MXPA02002455A - Antagonistas receptores de vitronectina. - Google Patents

Antagonistas receptores de vitronectina.

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Abstract

Se describen compuestos de la formula (1) (ver formula) los cuales son antagonistas del receptor de vitronectina y son utiles en el tratamiento de osteoporosis en donde Rl es Het- o Ar; R2 es formula (a) o formula (b); (ver formula) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Description

ANTAGONISTAS RECEPTORES DE VITRONECTINA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a compuestos farmacéuticamente activos que inhiben el receptor de vitronectina y son útiles para el tratamiento de inflamación, cáncer y trastornos cardiovasculares, tales como aterosclerosis y restenosis y enfermedades en donde es un factor la reabsorción de huesos , tal como osteoporosis.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las integrinas son una superfamilia de receptores de adhesión celular, que son glicoproteínas transmembrana expresadas en una variedad de células. Estos receptores de adhesión de superficie celular incluyen gpllb/llla (el receptor de fibrinógeno) y avß3 (el receptor de vitronectina). El receptor de fibrinógeno gbllb/llla se expresa en la superficie de las plaquetas y media la agregación de plaquetas y la formación de un coágulo hemostático en el sitio de una herida sangrante. Philips y otros, Blood, 1988, 71 , 831. El receptor de vitronectina avß3 se expresa en un número de células, incluyendo células endoteliales, del músculo liso, de osteoclastos y tumorales, y por lo tanto, tiene una variedad de funciones. El receptor avß3 expresado en la membrana de células de osteoclastos media la adhesión de osteoclastos a la matriz del hueso, un paso clave en el proceso de reabosorción del hueso. Ross, y otros, J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. Una enfermedad caracterizada por la reabsorción de huesos excesiva es osteoporosis. El receptor avß3 expresado en células del músculo liso aórtico humano media su migración en neointima, un proceso que puede conducir a restenosis después de la angioplastía coronaria percutánea. Brown, y otros, Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. Adicionalmente, Brooks, y otros, Cell, 1994, 79, 1157 ha mostrado que un antagonista de avß3 es capaz de promover la regresión de tumores induciendo la apotosis de vasos sanguíneos angiogénicos. Por lo tanto, los agentes que bloquean el receptor de vitronectina podrían ser útiles para tratar enfermedades, tales como osteoporosis, restenosis y cáncer. El receptor de vitronectina ahora se conoce porque se refiere a tres integrinas diferentes, designadas avß?, avß3 y avßs. Horton, y otros, Int. J. Esp. Pathol., 1990, 71, 741, avß3 se une a fíbronectina y vitronectina. avßs se une a una gran variedad de ligandos, incluyendo fibrina, fibrinógeno, laminina, trombospondina, vitronectina, factor de von Willebrand, osteopontina y sialproteína I de huesos. avßs se une a vitronectina. Se ha mostrado que el receptor avß5 está implicado en una adhesión celular de una variedad de tipos de células, incluyendo células endoteliales microvasculares, (Davis y otros, J. Cell. Biol., 1993, 51 , 206), y se configuró su papel en angiogénesis. Brooks y otros, Science, 1994, 264, 569. Esta integrina se expresó en vasos sanguíneos en el tejido de granulación de heridas humano, pero no en piel normal.
Se sabe que el receptor de vitronectina se une a las proteínas de matriz ósea las cuales contienen el motivo de tripéptidos Arg-Gly-Asp (o RGD). Por lo tanto, Horton y otros, Exp. Cell. Res. 1991 , 195, 368, describe que los péptidos que contienen RGD y un anticuerpo de receptor anti-vitronectina (23C6) inhibe la reabsorción de dentina y la difusión celular por los osteoclastos. Además, Sato, y otros, J. Cell Biol. 1990, 111 , 1713 describe que la equistatina, un péptido de veneno de víbora que contiene la secuencia de RGD, es un potente inhibidor de reabsorción ósea en cultivo de tejidos, e inhibe la unión de osteoclastos a los huesos. Ahora se ha descubierto que ciertos compuestos son inhibidores potentes de los receptores avß3 y avßs. En particular, se ha descubierto que dichos compuestos son inhibidores más potentes del receptor de vitronectina que el receptor de fibrinógeno.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención comprende compuestos de la fórmula (I) como se describe más adelante, los cuales tienen actividad farmacológica por la inhibición del receptor de vitronectina y son útiles en el tratamiento de inflamación, cáncer y trastornos cardiovasculares, tales como aterosclerosis y restenosis, y enfermedades en donde la reabsorción ósea es un factor, tal como osteoporosis.
Esta invención también es una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) y un vehículo farmacéutico. Esta invención también es un método para tratar enfermedades que se median por el receptor de vitronectina. En un aspecto particular, los compuestos de esta invención son útiles para tratar aterosclerosis, restenosis, inflamación, cáncer y enfermedades en donde la reabsorción ósea es un factor, tal como osteoporosis.
DESCRIPCIÓN DETALLADA Esta invención comprende compuestos novedosos que son inhibidores más potentes del receptor de vitronectina que el receptor de fibrinógeno. Esta invención comprende compuestos de la fórmula (I): en donde: R1 es Het- o Ar; R2 es o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En esta invención también se incluyen sales de adición y complejos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención. En los casos en donde los compuestos de esta invención pueden tener uno o más centros quirales, a menos que se especifique, esta invención incluye cada compuesto único no racémico que puede sintetizarse y resolverse por técnicas convencionales. De acuerdo con la presente invención, se prefiere la configuración (S) de los compuestos de la fórmula (I). En los casos en los cuales los compuestos tienen dobles ligaduras carbono-carbono insaturadas, tanto los isómeros cis (Z) y trans (E) están dentro del alcance de esta invención. En los casos en donde pueden existir comDuestos en formas tautoméricas, tales como ceto-enol tautomeros, O OR' tales como ^. L^,^ y .— -"^ss- cada forma tautomérica se contempla por estar incluida dentro de esta invención ya sea que exista un equilibrio o esté cerrada en una forma por sustitución apropiada con R'. Los compuestos de la fórmula (I) inhiben la unión de vitronectina y otros péptidos que contienen RGD al receptor de vitronectina. La inhibición del receptor de vitronectina en osteoclastos inhiben la reabsorción ósea osteoclástica y es útil en el tratamiento de enfermedades en donde se asocia la reabsorción ósea con patología, tal como osteoporosis y osteoartritis. En otro aspecto, esta invención es un método para estimular la formación ósea que comprende administrar un compuesto el cual ocasiona un incremento en la liberación de osteocalcina. La producción ósea incrementada es un beneficio claro en estados de enfermedad en donde hay una deficiencia de masa ósea mineralizada o se desea la remodelación de los huesos, tal como curación de fracturas y prevención de fracturas óseas. Las enfermedades y trastornos metabólicos que dan como resultado la pérdida de la estructura ósea también podría beneficiarse de dicho tratamiento. Por ejemplo, el hiperparatiroidismo, enfermedad de Paget, hipercalcemia de malignidad, lesiones osteolíticas producidas por metástasis ósea, pérdida de hueso debido a la inmovilización o deficiencia de hormona sexual, enfermedad de Beh?et, osteomalacia, hiperoptosis y osteopetrosis, podría beneficiarse por la administración de un compuesto de esta invención. Adicionalmente, dado que los compuestos de la presente invención inhiben los receptores de vitronectina en un número de diferentes tipos de células, dichos compuestos podrían ser útiles en el tratamiento de trastornos inflamatorios tales como artritis reumatoide y psoriasis, y enfermedades cardiovasculares, tales como aterosclerosis y restenosis. Los compuestos de la fórmula (I) de la presente invención pueden ser útiles para el tratamiento o prevención de otras enfermedades incluyendo, pero no limitado a, trastornos tromboembólicos, asma, alergias, síndrome de aflicción respiratoria en adultos, enfermedad de injerto contra huésped, rechazo de trasplantes de órganos, choque séptico, eczema, dermatitis de contacto, enfermedad inflamatoria de intestino y otras enfermedades autoinmunes. Los compuestos de la presente invención también pueden ser útiles para curar heridas.
Los compuestos de la presente invención también son útiles para el tratamiento, incluyendo prevención, de trastornos angiogénicos. El término trastornos angiogénicos como se usa en la presente incluyen condiciones que implican la neovascularización anormal. En donde la causa es el desarrollo de nuevos vasos sanguíneos, o contribuye a, la patología asociada con una enfermedad, la inhibición de angiogénesis reducirá los efectos perjudiciales de la enfermedad. Un ejemplo de dicha enfermedad blanco es retinopatía diabética. En donde se requiere el desarrollo de vasos sanguíneas nuevos para soportar el desarrollo de un tejido nocivo, la inhibición de angiogénesis reducirá el suministro sanguíneo al tejido y así contribuirá a la reducción en masa de tejido basada eri los requerimientos de suministro sanguíneo. Ejemplos incluyen el crecimiento de tumores en donde la neovascularización es un requerimiento continuo con el fin de que el tumor crezca y se establezca la metástasis tumoral sólida. Así, los compuestos de la presente invención inhiben angiogénesis del tejido tumoral, evitando así metástasis tumoral y desarrollo tumoral,. Por lo tanto, de acuerdo con los métodos de la presente invención, la inhibición de angiogénesis usando los compuestos de la presente invención pueden disminuir los síntomas de la enfermedad, y, en algunos casos, pueden curar la enfermedad. Otro blanco terapéutico para los compuestos de la presente ¡nvención son enfermedades oculares caracterizadas por neovascularización, Dichas enfermedades oculares incluyen trastornos neovasculares de la córnea, tales como el transplante de cornea, queratitis herpética, queratitis luética, pterigio y paño neovascular asociado con el uso de lentes de contacto. Las enfermedades oculares adicionales incluyen también degeneración macular relacionada con la edad, histoplasmosis ocular presupuesta, retinopatía de premadurez y glaucoma neovascular. Esta invención además provee un método para inhibir el desarrollo tumoral que comprende administrar por pasos o en combinación física de un compuesto de la fórmula (I) y un agente antineoplástico, tal como topotecan y cisplatina. Con respecto a la fórmula (I), adecuadamente Ri es en la cual R' es alquilo de C1- y R" es fenilo, bencilo o -CH2CF3; o R' y R" se unen para formar un anillo de morfolinilo. Adecuadamente, R2 es: Representativo de los compuestos novedoso de esta invención son los siguientes: Acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilam¡no)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-(tr¡fluorometil)fenil]butanó¡co; Acido (±)-4-[4-[2-[6-(met¡lamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-'(N-metil-N-fenilamino)carbonil]-1 ,3-oxazoI-2-il]-butanóico; Acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]feniI]-3-[4- (morfolin-4-il)carbonil]-1 ,3-oxazol-2-il]butanóico; Acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-[[N-metil-N^^^-trifluorometilJaminojcarbonil-I .S-oxazol^-ilj-butanóico; Acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-(tr¡fluorometil)tiazol-2-il]butanóico; Acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)p¡ridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-(3-metiItiazol-2-il)butanóico; Acido (S)-3-(3-fluorofenil)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)etoxifenil]butanóico; Acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3- (pir¡din-3-il)butanóico; Acido (S)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3- (piridin-3-il)butanóico; y Acido (S)-3-(piridin-3-il)-4-[4-t2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanóico; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En los casos en donde los compuestos de esta invención pueden tener uno o más centros quirales, a menos que se especifique de otra manera, esta invención incluye cada compuesto no racémico único que puede sintetizarse y resolverse por técnicas convencionales. En los casos en los cuales los compuestos tienen dobles ligaduras carbono-carbono insaturadas, amos isómeros cis (Z) y trans (E) están dentro del alcance de esta invención. El significado de cualquier sustituyente en cualquiera de una ocurrencia es independiente de este significado, o cualquier otro significado del sustituyente, en cualquier otra presentación. También se incluyen en esta ¡nvención los profármacos de los compuestos de esta invención. Se considera que los profármacos son portadores unidos covalentemente los cuales liberan el fármaco madre activo de acuerdo con la fórmula (I) in vivo. Por lo tanto, en otro aspecto de esta invención son profármacos novedoso, los cuales también son intermediarios en la preparación de los compuestos de la fórmula (a), de la fórmula (II): Las abreviaturas y símbolos utilizados comúnmente en el péptido y técnicas químicas se usan en la presente para describir los compuestos de esta invenció. En general, las abreviaturas de aminoácidos siguen la Comisión Conjunta de la IUPAC-IUB en Nomenclatura Bioquímica como se describe en Eur. J. Biochem, 15á, 9 (1984). Alquilo de C1-4 como se aplica en la presente significa un grupo alquilo sustituido opcionalmente de 1 a 4 átomos de carbono, e incluye metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo y t-butilo. Cualquier alquilo de C?-4 puede sustituirse opcionalmente con el grupo Rx, que puede ser únicamente un átomo de carbono que da como resultado una estructura estable y está disponible por técnicas sintéticas convencionales. Los grupos adecuados para Rx son alquilo de C- , OR*, SR*, alquilsulfonilo de C1.4, alquilsulfonilo de C1-4, -CN, N(R*)2, CH2N(R*)2, -NO2, -CF3> -CO2R*-CON(R*)2> -COR*, -SO2N(R*)2, -NR*(O)R*, F, Cl, Br, I, o CH3S(O)R-, en donde r es 0, 1 ó 2, y R* es H, alquilo de C1-4, fenilo o bencilo. Halógeno o halo significa F, Cl, Br, e I. Ar, o arilo, como se aplica en la presente, significa fenilo o naftilo, o fenilo o naftilo sustituido por uno a tres sustituyentes, tales como aquellos definidos antes para alquilo, especialmente alquilo de C-M, alcoxi de C?-*, alquiltio de d-4, CF3, NH2, OH, F, Cl, Br o I. Het, o heterociclo, indica un anillo monocíclico de cinco o seis miembros opcionalmente sustituido, o un anillo bicíclico de nueve o diez miembros que contiene de uno a tres heteroátomos elegidas del grupo de nitrógeno, oxígeno y azufre, que son estables y están disponibles por síntesis química convencional. Los heterociclos ilustrativos son benzofurano, bencimidazol, benzopirano, benzotiofeno, benzotiazol, furano, imidazol, indolina, morfolina, piperidina, piperazina, pirrol, pirrolidina, tetahidropiridina, piridina, tiazol, oxazol, tiofeno, quinolina, isoquinolina, y tetra- y perhidro-quinolina e isoquinolina. Cualquier combinación accesible de hasta tres sustituyentes en el anillo Het, tal como aquellos definidos antes para alquilo, los que están disponibles por síntesis química y son estables, están dentro del alcance de esta invención. Ciertos grupos radicales se abrevian en la presente, t-Bu se refiere al radical butilo terciario, Boc se refiere al radical de t-butiloxicarbonilo, Fmoc se refiere al radical flurenilmetoxicarbonilo, Ph se refiere al radical fenilo, Cbz se refiere al radical benciloxicarbonilo, Bn se refiere al radical bencilo, Me refiere a metilo, E se refiere a etilo, Ac se refiere a acetilo, Alk se refiere a alquilo de C -4, Nph se refiere a 1- o 2-naftilo y cHex se refiere a ciciohexilo. Tet se refiere a 5-tetrazolilo. Ciertos reactivos se abrevian en la presente. DCC se refiere a diciclohexilcarbodiimida, DMAP se refiere a dimetilaminopiridina, DIEA se refiere a diisopropil etil amina, EDC se refiere a clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida. HOBt se refiere a 1 -hidroxibenzotriazol, THF se refiere a tetrahidrofurano, DIEA se refiere a diisopopiletilamina, DEAD se refiere a azodicarboxilato de dietilo, PPh3 se refiere a trifenilfosfina, DIAD se refiere a azodicarboxilato de diisopropilo, DME se refiere a dimetoxietano, DMF se refiere a dimetilformamida, NBS se refiere a N-bromosuccinimida, Pd/C se refiere a catalizador de paladio sobre carbón, PPA se refiere a ácido polifosfórico, DPPA se refiere a azida de difenilfosforilo, BOP se refiere a hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxi-tris(dimetilamino)fosfon¡o, HF se refiere a ácido fluorhídrico, TEA se refiere a trietilamina, TFA se refiere a ácido trifluoroacético, PCC se refiere a clorocromato de iridionio. Los compuestos de esta invención se prepararon por los métodos generales descritos en los Esquemas I-VI.
ESQUEMA I (a) CH3NH(OCH3).HCI, EDC, HOBt.H2O, DMF; (b) 4-benzotrifluoruro de 4-bromo, sec-BuLi, THF; (c) (EtO)2P(O)CH2CO2Et, NaH, tolueno; (d) H2, 10% Pd/C, EtOH; (e) BBr3, CH2CI2; (f) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) NaOH 1.0 N, MeOH, después acidificación. Un ácido alcoxifenilacético apropiado, por ejemplo ácido 4-metoxifenilacético (1-1), se convierte al derivado de desoxibenzoina I-3 por reacción del N-metoxi-N-metilamida correspondiente (I-2) con un derivado aromático metalado, de acuerdo con el método general de Weinreb (Tetrahedron Lett. 1981 , 22, 3815). El Compuesto I-3 se convierte al éster a,ß-insaturado 1-4 mediante la reacción de Wittig bien conocida. Óptimamente, la reacción se llevó a cabo usando fosfonoacetato de trietilo en presencia de una base adecuada, generalmente hidruro de sodio o bis(trimetilsilil)amida de litio, en un solvente aprótico, tal como tolueno, THF, o mezclas de los mismos. La reducción del grupo olefina de 1-4 se logra óptimamente por hidrogenación en presencia de un catalizador de paladio, por ejemplo paladio sobre carbón activado, en un solvente adecuado, tal como EtOAc, MeOH, EtOH, i-PrOH, o mezclas de los mismos. El éter de metilo de I-5 pueden separarse por dibromuro de boro (BBr3), en un solvente inerte, tal como CH2CI2, o con etanotiol (EtSH) y tricloruro de aluminio (AICI3), en un solvente inerte, preferiblemente CH2CI2, o con etanotiol (EtSH) y tricloruro de aluminio (AICI3) en un solvente inerte, tal como CH2CI2. Otros métodos útiles para la remoción de grupos protectores de éste metílico se describen en Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis" (publicada por Wiley-lnterscience). El fenol resultante 1-6 se hace reaccionar con 6-(metilamino)-32-piridiletanol en una reacción de acoplamiento tipo Mitsunobu (Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Síntesis 1981 , 1-28) para dar I-7. La reacción se media por el complejo formado entre un diéster de azodicarboxilato, tal como azodicarboxilato de dietilo o azodicarboxilato de diisopropilo, y trifenilfosfina, y se realiza en un solvente aprótico, por ejemplo THF, CH2CI2, o DMF. El éster etílico de I-7 se hidroliza usando base acuosa, por ejemplo, LiOH en THF acuoso o NaOH en metanol o etanol acuoso, y la sal de carboxilato intermediario se acidificó con un ácido adecuado, por ejemplo TFA o HCl, para dar el ácido carboxílico I-8. Alternativamente, se puede aislar la sal de carboxilato intermediaria, si se desea, o una sal de carboxilato del ácido carboxílico libre puede prepararse por métodos bien conocidos por los expertos en la materia.
