antes. Las muestras de ensayo fueron aplicadas subsecuentemente por triplicado a una hoja prehumedecida de mem brana de transferencia Immobilon-P usando el aparato Bio-Dot de 96 cavidades de Bio-Rad , como se describe en las l íneas de guía de los fabricantes. Aproximadamente 200 µl de medio se aplicaron por cavidad. Se permitió q ue el medio se filtrara a través de la membrana bajo gravedad (30 minutos) , después de lo cual se lavó dos veces la membrana con P BS (200 µl) . Se permitió que estos lavados de PBS se filtraran a través de la membrana bajo gravedad (2x1 5 minutos). Entonces se unió el aparato Bio-Dot a un colector de vacío y se realizó u n tercer y último lavado con PBS bajo succión El aparato fue desmontado, la membrana se removió y se cortó rápidamente según se req uería antes de ser colocada en amortiguador de bloqueo ,A±. durante la noche a 4°C. Las membranas preparadas para análisis de decorina se bloquearon con 3% (p/v) de BSA/0.1 % (v/v) de Tween 20 en PBS, mientras que aquéllas para análisis de procolágeno-l se bloquearon con 5% (p/v) de lecho deshidratada descremtada en polvo/0.05% de Tween 20 en PBS . El día siguiente, las membranas fueron sondeadas con dilución 1 : 10000 de anticuerpos primarios a ya sea procolágeno-l humano (MAB1912; monoclonal de rata; Chemicon Int. Inc. , Temecula, CA) o decorina humana (policlonal de conejo; Biogénesis) durante 2 horas a temperatura ambiente. Las membranas se lavaron subsecuentemente con TBS/0.05% de Tween 20 (3 x 5 minutos) y entonces se incubaron con dilución 1 : 1000 de fragmentos F(ab')2 anti-rata o anti-conejo 125l- conjugados (Amersham) según se requiere durante 1 hora a temperatura ambiente. Siguiendo esto, las tiras de Immobilon fueron lavadas nuevamente con TBS/Tween 20 (3 x 5 minutos) antes de permitir que se secaran en aire a temperatura ambiente. Las membranas secas se envolvieron en celofán y se expusieron a una pantalla de fósforo de almacenamiento Molecular Dynamics durante 16-18 horas. Al final de este tiempo, la pantalla expuesta se exploró mediante un formador de imágenes de fósforo (Molecular Dynamics Phosphorimager SF) usando el programa de cómputo l mageQuant R. La intensidad de puntos se valoró mediante análisis de imágenes asistido por computadora usando las herramientas de cuantificación en lmageQuantMR, estandarizada a número de células y los efectos de varios reactivos de prueba en la síntesis de decorina y procolágeno-l se determinaron en relación a un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias.

Eiemplo 7 PRU EBAS La tabla 10 más adelante indica el efecto sinérgico de ácido linoleico conjugado en combinación con inhibidor de LRAT/ARAT Ceramide 6 en la síntesis de decorina en fibroblastos dérmicos humanos, y las cantidades en las cuales los activos fueron aplicado. Con el fin de normalizar los resultados, los efectos de las substancias de prueba fueron determinados en relación a un valor de control tratado con vehículo de 100 unidades arbitrarias. Las concentraciones de reactivos usadas en los ensayos no tuvieron influencia en la viabilidad celular.

TABLA 10 El efecto sinérgico en la síntesis de decorina por ácido linoleico conjugado en combinación con un inhibidor de LRAT/ARAT Los resultados en la tabla 10 indican que la combinación de ácido linoleico conjugado con un inhibidor de LRAT/ARAT sobre-regula significativamente la síntesis de procolágeno-l y/o decorina en fibroblastos dérmicos humanos, como se -compara con el control. El nivel de decorina en la piel está asociado con una condición y apariencia mejorada de la piel. Aumentar el nivel de decorina en la piel es importante para la deposición controlada y correcta de colágeno en la piel, el cual está asociado con muchos beneficios para la piel, tal como borradura de arrugas y reparación dérmica de piel fotodañada.

