KR100711170B1 - 비트로넥틴 수용체 길항제 - Google Patents

비트로넥틴 수용체 길항제 Download PDF

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Abstract

비트로넥틴 수용체 길항제이며 골다공증의 치료에 유용한 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용가능한 염을 개시했다.
<화학식 I>
Figure 112002006561396-pct00062
상기 식에서,
R1은 Het- 또는 Ar이고;
R2
Figure 112002006561396-pct00063
또는
Figure 112002006561396-pct00064
이다.
비트로넥틴, 수용체 길항제, 골다공증, 제약상 허용가능한 염

Description

비트로넥틴 수용체 길항제 {Vitronectin Receptor Antagonists}
본 발명은 비트로넥틴 수용체를 억제하고 염증, 암 및 아테롬성 동맥경화증 및 재협착증과 같은 심혈관계 질환, 및 골다공증과 같은 뼈의 재흡수가 한 인자인 질병에 유용한 제약상 활성 화합물에 관한 것이다.
인테그린은 다양한 세포상에서 발현되는 막횡단 당단백질인 세포 부착 수용체의 거대족이다. 이 세포 표면 부착 수용체는 gpIIb/IIIa (피브리노겐 수용체) 및 αvβ3 (비트로넥틴 수용체)를 포함한다. 피브리노겐 수용체인 gpIIb/IIIa는 혈소판 표면에서 발현하며, 출혈이 있는 상처 부위에서 혈소판 응집 및 지혈성 혈전 형성을 매개한다 [Philips et al., Blood., 1988, 71, 831]. 비트로넥틴 수용체인 αvβ3은 내피, 평활근, 파골세포 (osteoclast) 및 종양 세포 등을 비롯한 많은 세포 상에서 발현되며, 이에 따라 그 기능이 다양하다. 파골세포의 막에서 발현된 αvβ3 수용체는 뼈의 재흡수 과정의 핵심 단계인 파골세포의 골기질로의 부착을 매개한다 [Ross et al., J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703). 골다공증은 과다한 뼈의 재흡수를 특징으로하는 질병이다. 인간 동맥 평활근 세포에 발현된 αvβ3 수용체는 이 세포들의 신생내막으로의 이동을 매개하며, 이 과정은 경피 관상동맥 확장 술 이후 재협착을 초래할 수 있다 [Brown et al., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815]. 또한, [Brooks et al., Cell, 1994, 79, 1157]은 αvβ3 길항제가 혈관생성성 혈관의 아폽토시스 (apoptosis)를 유도함으로써 종양 퇴행을 촉진시킬 수 있음을 보여주었다. 따라서, 비트로넥틴 수용체를 블로킹하는 작용제는 골다공증, 재협착증 및 암과 같은 질병의 치료에 유용할 것이다.
비트로넥틴 수용체는 현재 αvβ1, αvβ3 및 αvβ 5로 표시되는 3가지의 상이한 인테그린을 뜻하는 것으로 공지되어 있다 [Horton et al., Int. J. Exp. Pathol., 1990. 71, 741]. αvβ1은 피브로넥틴 및 비트로넥틴과 결합한다. αv β3은 피브린, 피브리노겐, 라미닌, 트롬보스폰딘, 비트로넥틴, 폰 빌레브란트 인자 (von Willebrand's factor), 오스테오폰틴 및 뼈 시알로단백질 I 등의 매우 다양한 리간드와 결합한다. αvβ5는 비트로넥틴과 결합한다. 비트로넥틴 수용체 αv β5는 미세혈관 내피세포를 포함하는 다양한 유형의 세포들의 세포 부착에 관여하는 것으로 나타났으며 [Davis et al., J. Cell. Biol., 1993, 51, 206], 혈관생성에서의 역할이 확인되었다 [Brooks et al., Science, 1994, 264, 569]. 이 인테그린은 인간의 상처난 과립 조직의 혈관에 발현하며, 정상 피부에는 발현하지 않는다.
비트로넥틴 수용체는 트리펩티드 Arg-Gly-Asp (또는 RGD) 모티브를 함유하는 골기질 단백질에 결합하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 문헌 [Horton et al., Exp. Cell Res. 1991, 195, 368]은 RGD-함유 펩티드 및 항-비트로넥틴 수용체 항체 (23C6)가 파골세포에 의한 상아질 재흡수 및 세포 분산을 억제한다고 개시하였다. 또한, 문헌 [Sato et al., J. Cell Biol, 1990, 111, 1713]은 RGD 서열을 함유하는 뱀독 펩티드인 에키스타틴 (echistatin)이 조직 배양에서 강력한 뼈의 재흡수 억제제이며, 파골세포가 뼈에 부착하는 것을 억제한다고 개시하였다.
본 발명에 이르러 특정 화합물이 αvβ3 및 αvβ5 수용체의 강력한 억제제라는 것을 발견하였다. 특히, 이러한 화합물이 피브리노겐 수용체보다 비트로넥틴 수용체에 더 강력한 억제제임을 발견하였다.
<발명의 요약>
본 발명은 비트로넥틴 수용체의 억제에 대한 약리적 활성을 지니며 염증, 암 및 아테롬성 동맥경화증 및 재협착증과 같은 심혈관계 질환 및 골다공증과 같은 뼈의 재흡수가 한 인자인 질병에 유용한, 하기에 기재한 바와 같은 화학식 (I)의 화합물을 포함한다.
또한, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 제약상 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 비트로넥틴 수용체로 매개되는 질병의 치료 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 화합물은 아테롬성 동맥경화증, 재협착증, 염증, 암 및 골다공증과 같은 뼈의 재흡수가 한 인자인 질병의 치료에 유용하다.
본 발명은 피브로노겐 수용체 보다 비트로넥틴 수용체에 대해 더욱 강력한 억제제인 신규 화합물을 포함한다. 본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그 의 제약상 허용가능한 염을 포함한다.
Figure 112002006561396-pct00001
상기 식에서,
R1은 Het- 또는 Ar이고;
R2
Figure 112002006561396-pct00002
또는
Figure 112002006561396-pct00003
이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 화합물의 제약상 허용가능한 부가염 및 복합체도 포함한다. 상기 화합물이 1개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 특별히 언급하지 않는 한, 본 발명은 통상적인 기술에 의하여 합성되고 분리될 수 있는 각각의 독특한 비라세미 (nonracemic) 화합물을 포함한다. 본 발명에 따라서, 화학식 (I)의 화합물은 (S) 배열인 것이 바람직하다.
상기 화합물이 불포화 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 경우, 시스 (Z) 및 트란스 (E) 이성질체 모두가 본 발명의 범위 내에 있다. 본 발명의 화합물이 케토-에놀 호변이성질체 (예를 들면,
Figure 112002006561396-pct00004
)와 같은 호변 이성질체의 형태로 존재할 수 있는 경우, 각각의 호변이성질체의 형태는 평형상태로 존재하든지 또는 R'으 로 적절히 치환된 형태로 고정되어 있든 간에, 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 고려된다.
화학식 (I)의 화합물은 비트로넥틴 및 다른 RGD-함유 펩티드의 비트로넥틴 수용체로의 결합을 억제한다. 파골세포상의 비트로넥틴 수용체 억제는 파골세포의 뼈의 재흡수를 억제하며 골다공증 및 골관절염과 같이, 그 병리가 뼈의 재흡수와 관련된 질병의 치료에 유용하다.
다른 측면에서, 본 발명은 오스테오칼신의 분비 증가를 야기하는 화합물의 투여를 포함하는 뼈의 형성 촉진 방법에 관한 것이다. 뼈 생성 증가는 골절 치료 및 골절 예방과 같은 미네랄화된 뼈중량의 부족이 있거나 또는 뼈의 개조가 요구되는 질병 상태에 명백하게 이롭다. 뼈 구조의 감소를 야기하는 질병 및 대사성 질환도 이러한 치료법으로 이로울 수 있다. 예를 들어, 부갑상선 기능항진증, 파겟병 (Paget's disease), 악성 고칼슘혈증, 뼈의 대사로 인한 용골성 병변, 운동불능 또는 성호르몬 결핍으로 인한 뼈의 손실, 베체병 (Behcet's disease), 골연화증, 과다골화증 및 골화석증은 본 발명의 화합물 투여가 이로울 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 많은 상이한 유형의 세포 상의 비트로넥틴 수용체를 억제하기 때문에, 류마티스성 관절염 및 건선과 같은 염증성 질환, 아테롬성 동맥경화증 및 재협착증과 같은 심혈관계 질병의 치료에 유용할 것이다. 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 혈전색전성 질환, 천식, 알러지, 성인 호흡 곤란 증후군, 숙주의 이식거부반응, 기관 이식 거부증, 패혈성 쇼크, 습진, 접촉성 피부염, 염증성 장질병 및 기타 자가면역질병을 포함하는 다른 질병의 치료 또는 예방에 유용할 수 있으나 이들 질병에 국한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 화합물은 상처 치료에도 유용할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물은 혈관생성성 질환의 치료 (예방 포함)에 유용하다. 본원에서 사용되는 용어 혈관생성성 질환이란, 비정상적 혈관신생을 수반하는 상태를 포함한다. 새 혈관의 성장이 질병과 관련된 병리를 야기하거나 그 병리에 기여하는 경우, 혈관생성의 억제는 질병의 해로운 효과를 감소시킬 것이다. 이러한 질병 표적의 예가 당뇨성 망막장애이다. 해로운 조직의 성장을 보조하기 위해 새로운 혈관의 성장이 필요한 경우, 혈관생성의 억제는 조직으로의 혈액 공급을 감소시켜 혈액 공급 요건에 기초한 조직 중량의 감소에 기여할 것이다. 그 예로는 종양이 성장하고 충실성 종양 (solid tumor)의 전이를 수립하기 위해 혈관신생이 지속적으로 요구되는 종양의 성장이 포함된다. 따라서, 본 발명의 화합물은 종양 조직의 혈관생성을 억제하여 종양의 전이 및 종양의 성장을 예방한다.
따라서, 본 발명의 방법에 따라, 본 발명의 화합물을 사용하여 혈관생성을 억제하면 질병의 증후를 개선할 수 있고, 일부의 경우에서는 질병을 치료할 수도 있다.
본 발명의 화합물의 다른 치료 표적은 혈관신생을 특징으로하는 안 질병이다. 이러한 안 질병은 각막 이식, 포진성 각막염, 매독성 각막염, 콘택트 렌즈의 사용과 관련된 표피과막 (pterygium) 및 혈관신생 섬유화 염증 (pannus)과 같은 각막 혈관신생 질환을 포함한다. 또한, 다른 안 질병으로는 노화성 반점 퇴행, 추정 안 히스토플라스마증, 미숙성 및 혈관신생성 녹내장의 망막 장애 등이 있다.
또한, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 토포테칸 및 시스플라틴과 같은 항종양제를 차례로 또는 물리적 조합물로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 억제 방법을 제공한다.
화학식 (I)과 관련하여, 적절한 R1은 하기 구조식을 갖는다:
Figure 112002006561396-pct00005
Figure 112002006561396-pct00006
상기 식에서, R'는 C1-4알킬이고, R"는 페닐, 벤질 또는 -CH2CF3이거나; 또는 R' 및 R"가 결합하여 모르폴리닐 고리를 형성한다.
적절한 R2
Figure 112002006561396-pct00007
또는
Figure 112002006561396-pct00008
이다.
본 발명의 신규 화합물의 대표적인 예는 다음과 같다:
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부탄산;
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-l-에톡시]페닐]-3-[4-[(N-메틸-N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부탄산;
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부탄산;
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부탄산;
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]부탄산;
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-(3-메틸티아졸-2-일)부탄산;
(S)-3-(3-플루오로페닐)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산;
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산;
(S)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산; 및
(S)-3-(피리딘-3-일)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일) 에톡시]페닐]부탄산; 또는 이들의 제약상 허용가능한 염.
상기 화합물이 1개 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 특별히 언급하지 않는 한, 본 발명은 통상적인 기술에 의하여 합성되고 분리될 수 있는 각각의 독특한 비라세미 화합물을 포함한다.
상기 화합물이 불포화 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 경우, 시스 (Z) 및 트란스 (E) 이성질체 모두가 본 발명의 범위 내에 있다. 임의의 위치에 있는 임의의 치환기의 의미는 임의의 다른 위치에 있는 그 치환기 또는 임의의 다른 치환기의 의미와는 독립적이다.
또한, 본 발명은 본 발명의 화학물의 전구약물을 포함한다. 전구약물은 생체 내에서 화학식 (I)의 활성 모 (parent) 약물을 방출하는 어떠한 공유결합된 담체라도 가능하다. 따라서, 본 발명의 다른 측면은 화학식 (Ia)의 화합물의 제조에 있어서 또한 중간체인 하기 화학식 (II)의 신규한 전구약물 또는 제약상 허용가능한 그의 염이다.
본 명세서에서는 본 발명의 화합물을 기재하기 위해 펩티드 및 화학 업계에서 흔히 사용되는 약어 및 기호를 사용한다. 일반적으로, 아미노산의 약어는 문헌 [Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984)]에 기재된 바와 같이 IUPAC-IUB 조인트 커미션 온 바이오케미칼 노먼클레이처 (Joint Commission on Biochemical Nomenclature)를 따른다.
본 명세서에 사용된 C1-4알킬은 탄소 원자수 1 내지 4 개의 임의로 치환된 알 킬기를 의미하며, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 및 t-부틸을 포함한다. 임의의 C1-4알킬은 임의의 탄소 원자상에 있을 수 있는 Rx기로 임의로 치환되어 안정한 구조를 이루며 통상의 합성 기술로 이용가능할 수 있다. Rx에 적합한 기는 C1-4알킬, OR*, SR*, C1-4알킬술포닐, C1-4 알킬술폭실, -CN, N(R*)2, CH2N(R*)2, -NO2, -CF3, -CO2R* , -CON(R*)2, -COR*, -SO2N(R*)2, -NR*C(O)R*, F, Cl, Br, I 또는 CF3S(O)r- (여기서, r은 0, 1 또는 2이고, R*는 H 또는 C1-4 알킬, 페닐 또는 벤질임)이다.
할로겐 또는 할로는 F, Cl, Br 및 I를 의미한다.
본원에 적용되는 바와 같이, Ar 또는 아릴은 페닐 또는 나프틸, 또는 알킬에 대해 상기 정의된 바와 같은 치환기들, 특히 C1-4알킬, C1-4알콕시, C1-4알킬티오, CF3, NH2, OH, F, Cl, Br 또는 I와 같은 치환기 1 내지 3개로 치환된 페닐 또는 나프틸을 의미한다.
Het 또는 헤테로사이클은 통상의 화학적 합성법으로 이용가능하고 안정한, 질소, 산소 또는 황의 군으로부터 선택된 헤테로원자를 1 내지 3개 함유하고 임의로 치환된 5원 또는 6원 모노사이클 고리 또는 9원 또는 10원 바이사이클 고리를 나타낸다. 헤테로사이클의 예로는 벤조푸란, 벤즈이미다졸, 벤조피란, 벤조티오 펜, 벤조티아졸, 푸란, 이미다졸, 인돌린, 모르폴린, 피페리딘, 피페라진, 피롤, 피롤리딘, 테트라히드로피리딘, 피리딘, 티아졸, 옥사졸, 티오펜, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 및 테트라- 및 퍼히드로퀴놀린 및 이소퀴놀린 등이 있다. 화학적 합성법으로 이용가능하고 안정한, 알킬에 대해 상기 정의한 바과 같은 Het 고리 상의 3개 이하의 치환기의 임의의 이용가능한 조합도 본 발명의 범위에 포함된다.
본원에서는 특정 라디칼기를 약기했다. t-Bu는 3급 부틸 라디칼, Boc는 t-부틸옥시카르보닐 라디칼, Fmoc는 플루오레닐메톡시카르보닐 라디칼, Ph는 페닐 라디칼, Cbz는 벤질옥시카르보닐 라디칼, Bn은 벤질 라디칼, Me는 메틸, Et는 에틸, Ac는 아세틸, Alk는 C1-4알킬, Nph는 1- 또는 2-나프틸, 그리고 cHex는 시클로헥실을 지칭한다. Tet는 5-테트라졸릴을 지칭한다.
본원에서는 특정 시약을 약기했다. DCC는 디시클로헥실카르보디이미드, DMAP는 디메틸아미노피리딘, DIEA는 디이소전구필에틸 아민, EDC는 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 염산염, HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸, THF는 테트라히드로푸란, DIEA는 디이소프로필에틸아민, DEAD는 디에틸 아조디카르복실레이트, PPh3은 트리페닐포스핀, DIAD는 디이소프로필 아조디카르복실레이트, DME는 디메톡시에탄, DMF는 디메틸포름아마이드, NBS는 N-브로모숙신이미드, Pd/C는 탄소 상의 팔라듐 촉매, PPA는 폴리인산, DPPA는 디페닐포스포릴 아지드, BOP는 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트, HF는 히드로플루오르산, TEA는 트리에틸아민, TFA는 트리플루오로아세트산, PCC는 피리디 늄 클로로크로메이트를 지칭한다.
본 발명의 화합물들은 반응식 I 내지 VI에 기재한 통상의 방법으로 제조된다.