ESQUEMA II 12 13 .Ph CH, m U U CO2H 14 (a) Cloruro de triisopropilsilil, ¡midazol, DMF, (b) 3- (benciloxicarbonil)-3-butenoato de metilo, Pd(OAc)2, P(tol)3) (i-Pr)2Net, propionitrilo; (c) H2, 10% Pd/C, EtOAc; (d) clorhidrato de éster bencílico de serina, EDC, HOBt H2O, Et3N, DMF; (e) reactivo de Burgess, THF; (f) CI3CBr, DBU, CH2CI2; (g) TBAF, THF; (h) (Boc)2O, piridina, THF; (i) H2, 10% Pd/C, EtOH; (j) N-metilanilina, EDC, BPFFH, (i-Pr)2N-Et, piridina, D F; (k) HCI/dioxano 4N; (I) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (m) LiOH, THF, H2O, luego acidificación. Un derivado de halofenol, por ejemplo 4-bromofenol (11-1) se convierte a un derivado protegido adecuadamente, por ejemplo 4-bromo-1-(triisopropilsiloxi)benceno (II-2). Ei grupo protector para el fenil deberá ser compatible con la química subsecuente, y también debe ser capaz de removerse selectivamente cuando se desee. Los métodos para la protección de fenoles se describen en volúmenes de referencia normales, tales como Crene, "Protective Groups in Organic Synthesis" (publicada por Wiley-Interscience). El compuesto II-2 reacciona con 3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato de metilo en una reacción tipo Heck (véase Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345) para dar II-3. La reacción es mediada por una especie de paladio (0), y generalmente se llevó a cabo en un solvente inerte, tal como CH3CN, propionitrilo, o tolueno, en presencia de un eliminador de ácido apropiado, tal como trietilamina (Et3N) o diisopropiletilamina (i-Pr)2Net). Las fuentes normales de las especies de paladio (0) incluyen acetato de paladio (II) (Pd(OAc)2) y cloruro de paladio (II) (PdCI2), y con frecuencia se incluyen ligandos de fosfina, por ejemplo trifenilfosfina (PPh3) o tri-orto-tolilfosfina (P(tol)3). El éster a,ß-insaturado II-3 se reduce al compuesto saturado II-4 mediante la reacción con gas hidrógeno en presencia de un catalizador adecuado, preferiblemente metal de paladio sobre carbón activado (Pd/C), en un solvente inerte, generalmente MeOH, EtOH, EtOAc, o mezclas de los mismos. El ácido carboxílico de II-4 se convierte a una forma activada usando, por ejemplo, EDC y HOBt, SOCI2, o 1 ,1'-carbonildiimidazol (CDI), y la forma activada se hace reaccionar subsecuentemente con una amina apropiada, por ejemplo éster bencílico de serina, en un solvente adecuado, tal como DMF, para dar II-5. Dependiendo de que se requiera o no la neutralización de ácido, se puede usar una base agregada, tal como trietilamina (Et3N), diisopropiletilamina ((i-Pr)2Net), o piridina. Se conocen bastantes métodos adicionales para convertir un ácido carboxílico a una amida,, y se pueden encontrar en libros de referencia normales, tales como • "Compendium of Organic Synthetic Methods", Vol. I-VI (publicado por Wiley- Interscience), o Bodansky, "The Practice of Peptide Synthesis" (publicada por Springer- Verlag). II-5 se convirtió luego al derivado de oxazol II-7. Se conocen varios métodos para la conversión de amidoalcoholes a oxazoles (Meyers, Tetrahedron 1994, 50, 2297-2360; Wipf, J. Org. Chem. 1993, 58, 3604-3606). Por ejemplo, el amidoalcohol II-5 puede convertirse primero a la oxazolina II- 6. Esta transformación generalmente se logra bajo condiciones de deshidratación, tal como reacción con reactivo de Burges en THF. La oxazolina II-6 se oxidó luego a oxazol II-7 usando, por ejemplo, bromotriclorometano y DBU en CH2CI2 (Williams, Tetrahedron Letters 1997, 38, 331-334) o CuBR2 y DBU en un solvente apropiado, tal como EtOAc/CHCI3 o CH2CI2 (Barrish, J. Org. Chem. 1993, 58, 4494-4496). La remoción del grupo protector de sililo bajo condiciones de fluoruro normales (véase Greene anterior) da fenol II-8, que se convierte al derivado de carbonato de ter-butiloxi II-9 usando dicarbonato de di-ter-butilo en presencia de una base, generalmente piridina, en un solvente polar, neutro, tal como THF. Este nuevo grupo protector se selecciona como se describió antes. El compuesto II-9 se convirtió al derivado de ácido carboxílico 11-10 por hidrogenación como se describió antes, y 11-10 se convirtió a amida 11-11 de acuerdo con el procedimiento general de Carpino y Ayman (J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5401-5402). Bajo estas condiciones, el ácido carboxílico 11-10 se hace reaccionar con una amina adecuada, por ejemplo N-metilanilina, en presencia de hexafluorofosfato de bis(tetrametileno)fluoroformamidinio (BPFFH) y una base apropiada, generalmente EtsN, (i-Pr)2Net, piridina, o mezclas de los mismos, en un solvente polar neutro, tal como DMF. El grupo protector de carbamato de ter-butiloxi se removió bajo condiciones acidas normales (véase Greene anterior), y el fenol resultante 11-12 se convirtió a II-14 mediante los métodos descritos en el Esquema ll.
ESQUEMA III 10 (a) EtOH, reflujo; (b) 4-(benciloxi)benzaldehído, NaOEt, EtOH; (c) AI2O3, NaOCI, CH3CN; (d) Et3SiH, BF3.OET2, EtSH; (i) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (]) LiOH, THF, H2O, luego acidificación. El derivado de tiazol ill-3 se preparó por condensación de 2-cianoacetamida (111-1 ) y 3-bromo-1 ,1 ,1-trifluoroacetona (III-2) en etanol calentado a reflujo, mediante la modificación apropiada del procedimiento de Schaefer y Gewald (J. Pract. Chem. 1974, 316, 684-692) para la preparación de 4-fenil-2-(cianometil)tiazol. La condensación con aidol de III-3 con un derivado de benzaldehído apropiadamente sustituido, por ejemplo 4- (benciloxi)benzaldehído, da III-4. La reacción se catalizó por una base adecuada, preferiblemente etóxido de sodio y se llevó a cabo en un solvente polar, generalmente etanol. La epoxilación de III-4 para dar III-5 se logró con hipoclorito de sodio en presencia de alumina neutra de acuerdo con el método general de Foucad (Synthesis 1987, 9, 854,856).También se pueden usar otras condiciones de epoxidación bien conocidas, tales como mCPBA, peróxido de hidrógeno básico, o hidroperóxido de terbutilo, mientras las condiciones sean compatibles con la funcionalidad en el sustrato. Una exposición de trietilsilano en presencia de un ácido de Lewis adecuado, tal como BF3.OEt , o un ácido prótico adecuado, por ejemplo TFA o HCl, el anillo de epóxido de III-5 se abre reductivamente en una forma altamente regioselectiva para dar cetona ill-6, junto con la cianohidrina de trimetil sililo correspondiente de Hl-6. Esta cianohidrina se convirtió convenientemente a cetona III-6 por exposición a fluoruro de tetrabutilamonio en un solvente apropiado, generalmente THF. Esta cetona reacciona en una reacción tipo Wittig con fosfonoacetato de trietilo en presencia de una base adecuada, por ejemplo LiN (TMS)2 o NaH, en un solvente aprótico polar, preferiblemente THF, para dar el éster aß-insaturado III-7 como una mezcla de isómeros olefínicos. En la reacción con metal de magnesio en MeOH, la olefina de III-7 se reduce selectivamente bajo estas condiciones. La remoción del grupo bencilo se logra con etanodiol y BF3.OEt2, para dar el fenol III-9, que se convirtió a 111-10 de acuerdo con los métodos descritos en el Esquema I.
ESQUEMA IV "°t (a) BnCI, K2CO3, acetona; (n) 5-metiltiazol, n-BuLi, THF; (c) (EtO)2P(=0)CH2C?2Et, NaH, THF; (d) Mg, MeOH; (e) BF3.Oet2, EtSH; (f) 6-(metilam¡no)-2-p¡ridiletanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) LiOH, THF, H2O, luego acidificación. El grupo fenol de 4-hidroxifenilacetato de metilo (V-1 ) comercialmente disponible se protegió con un grupo protector adecuado, por ejemplo un éter metílico, un éter bencílico o un éter triisopropilsililo. La protección de fenoles se conoce bien por los expertos en la material y los grupos protectores representativos se describieron en volúmenes de referencia normal tal como Greene "Protective Groups in Organic Sythesis" (publicado por Wiley-lnterscience). El compuesto resultante (IV-2) reacciona con reactivos de Grignard u organolitio para dar cetonas. Por ejemplo, 2-litio-5-metiltiazo!, preparado a partir de 5-metiltiazol y n-butil-litio, reacciona con IV-2 en un solvente etéreo, tal como THF o DME, para dar un derivado de cetona IV-3. Esta cetona se convirtió luego a IV-6 de acuerdo con los métodos descritos en el esquema lll.
ESQUEMA V (a) TBDMSCI, KCN, Znl2, CH3CN; (b) LDA, THF, después cloruro de 4-benciloxibencilo; (c) TBAF, THF; (d) (EtO)2P(=O)CH2CO2Et, NaH, THF; (e) H2, Pd/C, EtOH; (f) 6-(met¡lamino)-2-pirid¡letanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) LiOH, THF, H2O, luego la acidificación. 5 Un aldehido aromático seleccionado, por ejemplo 3- piridincarboxialdehído (V-1 ), se convirtió a una cianohidrina protegida con sililo, tal como V-2 mediante reacción con ¡on cianuro en presencia de un haluro de sililo adecuado, por ejemplo cloruro de trimetilsiiilo (TMSCI), cloruro *. de triisopropilsililo (TIPSCI), o cloruro de ter-butildimetilsililo (TBDMSCI o 10 TBSCI). Las fuentes normales del ¡on cianuro incluyen cianuro de potasio (DCN), cianuro de sodio (NaCN), y cianuro de tetrabutilamonio (Bu4NCN). La reacción se condujo frecuentemente en presencia de una cantidad catalítica de un ácido de Lewis, generalmente Zn^, y se prefiere un solvente polar, aprótico, tal como acetonitrilo (CH3CN). Se pueden usar otras cianohidrinas 15 protegidas, o por ejemplo, una cianohidrina protegida con etoxietilo, mientras que el grupo protector es compatible con la química subsecuente y se pueden remover selectivamente cuando se desea. Una discusión de grupos protectores puede encontrase en volúmenes de referencia normal, tal como Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis" (publicada por Wiley- 20 Interscience). El compuesto V-2 es alquilada con C con un haluro de bencilo apropiado, por ejemplo cloruro de 4-benciloxibencilo, para dar V-3. La reacción implica una desprotonación inicial para dar un anión intermediario, el cual no se aisla pero se hace reaccionar in situ con el agente de alquilación.
Se prefieren bases normales para este tipo de reacción incluyen diisopropilamida de litio (LDA) y hexametildisilazida de litio (LiN(TMS)2), y solventes apróticos polares, tales como THF o DME. La TBS-cianohidrina de B-3 se convierte convenientemente a la cetona V-4 por reacción con fluoruro de tetrabutilamonio (TBA). También se puede usar un procedimiento de dos pasos para efectuar esta transformación. Por ejemplo, el grupo protector de sililo de V-3 puede removerse bajo condiciones acidas, tales como por reacción con HF, para dar una cianohidrina que puede convertirse a cetona V-4 por reacción con una base adecuada. El compuesto V-4 se convirtió al éster a,ß-insaturado V-5 a través de la reacción de Wittig bien conocida. Normalmente, la reacción se conducido usando fosfonoacetato de 'trietilo en presencia de una base adecuada, generalmente hidruro de sodio(NaH) o LiN(TMS)2, en un solvente prótico, tal como tolueno, THF, o mezclas de los mismos. La reducción del grupo olefina de V-5 se logró óptimamente por hidrogenación en presencia de un catalizador de paladio, por ejemplo paladio sobre carbón activado, en un solvente adecuado, tal como EtOAc, MeOH, EtOH, l-PrOH, o mezclas de los mismos. Bajo estas condiciones, el grupo protector de bencilo en el fenol también se removió. El fenol resultante V-6 se hizo reaccionar con 6-(metilamino)-2-piridiletanol en una reacción de acoplamiento del tipo Mitsunobu (Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Synthesis 1981 , 1-28) para dar V-7. La reacción se media por el complejo formado entre un diéster de azodicarboxilato, y trifenilfosfina, y normalmente se llevó a cabo en un solvente aprótico, por ejemplo THF, CH2CI2, o DMF. El éster etílico de V-7, metanol o etanol, y la sal de carboxilato intermedio se acidificó con un ácido adecuado, por ejemplo TFA o HCl, para dar el ácido carboxílico V-8. Si se desea, se puede aislar la sal de carboxilato intermedia. Además, las sales apropiadas del ácido carboxílico o la amina pueden prepararse por métodos bien conocidos por aquellos expertos en la materia.
ESQUEMA VI S (a) cloruro de acriloilo, (i-Pr)2Net, CuCI, CH2CI2; (b) 3-bromopiridina, Pd(OAc)2, P(tol)3, (i-Pr)2Net, DMF; (c) cloruro de 4-metoxibencilmagnesio, Znl2, CuBr.DMS, THF, tolueno; (d) NaOEtTHF; (e) AICI3, EtSH, CH2CI2; (f) 6-(metilamino)-2-piridiletanol, DIAD, (Ph)3P, THF; (g) NaOH, dioxano, H2O, después acidificación. (4S,5R)-1 ,5-dimetil-4-fenil-2-imidazolidinona (VI-1 ) comercialmente disponible reacciona con un cloruro de ácido c^ß-insaturado, por ejemplo cloruro de acrioilo, para dar imida VI-2- La reacción es medida por una base adecuada, normalmente trietilamina (Et3N) o diisopropiletilamina ((i-Pr)2Net), y se condujo en presencia de una cantidad catalítica de un haluro cuproso, por ejemplo cloruro de cobre (I). Se prefiere un solvente neutro tal como CH2CI2. El compuesto VI-2 reacciona con un haluro de arilo adecuado, tal como 3-bromopiridina, en una reacción del tipo Heck (ver Heck, Org. Reactions 1982, 27, 345) para dar VI-3. La reacción es mediada por una especie de paladio (II), y generalmente se lleva a cabo en un solvente inerte, tal como CH3CN, propionitrilo, tolueno o DMF, en presencia de un eliminador de ácidos apropiado, tal como trietilamina (Et3N) o diisopropiletilamina ((i-Pr)2Net). Las fuentes normales de la especie de paladio (II) incluyen acetato de paladio (II) (Pd(OAc)2) y cloruro de paladio (II) (PdCI2), y con frecuencia se incluyen ligandos de fosfina, por ejemplo trifenilfosfina (PPh3) o tri-orto-tolilfosfina (P(tol)3). El compuesto VI-3 reacciona con una especie de órgano-cobre en una reacción de adición en 1 ,4 para dar el producto de adición del conjugado VI-4 (véase Melnyk, O.; Stephan, E.; Pourcelot, G.; Cresson, P.
