CZ2002822A3 - Antagonisté receptoru vitronektinu - Google Patents

Antagonisté receptoru vitronektinu Download PDF

Info

Publication number
CZ2002822A3
CZ2002822A3 CZ2002822A CZ2002822A CZ2002822A3 CZ 2002822 A3 CZ2002822 A3 CZ 2002822A3 CZ 2002822 A CZ2002822 A CZ 2002822A CZ 2002822 A CZ2002822 A CZ 2002822A CZ 2002822 A3 CZ2002822 A3 CZ 2002822A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
compound
mmol
phenyl
pyridin
ethoxy
Prior art date
Application number
CZ2002822A
Other languages
English (en)
Inventor
Peter J. Manley
William H. Miller
Irene N. Uzinskas
Original Assignee
Smithkline Beecham Corporation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Corporation filed Critical Smithkline Beecham Corporation
Publication of CZ2002822A3 publication Critical patent/CZ2002822A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • External Artificial Organs (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

Oblast techniky
Předložený vynález se. týká farmaceuticky účinných sloučenin, které inhibují receptory vitronektinu a jsou h . použitelné pro léčení zánětů, rakoviny a kardiovaskulárních | onemocnění jako jsou ateroskleróza a restenóza a onemocnění, ve kterých je faktorem kostní resorpce, jako je osteoporóza.
Dosavadní stav techniky
Integriny jsou nadtřídou buněčných receptorů, které jsou transmembránové glykoproteiny exprimované na· řadě buněk. Tyto povrchové buněčné adhezivní receptory zahrnují gpllb/lila (receptor fibrinogenu) . ' a ανβ3 (receptor vitronektinu). Receptor fibrinogenu gpIIb/IIIa je ‘ exprimován na povrchu krevních destiček a' zprostředkovává shlukování destiček a vytváření ,hemostatického uzávěru v místě krvácejícího zranění. Philips a kol., Blood., 1988,
I . 71, '831. Receptor vitronektinu- ανβ3 je exprimován na řadě .» f buněk, včetně buněk endotelu, hladkého svalstva, ‘i ' osteoklastů a nádorových buněk a má proto řadu funkcí. ανβ3 receptor, exprimovaný na membráně osteoklastových buněk, zprostředkuje přilnutí osteoklastů ke kostní matrix, což je
klíčový krok v procesu kostní’ resorpce, Ross a kol., J. Biol. Chem., 1987, 262. 7703. Onemocnění charakterizované nadměrnou kostní resorpcí je osteoporóza. ανβ3 receptor exprimovaný na lidských buňkách hladkého svalstva aorty zprostředkuje jejich migraci do neointima, což je proces, který vede k restenóze po perkutánní koronární angioplastice, Brown a kol., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. Kromě toho Brooks -a kol., Cell, 1994, 79, 1157 prokázali, že ανβ3 antagonista je schopen podporovat regresi nádoru indukcí apoptózy angiogenních krevních cév. Činidla, která blokují receptory vitronektinu, by proto mohla být použitelná při léčení osteoporózy, restenózy .a ______rakoviny. _________;_ _ _ _
Nyní je známo, že receptory vitronektinu' se týkají tří různých integrinů, označených ανβι, <Χνβ3 a ανβ5, Horton a kol., Int. J. Exp. Pathol., , 1990, 71, 741. ανβι váže fibronektin a vitronektin. ανβ3 váže velké množství ligándů, včetně fibrinu, fibrinogenu, lamininu, thrombospondinu, vitronektinu, von Willebrandova faktoru, osteopontinu a kostního sialoproteinu I. ανβ5 váže vitronektin. Bylo ukázáno, že receptor vitronektinu ανβ5 se účastní buněčného přilnutí řady typů buněk, včetně mikrovaskulárních buněk endotelu (Davis a kol., J. Cell. Biol., 1993, 51, 206) a jeho role v. angiogenesi byla potvrzena, Brooks a kol., Science, 1994, 264, 569. Tento integrit je exprimován v krevních cévách v lidské granulační tkáni jizev, ale nikoliv v normální kůži.
• · · ·· · · ·. · · · · · r· · ·»· 9*99 ,9 ' · · 9 9· 9 9 *
99 9 9999999 9 9
Je známo, že receptory vitronektinu se váží k ‘proteinům kostní matrix, které obsahují tri-peptidový motiv Arg-GlyAsp (neboli RGD). Horton a kol., Exp. Cell Res., 1991, 195, 368, objevili, že RGD-obsahující peptidy a protilátky proti receptorům vitronektinu (2306) inhibují zubní resorpci a šíření buněk osteoklastý., Kromě toho Sáto a kol., J. Cell ' u Biol., 1990, 111, 1713 objevili, že echistatin, peptid hadího jedu, který obsahuje RGD sekvenci, je silný inhibitor kostní resorpce v tkáňové kultuře a inhibuje vazbu osteoklastů ke kosti.
· ·,·* : ’ ’ · ‘
Nyní bylo objeveno, že, jisté sloučeniny jsou silné inhibitory ανβ3 a ανβ5 receptoru. Konkrétně bylo zjištěno,
- . ' '· : 1 '·--------—‘ r—-;--, --'—“··—— r- —“T—---že takové sloučeniny . j sou silnějěí inhibitory receptorů vitronektinu než receptorů fibrinogenu.
Podstata vynálezu
Předložený vynález se týká sloučenin obecného vzorce (I) uvedeného dále, . které mají farmakologickou aktivitu inhibice receptorů vitronektinu a jsou použitelné pro léčení zánětů, rakoviny a kardiovaskulárních poruch jako jsou ateroskleróza a restenóza a onemocnění, ve kterých je faktorem kostní resorpce, jako je osteoporóza.
Předložený vynález se také týká farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu obecného vzorce (I) a farmaceutický nosič. . ·
Předložený vynález se také týká způsobu léčení onemocnění, které jsou zprostředkovány receptory vitronektinu. Konkrétně jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu použitelné pro léčení aterosklerózy, restenózy, zánětů, rakoviny a onemocnění, ve kterých je faktorem kostní resorpce, jako je osteoporóza.
Detailní popis
Předložený vynález se týká nových sloučenin, které jsou silnější inhibitory receptorů vitronektinu’ než receptorů fibrinogenu. Předložený vynález se týká sloučenin obecného vzorce (I):
(I)
R1.je Het- nebo Ar;
R2 je '
9.
nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí.
Předložený vynález se také týká farmaceuticky přijatelných adičních. solí a· komplexů sloučenin podle předloženého vynálezu.· V případech kdy 'sloučeniny podlé předloženého vynálezu mají jedno nebo více chirálních center, pak pokud není uvedeno jinak se předložený vynález také, týká. každé,.
.jednotlivé neracemické- sloučeniny, která .' může být· ,. 'způsoby. Podle- ' (S) konfigurace' syntetizována a připravena obvyklými předloženého vynálezu jsoué výhodné sloučenin obecného vzorce '(!).. ' éV případech,, kdy sloučeniny mají nenasycenou dvojnou vazbu uhlík-uhlík, spadají cis (Z) a trans (E) isomery do rozsahu předmětu předloženého vynálezu. V případech, kdy.sloučeniny mohou existovat v tautomerních formách jako jsou ketpOR’ enolové tautomery, .· jako jsou a ,, .každá tautomerní forma, spadá do rozsahu předmětu, předloženého vynálezu, ať již existuje’ v rovnovázeénebó je .uzamčena v jedné formě vhodnou substitucí R’. .
• ·
Sloučeniny obecného vzorce (I) inhibují vazbu vitronektinu a dalších peptidů, obsahujících motiv RGD, k receptorům vitronektinu. Inhibice receptorů vitronektinu na osteoklastech inhibituje osteoklastovou kostní resorpci a je použitelná pro léčení nemocí, ve kterých je kostní resorpce spojená s patologií, jako je osteoporóza a osteoartritida.
Předložený vynález se.také týká způsobu stimulace vytváření kosti, který zahrnuje podávání sloučeniny, které způsobuje vzrůst ., uvolňování osteokalcinu. Zvýšená produkce kosti představuje nepochybný příznivý účinek v případě chorobných stavů, ve kterých dochází k nedostatku ' mineralizované kostní hmoty nebo je’ požadována remodelace kosti, jako v případě léčení zlomenin a při prevenci kostních zlomenin. Onemocnění a metabolické poruchy, které vedou ke . ztráně kostní struktury, mohou také být příznivě-ovlivněny takovým způsobem léčby. Například hyperparathyroidismus, Pagetova nemoc,. hyperkalcemie při maligních stavech, osteolytické léze, vzniklé metastázami kostí, ztráta kostní hmoty v důsledku imobilizace nebo 'nedostatku sexuálního, hormonu, Behpetova nemoc, osteomalacie, hyperostóza a osteopetróza mohou být příznivě ovlivněny podáváním sloučeniny podle předloženého vynálezu.
Dále, jelikož sloučeniny ' podle předloženého vynálezu inhibují receptory vitronektinu v řadě různých typů buněk, tyto sloučeniny mohou být použitelné pro léčení zánětlivých poruch, jako je rheumatoidní artritida a psoriáza a kardiovaskulární onemocnění, jako je jsou ateroskleróza a
·.: · · 0 A A · · · A
A ·'···· · · · • · · · · ···· · * · ·
AAAA ·· 0 A A ·· AAAA restenóza. Sloučeniny obecného vzorce (I) podle předloženého vynálezu mohou být použitelné pro léčení nebo prevenci dalších onemocnění, zahrnujících neomezujícím způsobem thromboembolické poruchy, astma, alergie, syndrom dechové tísně dospělých, odhojení . štěpu, rejekce transplantovaných orgánů, septický šok, ekzém, kontaktní dermatitidu, autoimunitní zánětlivé onemocnění.
střevní onemocnění a další Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou také být použitelné při léčení zranění.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou také použitelné pro léčení, včetně prevence, angiogenních poruch. Výraz .angiogenní poruchy, jak je zde použit, zahrnuje stavy zahrnující abnormmální neovaskularizaci. Pokud růst nových krevních cév je příčinou onemocnění nebo přispívá' k jeho patologii, inhibice angiogenese snižuje škodlivé účinky onemocnění. Příkladem takového léčebného cíle je diabetická retinopatie. Jestliže je růst nových cév nutný pro podporu růstu nežádoucí tkáně, inhibice. angiogenese sníží zásobování této tkáně krví a tím přispívá ke snížení hmotnosti této tkáně v důsledku omezeného přiváděné krve. Příklady zahrnují růst nádorů, kde neovaskularizace je neustále nutná pro růst nádoru a pro vytváření metastáz nádoru. Sloučeniny podle předloženého vynálezu proto inhibují angiogenesi v nádorové tkáni, čímž dochází k prevenci metastáz nádoru a růstu nádoru.
Při použití způsobů podle předloženého vynálezu tedy inhibice angiogenese použitím sloučenin podle předloženého ·· ·>·· · · · ·· ·· · · « · · · · '·' · . · • · ····'·· · • · · · ······· · · • · · · · · ··· ···· ·· ·· · ·· ···· vynálezu může zlepšit symptomy onemocnění a v některých případech může způsobit vyléčení onemocnění.
Dalším terapeutickým cílem sloučenin podle předloženého vynálezu jsou oční onemocnění, při kterých dochází k neovaskularizaci. Taková oční onemocnění zahrnují neovaskulární poruchy týkající se rohovky, jako je transplantace rohovky, herpetická keratitida, luetická keratitida, pterygium a neovaskulární panus související s používáním kontaktních čoček. Další oční onemocnění také zahrnují s věkem související makulární degeneraci, .předpokládanou oční histoplasmózu, retinopatii při .nédospělosti a neovaskulární glaukom. '
Předložený vynález se dále týká způsobu inhibice růstu nádoru, který zahrnuje podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučeniny obecného vzorce (I) a antineoplastického činidla, jako je topotecan a cisplatin.
V obecném vzorci (I) je výhodným substituentem R1
» »
4« 4 4 4« . 4 4 4 4 4 4 4 . 4 « 4 « · 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4 4 • 4 4'· 4 4' 4 4 4« 4 4 4 0)
nebo ve kterém R' je Ci-4alkyl a R je .fenyl, benzyl >nebo-CH2CF3;
nebo R' a R společně vytvářejí
R2 je výhodně:
morfolinylový kruh.
Reprezentanty nových sloučenin jsou následující sloučeniny:
•podle předloženého vynálezu (±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-(trifluormethyl)fenyl]butanová kyselina;
x
(±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-[(N-methyl-N-fenylamino)karbonyl]-1,3-oxazol-2yl]butanová kyselina;
(±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-(4-( (morpholin-4-yl)· karbonyl] -1,3-oxazol-2-yl]butanová kyselina;
(±)— 4—[4—[2—[6—(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]-.
3-,(4- [[N-methyl-N- (2,2,2-trifluorethyl) amino] karbonyl] -1,3oxazol-2-yl]butanová kyselina;
(±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]butanová kyselina;
(±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-(3-methylthiazol-2-yl)butanová kyselina;
(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-(4-(2-(5,6,7,8-tetrahydro-l, 8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanová kyselina;
( + ) -4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]-3(pyridin-3-yl)butanová kyselina;
(S)-4-(4-(2-(6-(methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]-3(pyridin-3-yl)butanová kyselina; a (S)-3-(pyridin-3-yl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-l, 8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanová kyselina;
• · · ·· · 9 9 '·
999 9999999 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9
9999 ·« ·· · ··’ ···· nebo jejich farmaceuticky přijatelné sole.
V případech, kdy sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou mít jedno nebo více chirálních center, pak pokud není uvedeno jinak, se předložený vynález se také týká každé jednotlivé neracemické sloučeniny, která může být syntetizována a připravena obvyklými způsoby.
V.případech kdy sloučeniny mají nenasycenou dvojnou- vazbu uhlík-uhlík, pak . spadají cis (Z) a trans (E) isomerý. ďo rozsahu předmětu předloženého vynálezu. Význam libovolného .
substituentu v libovolném jeho-výskytu je nezávislý na jeho____ významu v libovolném jiném jeho výskytu nebo na- významu libovolného jiného substituentu. \ .
Předložený vynález se dále týká prekurzorů sloučenin -podle předloženého vynálezu'. Za- prekurzor· .jsou -považovány libovolné kovalentně vázané nosiče, které uvolňují účinnou látku obecného vzorce (I) in vivo. Předložený vynálezu se proto také týká- nových prekurzorů, které jsou také meziprodukty pro přípravu sloučenin obecného vzorce (laj , obecného vzorce (II) :
Zkratky a symboly běžně používané v peptidové a obecné chemii jsou zde používány pro popis sloučenin podle předloženého vynálezu. Názvosloví a zkratky aminokyselin jsou v souladu.s doporučeními IUPAC-IUB Joint Commission on
Biochemical Nomenclature, jak jsou popsány v Eur. J.
Biochem., 158, 9 (1984).
• 0 0000 ·· ·
• ·0 · · · • 0 0000 0 0 • 0
0000
Výraz Ci_4alkyl, jak je zde používán, znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu 1 až 4 atomů uhlíku a zahrnuje methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl a t-butyl. Libovolný Ci_4alkyl může být popřípadě substituován skupinou Rx, která se může nacházet na libovolném atomu uhlíku, jestliže substituce vede na stabilní strukturu a je možné ji vyrobit obvyklými způsoby syntézy. Vhodné skupiny Rx jsou Ci_4alkyl, OR*, SR*, Ci_ 4alkylsulfonyl, Ci_4alkylsulfoxyl, -CN, N(R*)2, CH2N(R*)2, N02, -CF3, -CO2R* -CON(R*)2, -COR*, -SO2N(R*)2, -NR*C(O)R*,
F, Cl, Br, I nebo CF3S(O)r, kde r je 0, 1 nebo 2, a R* je Ή, Ci_l_4alkyl, fenyl nebo benzyl.
Halogen nebo halo znamená F, Cl, Br, a I.
Ar, nebo aryl, jak je zde používán, znamená fenyl nebo naftyl nebo fenyl nebo naftyl substituovaný jedním až třemi substituenty, jako jsou substituenty definované v případě alkylu, obzvláště Ci_4alkyl, Ci_4alkoxy, Ci_4alkylthio, CF3, NH2, OH, F, Cl, Br nebo I.
Het,.' nebo· heterocyklus, označuje popřípadě substituovaný pěti- nebo šestičlenný monocyklícký kruh nebo devíti- nebo desetičlenný bicyklický kruhový systém obsahující jeden až tři heteroatomy, zvolené ze souboru, zahrnujícího atom dusíku, atom kyslíku a,atom síry, které jsou stabilní a je možno je vytvořit obvyklými způsoby chemické syntézy. Příklady heterocyklů jsou benzofuran, benzimidazol, benzopyran, benzothiofen, benzothiazol, furan, imidazol, • v ···· ·· ·. ·· ·« • ’·· · 9 · 9 9 9 9 '9 · ····· · e .· • 999.9999999 · 9 · 9 9 ' · · · · ' · ···· 99 '··- · ·· 9999 indolin,· morfolin, piperidin, piperazin, . pyrrol, pyrrolidin, tetrahydropyridin, pyridin, thiazol, oxázol, thiofen, chinolin, isochinolin a tetra- a perhydrochinoiin a isochinolin.' Libovolná kombinace až tři substituentu na Het kruhu, jako- jsou substituce definované výše pro alkyl, která je stabilní a je možno ji vytvořit obvyklými . způsoby· chemické syntézy, spadá do ...rozsahu předmětu předloženého vynálezu.
Pro. jisté skupiny jsou v následujícím popisu »používány zkratky. t-Bu označuje zbytek terč.-butyl, Boc označuje, zbytek t-butyloxykarbonyl, ' Fmoc označuje. zbytek fluorenylmethoxykarbonyl, .· Ph označuje zbytek fenyl, . Cbz označuje zbytek benzyloxykarbonyl, ' B.z označuje- zbytek benzyl, Et označuje ethyl, Ác označuje .acetyl·, Álk označuje) * ..i ’ v ’ .-.·'
Ci_4alkyl, Nph označuje 1- nebo 2-naftyl a cHex označuje' cyklohexyl.1 Tet označuje 5-tetrazolyl. . / . :
Pro jisté reagenty jsou v následujícím popisu používány zkratky. DCC označuje dicyklohexylkarbodiimid, . DMAP označuje dimethylaminopyridin, DIEA označuje diisopropylethylamin, EDC označuje hydrochlorid l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu. HOBt označuje. 1hydroxybenzotrřazol, THF označuje tetráhydrofuran, DIEA označuje diisopropylethylamin, DEAD označuje diethylazodikarboxylát,. PPh3 · označuje trifenýlfosfin, . ' DIAD označuje diisopropyl-azodikarboxylát,. DME označuje dimethoxyethan, DMF označuje dimethylformamid, NBS označuje N-bromsukcinimid, Pd/C označuje katalyzátor paládium na uhlí, PPA označuje kyselinu polyfosforečnou, DPPA označuje' t
• 9 9999
9 • 9
9
9 9
9999 99
99. 9 • 9 ·
9 9 9
9 9 9 999 · ' ·
9
9 ·
9 ·
9999 difenylfosforylazid, BOP označuje benzotriazol-l-yloxytris(dimethyl-amino)fosfonium hexafluorfosforečnan, HF označuje kyselinu fluorovodíkovou, TEA označuje triethylamin, TFA označuje kyselinu trifluoroctqvou, PCC označuje pyridinium chlorchromát.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu se připraví obecnými způosby, popsanými ve Schématech I-VI.
Schéma I
(a) CH3NH(OCH3) ;HCl, EDC, HOBt - H2O, Et3N, DME; (b) 4brombenzotrifluorid, sek.-BuLi, THF; (c) (EtO) 2P (O) CH2CO2Et, NaH, toluen; (d) H2, 10% Pd/C, EtOH; (e) BBr3, CH2C12; (f)
6-(methylamino)-2-pyridylethanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) 1,0 N NaOH, MeOH, potom acidifikace.
Vhodná alkoxyfenyloctová kyselina, například kyselina 4methoxyfenyloctová (I—1) , se přemění na deoxybenzoinový derivát 1-3 reakcí odpovídajícího N-methoxy-N-methylamidu (1-2) s metalovaným aromatickým derivátem, obecným způsobem, který popsal Weinreb (Tetrahedron Lett. 1981, 22, ___3815). Sloučenina- 1-3. se· přemění na α,β-nenasycený ester I4 pomocí známé Wittigovy reakce. Optimálně., se reakce se provádí použitím triethylfosfonoacetátu v přítomnosti, vhodné · báze, obecně hydridu sodného ‘ nebo bis (trimethylsilyl) amidu lithného, ..v aprotickém rozpouštědle jako je toluen, THF'nebo jejich směsi. Redukce olefinové skupiny 1-4 se optimálně·dosahuje ’hydrogenací v přítomnosti paládiového katalyzátoru, například paládia na aktivním uhlí, ve vhodném rozpouštědloe jako je EtOAc, MeOH, EtOH,· i-PrOH nebo jejich směsi. Methylether 1-5 může být štěpen bromidem boritým (BBr3) v inertním rozpouštědle, výhodně CH2CI2, ' nebo ethanthiolem (EtSH) a chloridem hlinitým (A1C13) v inertním rozpouštědle 'jako je CH2C12. Další * použitelné způsoby odstraňování methyletherových ochranných skupin jsou popsány v publikaci Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (publikoval.WileyInterscience). Výsledný fenol 1-6 se nechá reagovat -s 6(methylamino)-2-pyridylethanolem v kopulační reakci • · · · · · • · · · · * |3·· · ·
Mitsunobuova typu (Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Synthesis 1981, 1-28) pro získání 1-7. Reakce se zprostředkovává komplexem vytvořeným mezi azodikarboxylátovým diesterem jako je diethylazodikarboxylát nebo diisopropyl-azodikarboxylát a trifenylfosfiném a provádí se v aprotickém rozpouštědle, například . THF, 0Η2012 nebo DMF. Ethylester . 1-7 ’ se hydrolyzuje použitím vodné báze, například LiOH, ve vodném THF nebo, Na.OH ve vodném methanolu nebo ethanolu a meziproduktová karboxylátová sůl se okyselí vhodnou kyselinou,, například TFA nebo HCl, pro získání’.karboxylové kyseliny 1-8. .; Alternativně, je-li to požadováno, může být izolována -meziproduktová karboxylátová sůl nebo může být připravena karboxylátová sůl volné . karboxylové kyseliny způsoby dobře, známými.odborníkům v oboru.
Schéma II
HO.
TIPSO,
Br
Br
,COzBn f TIPSO /=( Ο^χ,Ν
GO2CH3 ' 7 • « _ · 0 0 «>
>0 0
(a) Triisopropylsilylchlorid, imidazol, DMF;’ (b) methyl-3(benzyloxykarbonyl)-3-butenoát, Pd(0Ac)2, P(tol)3, (iPr)2NEt, propionitril; ,(c) H2, 10% Pd/C, - EtOAc;' (dj.
hydrochlorid benzylesteru se.rinu, EDO, HOBt . H2O, Et3N, ' DMF; (e) Burgessův reagent, THF; (f) Cl3CBr, DBU, CH2G12; (g)-TBÁF, THF; (h) (Boc)20, pyridin, THF; (i) H2, 10% Pd/C,’'
EtOH; (j) '. N-methylaňilin, EDO, BPFFH, (i-Pr)2NEt, pyridin, DMF;, (k): 4 N HCl/dipxane; (1) 6- (methylamino) -2-pyrÍdylethanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (m) LiOH, THF, H2O, potom acidifikace.
• · · · *9 • 9 ·
• · · • · * • · · · • · · · * · · . · 0
Φ
Halogenfenolový derivát, například 4-bromfenol (II-l), se přemění na vhodně chráněný derivát, například 4-brom-l(triisopropylsilyloxy)benzen (II-2). Ochranná skupina fenolu musí být slučitelná s následujícími chemickými reakcemi a-musí být možné ji selektivně odstranit, pokud je to požadováno. Způsoby ochrany fenolů jsou popsány v standardních referenčních monografiích jako je Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (publikoval WíleyInterscience). Sloučenina II-2 reaguje s methyl-3(benzyloxykarbonyl)-3-butenoátem v reakci Heckova typu (viz Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345) pro Získání II-3.
Reakce je zprostředkována katalyzátory obsahujícími paládium (0) a obecně se provádí v inertním rozpouštědle jako je CH3CN, propionitril nebo toluen, . v přítomnosti vhodného vychytávače kyselin jako je triethylamin (Et3N) nebo diisopropylethylamin .( (i-Pr) 2NEt) . Typické zdroje paládia (0) zahrnují 'octan paladnatý. (Pd(OAc)2) a chlorid paladnatý (PdCl2) a často se také používají fosfinové ligandy, například trifenylfosfin (PPh3) nebo tri-orthotolylfosfin (P(tol)3)'. a, beta-nenasycený ester II-3 se redukuje na nasycenou sloučeninu II-4 reakcí s plyným vodíkem v přítomnosti vhodného katalyzátoru, výhodně kovového paládia na aktivním uhlí (Pd/C), v inertním rozpouštědle, obecně MeOH, EtOH, EtOAc nebo jejich směsi. Karboxylová kyselina 11-4' se přemění na aktivovanou formu použitím například EDC a HOBt, SOC12, nebo 1,1'karbonyldiimidazolu (CDI)‘, a aktivovaná forma se následně nechá reagovat s vhodným aminem, například benzylesterem serinú, ve vhodném rozpouštědle jako je DMF, pro získání
• « · · Φ ύ
ΙΙ-5. V závivlosti na tom, zda je potřebná neutralizace kyseliny, může být přidána báze jako je triethylamin (Et3N) , diisopropylethylamin ((i-Pr)2NEt) nebo pyridin. Je známo mnoho dalších způsobů přeměny karboxyiové kyseliny na amide a mohou být nalezeny v standardních referenčních knihách jako je Compendium of Organic Synthe.tic Methods, Vol. I - VI (publikoval Wiley-Interscience) nebo Bodansky, The Practice of Péptide Synthesis (publikoval S.pringerV.erlag) . II-5, se potom přemění na oxazolový derivát II-7.