Efecto sinérgico de CLA con ácido retinoico La tabla 1 1 a continuación indica el efecto sinérgico de ácido linoleico conjugado en combinación con ácido retinoico, en la síntesis de procolágeno-l en fibroblastos dérmicos humanos, y las cantidades en las cuales se aplicaron los activos. Con el fin de normalizar los resultados, los efectos de las substancias de prueba fueron determinados en relación a un valor de control tratado con veh ículo de 1 00 unidades arbitrarias. Las concentraciones de reactivos usadas en los ensayos no tuvieron influencia en la viabilidad celular.

TABLA 1 1 Control sin tratar = 100% todos los resultados se normalizaron a este valor.

Los resultados en la tabla 1 1 indican que la combinación de ácido linoleico conjugado con ácido retinoico sobre-regula significativamente la síntesis de procolágeno-l en fibroblastos dérmicos humanos, como se compara con el control. El nivel de decorina en piel está asociado con la condición y apariencia mejorada de la piel. Aumentar el nivel de decorina en la piel es importante para una deposición controlada y correcta de colágeno en la piel, el cual está asociado con muchos beneficios de la piel, tales como borradura de arrugas y reparación dérmica de piel fotodañada.

Eiemplo 8 Este ejemplo ilustra cremas de aceite-en-agua de acuerdo con la invención.

*A»,A ******* . .* ~ ., M*t i J Alfol 16RD es alcohol cetílico Ejemplo 9 ' Este ejemplo ilustra lociones alcohólicas de acuerdo con la invención.

Ejemplo 10 Este ejemplo ilustra una crema para cuidado del sol que incorpora ta composición de la invención: Ejemplo 11 Este ejemplo ilustra una emulsión de agua-en-aceite, de fase interna alta, que incorpora la composición inventiva. Íj.Í.^.ÍJ.¿d!aiÍ__t..

Los Ejemplos 8 a 1 1 ilustran las composiciones tópicas de acuerdo con la presente invención. Las composiciones pueden ser procesadas en una manera convencional. Son adecuadas para uso cosmético. Proporcionan un tratamiento cosmético efectivo para mejorar la apariencia de piel arrugada, envejecida, fotodañada y/o irritada, cuando se aplica a piel normal que se ha deteriorado a través de envejecimiento o fotoenvejecimiento, o cuando se aplica a piel joven para ayudar a prevenir -- i iiñü^-a^i o retardar tales cambios deterioradores. Las composiciones también son efectivas para calmar piel irritada, acondicionar piel seca, aclarar el color de la piel y reducir secreciones de aceite y sebo.

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Claims (10)

REIVI NDICACIONES

1 . Una composición tópica que comprende: (a) ácido linoleico conjugado y/o un derivado del mismo, en donde el derivado de ácido linoleico es un éster de glicérido, una amida, una sal o un ácido linoleico conjugado substituido; (b) ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor de LRA/ARAT; y (c) un vehículo dermatológicamente aceptable.

2. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 1 , en donde el ácido linoleico conjugado o derivados del mismo son los isómeros cis 9 trans 1 1 o trans 1 0 cis 12.

3. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivind icación 2, en donde el componente (b) de la composición es un ácido retínoico, retinol o un éster de retinilo.

4. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 3, en donde et componente (b) es retinol o linoleamida monoetanolamida (MEA).

5. U na composición tópica de acuerdo con cualquier reivindicación precedente, en donde el éster de retinilo es linoleato de retinilo.

6. U na composición tópica de acuerdo con cualqu ier reivindicación precedente, en donde la composición es una composición que se deja puesta.

7. U na composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde al menos 1 % en peso de las porciones linoleicas conjugadas del ácido y/o derivadas del mismo está presente como el isómero cis 9, trans 1 1 y/o el isómero trans 10, cis 12.