Tetrahedron 1992, 48, 841-850; Bongini, A.; Cardillo, G.; Mingardi, A.; Tomasini, C. Tetrahedron Asymmetry 1996, 7, 1457-1466; van Hereden, P.S.; Bezuidenhoudt, B. C. B.; Ferreira, D. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 1821-1824. Para revisiones de reacciones de organocobre, véase Posner, G. Organic Reactions 1972, 19, 1-113; Lipshutz, B. Organic Reactions 1992, 41 , 135-631 ). La generación de las especies de organocobre puede lograrse por la adición de un reactivo de organolitio u organomagnesio, por ejemplo, cloruro de 4-metoxibencilmagnesio, a una fuente de cobre (I), por ejemplo CuCI, CuBr.DMS, o Cul, en un solvente inerte, tal como Et2O, THF, DME, tolueno, o mezclas de los mismos. La diaestereoselectividad de la reacción se puede mejorar por ciertos ácidos de Lewis, por ejemplo, MgBR2, Bu2BOTf, o Znl2. La auxiliaridad quiral de VI-4 se removió convenientemente por etanólisis bajo condiciones básicos. Por ejemplo, el tratamiento de VI-4 se removió convenientemente por etanolisis bajo condiciones básicas. Por ejemplo, el tratamiento de VI-4 con etóxido de sodio en THF da VI-5. El éter metílico de VI-5 puede separarse con tribromuro de boro (BBr3), en un solvente inerte, tal como CH2Cl2, para dar fenol VI-6. Otros métodos útiles para la remoción de grupos protectores de éter metílico se describieron en volúmenes de referencia normales (véase el Esquema V). El fenol VI-6 se convirtió a VI-8 como se describió en el Esquema V. Los reactivos de acoplamiento de amida como se usa en la presente denotan reactivos que pueden usarse para formar enlaces de péptidos. Los métodos de acoplamiento normales emplean carbodiimidas, los anhídridos y esteres activados y haluros de acilo. Son normales los reactivos tales como EDC, DCC, DPPA, BOP, reactivo de HOBt, N-hidroxisuccinimida y cloruro de oxalilo. Los métodos de acoplamiento para formar enlaces de péptidos generalmente son bien conocidos en la materia. Los métodos de síntesis de péptidos generalmente exhibidos por Bodansky y otros, THE PRACTICE OF PEPTIDE SYNTHESIS, Springer-Verlag, Berlin, 1984, Ali y otros en J. Med. Chem., 29, 984 (1986) y J. Med. Chem., 30, 2291 (1987) son generalmente ilustrativos de la técnica y se incorporan aquí por referencia. Normalmente, la amina o anilina se acopla vía su grupo amino libre a un sustrato de ácido carboxílico apropiado usando un agente de acoplamiento de carbodiimida adecuado, tal como N,N'-diciclohexil carbodiimida (DCC), opcionalmente en presencia de catalizadores tales como 1 -hidroxibenzotriazol (HOBt) y dimetilaminopiridina (DMAP). Otros métodos, tales como la formación de esteres activados, anhídridos o haluros de ácido, del carboxilo libre de un sustrato de ácido protegido adecuadamente y también es adecuada la reacción subsecuente con la amina libre de una amina protegida adecuadamente, opcionalmente en presencia de una base. Por ejemplo, un aminoácido Boc protegido o ácido benzoico de amidino Cbz se trata en un solvente anhídrido, tal como cloruro de metileno o tetrahidrofurano (THF), en presencia de una base, tal como N-metil morfolina, DMAP o una trialquilamina, con cloroformato de isobutilo para formar el "anhídrido activado", que se hace reaccionar subsecuentemente con la amina libre de un segundo aminoácido protegido o anilina. Los intermediarios útiles para preparar los compuestos de la fórmula () en los cuales R2 es un bencimidazol, se describen en Néstor y otros, J. Med. Chem. 1984, 27, 320. Los métodos representativos para preparar compuestos de bencimidazol útiles como intermediarios en la presente invención, también son comunes para la materia y se pueden encontrar, por ejemplo, en la EP-A 0381 033. Las sales de adición de ácidos de los compuestos se prepararon en una forma normal en un solvente adecuado del compuesto madre y un exceso de un ácido, tal como clorhídrico, bromhídrico, fluorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, maleico, succínico o metansulfónico. Ciertos de los compuestos de las sales internas o zwiteriones que puede ser aceptables. Las sales catiónicas se preparan tratando el compuesto madre con un exceso de un reactivo alcalino, tal como hidróxido, carbonato o alcóxido, conteniendo el catión apropiado; o con una amina orgánica apropiada. Los cationes tales como L¡+, Na+, K+, Ca++, Mg++ y NH4+ son ejemplos específicos de cationes presentes en sales farmacéuticamente aceptables. Esta invención también provee una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la fórmula (I) y un portador farmacéuticamente aceptable. Consecuentemente, los compuestos déla fórmula (I) pueden usarse en la manufactura de un medicamento. Las composiciones farmacéuticas de los compuestos de la fórmula (I) preparados como se describió antes pueden formularse como soluciones o polvos liofilizados para la administración parenteral. Los polvos puede reconstituirse por la adición de un diluyente adecuado u otro portador farmacéuticamente aceptable antes de usarse. La formulación de líquidos puede ser una solución acuosa, isotónica, con pH regulado. Ejemplos de diluyentes adecuados son la solución salina isotónica normal, dextrosa normal al 5% en agua o solución de acetato de sodio o amonio con pH regulado. Dicha formulación es especialmente adecuada para la administración parenteral, pero también se puede usar para la administración oral o estar contenida en un inhalador o nebulizador de dosis medida para insuflación. Puede ser conveniente agregar excipientes tales como polivinilpirrolidona, gelatina, hidroxicelulosa, acacia, polietilenglicol, manitol, cloruro de sodio o citrato de sodio. Alternativamente, estos compuestos pueden encapsularse, formarse en tabletas o prepararse en una emulsión o jarabe para la administración oral. Los portadores sólidos o líquidos farmacéuticamente aceptables pueden agregarse para aumentar o estabilizar la composición, o para facilitar la preparación de la composición. Los vehículos sólidos incluyen almidón, lactosa, dihidrato de sulfato de calcio, térra alba, estearato de magnesio o ácido esteárico, talco, pectina, acacia, agar o gelatina. Los portadores líquidos incluyen jarabe, aceite de cacahuate, aceite de oliva, solución salina y agua. El portador también puede incluir un material de liberación sostenida tal como monoesterato de glicerilo o diestearato de glicerilo, solo o con una cera. La cantidad de portador sólido varía, pero, preferiblemente, será de entre aproximadamente 20 mg a alrededor de 1 g por dosis unitaria. Las preparaciones farmacéuticas se hacen siguiendo las técnicas convencionales de farmacia que implican el molido, mezclado, granulado y compresión, cuando es necesario, para formas de tabletas; o el molido, mezclado, y llenado para formas de cápsulas de gelatina dura. Cuando de usa un vehículo líquido, la preparación tendrá la forma de un jarabe, elíxir, emulsión o una suspensión acuosa o no acuosa. Dicha formulación líquida puede administrarse directamente p. o. o llenarse en una cápsula de gelatina suave. Para la administración rectal, los compuestos de esta invención también pueden combinarse con excipientes tales como manteca de cacao, glicerina, gelatina o glicoles de polietileno y moldearse en un supositorio. Los compuestos descritos en la presente son antagonistas del receptor de vitronectina, y son útiles para tratar enfermedades en donde la patología subyacente se puede atribuir al ligando o células que interactúan con el receptor de vitronectina. Por ejemplo, estos compuestos son útiles para el tratamiento de enfermedades en donde la pérdida de la matriz ósea crea patología. Por lo tanto, los presentes compuestos son útiles para el tratamiento de osteoporosis, hiperparatiroidismo, enfermedad de Paget, hipercalcemia de malignidad, lesiones osteolíticas producidas por metástasis ósea, pérdida de hueso debido a inmovilización o deficiencia de hormona sexual. También se piensa que los compuestos de esta ¡nvención tienen utilidad como los agentes antitumorales, anti-angiogénicos, anti-inflamatorios y anti-metastáticos y son útiles en el tratamiento de aterosclerosis y restenosis. El compuesto se administró ya sea oral o parenteralmente al paciente, en una forma tal que la concentración de fármaco es suficiente para inhibir la reabsorción ósea, u otra indicación tal. La composición farmacéutica que contiene el compuesto se administró a una dosis oral de entre aproximadamente 0.1 a alrededor de 50 mg/kg en una forma consistente con la condición del paciente. Preferiblemente, la dosis oral podría ser de aproximadamente 0.5 a alrededor de 20 mg/kg. Para terapia aguda, se prefirió la administración parenteral. Una infusión intravenosa del péptido en dextrosa en agua al 5% o solución salina normal, o una formulación similar con excipientes adecuados, es más efectiva, aunque también es útil una inyección intramuscular al bolo. Normalmente, la dosis parenteral será de aproximadamente 0.01 a alrededor de 100 mg/kg; preferiblemente entre 0.1 y 20 mg/kg. Los compuestos se administraron de una a cuatro veces diariamente a un nivel para lograr una dosis diaria total de aproximadamente 0.4 a alrededor de 400 mg(kg/día. El nivel y método precisos mediante los cuales se administran los compuestos, se determinan fácilmente por alguien experto en la materia comprando el nivel sanguínea del agente a la concentración requerida para tener un efecto terapéutico. Esta invención además provee un método para tratar osteoporosis o inhibir la pérdida de hueso que comprende administrar en pasos o en combinación física, un compuesto de la fórmula () y otros inhibidores de la reabsorción ósea, tal como bifosfonatos (es decir, alendronato), terapia de reemplazo hormonal, anti-estrógenos, o calcitonina. Además, esta invención provee un método de tratamiento usando un compuesto de esta invención y un agente anabólico, tal como la proteína morfogéníca ósea, iproflavona, útil en la prevención de pérdida de hueso y/o incrementar la masa ósea. Adicionalmente, esta invención prevé un método para inhibir el crecimiento tumoral el cual comprende administrar por pasos o en combinación física un compuesto de la fórmula (I) y un agente antineoplástico. Los compuestos de la clase análoga de campotecina, tales como topotecan, ¡rinotecan y 9-aminocampotecina, y complejos de coordinación de platino, tales como cisplatina, ormaplatina y tetraplatina, son grupos bien conocidos de agentes antineoplásticos. Los compuestos de la clase análoga de campotecina se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,004,758, 4,604,463, 4,473,692, 4,545,880, 4,342,776, 4,513,138, 4,399,276, Publicaciones de Solicitudes de Patente EP Nos. 0 418 099 y 088 642, Wani, y otros, J. Med. Chem., 1987, 30, 1774, y Nitta y otros, Proc. 14th International Congr. Chemotherapy., 1985, Anticancer Section I, 28, toda la descripción de cada una incorporada aquí por referencia. El complejo de coordinación de platino, cisplatina, está disponible bajo el nombre Platinol® de Bristol Myers-Squibb Corporation. Las formulaciones útiles para cisplatina se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,562,925 y 4,310,515, toda la descripción de cada una incorporada aquí por referencia. En el método para inhibir el crecimiento tumoral que comprende administrar por pasos o en combinación física un compuesto de fórmula () y un agente antineoplástico, el compuesto de coordinación de platino, por ejemplo cisplatina, puede administrarse usando infusión intravenosa lenta. El portador preferido es dextrosa/solución salina conteniendo manitol. El programa de dosis del compuesto de coordinación de platino puede ser sobre la base de aproximadamente 1 a alrededor de 500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área superficial corporal por curso de tratamiento. Las infusiones dé compuesto de coordinación de platino pueden darse de una a dos veces a la semana y se pueden repetir varias veces los tratamientos semanales. Usando un compuesto de la clase análoga de campotecina en una administración parenteral, el curso de terapia empleada generalmente es de 0.1 a aproximadamente 300.0 mg/m2 de área superficial corporal por día durante aproximadamente cinco días consecutivos. Más preferiblemente, el curso de terapia empleado para topotecan es de aproximadamente 1.0 a 2.0 mg/m2 de área superficial corporal por día durante aproximadamente cinco días consecutivos. Preferiblemente, el curo de terapia se repeine por lo menos una vez en aproximadamente siete días, a aproximadamente un intervalo de veintiocho días. La composición farmacéutica puede formularse con el compuesto de fórmula (i) y con el agente antineoplástico en el mismo recipiente, pero se prefiere la formulación en diferentes recipientes. Cuando se proveen ambos agentes en forma de solución, pueden estar contenidos en un sistema de infusión/inyección para administración simultánea o en una disposición aleatoria. Para la administración conveniente del compuesto de fórmula (I) y el agente antineoplástico en el mismo o diferentes tiempos, se prepara un equipo, comprendiendo, en u solo recipiente, tal como una caja, cartón y otro recipiente, botellas, bolsas, frascos u otros recipientes individuales teniendo cada uno una cantidad efectiva del compuesto de fórmula (I) para la administración parenteral, como se describió antes, y una cantidad efectiva del agente' antineoplástico para la administración parenteral, como se describió antes. Dicho equipo puede comprender, por ejemplo, ambos agentes farmacéuticos en recipientes separados y en el mismo recipiente, opcionalmente como tapones liofilizados y recipientes de soluciones para reconstitución. Una variación de esto es incluir la solución para constitución y el tapón liofilizado en dos cámaras de un solo recipiente, el cual puede hacerse que se mezcle antes de usarse. Con dicha disposición, el agente antineopiástico y el compuesto de esta invención se puede empacar por separado, como en dos recipientes o liofilizarse juntos como un polvo y proveerse en un solo recipiente. Cuando se proveen ambos agentes en forma de solución, puede estar contenidos en un sistema de infusión/inyección para administración simultánea o en una disposición aleatoria. Por ejemplo, el compuesto de fórmula (I) puede estar en una forma inyectable i.v. o bola de infusión ligada en serie, vía entubación, al agente antineoplástico en una segunda bolsa de infusión. Usando dicho sistema, un paciente puede recibir una inyección o infusión de tipo bolo inicial del compuesto de fórmula (I) seguido por una infusión del agente antineoplástico. Los compuestos pueden probarse en uno de varios análisis biológicos para determinar la concentración de compuesto que se requiere para tener un efecto farmacológico dado.
Inhibición de unión de vitronectina Fase sólida fH]-SK&F-107260 unido a avß3: La placenta humana o plaquetas humanas avß3 (0.1-0.3 mg/ml) en solución reguladora de pH T (conteniendo 2 mM de CaCl2 y 1% de octilglucósido) se diluyó con solución reguladora de pH T conteniendo 1mM CaCI2, 1 mM MnCI2, 1 mM MgCI2 (solución reguladora de pH A) y 0.05% NaN3 y luego se agregó inmediatamente a placas de 96 pozos con ELISA (Corning, New York, NY) a 0.1 ml por pozo. 0.1-0.2 µg de avß3 se agregaron por pozo. Las placas se incubaron durante la noche a 4°C. En el momento del experimento, los pozos se lavaron una vez con una solución reguladora de pH A y se incubaron con 0.1 ml de 3.5% de albúmina de suero de bovino en la misma solución reguladora de pH durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación, se aspiraron los pozos completamente y se lavaron dos veces con 0.2 mi de solución reguladora de pH A.
Los compuestos se disolvieron en DMSO al 100% para dar una solución madre 2 mM, que se diluyó con solución reguladora de pH de unión (15 mM Tris-HCl (pH 7.4), 100 mM NaCI, 1 mM CaCI2, 1 MM MnCI2, 1 mM MgC ) a una concentración de compuesto final de 100 µM. Esta solución se diluyó luego a la concentración del compuesto final requerida. Varias concentraciones de antagonistas no marcados (0.001-100 µM) se agregaron a los pozos por triplicado, seguido por la adición de 5.0 mM de [3H]-SK&F-107260 (65-86 Ci/mmol). Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación los pozos se aspiraron completamente y se lavaron una vez con 0.2 ml de solución reguladora de pH A enfriada en hielo en una forma de pozo a pozo. Los receptores se solubilizaron con 0.1 ml de 1% SDS y [3H]-SK&F-107260 unido se determinó por conteo de centelleo líquido con la adición de 3 ml de Contador de Centelleo Líquido Ready Safe en un Líquido LS de Beckman, con 40% de eficiencia. La unión no específica de [3H]-SK&F-107260 se determinó en presencia de 2 µM de SK&F-107260 y fue consistentemente menor que el 1% de la entrada de radioligando total. IC50 (concentración del antagonista para inhibir el 50% de unión de [3H]-SK&F-107260) se determinó por una rutina de ajuste de curva de mínimos cuadrados, no lineal, la cual se modificó del programa LUNDON-2. Se calculó la K¡ (constante de disociación del antagonista) de acuerdo con la ecuación: Kj=IC5o/(1+L/KD), en donde I y KD fueron la concentración y la constante de disociación de [3H]-SK&F-107260 respectivamente.
Los compuestos de la presente invención inhiben la unión de vitronectina a SK&F 107260 en la escala de concentración de aproximadamente 0.060 a alrededor de 0.0005 micromolar. Los compuestos de esta ¡nvención también se probaron para la reabsorción ósea in vitro e in vivo en análisis normales en la técnica para evaluar la inhibición de formación ósea, tal como el análisis de formación de pozo descrito en EP 528 587, que también se puede realizar usando osteoclastos humanos en lugar de osteoclastos de ratas, y el modelo de ratas ovariectomizados, descrito por Wronskin y otros, Cells and Materials 1991 , Sup. 1 , 69-74.
Análisis de migración de células del músculo liso vascular Se utilizaron células del músculo liso aórtico de ratas o seres humanos. La migración celular se monitoreó en una cámara de cultivo de células Transwell usando una membrana de policarbonato con poros de 8 um (Costar). La superficie inferior del filtro se revistió con vitronectina. Las células se suspendieron en DMEM suplementado con 0.2% de albúmina de suero de bovinos a una concentración de 2.5-5.0 x 106 células/ml y se pretrataron con el compuesto de prueba a varias concentraciones durante 20 minutos a 20°C. El solvente solo se usó como control. 0.2 ml de la suspensión celular se colocó en el compartimiento superior de la cámara. El compartimiento inferior contuvo 0.6 ml de DMEM suplementado con 0.2% de albúmina de suero de bovinos. La incubación se llevó a cabo a 37°C en una atmósfera de 95% de aire/ 5% CO2 durante 24 horas. Después de la incubación, las células no migradas en la superficie superior del filtro se removieron por raspado suave. El filtro luego se fijó en metanol y se tiñó con tinción Giemsa al 10%. La migración se midió por a) contando del número de células que migró a la superficie inferior del filtro o b) extrayendo las células teñidas con 10% de ácido acético seguido por la determinación de la absorbancia a 600 nM.
Modelo de ratas tiroparatiroidectomizadas Cada grupo experimental consiste de 5-6 ratas macho adultas Sprague-Dawley (peso corporal 250-400g). Las ratas se tiroparatiroidectomizaron (por el vendedor, Taconic Farms) 7 días antes de usarse. Todas las ratas reciben una dosis de reemplazo de tiroxina cada 3 días. Al recibirla las ratas, se miden los niveles de calcio ionizado circulante en toda la sangre inmediatamente después de que se retira por punción en vena en la cola en tubos heparinizados. Se incluyeron las ratas si el nivel de Ca ionizado (medido con un analizador de pH de calcio modelo 634 de Ciba-Corning) es de <1.2 mM/L. Cada rata se adaptó con un catéter venoso y arterial residente para el suministro de material de prueba y para muestreo, respectivamente. Las ratas luego se sometieron a una dieta de croquetas libres de calcio y agua desionizada. Los niveles de Ca de la línea base se midieron y cada a rata se le administró vehículo de control o péptido 1-34 de hormona paratiroidea humana (hPTH1-34, dosis 1.25 ug/kg/h en solución salina/0.1% albúmina de suero de bovinos, Bachem, Ca) o una mezcla de hPTH1-34 y material de prueba, mediante infusión intravenosa continua vía el catéter venoso usando una bomba de jeringa externa. La respuesta calcémica de cada rata se midió en intervalos de dos horas durante el periodo de infusión de 6-8 horas.
Análisis de reabsorción y adhesión de osteoclastos humanos Los análisis de reabsorción y adhesión de fosas se han desarrollado y normalizado usando osteoclastos humanos normales derivados de tejido de osteoclastoma. El análisis 1 se desarrollo para la medición de volúmenes de fosas de osteoclastos por microscopía confocal de láser. El análisis 2 se desarrolló como un tamiz da paso superior en el cual se midieron los fragmentos de colágeno (liberados durante la reabsorción) mediante ELISA competitiva.
Análisis 1 (usando microscopía confocal de láser) • Se removieron alícuotas de suspensiones celulares derivadas de osteoclastomas humanos de almacenamiento de nitrógeno líquido, se calentaron rápidamente a 37°C y se lavaron x1 en medio RPM 1-1640 por centrifugación (1000 rpm, 5 min a 4°C). • El medio se aspiró y se reemplazó con anticuerpo anti-HLA-DR de murinos y luego se diluyó 1 :3 en medio RPMI-1640. La suspensión se incubó durante 30 min en hielo y se mezcló frecuentemente.
• Las células se lavaron x2 con RPMI-1640 fría seguido por centrifugación (1000 rpm, 5 min a 4°C) y las células se transfirieron a un tubo de centrifuga de 15 ml estéril. El número de células mononucleares se enumeraron en una cámara de conteo Neubauer mejorada. • Se removieron suficientes perlas magnéticas (5/célula mononuclear), revestidas con IgG anti-ratón de cabra (Dynal. Great Neck, NY) de su botella de solución madre y se colocaron en 5 ml de medio fresco (esto lava el conservador de azida tóxico). El medio se removió inmovilizando las perlas en un imán y se reemplazaron con medio fresco. • Las perlas se mezclaron con las células y la suspensión se incubó durante 30 min en hielo. La suspensión se mezcló frecuentemente. • Las células revestidas con perlas se inmovilizaron en un imán y las células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantó en un tubo de centrífuga de 50 ml estéril. « Se agregó medio fresco a las sellas revestidas con perlas para descargar cualesquiera osteoclastos atrapados. Este proceso de lavado se repitió x 10. Se descararon las células revestidas con perlas. • Los osteoclastos viables se numeraron en una cámara de conteo, usando diacetato de fluoresceína para marcar células vivas. Se utilizó una pipeta Pasteur de plástico desechable con orificio grande para agregar la muestra la cámara. • Los osteoclastos se formaron en pellas por centrifugación y la densidad se ajustó al número apropiado en medio EMEM (el número de osteoclastos es variable de tumor a tumor), suplementado con 10% de suero de becerro fetal y 1.7 g/litro de bicarbonato de sodio. • Alícuotas de 3 ml de la suspensión celular (por tratamiento de compuesto) se decantaron en tubos de centrífuga de 15 ml. Las células se formaron en pellas por centrifugación. • A cada tubo, 3 ml del tratamiento del compuesto apropiado se agregaron (diluidas a 50 uM en el medio EMEM). También se incluyeron controles de vehículo apropiados, un control positivo (anticuerpo monoclonal de murinos del receptor de anti-vitronectina [87MEM1] diluido a 100 ug/ml) y un control isotípico (IgG^ diluido a 100 ug/ml). Las muestras se incubaron a 37°C durante 30 min. • Alícuotas de 0.5 ml de las células se sembraron en cortes de dentina estériles en una placa de 48 pozos y se incubaron a 37°C durante 2 horas. Cada tratamiento se tamizó por cuadruplicado. • Los cortes se lavaron en seis cambios de PBS caliente (10 ml/pozo en una placa de 6 pozos) y luego se colocaron en medio fresco conteniendo las muestras de tratamiento con compuesto o control. Las muestras se incubaron a 37°C durante 48 horas.
Procedimiento de fosfatasa de ácido resistente a tartrato (TRAP. por sus siglas en inglés) (tinción selectiva de células del linaje de osteoclastos) • Los cortes de huesos que contienen los osteoclastos unidos se lavaron en solución salina regulada con fosfato y se fijaron en 2% de glutaraldehído (en cacodilato de sodio 0.2M) durante 5 min. • Se lavaron en agua y se incubaron durante 4 minutos en solución reguladora de pH de TRAP a 37°C (0.5 mg/ml fosfato de naftol AS-Bl disuelto en N, N-dimetilformamida y se mezcló con solución reguladora de pH de citrato 0.25 M (H 4.5) conteniendo 10 mM de tartrato de sodio. • Después de un lavado en agua fría, los cortes se sumergieron en solución reguladora de pH de acetato fría (0.1 M, pH 6.2) conteniendo aparejo rojo rápido 1 mg/ml y se incubaron a 4°C durante 4 minutos. • Se aspiró la solución reguladora de pH en exceso y los cortes se secaron al aire después de una lavado en agua. • Los osteoclastos positivos para TRAP (precipitado rojo ladrillo/morado) se enumeraron por microscopía de cambo brillante y luego se removieron de la superficie de la dentina por tratamiento sónico. • Se determinaron los volúmenes de fosa usando microscopía confocal de ILM21W Nikon/Lasertec.