Několik způsobů je známo pro přeměnu amidoalkoholů na oxazoly (Meyers, Tetrahedron, 1994, 50, 2297-2360; Wipf, J. Org.' Chem., t 1993, 58, 3604-3606). Například může být ami do alkohol 11-5 přeměněn, nejprve na oxazolin 11-6:.. Tato, transformace se obecně dosahuje za dehydratačních podmínek jako je reakce s Burgessovým reagentem v THE. Oxazolin II-6 se potom oxiduje na oxazol, II-7 použitím, například, bromtrichlormethanu a DBU v ,CH2C12 (Williams, Tetrahedron Letters, 1997, 38, 331-334) nebo CuBr2 a DBU ve vhodném rozpouštědle jako je EtOAc/CHCl3 nebo CH2C12 (Barrish, J. Org. Chem.' 1993, 58, 4494-4496). Odstranění silylové ochranné skupiny za standardních fluoridových podmínek (viz Greene citovaný výše) dává fenol II-8, který se přemění na terč.-butyloxykarbonátový derivát 11-9 použitím di-terc.butyldikarbonátu v přítomnosti báze, obecně pyridinu, v polárním neutrálním rozpouštědle jako je THF. Tato nová ochranná ' skupina· se volí způsobem, který byl popsán výše. Sloučenina II-9 se přemění na derivát představovaný karboxylovou, kyselinou 11-10 hydrogenací výše popsaným způsobem a 11-10 se přemění na amide 11-11 způsobem, který v obecnosti popsali Carpino ;a Ayman (J. Am. Chem. Soc.
♦ « A AAAA • A · • A
A A A β · · • •A A ··
1995, 117, 5401-5402). Za těchto podmínek se karboxylová kyselina 11-10 nechá reagovat s vhodným aminem, například N-methylanilinem, . v přítomnosti bis(tetramethylen)fluorformamidinium hexafluorfosfátem (BPFFH) a vhodnou bází, obecně Et3N,. (i-Pr)2NEt, pyridinem nebo jejich směsemi, v polárním neutrálním rozpouštědle jako je DMF. Terc.butyloxykarbamátová ochranná skupina se odstraní za standardních kyselých podmínek (viz Greene uvedený výše), a výsledný fenol 1.1-12 se přemění na 11-14 způsoby popsanými ve Schématu I.
Schéma III
(a) EtOH, řeflux; (b) 4-(benzyloxy)beňzaldehyď, NaOEť,
EtOH; (c) A12O3, NaOCl, CH3CN; ' (d) Et3SiH, BF3‘ . OEt2,
CH2C12; (e) n-Bu4NF, THF; (f) (EtO) 2P (=0) CH2CO2Et,' NaH, THF, řeflux; (g) Mg, MeOH;, (h) BF3 . OEt2, EtSH; (i) 6(methylamino)-2-pyridylethanol, DIAD, (?hj3P, THF; (jj < LiOH, THF, H20, potom, acidifikace.
Thiazolový derivát III-3 se připraví kondenzací 2kyarioac.etamidu (III-l) a 3-brom-l,1,1-trifluoracetonu (III2.) v řefluxujícím ethanolu vhodnou modifikací způsobu, který popsali Schaefer a Gewald (J. Pract. Chem. 1974, 316,
684 + 692) přo,· přípravu 4-fenyl-2-(kyanomethyl)thiazolu.
Aldolová kondenzace III-3 s vhodným, způsobem substituovaným ..__L benžaldéhydovým derivátem, například, -1 · ·4(bénzyloxy)beňzaldehydem, dává· sloučeninu IIÍg4.·Reakce je katalyzována vhodnou bází, výhodně ethbxidem sodným a provádí se v polárním' rozpouštědle,· ','obecně · ethanolu. Époxidace III-4 pro získání' III-5 se' dosahuje chlornanem sodným' v přítomnosti neutrálního oxidu' hlinitého obecným způsobem, který popsal Fouc.aud (Syrithesis 1987, 9, 854856). Mohou také býť použity další známé epoxidační podmínky, jako je mCPBA, bázický peroxid vodíku nebo bázický terč.-butylperoxid vodíku, pokud jsou tyto podmínky slučitelné s funkční (skupinou substrátu. Vystavením triethylsilanu v přítomnosti vhodné Lewisovy kyseliny jako je, BF3· . OEt2 nebo vhodné protonové.kyselině, například TFA nebo HCI, se epoxidový kruh IÍI-5 redukčně otevře vysoce regioselektivním způsobem pro získání ketonu III-6, spolu s , odpovídajícím trimethylsilyl-kyanohydrinem III-6. Tento kyanohydrin se výhodně přemění na keton TII-6 vystavením
• A . A ' • * · .
• » · '*'
tetrabutylamonium fluoridu ve vhodném rozpouštědle, obecně THF. Tento keton reaguje v reakci Wittigova typu s triethyl-fosfonoacetátem v přítomnosti vhodné báze, například LiN(TMS)2 nebo NaH, v polárním aprotickém rozpouštědle, výhodně THF,- pro získání a, β-nenasýceného esteru III-7 ve formě směsi olefinových isomerů. Reakcí s kovovým hořčíkem v MeOH se olefin 111-7 selektivně redukuje pro získání nasyceného derivátu III-8. Ethylester se přemění. na methylester za těchto podmínek. Odstranění benzylováskupiny se dosahuje ethanthiolem spolu s BF3 . OEt2 pro získání fenolu III-9, který se přemění na TII-10 způsoby, které byly popsány ve Schématu I-.
Schéma 'IV
... 5
(a) BnCl, K2CO3, aceton; (b) 5-methyíthiazol, n-BuLi, THF;
(c) (EtO) 2P (=0) CH2CO2Et, NaH, THF; (d) Mg, MeOH; (e) BF3 . OEt2, EtSH; (f) 6-(methylaminó)-2-pyridylethanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) LiOH, THF, H20, potom acidifikace.
Fenolová skupina komerčně dostupného methyl-4hydroxyfenylacetátu (V-l) se chrání vhodnou ochrannou skupinou, například methyletherem, benzyletherem nebo ťriisopropylsilyletherem. Ochrana fenolů . je dobře známa odborníkům v oboru a reprezentativní ochranné skupiny jsou popsány v standardních referenccích jako je Greene Protective Groups in Organic Synthesis (publikoval.Wiley-T-nť.e.r-s.c.i.ence.)____Výsledná sloučenina (IVr2) reaguje s vhodným·
Grígnardovými nebo organolithiovými reagenty pro získání ketonů. Například 2-lithio-5-methylthiazol, připravený z .5methylthiazolu a n-butyllithia, reaguje s IV-2 v etherovém rozpouštědle jako je THF nebo DME, pro. získání ketonového derivátu IV-3. Tento keton se potom přemění na IV-6 způsoby, které byly popsány ve Schématu III.
► 9 • Λ • · • ···«
Schéma V
(a). ŤBDMSCl, *KCN, Znl2, benzyloxybeňzylchlorid;
CH3CN; ’ (b) LÚA,.THF, potom 4(c) TBAF, THF; (d) (EtO) 2P (-0) CH2CO2Et, NaH, THF; (e) H2, Pd/C, EtOH; (f) 6(methylamino)-2-pyridylethanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) LiOH, THF, H20, potom acidifikace.
Zvolený aromatický , aldehyd, například 3pyridinkarboxaldehyd.(V-l), se přemění na silylově chráněný » ť kyanohydrin jako- je V-2 reakcí s kyanidovým iontem v přítomnosti vhodného silylhalogenidu, například trimethylsilylchlořidu (TMSCI), triišopropylsilylchloridú’
,. (TIPSCI) nebo terč.-butyldimethylsilylchloridu (TBDMSCI . nebo. TBSCI). Typické zdroje kyanidových iontů- ..zahrnují .
kyanid draselný (KCN) , kyanid sodný - (ŇaCN),' J a . tetrabutylamonium kyanid (Bu4NCN) . Reakce se často provádí
V · · ' -
- v přítomnosti katalytického množství-. Lewisovy kyseliny, obecně Z-nI2, a výhodné je polární , aprotické rozpouštědlo ' '>
jako je acetonitril (CH3CN). Mohou .být použity další, chráněné kyanohydriny,. například ethoxyethylově chráněný kyanohydrin, pokud .je .ochranná skupina slučitelná s následujícími chemickými reakcemi a může, být selektivně odstraněna,, když je to · požadováno. Diskuze ochranných
- sknoln . může být ‘ nalezena v standardních referenčních publikacích jako je Greene, Protectívé Groups in Organic Synthesis (publikoval Wiley-Interscience)., Sloučenina V-2 se C-alkyluje vhodným benzylhalogenidem, například 4benzyloxybenzylchloridem, pro získání V-3. Reakce zahrnuje počáteční deprotonaci pro získání meziproduktového aniontu, který se neizoluje, ale spíše se nechá reagovat in šitu s alkylačním činidlem. Typické báze pro tento- typ reakce zahrnují lithium diisopropylamid (LDA) a lithium hexamethyldisilazid (LiN(TMS)2) a jsou výhodná polární aprotická rozpouštědla jako je THF nebo DME. TBSkyanohydrin V-3 se výhodně přemění na keton V-4 reakcí s tetrabutylamonium fluoridem (TBAF). Procedura se dvěma kroky může také být použita pro provedení této transformace. Například silylová ochranná skupina V-3 může být odstraněna za kyselých podmínek jako například reakci s HF pro získání kyanohýdrinu, který může být přeměněn na keton V-4 reakcí s vhodnou bází. Sloučenina V-4 se přemění na oc, β-nenasycený ester V-5 použitím známé Wittigovy reakce. Typicky se reakce. provádí použitím triethylfosfonoacetátu v přítomnost vhodné báze, obecně hydridu sodného (NaH) nebo LiN(TMS)2 . v aprotickém rozpouštědle jako je toluen, THF nebo jejich směsi. Redukce olefinové skupiny V-5 se' optimálně dosahuje hydrogenací v přítomnosti paládiového. katalyzátoru, například paládia na aktivním uhlí, ve vhodném rozpouštědle jako je EtOAc, MeOH, EtOH, i-PrOH nebo jejich směsi. Za těchto podmínek se benzylová ochranná skupina na fenolu odstraní také. Výsledný fenol V-6 se nechá reagovat s 6-(methylamino)-2pyridylethanolem. v kopulační reakci Mitsunobuova. typu -(-Θ-rga-ni-e- Rea ct ion s .3,9.92, A2.,. „335-656; Synthesis' 19.81, 1-28) pro získání V-7. Reakce se mediuje komplexem vytvořeným mezi azodikarboxylátovým diesterem jako je diethylazodikarboxylát nebo diisopropyl-azodikarboxylát a trifenylfosfinem a typicky se provádí v aprotickém rozpouštědle, například THF, CH2C12 nebo DMF, Ethylester V7 se hydrolyzujepoužitím vodné báze, například LiOH nebo NaOH ve vodném dioxanu, THF, methanolu nebo ethanolu a meziproduktová karboxylátová sůl se okyselí vhodnou kyselinou, například TFA nebo HCI, pro získání karboxylové kyseliny V-8. Je-li to požadováno, může být izolována meziproduktová karboxylátová sůl. Kromě toho mohou být připraveny vhodné sole karboxylové kyseliny nebo aminu způsoby dobře známými odborníkům v oboru.
• ·
(a) akryloyl chlorid, (i-Pr)2NEt, CuCl, CH2C12; (b) 3brompyridin, Pd(OAc)2, P(tol)3, . (i-Pr)2NEt, DMF; (c)' 4methoxybenzylmagnesiumchlorid, Znl2, CuBr . DMS, THF, toluen; (d) NaOEt, THF; (e) A1C13, EtSH, CH2C12; (f) 6(methylamino) -2-pyridylethanol, DIAD, (Ph)3P,. THF; (g) NaOH, dioxan, H2O, potom acidifikace.
·· » 9 9 •9 ····
9» · > 9 · • 9999 99 9 »9 9 9 9 «
9 99 9« kyseliny, imidu VI-2.
například Reakce se
Komerčně dostupný (4S,SR)-1,5-dimethyl-4-fenyl-2imidazolidinon (VI-1) se nechá reagovat s vhodným α, βnenasyceným chloridem akryloýlchloridem, pro získání zprostředkovává vhodnou bází, typicky triethylaminem (Et3N) nebo diisopropylethylaminem ((i-Pr)2NEt) a provádí se v přítomnosti' katalytického množství halogenidu mědi, například chloridu měďného. Výhodné je neutrální rozpouštědlo jako je CH2C12. Sloučenina VI-2 reaguje s vhodným arylhalogenidem jako je 3-brompyridin v reakci Heckova typu (viz Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345) pro získání VI-3. Reakce, se zprostředkovává paládiem (0) a --obecně-.se provádí ..._y_inertním _rozpouštědle jako je CH3CN, propionitril, toluen nebo DMF, v přítomnosti vhodného vychytávače kyselin jako je triethylamin . (Et3N) nebo diisopropylethylamin ( (i-Pr) 2NEt). Typické zdroje paládia (0) zahrnují octan paladnatý (Pd(0Ac)2) achlorid paladnatý (PdCl2) a často se používají fosfinové ligandy, například trifenylfosfin (PPh3j nebo tri-ortho-tolylfosfin (P(tol)3). Sloučenina VI-3 reaguje s organickou sloučeninou mědi v 1,4-adiční reakci pro získání konjugovaného adičního produktu VI-4 (viz Melnyk, O.; Stephan, E.; Pourcelot, G.; Cresson, P. Tetrahedron 1992, 48, 841-850; Bongini, A.;
Cardillo, G. ; Mingardi, A.; Tomasini, . C. Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1457-1466; van Heerden, P. S.;
Bezuidenhoudt, B. C. B.; Ferreira, D. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 1821-1824. (Přehled reakcí organických sloučenin mědi může být nalezen v Posner, G. Organic Reactions 1972, 19, 1-1 13; Lipshutz, B. Organic Reactions 1992, 41, 135631). Vytváření organických sloučenin mědi může být
0000 ·»·· 00 0 00 0 0 0' 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0. » 0 -0 *000 000000« 0 0 · :‘ 0.·' 0 0. 0 0.0 0000 00 00 0 00 ¢dosaženo přidáním organolithiového nebo organohořčíkového reagentů, například 4-methoxybenzylmagnesiumchloridu, do zdroje jednomocné mědi, například ČuCl, CuBr . DMS nebo Cul v inertním rozpouštědle, jako je Et2O, THF, DME, toluen nebo jejich směsi. Diastereoselektivita reakce může ‘-být zvýšena jistými Lewisovými kyselinami, například. MgBr2, Bu2BOTf, nebo Znl2. Chirální auxiliarít.a VI-4 se výhodně ; odstraní ethanolýzou· zá bázických podmínek. Například zpracování ; VI-4, ethoxidem ' sodným v THF dává . VI-5., Methylether VI-5 může být štěpen bromidem boritým (BBr3) v inertním rozpouštědle, výhodně CH2C12, nebo ethanthiolem (EtSH) a chloridem hlinitým (A1C13) v inertním...
.„rozpouštědle, jako' je CH2C12, pro/'Získání ·fenolu VI-6.s Další použitelné způsoby odstranění methyletherových ochranných skupin jsou popsány v standardních'referenčních publikacích (viz Schéma V) . Fenol VI-β se přemění; na VI-8 způsobem popsaným ve Schématu V. ' i ' ’ . ·· íť.
Amidové kopulační reagenty, jak'jsou1zde uváděny, znamenají reagenty,. které mohou, být použity pro vytvoření peptidových .vazeb. Typické, kopulační způsoby aktivované anhýdríďy a estery-1 Reagenty jako ' jsou EDC, · DCC, hydroxysukcinimid a oxalylchlorid jsou typické.
používají karbodnmidy, a halogenidy kyselin. DPPA, BOP, HOBt,. NKopulační způsoby vytváření peptidových vazeb jsou obecně v oboru velmi dobře, známy. Způsoby peptidové syntézy' jsou obecně popsány v publikaci Bodansky a kol., The Practice;of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984, Ali a kol., J. Med. Chem., 29/984 (1986) a J. . Med. Chem.,, 3.0, ·· »· • ♦» · • · ♦ • · · • · « ·· ···· ·* ·«»·· • · · • · • · · • · * ···· ·· ·· · ♦ · · • · ♦ · • · · ·.· · • · · ·· · . 2291 (1987) obecně. ilustruj i používané techniky a jsou zde zahrnuty jako reference.‘
Typicky se amin nebo anilin kopulují za jejich volnou aminovou skupinu k vhodnému substrátu, tvořenému karboxylovou kyselinou, používaje vhodné karbodiimidové kopulační činidlo, jako je N,N’-dicyklohexylkarbodiimid (DCC), popřípadě v přítomnosti katalyzátorů jako jsou 1.4 . ·' hydroxyběnzotriazol (HOBt) a ’ dimethylaminopyridin (DMAP) .
Další' způsoby, jako, je vytvářeni aktivovaných esterů, anhydridů nebo halogenidůkyselin volného karboxylu vhodně chráněného kyselinového substrátu a následná reakce s ____________ volným 'aminem· vhodně ' chráněného' aminu,__popřípadě, v __ přítomnosti báze, jsou také vhodné. 'Například·se chráněná Boc-aminokyselina nebo ’ Cbz-amidinobenzoová kyselina zpracovává v bezvodém rozpouštědle jako je, methylenchlorid nebo tetrahydrofuran (THF) , v přítomnosti báze jako, je Nmethyl-morfolin, DMAP nebo trialkylamin, -isobutylchlormravenčanem pro vytvoření aktivovaného anhydridů, který se následně nechá reagovat s. volným aminem- druhé *' s ’ chráněné aminokyseliny nebo anilinu. ...
Použitelné meziprodukty pro přípravu sloučenin obecného vzorce (I), ve kterém R2 je benzimidazol, jsou popsány.v .t- Nestor a kol., J. Med, Chem. 198.4, 27, 320. Representativní způsoby přípravy.benzimidazólových sloučenin, použitelných < ‘ -jako' meziprodukty podle předloženého vynálezu, jsou také v oboru běžně a mohou být nalezeny' například v EP-A 0 381 . 033.
• · · · • · ·
Adiční sole kyselin sloučenin podle předloženého vynálezu se připraví standardním způsobem ve vhodném rozpouštědle z výchozí sloučeniny a přebytku kyseliny jako je kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina fluorovodíková, kyselina sírová, kyselina fosforečná, kyselina octová, kyselina trifluoroctová, kyselina maleinová, kyselina jantarová nebo kyselina methansulfonová. Jisté sloučeniny vytvářejí vnitřní sole nebo zwitteriony, které mohou být přijatelné. Kationtové sole se připraví zpracováním výchozí sloučeniny přebytkem alkalického reagentu. jako je hydroxid, uhličitan nebo alkoxid, obsahujícího vhodný kationt, nebo vhdoným organickým aminem. Kationty jako jsou Li+, Na+, K+, Ca++, Mg++ a NH4+ jsou specifické příklady kationtů přítomných ve farmaceuticky přijatelných solích.
Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozic, které obsahují sloučeninu obecného vzorce.
(I) farmaceuticky přijatelný nosič. V souladu š tím mohou být .sloučeninyobecného vzorce (I) použity pro výrobu léčiva. 'Farmaceutické kompozice sloučenin obecného vzorce (I) připravené zde uvedeným způsobem mohou být vytvořeny jako prášky pro parenterální rekonstituovány přidáním roztoky nebo .lyofilizované podávání. Prášky mohou být vhodného ředidla nebo dalšího farmaceuticky přijatelného nosiče před použitím. Kapalné přípravky mohou být pufrované isotonické vodné roztoky. Příklady vhodných ředidel jsou normální isotonický solný roztok, standardní 5% dextróza ve vodě nebo pufrovaný roztok octanu sodného nebo amonného. Takové přípravky jsou obzvláště vhodné pro parenterální
V podávání, ale mohou také být použity pro orální podávání nebo obsaženy v inhalačním přístroji nebo rozprašovači s odměřenou dávkou pro vdechnutí. Také může být žádoucí přidat excipienty jako je polyvinylpyrrolidon, želatina, hydroxycelulóza, arabská guma, polyethylenglykol, manitol, chlorid sodný nebo citronan sodný.
Alternativně mohou být' tyto sloučeniny enkapsulovány, tabletovány nebo připraveny jako emulze nebo sirup pro orální podávání. Mohou být přidány farmaceuticky, přijatelné pevné nebo kapalné nosiče pro zlepšení nebo stabilizaci kompozice nebo pro usnědnění přípravy kompozice. Pevné '.nosiče zahrnují škrob, laktózu, dihydrát síranu vápenatého,· lerra alba, stearan hořečnatý nebo kyselinu stearovou, talek, pektin, arabskou gumu, agar nebo želatinu. Kapalné nosiče zahrnují sirup, podzemnicový olej, olivový olej, .solný roztok a vodu. Nosič také může zahrnovat materiál pro ..trvalé Uvolňování jako je glycerylmonostearát nebo glyceryldistearát, samotné nebo spolu s voskem. Množství pevného nosiče se mění, ale výhodně je v rozmezí od 2 0 mg do asi 1 g na jednu dávkovou jednotku. Farmaceutické přípravky se vytvářejí obvyklými způsoby farmaceutické techniky a zahrnují mletí, míchání, granulaci a lisování, je-li to nutné, do tabletové formy; nebo mletí, míchání a plnění do tvrdých želatinových kapslí. Pokud je použit kapalný nosič, přípravek je ve formě sirupu, elixíru, emulze nebo vodné nebo bezvodé suspenze. Takové kapalné přípravky mohou být podávány přímo p.o. nebo plněny do měkkých želatinových kapslí.
Pro rektální podávání mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu také zkombinovány s excipienty jako je kakaové máslo, glycerin, želatina nebo polyethylenglykoly a odlévány do čípkové formy.
Sloučeniny zde popsané jsou antagonisté receptorů vitronektinu a jsou použitelné pro lečem onemocněni, ve kterých základní pathologie souvisí s ligandem nebo uňkou, které interagují s receptorem vitronektinu. Například jsou tyto sloučeniny použitelné pro léčení onemocnění, ve kterých patologií je zťrátako kostní hmoty. Proto jsou popisované sloučeniny použitelné pro léčení ostoeporózy, hyperparathyroidismu, Pagetovy nemoci,, hyperkalcemie související s maligními stavy, osteolytických lézí vytvářených metastázami v kostech, ztráty. kostní hmoty v důsledku imobilizace nebo nedostatku sexuálního hormonu.
t Předpokládá se také, že sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou použitelné jako protinádorová, antiangiogenní, protizánětlivá a anti-metastatlcká činidla a že jsou použitelná při léčení aterosklerózy a restenózy.
Sloučenina se podává buď orálně .nebo parenterálně - pacientovi takovým způsobem, aby koncentrace látky byla dostatečná pro inhibici kostní resorpce nebo jiné podobné , indikace. Farmaceutická kompozice obsahující sloučeninu se podává v orální dávce v rozmezí mezi přibližně 0,1 až ’ přibližně 50 mg/kg způsobem slučitelným se stavem pacienta.’
Výhodně je orální dávka přibližně 0,5 až přibližně 20 mg/kg. Pro akutní terapii je výhodné parenterální podávání. Intravenózní infúze peptidu v 5% dextróze ve vodě nebo
_ “ZA — ······· ··· « · · ··· • « · · 2 AA AA • · · *· • '·· Á ··
A ·· A · · ** • · · · · · A
normálním fyziologickém roztoku nebo podobném přípravku s
vhodnými excipienty je nejúčinnější, ačkoliv j ednorázová
intramuskulární injekce je také použitelná. Typicky je
parenterální dávka přibližně 0,01 až přibližně 100 mg/kg; výhodně v rozmezí od 0,1 do 20 mg/kg. Sloučeniny se podávají jednou až čtyřikrát denně v množství, potřebném pro dosažení celkové denní dávky přibližně 0,4 až přibližně 400 mg/kg/den. Přesné množství a způsob podávání sloučenin se snadno stanoví způsoby obvyklými v oboru porovnáním hladiny činidla v krvi s koncentrací potřebnou k dosažení terapeutického účinku.
Předložený vynález se dále týká způsobu léčení osteoporózy nebo inhibice ztráty kostní hmoty, který zahrnuje podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučeniny obecného vzorce (I) a dalších inhibitorů kostní resorpce, jako' jsou bisfosfonáty (například allendronát), hormonální nahrazovací terapie, anti-estrogeny nebo kalcitonin. Kromě toho se předložený vynález dále týká způsobu léčení použitím sloučeniny podle předloženého vynálezu a anabolického činidla, jako jsou proteiny morfogeneze kosti, iproflavon, které jsou použitelné pro prevenci ztráty kostní hmoty a/nebo pro zvýšení kostní hmoty.
Dále se předložený vynález týká způsobu inhibice růstu nádoru, který zahrnuje podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci. sloučeniny obecného vzorce (I) a antineoplastického činidla. Sloučeniny typu analogů kamptothecinu, jako jsou topotecan, irinotecan a 9aminokamptothecin a koordinační komplexy platiny jako je • Φ φφφφ φφ
5,004,758,
4,513,138,
4,604,463,
4,399,276,
1987, 30, 1774, International Congr.
cisplatin, ormaplatin a tetřaplatin, jsou dobře známé skupiny antineoplastických činidel. Sloučeniny třídy analogů kamptothecinu jsou popsány v U.S. patentech č.