Figure 112002006561396-pct00009
(a) CH3NH(OCH3)·HCl, EDC, HOBt·H2O, Et3N, DMF; (b) 4-브로모벤조트리플루오라이드, sec-BuLi, THF; (c) (EtO)2P(O)CH2CO2Et, NaH, 톨루엔; (d) H2, 10% Pd/C, EtOH; (e) BBr3, CH2Cl2; (f) 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) 1.0 N NaOH, MeOH, 이후 산성화
적합한 알콕시페닐아세트산, 예를 들면, 4-메톡시페닐아세트산 (I-1)은 바인렙 (Weinreb)의 통상적 방법 (Tetrahedron Lett. 1981, 22, 3815)에 따라, 상응하는 N-메톡시-N-메틸아미드 (I-2)와 금속화된 방향족 유도체의 반응으로 데옥시벤조인 유도체 I-3으로 전환된다. 화합물 I-3은 공지된 비티그 (Wittig) 반응을 통해 α,β-불포화 에스테르 I-4로 전환된다. 최적으로는, 상기 반응은 톨루엔, THF, 또는 이들의 혼합물과 같은 비양성자성 용매 중에서 적절한 염기, 통상적으로는 수소화 나트륨 또는 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드의 존재하에 트리에틸 포스포노아세테이트를 사용하여 수행된다. I-4의 올레핀기의 환원은 EtOAc, MeOH, EtOH, i-PrOH, 또는 이들이 혼합물과 같은 적절한 용매 중에서 활성 목탄 상의 팔라듐과 같은 팔라듐 촉매의 존재하에 수소첨가반응에 의해 최적으로 수행된다. I-5의 메틸 에테르는 불활성 용매, 바람직하게는 CH2Cl2 중의 삼브롬화 붕소 (BBr3)를 사용하거나, CH2Cl2와 같은 불활성 용매 중의 삼염화 알루미늄 (AlCl3) 및 에탄티올 (EtSH)을 사용하여 절단할 수 있다. 메틸 에테르 보호기 제거에 유용한 다른 방법은 그린 (Greene)의 문헌 [Protective Groups in Organic Synthesis; John Wiley and Sons]에 기재되어 있다. 생성된 페놀 I-6을 미쯔노부 (Mitsunobu)-형 커플링 반응 (문헌 [Organic Reactions 1992, 42, 335-656], 문헌 [Synthesis 1981, 1-28])에서 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올과 반응시켜 I-7을 수득한다. 상기 반응은 디에틸 아조디카르복실레이트 또는 디이소프로필 아조디카르복실레이트와 같은 아조디카르복실레이트 디에스테르와 트리페닐포스핀 사이에서 형성된 복합체에 의하여 매개되 고, THF, CH2Cl2 또는 DMF 등과 같은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. I-7의 에틸 에스테르를 예를 들면 THF 수용액 중의 LiOH, 또는 메탄올 또는 에탄올 수용액 중의 NaOH와 같은 염기 수용액을 사용하여 가수분해하고, 중간체 카르복실레이트 염은 TFA 또는 HCl과 같은 적절한 산으로 산성화하여 카르복실산 I-8을 수득한다. 별법으로, 상기 중간체 카르복실레이트 염은 단리될 수 있고, 원한다면, 유리 카르복실산의 카르복실레이트 염은 당업자에게 공지된 방법으로 제조될 수 있다.
Figure 112002006561396-pct00010
Figure 112002006561396-pct00011
할로페놀 유도체, 예를 들어 4-브로모페놀 (II-1)을 적절히 보호된 유도체, 예를 들어 4-브로모-1-(트리이소프로필실릴옥시)벤젠 (II-2)으로 전환시킨다. 상기 페놀에 대한 보호기는 이후의 화학적 방법에 상용가능해야 하며, 또한 원하는 경우 선택적으로 제거될 수 있어야 한다. 페놀의 보호 방법은 그린의 문헌 [Protective Groups in Organic Synthesis; John Wiley and Sons]와 같은 표준 참고 문헌에 기재되어 있다. 화합물 II-2를 헤크 (Heck)형 반응 (문헌 [Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345] 참조)에서 메틸 3-(벤질옥시카르보닐)-3-부테노에이트와 반응시켜 II-3을 수득한다. 상기 반응은 팔라듐(0) 종에 의해 매개되고, 통상적으로 트리에틸아민 (Et3N) 또는 디이소프로필에틸아민 ((i-Pr)2NEt)과 같은 적합한 산 제거제 (scavenger)의 존재하에 CH3CN, 프로피오니트릴, 또는 톨루엔과 같은 불활성 용매 중에서 수행된다. 팔라듐(0) 종의 전형적인 공급원으로는 팔라듐(II) 아세테이트 (Pd(OAc)2) 및 팔라듐(II) 클로라이드 (PdCl2), 및 종종 포스핀 리간드, 예를 들면, 트리페닐포스핀 (PPh3) 또는 트리-오르토-톨릴포스핀 (P(tol)3) 등이 있다. α,β-불포화 에스테르 II-3은 불활성 용매, 통상적으로는 MeOH, EtOH, EtOAc 또는 이들의 혼합물 중에서 적절한 촉매, 바람직하게는 활성화 탄소 상의 팔라듐 금속 (Pd/C)의 존재하에 수소 기체와의 반응에 의해 포화 화합물 II-4로 환원된다. II-4의 카르복실산은 EDC 및 HOBt, SOCl2, 또는 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI) 등을 사용하여 활성화 형태로 전환시킨 다음, 상기 활성화 형태를 DMF 등과 같은 적절한 용매 중에서 세린 벤질 에스테르 등의 적당한 아민과 반응시켜 II-5를 수득한다. 산 중화가 필요한지 여부에 따라, 트리에틸아민 (Et3N), 디이소프로필에틸아민 ((i-Pr)2NEt), 또는 피리딘 등의 염기가 추가로 사용될 수 있다. 카르복실산을 아미드로 전환시키는 많은 다른 방법들이 공지되어 있으며, 이는 문헌 [Compendium of Organic Synthetic Methods", Vol. I-VI; Wiley-Interscience] 또는 본다스키 (Bodansky) 등의 문헌 [The Practice of Peptide Synthesis; Springer-Verlag] 등 의 표준 참조 문헌에서 찾을 수 있다. 그 다음, II-5를 옥사졸 유도체 II-7로 전환시킨다. 아미도알콜을 옥사졸로 전환시키는 여러 방법들이 문헌 [Meyers, Tetrahedron 1994, 50, 2297-2360] 및 문헌 [Wipf, J. Org. Chem, 1993, 58, 3604-3606] 등에 공지되어 있다. 예를 들어, 아미도알콜 II-5를 먼저 옥사졸린 II-6으로 전환시킬 수 있다. 이러한 변형은 통상적으로는 탈수 조건하에서, 예를 들면 THF 중의 버제스 (Burgess) 시약과 반응시켜 수행된다. 그 다음, 옥사졸린 II-6을 CH2Cl2 중의 브롬트리클로로메탄 및 DBU 등을 사용 [Williams, Tetrahedron Letters 1997, 38, 331-334]하거나 EtOAc/CHCl3 또는 CH2Cl2 등과 같은 적당한 용매 중의 CuBr2 및 DBU를 사용 [Barrish, J. Org. Chem. 1993, 58, 4494-4496]하여 옥사졸 II-7로 산화시킨다. 표준 불소 조건 (상기 그린의 문헌 참조)하에서 상기 실릴 보호기를 제거하여 페놀 II-8을 수득하고, 이를 THF 등과 같은 극성 중성 용매 중에서 염기, 통상적으로는 피리딘의 존재하에 디-tert-부틸 디카르보네이트를 사용하여 tert-부틸옥시 카르보네이트 유도체 II-9로 전환시킨다. 이러한 새로운 보호기는 상기 기재된 바와 같이 선택된다. 화합물 II-9를 상기 기재한 바와 같은 수소첨가반응에 의해 카르복실산 유도체 II-10으로 전환시키고, II-10를 카르피노 (Carpino) 및 아이만 (Ayman)의 문헌 [J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5401-5402]의 통상적인 방법에 따라 아미드 II-11로 전환시킨다. 이러한 조건하에서, 카르복실산 II-10을 DMF 등과 같은 극성 중성 용매 중에서 비스(테트라메틸렌)플루오로포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트 (BPFFH) 및 적당한 염기, 통상적으로는 Et3N, (i- Pr)2NEt, 피리딘, 또는 이들의 혼합물의 존재하에 N-메틸아닐린 등과 같은 적절한 아민과 반응시킨다. tert-부틸옥시 카르바메이트 보호기를 표준 산성 조건 (상기 그린의 문헌 참조)하에서 제거하고, 생성된 페놀 II-12를 반응식 I에 기재된 방법에 의해 II-14로 전환시킨다.
Figure 112002006561396-pct00012
섀퍼 (Schaefer) 및 게발트 (Gewald)의 문헌 [J. Prakt. Chem. 1974, 316, 684-692]의 4-페닐-2-(시아노메틸)티아졸 제조 방법을 적당히 변형시켜, 티아졸 유도체 III-3을 환류 에탄올 중에서 2-시아노아세트아미드 (III-1)와 3-브로모- 1,1,1-트리플루오로아세톤 (III-2)을 축합시켜 제조한다. 4-(벤질옥시)벤즈알데히드 등과 같은 적당하게 치환된 벤즈알데히드 유도체를 사용하여 III-3을 알돌 축합시켜 III-4를 생성한다. 상기 반응은 적절한 염기, 바람직하게는 에톡시드 나트륨에 의해 촉매되며, 극성 용매, 통상적으로는 에탄올 중에서 수행된다. 포우카우드 (Foucaud)의 문헌 [Synthesis 1987, 9, 854-856]의 통상의 방법에 따라, 중성 알루미나의 존재하에 차아염소산 나트륨을 사용하여 III-4를 에폭시드화시켜 III-5를 수득한다. 상기 조건이 기질 중의 관능기와 상용가능한 한, mCPBA, 염기성 과산화수소, 또는 염기성 tert-부틸 히드로퍼옥시드 등과 같은 기타의 공지된 에폭시드화 조건도 이용될 수 있다. III-5를 BF3·OEt2 등의 적절한 루이스 산 또는 TFA 또는 HCl 등의 적절한 양성자산의 존재하에 트리에틸실란에 노출시킨 후, III-5의 에폭시드 고리는 고도의 위치선택적인 방식으로 환원성 개방되어 케톤 III-6, 및 III-6의 상응하는 트리메틸실릴 시아노히드린이 함께 수득된다. 이 시아노히드린을 적당한 용매, 통상적으로는 THF 중의 불소 테트라부틸암모늄에 노출시키면, 케톤 III-6으로 편리하게 전환된다. 이 케톤을 비티그 반응에서 극성 비양성자성 용매, 바람직하게는 THF 중에서 LiN(TMS)2 또는 NaH 등과 같은 적절한 염기의 존재하에 트리에틸 포스포노아세테이트와 반응시킴으로써 올레핀계 이성질체의 혼합물로서의 α,β-불포화 에스테르 III-7을 수득한다. MeOH 중의 마그네슘 금속을 사용한 반응으로 III-7의 올레핀은 선택적으로 환원되어 포화 유도체 III-8이 수득된다. 이러한 조건하에서, 상기 에틸 에스테르는 메틸 에스테르로 전환된다. 에탄티올 및 BF3·OEt2 를 사용하여 벤질기를 제거하여 페놀 III-9를 수득하고, 이를 반응식 I에 기재된 방법에 따라 III-10으로 전환시킨다.
Figure 112002006561396-pct00013
시판되는 메틸 4-히드록시페닐아세테이트 (V-1)의 페놀기를 메틸 에테르, 벤질 에테르, 또는 트리이소프로필실릴 에테르 등과 같은 적절한 보호기로 보호한다. 페놀의 보호 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 대표적인 보호기는 그린의 문헌 [Protective Groups in Organic Synthesis; Wiley-Interscience] 등과 같은 표준 참고 문헌에 기재되어 있다. 생성된 화합물 (IV-2)을 적절한 그리그나르드 (Grignard) 또는 유기리튬 시약과 반응시켜 케톤을 수득한다. 예를 들어, 5-메틸티아졸 및 n-부틸리튬로부터 제조된 2-리티오-5-메틸티아졸을 THF 또는 DME와 같은 에테르성 용매 중에서 IV-2와 반응시켜 케톤 유도체 IV-3을 수득한다. 그 다음, 상기 케톤을 반응식 III에 기재된 방법에 따라 IV-6로 전환시킨다.
Figure 112002006561396-pct00014
선택된 방향족 알데히드, 예를 들면, 3-피리딘카르복스알데히드 (V-1)를 트리메틸실릴 클로라이드 (TMSCl), 트리이소프로필실릴 클로라이드 (TIPSCl), 또는 tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (TBDMSCl 또는 TBSCl)와 같은 적절한 실릴 할라이드의 존재하에 시아나이드 이온과 반응시켜 V-2와 같은 실릴-보호된 시아노히드린으로 전환시킨다. 시아나이드 이온의 전형적인 공급원으로는 시아나이드 칼륨 (KCN), 시아나이드 나트륨 (NaCN), 및 시아나이드 테트라부틸암모늄 (Bu4NCN) 등이 있다. 상기 반응은 종종 촉매량의 루이스 산, 통상적으로는 ZnI2, 및 극성의 비양성자성 용매, 바람직하게는 아세토니트릴 (CH3CN)의 존재하에서 수행된다. 상기 보호기가 이후의 화학적 방법에 상용가능하고, 원하는 경우 선택적으로 제거될 수 있는 한, 다른 보호된 시아노히드린, 예를 들면, 에톡시에틸-보호된 시아노히드린을 사용할 수 있다. 보호기에 관한 논의는 그린의 문헌 [Protective Groups in Organic Synthesis; John Wiley and Sons]와 같은 표준 참고 문헌에서 찾을 수 있다. 화합물 V-2를 4-벤질옥시벤질 클로라이드 등과 같은 적당한 벤질 할라이드로 C-알킬화시켜 V-3을 수득한다. 상기 반응은 중간체 음이온을 생성하는 초기의 탈양성자 반응을 포함하며, 상기 중간체 음이온은 단리되지 않고, 대신 알킬화제와 계내 반응한다. 이러한 유형의 반응에 전형적인 염기로는 리튬 디이소프로필아미드 (LDA) 및 리튬 헥사메틸디실아지드 (LiN(TMS)2) 등이 있으며, THF 또는 DME와 같은 극성 비양성자성 용매가 바람직하다. V-3의 상기 TBS-시아노히드린은 불소 테트라부틸암모늄 (TBAF)과의 반응에 의해 케톤 V-4로 편리하게 전환된다. 이러한 변형에는 2단계 절차를 사용할 수도 있다. 예를 들어, V-3의 상기 실릴 보호기를 산성 조건하에서, 예를 들면, HF와의 반응으로 제거하여 시아노히드린을 수득할 수 있으며, 이는 적절한 염기와의 반응에 의해 케톤 V-4로 전환될 수 있다. 화합물 V-4는 공지된 비티그 반응을 통해 α,β-불포화 에스테르 V-5로 전환된다. 전형적으로, 상기 반응은 톨루엔, THF, 또는 이들의 혼합물과 같은 비양성자성 용매 중에 서 적절한 염기, 통상적으로는 수소화 나트륨 또는 LiN(TMS)2의 존재하에 트리에틸 포스포노아세테이트를 사용하여 수행된다. V-5의 올레핀기의 환원은 EtOAc, MeOH, EtOH, i-PrOH, 또는 이들이 혼합물과 같은 적절한 용매 중에서 활성 목탄 상의 팔라듐과 같은 팔라듐 촉매의 존재하에 수소첨가반응에 의해 최적으로 수행된다. 이러한 조건하에서는 페놀 상의 벤질 보호기도 제거된다. 생성된 페놀 V-6을 미쯔노부-형 커플링 반응 (문헌 [Organic Reactions 1992, 42, 335-656], 문헌 [Synthesis 1981, 1-28]에서 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올과 반응시켜 V-7을 수득한다. 상기 반응은 디에틸 아조디카르복실레이트 또는 디이소프로필 아조디카르복실레이트와 같은 아조디카르복실레이트 디에스테르와 트리페닐포스핀 사이에서 형성된 복합체에 의하여 매개되고, 전형적으로는 THF, CH2Cl2 또는 DMF와 같은 비양성자성 용매 중에서 수행된다. V-7의 에틸 에스테르를 예를 들면 디옥산 수용액, THF, 메탄올 또는 에탄올 중의 LiOH 또는 NaOH와 같은 염기 수용액을 사용하여 가수분해하고, 중간체 카르복실레이트 염은 예를 들면 TFA 또는 HCl과 같은 적절한 산으로 산성화하여 카르복실산 V-8을 수득한다. 원한다면, 상기 중간체 카르복실레이트 염은 단리될 수 있다. 또한, 상기 카르복실산 또는 아민의 적당한 염은 당업자에게 공지된 방법으로 제조될 수 있다.
Figure 112002006561396-pct00015
시판되는 (4S,5R)-1,5-디메틸-4-페닐-2-이미다졸리디논 (VI-1)을 적당한 α,β-불포화 산 클로라이드, 예를 들면, 아크릴로일 클로라이드와 반응시켜 이미드 VI-2를 수득한다. 상기 반응은 적절한 염기, 전형적으로는 트리에틸아민 (Et3N) 또는 디이소프로필에틸아민 ((i-Pr)2NEt)에 의해 매개되며, 이는 촉매량의 구리 할라이드, 예를 들면, 구리(I) 클로라이의 존재하에 수행된다. CH2Cl2 등의 중성 용매 가 바람직하다. 화합물 VI-2를 헤크형 반응 (문헌 [Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345] 참조)에서 3-브로모피리딘과 같은 적절한 아릴 할라이드와 반응시켜 VI-3을 수득한다. 상기 반응은 팔라듐(0) 종에 의해 매개되고, 통상적으로 트리에틸아민 (Et3N) 또는 디이소프로필에틸아민 ((i-Pr)2NEt)과 같은 적합한 산 제거제의 존재하에 CH3CN, 프로피오니트릴, 톨루엔, 또는 DMF와 같은 불활성 용매 중에서 수행된다. 팔라듐(0) 종의 전형적인 공급원으로는 팔라듐(II) 아세테이트 (Pd(OAc)2) 및 팔라듐(II) 클로라이드 (PdCl2), 및 종종 포스핀 리간드, 예를 들면, 트리페닐포스핀 (PPh3) 또는 트리-오르토-톨릴포스핀 (P(tol)3) 등이 있다. 화합물 VI-3을 1,4-첨가 반응에서 유기구리 종과 반응시켜 공액 첨가 생성물 VI-4를 생성한다 (문헌 [Melnyk, O.; Stephan, E.; Pourcelot, G.; Cresson, P. Tetrahedron 1992, 48, 841-850], 문헌 [Bongini, A.; Cardillo, G.; Mingardi, A.; Tomasini, C. Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1457-1466], 문헌 [van Heerden, P. S., Bezuidenhoudt, B. C. B., Ferreira, D., Tetrahedron Lett. 1997, 38, 1821-1824] 참조). 유기구리 반응에 관해 살펴보기 위해서는 문헌 [Posner, G. Organic Reactions 1972, 19, 1-113], 문헌 [Lipshutz, B. Organic Reactions 1992, 41, 135-631]을 참조한다. 유기구리 종의 생성은 Et20, THF, DME, 톨루엔, 또는 이들의 혼합물 등과 같은 불활성 용매 중에서 유기리튬 또는 유기마그네슘 시약, 예를 들면, 4-메톡시벤질마그네슘 클로라이드를 구리(I) 공급원, 예를 들면 CuCl, CuBr·DMS 또는 CuI을 첨가하여 수행될 수 있다. 상기 반응의 부분입체선택성은 MgBr2, Bu2BOTf, 또는 ZnI2와 같은 특정 루이스 산에 의해 향상될 수 있다. VI-4의 보조 키랄은 염기성 조건하에서 에탄올첨가분해시켜 편리하게 제거된다. 예를 들어, THF 중에서 VI-4를 에톡시드 나트륨으로 처리하여 VI-5를 수득한다. VI-5의 메틸 에테르는 불활성 용매, 바람직하게는 CH2Cl2 중의 삼브롬화 붕소 (BBr3)를 사용하거나, CH2Cl2와 같은 불활성 용매 중의 삼염화 알루미늄 (AlCl3) 및 에탄티올 (EtSH)을 사용하여 절단시켜 페놀 VI-6을 수득할 수 있다. 메틸 에테르 보호기를 제거하는 기타 유용한 방법은 표준 참고 문헌 (반응식 V 참조)에 기재되어 있다. 반응식 V에 기재한 바와 같이, 페놀 VI-6은 페놀 VI-8로 전환된다.