Análisis 2 (usando una lectura de ELISA) • Se removieron alícuotas de suspensiones celulares derivadas de osteoclastomas humanos de almacenamiento de nitrógeno líquido, se calentaron rápidamente a 37°C y se lavaron x1 en medio RPM1-1640 por centrifugación (1000 rpm, 5 min a 4°C). • El medio se aspiró y se reemplazó con anticuerpo anti-HLA-DR de murinos y luego se diluyó 1 :3 en medio RPMI-1640. La suspensión se incubó durante 30 min en hielo y se mezcló frecuentemente. • Las células se lavaron x2 con RPMI-1640 fría seguido por centrifugación (1000 rpm, 5 min a 4°C) y las células se transfirieron a un tubo de centrífuga de 15 ml estéril. El número de células mononucleares se enumeraron en una cámara de conteo Neubauer mejorada. • Se removieron suficientes perlas magnéticas (5/célula mononuclear), revestidas con IgG anti-ratón de cabra (Dynal. Great Neck, NY) de su botella de solución madre y se colocaron en 5 ml de medio fresco (esto lava el conservador de azida tóxico). El medio se removió inmovilizando las perlas en un imán y se reemplazaron con medio fresco. • Las perlas se mezclaron con las células y la suspensión se incubó durante 30 min en hielo. La suspensión se mezcló frecuentemente. • Las células revestidas con perlas se inmovilizaron en un imán y las células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantó en un tubo de centrífuga de 50 ml estéril.
• Se agregó medio fresco a las sellas revestidas con perlas para descargar cualesquiera osteoclastos atrapados. Este proceso de lavado se repitió x 10. Se descararon las células revestidas con perlas. • Los osteoclastos viables se numeraron en una cámara de conteo, usando diacetato de fluoresceína para marcar células vivas. Se utilizó una pipeta Pasteur de plástico desechable con orificio grande para agregar la muestra la cámara. • Los osteoclastos se formaron en pellas por centrifugación y la densidad se ajustó al número apropiado en medio EMEM (el número de osteoclastos es variable de tumor a tumor), suplementado con 10% de suero de becerro fetal y 1.7 g/litro de bicarbonato de sodio. En contraste con el método descrito antes en el Análisis 1 , los compuestos se tamizaron en 4 dosis para obtener una IC50, como se describe enseguida: • Las preparaciones de osteoclastos se preincubaron durante 30 minutos a 37°C con el compuesto de prueba (4 dosis) o controles. • se sembraron entonces sobre cortes de huesos corticales de bovinos en pozos de una placa de cultivo de tejido de 48 pozos y se incubaron durante 2 horas adicionales a 37°C. • Los cortes del hueso se lavaron en seis cambios de solución salina regulada con fosfato (PBS, por sus siglas en inglés), para remover sellas no adherentes, y luego se regresó a los pozos de una placa de 48 pozos conteniendo compuesto fresco o controles.
La placa de cultivo de tejidos se incubó luego durante 48 horas a 37°C. • Los sobrenadantes de cada pozo se aspiraron en tubos individuales y se tamizaron en una ELISA competitiva que detecta el c-telopéptido de colágeno tipo I que se liberó durante el proceso de reabsorción. Esto es una -ELISA comerciaimente disponible (Osteometer, Denmark) que contiene un anticuerpo de conejo que reacciona específicamente con una secuencia de 8 aminoácidos (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg) que está presente en el telopéptido del carboxi terminal de la cadena a1 de colágeno tipo I. Los resultados se expresaron como % de inhibición de reabsorción comparado con un vehículo de control.
Análisis de adhesión de osteoclastos humano Los osteoclastos humanos se enriquecieron y prepararon para tamizar el compuesto como se describió antes en los 9 pasos iniciales del Análisis 1 , Para claridad, en seguida se repiten estos pasos. • Se removieron alícuotas de suspensiones celulares derivadas de osteoclastomas humanos de almacenamiento de nitrógeno líquido, se calentaron rápidamente a 37°C y se lavaron x1 en medio RPM 1-1640 por centrifugación (1000 rpm, 5 min a 4°C). • El medio se aspiró y se reemplazó con anticuerpo anti-HLA-DR de murinos y luego se diluyó 1:3 en medio RPMI-1640. La suspensión se incubó durante 30 min en hielo y se mezcló frecuentemente.
• Las células se lavaron x2 con RPMI-1640 fría seguido por centrifugación (1000 rpm, 5 min a 4°C) y las células se transfirieron a un tubo de centrífuga de 15 ml estéril. El número de células mononucleares se enumeraron en una cámara de conteo Neubauer mejorada. • Se removieron suficientes perlas magnéticas (5/célula mononuclear), revestidas con IgG anti-ratón de cabra (Dynal. Great Neck, NY) de su botella de solución madre y se colocaron en 5 ml de medio fresco (esto lava el conservador de azida tóxico). El medio se removió inmovilizando las perlas en un imán y se reemplazaron con medio fresco. • Las perlas se mezclaron con las células y la suspensión se incubó durante 30 min en hielo. La suspensión se mezcló frecuentemente. • Las células revestidas con perlas se inmovilizaron en un imán y las células restantes (fracción rica en osteoclastos) se decantó en un tubo de centrífuga de 50 ml estéril. - Se agregó medio fresco a las sellas revestidas con perlas para descargar cualesquiera osteoclastos atrapados. Este proceso de lavado se repitió x 10. Se descararon las células revestidas con perlas. • Los osteoclastos viables se numeraron en una cámara de conteo, usando diacetato de fluoresceína para marcar células vivas. Se utilizó una pipeta Pasteur de plástico desechable con orificio grande para agregar la muestra la cámara. • Los osteoclastos se formaron en pellas por centrifugación y la densidad se ajustó al número apropiado en medio EMEM (el número de osteoclastos es variable de tumor a tumor), suplementado con 10% de suero de becerro fetal y 1.7 g/litro de bicarbonato de sodio. • Los osteoclastos derivados de osteoclastoma se preincubaron con compuesto (4 dosis) o controles a 37°C durante 30 minutos. • Las células se sembraron luego en cortes revestidos con osteopontina (osteopontina humana o de ratas, 2.5 ug/ml) y se incubaron durante 2 horas a 37°C. • Las células son adherentes se removieron lavando los cortes vigorosamente en solución salina regulada con fosfato y las células que quedaron en los cortes se fijaron en acetona. • Los osteoclastos se tiñeron para fosfatasa acida resistente a tartrato (TRAP), un marcador selectivo para células de este fenotipo (véase pasos 15-17) y se enumeraron por microscopía luminosa. Los resultados se expresaron como % inhibición de adhesión comparado con un control de vehículo.
Análisis de Adhesión Celular Células y cultivo de células Las células de riñon embriónico humano (células HEK293) se obtuvieron de ATCC (Catálogo No. CRL 1573). Las células se desarrollaron en medio esencial mínimo de EARL (EMEM) conteniendo sales de Earl, 10% de suero de bovino fetal, 1% de glutamina y 1% de penicilina-estreptomicina.
Construcciones v transfecciones Un fragmento de 3.2 kb de EcoRI-Ipnl de la subunidad av y un fragmento de 2.4 kb de Xbal-Xhol de la subunidad ß3 se insertaron en los sitios de clonación EcoRI-EcoRV del vector pCDN (Aiyar y otros, 1994) que contiene un promotor de CMV y un marcador seleccionable G418 por ligación de extremo romo. Par la expresión estable, se electrotransformaron 80x106 células HEK 293 se electrotransformaron con construcciones de av+ ß3 (20 µg ADN de cada subunidad) usando un Pulsador de Genes (Hensley y otros, 1994) y se sembraron en placas de 100 mm (5x105 células/placa). Después de 48 horas, el medio de crecimiento se suplemento con 450 µg/ml de geneticina (G418 Sulfato, GIBCO-BRL, Bethesda, MD). Las células se mantuvieron en medio de selección hasta que las colonias fueron lo suficientemente grandes para ser analizadas.
Análisis inmunocitoquímico de células trasfectadas Para determinar si los transfectantes HEK293 expresaron el receptor de vitronectina, las células se inmovilizaron en portaobjetos de vidrio de microscopio por centrifugación, se fijaron en acetona durante 2 min a temperatura ambiente y se secaron al aire. La reactividad específica con 23C6, un anticuerpo monoclonal específico para el complejo av+ ß3 se demostró usando un método de inmunofluorescencia indirecta normal.
Estudios de adhesión celular Se prerevistieron placas de ELISA de 96 pozos Corning durante la noche a 4°C con 0.1 ml de vitronectina humana (0.2 µg/ml en medio RPMI). En el momento del experimento, las placas se lavaron una vez con medio RPMl y se bloquearon con 3.5% BSA en medio RPMl durante 1 hora a temperatura ambiente. Las células transfectadas 293 se resuspendieron en medio RPMl, se suplementaron con Hepes 20 mM, pH 7.4 y 0.1% BSA a una densidad de 0.5 x 10ß células/ml. Se agregó 0.1 ml de suspensión celular a cada pozo y se incubaron durante 1 hora a 37°C, en presencia o ausencia de varios antagonistas de avß3. Después de la incubación, 0.025 ml de una solución de formaldehído al 10%, pH 7, .4, se agregaron y las células se fijaron a temperatura ambiente, durante 10 minutos. Las placas se lavaron 3 veces con 0.2 ml de medio RPMl y se tiñeron las células adherentes con 0.1 ml de azul de toluidina 0.5% durante 20 min a temperatura ambiente. La tinción en exceso se removió por lavado extenso con agua desionizada. El azul de toluidina incorporado en células se diluyo por la adición de 0.1 ml de 50% etanol conteniendo 50 mM HCl. La adhesión celular se cuantificó a una densidad óptica de 500 nM en un lector de placas de microtitulación (Titertek Multiskan MC, Sterling, VA).
Análisis de unión de ayß^en fase sólida El receptor de vitronectina ovß3 se purificó de la placenta humana. La preparación del receptor se diluyo con 50 mM Tris-HCl, pH 7.5, 100 mM NaCI, 1 mM CACI2, 1 mM MnCI2, 1 mM MgCI2 (solución reguladora de pH A) y se agregó inmediatamente a placas de ELISA de 96 pozos a 0.1 ml por pozo. Se agregaron 0.1-0,2 µg de ovß3 por pozo. Las placas se incubaron durante la noche a 4°C. En el momento del experimento, se lavaron los pozos una vez con solución reguladora de pH A y se incubaron con 0.1 ml de albúmina de suero de bovino 3.5% en la misma solución reguladora de pH durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación, los pozos se aspiraron completamente y se lavaron dos veces con 0.2 ml de solución reguladora A. En un análisis de competencia de [3H]-SK&F-107260, se agregaron varias concentraciones de antagonistas no marcados (0.001-100 µM) a los pozos, seguido por la adición de 5.0 nM de [3H]-SK&F-107260. Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Las placas se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación los pozos se aspiraron completamente y se lavaron una vez con 0.2 ml de solución reguladora de pH A enfriada en hielo en una forma de pozo a pozo. Los receptores se solubilizaron con 0.1 ml de 1% SDS y [3H]-SK&F-107260 unido se determinó por conteo de centelleo líquido con la adición de 3 ml de Contador de Centelleo Líquido Ready Safe en un Líquido LS de Beckman, con 40% de eficiencia. La unión no específica de [3H]-SK&F-107260 se determinó en presencia de 2 µM de SK&F-107260 y fue consistentemente menor que el 1% de la entrada de radioligando total. IC5o (concentración del antagonista para inhibir el 50% de unión de [3H]-SK&F- 107260) se determinó por una rutina de ajuste de curva de mínimos cuadrados, no lineal, la cual se modificó del programa LUNDON-2. Se calculó la K¡ (constante de disociación del antagonista) de acuerdo con la ecuación: Ki=IC50/(1+L/KD), en donde I y KD fueron la concentración y la constante de disociación de [3H]-SK&F-107260 respectivamente.
Inhibición de unión de GPHb-llla mediada por RGD Purificación de GPIIB-I la Diez unidades de plaquetas humanas lavadas, caducadas, (obtenidas de la Cruz Roja) se usaron por agitación suave en 3% de octilgucósido, 20 mM de Tris-HCl, OpH 7.4, 140 mM de NaCI, 2 mM CaCI2 a 4°C durante 2 horas. El lisato se centrífugo a 100,000 g durante 1 horas. El sobrenadante obtenido se aplicó a 5 ml de columna 4B de lentil lectina sefarosa (E.Y. Labs) preequilibrada con 20 mm de Tris-HCl, pH 7.4, 100 mM NaCI, 2 mM de CaCI2, 1 % de octilglucósido (solución reguladora de pH A).
Después de 2 horas de incubación, la columna se lavó con 50 ml de solución reguladora de pH a fría. La GPIIb-llla retenida en lectina se eluyó con solución reguladora de pH A conteniendo 10% dextrosa. Todos los procedimientos se llevaron a cabo a 4°C. El GPIIb-llla obtenido fue >95% puro como se muestra por electroforesis de gel de poliacrilamida SDS.
PAGINA FALTANTE EN EL MOMENTO DE LA PUBLICACIÓN Los compuestos preferidos de esta invención tienen una afinidad para el receptor de vitronectina relativo al receptor de fibrinógeno mayor que 10:1. Los compuestos más preferidos tienen un radio de actividad mayor que 100:1. La eficacia de los compuestos de la fórmula (I) solos o en combinación con un agente antineoplástico puede determinarse usando varios modelos tumorales de ratón trasplantares. Ver Patentes de E.U.A. Nos. 5,004,758 y 5,633,016 para detalles de estos modelos. De ninguna manera se pretende que los siguientes compuestos limiten el alcance de esta invención, pero se proveen para ilustrar la forma de hacer y usar los compuestos de ésta invención. Muchas otras modalidades serán fácilmente aparentes para los expertos en la materia.
GENERAL Se registraron espectros de resonancia magnética nuclear de protones (RMN 1H) a 250, 300 0 400 MHz. Se reportaron cambios químicos en pares por millón (d) en el campo inferior de tetrametilsilano normal interno (TMS, por sus siglas en inglés). Las abreviaturas para los datos de RMN son las siguientes: s= singlete, d= doblete, t= triplete, q=cuarteto, m=multiplete, dd=doblete de dobletes, dt=dob!ete de tripletes, app=aparente, br=amplio. J indica la constante de acoplamiento de RMN medido en Hertz. CDCI3 es deuteriocloroformo, DMSO-d es sulfóxido de hexadeuteriodimetilo y CD3OD es tetradeuteriometanol. Se registraron espectros infrarrojos (IR) en el modo de transmisión y se reportaron posiciones de bandas en números de onda inversos (cm"1). Los espectros de masa se obtuvieron usando técnicas de electrorociado (ES, por sus siglas en inglés) o de ionización FAB. Se realizaron análisis elementales ya sea domésticos o por Quantitative Technologies Inc., Whitehouse, NJ. Se tomaron puntos de fusión en un aparato de punto de fusión Thomas-Hoover y no se corrigieron. Todas las temperaturas se reportaron en grados centígrados. Se utilizaron placas de capa fina de Gel de Sílice Analthec GF y Gel de Sílice de E. Merck 60 F-254 para cromatografía de capa fina. Se llevaron a cabo cromatografía instantánea y por gravedad en gel de sílice de E. Merck Kieselgel 60 (230-400 malla). Se realizaron CLAR analítica y preparativa en cromatógrafos Rainin o Beckman. ODS se refiere a un soporte cromatográfico de gel de sílice de octadecilsililo derivatizado. 5 µ Apex-ODS indica un soporte cromatográfico de gel de sílice de octadecilsililo derivatizado que tiene un tamaño de partícula nominal de 5 µ, hecho por Jones Chromatography, Littleton, Colorado. YMC ODS-AQ® es un soporte cromatográfico de ODS y es una marca registrada de YMC Co. Ltd. Kyoto, Japón. PRP-1® es un soporte cromatográfico polimérico (estireno-divinilbenceno) y es una marca registrada de Hamilton Co., Reno, Nevada. Celite® es un auxiliar de filtración compuesto de sílice diatomácea lavada con ácido y es una marca registrada de Manville Corp. Denver, Colorado.
PREPARACIÓN 1 Preparación de 6-(met?lamino)-2-piridiletanol a) 2-(tert-butoxicarbonilamino)-6-picolina Una solución de 2-amino-6-picolina (21.63 g, 200 mmoles) y bicarbonato de di-ter-butilo (52.38 g, 240 mmoles) en CH2CI2 (200 ml) se concentró en el rotovapor a 50°C, y el residuo resultante se dejó rotar en el rotovapor a 50°C bajo vacío. Después de 21.5 hr, la reacción se diluyó con hexanos (400 ml) y se filtró a través de gel de sílice (hexanos seguido por 20% EtOAc/hexanos). La concentración dejó el compuesto del título (41.84 g, cuantitativo) como un aceite amarillo claro que se solidificó gradualmente al permanecer en reposo: RMN 1H (250 MHz, CDCI3) d 7.71 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.40-7.65 (m, 2H), 6.80 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 2.43 (s, 3H), 1.50 (s, 9H); MS (ES) m/e 153 (M+H-C4H8)+. b) 2-r(ter-butoxicarbonil)metilamino1-6-picolina NaH (60% en aceite mineral, 3.60 g, 90 mmoles) se agregó en porciones durante varios minutos a una solución de 2-(ter-butoxicarbonilamino)-6-picolina (15.62 g, 75 mmoles) y yodometano (9.3 ml, 150 mmoles) en DMSO anhídrido (75 ml) a 15°C (baño de agua fría). La temperatura interna casi llega a 35°C. Cuando terminó la evolución de gases, el baño de agua fría se removió y se dejó agitar la reacción a TA. Después de 0.5 hr, la mezcla amarilla obscura se vertió en hielo/H2O (300 ml) y se extrajo con Et2O (3x300 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con H2O (2x75 ml) y salmuera (75 ml). El secado (MgS0 ) y concentración dejaron un aceite amarillo que se cromatografió sobre gel de sílice (7% EtOAc/hexanos). El compuesto del título (13.01 g, 78%) se obtuvo como un aceite amarillo pálido: RMN 1H (250 MHz, CDCI3) d 7.51 (app t, 1 H), 7.37 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 6.86 (d, J=7.2 Hz, 1 H), 3.38 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 1.50 (s, 9H); MS (ES) m/e 223 (M+H)+. c) 6-r(ter-butoxicarbonil)met¡lamino1-2-p¡ridilacetato de etilo Se preparó LDA a 0°C bajo argón de diisopropilamina (19.5 ml, 139.14 mmoles) y 2.5 M n-BuLi en hexanos (46.4 ml, 115.95 mmoles) en THF seco (350 ml). Esta solución se enfrió a -78°C y una solución de 2-[(ter-butoxicarbonil)metilamino]-6-picolina (10.31 g, 46.38 mmoles) en THF seco (46 ml) se agregó por goteo durante 10 min. Se utilizó THF seco adicional (2 ml) en transferencia. La solución anaranjada se agitó a 78°C durante 15 min, luego carbonato de dietilo (6.2 ml, 51.02 mmoles) se agregó rápidamente. La solución roja se agitó a -78°C durante 15 min, luego se enfrió con NH CI medio saturado (175 ml). La mezcla se calentó a +5°C y se extrajo con EtOAc (175 ml) luego con CH2CI2 (2x100 mi). Los orgánicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron (MgSO ), y se concentraron. El aceite amarillo nebuloso se cromatografió en gel de sílice (15% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (10.72 g, 79%) como un aceite amarillo claro: RMN 1H (250 MHz, CDCI3) d 7.51-7.63 (m, 2H), 6.91-7.03 (m, 1H), 4.19 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.38 (s, 3H), 1.27 (t, J=7.1 Hz, 3H), 1.51 (s, 9H); MS (ES) m/e 295 (M+H)+. d) 6-í(ter-butox¡carbon¡l)metilam¡no1-2-piridiletanol Una solución de LiBH4 2N en THF (7 ml, 14 mmoles) se agregó vía jeringa a una solución agitada de 6-[(ter-butox¡carbonil)metilamino]-2-piridilacetato de etilo (6.97 g, 23.7 mmoles) en THF anhídrido (30 ml) bajo argón. La reacción se calentó lentamente a reflujo (exotermia inicial). Después de calentamiento a reflujo de 16 h, la reacción se enfrió a 0°C y se extinguió cuidadosamente con agua (50 ml). La mezcla se extrajo con EtOAc (150 ml), y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (Na2SO ), y se concentró. La purificación por cromatografía instantánea en gel de sílice (35% EtOAc/hexano) dio el compuesto del título (5.26 g, 88%) como un aceite transparente: RMN H (400 MHz, CDCI3) d 7.57 (m, 2H), 6.88 (d, J=7.2 Hz, 1 H), 4.01 (t, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.00 (t, 2H), 1.53 (s, 9H); MS (ES) m/e 253.2 (M+H)+. e) 6-(metilamino)-2-piridiletanol A 6-[(ter-butoxicarbonil)metiIamino]-2-piidiletanol (17.9 g, 71 mmoles) se agregó a una solución de HCl 4N en dioxano (200 ml). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h (se observó evolución de gases moderada) luego se concentró a sequedad. El producto como la sal de clorhidrato se solidificó bajo vacío. El sólido se disolvió en solución de NaOH 1.0 N saturada con NaCI (75 ml), y la solución se extrajo con Et2O (2 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (Na2SO4), y se concentró para dar el compuesto del título (9.12 g, 85%) como un sólido ceroso: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 7.37 (t, 1H), 6.42 (d, J=7.3 Hz, 1H), 6.27 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 3.96 (t, 2H), 2.90 (d, J=5.2 Hz, 3H), 2.84 (t, 2H); MS (ES) m/e 153 (M+H)+.