4,473,692, 4,545,880 4,342,776, v publikovaných EP patentových přihláškách 0 418 099 a 0 088 642, v článcích Wani a kol., J. Med. Chem., 1986, 29, 2358, Wani a kol., J. Med. Chem., 1980, 23, 554, Wani a kol., J. Med. Chem.
a Nitta a kol., Proč. 14th
Chemotherapy, 1985, Anticancer Section 1, 28, které jsou zde zahrnuty jako reference. Koordinační komplex platiny, cisplatin, je dostupný pod jménem Platinol® společnosti Bristol Myers-Squibb Corporation. Použitelné přípravky 'cisplatinu jsou popsány v U.S. patentech č. 5,562,925 a 4,310,515, které jsou zde zahrnuty jako reference.
Ve způsobu inhibice růstu nádoru, který zahrnuje podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučeniny obecného vzorce (I) a antineoplastického činidla, koordinační sloučeniny platiny, například cisplatinu, mohou být účinné látky podávány pomalou intravenózní infúzí. Výhodný nosič je směs dextróza/solný roztok obsahující manitol. Dávkovači schéma koordinační sloučeniny platiny může být v rozmezí od přibližně 1 do přibližně 500 mg na čtvereční metr (mg/m2) povrchu těla v průběhu ,léčení. Infúze koordinační sloučeniny platiny mohou být prováděny jednou až dvakrát týdně a týdenní ošetření mohou být opakována několikrát. Při použití sloučeniny třídy analogů kamptothecinu při parenterálním podávání se obecně používá terapie s dávkami od přibližně 0,1 do přibližně 300,0 mg/m2 povrchu těla ♦ A AAA· * · · · A A A A A A · A A « •A AA A A A A • AAA AA AA A AA AAAA denně po přibližně pět po sobě následujících dni. Nejvýhodněji se v případě topotecanu používá od přibližně 1,0 do přibližně 2,0 mg/m2 povrchu těla denně po přibližně pět po sobě následujících dní.
Výhodně je terapie opakována alespoň jednou po přibližně sedmi dnech až přibližně dvaceti osmi dnech.
Farmaceutická kompozice může být připravena tak, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I) a antíneoplastické činidlo ve formě jediného přípravku,, ale podávání ve formě různých přípravků je výhodné. Pokud jsou obě činidla připravena ve formě roztoku, mohou být obsažena v infúzním/injekčním systému pro současné podávání nebo v tandémovém uspořádání.
Pro výhodné podávání sloučeniny obecného vzorce (I) a antineoplastického činidla ve stejnou dobu nebo různých dobách byla připravena souprava, která obsahuje látky., v jednom obalu, jako je krabice, karton nebo jiný obal, jednotlivé láhve, sáčky, nádobky nebo jiné nádoby, které každá obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce (I). pro parenterální podávání, jak bylo. popsáno výše a účinné množství antineoplastického 'činidla pro parenterální podávání, jak bylo popsáno výše. Taková souprava může například obsahovat farmaceutická činidla v oddělených nádobách nebo v téže nádobě, popřípadě v lyofilizované formě; a nádoby s roztoky pro rekonstituci. Obměnou této formy je zahrnutí roztoku pro rekonstituci a lyofilizované látky ve dvou komorách jediné nádoby, jejichž obsahy mohou • · · · · · být smíchány před použitím. V takovém uspořádání mohou*být antineoplas.tické činidlo a sloučenina podle předloženého vynálezu plněny odděleně ve dvou nádobách nebo lyofilizovány spolu jako prášek a plněny do jedné nádoby.
Pokud jsou obě činidla ve formě roztoku, mohou být obsaženy v infúz.ním/inj ekčním systému pro současné podávání nebo v tandémovém uspořádání. Například sloučenina obecného vzorce (I). může mohou být v i,v. injektovatelné formě nebo v infúzním vaku, spojeném trubicí . s antineoplastickým činidlem v druhém infúzním vaku. Při použití takového, systému pacient dostává počáteční jednorázovou injekci nebo. infúzi sloučeniny obecného vzorce . ( I) následovanou infúzí antineoplastického činidla. '
Sloučeniny mohou být testovány v jednom z řady- biologických testů pro určení koncentrace sloučeniny, která je. potřebná' pro dosažení.určitého farmakologického účinku.
Inhibice vazby vitronektinu
Vazba [3H] -SK&F-10726Q v pevné fázi k ανβ3·*
Lidský, placentový nebo lidský destičkový ανβ3 (0,1-0,3 mg/ml) v pufru T (obsahujícím 2 mM CaCl2 a 1% oktylglukosidu) byl zředěn pufrem T obsahujícím 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2 (pufr A) a 0,05% NaN3 a potom okamžitě přidán do 96-jamkových ELISA destiček (Corning, New York, NY) v koncentraci 0,1 ml na jamku. Do každé jamky bylo přidáno 0,1 - 0,2 pg ανβ3· Destičky byly inkubovány •4 4444 »444 44 · ·· ·· • 4 4 4 4 4 4
4 4 4 4 4 ·
4 4 4 4 4 4 ’ 4 4 4
4 4 4 4 4 ·· · 44 444 4 přes noc za teploty 4 °C. V okamžiku pokusu byly jamky promyty jednou pufrem A a byly inkubovány s 0,1 ml 3,5% hovězího sérového albuminu v témže pufru po dobu 1 hodiny za teploty okolí. Po inkubaci byly jamky úplně odsáty a promývány dvakrát 0,2 ml pufru A.
Sloučeniny byly rozpuštěny v 100% DMSO p»ro získání 2 mM zásobního roztoku, který byl zředěn vazebním pufrem (15 mM Tris-HCl (pH 7,4), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2) na konečnou koncentraci sloučeniny 100 μΜ. Tento roztok potom byl zředěn na požadovanou konečnou koncentraci sloučeniny. Různé koncentrace -neoznačených anťagonistů (.0,001 - 100 μΜ) byly přidány do jamek trojmo, následovány přidáním 5,0 nM [3H]-SK&F-107260 (65 - 86 Ci/mmol).
Destičky byly inkubovány po dobu 1 hodiny za teploty okolí. Po ukončení inkubace byly .jamky úplně odsáty a promývány jednou 0,2 ml ledového pufru A způsobem od-jamky k jamce. Receptory byly solubilizovány 0,1 ml 1 % SDS a vazba [3H]SK&F-107260 byla určena kapalinovým scintilačnim počítačem s přidáním 3 ml Ready Safe v počítači Beckman LS Liquid Scintillation Counter s 40% účinností. Nespecifická vazba [3H]—SK&F—107260 byla určena v přítomnosti 2 μΜ. SK&F-107260 a byla menší než 1% Celkového radioligandového vstupu. IC50 (koncentrace antagonisty potřebná pro inhibici 50% vazby [3H]-SK&F-107260) byla určena nelineární procedurou aproximace křivky metodou nejmenších čtverců, která byla modifikována z programu LUNDON-2. Ki (disociační konstanta antagonisty) byla vypočtena podle následující rovnice:
Ki = ICso/ (1 + L/Kd) , kde L a Kd byly koncentrace, respektive disociační konstanta [3H]-SK&F-107260.
0000 . ·
0.
0000
0 00
00 • 0 0 0 0 0 0 • 0 0 0 · · · * • 0 0000 0 0 0 0
0 0 0 0 0 • 0 0 00 ·00·
0
Sloučeniny podle předloženého vynálezu inhibují vazbu vitronektinu na SK&F 107260 v rozmezí koncentrací od přibližně 0,060 do přibližné 0,0005 mikromolů.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu byly také testovány v in vitro a .in vivo testech kostní resorpce, které představují standard v oboru hodnocení inhibice vytváření kosti, jako je test vytváření jamky, popsaný v v EP 528 5.87, který' také může být prováděn použitím lidských osteo.klastů namísto 'krysích osteoklastů, a ovarektomizovaného krysího modelu, který popsali Wronski a kol., Cells and. Materials 1991, Sup. 1, 69-74.
, z
Test migrace buněk vaskulářního hladkého svalstva.
Byly použity krysí nebo lidské buňky hladkého svalstva aorty. Migrace buněk byla monitorována v komoře na buněčné kultury Transwell použitím polykarbonátové membrány s póry 8 |tm (Costar) . Spodní povrch filtru byl pokryt vitronektinem. Buňky byly suspendovány v DMEM doplněném 0,2% hovězího sérového albuminu v koncentraci 2,5 - 5,0 χ 106’ buněk/ml a byly předem ošetřený testovanou sloučeninou v různých koncentracích po dobu 20 minut za teploty 20 ' °,G. Samotné rozpouštědlo bylo použito jako kontrola. 0,2 ml buněčné suspenze bylo umístěno do horní komory. -Spodní oddíl obsahoval 0,6 ml DMEM doplněného. 0,2% hovězího • 4 ·· β « · · • » « • · · • · · ·· ···· ·· ·Φ·0 • · · ···· ··
Φ· · • · · • « · · • · · ···· • · · ·· » sérového albuminu. Inkubace byla prováděna za teploty 37 PC v atmosféře s obsahem 95% vzduch/5% C02 po dobu 24 hodin. Po inkubaci byly nezmigrované buňky na horním povrchu filtru odstraněny jemným seškrábáním. Filtr byl potom fixován v methanolu a označen 10% Giemsa barviva. Migrace byla měřena buď * a) počítáním počtu buněk, které migrovaly na spodní povrch filtru, nebo 4 b) extrakcí označených buněk 10% kyselinou octovou následovanou určením absorpce na 600 nM.
Thyroparathyroidektomizovaný krysí model
Každá experimentální skupina zahrnovala 5-6 dospělých samců krys Sprague-Dawley (tělesná hmotnost 250-400 ,g) . Krysy byly thyroparathyroidektomizovány ' (dodavatelem, Taconic Farms) 7 dní před použitím. Všechny krysy ' dostávaly náhradní dávku thyroxinu každé 3 dny. Při příjmu krys byly měřeny hladiny obíhajícího ionizovaného vápníku v úplné krvi okamžitě po jejím odebrání ocasní venipunkturou do heparinizovaných zkumavek. Krysy byly zahrnuty do pokusu, pokud úroveň . ionizovaného Ca (měřená vápníkovým pH ’ analyzátorem Ciba-Corning model 634) byla <1,2 mM/Ι. Každé kryse byl zaveden stálý žilní a arteriální katetr pro 4*·. podávání testovaného, materiálu respektive pro odebírání krevních vzorků. Krysy potom byly drženy na bezvápníkové ’ dietě a byla jim podávána deionizovaná voda. Byly změřeny základní hladiny Ca a každé kryse bylo podáváno buď kontrolní vehikulum nebo peptid lidského parathyroidního hormonu 1-34 (hPTH 1-34, dávka 1>25 μg/kg/h vě směsi solný • · • · ·· « · · · · • ·♦ · ·· roztok/0,1 % hovězí sérový albumin, ‘Bachem, Ca) nebo směs hPTH 1-34 a testovaného materiálu, a to kontinuální intravenózní infúzí ; žilním katetrem používajíce externí stříkačku. Kalcemická odezva každé krysy byla měřena ve dvouhodinových intervalech během infúzní periody 6-8 hodin.
Testy resorpce a přilnutí lidských osteoklastů
Byly vyvinuty a standardizovány testy jamkové resorpce a přilnutí používající normální lidské osteoklasty odvozeně z os.teoklastomové tkáně. Test 1 byl vyvinut pro měření osteoklastových- jamkových objemů laserovou konfokální mikroskopií. Těst 2 byl vyvinut jako výkonnější .třídění, ve kterém se fragmenty kolagenu (uvolňované během 'resorpce) měří kompetitivním testem ELISA. \ '
Test 1 (používající laserovou konfokální mikroskopii) • Alikvoty suspenzí lidských buněk získaných z osteoklastomů se vyjmou ze zásoby v kapalném dusíku, rychle zahřejí na teplotu .37 °C a promývají se χ . 1 v PRMI-1640 médiu centrifugací (1000 ot./min, 5 minut za teploty 4.°C).
• Médium se odsaje a nahradí myší'anti-HLA-DR protilátkou a potom zředí 1:3 v PRMI-1640 médiu. Suspenze se inkubuje po 30 minut na ledu a často míchá. . ' • Buňky se promývají χ 2 studeným PRMI-1640 následovaným centrifugací (1000 ot./min, 5 minut za teploty 4 °C) a buňky se potom přenesou do sterilní 15 ml centrifugační •Jfc · · · ···· ·· zkumavky. Počet mononukleárních buněk se určuje ve zlepšené
Neubauerově počítací komoře.
• Dostatečné množství magnetických kuliček (5 / mononukleární buňku), pokrytých kozím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, NY) se vyjme ze zásobní lahve a vloží do 5 ml čerstvého média (tím se vymyje toxické azidové konzervační činidlo). Médium se odstraní imobilizací kuliček na magnetu a nahradí se čerstvým médiem.
• Kuličky se smíchají s buňkami a suspenze se inkubuje po dobu 30 minut na ledu. Suspenze se často míchá.
• .Buňky pokryté kuličkami · se zmobilizují na magnetu a zbývající buňky (na osteoklasty bohatá frakce) se dekantuje ve sterilní 50 ml centrifugační zkumavce, • Čerstvé médium se přidá k buňkám pokrytým kuličkami pro oddělení jakýchkoli zachycených osteoklastů. Tento promývací proces se opakuje * 10. Buňky pokryté kuličkami se vyhodí.
• Životaschopné osteoklasty se spočítají v počítací komoře, používajíce fluorescein diacetát pro označení živých buněk. Plastová pasteurova pipeta s. velkým otvorem pro jedno použití se použije pro přidávání vzorků do komory.
• Osteoklasty se peletují centrifugací a hustota se upraví na vhodnou hodnotu v EMEM médiu (počet osteoklastů se mění • ·
10% fetálním sodného.
Λ Ο ·· ···· *
4ο · -· · · · · • · · · * * φ · · 9 9 99 9 »*··'·· od jednoho nádoru telecím sérem a 1,7 k druhému), doplněném g/litr hydrogenuhličitanu • 3 ml alikvotů buněčné suspenze (na jedno ošetření sloučeninou) se dekantuje do 15 ml centrifugačních zkumavek. Buňky se peletují centrifugací.
• Do každé zkumavky se přidá 3 ml vhodně sloučeniny (zředěné na 50 μΜ ν' EMEM médiu). Přidají se také vhodná kontrolní; vehikula a pozitivní kontrola (myší monoklonální protilátka proti vitronektinovému receptoru [87MEM1] zředěná na 100 μς/πιΐ) a isotypová kontrola (IgG2a zředěný na -100 gg/ml) Vzorky se inkubují ,za teploty 37 °C po dobu 30 minut. . .
• 0,5 ml alikvotů buněk se naočkuje na . sterilní dentinové řezy v 48-jámkové destičce a inkubují. se za teploty 37 °C po dobu 2 hodin. Každá látka se zpracovává čtyřikrát.
• Řezy se' promýva jí . šestkrát' v horkém PBS (10 ml. / jamku v 5-jamkové( destičce) a potom se vloží do čerstvého média obsahujícího vzorky s testovanou sloučeninou nebo kontrolou. Vzorky se inkubují za teploty 37' °C po dobu 48 hodin. . . TRAP . ('tartrate resistant-. . acid . phosphatase) procedura, (selektivní označení buněk osteoklastové linie) • · · · · ·
- 44,·* i
···· ·0 • Kostní řezy obsahující navázané osteoklasty se promývají ve .fosfátově pufrovaném solném .roztoku a fixují v 2% gluteraldehydu (v 0,2M kakodylátu sodném) po dobu- 5 minut.
• Potom se promývají ve vodě a inkubují se po 4 minuty v TRAP pufru za teploty 37 °C (0,5 mg/ml naftol AS-BI fosfát rozpuštěný v N,Ň-dimethýlformamidu a smíchaný s 0,25 M citrátovým pufrem (pH 4,5),'obsahujícím 10 mM vínan sodný.
· Po pr omývání ve studené vodě acetátového pufru (0,1 M, pH (granátové červeně a inkubují minutý.. . . ',· se řezy ponoří do studeného
6,2) obsahujícího 1 mg/ml se za ' teploty 4' °C pó 4 • Přebytek pufru je odsaje’1 a (řezy se suší po' promývání ve vodě. ‘ • TRAP pozitivní osteoklasty (cihlově .červený/purpurový •precipitát). se počítají světelnou mikroskopií a .potom se odstraní z povrchu dentinu sonikací.
Jamkové objemy se určí pomocí konfokalníhp mikroskopu
Nikon/Lasertec. ILM21W.
Test 2 (použití testu ELISA)
Lidské osteoklasty se obohatí a připraví pro třídění sloučenin, jak je popsáno v úvodních 9 krocích Testu 1. Pro jasnost výkladu jsou tyto kroky v popisu testu opakovány.
*· ' ·♦' ···· ** *' — /J 5 © _ A A · /*> · • t*·' * .· > Λ ··· · · £ · · α <······ A · * « · A·'·'1» * * ' „ • ·· ·· A , ♦ · AAAA • Alikvoty suspenzí lidských buněk získaných , z osteoklastomů se vyjmou ze zásoby v kapalném dusíku, rychle zahřejí na. teplotu 37 °C a promývají se χ 1 v PRMI-1640 médiu centrifugací (1000 ot./min, 5 .minut zá teploty 4 °C) :
, · Médium se odsaje a nahradí myší anti-HLA-DR protilátkou a potom zředí 1:3 v PRMI-1640 médiu. Suspenze se inkubuje po 30 minut na ledu a často míchá.
· Buňky se promývají χ 2 studeným PRMI-1640 následovaným centrifugací (1000 ot./min, 5 minut za. teploty 4 °C) a buňky se potom přenesou do sterilní 15 ml centrifugační zkumavky. Počet mononukleárních buněk se určuje ve zlepšené, Neubauerově počítací komoře; \ _ ’ · ., • Dostatečné množství magnetických kuliček. (-5 ',./ mononukleární buňku), pokrytých .kozím, anti-myším· IgG (Dynai, Great Neck, NY) se vyjme ze zásobní lahve a vloží do 5 . ml čerstvého,! média (tím se vymyje toxické azidové konzervační činidlo),( Médium se odstraní imobilizací kuliček ria magnetu, a nahradí se čerstvým médiem.
' · Kuličky se smíchají s buňkami a suspenze se inkubuje po dobu 30 minut na ledu. Suspenze se často míchá.
• Buňky pokryté kuličkami se imobilizují, na magnetu a zbývající buňky . (na osteoklasty bohatá frakce) se dekantují ve sterilní '50 ml centrifugační' zkumavce. ·. .
·' ♦ • · · ···· ·· ·· · Γ· · • · ·
• Čerstvé médium se přidá k buňkám pokrytým,kuličkami pro odděleni jakýchkoli zachycených osteoklastů. Tento promývaci proces se opakuje χ 10. Buňky pokryté kuličkami se vyhodí.
• Životaschopné osteoklasty se spočítají v počítací komoře, používajíce fluorescein díacetát pro označení živých buněk. Plastová pasteurova pipeta s velkým otvorem pro jedno použití se použije pro přidávání.vzorků do komory.
• Osteoklasty se peletují centrífugací a hustota se upraví na vhodnou hodnotu v EMEM médiu (počet osteoklastů' se mění od jednoho nádoru k druhému), doplněném 10% fetálním telecím sérem a 1,7 g/litr hydrogenuhličitanu sodného.
Na rozdíl od způsobu popsaného výše v Testu 1 se sloučeniny třídí ve 4 dávkách pro získání IC50, jak je naznačeno dále:
• Osteoklastové přípravky se preinkubují po 30 minut za teploty 37 °C s testovanou sloučeninou (4 dávky) nebo kontrolou.
• Potom se naočkují na řezy hovězí kortikální kosti v jamkách 48-jamkové destičky na tkáňové kultury a inkubují se po další 2 hodiny za teploty 37 °C.
• Kostní řezy se promývají v šestkrát vyměněném fosfátově pufrovaném solném roztoku (PBS) pro odstranění nepřilnutých buněk a potom se vrátí do jamek 48 jamkových destiček, obsahujících čerstvou sloučeninu nebo kontroly.
• Destička na tkáňové kultury se potom inkubuje po 48 hodin za teploty 37 °C.
• Supernatanty z každé jamky se odsají do zvláštních trubic a jsou tříděny v kompetitivním ELISA testu, který detekuje c-telopeptid kolagenu typu I, který se uvolňuje v průběhu resorpce. Jedná se o komerčně dostupný ELISA test (Osteometer, Denmark), který obsahuje králičí protilátku, která specificky reaguje d 8-aminokyselinovou sekvencí (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg) , která je přítomna v karboxy-terminálním telopeptidu al-řetězce kolagenu typu I. Výsledky se vyjádří jako procento inhibice resorpce - ve stovnání s kontrolním vehikulem. Test přilnutí lidských osteoklastů
Lidské osteoklasty se obohatí , a připraví pro třídění sloučenin, jak 'je popsáno výše v počátečních 9 krocích Testu I. Pro jasnost výkladu jsou tyto kroky v popisu testu opakovány.
• Alikvoty suspenzí. lidských buněk získaných z osteoklasťomů se vyjmou ze zásoby v kapalném dusíku, rychle zahřejí na teplotu 37 °C a promývají se * 1 v PRMI-1640 médiu centrifugací (1000 ot./min, 5 minut za teploty 4 °C).
• Medium se odsaje a nahradí myší anti-HLA-DR protilátkou a potom zředí 1:3 v PRMI-1640 médiu. Suspenze se inkubuje po 30 minut na ledu a často míchá.
· Buňky se promývají x 2 studeným PRMI-1640 následovaným centrifugací (1000 ot./min, 5 minut za teploty 4 °C) a buňky se potom přenesou do sterilní 15 ml centrifugační • zkumavky. Počet mononukleárních buněk se určuje ve zlepšené Neubauerově počítací komoře.
Dostatečné množství magnetických kuliček (5 / mononukleární buňku) , pokrytých kozím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, ΝΫ) se vyjme ze ,zásobní lahve a vloží do 5 ml čerstvého média (tím se vymyje toxické azidové konzervační činidlo). Médium se odstraní imobilizací kuliček na magnetu a nahradí se čerstvým médiem.
• Kuličky se smíchají s buňkami a suspenze se inkubuje po. dobu 30 minut na ledu. Suspenze se často.míchá.
Buňky pokryté kuličkami se ' . imobilizuj í ná magnetu a zbývající buňky (na osteoklasty. bohatá frakce) se děkantují ve sterilní 50 ml centrifugační zkumavce.
• 'Čerstvé médium se přidá k buňkám pokrytým kuličkami pro oddělení jakýchkoli zachycených . ošteóklast.ů. Tento promývací proces se opakuj.e , χ 10. ‘Buňky pokryté kuličkami se vyhodí. .
· Životaschopné osteoklasty se’ spočítají v počítací komoře, používajíce fluorescein.diacetát pro oznáčění živých buněk. Plastová pasteurova pipeta s velkým* otvorem pro jedno použití se použije pro přidávání vzorků do komory.
- ,. · Osteoklasty se peletují centrifugací a hustota se upraví .na vhodnou hodnotu v EMEM médiu (počet osteoklastů se mění od jednoho nádoru k druhému) , doplněném 10% fetálním telecím sérem a 1,7 g/litr hydrogenuhličitanu sodného.
’* · Osteoklasty odvozené z osteoklastomu se preinkubují se sloučeninou (4 dávky) nebo kontrolou za teploty 37 °C po dobu.30 minut. . ' ' · · Buňky, se' potom naočkují na osteop.ontínem pokryté řezy (lidský nebo krysí ..osteopontin,' 2,5 ,ug/žl·) a inkubuj 1. se..po 2 hodiny za teploty 37 °C. ; . . · Nepřilnuté buňky se odstraní promýváním·řezů intenzívním ( způsobem ve fosfátově pufrovaném solném ‘ roztoku · a · buňky \ ' zůstávající na řezech se fixují v acetonu.· ·* ‘ -IP - .' : Λ ' . . ' , - ' · ý, . ;·. 1 · Osteoklasty se označí pro TRAP (tartrate-resistant acid • '·, phosphatase), selektivní markér- pro buňky tohoto, fenotypu (viz kroky' 15 - 17) a počítají se pod světelným mikroskopem. Výsledky se vyjádří jako procento ^inhibice
-. přilnutí ve srovnání s kontrolním vehikulem.
'ÉP , ýe- Test buněčného přilnutí i Buňky a buněčné kultury ;
Ledvinové buňky lidského embrya (buňky HEK293) byly získány z ATCC (katalogové číslo CRL 1573). Buňky byly pěstovány v
- 50.
A.· ···
Earlově minimálním esenciálním· médiu (EMEM) obsahuj ícím Earlovy sole, 10% fetálního hovězího séra, 1 % glutaminu a 1 % Penicilinu-Steptomycinu.
Konstrukty a transfekce
3,2 kb EcoRI-KpnI fragment podjednotky otv a 2,4 kb XbalXhoí fragment podjednotky'β3 byly vloženy do EcoRI - EcoRV klonoyacích míst vektoru- pCDN (Aiyar a kol·., 1994), který obsa.huje’ promotor , CMV a G418 selektovatelný markér pomocí blunt end ligace. Pro stabilní expresi bylo 80 * 106 buněk HEK 293 elektrotransformoyáno.αν+β3 konstrukty.(20 pg DNA, každé podjednotky) použitím, přístroje ' Gene Pulser (Hensley a kol., 1994) a umístěno, na 100 mm deštičkách (5 χ 105 buněk/destičku) . Po' uplynutí. 4.8 hodin bylo k růstovému médiu přidáno 450 pg/ml Geneticinu (-G418 Sulfáte, GIBCO-’ BRL, Bethesda, MD) . Buňky byly udržovány v selekčním médiu, · dokud kolonie nebyly dostatečně .velké pro testování.
