JP2019528300A - インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼの阻害剤およびその使用方法 - Google Patents

インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼの阻害剤およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

インドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)の酵素活性を調節または阻害する化合物、該化合物を含む医薬組成物および本発明の化合物を使用して癌などの増殖性障害、ウイルス感染および／または炎症性障害を処置する方法が開示される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年８月２６日出願の米国出願６２／３８０,０８８に基づく優先権を主張し、その全体を引用により本明細書に包含させる。
発明の分野
本発明は、一般にインドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)の酵素活性を調節または阻害する化合物、該化合物を含む医薬組成物ならびに本発明の化合物を使用する、癌などの増殖性障害、ウイルス感染および／または自己免疫疾患を処置する方法に関する。
発明の背景
インドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ；ＩＤＯ１としても知られる)は、免疫調節に役割を有するＩＦＮ−γ標的遺伝子である。ＩＤＯは酸化還元酵素であり、トリプトファンからＮ−ホルミル−キヌレニンへの変換における最初のかつ律速の段階を触媒する２つの酵素の一つである。それは免疫細胞、内皮細胞および線維芽細胞を含むいくつかの細胞集団に見られる４１kD単量体として存在する。ＩＤＯは種間で比較的よく保存されており、マウスとヒトはアミノ酸レベルで６３％配列同一性を共有する。結晶構造および部位特異的変異誘発から得られるデータは、基質結合および基質と鉄結合ジオキシゲナーゼの間の相関の両者が活性に必要であることを示す。ＩＤＯのホモログ(ＩＤＯ２)はＩＤＯと４４％アミノ酸配列相同性を共有することが同定されているが、その機能はＩＤＯと大きく異なる(例えば、Serafini, P. et al., Semin. Cancer Biol., 16(1): 53-65 (Feb. 2006)およびBall, H.J. et al., Gene, 396(1): 203-213 (Jul. 1, 2007)参照)。
ＩＤＯは免疫制御に大きな役割を有し、その免疫抑制機能はいくつかの様式で顕在化する。ＩＤＯが免疫をＴ細胞レベルで制御し、ＩＤＯとサイトカイン産生の間にネクサスが存在することは重要である。さらに、腫瘍は、しばしばＩＤＯの上方制御により免疫機能を操作する。それ故に、ＩＤＯの調節は、多数の疾患、障害および状態に治療的影響を有し得る。
病態生理学的関連がＩＤＯと癌の間に存在する。免疫恒常性の崩壊は本質的に腫瘍増殖および進行に関与し、腫瘍微小環境におけるＩＤＯ産生は、腫瘍増殖および転移を助けるように見える。さらに、ＩＤＯ活性レベルの増加は、種々の腫瘍と関係する(Brandacher, G. et al., Clin. Cancer Res., 12(4): 1144-1151 (Feb. 15, 2006))。
癌処置は、通常外科的切除とそれに続く化学療法および放射線療法を伴う。標準処置レジメンは、腫瘍細胞が一次腫瘍増殖を復活させることによる、そしてしばしばより重要なことに遠位転移を播種することによる、癌処置を本質的に回避する能力により、長期成功の程度は高度に多様となる。癌および癌関連疾患、障害および状態の処置の近年の進歩は、免疫療法をより古典的な化学療法および放射線療法に組み入れる組み合わせ治療の使用を含む。大部分のシナリオにおいて、免疫療法に関連する毒性は、腫瘍細胞の同定および排除に患者自身の免疫系を利用するため、古典的化学療法より低い。
癌に加えて、ＩＤＯは、数ある疾病状態の中で、免疫抑制、慢性感染および自己免疫疾患または障害(例えば、関節リウマチ)と関連付けられている。それ故に、ＩＤＯ活性阻害によるトリプトファン分解の抑制は、膨大な治療的価値を有する。さらに、ＩＤＯの阻害剤は、Ｔ細胞が妊娠、悪性腫瘍またはウイルス(例えば、ＨＩＶ)により抑制されているとき、Ｔ細胞活性化を増強するために使用できる。役割は十分に定義されていないが、ＩＤＯ阻害剤は、神経学もしくは精神神経疾患または障害(例えば、うつ病)の患者の処置にも用途があり得る。
ＩＤＯの小分子阻害剤は、ＩＤＯ関連疾患の処置または予防のために開発されている。例えば、ＩＤＯ阻害剤１−メチル−ＤＬ−トリプトファン；ｐ−(３−ベンゾフラニル)−ＤＬ−アラニン；ｐ−[３−ベンゾ(ｂ)チエニル]−ＤＬ−アラニン；および６−ニトロ−Ｌ−トリプトファンは、トリプトファンおよびトリプトファン代謝物の局所細胞外濃度を変えることにより、Ｔ細胞介在免疫の調節に使用されている(ＷＯ９９／２９３１０)。ＩＤＯ阻害性活性を有する化合物は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００４／０９４４０９にさらに記載されている。
多種多様な疾患、障害および状態におけるインドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼにより演じられる役割ならびに現在のＩＤＯ阻害剤の限界(例えば、有効性)を考慮するならば、新規ＩＤＯモジュレーターおよび組成物ならびにそれに関連する方法がなお必要とされている。
発明の要約
本発明は、式Ｉまたは式II
〔式中、ＸはＣＨまたはＮであり；ＴはＣＨまたはＮであり；Ｖは結合またはＯであり；ｎは０、１、２、３または４であり；ＹはＣＨまたはＮであり；ＷはＣＨ、Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)またはＮであり；Ｌは場合によりＣ１−Ｃ６アルキルおよび−Ｃ１−Ｃ６アルクＯＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択される１、２または３置換基で置換されていてよいＣ１−Ｃ６アルキレンであり；Ｚは結合、−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)であり；Ａはトリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、チアゾリルまたはイミダゾリルであり；Ｚ’は結合、−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)であり；Ｒ１はＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである；Ｒ１ＡはＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであり；そしてＲ２は場合によりハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルおよび場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいヘテロアリールから独立して選択される１、２または３置換基で置換されていてよいアリールであるか；またはＲ２は場合によりハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたは場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいヘテロアリールから独立して選択される１、２または３換基で置換されていてよいＣ３−Ｃ１０シクロアルキルであるか；またはＲ２はＣ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキルであるか；またはＲ２は場合によりハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択される１、２または３置換基で置換されていてよいヘテロアリールである。〕
の化合物に関する。
また本発明の範囲内であるのは、Ｉおよび式IIの化合物の薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体および溶媒和物である。
本発明はまた１以上の式Ｉおよび／または式IIの化合物を含む医薬組成物にも関する。本発明はまた１以上の式Ｉおよび／または式IIの化合物を使用して癌を処置する方法にも関する。
発明の詳細な記載
本発明の化合物
本発明は、式Ｉおよび式II
の化合物に関する。
本発明によると、ＸはＣＨまたはＮである。ある態様において、ＸはＣＨである。他の態様において、ＸはＮである。
本発明によると、ＴはＣＨまたはＮである。ある態様において、ＴはＣＨである。他の態様において、ＴはＮである。
ある実施態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＣＨである。他の実施態様において、ＸはＮであり、ＴはＣＨである。他の実施態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＮである。他の実施態様において、ＸはＮであり、ＴはＮである。
本発明によると、Ｖは結合または−Ｏ−である。好ましい態様において、Ｖは結合である。他の態様において、Ｖは−Ｏ−である。
本発明によると、ＹはＣＨまたはＮである。ある態様において、ＹはＣＨである。他の態様において、ＹはＮである。別の実施態様において、Ｙは−Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)、例えば、−Ｃ(ＣＨ３)−またはＣ(ＣＨ２ＣＨ３)である。
本発明によると、ＷはＣＨ、−Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)−またはＮである。ある態様において、ＷはＣＨである。他の態様において、Ｗは−Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)−、例えば、−Ｃ(ＣＨ３)−、−Ｃ(ＣＨ２ＣＨ３)−、−Ｃ(ｉ−プロピル)または−Ｃ(ブチル)−である。他の態様において、ＷはＮである。ある態様において、ＷはＣＨまたは−Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)−である。他の態様において、ＷはＣＨまたはＮである。さらに他の態様において、ＷはＮまたは−Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)−である。
ある態様において、ＹはＣＨであり、ＷはＣＨである。他の態様において、ＹはＣＨであり、ＷはＮである。他の態様において、ＹはＮであり、ＷはＣＨである。なおさらに他の態様において、ＹはＮであり、ＷはＮである。ある態様において、ＹはＣＨであり、ＷはＣ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である。他の態様において、ＹはＮであり、ＷはＣ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である。
本発明によると、ｎは０、１、２、３または４である。好ましい態様において、ｎは２である。他の態様において、ｎは０である。他の態様において、ｎは１である。さらに他の態様において、ｎは３である。なおさらに他の態様において、ｎは４である。ある態様において、ｎは０〜２または１〜２である。さらに他の態様において、ｎは１〜３である。
本発明によると、Ｌは非置換Ｃ１−Ｃ６アルキレン、例えば、非置換Ｃ１−Ｃ５アルキレン、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ１−Ｃ３アルキレン、Ｃ１−Ｃ２アルキレンまたはＣ１アルキレンである。他の態様において、ＬはＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル)および−Ｃ１−Ｃ６アルクＯＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択される１、２または３置換基、好ましくは１または２置換基で置換されている、Ｃ１−Ｃ６アルキレン、例えば、Ｃ１−Ｃ５アルキレン、Ｃ１−Ｃ４アルキレン、Ｃ１−Ｃ３アルキレン、Ｃ１−Ｃ２アルキレンまたはＣ１アルキレンである。好ましい態様において、Ｌは１個のＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチルまたはエチル)置換基で置換されているＣ１アルキレンである。他の好ましい態様において、Ｌは１個の−Ｃ１−Ｃ６アルクＯＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、−ＣＨ２−Ｏ−エチルまたは−ＣＨ２−Ｏ−メチル)置換基で置換されているＣ１アルキレンである。
本発明によると、Ｚは結合、−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である。ある態様において、Ｚは結合である。他の態様において、Ｚは−ＮＨ−である。さらに他の態様において、Ｚは−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)、例えば、−Ｎ(ＣＨ３)−、−Ｎ(ＣＨ２ＣＨ３)−、−Ｎ(ｉ−プロピル)−および−Ｎ(ｔ−ブチル)−である。ある態様において、Ｚは−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である。他の態様において、Ｚは結合または−ＮＨ−である。
本発明によると、Ａはトリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、チアゾリルまたはイミダゾリルである。ある実施態様において、Ａはトリアゾリル、例えば、１Ｈ−１,２,３−トリアゾリル、２Ｈ−１,２,３−トリアゾリル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾリルまたは４Ｈ−１,２,４−トリアゾリルである。トリアゾリルは、トリアゾリル環の炭素により式Ｉまたは式IIの化合物に結合し得る。好ましいトリアゾリルは
である。
他の実施態様において、Ａはオキサジアゾリル、例えば、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,２,５−オキサジアゾリルまたは１,３,４−オキサジアゾリルである。オキサジアゾリルは、トリアゾリル環の炭素により式Ｉまたは式IIの化合物に結合し得る。好ましいオキサジアゾリルは
である。
他の態様において、Ａはチアジアゾリル、例えば、１,２,４−チアジアゾリルまたは１,３,４−チアジアゾリルである。チアジアゾリルはチアジアゾリル環の炭素により式Ｉまたは式IIの化合物に結合し得る。好ましいチアジアゾリルは
である。
他の態様において、Ａはオキサゾリルである。オキサゾリルは、２個の利用可能な環炭素の何れかにより式Ｉまたは式IIの化合物に結合し得る。残りのオキサゾリル環炭素は、場合により、例えば、ハロ(例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ)またはＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチルまたはエチル)で置換されていてよい。好ましいオキサゾリルは
である。
他の態様において、Ａはチアゾリルである。チアゾリルは、２個の利用可能な環炭素の何れかにより式Ｉまたは式IIの化合物に結合し得る。残りのチアゾリル環炭素は、場合により、例えば、ハロ(例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ)またはＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチルまたはエチル)で置換されていてよい。好ましいチアゾリルは
である。他の好ましいチアゾリルは
である。
他の態様において、Ａはイミダゾリル。イミダゾリルは、２個の利用可能な環炭素の何れかにより式Ｉまたは式IIの化合物に結合し得る。残りのイミダゾリル環炭素は、場合により、例えば、ハロ(例えば、Ｆ、ＣｌまたはＢｒ)またはＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチルまたはエチル)で置換されていてよい。好ましいイミダゾリルは
である。
本発明によると、Ｚ’は結合、−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である。ある態様において、Ｚ’は結合である。他の態様において、Ｚ’は−ＮＨ−である。さらに他の態様において、Ｚ’は−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)、例えば、−Ｎ(ＣＨ３)−、−Ｎ(ＣＨ２ＣＨ３)−、−Ｎ(ｉ−プロピル)−および−Ｎ(ｔ−ブチル)−である。ある態様において、Ｚ’は−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である。他の態様において、Ｚ’は結合または−ＮＨ−である。
本発明によると、Ｒ１はＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである。ある態様において、Ｒ１はＨである。ある態様において、Ｒ１はハロ(Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ)、好ましくはＦである。他の態様において、Ｒ１はＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチルまたはｔ−ブチルである。ある態様において、Ｒ１は−ＯＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ブトキシである。さらに他の態様において、Ｒ１はＣ１−Ｃ６ハロアルキル、例えば、−ＣＦ３である。ある態様において、Ｒ１はハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである。さらに他の態様において、Ｒ１は−ＯＣ１−Ｃ６アルキルである。ある態様において、Ｒ１はハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである。他の態様において、Ｒ１はハロまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである。
式Ｉの化合物を含む本発明のこれらの態様において、Ｒ１がハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであるとき、Ｒ１は、好ましくは、キノリン環の４位炭素に存在する。式Ｉの化合物を含む本発明の他の態様において、Ｒ１がハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであるとき、Ｒ１は、キノリン環の２位炭素に存在し得る。好ましくは、式Ｉの化合物を含む本発明のこれらの態様において、Ｒ１はキノリン環の４位炭素のＦまたはＣＦ３である。
式IIの化合物を含む本発明のこれらの態様において、Ｒ１がハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであるとき、Ｒ１は好ましくはピリジル環の２位炭素に存在する。式IIの化合物を含む本発明の他の態様において、Ｒ１がハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであるとき、Ｒ１は、ピリジル環の３位炭素に存在し得る。好ましくは、式IIの化合物を含む本発明のこれらの態様において、Ｒ１はピリジル環の２位炭素のＦまたはＣＦ３である。
本発明によると、Ｒ１ＡはＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルである。好ましい態様において、Ｒ１ＡはＨである。ある態様において、Ｒ１Ａはハロ(Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ)である。他の好ましい態様において、Ｒ１ＡはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチルまたはｔ−ブチルである。ある態様において、Ｒ１Ａは−ＯＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ブトキシである。さらに他の態様において、Ｒ１ＡはＣ１−Ｃ６ハロアルキル、例えば、−ＣＦ３である。
本発明のある態様において、Ｒ２は非置換アリール、例えば、非置換フェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルである。好ましい態様において、Ｒ２は、１、２または３置換基、好ましくは１または２置換基で置換されているアリールである。Ｒ２置換基は、１以上のＲ４と称されることもあり、好ましくはハロ(Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ)、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル)、−ＯＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ブトキシ)および場合によりＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル)で置換されていてよいヘテロアリール(例えば、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリルまたはピリジル)から独立して選択される。
本発明のある態様において、Ｒ２は非置換Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル、例えば、非置換シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。他の態様において、Ｒ２は場合により１、２または３置換基、好ましくは１または２置換基で置換されていてよいＣ３−Ｃ１０シクロアルキルである。Ｒ２置換基は、１以上のＲ４と称されることもあり、好ましくはハロ(Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ)、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル)、−ＯＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ブトキシ)および場合によりＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル)でされていてよいヘテロアリール(例えば、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリルまたはピリジル)から独立して選択される。