본원에 사용된 바와 같이, 아미드 커플링 시약은 펩티드 결합의 형성에 이용될 수 있는 시약을 의미한다. 전형적인 커플링 방법에서는 카르보디이미드, 활성화 무수물 및 에스테르 및 아실 할라이드를 사용한다. EDC, DCC, DPPA, BOP 시약, HOBt, N-히드록시숙신디이미드 및 옥살릴 클로라이드와 같은 시약이 전형적이다.
통상적으로, 펩티드 결합을 형성하는 커플링 방법은 당업계에 공지되어 있다. 통상적으로 문헌 [Bodansky et al., THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984], 문헌 [Ali et al. in J. Med. Chem., 29, 984 (1986)] 및 문헌 [J. Med. Chem., 30, 2291 (1987)]에 기재되어 있는 펩티드 합성 방법은 상기 기술을 일반적으로 설명하며, 상기 문헌은 참고로 본원에 도입된다.
전형적으로, N,N'-디시클로헥실 카르보디이미드 (DCC)와 같은 적절한 카르보 디이미드 커플링제를 사용하여, 임의로 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt) 및 디메틸아미노 피리딘 (DMAP) 등의 촉매의 존재하에 상기 아민 또는 아닐린을 그의 유리 아미노 기를 통해 적절한 카르복실산 기질에 커플링시킨다. 적절히 보호된 산 기질의 유리 카르복실의 활성화 에스테르, 무수물 또는 산 할라이드를 형성시키는 등의 다른 방법을 사용한 후, 임의로 염기의 존재하에존재하에호된 아민의 유리 아민과 반응시키는 것도 적절하다. 예를 들어, 염화 메틸렌 또는 테트라히드로푸란 (THF) 등과 같은 무수 용매 중에서 N-메틸 모르폴린, DMAP 또는 트리알킬아민 등과 같은 염기의 존재하에 보호된 Boc-아미노산 또는 Cbz-아미디노 벤조산에 이소부틸 클로로포르메이트를 처리하여 "활성화 무수물"을 형성시킨 다음, 이를 제2 보호된 아미노산 또는 아닐린과 반응시킨다.
R2가 벤즈이미다졸인 화학식 (I)의 화합물의 제조에 유용한 중간체가 문헌 [Nestor et al, J. Med. Chem. 1984, 27, 320]에 개시되어 있다. 본 발명의 중간체로 유용한 벤즈이미다졸 화합물을 제조하는 대표적인 방법들도 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들면, EP-A 0 381 033에서 찾을 수 있다.
화합물의 산 부가염은 모 화합물 및 염산, 브롬화수소산, 히드로플루오르산, 황산, 인산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레산, 숙신산 또는 메탄술폰산과 같은 과량의 산으로부터 적합한 용매에서 표준 방식으로 제조한다. 일부 화합물은 허용가능할 수 있는 내염 또는 양쪽성이온을 형성한다. 양이온 염은 모 화합물을 수산화물, 탄산염 또는 알콕시드와 같이 적절한 양이온을 함유하는 과량의 알칼리 시약으로, 또는 적절한 유기아민으로 처리하여 제조한다. Li+, Na+, K+, Ca++, Mg++ 및 NH4 +와 같은 양이온은 제약상 허용가능한 염에 존재하는 양이온의 구체적인 예이다.
또한, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물 및 제약상 허용가능한 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 따라서, 화학식 (I)의 화합물은 의약 제조에 사용될 수 있다. 본 명세서에서 이전에 기재한 바와 같이 제조한 화학식 (I)의 화합물의 제약 조성물은 비경구 투여를 위한 용액 또는 동결건조된 분말로 제형화될 수 있다. 분말은 사용 전에 적합한 희석제 또는 다른 제약상 허용가능한 담체를 첨가하여 재구성할 수 있다. 액체 제제는 완충된 등장의 수용액일 수 있다. 적합한 희석제의 예로는 통상적인 등장의 염수 용액, 물 또는 완충된 나트륨 또는 암모늄 아세테이트 중의 표준 5% 덱스트로스 용액 등이 있다. 이러한 제제는 특히 비경구 투여에 적합하지만, 경구 투여에 사용되거나 또는 취입을 위한 계량된 투여량의 흡입제 또는 분무제에 함유될 수도 있다. 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, 히드록시 셀룰로스, 아카시아, 폴리에틸렌 글리콜, 만니톨, 염화나트륨 또는 시트르산나트륨과 같은 부형제를 첨가하는 것이 바람직할 수 있다.
또한, 이들 화합물은 경구 투여를 위한 캡슐, 정제 또는 에멀젼 또는 시럽으로 제조될 수 있다. 제약상 허용가능한 고상 또는 액상 담체를 첨가하여 조성물을 향상시키거나 안정화시키고, 또는 조성물의 제조를 용이하게 할 수 있다. 고상 담체는 전분, 락토스, 황산칼슘 이수화물, 테라 알바, 스테아르산마그네슘 또는 스테 아르산, 탈크, 펙틴, 아카시아, 아가 또는 젤라틴을 포함한다. 액상 담체는 시럽, 땅콩유, 올리브유, 염수 및 물을 포함한다. 또한, 담체는 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 서방형 물질을 단독으로 또는 왁스와 함께 포함할 수 있다. 고상 담체의 양은 다양하나, 바람직하게는 투여량 단위당 약 20 mg 내지 약 1 g일 것이다. 제약 제제는 정제 형태를 위해 필요한 경우 분쇄, 혼합, 과립화 및 압착, 경질 젤라틴 캡슐 제형을 위한 분쇄, 혼합 및 충전을 포함하는 제약의 통상적인 기술로 제조된다. 액상 담체가 사용되는 경우, 상기 제제는 시럽제, 엘릭시르제, 에멀젼제 또는 수성 또는 비수성 현탁액제의 형태일 것이다. 이러한 액상 조성물은 직접 경구로 투여되거나 연질 젤라틴 캡슐에 충전하여 투여될 수 있다.
직장 투여를 위해, 본 발명의 화합물은 또한 코코아 버터, 글리세린, 젤라틴 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 부형제와 조합하여 좌제로 성형될 수 있다.
본원에 기재한 화합물은 비트로넥틴 수용체의 길항제이며 근원 병리가 비트로넥틴 수용체와 상호작용하는 리간드 또는 세포에 기인하는 질병의 치료에 유용하다. 예를 들어, 이들 화합물은 뼈 매트릭스의 손실로 병리가 야기되는 질병의 치료에 유용하다. 따라서, 본 화합물은 골다공증, 부갑상선 기능항진증, 파겟병, 악성 고칼슘혈증, 뼈의 대사로 인한 용골성 병변, 운동불능 또는 성호르몬 결핍으로 인한 뼈의 손실의 치료에 유용하다. 또한, 본 발명의 화합물은 항종양제, 항혈관생성제, 항염증제 및 항전이제로서 유용성이 있으며 아테롬성 동맥경화증 및 재협착증의 치료에 유용하다고 여겨진다.
이 화합물은 경구 또는 비경구로, 약물의 농도가 뼈의 재흡수를 억제하기에, 또는 기타 이러한 징후에 충분하게 환자에게 투여된다. 이 화합물을 함유하는 제약 조성물은 환자의 상태에 알맞도록 약 0.1 내지 약 50 mg/kg의 경구 투여량으로 투여된다. 바람직하게는 경구 투여량은 약 0.5 내지 약 20 mg/kg일 것이다. 급성 치료에서는 비경구 투여가 바람직하다. 근육내 농축괴 주사도 효과적이지만, 물 중의 5% 덱스트로스 또는 통상적인 염수 용액 중의 펩티드 또는 적합한 부형제와의 유사한 조성물로 정맥내 주입하는 것이 가장 효과적이다. 전형적으로, 비경구 투여량은 약 0.01 내지 약 100 mg/kg이고, 바람직하게는 0.1 내지 20 mg/kg일 것이다. 화합물은 총 하루 투여량이 약 0.4 내지 약 400 mg/kg/일이 되도록 하는 수준으로 하루에 1 회 내지 4 회 투여한다. 당업자는 치료 효과에 요구되는 농도와 작용제의 혈중 농도를 비교하여 상기 화합물 투여의 정확한 수준 및 방법을 용이하게 결정한다.
또한, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물과 비스포스포네이트 (즉, 알렌드로네이트)와 같은 다른 뼈의 재흡수 억제제, 호르몬 대체 요법, 항-에스트로겐제 또는 칼시토닌을 차례로 또는 물리적 조합물로 투여하는 것을 포함하는, 골다공증의 치료 방법 또는 뼈의 손실 억제 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 골형태발생 단백질, 이프로플라본과 같은 동화제를 사용하는 뼈 손실의 예방 및(또는) 뼈 중량 증가에 유용한 치료 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 화학식 (I)의 화합물과 항종양제를 차례로 또는 물리적 조합물로 투여하는 것을 포함하는, 종양 성장 억제 방법을 제공한다. 토포테칸, 이 리노테칸 및 9-아미노캄프토테신과 같은 캄포테신 유사체류의 화합물 및 시스플라틴, 오르마플라틴 및 테트라플라틴과 같은 백금 배위 복합체는 항종양제로 공지된 군이다. 캄포테신 유사체류의 화합물은 미국 특허 제 5,004,758호, 동 제 4,604,463호, 동 제 4,473,692호, 동 제 4,545,880호, 동 제 4,342,776호, 동 제 4,513,138호, 동 제 4,399,276호, 유럽 특허 출원 공개 번호 제0 418 099호 및 동 제0 088 642호, 문헌 [Wani et al., J. med. Chem., 1986, 29, 2358], 문헌 [Wani et al., J. med. Chem., 1980, 23, 554], 문헌 [Wani et al., J. med. Chem., 1987, 30, 1774] 및 문헌 [Nitta et al., Proc. 14th International Congr, Chemotherapy., 1985, Anticancer Section 1, 28]에 기재되어 있으며, 상기 문헌의 개시 내용 전체는 참고로 본원에 도입된다. 백금 배위 복합체인 시스플라틴은 브리스톨 마이어스 스퀴브사 (Bristol Myers-Squibb Corporation)가 플라티놀 (Platinol) (등록상표)로 판매한다. 시스플라틴의 유용한 조성물은 미국 특허 제 5,562,925호 및 동 제 4,310,515호에 기재되어 있으며, 상기 문헌의 개시 내용 전체는 참고로 본원에 도입된다.
화학식 (I)의 화합물과 항종양제를 차례로 또는 물리적 조합물로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 억제 방법에서, 시스플라틴과 같은 백금 배위 화합물을 느린 정맥 주입으로 투여할 수 있다. 바람직한 담체는 만니톨을 함유하는 덱스트로스 염수 용액이다. 백금 배위 화합물의 투여 계획은 치료 과정 당 신체 표면적 (m2) 당 약 1 내지 약 500 mg을 기준으로 할 수 있다. 백금 배위 화합물은 1 주당 1 회 또는 2 회 주입할 수 있으며, 이러한 주간 치료를 여러 회 반복할 수 있다. 캄포테신 유사체류의 화합물을 비경구 투여에 사용하는 경우, 일반적으로 약 5일을 연속으로 하루당 체 표면적 (m2) 당 약 0.1 내지 약 300.0 mg을 치료 과정에서 사용한다. 가장 바람직하게는 치료 과정에 토포테칸을 사용하는 것으로서 약 5일을 연속으로 하루당 신체 표면적 (m2) 당 약 1.0 내지 약 2.0 mg을 사용한다. 바람직하게는, 상기 치료 과정은 약 7 일 내지 약 28 일 간격으로 1 회 이상 반복한다.
화학식 (I)의 화합물과 항종양제를 동일 용기 안에 함께 사용하여 제약 조성물을 제형화할 수도 있으나, 서로 다른 용기에서 제형화하는 것이 바람직하다. 두 작용제가 모두 용액 형태로 제공되는 경우, 이들은 동시 투여되는 주입/주사 시스템으로 함유되거나 대등한 배열 (tandem arrangement)로 함유될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 항종양제를 동시에 또는 따로 편리하게 투여하기 위해, 상기에 기재한 바와 같이 화학식 (I)의 화합물의 비경구 투여시의 유효량 및 상기에 기재한 바와 같이 항종양제의 비경구 투여시의 유효량을 각각 함유하는 개별 병, 백, 바이알 또는 기타 용기를 상자, 종이상자 또는 기타 용기와 같은 단일 용기 내에 포함하는 키트를 제조한다. 이러한 키트의 예로는 경우에 따라 동결건조된 충전물로서의 제약상의 제제들을 둘다 포함하는 별개의 용기 또는 동일 용기, 및 재구성용 용액이 있는 용기를 포함하는 키트를 들 수 있다. 이것의 변형은 재구성용 용액 및 동결건조된 충전물을 단일 용기내의 두 개의 쳄버 내에 포함시켜 사용전 혼합될 수 있도록 하는 것이다. 이러한 배열로, 항종양제 및 본 발명의 화 합물을 2개의 용기 내에 별개로 포장하거나, 분말로 함께 동결건조시켜 단일 용기로 제공할 수 있다.
두 작용제가 둘다 용액제 형태로 제공되는 경우, 이들은 동시 투여되는 주입/주사 시스템으로 함유되거나 대등한 배열로 함유될 수 있다. 예를 들어, 화학식 (I)의 화합물은 제2 주입 백 내의 항종양제와 튜브를 통해 직렬로 연결된 주입 백으로 존재하거나 정맥 주사가능한 형태일 수 있다. 이러한 시스템을 사용하여 환자는 화학식 (I)의 화합물을 먼저 농축괴-형의 주사 또는 주입받은 후, 항종양제를 주입받을 수 있다.
이 화합물을 여러 생물학적 분석법 중 하나로 시험하여, 주어진 약리 효과를 발휘하는데 필요한 화합물의 농도를 결정할 수 있다.
비트로넥틴 결합 억제
ανβ3에 대한 고상 [3H]-SK&F-107260 결합: 완충액 T (2 mM CaCl2 및 1% 옥틸글루코시드 함유) 중의 인간 태반 또는 인간 혈소판 ανβ3 (0.1 내지 0.3 mg/mL)을 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2 (완충액 A) 및 0.05% NaN3를 함유하는 완충액 T로 희석한 직후에, 96-웰 ELISA 플레이트 (미국 뉴욕주 뉴욕에 소재하는 코닝 (Corning) 제품)에 웰 당 0.1 mL씩 첨가했다. 웰 당 ανβ3을 0.1 내지 0.2 ㎍ 첨가했다. 상기 플레이트를 4 ℃에서 밤새 인큐베이션했다. 실험시, 상기 웰을 완 충액 A로 1 회 세척하고, 동일한 완충액 중의 3.5% 소혈청 알부민 0.1 mL과 함께 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션한 후, 상기 웰을 완전히 흡인하고, 완충액 A 0.2 mL로 2 회 세척했다.
화합물을 100% DMSO 중에 용해하여 2 mM 스톡 용액으로 만들고, 결합용 완충액 (15 mM 트리스-HCl (pH 7.4), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2)을 사용하여 최종 화합물 농도가 100 μM이 되도록 희석했다. 그 다음, 이 용액을 필요한 최종 화합물 농도로 희석하였다. 다양한 농도의 비표지 길항제 (0.001 내지 100 μM)를 3벌 웰에 첨가하고, [3H]-SK&F-107260을 5.0 nM (65 내지 86 Ci/mmole)로 첨가했다.
상기 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후에, 상기 웰을 완전히 흡인하고, 빙냉 완충액 A 0.2 mL를 사용하여 웰 대 웰 (well-to-well) 방식으로 1 회 세척했다. 수용체를 1% SDS 1 mL 중에 용해하고, 효율이 40%인 베크만 (Beckman) LS 액체 섬광계수기에 레디 세이프 (Ready Safe) 3 mL을 첨가하여 결합된 [3H]-SK&F-107260를 액체 섬광계수법 (liquid scintillation counting)으로 측정했다. 2 μM SK&F-107260 존재하에서 [3H]-SK&F-107260의 비특이적 결합을 측정한 결과, 일관되게 총 방사리간드 유입량의 1% 미만이었다. IC50 ([3H]-SK&F-107260의 결합을 50% 억제하는 길항제의 농도)을 룬 돈 (LUNDON) 2-프로그램을 변형시킨 비선형 최소 자승 곡선-피팅 경로 (nonlinear, least squares curve-fitting routine)로 측정했다. Ki (길항제 분리 상수)를 다음 방정식에 따라 계산하였다: Ki = IC50/(1 + L/Kd) (식 중, L 및 Kd 는 [3H]-SK&F-107260의 농도 및 분리 상수 각각을 나타냄).
본 발명의 화합물은 약 0.060 내지 약 0.0005 마이크로몰의 농도 범위에서 SK&F-107260에 대한 비트로넥틴의 결합을 억제한다.
또한, 뼈 형성의 억제를 평가하기 위한 당업계의 표준 분석법, 예를 들어 EP 528 587에 개시된 소와(小窩, pit) 형성 분석법 (래트 파골세포 대신 인간 파골세포를 사용하여 수행할 수도 있음) 및 문헌 [Wronski et al., Cells and Materials 1991, Sup. 1, 69-74]에 기재된 난소절제된 래트 모델로 본 발명의 화합물을 시험관내 및 생체내 뼈의 재흡수에 대해 시험하였다.
혈관 평활근 세포 이동 분석
래트 또는 인간 대동맥 평활근 세포를 사용하였다. 세포 이동은 공극이 8 μm인 폴리카르보네이트 막 (코스타 (Costar) 제품)을 사용하여 트랜스웰 (Transwell) 세포 배양 쳄버에서 모니터링했다. 보다 작은 면적의 필터를 비트로넥틴으로 코팅했다. 세포를 2.5 내지 5.0 × 106 세포/mL의 농도로 0.2% 소혈청 알부민으로 보충된 DMEM 중에 현탁하고, 다양한 농도의 시험 화합물로 20 ℃에서 20 분 동안 예비처리하였다. 대조용으로 용매만을 사용하였다. 세포 현탁액 0.2 mL을 쳄버의 상부 구획에 넣었다. 하부 구획에는 0.2% 소혈청 알부민으로 보충된 DMEM 0.6 mL이 함유되었다. 95% 공기/5% CO2의 분위기하에서 37 ℃에서 24 시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 필터의 상부 표면상에 있는 이동하지 않은 세포를 완만하게 긁어내어 제거하였다. 그 다음, 필터를 메탄올 중에 고정시키고 10% 김사 (Giemsa) 염색제로 염색하였다. 이동율은 a) 필터의 하부 표면으로 이동한 세포 수를 계수하거나, b) 염색된 세포를 10% 아세트산으로 추출한 후 600 nM 에서 흡광도를 측정하여 결정하였다.