Imunocytochemická analýza transfektovaných buněk .
Ί Pro určení, zda HEK 29.3 transfektanty exprimovaly receptoř vitronektinu byly buňky zmobilizovány na mikroskopových sklíčkách c.entrifugací;' fixovány v acetonu po 2 minuty · za teploty okolí a sušeny na vzduchu. Specifická reaktivita k 23C6, monoklonální protilátce specifické pro komplex · ανβ3, byla demonstrována- použitím . standardního nepřímého imunofluorescenčního způsobu.
·· ···· ·♦ ·» ··
Studie buněčného přilnutí ; .
96-jamkové destičky ELISA Corning byly předem pokryty přes noc za teploty 4 °C 0,1 ml lidského vitronektinu (0,2 μς/πιΐ v PRMI médiu). V okamžiku pokusu byly destičky promývány jednou PRMI médiem a blokovány 3,5% BSA v PRMI médiu po dobu 1 hodiny za teploty okolí. Transfektované buňky 293 byly resuspendovány v PRMI médiu, doplněny 20 mM Hepes, pH 7,-4. a 0,1 % BSA o hustotě 0,5 * .106 buněk/ml. 0,1 ml buněčné suspenze bylo přidáno do každé jamky a inkubováno po 1 hodinu za teploty 37' °C, v přítomnosti nebo nepřítomnosti různých antagonistů ανβ3· Po ukončení inkubace bylo přidáno 0,025 ml 10% roztoku formaldehydu, pH
7,4 a buňky byly fixovány za teploty, okolí po dobu’ 10 minut. Destičky byly promývány třikrát 0,2 ml PRMI média a přilnuté buňky byly označeny 0,1 ml 0,5% toluidinové modři po 20 minut za teploty okolí. Přebytek barviva byl odstraněn důkladným promývání deionizovanou vodou. Tóluidinová modř zabudovaná do buněk byla vymyta přidáním 0,1 mí 50% ·ethanolu obsahujícího 50 mM HCI. Buněčné přilnutí bylo kvantitativně určováno pomocí optické hustoty při 600. nm na čtečce mikrotitračních destiček (Titertek Multiskan MC, Sterling, VA).
Test v pevné fázi vazby avPs:
Receptor vitronektinu <χνβ5 byl purifikován z lidské placenty. Receptorový přípravek byl zředěn pomocí 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 100 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM· MnCl2, 1 mM '
0000 • 0 0· • 0 · · ···· ·· ’ 0-0 0
MgCl2 (pufr A) a byl okamžitě přidán do 96-jamkových ELISA destiček s 0,1 ml na jamku. 0,1-0,2 μg ανβ3 bylo přidáno do každé jamky. Destičky byly .inkubovány přes noc za teploty 4 °C. V okamžiku pokusu byly jamky promýván jednou pufrem A a byly inkubován s 0,1 ml 3,5% hovězího sérového albuminu ve stejném pufru po 1 hodinu za teploty okolí. Po ukončení inkubace byly jamky úplně odsáty a promývány dvakrát 0,2 ml pufru A.
V [3H]-SK&F-107260 kompetičním testu byly různé koncentrace neoznačených antagonistů (0,001-100 ’μΜ) přidány do jamek, následovány přidáním 5,0 nM [3H]-SK&F-107260. .Destičky byly ř
inkubovány po . 1· hodinu za teploty okolí. Po ukončení inkubace byly jamky úplně odsáty a promývány jednou 0,2 ml ledového pufru A jamka po jamce. Receptory byly solubilizovány 0,1 ml 1 % SDS a vazba [3H] -SK&F-107260 byla určena kapalinovým scintilačnim počítačem s přidáním 3 ml. Ready Safe v počítači Beckman LS 6800 Liquid Scintillation Counter, se 40% účinností. Nespecifická vazba [3H]-SK&F107260 byla určena v přítomnosti 2 μΜ SK&F-107260 a byla menší než 1 % celkového vstupu radioligandů. IC50 (koncentrace antagonis.ty pro inhibici 50% vazby [3H]-SK&F107260) byla určena nonlineární aproximací křivky metodou nejmenších čtverců, která byla upravena z programu LUNDON2. Ki (disociační konstanta antagonisty) byla vypočtena pomocí Cheng-Prusoffovy.rovnice:
Ki = IC50/ (1 + L/Kd), kde L a Kd byly koncentrace respektive disociační konstanta [3H]-SK&F-107260.
' i ·· ···· ·· ř· co · _ · · ’ · ·· □ o · i > ··· • · · · ··;··’« • ' · · · -· · * , • ·· · ·· ·- ,· · ;
RR ···· , Inhibice RGD-mediované GPIIb-IIIa vazby
Čištění of GPIIb-IIIa *
Deset jednotek promytých lidských krevních destiček (získané od Červeného kříže) byl lýzováno mírným mícháním v 3% oktylglukosidu, 20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 140 mM NaCl, 2
Ir.* ,r mM CaCl2 za teploty 4 . °C po 2 hodiny. Lyzát byl 1 centrifugován·při 100000 g po 1 hodinu. Získaný supernatant .,. .· byl aplikován do 5 ml lektinové sefarózové 43 kolony (Ξ.Υ.
Labs) předem ekvilibrované pomocí 20 mM Tris-HCl, pH 7,4,100 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1% oktylglukosidu (pufr A); Po ‘ . , * . '' ' - ' '‘''.I uplynutí 2 hodiny inkubace byla kolona promývána 50 ml’, studeného pufru A. V lektánu' zadržený GPIIb-IIIa' byl · vymýván pufrem A obsahujícím . 10%'4 dextfózy::, Všechny- ' i procedury byly prováděny za -teploty 4 -°C. Získaný- GPITb-7 !,< lila měl čistotu >95%, jak ukázala elektroforéza na SDS . polyakrylamidovém gelu. '
Výhodné sloučeniny podle předloženého vynálezu mají afinitu k receptorům vitronektinu vzhledem k afinitě k receptorům fibrinogenu větší než 10 : 1. Nejvýhodnější sloučeniny -maji tento poměr aktivity větší než 100:1.
, ' .Účinnost sloučenin obecného vzorce (I) samotných nebo v ’ kombinaci s .antineoplastickým činidlem může být určena použitím řady transplantovatelných myším nádorových modelů.
-Viz U. S. patenty č. 5,004,758 a 5, 633,016 pro detaily těchto modelů.
·« ···»
9· 9 ·* r ·· • · < · · · · • · · · · · * • ··<···· · * ♦ '·· ·· · · · · ···· ♦· ,·· · ·· ,····
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady nejsou v žádném případě zamýšleny jako omezení rozsahu předmětu, předloženého vynálezu, ale jsou podány pro ilustraci výroby a použití sloučenin podle předloženého vynálezu. Mnoho dalších provedení bude okamžitě zřejmých odborníkovi v oboru.
Obecná protonová nukleární magnetická rezonanční (‘'H NMR) spektra byla zaznamenávána na frekvenci 250, 300 -nebo 400
MHz, Chemické posuny jsou uváděny v .částech na milion (δ) ve srovnání s vnitřním standardem tetramethylsílaném (TMS). Zkratky pro NMR data jsou následující: s = single.t, d = doublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet, dd = doublet doubletů, dt = doublet tripletů, app = zjevný, br = široký. J označuje NMR kopulační konstantu měřenou v Hertzech. CDC13 je deuteriochloroform, DMSO-d6 je hexadeuteriodimethylsulfoxid a CD3OD . jé tetradeuteriomethanol. Infračervená (IR) spektra byla zaznamenávána v transmisním módu a polohy pásem jsou uváděny v inverzních vlnových délkách (cm1) . Hmotová spektra byla získána použití elektrosprejového (ES) nebo FAB ionizačního způsobu. Elementární analýzy.byly prováděny buď v laboratoři ' nebo společností Quantitativne Technologies lne., Whitehouse, NJ. Teploty tání byly určovány přístrojem Thomas-Hoover pro měření teplot tání a jsou nekorigovány. Všechny teploty jsou uváděny ve stupních Celsia. Destičky pro chromatografií na tenké vstvě Anal těch-' ar *··· ···» • 9 9 9 ·· • Φ * « 9 <
* · 9 « · 9999 9 • 99 ·
9 9 ·
9 ·
9 9 · · «9 9999
Silica Gel GF a E. Merck Silica Gel 60 F-254 byly použity pro chromatografií na tenké vstvě. Jak mžiková, tak i gravitační chromatografie byly prováděny na silikagelu E. Merck Kieselgel 60 (230-400 mesh). Analytická a preparativní HPLC byly prováděny na chromatografech Rainin nebo Beckman. ODS označuje silikagelový chromatografický nosič derivatizovaný oktadecylsilylem. 5 μ Apex-ODS indikuje silikagelový chromatografický nosič derivatizovaný oktadecylsilylem, který má nominální velikost částic 5 μ, vyrobený společností Jones Chromatografie, Littleton, Colorado. YMC ODS-AQ® je ODS chromatografický nosič a je to registerovaná obchodní značka společnosti YMC Co. Ltd., Kyoto, Japan. PRP-1® je polymerní (styren-divinylbénzen) chromatografický nosič a je to registerovaná . obchodní značka společnosti Hamilton Co., Reno, Nevada. Celíte® je filtrační prostředek obsahující' kyselinou promývanou křemelinu a je to registerovaná obchodní značka společnosti Manville Corp., Denver, Colorado.
Příprava 1
Příprava 6-(methylamino)-2-pyridylethanolu
a) 2-(terč.-butoxykarbonylamino)-6-pikolin
Roztok 2-aminó-6-pikolinu (21,63 g, 200 mmolů) a di-terč.butyldikarbonátu „ (52,38 g, 240 mmolů) v CH2CI2 (200 ml) byl koncentrován v rotační odparce za teploty 50 °C a výsledné reziduum bylo ponecháno rotovat v rotační odparce za ς··.96* • ·
20% EtOAc/hexan). názvu (41,84 g, teploty 50 °C za vakua. Po uplynutí 21,5 hodin byla reakční směs byla zředěna hexanem (400 ml) a filtrována- přes silikagel (hexan následovaný směsí
Koncentrace zanechala sloučeninu z kvantitativně) ve formě světle žlutého oleje, který v klidu postupně tuhnul:
4Η NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,71 (d, J = 8,3 Hz, 1 Η) , 7,40 7,65 (m, 2 Η) , 6,80 (d, J = 7,5 Hz, 1 Η) , 2,43 (s, 3 Η) ,
1,50 (s, 9 H);
MS (ES) m/e 153 (Μ + H - C4H8)+.
b) 2-[(terč.-butoxykarbonyl)methylamino]-6-pikolin
NaH (60% v minerálním oleji, 3,60 g, 90 mmolů) byl přidán po částech během několika minut do roztoku 2-(terč.butoxykarbonylamino)-6-pikolinu (15,62 g, 75 mmolů) a jodomethanu (9,3 ml, 150 mmolů) v bezvodém DMSO. (75 ml) za teploty 15 °C (chladicí vodní lázeň). Vnitřní teplota vzrostla na 35 °C. Když ustal vývin plynů, chladicí vodní lázeň byla odstraněna a reakční směs byla ponechána za míchání za teploty okolí. Po uplynutí 0,5 hodin, byla tmavě žlutá směs vlita do směsi led/H2O (300 ml) a extrahována . Et2O (3 χ 300 ml). Spojené organické vrstvy byly'promývány postupně pomocí H2O (2 χ 75 ml) a solného roztoku (75 ml). Sušení (MgSO4) a koncentrace zanechaly žlutý olej, který byl , chromatografován na . silikagelu (7%. EtOAc/hexan) .
* Sloučenina z názvu (13,01 g, 78%) byla získána ve formě bledě žlutého oleje:
-.*•5?··:- ?·.
' ' ΧΗ NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,51 (app t, 1 H) , 7,37 (d, J = , 8,2 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 7,2 Hz, 1 H) , 3,3,8 (s, 3 H) ,
2,49 (s, 3 H), 1,50 (s, 9 H) ;
\ MS (ES) m/e 223 (M + H)+.
c) Ethyl-6-[(terč.-butoxykarbonyl)methylamino]-2. pyridylacetát .·'··' , LDA byl připraven, za teploty 0 °C pod argonovou atmosférou z diisopropylaminu (19,5 ml, 139,14 mmolů) a 2,5 M n-BuLi·v hexanu (46,4 ml, 115,95 mmolů) v bežvodém THE (.350 ml). Tento roztok byl ochlazen na teplotu k -78. °C· a .po kapkách , byl· přidán roztok .· 2-[ (terč. -butoxykarbonyl)methylamino ]-6- \ .· pikolinu (10,31 g, 46, 38 mmolů) v bežvodém . THF · (4 6 ml)' v , průběhu 10 minut. Další bezvodý THF (2 ml) byl·1 použit pro 7 transfer. Oranžový roztok byl míchán' za teploty. -78 . °;C. po / dobu 15 minut, potom byl rychle přidán diethylkarbonát (6,2 ml, 51,02 mmolů). Červený roztok byl míchán za teploty -78 ' °C· p.o‘ dobu 15 minut, potom byla reakce zastavena polonasyceným NH4C1 (175 ml). Směs byla. zahřáta na teplotu +5 °C a extrahována EtOAc (175 ml) a potom CH2CÍ2 (2 χ 100
- ml) . Spojené organické složky byly promývány solným roztokem (.10.0 ml), sušeny (MgSO4) a koncentrovány. Kalně žlutý, olej byl chrómatografován na silikagelu (15% * EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z. názvu (10,72 g,· 79%) ve formě,'Světle žlutého oleje:
XH NMR (250 MHz, CDC13) δ 7,51 - 7,63 (m, 2. H) , 6, 91 - 7,03 (m, 1 H) , 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2 H) , 3,77 (s, 2 H) , 3,38 (s,,- 3 H) , 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3 H), 1,51 (s, 9 H) ;
-.••53··:• · 4 ·
4 4 4 4
MS (ES) m/e 295 (M + H)+.
d) 6-[(terč.-butoxykarbonyl)methylamino]-2-pyridylethanol.
Roztok 2 N LiBH4 v THF (7 ml, 14 mmolů) byl přidán stříkačkou do míchaného roztoku ethyl-6-[(terč.butoxykarbonyl)methylamino]-2-pyridylacetátu (6,97 g, 23,7 mmolů) v bezvodém THF (30 ml) pod argonovou atmosférou. Reakční směs byla potom pomalu zahřát na teplotu zpětného toku'(initial exotherm). Po uplynutí 16 hodiny za teploty zpětného toku byla reakční směs ochlazena na teplotu 0 °C a reakce byla opatrně zastavena vodou (50 ml). Směs byla extrahována pomocí EtOAc (150 ml) a organická vrstva byla promývána solným roztokem, sušena (Na2SO4) a koncentrována.. Čištění mžikovou chromatografií na silikagelu (35% EtOAc/hexan) dalo sloučeninu z názvu '(5,26 g, 88%). 've formě čirého oleje:
4H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,57 (m, 2 H) , 6,88 (d, J = 7,2 Hz, 1 H) , 4,01 (t, 2 H), 3,39 (s, 3 H) , 3,00 (t,- 2 H) , 1,53 (s, 9 H);
MS .(ES) m/e 253, 2 (M + H)+.
’ é) 6-(Methylamino)-2-pyridylethanol
Do 6- [ (terč. -butoxykarbonyl)methylamino] -2-pyridylethanolu (17,9 g, 71 mmolů) byl přidán roztok 4N HCl v dioxanu (200 ml) . Reakční směs byla míchána za teploty okolí po dobu 1 hodiny (byl pozorován mírný vývin plynů) a potom byla koncentrována do sucha. Produkt ve formě hydrochloridové sole tuhnul za vakua. Pevná látka byla rozpuštěna v NaCl-
'nasyceném 1,0 N NaOH roztoku (75 . ml) a roztok byl extrahován pomocí Et2O (2 χ 200 ml) . Spojené organické vrstvy byly promývány solným roztokem, sušeny (Na2SO4) a koncentrovány - pro získání sloučeniny z názvu (9,12 g, 85%)
ve formě voskovité pevné látky:
XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,37 (t, 1 H), 6, 42 (d, J = 7,3
Hz, 1 H) , 6,27 (d, J = 8,3 Hz, 1 H) , 4,62 (br s , 1 H) , 3, 96
(t„ 2 H), 2,90 (d, J = 5,2 Hz, 3 H), 2,84 (t, 2 H) ;
MS (ES), m/e 153 (M + H)+.
Příprava 2 · *··.;
Příprava 2-(5, 6,'7,8-tetrahydro-l,8-naftyridin-2-yl) -lethanolu
a) 2-(Pivaloylamino)pyridin
Do roztoku 2-aminopyridinu (94,12 g, 1 molů) a Et3N (167,3 • ml, 1,2 molů) v CH2C12. (1 1) byl přidán pivaloylchlorid (135,5 ml, 1,1 molů) po kapkách za teploty 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se na- teplotu jak se lázeň zahřívala. Po uplynutí , 18 hodin směs byla filtrována. Filtrát byl promýván postupně H2O (1,5 1) a nasyceným NaHCO3 (2 χ 1,5 1) , potom byl sušen (MgSO4) a koncentrován za sníženého tlaku pro získání sloučeniny z názvu (183 g, 103%) ve formě bělavé pevné, látky: . , 7H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,28 (m, 2 H) , 8,00 (br s, 1 H) ,
7,70 (m, 1 H), 7,03 (m, 1 H), 1,31 (s, 9 H) ;
MS (ES) m/e. 179 (M + H)+. * . , Poznámka:
ΧΗ NMR prokázala přítomnost malého množství terč.-butyl bosahujících nečistot; ale materiál byl dostatečně čistý pro použití v následujícím kroku.
b) 2-(Pivaloylamino)-3-pyridinkarboxaldehyd s>
Do roztoku 2-(pivaíoýlámino)pyridinu (17,8 g, 100 mmolů) v bezvodém THF (250 ml) byl za teploty -20 °C přidán n-BuLi (2,5, M roztok v hexanu, 100 ml, 250 mmolů) po kapkách v
..průběhu 30 minut. Po uplynutí 2 hodin byl po .kapkách přidán' DMF (21 ml, 275 mmolů) v průběhu 30 minut. Směs byla ponechána zahřát se . na teplotu okolí jak se lázeň . zahřívala. Po uplynutí 18 hodin byla reakce zastavena nasyceným NH4C1 (300 ml) a výsledná směs byla extrahována EtOAc .(3 x 400 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrovány pro získání sloučeniny z názvu ve formě 2:1 směsi s 2-(pivaloylamino)pyridinem (22 g) .
. JH NMR (300 MHz,. CDC13) δ 10,95 (br s, 1 Η) , 9,95 (s, 1 Η) , 8,69 (m, 1 Η) , 8,02 (m, 2 Η) ,. 7,20 (m, 1 Η) , 1,38' (s, 9 H) ; MS (ES) m/e 207.(Μ + H)+.
iPoznámka: Výše uvedená procedura byl opakována s použitím 1-formylpiperidinu (30,5 ml, 275 mmolů) namísto DMF pro získání sloučeniny z názvu ve formě· 4:1 směsi s 2(pivaloylamino)pyridinem (21 g).
c) 2-Amino-3-pyridinkarboxaldehyd
• ►-I ···· ·· ·
- · Ό·1 . · · · ·· ·· ' · · ·. · · « · ·,·' · '> · ’· » >.'·«·. ····· t·'·· · - ;· ’· • · · · . · . '· '· ·
1,
Surový 2-(pivaloylamino)-3-pyridinkarboxaldehyd (z kroku b, 43 g) byl rozpuštěn v 3 M HCI (500 ml) a roztok byl zahřát na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin byla směs ochlazena na teplotu okolí a pH bylo opatrně upraveno na hodnotu 7 použitím pevného K2CO3. Vodný roztok byl extrahován EtOAc (3 χ 500 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrovány pro získání sloučeniny z názvu (24,57 g. 101 %) ‘ ve formě červenavě hnědé pevné látky:'. .
'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 9,85 (s, 1 Η) , 8,24 (m, 1 Η) ,
7,80·(m, · 1 H), 6,90 (br s, 2 Η), 6,74 (m, 2 H); ·
MS (ES). m/e. 123 (M + H)+. ' . - , ·. '
d) 2-Methyl-l, 8-naftyridin , '· ·, '·
Do. roztoku 2-amino-3-pyridinka,rboxaldehydu, (z kroku c, .
24,57 g) v acetonu (750 ml) byl’, přidán prolin (2,,3 g, '20 ,· mmolů) ,· potom byla směs zahřáta na. teplotu zpětného toku.
Po 'uplynutí 4 8'hodin směs byla ochlazena na teplotu okolí·, filtrována a .. koncentrována. Mžiková sloupcová chromatografie na silikagelu (35% aceton/hexan) dala sloučeninu ž názvu (18,5 g, 64% ve 3 krocích) ve formě oranžově-žluté pevné látky:
4H NMR (300 MHz, CDC13) δ 9,07 (m, 1 H),'-8,10 (m, 2 Η) ,
7,40 (m, 2 Η), 2,80 (s, 3 H) ; ,
MS. (ES) m/e 145 (M + H)+.
e) 2-Methyl-5,-6, 7,.8-tetrahydro-l, 8-naftyridin • ·
- ♦ <?···«. '·♦ · • · · · · • 4 4 4·
444 4 4« · 4 4 4
4··· 44 «·
Směs 2-methyl-l,8-naftyridinu (18,5 g, 128 mmolů), 10% Pd/C (5 g) a absolutního EtOH (150 ml) byla třepána pod vodíkovou atmosférou (15 psi) v Parrově láhvi. Po uplynutí 24 hodin byla směs filtrován přes celit® a filtrační vrstva byla promývána postupně absolutním EtOH a EtOAc. Filtrát byl koncentrován do sucha a zanechal sloučeninu z názvu (18,85 g, 99%) ve formě bělavé pevné látky:
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,02 (d, J = 7,5 Hz, 1 Η) , 6,34 ' (d, J - 7,5 Hz, 1 H), 4,80 (br s, 1 Η) , 3,38 (m, 2 Η) , 2,74 (m, 2 Η), 2,30 (s, 3 Η), 1,88 (m, 2 H);
MS (ES) m/e 149 (M + H)+.
f) 2-Methýl-8-(terč.-butoxykarbonyl)-5,6, 7,8-tetrahydro1,8-naftyridin
Do roztoku 2-methyl-5,6,7,8-tetrahydro-l,8-naftyridinu (23,32 g, 157 mmolů) a di-terc.-butyldikarbonátu (44,74 g, 205 mmolů) v bezvodém THF (750 ml) za teploty 0 °C byl po kapkách přidán LiHMDS (1,0 M roztok v THF, 205 ml, 205 mmolů). 30 minut po ukončení adice byla reakce zastavena nasyceným NH4C1 (500 ml) a extrahována EtOAc (3 χ 500 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrován za sníženého tlaku. Mžiková sloupcová chromatografie na silikagelu (40% EtOAc/hexan) dalo sloučeninu z názvu (32,3 g, 83%) ve formě světle žlutého oleje:
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,27 (d, J = 7,6 Hz, 1 Η) , 6,81 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 3, 69 - 3,79 (m, 2 Η) , 2,65 - 2,75 (m, 2 H), 2,48 (s, 3 H), 1,83 - 1,98 (m, 2 Η), 1,52 (s, 9 H);
MS (ES) m/e 249 (M + H)+.
• · · · · · ···· ·· ·· · . g) Ethyl-[8-(terč.-butoxykarbonyl)-5, 6, 7,8-rtetrahydro-l, 8naftyridin-2-yl]acetát
Do roztoku diisopropylaminu (47,7 ml, 364 mmolů) v bezvodém THF (250 ml) byl za teploty 0 °C po kapkách přidán n-BuLi (2,5 M v hexan, 145,6 ml, 364 mmolů). Po uplynutí 15 minut byl tento roztok po kapkách byl přidán do roztoku 2-methyl8-(terč.-butoxykarbony!)-5,6,7,8-tetrahydro-l, 8-naftyridinu (32,3 g, 130 mmolů). a diethylkarbonátu (56,8 ml, 4 81-mmolů) v bezvodém THF (400 ml) za teploty -78 °C. Po uplynutí 30 minut byla reakce zastavena· nasyceným NH4C1 (500 ml) ,'směs byla -zahřáta na teplotu okolí a extrahován pomocí EtOAc (3 x 500 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny (MgSO4) , .filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku. Sušení za vysokého vakua přes noc dalo sloučeninu z názvu (42,52 g, 102%) ve formě světle žlutého oleje;
XH NMR ( ;3oo MHz, CDC13) δ 7,35 (d, J = = 7,5 Hz, 1 H), 6,96
(o, J - 7,5 Hz, 1 Η), 4,18 (t, 2 Η) , 3, 75 (m, 4 Η) , 2,72
(t, 2 H) , 1/ 91 (m, 2 H) , 1,52 (s, 9 H), . 1,24 (m, 3H) ;
MS (ES) m/e 321 (Μ + H) -i-
Poznámka:
1H NMR ukázala malé množství diethylkarbonátu přítomného v produktu, ale materiál byl dostatečně čistý pro použití v následujícím,kroku. · ...
h) 2-(5,6,7,8-tetrahydro-l,8-naftyridin-2-yl)-1-ethanol
- .«64···*
4 0 0«
4444
Do roztoku ethyl-[8-(terč.-butoxykarbonyl)-5, 6,7,8tetrahydro-1,8-naftyridin-2-yl]acetátu (42,52 g, 130 mmolů) v bezvodém THF (650 ml) byl za teploty okolí přidán LiBH4 (2,0 M-v THF, 65 ml, 130 mmolů) a výsledná, směs byla zahřáta na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin byla směs ochlazena na teplotu 0 °C a reakce byla opatrně zastavena H2O (300 ml). Po uplynutí 10 minut byla směs extrahován pomocí EtOAc (3 χ 500 ml) . Spojené organické extrakty byly sušeny (IvlgSO4) , filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku.