8. Una composición tópica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el inhibidor de LRAT/ARAT es una 5 amida grasa, una amida de ácido hidroxi graso, una ceramida, una melinamida, una imidazolidinona, un hidrocarburo insaturado alifático cíclico, un terpeno, o un surfactante de hidroxietil imidazolina grasa, o mezclas de los mismos.

9. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el 0 compuesto insaturado alifático cíclico es seleccionado de aldehidos insaturados alifáticos cíclicos, cetonas, alcoholes y esteres, tales como alfa damascona, beta damascona, delta damascona, isodamascona, damascenona, alfa ionona, beta ionona, alil alfa ionona, isobutil ionona , alfa metil ionona, gamma metil ionona, brahmanol, sandanol , alfa terpineol, 5 liral , safranato de etilo y mezclas de los mismos.

10. U na composición tópica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el compuesto insaturado alifático cíclico es una a damascona o una a ionona. 1 1 . Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en donde 0 el ácido graso en la amida de ácido graso es seleccionado de ácido linoleico, ácido linolénico, ácido araquidónico, ácido gamma-linolénico, ácido homo-gamma-línolénico y mezclas de los mismos. 1 2. Una composición tópica de acuerdo con la reivind icación 1 1 , en donde el ácido graso en la amida de ácido graso es ácido linoleico. éatti .._¿ j .¿ j. i i3?^á . . y 1 3. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la amida de ácido hidroxi graso es lactamida-monoetanolamida, ácido ß- hidroxi de C1 3 (2-hidroxi-C?3-amida), N-hidroxietil-2-hidroxi-C?6 amida, 12- hidroxi-N-(2-hidroxietil) octadecanamida y monoetanolamida de aceite de ricino y mezclas de los mismos. 14. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el terpeno es un ácido monocarboxílico de tríterpeno pentacíclico. 1 5. Una composición tópica de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la ceramida es un derivado de ceramida, el cual es acetil esfingosina. 1 6. Un método cosmético para proporcionar al menos un beneficio para el cuidado de la piel seleccionado de: tratar/prevenir piel arrugada, colgada, seca, envejecida y/o fotodañada; reforzar los niveles de colágeno en la piel, reforzar/mantener los niveles de decorina en la piel , intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo; comprendiendo el método aplicar a la piel una composición tópica como se reclama en cualquier reivindicación precedente. 1 7. El uso de una composición como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1 5 para mejorar al menos un beneficio para el cuidado de la piel , seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida, seca y/o fotodañada; reforzar/mantener los niveles de colágeno en la piel, reforzar/mantener los niveles de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; ÍíÍ^i ..i..í A..? . .. **^2¡.i..l .. mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel ; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo. 1 8. El uso de ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo en combinación con un ácido retinoico, retinol, éster de retinilo y/o un inhibidor de LRAT/ARAT en una composición tópica cosmética, para proporcionar al menos un beneficio cosmético para el cuidado de la piel seleccionado de tratar/prevenir piel arrugada, colgada, envejecida y/o fotodañada; reforzar/mantener los niveles de colágeno en la piel, reforzar/mantener los niveles de decorina en la piel, intensificar la reparación de tejido; calmar piel irritada, roja y/o sensible; mejorar la textura, suavidad y/o firmeza de la piel; aclarar la piel; controlar la secreción de aceite/sebo. jiM t *?.!?-A*A.,.W?Í.A M¿k.. RESU MEN Una composición tópica que comprende: (a) ácido linoleico conjugado y/o derivados del mismo; (b) un ácido retinoico, retinol , éster de retinilo y/o un inhibidor de LRAT/ARAT; y (c) un vehículo dermatológicamente aceptable Tales composiciones para el cuidado de la piel son útiles para tratar y/o prevenir condiciones de la piel normales, pero no deseables, seleccionadas del grupo que consiste de piel arrugada, colgada, fotodañada, piel seca y manchas de la edad y calmar piel sensible. t. ¿?.J..-k .Í. í ?*, .?- ...