갑상선상피소체 절제된 (Thyroparathyroidectomized) 래트 모델
각각의 실험 군을 5 내지 6 마리의 성체 수컷 스프레그-돌리 (Spargue-Dawley) 래트 (250 내지 400 g 체중)로 구성했다. 이 래트는 사용하기 7 일 전에 갑상선상피소체 절제술을 하였다 (공급업체인 타코닉 팜스 (Taconic Farms)에서 수행). 모든 래트에는 3 일 마다 대체 용량의 티록신이 수여되었다. 래트를 받자 마자 꼬리 정맥천자를 사용하여 헤파린으로 처리한 튜브에 온전한 혈액을 채취하고, 그 직후에 상기 혈액 중의 순환 이온화 칼슘 수준을 측정했다. 이온화 Ca 수준 (시바-코닝 (Ciba-Corning) 모델 634 칼슘 pH 분석기로 측정)이 1.2 mM/L 미만인 래트를 포함시켰다. 각각의 래트마다 시험물질의 전달 및 혈액 샘플링을 위한 내부 정맥 및 동맥 카테테르를 장착하였다. 그 다음, 상기 래트에 칼슘이 없는 먹이 및 탈이온수 식이요법을 시행하였다. 기준 Ca 수준을 측정하고 각각의 래트에 대조용 비히클 또는 인간 부갑상선 호르몬 1-34 펩티드 (hPTH1-34, 투여량: 염수/0.1% 소혈청 알부민 중 1.25 ㎍/kg/시간, 미국 캘리포니아주에 소재하는 바켐 (Bachem) 제품) 또는 hPTH1-34 및 시험 물질의 혼합물 중의 하나를 외부 주사기 펌프를 사용하는 정맥 카테테르를 통해 연속 정맥내 주입으로 투여했다. 6 내지 8 시간의 주입 기간 동안 각각의 래트의 칼슘혈 반응을 2 시간 간격으로 측정했다.
인간 파골세포 재흡수 및 부착 분석
소와 재흡수 및 부착 분석을 파골세포종 조직에서 유도된 정상적인 인간 파골세포를 사용하여 진행하고 표준화하였다. 분석 1을 진행하여 레이저 동초점 현미경으로 파골세포 소와 체적을 측정했다. 분석 2는 콜라겐 단편 (재흡수 도중에 방출된 것임)을 경쟁적 ELISA로 측정하는 고처리량 스크리닝으로 진행하였다.
분석 1 (레이저 동초점 현미경을 사용)
- 인간 파골세포종에서 유래한 세포 현탁액의 분액을 액체 질소 저장고에서 꺼내 37 ℃에서 신속히 가온하고 RPMI-1640 배지 중에서 원심분리 (1000 rpm, 4 ℃ 에서 5 분)하여 1 회 세척했다.
- 상기 배지를 흡인하고 쥐과 동물의 항-HLA-DR 항체로 대체한 다음, RPMI-1640 배지 중에서 1 : 3으로 희석했다. 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이션하고 자주 혼합했다.
- 상기 세포를 냉각된 RPMI-1640으로 2 회 세척하여 원심분리 (1000 rpm, 4 ℃ 에서 5 분)한 다음, 상기 세포를 무균 15 mL 원심분리 튜브로 옮겼다. 단핵 세포의 수를 개선된 뉴바우어 (Neubauer) 계수용 쳄버 내에서 측정했다.
- 염소 항-마우스 IgG (미국 뉴욕주 그레이트 넥에 소재하는 다이날 (Dynal) 제품)로 코팅된 충분한 자성 비드 (bead) (5/단핵세포)를 스톡 병에서 꺼내어 신선한 배지 (이것이 독성 아지드 방부제를 세척해냄) 5 mL 중에 두었다. 상기 비드를 자석 상에 고정시켜 배지를 제거하고 신선한 배지로 교체하였다.
- 상기 비드를 세포와 혼합하고 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이션했다. 상기 현탁액을 자주 혼합했다.
- 비드로 코팅된 세포를 자석 상에 고정시키고, 남아있는 세포 (파골세포가 풍부한 분획)를 무균 50 mL 원심분리 튜브 내로 따라내었다.
- 비드로 코팅된 세포에 신선한 배지를 첨가하여 임의의 포획된 파골세포를 이동시켰다. 이러한 세척 과정을 10 회 반복했다. 상기 비드로 코팅된 세포를 버렸다.
- 생(生) 세포를 표지하기 위해, 살아있는 파골세포의 수를 플루오레신 디아세테이트를 사용하여 계수용 쳄버 내에서 측정했다. 공극이 큰 1 회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 상기 쳄버에 샘플을 첨가했다.
- 원심분리하여 파골세포를 펠렛화하고, 10% 소태아 혈청 및 1.7 g/L의 중탄산 나트륨으로 보충된 EMEM 배지 중에 적절한 수가 되도록 상기 세포의 밀도를 조정했다 (파골세포의 수는 종양마다 다를 수 있음).
- 상기 세포 현탁액의 3 mL 분액 (화합물 처리 당)을 15 mL 원심분리 튜브 내로 따라내었다. 상기 세포를 원심분리하여 펠렛화하였다.
- 각각의 튜브에, 적절한 화합물 처리물을 3 mL 첨가했다 (EMEM 배지 중에 50 μM로 희석). 또한, 적절한 비히클 대조구, 양성 대조구 (100 μg/mL로 희석한 항-비트로넥틴 수용체 쥐과 동물의 모노클로날 항체 [87MEM1]) 및 이소타입 대조구 (100 μg/mL로 희석한 IgG2)를 포함시켰다. 상기 샘플을 37 ℃에서 30 분간 인큐베이션했다.
- 상기 세포의 0.5 mL 분액을 48-웰 플레이트 내의 무균 상아질 슬라이스 위에 접종하고, 37 ℃에서 2 시간 동안 인큐베이션했다. 각각의 처리물을 4-벌 스크리닝하였다.
- 가온된 PBS (6-웰 플레이트의 웰 당 10 mL씩)를 6 회 바꿔가며 상기 슬라이스를 세척한 다음, 상기 화합물 처리물을 함유하거나 대조구 샘플을 함유하는 신선한 배지 내에 두었다. 상기 샘플을 37 ℃에서 48 시간 동안 인큐베이션했다.
타르타르산염 내성의 산 포스파타제 (TRAP, Tartrate resistant acid phosphatase) 공정 (파골세포 계통의 세포에 대한 선택적인 염색)
- 부착된 파골세포를 함유하는 뼈 슬라이스를 인산염 완충염수 중에서 세척하고 2% 글루테르알데히드 (0.2 M 카코딜레이트 나트륨 중) 중에서 5 분간 고정시켰다.
- 그 다음, 이들을 물 중에서 세척하고 37 ℃에서 TRAP 완충액 (N,N-디메틸포름아미드 중에 용해되고 10 mM 타르타르산 나트륨을 함유하는 0.25 M 시트르산염 완충액 (pH 4.5)과 혼합된 나프톨 AS-BI 인산염 0.5 mg/mL) 중에서 4 분간 인큐베이션했다.
- 냉각수 중에서 세척한 후에, 상기 슬라이스를 1 mg/mL 고정된 적색 석류석 (fast red garnet)을 함유하는 냉각 아세테이트 완충액 (0.1 M, pH 6.2) 중에 침지시키고 4 ℃ 에서 4 분간 인큐베이션했다.
- 과량의 완충액을 흡인하고, 상기 슬라이스를 공기 중에서 건조시킨 후 물 중에서 세척했다.
- TRAP 양성 파골세포 (적벽돌색/자주색 침전)을 명시야 현미경으로 측정한 다음, 초음파를 사용하여 상아질 표면에서 제거하였다.
- 소와 체적을 니콘/라세르텍 (Nikon/Lasertec) ILM21W 동초점 현미경을 사용하여 측정했다.
분석 2 (ELISA 판독을 이용)
분석 1의 초기 9 단계에 기재한 바와 같이, 화합물 스크리닝을 수행하기 위하여 인간 파골세포를 풍부하게 제조했다. 명확하게 하기 위하여, 이들 단계는 하기와 같이 반복했다.
- 인간 파골세포종에서 유래한 세포 현탁액의 분액을 액체 질소 저장고에서 꺼내 37 ℃에서 신속히 가온하고 RPMI-1640 배지 중에서 원심분리 (1000 rpm, 4 ℃ 에서 5 분)하여 1 회 세척했다.
- 상기 배지를 흡인하고 쥐과 동물의 항-HLA-DR 항체로 대체한 다음, RPMI-1640 배지 중에서 1 : 3으로 희석했다. 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐 베이션하고 자주 혼합했다.
- 상기 세포를 냉각된 RPMI-1640으로 2 회 세척하여 원심분리 (1000 rpm, 4 ℃ 에서 5 분)한 다음, 상기 세포를 무균 15 mL 원심분리 튜브로 옮겼다. 단핵 세포의 수를 개선된 뉴바우어 계수용 쳄버 내에서 측정했다.
- 염소 항-마우스 IgG (미국 뉴욕주 그레이트 넥에 소재하는 다이날 제품)로 코팅된 충분한 자성 비드 (5/단핵세포)를 스톡 병에서 꺼내어 신선한 배지 (이것이 독성 아지드 방부제를 세척해냄) 5 mL 중에 두었다. 상기 비드를 자석 상에 고정시켜 배지를 제거하고 신선한 배지로 교체하였다.
- 상기 비드를 세포와 혼합하고 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이션했다. 상기 현탁액을 자주 혼합했다.
- 비드로 코팅된 세포를 자석 상에 고정시키고, 남아있는 세포 (파골세포가 풍부한 분획)를 무균 50 mL 원심분리 튜브 내로 따라내었다.
- 비드로 코팅된 세포에 신선한 배지를 첨가하여 임의의 포획된 파골세포를 이동시켰다. 이러한 세척 과정을 10 회 반복했다. 상기 비드로 코팅된 세포를 버렸다.
- 생 세포를 표지하기 위해, 살아있는 파골세포의 수를 플루오레신 디아세테이트를 사용하여 계수용 쳄버 내에서 측정했다. 공극이 큰 1 회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 상기 쳄버에 샘플을 첨가했다.
- 원심분리하여 파골세포를 펠렛화하고, 10% 소태아 혈청 및 1.7 g/L의 중탄산 나트륨으로 보충된 EMEM 배지 중에 적절한 수가 되도록 상기 세포의 밀도를 조정했다 (파골세포의 수는 종양마다 다를 수 있음).
분석 1에 기재한 방법과는 반대로, 상기 화합물을 4 가지 투여량을 이용하여 스크리닝하여 하기에 약술된 바와 같이 IC50을 얻었다:
- 파골세포 제제를 시험 화합물 (4 가지 투여량) 또는 대조구와 함께 37 ℃에서 30 분 동안 예비인큐베이션했다.
- 그 다음, 이들을 48-웰 세포 조직 배양 플레이트 내의 소 피질 뼈 슬라이스 위에 접종하고, 37 ℃에서 2 시간 더 인큐베이션했다.
- 뼈 슬라이스를 가온 인산염 완충염수 (PBS)를 6 번 바꿔가며 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거한 후, 신선한 화합물 또는 대조구를 함유하는 48-웰 플레이트의 웰에 다시 넣었다.
- 그 다음, 상기 세포 조직 배양 플레이트를 37 ℃에서 48 시간 동안 인큐베이션했다.
- 각 웰의 상층액을 개별 튜브 내로 흡인하고, 재흡수 과정 동안에 방출된 제I형 콜라겐의 c-텔로펩티드를 검출하는 경쟁적 ELISA로 스크리닝하였다. 이것은 타입 I 콜라겐의 a1-쇄의 카르복시-말단 텔로펩티드 내에 존재하는 8-아미노산 서열 (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)과 특이적으로 반응하는 토끼 항체를 함유하는 시판되는 ELISA (덴마크에 소재하는 오스테오메터 (Osteometer) 제품)이다. 결과는 비히클 대조구와 비교한, 재흡수의 억제율(%)로서 나타내었다.
인간 파골세포 부착 분석
분석 1의 초기 9 단계에 기재한 바와 같이, 화합물 스크리닝을 수행하기 위하여 인간 파골세포를 풍부하게 제조했다. 명확하게 하기 위하여, 이들 단계는 하기와 같이 반복했다.
- 인간 파골세포종에서 유래한 세포 현탁액의 분액을 액체 질소 저장고에서 꺼내 37 ℃에서 신속히 가온하고 RPMI-1640 배지 중에서 원심분리 (1000 rpm, 4 ℃ 에서 5 분)하여 1 회 세척했다.
- 상기 배지를 흡인하고 쥐과 동물의 항-HLA-DR 항체로 대체한 다음, RPMI-1640 배지 중에서 1 : 3으로 희석했다. 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이션하고 자주 혼합했다.
- 상기 세포를 냉각된 RPMI-1640으로 2 회 세척하여 원심분리 (1000 rpm, 4 ℃ 에서 5 분)한 다음, 상기 세포를 무균 15 mL 원심분리 튜브로 옮겼다. 단핵 세포의 수를 개선된 뉴바우어 계수용 쳄버 내에서 측정했다.
- 염소 항-마우스 IgG (미국 뉴욕주 그레이트 넥에 소재하는 다이날 제품)로 코팅된 충분한 자성 비드 (5/단핵세포)를 스톡 병에서 꺼내어 신선한 배지 (이것이 독성 아지드 방부제를 세척해냄) 5 mL 중에 두었다. 상기 비드를 자석 상에 고정시켜 배지를 제거하고 신선한 배지로 교체하였다.
- 상기 비드를 세포와 혼합하고 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이션했다. 상기 현탁액을 자주 혼합했다.
- 비드로 코팅된 세포를 자석 상에 고정시키고, 남아있는 세포 (파골세포가 풍부한 분획)를 무균 50 mL 원심분리 튜브 내로 따라내었다.
- 비드로 코팅된 세포에 신선한 배지를 첨가하여 임의의 포획된 파골세포를 이동시켰다. 이러한 세척 과정을 10 회 반복했다. 상기 비드로 코팅된 세포를 버렸다.
- 생 세포를 표지하기 위해, 살아있는 파골세포의 수를 플루오레신 디아세테이트를 사용하여 계수용 쳄버 내에서 측정했다. 공극이 큰 1 회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 상기 쳄버에 샘플을 첨가했다.
- 원심분리하여 파골세포를 펠렛화하고, 10% 소태아 혈청 및 1.7 g/L의 중탄산 나트륨으로 보충된 EMEM 배지 중에 적절한 수가 되도록 상기 세포의 밀도를 조정했다 (파골세포의 수는 종양마다 다를 수 있음).
- 파골세포종에서 유래한 파골세포를 화합물 (4 가지 투여량) 또는 대조구와 37 ℃에서 30 분 동안 예비인큐베이션했다.
- 그 다음, 세포를 골교 (骨橋, osteopontin)로 코팅된 슬라이드 (인간 또는 래트의 골교, 2.5 ㎍/mL)에 접종하고, 37 ℃에서 2 시간 동안 인큐베이션했다.
- 상기 슬라이드를 인산염 완충염수 중에서 격렬하게 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거하고, 슬라이드 위에 남아있는 세포를 아세톤 중에 고정시켰다.
- 상기 파골세포를 타르타르산염 내성의 산 포스파타제 (TRAP) (이러한 표현형 세포에 대한 선택적 마커임)에 대해 염색하였고 (단계 15 내지 17 참조), 명시야 현미경으로 평가하였다.
세포 부착 분석
세포 및 세포 배양
인간 태아의 신장세포 (HEK293 세포)를 ATCC (카탈로그 번호 CRL 1573)로부터 얻었다. 세포를 얼 (Earl) 염, 10% 소태아 혈청, 1% 글루타민 및 1% 페니실린-스텝토마이신을 함유하는 얼의 최소 필수 배지 (EMEM) 중에서 성장시켰다.
구조물 및 형질감염
αv 서브유닛의 3.2 kb EcoRI-KpnI 단편 및 β3 서브유닛의 2.4 kb XbaI-XhoI 단편을 CMV 프로모터 및 G418 선택가능한 마커를 함유하는 pCDN 벡터 [Aiyar et al., 1994]의 EcoRI-EcoRV 클로닝 부위 내로 블런트 (blunt) 말단 라이게이션을 통해 삽입하였다. 안정적인 발현을 위하여, 진 펄서 (Gene Pulser) [Hensley et al., 1994]를 이용하여 80 × 106 HEK 293 세포에 αv3 구조물 (각각의 서브 유닛의 DNA 20 μg)을 전기형질전환시키고, 100 mm 플레이트 내에 플레이팅하였다 (5 × 105 세포/플레이트). 48 시간 후, 성장 배지를 제네티신 (Geneticin) (G418 술페이트, 미국 매릴랜드주 베데스다에 소재하는 GIBCO-BRL 제품) 450 μg/mL으로 보충하였다. 콜로니가 분석되기에 충분할 만큼 커질때까지, 상기 세포를 선택 배지 중에서 유지하였다.
형질감염된 세포의 면역세포화학적 분석
HEK 293 형질감염체가 비트로넥틴 수용체를 발현하는지 여부를 결정하기 위 하여, 상기 세포를 원심분리시켜 유리 현미경 슬라이드 상에 고정시키고, 실온에서 2 분간 아세톤 중에 고정시키고, 공기 중에서 건조시켰다. 표준 간접 면역형광법을 사용하여, αvβ3 복합체에 특이적인 모노클로날 항체의 일종인 23C6과의 특이적 반응성을 입증하였다.
세포 부착 연구
코닝 96-웰 ELISA 플레이트를 인간 비트로넥틴 (RPMI 배지 중의 0.2 μg/mL) 0.1 mL로 4 ℃에서 밤새 예비코팅했다. 실험시, 상기 플레이트를 RPMI 배지로 1 회 세척하고 RPMI 배지 중의 3.5% BSA로 실온에서 1 시간 동안 블로킹하였다. 형질감염된 293 세포를 20 mM 헤페스 (Hepes, pH 7.4) 및 0.1% BSA로 보충된 RPMI 배지 중에 0.5 × 106 세포/mL의 밀도로 재현탁하였다. 세포 현탁액 0.1 mL를 각각의 웰에 첨가하고, 다양한 αvβ3 길항제의 존재 또는 부재하에 37 ℃에서 1 시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 10% 포름알데히드 용액 (pH 7.4) 0.025 mL을 첨가하고, 세포를 실온에서 10 분간 고정시켰다. 상기 플레이트를 RPMI 배지 0.2 mL로 3 회 세척하고, 부착된 세포를 0.5% 톨루이딘 블루 0.1 mL로 실온에서 20 분간 염색하였다. 탈이온수로 완전히 세척하여 과량의 염색제를 제거하였다. 50 mM HCl을 함유하는 50% 에탄올 0.1 mL을 첨가하여 세포 내로 혼입된 톨루이딘 블루를 용출하였다. 세포 부착을 마이크로타이터 플레이트 판독기 (미국 버지니아주 스틸링에 소재하는 티터텍 멀티스칸 MC (Titertek Multiskan MC) 제품)에서 600 nm 광학 밀도로 정량화하였다.