PREPARACIÓN 2 Preparación de 2-(5,6,7.8-tetrahidro-1 ,8-naft¡ridin-2-il)-1 -etanol a) 2-Pivaloilamino)p¡ridina A una solución de 2-aminopiridina (94.12 g, 1 mol) y Et3N (167.3 ml, 1.2 mol) en CH2CI2 (1 L) se le agregó cloruro de pivaloilo (135.5 ml, 1.1 mol) por goteo a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA mientras el baño se calentaba. Después de 18 horas la mezcla se filtró. El filtrado se lavó secuencialmente con H2O (1.5 I) y NaHCO3 saturado (2 x 1.5 I), luego se secó (MgSO4) y se concentró bajo presión reducida para dar el compuesto del título (183 g, 103%) como un sólido blanquecino: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.28 (m, 2 H), 8.00 (br s, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.03 (m, 1H), 1.31 (s, 9H); MS (ES) m/e 179 (M+H)+. Nota: RMN 1H mostró la presencia de una pequeña cantidad de impurezas que contienen terbutilo, pero el material es lo suficientemente puro para usarse en el siguiente paso. b) 2-(pivaloilamino)-3-piridincarboxialdehído A una solución de 2-(pivaloilamino)piridina (17.8 g, 100 mmoles) en THF seco (250 ml) a -20°C se agregó n-BuLi (solución de 2.5 M en hexanos, 100 ml, 250 mmoles) por goteo durante 30 min. Después de 2 horas, se agregó DMF (21 ml, 275 mmoles) por goteo durante 30 minutos. La mezcla se dejó calentar a TA mientras el baño se calentaba. Después de 18 horas la mezcla se extinguió con NH4CI saturado (300 ml) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (3x400 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) y se concentraron para dar el compuesto del título como una mezcla 2:1 con 2-(pivaloilam¡no)piridina (22 g). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 10.95 (br s, 1 H), 9.95 (s, 1 H), 8.69 (m, 1 H), 8.02 (m, 2H), 7.20 (m, 1 H), 1.38 (s, 9H); MS (ES) m/e 207 (M+H)+. Nota: El procedimiento anterior se repitió usando 1-formilpiperidina (30.5 ml, 275 mmoles) en lugar de DMF para dar el compuesto del título como una mezcla de 4:1 con 2-(pivaloilamino)piridina (21 9). c) 2-amino-3-piridincarboxialdehído 2-(pivaloilamino)-3-piridincarboxialdehído crudo (a partir del paso b, 43 g) se disolvió en HCl 3M (500 ml) y la solución se calentó a reflujo.
Después de 18 horas la mezcla se enfrió a TA, y el pH se ajustó cuidadosamente a 7 usando K2CO3 sólido. La solución acuosa se extrajo con EtOAc (3x500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) y se concentró para dar el compuesto del título (24.57 g, 101 %) como un sólido café rojizo: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 9.85 (s, 1H), 8.24 (m, 1H), 7.80 (m, 1H), 6.90 (br s, 2H), 6.74 (m, 2H); MS (ES) m/e 123 (M+H)+. d) 2-Met¡l-1.8-naftiridina A una solución de 2-amino-3-piridincarboxialdehído (del paso c, 24.57 g) en acetona (750 ml) se agregó prolina (2.3 g, 20 mmoles) luego la mezcla se calentó a reflujo. Después de 48 horas la mezcla se enfrió a TA, se filtró, y se concentró. La cromatografía en columna instantánea en gel de sílice (35% acetona/hexanos) dio el compuesto del título (18.5 g, 64% en 3 pasos) como un sólido amarillo anaranjado: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 9.07 (m, 1H), 8.10 (m, 2H), 7.40 (m, 2H), 2.80 (s, 3H); MS (ES) m/e (M+H)+. e) 2-metil-5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridina Una mezcla de 2-metil-1 ,8-naftiridina (18.5 g, 128 mmoles), 10% Pd/C (5g), y EtOH absoluto (150 ml) se agitó bajo hidrógeno (1.05 kg/cm2) en un aparato Parr. Después de 24 horas, la mezcla se filtró a través de Celite®, y la almohadilla de filtro se lavó secuencialmente con EtOH absoluto y etOAc. El filtrado se concentró a sequedad para dar el compuesto del título (18.85 g, 99%) como un sólido blanquecino: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.02 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.34 (d, J=7.5 Hz, 1H), 4.80 (br s, 1H), 3.38 (m, 2H), 2.74 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.88 (m, 2H); MS (ES) m/e 149 (M+H)+. f) 2-metil-8-(ter-butoxicarbonil)-5,6,7.8-tetrahidro-1 ,8-naftiridina A una solución de 2-metil-5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridna (23.32 g, 157 mmoles) y dicarbonato de di-ter-butilo (44.74 g, 205 mmoles) en THF seco /750 ml) a 0°C se le agregó LiHMDS (solución 1.0 m en THF, 205 ml, 205 mmoles) por goteo. 30 min después de que se completó la adición, la mezcla se extinguió con NH4CI saturado (500 ml) y se extrajo con EtOAc (3x500 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) y se concentraron bajo presión reducida. La cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice (40% EtOAc/hexanos) dio el compuesto del título (32.2 g, 83%) como un aceite amarillo claro: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.27 (d, J=7.6 Hz, 1H), 6.81 (d, J=7.6 Hz, 1H), 3.69-3.79 (m, 2H), 2.65-2.75 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 1.83-1.98 (m, 2H), 1.52 (s, 9H); MS (ES) m/e 249 (M+H)+. g) í8-(ter-butoxicarbon¡i)-5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-illacetato de etilo A una solución de diisopropilamina (47.7 ml, 364 mmoles) en THF seco (250 ml) a 0°C se le agregó en n-BuLi (2.5 M en hexanos, 145.6 ml, 364 mmoles) por goteo. Después de 15 min, esta solución se agregó por goteo a una solución de 2-metil-8-(ter-butoxicarbonil)-5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridina (32.3 g, 130 mmoles) y carbonato de dietilo (56.8 ml, 481 mmoles) en THF seco (400 ml) a -78°C. Después de 30 min, la mezcla se enfrió con NH4CI (500 ml), se calentó a TA, y se extrajo con EtOAc (3 x 500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El secado bajo alto vacío durante la noche dan el compuesto del título (42.52 g, 102%) como un aceite amarillo claro: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.35 (d, J=7.5 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 4.18 (t, 2H), 3.75) (m, 4H), 2.72 (t, 2H), 1.91 (m, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.24 (m, 3H); MS (ES) m/e 321 (M+H)+. Nota: RMN 1H mostró una cantidad pequeña de carbonato de dietilo presente en el producto, pero el material es lo suficientemente puro para usarse en el siguiente paso. h) 2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)-1 -etanol A una solución de [8-(ter-butoxicarbonil)-5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il]acetato de etilo (42.52 g, 130 mmoles) en THF seco (650 ml) a TA se le agregó LiBH (2.0 M en THF, 65 ml, 130 mmoles) y la mezcla resultante se calentó a reflujo. Después de 18 horas, la mezcla se enfrió a 0°VC y se extinguió cuidadosamente con H2O (300 ml). Después de 10 min, la mezcla se extrajo con EtOAc (3x500 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO4), se filtró y se concentró bajo presión reducida. El residuo anterior se disolvió en CH2CI2 (300 ml). A esta solución se le agregó HCl 4N en dioxano (300 ml) lentamente a TA. Después de 4 horas, la mezcla se concentró bajo presión reducida. El residuo se absorbió en una mezcla de 1 :1 de NaOH 1.0 N y NaCI saturado (300 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO ), se filtraron, y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se absorbió en Et2O (250 ml) y se agregó por goteo ácido fórmico al 96% (130 mmoles). El resultado sólido se recuperó por filtración y se lavó con Et2O (2 x 50 ml). El sólido se disolvió en una mezcla 1 :1 de NaOH 1.0 N y NaCI saturado (300 ml), y la solución se extrajo con CH2CI2 (3x300 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO ), se filtraron y se concentraron bajo presión reducida para dar el compuesto del título (11.1 g, 48% en 4 pasos) como un sólido amarillo. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.05 (d, J=7.6 Hz, 1 H), 6.33 (d, J=7.6 Hz,'l H), 3.90 (t, 2H), 2.75 (t, 2H), 2.70 (t, 2H), 1.90 (m, 2H); MS (ES) m/e 179 (M+H)+.
PREPARACIÓN 3 Preparación de (±)-4-(4-hidroxifenil)-3-r4-(trifluorometil)feninbutanoato de etilo a) N-metoxi-N-metil-2-(4-metoxifenil)acetamida A una solución de ácido 4-metoxifenilacético (3.3 g, 20 mmoles) en DMF seco (75 ml) se le agregó clorhidrato de N-metoxi-N-metilamina (1.95 g, 20 mmoles), Et3N (3.1 ml, 22 mmoles), HOBt*H2O (1.95 g, 22 mmoles) y EDC (2.7 g, 22 mmoles). La solución se agitó a TA durante la noche, luego se concentró a vacío. El residuo se absorbió en solución de Na3CO3 al 5% (10 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y concentraron. El residuo se cromatografió sobre gel de sílice (MeOH/CH2CI2 3%) para dar el compuesto del título (1.54 g, 37%) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 210 (M*H)+. b) 2-metoxifenil)-1 -í4-(tr¡fluorometil)fen¡petanona A una solución de sec-BuLi (1.3 M en THF, 22.6 ml, 29.5 mmoles) en THF seco (50 ml) se le agregó 4-bromobenzotrifluoruro (3.3 g, 14.7 mmoles) en THF seco (20 ml) por goteo a -78°C. Después de 20 min, se agregó por goteo N-metoxi-N-metil-2-(4-metoxifenil)acetamida (1.5 g, 7.4 mmoles) en THF seco (10 mi), se calentó a TA, y se extrajo con Et2O (3x20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió en gel de sílice (15% EtOAc/hexanos) Rf 0.81 ; RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.10 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.72 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.187 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.88 (d, J=8,7 Hz, 2H), 4.25 (s, 2H), 3.79 (s, 3H). c) (±)-4-)(4-metox¡fenil)-3-í4-(trifluorometil)fenil1crotonato de etilo A una suspensión de NaH al 60% (350 mg, 8.84 mmoles) en tolueno seco (30 ml) se le agregó fosfonoacetato de trietilo (2.0 g, 8.84 mmoles) en tolueno seco (20 ml) por goteo a TA. Después de 15 min, una solución de 2-(4-metoxifenil)-1-[4-(trifluorometil)fenil]etanona (1.3 g, 4.42 mmoles) en tolueno seco (15 ml) se agregó por goteo y la solución se calentó a reflujo. Después de 16 hors, la reacción se extinguió con NH CI saturado (10 ml), y la mezcla se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtró y se concentró. El compuesto del título (2.2 g, 56%, una mezcla de dos componentes) se obtuvo como un aceite amarillo claro: CLF (5% EtOAc/hexanos) Rf=0.42, 0.44. Este material se usó sin purificación adicional. d) (±)-4-(4-metoxifenil)-3-[4-(trifluorometil)feninbutanoato de etilo A una suspensión de Pd/C al 10% (600 mg) en EtOH absoluto (50 ml) se le agregó (±)-4-(4-metoxifen¡l)-3-[4-(trifluorometiI)fenil]crotonato de etilo (2.2 g, 6 mmoles), y la mezcla se agitó en un aparato Parr a TA bajo H2 (3.5 mg/kg2). Después de 4 horas, la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite®, y el filtrado se concentró. Esta secuencia de reacción se repitió tres veces. El resido se cromatografió en gel de sílice (35% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (900 mg, 56%) como un aceite: CLF (5% EtOAc/hexanos) Rf 0.46; RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.51 (d, J=8.2 Hz, 2H), 7.24 (d, J=8.2 Hz, 2H), 6.94 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.76 (d, J=8.7 Hz, 2H), 3.99 (q, 3=7.1 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.35-3.50 (m, 1H), 2.75-2.93 (m, 2H), 2.69 (dd, J=15.6, 6.4 Hz, 1H), 2.60 (dd, J=15.6, 8.9 Hz, 1H), 1.11 (t, J=7.1 Hz, 3H). e) (±)-4-(4-hidroxifenil)-3-í4-(trifluorometil)fen¡nbutanoato de etilo A una solución de (±)-4-(4-metoxifenil)-3-[4- (trifluorometil)fenil]butanoato de etilo (450 mg, 1.23 mmoles) en CH2CI2 (5 ml) se le agregó BBr3 (1.5 ml, 1.48 mmoles) a -10°C. Después de 3 horas la mezcla se extinguió cuidadosamente con EtOH (10 ml) y la solución se dejó calentar a TA. La mezcla se concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (20% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (270 mg, 63%) como un aceite amarillo: CLF (20% EtOAc/hexanos) Rf 0.22.
PREPARACIÓN 4 Preparación de (±)-3-r4-carboxi-1.3-oxazol-2-ip-4-r4-r(ter- butiloxicarboniDoxilfenilIbutanoato de metilo a) 4-bromo-1 -(triisopropilsililoxi)benceno A una solución de 4-bromofenol (17.3 g, 100 mmoles) en DMF seco (100 ml) a TA se le agregó imidazol (13.62 g, 200 mmoles) seguido por cloruro de triisopropilsililo (22.5 ml, 105 mmoles). Después de 4 horas, la mezcla se diluyó con H2O (50 ml) y se extrajo con hexanos (3x75 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron para dar el compuesto del título (32.23 g, 100%) como una aceite claro que se usó sin purificación: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.29 (d, 3=6 Hz, 2H), 6.71 (d, J=6 Hz, 2H), 1.22 (m, 3H), 1.09 (m, 18H). b) 3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato de metilo Azodicarboxilato de diiosopropilo (32.8 ml, 166 mmoles) se agregó a una solución de 3-carboxi-3-butenoato de metilo (20 g, 139 mmoles), alcohol bencílico (17.2 mg, 166 mmoles), y trifenilfosfina (43.7 g, 166 mmoles) en THF anhídrido (500 ml) a 0°C. La mezcla se dejó para calentar el baño calentado a TA. Después de 3 hr la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (10% EtOAc/hexanos). El compuesto del título (29.46 g, 91 %) se obtuvo como un aceite incoloro: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.35 (m, 5H), 6.48 (s, 1H), (s, 1H), 5.20 (s, 2H), 3.63 (s, 3H), 3.37 (s, 1H). c) (±)-4-(4-triisopropilsililoxifenil)-3-carboxibutanoato de metilo Una solución de 4-bromo-1-(triisopropilsililoxi)benceno (33.23 g, 100 mmoles), 3-(beniciloxicarbonil)-3-butenoato de metilo (28.11 g, 120 mmoles), Pd(OAc)2 (2.24 g, 10 mmoles), P(o-tolil)3 (6.09 g, 20 mmoles), y (i-Pr)2Net (34.8 ml, 200 mmoles) en propionitrilo (350 ml) se desoxigenó (ciclos de 3 x evacuación/purga de N2) se calentó luego a reflujo. Después de 18 horas la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (10% EtOAc/hexanos) para dar un aceite amarillo. El aceite se absorbió en 5% EtOAc/hexanos (100 ml), y la solución se dejó reposar a TA. Después de 72 h la mezcla se filtró y el filtrado se concentró para dar (±)-4-(4-trisiopropilsililoxifenil)-3-(benciloxicarbonil)-3-butenoato de metilo crudo como una mezcla de isómeros de olefina. Esto se usó inmediatamente en el siguiente paso. La mezcla de olefina anterior se dividió en dos partes. Cada parte se hizo reaccionar de la siguiente manera combinándose luego por filtración: A una suspensión de 10% de Pd/C (7.4 g) en EtOAc (100 ml) se le agregó a la mezcla de olefina combinan después de filtración: a una suspensión de 10% Pd/C (7.4 g) en EtOAc (100 ml) se agregó a la mezcla de olefina anterior. La mezcla se desoxigenó (ciclos de 3x evacuación/purga de N2) luego se cargó con H2 (3.5 mg/kg2). Después de 4 horas el H2 se removió y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite®. El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (24.64 g, 89% de 4-bromo-1-(triisopropilsiloxi)benceno) como un aceite transparente: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.01 (d, J=6 Hz, 2H), 6.80 (d, J=6 Hz, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.05 (m, 2H), 2.65 (m, 1H), 2.40 (m, 2H), 1.21 (m, 3H), 1.09 (m, 18H). d) Ester bencílico de (±)-N-f2-í4-(triisopropilsililoxi)bencin-3-(cabometoxi)propionipserina A una solución de (±)-3-carboxi-4-[4- (triisopropils¡l¡loxi)fenil]butanoato de metilo (5.00 g, 12.67 mmoles) en DMF seco (60 ml) a TA se le agregó clorhidrato de éster bencílico de serina (3.52 g, 15.21 mmoles), HOBt (2.06 g, 15.21 mmoles), Et2N (5.3 ml, 38.01 mmoles) y EDC (2.92 g, 15.21 mmoles). Después de 18 horas la mezcla se concentró. El residuo se cromatografió en gel de sílice (80% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (5.76 mg, 79%) como un aceite amarillo pálido: MS (ES) m/e 572 (M+H)+.
L (±)-3-í4-(benciloxicarbonil)-1 ,3-oxazol¡n-2-¡p-4-l4- (triisopropilsililoxi)fenillbutanoato de metilo A una solución de éster bencílico de (±)-N-[2-[4-(triisopropils¡liloxi)bencil]-3-(carbometoxi)propionil]serina (5.76 g, 10.07 mmoies) en THF seco (50 ml) se agregó reactivo de Burgess (2.88 g, 12.08 mmoles), luego la mezcla se calentó a reflujo. Después de 2 horas la mezcla se enfrió a TA y se concentró. El residuo se cromatografió en gel de sílice (35% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (4.45 g, 80%) como un aceite transparente: MS (ES) m/e 554 (M+H)+. ñ. (±)-3-f4-(benciloxicarbonin-1.3-oxazol-2-ill-4-r4- (triisopropilsililoxQfenipbutanoato de metilo A una solución de (±)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1 ,3-oxazolin-2-il]-4-[4-(triisopropilsililoxi)fenil]butanoato de metilo (4.45 g, 8.03 mmoles) en CH2CI2 (40 ml) a 0°C se le agregó DBU (1.4 ml, 9.64 mmoles), seguido por bromotriclorometano (0.95 ml, 9.64 mmoles). La mezcla se dejó calentar a TA a medida que se calentó al baño. Después de 18 horas, la mezcla se concentró. El resido se cromatografió sobre gel de sílice (20% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (2.23 g, 50%) como un aceite transparente: MS (ES) m/e 552 (M+H)+. gl (±)-3-r4-(benciloxicarbon¡l)-1.3-oxazol-2-ill-4-(4-hidroxifeniPbutanoato de metilo A una solución de (±)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1 ,3-oxazol-2-il]-4-[4-(triisopropilsililoxi)fenil]butanoato de metilo (2.23 g, 4.04 mmoles) en THF seco (20 ml) a 0°C se le agregó una solución de TBAF en THF (1.0 M, 6.06 ml, 0.06 mmoles). Después de 2 horas la mezcla se diluyó con NH4CI saturado (10 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió en gel de sílice (40% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (1.4 g, 88%) como una espuma blanquecina: MS(ES) m/e 396 (M+H)+. Ül (±)-3-í4-(benciloxicarbonil)-1 ,3-oxazol-2-ill-4-r4-(ter-butiloxicarboniOoxilfenipbutanoato de metilo A una solución de (±)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1 ,3-oxazol-2-il]-4- (4-hidroxifenil)butanoato de metilo (700 mg, 1.77 moles) y dicarbonato de di-ter-butilo (463 mg, 2.12 mmoles) en THF seco (10 ml) se le agregó piridina (0.17 ml, 2.12 mmoles) a TA. Después de 18 horas se concentró la mezcla. El residuo se trituró con hexanos, se filtró, y se secó a vacío para dar el compuesto del título (765 mg, 87%) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 496 (M+H)+.
