ES2234658T3 - Antagonistas del receptor de vitronectina. - Google Patents
Antagonistas del receptor de vitronectina.Info
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Abstract
Un compuesto según la fórmula (I): en el que: R1 es donde R'' es alquilo C1-4 opcionalmente sustituido con el grupo RX y R'''' es fenilo, bencilo o -CH2CF3; o R'' y R'''' se toman conjuntamente para formar un anillo morfolinilo; RX es alquilo C1-4, OR*, SR*, alquilsulfonilo C1-4, alquilsulfoxilo C1-4, -CN, N(R*)2, CH2N(R*)2, -NO2, -CF3, -CO2R*, -CON(R*)2, -COR*, -SO2N(R*)2, -NR*C(O)R*, F, Cl, Br, I o CF3S(O)r-; r es 0, 1 ó 2; R* es H, alquilo C1-4, fenilo o bencilo; R2 es o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Description
Antagonistas del receptor de vitronectina.
Esta invención se refiere a compuestos
farmacéuticamente activos que inhiben el receptor de vitronectina y
son útiles para el tratamiento de inflamación, cáncer y trastornos
cardiovasculares, tales como aterosclerosis y restenosis, y de
enfermedades uno de cuyos factores es la resorción ósea, tales como
osteoporosis.
Las integrinas son una superfamilia de receptores
de adhesión celular, que son glicoproteínas transmembranales
expresadas sobre una gama de células. Estos receptores de adhesión
de superficie celular incluyen gpIIb/IIIa (el receptor de
fibrinógeno) \alpha_{v}\beta_{3} (el receptor de
vitronectina). El receptor de fibrinógeno gpIIb/IIIa se expresa
sobre la superficie de las plaquetas, y media en la agregación
plaquetaria y en la formación de un coágulo hemostático en el sitio
de una herida sangrante. Philips y col., Blood., 1988, 71, 831. El
receptor de vitronectina, \alpha_{v}\beta_{3}, se expresa
sobre cierto número de células, entre ellas las células
endoteliales, de los músculos lisos, osteoclastos y tumorales, así
que tiene diversas funciones. El receptor
\alpha_{v}\beta_{3} expresado en la membrana de los
osteoclastos media en la adhesión de los osteoclastos a la matriz
ósea, una etapa fundamental en el proceso de resorción ósea. Ross y
col., J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. Una enfermedad caracterizada
por una resorción ósea excesiva es la osteoporosis. El receptor
\alpha_{v}\beta_{3} expresado sobre células del músculo liso
aórtico humano media en su migración a la neoíntima, un proceso que
puede causar restenosis después de una angioplastia coronaria
percutánea. Brown y col., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815.
Adicionalmente, Brooks y col., Cell, 1994, 79, 1157, han indicado
que un antagonista de \alpha_{v}\beta_{3} tiene capacidad
para estimular la regresión de un tumor al inducir apoptosis de los
vasos sanguíneos angiogénicos. Así, los agentes que bloqueen el
receptor de vitronectina serían útiles para tratar enfermedades,
tales como osteoporosis, restenosis y cáncer.
Ahora se sabe que el receptor de vitronectina
alude a tres integrinas diferentes, designadas
\alpha_{v}\beta_{1}, \alpha_{v}\beta_{3} y
\alpha_{v}\beta_{5} Horton y col., Int. J. Exp. Pathol.,
1990, 71, 741. \alpha_{v}\beta_{1} fija fibronectina y
vitronectina. \alpha_{v}\beta_{3} fija una gran variedad de
ligandos, entre ellos fibrina, fibrinógeno, laminina,
trombospondina, vitronectina, factor de von Willebrand, osteopontina
y sialoproteína ósea I. \alpha_{v}\beta_{5} fija
vitronectina. Se ha indicado que el receptor
\alpha_{v}\beta_{5} de vitronectina está involucrado en la
adhesión celular de diversos tipos de células, entre ellas las
células endoteliales microvasculares, (Davis y col., J. Cell. Biol.,
1993, 51, 206), y se ha confirmado su papel en la angiogénesis.
Brooks y col., Science, 1994, 264, 569. Esta integrina se expresa
sobre los vasos sanguíneos en tejido de granulación de heridas
humanas, pero no en piel sana.
Se sabe que el receptor de vitronectina se fija a
proteínas de la matriz ósea que contienen la secuencia tripeptídica
Arg-Gly-Asp (o RGD). Así, Horton y
col., Exp. Cell Res. 1991, 195, 368, describen que los péptidos que
contienen RGD y un anticuerpo anti-receptor de
vitronectina (23C6) inhiben la resorción de dentina y la
diseminación celular por los osteoclastos. Además, Sato y col. J.
Cell Biol. 1990, 11, 1713, describen que la equistatina, un
péptido del veneno de serpiente que contiene la secuencia RGD, es un
potente inhibidor de la resorción ósea en histocultivos, e inhibe la
unión de osteoclastos al hueso.
Los documentos WO 99/45927 y WO 99/15508 (ambos
de SmithKline Beecham Corp.) describen una serie de compuestos que
se reivindican como antagonistas del receptor de vitronectina.
Takedo et al (1997), Chem Abs 126, Abstract Nos. 117964 y
89361 describen la preparación de derivados de ácido propiónico como
agentes reductores de los niveles de glucosa en sangre.
Ahora se ha descubierto que ciertos compuestos
son potentes inhibidores de los receptores
\alpha_{v}\beta_{3} y \alpha_{v}\beta_{5}. En
particular, se ha descubierto que tales compuestos son inhibidores
más potentes del receptor de vitronectina que del receptor de
fibrinógeno.
Esta invención comprende compuestos de fórmula
(I), según se describe aquí más adelante, que tienen actividad
farmacológica para la inhibición del receptor de vitronectina y son
útiles en el tratamiento de inflamación, cáncer y enfermedades
cardiovasculares, tales como aterosclerosis y restenosis, y de
enfermedades uno de cuyos factores es la resorción ósea, tales como
osteoporosis.
Esta invención es también una composición
farmacéutica que comprende un compuesto según la fórmula (I) y un
vehículo farmacéutico.
Esta invención es también un uso en la
fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades
que están mediadas por el receptor de vitronectina. En un aspecto
particular, los compuestos de esta invención son útiles para tratar
aterosclerosis, restenosis, inflamación, cáncer y enfermedades uno
de cuyos factores es la resorción ósea, tal como la
osteoporosis.
Esta invención comprende nuevos compuestos que
son inhibidores más potentes del receptor de la vitronectina que del
receptor de fibrinógeno. Esta invención comprende compuestos de
fórmula (I):
en la
que:
R^{1} es como se ha definido en la
reivindicación 1;
R^{2} es
o una sal farmacéuticamente
aceptable de los
mismos.
También se incluyen en esta invención las sales
de adición y los complejos farmacéuticamente aceptables de esta
invención. En los casos en que los compuestos de esta invención
pueden tener uno o más centros quirales, a menos que se especifique
lo contrario, esta invención incluye cada compuesto no racémico
único que pueda sintetizarse y resolverse por técnicas
convencionales. De acuerdo con la presente invención, se prefiere la
configuración (S) de los compuestos de fórmula (I).
En los casos en que los compuestos tienen dobles
enlaces carbono-carbono insaturados, ambos isómeros
cis (Z) y trans (E) están dentro del alcance de esta invención. En
los casos en que los compuestos pueden existir en formas tautómeras,
tales como los tautómeros cetoenólicos, como 3 y
4 , cada forma tautómera está contemplada como
incluida dentro de esta invención, ya sea existiendo en equilibrio o
anclada en una forma por sustitución apropiada con R'.
Los compuestos de fórmula (I) inhiben la fijación
de vitronectina y otros péptidos que contienen RGD al receptor de
vitronectina. La inhibición del receptor de vitronectina sobre los
osteoclastos inhibe la resorción ósea osteoclástica y es útil en el
tratamiento de enfermedades en las que la resorción ósea está
asociada con la patología, tales como osteoporosis y
osteoartritis.
En otro aspecto, esta invención es un uso de un
compuesto que provoca un aumento en la liberación de oxteocalcina en
la fabricación de un medicamento para estimular la formación de
hueso, que comprende administrar un compuesto que causa un
incremento en la liberación de osteocalcina. El incremento en la
producción de hueso es un beneficio evidente en estados de
enfermedad en que hay una deficiencia de masa ósea mineralizada o en
que se desea una remodelación del hueso, tal como la curación de una
fractura y la prevención de fracturas de huesos. Las enfermedades y
los trastornos metabólicos que dan como resultado la pérdida de
estructura ósea también se beneficiarían de este tratamiento. Por
ejemplo, el hiperparatiroidismo, la enfermedad de Paget, la
hipercalcemia maligna, las lesiones osteolíticas producidas por
metástasis ósea, la pérdida de masa ósea causada por inmovilización
o deficiencia de hormonas sexuales, la enfermedad de Behçet, la
osteomalacia, la hiperostosis y la osteopetrosis podrían resultar
beneficiadas por la administración de un compuesto de esta
invención.
Adicionalmente, ya que los compuestos de la
presente invención inhiben los receptores de vitronectina en cierto
número de diferentes tipos de células, dichos compuestos serían
útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios tales como
artritis reumatoide y psoriasis, y enfermedades cardiovasculares
tales como aterosclerosis y restenosis. Los compuestos de Fórmula
(I) de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento o
la prevención de otras enfermedades, entre ellas pero sin limitación
a las mismas, trastornos tromboembólicos, asma, alergias, síndrome
disneico del adulto, rechazo inverso de injertos, rechazo de
trasplante de órganos, choque séptico, eczema, dermatitis de
contacto, enfermedad intestinal inflamatoria y otras enfermedades
autoinmunitarias. Los compuestos de la presente invención también
pueden ser útiles para curar heridas.
Los compuestos de la presente invención son
también útiles para el tratamiento, incluyéndose la prevención, de
trastornos angiogénicos. La expresión trastornos angiogénicos, según
se utiliza aquí, incluye condiciones que implican una
neovascularización anormal. Cuando el crecimiento de nuevos vasos
sanguíneos es la causa de la patología asociada con una enfermedad,
o contribuye a ella, la inhibición de angiogénesis reducirá los
efectos deletéreos de la enfermedad. Un ejemplo de dicho objetivo de
enfermedad es la retinopatía diabética. Cuando se requiere el
crecimiento de nuevos vasos sanguíneos para sustentar el crecimiento
de un tejido deletéreo, la inhibición de angiogénesis reducirá el
aporte de sangre al tejido y contribuirá por ello a disminuir la
masa de tejido, basándose en la necesidad de aporte de sangre.
Ciertos ejemplos incluyen el crecimiento de tumores en que la
neovascularización es una necesidad continua para el crecimiento del
tumor y para el establecimiento de metástasis de tumores sólidos.
Así, los compuestos de la presente invención inhiben la angiogénesis
de tejido tumoral, previniendo por ello la metástasis de un tumor y
el crecimiento de un tumor.
De este modo, de acuerdo con los usos de la
presente invención, la inhibición de angiogénesis utilizando los
compuestos de la presente invención en la fabricación de un
medicamento puede aliviar los síntomas de la enfermedad y, en
algunos casos, puede curar la enfermedad.
Otro objetivo terapéutico para los compuestos de
la presente invención son las enfermedades oculares caracterizadas
por neovascularización. Tales enfermedades oculares incluyen los
trastornos neovasculares corneales, como el trasplante de córnea, la
queratitis herpética, la queratitis sifilítica, el terigión y la
queratitis vascular asociada con el uso de lentes de contacto. Otras
enfermedades oculares incluyen también la degeneración macular
asociada con la edad, la histoplasmosis ocular presunta, retinopatía
de premadurez y glaucoma neovascular.
Esta invención proporciona además un uso de
administración secuencial o en combinación física de un compuesto de
fórmula (I) y un agente antineoplásico, tal como topotecán y
cisplatino en la fabricación de un medicamento para inhibir el
crecimiento tumoral.
Con respecto a la fórmula (I), R^{1} es
en que R' es alquilo
C_{1-4} y R'' es fenilo, bencilo o
-CH_{2}CF_{3}; o R' y R'' están unidos para formar un anillo de
morfolinilo.
R^{2} es:
Ejemplos representativos de los nuevos compuestos
de esta invención son los siguientes:
ácido
(\pm)-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-(trifluorometil)-fenil]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-[(N-metil-N-fenilamino)carbonil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-[(morfolin-4-il)carbonil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-[[N-metil-N-(2,2,2-trifluoroetil)amino]carbo-
nil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
nil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-(trifluoro-metil)tiazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-(3-metiltiazol-2-il)butanoico;
ácido
(S)-3-(3-fluorofenil)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etoxi]-fenil]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-etoxi]-fenil]-3-(piridin-3-il)-butanoico;
ácido
(S)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-etoxi]-fenil]-3-(piridin-3-il)-butanoico;
y
ácido
(S)-3-(piridin-3-il)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]-butanoico;
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables.
En los casos en que los compuestos de esta
invención pueden tener uno o más centros quirales, salvo
especificación en contrario, esta invención incluye cada compuesto
no racémico único, que puede sintetizarse y resolverse por técnicas
convencionales.
En los casos en que los compuestos tienen dobles
enlaces carbono-carbono insaturados, tanto los
isómeros cis (Z) como trans (E) están dentro del alcance de esta
invención. El significado de cualquier sustituyente en cualquier
ocasión en que aparezca es independiente de su significado, o del
significado de cualquier otro sustituyente, en cualquier otra
ocasión.
En este documento se utilizan las abreviaturas y
los símbolos utilizados corrientemente en el campo de los péptidos y
los compuestos químicos para describir los compuestos de esta
invención. En general, las abreviaturas de los aminoácidos siguen
las normas de la IUPAC-IUB Joint Commission on
Biochemical Nomenclature, descritas en Eur. J. Biochem., 158, 9
(1984).
La expresión alquilo C_{1-4}
como se aplica aquí representa un grupo alquilo de 1 a 4 átomos de
carbono, opcionalmente sustituido, e incluye metilo, etilo,
n-propilo, isopropilo, n-butilo,
isobutilo y t-butilo. Cualquier alquilo
C_{1-4} puede estar opcionalmente sustituido con
el grupo R^{X}, que puede estar en cualquier átomo de carbono que
de como resultado una estructura estable y sea obtenible por
técnicas convencionales de síntesis. Los grupos adecuados para
R^{X} son alquilo C_{1-4}, OR*, SR*, alquil
C_{1-4}-sulfonilo, alquil
C_{1-4}-sulfoxilo, -CN,
N(R*)_{2}, CH_{2}N(R*)_{2}, -NO_{2},
-CF_{3},-CO_{2}R*, -CON(R*)_{2}, -COR*, SO_{2}N(R*)_{2}, -NR*C(O)R*, F, Cl, Br, I o CF_{3}S(O)_{r}, donde r es 0, 1 ó 2, y R* es H, alquilo C_{1-4}, fenilo o bencilo.
-CF_{3},-CO_{2}R*, -CON(R*)_{2}, -COR*, SO_{2}N(R*)_{2}, -NR*C(O)R*, F, Cl, Br, I o CF_{3}S(O)_{r}, donde r es 0, 1 ó 2, y R* es H, alquilo C_{1-4}, fenilo o bencilo.
Halógeno o halo representa F, Cl, Br y I.
Ciertos grupos radicales se dan aquí en forma
abreviada. t-Bu se refiere al radical butilo
terciario, Boc se refiere al radical
t-butiloxicarbonilo, Fmoc se refiere al radical
fluorenilmetoxicarbonilo, Ph se refiere al radical fenilo, Cbz se
refiere al radical benciloxicarbonilo, Bn se refiere al radical
bencilo, Me se refiere a metilo, Et se refiere a etilo, Ac se
refiere a acetilo, Alk se refiere a alquilo
C_{1-4}, Nph se refiere a 1- ó
2-naftilo y cHex se refiere a ciclohexilo. Tet se
refiere a 5-tetrazolilo.
Ciertos reactivos se dan aquí en forma abreviada.
DCC se refiere a diciclohexilcarbodiimida, DMAP se refiere a
dimetilaminopiridina, DIEA se refiere a diisopropiletilamina, EDC
se refiere a hidrocloruro de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida,
HOBt se refiere a 1-hidroxibenzotriazol, THF se
refiere a tetrahidrofurano, DIEA se refiere a diisopropiletilamina,
DEAD se refiere a azodicarboxilato de dietilo, PPh_{3} se refiere
a trifenilfosfina, DIAD se refiere a azodicarboxilato de
diisopropilo, DME se refiere a dimetoxietano, DMF se refiere a
dimetilformamida, NBS se refiere a
N-bromosuccinimida, Pd/C se refiere a un catalizador
de paladio sobre carbono, PPA se refiere a ácido polifosfórico, DPPA
se refiere a difenilfosforilazida, BOP se refiere a
hexafluorofosfato de
benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetil-amino)forsfonio,
HF se refiere a ácido fluorhídrico, TEA se refiere a trietilamina,
TFA se refiere a ácido trifluoroacético, PCC se refiere a
clorocromato de piridinio.
Los compuestos de esta invención se preparan por
los métodos generales descritos en los Esquemas
I-VI.
Esquema
I
(a) CH_{3}NH(OCH_{3})
\cdot HCl, EDC, HOBt \cdot H_{2}O, Et_{3}N, DMF; (b)
4-bromobenzotrifluoruro, sec-BuLi,
THF; (c)
(EtO)_{2}P(O)CH_{2}CO_{2}Et, NaH, tolueno; (d) H_{2}; 10% de Pd/C, EtOH: (e) BBr_{3}, CH_{2}Cl_{2}; (f) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)_{3}P, THF: (g) NaOH 1,0 N, MeOH, después acidulación.
(EtO)_{2}P(O)CH_{2}CO_{2}Et, NaH, tolueno; (d) H_{2}; 10% de Pd/C, EtOH: (e) BBr_{3}, CH_{2}Cl_{2}; (f) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)_{3}P, THF: (g) NaOH 1,0 N, MeOH, después acidulación.
Un ácido alcoxifenilacético apropiado, por
ejemplo ácido 4-metoxifenilacético
(I-1), se convierte en el derivado de desoxibenzoína
I-3 por reacción de la correspondiente
N-metoxi-N-metilamida
(I-2) con un derivado aromático metalado, de acuerdo
con el método general de Weinreb (Tetrahedron Lett.
1981, 22, 3815). El compuesto I-3 se
convierte en el éster \alpha,\beta-insaturado
I-4 a través de la conocidísima reacción de Wittig.
Con la mayor preferencia, la reacción se efectúa utilizando
fosfonoacetato de trietilo en presencia de una base adecuada,
generalmente hidruro de sodio o
bis(trimetilsilil)amiduro de litio, en un disolvente
aprótico, tal como tolueno, THF o mezclas de los mismos. La
reducción del grupo olefínico de I-4 se lleva a cabo
con la mayor preferencia por hidrogenación en presencia de un
catalizador de paladio, por ejemplo paladio sobre carbón vegetal
activo, en un disolvente adecuado, tal como EtOAc, MeOH, EtOH,
i-PrOH, o mezclas de los mismos. El éter metílico de
I-5 se puede escindir con tribromuro de boro
(BBr_{3}), en un disolvente inerte, preferiblemente
CH_{2}Cl_{2}, o con etanotiol (EtSH) y tricloruro de aluminio
(AlCl_{3}) en un disolvente inerte, tal como CH_{2}Cl_{2}.
Otros métodos útiles para separar los grupos protectores de éter
metílico están descritos en Greene, "Protective Groups in Organic
Synthesis" (editado por Wiley-Interscience). El
fenol I-6 resultante se hace reaccionar con
6-(metilamino)-2-piridiletanol en
una reacción de acoplamiento de tipo Mitsunobu (Organic
Reactions 1992, 42, 335-656;
Synthesis 1981, 1-28) para dar
I-7. La reacción está mediada por el complejo
formado entre el diéster de azodicarboxilato, tal como
azodicarboxilato de dietilo o azodicarboxilato de diisopropilo, y
trifenilfosfina, y se efectúa en un disolvente aprótico, por ejemplo
THF, CH_{2}Cl_{2} o DMF. El éster etílico de I-7
se hidroliza utilizando una base acuosa, por ejemplo, LiOH en THF
acuoso o NaOH en metanol o etanol acuoso, y la sal de carboxilato
intermedia se acidula con un ácido adecuado, por ejemplo TFA o HCl,
para dar el ácido carboxílico I-8. Alternativamente,
si se desea se puede aislar la sal de carboxilato intermedia, o se
puede preparar una sal de carboxilato del ácido carboxílico libre
por métodos bien conocidos por los expertos en la técnica.