고상-α v β 5 결합 분석
비트로넥틴 수용체 αvβ5를 인간 태반으로부터 정제하였다. 수용체 제제제를 50 mM 트리스-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2 (완충액 A)로 희석한 직후에, 96-웰 ELISA 플레이트에 웰 당 0.1 mL씩 첨가했다. 웰 당 αvβ3을 0.1 내지 0.2 μg 첨가했다. 상기 플레이트를 4℃에서 밤새 인큐베이션했다. 실험시, 상기 웰을 완충액 A로 세척하고, 동일한 완충액 중의 3.5% 소 혈청 알부민 0.1 ml과 함께 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 후에 상기 웰을 완전히 흡인하고, 완충액 A 0.2 ml로 2 회 세척했다.
[3H]-SK&F-107260 경쟁적 분석에서, 다양한 농도의 비표지 길항제 (0.001-100 μM)를 웰에 첨가한 후, 5.0 nM [3H]-SK&F-107260를 첨가했다. 상기 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 상기 웰을 완전히 흡인하고, 빙냉 완충액 A 0.2 mL를 사용하여 웰 대 웰 방식으로 세척했다. 수용체를 1% SDS 1 mL 중에 용해하고, 결합된 [3H]-SK&F-107260를 베크만 LS 6800 액체 섬광계수기 내에 레디 세이프 0.3 mL을 첨가한 액체 섬광계수법 (효율 40%)으로 측정했다. 2 μM SK&F-107260 존재하에서 [3H]-SK&F-107260의 비특이적 결합을 측정 한 결과, 일관되게 총 방사리간드 유입량의 1% 미만이었다. IC50 ([3H]-SK&F-107260의 결합을 50% 억제하는 길항제의 농도)을 룬돈 2-프로그램을 변형시킨 비선형 최소 자승 곡선-피팅 경로로 측정했다. Ki (길항제 해리 상수)는 첸 및 프루조프 방정식 (Cheng and Prusoff equation)에 따라 계산하였다. Ki=IC50/(1+L/Kd ) (식 중, L 및 Kd는 각각 [3H]-SK&F-107260의 농도 및 해리 상수임).
RGD-매개 GPIIb-IIIa 결합의 억제
GPIIb-IIIa의 정제
오래된 세척된 인간 혈소판 (적십자 (Red Cross)에서 얻음) 10 유닛을 3% 옥틸글루코시드, 20 mM 트리스-HCl (pH 7.4), 140 mM NaCl, 2 mM CaCl2 중에서 4 ℃에서 2 시간 동안 완만하게 교반하여 용해하였다. 상기 용해물을 1 시간 동안 100,000 g에서 원심분리하였다. 수득된 상층액을 20 mM 트리스-HCl (pH 7.4), 100 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1% 옥틸글루코시드 (완충액 A)로 예비평형화한 5 mL 렌틸 (lentil) 렉틴 세파로스 4B 컬럼 (이.와이.랩스 (E.Y.Labs) 제품)에 첨가했다. 2 시간 동안 인큐베이션한 후에, 상기 컬럼을 냉각 완충액 A 50 mL로 세척했다. 상기 렉틴-보유 GPIIb-IIIa를 10% 덱스트로스를 함유하는 완충액 A로 용출하였다. 모든 과정을 4 ℃에서 수행하였다. 수득된 GPIIb-IIIa는 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동법으로 나타난 바와 같이 순도가 95%를 넘었다.
본 발명의 바람직한 화합물은 비트로넥틴 수용체 대 피브리노겐 수용체에 대한 친화성이 10 : 1을 넘는다. 더욱 바람직한 화합물의 활성 비율은 100 : 1을 넘는다.
화학식 (I)의 화합물 단독 및 항종양제와 조합에서의 효율은 몇몇 이식가능한 마우스 종양 모델을 사용하여 측정할 수 있다 (이들 모델에 대한 상세 기재는 미국 특허 제5,004,758호 및 동 제5,633,016호 참조).
하기의 실시예는 본 발명의 범위를 제한하려는 의도는 전혀 없으며, 단지 본 발명의 화합물을 제조하고 사용하는 방법을 제시하기 위함이다. 기타 많은 실시태양은 당업자들이 쉽게 알 수 있을 것이다.
개요
250, 300, 또는 400 MHz에서 양성자핵자기공명 (1H NMR) 스펙트럼을 기록하였다. 화학적 이동 (chemical shift)은 내부 표준 테트라메틸실란 (TMS)으로부터의 하류장방향으로 백만분율 (parts per million) (δ)로 기록한다. NMR 데이터의 약어는 다음과 같다: s=단일선, d=이중선, t=삼중선, q=사중선, m=다중선, dd=이중선의 이중선, dt=삼중선의 이중선, app=명확, br=넓음. J는 헤르쯔로 측정되는 NMR 커플링 상수를 나타낸다. CDCl3는 듀테리오클로로포름, DMSO-d6는 헥사듀테리오디메틸술폭시드, 및 CD3OD는 테트라듀테리오메탄올이다. 투과 모드에서 적외선 (IR) 스펙트럼을 기록하고, 밴드의 위치를 진동수의 역수로 기록하였다 (cm-1). 질량 스펙트럼은 전기분무 (electrospray: ES) 또는 FAB 이온화 기술을 이용하여 구하였다. 원소 분석은 실험실 내에서 또는 퀀티터티브 테크놀로지 인크 (Quantitative Technologies Inc.) (미국 뉴저지주 소재)에 의해 수행하였다. 융점은 토마스-후버 (Thomas-Hoover) 융점 측정 장치에서 구하고 보정하지 않았다. 모든 온도는 섭씨로 기록하였다. 아날테크 실리카 겔 GF 및 E. 머크 실리카 겔 60 F-254 박층 플레이트를 박층 크로마토그래피에 이용하였다. 속성 및 중력 크로마토그래피는 모두 E. 머크 키젤겔 60 (230-400 메시) 실리카 겔에서 수행하였다. 분석용 HPLC 및 제조용 HPLC는 라이닌 또는 베크만 크로마토그래프상에서 수행하였다. ODS는 옥타데실실릴 유도된 실리카 겔 크로마토그래피 지지체를 칭한다. 5 ㎕ Apex-ODS는 보통의 입자 크기가 5 ㎕인 옥타데실실릴 유도된 실리카 겔 크로마토그래피 지지체이고, 존스 크로마토그래피 (Jones Chromatography) (미국 콜로라도주 리틀톤에 소재)에서 제조된다. 등록상표 YMC ODS-AQ는 ODS 크로마토그래피용 지지체이고, 이는 YMC Co. Ltd. (일본 쿄토 소재)사의 등록상표이다. 등록상표 PRP-1은 중합체 (스티렌-디비닐벤젠) 크로마토그래피 지지체이고, 하밀톤사 (Hamilton Co.) (미국 네바다주 레논 소재)의 등록상표이다. 셀라이트 (등록상표)는 산-세척된 규조토 실리카로 구성된 필터 보조제이고, 만빌사 (Manvile Corp.) (미국 콜로라도주 덴버에 소재)의 등록상표이다.
제조예 1
6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올의 제조
a) 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-6-피콜린
CH2Cl2 (200 mL) 중 2-아미노-6-피콜린 (21.63 g, 200 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (52.38 g, 240 mmol)의 용액을 50℃의 회전증발기 상에서 농축시키고, 생성된 잔사를 진공하에 50℃의 회전증발기 상에서 회전시켰다. 21.5시간 후에, 상기 반응물을 헥산 (400 mL)으로 희석하고 실리카 겔 (헥산 후 20% EtOAc/헥산)을 통해 여과시켰다. 농축 후에 밝은 황색 오일로 생성된 표제 화합물 (41.84 g, 정량)은 방치 후에 점차 고체화되었다.
Figure 112002006561396-pct00016
b) 2-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-6-피콜린
15℃ (냉수 욕조)에서, 무수 DMSO (75 mL) 중 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-6-피콜린 (15.62 g, 75 mmol) 및 요오도메탄 (9.3 mL, 150 mmol)의 용액에 NaH (광유 중 60%, 3.60 g, 90 mmol)를 수 분에 걸쳐 조금씩 첨가했다. 내부 온도가 35℃로 상승되었다. 기체 방출이 사그라들었을 때, 상기 냉수 욕조를 제거하고, 상기 반응물을 실온에서 교반했다. 0.5시간 후에, 짙은 황색 혼합물을 얼음/H2O (300 mL)에 붓고, Et2O (3 × 300 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 H20 (2 × 75 mL)로 세척한 후, 염수 (75 mL)로 세척했다. 건조 (MgSO4)및 농축하여 생성된 황색 오일을 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (7% EtOAc/헥산)했다. 상기 표제 화합 물 (13.01 g, 78%)을 엷은 황색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00017
c) 에틸-6-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-2-피리딜아세테이트
0℃의 아르곤하에, 무수 THF (350 mL) 중에서 디이소프로필아민 (19.5 mL, 139.14 mmol) 및 헥산 (46.4 mL, 115.95 mmol) 중의 2.5 M n-BuLi으로부터 LDA를 제조했다. 이 용액을 -78℃로 냉각시키고, 무수 THF (46 mL) 중 2-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-6-피콜린 (10.31 g, 46.38 mmol)의 용액을 10분에 걸쳐 적가했다. 추가의 무수 THF (2 mL)를 사용하여 이동시켰다. 상기 오렌지색 용액을 -78℃에서 15분 동안 교반한 다음, 디에틸 카르보네이트 (6.2 mL, 51.02 mmol)를 신속하게 첨가했다. 상기 적색 용액을 -78℃에서 15분 동안 교반한 다음, NH4Cl 반포화 (half-saturated) 용액 (175 mL)으로 급냉시켰다. 상기 혼합물을 +5℃로 가온하고, EtOAc (175 mL)로 추출한 다음, CH2Cl2 (2 × 100 mL)로 추출했다. 합한 유기물들을 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조 (MgS04)및 농축시켰다. 상기 탁한 황색 오일을 실리카 겔 (15% EtOAc/헥산)상에서 크로마토그래피하여 표제 화합물 (10.72 g, 79%)을 밝은 황색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00018
d) 6-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-2-피리딜에탄올
아르곤하에, THF 중의 2 N LiBH4 용액 (7 mL, 14 mmol)을 무수 THF (30 mL) 중 에틸-6-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-2-피리딜아세테이트 (6.97 g, 23.7 mmol)의 교반된 용액에 주사기를 통해 첨가했다. 그 다음, 상기 반응물을 서서히 환류가열 (초기 발열)했다. 16시간 환류시킨 후에, 상기 반응물을 0℃로 냉각하고, 물 (50 mL)을 사용하여 조심스럽게 급냉시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc (150 mL)로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시켜 농축했다.
실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (35% EtOAc/헥산)로 정제하여 표제 화합물 (5.26 g, 88%)을 맑은 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00019
e) 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올
6-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-2-피리딜에탄올 (17.9 g, 71 mmol)을 디옥산 (200 mL) 중 4N HCl의 용액에 첨가했다. 상기 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반 (완만한 기체 방출이 관찰됨)한 다음, 건조될 때까지 농축시켰다. 진공하에 상기 생성물을 염산염으로 고체화시켰다. 이 고체를 NaCl-1.0 N NaOH 포화 용액 (75 mL) 중에 용해하고, 상기 용액을 Et2O (2 × 200 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고 농축하여 표제 화합물 (9.12 g, 85%)을 말랑말랑한 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00020
제조예 2
2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)-1-에탄올
a) 2-(피발로일아미노)피리딘의 제조
0℃에서, CH2Cl2 (1 L) 중 2-아미노피리딘 (94.12 g, 1 mol) 및 Et3N (167.3 mL, 1.2 mol)의 용액에 피발로일 클로라이드 (135.5 mL, 1.1 mol)를 적가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 여과했다. 여액을 H20 (1.5 L)로 세척한 후에, NaHC03 포화 용액 (2 × 1.5 L)으로 세척한 다음, 이를 건조 (MgSO4)시키고 감압하에 농축시켜 표제 화합물 (183 g, 103%)을 회백색 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00021
주의: 1H NMR은 불순물을 함유하는 소량의 tert-부틸이 있음을 나타내지만, 이 물질은 다음 단계에 사용하기에 충분히 순수하다.
b) 2-(피발로일아미노)-3-피리딘카르복스알데히드
-20℃에서, 무수 THF (250 mL) 중 2-(피발로일아미노)피리딘 (17.8 g, 100 mmol)의 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5 M 용액, 100 mL, 250 mmol)를 30분에 걸쳐 적 가했다. 2시간 후에, DMF (21 mL, 275 mmol)를 30분에 걸쳐 적가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 NH4Cl 포화 용액 (300 mL)으로 급냉하고, 생성된 혼합물을 EtOAc (3 × 400 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)및 농축시켜 표제 화합물을 2-(피발로일아미노)피리딘과 2 : 1 혼합물로 생성했다 (22 g) .
Figure 112002006561396-pct00022
주의: DMF 대신 1-포르밀피페리딘 (30.5 mL, 275 mmol)을 사용하여 상기 과정을 반복한 경우, 표제 화합물을 2-(피발로일아미노)피리딘과 4 : 1 혼합물로 생성했다 (21 g) .
c) 2-아미노-3-피리딘카르복스알데히드
조 2-(피발로일아미노)-3-피리딘카르복스알데히드 (단계 b로부터의 생성물, 43 g)를 3 M HCl (500 mL) 중에 용해하고, 상기 용액을 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 고체 K2CO3를 사용하여 pH를 조심스럽게 7로 조정했다. 수용액을 EtOAc (3 × 500 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고 농축하여 표제 화합물 (24.57 g, 101%)을 적색빛 갈색 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00023
d) 2-메틸-1,8-나프티리딘
아세톤 (750 mL) 중 2-아미노-3-피리딘카르복스알데히드 (단계 c로부터의 생성물, 24.57 g)의 용액에 프롤린 (2.3 g, 20 mmol)을 첨가한 다음, 상기 혼합물을 환류가열했다. 48시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각하고, 여과 및 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 속성 컬럼 크로마토그래피 (35% 아세톤/헥산)로 표제 화합물 (18.5 g, 3 단계에 걸쳐 64%)을 오렌지빛-황색 고체로 생성했다.
Figure 112002006561396-pct00024
e) 2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘
2-메틸-1,8-나프티리딘 (18.5 g, 128 mmol), 10% Pd/C (5 g) 및 무수 EtOH (150 mL)의 혼합물을 파르 (Parr) 장치 상에서 수소 (15 psi)하에 진탕시켰다.
24시간 후에, 상기 혼합물을 셀라이트 (등록상표)를 통해 여과시키고, 이 필터 패드를 무수 EtOH로 세척한 다음, EtOAc로 세척했다. 여액을 농축시켜 건조시키고 표제 화합물 (18.85 g, 99%)을 회백색 고체로 생성했다.
Figure 112002006561396-pct00025
f) 2-메틸-8-(tert-부톡시카르보닐)-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘
0℃에서, 무수 THF (750 mL) 중 2-메틸-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘 (23.32 g, 157 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (44.74 g, 205 mmol)의 용액에 LiHMDS (THF 중 1.0 M 용액, 205 mL, 205 mmol)를 적가했다. 30분 후에, 첨가가 완료되었고, 상기 혼합물을 NH4Cl 포화 용액 (500 mL)으로 급냉시키고, EtOAc (3 × 500 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고, 감압하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 속성 컬럼 크로마토그래피 (40% EtOAc/헥산)로 표제 화합물 (32.3 g, 83%)을 밝은 황색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00026
g) 에틸 [8-(tert-부톡시카르보닐)-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일]아세테이트
0℃에서, 무수 THF (250 mL) 중의 디이소프로필아민 (47.7 mL, 364 mmol)의 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 145.6 mL, 364 mmol)를 적가했다. 15분 후에, 이 용액을 -78℃에서 무수 THF (400 mL) 중 2-메틸-8-(tert-부톡시카르보닐)-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘 (32.3 g, 130 mmol) 및 디에틸 카르보네이트 (56.8 mL, 481 mmol)의 용액에 적가했다. 30분 후에, 상기 혼합물을 NH4Cl 포화 용액 (500 mL)으로 급냉시키고, 실온으로 가온하고, EtOAc (3 × 500 mL)로 추출했다. 합한 오렌지색 추출물들을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 감압하에 농축시켰다. 고진공하에 밤새 건조시켜 표제 화합물 (42.52 g, 102%)을 밝은 황색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00027
주의: 1H NMR은 생성물 중에 소량의 디에틸 카르보네이트가 있음을 나타내지만, 이 물질은 다음 단계에 사용하기에 충분히 순수하다.
h) 2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)-1-에탄올
실온에서, 무수 THF (650 mL) 중의 에틸 [8-(tert-부톡시카르보닐)-5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일]아세테이트 (42.52 g, 130 mmol)의 용액에 LiBH4 (THF 중 2.0 M, 65 mL, 130 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 0℃로 냉각하고, H20 (300 mL)를 사용하여 조심스럽게 급냉시켰다. 10분 후에, 상기 혼합물을 EtOAc (3 × 500 mL)로 추출했다. 합한 오렌지색 추출물들을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 감압하에 농축했다.