Výše uvedené reziduum bylo rozpuštěno v CH2C12 (300 ml) . Do tohoto roztoku byl přidán 4 N HCI v dioxanu (300 ml), pomalu za teploty okolí. Po uplynutí 4 hodin byla směs koncentrována za sníženého tlaku. Reziduum bylo vyjmuto v 1:1 směsi 1,0 N NaOH a nasyceného NaCl (300 ml) a extrahováno pomocí CH2C12 (3 χ 300 ml) . Spojené organické extrakty byly sušeny (MgSO4) , filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku. Reziduum bylo vyjmuto v Et2O (250 ml) a po kapkách byla přidána 96% kyselina mravenčí (130 mmolů). Výsledná pevná látka byla izolována filtrací a promývána ' J
Et2O (2 χ 50 ml). Pevná látka byla rozpuštěna v 1:1 směsi 1,0 N NaOH a nasyceného NaCl (300 ml) a roztok byl extrahován CH2C12 (3 χ 300 ml). Spojené organické extrakty byly sušeny (MgSO4) , filtrovány a koncentrovány za sníženého tlaku pro získání sloučeniny z názvu (11,1 g, 48% ve 4 krocích) ve formě žluté pevné látky.
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,05 (d, J = 7,6 Hz, 1 Η) , 6,33 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 3,90 (t, 2 Η) , 3,39 (m, 2 Η) , 2,75 (t, 2 H), 2,70 (t, 2 H), 1,90 (m, 2 H);
• · · • · ··
MS (ES) m/e 179 (M + H)+. .·
Příprava 3 ‘
Příprava ethyl-(±)-4-(4-hydroxyfenyl)-3-[4(trifluormethyl)fenyl]butanoátu ‘ .
a) N-Methoxy-N-methyl-2-(4-methoxyfenyl)acetamid
Do roztoku 4-methoxyfenyloctové kyseliny (3,3 g, 20 mmolů) v bezvodém DMF (75 ml) byl přidán hydrochlorid N-methoxy-Nmethylaminu (1,95 g, 20 mmolů) , Et3N (3,1 ml, . 22 mmolů), HOBt . H2O (1,95 g, 22 mmolů) a EDO (2,7 g, 22 mmolů).. Roztok byl míchán za teploty okolí přes noc, potom byl koncentrován ve vakuu. Reziduum b.ylo vyjmuto v 5% Na2CO3 roztok (10 ml) a extrahováno CH2C12 (3 χ 20 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Reziduum bylo' chromatografováno na silikagelu (3% MeOH/CH2Cl2) pro získání sloučeniny z názvu (1,54.g, 37%)‘ve formě bílé pevné látky:
MS (ES) m/e 210 (M + H)+.
b) 2-(4-Methoxyfenyl)-1-[4-(trifluormethyl)fenyl]ethanon
Do roztoku sek.-BuLi (1,3 M v THF, 22,6 ml, 29,5 mmolů) v bezvodém THF (50 ml) byl po kapkách : přidán 4brombenzotrifluorid (3,3 g,14,7 mmolů) v bezvodém THF (20 ml) za teploty -78 °C. Po uplynutí 20 minut byl po kapkách přidán· N-methoxy-N-methyl-2-(4-methoxyfenyl)acetamid (1,5 g, 7,4 mmolů) v bezvodém THF (20 ml). Po uplynutí 1 hodiny .·δ^·*·τ .·· · . · · • · · · • · · '» ···· ·· ·· ·· ·· • '· · · • · · · ·· · · · · • · · · • ·· ···· byla reakce· zastavena nasyceným NH4C1 (10 ml), směs byla zahřáta na teplotu okolí a extrahována Et2O (3 χ 20 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu'(15% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (2,2 g, 100%) ve formě mírně žluté pevné látky:
TLC (1,5% EtOAc/hexan) Rf 0,81;
ΤΗ NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8,10 (d, J = 8,2 Hz, 2 Η) , 7,72 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 7,18 (d, J = 8,7 Hz, 2 Η) , 6,88 (d, J = 8,7 Hz, 2 Η), 4,25 (s, 2 Η), 3,79 (s, 3 H).
c) Ethyl-(±)~4-(4-rhethoxyfenyl)-3-[4(trifluormethyl)fenyl]krotonát * - Do suspenze 60% NaH (350 mg, 8,84 mmolů) v bezvodém toluenu (30 ml) byl za teploty okolí po kapkách. , přidán triethylfosfonoacetát (2,0 g, 8,84 mmolů) v bezvodém toluenu (20 ml). Po uplynutí 15 minut byl po.kapkách přidán roztok 2-(4-methoxyfenyl)-1-[4-(trifluormethyl)fenyl]ethanonu (1,3 g, 4,42 'mmolů) v bezvodém toluenu (15 ml) a roztok byl zahříván na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 16 hodin byla reakce zastavena nasyceným NH4CI (10 ml) a směs byla extrahována pomocí EtOAc (3 χ 20 mi) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Sloučenina z názvu (2,2 g, 56%, směs dvou složek) byla získána ve formě světle žlutého oleje:
TLC (5% EtOAclhexan) Rf 0,42, 0,44.
Tento materiál byl použit bez dalšího čištění..
— £*7 ··♦-· ·* · ·· ·· · · · · · · · · •β ···· ·· *
000 0000000 · ·
0 0 0 0 0 0 00 0000 00 00 0 ·· 0000
d) Ethyl-(±)-4-(4-methoxyfenyl)-3-[4(trifluormethyl)fenyl]butanoát
Do suspenze 10% Pd/C (600 mg) v absolutním EtOH (50 ml) byl přidán ethyl-(±)-4-(4-methoxyfenyl)-3-[4(trifluormethyl)fenyl]krotonát (2,2 g, 6 mmolů) a směs byla třepána v Parrově láhvi za teploty okolí pod atmosférou H2 (50 psi) . Po uplynutí 4 hodin byla směs filtrována přes s vrstvu celitu® a filtrát byl koncentrován. Tato reakční sekvence byla opakována třikrát. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (35% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (900 mg, 56%) ve formě oleje:
TLC (5% EtOAc/hexan) Rf 0,46;
4H NMR1 (300 MHz, CDC13) δ 7,51 (d, J = 8,2 Hz, 2 H) , 7,24 (d, J = 8,2 Hz, 2 H), 6,94 (d,J = 8,7 Hz, 2 H) , 6,7 6 (d,J = . 8,7 Hz, 2 H), 3,99 (q, J = 7,1 Hz, 2 H) , 3,76 (s, 3 H) ,
3,35 - 3,50 (m, 1 H), 2,75 - 2,93 (m, 2 H), 2,69 (dd, J = 15,6, .6,4 Hz, 1 H) , 2,60 (dd, J = 15,6, 8,9 Hz, 1 H) , 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
e) Ethyl-(±).-4-(4-hydroxyfenyl)-3-[4(trifluormethyl)fenyl]butanoát
Do roztoku ethyl-(±)-4-(4-methoxyfenyl)-3-[4,‘ (trifluormethyl)fenyl]butanoátu (450 mg, 1,23 mmolů) v í*·
CH2C12. (5 ml) byl přidán BBr3 (1,5 ml, 1,48 mmolů) za * teploty -10 °C. Po uplynutí 3 hodin reakce byla opatrně zastavena pomocí EtOH (10 ml) a roztok byl ponechán zahřát se na teplotu okolí. Směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (20% EtOAc/hexan) pro — 68 ·*·· ·♦ · φ Φ φ Φ 9 « * · 9
- · ' ® ® 9 9 9 · ·♦ ♦
9999 9999 99« 9
999 9 9 9 99 9 •999 9® 99 · ·· «···.
získání sloučeniny z názvu (270 mg, 63%) ve formě žlutého oleje:
TLC (20% EtOAc/hexan) Rf 0,22.
Příprava 4
Příprava methyl-(±)-3-[4-karboxy-l,3-oxazol-2-yl]-4-[4[(terč.-butyloxykarbonyl)oxy]fenyl]butanoátu
a) 4-Brom-l-(triisopropylsilyloxy)benzen
Do roztoku 4-bromfenolu (17,3 g, 100 mmolů) v bezvodém DMF.
(100 ml) za teploty okolí byl přidán imidazol (13,62 g, 200 mmolů), následovaný' triisopropylsilylchloridem . (22,5 ml, 105 mmolů) . Po uplynutí 4 hodin byla směs zředěna pomocí H20 (50 ml) a extrahována hexanem (3 ; χ 75 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány - a koncentrovány pro získání sloučeniny· z názvu (32,23 g, 100%) ve formě čirého oleje, který byl použit bez čištění:
4H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,29 (d, J = 6 Hz, 2 Η) , 6,71 (d, J = 6 Hz, 2 Η), 1,22 (m, 3 H)., 1,09 (m, 18 H) .
b) Methyl-3-(benzyloxykarbonyl)-3-butenoát
Diisopropyl-azodikarboxylát (32,8 ml, 166 mmolů) byl přidán do roztoku methyl-3-karboxy-3-butenoátu (20 g, 139 mmolů), benzylalkoholu (17,2 mg, 166 mmolů) a trifenylfosfinu (43,7 g, 166 mmolů) v bezvodém THF (500 ml) za teploty 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se, jak se lázeň zahřála na teplotu okolí. Po uplynutí 3 hodin byla směs koncentrována a — gQ — ·· ···· · 9 * ·β ·· v · · · · « · · · · · • · · · · * · · « • . · · · ······· · * reziduum bylo .. chromatografováno na silikagelu: (10% EtOAc/hexan). Sloučenina z názvu (29,46 g, .91 %) byla získána ve formě bezbarvého oleje:
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,35 (m, 5 Η) , 6,48 (s, 1 Η) ,
5,71 (s, 1 Η), 5,20 (s, 2 H), 3,63 (s, 3 Η), 3,37 (s, 2 H).
c) Methyl-(±)-4-(4-triisopropylsilyloxyfenyl)-3karboxybutanoát
Roztok 4-brom-l-(triisopropylsilyloxy)benzenu (33,23 g, 100. mmolů), raethyl-3-(benzyloxykarbonyl)-3-butenoátu (28,11- g, 120 mmolů), Pd(OAc)2 (2,24 g, 10 mmolů), P(o-tolyl)3 (6)09 g, .20 mmolů) a (i-Pr)2NEt (34,8 ml, .200. mmolů) v propionitrilu (350 ml) byl. deoxygenován (3 χ cyklus evakuace/N2 propláchnutí) a potom byl Zahřát, na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na· silikagelu „ (10% EtOAclhexan) pro získání žlutého oleje. Olej byl' vyjmut ve směsi 5% EtOAc/hexan (100 ml.) a roztok byl ponechán· v klidu za teploty okolí. Po uplynutí 72 hodin směs byla filtrována a. filtrát byl koncentrován pro 'získání surového methyl-( + )4-(4-triisopropylsilyloxyfenyl)-3-(benzyloxykarbonyl)-3butenoátu ve formě .. směsi olefinových ' isomérů. Tato látka byla okamžitě použita v následujícím kroku. >
Výše zmíněná olefinová směs byla rozdělena do dvou částí.
Každá část byla pomnechána reagovat následujícím způsobem a potom byly spojeny po filtraci: Do suspenze 10% Pd/C (7,4
g) v EtOAc (100 ml) byla přidána olefinová směs. Směs byla deoxygenována (3 χ cyklus evakuace/N2 propláchnutí) a potom byla nádoba naplněna H2 (50 psi) . Po uplynutí 4 hodin byl H2 odstraněn a směs byla filtrována přes vrstvu celifu®. Filtrát byl koncentrován pro získání sloučeniny z názvu (24,64 g, 89% z 4-brom-l-(triisopropylsilyloxy)benzenu) ve formě čirého oleje: ' ΧΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,01 (d, J = 6 Hz, 2-H), 6,80 (d,
J.= 6 Hz, 2 H), 3,62 (s, 3 Η) , 3,05 (m, 2 Η) , 2,65 (m, 1 Η), 2,40 (m, 2 H), 1,21 (m, 3 Η), 1,09 (m, 18 H).
d) (±)-N-[2-[4-(Triisopropylsilyloxy)benzyl]-3(karbomethoxy)propionyl]serin, benzylester
Dó roztoku - . ’ . methyl-(±)-3-karboxy-4-[4(triisogropylsilyloxy)fenyl]butanoáťu (5,00 g, 12,67 mmolů) v bezvodém DMF (60 ml) 'byl· za teploty· okolí přidánhydrochlorid benzylesteru·' šeřinu'. (3,52, g, 15,21 mmolů), HOBt (2,06 g, 15,21 mmolů), Et3N (5,3 ml, 38,01 .
mmolů) a EDO (2,92 g, 15,21 mmolů)/ Po uplynutí 18 hodin , směs byla koncentrována.
Reziduum, bylo chromatografováno na silikagelu (80% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (5,76 mg, 79%) ve formě bledě žlutého oleje:
MS (ES) m/e 572 (Μ + H)+.
e) Methyl-(±)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3-oxazolin-2-yl]4-[4-(triisopropylsilyloxy)fenyl]butanoát
Do roztoku * . benzylesteru (±)-N-[2-[4(triisopropylsilyloxy)benzyl]-3-(karbomethoxy)propionyl]71 ·« ··· · «· · ·« • · * · · ·····»· · · ···· ·· ·© · ·· ···· serinú (5,76 g, 10,07 mmolů) v bezvodém THF (50 ml) byl přidán Burgessův reagent (2,88 g, 12,08 mmolů), potom směs byla zahřáta na teplotu zpětného toku. Po 'uplynutí.2 hodin směs byla ochlazena na teplotu okolí a koncentrována. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (35% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (4,45 g, 80%) ve formě čirého oleje:
MS (ES) m/e 554 (M + H)+.
f) -Methyl- ( + ) -3- [4=- (benzyloxykarbonyl) -1, 3-oxazol-2-yl] -4[4-(triisopropylsilýloxy)fenyl]butanoát přidán DBU (1,4 bromtrichlormethanem ponechána zahřát se zahřívala
Reziduum
Do roztoku methyl-(+)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3oxazolin-2-yl] -4- [4‘- (triisopropylsilyloxy) fenyl]butanoátu (4,45 g, 8,03 mmolů) v CH2C12 (40 ml) byl za teploty 0 °C ml, 9,64 mmolů)., následovaný (0,95 ml, 9,64' mmolů). Směs byla na teplotu okolí, . jak se lázeň
Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována, bylo chromatografováno na silikagelu (20% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (2,23 g, 50%) ve formě čirého oleje:
MS (ES) m/e 552 (M + H)+.
g) Methyl-(±)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3-oxazol-2-yl]-4(4-hydroxyfenyl)butanoát
Do roztoku methyl-(±)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3-oxazol2-yl]-4-[4-(triisopropylsilyloxy)fenyl]butanoátu .(2,23 g, 4,04 mmolů) v bezvodém THF (20 ml) byl za teploty 0 °C ·· to přidán roztok TBAF v THF (1,0 M, 6,06 ml, 6,06 mmolů). P 2 hodin směs byla zředěna nasyceným NH4C1(1O ml) a extrahován with CH2CI2 (3 χ 15 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Reziduum bylo chrorriatografováno na silikagelu (40% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (1,4 g, 88%) ve formě bělavé pěny:
MS (ES) m/e 396 (M + H)+.
h) Methyl-(±)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3-oxazol-2-yl]-4[4-[(terč.-butyloxykarbonyl)oxy]fenyl)butanoát
Do' roztoku methyl-(±)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3-oxazol2-yl]-4-(4-hydroxyfenyl) butanoátu (700 mg, 1,77 mmolů) a di-terc.-butyldikarbonátu (.463 mg/ 2,12 mmolů) v bezvodém THF (10 ml) byl přidán pyridin (0,17 ml, 2,12 mmolů). za teploty okolí. Po uplynutí koncentrována. Reziduum bylo filtrováno a sušen ve vakuu pro získání sloučeniny z názvu (765 mg, 87%) vé formě bílé pevné látky:
MS (ES) m/e 496 (M + H)+.
hodin rozetřeno směs byla s -hexanem,·
i) Methyl-(±)-3-[4-karboxy-l,3-oxazol-2-yl]-4-[4-[(terč.butyloxykarbonyl)oxy]fenyl]butanoát
Směs methyl-(±)-3-[4-(benzyloxykarbonyl)-1,3-oxazol-2-yl)4-[4-[(terč.-butyloxykarbonyl)oxy]fenyl]butanoátu (765 mg,
1,54 mmolů) a 10% Pd/C (164 mg) v EtOH (20 ml) byla deoxygenována (3 χ cyklus evakuace/N2 propláchnutí) a potom byla nádoba naplněna H2 (50 psi) . Po uplynutí 4 hodin byl • · · 4 ··· · ······ ·· «
H2 odstraněn a směs byla filtrována přes vrstvu cel'itu®.. Filtrát byl koncentrován pro získání sloučeniny z. názvu (659 mg, 100%) ve formě bílé pevné látky:
MS (ES) m/e 811 (2M + H)+.
Příprava 5
Příprava methyl-(±)-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl] -4(4-hydroxyfenyl)butanoátu
a) 2-Kyanomethyl-4-(trifluormethyl)thiazol
2-Kyanothioacetámid (1,00 g, 9,99 mmolů) a 3-brom-ltrifluorpropan-2-on (1,04 ml, 9,99 mmolů) byly zkombinovány v absolutním EtOH (50 ml) a zahřátý’ na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin směs byla ochlazená na teplotu okolí a koncentrována. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (15% EtOAc/hexanj pro' získání sloučeniny z názvu •('1,24 g) ve formě 2:1 směsi s ethyl-2-kyanoacetátém:
MS (ES) m/e 385 (2M + H)+. . ;
b) 3-(4-Benzyloxyfenyl)-2-[(4-trifluormethyl)thiazol-2yl]akrylonitril ' .
NaH (516 mg, 60% disperze v minerálním oleji, 12,9 mmolů) byl nechán reagovat s absolutním EtOH (10 ml) za teploty 0 °C. Po ukončení vývinu plynů byla směs zahřáta na teplotu okolí. 4-Benzyloxybenzaldehyd (2,05 g, . 9,68 mmolů) byl přidán najednou ve formě pevné látky. Do této směsi byl po kapkách přidán roztok 2-kyanomethyl-474 - .·· ' · ·. · '· ······· · · • · .· · · · · · · ···· ·· ·· · ·· ···· (trifluormethyl)thiazolu (1,24 g) v absolutním EtOH (20 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 4 hodin a potom byla pevná látka .izolována filtrací a promývána hexanem pro získání sloučeniny z názvu (1,64 g, 42% ve 2 krocích) ve formě žluté pevné látky:
1H NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,25.(s, 1 H) , 8,00 (d, J = 6 Hz, 2 H) , 7,79 (s, 1 H), 7,40 (m, 5 H) , 7,10 (d, J = 6 Hz, 2 H) , 5,18 (s, 2 H) .
c) 3-(4-Benzyloxyfenyí)-2-kyano-2-((4trifluormethyl)thiazol-2-yl)oxiran .
Do roztoků 3- (4-benzyloxyfenyl)-2-[(4trifluormethyl)thiazol-2-yl)akrylonitrilu > (500 mg, 1,29 mmolů) v CH3CN (5. ml) byl přidán .neutrální oxid hlinitý ?· (1,3 g). Bělidlo clorox (5 ml) bylo po .kapkách přidáno za teploty okolí. Po uplynutí 1 hodin směs byla filtrována. Filtrát byl zředěn H20 (20 ml) a extrahován CH2C12 (3 χ 20 .ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány pro získání sloučeniny z názvu (425 mg, 82%) ve. formě žlutého oleje, který byl dostatečně čistý pro použití v následujícím kroku.
:H NMR (300MHz, CDC13) δ 7,90 (s, 1 H) , 7,40 (m, 7 H) , 7,06. (d, J = 6 Hz, 2 H), 5,10 (s, 2 H) ,. 4,59 (s, 1 H) .
d) 2-(4-Benzyloxyfenyl)-1-[4-(trifluormethyl)thiazol-2yljethanon ·· · • 4 «4 • « · 4 · 4 4 444
4 4444 44 · • · 4 4 4 444· 444 4
444 444 444
4444 44 ♦· · · ·· ····
Do roztoku ., 3-(4-benzyloxyfenyl)-2-kyano-2-((4trifluormethyl)thiazol-2-yl]oxiranu (425 mg, 1,06 mmolů) v CH2C12 (7 ml) byl přidán Et3SiH (0,85 ml, 5,3-mmolů) a potom BF3 . OEt2 (0,39 ml, 3,17 mmolů) po kapkách za teploty 0 °C. Po uplynutí 2 hodin směs byla vlita do H2O (20 ml) a extrahována pomocí CH2C12 (3 χ 20 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány.
Do- uvedeného rezidua v bezvodém THE (7 ml) byl přidán roztok TBAF v, THF(l,0 M, 1,6 ml, 1,6 mmolů) za teploty 0 °C. Po uplynutí- 1 hodiny 'směs byla vlita do nasyceného ,NH4C1 (20 ml) a extrahována pomocí EtOAc (3 χ 20 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (5% EtOAclhexan) pro získání sloučeniny z. názvu (167 mg, 40%) ve formě bílé pevné látky:
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,05 (s, 1 H) , 7,35 (m, 7 H) ,
6,92 (d, J = 6 Hz, 2 H), 5,05 (s, 2 H), 4,40 (s, 1 H).
e) Methyl-(±)-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]-4-(4hydroxyfenyl)butanoát
Do suspenze NaH (35 mg, 0,88 mmolů) v bezvodém THF (2 ml) byl po kapkách za teploty okolí přidán triethylfosfonoacetát (0,17 ml, 0,88 mmolů). Po uplynuti 15 minut byl po kapkách přidán roztok 2-(4-benzyloxyfenyl)-1(4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]ethanonu (167 mg, 0,44 mmolů) v bezvodém THF (2 ml) a směs byla zahřáta na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin směs byla ochlazena na teplotu okolí reakce byla zastavena nasyceným NH4C1 (10 ml)
ΒΒ ΒΒΒΒ ΒΒ · ·· ·· • . · · # ' · · » · · ' ·
Β · ΒΒΒΒ ΒΒ Β • ΒΒΒ ······♦ · ·
ΒΒΒ ΒΒΒ ΒΒΒ
ΒΒΒΒ ΒΒ ΒΒ Β ΒΒ ΒΒΒΒ
Ί6 a směs byla extrahována EtOAc (3 χ '20 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány pro získání surového ethyl-(±)-3-[4(trifluormethyl)thiazoi-2-yl)-4-(4-benzyloxyfenvl)krotonátu ve formě oleje. Ten byl použit bez čištění.
Ethyl-(±)-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]-4-(4benzyloxyfenyl)krotonát (0,44 mmolů, surový) byl rozpuštěn v MeOH (4 ml) a za teploty okolí byly přidány hořčíkové piliny (53 mg, 2,20. mmolů). Po uplynutí 72. hodin směs byla vlita do 10% HCI (75. ml) a extrahována pomocí CH2C12 (3 χ 50 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány pro získání surového methyl- (1.)3(4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]-4-(4-benzyloxyfenyl)butanoátu. Ten byl použit bez čištění.
Do roztoku methyl-(±)-3[4-(trifluormethyl)thia.zo(-2-yl]-4(4-benzyloxyfenyl)butanoátu (0,44 mmolů, surový) v EtSH (5 ml) byl za teploty okolí přidán BF3 . OEt2 (0,3 ml) . Po uplynutí 18 hodin byl přidán další BF3 . OEt2 (0,3 ml) . Po uplynutí dalších 18 hodin byla směs ochlazena na teplotu 0 °C a reakce byla opatrně zastavena nasyceným NaHCO3.
«. Výsledná směs byla extrahovánaa -CH2C12 (3 χ 25 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a > koncentrovány. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (30% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu ’ (123 mg, 81% ve 3 krocích) ve formě· žlutého oleje:
MS (ES) m/e 346 (M + H)+.