本発明のある態様において、Ｒ２はＣ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、例えば、Ｃ１−Ｃ５アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ３アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ２アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ５アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ２アルキルまたはＣ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１アルキルである。
本発明のある態様において、Ｒ２は非置換ヘテロアリール、例えば、ピリジルである。他の態様において、Ｒ２は、１、２または３置換基、好ましくは１または２置換基で置換されている、ヘテロアリール、例えば、ピリジルである。Ｒ２置換基は、１以上のＲ４と称されることもあり、好ましくはハロ(Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ)、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル)、−ＯＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、ブトキシ)および場合によりＣ１−Ｃ６アルキル(例えば、メチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル)でされていてよいヘテロアリール(例えば、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリルまたはピリジル)から独立して選択される。
本発明はまた式ＩおよびIIの薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体および溶媒和物も包含する。
式Ｉの下位式は、ｎが２であり、Ｖが結合であり、ＹがＣＨであり、ＷがＣＨであり、ＬがＣ１アルキレンであり、Ｚが結合であり、そしてＺ’が結合である式、例えば、
〔式中、ＸはＣＨであり、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくはメチルである。〕
を含む。式Ｉ−Ａおよび式II−Ａの他の実施態様において、ＸはＮであり、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくはメチルである。他の態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＣＨである。ある態様において、ＸはＮであり、ＴはＣＨである。他の態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＮである。他の態様において、ＸはＮであり、ＴはＮである。これらの実施態様の一部において、Ｒ２が置換フェニルであるのが好ましい。本発明はまた式Ｉ−ＡおよびII−Ａの薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体および溶媒和物も包含する。
式Ｉの下位式は、ｎが２であり、Ｖが結合であり、ＹがＣＨであり、ＷがＣＨであり、ＬがＣ１アルキレン、ＺがＮＨであり、そしてＺ’が結合である式、例えば、
〔式中、ＸはＣＨであり、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくはメチルである。〕
を含む。式Ｉ−Ｂおよび式II−Ｂの他の実施態様において、ＸはＮであり、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくはメチルである。他の態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＣＨである。ある態様において、ＸはＮであり、ＴはＣＨである。他の態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＮである。他の態様において、ＸはＮであり、ＴはＮである。これらの実施態様の一部において、Ｒ２が置換フェニルであるのが好ましい。本発明はまた式Ｉ−ＢおよびII−Ｂの薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体および溶媒和物も包含する。
式Ｉの下位式は、ｎが２であり、Ｖが結合であり、ＹがＣＨであり、ＷがＣＨであり、ＬがＣ１アルキレンであり、Ｚが結合であり、そしてＺ’がＮＨである式、例えば、
〔式中、ＸはＣＨであり、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくはメチルである。〕
を含む。式Ｉ−Ｃおよび式II−Ｃの他の実施態様において、ＸはＮであり、Ｒ３はＣ１−Ｃ６アルキル、好ましくはメチルである。他の態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＣＨである。ある態様において、ＸはＮであり、ＴはＣＨである。他の態様において、ＸはＣＨであり、ＴはＮである。他の態様において、ＸはＮであり、ＴはＮである。これらの実施態様の一部において、Ｒ２が置換フェニルであるのが好ましい。本発明はまた式Ｉ−ＣおよびII−Ｃの薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体および溶媒和物も包含する。
他の実施態様において、本発明の化合物は、ヒトＩＤＯ ＩＣ５０値＞５０nMを有する。他の実施態様において、本発明の化合物は、ヒトＩＤＯ ＩＣ５０値≦５０nMを有する。他の実施態様において、本発明の化合物は、ヒトＩＤＯ ＩＣ５０値＜５nMを有する。
本発明の他の実施態様
他の実施態様において、本発明は、１以上の本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体、その互変異性体もしくはその溶媒和物を含む、組成物を提供する。
他の実施態様において、本発明は、薬学的に許容される担体ならびに本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体、その互変異性体もしくはその溶媒和物の少なくとも一つを含む、医薬組成物を提供する。
他の実施態様において、本発明は、薬学的に許容される担体ならびに治療有効量の本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体、その互変異性体もしくはその溶媒和物の少なくとも一つを含む、医薬組成物を提供する。
他の実施態様において、本発明は、本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体、その互変異性体もしくはその溶媒和物を製造する方法を提供する。
他の実施態様において、本発明は、本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体、その互変異性体もしくはその溶媒和物の製造のための中間体を提供する。
他の実施態様において、本発明は、種々のタイプの癌、ウイルス感染および／または自己免疫疾患を処置および／または予防する方法であって、このような処置および／または予防を必要とする患者に、治療有効量の１以上の本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体またはその互変異性体を単独で、または、場合により、他の本発明の化合物および／または化学療法剤またはシグナル伝達因子阻害剤などの少なくとも一つの他のタイプの治療剤と組み合わせて投与することを含む、方法を提供する。
他の実施態様において、本発明は、治療に使用するための本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体またはその互変異性体を提供する。
他の実施態様において、本発明は、治療において同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体またはその互変異性体およびさらなる治療剤の組み合わせ製剤を提供する。
他の実施態様において、本発明は、ＩＤＯの酵素活性と関連する複数の疾患または障害の処置および／または予防において同時に、別々にまたは逐次的に使用するための、本発明の化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体またはその互変異性体およびさらなる治療剤の組み合わせ製剤を提供する。
他の態様において、本発明は、ＩＤＯの酵素活性に対して感受性である医学的状態を有するまたはその素因がある患者を処置する方法を提供する。多数の医学的状態が処置され得る。該方法は、該患者に治療有効量のここに記載する化合物および／またはその薬学的に許容される塩、その立体異性体またはその互変異性体を投与することを含む。例えば、ここに記載する化合物を、ウイルス感染、増殖性疾患(例えば、癌)および自己免疫疾患の処置または予防に使用し得る。
治療応用
本発明の化合物および医薬組成物は、ＩＤＯの酵素活性に対して感受性であるあらゆる疾患または状態の処置または予防に有用である。これらは、ウイルスおよび他の感染(例えば、皮膚感染、ＧＩ感染、尿路感染、尿生殖器感染、全身感染)、増殖性疾患(例えば、癌)および自己免疫疾患(例えば、関節リウマチ、狼瘡)を含む。化合物および医薬組成物を、動物、好ましくは哺乳動物(例えば、家畜化動物、ネコ、イヌ、マウス、ラット)、より好ましくはヒトに投与し得る。患者に化合物または医薬組成物を送達するために任意の投与方法が使用され得る。ある実施態様において、化合物または医薬組成物は経口投与される。他の実施態様において、化合物または医薬組成物は非経腸投与される。
本発明の化合物は、酵素インドールアミン−２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)の活性を調節できる。用語“調節する”は、酵素または受容体の活性を増加または減少させる能力をいうことを意図する。従って、本発明の化合物を、該酵素とここに記載する化合物または組成物の任意の１以上を接触させることによる、ＩＤＯを調節する方法に使用できる。ある実施態様において、本発明の化合物はＩＤＯの阻害剤として作用し得る。さらなる実施態様において、本発明の化合物を、調節(例えば、阻害)量の本発明の化合物の投与により、ＩＤＯの調節が必要である細胞または個体における該酵素の活性の調節に使用できる。
本発明の化合物は、酵素インドールアミン−２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)の活性を阻害できる。例えば、本発明の化合物を、阻害量の本発明の化合物の投与により、ＩＤＯの調節を必要とする細胞または個体において該酵素の活性を阻害するために使用できる。
本発明は、さらに、組織、生存生物または細胞培養などのＩＤＯ発現細胞を含む系における、トリプトファンの分解を阻害する方法を提供する。ある実施態様において、本発明は、有効量のここに提供する化合物または組成物の投与により、哺乳動物における細胞外トリプトファンレベルを変える(例えば、増加させる)方法を提供する。トリプトファンレベルおよびトリプトファン分解を測定する方法は、当分野で慣用である。
本発明は、さらに、有効量のここに提供する化合物または組成物を患者に投与することによる、患者におけるＩＤＯ介在免疫抑制などの免疫抑制を阻止する方法を提供する。ＩＤＯ介在免疫抑制は、例えば、癌、腫瘍増殖、転移、ウイルス感染およびウイルス複製と関連している。
本発明は、さらに、個体(例えば、患者)におけるＩＤＯの異常活性および／または過発現を含む活性または発現と関係する疾患を処置する方法であって、このような処置を必要とする個体に治療有効量または用量の本発明の化合物またはその医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。疾患例は、ＩＤＯ酵素の過発現または異常活性などの発現または活性と直接的または間接的に関連するあらゆる疾患、障害または状態を含み得る。ＩＤＯ関連疾患は、酵素活性の調節により予防、軽減または治癒され得るあらゆる疾患、障害または状態も含み得る。ＩＤＯ関連疾患の例は、癌、ＨＩＶ感染およびＨＣＶ感染などのウイルス感染、うつ病、アルツハイマー病およびハンチントン病などの神経変性障害、外傷、加齢性白内障、臓器移植(例えば、臓器移植片拒絶)ならびに喘息、関節リウマチ、多発性硬化症、アレルギー性炎症、炎症性腸疾患、乾癬および全身性エリテマトーデスを含む自己免疫疾患を含む。
ここで使用する用語“細胞”は、インビトロ、エクスビボまたはインビボにある細胞をいうことを意図する。ある実施態様において、エクスビボ細胞は、哺乳動物などの生物から切除した組織サンプルの一部であり得る。ある実施態様において、インビトロ細胞は、細胞培養における培養であり得る。ある実施態様において、インビボ細胞は、哺乳動物などの生物中で生存している細胞である。
ここで使用する用語“接触”は、インビトロ系またはインビボ系において示す複数部分を一緒にすることをいう。例えば、ＩＤＯ酵素と本発明の化合物の“接触”は、本発明の化合物をＩＤＯを有するヒトなどの個体または患者に投与すること、ならびに、例えば、本発明の化合物をＩＤＯ酵素を含む細胞もしくは精製調製物を含むサンプルに導入することを含む。
用語“ＩＤＯ阻害剤”は、インドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)の活性を阻害し、それにより、ＩＤＯ介在免疫抑制を逆転させることができる薬剤をいう。ＩＤＯ阻害剤はＩＤＯ１および／またはＩＤＯ２(ＩＮＤＯＬ１)を阻害し得る。ＩＤＯ阻害剤は可逆性または不可逆性ＩＤＯ阻害剤であり得る。“可逆性ＩＤＯ阻害剤”は触媒部位または非触媒部位でＩＤＯ酵素活性を可逆性に阻害する化合物であり、“不可逆性ＩＤＯ阻害剤”は、ＩＤＯ酵素活性を不可逆性に破壊する化合物である。
本発明の化合物で処置し得る癌のタイプは、脳の癌、皮膚癌、膀胱癌、卵巣癌、乳癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸癌、血液癌、肺癌および骨の癌を含むが、これらに限定されない。このような癌タイプの例は、神経芽腫、直腸癌、結腸癌、家族性大腸腺腫症癌および遺伝性非ポリープ性結腸直腸癌などの腸管癌、食道癌、陰唇癌、喉頭癌、下咽頭癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、髄様甲状腺癌、乳頭様甲状腺癌、腎臓癌、腎実質癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮体癌、子宮内膜癌、絨毛癌、膵臓癌、前立腺癌、精巣癌、乳癌、泌尿器癌、黒色腫、神経膠芽腫、星状細胞腫、髄膜腫、髄芽腫および末梢神経外胚葉腫瘍などの脳腫瘍、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、急性リンパ性白血病(ＡＬＬ)、慢性リンパ性白血病(ＣＬＬ)、急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)、成人Ｔ細胞白血病リンパ腫、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫(ＤＬＢＣＬ)、肝細胞癌、胆嚢癌、気管支癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、多発性骨髄腫、基底細胞腫、奇形腫、網膜芽細胞腫、脈絡膜黒色腫、精上皮腫、横紋筋肉腫、頭蓋咽頭腫、骨肉腫、軟骨肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、ユーイング肉腫および形質細胞腫を含む。
それ故に、他の実施態様によると、本発明は、本発明の化合物または組成物をそれを必要とする患者に提供することによる、自己免疫疾患を処置する方法を提供する。このような自己免疫疾患の例は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、シャープ症候群、クレスト症候群(石灰沈着、レイノー症候群、食道運動不全、毛細血管拡張症)、皮膚筋炎、脈管炎(ウェゲナー病)およびシェーグレン症候群などの膠原病、グッドパスチャー症候群、急速に進行する糸球体腎炎および膜性増殖性糸球体腎炎II型などの腎疾患、Ｉ型糖尿病、自己免疫性多腺性内分泌不全症・カンジダ症・外胚葉ジストロフィー(ＡＰＥＣＥＤ)、自己免疫性副甲状腺機能亢進症、悪性貧血、性腺機能不全、特発性アジソン病、甲状腺機能亢進症、橋本甲状腺炎および原発性粘液水腫などの内分泌疾患、尋常性天疱瘡、類天疱瘡、妊娠性疱疹、表皮水疱症および重症型多型紅斑などの皮膚疾患、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性胆管炎、自己免疫性肝炎１型、自己免疫性肝炎２型、原発性硬化性胆管炎などの肝疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、ランバート・イートン筋無力症候群、後天性神経性筋強直症、ギラン・バレー症候群(ミラー・フィッシャー症候群)、スティッフマン症候群、小脳変性、運動失調、眼球クローヌス、感覚性ニューロパチーおよびアカラシアなどの神経疾患、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減少性紫斑病(ウェルホーフ病)などの血液疾患、ＡＩＤＳ、マラリアおよびシャーガス病などの自己免疫反応が関係する感染症を含むが、これらに限定されない。
例えば、抗ウイルス剤、化学療法剤または他の抗癌剤、免疫増強剤、免疫抑制剤、放射線、抗腫瘍および抗ウイルスワクチン、サイトカイン療法(例えば、ＩＬ−２およびＧＭ−ＣＳＦ)および／またはチロシンキナーゼ阻害剤などの１以上のさらなる薬剤または処置法を、ＩＤＯ関連疾患、障害または状態処置のために場合により本発明の化合物と組み合わせて使用し得る。これら薬剤を、本発明化合物と、単回投与量形態で組み合わせてよくまたはこれら薬剤を別の投与形態で同時にまたは逐次的に投与してよい。
適当な化学療法剤または他の抗癌剤は、例えば、アルキル化剤(ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホネート、ニトロソウレアおよびトリアゼンを含むが、これらに限定されない)、例えばウラシルマスタード、クロルメチン、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標))、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ピポブロマン、トリエチレン−メラミン、トリエチレンチオホスホラミン、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジンおよびテモゾロミドを含む。
黒色腫の処置において、本発明の化合物と組み合わせて使用するのに適する薬剤は、場合により、カルムスチン(ＢＣＮＵ)およびシスプラチンなどの他の化学療法薬物と組み合わせたダカルバジン(ＤＴＩＣ)；ＤＴＩＣ、ＢＣＮＵ、シスプラチンおよびタモキシフェンからなる“ダートマスレジメン”；シスプラチン、ビンブラスチンおよびＤＴＩＣ、テモゾロミドまたはヤーボイ(登録商標)の組み合わせを含む。本発明の化合物を、黒色腫の処置において、インターフェロンアルファ、インターロイキン２および腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)などのサイトカインを含む免疫療法薬物とも組み合わせ得る。
黒色腫の処置において、本発明の化合物をワクチン療法とも組み合わせて使用し得る。抗黒色腫ワクチンは、ある意味で、ポリオ、麻疹および流行性耳下腺炎などのウイルスが原因の疾患の予防に使用される抗ウイルスワクチンに類似する。弱化黒色腫細胞または抗原と称される黒色腫細胞の一部を、黒色腫細胞を破壊する体の免疫系を刺激するために、患者に注射し得る。
腕または脚に限局する黒色腫はまた温熱単離四肢灌流療法を使用して、１以上の本発明の化合物を含む薬剤の組み合わせでも処置され得る。この処置プロトコールは、関連肢の循環を体の残りの部分から一過性に分離し、高用量の化学療法を該肢に影響を供給する動脈に注射し、そうしなければ重篤な副作用を引き起こす可能性がある用量に内臓を曝すことなく、腫瘍の領域に高用量を提供する。通常流体を１０２〜１０４°Fに温める。メルファランは、この化学療法手順に最もしばしば使用される薬物である。これは、腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)と称される他の薬物の投与でも行われ得る。
適当な化学療法剤または他の抗癌剤は、例えば、代謝拮抗剤(葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよびアデノシンデアミナーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない)、例えばメトトレキサート、５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、シタラビン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、フルダラビンホスフェート、ペントスタチンおよびゲムシタビンを含む。
適当な化学療法剤または他の抗癌剤は、さらに、例えば、ある種の天然物およびその誘導体(例えば、ビンカアルカロイド、抗腫瘍抗生物質、酵素、リンホカインおよびエピポドフィロトキシン)、例えばビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ａｒａ−Ｃ、パクリタキセル(タキソール)、ミトラマイシン、デオキシコホルマイシン、マイトマイシン−Ｃ、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン(特にＩＦＮ−ａ)、エトポシドおよびテニポシドを含む。