상기 잔사를 CH2Cl2 (300 mL) 중에 용해했다. 실온에서, 이 용액에 디옥산 중의 4 N HCl (300 mL)을 서서히 첨가했다. 4시간 후에, 상기 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔사를 1.0 N NaOH 및 NaCl 포화 용액 (300 mL)의 1 : 1 혼합물 중에 용해시키고, CH2Cl2 (3 × 300 mL)로 추출했다. 합한 오렌지색 추출물들을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고 감압하에 농축했다. 잔사를 Et2O (250 mL) 중에 취해, 96% 포름산 (130 mmol)을 적가했다. 생성된 고체를 여과하여 모으고 Et2O (2 × 50 mL)로 세척했다. 상기 고체를 1.0 N NaOH 및 NaCl 포화 용액 (300 mL)의 1 : 1 혼합물 중에 용해하고, 이 용액을 CH2Cl2 (3 × 300 mL)로 추출했다. 합한 유기 추출 물들을 건조(MgSO4)시키고 여과하고 감압하에 농축하여 표제 화합물 (11.1 g, 4 단계에 걸쳐 48%)을 황색 고체로서 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00028
제조예 3
에틸 (±)-4-(4-히드록시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부타노에이트의 제조
a) N-메톡시-N-메틸-2-(4-메톡시페닐)아세트아미드
무수 DMF (75 mL) 중의 4-메톡시페닐아세트산 (3.3 g, 20 mmol) 용액에 N-메톡시-N-메틸아민 히드로클로라이드 (1.95 g, 20 mmol), Et3N (3.1 mL, 22 mmol), HOBt·H2O (1.95 g, 22 mmol) 및 EDC (2.7 g, 22 mmol)를 첨가했다. 상기 용액을 실온에서 밤새 교반한 다음, 진공하에 농축시켰다. 잔사를 5% Na2CO3 용액 (10 mL) 중에 용해시키고 CH2Cl2 (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 로 건조하고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (3% MeOH/CH2Cl2)하여 표제 화합물 (1.54 g, 37%)을 백색 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 210 (M + H)+.
b) 2-(4-메톡시페닐)-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄온
-78℃에서, 무수 THF (50 mL) 중의 sec-BuLi (THF 중 1.3 M, 22.6 mL, 29.5 mmol)의 용액에 무수 THF (20 mL) 중의 4-브로모벤조트리플루오라이드 (3.3 g, 14.7 mmol)를 적가했다. 20분 후에, 무수 THF (20 mL) 중의 N-메톡시-N-메틸-2-(4-메톡시페닐)아세트아미드 (1.5 g, 7.4 mmol)를 적가했다. 1시간 후에, NH4Cl 포화 용액 (10 mL)을 사용하여 상기 혼합물을 급냉시킨 후, 실온으로 가온하고, Et2O (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (15% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (2.2 g, 100%)을 옅은 황색 고체로 수득했다: TLC (1.5% EtOAc/헥산) Rf 0.81.
Figure 112002006561396-pct00029
c) 에틸 (±)-4-(4-메톡시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]크로토네이트
실온에서, 무수 톨루엔 (30 mL) 중 60% NaH (350 mg, 8.84 mmol)의 현탁액에 무수 톨루엔 (20 mL) 중의 트리에틸 포스포노아세테이트 (2.0 g, 8.84 mmol)를 적가했다. 15분 후에, 무수 톨루엔 (15 mL) 중의 2-(4-메톡시페닐)-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄온 (1.3 g, 4.42 mmol)의 용액을 적가하고, 상기 용액을 환류가열했다. 16시간 후에, 상기 반응물을 NH4Cl 포화 용액 (10 mL)으로 급냉시키고, 상기 혼합물을 EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgS04 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 표제 화합물 (2.2 g, 56%, 2가지 성분들의 혼합물)을 밝은 황색 오일로 수득했다: TLC (5% EtOAc/헥산) Rf 0.42, 0.44. 이 물질을 추가의 정제없이 사용했다
d) 에틸 (±)-4-(4-메톡시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부타노에이트
무수 EtOH (50 mL) 중의 10% Pd/C (600 mg)의 현탁액에 에틸 (±)-4-(4-메톡시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]크로토네이트 (2.2 g, 6 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 H2 (50 psi)하에 파르 장치 상에서 진탕했다. 4시간 후에, 상기 혼합물을 셀라이트 (등록상표)의 패드를 통해 여과하고, 여액을 농축했다. 상기 반응 순서를 3회 반복했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (35% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (900 mg, 56%)을 오일로 수득했다: TLC (5% EtOAc/헥산) Rf 0.46;
Figure 112002006561396-pct00030
e) 에틸 (±)-4-(4-히드록시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부타노에이트
-10℃에서, CH2Cl2 (5 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-메톡시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부타노에이트 (450 mg, 1.23 mmol)의 용액에 BBr3 (1.5 mL, 1.48 mmol)를 첨가했다. 3시간 후에, EtOH (10 mL)를 사용하여 상기 혼합물을 조심스럽게 급냉시키고, 상기 용액을 실온으로 가온했다. 혼합물을 농축하고, 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (20% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (270 mg, 63%)을 황색 오일로 수득했다: TLC (20% EtOAc/헥산) Rf 0.22.
제조예 4
메틸 (±)-3-[4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트의 제조
a) 4-브로모-1-(트리이소프로필실릴옥시)벤젠
실온에서, 무수 DMF (100 mL) 중 4-브로모페놀 (17. 3 g, 100 mmol)의 용액에 이미다졸 (13.62 g, 200 mmol)을 첨가한 다음, 트리이소프로필실릴 클로라이드 (22.5 mL, 105 mmol)를 첨가했다. 4시간 후에, 상기 혼합물을 H20 (50 mL)로 희석하고, 헥산 (3 × 75 mL)으로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 표제 화합물 (32.23 g, 100%)을 맑은 오일로 생성했으며, 이를 정제 없이 사용했다.
Figure 112002006561396-pct00031
b) 메틸 3-(벤질옥시카르보닐)-3-부테노에이트
0℃에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (32.8 mL, 166 mmol)를 무수 THF (500 mL) 중 메틸 3-카르복시-3-부테노에이트 (20 g, 139 mmol), 벤질 알콜 (17.2 mg, 166 mmol) 및 트리페닐포스핀 (43.7 g, 166 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 3시간 후에, 상기 혼합물을 농축시키고, 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (10% EtOAc/헥산)했 다. 표제 화합물 (29.46 g, 91%)을 무색의 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00032
c) 메틸 (±)-4-(4-트리이소프로필실릴옥시페닐)-3-카르복시부타노에이트
프로피오니트릴 (350 mL) 중 4-브로모-1-(트리이소프로필실릴옥시)벤젠 (33. 23 g, 100 mmol), 메틸 3-(벤질옥시카르보닐)-3-부테노에이트 (28.11 g, 120 mmol), Pd (OAc)2 (2.24 g, 10 mmol), P(o-톨릴)3 (6.09 g, 20 mmol) 및 (i-Pr)2 NEt (34.8 mL, 200 mmol)의 용액을 탈산소 (3 회 배기/N2 퍼징 (purging) 사이클)시킨 다음, 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축하고, 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (10% EtOAc/헥산)하여 황색 오일을 수득했다. 상기 오일을 5% EtOAc/헥산 (100 mL) 중에 용해하고, 이 용액을 실온에서 방치했다. 72시간 후에, 상기 혼합물을 여과하고, 여액을 농축하여 조 생성물인 메틸 (±)-4-(4-트리이소프로필실릴옥시페닐)-3-(벤질옥시카르보닐)-3-부테노에이트를 올레핀 이성질체들의 혼합물로서 수득했다. 이를 다음 단계에 즉시 사용했다.
상기 올레핀 혼합물을 2 부분으로 나누었다. 각 부분을 다음의 방식으로 반응시킨 다음, 여과한 후 합했다: EtOAc (100 mL) 중의 10% Pd/C (7.4 g) 현탁액에 상기 올레핀 혼합물을 첨가했다. 상기 혼합물을 탈산소 (3 회 배기/N2 퍼징 사이클)시킨 다음, H2 (50 psi)로 충전했다. 4시간 후에, H2를 제거하고, 상기 혼합물을 셀라이트 (등록상표) 패드를 통해 여과했다. 여액을 농축하여 표제 화합물 (24.64 g, 4-브로모-1-(트리이소프로필실릴옥시)벤젠으로부터 89%)을 맑은 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00033
d) (±)-N-[2-[4-(트리이소프로필실릴옥시)벤질]-3-(카르보메톡시)프로피오닐]세린 벤질 에스테르
실온에서, 무수 DMF (60 mL) 중의 메틸 (±)-3-카르복시-4-[4-(트리이소프로필실릴옥시)페닐]부타노에이트 (5.00 g, 12.67 mmol)의 용액에 세린 벤질 에스테르 히드로클로라이드 (3.52 g, 15.21 mmol), HOBt (2.06 g, 15.21 mmol), Et3N (5.3 mL, 38.01 mmol) 및 EDC (2.92 g, 15.21 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (80% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (5.76 mg, 79%)을 옅은 황색 오일로 수득했다: MS (ES) m/e 572 (M + H)+.
e) 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸린-2-일]-4-[4-(트리이소프로필실릴옥시)페닐]부타노에이트
무수 THF (50 mL) 중의 (±)-N-[2-[4-(트리이소프로필실릴옥시)벤질]-3-(카르보메톡시)프로피오닐]세린 벤질 에스테르 (5.76 g, 10.07 mmol)의 용액에 버제스 시약 (2.88 g, 12.08 mmol)을 첨가한 다음, 상기 혼합물을 환류가열했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로 마토그래피 (35% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (4.45 g, 80%)을 맑은 오일로 수득했다: MS (ES) m/e 554 (M + H)+.
f) 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-(트리이소프로필실릴옥시)페닐]부타노에이트
0℃에서, CH2Cl2 (40 mL) 중의 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸린-2-일]-4-[4-(트리이소프로필실릴옥시)페닐]부타노에이트 (4.45 g, 8.03 mmol)의 용액에 DBU (1.4 mL, 9.64 mmol)를 첨가한 다음, 브로모트리클로로메탄 (0.95 mL, 9.64 mmol)을 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (20% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (2.23 g, 50%)을 맑은 오일로 수득했다: MS (ES) m/e 552 (M + H)+.
g) 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
0℃에서, 무수 THF (20 mL) 중의 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-(트리이소프로필실릴옥시)페닐]부타노에이트 (2.23 g, 4.04 mmol)의 용액을 THF 중의 TBAF (1.0 M, 6.06 mL, 6.06 mmol)의 용액에 첨가했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 NH4Cl 포화 용액 (10 mL)으로 희석하고, CH2Cl2 (3 × 15 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (40% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (1.4 g, 88%)을 회백색 포움으로 수득했다: MS (ES) m/e 396 (M + H)+.
h) 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트
실온에서, 무수 THF (10 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트 (700 mg, 1.77 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (463 mg, 2.12 mmol)의 용액에 피리딘 (0.17 mL, 2.12 mmol)을 첨가했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 헥산으로 처리하고, 여과하고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 (765 mg, 87%)을 백색 고체로 생성했다: MS (ES) m/e 496 (M + H)+.
i) 메틸 (±)-3-[4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트
EtOH (20 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-(벤질옥시카르보닐)-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트 (765 mg, 1.54 mmol) 및 10% Pd/C (164 mg)의 혼합물을 탈산소 (3 회 배기/N2 퍼징 사이클)시킨 다음, H2 (50 psi)로 충전했다. 4시간 후에, H2를 제거하고, 상기 혼합물을 셀라이트 (등록상표) 패드를 통해 여과했다. 여액을 농축하여 표제 화합물 (659 mg, 100%)을 백색 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 811 (2M + H)+.
제조예 5
메틸 (+)-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트의 제조
a) 2-시아노메틸-4-(트리플루오로메틸)티아졸
2-시아노티오아세트아미드 (1.00 g, 9.99 mmol) 및 3-브로모-1-트리플루오로프로판-2-온 (1.04 mL, 9.99 mmol)을 무수 EtOH (50 mL) 중에서 합하고, 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시켜 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (15% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (1.24 g)을 에틸 2-시아노아세테이트와 2 : 1 혼합물로 수득했다: MS (ES) m/e 385 (2M + H)+.
b) 3-(4-벤질옥시페닐)-2-[(4-트리플루오로메틸)티아졸-2-일]아크릴로니트릴
0℃에서, NaH (516 mg, 광유 중의 60% 분산액, 12.9 mmol)를 무수 EtOH (10 mL)와 반응시켰다. 기체 방출이 멈춘 후에, 상기 혼합물을 실온으로 가온했다. 4-벤질옥시벤즈알데히드 (2.05 g, 9.68 mmol)를 고체 상태로 한꺼번에 첨가했다. 이 혼합물에 무수 EtOH (20 mL) 중의 2-시아노메틸-4-(트리플루오로메틸)티아졸 (1.24 g) 용액을 적가했다. 상기 반응물을 4시간 동안 교반한 다음, 여과하여 고체를 수집하고 헥산으로 세척하여 표제 화합물 (1.64 g, 2단계에 걸쳐 42%)을 황색 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00034
c) 3-(4-벤질옥시페닐)-2-시아노-2-[(4-트리플루오로메틸)티아졸-2-일]옥시란
CH3CN (5 mL) 중의 3-(4-벤질옥시페닐)-2-[(4-트리플루오로메틸)티아졸-2-일]아크릴로니트릴 (500 mg, 1.29 mmol)의 용액을 중성 알루미나 (1.3 g)에 첨가했다. 실온에서, 클로록스 (Clorox) 표백제 (5 mL)를 적가했다. 1시간 후에, 상기 혼합물을 여과했다. 여액을 H20 (20 mL)로 희석하고 CH2Cl2 (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 표제 화합물 (425 mg, 82%)을 황색 오일로 수득했으며, 이는 충분히 순수하여 다음 단계에 사용했다.
Figure 112002006561396-pct00035
d) 2-(4-벤질옥시페닐)-1-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]에탄온
0℃에서, CH2Cl2 (7 mL) 중의 3-(4-벤질옥시페닐)-2-시아노-2-[(4-트리플루오로메틸)티아졸-2-일]옥시란 (425 mg, 1.06 mmol)의 용액에 Et3SiH (0.85 mL, 5.3 mmol)를 적가한 다음, BF3·OEt2 (0.39 mL, 3.17 mmol)를 적가했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 H20 (20 mL)에 붓고, CH2Cl2 (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgS04 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다.
0℃에서, 무수 THF (7 mL) 중의 상기 잔사에 THF 중의 TBAF (1.0 M, 1.6 mL, 1.6 mmol)의 용액을 첨가했다. 1시간 후에, 이 혼합물을 NH4Cl 포화 용액 (20 mL)에 붓고, EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgS04 상에서 건조시 키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (5% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (167 mg, 40%)을 백색 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00036
e) 메틸 (±)-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
실온에서, 무수 THF (2 mL) 중 NaH (35 mg, 0.88 mmol)의 현탁액에 트리에틸 포스포노아세테이트 (0.17 mL, 0.88 mmol)를 적가했다. 15분 후에, 무수 THF (2 mL) 중의 2-(4-벤질옥시페닐)-1-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]에탄온 (167 mg, 0.44 mmol)의 용액을 적가하고, 상기 혼합물을 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각하고, NH4Cl 포화 용액 (10 mL)을 사용하여 급냉시키고, EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgS04 상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 조 생성물인 에틸 (±)-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-4-(4-벤질옥시페닐)크로토네이트를 오일로 수득했다. 이를 정제 없이 사용했다.
실온에서, 에틸 (±)-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-4-(4-벤질옥시페닐)크로토네이트 (0.44 mmol, 조)를 MeOH (4 mL) 중에 용해하고, 마그네슘 터닝 (turning) (53 mg, 2.20 mmol)을 첨가했다. 72시간 후에, 상기 혼합물을 10% HCl (75 mL)에 붓고, CH2Cl2 (3 × 50 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축시켜 조 생성물인 메틸 (±)-3[4-(트리플루오로메틸)티아 졸-2-일]-4-(4-벤질옥시페닐)부타노에이트를 수득했다. 이를 정제 없이 사용했다.
실온에서, EtSH (5 mL) 중 메틸 (±)-3[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-4-(4-벤질옥시페닐)부타노에이트 (0.44 mmol, 조 생성물)의 용액에 BF3·OEt2 (0.3 mL)를 첨가했다. 18시간 후에, 추가의 BF3·OEt2 (0.3 mL)을 첨가했다. 그 후 18시간이 지난 후에, 상기 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaHC03 포화 용액을 사용하여 조심스럽게 급냉시켰다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (3 × 25 mL)로 농축했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (30% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (123 mg, 3단계에 걸쳐 81%)을 황색 오일로 수득했다: MS (ES) m/e 346 (M + H)+.
제조예 6
메틸 (±)-3-(5-메틸티아졸-2-일)-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트의 제조
a) 메틸 4-(벤질옥시)페닐아세테이트
아세톤 (50 mL) 중의 K2CO3 (20.7 g, 150 mmol)의 현탁액에 메틸 4-히드록시페닐 아세테이트 (5.0 g, 30 mmol) 및 벤질 클로라이드 (10.4 mL, 90 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 환류가열했다. 24시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (10% EtOAc/ 헥산)하여 표제 화합물 (7.7 g, 100%)을 백색 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00037
b) 2-(4-벤질옥시페닐)-I-(5-메틸티아졸-2-일)에탄온
-78℃에서, 무수 THF (10 mL) 중의 5-메틸티아졸 (0.21 mL, 2.34 mmol)의 용액에 n-BuLi (0.94 mL, 헥산 중에 2.5 M 용액, 2.34 mmol)을 적가했다. 15분 후에, 무수 THF (5 mL) 중의 메틸 4-벤질옥시페닐 아세테이트 (0.5 g, 1.95 mmol)를 적가했다. 30분 후에, NH4Cl 포화 용액 (10 mL)을 사용하여 상기 혼합물을 급냉시킨 후, 실온으로 가온하고, EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (15% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물을 백색 고체 (532 mg, 51%)로 수득했다: MS (ES) m/e 324 (M + H)+.
c) 에틸 (±)-4-(4-벤질옥시페닐)-3-(5-메틸티아졸-2-일)크로토네이트
실온에서, 무수 THF (2 mL) 중의 NaH (79 mg, 1.98 mmol)의 현탁액에 트리에틸 포스포노아세테이트 (0.39 mL, 1.98 mmol)를 적가했다. 15분 후에, 무수 THF (3 mL) 중의 2-(4-벤질옥시페닐)-1-(5-메틸티아졸-2-일)에탄온 (320 mg, 0.99 mmol)의 용액을 적가하고, 상기 혼합물을 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, NH4Cl 포화 용액 (10 mL)을 사용하여 급냉시키고, EtOAc (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgS04 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 생성된 황색 오일을 정제 없이 다음 단계에 사용했다: MS (ES) m/e 394 (M + H)+.
d) 메틸 (±)-3-(5-메틸티아졸-2-일)-4-(4-벤질옥시페닐)부타노에이트
에틸 (±)-4-(4-벤질옥시페닐)-3-(5-메틸티아졸-2-일)크로토네이트 (0.99 mmol, 조 생성물)를 MeOH (5 mL) 중에 용해하고, 실온에서 마그네슘 터닝 (120 mg, 4.95 mmol)을 첨가했다. 72시간 후에, 상기 혼합물을 10% HCl (75 mL)에 붓고 CH2Cl2 (3 × 50 mL)로 추출했다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축하여 조 생성물인 표제 화합물을 수득했다. 이를 정제 없이 사용했다: MS (ES) m/e 382 (M + H)+.
e) 메틸(±)-3-(5-메틸티아졸-2-일)-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
실온에서, EtSH (5 mL) 중의 메틸 (±)-3-(5-메틸티아졸-2-일)-4-(4-벤질옥시페닐)부타노에이트 (0.99 mmol, 조 생성물)의 용액에 BF3·OEt2 (0.6 mL)를 첨가했다. 18시간 후에, BF3·OEt2를 더 첨가 (0.6 mL)했다. 그 후 18시간이 지난 후에, 상기 혼합물을 0℃로 냉각시키고, NaHCO3 포화 용액을 사용하여 이를 조심스럽게 급냉시켰다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (3 × 25 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로 마토그래피 (50% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (249 mg, 3단계에 걸쳐 86%)을 황색 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 292 (M + H)+.