·· ··»· ·· · ·· ····
Příprava 6
Příprava methyl-(±)-3-(5-methylthiazol-2-yl)-4-(4hydroxyfenyl)butanoátu
a) Methyl-4-(benzyloxy)fenylacetát
Do suspenze K2CO3 (2.0,7 g, 150 mmolů) v acetonu (50 ml) byl přidán methyl-4-hydroxyfenyl-acetát· (5,0 g, 30 mmolů) a benzylchlorid (10,4 ml, 90 mmolů) a směs byla zahřáta na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 24 hodin směs byla ochlazena na teplotu okolí, filtrována a koncentrována. Reziduum bylo · chromatografováno , na silikagelt EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (7,7 g ve formě bílé pevné látky:
3Η NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,40 (m, 5 Η) , 7,21 (d, J = 6,6
Hz, 2. Η) , 6,95 (d, J = 6,6 Hz,· 2 H)., 5,05 (s, 2 H), 3,70 (s, 3 Η) , 3,59 (s, 2 H) . , . . ' (10%·
100%)
b) 2-(4-Benzyloxyfěnyl)-1-(5-methylthiazol-2-yl)ethanon
Do roztoku 5-methylthiazolu (0,21 ml, 2,34 mmolů) v bezvodém THF (10 ml) byl přidán n-BuLi (0,94 ml, 2,5 M roztok v hexan,. 2,34 mmolů) po kapkách za teploty -78 °C. Po uplynutí 15 minut byl po kapkách přidán methyl-4benzyloxyfenylacetát (0,5 g, 1,95 mmolů) v bezvodém THF (5 ml) . Po uplynutí 30 minut byla reakce zastavena nasyceným NH4C1 (10 ml), směs byla zahřáta na teplotu okolí -a extrahována EtOAc (3 χ 20 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Reziduum
7P — ·· ···· ·* · ·· ·· /o · · · ··· · · · · • · ···· · · * • ··· ······· · · • · · ·· · ··· ···· ·· ·· · ·· ··*· bylo chromatografováno na silikagelu (15% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu ve formě bílé pevné látky (532 mg,51%):
MS (ES) m/e 324 (M + H)+.
1 c) Ethyl-(±)-4-(4-benzyloxyfenyl)-3-(5-methylthiazol-2r yl)krotonát v
' * Do suspenze NaH (79 mg, 1,98 mmolů) v bezvodém THF (2 mi) byl po kapkách za teploty okolí přidán triethylfosfonoacetát (0,39 ml, 1,98 mmolů). Po uplynutí 15 minut byl po kapkách za teploty okolí přidán roztok 2—{4— benzyloxyfenyl)-1-(5-methylthiazol-2-yl)ethanonu (320 mg, 0,99 mmolů) v bezvodém THF (3 ml) a směs byla zahřáta na. teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin., směs .byla ochlazena na teplotu okolí, reakce· byla zastavena nasyceným NH4C1 (10 ml) a směs byla extrahována EtOAc (3 χ 20 ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. Výsledný žlutý olej byl použit v následujícím kroku'bez čištění:
MS (ES) m/e 394 (M + H)+..
d) Methyl-(±)-3-(5-methylthiazol-2-yl)-4-(4benzyloxyfenyl)butanoát • '
Ethyl-(±)-3-(5-methylthiazol-2-yl)-4-(4- .
> benzyloxyfenyl)krotonát (0,99 mmolů, surový) byl rozpuštěn v MeOH (5 ml) a za teploty okolí byly přidány hořčíkové piliny (120 mg, 4,95 mmolů). Po uplynutí 72 hodin směs byla vlita do 10% HCI (75 ml) a extrahována CH2C12 (3 χ 50 ml) .
_ -7 Q _ 44 44·· ·* · / y 4 · 4 444 · 44«· « 4 4 4 4444 4
4 4 4 4 ·
4444 44 44 · • 4 44
4 · 4 r · v
9 4
4 4 •4 4444
Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, a koncentrovány pro získání surové sloučeniny filtrovány z názvu, která byla použita bez čištěni:
MS (ES) m/e 382 (M + H) + .
e) Methyl-(±)-3-(5-methylthiazol-2-yl)-4-(4hydroxyfenyl)butanoát
Do roztoku methyl-(±)-3-(5-methyithiazoi-2-yi)-4-(4benzyloxyfenyl)butanoátu (0,99 mmolů, surový) v EtSH (5 ml) byl za teploty okoli přidán BF3 . OEt2 (0,6 ml) . Po uplynutí 18 hodin byl přidán další BF3 . OEt2 (0,6 ml). Po uplynutí dalších.18 hodin byla směs ochlazena na teplotu 0 °.C a reakce byla opatrně _ zastavena nasyceným NaHCO3. Výsledná směs byla extrahována pomocí CH2CI2 (3 x 25 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4/ filtrovány a koncentrovány. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (50%. EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (249 mg, 86% ve 3 krocích) ve formě žluté pevné látky:
MS./ES) m/e 292 (M + H) + .
Příprava 7
Příprava (4R,5S)-l-akryloyl-3,4-dimethyl-5fenylimidazolidin-2-onu
Do roztoku (4S,5R)-1,5-dimethyl-4-fenyl-2-imidazolidinonu (45,0 g, 237 mmolů) a (i-Pr)2NEt (62 ml, 355 mmolů) v CH2C12 (1200 ml) byl přidán CuCl (50 mg, 0,51 mmolů) a potom akryloylchlorid (29 ml, 355 mmolů) a směs byla zahřáta na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 2 hodin směs byla ochlazena na teplotu okolí, promývána H20 (3 χ 400 ml) , sušena nad MgSO4 a koncentrována. Výsledná pevná látka byla rozetřena s Et2O (300 ml) a izolována filtrací pro získání sloučeniny z názvu (45,15 g, 78%):
4H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,72 '(dd, J = 17,0, 10,5 Hz, 1
Η) , 7,20 - 7 ,38 (m, 3 Η) , 7,10 - 7,20 (m, 2 Η), 6,40 (dd, J
- 17,0, 2,1 Hz, 1 Η) , 5 ,77 (dd, J = 10,4, 2,0 Hz, 1 H) f
c 0 c. . / O f v VU. f T — u — 8,5 Hz 1 U \ r o qí _ /1 nn , “3 , V V (m, 1 Η) , 2,85 (s, 3
Η), 0,82 (d,' J.= 6, 6 Hz, 3 H) ;
MS (ES) m/e 245 (M + H)+;
Příprava 8 ...
Příprava 4-methoxyfenylmagnesiumbromidu
Roztok 4-methóxybenzylchloridu . (120 g, 766 mmolů) v bezvodém THF (1,0 1) byl po kapkách přidán v průběhu 1,5 hodin do směsi ‘hořčíkových pilin (74 g, 3,04 molů) a I2 (50 mg; 0,20 mmolů) v bezvodém .THF (0,5 1) za teploty okolí. Během počátečních 10 minut přidávání zmizela hnědá barva a reakční směs se stala horkou. Jednu hodinu po ukončení adice, se teplota směsi vrátila. Titrace použitím 1,10fenanthrolinu indikovala, .že roztok byl 0,36 M Grignardův reagent v THF.
Příprava 9
Příprava ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-(4hydroxyfenyl)butanoátu
-«··.&!·: (a) (4R, 5S) -3,4-Dimethyl-l-.[ (E) -3- (3-fluorfenyl)prop-2enoyl)-5-fenylimidazolidin-2-on
Roztok l-brom-3-fluorbenzenu (525 mg, 3 mmolů), (4R,5S)-1akryloyl-3,4-dimethyl-5-f,enylimidazolidin-2-onu (500 mg, 2 mmolů), Pd{OAc)2 (22 mg, .0,10 mmolů), P(o-toly)3 (61 mg, 0,20· mmolů), a (i-Pr)2NÉt (0,73 ml, 4,2 mmolů) v bezvodém DMF (10 ml) byl zbaven plynů (3 χ vakuum/N2. proplachování) a potom byl zahříván na teplotu 110 °C. Po uplynutí 2 hodin směs -byla ochlazena a vlita do EtOAc. Výsledná směs byla promývána H2O (3x) a spojené vodné vrstvy byly -zpětně extrahovány EtOAc. Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrován přes vrstvu silikagelu á koncentrovány,.· Reziduum bylo vyjmuto ve směsi 1:1 Et2O/hexan (10 ml)'. a' ochlazeno na teplotu -20 . °C .přes noc. Pevná látka byla izolována a sušena ve vakuu pro získání·sloučeniny z názvu (514 mg, 7 6%) : ' '
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,18 (d, J = 15, 9 Hz, 1 H) ,· 7,64
(d, J = 15, 9 Hz, 1 .Η) , 7 ,15 - 7,45 (m, 8 Η) , 6,98 - 7,10
(m, 1 Η) , 5,42 (d, J = 8, 5 Hz, 1 H), 3,88 -'4,03 (m, 1 Η),
2,88 (s, 3 Η), 0,85 (d, J = 6,6 Hz, 3 H);
MS (ES) m/e 339 (M + H)+.
(b) (4R,5S)-3,4-Dimethyl-l-((S)-3-(3-fluorfenylj-4-(4methoxyfenyl)butanoyl)-5-fenylimidazolidin-2-on
Roztok 4-methoxyfenylmagnesiumbromid v THF (0,31 M, 14,7 ml, 4,56 mmolů) byl po kapkách, přidán do míchané suspenze (4R,5S)-3,4-dimethyl-l-[(E)-3-(3-fluorfenyl)prop-2-enoyl]• ·· · ««***«« W • .· ·' · · · · · · ···· ·· ·· · ·· ····
5-fenylimidazolidin-2-onu (514 mg, 1,52 mmolů), CuBr DMS komplexu (229 mg, 1,06 mmolů) a Znl2 (582 mg, 1,8'2 mmolů) ve směsi THF/toluen (10 ml) za teploty -15 °C. Po uplynutí
1,5 hodin byla reakce zastavena nasyceným NH4C1 a směs byla extrahována pomocí EtOAc (3x) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4 a koncentrován db sucha. Reziduum bylo vyjmuto ve směsi 1:1 Et20/hexan a chlazeno na teplotu -20 °C po dobu 18 hodin; Pevná látka byla izolována, promývána směsí 1:1 Et2O/hexan, a sušena ve vakuu pro získání první dávky sloučeniny z názvu. Filtrát byl koncentrován a ' reziduum bylo' purifikováno mžikovou chromatografií na silikagelu (30% EtOAc/hexan) pro získání -další sloučeniny z názvu ve formě.' žlutého oleje, ._ který tuhnul ve vakuu. Celkový výtěžek' sloučeniny z názvu bylk 0,62 g (91%) : 1 ' . . . · ' ’ vH NMR (300. MHz, CDC13) δ 6, 75 .- 7., 37 (m, 13 H) 5,10 (d,‘ -J = 8,5 Hz, 1 H), 3,80 (s, 3 Η),·3,65 - 3,85 (m, . 1 Η) , 3,63 (dd, J = 16,7, 9,6 Hz, 1 H), 3,36 - 3,41 (m, 1 Η) , -'3,14 (dd,. J = 16,7, 4,9 Hz, 1 Η) , 2,72 - 2,8 8 (m, 2 Η) , 2,7 9 (s, , 3' Η) , 0,74 (d, J = 6,6 Hz, 3 H) ..
(c) Ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-(4-methoxyfenyl)butanoát
Roztok 21 % NaOEt v EtOH (0,6 ml, 1,8 mmolů) byl přidán do roztoku (4R, 5S) -3 ,'4-dimethyl-l- [ (S) -3- (3-f luorf enyl) -4- (4methoxyfenyl)butanoyl]-5-fenylimidazolidin-2-onu (620 mg,
1,38 mmolů) v THF (10 ml) . Reakční směs byla míchána po dobu 1 hodiny, potom byla reakce'zastavena nasyceným NH4C1. EtOAc extrakce, sušení (MgSO4) a koncentrace zanechaly reziduum, které bylo filtrováno přes vrstvu silikagelu (15%
8»3·· - ·· · ·· ··.
• · · · · » · · · • · · · 0 · · · ··· »0000000 * • · 0 « 0 0 0 ·
00 0 0 0 ·· · · • 000
EtOAc/hexan). · Filtrát byl koncentrován. pro získání sloučeniny z názvu (263 mg, 60%) vé formě čirého oleje:
XH NMR (300 MHz, CDC13) δ 7,13 - 7,35 (m, 1 H) , 6,80 - 7,00 (m, 5 H) , 6,70 - 6, 80 (m, 2 H) , 4,00 (q, J = 7,1 Hz, 2 H) , 3,81 (s, 3 H), 3,28 - 3,45 (m, 1 H), 2,83 (d, J = 7,5 Hz, 2 H) , 2,65 (dd, J = 15,4, 6,4 Hz, 1 H) , 2,56 (dd, J = 15,4,
8,7 Hz, 1 H), 1,12 (t, J = 7,1 Hz, 3 H).
(d) Ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-(4-hydroxyfenyl)butanoát
Do roztoku ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-(4methoxyfenyl)butanoátu (263 mg, 0,83 mmolů) v ΟΗ2Ο12 (5 ml) za teploty -15 °C byl' přidán ethanthiol (0,30 ml, 4,16 ..mmolů) následovaný A1C13 (555 mg, 4,16 mmolů). Po 'uplynutí 30 minut byla směs zahřáta na teplotu okolí, míchána po dobu dalších 30 minut, potom vlita na led. Led byl ponechán roztát a směs byla extrahována pomocí CH2CI2 (3x). Sušení (MgSO4) a koncentrace daly reziduum, které bylo filtrováno
přes vrstvu silikagelu (30% EtOAc/hexan). Koncentrace
filtrátu poskytla sloučeninu z názvu (250 mg,
kvantitativně):
XH NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,10 - 7,35 (m, 1 H) , 6,78 - 7,00
(m, 5 H), 6,58 - 6,78 (m, 2 H), 5,00 (s, 1 H), 4,00 (q, 2
H), 3,28 - 3,45 (m, 1 H) , 2,83 (d, 2 H) , 2,50 - 2,75 (m, 2
H), 1,17 (t, 3 H).
-»*\£4* • · • · • · · · · · ·♦ ♦·
Příprava 10
Příprava ethyl-(±)-4-(4-hydroxyfenyl)-3-(pyridin-3yl)butanoátu (a) 2-(terč.-butyldimethylsilyloxy)-2-(pyridin-3yl)acetonitril
Do roztoku 3-pyridínkarboxaldehydu (1,0 g, 9,34 mmolů) v CH3CN (45 ml) byl přidán KCN (6,0 g, 93 mmolů), TBDMSCI (1,7 g< 11,21 mmolů) a Znl2 (50 mg, 0,16 mmolů) . Po uplynutí 4 hodin za teploty okolí směs byla filtrována přes .celit® a filtrát byl koncentrován. Mžiková chromatografie na silikagelu (25% EtOAc/hexan) dala sloučeninu z názvu (2,17 g, 94%) ve formě čirého oleje:
3Η NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,63 - 8,73 (m, 2 H) , 7,80 - 7,87 i
(m, 1 H), 7,33 - 7,41 (m, 1 H) , 5,57 (s, 1 H) ,. 0,97 (s, 9
H), 0,27 (s, 3 H), 0,19 (s, 3 H).
(b) (+)-3-(4-Benzyloxyfenyl)-2-(terč.butyldimethylsilyloxy)-2-(pyridin-3-yl)propionitril
LDA byl připraven přidáním n-BuLi, (2,5 M v hexan, 1,93 ml,
4,83 mmolů) do roztoku diisopropylaminu (0,63 ml, 4,83 mmolů) v bezvodém THF (5 ml) za teploty 0 °C. LDA roztok byl po kapkách, přidán do . roztoku 2-(terč.butyldimethylsilyloxy)-2-(pyridin-3-yl)acetonitrilu (1,0 g, 4,03 mmolů) v bezvodém THF (15 ml) za teploty , -78 °C.
Roztok byl míchán po dobu 15 minut potom byl najednou přidán pevný 4-benzyloxybenzylchlorid (1,41 g, 6,05 mmolů).
Reakční směs byla udržována za teploty -78 C po dobu 15 minut, potom byla zahřáta na teplotu okolí. Po uplynutí 30 minut za teploty okolí byla reakce zastavena nasyceným vodným NH4C1 a směs byla míchána po dobu 20 minut, EtOAc extrakce (3x), sušení (MgSO4) , koncentrace a mžiková chromatografie na silikagelu (20% EtOAc/hexan) daly sloučeninu z názvu (769 mg, 43%) ve formě žlutého oleje:
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 8,80 (úzký m, 1 H) , 8,67 - 8,70 ím 7 TR - t 80 ím 1 733-753 \ *· l f ·*» χ χ / f i f 1 1 f ' v \ xtl f -L χ X j f i f I f μιι,
H), 7,08 (d, H) , (s,
H), 6,93 (d, 2 H), 5,10 (s, 2 H) , 3,30 (1/2 Abq, 1
3,18; (1/2 Abq, 1 H) , 0, 99 . (s, 9 H) , 0,12 (s, 3 H) , 0,08
H) .
(c) 2-(4-Benzyloxyfenyl)-1-(pyridin-3-yl)ethanon
Roztok TBAF v THF (1,0 M, 2,2, ml, 2,2 mmolů) byl po kapkách přidán do roztoku (±)-3-(4-benzyloxýfenyl)-2-(terč.butyldimethylsilyloxy)-2-(pyridin-3-yl)propionitrilu (769 mg, 1,73 mmolů) v bezvodém THF (10 ml) za teploty -15 °C. Po uplynutí 30 minut byla .reakční směs byla rozdělena mezi EtOAc a H2O. Vrstvy.byly' separovány a organická vrstva byla promývána H2O, sušena (MgSO4) , filtrováan přes vrstvu silikagelu a koncentrována pro získání nečisté sloučeniny z názvu (492 mg, 94%) ve formě žluté pevné látky:
MS (ES) m/e 304 (M + H)+. Tento materiál byl použit bez dalšího čištění.
(d) Ethyl-4- (4^-benzyloxyfenyl) -3- (pyridin-3-yl) but-2-enoát _ ·· or»·· _ ·· · ·· ·· • $O · · '· · · · · I • - « · · · to .· · • · * · ······· · · • · · i to · · . · · ·' '
Triethylfosfonoaeetát (0,70 ml, 3,46 mmolů) byl po kapkách přidán do suspenze NaH (60% disperze v minerálním oleji, 138 mg, 3,46 mmolů) v bezvodém THF (5 ml) za teploty okolí. Když ustal vývin plynů, byl přidán roztok -2-(4benzyloxyfenyl)-1-(pyridin-3-yl)ethanonu (zhruba 1,73 mmolů, mečistý materiál z Přípravy 10 (c) ) v bezvodém THF (5 ml) a směs byla zahřívána' na teplotu zpětného toku. Po uplynutí 18 hodin byla směs ochlazena ná teplotu okolí, reakce byla zastavena nasyceným vodhý NH4C1 a směs byla v
extrahována EtOAc (3x) .’ Spojené organické látky byly. sušeny (MgSO4) a .koncentrovány pro získání· surové sloučeniny ' z názvu: ,
MS (ES)· m/e 374 (M + H)+. Tento materiál byl použit bez dalšího čištění. ... ‘ , (e) Ethyl-(±)-4-(4-hydroxyfenyl)-3-(pyridin-3-yl)butanoát
Směs ethyl-4-(4-benzyloxyfenyl)-3-(pyridin-3-yl)but-2enoátu (1,73 mmolů) a.10% Pd/C (200 mg) v EtOH (10 ml) byla třepána pod atmosférou H2 (50 psi) v Parrově láhvi. Po uplynutí 4 hodin byla směs filtrován přes celit® a filtrát byl koncentrován. Mžiková chromatografie na silikagelu (50% EtOAc/hexan) dala' nečistou sloučeninu z - názvu (327 mg, 66% ve třech krocích) ve formě žlutého oleje:
MS (ES) m/e 286 (M + H)+. Tento materiál byl použit' bez dalšího čištění.
— • •fiW···- ·· · ·· ·♦
V · 9 9 9 9 9 9 9 9
9-9 · 9 · 9 · · · • · · · ······· · ·
9 9 9 9 9 9 9.9
999· 99 ·· 9 ·· ····
Příprava 11
Příprava ethyl-(S)-4-(4-hydroxyfenyl)-3-(pyridin-3yl)butanoátu (a) (4R,5S)-3,4-Dimethyl-l-[(E)-3-(pyridin-3-yl)prop-2enoyl]-5-fenylimidazolidin-2-on
Roztok 3-brompyridinu (8,6 ml, 88,5 mmolů), (4R,53)-1akryloyl-3,4-dimethyl-5-fenylimidazolidin-2-onu (14,4 g, 59 mmolů), Pd(OAc)2 (662 mg,' 2,95 mmolů), P(o-tolyl)3 (1,80 g,
5,9 mmolů) a (i-Pr)2NEt (22 ml, 124 mmolů) v bezvodém DMF (300 ml) byl zbaven, plynů' (3 χ vakuum/N2 proplach) a potom zahřát na teplotu 110 °C. Po uplynutí 2 hodin byla směs ochlazena a vlita do EtOAc. Výsledná směs byla promývána H2O (3x) a spojené vodné' vrstvy 'byly zpětně extrahovány pomocí EtOAc (2x). Spojené' organické vrstvy byly sušeny nad MgSÓ4/ filtrovány přes vrstvu silikagelu a koncentrovány. Reziduum bylo vyjmuto ve směsi 1:1 EtOÁc/hexan a pevná látka byla izolována,, promývána směsí 1:1 EtOAc/hexan a sušena ve vakuu pro získání první dávky sloučeniny z názvu. Filtrát byl koncentrován a krystalizační proces byl opakován pro získání druhé dávky. Celkový výtěžek sloučeniny z názvu byl 17,53 g (92%):
1H NMR (400 MHz, CDC13)' δ 8,48 - 8/85 (m, 2 Η) , 8,25 (d, J = 15,9 Hz, 1 Η) , 7,89 - 7,97 (m, 1 Η) , 7,68 (d, J = 15,9 Hz, 1 H), 7,15 - 7,38 (m, 6 Η) , 5,43 (d, J = 8,5 Hz, 1 Η), 3,90 - 4,02 (m, 1 Η) , 2,88 (s, .3 Η) , 0,85 (d, J = 6,6 Hz, 3 H) ;
MS (ES) m/e 322 (M + H)+.
*>· · • « • · · • · · ···· ··
• 0 00 • · · * • · 0 • 0 ·
0 0
0000 (b) (4R,5S)-3,4-Dimethyl-l-[(S)-4-(4-methoxyfenyl)-3(pyridin-3-yl)butanoyl]-5-fenylimidazolidih-2-on
Roztok 4-methoxyfenylmagnesiumbromidu v THF (0,33 M, 495 ml, 163,5 mmolů) byl po kapkách přidán do míchané suspenze (4R,.5S) -3,4-dime'thyl-l- [ (E) -3- (pyridin-3-yl)prop-2-enoyl] 5-fenylimidazolidin-2-onu (17,53 g, 54,5 mmolů), CuBr DMS komplex (14,1 g, 65,4 mmolů) a Znl2 (20,9 g, 65,4 mmolů) ve směsi THF/toluen (270 ml) za teploty -15 °C. Po uplynutí 1 hodiny byla reakce zastavena směsí 9:1 nasycený NH4CÍ/konc. NH4OH á· směs byla míchána otevřená na vzduchu po dobu 30 minut. Směs byla zředěna H2O a extrahována EtOAc (3x). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4 a koncentrovány. . Reziduum bylo vyjmuto v - methyl-terc.butyletheru (MTBE, . 200 ml) a uchováváno za teploty -20 °C přes noc. Pevná látka byla izolována, promýván . MTBE a su-šena ve vakuu. Tento materiál byl rekrystalizován ze směsi' 3:1 hexan/EtOAc pro získání sloučeniny z názvu (19,408 g, 80%) :
4Η NMR (400 MHz, , CDC13) δ 8 ,72 (br s, 2 H) , 7,50 (úzký m, 1
H) , 7, 12 --7,35 (m, 4 H), 6,97 - 7,03 (m, 2 H), 6, 94 (d, J
= 8, 6 Hz, 2 H) , 6,72 (d, J = 8,6 Hz, 2 H) , 5,11 (d, J = 8 ,4
Hz, 1 H) , 3,70 - 3,90 (m, 2 H), 3,70 (s, 3 H) , 3,43 - 3, 58
(m, 1 H) , 3,03 - 3,18 (m, 1 H), 2,75 - 2, 95 (m, 2 H) , 2, 71
(s, 3 H) , 0,66 (d, J = 6,5 Hz, 3 H);
MS (ES) m/e 444 (M + H)+.
(c) Ethyl-(S)-4-(4-methoxyfenyl)-3-(pyridin-3-yl)butanoát ••8 9··:·· . · 44 44 • · · 4 4 · 4 • · 4 4 · 4 4 4.· • · 4 4 ······ 4 ·
4 4 4 4 4 4 44 • 444 44 ·· 4 4· 4444
Roztok 21 % NaOEt v EtOH (18,4 ml, 56,88 mmolů) byl přidán do roztoku (4R,5S)-3,4-diméthyl-l-[(S)-4-(4-methoxyfenyl)3-<(pyridin-3-yl) butanoyl] -5-fenylimidazolidin-2-onu (19, 408 g, 43,8 mmolů) v THF (200 ml) za teploty 0 °C. Reakční směs byla míchána po dobu 1 hodiny, potom byla reakce zastavena nasyceným NH4C1 a směs byla extrahována EtOAc (3x). Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrovány. Reziduum bylo vyjmuto ve směsi 1:1 EtOAc/hexan a filtrováno a filtrát byl filtrován přes vrstvu silikagelu·. (1:1 EtOAc/hexan) : Filtrát byl koncentrován pro získání sloučeniny z názvu . (.9,25 g, oleje:
XH NMR (4.00 MHz, CDC13) δ 8,57
H) , 7,17 - 7,25 (m, 11 H) , 6,95
(d, J = 8,6 Hz, 2 H), 4,C 11 (g.
H) , 3,33 - 3,48 (m, 1 H), 2,91
2,8 5 (dd, J = 1 3,7, 7,8 Hz, 1
Hz, 1 H) , 2,61 (dd, J = 15,6,
7,1 Hz, 3 H);
MS (ES) m/e 300 (M + H)+.