他の細胞毒性剤は、ナベルビン、ＣＰＴ−１１、アナストロゾール、レトロゾール、カペシタビン、ラロキシフェンおよびドロロキシフェンを含む。
また適するのは、エピポドフィロトキシン；抗新生物酵素；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキサントロン；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金配位化合物；生物学的応答修飾剤；増殖阻害剤；抗ホルモン治療剤；ロイコボリン；テガフール；および造血性増殖因子などの細胞毒性剤である。
他の抗癌剤は、トラスツズマブ(ハーセプチン(登録商標))、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢおよびＰＤ−１に対する抗体またはサイトカイン(ＩＬ−１０またはＴＧＦ−β)に対する抗体などの抗体治療剤を含む。
他の抗癌剤はＣＣＲ２およびＣＣＲ４を含むケモカイン受容体に対するアンタゴニストなどの免疫細胞遊走を遮断するものも含む。
他の抗癌剤はまたアジュバントまたは養子Ｔ細胞移入などの免疫系を増強するものも含む。
抗癌ワクチンは、樹状細胞、合成ペプチド、ＤＮＡワクチンおよび組み換えウイルスを含む。
本発明の医薬組成物は、場合により少なくとも一つのシグナル伝達阻害剤(ＳＴＩ)を含み得る。“シグナル伝達阻害剤”は、癌細胞の通常の機能におけるシグナル伝達経路の１以上の重要な段階を選択的に阻害し、それによりアポトーシスに導く薬剤である。適当なＳＴＩは、(ｉ)例えば、ＳＴＩ ５７１(グリベック(登録商標))などのｂｃｒ／ａｂｌキナーゼ阻害剤；(ii)例えば、キナーゼ阻害剤(イレッサ(登録商標)、ＳＳＩ−７７４)および抗体(Imclone: C225 [Goldstein et al., Clin. Cancer Res., 1: 1311-1318 (1995)]およびAbgenix: ABX-EGF)などの上皮細胞増殖因子(ＥＧＦ)受容体阻害剤；(iii)例えば、Ｌ−７４４,８３２(Kohl et al., Nat. Med., 1(8): 792-797 (1995))などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤(ＦＴＩ)などのｈｅｒ−２／ｎｅｕ受容体阻害剤；(iv)例えば、ラパマイシンなどのＡｋｔファミリーキナーゼＡｋｔ経路阻害剤(例えば、Sekulic et al., Cancer Res., 60: 3504-3513 (2000)参照)；(ｖ)例えば、フラボピリドールおよびＵＣＮ−Ｏ１などの細胞周期キナーゼ阻害剤(例えば、Sausville, Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents, 3: 47-56 (2003)参照)；および(vi)例えば、ＬＹ２９４００２などのホスファチジルイノシトールキナーゼ阻害剤(例えば、Vlahos et al., J. Biol. Chem., 269: 5241-5248 (1994)参照)を含むが、これらに限定されない。あるいは、少なくとも一つのＳＴＩおよび少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤は別の医薬組成物にあり得る。本発明の具体的実施態様において、少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤および少なくとも一つのＳＴＩは、患者に同時にまたは逐次的に投与され得る。換言すると、少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤を最初に投与してよく、少なくとも一つのＳＴＩを最初に投与してよくまたは少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤および少なくとも一つのＳＴＩを同時に投与してよい。さらに、１を超えるＩＤＯ阻害剤および／またはＳＴＩを使用するとき、これら化合物を任意の順番で投与し得る。
本発明は、さらに、薬学的に許容される担体中に少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤、場合により、少なくとも一つの化学療法薬物および場合により、少なくとも一つの抗ウイルス剤を含む、患者における慢性ウイルス感染を処置するための医薬組成物を提供する。医薬組成物は、少なくとも一つの確立されている(既知)ＩＤＯ阻害剤に加えて、本発明の少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤を含み得る。具体的実施態様において、医薬組成物のＩＤＯ阻害剤の少なくとも一つは、式(Ｉ)および(II)の化合物からなる群から選択される。
また提供されるのは、有効量の上記医薬組成物の投与による、患者における慢性ウイルス感染を処置する方法である。
本発明の具体的実施態様において、少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤および少なくとも一つの化学療法剤を患者に同時にまたは逐次的に投与し得る。換言すると、少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤を最初に投与してよく、少なくとも一つの化学療法剤を最初に投与してよくまたは少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤および少なくとも一つのＳＴＩを同時に投与してよい。さらに、１を超えるＩＤＯ阻害剤および／または化学療法剤を使用するとき、これら化合物を任意の順番で投与し得る。同様に、任意の抗ウイルス剤またはＳＴＩを、ＩＤＯ阻害剤の投与に対して任意の時点でまた投与し得る。
本組み合わせ処置を使用して処置し得る慢性ウイルス感染は、Ｃ型肝炎ウイルス(ＨＣＶ)、ヒト乳頭腫ウイルス(ＨＰＶ)、サイトメガロウイルス(ＣＭＶ)、単純ヘルペスウイルス(ＨＳＶ)、プスタイン・バーウイルス(ＥＢＶ)、水痘・帯状疱疹ウイルス、コクサッキーウイルス、ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ)が原因の疾患を含むが、これらに限定されない。注意されるべきは、寄生虫感染症(例えば、マラリア)も、抗ウイルス剤の替わりに寄生虫感染状態を処置することで知られている化合物を場合により加えて、上記方法により処置され得る。
さらに他の実施態様において、本発明の少なくとも一つのＩＤＯ阻害剤を含む医薬組成物を、バルーン内視鏡またはステント留置後などにおける動脈性再狭窄を予防するために患者に投与し得る。特定の実施態様において、医薬組成物は、さらに少なくとも一つのタキサン(例えば、パクリタキセル(タキソール)；例えば、Scheller et al., Circulation, 110: 810-814 (2004)参照)を含む。
本発明の化合物と組み合わせた使用が企図される適当な抗ウイルス剤は、ヌクレオシドおよびヌクレオチド逆転写酵素阻害剤(ＮＲＴＩ)、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤(ＮＮＲＴＩ)、プロテアーゼ阻害剤および他の抗ウイルス薬物を含み得る。
適当なＮＲＴＩの例はジドブジン(ＡＺＴ)；ジダノシン(ｄｄｌ)；ザルシタビン(ｄｄＣ)；スタブジン(ｄ４Ｔ)；ラミブジン(３ＴＣ)；アバカビル(１５９２Ｕ８９)；アデフォビルジピボキシル[ビス(ＰＯＭ)−ＰＭＥＡ]；ロブカビル(ＢＭＳ−１８０１９４)；ＢＣＨ−Ｉ０６５２；エムトリシタビン[(−)−ＦＴＣ]；ベータ−Ｌ−ＦＤ４ベータ−Ｌ−Ｄ４Ｃとも称され、名称ベータ−Ｌ−２’,３’−ジデオキシ−５−フルオロ−シチジン)；ＤＡＰＤ、((−)−ベータ−Ｄ−２,６−ジアミノ−プリンジオキソラン)；およびロデノシン(ＦｄｄＡ)を含む。典型的な適当なＮＮＲＴＩは、ネビラピン(ＢＩ−ＲＧ−５８７)；デラビルジン(ＢＨＡＰ、Ｕ−９０１５２)；エファビレンツ(ＤＭＰ−２６６)；ＰＮＵ−１４２７２１；ＡＧ−１５４９；ＭＫＣ−４４２(１−(エトキシ−メチル)−５−(１−メチルエチル)−６−(フェニルメチル)−(２,４(１Ｈ,３Ｈ)−ピリミジンジオン)；および(＋)−カラノリドＡ(ＮSC−６７５４５１)およびＢを含む。典型的な適当なプロテアーゼ阻害剤は、サキナビル(Ｒｏ ３１−８９５９)；リトナビル(ＡＢＴ−５３８)；インジナビル(ＭＫ−６３９)；ネルフィナビル(ＡＧ−１３４３)；アンプレナビル(１４１Ｗ９４)；ラシナビル(ＢＭＳ−２３４４７５)；ＤＭＰ−４５０；ＢＭＳ−２３２２６２３；ＡＢＴ−３７８；およびＡＧ−１５４９を含む。他の抗ウイルス剤は、ヒドロキシ尿素、リバビリン、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ペンタフシドおよびYissum Project No. 11607を含む。
腫瘍免疫療法剤との組み合わせ
さらに提供されるのは、式Ｉまたは式IIの化合物を１以上の腫瘍免疫療法剤と投与する、処置方法である。ここで使用する腫瘍免疫療法剤は、癌免疫療法剤としても知られ、対象における免疫応答の増強、刺激および／または上方制御に有効である。
ある態様において、式Ｉまたは式IIの化合物は、腫瘍免疫療法剤の投与前に逐次的に投与される。他の態様において、式Ｉまたは式IIの化合物は、腫瘍免疫療法剤と同時に投与される。さらに他の態様において、式Ｉまたは式IIの化合物は、腫瘍免疫療法剤の投与後に逐次的に投与される。
他の態様において、式Ｉまたは式IIの化合物は腫瘍免疫療法剤と共製剤化され得る。
腫瘍免疫療法剤は、例えば、小分子薬物、抗体または他の生物学的または小分子を含む。生物学的腫瘍免疫療法剤の例は、癌ワクチン、抗体およびサイトカインを含むが、これらに限定されない。ある態様において、抗体はモノクローナル抗体である。他の態様において、モノクローナル抗体はヒト化されているまたはヒトである。
ある態様において、腫瘍免疫療法剤は、Ｔ細胞の(ｉ)刺激(共刺激を含む)受容体のアゴニストまたは(ii)阻害(共阻害を含む)シグナルのアンタゴニストであり、この両者とも抗原特異的Ｔ細胞応答の増強に至る(免疫チェックポイントレギュレーターと称されることもある)。
刺激分子および阻害分子の一部は、免疫グロブリンスーパーファミリー(ＩｇＳＦ)のメンバーである。共刺激または共阻害受容体に結合する膜結合リガンドの一つの重要なファミリーは、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１(ＰＤ−Ｌ１)、Ｂ７−ＤＣ(ＰＤ−Ｌ２)、Ｂ７−Ｈ２(ＩＣＯＳ−Ｌ)、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５(VIＳＴＡ)およびＢ７−Ｈ６を含むＢ７ファミリーである。共刺激または共阻害受容体に結合する膜結合リガンドの他のファミリーは、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７(４−１ＢＢ)、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲ１、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ＮＧＦＲを含む、同族ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーに結合するＴＮＦファミリーの分子である。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、免疫応答刺激のために、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカイン(例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＶＥＧＦおよび他の免疫抑制性サイトカイン)またはＴ細胞活性化を刺激するサイトカインである。
ある態様において、Ｔ細胞応答は、式Ｉまたは式IIの化合物と、(ｉ)ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ６９、ガレクチン−１、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、VIＳＴＡ、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ−１およびＴＩＭ−４などのＴ細胞活性化を阻害する(例えば、免疫チェックポイント阻害剤)タンパク質のアンタゴニストおよび(ii)Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ(ＣＤ１３７)、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＤＲ３およびＣＤ２８ＨなどのＴ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストの１以上の組み合わせにより刺激され得る。
癌の処置のために式Ｉまたは式IIの化合物と組み合わせ得る他の薬剤は、ＮＫ細胞の阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞の活性化受容体のアゴニストを含む。例えば、式Ｉまたは式IIの化合物を、リリルマブなどのＫＩＲのアンタゴニストと組み合わせ得る。
組み合わせ治療のためのさらに他の薬剤は、ＲＧ７１５５(ＷＯ１１／７００２４、ＷＯ１１／１０７５５３、ＷＯ１１／１３１４０７、ＷＯ１３／８７６９９、ＷＯ１３／１１９７１６、ＷＯ１３／１３２０４４)またはＦＰＡ−００８(ＷＯ１１／１４０２４９、ＷＯ１３／１６９２６４、ＷＯ１４／０３６３５７)を含むＣＳＦ−１Ｒアンタゴニスト抗体などのＣＳＦ−１Ｒアンタゴニストを含むが、これらに限定されないマクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤を含む。
他の態様において、式Ｉまたは式IIの化合物を、正の共刺激受容体をライゲートするアゴニスト剤、阻害受容体を介するシグナル伝達を減弱させる遮断剤、アンタゴニストおよび１以上の抗腫瘍Ｔ細胞の頻度を全身性に増加させる薬剤、腫瘍微小環境内の明確な免疫抑制経路に打ち勝つ薬剤(例えば、阻害性受容体結合(例えば、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用)遮断、Ｔｒｅｇ枯渇または阻害(例えば、抗ＣＤ２５モノクローナル抗体(例えば、ダクリズマブ)使用またはエクスビボ抗ＣＤ２５ビーズ枯渇による)、ＩＤＯなどの代謝酵素阻害またはＴ細胞アネルギーまたは消耗の回復／防止)および腫瘍部位での自然免疫活性化および／または炎症を誘発する薬剤の１以上と使用し得る。
ある態様において、腫瘍免疫療法剤は、アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体などのＣＴＬＡ−４アンタゴニストである。適当なＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、ヤーボイ(登録商標)(イピリムマブ)またはトレメリムマブを含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アンタゴニストＰＤ−１抗体などのＰＤ−１アンタゴニストである。適当なＰＤ−１抗体は、例えば、オプジーボ(登録商標)(ニボルマブ)、キイトルーダ(登録商標)(ペムブロリズマブ)またはＭＥジ−０６８０(ＡＭＰ−５１４；ＷＯ２０１２／１４５４９３)を含む。腫瘍免疫療法剤は、ピディリズマブ(ＣＴ−０１１)を含み得るが、そのＰＤ−１結合についての特異性は疑問がある。ＰＤ−１受容体を標的とする他のアプローチは、ＩｇＧ１のＦｃに融合したＰＤ−Ｌ２(Ｂ７−ＤＣ)の細胞外ドメインからなる、ＡＭＰ−２２４と称される組み換えタンパク質である。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アンタゴニストＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１アンタゴニストである。適当なＰＤ−Ｌ１抗体は、例えば、ＭＰＤＬ３２８０Ａ(ＲＧ７４４６；ＷＯ２０１０／０７７６３４)、デュルバルマブ(ＭＥＤＩ４７３６)、ＢＭＳ−９３６５５９(ＷＯ２００７／００５８７４)およびＭＳＢ００１０７１８Ｃ(ＷＯ２０１３／７９１７４)を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アンタゴニストＬＡＧ−３抗体などのＬＡＧ−３アンタゴニストである。適当なＬＡＧ３抗体は、例えば、ＢＭＳ−９８６０１６(ＷＯ１０／１９５７０、ＷＯ１４／０８２１８)またはＩＭＰ−７３１またはＩＭＰ−３２１(ＷＯ０８／１３２６０１、ＷＯ０９／４４２７３)を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アゴニストＣＤ１３７抗体などのＣＤ１３７(４−１ＢＢ)アゴニストである。適当なＣＤ１３７抗体は、例えば、ウレルマブおよびＰＦ−０５０８２５６６(ＷＯ１２／３２４３３)を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アゴニストＧＩＴＲ抗体などのＧＩＴＲアゴニストである。適当なＧＩＴＲ抗体は、例えば、ＢＭＳ−９８６１５３、ＢＭＳ−９８６１５６、ＴＲＸ−５１８(ＷＯ０６／１０５０２１、ＷＯ０９／００９１１６)およびＭＫ−４１６６(ＷＯ１１／０２８６８３)を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、ＩＤＯアンタゴニストである。適当なＩＤＯアンタゴニストは、例えば、ＩＮＣＢ−０２４３６０(ＷＯ２００６／１２２１５０、ＷＯ０７／７５５９８、ＷＯ０８／３６６５３、ＷＯ０８／３６６４２)、インドキシモドまたはＮＬＧ−９１９(ＷＯ０９／７３６２０、ＷＯ０９／１１５６６５２、ＷＯ１１／５６６５２、ＷＯ１２／１４２２３７)を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０アゴニストである。適当なＯＸ４０抗体は、例えば、ＭＥジ−６３８３またはＭＥジ−６４６９を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アンタゴニストＯＸ４０抗体などのＯＸ４０Ｌアンタゴニストである。適当なＯＸ４０Ｌアンタゴニストは、例えば、ＲＧ−７８８８(ＷＯ０６／０２９８７９)を含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストである。さらに他の実施態様において、腫瘍免疫療法剤は、アンタゴニストＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アンタゴニストである。適当なＣＤ４０抗体は、例えば、ルカツムマブまたはダセツズマブを含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、アゴニストＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストである。適当なＣＤ２７抗体は、例えば、バルリルマブを含む。
他の態様において、腫瘍免疫療法剤は、ＭＧＡ２７１(Ｂ７Ｈ３に対する)(ＷＯ１１／１０９４００)である。
本発明はまた、例えば、ＩＤＯ関連疾患または障害、肥満、糖尿病およびここに言及する他の疾患の処置または予防に有用な医薬キットも含み、これは、治療有効量の本発明の化合物を含む医薬組成物を含む１以上の容器を含む。当業者には容易に明らかであるように、このようなキットは、所望により、例えば、１以上の薬学的に許容される担体の容器、さらなる容器などの、１以上の種々の慣用の医薬キット要素をさらに含み得る。投与すべき成分の量、投与のガイドラインおよび／または成分の混合のガイドラインを示す、挿入物またはラベルとしての指示もキットに包含され得る。
組み合わせ治療は、各治療剤が異なる時点で投与されるこれら治療剤の逐次的様式での投与ならびにこれら治療剤または少なくともこれら治療剤の少なくとも二つが実質的の同時の様式での投与を包含することを意図する。実質的に同時の投与は、例えば、対象に各治療剤を固定比で含む単一投与量形態または各治療剤の複数の単一投与形態を投与することにより、達成され得る。各治療剤の逐次的または実質的に津叔父の投与は、経口経路、静脈内経路、筋肉内経路および粘膜組織を介する直接吸入を含むが、これらに限定されない任意の適当な経路により行われ得る。治療剤を同じ経路で投与しても、異なる経路で投与してもよい。例えば、選択下組み合わせの第一治療剤を静脈内注射により投与してよく、組み合わせの他の治療剤を経口で投与してよい。あるいは、例えば、全治療剤を経口で投与してよくまたは全治療剤を静脈内注射により投与してよい。組み合わせ治療はまた、他の生物学的活性成分および非薬物療法(例えば、手術または放射線処置)とさらに組み合わせた上記治療剤の投与も包含し得る。組み合わせ治療がさらに非薬物処置を含むとき、該非薬物処置は、治療剤と非薬物処置の組み合わせの共作用による有益な効果が達成される限り、任意の適当な時点で実施し得る。例えば、適切な場合、非薬物処置が治療剤の投与から、おそらく、数日または数週間時間的に離れていても、有益な効果がなお達成される。
医薬組成物および投与
本発明はまた、１以上の薬学的に許容される担体(添加物)および／または希釈剤および場合により、１以上の上記治療剤と製剤化されている、治療有効量の１以上の式Ｉおよび／または式IIの化合物を含む、薬学的に許容される組成物も提供する。
本発明の化合物は、ここに記載する使用の何れかのために、任意の適当な手段で、例えば、錠剤、カプセル(この各々は、徐放性または持続放出型製剤を含む)、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液剤(ナノ懸濁液剤、マイクロ懸濁液剤、噴霧乾燥分散剤を含む)、シロップ剤およびエマルジョン剤など経口的に；舌下に；バッカルに；皮下、静脈内、筋肉内または胸骨内注射または点滴技術により非経腸的に(例えば、無菌注射可能水性または非水溶液または懸濁液として)；吸入スプレーによるなどの鼻粘膜への投与を含む経鼻的に；クリーム剤または軟膏剤の形態として局所的に；または坐薬の形態で直腸に投与できる。それらは単独で投与できるが、一般に、選択した投与経路および標準薬務に基づき選択した医薬担体と共に投与される。
用語“薬学的に許容される”は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー性応答または他の問題あるいは合併症を伴わず、合理的ベネフィット／リスク比において、ヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適する、化合物、物質、組成物および／または投与形態をいうためにここで使用する。