제조예 7
(4R,5S)-1-아크릴로일-3,4-디메틸-5-페닐이미다졸리딘-2-온의 제조
CH2Cl2 (12O0 mL) 중 (4S,5R)-1,5-디메틸-4-페닐-2-이미다졸리딘온 (45.0 g, 237 mmol) 및 (i-Pr)2NEt (62 mL, 355 mmol)의 용액에 CuCl (50 mg, 0.51 mmol)을 첨가한 다음, 아크릴로일 클로라이드 (29 mL. 355 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 환류가열했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각하고, H2O (3 × 400 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켜 농축했다. 생성된 고체를 Et2O (300 mL)로 분쇄하고, 여과로 수집하여 표제 화합물 (45.15 g, 78%)을 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00038
제조예 8
4-메톡시페닐마그네슘 브로마이드의 제조
실온에서, 무수 THF (1.0 L) 중의 4-메톡시벤질 클로라이드 (120 g, 766 mmol)의 용액을 1.5시간에 걸쳐 무수 THF (0.5 L) 중 마그네슘 터닝 (74 g, 3.04 mol) 및 I2 (50 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 적가했다. 첨가 후 처음 10분 동안, 갈색이 감쇄되었고, 반응물이 가온되었다. 1시간 후에, 첨가를 완료했고, 반응물을 다시 실온으로 냉각했다. 1,10-페난트롤린을 이용한 적정은 상기 용액이 THF 중에 0.36 M 그리냐드 시약임을 나타냈다.
제조예 9
에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트의 제조
(a) (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(E)-3-(3-플루오로페닐)프로프-2-에노일]-5-페닐이미다졸리딘-2-온
무수 DMF (10 mL) 중 1-브로모-3-플루오로벤젠 (525 mg, 3 mmol), (4R,5S)-1-아크릴로일-3,4-디메틸-5-페닐이미다졸리딘-2-온 (500 mg, 2 mmol), Pd(OAc)2 (22 mg, 0.10 mmol), P(o-톨릴)3 (61 mg, 0.20 mmol) 및 (i-Pr)2NEt (0.73 mL, 4.2 mmol)의 용액을 탈기 (3 회 진공/N2 퍼징)시킨 다음, 110℃로 가열했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 냉각시켜 EtOAc에 부었다. 생성된 혼합물을 H20 (3 회)로 세척하고, 합한 수성층들을 EtOAc로 재추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 실리카 겔 플러그를 통해 여과하고 농축했다. 잔사를 1 : 1 Et2O/헥산 (10 mL) 중에 용해시키고, -20℃에서 밤새 냉각했다. 고체를 수집하여 진공하에 건조시켜 표제 화합물 (514 mg, 76%)을 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00039
(b) (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-메톡시페닐)부타노일]-5- 페닐이미다졸리딘-2-온
-15℃에서, THF 중의 4-메톡시페닐마그네슘 브로마이드 용액 (0.31 M, 14.7 mL, 4.56 mmol)을 THF/톨루엔 (10 mL) 중 (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(E)-3-(3-플루오로페닐)프로프-2-에노일]-5-페닐이미다졸리딘-2-온 (514 mg, 1.52 mmol), CuBr·DMS 복합체 (229 mg, 1.06 mmol) 및 ZnI2 (582 mg, 1.82 mmol)의 교반된 현탁액에 적가했다. 1.5시간 후에, NH4Cl 포화 용액을 사용하여 상기 반응물을 급냉시키고 EtOAc (3 회)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 건조될 때까지 농축시켰다. 잔사를 1 : 1 Et2O/헥산 중에 용해시키고, -20℃로 18시간 동안 냉각시켰다. 고체를 수집하여 1 : 1 Et2O/헥산으로 세척하고, 진공하에 건조시켜 표제 화합물의 제1 수확물을 수득했다. 여액을 농축하고, 잔사를 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (30% EtOAc/헥산)로 정제하여 추가의 표제 화합물을 황색 오일로 수득하여 이를 진공하에 고체화시켰다. 표제 화합물의 총 수득량은 0.62 g (91%)이었다.
Figure 112002006561396-pct00040
(c) 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-메톡시페닐)부타노에이트
EtOH (0.6 mL, 1.8 mmol) 중의 21% NaOEt 용액을 THF (10 mL) 중 (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-메톡시페닐)부타노일]-5-페닐이미다졸 리딘-2-온 (620 mg, 1.38 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 반응물을 1시간 동안 교반한 다음, NH4Cl 포화 용액을 사용하여 급냉시켰다. EtOAc 추출, 건조 (MgS04) 및 농축시켜 잔사를 생성했고, 이를 실리카 겔 플러그를 통해 여과했다 (15% EtOAc/헥산). 여액을 농축하여 표제 화합물 (263 mg, 60%)을 맑은 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00041
(d) 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
-15℃에서, CH2Cl2 (5 mL) 중의 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-메톡시페닐)부타노에이트 (263 mg, 0.83 mmol)의 용액에 에탄티올 (0.30 mL, 4.16 mmol)을 첨가한 다음, AlCl3 (555 mg, 4.16 mmol)을 첨가했다. 30분 후에, 상기 혼합물을 실온으로 가온하고 30분 더 교반한 다음, 얼음에 부었다. 상기 얼음을 용융시키고, 상기 혼합물을 CH2Cl2 (3 회)로 추출했다. 건조 (MgSO4) 및 농축하여 잔사를 생성하고, 이를 실리카 겔 플러그 (30% EtOAc/헥산)를 통해 여과했다. 여액을 농축하여 표제 화합물 (250 mg, 정량)을 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00042
제조예 10
에틸 (±)-4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트의 제조
(a) 2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2-(피리딘-3-일)아세토니트릴
CH3CN (45 mL) 중의 3-피리딘카르복스알데히드 (1.0 g, 9.34 mmol)의 용액에 KCN (6.0 g, 93 mmol), TBDMSCI (1.7 g, 11.21 mmol) 및 ZnI2 (50 mg, 0.16 mmol)를 첨가했다. 4시간 후에, 실온에서 상기 혼합물을 셀라이트 (등록상표)를 통해 여과시키고 여액을 농축했다. 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (25% EtOAc/헥산)로 표제 화합물 (2.17 g, 94%)을 맑은 오일로 생성했다.
Figure 112002006561396-pct00043
(b) (±)-3-(4-벤질옥시페닐)-2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2-(피리딘-3-일)프로피오니트릴
0℃에서, 무수 THF (5 mL) 중의 디이소프로필아민 (0.63 mL, 4.83 mmol)의 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 1.93 mL, 4.83 mmol)를 첨가하여 LDA를 제조했다. -78℃에서, 상기 LDA 용액을 무수 THF (15 mL) 중의 2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2-(피리딘-3-일)아세토니트릴 (1.0 g, 4.03 mmol)의 용액에 적가했다. 상기 용액을 15분 동안 교반한 다음, 고체 상태의 4-벤질옥시벤질 클로라이드 (1.41 g, 6.05 mmol)를 한꺼번에 첨가했다. 상기 반응물을 -78℃에서 15분 동안 방치한 다음, 실온으로 가온했다. 실온에서 30분 후에, NH4Cl 포화 수용액을 사용하여 상기 반응물을 급냉시키고, 20분 동안 교반했다. EtOAc 추출 (3 회), 건조 (MgS04), 농축 및 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (20% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (769 mg, 43%)을 황색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00044
(c) 2-(4-벤질옥시페닐)-1-(피리딘-3-일)에탄온
-15℃에서, 무수 THF 중의 TBAF (1.0 M, 2.2 mL, 2.2 mmol)의 용액을 무수 THF (10 mL) 중의 (±)-3-(4-벤질옥시페닐)-2-(tert-부틸디메틸실릴옥시)-2-(피리딘-3-일)프로피오니트릴 (769 mg, 1.73 mmol)의 용액에 적가했다. 30분 후에, 상기 반응물을 EtOAc와 H20 사이에 분배시켰다. 층들이 분리되었고, 유기 층을 H20로 세척하고, 건조 (MgS04)시키고, 실리카 겔 플러그를 통해 여과하고 농축하여 불순한 표제 화합물 (492 mg, 94%)을 황색 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 304 (M + H)+. 이 물질을 추가의 정제없이 사용했다.
(d) 에틸 4-(4-벤질옥시페닐)-3-(피리딘-3-일)부트-2-에노에이트
실온에서, 트리에틸 포스포노아세테이트 (0.70 mL, 3.46 mmol)를 무수 THF (5 mL) 중의 NaH (광유 중의 60% 분산액, 138 mg, 3.46 mmol)의 현탁액에 적가했다. 기체 방출이 멈추었을 때, 무수 THF (5 mL) 중의 2-(4-벤질옥시페닐)-1-(피리딘-3-일)에탄온 (약 1.73 mmol, 제조예 10 (c)으로부터의 불순물)의 용액을 첨가하고, 상기 혼합물을 환류가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, NH4Cl 포화 수용액을 사용하여 이를 급냉시켜 EtOAc (3 회)로 추출했다. 합한 유기물들을 건조 (MgS04)시키고 농축시켜 조 생성물인 표제 화합물을 수득했다: MS (ES) m/e 374 (M + H)+. 이 물질을 추가의 정제없이 사용했다.
(e) 에틸 (±)-4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트
EtOH (10 mL) 중 에틸 4-(4-벤질옥시페닐)-3-(피리딘-3-일)부트-2-에노에이트 (1.73 mmol) 및 10% Pd/C (200 mg)의 혼합물을 파르 장치 상에서 H2 (50 psi) 하에 진탕했다. 4시간 후에, 상기 혼합물을 셀라이트 (등록상표)를 통해 여과시키고 여액을 농축했다. 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (50% EtOAc/헥산)하여 불순한 표제 화합물 (327 mg, 3단계에 걸쳐 66%)을 황색 오일로 생성했다: MS (ES) m/e 286 (M + H)+. 이 물질을 추가의 정제없이 사용했다.
제조예 11
에틸 (S)-4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트의 제조
(a) (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(E)-3-(피리딘-3-일)프로프-2-에노일]-5-페닐이미다졸리딘-2-온
무수 DMF (300 mL) 중 3-브로모피리딘 (8.6 mL, 88.5 mmol), (4R,5S)-1-아크릴로일-3,4디메틸-5-페닐이미다졸리딘-2-온 (14.4 g, 59 mmol), Pd (OAc)2 (662 mg, 2.95 mmol), P(o-톨릴)3 (1.80 g, 5.9 mmol) 및 (i-Pr)2NEt (22 mL, 124 mmol)의 용액을 탈기 (3회 진공/N2 퍼징)시킨 다음, 110℃로 가열했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 냉각시켜 EtOAc에 부었다. 생성된 혼합물을 H20 (3 회)로 세척하고, 합한 수성층들을 EtOAc (2 회)로 재추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 실리카 겔 플러그를 통해 여과하고 농축했다. 잔사를 1 : 1 EtOAc/헥산 중에 용해시키고, 고체를 수집하고, 1 : 1 EtOAc/헥산으로 세척하고, 진공하에 건조시켜 표제 화합물의 제1 수확물을 수득했다. 여액을 농축하고, 상기 결정화 과정을 반복하여 제 2 수확물을 수득했다. 표제 화합물의 총 수득량은 17.53 g (92%)이었다.
Figure 112002006561396-pct00045
(b) (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(S)-4-(4-메톡시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노일]-5-페닐이미다졸리딘-2-온
-15℃에서, THF (0.33 M, 495 mL, 163.5 mmol) 중의 4-메톡시페닐마그네슘 브로마이드 용액을 THF/톨루엔 (270 mL) 중 (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(E)-3-(피리딘-3-일)프로프-2-에노일]-5-페닐이미다졸리딘-2-온 (17.53 g, 54.5 mmol), CuBr·DMS 복합체 (14.1 g, 65.4 mmol) 및 ZnI2 (20.9 g, 65.4 mmol)의 교반된 현탁액에 적가했다. 1시간 후에, 9 : 1 NH4Cl 포화 용액/진한 NH40H를 사용하여 상기 반응물을 급냉시키고, 상기 혼합물을 30분 동안 교반하면서 공기에 노출시켜 두었다. 상기 혼합물을 H20로 희석하고 EtOAc (3 회)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축했다. 잔사를 메틸 tert-부틸 에테르 (MTBE, 200 mL) 중에 용 해시켜 -20℃에서 밤새 저장했다. 고체를 수집하고, MTBE로 세척하고, 진공하에 건조시켰다. 상기 물질을 3 : 1 헥산/EtOAc로 재결정화시켜 표제 화합물 (19.408 g, 80%)을 제조했다
Figure 112002006561396-pct00046
(c) 에틸 (S)-4-(4-메톡시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트
0℃에서, EtOH (18.4 mL, 56.88 mmol) 중의 21% NaOEt 용액을 THF (200 mL) 중의 (4R,5S)-3,4-디메틸-1-[(S)-4-(4-메톡시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노일]-5-페닐이미다졸리딘-2-온 (19.408 g, 43.8 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 반응물을 1시간 동안 교반한 다음, NH4Cl 포화 용액을 사용하여 급냉시키고 EtOAc (3 회)로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgS04) 및 농축했다. 잔사를 1 : 1 EtOAc/헥산 중에 용해시키고 여과하고, 여액을 실리카 겔 플러그 (1 : 1 EtOAc/헥산)를 통해 여과했다. 여액을 농축하여 표제 화합물 (9.25 g, 71%)을 오렌지색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00047
(d) 에틸 (S)-4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트
CH2Cl2 (150 mL) 중의 에틸 (S)-4-(4-메톡시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트 (9.25 g, 31 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시켰다. 에탄티올 (11.5 mL, 155 mmol)을 첨가한 다음, AlCl3 (20.7 g, 155 mmol)를 조금씩 첨가했다. 2시간 후에, 상기 혼합물을 얼음에 붓고, 실온으로 가온시켜, NaHC03로 중화시켰다. 생성된 현탁액을 셀라이트 (등록상표)를 통해 여과시키고, 이 필터 패드를 CH2Cl2로 세척했다. 층들이 분리되었고 수성층을 CH2Cl2로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고, 농축했다. 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (1 : 1 EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (6.435 g, 73%)을 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00048
실시예 1
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부탄산의 제조
a) 에틸 (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부타노에이트
0℃에서 N2하에, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.15 mL, 0.767 mmol)를 무수 THF (5 mL) 중 에틸 (±)-4-(4-히드록시페닐)-3-[4-(트리플루오로메틸)페 닐]부타노에이트 (270 mg, 0.767 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (130 mg, 0.92 mmol) 및 트리페닐포스핀 (200 mg, 0.767 mmol)의 용액에 2분에 걸쳐 첨가했다. 상기 황색 용액을 0℃에서 10분 동안 방치한 다음, 실온으로 가온했다. 24시간 후에, 상기 반응물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (20 EtOAc/헥산)했다. 표제 화합물 (200 mg, 54%)을 무색의 오일로 수득했다: MS (ES) m/e 487 (M + H)+.
b) (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부탄산
1.0 N NaOH (8.2 mL, 0.823 mmol)를 MeOH (3 mL) 중 에틸 (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부타노에이트 (200 mg, 0.41 mmol)의 냉각 (15℃)시킨 용액에 적가하고, 상기 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반했다. 생성된 용액을 진공하에 농축하고 잔사를 H2O (5 mL) 중에 용해했다. 1.0 N HCl을 사용하여 pH를 5로 조정했으며, 침전물을 수집하여 소량의 물로 세척하고, 60℃에서 진공하에 건조시켰다. 표제 화합물 (120 mg, 64%)을 백색의 포움성 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 459 (M + H)+. C25H25FN2O3·0.85H20에 대한 분석 계산치: C, 63.38: H, 5.68: N, 5.91. 실측치: C, 63.23; H, 5.41; N, 5.73.
실시예 2
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페틸]-3-[4-[(N-메틸-N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-부탄산의 제조
a) 메틸 (±)-3-[4-[(N-메틸-N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
실온에서, 무수 DMF (2 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트 (150 mg, 0.37 mmol), (i-Pr)2NEt (0.1 mL, 0.56 mmol), 피리딘 (0.09 mL, 1.11 mmol) 및 N-메틸아닐린 (0.06 mL, 0.56 mmol)의 용액에 BPFFH (382 mg, 1.11 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 10% HCl (20 mL) 중에 용해시켜 CH2Cl2 (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다.
실온에서, 상기 잔사를 디옥산 중의 4 N HCl (10 mL) 중에 용해했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (75% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (146 mg)을 비스(펜타메틸렌)우레아로 오염된 오렌지색 포움으로 수득했다: MS (ES) m/e 417 (M + H)+.
b) 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-[(N-메틸-N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일)]부타노에이트
0℃에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.15 mL, 0.74 mmol)를 CH2Cl2 (2 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-[(N-메틸-N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2- 일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트 (146 mg, 0.37 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (113 mg, 0.74 mmol) 및 트리페닐포스핀 (194 mg, 0.74 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 혼합물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (50% THF/헥산)했다. 생성물을 함유하는 분획들을 농축하여 산화 트리페닐포스핀으로 오염된 표제 화합물 (322 mg)을 수득했다: MS (ES) m/e 529 (M + H)+.
c) (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[(N-페닐-N-메틸아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-부탄산
실온에서, 1 : 1 THF/H2O (2 mL) 중의 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-[(N-메틸-N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일)]부타노에이트 (322 mg)의 용액에 1.0 N LiOH (0.35 mL, 0.35 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 10% HCl을 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시킨 다음, 건조될 때까지 농축시켰다. 잔사를 역상 HPLC (구배: 0.1% TFA를 함유하는 10-80% CH3CN/H2O)로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획들을 합하고 농축시켜 CH3CN을 제거했다. 생성된 수용액을 동결건조시켜 표제 화합물 (33 mg, 3단계에 걸쳐 29%)을 백색 고체로서 수득했다: MS (ES) m/e 515 (M + H)+. C29H30N4O 1.85 TFA에 대한 분석 계산치: C, 54.13: H, 4.42: N, 7.72. 실측치: C, 54.17: H, 4.50: N, 7.52.