%) ve formě oranžového r s, 2 ·Η) , 7,44 (úzký m, 1 (d, J = 8,6 HZ, 2 H) , 6,76 =7,1 Hz, 2 H), 3,75 (s, 3 id, J = 13,7, 7,·3 Hz, 1 H) , ) , 2,71 (dd, J = 15,6, 6,5 ,7 Hz, 1 H) , ..1,13 (t, J = (d) Ethyl-(S)-4-(4-hydroxyfenyl)-3-(pyridin-3-yl)butanoát
Roztok ethyl-(S)-4-(4-methoxyfenyl)-3-(pyridin-3yl)butanoátu (9,25 g, 31 mmolů) v CH2C12 (150 ml) byl ochlazen na teplotu 0 °C. Byl přidán ethanthiol (11,5 ml, 155 mmolů), potom byl po částech přidán A1C13 (20,7 g, 155 mmolů). Po uplynutí 2 hodin byla směs vlita na led, ponechána zahřát se na teplotu' okolí a neutralizována pomocí NaHCO3. Výsledná suspenze byla filtrována . přes
9999 ··
9
9999 ·9
9999 celit® a filtrační vrstva byla promývána CH2CI2. Vrstvy byly separovány a vodná vrstva byla extrahována CH2CI2. Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrovány. Mžiková chromatografie na silikagelu (1:1 EtOAc/hexan) přinesla sloučeninu z názvu (6,435 g, 73%):
XH NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,72, 8,41 (dd, J = 4,9, 1,5 Hz,
1 Η) , 8, 24 (úzký m, 1 Η) , 7,26 (dd, J = 7,8, 4,9 Hz, 1 Η) ,
6,78 (d, J = 8,5 Hz, 2 Η) , 6,64 (d, J = 8,5 Hz, 2 Η) , 4,03
(q, J - 7,1 Hz, 2 Η) , 3,34 - 3,48 (m, 1 Η) , 2,92 (dd, J =
13,7, 1 Hz, 1 Η) , 2,.69 - 2,81 (m, 2 Η) , 2,64 (dd, J =
15,6, 8, 7 Hz, 1 Η), 1,13 (t, J = 7,1 Hz, 3 H) Z
'MS (ES) m/e 286 (M'.+ H) + .
Příklad 1 . ,‘ ' · '
Příprava (±)-4-[4-[2-(6- (methylamino ),pyridin-2.-yl] -1ethoxy] fenyl] -3- [4- (trifluormethyl).fenyl]butanovéi kyseliny
a) Ethyl (±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1ethoxy]fenyl]-3-[4-(trifluormethyl)fenyl]butanoát
Diisopropyl azodikarboxylát .(0,15 ml, 0,767 mmolů) byl přidán v průběhu 2 minut do roztoku ethyl-(±)-4-(4hydroxyfenyl)-3-[4-(trifluormethyl)fenyl]butanoátu (270 mg, 0,767 mmolů), 6-(methylamino)-2-pyridylethanolu (130 mg, 0,92 mmolů) a trifenylfosfinu (200 mg, 0,767 mmolů) v bezvodém THF (5 ml) za teploty 0 °C pod atmosférou N2, Žlutý roztok byl udržován za teploty 0 °C po dobu 10 minut, potom byl zahřát na teplotu okolí. Po uplynutí 24 hodin byla reakční směs koncentrována a reziduum bylo • · • · • · · · chromatografováno na silikagelu (20 EtOAc/hexan). Sloučenina z názvu (200 mg, 54%) byla získána ve formě bezbarvého oleje:
MS (ES) m/e 487 (M + H)+.
b) (±)—4—[4—[2—[6—(Methylamino)pyridin-2-yl] -1ethoxy]fenyl]-3-[4-(trifluormethyl)fenyl]butanová _ __ 1 - Z ι,υ N Nauti (o,z m±, υ,οζο mmoxu; čyx po KapKaoii kyselina přidán do chlazeného (15 °C) roztoku ethyl-(±)-4-[4-[2-[6(methylamino)pyridin-2-yl)-1-ethoxy]fenyl]-3-(4(trifluormethyl)fenyl]butanoátu (200 mg, 0,41 mmolů) v MeOH (3 ml) a směs byla míchána za, teploty okolí po dobu 24 hodin. Výsledný roztok bylkoncentrován ve vakuu.a reziduum bylo rozpuštěno v H2O (5 ml). pH bylo upraveno na hodnotu’5 pomocí 1,0 N HCI a precipitát byl izolován, promýván malým množstvím vody a sušen ve vakuu za teploty .60 °C.
Sloučenina z názvu (120 mg, 64%) byla. získán ve formě bílé pěnovíté pevné látky:
MS (ES) m/e 459 (M + H) + .
Vypočteno pro C2sH25FN2O3 . 0,85 H20: C, 63,38; H, 5,91. .
C, 63,23; H, 5,41; N, 5,73.
Analýza: 5,68; N, Nalezeno:
Příklad 2 'i » Příprava (±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1ethoxyfenyl]-3-[4-[(N-methyl-N-fenylaminó)karbonyl]-1,3oxazol-2-yl]-butanové kyseliny »· ···· •» *
a) Methyl- (±) -3- [4- [ (N-methyl-N-fenylamino) karbonyl] -1,.3oxazol+2ryl] -4- (4-hydroxyfenyl)butanoát
Do roztoku methyl-(±)-3-[4-karboxy-l,3-oxazol-2-yl]-4-[4[(terč.-butyloxykarbonyl)oxy]fenyl]butanoátu (150 mg, 0,37 mmolů), (i-Pr)2NEt (0,1 ml,' 0,56 mmolů), pyridinu (0,09 ml,
1,11 mmolů) a N-methylanilinu· (0,06 ml, 0,56 mmolů) v bezvodém,DMF (2 ml) byl za teploty okolí přidán BPFFH (382 mg, 1,11 mmolů). Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována. Reziduum bylo vyjmuto v 10% HCI (20 ml) a extrahováno pomocí CH2C12 (3 χ 20 ml) . Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány.
Uvedené reziduum bylo za teploty okolí rozpuštěno v 4 N HCI v dioxanu (10 ml) . Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (75% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (14 6 mg) ve formě oranžové pěny kontaminované bis(pentamethylen)močovinou: . '
MS (ES) m/e 417 (M + H)+.
b) Methyl-(±)-4-[4-[2-(6-methylaminopyridin-2-yl) -1ethoxy]fenyl]-3-[4-[(N-methyl-N-fenylamino)karbonyl]-1,3oxazol-2-yl)]butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (0,15 ml, 0,74 mmolů) byl za teploty 0 °C přidán do roztoku methyl-(+)-3-[4-[(N-methylN-f enylamino) karbonyl)-1,3-oxazol-2-yl]-4-(4hydroxyfenyl)butanoátu (146 mg, 0,37 mmolů), ‘ 6(methylamino)-2-pyridylethanolu (113 mg, 0,74 mmolů) a ·· · φφ '·· « · · • ’ · i».·· · · 1 • « φ ·····*· * · • · · φ · · ·
Φ <*· φ ·· ΦΦΦΦ trifenylfosfinu (194 mg, 0,74 mmolů) v CH2C12 (2 ml). Směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí, jak se lázeň zahřívala. Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (50% THF/hexan). Frakce obsahující produkt byly koncentrovány pro ' získání sloučeniny z názvu (322 mg) kontaminované trifenylfosfinoxidem:
MS (ES) m/e 529 (Μ + H)+.
c) (±)-4-[4-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]-lethoxy]fenyl]-3-[4-[(N-fenyl-N-methylamino)karbonyl]-1,3oxazol-2-yl]-butanová kyselina
Do roztoku methyl-(±)-4-(4-(2-(6-methylaminopyridin-2-ylj1-ethoxy]fenyl]-3-[4-[(N-methyl-N-fenylamino)karbonyl]-1,3oxazol-2-yl)]butanoátu (322 mg) v směsi 1:1 THF/H2O (2 ml) byl za . teploty okolí přidán 1,0 N LiOH (0,35 ml, 0,35
- mmolů). Po. uplynutí 18 .hodin směs byla okyselena' na pH 6 použitím 10% HCI a potom . byla koncentrována do sucha. Reziduum bylo čištěno HPLC . s obrácenými fázemi (gradient: 10-80% CH3CN/H2O obsahující 0,1 % TFA). .Frakce obsahující produkt byly zkombinovány a koncentrovány pro odstranění β CH3CN. Výsledný vodný roztok byl lyofilizován pro. získání sloučeniny z názvu (33 mg, 29% ve 3 krocích) ve formě bílé *· pevné látky:
MS (ES) m/ě 515 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro C2?H3oN405 . 1,85 TFA: C, 54,13; H, 4,42; N, 7,72.
Nalezeno: C, 54,17; H, 4,50; N, 7,52.
·· ··
Příklad 3
Příprava (±)-4-[4-[2-[·6-(methylamino) pyridin-2-yl]-1ethoxy]fenyl]-3-(4-(morpholin-4-yl)karbonyl]-1, 3-oxazol-2yl]-butanové kyseliny
a) Methyl-(±)-3-[4-(morpholin-4-yl)karbonyl]-1,3-oxazol-2yl]-4-(4-hydroxyfenyl)butanoát
Do roztoku methyl-(±)-3-[4-karboxy-l,3-oxazol-2-yl]-4-[4[(terč.-butyloxykarbonyl)oxy]fenyl]butanoátu (150 mg, 0,37 mmolů),' (i-Pr)2NEt (0,1 ml, 0,56.mmolů), pyridinu (0,09 ml, '1,11 mmolů) a morfolinu' (0,05 ml, 0,56 mmolů) v bežvodém DMF (2 ml) byl za teploty okolí přidán.BPFFH (382 mg, 1,11 mmolů). Po uplynutí 18 hodin směs byla' koncentrována. Reziduum bylo vyjmuto v 10% HCl. (20 ml) . a - extrahováno CH2C12 (3 χ 20 ml). Spojené organické' vrstvy byly 'sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány. . -.. , - '
Uvedené reziduum bylo za teploty okolí rozpuštěno v 4 N HCl v dioxanu (10 ml) . Po uplynutí 18 hodin, směs byla koncentrována. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (100%· EtOAc) pro získání sloučeniny z názvu (122 mg, 88%) ve formě čirého oleje:
ΤΗ NMR (300 MHz, CDC13) δ 8,05 (s, 1 H) , 7,88 (d, J = 6,6
Hz, 2 H) , 6,70 (d, J = 6,6 Hz, 2 H) , 5,9 (s, 1 H) , 3,73 (bs, 8 H), 3,62 (s, 3 H), 2,85 (m, 5 H) .
• · · · ·» · . ·· ··
b) Methyl-(+)-4-[4-[2-(6-methylaminopyridin-2-yl)-1ethoxy]fenyl]-3-[4-(morpholin-4-yl)karbony!]-1,3-oxazol-2yl)]butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (0,13 ml, 0,66 mmolů) byl za teploty 0 °C přidán do roztoku methyl-(±)-3-[4-(morpholin4-yl)karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl]-4-(4-hydroxyfenyl)butanoátu (122 mg, 0,37 mmolů), 6-(methylamino)-2-pyridylethanolu ( 100 mg, 0,66 mmolů) a trifenyifosfinu (173 mg, 0,66 mmolů) v CH2CI2 (2 ml). . Směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí, jak se lázeň zahřívala. Po uplynutí 18 hodin směs byla. koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (100% EtOAc) . Frakce obsahující produkt byly koncentrovány pro získání sloučeniny z názvu (94 mg) kontaminované trifenylfosfinoxidem:
MS (ES) m/e 509 (Μ + H)+.
c) (±)-4-[4-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]-1ěthoxy]fenyl]-3-[4-(morpholin-4-yl)karbonyl]-1,3-oxazol-2yl]-butanová kyselina
Do roztoku methyl-(±)-4-[4-[2-(6-methylaminopyridin-2-yl)1- ethoxy]fenyl)-3-[4-(mořpholin-4-yl)karbonyl]-1,3-oxazol2- yl)]butanoátu (94 mg, 0,18 mmolů) ve směsi 1:1 THF/H2O (2 ml) byl za teploty okolí přidán 1,0 N LiOH (0,25 ml, 0,25 mmolů) . Po uplynutí 18 hodin směs byla okyselena na pH 6 použitím 10% HCI a potom byla koncentrována do sucha. Reziduum bylo čištěn pomocí HPLC s 'obrácenými fázemi (gradient: 15-35% CH3CN/H2O obsahující 0,1 % TFA). Frakce obsahující produkt byly zkombinovány a koncentrovány pro •Φ ···· odstranění CH3CN. Výsledný vodný roztok byl lyofilizován pro získání sloučeniny z názvu (23 mg, 26% ve 2 krocích) ve formě bílé pevné látky:
MS (ES) m/e 495 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro C26H30N4O6 . 1,75 TFA: C, 49, 76; H,
4,78; N, 7,87.
Nalezeno: C, 49,93; H, 4,97; N, 7,84.
Příklad 4
Příprava (±) -4- [-4- [2- [ 6- (methylamino) pyridin-2-yl] -1ethoxy]fenyl]—3 —[4 —[[N-methyl-N-(2,2,2trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3-oxažol-2-yl]-butanové kyseliny
a) Methyl-(±)-3-[4-[[N-methyl-N-(2,2,2trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl]-4-(4hydroxyfenyl)butanoát
Do roztoku methyl-(±)-3-[4-karboxy-l,3-oxazol-2-yl]-4-[4[(terč.-butyloxykarbonyl)oxy]fenyl]butanoátu (150 mg, 0,37 mmolů), (i-Pr)2NEt (0,1 ml, 0,56 mmolů), pyridinu (0,09 ml,
1,11 mmolů) a hydrochloridu N-methyl-N-(2,2,2trifluorethyl) aminu (84 mg, 0,56 mmolů)' v, bezvodém DMF (2 ml) byl za teploty okolí přidán BPFFH (382 mg, 1,11 mmolů). Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována. Reziduum bylo vyjmuto v 10% HCl (20 ml) a extrahováno CH2C12 (3 χ 20' ml). Spojené organické vrstvy byly sušeny nad MgSO4, filtrovány a koncentrovány.
·· ···· ·· » ·· ·· • · · · * · · · • · Ι· · · ' · '<
’· « '· ····«·· · .* • · · · · · · ’· · · ♦·····
Uvedené reziduum bylo za teploty okolí rozpuštěno v 4 N HCI v dioxanu (10 ml) . ' Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována. Reziduum bylo chromatografováno . na silikagelu (60% EtOAc/hexan) pro získání sloučeniny z názvu (298 mg) ve formě čirého oleje kontaminovaného bis(pentamethylen)močovinou. Olej byl použit v následujícím kroku bez dalšího čištění.
b) Methyl-(±)-4-[4-[2-(6-methyiaminopyr.idin-2-yl)-lethoxý]fenyl]-3-[4-[(N-methyl-N-(2,2,2trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl)]butanoát
Diisopropylazddikarboxylát (0,15 ml, 0,74 mmolů) byl přidán do roztoku . methyl-(±)-3-(4-([N-methyl-N-(2’, 2,2trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl]-4-(4-ť hydroxyfenyl)butanoátu (298 mg, ‘ 0,37 mmolů), ‘ 6(methylamino)-2-pyridylethanolu (113 mg, 0,74 mmolů) a trifenylfosf inu (194 mg, 0,74 mmolů) v CH2CI2 (2 ml), za teploty 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se na· teplotu okolí, jak se lázeň zahřívala. Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (40% EtOAc/hexan). Frakce obsahující produkt byly koncentrovány pro získání sloučeniny z' názvu (115 mg) kontaminované trifenylfosfihoxidem:
MS (ES) m/e 535 (M + H)+.
c) (±)-4-[4-[2-[6-(Methylaminó)pyridin-2-yl]-1ethoxy]fenyl]-3-[4-[(N-methyl-N-(2,2,2trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl]-butanová kyselina
Do roztoku methyl-(+)-4-[4-[2-(6-methylaminopyridin-2-yl)1-ethoxy]fenyl]-3-[4-[[N-methyl-N-(2,2,2trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl)]butanoátu (115 mg, 0,22 mmolů) ve směsi 1:1 THF/H2O (2 ml) byl za teploty okolí přidán 1,0 N LiOH (0,32 ml, 0,32 mmolů). Po uplynutí 18 hodin směs byla okyselena na pH 6 použitím 10% HCI a potom byla koncentrována do sucha. Reziduum bylo čištěno pomocí HPLC s obrácenými fázemi (gradient: 10-80% CH3CN/H2O obsahující. 0,1% TFA). Frakce obsahující produkt byly zkombinovány a koncentrovány pro odstranění CH3CN. Výsledný vodný roztok byl lyofilizován pro získání sloučeniny z názvu (42 mg, 37% ve 3 krocích) ve formě bílé pevné, látky:
MS (ES) m/e 522 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro C25H27F3N4O5 . 1,4 TFA: C, 49, 09; H, 4,21; N, 8,24.
Nalezeno: C, 49,18; H, 4,18; N, 8,22.
Příklad 5
Příprava (+)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1ethoxy]fenyl]-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]butanové kyseliny
a) Methyl-(+)-4-[4-[2-(6-methylaminopyridin-2-yl)-1ethoxy]fenyl]-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (0,14 ml, 0,71 mmolů) byl za teploty 0 °C přidán do roztoku methyl-(±)-3-[499 ·· ···· ·· · ·· (trifluormethyl)thíazol-2-yl]-4-hydroxyfenyl)butanoátu (123 mg, 0,37 mmolů), 6-(methylamiho)-2-pyridylethanolu (108 mg, 0,71 mmolů) a trifenylfosfinu (186 mg, 0,71 mmolů) v CH2CI2 (2 ml). Směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí, jak se lázeň zahřívala. Po uplynutí 18 hodin směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu obsahuj ící sloučeniny \ -L -L (40% EtOAc v produkt byly
1:1 toluen/hexan). Frakce koncentrovány pro získání mg, kontaminované redukovaným
DIAD).:
MS (ES) m/e 480 (Μ + H) +. ' •b) (±)-4-[4-(2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yí]-1ethoxy]fenyl]-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]-butanová’ kyselina
Do roztoku methyl-(±)-4-.[4-[2-(6-methylaminopyridin-2-^yl)1-ethoxy]fenyl]-3-[4-(trifluormethyl)thiazol-2-yl]butanoátu (114 mg, 0,24 mmolů) ve směsi 1:1 THF/H2O (2 ml) byl za teploty okolí přidán 1,0 N LiOH'(0,36 ml, 0,36 mmolů). Po uplynutí 18 hodin směs byla okyselena na pH 6 použitím 10% HC1. Výsledná pevná látka byla izolována filtrací a sušena ve vakuu’ za teploty 50 °C pro získání sloučeniny z názvu (43 mg, 42 %) ve formě bílé pevné látky:
MS (ES) m/e 466 (Μ + H) +.
Analýza: Vypočteno pro C22H22F3N3O3S . 0,'2H2O: C, 56,33; Ή,
4,81; N, 8,96.
Nalezeno: C, 56,34; H, 4,69; N, 8,88.
Příklad 6
100 - ·♦ ···· *· · ·* ·· · · · ···. · · · · · . · · · · · · · · i • ··· ······· · · ··· · · · · · · ···· ·· ·· · ·· ····
Příprava (±)-4- [4-(2-(6-methylaminopyridin-2-yl) -1ethoxy]fenyl]-3-(5-methylthiazol-2-yl)butanové kyseliny
a) Methyl-(±)-4-[4-[2-(6-Methylaminopyridin-2-yl)-1ethoxy]fenyl]-3- (5-methylthiazol-2-yl)butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (0,25 ml, 1,28 mmolů) byl přidán meuiiy±- ví; -4 - ^-nyaroxyrenyi) - (3methylthiazol-2-yl)butanoátu (249 mg, 0,85 mmolů), 6(methylamino)-2-pyridylethanolu (194 mg, 1,28 mmolů) a trifenylfosfinu .(33,6 mg, 1,28 mmolů) v TBME (5 ml) za teploty 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí, jak se lázeň zahřívala’. Po uplynutí 72 hodin směs byla koncentrována a reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (30% EtOAc/CHCl3) . Frakce, obsahující produkt byly koncentrovány pro získání sloučeniny z názvu (385 mg, kontaminované trifenylfosfinoxidem):
MS (ES) m/e 426 (M + H)+.
b) (±)-4-[4-[2-(6-Methylaminopyridin-2-yl)-1-ethoxy]fenyl]3-(5-methylthiazol-2-yl)butanová kyselina
Do roztoku methyl-(±)-4-[4-(2-(6-methylaminopyridin-2-yl)1-ethoxy]fenyl]-3-(5-methylthiazol-2-yl)butanoátu (0,85 mmolů) ve směsi 1:1 THF/H2O (5 ml) byl přidán 1,0 N NaOH (1,28 ml, 1,28 mmolů). Po uplynutí 18 hodin směs byla okyselena na pH 6 pomocí 10% HCI a potom koncentrována do sucha. Reziduum bylo chromatografováno na silikagelu (EtOH) φφ φφφφ
101 ·· · φφ β» φ φ φ φφφ φφφφ φ · φφφφ φ φ · φ φφφ φφφφφφφ φ φ φ φ φ ·’φ φ ' φ· φ φ ’φ φφφφ ·· φφ φ φφ φφφφ pro získání sloučeniny z názvu ve formě žluté pevné látky (217 mg, 62% ve 2 krocích).
MS (ES) m/e 412 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro C22H25N3O3S . 1,2 H2O: C, 61,01; H,
6,38; N, 9,70.
Nalezeno: C, 61,25; H, 6,06; N,.9,32.
Příklad 7
Příprava (S)-3-(3-fluorfenyl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro'1, 8-naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanové kyseliny (a) Ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro1,8-naftyridin-2-yl)ethoxy)fenyl)butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (0,20 ml, 1,0 mmolů) byl za teploty okolí po kapkách přidán do roztoku ethyl-(S)-3-(3fluorfenyl)-4-(4-hydroxyfenyl)butanoátu (250 mg, 0,83 mmolů), 2-(5,6,7,8-tetrahydro-l,8-naftyridin-2-yl)-1ethanolu (178 mg> 1,0 mmolů·)' a trifenylfosfinu (262 mg, 1,0 mmolů) v bezvodém THF (5 ml). Po uplynutí 18 hodin reakční směs byla koncentrována a reziduum bylo · mžikově chromatografováno na silikagelu (5:1 Et2O/hexán) pro získání nečisté sloučeniny.z názvu (236 mg, 61%ý:
MS (ES) m/e 463 (M + H)+.
Ta byla použit bez dalšího čištění.
(b) (S)-3-(3-Fluorfenyl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-l,8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl)butanová kyselina ·· ·· · • · ·' · · · • · · · · · • ! · · · · ^, · ,· · · ' · · · ’· ’· » · ·· ····
1Ó2 ♦· ··«· .¼ ···· ··
1,0. N LiOH (0,76 ml, 0,76 mmolů) byl přidán do roztoku ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-l,8naftyridin-2-yl)ethoxy)fenyl]butanoátu (236 mg, 0,51 mmolů) v THFIH2O (3 ml) a směs byla zahřívána na teplotu 50 °C. Po uplynutí 18 hodin směs byla ochlazena na teplotu okolí a okyselena na pH 6 pomo.cí 10% vodného HCI. EtOAc (5 ml) byl přidán a. směs byla intenzívně míchána. Pevná látka byla izolován podtlakovou filtrací, promývána H2O (2x) a Et2O (2x) a sušen ve vakuu za teploty 50 °C pro získání sloučeniny z názvu:
MS (ES) m/e 435 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro· C26H27FN2O3 . 2,25 HCI: C, 60,46; H, 5,71; N, 5,42;
Nalezeno: C, 60,44; H, 5,34; N, 5,45. .
Příklad 8 . ,
Příprava (±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2yl]ethoxy]fenyl]-3-(pvridin-3-yl)butanové kyseliny (a) Ethyl-(±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-.
yl) ethoxy] fenyl]’-3-(pyridin-3-yl) butanoát.
Postupujíce způsobem podle Příkladu 7 (a), s výjimkou náhrady ethyl-4-(4-hydroxyfenyl)-3-(pyridin-3-yl) butanoátu (327 mg nečistý, 1,15 mmolů) za ethyl-(S)-3-(3-fluorfenyl)4-(4-hydroxyfenyl)butanoát a náhrady 6-(methylamino)-2pyridylethanolu (210 mg, 1,38 mmolů) za 2-(5,6,7,8tetrahydro-1,8-naftyridin-2-yl)-1-ethanol bylsloučenina z ř · ·* «» • · · * · « • · · · · « • ···< · · · · • · · · · ft · ·· ···<
- 103 «· ··*· ···· ·· názvu připravena ve formě nečisté světle oranžové pevné látky po mžikové chromatografii na silikagelu (100% EtOAc): MS (ES) m/e 420 (M + H)+. Tento materiál byl použit bez dalšího čištění.
(b) (±)-4-[4-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]3-(pyridin-3-yl)butanová kyselina extrahována CHCI3 'sušeny (MgSO4) chromatografováno
1,0 N LiOH (3,45 ml, 3,45 mmolů) byl přidán do roztoku ethyl- (±) -4- [4- [2- [6- (methylamino)pyridin-2yl]ethoxy]fenyl]-3-(pýridin-3-yl)butanoátu (1,15 mmolů) v THF/H2O (5 ml) a směs byla zahřívána na teplotu 50 °C. Po uplynutí 18 hodin reakční směs byla ochlazena na teplotu okolí a okyselena na pH 6 pomocí 10% vodného HCl. Směs byla (3x) a spojené organické vrstvy byly a koncentrovány.' Reziduum , bylo na koloně C-18 Bond-Elute (20%
CH3CN/H2O) . Frakce obsahující produkt' byly shromážděny a extrahována CHC13 (3x) a spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrovány. Výsledná pevná látka byla vyjmuta v 2 M. NaOH a promývána EtOAc (2x) . EtOAc extrakty byly vyhozeny. Vodná vrstva byla okyselena na pH 6a extrahována CHCI3 (3x) . Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4) a koncentrovány pro získání sloučeniny z názvu (51 mg, 11%) ve formě bílé pevné látky:
XH NMR (300 MHz , CDCI3) δ 8,32 (m, 2 H), 7
7,2, Hz, 1 H), 7,38 - 7,46 (m, 1 H), 7,12
Hz, 1 H) , 6,86 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6, 68
H) , 6,52 (d, J = 7,2 Hz, 1 H) , 6,37 (d, C
4,15 - 4,30 (m, 2 H), 3,39-3 ,52 (m, , 1 H)
- 104 , . · ·.'· .