ここで使用される用語“薬学的に許容される担体”は、対象化合物の体のある臓器または部分から体の他の臓器または部分への運搬または輸送に関与する、液体または固体増量剤、希釈剤、添加物、製造補助(例えば、滑沢剤、タルク、マグネシウム、カルシウムまたはステアリン酸亜鉛またはステリン酸)または溶媒カプセル封入剤などの薬学的に許容される物質、組成物または媒体を意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に有害ではない点で、“許容される”ものでなければならない。
用語“医薬組成物”は、少なくとも一つのさらなる薬学的に許容される担体と組み合わせて本発明の化合物を含む、組成物を意味する。“薬学的に許容される担体”は、投与および投与形態の性質により、すなわち、希釈剤、防腐剤、充填剤、流動制御剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、抗細菌剤、抗真菌剤、滑沢剤および分散剤などのアジュバント、添加物または媒体を含む、動物、特に、哺乳動物への生物学的活性剤の送達のために当分野で一般に許容される媒体をいう。
薬学的に許容される担体は、十分に当分野の通常の技術の範囲内である多数の因子に従い製剤化される。これらは、製剤化する活性剤のタイプおよび性質；薬剤含有組成物を投与する対象；組成物の意図される投与経路；および処置する治療適応症を含むが、これらに限定されない。薬学的に許容される担体は、水性および非水性両方の液体媒体ならびに種々の固体および半固体投与形態を含む。このような担体は、活性剤に加えて多数の種々の成分および添加剤を含み得て、このようなさらなる成分は、当業者に周知の、例えば、活性剤の安定化、結合剤など、種々の理由で製剤に包含される。適当な薬学的に許容される担体および因子のその選択に関与する記載は、例えば、Allen, Jr., L.V. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 Volumes), 22nd Edition, Pharmaceutical Press (2012)などの多様な容易に入手可能な情報源に見ることができる。
本発明の化合物の投与レジメンは、当然、特定の薬剤の薬力学的特徴およびその投与方式および経路；受け手の種、年齢、性別、健康状態、医学的状態および体重；症状の性質および程度；同時処置の種類；処置の頻度；投与経路、患者の腎機能および肝機能および所望の効果などの既知因子により変わる。
一般的ガイダンスとして、各活性成分の１日経口用量は、記載した効果のために使用したとき、約０.００１〜約５０００mg／日、好ましくは約０.０１〜約１０００mg／日、最も好ましくは約０.１〜約２５０mg／日の範囲である。静脈内では、最も好ましい用量は低速点滴の間、約０.０１〜約１０mg／kg／分の範囲である。本発明の化合物は、１日１回用量で投与でき、または総１日用量を１日２回、３回または４回の分割用量で投与できる。
化合物は、一般に、意図する投与形態、例えば、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤およびシロップ剤に関連して適切に選択されているならびに慣用の薬務に一致する、適当な医薬希釈剤、添加物または担体(ここでは集合的に医薬担体と称する)と混合して投与される。
投与に適する投与形態(医薬組成物)は、単位投与単位あたり約１mg〜約２０００mgの活性成分を含み得る。これらの医薬組成物において、活性成分は通常組成物の総重量に基づき、約０.１〜９５重量％の量で存在する。
経口投与用の典型的カプセル剤は、本発明の化合物の少なくとも一つ(２５０mg)、ラクトース(７５mg)およびステアリン酸マグネシウム(１５mg)を含む。混合物を６０メッシュ篩を篩過させ、１号ゼラチンカプセルに充填する。
典型的注射可能製剤は、本発明の化合物の少なくとも一つ(２５０mg)をバイアルに無菌的に入れ、無菌的に凍結乾燥し、密封することにより製造する。使用に際し、バイアルの内容物を２mLの生理食塩水と混合し、注射可能製剤を製造する。
本発明は、その範囲内に、活性成分として治療有効量の本発明の化合物の少なくとも一つを、単独でまたは医薬担体と組み合わせて含む、医薬組成物を含む。場合により、本発明の化合物を単独で、本発明の他の化合物と組み合わせてまたは１以上の他の治療剤、例えば、抗癌剤もしくは他の薬学的活性物質と組み合わせて使用し得る。
選択した投与経路に係わらず、適当な水和されている形態で使用し得る本発明の化合物および／または本発明の医薬組成物を、当業者に知られる慣用法により、薬学的に許容される投与形態に製剤化する。
本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物および投与方式について、患者に毒性とならずに、所望の治療効果を達成するのに有効である活性成分の量を得るように変わり得る。
選択する投与量レベルは、用いる本発明の特定の化合物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いる本発明の特定の化合物の排泄または代謝速度、吸収の速度および程度、処置の期間、用いる特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、処置する患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態および病歴および医薬分野で周知の類似の因子を含む多様な因子に依存する。
通常の技術を有する医師または獣医師は、医薬組成物の必要な有効量を容易に決定し、処方できる。例えば、医師または獣医師は、医薬組成物において用いる本発明の化合物の用量を所望の治療効果の達成に必要であるより低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に増加する。
一般に、本発明の化合物の適当な１日用量は、治療効果を生じるために有効な最低用量である化合物の量である。このような有効用量は、一般に上記因子による。一般に、患者に対する本発明の化合物の経口、静脈内、脳室内および皮下用量は、約０.０１〜約５０mg／体重kg／日の範囲である。
所望により、活性化合物の有効１日用量を、場合により、単位投与形態で、１日をとおして適当な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回またはそれ以上の分割用量として投与され得る。本発明のある態様において、投与は１日１回投与である。
本発明の化合物について単独で投与することは可能であるが、該化合物を医薬製剤(組成物)として投与するのが好ましい。
定義
本明細書において特に断らない限り、単数表現での記載は、複数も含み得る。例えば、“ある”は、１または１以上をいい得る。
特に断らない限り、原子価が充足されていない何らかのヘテロ原子は、原子価を充足させるのに十分な水素原子を有すると仮定される。
本明細書および添付する特許請求の範囲をとおして、ある化学式または化学名は、その全ての立体および光学異性体ならびにラセミ体を、そのような異性体が存在するときは包含すべきである。特に断らない限り、全てのキラル(エナンチオマーおよびジアステレオマー)形態およびラセミ体形態は本発明の範囲内である。Ｃ＝Ｃ二重結合、Ｃ＝Ｎ二重結合、環系などの多くの幾何異性体も本化合物において存在でき、全てのこのような安定な異性体は本発明において企図される。本発明の化合物のｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−(またはＥ−およびＺ−)幾何異性体が挙げられ、異性体混合物としてまたは分離されている異性体形態として単離され得る。本化合物は光学活性形態またはラセミ体形態で単離され得る。光学活性形態は、ラセミ体の分割によりまたは光学活性出発物質からの合成により製造され得る。本発明の化合物の製造に使用される全方法およびそれにおいて製造される中間体は、本発明の一部と考えられる。エナンチオマーまたはジアステレオマー生成物が製造されるとき、それらは慣用の方法で、例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶により分離され得る。製造条件によって、本発明の最終産物は、遊離(中性)または塩形態で得られる。これらの最終産物の遊離形態および塩の何れも本発明の範囲内である。そのように望むのであれば、化合物のある形態を他の形態に変換し得る。遊離塩基または酸を塩に変換し得る；塩を遊離化合物または他の塩に変換し得る；本発明の化合物の異性体混合物を個々の異性体に分離し得る。本発明の化合物は、遊離形態でもその塩でも、水素原子が分子の他の部分に転位し、分子の原子間の化学結合が結果として再配置される、複数の互変異性形態で存在し得る。全ての互変異性形態が、それらが存在し得る限り、本発明に含まれることは理解されるべきである。
明瞭化の目的でかつ当分野の標準的慣習に従い、記号
は、式および表中で部分または置換基の構造のコア／核への結合点である結合を示すために使用する。
さらに、明瞭化の目的で、置換基が２つの文字または記号の間ではないダッシュ(−)を有するとき、これは置換基の結合点を示すために使用する。例えば、−ＣＯＮＨ２は炭素原子を介して結合される。
さらに、明瞭化の目的で、実線の最後に置換基が示されていないとき、これは、該結合に結合したメチル(ＣＨ３)基があることを示す。
ここで使用する用語“アルキル”および“アルキレン”(“アルク”とも称する)は、特定の炭素原子数を有する分岐および直鎖飽和脂肪族炭化水素基を含むことを意図する。例えば、“Ｃ１−Ｃ６アルキル”または“Ｃ１−６アルキル”は、１〜６炭素原子を有するアルキルを意味する。アルキル基の例は、メチル(Ｍｅ)、エチル(Ｅｔ)、プロピル(例えば、ｎ−プロピルおよびイソプロピル)、ブチル(例えば、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル)およびペンチル(例えば、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル)を含むが、これらに限定されない。“Ｃ１−Ｃ６アルキレン”は、１〜６炭素原子を有するアルキレンをいう。アルキレン基の例は、メチレン(−ＣＨ２−)、エチレン(−ＣＨ２ＣＨ２−)などを含むが、これらに限定されない。
ここで使用する“アリール”は、フェニル、ビフェニル、インダニル、１−ナフチル、２−ナフチルおよびテトラヒドロナフチルを含むが、これらに限定されない芳香環系をいう。
“ハロ”または“ハロゲン”は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを含む。
“ハロアルキル”は、１以上のハロゲンで置換されている、特定の炭素原子数を有する分岐鎖および直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を含むことを意図する。ハロアルキルの例は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、ペンタフルオロエチル、ペンタクロロエチル、２,２,２−トリフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピルおよびヘプタクロロプロピルを含むが、これらに限定されない。ハロアルキルの例はまた、１以上のフッ素原子で置換されている特定の炭素原子数を有する分岐鎖および直鎖飽和脂肪族炭化水素基の両方を含むことを意図する、“フルオロアルキル”も含む。
ここで使用する“ヘテロアリール”は、硫黄、酸素または窒素など少なくとも１個のヘテロ原子環員を含む、安定な単環式および多環式芳香族炭化水素を意味することを意図する。ヘテロアリール基は、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピロリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、イソチアゾリル、プリニル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリニル、ベンゾジオキソラニルおよびベンゾジオキサンを含むが、これらに限定されない。ヘテロアリール基は置換または非置換である。窒素原子は、置換または非置換である(すなわち、ＮまたはＮＲであって、ここで、Ｒは、定義されるならば、Ｈまたは他の置換基である)。窒素および硫黄ヘテロ原子は、場合により酸化されていてよい(すなわち、Ｎ→ＯおよびＳ(Ｏ)ｐであって、ここでｐは０、１または２である)。
ここで使用する用語“置換”は、正常な原子価が維持され、置換が安定な化合物をもたらす限り、少なくとも１個の水素原子が非水素基に置き換わることを意味する。
用語“薬学的に許容される”は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー性応答または他の問題あるいは合併症を伴わず、合理的ベネフィット／リスク比において、ヒトおよび動物の組織と接触させる使用に適する、化合物、物質、組成物および／または投与形態をいうためにここで使用する。
ここで使用する“薬学的に許容される塩”は、親化合物がその酸または塩基塩を製造するように修飾されている、開示化合物の誘導体をいう。薬学的に許容される塩の例は、アミンなどの塩基性基の無機または有機酸塩；およびカルボン酸などの酸性基のアルカリまたは有機塩を含むが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩は、例えば、非毒性無機または有機酸から形成される、親化合物の慣用の非毒性塩または４級アンモニウム塩を含む。例えば、このような慣用の非毒性塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸および硝酸などの無機酸由来のもの；および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸およびイセチオン酸などの有機酸から製造した塩を含む。
本発明の薬学的に許容される塩は、慣用の化学法により、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成され得る。一般に、このような塩は遊離酸または塩基形態のこれらの化合物と、化学量論量の適切な塩基または酸を、水もしくは有機溶媒またはこれら二種の混合物中で反応させることにより製造でき；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。適当な塩の一覧は、適当な塩の一覧は、Allen, Jr., L.V., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, London, UK (2012)に見ることができる。その記載は、引用により本明細書に包含させる。
さらに、式Ｉおよび式IIの化合物は、プロドラッグを有し得る。インビボで変換して、生理活性剤(すなわち、式ＩまたはIIの化合物)を提供するあらゆる化合物は、本発明の範囲および精神内でプロドラッグである。種々の形態のプロドラッグが当分野で周知である。このようなプロドラッグ誘導体の例について
ａ)Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), and Widder, K. et al., eds., Methods in Enzymology, 112: 309-396, Academic Press (1985)；
ｂ)Bundgaard, H., Chapter 5: "Design and Application of Prodrugs", A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Krogsgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991)；
ｃ)Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8: 1-38 (1992)；
ｄ)Nielsen, N.M. et al., J. Pharm. Sci., 77: 285 (1988)；
ｅ)Kakeya, N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32: 692 (1984)；および
ｇ)Rautio, J., ed., Prodrugs and Targeted Delivery (Methods and Principles in Medicinal Chemistry), Vol. 47, Wiley-VCH (2011)
を参照のこと。
カルボキシ基を含む化合物は、体内で加水分解して、式Ｉまたは式IIの化合物それ自体を酸性するプロドラッグとして働く生理学的に加水分解可能なエステルを形成し得る。このようなプロドラッグは、多くの場合加水分解が原則として消化酵素の影響下に生じるため、好ましくは経口投与する。エステルそれ自体が活性であるかまたは加水分解が血中で生じるとき、非経腸投与を使用し得る。式Ｉまたは式IIの化合物の生理学的に加水分解可能なエステルの例は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルベンジル、４−メトキシベンジル、インダニル、フタリル、メトキシメチル、Ｃ１−６アルカノイルオキシ−Ｃ１−６アルキル(例えば、アセトキシメチル、ピバロイルオキシメチルまたはプロピオニルオキシメチル)、Ｃ１−６アルコキシカルボニルオキシ−Ｃ１−６アルキル(例えば、メトキシカルボニル−オキシメチルまたはエトキシカルボニルオキシメチル、グリシルオキシメチル、フェニルグリシルオキシメチル、(５−メチル−２−オキソ−１,３−ジオキソレン−４−イル)−メチル)および例えば、ペニシリンおよびセファロスポリン分野で使用される、他の周知の生理学的に加水分解可能なエステルを含む。このようなエステルは、当分野で知られる慣用の技法により製造され得る。
プロドラッグの製造は当分野で周知であり、例えば、King, F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, UK (Second Edition, reproduced, 2006); Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzymology, VCHA and Wiley-VCH, Zurich, Switzerland (2003); Wermuth, C.G., ed., The Practice of Medicinal Chemistry, Third Edition, Academic Press, San Diego, CA (2008)に記載される。
本発明は、本化合物に生じる全ての原子同位体を含むことを意図する。同位体は、同一原子番号を有するが、質量数が異なる原子を含む。一般的な例として、かつ限定せずに、水素の同位体は重水素およびトリチウムを含む。炭素の同位体は１３Ｃおよび１４Ｃを含む。同位体標識した本発明の化合物は、一般に、他の場合に用いた非標識反応材の替わりに、適切な同位体標識した反応材を使用して、当業者に知られる慣用の技法でまたは個々に記載したものに準ずる方法で製造され得る。
用語“溶媒和物”は、本発明の化合物と、有機であれ無機であれ、１以上の溶媒分子の物理的会合を意味する。この物理的会合は、水素結合を含む。ある場合、例えば、１以上の溶媒分子が結晶固体の結晶格子内に組み込まれているとき、溶媒和物は単離可能である。溶媒和物中の溶媒分子は、規則的配置および／または秩序立てられていない配置で存在し得る。溶媒和物は、化学量論または非化学量論量の溶媒分子を含み得る。“溶媒和物”は、溶液相および単離可能溶媒和物の両方を包含する。溶媒和物の例は、水和物、エタノラート、メタノラートおよびイソプロパノラートを含むが、これらに限定されない。溶媒和の方法は当分野で一般に知られる。
ここで使用する用語“患者”は、本発明の方法により処置される生物をいう。このような生物は、好ましくは、哺乳動物(例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど)を含むが、これらに限定されず、最も好ましくはヒトをいう。
ここで使用する用語“有効量”は、例えば、研究者または臨床医により探索されている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する、薬物または薬剤、すなわち本発明の化合物の量を意味する。さらに、用語“治療有効量”は、そのような量を受けていない対応対象と比較して、疾患、障害または副作用の処置、治癒、予防または軽快の改善または疾患または障害の進行速度の減少をもたらすあらゆる量を意味する。有効量を１以上の投与、適用または用量で投与でき、特定の製剤または投与経路に限定することを意図しない。本用語はまた、その範囲内に、正常な生理機能の増強に有効な量も含む。
ここで使用する用語“処置”は、状態、疾患、障害などの改善またはその症状の軽快をもたらす、あらゆる効果、例えば、低減、減少、調節、改善または排除を含む。
ここで使用する用語“医薬組成物”は、組成物をインビボまたはエクスビボの診断または治療使用に特に適切する、活性剤と、不活性であれ活性であれ、担体との組み合わせをいう。
治療使用のために、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容されるとして企図される。しかしながら、酸および塩基の薬学的に許容されない塩も、例えば、薬学的に許容される化合物の製造または精製に、利用され得る。
製造法
本発明の化合物は、当業者に知られる化学変換を利用して、次のスキームに記載するもののような方法により製造され得る。溶媒、温度、圧力および他の反応条件は、当業者により容易に選択され得る。出発物質は市販されているかまたは当業者により容易に製造される。これらのスキームは説明的であり、ここに開示する化合物の製造に当業者が使用し得る可能な技法を制限する意味はない。当業者には別の方法が明らかであり得る。さらに、合成における種々の工程を、別の順序または順番で実施し、所望の化合物を得ることができる。さらに、これらのスキームにおける別々の工程としての表示は、複数工程を同じ反応容器にはめ込むことによりまたは中間体の精製もしくは特徴付けをすることなく複数工程を実施することにより、直列的に実施することを排除しない。さらに、下記方法により製造される化合物の大部分を、当業者に周知の慣用の化学を使用してさらに修飾し得る。ここに引用する全ての文献を、その全体を引用により本明細書に包含させる。