Jl (±)--3-r4-carboxi-1.3-oxazol-2-ill-4-r4-r(ter-butiloxicarboniDoxilfenillbutanoato de metilo Una mezcla de (±)-3-[4-(benciloxicarbonil)-1 ,3-oxazol-2-ii]-4-[4-(ter-butiIoxicarbonil)oxi]fenil]butanoato de metilo (765 mg, 1.54 mmoles) y 10% Pd/C (164 mg) en EtOH (20 ml) se desoxigenó (ciclos de 3x evacuación/purga N2) luego se cargó con H2 (3.5 mg/kg2). Después de 4 horas el H2 se removió y la mezcla se filtró a través de una almohadilla de Celite®. El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (659 mg, 100%) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 811 (2M+H)+.
PREPARACIÓN 5 Preparación de (±)-3-r4-(tr¡fluorometii)tiazol-2-ill-4-(4- hidroxifeniPbutanoato de metilo a) 2-cianomet¡l-4-(trifluorometil)t¡azol 2-cianotiacetamida (1.00 g, 9.99 mmoles) y 3-bromo-1-trifluoropropan-2-ona (1.04 ml, 9.99 mmoles) se combinaron en EtOH absoluto (50 ml) y se calentó a reflujo. Después de 18 horas, la mezcla se enfrió a TA y se concentró. El residuo se cromatografíó en gel de sílice 815% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (1.24 g) como una mezcla de 2:1 con 2-cianoacetato de etilo: MS (Es) m/e (2M+H)+. b) 3-(4-benc¡loxifenil)-2-í(4-trifluorometil)tiazol-2-inacrilonitrilo Se hizo reaccionar NaH (516 mg, dispersión en aceite mineral al 60%, 12.9 mmoles) con EtOH absoluto (10 ml) a 0°C. Después de que cesó fla evolución de los gases, la mezcla se calentó a TA. Se agregó 4- benciloxibenzaldehído (2.05 g, 9.68 mmoles) todo a la vez como un sólido. A esta mezcla, se le agregó por goteo una solución de 2-cianoemetil-4- (trifluorometil)tiazol (1.24 g) en EtOH absoluto (20 ml). La reacción se agitó durante 4 horas, luego el sólido se recuperó por filtración y se lavó con hexanos para dar el compuesto del título (1.64 g, 42% en 2 pasos) como un sólido amarillo: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.25 (s, 1H), 8.00 (d, J=6 Hz, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.40 (m, 5H), 7.10 (d, J=6 Hz, 2H), 5.18 (s, 2H). c) 3-(4-benciloxifenip-2-c¡ano-2-f(4-trifluorometil)tiazol-2-illox¡rano A una solución de 3-(4-benciloxifenil)-2-[(4-trifluorometil)tiazol-2- iljacrilonirilo (500 mg, 1.29 mmoles) en CH3CN (5 ml) se le agregó alúmina neutra (1.3 g). Se agregó blanqueador Cloros (5 ml) por goteo a TA. Después de 1 hora, la mezcla se filtró. El filtrado se diluyó con H2O (20 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x20 ml). La capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron para dar el compuesto del título (425 mg, 82%) como un aceite amarillo que fue suficientemente puro para usarse en el siguiente paso. RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.90 (s, 1 H), 7.40 (m, 7H), 7.06 (d, J=6Hz, 2H), 5.10 (s, H), 4.59 (s, 1 H). d) 2-(4-benciloxifenil)-21-r4-(trifluorometil)tiazol-2-illetanona A una solución de 3-(4-benciloxifenil)-2-ciano-2-[(4-trifluorometil)tiazol-2-il]oxirano (425 mg, 1.06 mmoles) en CH2CI2 (7 ml) se le agregó Et3SiH (0.85 ml, 5.3 mmoles) luego BF3«Oet2 80.39 ml, 3.17 mmoles) por goteo a 0°C. Después de 2 horas la mezcla se vertió en H20 (20 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió en gel de sílice (5% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (167 mg, 40%) como un sólido blanco: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.05 (s, 1H), 7.35 (m, 7H), 6.92 (d, J=6 Hz, 2H), 5.05 (s, 2H), 4.40 (s, 1H). e) (±)-3-í4-(trifluorometil)t¡azol-2-in-4-(4-hidroxifenil) butanoato de metilo A una suspensión de NaH (35 mg, 0.88 mmoles) en THF seco (2 ml) se le agregó fosofonaoacetato de trietilo 80.17 ml, 0.88 mmoles) en THF seco (2 ml) se le agregó fosfonoacetato de trietilo (0.17 ml, 0.88 mmoles) por goteo a TA. Después de 15 minutos, se agregó por goteo una solución de 2-(4-benciloxifenil)-1-[4-(trifluormetil)tiazol-2-il]etanona (167 mg, 0.44 mmoles) en THF seco (2 ml), y la mezcla se calentó a reflujo. Después de 18 horas, la mezcla se enfrió a TA, se extinguió con NH4CI saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron para dar (±)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2- il]-4-(4-benciloxifenil)crotonato de etilo crudo como un aceite. Este se utilizó sin purificación. Se disolvió (±)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)crotonato de etilo (0.44 mmoles, crudo) en MeOH (4 ml), y se agregaron virutas de magnesio (53 mg, 2, .20 mmoles) a TA. Después de 72 horas la mezcla se vertió en NCI 10% (75 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3 x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtró y se concentró para dar (±)-3[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)butanoato de metilo. Este se usó sin purificación. A una solución de (±)-3[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-(4-benciloxifenil)butanoato de metilo (0.44 mmoles, crudo) en EtSH (5 ml) a TA se le agregó BF3*Oet2 (0.3 ml). Después de 18 horas, se agregó BF3«Oet2 adicional (0.3 ml). Después de otras 18 horas, la mezcla se enfrió a 0°C y se extinguió cuidadosamente con NaHCO3 saturado. La mezcla resultante se extrajo con CH2CI2 (3x25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió en gel de sílice (30% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (123 mg, 81 % en tres pasos) como un aceite amarillo: MS (ES) m/e 346 (M+H)+.
PREPARACIÓN 6 Preparación de (±)-3-(5-metiltiazol-2-il)-4-(4-hidroxifenilbutanoato de metilo a) 4-(benciloxQfenilacetato de metilo A una suspensión de K2CO3 (20.7 g, 150 mmoles) en acetona (50 ml) se le agregó 4-hidroxifenil acetato de metilo (5.0 g, 30 mmoles) y cloruro de bencilo (10.4 ml, 90 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo. Después de 24 horas, la mezcla se enfrió a TA, se filtró y se concentró. El residuo se cromatografió en gel de sílice (10% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del titulo (7.7 g, 100%) como un sólido blanco: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.40 (m, 5H), 7.21 (d, J=6.6 Hz, 2H), 6.95 (d, J=6.6 Hz, 2H), 5.05 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (s, 2H). b) 2-(4-benciloxifenil)-1 -(5-meti!tiazol-2-iPetanona A una solución de 5-metiltiazol (0.21 ml, 2.34 mmoles) en THF seco (10 ml) se le agregó por goteo n-BuLi (0.94 ml, solución 2.5 M en hexanos, 2.34 mmoles) a -78°C. Después de 15 minutos, se agregó por goteo 4-benciloxifenilacetato de metilo (0.5 g, 1.95 mmoles) en THF seco (5 ml). Después de 30 minutos la mezcla se extinguió con NH CI (10 ml) saturado, se calentó a TA y se extrajo con EtOAc (3x20 ml). Las capas orgánicas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió en gel de sílice (15% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (535 mg, 51 %): MS (ES) m/e 324 (M+H)+. c) (±)-4-(4-bencilox¡fenil)-3-(5-metiltiazol-12-il)crotonato de etilo A una suspensión de NaH (79 mg, 1.98 mmoles) en THF seco (2 ml) se le agregó fosfonoacetato de trietilo (0.39 ml, 1.98 mmoles) por goteo a TA. Después de 15 minutos, se agregó por goteo una solución de 2-(4-benciloxifenil)-1-(5-metiltiazol-2-il)etanona (320 mg, 0.99 moles) en THF seco (3 ml), y la mezcla se calentó a reflujo. Después de 18 horas la mezcla se enfrió a TA, se extinguió con NH CI saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml). las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron. El aceite amarillo resultante se usó en el siguiente paso sin purificación: MS (ES) m/e 394 (M+H)+. d) (±)-3-(5-metiltiazol-2-il)-4-(4-benciloxifenil)butanoato de metilo Se disolvió (±)-3-(5-metiltiazol-2-il)-4-(4-benciloxifenil)crotonato de metilo (0.99 mmoles, crudo) en MeOH (5 ml) y se agregaron virutas de magnesio (120 mg, 4.95 mmoles) a TA. Después de 72 horas, la mezcla se vertió en 10% HCl (75 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron para dar el compuesto del título crudo. Este se usó sin purificación: MS (ES) m/e 382 (M+H)+. e) (±)-3-(5-metiltíazol-2-¡l)-4-(4-hiroxifenil)butanoato de metilo A una solución de (±)-3-(5-metiltiazol-2-il)-4-(4-benciloxifenil)butanoato de metilo (0.99 mmoles, crudo) en EtSH (5 ml) a TA se le agregó Bf3Oet2 (0.6 ml). Después de 18 horas, se agregó Bf3Oet2 adicional (0.6 ml). Después de otras 18 horas, la mezcla se enfrió a 0°C y se extinguió cuidadosamente con NaHCO3 saturado. La mezcla resultante se extrajo con CH2CI2 (3x25 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron y se concentraron. El residuo se cromatografió en gel de sílice (50% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título (249 mg, 86% en 3 pasos) como un sólido amarillo; MS (ES) m/e 292 (M+H)+.
PREPARACIÓN 7 Preparación de (4R, 5s)-1-acriloil-3,4-dimetil-5-feniHm¡dazolidin-2-ona A una solución de (4S, 5R)-1 ,5-dimetil-4-fenil-2-imidazolidinona (45.0 g, 237 mmoles) y (i-Pr)2Net (62 ml, 355 mmoles) en CH2CI2 (1200 ml) se le agregó CuCI (50 mg, 0.51 mmoles) luego cloruro de acriloilo (29 ml), 355 mmoles) y la mezcla se calentó a reflujo. Después de 2 horas la mezcla se enfrió a TA, se lavó con H2O (3x400 ml), se secó sobre MgSO , y se concentró. El sólido resultante se trituró con Et2O (300 ml) y se recogió por filtración para dar el compuesto del título (45.15 g, 78%): RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 7.72 (dd, J=17.0, 10.5 Hz, 1H), 7.20-7.38 (m, 3H), 7.10-7.20 (m, 2H), 6.40 (dd, J=17.0, 2.1 Hz, 1 H), 5.77 (dd, J=10.4, 2.0 Hz, 1H), 5.6 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.85-4.00 (m, 1H), 2.85 (s, 3H), 0.82 (d, J=6.6 Hz, 3H), MS (ES) m/e 245 (M+H)+.
PREPARACIÓN 8 Preparación de bromuro de 4-metoxifenilmaqnesio Una solución de cloruro de 4-metoxibencilo (120 g, 766 mmoles) en THF (1.0 L) se agregó por goteo durante 1.5 horas a una mezcla de virutas de magnesio (74 g, 3.04 moles) e l2 (50 mg, 0.20 mmoles) en HF seco (0.5 I) a TA. Durante los 10 minutos iniciales de la adición se disipó el color café y la reacción se calentó. Una hora después se completó la adición y la reacción volvió a TA. La titulación usando 1 ,10-fenantrolina indicó que la solución fue reactivo de Grignard 0.36 M en THF.
PREPARACIÓN 9 Preparación de (S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-hidroxifenil)butanoato de etilo (a) (4R. 5S)-3,4-dimetil-1 -r(E)-3-(3-fluorofen¡l)prop-2-eno¡ll-5-fenilímidazolidin-2-ona. Una solución de 1 -bromo-3-fluorobenceno (525 mg, 3 mmoles), (4R, 5S)-1-acriloil-3,4-dimetil-5-fenilimidazolidin-2-ona (500 ml, 2 mmoles), Pd(OAc)2 (22 mg, 0.10 mmoles), P(o-tolil)3 (61 mg, 0.20 mmoles), y (i-Pr)2Net (0.73 ml, 4.2 mmoles) en DMF seco (10 ml) se desgasificó (3x vacío/purga N2) luego se calentó a 110°C. Después de 2 horas la mezcla se enfrió y se vertió en EtOAc. La mezcla resultante se lavó con H2O (3x), y las capas acuosas combinadas se extrajeron de nuevo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron a través de un tapón de gel de sílice y se concentraron. El residuo se absorbió en Et2O/hexanos al 1 :1 (10 ml) y se enfriaron a -20°C durante la noche. El sólido se recogió y se secó a vacío para dar el compuesto del título (514 mg, 76%): RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.18 (d, 3=15.9 Hz, 1H), 7.64 (d, 3=15.9 Hz, 1H), 7.15-7.45 (m, (H), 6.98-7.10 (m, 1H), 5.42 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.88-4.03 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 0.85 (d, 3=6.6 Hz, 3H); MS (ES) m/e 339 (M+H)+.
. I4R, 5S)-32.4-d¡metil-1-(S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-metoxifenil)butanoin-5-fenilimidazolidin-2-ona Una solución de bromuro de 4-metoxifenilmagnesio en THF (0.31 M, 14.7 ml, 4.56 mmoles) se agregó por goteo a una suspensión agitada de (4R, 5S)-3,4-dimetil-1 -[(E)-3-(3-fluorofenil)prop-2-enoil]-5-fenilimidazolidin-2-ona (514 mg, 1.52 mmoles), complejo CuBr?DMS (229 mg, 1.06 mmoles), y Znl2 (582 mg, 1.82 mmoles) en THF/tolueno (10 ml) a -15°C. Después de 1.5 horas, la reacción se extinguió con NH4CI saturado y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO y se concentraron a sequedad. El residuo se absorbió en Et2O/hexanos 1 :1 y se enfriaron a -20°C durante 18 horas. El sólido se recuperó, se lavó con Et2O/hexanos 1 :1 y se secó a vacío para dar una primera recopilación del compuesto del título. El filtrado se concentró y el residuo se purificó por cromatografía instantánea sobre gel de sílice (30% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del título adicional como un aceite amarillo que se solidificó a vacío. El rendimiento total del compuesto del título fue de 0.62 g (91 %): RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 6.75-7.37 (m, 13H), 5.10 (d, 3=8.5 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.65-3.85 (m, 1H), 3.63 (dd, J=16.7, 9.6 Hz, 1H), 3.36-3.41 (m, 1H), 3.14 (dd, 3=16.7, 4.9 Hz, 1 H), 2.72-2.88 (m, 2H), 2.79 (s, 3H), 0.74 (d, J=6.6 Hz, 3H). (c) (S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-metoxifenil)butanoato de etilo Una solución de 21 % de NaOEt en EtOH (0.6 ml, 1.8 mmoles) se agregó a una solución de (4R, 5S)-3,4-dimetil-1-[(S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-metoxifenil)buatanoilj-5-fenilimidazolidin-2-ona (620 mg, 1.38 mmoles) en THF 810 ml). La reacción se agitó durante 1 horas, luego se extinguió con NH4CI saturado. La extracción con EtOAc, secado (MgSO4), y concentración dejaron un residuo que se filtró a través de un tapón de gel de sílice (15% EtOAc/hexanos). El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (163 mg, 60%) como un aceite transparente: RMN 1H (300 MHz, -CDCI3) d 7.13-7.35 (m, 1H), 6.80-7.00 (m, 5H), 6.70-6.80 (m, 2H), 4.00 (q, 3=7.1 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.28-3.45 (m, 1 H), 2.83 (d, J=7.5 Hz, 2H), 2.65 (dd, J=15.4, 6.4 Hz, 1 H), 2.56 (dd, J=15.4, 8.7 Hz, 1 H), 1.12 (t, J=7.1 Hz, 3H). (d) (S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-hidroxifenil)butanoato de etilo A una solución de (S)-3-(3-fIuorofenil)-4-(4-metoxifenil)butanoato de etilo (263 mg, 0.83 mmoles) en CH2CI2 (5 ml) a -15°C se le agregó etanotiol 80.30 ml, 4.16 mmoles) seguido por AICI3 (555 mg, 4.16 mmoles). Después de 30 min, la mezcla se calentó a TA, se agitó durante 30 minutos adicionales, luego se vertió sobre hielo, El hielo se dejó fundir, y la mezcla se extrajo con CH2CI2 (3x). El secado (MgSO ) y concentración dejaron un residuo que se filtró a través de un tapón de gel de sílice (30% EtOAc/hexanos). La concentración del filtrado dio el compuesto del título (250 mg, cuantitativo): RMN 1H RMN (300 MHz, CDCI3) d 7.10-7.35 (m, 1H), 6.78-7.00 (m, 5H), 6.58-6.78 (m, 2H), 5.00 (s, 1H), 4.00 (q, 2H), 3.28-3.45 (m, 1H), 2.83 (d, 2H), 2.50-2.75 (m, 2H), 1.17 (t, 3H).