• · · · ···· ·· .. ··
Η), 2,85 (s, 3 Η), 2,80 (dd, J = 13,7, 8,9 Hz, 1 Η) , 2,68 (dd, J = 15,1, 8,3 Hz, 1 H), 2,59 (dd, J = 15,1, 6,7 Hz, 1 H); v
MS (ES) m/e 392 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro C23H25N3O3 . 1,3 HCl: C, 62,95; H,
6,04; N, 9,57. ’
Nalezeno: C, 62,84; H, 5,87; N, 9,20.
Příklad 9
Příprava (S)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2yl]ethoxy]fenyl]-3-(pyridin-3-yl)butanové kyseliny (a) Ethyl-(S)-4-[4-[2-[6-(methylamino).pyridin-2yl]ethoxy]fenyl]-3-(pyridin-3-yl)butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (7,8 ’ ml, 39,8 mmolů) byl po kapkách přidán do roztoku ethyl-(S)-4-(4-hydroxyfenyl)-3(pyridin-3-yl)butanoátu (9,455 g, 33,1 mmolů), 6(methylamino)-2-pyridylethanolu (6,06 g, 39,8 mmolů) a trifenylfosfinu (10,44 g, 39,8 mmolů) v bezvodém THF (150 ml) za teploty. 0 °C. Směs byla ponechána zahřát se na teplotu okolí, jak se lázeň zahřívala. Po uplynutí 18 hodin reakční směs byla koncentrována a reziduum bylo mžikově chromatografováno na silikagelu (3% MeOH v 1:1 EtOAc/CHCls) pro získání sloučeniny z názvu (9,2 g, 66%) ve formě viskózního žlutého oleje:
ΤΗ NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,43 (dd, J = 4,8, 1,6 Hz, 1 H) ,
8,39 (d, J = 1,9 Hz, 1 H) , 7,31 - 7/45 (m, 2 H) , 7,13 7,21 (m, 1 H) , 6,91 (d,J = 8,6 Hz, 2 H)', 6,77 (d, J = 8,6
- 105 • · · ·
Hz, 2 H), 6,53 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,24 (d, J =' 8,2 Hz, 1
H), 4,43 - 4,58 (m, 1 H), 4,26 (t, J = 7,0 Hz-, 2 H) , 3,92 -
4,05 (m, 2 H), 3,32 - 3,45 (m, 1 H), 3,04 (t, J = 7, 0 HZ, 2
Η), 2,89 (d, J = 5,3 Hz, 3H), 2,88 (dd, J = 13,7, 7,2 Hz,
H), 2,82 (dd, J = 13,7, 7,8 Hz, 1 H), 2,70 (dd, J = 15,6,
6,3 Hz, 1 H), 2,59 (dd, J= 15,6, 9,0 Hz, 1 H) , 1,11 (t, J = 7,1 Hz, 3 H);
MS (ES) m/e 420 (M + H)+.
(b) (S)-4-[4-[2-[6-(Methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]3-(pyridin-3-yl)butanová kyselina
2,0 M NaOH - (15 ml, 30 mmolů) byl přidán do roztoku ethyl(S.) -4- [4- [2- [6-(methylamino)pyridin-2-yl] ethoxy] fenyl] -3(pyridin-3-yl) butanoátu (9,2 : g, 22 mmolů) ve směsi dioxan/H20 (100 ml) a směs byla zahřívána na teplotu 50 °C. Po.uplynutí 18 hodin byla reakční směs ochlazena na teplotu, okolí, okyselena 10% HCI (25 ml) a koncentrována na 1/3 objemu pro precipitaci gumy. Supernatant byl dekantován a guma ..byla rozdělena mezi H20 a . CHC13. Vrstvy byly separovány· a vodná vrstva byla extrahována CHG13 (3x) . Spojené organické vrstvy byly sušeny (MgSO4)a koncentrovány a reziduum bylo vyjmuto v H2O a 2 M NaOH (30 ml). Roztok byl promýván Et2O (3x) a Et2O extrakty byly vyhozeny. Vodný roztok byl okyselen 10% HCI (50 ml), koncentrován na 1/3 objemu a extrahován CHC13 (3x). Organické vrstvy byly zkombinovány, sušen ’(MgSO4) a koncentrovány pro získání pěny. Tato pěna byla vyjmuta v CH2C12 a roztok- byl zředěn hexanem a koncentrován. Tento proces byl opakován třikrát.
Výsledná pevná látka byla sušena ve vakuu za teploty 65 °C pro získání sloučeniny z názvu (7,96 g, 92%):
NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8,28 (úzký m, 1 Η) , 8,21 (d, J = 1,7 Hz, 1 Η), 7,68 (úzký m, 1 Η), 7,48 (dd, J = 8,5, 7,3
Hz, 1 Η) , 7,30 (dd, J = 7,9, 4,9 Hz, 1 Η) , 6,91 (d, J = 8,6
Hz, 2 Η) , 6,72 (d, J = 8,6 Hz, 2 Η) , 6,56 (d, J = 7,3 Hz, 1
H), 6,44 (d, J = 8,5 Hz, . 1 Η), 4,20 (t, J = 6,6 Hz, 2 Η) ,
3,31-3,42 (m, 1H), 3,02 (t, J = 6,6 Hz, 2 Η) , 2,97 (dd, J =
13,6, 6,5 Hz, 1 Η), 2,87 (s, 3 Η), 2,77 (dd, J = 13,6, 8,9
Hz, 1 Η) , 2,71 (dd, J = 15,6, 6,4 Hz, 1 Η) , 2,62 (dd, J =
15,6, 8,9 Hz, 1 H);
MS (ES) m. /e 392 (M + H)+.
.Analýza: Vypočteno pro C23H25N3O3 . 0,1 H2O: C, 70,25; H,
6,46; N, 10,68.
Nalezeno: C, 70,32; H, 6,50; N, 10,32.
Příklad 10
Příprava (S)-3-(pyridin-3-yl)-4-[4-[2-[5,6,7,8-tetrahydro1,8-naftyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]butanové kyseliny (a) Ethyl-(S)-3-(pyridin-3-yl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro1, 8-naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanoát
Diisopropylazodikarboxylát (0,41 ml, 2,1 mmolů) byl po kapkách přidán do roztoku ethyl-(S)-4-(4-hydroxyfenyl)-3(pyridin-3-yl)butanoátu (500 mg, 1,75 mmolů), 2-(5,6,7,8tetrahydro-1,8-naftyridin-2-yl)-1-ethanolu (374 mg, 2,1. mmolů) a trifenylfosfinu (551 mg, 2,1 mmolů) v bezvodém THF (8 ml) za teploty okolí. Po uplynutí 18 hodin reakční směs • · byla koncentrována a reziduum bylo mžikově chromatografováno na silikagelu (90% EtOAc/hexan potom 5% EtOH/EtOAc) pro získání sloučeniny z názvu (572 mg, 73%) ve formě olej:
ΤΗ N MR (400 MHz ;, CDCI3) δ 8,43 (dd, J =4,8, 1,6 Hz, 1 Η) ,
8, 39 (d, J = 1, 9 Hz, 1 Η), 7,41 (úzký m, 1 H ), 7,17 (dd, J
= 7, 8, 4,8 Hz, 1 H), 7,07 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,90 (d, J
= 8, 6 Hz, 2 Η), 6,76 (d, J = 8, 6 Hz, 2 Η) , 6, 44 (d, J = 7,3
Hz r 1 H), 4,75 (br s, 1 Η), 4,21 (t, J = 7,0 Hz, 2 Η), 3,93
- 4, 08 (m, 2 H) , 3,31 - 3,45 (m, 3 Η), 2,99 ( (t, J = 7,0 Hz,
2 H) , 2,88 (dd, J = 1 3,7, 7,2 Hz, 1 H) , 2,82 (dd, J = 13,7,
7, 8 Hz, 1 Η), 2 , 65 - 2,75 (m, 3 Η) , 2, 59 (dd, J = 15,6, 9,0
Hz, 1 Η) , 1, 85 - 1, 95 (m, 2 Η) , 1,12 (t, J = 7,1 Hz, 3 H) ; MS (ES) m/e 446 (M + H)+.
(b) (S)-3-(Pyridin-3-yl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-lr 8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl)butanová kyselina
1,0 M LiOH (2,6 ml, 2,6 mmolů) byl přidán do roztoku ethyl(S)-3-(pyridin-3-yl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-l, 8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanoátu (572 mg, 1,28 mmolů) v THF/H2O (8 ml) a směs byla zahřívána na teplotu 50 °C. Po uplynutí 18 hodin byla reakční směs ochlazena na teplotu okolí a okyselena na pH 6,0 pomocí 10% HCI. Precipitovaná pevná látka byla izolována podtlakovou filtrací, promývána H2O a sušena ve vakuu pro získání sloučeniny z názvu (414 mg, 77%) :
hi NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8,28 (dd, J = 4,9, 1,4 Hz, 1 H) , 8,21 (d, J = 1,8 Hz, 1 Η) , 7,68 (d, J = 8,0 Hz, 1 Η) ,
- 108 .7,25-7,27 (m, 2 Η), 6,91 (d, J = 8,6 Hz, 2 Η), 6,71 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,53 (d, J = 7,3 Hz, 1 Η) , 4,08 - 4,22 (m,
H), 3,30 - 3,45 (m, 3 Η) , 2,90 - 3, 05 (m, 3 Η) , 2,70 2,85 (m, 3 Η), 2,68 (dd, J = 15,2, 6,7 Hz, 1 Η) , 2,58 (dd,
J = .15,2, 8,5 Hz, 1 Η) , 1,80 - 1,97 (m, 2 H) ;
MS (ES) m/e 418 (M + H)+.
Analýza: Vypočteno pro C23H25N3O3 , 0,25 H2O: C, 71,15; H,
6,57; N, 9,96.
, Nalezeno: C, 71. 1 1; H, 6,66; N, 9,82.
Příklad 11
Kompozice pro parenťerální jednotkovou dávku
Přípravek, který obsahuje 20 mg sloučeniny z Příkladu 1 ve formě sterilního suchého prášku se připraví následujícím způsobem: 20 mg sloučeniny se rozpustí v 15 ml destilované vody. Roztok se filtruje za sterilních podmínek do 25 ml multidávkové ampule a lyof.ilizuje. Prášek se rekonstituuje přidáním 20 ml 5% dextrózy ve vodě (D5W) pro intravenózní nebo intramuskulární injekci. Dávka se určí ‘ volbou injekčního objemu. Následné zředění může být provedeno
·. - přidáním odměřeného množství této jednotkové dávky do odměřeného objemu D5W pro injekci nebo může být odměřená f dávka přidána do jiného mechanismu pro podávání léku, jako je láhev nebo vak pro IV infúzi nebo do jiného injekčněinfúzního systému.
109 ·· ···· ► ·· · 9 ·
Příklad 12
Kompozice pro orální jednotkovou dávku
Kapsle pro orální podávání se připraví smícháním a rozemletím 50 mg sloučeniny z Příkladu 1 s 75 mg laktózy a 5 mg stearanu horečnatého. Výsledný prášek se prosívá a plní do tvrdé želatinové kapsle.
Příklad 13
Kompozice pro orální jednotkovou dávku
Tableta pro orální podávání se připraví smícháním a granulací 2.0· mg sacharózy, 150 mg dihydrátu síranu vápenatého a 50 mg sloučeniny z Příkladu 1. s 10% roztokem želatiny. Vlhké granule se třídí, suší, smíchají s 10 mg škrobu, 5 mg talku a 3 mg kyseliny stearové a lisují do tablet.
Výše uvedený popis plně popisuje výrobu a použití sloučenin podle předloženého vynálezu. Předložený vynález však není omezen na konkrétní provedení popsaná výše, ale zahrnuje všechny modifikace, které· spadají do rozsahu předložených patentových nároků. Různé reference na články v časopisech, patenty a další publikace, které jsou zde citovány, popisují stav techniky a jsou zde zahrnuty jako reference.
Zastupuje: dr. P. Zelený
• ·
JUDr. Pavel Zelený advokát
- - ~ ·· ··♦· · no j .
• ··· ····· • · · · · · • ·· · ·· ·· · »· ··»·
Hálkova 2,120 00 Praha 2

Claims (1)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Sloučenina obecného.vzorce (I) :
    R--O (I)
    Ve kterém:
    R1 je Het- nebo Ar;
    R2 je (CH,).
    2/2 nebo (CH2) '2/2 nebo její farmaceuticky přijatelná sůl,
    2. Sloučenina podle nároku 1 ve které R1 je:
    - 111 ·· ···· ip.
    (»· kde R' je Ci_4alkyl a R j R' a R společně vytvářejí
    3. Sloučenina podle nároku ; fenyl, benzyl nebo-CH2CF3,· morfolinylový kruh.
    ve které R2 je:
    nebo (CH2)2—
    4. Sloučenina podle nároku 1 ve které R2 je:
    112 .*·.···:
    • · • · ·
    0000 ·· ·
    • 0 · • · · * • · ···· • · ·
    0 ·· 99 • · 9 9
    0 · • · · • · ·
    0« 0000
    5. Sloučenina která je:
    (+)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-(4-(trifluormethyl)fenyl]butanová kyselina;
    (±)-4-[4- [2-(6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-[(N-methyl-N-fenylamino)karbbnyl]-1,3-oxazol-2yl]butanová kyselina;
    (±) -4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-[(morpholin-4-yl)karbonyl]-1,3-oxazol-2-yl]butanová kyselina;
    (±)—4—[4—[2—[6—(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-[[N-methyl-N-(2,2,2-trifluorethyl)amino]karbonyl]-1,3oxazol-2-yl]butanová kyselina;
    (±)—4—[4—[2—[6—(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-[4-(trifluormethyl)thiaxol-2-yl]butanová kyselina;
    (±)-4-(4-(2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]-1-ethoxy]fenyl]3-(3-methylthiazol-2-yl)butanová kyselina;
    - 113 ♦ · <···
    9 · • · ♦ 9 9
    9 9
    9999 99 «
    « · · • 9 9 9
    99999
    9 9
    99
    9 9 9
    9 * • · · • · 9
    9999 (S)-3-(3-fluorfenyl)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahydro-l,8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanová kyselina;
    (±)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]-3(pyridin-3-yl)butanová kyselina;
    (S)-4-[4-[2-[6-(methylamino)pyridin-2-yl]ethoxy]fenyl]-3(pyridin-3-yl)butanová kyselina; nebo (S) - 3-(pyridin-3-yl)—4—[4 — [2— (5,6,7,8-tetrahydro-l,8naftyridin-2-yl)ethoxy]fenyl]butanová kyselina;
    nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
    6. Farmaceutická kompozice vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu podle kteréhokoli z nároků 1-5 a farmaceuticky přijatelný nosič.
    7. Farmaceutická kompozice vyznačující se tím, že zahrnuje sloučeninu podle nároku 1, antineoplastické činidlo a farmaceuticky přijatelný nosič.
    8. Farmaceutická kompozice podle nároku 6, vyznačující se tím, že antineoplastické činidlo je topotecan nebo cisplatin.
    9. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1, inhibitor kostní resorpce a farmaceuticky přijatelný nosič.
    114 • · · · • ·
    10. Způsob léčení chorobného stavu ve kterém je indikován antagonismus ανβ3 receptoru, vyznačující se tím, že •zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 1 subjektu, který má její potřebu.
    11. Způsob léčení chorobného stavu ve kterém je indikován antagonismus ανβ5 receptoru, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 1 subjektu, který má její potřebu.
    12. Způsob léčení osteoporózy, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 1 subjektu, který má její potřebu.
    13. Způsob inhibice angiogeneze, růstu nádoru nebo metastázy nádoru, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku.1 subjektu, který má její potřebu.
    14. Způsob léčení aterosklerózy, restenózy nebo rheumatoidní artritidy, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání sloučeniny podle nároku 1 subjektu, hkterý má její potřebu.
    15. Způsob inhibice růstu nádoru, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučeniny podle nároku 1 a antineoplastického činidla.
    16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že antineoplastické činidlo je topotecan nebo cisplatin.
    115 • · ··· · ·· 4
    17. Způsob léčení osteoporózy nebo inhibice ztráty kostní hmoty, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání po sobě nebo ve fyzické kombinaci sloučeniny podle nároku '1 a inhibitoru kostní resorpce.
    18. Sloučenina podle kteréhokoli z nároků 1 až 5 pro použití jako léčivo.
    19. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení onemocnění ve kterých je indikován antagonismus ανβ3 receptoru.
    20. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) pro výrobu , léčiva pro léčení onemocnění indikován antagonismus avps receptoru.
    podle nároku '1 ve kterých je
    21. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení osteoporózy.
    22. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro inhibici angiogenese, růstu nádoru nebo metastázy nádoru.
    23. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení aterosklerózy, restenózy nebo rheumatoidní artritidy.
    ·· ····
    116 ·· · ·· »·, • · · · * · «····· 1 • ······· · · »· ···
    24. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 a
    antineoplastického činidla pro výrobu léčiva pro inhibici růstu nádoru ve podávání. fyzické kombinaci nebo pro postupné 25. Použití podle nároku 24 ve kterém antineoplastické
    činidlo je topotecan nebo cisplatin.
    26. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle nároku 1 a inhibitorukostní resorpce pro výrobu léčiva pro léčení osteoporózy ve fyzické kombinaci nebo pro postupné podávání. , .
    Zastupuje:
    dr. P. Zelený l· lo
CZ2002822A 1999-09-07 2000-09-07 Antagonisté receptoru vitronektinu CZ2002822A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15278099P 1999-09-07 1999-09-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2002822A3 true CZ2002822A3 (cs) 2002-07-17

Family

ID=22544416

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2002822A CZ2002822A3 (cs) 1999-09-07 2000-09-07 Antagonisté receptoru vitronektinu

Country Status (29)

Country Link
EP (1) EP1218005B1 (cs)
JP (1) JP4685307B2 (cs)
KR (1) KR100711170B1 (cs)
CN (1) CN1236767C (cs)
AR (1) AR025589A1 (cs)
AT (1) ATE284870T1 (cs)
AU (1) AU768918B2 (cs)
BR (1) BR0013749A (cs)
CA (1) CA2384671A1 (cs)
CO (1) CO5200845A1 (cs)
CZ (1) CZ2002822A3 (cs)
DE (1) DE60016769T2 (cs)
EG (1) EG24179A (cs)
ES (1) ES2234658T3 (cs)
GC (1) GC0000203A (cs)
HK (1) HK1049110B (cs)
HU (1) HUP0202710A3 (cs)
IL (2) IL148325A0 (cs)
MX (1) MXPA02002455A (cs)
NO (1) NO322109B1 (cs)
NZ (1) NZ517296A (cs)
PE (1) PE20010582A1 (cs)
PL (1) PL200404B1 (cs)
PT (1) PT1218005E (cs)
TR (1) TR200200614T2 (cs)
TW (1) TWI255813B (cs)
UY (1) UY26329A1 (cs)
WO (1) WO2001017959A2 (cs)
ZA (1) ZA200201780B (cs)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6531494B1 (en) 2001-08-29 2003-03-11 Pharmacia Corporation Gem-substituted αvβ3 antagonists
US6982263B2 (en) 2001-06-08 2006-01-03 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Nitriles useful as reversible inhibitors of cysteine proteases
GB0315509D0 (en) 2003-07-02 2003-08-06 Meridica Ltd Dispensing device
MY146532A (en) * 2004-03-05 2012-08-15 Taisho Pharmaceutical Co Ltd Thiazole derivative
CA2804744C (en) 2010-07-14 2019-05-28 Novartis Ag Ip receptor agonist 1,8-naphthyridinyl and 7,8-dihydropyrido[3,2-b]pyrazinyl heterocyclic compounds
ES2565826T3 (es) 2012-01-13 2016-04-07 Novartis Ag Pirroles fusionados como agonistas del receptor IP para el tratamiento de hipertensión arterial pulmonar (PAH) y trastornos relacionados
EP2956455B1 (en) 2013-02-13 2017-05-17 Novartis AG Ip receptor agonist heterocyclic compounds
CN108675954A (zh) * 2018-04-03 2018-10-19 爱斯特（成都）生物制药股份有限公司 2-氨基-3-羟甲基吡啶的一种制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08325264A (ja) * 1995-05-31 1996-12-10 Sumitomo Metal Ind Ltd 新規２−芳香環置換−３−フェニルプロピオン酸またはアクリル酸誘導体
JPH08325263A (ja) * 1995-05-31 1996-12-10 Sumitomo Metal Ind Ltd 新規２−アミノ−３−フェニルプロピオン酸誘導体
EP0895475A4 (en) * 1995-12-29 2000-08-23 Smithkline Beecham Corp VITRONECTIN RECEPTOR ANTAGONISTS
AU8750298A (en) * 1997-08-28 1999-03-22 Ono Pharmaceutical Co. Ltd. Peroxisome proliferator-activated receptor controllers
AR015446A1 (es) * 1997-09-19 2001-05-02 Smithkline Beecham Corp Antagonistas de receptores de vitronectina, composicion farmaceutica que los contiene, procedimiento para su preparacion, su uso para la elaboracion de unmedicamento y compuestos intermediarios
AR015241A1 (es) * 1998-03-10 2001-04-18 Smithkline Beecham Corp Antagonistas del receptor de vitronectina composicion farmaceutica que los contiene, procedimiento para su preparacion y su empleo para la fabricacion deun medicamento.
WO2000009503A1 (en) * 1998-08-13 2000-02-24 Merck & Co., Inc. Integrin receptor antagonists

Also Published As

Publication number Publication date
EP1218005B1 (en) 2004-12-15
EP1218005A4 (en) 2002-10-09
PT1218005E (pt) 2005-05-31
ES2234658T3 (es) 2005-07-01
JP4685307B2 (ja) 2011-05-18
NO20021113L (no) 2002-05-03
UY26329A1 (es) 2001-07-31
CA2384671A1 (en) 2001-03-15
NO322109B1 (no) 2006-08-14
EG24179A (en) 2008-09-28
WO2001017959A3 (en) 2001-05-10
MXPA02002455A (es) 2002-07-02
CO5200845A1 (es) 2002-09-27
AU7354300A (en) 2001-04-10
ZA200201780B (en) 2003-05-28
CN1236767C (zh) 2006-01-18
BR0013749A (pt) 2003-06-10
KR100711170B1 (ko) 2007-04-27
NO20021113D0 (no) 2002-03-06
HUP0202710A3 (en) 2003-06-30
HUP0202710A2 (hu) 2002-12-28
KR20020027624A (ko) 2002-04-13
WO2001017959A2 (en) 2001-03-15
CN1377269A (zh) 2002-10-30
PL200404B1 (pl) 2009-01-30
IL148325A0 (en) 2002-09-12
EP1218005A2 (en) 2002-07-03
IL148325A (en) 2007-06-03
PE20010582A1 (es) 2001-06-23
PL354176A1 (en) 2003-12-29
GC0000203A (en) 2006-03-29
AR025589A1 (es) 2002-12-04
DE60016769D1 (de) 2005-01-20
DE60016769T2 (de) 2005-11-24
NZ517296A (en) 2003-11-28
TR200200614T2 (tr) 2002-07-22
TWI255813B (en) 2006-06-01
HK1049110B (zh) 2005-07-22
ATE284870T1 (de) 2005-01-15
JP2003508516A (ja) 2003-03-04
AU768918B2 (en) 2004-01-08
HK1049110A1 (en) 2003-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI721335B (zh) 鹵代烯丙基胺類ssao/vap-1抑制劑及其用途
KR101564634B1 (ko) 축합 아미노디하이드로 티아진 유도체
JPH11514651A (ja) 置換ピリジルピロール、前記化合物を含む組成物及び使用方法
JP2002508323A (ja) インテグリン受容体拮抗薬
MX2014012296A (es) Derivados de imidazotiadiazol e imidazopirazina como inhibidores del receptor activado de proteasa 4 (par4) para el tratamiento de agregacion plaquetaria.
WO2009083526A1 (en) Novel compounds
AU758498B2 (en) Vitronectin receptor antagonists
US20050234029A1 (en) Compounds
CZ2002822A3 (cs) Antagonisté receptoru vitronektinu
US6495560B1 (en) Vitronectin receptor antagonist
JP5201694B2 (ja) アゼチジン化合物およびその医薬用途
US6881736B1 (en) Vitronectin receptor antagonists
US6458814B1 (en) Vitronectin receptor antagonists
WO2005028453A1 (ja) フェニル酢酸誘導体、その製造方法および用途
US20020147334A1 (en) Vitronectin Receptor Antagonists
CZ20003289A3 (cs) Antagonisté receptoru vitronektinu
MXPA00008847A (en) Vitronectin receptor antagonists
MXPA01001386A (en) Vitronectin receptor antagonists
MXPA00002700A (en) Vitronectin receptor antagonists