\newpage
Esquema
II
(a) Cloruro de triisopropilsililo,
imidazol, DMF; (b)
3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato de
metilo, Pd(OAc))_{2},
P(tol)_{3}, (i-Pr)_{2}NEt, propionitrilo; (c) H_{2}, 10% de Pd/C, EtOAc; (d) hidrocloruro de éster bencílico de serina, EDC, HOBt \cdot H_{2}O, Et_{3}N, DMF; (c) reactivo de Burgess, THF; (f) Cl_{3}CBr, DBU, CH_{2}Cl_{2}; (g) TBAF, THF; (h) (Boc)_{2}O, piridina, THF; (i) H_{2}, 10% de Pd/C, EtOH; (j) N-metilanilina; EDC, BPFFH, (i-Pr)_{2}Net, piridina, DMF; (k) HCl/dioxano 4 N; (l) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (m) LiOH, THF, H_{2}O; luego acidulación.
P(tol)_{3}, (i-Pr)_{2}NEt, propionitrilo; (c) H_{2}, 10% de Pd/C, EtOAc; (d) hidrocloruro de éster bencílico de serina, EDC, HOBt \cdot H_{2}O, Et_{3}N, DMF; (c) reactivo de Burgess, THF; (f) Cl_{3}CBr, DBU, CH_{2}Cl_{2}; (g) TBAF, THF; (h) (Boc)_{2}O, piridina, THF; (i) H_{2}, 10% de Pd/C, EtOH; (j) N-metilanilina; EDC, BPFFH, (i-Pr)_{2}Net, piridina, DMF; (k) HCl/dioxano 4 N; (l) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (m) LiOH, THF, H_{2}O; luego acidulación.
Un derivado de halofenol, por ejemplo
4-bromofenol (II-1), se convierte en
un derivado adecuadamente protegido, por ejemplo
4-bromo-1-(triisopropilsililoxi)benceno
(II-2). El grupo protector para el fenol debe ser
compatible con la química subsiguiente, y también debe poder
eliminarse selectivamente cuando se desee. Los métodos para la
protección de fenoles están descritos en libros de referencia
clásicos, tales como Greene, "Protective Groups in Organic
Synthesis" (editado por Wiley-Interscience). El
compuesto II-2 reacciona con
3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato de
metilo en una reacción de tipo Heck (véase Heck, Org.,
Reactions 1982, 27, 345) para dar
II-3. La reacción está mediada por una especie de
paladio (0), y generalmente se efectúa en un disolvente inerte, tal
como CH_{3}CN, propionitrilo o tolueno, en presencia de un
captador apropiado de ácido tal como trietilamina (Et_{3}N) o
diisopropiletilamina ((i-Pr)_{2}NEt). Las
fuentes típicas de la especie de paladio (0) incluyen acetato de
paladio (II) (Pd(OAc)_{2} y cloruro de paladio (II)
(PdCl_{2}), y muchas veces se incluyen ligandos de fosfina, por
ejemplo trifenilfosfina (PPh_{3}) o
tri-orto-tolilfosfina
(P(tol)_{3}). El éster
\alpha,\beta-insaturado II-3 se
reduce al compuesto II-4 por reacción con hidrógeno
gaseoso en presencia de un catalizador adecuado, preferiblemente
paladio elemental sobre carbono activado (Pd/C), en un disolvente
inerte, generalmente MeOH, EtOH, EtOAc, o mezclas de ellos. El ácido
carboxílico de II-4 se convierte en una forma
activada utilizando, por ejemplo, EDC y HOBt, SOCl_{2}, o
1,1'-carbonildiimidazol (CDI), y la forma activada
se hace reaccionar subsiguientemente con una amina apropiada, por
ejemplo éter bencílico de serina, en un disolvente adecuado, tal
como DMF, para dar II-5. Dependiendo de si se
requiere neutralización del ácido, se puede añadir una base tal como
trietilamina (Et_{3}N), diisopropiletilamina
((i-Pr)_{2}NEt), o piridina. Se conocen
muchos métodos adicionales para convertir un ácido carboxílico en
una amida, y se pueden encontrar en la bibliografía científica
clásica, tal como "Compendium of Organic Synthetic Methods",
Vol. I-VI (editado por
Wiley-Interscience), o Bodansky, "The Practice of
Peptide Synthesis" (editado por Springer-Verlag).
Después se convierte II-5 en el derivado de oxazol
II-7. Se conocen varios métodos para la conversión
de amidoalcoholes en oxazoles (Meyers, Tetrahedron
1994, 50, 2297-2360; Wipf, J. Org.
Chem. 1993, 58, 3604-3606. Por
ejemplo, el amidoalcohol II-5 se puede convertir
primero en la oxazolina II-6. Generalmente, la
transformación se lleva a cabo en condiciones deshidratantes, tales
como la reacción con reactivo de Burgess en THF. Después se oxida la
oxazolina II-6 para dar el oxazol
II-7 utilizando, por ejemplo, bromtriclorometano y
DBU en CH_{2}Cl_{2} (Williams, Tetrahedron Letters
1997, 38, 331-334,) o CuBr_{2} y DBU
en un disolvente apropiado, tal como EtOAc/CHCl_{3} o
CH_{2}Cl_{2} (Barrish, J. Org. Chem., 1993,
58, 4494-4496). La eliminación del grupo
protector sililo en condiciones clásicas con un fluoruro (véase
Greene, anteriormente) produce el fenol II-8, que se
convierte en el derivado de terc-butiloxicarboniltio
II-9 utilizando dicarbonato de
di-terc-butilo en presencia de una
base, generalmente piridina, en un disolvente neutro polar, tal como
THF. Este nuevo grupo protector se selecciona como se ha descrito
anteriormente. El compuesto II-9 se convierte en el
derivado de ácido carboxílico II-10 por
hidrogenación como se ha descrito anteriormente, y
II-10 se convierte en la amida II-11
de acuerdo con el procedimiento general de Carpino y Ayman (J.
Am. Chem. Soc. 1995, 117,
5401-5402). En estas condiciones, el ácido
carboxílico II-10 se hace reaccionar con una amina
adecuada, por ejemplo, N-metilanilina, en presencia
de hexafluorofosfato de
bis(tetrametilen)-fluoroformamidinio (BPFFH)
y una base apropiada, generalmente Et_{3}N,
(i-Pr)_{2}NEt, piridina, o mezclas de
ellos, en un disolvente neutro polar, tal como DMF. El grupo
terc-butiloxicarbamato se separa en condiciones
ácidas clásicas (véase Greene anteriormente) y el fenol resultante
II-12 se convierte en II-14 por los
métodos descritos en el Esquema I.
Esquema
III
\vskip1.000000\baselineskip
(a) EtOH, reflujo; (b)
4-(benciloxi)benzaldehído, NaOEt, EtOH; (c) Al_{2}O_{3},
NaOCl, CH_{3}CN; (d) Et_{3}SiH, BF_{3}\cdotOEt_{2},
CH_{2}Cl_{2}; (e) n-Bu_{4}NF, THF; (f)
(EtO)_{2}P(=O)CH_{2}CO_{2}Et, NaH, THF, reflujo;
(g) Mg, MeOH; (h) BF_{3}\cdotOEt_{2}, EtSH; (i)
6-(metilamino)-2-piridiletanol,
DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (j) LiOH, THF, H_{2}O, después
acidulación.
El derivado de tiazol III-3 se
prepara por condensación de 2-cianoacetamida
(III-1) y
3-bromo-1,1,1-trifluoroacetona
(III-2) en etanol a reflujo, por una modificación
apropiada del procedimiento de Schaefer y Gewald (J. Prakt.
Chem. 1974, 316, 684-692) para la
preparación de
4-fenil-2-(cianometil)tiazol.
La condensación aldólica de III-3 con un derivado de
benzaldehído apropiadamente sustituido, por ejemplo
4-(benciloxi)benzaldehído, da III-4. La
reacción se cataliza con una base adecuada, preferiblemente etóxido
de sodio, y se lleva a cabo en un disolvente polar, generalmente
etanol. La epoxidación de III-4 para producir
III-5 se lleva a cabo con hipoclorito de sodio en
presencia de alúmina neutra de acuerdo con el método general de
Foucaud (Synthesis 1987, 9,
854-856). También podrían utilizarse otras
condiciones de epoxidación bien conocidas, tales como mCPBA,
peróxido de hidrógeno básico o hidroperóxido de
terc-butilo, con tal que las condiciones sean
compatibles con la funcionalidad en el sustrato. Al exponerse a
trietilsilano en presencia de un ácido de Lewis apropiado, tal como
BF_{3}, OEt_{2}, o un ácido prótico adecuado, por ejemplo TFA o
HCl, el anillo de epóxido de III-5 se abre
reductivamente de una manera sumamente regioselectiva para dar la
cetona III-6, junto con la correspondiente
trimetilsililcianhidrina de III-6. Esta cianhidrina
se convierte convenientemente en la cetona III-6 al
exponerse a fluoruro de tetrabutilamonio en un disolvente apropiado,
generalmente THF. Esta cetona reacciona en una reacción de tipo
Wittig con fosfonoacetato de trietilo en presencia de una base
adecuada, por ejemplo LiN(TMS)_{2} o NaH, en un
disolvente polar aprótico, preferiblemente THF, para producir el
éster \alpha,\beta-insaturado
III-7 como una mezcla de isómeros olefínicos. Al
reaccionar con magnesio elemental en MeOH, la olefina de
III-7 se reduce selectivamente para producir el
derivado saturado III-8. El éster etílico se
convierte en un éster metílico en estas condiciones. La separación
del grupo bencilo se efectúa con etanotiol y
BF_{3}\cdotOEt_{2}, para producir el fenol
III-9, que se convierte en III-10,
de acuerdo con los métodos descritos en el Esquema I.
Esquema
IV
(a) BnCl, K_{2}ClO_{3},
acetona; (b) 5-metiltiazol, n-BuLi,
THF; (c) (EtO)_{2}P(=O)CH_{2}CO_{2}Et, NaH, THF;
(d) Mg, MeOH; (e) BF_{3}OEt_{2}, EtSH; (f)
6-(metilamino)-2-piridiletanol,
DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (g) LiOH, THF, H_{2}O, después
acidulación.
El grupo fenol de
4-hidroxifenilacetato de metilo
(V-1), disponible en el mercado, se protege con un
grupo protector adecuado, por ejemplo un éter metílico, un éter
bencílico, o un éter triisopropilsilílico. La protección de fenoles
es bien conocida por los expertos en la técnica y los grupos
protectores representativos se describen en la bibliografía
científica clásica, tal como Greene "Protective Groups in Organic
Synthesis" (editado por Wiley Interscience). El compuesto
(IV-2) resultante reacciona con reactivos de
Grignard u organolitio adecuados para producir cetonas. Por ejemplo,
2-litio-5-metiltiazol,
preparado a partir de 5-metiltiazol y
n-butil-litio, reacciona con
IV-2 en un disolvente etéreo, tal como THF o DME,
para producir el derivado de cetona IV-3. Después se
convierte esta cetona en IV-6 de acuerdo con los
métodos descritos en el Esquema III.
\newpage
Esquema
V
(a) TBDMSCl, KCN, ZnI_{2},
CH_{3}CN; (b) LDA, THF, después cloruro de
4-benciloxibencilo; (c) TBAF, THF; (d)
(EtO)_{2}P(=O)CH_{2}CO_{2}Et, NaH, THF; (e) H_{2}, Pd/C, EtOH; (f) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (g) LiOH, THF, H_{2}O, después acidulación.
(EtO)_{2}P(=O)CH_{2}CO_{2}Et, NaH, THF; (e) H_{2}, Pd/C, EtOH; (f) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (g) LiOH, THF, H_{2}O, después acidulación.
Un aldehído aromático seleccionado, por ejemplo
3-piridinacarboxaldehído (V-1), se
convierte en una cianhidrina protegida con sililo tal como
V-2 por reacción con ion cianuro en presencia de un
haluro de sililo adecuado, por ejemplo cloruro de trimetilsililo
(TMSCl), cloruro de triisopropilsililo (TIPSCl), o cloruro de
terc-butildimetilsililo (TBDMSCl o TBSCl). Las
fuentes típicas de ion cianuro incluyen cianuro de potasio (KCN),
cianuro de sodio (NaCN) y cianuro de tetrabutilamonio (Bu_{4}NCN).
La reacción se efectúa frecuentemente en presencia de una cantidad
catalítica de un ácido de Lewis, generalmente ZnI_{2}, y se
prefiere un disolvente aprótico polar, tal como acetonitrilo
(CH_{3}CN). Se pueden utilizar otras cianhidrinas protegidas, por
ejemplo una cianhidrina protegida con etoxietilo, con tal que el
grupo protector sea compatible con las reacciones químicas
subsiguientes y pueda separarse selectivamente cuando así se desee.
Se puede encontrar una discusión de grupos protectores en la
bibliografía científica clásica, tal como Green "Protective Grupos
in Organic Synthesis" (editado por
Wiley-Interscience). El compuesto
V-2 se somete a C-alquilación con un
haluro de bencilo apropiado, por ejemplo, cloruro de
4-benciloxibencilo, para producir
V-3. La reacción implica una desprotonación inicial
para producir un anión intermedio, que no se aísla sino que se hace
reaccionar in situ con un agente alquilante. Las bases
típicas para este tipo de reacción incluyen diisopropilamiduro de
litio (LDA) y hexametildisilazida de litio
(LiN(TMS)_{2}), y se prefieren los disolventes
apróticos polares tales como THF o DME. La
TBS-cianhidrina de V-3 se convierte
convenientemente en la cetona V-4 por reacción con
fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF). También podría utilizarse un
procedimiento en dos etapas para efectuar esta transformación. Por
ejemplo, puede separarse el grupo protector de sililo de
V-3 en condiciones ácidas, tal como por reacción con
HF, para producir una cianhidrina que se puede convertir en la
cetona V-4 por reacción con una base adecuada. El
compuesto V-4 se convierte en el éster
\alpha,\beta-insaturado V-5 a
través de la bien conocida reacción de Wittig. Típicamente, la
reacción se efectúa utilizando fosfonoacetato de trietilo en
presencia de una base adecuada, generalmente hidruro de sodio (NaH)
o LiN(TMS)_{2}, en un disolvente aprótico, tal como
tolueno, THF, o mezclas de ellos. La reducción del grupo olefínico
de V-5 se lleva a cabo óptimamente por hidrogenación
en presencia de un catalizador de paladio, por ejemplo paladio sobre
carbón vegetal activo, en un disolvente adecuado, tal como EtOAc,
MeOH, EtOH, i-PrOH, o mezclas de ellos. En estas
condiciones, también se separa el grupo protector bencilo del fenol.
El fenol resultante V-6 se hace reaccionar con
6-(metilamino)-2-piridiletanol en
una reacción de acoplamiento de tipo Mitsunobu (Organic
Reactions 1992, 42, 335-656;
Synthesis 1981, 1-28) para producir
V-7. La reacción es mediada por el complejo formado
entre un diéster de azodicarboxilato, tal como azodicarboxilato de
dietilo o azodicarboxilato de diisopropilo, y trifenilfosfina, y se
efectúa típicamente en un disolvente aprótico, por ejemplo THF,
CH_{2}Cl_{2}, o DMF. El éster etílico de V-7 se
hidroliza utilizando base acuosa, por ejemplo, LiOH o NaOH en
dioxano acuoso, THF, metanol o etanol, y la sal de carboxilato
intermedia se acidula con un ácido adecuado, por ejemplo TFA o HCl,
para producir el ácido carboxílico V-8. Si se desea,
puede aislarse la sal de carboxilato intermedia. Además, pueden
prepararse sales apropiadas del ácido carboxílico o la amina por
métodos bien conocidos por los expertos en la técnica.
Esquema
VI
(a) cloruro de acriloílo,
(i-Pr)_{2}NEt, CuCl, CH_{2}Cl_{2}; (b)
3-bromopiridina, Pd(OAc)_{2},
P(tol)_{3}, (i-Pr)_{2}NEt,
DMF; (c) cloruro de 4-metoxibencilmagnesio,
ZnI_{2}, CuBr\cdotDMS, THF, tolueno; (d) NaOEt, THF; (e)
AlCl_{3}, EtSH, CH_{2}Cl_{2}; (f)
6-(metilamino)-2-piridiletanol,
DIAD, (Ph)_{3}P, THF; (g) NaOH, dioxano, H_{2}O, después
acidulación.
Se hace reaccionar
(4S,5R)-1,5-dimetil-4-fenil-2-imidazolidinona
(VI-1), disponible en el mercado, con un cloruro de
ácido \alpha,\beta-insaturado apropiado, por
ejemplo, cloruro de acriloílo, para dar la imida
VI-2. La reacción es mediada por una base adecuada,
típicamente trietilamina (Et_{3}N) o diisopropiletilamina
\hbox{((i-Pr) _{2} NEt)}, y se
efectúa en presencia de una cantidad catalítica de un haluro
cuproso, por ejemplo cloruro de cobre (I). Se prefiere un disolvente
neutro tal como CH_{2}Cl_{2}. El compuesto VI-2
reacciona con un haluro de arilo adecuado, tal como
3-bromopiridina, en una reacción de tipo Heck (véase
Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345) para dar
VI-3. La reacción es mediada por una especie de
paladio (0) y, generalmente, se efectúa en un disolvente inerte, tal
como CH_{3}CN, propionitrilo, tolueno o DMF, en presencia de un
captador apropiado de ácido, tal como trietilamina (Et_{3}N) o
diisopropiletilamina((i-Pr)_{2}NEt). Las fuentes típicas de la especie de paladio (0) incluyen acetato de paladio (II) (Pd(OAc)_{2}) y cloruro de paladio (II) (PdCl_{2}), y muchas veces se incluyen ligandos de fosfina, por ejemplo trifenilfosfina (PPh_{3}) o tri-orto-tolilfosfina (P(tol)_{3}). El compuesto VI-3 reacciona con una especie de organocobre en una reacción de adición 1,4 para dar el producto de adición conjugado VI-4 (véase Melnyk, O.; Stephan, E.; Pourcelot, G.; Cresson, P. Tetrahedron 1992, 48, 841-850; Bongini, A.; Cardillo, G.; Mingardi, A.; Tomasini, C. Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1457-1466; van Heerden, P.S.; Bezuidenhoudt, B.C.B.; Ferreira, D. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 1821-1824. Para repasar las reacciones de organocobre, véase Posner, G. Organic Reactions 1972, 19, 1-113; Lipshutz, B. Organic Reactions 1992, 41, 135-631). La generación de la especie de organocobre puede efectuarse por adición de un reactivo de organolitio u organomagnesio, por ejemplo cloruro de 4-metoxibencilmagnesio, a una fuente de cobre (I), por ejemplo CuCl, CuBr\cdotDMS, o CuI, en un disolvente inerte, tal como Et_{2}O, THF, DME, tolueno, o mezclas de ellos. La diastereoselectividad de la reacción puede ser intensificada por ciertos ácidos de Lewis, por ejemplo, MgBr_{2}, Bu_{2}BOTf, o ZnI_{2}. La auxiliaridad quiral de VI-4 se elimina convenientemente por etanólisis en condiciones básicas. Por ejemplo, el tratamiento de VI-4 con etóxido de sodio en THF produce VI-5. El éter metílico de VI-5 puede escindirse con tribromuro de boro (BBr_{3}), en un disolvente inerte, preferiblemente CH_{2}Cl_{2}, o con etanotiol (EtSH) y tricloruro de aluminio (AlCl_{3}) en un disolvente inerte, tal como CH_{2}Cl_{2}, para producir el fenol VI-6. Otros métodos útiles para separar grupos protectores del tipo éter metílico están descritos en la bibliografía científica clásica (véase el Esquema V). El fenol VI-6 se convierte en VI-8 como se describe en el Esquema V.
Los reactivos de acoplamiento de amidas, como se
denominan en este documento, denotan reactivos que se pueden
utilizar para formar enlaces peptídicos. Los métodos típicos de
acoplamiento emplean carbodiimidas, anhídridos activados y ésteres y
haluros de acilo. Son típicos reactivos tales como EDC, DCC, DPPA,
reactivo BOP, HOBt, N-hidroxisuccinimida y cloruro
de oxalilo.
Los métodos de acoplamiento para formar enlaces
peptídicos son generalmente bien conocidos en la técnica. Los
métodos de síntesis de péptidos descritos de modo general por
Bodansky y col., THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS,
Springer-Verlag, Berlín, 1984, Ali y col., en J.
Med. Chem., 29, 984 (1986) y J. Med. Chem., 30, 2291
(1987) son en general ilustrativos de la técnica y se incorporan
aquí como referencia.