国際公報ＷＯ２０１６／０７３７３８、ＷＯ２０１６／０７３７７０およびＷＯ２０１６／０７３７７４も参照し得る。
ここで使用するこれらの多くの化学変換への言及は、Smith, M.B. et al., March's Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms, and Structure, Fifth Edition, Wiley-Interscience, New York (2001)または合成有機化学の主題の他の標準テキストに見ることができる。ある変換は、反応性官能基が保護基でマスクされていることを必要とし得る。これらの基の導入、除去および反応条件に対する相対的感受性についての条件を説明する好都合な文献は、Greene, T.W. et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley-Interscience, New York (1999)である。
スキーム
トリアゾール４を、化合物１から次の方法で３工程で合成できた。酸１をｔｅｒｔ−ブチルカルバゼートで処理し、続いてＨＣｌでＢｏｃ基を脱保護して、ヒドラジド３を得た。化合物３と置換ベンズイミドアミド塩酸塩の縮合を、１１０℃においてピリジン中の塩基で実施して、トリアゾール４を得た。
オキサジアゾール６またはチアゾール７の合成をヒドラジド３と置換カルボン酸のＨＡＴＵカップリングにより実施して、中間体５を得た。化合物５とＰＯＣｌ３の高温での反応は、オキサジアゾール６への環化を実施した。しかしながら、化合物５をローソン試薬と反応させると、チアゾール７が得られた。
４−アミノチアジアゾール９の合成を、２工程合成により達成した。ヒドラジド３と置換イソシアネートの反応により、中間体８を得た。次いで、ローソン試薬での処理により、アミノチアジアゾール９を得た。
あるいは、４−アミノトリアゾールが所望であるなら、ヒドラジド３と置換カルバムイミドチオエートとの高温での縮合により、これを直接合成した。
２−アミノオキサジアゾール１３を、２工程で製造した。酸１から出発して、ジフェニルホスホリルアジドおよび塩基での７０℃での処理により、イソシアネート１１を得て、これをさらに置換カルバゼートと反応させて、中間体１２を得た。高温でのＰＯＣｌ３による環化により、２−アミノオキサジアゾール１３を得た。
２−アミノチアジアゾール１４の合成は、中間体１２をローソン試薬と高温で処理することにより達成した。
２−アミノチアゾール１６を、アミン１５から置換チオシアナトエタノンとの縮合による１工程で合成した。
２−アミノオキサゾールの合成を３工程で達成した。酸１から出発して、ジフェニルホスホリルアジドとの反応によりイソシアネート１１を得た。この中間体をさらに２−アミノ−(置換フェニル)エタノンと反応させて、尿素１７を得た。２−アミノオキサゾールへの環化は、１７を高温でＰＯＣｌ３で処理することにより実施した。
２−アミノトリアゾール２２を、４工程で製造した。アミン１５から出発して、ベンゾイルイソチオシアネートとの反応により、カルバモチオイルベンズアミド１９を得た。水酸化ナトリウムを用いるベンゾイル基の開裂により、チオ尿素２０を得た。硫黄部分のヨウ化メチルでのメチル化により、カルバムイミドチオエート２１を得た。最後に、置換カルバゼートとの縮合により、２−アミノトリアゾール２２を得た。
オキサゾール２４またはイミダゾール２５の合成は、酸１から２工程で達成した。置換２−アミノエタノンとのＨＡＴＵカップリングにより、アミド２３を得た。この中間体のＰＯＣｌ３での環化により、オキサゾール２４を得た。一方中間体２３の酢酸存在下、１２０℃における高沸点溶媒中の酢酸アンモニウム処理により、イミダゾール２５を得た。
２−アミノオキサジアゾール３０を次の方法で合成した。エステル２６の鹸化により、酸２７を得た。この中間体のジフェニルホスホリルアジドでの処理により、イソシアネート２８を得た。この化合物をさらに置換カルバゼートと反応させて、中間体２９を得た。後者を、高温でＰＯＣｌ３で環化させて、２−アミノオキサジアゾール３０を得た。
次の実施例は、当業者に本発明をどのように製造し、使用するかについて完全な開示および記載を提供するために提示し、発明者が発明として認識する範囲を限定する意図も、下記実験が実施されているまたは実施し得る全ての実験であることを表す意図もない。現在形で記載する実験の記載は必ずしも実施していないが、その記載はここに記載する性質のデータなどを作成するために実施し得ることが理解されるべきである。使用する数値(例えば、量、温度など)は正確を期するように努力しているが、ある程度の実験誤差があることは考慮されるべきである。
特に断らない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏度(℃)であり、圧力は大気圧または近大気圧である。次のものを含む標準的略語を使用する：wt＝野生型；bp＝塩基対；kb＝キロベース；nt＝ヌクレオチド；aa＝アミノ酸；ｓまたはsec＝秒；min＝分；ｈまたはhr＝時間；ng＝ナノグラム；μg＝マイクログラム；mg＝ミリグラム；ｇ＝グラム；kg＝キログラム；dlまたはdL＝デシリットル；μlまたはμL＝マイクロリットル；mlまたはmL＝ミリリットル；ｌまたはＬ＝リットル；μm＝マイクロモル；mM＝ミリモル；Ｍ＝モル；kDa＝キロダルトン；ｉ.ｍ.＝筋肉内；ｉ.ｐ.＝腹腔内；SCまたはSQ＝皮下；QD＝１日１回；BID＝１日２回；QW＝週１回；QM＝月１回；HPLC＝高速液体クロマトグラフィー；BW＝体重；Ｕ＝単位；ns＝統計的非有意；PBS＝リン酸緩衝化食塩水；IHC＝免疫組織化学；DMEM＝ダルベッコ改変イーグル培地；EDTA＝エチレンジアミン四酢酸。
材料および方法
次の一般的材料および方法を、記載するときは使用し、または次の実施例に使用し得る。
分子生物学の標準法は科学文献に記載される(例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001)；および細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ変異誘発(Vol. 1)、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング(Vol. 2)、糖複合体およびタンパク質発現(Vol. 3)ならびにバイオインフォマティクス(Vol. 4)を記載するAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY (2001)参照)。
科学文献は、免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化、ならびに化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の産生およびタンパク質の糖鎖付加を含むタンパク質精製の方法を記載する(例えば、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, Vols. 1-2, John Wiley and Sons, Inc., NY (2000)参照)。
例えば、抗原性フラグメント、リーダー配列、タンパク質折りたたみ、機能的ドメイン、糖鎖付加部位および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースは入手可能である(例えば、GCG(登録商標)Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA)；およびDeCypher(登録商標)(TimeLogic Corp., Crystal Bay, NV)参照)。
ここに記載する化合物の評価の基礎として役立ち得るアッセイおよび他の実験技術は科学文献に豊富である。
ＩＤＯ酵素アッセイおよびキヌレニン(ＫＹＮ)の細胞産生は、Sarkar, S.A. et al., Diabetes, 56: 72-79 (2007)に記載される。簡潔には、特記しない限り、全ての化学薬品はSigma-Aldrich(St. Louis, MO)から購入できる。１,０００ヒト島の群を１mL培地中、サイトカインと２４時間培養し、５分、８００×ｇの遠心分離により回収し、プロテアーゼ阻害剤含有１５０μL ＰＢＳ中、超音波処理し得る(セット２；Calbiochem, EMD Biosciences, San Diego, CA)。超音波処理物を１０分、１０,０００×ｇで遠心分離し、上清を、トリプリケートで、４０μl サンプルと等量の４０mmol／Ｌ アスコルビン酸(ｐＨ７.０に中和)、１００μmol／Ｌ メチレンブルー、２００μｇ／mL カタラーゼおよび４００μmol／ｌ Ｌ−Ｔｒｐを含む１００mmol／Ｌ リン酸カリウム緩衝液、ｐＨ６.５を３０分、３７℃でインキュベートすることによりアッセイし得る。アッセイを１６μL ３０％(ｗ／ｖ) トリクロロ酢酸(ＴＣＡ)を加えて停止させ、さらに６０℃で１５分インキュベートして、Ｎ−ホルミルキヌレニンをＫＹＮに加水分解し得る。混合物を次いで１２,０００rpmで１５分遠心分離でき、ＫＹＮを、９６ウェルマイクロタイタープレート中、等量の上清と２％(ｗ／ｖ) エールリッヒ試薬を氷酢酸中で混合し、４８０nmの吸光度をＬ−ＫＹＮを標準として使用して読むことにより定量し得る。島サンプルのタンパク質を、５９５nmでのBio-Radタンパク質アッセイにより定量し得る。島培養上清におけるＬ−ＫＹＮの検出のために、タンパク質を５％(ｗ／ｖ) ＴＣＡで沈殿させ、１２,０００rpmで１５分遠心分離し、上清中のＫＹＮを、上記のとおりエールリッヒ試薬で決定し得る。ＩＬ−４(１０μｇ／mL；５００〜２,０００単位／mL)および１−α−メチルＴｒｐ(１−ＭＴ；４０μmol／Ｌ)を記載するとおり、インキュベーション培地に加え得る。このアッセイはまた細胞ベースのアッセイの形に基づいてもよく、ＵＶ／Ｖｉｓ検出の代替としてＬＣＭＳ／ＭＳで定量し得る。
ウェスタンブロット分析。２４時間、マイアミ培地でサイトカイン存在下インキュベートした１,０００〜１,２００島の群を、上記のとおりＰＢＳ中に採取し、超音波処理でき、５０μｇタンパク質サンプルを１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで電気泳動し得る。ヒト−ＩＤＯプラスミド(３μｇ)または空ベクター細胞でトランスフェクトしたＣＯＳ７細胞(０.６×１０６細胞／６０mm３ペトリ皿)を、それぞれ陽性および陰性対照として使用し得る。タンパク質を、電気泳動により半乾燥方法でポリビニリジンフルオライド膜に移し、５％(ｗ／ｖ)脱脂粉乳でＴｒｉｓ緩衝化食塩水および０.１％Ｔｗｅｅｎ中１時間遮断し、一夜、抗ヒトマウスＩＤＯ抗体(１：５００；Chemicon, Temecula, CA)、ホスホ−ＳＴＡＴ１α ｐ９１およびＳＴＡＴ１α ｐ９１(１：５００；Zymed, San Francisco, CA)とインキュベートし得る。抗マウスホースラディッシュペルオキシダーゼ標識二次抗体(Jackson Immunolabs, West Grove, PA)と１時間インキュベーション後、免疫反応性タンパク質をECL PLUS(登録商標)ウェスタンブロッティング検出試薬(Amersham BioSciences, Buckinghamshire, U.K.)で可視化し得る。
ＩＤＯの免疫組織化学的検出。島を、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド(Invitrogen)で１時間固定し、溶融１０％ブタヒフゼラチンブロックに固定化し(３７℃)、最適切断温度化合物に包埋し得る。島組織に対する免疫蛍光染色を、膵臓・十二指腸ホメオボックス１(ＰＤＸ１)およびＩＤＯに対して生じさせた抗体で染色した７μm切片で実施し得る。抗原検索を、９７℃で、１０mmol／ｌ Ｔｒｉｓおよび１mmol／ｌ ＥＤＴＡ(ｐＨ９.０)を含む緩衝液中、３０分、水浴で実施し得る。切片を、ＰＢＳ中５％正常ヤギ血清で１時間遮断し得る。次いで、組織を、加湿チャンバー中、一夜、室温でマウスモノクローナル抗ヒトＩＤＯ抗体(１：２０；Chemicon)およびヤギポリクローナル抗ヒトＰＤＸ１抗体(１：２,０００；Dr. Chris Wright, School of Medicine, Vanderbilt, TNに依頼し得る)TNに依頼し得る)と反応させ得る。二次抗体抗ヤギ(Ｃｙ３で標識)および抗マウス(Ｃｙ２で標識)をJackson Immunolabsから購入でき、１：２００濃度で使用し得る。核をHoechst 33258(Molecular Probes, Eugene, OR)で染色し得る。オリンパスＤＳＵ(スピニングディスク共焦点)および浜松ORCA IIER単色ＣＣＤカメラを備えたオリンパス１Ｘ８１倒立電動顕微鏡からIntelligent Imaging Systemソフトウェアにより画像を所得できる。
本発明のＩＤＯ阻害剤を評価する別の手段はＷＯ２０１０／０２３３１６６に記載され、以下に要約する。
生化学アッセイ。ヒトおよびマウス両者のＩＤＯについてのｃＤＮＡクローンは単離され、配列決定により確認されており、市販されている。生化学的試験のためにＩＤＯを調製するために、Ｃ末端ＨｉｓタグＩＤＯタンパク質を、ＩＰＴＧ誘導型ｐＥＴ５ａベクター系を使用して大腸菌で産生させ、ニッケルカラムで単離し得る。一部精製したタンパク質の終了を、ゲル電気泳動により確認でき、濃度をタンパク質標準との比較により概算する。ＩＤＯ酵素活性をアッセイするために、キヌレニン産生のための９６ウェルプレート分光学的定量法を、公開されている手順により実施し得る(例えば、Littlejohn, T.K. et al., Prot. Exp. Purif., 19: 22-29 (2000)参照)。ＩＤＯ阻害性活性スクリーニングのために、化合物を、１００μL 反応体積中の５０ngのＩＤＯ酵素に対して、例えば、２００μMの単一濃度で、トリプトファンを、例えば、０μM、２μM、２０μMおよび２００μMの漸増濃度で加えて、評価し得る。キヌレニン産生を１時間目に測定し得る。
細胞ベースのアッセイ。ＣＯＳ−１細胞を、製造業者が推奨するとおり、リポフェクタミン２０００(Invitrogen)を使用してＩＤＯ ｃＤＮＡを発現するＣＭＶプロモーター駆動プラスミドに一過性にトランスフェクトし得る。細胞のコンパニオンセットを、ＴＤＯ発現プラスミドで一過性にトランスフェクトし得る。トランスフェクション４８時間後、細胞を、６×１０４細胞／ウェルで９６ウェル形式に割り当て得る。翌日、ウェルを洗浄してよく、２０μｇ／mL トリプトファンを含む新規媒体(無フェノールレッド)を阻害剤と共に加え得る。酵素アッセイについて先に記載のとおり、５時間で反応を停止させ、上清を採り、キヌレニンについて分光光度的にアッセイし得る。ＩＤＯ活性の最初の確認を得るために、化合物を、例えば、１００μMの単一濃度で評価し得る。選択した化合物について、より詳細な用量漸増プロファイルを集め得る。
薬力学および薬物動態評価。薬力学アッセイは、キヌレニンおよびトリプトファンの両方の血清レベルの測定に基づき得て、キヌレニン／トリプトファン比の計算は、ベースライントリプトファンレベルと無関係のＩＤＯ活性の推定値を提供する。血清トリプトファンおよびキヌレニンレベルをＨＰＬＣにより決定でき、血清化合物レベルはまた場合により同一ＨＰＬＣランで決定し得る。
化合物を、最初にマウスをＬＰＳで負荷し、次いで血清キヌレニンレベルがプラトーになった時点で化合物のボーラス用量を投与することにより評価し得る。キヌレニンプールが、１０分未満の活性半減期で急速に入れ替わるため、既存のキヌレニンは、ＩＤＯ阻害剤がキヌレニン産生に対して有する影響を過度にマスクすることは予測されない。各実験は、非ＬＰＳ暴露マウス(他のマウスの比較対照となるベースラインキヌレニンレベルを決定するため)および媒体単独を投与されているＬＰＳ暴露マウスのセット(ＩＤＯ活性化の陽性対照を提供するため)を含み得る。各化合物を、最初にマウスにおいて少なくとも１００mg／kgの範囲の高ｉ.ｐ.ボーラス用量で評価し得る。キヌレニンおよびトリプトファンレベルのＨＰＬＣ分析(薬力学分析)ならびに化合物レベル(薬物動態分析)のために、規定した感覚で採血し得る(例えば、化合物投与５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間および２４時間後、５０μL サンプル)。薬物動態データから、達成される化合物のピーク血清濃度を決定し、クリアランス速度を推定できる。種々の時点でキヌレニン／トリプトファン比に対して血清中の化合物レベルを比較することにより、インビボでのＩＤＯ阻害の有効ＩＣ５０がおおまかに推定され得る。有効性を示す化合物を評価して、ピーク濃度で１００％ＩＤＯ阻害を達成する最大用量を決定し得る。
分析的ＨＰＬＣ／ＭＳを次の方法で実施した。
方法Ａ：次の方法を使用するWaters Acquity SDS：１.７分かけて２〜９８％溶媒Ｂの直線勾配；２２０nmでＵＶ可視化；カラム：BEH C18 ２.１mm×５０mm；１.７μm粒子(温度５０℃に加熱)；流速：０.８ml／分；移動相Ａ：１００％水、０.０５％ＴＦＡ；移動相Ｂ：１００％アセトニトリル、０.０５％ＴＦＡ。
方法Ｂ：カラム：Waters Acquity UPLC BEH C18、２.１×５０mm、１.７μm粒子；移動相Ａ：５：９５アセトニトリル：０.１％トリフルオロ酢酸含有水；移動相Ｂ：９５：５アセトニトリル：０.１％トリフルオロ酢酸含有水；温度：５０℃；勾配：３分かけて０〜１００％Ｂ、次いで１００％Ｂに０.７５分維持；流速：１.００ml／分；検出：２２０nmのＵＶ。
方法Ｃ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：Chiral IC ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：７４／２６ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｄ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：Chiral Phenomenex Cellulose-4 ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：７０／３０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｅ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：Chiral Phenomenex Cellulose-4 ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：７０／３０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ ｗ／０.１％ＤＥＡ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｆ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：Chiral IC−４ ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：８０／２０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｇ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：Chiral IC−４ ２５０×４.６mm ＩＤ、５μm；流速：２.０ml／分；移動相：８０／２０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｈ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：Ｌｕｘ− セルロース−４ ２５０×４.６mm ＩＤ、５μm；流速：２.０ml／分；移動相：８０／２０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｉ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Ｂｅｒｇｅｒ Ｐｒｅｐ ＳＦＣ ＭＧII カラム：キラルＯＪ ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：８０／２０ ＣＯ２／ＩＰＡ ｗ／０.１％ＤＥＡ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｊ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Ｂｅｒｇｅｒ Ｐｒｅｐ ＳＦＣ ＭＧII；カラム：Chiral AD ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：６５／３５ ＣＯ２／ＩＰＡ ｗ／０.１％ＤＥＡ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｋ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Ｂｅｒｇｅｒ Ｐｒｅｐ ＳＦＣ ＭＧII。カラム；キラルＡＳ−４ ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：９０／１０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ ｗ／０.１％ＤＥＡ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｌ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Ｂｅｒｇｅｒ Ｐｒｅｐ ＳＦＣ ＭＧII ；カラム：キラルＯＪ ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８５.０ml／分；移動相：８０／２０ ＣＯ２／ＭｅＯＨ ｗ／０.１％ＤＥＡ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｍ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Berger Prep SFC MGII(LVL-L4021 Lab)；カラム：キラルＯＤ ２５×３cm ＩＤ、５μm；流速：８０.０ml／分；移動相：８５／１５ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