PREPARACIÓN 10 Preparación de (±)-4-(4-hidroxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo (a) 2-(ter-butildimetilsil¡loxi)-2-(piridin-3-il)acetonitrilo A una solución de 3-piridincarboxialdehído (10 g, 9.34 mmoles) en CH3CI (45 ml) se le agregó KCN (6.0 g, 93 mmoles), TBDMSI (1.7 g, 11.21 mmoles), y Znl2 (50 mg, 0.16 mmoles). Después de 4 horas a TA la mezcla se filtró a través de Celite® y el filtrado se concentró. La cromatografía instantánea sobre gel de sílice (25% EtOAc/hexanos) dio el compuesto del título (2.17 g, 94%) como un aceite transparente: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.63-8.73 (m, 2H), 7.80-7.87 (m, 1H), 7.33-7.41 (m, 1H), 5.57 (s, 1H), 0.97 (s, 9H), 0.27 (s, 3H), 0.19 (s, 3H). (b) (±)-3-(4-benciloxifenip-2-(ter-butildimetilsililoxi)-2-(piridin-3-iQpropionitrilo LDA se preparó por adición de n-BuLi (2.5 M en hexanos, 1.93 ml, 4.83 mmoles) a una solución de diisopropilamina (0.63 ml, 4.83 mmoles) en THF seco (5 ml) a 0°C. La solución de LDA se agregó por goteo a una solución de 2-(ter-butildimetilsililoxi)-2-(piridin-3-il)acetonitrilo (1.0 g, 4.03 mmoles) en THF seco (15 ml) a -78°C. La solución se agitó durante 15 minutos, luego se agregó cloruro de 4-benciloxibencílico ((1.41 g, 6.05 mmoles) se agregó como un sólido todo la vez. La reacción se mantuvo a -78°C durante 15 minutos, luego se calentó a TA. Después de 30 minutos a tA, la reacción se extinguió con NH4CI acuoso saturado se agitó durante 20 minutos. La extracción de EtOAc (3x), secado (MgSO ), concentración y cromatografía instantánea en gel de sílice (20% EtOA/hexanos) dio el compuesto del título (769 mg, 43%) como un aceite amarillo: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.80 (estrecho m, 1H), 8.67-8.70 (m, 1H), 7.75-7.80 (m, 1H), 7.33-7.53 (m, 6H), 7.08 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.30 (1/2 Aq, 1H), 3.18 (1/2 Abq, 1H), 0.99 (s, 9H), 0.12 (s, 3H), 0.08 (s, 3H). (c) 2-(4-benciloxifenil)-1 -(piriidin-3-ipetanona Una solución de TBAF en THF (1.0 M, 2.2 ml, 2.2 mmoles) se agregó por goteo a una solución de (±)-3-(4-benciloxifenil)-2-(ter-butild¡metilsililoxi)-2-(p¡rid¡n-3-il)propionitrilo (769 mg, 1.73 mmoles) en THF seco (10 ml) a -15°C. Después de 30 minutos, la reacción se dividió entre EtOAc y H2O. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con H2O, se segó (MgSO4), se filtró a través de un tapón de gel de sílice, y se concentró para dar el compuesto del título impuro (492 mg, 94%) como un sólido amarillo: MS (ES) m/e 304 (M+H)+. Este material se usó sin purificación adicional. (d) 4-(4-benciloxifenil)-3-(piridin-3-il)but-2-enoato de etilo Se agregó por goteo fosfonoacetato de trietilo (0.70 ml, 3.46 mmoles) a una suspensión de NaH (dispersión al 60% en aceite mineral, 130 mg, 3.46 mmoles) en THF seco (5 ml) a TA. Cuando cesó la evolución de gases, se agregó una solución de 2-(4-benciloxifenil)-1-(piridin-3-il)etanona (ca. 1.73 mmoles, material impuro de la Preparación 10(c)) en THF seco (5 mi), y la mezcla se alentó a reflujo. Después de 18 horas, la mezcla se enfrió a TA, se extinguió con NH4CI acuoso saturado y se extrajo con EtOAc (3x). Los orgánicos combinados se secaron (MgSO ) y se concentró para dar el compuesto del título crudo: MS (ES) m/e 374 (M+H)+. Este material se usó sin purificación adicional. (e) (±)-4-(4-hidroxifen¡D-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo Una mezcla de 4-(4-benciloxifenil)-3-(piridin-3-¡l)but-2-enoato de etilo (1.73 mmoles) y 10% de Pd/C (200 mg) en EtOH (10 ml) se agitó bajo H2 (3.5 kg/cm2) en un aparato Parr. Después de 4 horas, la mezcla se filtró a través de Celite® y el filtrado se concentró. La cromatografía instantánea en gel de sílice (50% EtOAc/hexanos) dio el compuesto del título impuro (327 mg, 66% en tres pasos) como un aceite amarillo: M (ES) m/e 286 (M+H)+. Este material se uso sin purificación adicional.
PREPARACIÓN 11 Preparación de (S)-4-(4-hidroxifeniD-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo (a) (4R. 5S)-3.4-dimetil-1 -r(E)-3-(piridin-3-¡l)prop-2-eno¡n-5-fenilimidazolidin-2-ona Una solución de 3-bromopiridina (8.6 ml, 88.5 mmoles), (4R, 5S)-1-acriloil-3,4-dimetil-5-fenilimidazolid¡na-2-ona (14.4 g, 59 moles), Pd(OAc)2 (662 mg, 2.95 mmoles), P(o-tolil)3 (1.80 g, 5.9 mmoles), y (i-Pr)Net (22 ml, 124 mmoles) en DMF seco (300 ml) se desgasificó (3x vacío/purga N2) luego se calentó a 110°C. Después de 2 horas la mezcla se enfrió y se vertió en EtOAc. La mezcla resultante se lavó con H2O (3x) y las capas acuosas combinada se extrajeron de nuevo con EtOAc (2x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron a través de un tapón de gel de sílice y se concentraron. El residuo se absorbió en EtOA hexanos 1 :1 y se recuperó el sólido, se lavó con EtOAc/hexanos 1 :1 , y se secaron a vacío para dar una primera recopilación del compuesto del título. El filtrado se concentró y se preparó el proceso de cristalización para dar una segunda recopilación. El rendimiento total del compuesto del título fue 17.53 g (92%): RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 8.48-8.85 (m, 2H), 8.25 (d, 3=15.9 Hz, 1H), 7.89-7.97 (m, 1H), 7.68 (d, 3=15.9 Hz, 1H), 7.15-7.38 (m, 6H), 5.43 (d, 3=8.5 Hz, 1H), 3.90-4.02 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 0.85 (d, J=6.6 Hz, 3H); MS (ES) m/e 322 (M+H)+. fb) (4R. 5S)-3.4-dimetil-1-r(SM-(4-metoxifenin-3-(piridin-3-ipbutanoin-5-fenilimidazolidin-2-ona. Una solución de bromuro de 4-metoxifenilmagnesio en THF (0'.33 M, 495 ml, 163.5 mmoles) se agregó por goteo a una suspensión agitada de (4R, 5S)-3,4-dimetil-1-(E)-3-(piridin-3-il)prop-2-enoil]-5-fenilimidazolidin-2-ona (17.53 g, 54. moles), complejo de CuBr?DMS (14.1 g, 65.4 mmoles), y Znl2 820.9 g, 65.4 mmoles) en THF/tolueno (270 ml) a -15°C. Después de 1 hora la reacción se extinguió con NH4CI/conc. Saturado. NH4OH y la mezcla se agitó estando abierta durante 30 minutos. La mezcla se diluyó con H2O y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO y se concentraron. El residuo se absorbió en éter metil ter-butílico (MTBE, 200 ml) y se almacenó a -20°C durante la noche. El sólido se recuperó,. Se lavó con MTBE, y se secó a vacío. Este material se recristalizó con hexanos/EtOAc 3:1 para dar el compuesto del título (19.408 g, 80%): RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 8.72 (br, s, 2H), 7.50 (m estrecho, 1H), 7.12-7.35 (m, 4H), 6.97-7.03 (m, 2H), 6.94 (d, 3=8.6 Hz, 2H), 6.72 (d, J=8.6 Hz, 2H), 5.11 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 3.70-3.90 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.43-3.58 (m, 1 H), 3.03-3.18 (m, 1 H), 2.75-2.95 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 0.66 (d, J=6.5 Hz, 3H); MS (ES) m/e 444 (M+H)+. (c) (S -4-(4-metoxifen¡l)-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo Una solución de 21 % de NaOEt en EtOH (18.4 ml, 56.88 mmoles) se agregó a una solución de (4R, 5S)-3,4-dimetil-1-[(S)-4-(4-metoxifenil)-3-(piridin-3-iI)butanoi]-5-fenilimidazolidin-2-ona (19.408 g, 43.8 mmoles) en THF (200 ml) a 0°C. La reacción se agitó durante 1 hora, luego se enfrió con NH CI saturado y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4) y se concentraron. El residuo se absorbió en EtOAc/hexanos 1 :1 y se filtraron, y el filtrado se filtró a través de un tapón de gel de sílice (EtOAc/hexanos 1 :1 ). El filtrado se concentró para dar el compuesto del título (9.25 g, 71 %) como un aceite anaranjado: RMN 1H (400 MHz, CDCI3)d 8.57 (br s, 2H), 7.44 (m estrecho, 1H), 7.17-7.25 (m, 1H), 6.95 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.76 (d, J=8.6 Hz, 2H), 4.01 (q, 3=7.1 Hz, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.33-3.48 (m, 1H), 2.91 (dd, 3=13.7, 7.3 Hz, 1H), 2.85 (dd, 3=13.7, 7.8 Hz, 1H), 2.71 (dd, 3=15.6, 6.5 Hz, 1 H), 2.61 (dd, J=15.6, 8.7 Hz, 1 H), 1.13 (t, J=7.1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 300 (M+H)+.
EJEMPLO 1 Preparación de ácido (±)-4-í4-r2-r6-(metilamino)piridin-2-ill-1-etoxi1fenil-3- r4-(trifluorometiDfen¡pbutanoico a) (±)-4-r4-r2-r6-(met¡lamino)piridin-2-¡n-1-etoxilfenill-3-f4- (trifluorometipfeninbutanoato Azodicarboxilato de diisopropilo (0.15 ml. 0.767 moles) se agregó durante 2 minutos a una solución de (±)-4-(4-hidroxifenil)-3-[4-(trifluorometiI)fenil]butanoato de etilo (270 mg, 0.767 moles), 6-metilamino)-2-piridiletano (130 mg, 0.92 mmoles), y trifenilfosfina (200 mg, 0..767 mmoles) en THF anhídrido (5 ml) a 0°C bajo N2. La solución amarilla se mantuvo a 0°C durante 10 minutos, lego se calentó a TA. Después de 24 horas, la reacción se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (20 EtOAc/hexanos). El compuesto del título (200 mg, 54%) se obtuvo como un aceite incoloro: MS (ES) m/e 487 (M+H)+. b) Acido (±)-4-[4-r2-r6-(metilam¡no)pirid¡n-2-in-1 -etoxilfenin-3-f4-(trifluorometil)fenipbutanóico NaOH 1.0 N (8.2 ml, 0.823 mmoles) se agregó por goteo a una solución enfriada (15°C) de (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-ii]-1-etoxi]fenil]- 3-[4-(trifIuorometil)fenil]butanoato de etilo (200 mg, 0.41 mmoles) en MeOH (3 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 24 horas. La solución resultante se concentró a vacío y el residuo se disolvió en H2O (5 ml). El pH se ajustó a 5 con HCl 1.0 N y el precipitado se recopiló, se lavó con una pequeña cantidad de agua, y se secó a vacío a 60°C. El compuesto del título (120 mg, 64%) se obtuvo como un sólido espumoso blanco: MS (ES) m/e 459 (M+H)+. Anal. Cale. Para C25H25FN2O3?0.85 H2O: C, 63.38; H, 5.68; N, 5.91. Encontrado: C, 63.23; H, 5.41 ; N, 5.73.
EJEMPLO 2 Preparación de ácido (±)-4-í4-r2-f6-(metilamino)piridin-2-il-1-etoxi1fenip-3- r4-r(N-metiJ-N-fenilamino)carponill-1.3-oxazol-2-iH-butanóico a) (±)-3-r4-r(N-metil-N-fenilam¡no)carbonil1-1 ,3-oxazol-2-il1-4-(4-hidroxifeniDbutanoato de metilo A una solución de (±)-3-[4-[(N-metil-N-feniIamino)carboniI]-1 ,3-oxazol-2-il]-4-[4-[(ter-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato de metilo (150 mg, 0.37 mmoles), (i-Pr)2Net (0.1 ml, 0.56 mmoles), piridina (0.09 ml, 1.11 mmoles) y N-metilanilina (0.6 ml, 0.56 mmoles) en DMF seco (2 ml) se le agregó BPFFH (382 mg, 1.11 mmoles) a TA. Después de 18 horas la mezcla se concentró. El residuo se absorbió en HCl 10% (20 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x20 ml) para dar el compuesto del título (146 mg) como una espuma anaranjada contaminada con bis(pentametilen)urea: MS (ES) m/e 417 (M+H)+. b) (±)-4-r4-r2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi1fen¡n-3-r4-r(N-metil-N-fenilam¡no)carbon¡p-1 ,3-oxazol-2-il?)butanoato de metilo Azodicarboxilato e isopropilo (0.15 ml, 0.74 mmoles) se agregó a una solución de (±)-3-[4-[(N-metil-N-fenilamino)carbon¡l]-1 ,3-oxazol-2-il]-4-(4-hidroxifenil)butanoato de metilo (146 mg, 0.37 mmoles), 6-(metilamino)-2-piridiletanol 8113 mg, 0.74 mmoles), y trifenilfosfina 8194 mg, 0.37 mmoles) en CH2CI2 (2 ml) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentó el baño. Después de 18 horas, la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (50% THF/hexanos). Las fracciones que contiene el producto se concentraron para dar el compuesto del titulo (322 mg) contaminado con óxido de trifenilfosfina: MS (ES) m/e 529 (M+H)+. c) Acido (±)-4-r4-í2-r6-(metilamino)piridin-2-ill-1 -etoxpfenip-3-r4-r(N-fenil-N-metilamino)carbonill-1.3-oxazol-2-¡n-butanó¡co A una solución de (±)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-[4-[(N-menil-N-feniIamino)carbonil]-1 ,3-oxazol-2-il)]-butanoato de metilo (322 mg) en THF/H2O 1 :1 (2 ml) a TA se le agregó LiOH 1.0 N (0.35 ml, 0.35 mmoles). Después de 18 horas la mezcla se acidificó a pH 6 usando HCl 10% después se concentró a sequedad. El residuo se purificó por CLAR de fase inversa (gradiente: CH3CN/H2O 10-80% conteniendo TFA 0.1 %). Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron para remover CH3CN. La solución acuosa resultante se liofilizó para dar el compuesto del título (33 mg, 29% en 3 pasos) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 515 (M+H)+. Anal. Cale, para C29H30N4O5-1.85 TFA: C, 54.13; H, 4.42; N, 7.72. Encontrado: C, 54.17; H, 4.50; N, 7.52.
EJEMPLO 3 Preparación de ácido (±)-4-r4-r2-r6-(metilamino)piridin-2-in-1-etoxi1fenin- 3-r4-(morfolin-4-iQcarbonil1-1,3-oxazol-2-ipbutanó¡co a) (±)-3-r4-(morfolin-4-il)carbonin-1 ,3-oxazol-2-in-4-(4-hidroxifeniPbutanoato de metilo A una solución de (±)-3-[4-carboxi-1 ,3-oxazol-2-il]-4-[4-[(ter-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato de metilo (150 mg, 0.37 mmoles), (i-Pr)2Net (0.1 ml, 0.56 mmoles), piridina (0.09 ml, 1.11 mmoles) y morfolina (0.05 ml, 0.56 moles) en DMF seco (2 ml) se le agregó BPFFH (382 mg, 1.11 mmoles) a TA. Después de 18 horas la mezcla se concentró. El residuo se absorbió en HCl al 10% (20 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , filtraron y se concentraron. El residuo anterior se disolvió en HCl 4N en dioxano (10 ml) a TA. Después de 18 horas la mezcla se concentró. El residuo se cromatografió en gel de sílice (100% de EtOAc) para dar el compuesto del título (122 mg, 88%) como un aceite transparente: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.05 (s, 1H), 7.88 (d, J=6.6 Hz, 2H), 6.70 (d, J=6.6 Hz, 2H), 5.9 (s, 1 H), 3.73 (bs, 8H), 3.62 (s, 3H), 2.85 (m, 5H). b) (±)-4-r4-f2-(6-met¡laminopiridin-2-il)-1-etoxpfenin-3-r4-(morfolin-4-il)carbonill-1 ,3-oxazol-2-il)lbutanoato de metilo Azodicarboxilato de diisopropilo (0.13 ml, 0.66 mmoles) se agregó a una solución de (±)-3-[4-(morfolin-4-il)carbonil]-1.3-oxazol-2-il)-4-(4-hidroxifenil)butanaoto de metilo (122 mg, 0.37 mmoles), 6-(metilamino)-2-piridiletanol (100 mg, 0.66 mmoles) y trifenilfosfina (173 mg, 0.66 mmoles) en CH2CI2 (2 ml) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentaba el baño. Después de 18 horas la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (122 mg, 0.37 mmoles), 6-)(metilamino)-2-piridiletanol (100 mg, 0.66 mmoles) y trifenilfosfina (173 mg, 0.66 mmoles) en CH2CI2 (2 ml) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentaba el baño. Después de 18 horas la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (100% EtOAc). Las fracciones que contienen el producto se concentraron para dar el compuesto del título (94 mg) contaminado con óxido de trifenilfosfina. MS (ES) m/e 509 (M+H)+. c) Acido (±)-4-r4-r2-f6-(metilam¡no)piridin-2-ill-1 -etoxpfenill-3-r4- (morfolin-4-il)carbonip-1.3-oxazol-2-¡p-butanoíco A una solución de (±)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]-3-[4-(morfolin-4-il)carboniI]-1 ,3-oxazol-2-il)]butanoato de metilo (94 ml, 0.18 mmoles) en THF/H2O 1 :1 (2 ml) a TA se le agregó LiOH 1.0 N (0.25 ml, 0.25 mmoles). Después de 18 horas la mezcla se acidificó a pH 6 usando 10% HCl luego se concentró a sequedad. El residuo se purificó por CLAR de fase inversa (gradiente: 15-35% CH3CN/H2O conteniendo TFA 0.1 %). Las fracciones que contienen el producto se combinaron y concentraron para remover CH3CN. La solución acuosa resultante se liofilizó para dar el compuesto del título (23 mg, 26% en 2 pasos) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 495) (M+H)+. Anal. Cale. Para C26H3oN4oO6-1.75 TFA: C, 49,76; H, 4.78; N, 7.87. Encontrado: C, 49.93; H, 4.97; N, 7.84.
EJEMPLO 4 Preparación de ácido ±)-4-r4-r2-r6-(metilamino)iridin-2-»p-1-etoxi1fenip-3- r4-rrN-metil-N-(2.2,2-trifluoroet¡namino1carbonim-1.3-oxazol-2- ¡llbutanóico a) (±)-3-r4-rrN-metil-N-(2.2.2-trifluoroetil)am¡nolcarbonin-1.3-oxazol-2-¡n-4-(4-hidroxifenil)butanoato de metilo A una solución de (±)-3-[4-carboxi-1 ,3-oxazol-2-il]-4-[4-[(ter-butiloxicarbonil)oxi]fenil]butanoato de metilo (150 mg, 0.37 mmoles), (i-Pr)2Net (0.1 ml, 0.56 mmoles) en DMF seco (2 ml) se agregó BPFFH (382 mg, 1.11 mmoles) a TA. Después de 18 horas la mezcla se concentró. El residuo se absorbió en 10% HCl (20 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3x20 ml). las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO , se filtraron, y se concentraron. El residuo anterior se disolvió en NCI 4N en dioxano (10 ml) a TA. Después de 18 horas la mezcla se concentró. El residuo se cromatografió en gel de sílice (60% EtOAc/hexanos) para dar el compuesto del titulo (298 mg) como un aceite transparente contaminado con bis(pentametilen)urea. El aceite se usó en el siguiente paso sin purificación adicional. b) (±)-4-r4-r2-(6-metilaminop¡rid¡n-2-¡l)-1-etoxnfen¡n-3-r4-frN-metil- N-(2,2.2-trifluoroetil)aminolcarbon¡ll-1 ,3-oxazol-2-il)butanoato de metilo Se agregó azodicaboxilato de diisopropilo (0.15 ml, 0.74 mmoles) a una solución de (±)-3-[4-[[N-metil-N-(2,2,2-trifluoroetil)amoino]carbonil]-1 ,3-oxazol-2-¡l]-4-(4-hidroxifenil)butanoato de metilo (115 mg, 0.22 mmoles) en THF/H2= 1 :1 (2 ml) a TA se le agregó LiOH 1.0 N (0.32 ml, 0.32 mmoles). Después de 18 horas, la mezcla se acidificó a pH 6 usando HCl al 10% luego se concentró a sequedad. El residuo se purificó por CLAR de fase inversa (gradiente: 10-80% CH3CN/H2O conteniendo 0.1 % TFA). Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se concentraron para remover CH3CN. La solución acuosa resultante se liofilizó para dar el compuesto del título (42 mg, 37% en 3 pasos) como un sólido blanco: MS (ES) m/e 522 (M+H)+. Anal. Cale, para C25H27F3N4O5-1.4 TFA: C, 49.09; H, 4.21 ; N, 8.24. Encontrado: 49.18; H, 4.18; N, 8.22.