Típicamente, la amina o anilina se acopla a
través de su grupo amino libre a un sustrato de ácido carboxílico
apropiado utilizando un agente de acoplamiento de carbodiimida
apropiado, tal como N,N'-diciclohexilcarbodiimida
(DCC), opcionalmente en presencia de catalizadores tales como
1-hidroxibenzotriazol (HOBT) y dimetilaminopiridina
(DMAP). También son adecuados otros métodos, tales como la formación
de ésteres, anhídridos o haluros de ácido activados, del carboxilo
libre de un sustrato ácido adecuadamente protegido, y la
subsiguiente reacción con la amina libre de una amina adecuadamente
protegida, opcionalmente en presencia de una base. Por ejemplo, se
trata un aminoácido protegido con Boc o ácido amidinobenzoico
protegido con Cbz en un disolvente anhidro, tal como cloruro de
metileno o tetrahidrofurano (THF), en presencia de una base, tal
como N-metilmorfolina, DMAP o trialquilamina, con
cloroformiato de isobutilo para formar el "anhídrido activado",
que subsiguientemente se hace reaccionar con la amina libre de un
segundo aminoácido protegido o anilina.
Los intermedios útiles para preparar compuestos
de fórmula (I) en los que R^{2} es un bencimidazol están descritos
en Nestor y col., J. Med. Chem. 1984, 27, 320.
Los métodos representativos para preparar los compuestos de
bencimidazol útiles como intermedios en la presente invención
también son comunes en la técnica y se pueden encontrar, por
ejemplo, en EP-A-0381033.
Las sales de adición de ácido de los compuestos
se preparan de manera clásica en un disolvente adecuado a partir del
compuesto original y un exceso de un ácido, tal como ácido
clorhídrico, bromhídrico, fluorhídrico, sulfúrico, fosfórico,
acético, trifluoroacético, maleico, succínico o metanosulfónico.
Algunos de los compuestos forman sales internas o iones híbridos que
pueden ser aceptables. Las sales catiónicas se preparan por
tratamiento del compuesto original con un exceso de un reactivo
alcalino, tal como un hidróxido, carbonato alcóxido, que contenga el
catión apropiado; o con una amina orgánica apropiada. Los cationes
tales como Li^{+}, Na^{+}, K^{+}, Ca^{++}, Mg^{++} y
NH_{4}^{+} son ejemplos específicos de cationes presentes en las
sales farmacéuticamente aceptables.
Esta invención proporciona también una
composición farmacéutica que comprende un compuesto según la fórmula
(I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Consecuentemente, los
compuestos de fórmula (I) se pueden usar en la elaboración de un
medicamento. Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de
fórmula (I) preparadas como se describe en lo que antecede se pueden
formular como soluciones o polvos liofilizados para una
administración parenteral. Los polvos se pueden reconstituir
mediante la adición de un diluyente adecuado u otro vehículo
farmacéuticamente aceptable antes de ser usados. La formulación
líquida puede ser una solución acuosa isotónica tamponada. Ejemplos
de diluyentes adecuados son solución salina isotónica normal,
dextrosa al 5% estándar en agua o solución tamponada de acetato de
sodio o amonio. Tal formulación es especialmente adecuada para una
administración parenteral, pero se puede usar también para una
administración oral o contenida en un inhalador o nebulizador de
dosis medidas para ser insuflada. Puede ser deseable añadir
excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina,
hidroxi-celulosa, goma arábiga, polietilenglicol,
manitol, cloruro de sodio o citrato de sodio.
Alternativamente, estos compuestos pueden ser
encapsulados, comprimidos o preparados en una emulsión o jarabe para
una administración oral. Se pueden añadir vehículos sólidos o
líquidos farmacéuticamente aceptables para mejorar o estabilizar la
composición, o para facilitar la preparación de la composición. Los
vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, sulfato de calcio
dihidratado, alabastro, estearato de magnesio o ácido esteárico,
talco, pectina, goma arábiga, agar o gelatina. Los vehículos
líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva,
solución salina y agua. El vehículo puede incluir también un
material de liberación sostenida tal como monoestearato de glicerilo
o diestearato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de
vehículo sólido varía pero, preferentemente, estará entre
aproximadamente 20 mg y aproximadamente 1 g por unidad de
dosificación. Las preparaciones farmacéuticas se preparan siguiendo
las técnicas convencionales de la farmacia que incluyen trituración,
mezcladura, granulación y compresión, cuando sea necesario, para
formar comprimidos; o trituración, mezcladura de introducción para
formas de cápsulas de gelatina dura. Cuando se usa un vehículo
líquido, la preparación estará en la forma de un jarabe, elixir,
emulsión o suspensión acuosa o no acuosa. Tal formulación líquida se
puede administrar directamente por vía oral o se puede introducir en
una cápsula de gelatina blanda.
Para una administración rectal, los compuestos de
esta invención se pueden combinar también con excipientes tales como
manteca de cacao, glicerina, gelatina o polietilenglicoles y se
pueden moldear en forma de un supositorio.
Los compuestos descritos en la presente memoria
descriptiva son antagonistas del receptor de vitronectina, y son
útiles para tratar enfermedades en las que la patología subyacente
se puede atribuir a un ligando o célula que interacciona con el
receptor de vitronectina. Por ejemplo, estos compuestos son útiles
para el tratamiento de enfermedades en las que la pérdida de la
matriz ósea crea una patología. Por tanto, los presentes compuestos
son útiles para el tratamiento de osteoporosis, hiperparatiroidismo,
enfermedad de Paget, hipercalcemia maligna, lesiones osteolíticas
producidas por metástasis óseas, pérdida de masa ósea debida a
inmovilización o a una deficiencia de hormonas sexuales. Se cree que
los compuestos de esta invención tienen también utilidad como
agentes antitumorales, anti-angiogénicos,
antiinflamatorios y anti-metastásicos, y son útiles
en el tratamiento de aterosclerosis y restenosis.
El compuesto se administra por vía oral o por vía
parenteral al paciente, de una manera tal que la concentración de
fármaco sea suficiente para inhibir la resorción ósea u otra de
tales indicaciones. La composición farmacéutica que comprende el
compuesto se administra a una dosis oral entre aproximadamente 0,1 y
aproximadamente 50 mg/kg de una manera congruente con el estado del
paciente. Preferentemente, la dosis oral sería de aproximadamente
0,5 a aproximadamente 20 mg/kg. Para una terapia aguda, se prefiere
una administración parenteral. Una infusión intravenosa del péptido
en dextrosa al 5% en agua o solución salina normal, o una
formulación similar con excipientes adecuados es lo más eficaz,
aunque es también útil una inyección de bolo intramuscular.
Típicamente, la dosis parenteral será de aproximadamente 0,01 a
aproximadamente 100 mg/kg; preferentemente entre 0,1 y 20 mg/kg. Los
compuestos se administran de una a cuatro veces al día a un nivel
para conseguir una dosis diaria total de aproximadamente 0,4 a
aproximadamente 400 mg/kg/día. El nivel y el método precisos
mediante el que se administran los compuestos se determinan
fácilmente por un experto ordinario en la técnica, comparando el
nivel en sangre del agente con la concentración requerida para tener
un efecto terapéutico.
Esta invención proporciona adicionalmente un uso
de administración secuencial o en combinación física de un compuesto
de fórmula (I) y otros inhibidores de la resorción ósea, tal como
bisfosfonatos (es decir, alendronato), una terapia de sustitución de
hormonas, anti-estrógenos o calcitonina en la
fabricación de un medicamento para tratar la osteoporosis o la
inhibición de pérdida de masa ósea. Además, esta invención
proporciona un uso de un compuesto de esta invención y un agente
anabólico tal como la proteína morfogénica ósea, iproflavona, en la
fabricación de un medicamento para la prevención de pérdida de masa
ósea y/o para aumentar la masa ósea.
Adicionalmente, esta invención proporciona un uso
de administración secuencial o en combinación física de un compuesto
de fórmula (I) y un agente antineoplásico en la fabricación de un
medicamento para inhibir el crecimiento tumoral. Los compuestos de
la clase análoga de camptotecina, tal como topotecán, irinotecán y
9-aminocamptotecina, y complejos de coordinación de
platino tales como cisplatino, ormaplatino y tetraplatino, son
grupos bien conocidos de agentes antineoplásicos. Los compuestos de
la clase de análogos de la camptotecina se describen en las patentes
de EE.UU. nº 5.004.758, 4.604.463, 4.473.692, 4.545.880, 4.342.776,
4.513.138, 4.399.276, publicaciones de solicitudes de patentes
europeas nº 0.418.099 y 0.088.642, por Wani et al., J.
Med. Chem., 1986, 29, 2358, Wani et al.,
J. Med. Chem., 1980, 23, 554, Wani et
al., J. Med. Chem., 1987, 30, 1774, y
Nitta, et al., Proc. 14th International Congr.
Chemotherapy., 1985, Anticancer Section I, 28,
cuya descripción completa se incorpora como referencia en la
presente memoria descriptiva. El complejo de coordinación de
platino, cisplatino, está disponible bajo la denominación Platinol®
en la empresa Bristol Myers-Squibb Corporation. Las
formulaciones útiles para el cisplatino se describen en las patentes
de EE.UU. 5.562.925 y 4.310.515, cuya descripción completa se
incorpora como referencia a la presente memoria descriptiva.
En el uso de administración secuencial o en
combinación física de un compuesto de fórmula (I) y un agente
antineoplásico en la fabricación de un medicamento para inhibir el
crecimiento tumoral, el compuesto de coordinación de platino, por
ejemplo cisplatino, se puede administrar usando una infusión
intravenosa lenta. El vehículo preferido es una solución de
dextrosa/solución salina que contiene manitol. El esquema de
dosificación del compuesto de coordinación de platino puede ser del
orden de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg por metro
cuadrado (mg/m^{2}) de superficie corporal por curso de
tratamiento. Las infusiones del compuesto de coordinación de platino
se pueden proporcionar una a dos veces a la semana, y los
tratamientos semanales se pueden repetir varias veces. Usando un
compuesto de la clase de análogos de la camptotecina en una
administración parenteral, el curso de la terapia generalmente
empleada es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 300,0
mg/m^{2} de superficie corporal por día durante aproximadamente
cinco días consecutivos. Lo más preferentemente, el curso de la
terapia empleada para topotecán es de aproximadamente 1,0 a
aproximadamente 2,0 mg/m^{2} de superficie corporal por día
durante aproximadamente cinco días consecutivos. Preferentemente, el
curso de la terapia se repite al menos una vez en un intervalo de
aproximadamente siete días a aproximadamente veintiocho días.
La composición farmacéutica se puede formular
tanto con el compuesto de fórmula (I) como con el agente
antineoplásico en el mismo envase, pero se prefiere la formulación
en envases diferentes. Cuando los dos agentes se proporcionan en
forma de solución, pueden estar contenidos en un sistema de
infusión/inyección para una administración simultánea o en una
disposición en tándem.
Para una administración conveniente del compuesto
de fórmula (I) y el agente antineoplásico a la vez o en momentos
diferentes, se prepara un estuche de ensayo que comprende, en un
único envase, tal como una caja, cartón u otro envase, botes
individuales, bolsas, viales u otros envases que tengan cada uno una
cantidad eficaz del compuesto de fórmula (I) para una administración
parenteral, como se describió anteriormente, y una cantidad eficaz
del agente antineoplásico para una administración parenteral, como
se describió anteriormente. Tal estuche de ensayo puede comprender,
por ejemplo, los dos agentes farmacéuticos en envases separados o en
el mismo envase, opcionalmente en forma de polvos liofilizados y
envases de soluciones para ser reconstituidas. Una variación de esto
es incluir la solución para ser reconstituida y el polvo liofilizado
en dos cámaras de un único envase, que se puede causar que se
mezclen antes de ser usados. Con tal disposición, el agente
antineoplásico y el compuesto de esta invención pueden ser envasados
separadamente, como en dos envases, o liofilizados conjuntamente en
forma de un polvo y proporcionados en un único envase.
Cuando los agentes se proporcionan en forma de
solución, pueden estar contenidos en un sistema de
infusión/inyec-
ción para una administración simultánea o en una disposición en tándem. Por ejemplo, el compuesto de fórmula (I) puede estar en una forma inyectable intravenosa, o de bolsa de infusión conectada en serie, a través de tubos, al agente antineoplásico en una segunda bolsa de infusión. Usando tal sistema, un paciente puede recibir una inyección inicial de tipo bolo o una infusión del compuesto de fórmula (I) seguida de una infusión del agente antineoplásico.
ción para una administración simultánea o en una disposición en tándem. Por ejemplo, el compuesto de fórmula (I) puede estar en una forma inyectable intravenosa, o de bolsa de infusión conectada en serie, a través de tubos, al agente antineoplásico en una segunda bolsa de infusión. Usando tal sistema, un paciente puede recibir una inyección inicial de tipo bolo o una infusión del compuesto de fórmula (I) seguida de una infusión del agente antineoplásico.
Los compuestos pueden ser ensayados en uno de
varios ensayos biológicos para determinar la concentración de
compuesto que se requiere para tener un efecto farmacológico
dado.
Unión de
[H^{3}]-SK&F-107260 en fase
sólida al \alpha_{v}\beta_{3}: Se diluyó placenta humana
o plaquetas humanas \alpha_{v}\beta_{3}
(0,1-0,3 mg/ml) en tampón T (que contenía CaCl_{2}
2 mM y 1% de octilglucósido) con tampón T que contenía CaCl_{2} 1
mM, MnCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 1 mM (tampón A) y 0,05% de
NaN_{3}, y seguidamente se añadió inmediatamente a placas ELISA de
96 pocillos (Corning, Nueva York, NY) a 0,1 ml por pocillo. Se
añadieron 0,1-0,2 \mug de
\alpha_{v}\beta_{3} por pocillo. Las placas se incubaron
durante una noche a 4ºC. En el momento del experimento, los pocillos
se lavaron una vez con tampón A y se incubaron con 0,1 ml de
albúmina de suero bovino al 3,5% en el mismo tampón durante 1 h a TA
(temperatura ambiente). Después de la incubación, los pocillos se
aspiraron completamente y se lavaron dos veces con 0,2 ml de tampón
A.
Los compuestos se disolvieron en DMSO al 100%
para proporcionar una solución madre 2 mM, que se diluyó con tampón
de unión (Tris-HCl 15 mM (pH 7,4), NaCl 100 mM,
CaCl_{2} 1 mM, MnCl_{2} 1 mM y MgCl_{2} 1 mM) hasta una
concentración final del compuesto de 100 \muM. Esta solución se
diluye hasta la concentración final requerida de compuesto. Se
añadieron diversas concentraciones de antagonistas no marcados
(0,001-100 \muM) a los pocillos por triplicado,
seguidos de la adición de una concentración 5,0 nM de
[H^{3}]-SK&F-107260
(65-86 Ci/mmol).
Las placas se incubaron durante 1 h a TA. A
continuación de la incubación, los pocillos se aspiraron
completamente y se lavaron una vez con 0,2 ml de tampón A enfriado
con hielo en una forma de pocillo a pocillo. Los receptores se
solubilizaron con 0,1 ml de SDS al 1% y el
[H^{3}]-SK&F-107260 se
determinó por recuento del centelleo del líquido con la adición de
0,3 ml de "Ready Safe" en un contador de centelleo líquida
Beckman LS, con un 40% de eficacia. La unión no específica de
[H^{3}]-SK&F-107260 se
determinó en presencia de SK&F-107260 2 \muM y
era consistentemente menor que un 1% del aporte total de
radioligando. La IC_{50} (concentración del antagonista para
inhibir un 50% de unión de
[H^{3}]-SK&F-107260) se
determinó mediante una rutina de ajuste de la curva por mínimos
cuadrados, no lineal, que se modificó a partir del programa
LUNDON-2. La K_{i} (constante de disociación del
antagonista) se calculó según la ecuación K_{i} =
IC_{50}/(1+L/Kd), en la que L y Kd era la concentración y la
constante de disociación de
[H^{3}]-SK&F-107260,
respectivamente.
Los compuestos de la presente invención inhiben
la unión de vitronectina a SK&F 107260 en el intervalo de
concentración de aproximadamente 0,060 a aproximadamente 0,0005
micromolar.
Los compuestos de esta invención se ensayan
también en cuanto a la resorción ósea in vitro e in
vivo en ensayos clásicos de la técnica para evaluar la
inhibición de la formación ósea, tal como el ensayo de formación de
una fosita descrito en el documento EP 528.587, que se puede
realizar también usando osteoclastos humanos en lugar de
osteoclastos de rata, y el modelo de rata ovarectomizada, descrito
por Weonski et al., Cells and Materials 1991,
Sup. 1, 69-74.
Se usaron células de músculos lisos aórticos de
rata o humanos. La migración celular se vigiló en una cámara de
cultivo celular Transwell usando una membrana de policarbonato con
poros de 8 \mum (Costar). La superficie inferior del filtro se
revistió con vitronectina. Las células se pusieron en suspensión en
DMEM complementado con 0,2% de albúmina de suero bovino a una
concentración de 2,5-5,0 x 10^{6} células/ml, y
fueron previamente tratadas con el compuesto del ensayo a diversas
concentraciones durante 20 minutos a 20ºC. Se usó el disolvente a
solas como testigo. Se colocaron 0,2 ml de la suspensión celular en
el compartimento superior de la cámara. El compartimento inferior
contenía 0,6 ml de DMEM complementado con 0,2% de albúmina de suero
bovino. La incubación se llevó a cabo a 37ºC en una atmósfera de 95%
aire/5% CO_{2} durante 24 h. Después de la incubación, las células
que no migraron en la superficie superior del filtro se separaron
por raspadura suave. El filtro se fijó seguidamente en metanol y se
tiñó con tinte Giemsa al 10%. La migración se midió, o bien a)
contando el número de células que habían migrado a la superficie
inferior del filtro, o b) extrayendo las células teñidas con ácido
acético al 10% y determinando seguidamente la absorbancia a 600
nM.
Cada grupo experimental consiste en
5-6 ratas Sprague-Dawley machos
adultos (250-400 g de peso corporal). Las ratas son
tiroparatiroidectomizadas (por el proveedor, Taconic Farms) 7 días
antes de ser usadas. Todas las ratas reciben una dosis sustitutiva
de tiroxina cada 3 días. A la recepción de las ratas, se miden los
niveles de calcio ionizado en circulación en sangre completa
inmediatamente después de haber sido extraída por punción en la vena
de la cola en tubos heparinizados. Las ratas son incluidas si el
nivel de Ca ionizado (medido con un analizador del pH de calcio
Ciba-Corning modelo 634) es < 1,2 mM/l. Cada rata
se provee con un catéter venoso y arterial de alojamiento interno
para el suministro de material del ensayo y para la toma de muestras
de sangre, respectivamente. Las ratas se ponen seguidamente bajo una
dieta de pienso sin calcio y agua desionizada. Se miden los niveles
de Ca de basales y a cada rata se le administra vehículo testigo o
bien péptido 1-34 de hormona paratiroidea humana
(hPTH1-34, dosis de 1,25 \mug/kg/h en solución
salina/0,1% de albúmina de suero bovino, Bachem, Ca) o una mezcla de
hPTH1-34 y material del ensayo, por medio de
infusión intravenosa continua a través del catéter venoso usando un
dispositivo de bombeo de jeringa externa. La respuesta calcémica de
cada rata se mide a intervalos de dos horas durante el período de
infusión de 6-8 horas.
Los ensayos de resorción y adhesión de las
fositas se desarrollaron y normalizaron usando osteoclastos humanos
normales derivados de tejido de osteoclastoma. El Ensayo 1 se
desarrolló para la medición de los volúmenes de las fositas de
osteoclastos por microcopia confocal láser. El ensayo 2 se
desarrolló como una valoración de rendimiento superior en la que se
miden fragmentos de colágeno (liberado durante la resorción)
mediante un ensayo ELISA competitivo.
Ensayo
1
\bullet Se sacan partes alícuotas de
suspensiones celulares derivadas de osteoclastomas humanos de su
almacenamiento en nitrógeno líquido, se calientan rápidamente a 37ºC
y se lavan una vez en medio RPMI-1640 por
centrifugación (1.000 rpm, 5 minutos a 4ºC).
\bullet El medio es aspirado y sustituido con
anticuerpo anti-HLA-DR murino y
seguidamente se diluye 1:3 en medio RPMI-1640. La
suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo y se mezcla
frecuentemente.
\bullet Las células se lavan 2 veces con
RPMI-1640 frío y seguidamente se centrifugan (1.000
rpm, 5 minutos a 4ºC) y las células se transfieren seguidamente a un
tubo de centrifugadora estéril de 15 ml. Se cuenta el número de
células mononucleares en una cámara de recuento Neubauer
mejorada.
\bullet Se separan suficientes gránulos
magnéticos (5/célula mononuclear), revestidos con IgG
anti-ratón de cabra (Dynal, Great Neck, NY) de su
bote de almacenamiento y se colocan en 5 ml de medio de nueva
aportación (esto retira por lavado el conservante tóxico de azida).
El medio se retira inmovilizando los gránulos en un imán y se
sustituye con medio de nueva aportación.
\bullet Los gránulos se mezclan con las
células y la suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo. La
suspensión se mezcla frecuentemente.