方法Ｎ：分取クロマトグラフィー条件：装置：Ａｕｒｏｒａ ＳＦＣ ＭＧII (ＬＶＬ−Ｌ４０２１Ｌａｂ)；カラム：キラルＯＤ ２５０×４.６mm ＩＤ、５μm；流速：３.０ml／分；移動相：８５／１５ ＣＯ２／ＭｅＯＨ；検出器波長：２２０nm。
製造例１Ａ：
撹拌中の１,４−ジオキサスピロ[４.５]デカン−８−オン(３００ｇ、１９２０.８６mmol、１.０当量)およびＮ−フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド(８２３.４７ｇ、２３０５.０３mmol、１.２当量)のＭＴＢＥ(７.５Ｌ)溶液に、Ｎ２下、−７８℃で２.０Ｍ ＮａＨＭＤＳのＴＨＦ溶液(１１５２.２mL、２３０５.０３mmol、１.２当量)を７０分かけて加え、混合物をさらに６０分撹拌した。反応混合物を室温に温め、ＴＬＣで出発物質の完全な消費が示されるまで一夜撹拌した。混合物をＫＨＳＯ４水溶液(１００ml)で反応停止させ、濾過して固体を除去し、濾液を完全に濃縮した。残留物に３Ｌ ＭＴＢＥを加え、次いで５％ＮａＯＨ(１.５Ｌ×３)で洗浄した。有機相を濃縮して、５６７ｇ粗製製造例１Ａ化合物(淡黄色油状物、収率１０２％)を得た。粗製物をさらに精製することなく次工程に直接使用できる。
製造例１Ａ：1H NMR(400 MHz, CDCl3): δ (ppm) 5.65 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 3.98 (d, J = 1.5 Hz, 4H), 2.53 (s,2H), 2.40 (s, 2H), 1.90 (t, J = 6.6 Hz, 2H)
製造例１Ｂ：
粗製製造例１Ａ化合物(６００ｇ、２.０８mol、１当量)、Ｂ２Ｐｉｎ２(６８７.１ｇ、２.７１mol、１.３当量)、ＫＯＡｃ(６１３ｇ、６.２４mol、３当量)、ＮａＢｒ(８６ｇ、０.８３３mol,０.４当量)およびＰｄ(ｄｐｐｆ)Ｃｌ２(７６ｇ、０.１mol、０.０５当量)のジオキサン(６.５Ｌ)中の混合物を、一夜加熱還流した。反応が完了したら、混合物を濃縮し、ＦＣＣ(２％→１０％→２０％ＥｔＯＡｃ／ＰＥ)で精製して、製造例１Ｂ化合物(３６９ｇ、６６％)を得た。
製造例１Ｂ：LC-MS: 267.1 (M+1)+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.46 (s, 1H), 3.98 (s, 4H), 2.37-2.35 (m, 4H), 1.74-1.60 (t, 2H), 1.24 (s, 12H)
製造例１Ｃ：
製造例１Ｂ化合物(３６８ｇ、１.３８mol、１.３当量)、４−クロロ−６−フルオロキノリン(１９５ｇ、１.０７mol、１当量)、Ｋ２ＣＯ３(４４５ｇ、３.２２mol、３当量)およびＰｄ(ＰＰｈ３)４(２５ｇ、２２mmol、０.０２当量)のジオキサン−水(３Ｌ、４：１)中の混合物を、一夜加熱還流した。溶液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで抽出した。ＦＣＣ(３８％ＥｔＯＡｃ／石油エーテル)での精製により、製造例１Ｃ化合物(２３６ｇ、７７％)を得た。
製造例１Ｃ：LC-MS: 286.1 (M+1)+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.80-8.29 (d, 1H), 8.11-8.07 (q, 1H), 7.63-7.61 (q, 1H), 7.47-7.46 (q, 1H), 7.26-7.22(m,1H), 5.75-5.74 (m, 1H), 4.08-4.05 (m, 4H), 2.63-2.59 (m, 2H),2.59-2.53(m,2H), 2.0-1.97(m,2H)
製造例１Ｄ：
製造例１Ｃ化合物(１２５ｇ、０.４４mol)のＩＰＡ(２Ｌ)溶液に、５５℃で１０％Ｐｄ／Ｃを加え、混合物をＨ２雰囲気下で一夜撹拌した。混合物を濾過し、濃縮して、粗製製造例１Ｄ化合物(１３０ｇ)を得て、これを次工程で直接使用した。
製造例１Ｅ：
製造例１Ｄ化合物(１００ｇ、０.３４８mol)を、４Ｎ ＨＣｌ(３００mL)のアセトン(１２００mL)溶液で４５℃で一夜処理した。混合物をＴＬＣでモニターした。次いで溶液を減圧下濃縮した。残留物を６Ｎ ＮａＯＨでｐＨ９に調節し、混合物を酢酸エチルおよび水に分配した。有機層を塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、淡黄色固体を得て、これを次いでヘキサンおよび酢酸エチル(２０％酢酸エチルから７０％酢酸エチル)を使用するシリカゲルカラムで精製して、製造例１Ｅ化合物を白色固体として得た、(４７ｇ＋２０ｇ混合物、収率＞５５％)を得た。製造例１Ｅ：LC-MS: 244.0 (M+1)+, 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.84 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 9.3, 5.7 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 10.3, 2.8 Hz, 1H), 7.52 (ddd, J = 9.2, 7.8, 2.7 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 3.69 (ddd, J = 12.1, 9.0, 3.3 Hz, 1H), 2.77-2.54 (m, 4H), 2.37 (ddd, J = 13.4, 5.9, 3.0 Hz, 2H), 2.04 (qd, J = 12.6, 5.3 Hz, 2H)
製造例１Ｆ：
製造例１Ｅ化合物(５７.８ｇ、２３７.８mmol)をＥｔＯＨ(２４０mL)に溶解し、０℃に冷却した。ＮａＢＨ４(９.９４ｇ、２６１.６mmol)を、温度を０〜１０℃の範囲内に維持しながら少しずつ加えた(発熱反応)。得られた懸濁液を２０分撹拌した。少量の反応混合物のＬＣ／ＭＳは、ケトンの消費を示した(m/z (M+H)+ = 244)。０℃でアセトン(５８mL)を１５分かけてゆっくり加えて、反応停止させた(発熱)。反応物を５００mLの飽和塩化アンモニウム水溶液および５００ｇの氷にゆっくり注加した。得られた水溶液をＥｔＯＡｃ(３×３００mL)で抽出し、合わせた有機フラクションを飽和塩化アンモニウム水溶液(２５０mL)および飽和水性塩化ナトリウム(２５０mL)で洗浄した。有機フラクションを無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下濃縮した。油状物を吸着するのに十分なシリカを加え、１０％ＭｅＯＨのＣＨ２Ｃｌ２溶液で希釈した。同様の量のシリカを、本物質の精製のためのシリカプラグとして使用した。シリカプラグを、ＵＶ活性物質がＴＬＣ(７：３ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、Ｒｆ＝０.４)でもはや検出されなくなるまで、１０％ＭｅＯＨのＣＨ２Ｃｌ２溶液で洗浄した。濾液を濃縮し、５００mLのトルエンに懸濁し、再び濃縮した。粗製の製造例１Ｆ化合物を黄色固体(５８.２ｇ)として単離し、それをさらに精製することなく次工程で使用した。
製造例１Ｇ：
製造例１Ｆ化合物(５８.２ｇ、２３７.８mmol)に、ＭｅＣＮ(１２５mL)およびピリジン(３８.７mL、４８０mmol)を加え、反応混合物を氷／水浴を使用して５℃に冷却した。メタンスルホニルクロライド(２６.０mL、３３６mmol)を５℃で滴下し(発熱反応)、反応混合物を１時間、５℃で撹拌し、次いで室温にし、さらに１６時間撹拌し、その間に白色沈殿が形成した。不均一混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液(２００mL)を加えて反応停止させ、ＣＨ２Ｃｌ２(３×３００mL)で抽出した。合わせた有機フラクションを無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下濃縮した。過剰のピリジンをトルエン(３×３００mL)との共沸により除去した。粗製物を次のとおりＨ２Ｏ／ＭｅＯＨから再結晶した：１mL／mmolのＨ２Ｏを加え、スラリーを油浴中１２０℃で加熱した。ＭｅＯＨを、固体が溶解するまで加えた(約０.５Ｌ)。冷却後白色結晶を濾過により集めて、製造例１Ｇ化合物(５８.６ｇ、＞２０：１ｄｒ、２工程を通して７６％)を得た。m/z (M+H)+ = 324.1. 1H-NMR (400 MHz;CDCl3): δ 8.82 (dd, J = 4.6, 0.2 Hz, 1H), 8.15-8.11 (m, 1H), 7.64-7.61 (m, 1H), 7.52-7.46 (m, 1H), 7.25 (s, 1H), 4.78 (tt, J = 10.9, 5.2 Hz, 1H), 3.24-3.16 (m, 1H), 3.07 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.42-2.38 (m, 2H), 2.16-2.12 (m, 2H), 1.93-1.66 (m, 4H)
製造例１Ｈ：
ジ−ｔｅｒｔ−ブチルマロネート(３３.５mL、１５０mmol)を、水氷浴で冷却した、撹拌中のＮａＨ(６.０ｇ、油中６０％懸濁液、１５０mmol)の１,２−ジメトキシエタン(１００mL)懸濁液に、Ａｒ下滴下した。１０分撹拌後、製造例１Ｇ化合物(１６.２ｇ、５０mmol)を加え、反応物を８５℃で２０時間加熱した。この時間の後、酢酸(１００mL)を加え、反応フラスコにト字管を取り付け、温度を１３０℃に上げた。１,２−ジメトキシエタンを、蒸留物が酸性になるまで大気圧下で留去した(約１００mL)。ト字管を外し、還流凝縮器を接続し、水(２０mL)を加え、反応物を１３０℃で１２時間加熱した。反応物を減圧下濃縮し、２００ｇの氷および１００mLの飽和ＮａＯＡｃ水溶液に注加した。製造例１Ｈ化合物を濾過し、さらにディーン・スターク装置中トルエンと還流させることにより乾燥させて、白色固体として単離した(１１.０ｇ、７６％)を得た。m/z (M+H)+ = 288.2. 1H-NMR (400 MHz;DMSO-d6): δ 12.05 (bs, 1H), 8.79 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 9.2, 5.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 11.0, 2.8 Hz, 1H), 7.66-7.61 (m, 1H), 7.50 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.41 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.28-2.23 (m, 1H), 1.87-1.78 (m, 2H), 1.73-1.64 (m, 6H)
製造例１Ｉ：
製造例１Ｈ化合物(１.４ｇ、４.８mmol)のＴＨＦ(１５mL)溶液に、ＮＥｔ３(１.３mL、９.６mmol)を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、トリメチルアセチルクロライド(０.７１３mL、５.８mmol)を滴下し、得られた溶液を３０分、０℃で撹拌した。別のフラスコで、(Ｒ)−４−フェニルオキサゾリジン−２−オン(３、１.０１ｇ、６.２４mmol)のＴＨＦ(４５mL)を、０℃で１Ｍ ＬｉＨＭＤＳのＴＨＦ溶液(６.２４mL、６.２４mmolの滴下)で処理し、０℃で撹拌した。リチアートをカニューレを介して最初のフラスコに加えた。反応混合物をｒｔに温め、３時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳは、出発カルボン酸の完全な消費と所望のイミドの形成を示した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液(５０mL)に注加し、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ(３×５０mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン０〜１００％勾配を使用するシリカ上のクロマトグラフィーに付して、製造例１Ｉ化合物を白色泡状物として８３％収率で得た。m/z (M+H)+ = 433.3. 1H-NMR (400 MHz;CDCl3): δ 8.80 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 9.1, 5.7 Hz, 1H), 7.63 (dd, J = 10.5, 2.5 Hz, 1H), 7.48-7.43 (m, 1H), 7.40-7.30 (m, 6H), 5.47-5.44 (m, 1H), 4.71 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.31-4.28 (m, 1H), 3.20-3.11 (m, 3H), 2.49-2.46 (m, 1H), 1.82-1.67 (m, 6H)
製造例１Ｊ：
製造例１Ｉ化合物(２１.６ｇ、５０mmol)の無水ＴＨＦ(２００mL)溶液を−４０℃に冷却し(アセトニトリル／ドライアイス浴を使用、いくぶん沈殿が生じる)、２Ｍ ＮａＨＭＤＳのＴＨＦ溶液(３０mL、６０mmol)を５分かけて加えた(５〜８℃の温度上昇が観察された)。得られた黄色反応混合物を１０分撹拌し、均一となり、ＭｅＩ(１０.６ｇ、７５mmol)を２分かけて滴下した(１０℃の温度上昇が観察されている)。反応混合物を１時間、−４０℃で撹拌し、ＬＣ／ＭＳは出発物質の完全な消費と所望のメチルイミドの形成を示した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液(４００mL)で急希釈し、二相混合物を１５分撹拌した。ｉＰｒＯＡｃ(１００mL)を加え、層を分離し、水層をｉＰｒＯＡｃ(３×５０mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物を４００mL熱アセトンに溶解することにより再結晶し、乳状溶液が形成されるまでＨ２Ｏを加え、その後加熱しながら再溶解させた(約３：１アセトン／Ｈ２Ｏ)。製造例１Ｊ化合物を白色針状物として得た(１５.０４ｇ、２回分、６８％)を得た。m/z (M+H)+ = 447.3. 1H-NMR (400 MHz;CDCl3): δ 8.81 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 10.6, 2.7 Hz, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.41-7.29 (m, 6H), 5.47 (dd, J = 8.8, 3.8 Hz, 1H), 4.69 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 4.38-4.30 (m, 1H), 4.26 (dd, J = 8.9, 3.9 Hz, 1H), 3.26-3.21 (m, 1H), 2.18-2.15 (m, 1H), 1.93-1.64 (m, 8H), 1.09 (d, J = 6.9 Hz, 3H)
製造例１Ｋ：
製造例１Ｊ化合物(８２.０ｇ、１８３.６mmol)のＴＨＦ(６１０mL)溶液に、０℃でＨ２Ｏ２水溶液(３５wt％、８２mL)およびＬｉＯＨ(７.０４ｇ、２９３.８mmol)のＨ２Ｏ(１８９mL)溶液を加えた。得られた反応混合物をｒｔにゆっくり温め、一夜撹拌した。反応物を０℃に冷却し、飽和重亜硫酸ナトリウム水溶液(２５０mL)を加えた。３０分撹拌後、ＴＨＦを減圧下除去した。酢酸(３４mL)、続いてＥｔＯＡｃ(３００mL)を加えた。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ(３×５００mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮した。褐色粗製反応混合物をＭｅＣＮ(４００mL)に懸濁し、懸濁液を激しく撹拌しながら還流させた。ｒｔに冷却後、固形物を濾過により集め、さらなるＭｅＣＮで洗浄した。製造例１Ｋ化合物を白色固体として得た(４５.４ｇ、８２％)を得た。m/z (M+H)+ = 302.2. 1H-NMR (400 MHz;DMSO-d6): δ 12.10 (s, 1H), 8.79 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.2, 5.9 Hz, 1H), 7.97-7.94 (m, 1H), 7.67-7.62 (m, 1H), 7.49 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.41-3.36 (m, 1H), 2.73-2.65 (m, 1H), 1.83-1.61 (m, 9H), 1.08 (d, J = 6.8 Hz, 3H)。０.７５ml／分流速で、キラルＨＰＬＣ、＞９９％ｅｅ(Chiralpak IC-3、３μM、４.６×２５０mm、１５分定組成７０％ヘプタン３０％ｉ−ＰｒＯＨで２３０nm検出)で所望のエナンチオマーは８.６分の保持時間を有し、不所望のエナンチオマーは９.５分に溶出した。
１Ｌ：ｔｅｒｔ−ブチル２−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ヒドラジンカルボキシレート
(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(１Ｋ)(１００mg、０.３３２mmol)のＤＭＦ(３mL)溶液に、ＨＡＴＵ(１４５mg、０.３８２mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１０分撹拌し、続いてｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート(０.０４７mL、０.３６５mmol)およびＮ−メチルモルホリン(０.１６mL、１.３３mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体１Ｌ(白色固体、１３０mg、０.３１３mmol、９４％収率)を得た。LC-MS C23H30FN3O3の分析計算値 415.23, 実測値[M+H] 416.3 Tr = 0.68分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ： 8.80 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 10.5, 2.8 Hz, 1H), 7.52-7.43 (m, 2H), 7.32 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 3.37-3.23 (m, 1H), 2.61-2.46 (m, 1H), 2.17-2.04 (m, 1H), 1.98-1.57 (m, 9H), 1.48 (s, 9H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
１Ｍ：(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド
中間体１Ｌ(３３０mg、０.７９４mmol)のＣＨ２Ｃｌ２(５mL)溶液に、ＨＣｌ溶液(４.０Ｍのジオキサン溶液)(３.９７mL、１５.８８mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。白色固体が３０分後析出した。反応混合物を減圧下濃縮して、中間体１Ｍを２ＨＣｌ塩として得た(白色固体、３１０mg、０.７５８mmol、９５％収率)を得た。LC-MS C18H22FN3O・2HClの分析計算値 315.17, 実測値[M+H] 316.1 Tr = 0.55分(方法A). 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ: 9.13 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.34-8.32 (m, 1H), 8.31 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.19 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.03 (ddd, J = 9.3, 7.9, 2.6 Hz, 1H), 3.78-3.68 (m, 1H), 2.96-2.84 (m, 1H), 2.18-1.70 (m, 9H), 1.25 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
実施例１：４−((１ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−クロロフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)−６−フルオロキノリン
封管中の中間体１Ｍ(１７.７１mg、０.０９３mmol)および４−クロロベンズイミドアミド塩酸塩(１７.７mg、０.０９３mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０６５mL、０.４６４mmol)の反応混合物を窒素気流で１分パージし、次いで密封し、１１０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、実施例１化合物(１０.８mg、０.０２４mmol、３１％収率)を得た。LC-MS C25H24ClFN4の分析計算値 434.17, 実測値[M+H] 435.3. Tr = 1.58分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6)δ: 8.80 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.9, 6.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 3.76 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 2.13-1.93 (m, 2H), 1.89-1.47 (m, 6H), 1.28 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.15 (br. s., 1H)
実施例２