실시예 3
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-부탄산의 제조
a) 메틸 (±)-3-[4-(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
실온에서, 무수 DMF (2 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트 (150 mg, 0.37 mmol), (i-Pr)2NEt (0.1 mL, 0.56 mmol), 피리딘 (0.09 mL, 1.11 mmol) 및 모르폴린 (0.05 mL, 0.56 mmol)의 용액에 BPFFH (382 mg, 1.11 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 10% HCl (20 mL) 중에 용해시켜 CH2Cl2 (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다.
실온에서, 상기 잔사를 디옥산 중의 4 N HCl (10 mL) 중에 용해했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (100% EtOAc)하여 표제 화합물 (122 mg, 88%)을 맑은 오일로서 생성했다.
Figure 112002006561396-pct00049
b) 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-(모르폴린-4일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일)]부타노에이트
0℃에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.13 mL, 0.66 mmol)를 CH2Cl2 (2 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-4- (4-히드록시페닐)부타노에이트 (122 mg, 0.37 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (100 mg, 0.66 mmol) 및 트리페닐포스핀 (173 mg, 0.66 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (100% EtOAc)했다. 생성물을 함유하는 분획들을 농축하여 산화 트리페닐포스핀으로 오염된 표제 화합물 (94 mg)을 생성했다: MS (ES) m/e 509 (M + H)+.
c) (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-부탄산
실온에서, 1 : 1 THF/H2O (2 mL) 중의 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일)]부타노에이트 (94 mg, 0.18 mmol)의 용액에 1.0 N LiOH (0. 25 mL, 0.25 mmol)을 첨가했다. 18시간 후에, 10% HCl를 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시킨 다음, 건조될 때까지 농축시켰다. 잔사를 역상 HPLC (구배: 0.1% TFA를 함유하는 15-35% CH3CN/H2O)로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획들을 합하고 농축하여 CH3 CN를 제거했다. 생성된 수용액을 동결건조시켜 표제 화합물 (23 mg, 2단계에 걸쳐 26%)을 백색 고체로서 생성했다: MS (ES) m/e 495 (M + H)+. C26H30N4 O1.75 TFA에 대한 분석 계산치: C, 49.76: H, 4.78: N, 7.87. 실측치: C, 49.93: H, 4.97: N, 7.84.
실시예 4
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[N-메틸-N-2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-부탄산의 제조
a) 메틸 (±)-3-[4-[[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트
실온에서, 무수 DMF (2 mL) 중 메틸 (±)3-[4-카르복시-1,3-옥사졸-2-일]-4-[4-[(tert-부틸옥시카르보닐)옥시]페닐]부타노에이트 (150 mg, 0.37 mmol), (i-Pr)2NEt (0.1 mL, 0.56 mmol), 피리딘 (0.09 mL, 1.11 mmol) 및 N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아민 히드로클로라이드 (84 mg, 0.56 mmol)의 용액에 BPFFH (382 mg, 1.11 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을을 농축했다. 잔사를 10% HCl (20 mL)에 용해시키고, CH2Cl2 (3 × 20 mL)로 추출했다. 합한 유기 층들을 MgS04 상에서 건조시키고, 여과 및 농축했다.
실온에서, 상기 잔사를 디옥산 중의 4 N HCl (10 mL) 중에 용해했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축했다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (60% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물 (298 mg)을 비스(펜타메틸렌)우레아로 오염된 맑은 오일로서 수득했다. 상기 오일을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용했다.
b) 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-[[N-메틸-N (2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일)]부타노에이트
0℃에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.15 mL, 0.74 mmol)를 CH2Cl2 (2 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-[[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르 보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트 (298 mg, 0.37 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (113 mg, 0.74 mmol) 및 트리페닐포스핀 (194 mg, 0.74 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (40% EtOAc/헥산)했다. 생성물을 함유하는 분획들을 농축시켜 산화 트리페닐포스핀으로 오염된 표제 화합물 (115 mg)을 수득했다: MS (ES) m/e 535 (M + H)+.
c) (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]-부탄산
실온에서, 1 : 1 THF/H2O (2 mL) 중의 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-[[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일)]부타노에이트 (115 mg, 0.22 mmol)의 용액에 1.0 N LiOH (0.32 mL, 0.32 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 10% HCl를 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시킨 다음, 건조될 때까지 농축시켰다. 잔사를 역상 HPLC (구배: 0.1% TFA를 함유하는 10-80% CH3CN/H2O)로 정제했다. 생성물을 함유하는 분획들을 합하고 농축하여 CH3CN를 제거했다. 생성된 수용액을 동결건조시켜 표제 화합물 (42 mg, 3단계에 걸쳐 37%)을 백색 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 522 (M + H)+. C25H27F3N4O1.4 TFA에 대한 분석 계산치: C, 49.09: H, 4.21: N, 8.24. 실측 치: C, 49.18: H, 4.18: N, 8.22.
실시예 5
(±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]부탄산의 제조
a) 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]부타노에이트
0℃에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.14 mL, 0.71 mmol)를 CH2Cl2 (2 mL) 중 메틸 (±)-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-4-히드록시페닐)부타노에이트 (123 mg, 0.37 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (108 mg, 0.71 mmol) 및 트리페닐포스핀 (186 mg, 0.71 mmol)의 용액에 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (1 : 1 톨루엔/헥산 중의 40% EtOAc)했다. 생성물을 함유하는 분획들을 농축시켜 표제 화합물 (114 mg, 환원된 DIAD로 오염됨)을 수득했다: MS (ES) m/e 480 (M + H)+.
b) (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]-부탄산
실온에서, 1 : 1 THF/H2O (2 mL) 중의 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]부타노에이트 (114 mg, 0.24 mmol)의 용액에 1.0 N LiOH (0.36 mL, 0.36 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 10% HCl를 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시켰다. 생성된 고체를 여과하여 수집하고, 50℃에서 진공하에 건조시켜 표제 화합물 (43 mg, 42%)을 백색 고체로 수득했다: MS (ES) m/e 466 (M + H)+. C22H22F3 N3O3S·0.2H20에 대한 분석 계산치: C, 56.33: H, 4.81: N, 8.96. 실측치: C, 56.34: H, 4.69: N, 8.88.
실시예 6
(+)-4-14-[2-(6-메틸아미노페리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-(5-메틸티아졸-2-일)부탄산의 제조
a) 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-(5-메틸티아졸-2-일)부타노에이트
0℃에서, TBME (5 mL) 중 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.25 mL, 1.28 mmol)를 메틸 (±)-4-(4-히드록시페닐)-3-(5-메틸티아졸-2-일)부타노에이트 (249 mg, 0.85 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (194 mg, 1.28 mmol) 및 트리페닐포스핀 (336 mg, 1.28 mmol)의 현탁액에 첨가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 72시간 후에, 상기 혼합물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (30% EtOAc/CHCl3)했다. 생성물을 함유하는 분획들을 농축시켜 표제 화합물 (385 mg, 산화 트리페닐포스핀으로 오염됨)을 수득했다: MS (ES) m/e 426 (M + H)+.
b) (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-(5-메틸티아졸-2-일)부탄산
1 : 1 THF/H2O (5 mL) 중의 메틸 (±)-4-[4-[2-(6-메틸아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]페닐]-3-(5-메틸티아졸-2-일)부타노에이트 (0.85 mmol)의 용액에 1.0 N NaOH (1.28 mL, 1.28 mmol)를 첨가했다. 18시간 후에, 10% HCl를 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시킨 다음, 건조될 때까지 농축시켰다. 잔사를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 (EtOH)하여 표제 화합물을 황색 고체 (217 mg, 2단계에 걸쳐 62%)로 제조했다: MS (ES) m/e 412 (M + H)+. C22H25N3O 3S·1.2H20에 대한 분석 계산치:C, 61.01: H, 6.38: N, 9.70. 실측치: C, 61.25: H, 6.06: N, 9.32.
실시예 7
(S)-3-(3-플루오로페닐)-4-[4-2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산의 제조
(a) 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부타노에이트
실온에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.20 mL, 1.0 mmol)를 무수 THF (5 mL) 중 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트 (250 mg, 0.83 mmol), 2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)-1-에탄올 (178 mg, 1.0 mmol) 및 트리페닐포스핀 (262 mg, 1.0 mmol)의 용액에 적가했다. 18시간 후에, 상기 반응물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (5 : 1 Et2O/헥산)하여 불순한 표제 화합물 (236 mg, 61%)을 수득했다: MS (ES) m/e 463 (M + H)+. 이를 추가의 정제없이 사용했다.
(b) (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산
THF/H2O (3 mL) 중의 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부타노에이트 (236 mg, 0.51 mmol)의 용액에 1.0 N LiOH (0.76 mL, 0.76 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 50℃에서 가열했다. 18시간 후에, 상기 혼합물을 실온으로 냉각하고 10% HCl를 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시켰다. EtOAc (5 mL)를 첨가하고, 이 혼합물을 격렬하게 교반했다. 흡입 여과하여 고체를 수집하고, H2O (2 회) 및 Et2O (2 회)로 세척하고, 50℃에서 진공하에 건조시켜 표제 화합물을 수득했다: MS (ES) m/e 435 (M + H)+. C26H27FN2O3·2.25HCl에 대한 분석 계산치: C, 60.46: H, 5.71: N, 5.42. 실측치: C, 60.44: H, 5.34: N, 5.45.
실시예 8
(±)-4-14-12-l6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3 일)부탄산의 제조
(a) 에틸 (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부타노에이트
실시예 7 (a)에서 에틸 4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트 (327 mg 불순함, 1.15 mmol)을 에틸 (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-(4-히드록시페닐)부타노에이트로 대체하고, 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (210 mg, 1.38 mmol)을 2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)-1-에탄올로 대체한 점을 제외하고는 동일한 방법에 따라, 표제 화합물을 불순한 밝은 오렌지색 고체로 제조한 후에, 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (100% EtOAc)했다: MS (ES) m/e 420 (M + H)+. 이 물질을 추가의 정제없이 사용했다.
(b) (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산
1.0 N LiOH (3.45 mL, 3.45 mmol)를 THF/H2O (5 mL) 중의 에틸 (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부타노에이트 (1.15 mmol)의 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 50℃에서 가열했다. 18시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고 10% HCl를 사용하여 상기 혼합물을 pH 6으로 산성화시켰다. 상기 혼합물을 CHCl3 (3 회)로 추출하고, 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고 농축했다. 잔사를 C-18 본드-일루트 (Bond-Elute) 컬럼 (20% CH3CN/H2O) 상에서 크로마토그래피했다. 생성물을 함유하는 분획들을 풀링 (pooling) 하고 CHCl3 (3 회)로 추출하고, 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시켜 농축했다. 생성된 고체를 2 M NaOH 중에 용해시키고, EtOAc (2 회)로 세척했다. EtOAc 추출물을 버렸다. 수성층을 pH 6으로 산성화시키고 CHCl3 (3 회)로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고 농축하여 표제 화합물 (51 mg, 11%)을 백색 고체로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00050
MS (ES) m/e 392 (M + H)+. C23H25N3O3·1.3HCl에 대한 분석 계산치: C, 62.95: H, 6.04: N, 9.57. 실측치: C, 62.84: H, 5.87: N, 9. 20.
실시예 9
(S)-4-[4-[2-16-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산의 제조
(a)에틸 (S)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부타노에이트
0℃에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (7.8 mL, 39.8 mmol)를 무수 THF (150 mL) 중 에틸 (S)-4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트 (9.455 g, 33.1 mmol), 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올 (6.06 g, 39.8 mmol) 및 트리페닐포스핀 (10.44 g, 39.8 mmol)의 용액에 적가했다. 상기 혼합물은 욕조가 가온됨에 따라 실온으로 가온되었다. 18시간 후에, 상기 반응물을 농축하고 잔사를 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (1 : 1 EtOAc/CHCl3 중 3% MeOH)하여 표제 화합물 (9.2 g, 66%)을 점성이 있는 황색 오일로 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00051
(b) (S)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산
2.0 M NaOH (15 mL, 30 mmol)를 디옥산/H2O (100 mL) 중의 에틸 (S)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부타노에이트 (9.2 g, 22 mmol)의 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 50℃로 가열했다. 18시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각시키고, 10% HCl (25 mL)을 사용하여 산성화하고, 1/3 부피로 농축하여 침전시켜 고무화시켰다. 상층액을 기울여 따라내고, 상기 고무를 H2O와 CHCl3 사이에 분배시켰다. 층들이 분리되었고 수성층을 CHCl3 (3 회)로 추출했다. 합한 유기 층들을 건조 (MgSO4)시키고 농축하고, 잔사를 H2O 및 2 M NaOH (30 mL) 중에 용해시켰다. 상기 용액을 Et2O (3 회)로 세척하고, Et2O 추출물을 버렸다. 상기 수용액을 10% HCl (50 mL)로 산성화하고 1/3 부피로 농축시켜, CHCl3 (3 회)로 추출했다. 유기 층들을 합하여, 건조 (MgS04)및 농축시켜 포움을 생성했다. 이 포움을 CH2Cl2 중에 용해하고, 이 용액을 헥산으로 희석하여 농축했 다. 이 과정을 3회 반복했다. 생성된 고체를 65℃의 진공하에 건조시켜, 표제 화합물 (7.96 g, 92%)을 수득했다
Figure 112002006561396-pct00052
C23H25N3O3·0.1H20에 대한 분석 계산치: C, 70.25: H, 6.46: N, 10.68. 실측치: C, 70.32: H, 6.50: N, 10.32.
실시예 10
(S)-3-(피리딘-3-일)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산의 제조
(a) 에틸 (S)-3-(피리딘-3-일)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부타노에이트
실온에서, 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (0.41 mL, 2.1 mmol)를 무수 THF (8 mL) 중 에틸 (S)-4-(4-히드록시페닐)-3-(피리딘-3-일)부타노에이트 (500 mg, 1.75 mmol), 2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)-1-에탄올 (374 mg, 2.1 mmol) 및 트리페닐포스핀 (551 mg, 2.1 mmol)의 용액에 적가했다. 18시간 후에, 상기 반응물을 농축하고, 잔사를 실리카 겔 상에서 속성 크로마토그래피 (90% EtOAc/헥산, 이후 5% EtOH/EtOAc)하여 표제 화합물 (572 mg, 73%)을 오일로서 수득했다
Figure 112002006561396-pct00053
(b) (S)-3-(피리딘-3-일)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산
THF/H2O (8 mL) 중의 에틸 (S)-3-(피리딘-3-일)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부타노에이트 (572 mg, 1.28 mmol)의 용액에 1.0 M LiOH (2.6 mL, 2.6 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 50℃에서 가열했다. 18시간 후에, 상기 반응물을 실온으로 냉각하고, 10% HCl을 사용하여 pH 6.0으로 산성화시켰다. 흡입 여과하여 침전된 고체를 수집하고, H20로 세척하고 진공하에 건조시켜 표제 화합물 (414 mg, 77%)을 수득했다.
Figure 112002006561396-pct00054
실시예 11
비경구용 투여량 단위 조성물
실시예 1의 화합물 20 mg을 무균 건조 분말로서 함유하는 제제를 하기와 같 이 제조했다: 화합물 20 mg을 증류수 15 mL에 용해시킨다. 상기 용액을 무균 조건하에서 25 mL 다중투여량 앰플내로 여과하여 첨가하고 동결건조하였다. 상기 분말을 정맥내 또는 근육내 주사용으로 물중의 5% 덱스트로스 (D5W) 20 mL를 첨가하여 재구성시켰다. 이에 의하여 상기 투여량을 주사 부피로 결정했다. 이후의 희석은 상기 투여량 단위의 계량된 부피를 또 다른 주사용 D5W 부피에 첨가하여 수행하거나 또는 계량된 투여량을 IV 점적 주입용 병 또는 백 또는 기타 주사-주입 시스템과 같은 또 다른 약제 전달 메카니즘에 첨가할 수 있다.
실시예 12
경구 투여량 단위 조성물
경구 투여용 캡슐을 실시예 1의 화합물 50 mg과 락토스 75 mg 및 마그네슘 스테아레이트 5 mg과 혼합하고 분쇄하여 제조했다. 생성된 분말을 스크리닝하여 경질의 젤라틴 캡슐 내에 충전했다.
실시예 13
경구 투여량 단위 조성물
경구 투여용 정제를 수크로스 20 mg, 칼슘 술페이트 디히드레이트 150 mg 및 실시예1의 화합물 50 mg을 10% 젤라틴 용액과 함께 혼합하고 과립화하여 제조했다. 습윤된 과립을 스크리닝하고, 건조하고 전분 10 mg, 활석 5 mg 및 스테아르산 3 mg과 혼합하고, 정제로 압착하였다.
상기의 기재는 본 발명의 제조 및 사용법을 상세히 개시한다. 그러나, 본 발명은 상기에 기재된 특정 실시태양에 한정되는 것은 아니며, 하기 청구범위의 범 위 내에 있는 그의 모든 변형을 포함한다. 본원에서 인용된 저널, 특허 및 기타 간행물에 대한 다양한 참조는 본 기술 상태를 포함하며 그 전체가 기재되어 있는 것처럼 참고로 본원에 도입된다.















Claims (26)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
    <화학식 I>
    Figure 112006095330909-pct00055
    상기 식에서,
    R1
    Figure 112006095330909-pct00065
    Figure 112006095330909-pct00066
    (상기 식에서, R'는 C1-4알킬이고, R"는 페닐, 벤질 또는 -CH2CF3이거나; 또는 R' 및 R"가 결합하여 모르폴리닐 고리를 형성함)이고;
    R2
    Figure 112006095330909-pct00056
    또는
    Figure 112006095330909-pct00057
    이다.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, R2
    Figure 112002006561396-pct00060
    인 화합물.
  4. 제1항에 있어서, R2
    Figure 112002006561396-pct00061
    인 화합물.
  5. (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)페닐]부탄산;
    (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-l-에톡시]페닐]-3-[4-[(N-메틸- N-페닐아미노)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부탄산;
    (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[(모르폴린-4-일)카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부탄산;
    (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-[[N-메틸-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노]카르보닐]-1,3-옥사졸-2-일]부탄산;
    (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-[4-(트리플루오로메틸)티아졸-2-일]부탄산;
    (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]페닐]-3-(3-메틸티아졸-2-일)부탄산;
    (S)-3-(3-플루오로페닐)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산;
    (±)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산;
    (S)-4-[4-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]에톡시]페닐]-3-(피리딘-3-일)부탄산; 또는
    (S)-3-(피리딘-3-일)-4-[4-[2-(5,6,7,8-테트라히드로-1,8-나프티리딘-2-일)에톡시]페닐]부탄산인 화합물 또는 이들의 제약상 허용가능한 염.
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