\bullet Las células aplicadas como
revestimiento sobre gránulos se inmovilizan sobre un imán y las
células restantes (fracción rica en osteoclastos) se sedimentan en
un tubo de centrifugadora estéril de 50 ml.
\bullet Se añade medio de nueva aportación a
las células revestidas sobre gránulos para desalojar cualesquier
osteoclastos atrapados. Este procedimiento de lavado se repite 10
veces. Las células revestidas sobre gránulos se desecha.
\bullet Los osteoclastos viables se cuentan en
una cámara de recuento, usando diacetato de fluoresceína para marcar
las células vivas. Se usa una pipeta Pasteur de plástico desechable
de orificio grande para añadir la muestra a la cámara.
\bullet Los osteoclastos se sedimentan por
centrifugación y la densidad se ajusta al número apropiado en medio
EMEM (el número de osteoclastos es variable de un tumor a otro),
complementado con suero de ternera fetal al 10% y 1,7 g/litro de
bicarbonato de sodio.
\bullet Se sedimentan 3 ml de partes alícuotas
de la suspensión celular (por tratamiento de compuesto) en tubos de
centrifugadora de 15 ml. Las células se sedimentan por
centrifugación.
\bullet A cada tubo se añaden 3 ml del
tratamiento con el compuesto apropiado (diluido a 50 \muM en el
medio EMEM). También están incluidos testigos de vehículos
apropiados, un testigo positivo (anticuerpo monoclonal murino
anti-receptor de vitronectina[87MEM1] diluido
hasta 100 \mug /ml) y un testigo de isotipo (IgG_{2a} diluido a
100 \mug/ml). Las muestras se incuban a 37ºC durante 30
minutos.
\bullet Se siembran partes alícuotas de 0,5 ml
de las células en cortes de dentina estéril en una placa de 48
pocillos y se incuban a 37ºC durante 2 horas. Cada tratamiento se
valora por cuadruplicado.
\bullet Los cortes se lavan en seis cambios de
PBS caliente (10 ml/pocillo en una placa de 6 pocillos) y
seguidamente se colocan en medio de nueva aportación que contiene el
tratamiento de compuesto o muestras testigos. Las muestras se
incuban a 37ºC durante 48 horas.
\bullet Los cortes de huesos que contenían los
osteoclastos unidos se lavan en solución salina tamponada con
fosfato y se fijan en glutaraldehído al 2% (en cacodilato de sodio
0,2 M) durante 5 minutos.
\bullet Seguidamente se lavan en agua y se
incuban durante 4 minutos en tampón TRAP a 37ºC (0,5 mg/ml de
naftol-fosfato AS-BI disueltos en
N,N-dimetilformamida) y se mezclan con tampón de
citrato 0,25 M (pH 4,5) que contiene tartrato de sodio 10 mM.
\bullet A continuación de un lavado en agua
fría, los cortes se sumergen en tampón de acetato frío (0,1 M, pH
6,2) que contiene 1 mg/ml de granate rojo fijo y se incuba a 4ºC
durante 4 minutos.
\bullet El tampón en exceso es aspirado y los
cortes se secan a continuación de un lavado en agua.
\bullet Los osteoclastos positivos a TRAP
(precipitado color rojo ladrillo/púrpura) se cuentan por microcopia
de campo óptica y seguidamente se separan de la superficie de la
dentina por sonicación.
\bullet Los volúmenes de las fositas se
determinan usando el microscopio confocal Nikon/Lasertec ILM21W.
Ensayo
2
Los osteoclastos humanos son enriquecidos y
preparados para una valoración de compuestos como se describe en las
9 etapas iniciales del Ensayo 1. Para mayor claridad, estas etapas
se repiten a continuación.
\bullet Se sacan partes alícuotas de
suspensiones celulares derivadas de osteoclastomas humanos de su
almacenamiento en nitrógeno líquido, se calientan rápidamente a 37ºC
y se lavan una vez en medio RPMI-1640 por
centrifugación (1.000 rpm, 5 minutos a 4ºC).
\bullet El medio es aspirado y sustituido con
anticuerpo anti-HLA-DR murino y
seguidamente se diluye 1:3 en medio RPMI-1640. La
suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo y se mezcla
frecuentemente.
\bullet Las células se lavan 2 veces con
RPMI-1640 frío y seguidamente se centrifugan (1.000
rpm, 5 minutos a 4ºC) y las células se transfieren seguidamente a un
tubo de centrifugadora estéril de 15 ml. Se cuenta el número de
células mononucleares en una cámara de recuento Neubauner
mejorada.
\bullet Se sacan suficientes gránulos
magnéticos (5/célula mononuclear), revestidos con IgG
anti-ratón de cabra (Dynal, Great Neck, NY) de su
bote de almacenamiento y se colocan en 5 ml de medio de reciente
aportación (esto retira por lavado el conservante tóxico de azida).
El medio se retira inmovilizando los gránulos en un imán y se
sustituye con medio de nueva aportación.
\bullet Los gránulos se mezclan con las células
y la suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo. La
suspensión se mezcla frecuentemente.
\bullet Las células aplicadas como
revestimiento sobre gránulos se inmovilizan sobre un imán y las
células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantan en un
tubo de centrifugadora estéril de 50 ml.
\bullet Se añade medio de nueva aportación a
las células revestidas sobre gránulos para desalojar cualesquier
osteoclastos atrapados. Este procedimiento de lavado se repite 10
veces. Las células revestidas sobre gránulos se desecha.
\bullet Los osteoclastos viables se cuentan en
una cámara de recuento, usando diacetato de fluoresceína para marcar
las células vivas. Se usa una pipeta Pasteur de plástico desechable
de orificio grande para añadir la muestra a la cámara.
\bullet Los osteoclastos se sedimentan por
centrifugación y la densidad se ajusta al número apropiado en medio
EMEM (el número de osteoclastos es variable de un tumor a otro),
complementado con suero de ternera fetal al 10% y 1,7 g/litro de
bicarbonato de sodio.
En contraste con el método anteriormente descrito
en el Ensayo 1, los compuestos son valorados a 4 dosis para obtener
una IC_{50} como se indica a continuación:
\bullet Las preparaciones de osteoclastos se
preincuban durante 30 minutos a 37ºC con compuestos del ensayo (4
dosis) o testigos.
\bullet Seguidamente se siembran sobre cortes
de hueso cortical bovino en pocillos de una placa de cultivo de
tejidos de 48 pocillos y se incuban durante 2 horas adicionales a
37ºC.
\bullet Los trozos de huesos se lavan en seis
cambios de solución salina tamponada con fosfato (PBS), templada,
para separar las células no adherentes, y seguidamente se hacen
volver a los pocillos de la placa de 48 pocillos que contienen
compuesto de nueva aportación o testigos.
\bullet La placa de cultivo de tejidos se
incuba seguidamente durante 48 horas a 37ºC.
\bullet Las materias sobrenadantes de cada
pocillo se aspiran en tubos individuales y se valoran en un ensayo
ELISA competitivo que detecta el c-telopéptido de
colágeno de tipo I que es liberado durante el procedimiento de
resorción. Esto es un ensayo ELISA disponible en el comercio
(Osteometer, Dinamarca) que contiene un anticuerpo de conejo que
reacciona específicamente con una secuencia de 8 aminoácidos
(Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)
que está presente en el telopéptido carboxi-terminal
de la cadena a-1 del colágeno de tipo I. Los
resultados se expresan como % de inhibición de la resorción
comparado con un testigo de vehículo.
Los osteoclastos humanos son enriquecidos y
preparados para una valoración de los compuestos como se describió
anteriormente en las 9 etapas iniciales del Ensayo 1. Para mayor
claridad, estas etapas se repiten a continuación.
\bullet Se sacan partes alícuotas de
suspensiones celulares derivadas de osteoclastomas humanos de su
almacenamiento en nitrógeno líquido, se calientan rápidamente a 37ºC
y se lavan una vez en medio RPMI-1640 por
centrifugación (1.000 rpm, 5 minutos a 4ºC).
\bullet El medio es aspirado y sustituido con
anticuerpo anti-HLA-DR murino y
seguidamente se diluye 1:3 en medio RPMI-1640. La
suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo y se mezcla
frecuentemente.
\bullet Las células se lavan 2 veces con
RPMI-1640 frío y seguidamente se centrifugan (1.000
rpm, 5 minutos a 4ºC) y las células se transfieren seguidamente a un
tubo de centrifugadora estéril de 15 ml. Se cuenta el número de
células mononucleares en una cámara de recuento Neubauer
mejorada.
\bullet Se sacan suficientes gránulos
magnéticos (5/célula mononuclear), revestidos con IgG
anti-ratón de cabra (Dynal, Great Neck, NY) de su
bote de almacenamiento y se colocan en 5 ml de medio de reciente
aportación (esto retira por lavado el conservante tóxico de azida).
El medio se retira inmovilizando los gránulos en un imán y se
sustituye con medio de nueva aportación.
\bullet Los gránulos se mezclan con las células
y la suspensión se incuba durante 30 minutos sobre hielo. La
suspensión se mezcla frecuentemente.
\bullet Las células aplicadas como
revestimiento sobre gránulos se inmovilizan sobre un imán y las
células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantan en un
tubo de centrifugadora estéril de 50 ml.
\bullet Se añade medio de nueva aportación a
las células revestidas sobre gránulos para desalojar cualesquier
osteoclastos atrapados. Este procedimiento de lavado se repite 10
veces. Las células revestidas sobre gránulos se desechan.
\bullet Los osteoclastos viables se cuentan en
una cámara de recuento, usando diacetato de fluoresceína para marcar
las células vivas. Se usa una pipeta Pasteur de plástico desechable
de orificio grande para añadir la muestra a la cámara.
\bullet Los osteoclastos se sedimentan por
centrifugación y la densidad se ajusta al número apropiado en medio
EMEM (el número de osteoclastos es variable de un tumor a otro),
complementado con suero de ternera fetal al 10% y 1,7 g/litro de
bicarbonato de sodio.
\bullet Los osteoclastos derivados de
osteoclastomas se preincuban con compuesto (4 dosis) o testigos a
37ºC durante 30 minutos.
\bullet Las células se siembran seguidamente en
cortes revestidos con osteopontina (osteopontina humana o de rata,
2,5 \mug /ml) y se incuban durante 2 horas a 37ºC.
\bullet Se retiran células no adherentes
lavando los cortes vigorosamente en solución salina tamponada con
fosfato y las células que permanecían en los cortes se fijan en
acetona.
\bullet Los osteoclastos se tiñen para
fosfatasa ácida resistente a tartrato (TRAP), un marcador selectivo
para células de este fenotipo (véanse las etapas
15-17), y se cuentan por microcopia óptica. Los
resultados se expresan como % de la adhesión comparado con un
testigo de vehículo.
Se obtuvieron células de riñón embrionario humano
(células HEK293) a partir de la ATCC (catálogo nº CRL 1573). Las
células se hicieron crecer en medio esencial mínimo de Earl (EMEM)
que contenía sales de Earl, 10% de suero bovino fetal, 1% de
glutamina y 1% de penicilina-estreptomicina.
Un fragmento de EcoRI-KpnI de 3,2
kb de la subunidad \alpha_{v} un fragmento de
XbaI-XhoI de 2,4 kb de la subunidad \beta_{3} se
insertaron en los sitios de clonación EcoRI-EcoRV
del vector pCDN (Aiyar et al., 1994) que contiene un promotor
CMV y un marcador seleccionable G418 por ligadura a extremos romos.
Para una expresión estable, se electrotransformaron 8 x 10^{6}
células HEK 293 con construcciones \alpha_{v}+\beta_{3} (20
\mug de DNA de cada subunidad) usando un dispositivo Gene Pulser
(Hensley et al., 1994) y se dispusieron sobre placas en
placas de 100 mm (5 x 10^{5} células/placa). Después de 48 horas,
el medio de crecimiento se complementó con 450 \mug/ml de
Geneticina (G418 sulfato, GIBCO-BRL, Bethesda, MD).
Las células se mantuvieron en el medio de selección hasta que las
colonias eran suficientemente grandes para ser sometidas a
ensayo.
Para determinar si los transfectantes de HEK 293
expresaban el receptor de vitronectina, las células se inmovilizaron
en placas inclinadas de vidrio para microscopio por centrifugación,
se fijaron en acetona durante 2 minutos a TA y se secaron con aire.
La reactividad específica con 23C6, un anticuerpo monoclonal
específico para el complejo \alpha_{v}\beta_{3} se determinó
usando un método de inmunofluorescencia indirecta clásica.
Placas ELISA de 96 pocillos de Corning fueron
pre-revestidas durante una noche a 4ºC con 0,1 ml de
vitronectina humana (0,2 \mug/ml en medio RPMI). En el momento del
experimento, las placas se lavaron una vez con medio RPMI y se
bloquearon con 3,5% de BSA en medio RPMI durante 1 h a TA. Se
volvieron a poner en suspensión 293 células transfectadas en medio
RPMI, complementado con Hepes 20 mM, pH 7,4, y BSA al 0,1% a una
densidad de 0,5 x 10^{6} células/ml. Se añadió 0,1 ml de
suspensión celular a cada pocillo y se incubó durante 1 h a 37ºC en
presencia o ausencia de diversos antagonistas de
\alpha_{v}\beta_{3}. A continuación de la incubación, se
añadieron 0,025 ml de una solución de formaldehído al 10%, pH 7,4, y
las células se fijaron a TA durante 10 minutos. Las placas se
lavaron 3 veces con 0,2 ml de medio RPMI y las células adherentes se
tiñeron con 0,1 ml de azul de toluidina al 0,5% durante 20 minutos a
TA. El tinte en exceso se separó mediante lavado intensivo con agua
desionizada. El azul de toluidina incorporado en las células se
eluyó mediante la adición de 0,1 ml de etanol al 50% que contenía
HCl 50 mM. La adhesión celular se cuantificó a una densidad óptica
de 600 nm en un lector de placas de microtitulación (Titertek
Multiskan MC, Sterling, VA).
El receptor de vitronectina
\alpha_{v}\beta_{5} se purificó a partir de placenta humana.
La preparación del receptor se diluyó con Tris-HCl
50 mM, pH 7,5, NaCl 100 mM, CaCl_{2} 1 mM, MnCl_{2} 1 mM,
MgCl_{2} 1 mM (tampón A) y se añadió inmediatamente a placas ELISA
de 96 pocillos a 0,1 ml por pocillo. Se añadieron
0,1-0,2 \mug de \alpha_{v}\beta_{3} por
pocillo. Las placas se incubaron durante una noche a 4ºC. En el
momento del experimento, los pocillos se lavaron una vez con tampón
A y se incubaron con 0,1 ml de albúmina de suero bovino al 3,5% en
el mismo tampón durante 1 h a TA. A continuación de la incubación,
los pocillos se aspiraron completamente y se lavaron dos veces con
0,2 ml de tampón A.
En un ensayo de competición de
[H^{3}]-SK&F-107260, se
añadieron diversas concentraciones de antagonistas sin marcar
(0,001-100 \muM) a los pocillos, y seguidamente se
añadió [H^{3}]-SK&F-107260 5,0
nM. Las placas se incubaron durante 1 h a TA. A continuación de la
incubación, los pocillos se aspiraron completamente y se lavaron una
vez con 0,2 ml de tampón A enfriado en hielo en una manera de
pocillo a pocillo. Los receptores se solubilizaron con 0,1 ml de SDS
al 1% y el [H^{3}]-SK&F-107260
unido se determinó por recuento del centelleo del líquido con la
adición de 3 ml de "Ready Safe" en un contador de centelleo del
líquido Beckman LS 6800, con un 40% de eficacia. La unión no
específica de
[H^{3}]-SK&F-107260 se
determinó en presencia de SK&F-107260 2 \muM y
era consistentemente menor que 1% del aporte total del radioligando.
La IC_{50} (concentración del antagonista para inhibir un 50% de
la unión de
[H^{3}]-SK&F-107260) se
determinó mediante una rutina de ajuste de la curva por mínimos
cuadrados, no lineal, que se modificó a partir del programa
LUNDON-2. La K_{i} (constante de disociación del
antagonista) se calculó según la ecuación de Cheng y Prusoff:
K_{i} = IC_{50}/(1 + L/Kd), en la que L y K_{d} eran la
concentración y la constante de disociación de
[H^{3}]-SK&F-107260,
respectivamente.
Se lisaron diez unidades de plaquetas humanas
lavadas y caducadas (obtenidas de la Cruz Roja) mediante agitación
suave en octilglucósido al 3%, Tris-HCl 20 mM, pH
7,4, NaCl 140 mM, CaCl_{2} 2 mM a 4ºC durante 2 h. El lisado se
centrifugó a 100.000 g durante 1 h. La materia sobrenadante obtenida
se aplicó a una columna 4B de
lentil-lectina-sefarosa de 5 ml
(Laboratorios E. Y.) previamente equilibrada con Tris 20
mM-HCl, pH 7,4, NaCl 100 mM, CaCl_{2} 2 mM y
octilglucósido al 1% (tampón A). Después de 2 h de incubación, la
columna se lavó con 50 ml de tampón A frío. El
GPIIb-IIIa retenido en lectina se eluyó con tampón A
que contenía dextrosa al 10%. Todos los procedimientos se realizaron
a 4ºC. El GPIIb-IIIa obtenido era >95% puro según
se mostró mediante electroforesis de gel de poliacrilamida SDS.
Los compuestos preferidos de esta invención
tienen una afinidad por el receptor de vitronectina con relación al
receptor de fibrinógeno mayor que 10:1. Los compuestos más
preferidos tienen una relación de actividad mayor que 100:1.
La eficacia de los compuestos de fórmula (I)
solos o en combinación con un agente antineoplástico se puede
determinar usando diversos modelos de tumores de ratón
trasplantables. Véanse las patentes de EE.UU. nº 5.004.758 y
5.633.016 para detalles de estos modelos.
Los ejemplos que siguen no están destinados en
modo alguno a limitar el alcance de esta invención, sino que se
proporcionan para ilustrar el modo de preparar y usar los compuestos
de esta invención. Muchas otras realizaciones serán fácilmente
evidentes para los expertos en la técnica.
Los espectros de resonancia magnética nuclear
(H^{1} RMN) se registraron a 250, 300 ó 400 MHz. Los
desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (\delta)
campo abajo del patrón interno de tetrametilsilano (TMS). Las
abreviaturas para los datos de RMN son como sigue: s=singlete,
d=doblete, t=triplete, q=cuartete, m=multiplete, dd=doblete de
dobletes, dt=doblete de tripletes, app=aparente, br=ancho. J indica
la constante de acoplamiento de RMN medida en hertzios. CDCl_{3}
es deutorocloroformo, DMSO-d_{6} es
hexadeuterodimetilsulfóxido y CD_{3}OD es tetradeuterometanol. Los
espectros infrarrojos (IR) se registraron en el modo de transmisión,
y las posiciones de la banda se expresan en longitudes de onda
inversas (cm^{-1}). Los espectros de masas se obtuvieron usando
técnicas de ionización por electropulverización (ES) o FAB
(bombardeo con átomos rápidos). Los análisis elementales se
realizaron en el mismo lugar o por Quantitative Technologies Inc.,
Whitehouse, NJ. Los puntos de fusión se tomaron en un aparato de
puntos de fusión Thomas-Hoover y están sin corregir.
Todas las temperaturas se expresan en grados Celsius. Se usaron
placas de capa fina Analtech Silical Gel GF y E. Merck Silical Gel
60 F-254 para la cromatografía de capa fina. Se
llevaron a cabo cromatografías tanto rápida como de gravedad en gel
de sílice E. Merck Kieselgel 60 (malla 230-400). La
HPLC analítica y preparativa se llevaron a cabo en cromatógrafos
Rainin o Beckman. ODS se refiere a un soporte cromatográfico de gel
de sílice derivado de octadecilsililo. Apex-ODS de 5
\mu indica un soporte cromatográfico de gel de sílice derivado de
octadecilsililo que tiene un tamaño de partículas nominal de 5
\mu, fabricado por Jones Chromatography, Littleton, Colorado. YMC
ODS-AQ® es un soporte cromatográfico de ODS y es una
marca registrada de la empresa YMC Co. Ltd., Kyoto, Japón.
PRP-1® es un soporte cromatográfico polímero
(estireno-divinilbenceno), y es una marca registrada
de la empresa Hamilton Co., Reno, Nevada. Celite® es un adyuvante de
filtración compuesto de sílice de diatomeas lavada con ácido, y es
una marca registrada de Manvile Corp., Denver, Colorado.