EJEMPLO 5 Preparación de ácido (±)- -r4-r2-r6-(metilamino)piridin-2-¡p-1-etoxi1fenin- 3-r4-(trifluorometii)tiazol-2-¡i1butanóico a) (±)-4-r4-f2-r6-(metilamino)pirid¡n-2-il)-1-etoxilfenil1-3-f4- (trifluorometil)tiazol-2-inbutanoato de metilo Azodicarboxilato de diisopropilo (0.14 ml, 0.71 moles) se agregó a una solución de (±)-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-il]-4-hidroxifenil)butanoato de metilo (123 mg. 0.37 mmoles), 6-(metilamino)-2-piridiletanol (108 mg, 0.71 mmoles) y trifenilfosfina (186 mg, 0.71 mmoles) en CH2CI2 (2 ml) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA cuando se calentó al baño. Después de 18 horas la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (40% EtOAc en tolueno/hexanos 1 :1 ). Las reacciones que contiene el producto se concentraron para dar el compuesto del título (114 mg, contaminado con DIAD reducido): MS (ES) m/e 480 (M+H)+.
EJEMPLO 6 Preparación de ácido (±)-4-f4-r2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi1fenip-3- (5-metiltiazol-2-il)butanoico a) (±)-4-r4-r2-(6-metilaminopiridin-2-in-1-etoxilfenin-3-(5-metiltiazol-2-il)butanoato de metilo Se agregó azodicarboxiiato de diisopropilo (0.25 ml, 1.28 moles) a una suspensión de (±)-4-(4-hidroxifenil)-3-(5-metiltiazol-2-il)butanoato de metilo (249 mg, 0.85 mmoles), 6-(metilamino)-2-piridiletanol (194 mg, 1.28 mmoies), y trifenilfosfina (336 mg, 1.28 mmoles) en TBME (5 ml) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA cuando se calentaba el baño. Después de 72 horas la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (EtOAc/CHCI3 30%). Las fracciones que contienen el producto se concentraron para dar el compuesto del título (385 mg, contaminado con ácido de trifenilfosfina): MS (ES) m/e 426 (M+H)+. b) Acido de (±)-4-r4-r2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxpfen¡n-3-(5-metiltiazol-2-il)butanoico A una solución de (±)-4-[4-[2-(6-metilaminopiridin-2-il)-1-etoxi]fenil]3-(5-metiltiazol-2-il)butanoato de metilo (0.85 mmoles) en THF/H2O 1 :1 (5 ml) se le agregó NaOH 1.0 N (1.28 ml, 1.28 mmoles). Después de 18 horas, la mezcla se acidificó a pH 6 usando HCl 10% se concentraron a sequedad. El residuo se cromatografió en gel de sílice (EtOH) para dar el compuesto del título como sólido amarillo (217 mg, 62% en 2 pasos). MS (ES) m/e 412 (M+H)+. Anal. Cale, para C22H25N3O3S 1.2 H2O: C, 61.01 ; H, 6.38; N, 9.870. Encontrado: C, 61.25; H, 6.06; N, 9.32.
EJEMPLO 7 Preparación de ácido (S)-3-(3-fluorofenil)-4-r4-r2-(5.6.7.8-tetrahidro-1.8- naftiridin-2-¡l)etoxi1fen¡pbutanóico (a) (S)-3-(3-fluorofenil)-4-r4-r2-(5.6.7.8-ttrah¡dro-1.8-naftiridin-2-¡Detoxilfenillbutanoato de etilo Azodicarboxilato de diisopropilo (0.20 ml, 1.0 mmoles) se agregó por goteo a una solución de (S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-hidroxifenil)butanoato de etilo (250 mg, 0.83 moles), 2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)-1 -etanol (178 mg, 1.0 mmoles), y trifenilfosfina (262 mg, 1.0 mmoles) en THF anhídrido (5 ml) a TA. Después de 18 horas la reacción se concentró y el residuo se cromatografió sobre gel de sílice (Et2O/hexanos 5:1 ) para dar el compuesto del título impuro (236 mg, 61 %): MS (ES) m/e 463 (M+H)+. Esto se usó sin purificación adicional. (b) Acido (S)-3-(3-fluorofen¡n-4-r4-f2-(5.6.7.8-tetrahidro-1.8-naftiridin-2-¡l)etoxpfenipbutanóico LiOH 1.0 N (0.76 mmoles) se agregó a una solución de (S)-3-(3-fluorofenil)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanoato de etilo (236 mg, 0.51 mmoles) en THF/H2O (3 ml) y la mezcla se calentó a 50°C. Después de 18 horas la mezcla se enfrió a TA y se acidificó a pH 6 con HCl acuoso al 10%. EtOAc (5 ml) se agregó y la mezcla se agitó vigorosamente. El sólido se recuperó por filtración por succión, se lavó con H2O (2x) y Et2O (2x) y Et2O (2x), y se secó a vacío a 50°C para dar el compuesto del título: MS (ES) m/e 435 (M+H)+. Anal. Cal. para C26H7FN2O3-2.25 HCl: C, 60.46: H, 5.71 ; N, 5.42. Encontrado: C, 60.44; H, 5.34; N, 5.45.
EJEMPLO 8 Preparación de ácido (±)-4-r4-r2-f6-(metilamino)piridin-2-inetoxpfenip-3- (piridin-3-il)butanoico (a) (±)-4-r4-r2-r6-(metilamino)p¡ridin-2-illetoxi1fenin-3-(piridin-3-¡Pbutanoato de etilo De acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 7(a), excepto sustituyendo 4-(4-hidroxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo (327 mg impuro, 1.15 mmoles) para el (S)-3-(3-fluorofenil)-4-(4-hidroxifenil)butanoato de etilo y sustituyendo 6-(metilamino)-2-piridiletanol (210 mg, 1.38 mmoles) para el 2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)-1 -etanol, el compuesto del título se preparó como un sólido anaranjado claro, impuro, siguiendo la cromatografía instantánea en gel de sílice (100% EtOAc): MS (ES) m/e 420 (M+H)+. Este material se utilizó sin purificación adicional. (b) Acido (±)-4-r4-r2-r6-(metilamino)piridin-2-¡netoxpfenil]-3-(piridin-3-il)butanoico LiOH 1.0 N (3.45 ml, 3.45 mmoles) se agregó a una solución de (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]etoxi]fenil]-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo (1.15 mmoles) en THF/H2O (5 ml), y la mezcla se calentó a 50°C. Después de 18 horas la reacción se enrió a TA y se acidificó a pH 6 con HCl acuoso al 10%. La mezcla se extrajo con CHCI3 (3x) y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) y se concentró. El residuo se cromatografió en una columna de Unión-Elución C-18 (CH3CN/H2O al 20%). Las fracciones que contienen el producto se combinaron y se extrajeron con CHCI3 (3x), y las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) y se concentraron. El sólido resultante se absorbió en NaOH 2M y se lavaron con EtOAc (2x). Los extractos de EtOAc se descartaron. La capa acuosa se acidificó a pH 6 y se extrajo con CHCI3 (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) y se concentraron para dar el compuesto del título (51 mg, 11 %) como un sólido blanco: RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 8.32 (m, 2H), 7.54 (dd, J=8.7, 7.2 Hz, 1H), 7.38-7.46 (m, 1 H), 7.12 (dd, J=7.8, 4.9 Hz, 1 H), 6.86 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.68 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.52 (d, J=7.2 Hz, 1 H), 6.37 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 4.15-4.30 (m, 2H), 3.39-3.52 (m, 1 H), 2.98-3.20 (m, 3H), 2.85 (s, 3H), 2.80 (dd, J=13.7, 8.9 Hz, 1 H), 2.68 (dd, J=15.1 , 8.3 Hz, 1 H), 2.59 (dd, J=15.1 , 6.7 Hz, 1 H); MS (ES) m/e 392 (M+H)+. Anal. Cale, para C23H25N3O3?1.3 HCl: C, 62.95; H, 6.04; N, 9.57. Encontrado: C, 62.84; H, 5.87; N, 9.20.
EJEMPLO 9 Preparación de ácido (S)-4-r4-f2-r6-(metilamino)piridin-2-inetoxi1fenin-3- (piridin-3-il)butanóico (a) (S)-4-f4-r2-r6-(metilam¡no)p¡r¡din-2-¡netoxi1fenin-3-(piidin-3-¡Dbutanoato de etilo Azodicarboxilato de diisopropilo (7.8 ml, 39.8 mmoles) se agregó por goteo a una solución de (S)-4-(4-hidroxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo (9.455 g, 33.1 mmoles), 6-(metilamino)-2-piridiletanol (6.06 g, 39.8 mmoles) y trifenilfosfina (10.44 g, 39.8 mmoles) en THF anhídrido (150 ml) a 0°C. La mezcla se dejó calentar a TA mientras se calentaba el baño. Después de 18 horas se concentró la reacción y el residuo se cromatografió en gel de sílice (MeOH 3% en EtOAc/CHCI3 1 :1 ) para dar el compuesto del título (9.2 g, 66%) como un aceite amarillo viscoso: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 8.43 (dd, J=4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.39 (d, J=1.9 Hz, 1H), 7.31-7.45 (m, 2H), 7.13-7.21 (m, 1H), 6.91 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.77 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.53 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.24 (d, J=8.2 Hz, 1 H), 4.43-4.58 (m, 1 H), 4.26 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.92-4.05 (m, 2H), 3.32-3.45 (m, 1 H), 3.04 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.89 (d, J=5.3 Hz, 3H), 2.88 (dd, J=13.7, 7.2 Hz, 1 H), 2.82 (dd, J=13.7, 7.8 Hz, 1 H), 2.70 (dd, J=15.6, 6.3 Hz, 1 H), 2.59 (dd, J=15.6, 9.0 Hz, 1 H),m 1.11 (t, J=7.1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 420 (M+H)+. (b) Acido (S)-4-r4-r2-r6-(metilamino)piridin-2-inetoxi1fen¡n-3-(piridin-3-iQbutanoico NaOH 2.0 M (15 ml, 30 mmoles) se agregó a una solución de (S)-4-[4-[2-[6-(met¡lamino)pirid¡n-2-il]etoxi]fen¡l]-3-(pir¡din-3-il)butanoato de etilo (9.2 g, 22 mmoles) en dioxano /H2O (100 ml), y la mezcla se calentó a 50°C. Después de 18 horas, la reacción se enfrió a TA, se acidificó con HCl 10% (25 ml) y se concentró a 1/3 volumen para precipitar una goma. El sobrenadante se decantó y la goma se dividió entre H2O y CHCI3. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con CHCI3 (3x). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO ) y se concentraron y el residuo se absorbió en H2O y NaOH 2M (30 ml). La solución se lavó con Et2O (3x) y se descartaron los extractos de Et2O. La solución acuosa se acidificó con HCl 10% (50 ml), se concentró a 1/3 volumen, y se extrajo con CHCI3 (3x). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (MgSO ) y se concentraron para dar una espuma. Esta espuma se absorbió en CH2CI2, y la solución se diluyó con hexanos y se concentró. Este proceso se repitió tres veces. El sólido resultante se secó a vació a 65°C para dar el compuesto del título (7.96 g, 92%): RMN 1H (400 MHz, MeOH-d4) d 8.28 (m estrecho, 1 H), 8.21 (d, J=1.7 Hz, 1 H), 7.68 (m estrecho, 1 H), 7.48 (dd, J=8.5, 7.3 Hz, 1 H), 7.30 (dd, J=7.9, 4.9 Hz, 1 H), 6.91 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.56 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.44 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 4.20 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.31-3.42 (m, 1 H), 3.02 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.97 (dd, J=13.6, 6.5 Hz, 1 H), 2.87 (s, 3H), 2.77 (dd, J=13.6, 8.9 Hz, 1 H), 2.71 (dd, J=15.6 6.4 Hz, 1 H), 2.62 (dd, J=15.6, 8.9 Hz, 1 H); MS (ES) m/e 392 (M+H)+. Anal. Cale, para C23H25N3O3 0.1 H2O: C, 70.25; H, 6.46; N, 10.68. Encontrado: C, 70.32; H, 6.50; N, 10.32.
EJEMPLO 10 Preparación de ácido (S)-3-(pirid¡n-3-il)-4-r4-r2-(5,ß.7,8-tetrahidro-1.8- naft¡ridin-2-il)etoxi1fenipbutanoico (a) (S)-3-(p¡r¡din-3-il)-4-r4-r2-(5.6,7,8-tetrahidro-1.8-naftiridin-2-iDetoxpfeninbutanoato de eitlo Azodicarboxilato de diisopropil (0.41 ml, 2.1 mmoles) se agregó por goteo a una solución de (S)-4-(4-hidroxifenil)-3-(piridin-3-il)butanoato de etilo (500 mg, 1.75 mmoles), 2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)-1 -etanol (374 mg, 2.1 mmoles) y trifenilfosfina (551 mg, 2.1 mmoles) en THF anhídrido (8 ml) a TA. Después de 18 horas la reacción se concentró y el residuo se cromatografió instantáneamente en gel de sílice (90% de EtOAc/hexanos luego EtOH/EtOAc al 5%) para dar el compuesto del título 572 mg, 73%) como un aceite: RMN 1H (400 MHz, CDCI3) d 8.43 (dd, J=4.8, 1.6 Hz, 1 H), 8.39 (d, J=1.9 Hz, 1 H), 7.41 (m estrecho, 1 H), 7.17 (dd, J=7.8, 4.8 Hz, 1 H), 7.07 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 6.90 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.76 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.44 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 4.75 j(br s, 1 H), 4.21 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.93-4.08 (m, 2H), 3.31-3.45 (m, 3H), 2.99 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.88 (dd, J=13.7, 7.2 Hz, 1 H), 2.82 (dd, J=13.7, 7.8 Hz, 1 H), 2.65-2.75 (m, 3H), 2.59 (dd, J=15.6, 9.0 Hz, 1 H), 1.85-1.95 (m, 2H), 1.12 (t, J=7.1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 446 (M+H)+. (b) Acido (S)-3-(piridin-3-il)-4-r4-í2-(5.6.7.8-tetrahidro-1.8-naftirid¡n-2-il)etoxi1fenipbutanoico LiOH 1.0 M (2.6 ml. 2.6 mmoles) se agregó a una solución de (S)-3-(piridin-3-il)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil] butanoato de etilo (572 mg, 1.28 mmoles) en THF/H2O (8 ml), y la mezcla se calentó a 50°C. Después de 18 horas, la reacción se enrió a TA y se acidificó a pH 6.0 con HCl al 10%. El sólido precipitado se recuperó por filtración por succión, se lavó con H2O, y se secó a varío para dar el compuesto del título (414 mg, 77%): RMN 1H (400 MHz, MeOH-d4) d 8.28 (dd, J=4.9, 1.4 Hz, 1 H). 8.21 (d, J=1.8 Hz, 1 H), 7.68 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 7.25-7.27 (m, 2H), 6.91 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.71 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.53 (d, J=7.3 Hz, 1 H), 4.08-4.22 (m, 2H), 3.30-3.45 (m, 3H), 2.90-3.05 (m, 3H), 2.70-2.85 (m, 3H), 2.68 (dd, m J=15.2, 6.7 Hz, 1 H), 2.58 (dd, J=15.2, 8.5 Hz, 1 H), 1.80-1.97 (m, 2H); MS (ES) m/e 418 (M+H)+. Anal. Cale, para C23H23N3O3?0.25 H2O: C, 71.15; H, 6.57; N, 9.96. Encontrado: C, 71.11 ; H, 6.66; N, 9.82.
EJEMPLO 11 Composición de Dosis Unitaria Parenteral Una preparación que contiene 20 mg del compuesto del Ejemplo 1 , como un polvo seco estéril se preparó de la siguiente manera: 20 mg del compuesto se disolvió en 15 ml de agua destilada. La solución se filtró bajo condiciones estériles en una ampolleta de múltiples dosis de 25 ml (D5W) para inyección intravenosa o intramuscular. La dosis se determinó así por el volumen de inyección. Se puede hacer dilución subsecuente por adición de un volumen medido de esta dosis unitaria a otro volumen de D5W para inyección, o una dosis medida puede agregarse a otro mecanismo para dispensar el fármaco, como en una botella o bolsa para infusión por goteo IV u otro sistema de inyección-infusión.
EJEMPLO 12 Composición de Dosis Unitaria Oral Una cápsula para administración oral se preparó mezclando y moliendo 50 mg del compuesto del ejemplo 1 con 75 mg de lactosa y 5 mg de estearato de magnesio. El polvo resultante se tamizó y rellenó en una cápsula de gelatina dura.
EJEMPLO 13 Composición de Dosis Unitaria Oral Una tableta para la administración oral se preparó mezclando y granulando 20 mg de sacarosa, 150 mg de dihidrato de sulfato de calcio a 50 mg del compuesto del Ejemplo 1 con una solución de gelatina al 10%. Los granulos húmedos se tamizaron, se secaron, se mezclaron con 10 mg de almidón, 5 mg de talco y 3 mg de ácido esteárico; y se comprimieron en una tableta. La descripción anterior describe completamente la forma para hacer y usar la presente invención. Sin embargo, la presente invención no está limitada a las modalidades particulares descritas antes, pero incluye todas las modificaciones de la misma dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones. Las diferentes referencia para diarios, patentes y otras publicaciones que se citan en la presente comprenden el estado de la técnica y se incorporan aquí por referencia como se exhibe completamente.

Claims (18)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de conformidad con la fórmula (I): fórmula (I): en donde: R1 es Het- o Ar; R2 es o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri es:
F, en la cual R' es alquilo de C1-4 y R" es fenilo, bencilo o -CH2CF3; o R' y R" se unen para formar un anillo de morfolinilo.
3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R es:
4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R es:
5. Un compuesto caracterizado porque es: acido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-¡l]-1-etoxi]fenil]-3-[4-(trifluorometiI)fenil]butanóico; ácido (±)-4.[4.[2-[6-(metilamino)pirid¡n-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-(N-metil-N-fenilamino)carbonil]-1 ,3-oxazol-2-il]-butanóico; ácido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1 -etoxi]fenil]-3-[4-(morfolin-4-il)carbonil]-1 ,3-oxazol-2-iljbutanóico; ácido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1 -etoxi]fenil]-3-[4-[[N-metil-N-(2,2,2-trifluorometil)amino]carbonil-1 ,3-oxazol-2-il]-butanóico; ácido (±)-4-[4-[2-[6-(met¡iam¡no)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-[4-(trifluorometil)tiazol-2-iljbutanóico; ácido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1 -etoxi]fenil]-3-(3-metiltiazol-2-il)butanóico; ácido (S)-3-(3-fluorofenil)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)etoxifenil]butanóico; ácido (±)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-il]-1-etoxi]fenil]-3-(pirid¡n-3-il)butanóico; ácido (S)-4-[4-[2-[6-(metilamino)piridin-2-iI]-1-etoxi]fenil]-3-(piridin-3-il)butanóico; y ácido (S)-3-(piridin-3-iI)-4-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-1 ,8-naftiridin-2-il)etoxi]fenil]butanóico; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un portador farmacéuticamente aceptable.
7. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , un agente antineoplástico y un portador farmacéuticamente aceptable.
8. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada además porque el agente antineoplástico es topotecan o cisplatina.
9. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , un inhibidor de reabsorción ósea y un portador farmacéuticamente aceptable.
10. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque se usa como un medicamento.
11. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de enfermedades en las cuales se indica el antagonismo del receptor avß3.
12. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de enfermedades en las cuales se indica el antagonismo del receptor avßs.
13. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de osteoporosis.
14. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , en la manufactura de un medicamento para la inhibición de angiogénesis, crecimiento tumoral o metástasis tumoral.
15. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de aterosclerosis, restenosis o artritis reumatoide.
16. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque un agente antineoplástico en la manufactura de un medicamento para la inhibición de crecimiento tumoral en combinación física o para la administración por pasos.
17. El uso de conformidad con la reivindicación 16, en donde el agente antineoplástico es topotecan o cisplatina.
18. El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación (I), y un inhibidor de reabsorción ósea en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de osteoporosis en combinación física o para la administración por pasos.
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