２−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール
封管中の、４−フルオロベンズイミドアミド塩酸塩(１７.６mg、０.１００mmol)および(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド２ＨＣｌ塩(３０mg、０.０７７mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０６５mL、０.４６４mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣ／ＭＳで精製して、実施例２化合物(６.５mg、０.０１５mmol、２０％収率)を得た。LC-MS C25H23F2N3Oの分析計算値 419.18, 実測値[M+H] 420.3 Tr = 1.67分(方法B). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.15-8.00 (m, 3H), 7.93 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 3.84-3.79 (m, 1H), 3.64-3.51 (m, 1H), 2.13-1.92 (m, 2H), 1.90-1.57 (m, 6H), 1.35 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.29 (br. s., 1H)
実施例３
６−フルオロ−４−((１ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−フルオロフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノリン
封管中、４−フルオロベンズイミドアミド塩酸塩(１７.６mg、０.１００mmol)および(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド.２ＨＣｌ塩(３０mg、０.０７７mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０６５mL、０.４６４mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣ／ＭＳで精製して、実施例２(上記)および実施例３化合物(１７mg、０.０４０mmol、５２％収率)を得た。LC-MS C25H24F2N4の分析計算値 418.48, 実測値[M+H] 419.3. Tr = 1.39分(方法B). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.9, 5.9 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.93 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.25 (br. s., 2H), 3.78-3.65 (m, 2H), 2.12-1.93 (m, 2H), 1.89-1.47 (m, 6H), 1.28 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.16 (br. s., 1H)
実施例４
２−(４−クロロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール
４Ａ：４−クロロ−Ｎ’−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ベンゾヒドラジド
４−クロロ安息香酸(１４.５mg、０.０９３mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に、ＨＡＴＵ(３９mg、０.１０mmol)を加え、反応混合物をｒｔで１０分撹拌し、続いて中間体１Ｂ(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド、２ＨＣｌ(３０mg、０.０７７mmol)および４−メチルモルホリン(０.０５１mL、０.４６mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体４Ａ(白色固体、２９mg、０.０６４mmol、８３％収率)を得た。LC-MS C25H25ClFN3O2の分析計算値 453.16, 実測値[M+H] 454.3 Tr = 0.71分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 10.31 (br. s., 1H), 9.97 (s, 1H), 8.69 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.11 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.59 (dd, J = 10.5, 2.5 Hz, 1H), 7.45 (ddd, J = 9.1, 7.9, 2.6 Hz, 1H), 7.34-7.25 (m, 2H), 7.18 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 3.19 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 2.86-2.75 (m, 1H), 2.15-2.01 (m, 1H), 1.95-1.64 (m, 7H), 1.61-1.47 (m, 1H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H)
実施例４：２−(４−クロロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール
中間体４Ａ ４−クロロ−Ｎ’−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ベンゾヒドラジド(２８mg、０.０６２mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、実施例４化合物(１５mg、０.０３４mmol、５５.２％収率)を得た。LC-MS C25H23ClFN3Oの分析計算値 435.15, 実測値[M+H] 436.3 Tr = 1.94分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 8.02-7.91 (m, 3H), 7.66 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 7.58 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.61 (s, 2H), 2.14-1.94 (m, 2H), 1.91-1.58 (m, 6H), 1.36 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.32 (br. s., 1H)
実施例５
２−(４−クロロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール
４−クロロ−Ｎ’−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ベンゾヒドラジド(２８mg、０.０６２mmol)およびローソン試薬(１００mg、０.２４７mmol)のトルエン(４mL)中の反応混合物を１２０℃で１.５時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、実施例５化合物(１３.４mg、０.０２９mmol、４７％収率)を得た。LC-MS C25H23ClFN3S, 451.13, 実測値[M+H]の分析計算値 452.3 Tr = 1.97分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.83 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 7.65 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.2 Hz, 3H), 3.86-3.78 (m, 1H), 3.61-3.50 (m, 1H), 2.12-1.97 (m, 2H), 1.92-1.76 (m, 3H), 1.72 (d, J = 9.4 Hz, 2H), 1.61 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 1.39 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.34-1.36 (m, 1H)
実施例６
４−(５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−イル)ベンゾニトリル
６Ａ：４−シアノ−Ｎ’−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ベンゾヒドラジド
４−シアノ安息香酸(１６.７９mg、０.１１４mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に、ＨＡＴＵ(４７.０mg、０.１２４mmol)を加え、反応混合物をｒｔで１０分撹拌し、続いて(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド(３０mg、０.０９５mmol)および４−メチルモルホリン(０.０７mL、０.５８mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで３時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ＤＣＭ中０〜６０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体６Ａ(白色固体、２４mg、０.０５４mmol、５７％収率)を得た。LC-MS C26H25FN4O2の分析計算値 444.20, 実測値[M+H] 445.2 Tr = 0.68分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.76 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 8.03-7.98 (m, 2H), 7.88 (dd, J = 10.7, 2.8 Hz, 1H), 7.86-7.82 (m, 2H), 7.65-7.53 (m, 2H), 3.48-3.37 (m, 1H), 2.91-2.81 (m, 1H), 2.15-1.95 (m, 4H), 1.94-1.70 (m, 5H), 1.26 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
実施例６：４−(５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−イル)ベンゾニトリル
４−シアノ−Ｎ’−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ベンゾヒドラジド(２４mg、０.０５４mmol)およびローソン試薬(８７mg、０.２１６mmol)のトルエン(４mL)中の反応混合物を１２０℃で１.５時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、実施例６化合物(１２.９mg、０.０２９mmol、５３.４％収率)を得た。LC-MS C26H23FN4Sの分析計算値 442.16, 実測値[M+H] 443.1 Tr = 1.59分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.83 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 8.08 (dd, J = 9.1, 5.9 Hz, 1H), 8.03-7.91 (m, 3H), 7.72-7.62 (m, 1H), 7.60 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 3.88 (dd, J = 10.8, 6.6 Hz, 1H), 3.42 (br. s., 1H), 2.05 (br. s., 2H), 1.95-1.55 (m, 6H), 1.40 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.35 (d, J = 13.0 Hz, 1H)
実施例７
Ｎ−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン
７Ａ：Ｎ−(４−フルオロフェニル)−２−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ヒドラジンカルボキサミド
(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド、２ＨＣｌ(４２mg、０.１０８mmol)のＴＨＦ(２mL)懸濁液に、４−フルオロフェニルイソシアナート(１７.０５mg、０.１２４mmol)のＴＨＦおよびＴＥＡ(０.０９mL、０.６４９mmol)溶液を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで反応停止させ、減圧下濃縮して、中間体７Ａ(白色固体、４４mg、０.０９７mmol、９０％収率)を得た。粗製生成物を精製することなく次工程反応で使用した。LC-MS C25H26F2N4O2の分析計算値 452.20, 実測値[M+H] 453.2 Tr = 0.71分(方法A)
実施例７：Ｎ−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン
Ｎ−(４−フルオロフェニル)−２−((Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノイル)ヒドラジンカルボキサミド(２０mg、０.０４４mmol)およびローソン試薬(７１.５mg、０.１７７mmol)のトルエン(４mL)中の反応混合物を、１２０℃で２０時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、遠心蒸発により乾燥させて、実施例７化合物(３.５mg、０.００７２mmol、１６.３％収率)を得た。LC-MS C25H24F2N4Sの分析計算値 450.17, 実測値[M+H] 451.2 Tr = 1.63分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.83 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.16-8.04 (m, 1H), 7.97 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 7.73-7.50 (m, 4H), 7.16 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.67-3.34 (m, 2H), 2.07-1.56 (m, 8H), 1.44 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 1.30 (d, J = 6.5 Hz, 3H)
実施例９〜１５
実施例９〜１５化合物を、中間体１Ｂから、対応するイミドアミドを使用して、実施例１の方法に従い製造した。
実施例１６〜１９
実施例１６〜１９化合物を、中間体１Ｂから、対応するイミドアミドを使用して、実施例２または実施例４の方法に従い製造した。
実施例２０
５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
２０Ａ：１−(４−メトキシフェニル)チオ尿素
１−イソチオシアナト−４−メトキシベンゼン(０.６０ｇ、３.６３mmol)のアセトニトリル(５mL)溶液に、水酸化アンモニウム溶液(２８％wt溶液)(４.５５ｇ、３６.３mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。白色固体が析出した。固体を濾過して、中間体２０Ａ(白色固体、０.６５ｇ、３.５７mmol、９８％収率)を得た。LC-MS C8H10N2OSの分析計算値 182.05, 実測値[M+H] 183.0 Tr = 0.55分(方法A)
２０Ｂ：メチル４−メトキシフェニルカルバムイミドチオエート
１−(４−メトキシフェニル)チオ尿素(０.６５ｇ、３.５７mmol)のアセトニトリル(１２mL)溶液に、ヨウ化メチル(１.１２mL、１７.８３mmol)を加えた。反応混合物を窒素気流下、６５℃で３時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮して、中間体２０ＢをＨＩ塩(白色固体、１.１ｇ、３.４０mmol、９５％収率)として得た。LC-MS C9H12N2OS・HIの分析計算値 196.07, 実測値[M+H] 197.0 Tr = 0.50分(方法A 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 7.27 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.06 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.67 (s, 3H)
実施例２０：５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中、メチル(４−メトキシフェニル)カルバムイミドチオエート、ヨウ化物塩(２７.０mg、０.０８４mmol)および(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド、２ＨＣｌ(２５mg、０.０６４mmol)(実施例１の中間体１Ｂ)のピリジン(１.０mL)およびＴＥＡ(０.０６mL、０.３９mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１３０℃で３時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣ／ＭＳで精製して、実施例２０化合物(８.４mg、０.０１８mmol、２８.１％収率)を得た。LC-MS C26H28FN5Oの分析計算値 445.22, 実測値[M+H] 446.2 Tr = 1.15分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.82 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.70 (br. s., 1H), 8.08 (dd, J = 8.8, 6.1 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.71-3.51 (m, 3H), 3.38 (br. s., 1H), 3.27-3.09 (m, 1H), 2.03-1.52 (m, 8H), 1.24 (d, J = 6.1 Hz, 4H)
実施例２１
Ｎ−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
２１Ａ：１−(４−フルオロフェニル)チオ尿素
１−フルオロ−４−イソチオシアナトベンゼン(０.５ｇ、３.２６mmol)のアセトニトリル(５mL)溶液に、水酸化アンモニウム溶液(４.０９ｇ、３２.６mmol、２８％wt.)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液および酢酸エチルで希釈した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体２１Ａ(白色固体、０.５３ｇ、３.１１mmol、９５％収率)、LC-MS C7H7FN2Sの分析計算値 170.03, 実測値[M+H] 171.0. Tr = 0.56分(方法A)
２１Ｂ：メチル４−フルオロフェニルカルバムイミドチオエート
１−(４−フルオロフェニル)チオ尿素(０.５３ｇ、３.１１mmol)のアセトニトリル(１８mL)溶液に、ヨウ化メチル(０.９８mL、１５.５７mmol)を加えた。反応混合物を窒素気流下、６５℃で３時間加熱した。反応混合物を冷却し、混合物を少量まで減圧下濃縮し、残留物にエーテルを加え、減圧下濃縮して、中間体２１Ｂ(淡黄色固体、０.９０ｇ、２.８９mmol、９３％収率)を得た。LC-MS C8H9FN2S.HIの分析計算値 184.05, 実測値[M+H] 185.0. Tr = 0.48分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 9.26 (br. s., 2H), 7.48-7.30 (m, 4H), 2.68 (s, 3H)
実施例２１：Ｎ−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中の、メチル(４−フルオロフェニル)カルバムイミドチオエート、ヨウ化物塩(２６.０mg、０.０８４mmol)および(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド、２ＨＣｌ(２５mg、０.０６４mmol)(実施例１の中間体１Ｂ)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０５４mL、０.３８６mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１３０℃で３時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２１化合物(８.９mg、０.０２０mmol、３１.３％)を得た。LC-MS C25H25F2N5の分析計算値 433.21, 実測値[M+H] 434.3. Tr = 1.25分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 9.04 (br. s., 1H), 8.83 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 8.9, 5.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.57-7.45 (m, 3H), 7.03 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 3.48 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 3.22 (br. s., 1H), 1.98 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 1.89-1.52 (m, 6H), 1.26 (d, J = 6.4 Hz, 4H)