Preparación
1
Una solución de
2-amino-6-picolina
(21,63 g, 200 mmoles) y bicarbonato de di-terc-butilo (52,38
g, 240 mmoles) en CH_{2}Cl_{2} (200 ml) se concentró en el
evaporador rotatorio a 50ºC, y el residuo resultante se dejó rotar
en el evaporador rotatorio a 50ºC bajo vacío. Después de 21,5 h, la
reacción se diluyó con hexano (400 ml) y se filtró a través de gel
de sílice (hexano seguido de 20% de EtOAc/hexano). Una concentración
dejó el compuesto del título (41,84 g, cuantitativo) en forma de un
aceite amarillo claro que solidificó gradualmente en reposo:
H^{1}-RMN (250 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,71 (d,
J=8,3 Hz, 1H), 7,40-7,65 (m, 2H), 6,80 (d, J=7,5 Hz,
1H), 2,43 (s, 3H), 1,50 (s, 9H); MS (ES) m/e 153 (M + H -
C_{4}H_{8})^{+}.
Se añadió NaH (60% en aceite mineral, 3,60 g, 90
mmoles) en partes durante varios minutos a una solución de
2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-picolina
(15,62 g, 75 mmoles) y yodometano (9,3 ml, 150 mmoles) en DMSO
anhidro (75 ml) a 15ºC (baño de agua fría). La temperatura interna
se elevó a 35ºC. Cuando cesó el desprendimiento gaseoso, el baño de
agua fría se retiró y la reacción se dejó agitar a TA. Después de
0,5 h, la mezcla amarilla oscura se vertió en hielo/H_{2}O (300
ml) y se extrajo con Et_{2}O (3 x 300 ml). Las capas orgánicas
combinadas se lavaron secuencialmente con H_{2}O (2 x 75 ml) y
salmuera (75 ml). El secado (MgSO_{4}) y la concentración dejaron
un aceite amarillo que se cromatografió sobre gel de sílice (7%
EtOAc/hexano). El compuesto del título (13,01 g, 78%) se obtuvo en
forma de un aceite débilmente amarillo: H^{1}-RMN
(250 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,51 (app t, 1H), 7,37 (d, J=8,2 Hz,
1H), 6,86 (d, J=7,2 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 1,50 (s,
9H); MS (ES) m/e 223 (M+H)^{+}.
Se preparó LDA a 0ºC bajo argón a partir de
diisopropilamina (19,5 ml, 139,14 mmoles) y n-BuLi
2,5 M en hexano (46,4 ml, 115,95 mmoles) en THF seco (350 ml). Esta
solución se enfrió a -78ºC y se añadió gota a gota una solución de
2-[(terc-butoxicarbonil)metilamino]-6-picolina
(10,31 g, 46,38 mmoles) en THF seco (46 ml) durante 10 minutos. Se
usó THF seco adicional (2 ml) en la transferencia. La solución color
naranja se agitó a -78ºC durante 15 minutos y seguidamente se añadió
rápidamente carbonato de dietilo (6,2 ml, 51,02 mmoles). La solución
roja se agitó a -78ºC durante 15 minutos, seguidamente se inactivó
con NH_{4}Cl semisaturado (175 ml). La mezcla se calentó a +5ºC y
se extrajo con EtOAc (175 ml) y seguidamente con CH_{2}Cl_{2} (2
x 100 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera
(100 ml), se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron. El aceite
amarillo nebuloso se cromatografió sobre gel de sílice (15%
EtOAc/hexano) para proporcionar el compuesto del título (10,72 g,
79%) en forma de un aceite amarillo luminoso:
H^{1}-RMN (250 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,51-7,63 (m, 2H), 6,91-7,03 (m,
1H), 4,19 (q, J=7,1 Hz, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,38 (s, 3H), 1,27 (t,
J=7,1 Hz, 3H), 1,51 (s, 9H); MS (ES) m/e 295 (M+H)^{+}.
Una solución de LiBH_{4} 2 N en THF (7 ml, 14
mmoles) se añadió por medio de una jeringa a una solución agitada de
6-[(terc-butoxicarbonil)metilamino]-2-piridilacetato
de etilo (6,97 g, 23,7 mmoles) en THF anhidro (30 ml) bajo argón. La
reacción se calentó seguidamente de forma lenta hasta reflujo
(exotermia inicial). Después de 16 h a reflujo, la reacción se
enfrió a 0ºC y se inactivó cuidadosamente con agua (50 ml). La
mezcla se extrajo con EtOAc (150 ml), y la capa orgánica se lavó con
salmuera, se secó (Na_{2}SO_{4}) y se concentró. Una
purificación por cromatografía rápida sobre gel de sílice (35%
EtOAc/hexano) proporcionó el compuesto del título (5,26 g, 88%) en
forma de un aceite transparente: H^{1}-RMN (400
MHz, CDCl_{3}) \delta 7,57 (m, 2H), 6,88 (d, J=7,2 Hz, 1H),
4,01 (t, 2H), 3,39 (s, 3H), 3,00 (t, 2H), 1,53 (s, 9H); MS (ES) m/e
253,2 (M+H)^{+}.
A
6-[(terc-butoxicarbonil)metilamino]-2-piridiletanol
(17,9 g, 71 mmoles) se añadió una solución de HCl 4 N en dioxano
(200 ml). La reacción se agitó a TA durante 1 h (se observó un suave
desprendimiento gaseoso) y seguidamente se concentró hasta sequedad.
El producto como la sal de hidrocloruro solidificó bajo vacío. El
sólido se disolvió en NaCl-solución saturada de NaOH
1,0 N (75 ml) y la solución se extrajo con Et_{2}O (2 x 200 ml).
Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron
(Na_{2}SO_{4}) y se concentraron para proporcionar el compuesto
del título (9,12 g, 85%) en forma de un sólido céreo:
H^{1}-RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,37 (t,
1H), 6,42 (d, J=7,3 Hz, 1H), 6,27 (d, J=8,3 Hz, 1H), 4,62 (br, s,
1H), 3,96 (t, 2H), 2,90 (d, J=5,2 Hz, 3H), 2,84 (t, 2H); MS (ES) m/e
153 (M+H)^{+}.
Preparación
2
A una solución de 2-aminopiridina
(94,12 g, 1 mol) y Et_{3}N (167,3 ml, 1,2 moles) en
CH_{2}Cl_{2} (1 litro) se añadió cloruro de pivaloílo (135,5 ml,
1,1 mol) gota a gota a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA a medida
que se calentaba el baño. Después de 18 h, la mezcla se filtró. El
filtrado se lavó secuencialmente con H_{2}O (1,5 litros) y
NaHCO_{3} saturado (2 x 1,5 litros), después se secó (MgSO_{4})
y se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título
(183 g, 103%) como un sólido blanquecino: ^{1}H NMR (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta 8,28 (m, 2 H), 8,00 (s ancho, 1 H), 7,70 (m, 1
H), 7,03 (m, 1 H), 1,31 (s, 9 H); MS (ES) m/e 179 (M +
H)^{+}.
Nota: ^{1}H NMR indicó la presencia de una
pequeña cantidad de impurezas que contenían terc-butilo, pero
el material es lo suficientemente puro para usarlo en la etapa
siguiente.
A una solución de
2-(pivaloilamino)piridina (17,8 g, 100 mmol) en THF seco (250
ml) a -20ºC se añadió n-BuLi (solución 25 M en
hexano, 100 ml, 250 mmol) gota a gota a lo largo de 30 min. Después
de 2 h, se añadió gota a gota DMF (21 ml, 275 mmol) a lo largo de 30
min. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentaba el baño.
Después de 18 h, se extinguió la reacción por adición de NH_{4}Cl
saturado (300 ml), y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3 x
400 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y
concentraron para dar el compuesto del título como una mezcla 2:1
con 2-(pivaloilamino)piridina (22 g). ^{1}H NMR (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta 10,95 (s ancho, 1 H), 9,95 (s, 1 H), 8,69 (m, 1
H), 8,02 (m, 2 H), 7,20 (m, 1 H), 1,38 (s, 9 H); MS (ES) m/e 207 (M
+ H)^{+}.
Nota: El procedimiento anterior se repitió
utilizando 1-formilpiperidina (30,5 ml, 275 mmol) en
lugar de DMF para dar el compuesto del título como una mezcla 4:1
con 2-(pivaloilamino)piridina (21 g).
Se disolvió
2-pivaloilamino)-3-piridinacarboxaldehído
(procedente de la etapa b, 43 g) en HCl 3 M (500 ml), y la solución
se calentó a reflujo. Después de 18 h, la mezcla se enfrió a TA y el
pH se ajustó cuidadosamente a 7 utilizando K_{2}CO_{3} sólido.
La solución acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Las capas
orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y concentraron para dar
el compuesto del título (24,57 g, 101%) como un sólido pardo rojizo:
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,85 (s, 1 H), 8,24 (m, 1
H), 7,80 (m, 1 H), 6,90 (s ancho, 2 H), 6,74 (m, 2 H); MS (ES) m/e
123 (M + H)^{+}.
A una solución de
2-amino-3-piridinacarboxaldehído
(procedente de la etapa c, 24,57 g) en acetona (750 ml) se añadió
prolina (2,3 g, 20 mmol), y después la mezcla se calentó a reflujo.
Después de 48 h, la mezcla se enfrió a TA, se filtró y se concentró.
La cromatografía instantánea en columna sobre gel de sílice (35% de
acetona/hexano) dio el compuesto del título (18,5 g, 64% a lo largo
de 3 etapas) como un sólido amarillo anaranjado: ^{1}H NMR (300
MHz, CDCl_{3}) \delta 9,07 (m, 1 H), 8,10 (m, 2 H), 7,40 (m, 2
H), 2,80 (s, 3 H); MS (ES) m/e 145 (M + H)^{+}.
Una mezcla de
2-metil-1,8-naftiridina
(18,5 g, 128 mmol), 10% de Pd/C (5 g) y EtOH absoluto (150 ml) se
agitó por balanceo en hidrógeno (1,05 kg/cm^{2}) en un aparato
Parr. Después de 24 h, la mezcla se filtró a través de celite®, y el
lecho del filtro de lavó secuencialmente con EtOH absoluto y EtOAc.
El filtrado se concentró a sequedad para dar el compuesto del título
(18,85 g, 99%) como un sólido blanquecino: ^{1}H NMR (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,02 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 6,34 (d, J = 7,5 Hz,
1 H), 4,80 (s ancho, 1 H), 3,38 (m, 2 H), 2,74 (m, 2 H), 2,30 (s, 3
H), 1,88 (m, 2 H); MS (ES) m/e 149 (M + H)^{+}.
A una solución de
2-metil-5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridina
(23,32 g, 157 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo (44,74 g,
205 mmol) en THF seco (750 ml) a 0ºC se añadió LiHMDS (solución 1,0
M en THF, 205 ml, 205 mmol) gota a gota. Treinta minutos después de
completarse la adición, se extinguió la reacción por adición de
NH_{4}Cl saturado (500 ml) y se extrajo la mezcla con EtOAc (3 x
500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y
concentraron a presión reducida. La cromatografía instantánea en
columna sobre gel de sílice (40% de EtOAc/hexano) dio el compuesto
del título (32,3 g, 83%) como un aceite amarillo claro: ^{1}H NMR
(300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,27 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 6,81 (d, J
= 7,6 Hz, 1H), 3,69 - 3,79 (m, 2 H), 2,65 - 2,75 (m, 2 H), 2,48 (s,
3 H), 1,83 - 1,98 (m, 2 H), 1,52 (s, 9 H); MS (ES) m/e 249 (M +
H)^{+}.
A una solución de diisopropilamina (47,7 ml, 364
mmol) en THF seco (250 ml) a 0ºC se añadió n-BuLi
(2,5 M en hexano, 145,6 ml, 364 mmol) gota a gota. Después de 15
min, se añadió gota a gota esta solución a una solución de
2-metil-8-(terc-butoxicarbonil)-5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridina
(32,3 g, 130 mmol) y carbonato de dietilo (56,8 ml, 481 mmol) en THF
seco (400 ml) a -78ºC. Después de 30 min, se extinguió la reacción
por adición de NH_{4}Cl saturado (500 ml), y la mezcla se calentó
a la TA y se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Los extractos orgánicos
combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a
presión reducida. El secado a alto vacío durante una noche dio el
compuesto del título 42,52 g, 102%) como un aceite amarillo claro:
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35 (d, J = 7,5 Hz, 1
H), 6,96 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 4,18 (t, 2 H), 3,75 (m, 4 H), 2,72
(t, 2 H), 1,91 (m, 2 H), 1,52 (s, 9 H), 1,24 (m, 3 H) MS (ES) m/e
321 (M + H)^{+}.
Nota: ^{1}H-NMR indicó una
pequeña cantidad de carbonato de dietilo presente en el producto,
pero el material se suficientemente puro para uso en la siguiente
etapa.
A una solución de
[8-(terc-butoxicarbonil)-5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il]acetato
de etilo (42,52 g, 130
mmol) en THF seco (650 ml) a TA se añadió LiBH_{4} (2,0 M en THF, 65 ml, 130 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo. Después de 18 h, la mezcla se enfrió a 0ºC y la reacción se extinguió cuidadosamente con H_{2}O (300 ml). Después de 10 min, la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y concentraron a presión reducida.
mmol) en THF seco (650 ml) a TA se añadió LiBH_{4} (2,0 M en THF, 65 ml, 130 mmol) y la mezcla resultante se calentó a reflujo. Después de 18 h, la mezcla se enfrió a 0ºC y la reacción se extinguió cuidadosamente con H_{2}O (300 ml). Después de 10 min, la mezcla se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y concentraron a presión reducida.
El residuo anterior se disolvió en
CH_{2}Cl_{2} (3 x 300 ml). A esta solución se añadió HCl 4 N en
dioxano (300 ml) lentamente a TA. Después de 4 h, la mezcla se
concentró a presión reducida. El residuo se recogió en una mezcla
1:1 de NaOH 1,0 N y NaCl saturado (300 ml) y se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (3 x 300 ml). Los extractos orgánicos combinados se
secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron a presión
reducida. El residuo se recogió en Et_{2}O (250 ml) y se añadió
gota a gota ácido fórmico al 96% (130 mmol). El sólido resultante se
recogió por filtración y se lavó con Et_{2}O (2 x 50 ml). El
sólido se disolvió en una mezcla 1:1 de NaOH 1,0 N y NaCl (300 ml) y
la solución se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 300 ml). Los
extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron
y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del
título (11,1 g, 48% a lo largo de 4 etapas) como un sólido amarillo.
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,05 (d, J = 7,6 Hz, 1
H), 6,33 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 3,90 (t, 2 H), 3,39 (m, 2 H), 2,75
(t, 2 H), 2,70 (t, 2 H), 1,90 (m, 2 H); MS (ES) m/e 179 (M +
H)^{+}.
Preparación
3
A una solución de ácido
4-metoxifenilacético (3,3 g, 20 mmol) en DMF seca
(75 ml) se añadió hidrocloruro de
N-metoxi-N-metilamina
(1,95 g, 20 mmol), Et_{3}N (3,1 ml, 22 mmol), HOBt\cdotH_{2}O
(1,95 g, 22 mmol), y EDC (2,7 g, 22 mmol). La solución se agitó a TA
durante una noche, y después se concentró a vacío. El residuo se
recogió en una solución de Na_{2}CO_{3} al 5% (10 ml) y se
extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y concentraron.
El residuo se cromatografió sobre gel de sílice (3% de
MeOH/CH_{2}Cl_{2} para dar el compuesto del título (1,54 g, 37%)
como un sólido blanco: MS (ES) m/e 210 (M+H)^{+}.
A una solución de sec-BuLi (1,3 M
en THF, 22,6 ml, 29,5 mmol) en THF seco (50 ml) se añadió
4-bromobenzotrifluoruro (3,3 g, 14,7 mmol) en THF
seco (20 ml) gota a gota a -78ºC. Después de 20 min, se añadió gota
a gota
N-metoxi-N-metil-2-(4-metoxifenil)acetamida
(1,5 g, 7,4 mmol) en THF seco (20 ml). Después de 1 h, se extinguió
la reacción con NH_{4}Cl saturado (10 ml), se calentó a la TA y se
extrajo con Et_{2}O (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y concentraron. El residuo se
cromatografió sobre gel de sílice (15% de EtOAc/ hexano) para dar el
compuesto del título (2,2 g, 100%) como un sólido amarillento: TLC
(1,5% de EtOAc/hexano) R_{f} 0,81; ^{1}H NMR (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta 8,10 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,72 (d, J = 8,2 Hz,
2 H), 7,18 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 6,88 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 4,25 (s,
2 H), 3,79 (s, 3 H).
A una suspensión de NaH al 60% (350 mg, 8,84
mmol) en tolueno anhidro (30 ml) se añadió gota a gota
fosfonoacetato de trietilo (2,0 g, 8,84 mmol) en tolueno seco (20
ml) a TA. Después de 15 min, se añadió una solución de
2-(4-metoxifenil)-1-[4-(trifluorometil)fenil]etanona
(1,3 g, 4,42 mmoles) en tolueno seco (15 ml), y la solución se
calentó a reflujo. Después de 16 h, la reacción se extinguió por
adición de NH_{4}Cl saturado (10 ml) y la mezcla se extrajo con
EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. Se obtuvo el compuesto
del título (2,2 g, 56%, una mezcla de dos componentes) como un
aceite amarillo claro: TLC (5% de EtOAc/hexano) R_{f} 0,42, 0,44.
Este material se utilizó sin más purificación.
A una suspensión de 10% de Pd/C (600 mg) en EtOH
absoluto (50 ml) se añadió
(\pm)-4-(4-metoxifenil)-3-[4-(trifluorometil)fenil]crotonato
de etilo (2,2 g, 6 mmol), y la mezcla se agitó con movimiento
oscilatorio en un aparato Parr a TA en H_{2} (3,5 kg/cm^{2}).
Después de 4 h, la mezcla se filtró a través de un lecho de celite®
y el filtrado se concentró. Esta secuencia de reacción se repitió
tres veces. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice (35% de
EtOAc/hexano) para dar el compuesto del título (900 mg, 56%) como un
aceite: TLC (5% de EtOAc/hexano) R_{f} 0,46; ^{1}H NMR (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta 7,51 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,24 (d, J = 8,2 Hz,
2 H), 6,94 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 6,76 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 3,99 (q,
J = 7,1 Hz, 2 H), 3,76 (s, 3 H), 3,35 - 3,50 (m, 1 H), 2,75 - 2,93
(m, 2 H), 2,69 (dd, J = 15,6, 6,4 Hz, 1 H), 2,60 (dd, J = 15,6, 8,9
Hz, 1 H), 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
A una solución de
(\pm)-4-(4-metoxifenil)-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoato
de etilo (450 mg, 1,23 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) se añadió
BBr_{3} (1,5 ml, 1,48 mmol) a -10ºC. Después de 3 h, la reacción
se extinguió cuidadosamente con EtOH (10 ml) y la solución se dejó
calentar a TA. La mezcla se concentró y el residuo se cromatografió
sobre gel de sílice (20% de EtOAc/hexano) para dar el compuesto del
título (270 mg, 63%) como un aceite amarillo: TLC (20% de
EtOAc/hexano) R_{f} 0,22.
Preparación
4
A una solución de 4-bromofenol
(17,3 g, 100 mmol) en DMF seca (100 ml) a TA se añadió imidazol
(13,62 g, 200 mmol), seguido por cloruro de triisopropilsililo (22,5
ml, 105 mmol). Después de 4 h, la mezcla se diluyó con H_{2}O (50
ml) y se extrajo con hexano (3 x 75 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron para dar el compuesto del título (32,23 g, 100%) como
un aceite claro que se utilizó sin purificación: ^{1}H NMR (300
MHz, CDCl_{3}) \delta 7,29 (d, J = 6 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 6
Hz, 2 H), 1,22 (m, 3 H), 1,09 (m, 18 H).
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (32,8
ml, 166 mmol) a una solución de
3-carboxi-3-butenoato
de metilo (20 g, 139 mmol), alcohol bencílico (17,2 mg, 166 mmol), y
trifenilfosfina (43,7 g, 166 mmol) en THF anhidro (500 ml) a 0ºC. La
mezcla se dejó calentar a medida que se calentaba el baño a la TA.
Después de 3 h la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió
sobre gel de sílice (10% de EtOAc/hexano). El compuesto del título
(29,46 g, 91%) se obtuvo como un aceite incoloro: ^{1}H NMR (300
MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35 (m, 5 H), 6,48 (s, 1 H), 5,20 (s, 2
H), 3,63 (s, 3 H), 3,37 (s, 2 H).
Se desoxigenó (3 x ciclos de evacuación/purga con
N_{2}) una solución de
4-bromo-1-(triisopropilsililoxi)benceno
(33,23 g, 100 mmol),
3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato de
metilo (28,11 g, 120 mmol), Pd(OAc)_{2} (2,24 g, 10
mmol), P(o-tolil)_{3} (6,09 g, 20
mmol) y (i-Pr)_{2}NEt (34,8 ml, 200 mmol)
en propionitrilo (350 ml) y después se calentó a reflujo. Después
de 18 h, la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió sobre
gel de sílice (10% de EtOAc/hexano) para dar un aceite amarillo. El
aceite se recogió en 5% de EtOAc/hexano (100 ml) y la solución se
dejó estar a TA. Después de 72 h, la mezcla se filtró y el filtrado
se concentró para dar
(\pm)-4-(4-triisopropilsililoxifenil)-3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato
de metilo como una mezcla de isómeros olefínicos. Esto se utilizó
inmediatamente en la etapa siguiente.
La mezcla anterior de olefinas se dividió en dos
partes. Cada parte se hizo reaccionar de la siguiente manera y luego
se combinaron después de la filtración: A una suspensión de 10% de
Pd/C (7,4 g) en EtOAc (100 ml) se añadió la mezcla anterior de
olefinas. La mezcla se desoxigenó (3 x ciclos de evacuación/purga
con N_{2}) y después se cargó con H_{2} (3,5 kg/cm^{2}).
Después de 4 h, el H_{2} se separó y la mezcla se filtró a través
de un lecho de celite®. El filtrado se concentró para dar el
compuesto del título (24,64 g, 89% de
4-bromo-1-(triisopropilsililoxi)benceno)
como un aceite claro: ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta
7,01 (d, J = 6 Hz, 2 H), 6,80 (d, J = 6 Hz, 2 H), 3,62 (s, 3 H),
3,05 (m, 2 H), 2,65 (m, 1 H), 2,40 (m, 2 H), 1,21 (m, 3 H), 1,09 (m,
18 H).
A una solución de
(\pm)-3-carboxi-4-[4-(triisopropilsililoxi)fenil]butanoato
de metilo (5,00 g, 12,67 mmol) en DMF seca (60 ml) a TA se añadió
hidrocloruro de éster bencílico de serina (3,52 g, 15,21 mmol), HOBt
(2,06 g, 15,21 mmol), Et_{3}N (5,3 ml, 38,01 mmol) y EDC (2,92 g,
15,21 mmol). Después de 18 h, la mezcla se concentró. El residuo se
cromatografió sobre gel de sílice (EtOAc al 80%/hexano) para dar el
compuesto del título (5,76 mg, 79%) como un aceite amarillo pálido:
MS (ES) m/e 572 (M+H)^{+}.
A una solución de éster bencílico de
(\pm)-N-[2-[4-(triisopropilsililoxi)bencil]-3-(carbometoxi)propionil]serina
(5,76 g, 10,07 mmol) en THF seco (50 ml) se añadió reactivo de
Burgess (2,88 g, 12,08 mmol) y después se calentó la mezcla a
reflujo. Después de 2 h la mezcla se enfrió a TA y se concentró. El
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (35% de EtOAc/hexano)
para dar el compuesto del título (4,45 g, 80%) como un aceite claro:
MS (ES) m/e 554 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1,3-oxazolin-2-il]-4-[4-(triisopropilsililoxi)fenil]butanoato
de metilo (4,45 g, 8,03 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (40 ml) a 0ºC se
añadió DBU (1,4 ml, 9,64 mmol), seguido por bromotriclorometano
(0,95 ml, 9,64 mmol). La mezcla se dejó calentar a TA a medida que
se calentaba el baño. Después de 18 horas, la mezcla se concentró.
El residuo se cromatografió sobre gel de sílice (20% de
EtOAc/hexano) para dar el compuesto del título (2,23 g, 50%) como un
aceite claro: MS (ES) m/e 552 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1,3-oxazol-2-il]-4-[4-(triisopropilsililoxi)fenil]butanoato
de metilo (2,23 g, 4,04 mmol) en THF seco (20 ml) a 0ºC se añadió
una solución de TBAF en THF (1,0 M, 6,06 ml, 6,06 mmol). Después de
2 h la mezcla se diluyó con NH_{4}Cl saturado (10 ml) y se extrajo
con CH_{2}Cl_{2} (3 x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo
se cromatografió sobre gel de sílice (40% de EtOAc/hexano) para dar
el compuesto del título (1,4 g, 88%) como una espuma blanquecina: MS
(ES) m/e 396 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1,3-oxazol-2-il]-4-(4-hidroxifenil)butanoato
de metilo (700 mg, 1,77 mmol) y dicarbonato de di-terc-butilo
(463 mg, 2,12 mmol) en THF seco (10 ml) se añadió piridina (0,17 ml,
2,12 mmol) a TA. Después de 18 h, la mezcla se concentró. El residuo
se trituró con hexano, se filtró y se secó a vacío para dar el
compuesto del título (765 mg, 87%) como un sólido blanco: MS (ES)
m/e 496 (M+H)^{+}.
Una mezcla de
(\pm)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1,3-oxazol-2-il]-4-[4-(terc-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato
de
metilo (765 mg, 1,54 mmol) y 10% de Pd/C (164 mg) en EtOH (20 ml) se desoxigenó (3 x ciclos de evacuación/purga con N_{2}) y luego se cargó con H_{2} (3,5 kg/cm^{2}). Después de 4 h se separó el H_{2} y la mezcla se filtró a través de un lecho de celite®. El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (659 mg, 100%) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 811 (2M+H)^{+}.
metilo (765 mg, 1,54 mmol) y 10% de Pd/C (164 mg) en EtOH (20 ml) se desoxigenó (3 x ciclos de evacuación/purga con N_{2}) y luego se cargó con H_{2} (3,5 kg/cm^{2}). Después de 4 h se separó el H_{2} y la mezcla se filtró a través de un lecho de celite®. El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (659 mg, 100%) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 811 (2M+H)^{+}.
Preparación
5
Se combinaron 2-cianotioacetamida
(1,00 g, 9,99 mmol) y
3-bromo-1-trifluoropropan-2-ona
(1,04 ml, 9,99 mmol) en EtOH absoluto (50 ml) y se calentó a
reflujo. Después de 18 h la mezcla se enfrió a TA y se concentró. El
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (15% de EtOAc/ hexano)
para dar el compuesto del título (1,24 g) como una mezcla 2:1 con
2-cianoacetato de etilo: MS (ES) m/e 385
(2M+H)^{+}.
Se hizo reaccionar NaH (516 mg, dispersión al 60%
en aceite mineral, 12,9 mmol) con EtOH absoluto (10 ml) a 0ºC.
Después de cesar el desprendimiento de gas la mezcla se calentó a
TA. Se añadió 4-benciloxibenzaldehído (2,05 g, 9,68
mmol), todo de una vez y en forma sólida. A esta mezcla, se añadió
gota a gota una solución de
2-cianometil-4-(trifluorometil)tiazol
(1,24 g) en EtOH absoluto (20 ml). La reacción se agitó durante 4 h,
después el sólido se recogió por filtración y se lavó con hexano
para dar el compuesto del título (1,64 g, 42% en 2 etapas) como un
sólido amarillo: ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,25 (s,
1 H), 8,00 (d, J = 6 Hz, 2 H), 7,79 (s, 1 H), 7,40 (m, 5 H), 7,10
(d, J = 6 Hz, 2 H), 5,18 (s, 2 H).
A una solución de
3-(4-benciloxifenil)-2-[(4-trifluorometil)tiazol-2-il]acrilonitrilo
(500 mg, 1,29 mmol) en CH_{3}CN (5 ml) se añadió alúmina neutra
(1,3 g). Se añadió gota a gota clorox, un agente de blanqueo, (5 ml)
a TA. Después de 1 h, la mezcla se filtró. El filtrado se diluyó con
H_{2}O (20 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml). Las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron
y se concentraron para dar el compuesto del título (425 mg, 82%)
como un aceite amarillo, que era lo suficientemente puro como para
utilizarlo en la siguiente etapa. ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3})
\delta 7,90 (s, 1 H), 7,40 (m, 7 H), 7,06 (d, J = 6 Hz, 2 H), 5,10
(s, 2 H), 4,59 (s, 1 H).
A una solución de
3-(4-benciloxifenil)-2-ciano-2-[(4-trifluorometil)tiazol-2-il]oxirano
(425 mg, 1,06 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (7 ml) se añadió Et_{3}SiH
(0,85 ml, 5,3 mmol) y después BF_{3}\cdotOEt_{2}(0,39
ml, 3,17 mmol) gota a gota a 0ºC. Después de 2 h la mezcla se vertió
en H_{2}O (20 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml).
Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron y concentraron.
Al residuo anterior en THF seco (7 ml) se añadió
una solución de TBAF en THF (1,0 M, 1,6 ml, 1,6 mmol) a 0ºC. Después
de 1 h, la mezcla se vertió en NH_{4}Cl saturado (20 ml) y se
extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo
se cromatografió sobre gel de sílice (5% de EtOAc/hexano) para dar
el compuesto del título (167 mg, 40%) como un sólido blanco: ^{1}H
NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,05 (s, 1 H), 7,35 (m, 7 H),
6,92 (d, J = 6 Hz, 2 H), 5,05 (s, 2 H), 4,40 (s, 1 H).
A una suspensión de NaH (35 mg, 0,88 mmol) en THF
seco (2 ml) se añadió fosfonoacetato de trietilo (0,17 ml, 0,88
mmol) gota a gota a TA. Después de 15 minutos, se añadió gota a gota
una solución de
2-(4-benciloxifenil)-1-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]etanona
(167 mg, 0,44 mmol) en THF seco (2 ml) y la mezcla se calentó a
reflujo. Después de 18 h la mezcla se enfrió a TA, la reacción se
extinguió con NH_{4}Cl (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml).
Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se
filtraron y se concentraron para dar
(\pm)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)crotonato
de etilo como un aceite. Éste se utilizó sin purificación.
El
(\pm)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)crotonato
de etilo (0,44 mmol, bruto) se disolvió en MeOH (4 ml) y se
añadieron limaduras de magnesio (53 mg, 2,20 mmol) a TA. Después de
72 h la mezcla se vertió en HCl al 10% (75 ml) y se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} (3 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se
secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron para dar
(\pm)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)butanoato
de metilo. Éste se utilizó sin purificación.
A una solución de
(\pm)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)butanoato
de metilo (0,44 mmol, bruto) en EtSH (5 ml) a TA se añadió
BF_{3}\cdotOEt_{2}(0,3 ml). Después de 18 h, se añadió
otra porción de BF_{3}\cdotOEt_{2} (0,3 ml). Después de otras
18 h, la mezcla se enfrió a 0ºC y la reacción se extinguió
cuidadosamente con NaHCO_{3} saturado. La mezcla resultante se
extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 25 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y concentraron.
El residuo se cromatografió sobre gel de sílice (30% de
EtOAc/hexano) para dar el compuesto del título (123 mg, 81% en 3
etapas) como un aceite amarillo: MS (ES) 346 (M+H)^{+}.
Preparación
6
A una suspensión de K_{2}CO^{3} (20,7 g, 150
mmol) en acetona (50 ml) se añadió
4-hidroxifenilacetato de metilo (5,0 g, 30 mmol) y
cloruro de bencilo (10,4 ml, 90 mmol) y la mezcla se calentó a
reflujo. Después de 24 h la mezcla se enfrió a TA, se filtró y se
concentró. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice (10% de
EtOAc/hexano) para dar el compuesto del título (7,7 g, 100%) como un
sólido blanco: ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl^{3}) \delta 7,40 (m, 5
H), 7,21 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 6,95 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 5,05 (s, 2
H), 3,70 (s, 3 H), 3,59 (s, 2 H).
A una solución de 5-metiltiazol
(0,21 ml, 2,34 mmol) en THF seco (10 ml) se añadió gota a gota
n-BuLi (0,94 ml, solución 2,5 M en hexano, 2,34
mmol) a -78ºC. Después de 15 min se añadió gota a gota
4-benciloxifenilacetato de metilo (0,5 g, 1,95 mmol)
en THF seco (5 ml). Después de 30 min, la reacción se extinguió con
NH_{4}Cl saturado (10 ml), la mezcla se calentó a TA y se extrajo
con EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron
sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El residuo se
cromatografió sobre gel de sílice (15% de EtOAc/hexano) para dar el
compuesto del título como un sólido blanco (532 mg, 51%): MS (ES)
m/e 324 (M+H)^{+}.
A una suspensión de NaH (79 mg, 1,98 mmoles) en
THF seco (2 ml) se añadió fosfonoacetato de trietilo (0,39 ml, 1,98
mmol) gota a gota a TA. Después de 15 min, se añadió gota a gota una
solución de
2-(4-benciloxifenil)-1-(5-metiltiazol-2-il)etanona
(320 mg, 0,99 mmol) en THF seco (3 ml), y la mezcla se calentó a
reflujo. Después de 18 h, la mezcla se enfrió a TA, la reacción se
extinguió con NH_{4}Cl saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3
x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El aceite amarillo
resultante se utilizó en la siguiente etapa sin purificación: MS
(ES) m/e 394 (M+H)^{+}.
Se disolvió
(\pm)-3-(5-metiltiazol-2-il)-4-(4-benciloxifenil)crotonato
de etilo (0,99 mmol, bruto) en MeOH (5 ml) y se añadieron limaduras
de magnesio (120 mg, 4,95 mmol) a TA. Después de 72 h, la mezcla se
vertió en HCl al 10% (75 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2}). Las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron
y se concentraron para dar el compuesto del título bruto. Éste se
utilizó sin purificación: MS (ES) m/e 382 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-3-(5-metiltiazol-2-il)-4-(4-benciloxifenil)butanoato
de metilo (0,99 mmol, bruto) en EtSH (5 ml) a TA se añadió
BF_{3}\cdotOEt_{2} (0,6 ml). Después de 18 h, se añadió más
BF_{3}\cdotOEt_{2} (0,6 ml). Después de otras 18 h, la mezcla
se enfrió a 0ºC y la reacción se extinguió cuidadosamente con
NaHCO_{3} saturado. La mezcla resultante se extrajo con
CH_{2}Cl_{2}(3 x 25 ml). Las capas orgánicas combinadas
se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se concentraron. El
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (50% de EtOAc/hexano)
para dar el compuesto del título (249 mg, 86% en 3 etapas) como un
sólido amarillo: MS (ES) m/e 292 (M+H)^{+}.
Preparación
7
A una solución de
(4S,5R)-1,5-dimetil-4-fenil-2-imidazolidinona
(45,0 g, 237 mmol) y (i-Pr)_{2}NEt (62 ml,
355 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (1200 ml), se añadió CuCl (50 mg, 0,51
mmol) y después cloruro de acriloílo (29 ml, 355 mmol), y la mezcla
se calentó a reflujo. Después de 2 h, la mezcla se enfrió a TA, se
lavó con H_{2}O (3 x 400 ml), se secó sobre MgSO_{4}, y se
concentró. El sólido resultante se trituró con Et_{2}O (300 ml) y
se recogió por filtración para dar el compuesto del título (45,15 g,
78%): ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,72 (dd, J = 17,0,
10,5 Hz, 1 H), 7,20 - 7,38 (m, 3 H), 7,10 - 7,20 (m, 2 H), 6,40 (dd,
J = 17,0, 2,1 Hz, 1 H), 5,77 (dd, J = 10,4, 2,0 Hz, 1 H), 5,36 (d, J
= 8,5 Hz, 1 H), 3,85 - 4,00 (m, 1 H), 2,85 (s, 3 H), 0,82 (d, J =
6,6 Hz, 3 H); MS (ES) m/e 245 (M + H)^{+}.
Preparación
8
Se añadió una solución de cloruro de
4-metoxibencilo (120 g, 766 mmol) en THF seco (1,0
litro) gota a gota a lo largo de 1,5 h a una mezcla de limaduras de
magnesio (74 g, 3,04 mol) y I_{2} (50 mg, 0,20 mmol) en THF seco
(0,5 litros) a TA. Durante los 10 minutos iniciales de adición, se
disipó el color pardo y la reacción se calentó. Una hora después de
finalizar la adición, la reacción volvió a la TA. Una valoración
volumétrica utilizando 1,10-fenantrolina indicó que
la solución era reactivo de Grignard 0,36 M en THF.
Preparación
9
Se desgasificó (3 x vacío/purga con N_{2}) una
solución de
1-bromo-3-fluorobenceno
(525 mg, 3 mmol),
(4R,5S)-1-acriloil-3,4-dimetil-5-fenilimidazolidin-2ona
(500 mg, 2 mmol), Pd(OAc)_{2} (22 mg, 0,10 mmol),
P(o-tolil)_{3} (61 mg, 0,20 mmol), y
(i-Pr)_{2}NEt (0,73 ml, 4,2 mmol) en DMF
seca (10 ml) y después se calentó a 110ºC. Después de 2 h, la mezcla
se enfrió y se vertió en EtOAc. La mezcla resultante se lavó con
H_{2}O (3x), y las capas acuosas combinadas se retroextrajeron con
EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4},
se filtraron a través de un lecho de gel de sílice y se
concentraron. El residuo se recogió en Et_{2}O/hexano 1:1 (10 ml)
y se enfrió a -20ºC durante una noche. El sólido se recogió y secó a
vacío para dar el compuesto del título (514 mg, 76%): ^{1}H NMR
(300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,18 (d, J = 15,9 Hz, 1 H(, 7,64 (d,
J = 15,9 Hz, 1 H), 7,15 - 7,45 (m, 8 H), 6,98 - 7,10 (m, 1 H), 5,42
(d, J = 8,5 Hz, 1 H), 3,88 - 4,03 (m, 1 H), 2,88 (s, 3 H), 0,85 (d,
J = 6,6 Hz, 3 H); MS (ES) m/e 339 (M + H)^{+}.
Se añadió gota a gota una solución de bromuro de
4-metoxifenilmagnesio en THF (0,31 M, 14,7 ml, 4,56
mmol) a una suspensión agitada de
(4R,5S)-3,4-Dimetil-1-[(E)-3-(3-fluorofenil)prop-2-enoil]-5-fenilimidazolidin-2-ona
(514 mg, 1,52 mmol), complejo de CuBr\cdotDMS (229 mg, 1,06
mmoles) y ZnCl_{2} (582 mg, 1,82 mmol) en THF/tolueno (10 ml) a
-15ºC. Después de 1,5 h, la reacción se extinguió con NH_{4}Cl y
se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron
sobre MgSO_{4} y se concentraron a sequedad. El residuo se recogió
en Et_{2}O/hexano 1:1 y se enfrió a -20ºC durante 18 h. El sólido
se recogió, se lavó con Et_{2}O/hexano 1:1, y se secó a vacío para
dar una primera cosecha del compuesto del título. El filtrado se
concentró y el residuo se purificó por cromatografía instantánea
sobre gel de sílice (30% de EtOAc/hexano) para dar más compuesto del
título como un aceite amarillo que solidificó a vacío. El
rendimiento total del compuesto del título fue 0,62 g (91%): ^{1}H
NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 6,75 - 7,37 (m, 13 H), 5,10 (d, J
= 8,5 Hz, 1 H), 3,80 (s, 3 H), 3,65 - 3,85 (m, 1 H), 3,63 (dd, J =
16,7, 9,6 Hz, 1 H), 3,36 - 3,41 (m, 1 H), 3,14 (dd, J = 16,7, 4,9
Hz, 1 H), 2,72 - 2,88 (m, 2 H), 2,79 (s, 3 H), 0,74 (d, J = 6,6 Hz,
3 H).
Se añadió una solución de NaOEt al 21% en EtOH
(0,6 ml, 1,8 mmol) a una solución de
(4R,5S)-3,4-dimetil-1-[(S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-metoxifenil)butanoil]-5-fenilimidazolidin-2-ona
(620 mg, 1,38 mmol) en THF (10 ml). La reacción se agitó durante 1
h, después la reacción se extinguió con NH_{4}Cl saturado. La
extracción con EtOAc, el secado (MgSO_{4}) y la concentración
dejaron un residuo que se filtró a través de un tapón de gel de
sílice (15% de EtOAc/hexano). El filtrado se concentró para dar el
compuesto del título (263 mg, 60%, como un aceite claro: ^{1}H NMR
(300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,13 - 7,35 (m, 1 H), 6,80 - 7,00
(m, 5 H), 6,70 - 6,80 (m, 2 H), 4,00 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,81 (s,
3 H), 3,28 - 3,45 (m, 1 H), 2,83 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 2,65 (dd, J =
15,4, 6,4 Hz, 1 H), 2,56 (dd, J = 15,4, 8,7 Hz, 1 H), 1,12 (t, J =
7,1 Hz, 3 H).
A una solución de
(S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-metoxifenil)butanoato
de etilo (263 mg, 0,83 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (5 ml) a -15ºC se
añadió etanotiol (0,30 ml, 4,16 mmol) seguido por AlCl_{3} (555
mg, 4,16 mmol). Después de 30 min, la mezcla se calentó a TA, se
agitó durante 30 min más, y después se vertió sobre hielo. El hielo
se dejó fundir y la mezcla se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3x). El
secado (MgSO_{4}) y la concentración dejaron un residuo que se
filtró a través de un lecho de gel de sílice (30% EtOAc/hexano). La
concentración del filtrado dio el compuesto del título (250 mg,
cuantitativo): ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,10 -
7,35 (m, 1 H), 6,78 - 7,00 (m, 5 H), 6,58 - 6,78 (m, 2 H), 5,00 (s,
1 H), 4,00 (q, 2 H), 3,28 - 3,45 (m, 1 H), 2,83 (d, 2 H), 2,50 -
2,75 (m, 2 H), 1,17 (t, 3 H).
Preparación
10
A una solución de
3-piridinacarboxaldehído (1,0 g, 9,34 mmol) en
CH_{3}CN (45 ml) se añadió KCN (6,0 g, 93 mmol), TBDMSCl (1,7 g,
11,21 mmol) y ZnI_{2} (50 mg, 0,16 mmol). Después de 4 h a TA, la
mezcla se filtró a través de celite® y el filtrado se concentró. La
cromatografía instantánea sobre gel de sílice (25% de EtOAc/hexano)
dio el compuesto del título (2,17 g, 94%) como un aceite claro:
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,63 - 8,73 (m, 2 H),
7,80 - 7,87 (m, 1 H), 7,33 - 7,41 (m, 1 H), 5,57 (s, 1 H), 0,97 (s,
9 H), 0,27 (s, 3 H), 0,19 (s, 3 H).
Se preparó LDA por adición de
n-BuLi (2,5 M en hexano, 1,93 ml, 4,83 mmol) a una
solución de diisopropilamina (0,63 ml, 4,83 mmol) en THF seco (5 ml)
a 0ºC. La solución de LDA se añadió gota a gota a una solución de
2-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(piridin-3-il)acetonitrilo
(1,0 g, 4,03 mmol) en THF seco (15 ml) a -78ºC. La solución se agitó
durante 15 min, y después se añadió cloruro de
4-benciloxibencilo (1,41 g, 6,05 mmol) en forma de
sólido y todo de una vez. La reacción se mantuvo a -78ºC durante 15
min, y después se calentó a TA. Después de 30 min a TA, la reacción
se extinguió con NH_{4}Cl acuoso saturado y se agitó durante 20
min. La extracción con EtOAc (3x), el secado (MgSO_{4}), la
concentración y la cromatografía instantánea sobre gel de sílice
(20% de EtOAc/hexano) dio el compuesto del título (769 mg, 43%) como
un aceite amarillo: ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}). 8,80 (m
estrecho, 1 H), 8,67 - 8,70 (m, 1 H), 7,75 - 7,80 (m, 1 H), 7,33 -
7,53 (m, 6 H), 7,08 (d, 2 H), 6,93 (d, 2 H), 5,10 (s, 2 H), 3,30 (½
Abq, 1 H), 3,18 (½ Abq. 1 H), 0,99 (s, 9 H), 0,12 (s, 3 H), 0,08 (s,
3 H).
Se añadió gota a gota una solución de TBAF en THF
(1,0 M, 2,2 ml, 2,2 mmol) a una solución de
(\pm)-3-(4-benciloxifenil)-2-(terc-butildimetilsililoxi)-2-(piridin-3-il)propionitrilo
(769 mg, 1,73 mmol) en THF seco (10 ml) a -15ºC. Después de 30 min,
la reacción se repartió entre EtOAc y H_{2}O. Se separaron las
capas y la capa orgánica se lavó con H_{2}O, se secó (MgSO_{4}),
se filtró a través de un lecho de gel de sílice y se concentró para
producir compuesto del título impuro (492 mg, 94%) como un sólido
amarillo: MS (ES) m/e 304 (M+H)^{+}. Este material
se utilizó sin purificación adicional.
Se añadió gota a gota fosfonoacetato de trietilo
(0,70 ml, 3,46 mmol) a una suspensión de NaH (dispersión al 60% en
aceite mineral, 138 mg, 3,46 mmol) en THF seco (5 ml) a TA. Cuando
cesó el desprendimiento de gas, se añadió una solución de
2-(4-benciloxifenil)-1-(piridin-3-il)etanona
(aproximadamente 1,73 mmol, material impuro de la Preparación
10(c)) en THF seco (5 ml), y la mezcla se calentó a reflujo.
Después de 18 h, la mezcla se enfrió a TA, la reacción se extinguió
con NH_{4}Cl acuoso saturado y la mezcla se extrajo con EtOAc
(3x). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}) y
se concentraron para dar el compuesto del título bruto: MS (ES)
m/e 374 (M+H)^{+}. Este material se utilizó sin más
purificación.
Una mezcla de
4-(4-benciloxifenil)-3-(piridin-3-il)but-2-enoato
de etilo (1,73 mmol) y 10% de Pd/C (200 mg) en EtOH (10 ml) se agitó
con oscilación en H_{2} (3,5 kg/cm^{2}) en un aparato Parr.
Después de 4 h, la mezcla se filtró a través de celite® y el
filtrado se concentró. La cromatografía instantánea sobre gel de
sílice (50% de EtOAc/hexano) dio el compuesto del título impuro (327
mg, 66% en tres etapas) como un aceite amarillo: MS (EM) m/e
286 (M+H)^{+}. Este material se utilizó sin más
purificación.
Preparación
11
Una solución de 3-bromopiridina
(8,6 ml, 88,5 mmol),
(4R,5S)-1-acriloil-3,4-dimetil-5-fenilimidazolidin-2-ona
(14,4 g, 59 mmol), Pd(OAc)_{2} (662 mg, 2,95 mmol),
P(o-tolil)_{3} (1,80 g, 5,9 mmol) y
(i-Pr)_{2}NEt (22 ml, 124 mmol) en DMF seca
(300 ml) se desgasificó (3 x vacío/purga con N_{2}) y después se
calentó a 110ºC. Al cabo de 2 h, la mezcla se enfrió y vertió en
EtOAc. La mezcla resultante se lavó con H_{2}O (3x) y las capas
acuosas combinadas se secaron sobre Mg(SO_{4}), se
filtraron a través de un lecho de gel de sílice y se concentraron.
El residuo se recogió en EtOAc/hexano 1:1, y se secó a vacío para
dar una primera cosecha del compuesto del título. El filtrado se
concentró y el procedimiento de cristalización se repitió para dar
una segunda cosecha. El rendimiento total del compuesto del título
fue 17,53 g (92%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,48 -
8,85 (m, 2 H), 8,25 (d, J = 15,9 Hz, 1 H), 7,89 - 7,97 (m, 1 H),
7,68 (d, J = 15,9 Hz, 1 H), 7,15 - 7,38 (m, 6 H), 5,43 (d, J = 8,5
Hz, 1 H), 3,90 - 4,02 (m, 1 H), 2,88 (s, 3 H), 0,85 (d, J = 6,6 Hz,
3 H); MS (ES) m/e 322 (M + H)^{+}.
Se añadió gota a gota una solución de bromuro de
4-metoxifenilmagnesio en THF (0,33 M, 495 ml, 163,5
mmol) a una suspensión agitada de
(4R,5S)-3,4-dimetil-1-[(E)-3-(piridin-3-il)prop-2-enoil]-5-fenilimidazolidin-2-ona
(17,53 g, 54,5 mmol), complejo de CuBr\cdotDMS (14,1 g, 65,4 mmol)
y ZnI_{2} (20,9 g, 65,4 mmol) en THF/tolueno (270 ml) a -15ºC.
Después de 1 h, la reacción se extinguió con NH_{4}Cl
saturado/NH_{4}OH concentrado 9:1 y la mezcla se agitó expuesta al
aire durante 30 min. La mezcla se diluyó con H_{2}O y se extrajo
con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre
MgSO_{4} y se concentraron. El residuo se recogió en
metil-terc-butil-éter (MTBE, 200 ml)
y se guardó a -20ºC durante una noche. El sólido se recogió, se lavó
con MTBE y se secó a vacío. Este material se recristalizó en
hexano/EtOAc 3:1 para proporcionar el compuesto del título (19,408
g, 80%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,72 (s ancho, 2
H), 7,50 ( m estrecho, 1 H), 7,12 - 7,35 (m, 4 H), 6,97 - 7,03 (m, 2
H), 6,94 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,72 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 5,11 (d, J
= 8,4 Hz, 1 H), 3,70 - 3,90 (m, 2 H), 3,70 (s, 3 H), 3,43 - 3,58 (m,
1 H), 3,03 - 3,18 (m, 1 H), 2,75 - 2,95 (m, 2 H), 2,71 (s, 3 H),
0,66 (d, J = 6,5 Hz, 3 H); MS (ES) m/e 444 (M +
H)^{+}.
Se añadió una solución de NaOEt al 21% en EtOH
(18,4 ml, 56,88 mmol) a una solución de
(4R,5S)-3,4-dimetil-1-[(S)-4-(4-metoxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoil]-5-fenilimidazolidin-2-ona
(19,408 g, 43,8 mmol) en THF (200 ml) a 0ºC. La reacción se agitó
durante 1 h, y después la reacción se extinguió con NH_{4}Cl
saturado y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas
se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron. El residuo se recogió en
EtOAc/hexano 1:1 y se filtró, y el filtrado se filtró a través de un
lecho de gel de sílice (EtOAc/hexano 1:1). El filtrado se concentró
para dar el compuesto del título (9,25 g, 71%) como un aceite
naranja: ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,57 (s ancho, 2
H), 7,44 (m estrecho, 1 H(, 7,17 - 7,25 (m, 1 H), 6,95 (d, J = 8,6
Hz, 2 H), 6,76 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 4,01 (q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,75
(s, 3 H), 3,33 - 3,48 (m, 1 H), 2,91 (dd, J = 13,7, 7,3 Hz, 1 H),
2,85 (dd, J = 13,7, 7,8 Hz, 1 H), 2,71 (dd, J = 15,6, 6,5 Hz, 1 H),
2,61 (dd, J = 15,6, 8,7 Hz, 1 H), 1,13 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS (ES)
m/e 300 (M + H)^{+}.
Una solución de
(S)-4-(4-metoxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato
de etilo (9,25 g, 31 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (150 ml) se enfrió a
0ºC. Se añadió etanotiol (11,5 ml, 155 mmol) y después se añadió
AlCl_{3} (20,7 g, 155 mmol) en porciones. Después de 2 horas, la
mezcla se vertió sobre hielo, se dejó calentar a TA y se neutralizó
con NaHCO_{3}. La suspensión resultante se filtró a través de
celite® y el lecho del filtro se lavó con CH_{2}Cl_{2}. Se
separaron las capas y la capa acuosa se extrajo con
CH_{2}Cl_{2}. Las capas orgánicas combinadas se secaron
(MgSO_{4}) y concentraron. La cromatografía instantánea sobre gel
de sílice (EtOAc/hexano 1:1) dio el compuesto del título (6,435 g,
73%): ^{1}H NMR (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,72, 8,41 (dd, J =
4,9, 1,5 Hz, 1 H), 8,24 (m estrecho, 1 H), 7,26 (dd, J = 7,8, 4,9
Hz, 1 H), 6,78 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 6,64 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 4,03
(q, J = 7,1 Hz, 2 H), 3,34 - 3,48 (m, 1 H), 2,92 (dd, J = 13,7, 6,1
Hz, 1 H), 2,69 - 2,81 (m, 2 H), 2,64 (dd, J = 15,6, 8,7 Hz, 1 H),
1,13 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS (ES) m/e 286 (M +
H)^{+}.
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (0,15
ml, 0,767 mmol) a lo largo de 2 min a una solución de
(\pm)-4-(4-hidroxifenil)-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoato
de etilo (270 mg, 0,767 mmol),
6-(metilamino)-2-piridiletanol (130
mg, 0,92 mmol), y trifenilfosfina (200 mg, 0,767 mmol) en THF
anhidro (5 ml) a 0ºC en atmósfera de N_{2}. La solución amarilla
se mantuvo a 0ºC durante 10 min, y después se calentó a TA. Después
de 24 h, la reacción se concentró y el residuo se cromatografió
sobre gel de sílice (20% de EtOAc/hexano). El compuesto del título
(200 mg, 54%) se obtuvo como un aceite incoloro: MS (ES) m/e
487 (M+H)^{+}.
Se añadió gota a gota NaOH 1,0 N (8,2 ml, 0,823
mmol) a una solución enfriada (15ºC) de
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoato
de etilo (200 mg, 0,41 mmol) en MeOH (3 ml), y la mezcla se agitó a
TA durante 24 h. La solución resultante se concentró a vacío y el
residuo se disolvió en H_{2}O (5 ml). El pH se ajustó a 5 con HCl
1,0 N y el precipitado se recogió, se lavó con una pequeña cantidad
de agua y se secó a vacío a 60ºC. El compuesto del título se obtuvo
como un sólido blanco semejante a una espuma: MS (ES) m/e 459
(M + H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{25}H_{25}FN_{2}O_{3} \cdot 0,85 H_{2}O; C, 63,38; H,
5,68; N, 5,91. Encontrado: C, 63,23; H, 5,41; N, 5,73.
A una solución de
(\pm)-3-[4-carboxi-1,3-oxazol-2-il]-4-[4-[(terc-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato
de metilo (150 mg, 0,37 mmol),
(i-Pr)_{2}NEt (0,1 ml, 0,56 mmol), piridina
(0,09 ml, 1,11 mmol) y N-metilanilina (0,06 ml, 0,56
mmol) en DMF seca (2 ml) se añadió BPFFH (382 mg, 1,11 mmol) a TA.
Después de 18 h la mezcla se concentró. El residuo se recogió en HCl
al 10% (20 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml). Las
capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron
y se concentraron.
El residuo anterior se disolvió en HCl 4 N en
dioxano (10 ml) a TA. Después de 18 h la mezcla se concentró. El
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (75% de EtOAc/hexano)
para dar el compuesto del título (146 mg) como una espuma naranja
contaminada con bis(pentametilen)urea: MS (ES)
m/e 417 (M+H)^{+}.
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (0,15
ml, 0,74 mmol) a una solución de
(\pm)-3-[4-(N-metil-N-fenil-amino)carbonil]-1,3-oxazol-2-il]-4-(4-hidroxifenil)butanoato
de metilo (146 mg, 0,37 mmol),
6-(metilamino)-2-piridiletanol (113
mg, 0,74 mmol) y trifenilfosfina (194 mg, 0,74 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 ml) a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA
mientras se calentaba el baño. Después de 18 h la mezcla se
concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (50% de
THF/hexano). Las fracciones que contenían el producto se
concentraron para dar el compuesto del título (322 mg) contaminado
con óxido de trifenilfosfina: MS (ES) m/e 529
(M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-[4-[(N-metil-N-fenilamino)carbonil]-1,3-oxazol-2-il)]butanoato
de metilo (322 mg) en THF/H_{2}O 1:1 (2 ml) a TA se añadió LiOH
1,0 N (0,35 ml, 0,35 mmol). Después de 18 h, la mezcla se aciduló a
pH 6 utilizando HCl al 10%, y después se concentró a sequedad. El
residuo se purificó por HPLC en fase inversa (gradiente:
10-80% de CH_{3}CN/H_{2}O que contenía 0,1% de
TFA). Las fracciones que contenían el producto se combinaron y
concentraron para separar CH_{3}CN. La solución acuosa resultante
se liofilizó para dar el compuesto del título (33 mg, 29% en 3
etapas) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 515 (M +
H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{29}H_{30}N_{4}O_{5}\cdot1,85 TFA: C, 54,13; H, 4,42; N,
7,72. Encontrado: C, 54,17; H, 4,50; N, 7,52.
A una solución de
(\pm)-3-[4-carboxi-1,3-oxazol-2-il]-4-[4-[(terc-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato
de metilo (150 mg, 0,37 mmol),
(i-Pr)_{2}NEt (0,1 ml, 0,56 mmol), piridina
(0,09 ml, 1,11 mmol), y morfolina (0,05 ml, 0,56 mmol) en DMF seca
(2 ml) se añadió BPFFH (382 mg, 1,11 mmol) a TA. Después de 18 h la
mezcla se concentró. El residuo se recogió en 10% de HCl (20 ml) y
se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x 20 ml). Las capas orgánicas
combinadas se secaron sobre MgSO_{4}, se filtraron y se
concentraron.
El residuo anterior se disolvió en HCl 4 N en
dioxano (10 ml) a TA. Después de 18 h, la mezcla se concentró. El
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (EtOAc al 100%) para
dar el compuesto del título (122 mg, 88%) como un aceite claro:
^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,05 (s, 1 H), 7,88 (d, J
= 6,6 Hz, 2 H), 6,70 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 5,9 (s, 1 H), 3,73 (s
ancho, 8 H), 3,62 (s, 3 H), 2,85 (m, 5 H).
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (0,13
ml, 0,66 mmol) a una solución de
(\pm)-3-[4-(morfolin-4-il)carbonil]-1,3-oxazol-2-il]-4-(4-hidroxifenil)butanoato
de metilo (122 mg, 0,37 mmol),
6-(metilamino)-2-piridiletanol (100
mg, 0,66 mmol) y trifenilfosfina (173 mg, 0,66 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 ml) a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA
mientras se calentaba el baño. Después de 18 h la mezcla se
concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (EtOAc
al 100%). Las fracciones que contenían el producto se concentraron
para dar el compuesto del título (94 mg) contaminado con óxido de
trifenilfosfina: MS (ES) m/e 509 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-[4-(morfolin-4-il)carbonil]-1,3-oxazol-2-il)]butanoato
de metilo (94 mg, 0,18 mmol) en THF/H_{2}O 1:1 (2 ml) a TA se
añadió LiOH 1,0 N (0,25 ml, 0,25 mmol). Después de 18 h, la mezcla
se aciduló a pH 6 utilizando HCl al 10% y después se concentró a
sequedad. El residuo se purificó por HPLC en fase reversa (gradiente
15-35% de CH_{3}CN/H_{2}O que contiene 0,1% de
TFA). Las fracciones que contienen el producto se combinaron y
concentraron para separar CH_{3}CN. La solución acuosa resultante
se liofilizó para dar el compuesto del título (23 mg, 26% en 2
etapas) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 495 (M +
H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{26}H_{30}N_{4}O_{6}\cdot1,75 TFA: C, 49,76; H, 4,78; N,
7,87. Encontrado: C, 49,93; H, 4,97; N, 7,84.
A una solución de
(\pm)-3-[4-carboxi-1,3-oxazol-2-il]-4-[4-[(terc-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato
de metilo (150 mg, 0,37 mmol),
(i-Pr)_{2}NEt (0,1 ml, 0,56 mmol), piridina
(0,09 ml, 1,11 mmol) e hidrocloruro de
N-metil-N-(2,2,2-trifluoroetil)amina
(84 mg, 0,56 mmol) en DMF seca (2 ml) se añadió BPFFH (382 mg, 1,11
mmol) a TA. Después de 18 h la mezcla se concentró. El residuo se
recogió en HCl al 10% (20 ml) y se extrajo con CH_{2}Cl_{2} (3 x
20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO_{4},
se filtraron y se concentraron.
El residuo anterior se disolvió en HCl 4 N en
dioxano (10 ml) a TA. Después de 18 h la mezcla se concentró. El
residuo se cromatografió sobre gel de sílice (60% de EtOAc/hexano)
para dar el compuesto del título (298 mg) como un aceite claro
contaminado con bis(pentametilen)urea. El aceite se
utilizó en la siguiente etapa sin más purificación.
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (0,15
ml, 0,74 mmol) a una solución de
(\pm)-3-[4-[[N-metil-N-(2,2,2-trifluoroetil)amino]carbonil]-1,3-oxazol-2il]-4-(4-hidroxifenil)butanoato
de metilo (298 mg, 0,37 mmol), 6-(metila-
mino)-2-piridiletanol (113 mg, 0,74 mmol) y trifenilfosfina (194 mg, 0,74 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentaba el baño. Después de 18 h, la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (40% de EtOAc/hexano). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para dar el compuesto del título (115 mg) contaminado con óxido de trifenilfosfina: MS (ES) m/e 535 (M+H)^{+}.
mino)-2-piridiletanol (113 mg, 0,74 mmol) y trifenilfosfina (194 mg, 0,74 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (2 ml) a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentaba el baño. Después de 18 h, la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (40% de EtOAc/hexano). Las fracciones que contenían el producto se concentraron para dar el compuesto del título (115 mg) contaminado con óxido de trifenilfosfina: MS (ES) m/e 535 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-[4-[[N-metil-N-(2,2,2-trifluoroetil)amino]carbonil]-1,3-oxazol-2-il)]butanoato
de metilo (115 mg, 0,22 mmol) en THF/H_{2}O (2 ml) a TA se añadió
LiOH 1,0 N (0,32 ml, 0,32 mmol). Después de 18 h la mezcla se
aciduló a pH 6 utilizando HCl al 10% y después se concentró a
sequedad. El residuo se purificó por HPLC en fase inversa
(gradiente: 10-80% de CH_{3}CN/H_{2}O que
contenía 0,1% de TFA). Las fracciones que contenían el producto se
combinaron y se concentraron para separar el CH_{3}CN. La solución
acuosa resultante se liofilizó para dar el compuesto del título (42
mg, 37% en 3 etapas) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 522
(M + H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{25}H_{27}F_{3}N_{4}O_{5}\cdot1,4 TFA: C, 49,09; H,
4,21; N, 8,24. Encontrado: C, 49,18; H, 4,18; N, 8.22.
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (0,14
ml, 0,71 mmol) a una solución de
(\pm)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-hidroxifenil)butanoato
de metilo (123 mg, 0,37 mmol),
6-(metilamino)-2-piridiletanol (108
mg, 0,71 mmol) y trifenilfosfina (186 mg, 0,71 mmol) en
CH_{2}Cl_{2} (2 ml) a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA
mientras se calentaba el baño. Después de 18 h, la mezcla se
concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (40% de
EtOAc en tolueno/hexano 1:1). Las fracciones que contenían el
producto se concentraron para dar el compuesto del título (114 mg,
contaminado con DIAD reducida): MS (ES) m/e 480
(M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]butanoato
de metilo (114 mg, 0,24 mmoles) en THF/H_{2}O 1:1 (2 ml) a TA se
añadió LiOH 1,0 N (0,36 ml, 0,36 mmol). Después de 18 h, la mezcla
se aciduló a pH 6 utilizando HCl al 10%. El sólido resultante se
recogió por filtración y se secó a vacío a 50ºC para dar el
compuesto del título (43 mg, 42%) como un sólido blanco: MS (ES)
m/e 466 (M + H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{22}H_{22}F_{3}N_{3}O_{3}S\cdot0,2 H_{2}O: C, 56,33;
H, 4,81; N, 8,96. Encontrado: C, 56,34; H, 4,69; N, 8,88.
Se añadió azodicarboxilato de diisopropilo (0,25
ml, 1,28 mmol) a una suspensión de
(\pm)-4-(4-hidroxifenil)-3-(5-metiltiazol-2-il)butanoato
de metilo (249 mg, 0,85 mmol),
6-(metilamino)-2-piridiletanol (194
mg, 1,28 mmol) y trifenilfosfina (336 mg, 1,28 mmol) en TBME (5 ml)
a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA a medida que se calentaba el
baño. Después de 72 h la mezcla se concentró y el residuo se
cromatografió sobre gel de sílice (30% de EtOAc/CHCl_{3}). Las
fracciones que contenían el producto se concentraron para dar el
compuesto del título (385 mg, contaminado con óxido de
trifenilfosfina): MS (ES) m/e 426 (M+H)^{+}.
A una solución de
(\pm)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-(5-metiltiazol-2-il)butanoato
de metilo (0,85 mmol) en THF/H_{2}O 1:1 (5 ml) se añadió NaOH 1,0
N (1,28 ml, 1,28 mmol). Después de 18 h, la mezcla se aciduló a pH 6
utilizando HCl al 10% y después se concentró a sequedad. El residuo
se cromatografió sobre gel de sílice (EtOH) para dar el compuesto
del título como un sólido amarillo (217 mg, 62% a lo largo de 2
etapas). MS (ES) m/e 412 (M + H)^{+}. Análisis
Calculado para C_{22}H_{25}N_{3}O_{3}S\cdot1,2 H_{2}O:
C, 61,01; H, 6,38; N, 9,70. Encontrado: C, 61,25; H, 6,06; N,
9,32.
Se añadió gota a gota azodicarboxilato de
diisopropilo (0,20 ml, 1,0 mmol) a una solución de
(S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-hidroxifenil)butanoato
de etilo (250 mg, 0,83 mmol),
2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)-1-etanol
(178 mg, 1,0 mmol) y trifenilfosfina (262 mg, 1,0 mmol) en THF
anhidro (5 ml) a TA. Después de 18 h, la reacción se concentró y el
residuo se sometió a cromatografía instantánea sobre gel de sílice
(Et_{2}O/hexano 5:1) para dar el compuesto del título impuro (236
mg, 61%): MS (ES) m/e 463 (M+H)^{+}. Este compuesto
se utilizó sin más purificación.
Se añadió LiOH 1,0 N (0,76 ml, 0,76 mmol) a una
solución de
(S)-3-(3-fluorofenil)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanoato
de etilo (236 mg, 0,51 mmol) en THF/H_{2}O (3 ml) y la mezcla se
calentó a 50ºC. Después de 18 h, la mezcla se enfrió a TA y se
aciduló a pH 6 con HCl acuoso al 10%. Se añadió EtOAc (5 ml) y la
mezcla se agitó enérgicamente. El sólido se recogió filtrando con
succión, se lavó con H_{2}O (2x) y Et_{2}O (2x) y se secó a
vacío a 50ºC para dar el compuesto del título: MS (ES) m/e
435 (M + H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{26}H_{27}FN_{2}O_{3}\cdot2,25 HCl: C, 60,46; H, 5,71;
N, 5,42. Encontrado: C, 60,44; H, 5,34; N, 5,45.
De acuerdo con el procedimiento del Ejemplo
7(a), pero utilizando
4-(4-hidroxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato
de etilo (327 mg impuro, 1,15 mmol) en vez de
(S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-hidroxifenil)butanoato
de etilo y utilizando
6-(metilamino)-2-piridiletanol (210
mg, 1,38 mmol) en vez de
2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)-1-etanol,
se preparó el compuesto del título como un sólido anaranjado claro,
impuro, después de la cromatografía instantánea sobre gel de sílice
(EtOAc al 100%): MS (ES) m/e 420 (M+H)^{+}. Este
material se utilizó sin más purificación.
Se añadió LiOH 1,0 N (3,45 ml, 3,45 mmol) a una
solución de
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]etoxi]fenil]-3-(piridin-3-il)butanoato
de etilo (1,15 mmol) en THF/H_{2}O (5 ml), y la mezcla se calentó
a 50ºC. Después de 18 h, la reacción se enfrió a TA y se aciduló a
pH 6 con HCl acuoso al 10%. La mezcla se extrajo con
CHCl_{3}(3x), y las capas orgánicas combinadas se secaron
(MgSO_{4}) y concentraron. El residuo se cromatografió en una
columna C-18 Bond-Elute (20% de
CH_{3}CN/H_{2}O). Las fracciones que contenían el producto se
reunieron y se extrajeron con CHCl_{3} (3x), y las capas orgánicas
combinadas se secaron (MgSO_{4}) y concentraron. El sólido
resultante se recogió en NaOH 2N y se lavó con EtOac (2x). Los
extractos en EtOAc se descartaron. La capa acuosa se aciduló a pH 6
y se extrajo con CHCl_{3} (3x). Las capas orgánicas combinadas se
secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para dar el compuesto del
título (51 mg, 11%) como un sólido blanco: ^{1}H NMR (300 MHz,
CDCl_{3}) \delta. 8,32 (m, 2 H), 7,54 (dd, J = 8,7, 7,2 Hz, 1
H), 7,38 - 7,46 (m, 1 H), 7,12 (dd, J = 7,8, 4,9 Hz, 1 H), 6,86 (d,
J = 8,6 Hz, 2 H), 6,68 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,52 (d, J = 7,2 Hz, 1
H), 6,37 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 4,15 - 4,30 (m, 2 H), 3,39 - 3,52 (m,
1 H), 2,98 - 3,20 (m, 3 H), 2,85 (s, 3 H), 2,80 (dd, J = 13,7, 8,9
Hz, 1 H), 2,68 (dd, J = 15,1, 8,3 Hz, 1 H), 2,59 (dd, J = 15,1, 6,7
Hz, 1 H); MS (ES) m/e 392 (M + H)^{+}. Análisis
Calculado para C_{23}H_{25}N_{3}O_{3}\cdot1,3 HCl: C,
62,95; H, 6,04; N, 9,57. Encontrado: C, 62,84; H, 5,87;
N, 9,20.
N, 9,20.
Se añadió gota a gota azodicarboxilato de
diisopropilo (7,8 ml, 39,8 mmol) a una solución de
(S)-4-(4-hidroxifenil)-3-piridin-3-il)butanoato
de etilo (9,455 g, 33,1 mmol),
6-(metilamino)-2-piridiletanol (6,06
g, 39,8 mmol) y trifenilfosfina (10,44 g, 39,8 mmol) en THF anhidro
(150 ml) a 0ºC. La mezcla se dejó calentar a TA a medida que se
calentaba el baño. Después de 18 h, la reacción se concentró y el
residuo se sometió a cromatografía instantánea sobre gel de sílice
(3% de MeOH en EtOAc/CHCl_{3} 1:1) para dar el compuesto del
título (9,2 g, 66%) como un aceite amarillo viscoso: ^{1}H NMR
(400 MHz, CDCl_{3}). \delta 8,43 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1 H),
8,39 (d, J = 1,9 Hz, 1 H(, 7,31 - 7,45 (m, 2 H), 7,13 - 7,21 (m, 1
H), 6,91 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,77 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,53 (d, J
= 7,3 Hz, 1 H), 6,24 (d, J =
8,2 Hz, 1 H), 4,43 - 4,58 (m, 1 H), 4,26 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,92 - 4,05 (m, 2 H), 3,32 - 3,45 (m, 1 H), 3,04 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,89 (d, J = 5,3 Hz, 3 H), 2,88 (dd, J = 13,7, 7,2 Hz, 1 H), 2,82 (dd, J = 13,7, 7,8 Hz, 1 H), 2,70 (dd, J = 15,6, 6,3 Hz, 1 H), 2,59 (dd, J = 15,6, 9,0 Hz, 1 H), 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS (ES) m/e 420 (M + H)^{+}.
8,2 Hz, 1 H), 4,43 - 4,58 (m, 1 H), 4,26 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,92 - 4,05 (m, 2 H), 3,32 - 3,45 (m, 1 H), 3,04 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,89 (d, J = 5,3 Hz, 3 H), 2,88 (dd, J = 13,7, 7,2 Hz, 1 H), 2,82 (dd, J = 13,7, 7,8 Hz, 1 H), 2,70 (dd, J = 15,6, 6,3 Hz, 1 H), 2,59 (dd, J = 15,6, 9,0 Hz, 1 H), 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3 H); MS (ES) m/e 420 (M + H)^{+}.
Se añadió NaOH 2,0 M (15 ml, 30 mmol) a una
solución de
(S)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]etoxi]fenil]-3-(piridin-3-il)butanoato
de etilo (9,2 g, 22 mmol) en dioxano/H_{2}O (100 ml) y la mezcla
se calentó a 50ºC. Después de 18 h, la reacción se enfrió a TA, se
aciduló con HCl al 10% (25 ml) y se concentró a 1/3 del volumen para
precipitar una goma. El sobrenadante se decantó y la goma se
repartió entre H_{2}O y CHCl_{3}. Las capas se separaron y la
capa acuosa se extrajo con CHCl_{3} (3x). Las capas orgánicas
combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron, y el residuo
se recogió en H_{2}O y NaOH 2M (30 ml). La solución se lavó con
Et_{2}O (3x) y los extractos en Et_{2}O se descartaron. La
solución acuosa se aciduló con HCl al 10% (50 ml) se concentró a 1/3
del volumen y se extrajo con CHCl_{3} (3x). Las capas orgánicas se
combinaron, se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para dar una
espuma. Esta espuma se recogió en CH_{2}Cl_{2}, y la solución se
diluyó con hexano y se concentró. Esta operación se repitió tres
veces. El sólido resultante se secó a vacío a 65ºC para dar el
compuesto del título (7,96 g, 92%): ^{1}H NMR (400 MHz,
MeOH-d_{4}) .\delta 8,28 (m estrecho, 1 H), 8,21
(d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,68 (m estrecho, 1 H), 7,48 (dd, J = 8,5, 7,3
Hz, 1 H), 7,30 (dd, J = 7,9, 4,9 Hz, 1 H), 6,91 (d, J = 8,6 Hz, 2
H), 6,72 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,56 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,44 (d, J
= 8,5 Hz, 1 H), 4,20 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,31 - 3,42 (m, 1 H),
3,02 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 2,97 (dd, J = 13,6, 6,5 Hz, 1 H), 2,87
(s, 3 H), 2,77 (dd, J = 13,6, 8,9 Hz, 1 H), 2,71 (dd, J = 15,6, 6,4
Hz, 1 H), 2,62 (dd, J = 15,6, 8,9 Hz, 1 H); MS (ES) m/e 392
(M + H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{23}H_{25}N_{3}O_{3}\cdot0,1 H_{2}O: C, 70,25; H,
6,46; N, 10,68. Encontrado: C, 70,32; H, 6,50; N, 10,32.
Se añadió gota a gota azodicarboxilato de
diisopropilo (0,41 ml, 2,1 mmol) a una solución de
(S)-4-(4-hidroxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato
de etilo (500 mg, 1,75 mmol),
2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)-1-etanol
(374 mg, 2,1 mmol), y trifenilfosfina (551 mg, 2,1 mmol) en THF
anhidro (8 ml) a TA. Después de 18 h, la reacción se concentró y el
residuo se sometió a cromatografía instantánea sobre gel de sílice
(90% de EtOAc/hexano y después 5% de EtOH/EtOAc) para dar el
compuesto del título (572 mg, 73%) como un aceite: ^{1}H NMR (400
MHz, CDCl_{3}) .\delta 8,43 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1 H), 8,39 (d,
J = 1,9 Hz, 1 H), 7,41 (m estrecho, 1 H), 7,17 (dd, J = 7,8, 4,8 Hz,
1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,90 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,76 (d,
J = 8,6 Hz, 2 H), 6,44 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,75 (s ancho, 1 H),
4,21 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,93 - 4,08 (m, 2 H), 3,31 - 3,45 (m, 3
H), 2,99 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,88 (dd, J = 13,7, 7,2 Hz, 1 H),
2,82 (dd, J = 13,7, 7,8 Hz, 1 H), 2,65 - 2,75 (m, 3 H), 2,59 (dd, J
= 15,6, 9,0 Hz, 1 H), 1,85 - 1,95 (m, 2 H), 1,12 (t, J = 7,1 Hz, 3
H); MS (ES) m/e 446 (M + H)^{+}.
Se añadió LiOH 1,0 M (2,6 ml, 2,6 mmol) a una
solución de
(S)-3-(piridin-3-il)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanoato
de etilo (572 mg, 1,28 mmol) en THF/H_{2}O (8 ml) y la mezcla se
calentó a 50ºC. Después de 18 h, la reacción se enfrió a TA y se
aciduló a pH 6,0 con HCl al 10%. El sólido precipitado se recogió
por filtración con succión, se lavó con H_{2}O y se secó a vacío
para dar el compuesto del título (414 mg, 77%): ^{1}H NMR (400
MHz, MeOH-d_{4}) .\delta 8,28 (dd, J = 4,9, 1,4
Hz, 1 H), 8,21 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,25
- 7,27 (m, 2 H), 6,91 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,71 (d, J = 8,6 Hz, 2
H), 6,53 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 4,08 - 4,22 (m, 2 H), 3,30 - 3,45 (m,
3 H), 2,90 - 3,05 (m, 3 H), 2,70 - 2,85 (m, 3 H), 2,68 (dd, J = 15,2
6,7 Hz, 1 H), 2,58 (dd, J = 15,2, 8,5 Hz, 1 H), 1,80 - 1,97 (m, 2
H); MS (ES) m/e 418 (M + H)^{+}. Análisis Calculado para
C_{23}H_{25}N_{3}O_{3}\cdot0,25 H_{2}O: C, 71,15; H,
6,57; N, 9,96. Encontrado: C, 71,11; H, 6,66; N, 9,82.
Se prepara como sigue una preparación que
contiene 20 mg del compuesto del Ejemplo 1 como polvo seco estéril:
se disuelven 20 mg del compuesto en 15 ml de agua destilada. La
solución se filtra en condiciones estériles en una ampolla de 25 ml
para dosis múltiples y se liofiliza. El polvo se reconstituye por
adición de 20 ml de dextrosa al 5% en agua (D5W) para inyección
intravenosa o intramuscular. Por tanto, la dosificación se determina
por el volumen de inyección. Se puede hacer una dilución
subsiguiente por adición de un volumen medido de esta unidad de
dosificación a otro volumen de D5W para inyección, o se puede añadir
una dosis medida a otro mecanismo para dispensar el fármaco, como en
una botella o una bolsa para infusión gota a gota u otro sistema de
infusión por inyección.
Se prepara una cápsula para administración oral
mezclando y triturando 50 mg del compuesto del Ejemplo 1 con 75 mg
de lactosa y 5 mg de estearato de magnesio. El polvo resultante se
tamiza y se introduce en una cápsula de gelatina dura.
Se prepara un comprimido para administración oral
mezclando y granulando 20 mg de sacarosa, 150 mg de sulfato de
calcio dihidratado y 50 mg del compuesto del Ejemplo 1 con una
solución de gelatina al 10%. Los gránulos mojados se tamizan, se
secan, se mezclan con 10 mg de almidón, 5 mg de talco y 3 mg de
ácido esteárico; y se prensan para formar un comprimido.
La descripción anterior describe detalladamente
cómo hacer y utilizar la presente invención. Sin embargo, la
presente invención no se limita a las realizaciones particulares
descritas aquí anteriormente, sino que incluye todas sus
modificaciones dentro del alcance de las siguientes
reivindicaciones. Las diversas reverencias a revistas, patentes y
otras publicaciones que se citan aquí comprenden el estado de la
técnica y se incorporan aquí como referencias, como si se hubieran
expuesto íntegramente.
Claims (15)
1. Un compuesto según la fórmula (I):
en el
que:
R^{1} es
donde R' es alquilo
C_{1-4} opcionalmente sustituido con el grupo
R^{X} y R'' es fenilo, bencilo o -CH_{2}CF_{3}; o R' y R'' se
toman conjuntamente para formar un anillo
morfolinilo;
R^{X} es alquilo C_{1-4},
OR^{\text{*}}, SR^{\text{*}}, alquilsulfonilo
C_{1-4}, alquilsulfoxilo
C_{1-4}, -CN,
N(R^{\text{*}})_{2},
CH_{2}N(R^{\text{*}})_{2}, -NO_{2}, -CF_{3},
-CO_{2}R^{\text{*}}, -CON(R^{\text{*}})_{2},
-COR^{\text{*}}, -SO_{2}N(R^{\text{*}})_{2},
-NR^{\text{*}}C(O)R^{\text{*}}, F, Cl, Br, I o
CF_{3}S(O)_{r}-;
r es 0, 1 ó 2;
R^{\text{*}} es H, alquilo
C_{1-4}, fenilo o bencilo;
R^{2} es
o una de sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que R^{2} es:
3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el
que R^{2} es:
4. Un compuesto según la reivindicación 1, que
es:
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-(trifluorometil)fenil]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-[(N-metil-N-fenilamino)carbonil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-[(morfolin-4-il)carbonil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-[[N-metil-N-(2,2,2-trifluoroetil)amino]car-
bonil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
bonil]-1,3-oxazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]-fenil]-3-(3-metiltiazol-2-il)butanoico;
ácido
(S)-3-(3-fluorofenil)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanoico;
ácido
(\pm)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-etoxi]-fenil]-3-(piridin-3-il)butanoico;
ácido
(S)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-etoxi]-fenil]-3-(piridin-3-il)butanoico;
o
ácido
(S)-3-(piridin-3-il)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanoico;
o una de sus sales farmacéuticamente
aceptables.
5. Una composición farmacéutica, que comprende un
compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones
1-4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
6. Una composición farmacéutica, que comprende un
compuesto según la reivindicación 1, un agente antineoplásico y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. La composición farmacéutica según la
reivindicación 6, en el que el agente antineoplásico es topotecán o
cisplatino.
8. Una composición farmacéutica, que comprende un
compuesto según la reivindicación 1, un inhibidor de resorción ósea
y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
9. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 4 para uso como un medicamento.
10. El uso de un compuesto de la fórmula (I) como
se ha definido en la reivindicación 1 en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de la osteoporosis.
11. El uso de un compuesto de la fórmula (I) como
se ha definido en la reivindicación 1, en la fabricación de un
medicamento para la inhibición de angiogénesis, crecimiento tumoral
o metástasis tumoral.
12. El uso de un compuesto de la fórmula (I) como
se ha definido en la reivindicación 1 en la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de aterosclerosis, restenosis o
artritis reumatoide.
13. El uso de un compuesto de la fórmula (I) como
se ha definido en la reivindicación 1 y un agente antioplásico en la
fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento
tumoral en combinación física o mediante la administración
secuencial.
14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13 en
el que el agente antineoplásico es topotecán o cisplatino.
15. El uso de un compuesto de la fórmula (I) como
se ha definido en la reivindicación 1 y un inhibidor de la resorción
ósea en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de
osteoporosis en combinación física o para la administración
secuencial.
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