実施例２２
５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−Ｎ−フェニル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中の、メチルフェニルカルバムイミドチオエート、ヨウ化物塩(２５.５mg、０.０８７mmol)および(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンヒドラジド、２ＨＣｌ(２６mg、０.０６７mmol)(実施例１の中間体１Ｂ)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０６mL、０.４１mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で３時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２２化合物(７.３mg、０.０１７mmol、２６％収率)を得た。LC-MS C25H26FN5の分析計算値 415.51, 実測値[M+H] 416.3. Tr = 1.24分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.88 (br. s., 1H), 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.1, 5.9 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 6.76 (br. s., 1H), 3.71 (m, 1H), 3.20 (br. s., 1H), 1.96 (d, J = 11.4 Hz, 2H), 1.87-1.51 (m, 6H), 1.24 (d, J = 6.6 Hz, 4H)
実施例２３
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２３Ａ：ｔｅｒｔ−ブチル２−(４−クロロベンゾイル)ヒドラジンカルボキシレート
４−クロロ安息香酸(０.３ｇ、１.９１６mmol)のＤＭＦ(１０mL)溶液に、ＨＡＴＵ(０.８０１ｇ、２.１０８mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで５分撹拌し、続いてｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート(０.２８mL、２.１１mmol)およびモルホリン(０.４６mL、３.８３mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ヘキサン中０〜３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体２３Ａ(白色固体、０.４５ｇ、１.６６２mmol、８７％収率)を得た。LC-MS C12H15ClN2O3の分析計算値 270.08, 実測値[M+H] 215.4 (M-55). Tr = 0.82分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 7.98 (br. s., 1H), 7.75 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.91-6.40 (m, 1H), 1.51 (s, 9H)
２３Ｂ：４−クロロベンゾヒドラジド
ｔｅｒｔ−ブチル２−(４−クロロベンゾイル)ヒドラジンカルボキシレート(０.４２ｇ、１.５５１mmol)のＤＣＥ(７mL)中の反応混合物に、４Ｎ ＨＣｌ溶液のジオキサン(３.１０mL、１２.４１mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで３時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、濾過して、中間体２３Ｂ ＨＣｌ塩(白色固体、０.３ｇ、１.４４９mmol、９３％収率)を得た。LC-MS C7H7ClN2O・HClの分析計算値 170.03, 実測値[M+H] 171.4. Tr = 0.55分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.12-11.43 (m, 1H), 10.97-9.58 (m, 2H), 8.11-7.84 (m, 2H), 7.76-7.48 (m, 2H)
２３Ｃ：２−(４−クロロベンゾイル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド
(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(０.１ｇ、０.３３２mmol)のトルエン(３mL)懸濁液に、ジフェニルホスホリルアジド(０.０８３mL、０.３８２mmol)およびＴＥＡ(０.０６mL、０.４３１mmol)を加えた。密封バイアル中の反応混合物は、ＴＥＡを加えた後透明溶液になった。バイアルを密封し、７０℃で２.５時間加熱した。反応混合物をｒｔに冷却し、減圧下濃縮した。粗製混合物６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−イソシアナトエチル)シクロヘキシル)キノリン(４５mg、０.１５１mmol)のＴＨＦ(２mL)懸濁液に、４−クロロベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(３５.９mg、０.１７３mmol)およびＴＥＡ(０.１０５mL、０.７５４mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで反応停止させ、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。生成物含有フラクションを合わせ、減圧下濃縮して、中間体２３ＣをＴＦＡ塩(白色固体、６９mg、０.１１０mmol、７３％収率)として得た。LC-MS C25H26ClFN4O2・TFAの分析計算値 468.95, 実測値[M+H] 469.6. Tr = 0.74分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 9.05 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.42-8.23 (m, 2H), 8.11 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.98 (ddd, J = 9.3, 7.9, 2.6 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.31-7.12 (m, 1H), 4.23 (dd, J = 10.0, 6.5 Hz, 1H), 3.67 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.16-1.63 (m, 9H), 1.26-1.20 (m, 3H)
実施例２３：５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２−(４−クロロベンゾイル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(３０mg、０.０５１mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を、８５℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２３化合物(１０.７mg、０.０２３mmol、４５％収率)を得た。LC-MS C25H24ClFN4Oの分析計算値 450.16, 実測値[M+H] 450.9 Tr = 1.60分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 7.86-7.75 (m, 3H), 7.65 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.00 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.55-3.44 (m, 1H), 1.95-1.57 (m, 9H), 1.25 (d, J = 6.2 Hz, 3H)
実施例２４
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン
２−(４−クロロベンゾイル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(３５mg、０.０６０mmol)およびローソン試薬(９７mg、０.２４０mmol)のトルエン(４mL)中の反応混合物を、１１６℃で２０時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２４化合物(５.９mg、０.０１３mmol、２１％収率)を得た。LC-MS C25H24ClFN4Sの分析計算値 466.14, 実測値[M+H] 467.2 Tr = 1.62分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.82 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.68-7.60 (m, 1H), 7.51 (d, J = 8.2 Hz, 3H), 4.18 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 3.52 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 1.98-1.59 (m, 9H), 1.24 (d, J = 6.2 Hz, 3H)
実施例２５
Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２５Ａ：ｔｅｒｔ−ブチル２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキシレート
４−メトキシ安息香酸(０.３ｇ、１.９７２mmol)のＤＭＦ(１０mL)溶液に、ＨＡＴＵ(０.８３ｇ、２.１６９mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで５分撹拌し、続いてｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート(０.２８７ｇ、２.１６９mmol)およびＮ−メチルモルホリン(０.４６mL、３.８３mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ヘキサン中０〜３５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体２５Ａ(白色固体、０.４４ｇ、１.６５２mmol、８４％収率)を得た。LC-MS C13H18N2O4の分析計算値 266.13, 実測値[M+H] 211.4 (M-55). Tr = 0.73分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 7.78 (d, J = 9.0 Hz, 3H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 1.51 (s, 9H)
２５Ｂ：４−メトキシベンゾヒドラジド
ｔｅｒｔ−ブチル２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキシレート(０.４２ｇ、１.５５１mmol)のＤＣＥ(７mL)中の反応混合物に、４Ｎ ＨＣｌ溶液のジオキサン(３.１０mL、１２.４１mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで３時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈し、濾過して、中間体２５Ｂ ＨＣｌ塩(白色固体、０.３２ｇ、１.５７９mmol、９６％収率)を得た。LC-MS C8H10N2O2・HClの分析計算値 166.07, 実測値[M+H] 167.4. Tr = 0.48分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 11.41 (br. s., 1H), 10.39 (br. s., 2H), 8.26-7.70 (m, 2H), 7.36-6.89 (m, 2H), 3.84 (s, 3H)
２５Ｃ：Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド
６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−イソシアナトエチル)シクロヘキシル)キノリン(４５mg、０.１５１mmol)のＴＨＦ(２mL)懸濁液に、４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(３５.１mg、０.１７３mmol)およびＴＥＡ(０.１０５mL、０.７５４mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで反応停止させ、減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ＤＣＭ〜５０％の１０％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体２５Ｃ(白色固体、３８mg、０.０８２mmol、５４.２％収率)を得た。LC-MS C26H29FN4O3の分析計算値 464.22, 実測値[M+H] 465.6. Tr = 0.71分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.21 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.53 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.38-7.25 (m, 3H), 7.12-6.97 (m, 2H), 6.45 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.93 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 3.78-3.60 (m, 1H), 2.93-2.81 (m, 1H), 1.62-1.09 (m, 9H), 0.69 (d, J = 6.6 Hz, 3H)
実施例２５：Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド(１７mg、０.０３７mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を、９５℃で２時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２５化合物(８.７mg、０.０１９mmol、５２％収率)を得た。LC-MS C26H27FN4O2の分析計算値 446.21, 実測値[M+H] 447.1 Tr = 1.42分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.51 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.97 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 3.80 (s,3H), 3.55 (br. s., 1H), 1.96-1.57 (m, 9H), 1.24 (d, J = 6.2 Hz, 3H)
実施例２６
Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン
Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド(１８mg、０.０３９mmol)およびローソン試薬(６２.７mg、０.１５５mmol)のトルエン(３mL)中の反応混合物を、１１６℃で２６時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２６化合物(２.７mg、０.００５７８mmol、１５％収率)を得た。LC-MS C26H27FN4OSの分析計算値 462.1, 実測値[M+H] 463.1. Tr = 1.41分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.82 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 7.50 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.50 (br. s., 1H), 1.99-1.57 (m, 9H), 1.24 (br. s., 3H)
実施例２７
５−シクロヘキシル−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２７Ａ：６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−イソシアナトエチル)シクロヘキシル)キノリン
(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(４００mg、１.３２７mmol)のトルエン(１５mL)溶液に、ジフェニルホスホリルアジド(０.３５mL、１.６０mmol)およびトリエチルアミン(０.２０mL、１.７３mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応混合物をｒｔに冷却した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物を精製することなく次工程反応で使用した。
２７Ｂ：ｔｅｒｔ−ブチル２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチルカルバモイル)ヒドラジンカルボキシレート
６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−イソシアナトエチル)シクロヘキシル)キノリン(３１０mg、１.０３９mmol)のＴＨＦ(５mL)溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルヒドラジンカルボキシレート(１６５mg、１.２４７mmol)およびＤＩＰＥＡ(０.３６mL、２.０７８mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ヘキサン中０〜１０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体２７Ｂ(白色固体、０.３０ｇ、０.６９７mmol、６７％収率)を得た。LC-MS C23H31FN4O3の分析計算値 430.24, 実測値[M+H] 431.3. Tr = 0.70分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.81 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 10.6, 2.7 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J = 9.2, 8.0, 2.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.20 (s, 1H), 5.95 (s, 1H), 5.06 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 4.26 (tq, J = 9.7, 6.5 Hz, 1H), 3.50 (d, J = 4.9 Hz, 4H), 3.34-3.15 (m, 1H), 2.04-1.61 (m, 9H), 1.49 (s, 9H), 1.24-1.18 (m, 3H), 1.09-0.93 (m, 1H)
２７Ｃ：Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド
ｔｅｒｔ−ブチル２−(((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)カルバモイル)ヒドラジンカルボキシレート(０.３ｇ、０.６９７mmol)のＤＣＭ(６mL)溶液に、ＨＣｌ(４.０Ｍのジオキサン溶液)(３.５mL、１３.９４mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。白色固体が析出した。反応混合物を減圧下濃縮して、中間体２７Ｃ ２ＨＣｌ塩(白色固体、０.２５ｇ、０.６２mmol、８９％収率)を得た。LC-MS C18H23FN4O・2HClの分析計算値 330.19, 実測値[M+H] 331.45. Tr = 0.83分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 9.11 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 8.41-8.25 (m, 2H), 8.12 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.02 (ddd, J = 9.5, 7.9, 2.6 Hz, 1H), 4.33-4.09 (m, 1H), 3.78-3.69 (m, 1H), 2.17-1.65 (m, 9H), 1.25 (d, J = 6.6 Hz, 3H)
２７Ｄ：２−(シクロヘキサンカルボニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド
シクロヘキサンカルボン酸(１２.３９mg、０.０９７mmol)のＤＭＦ(１mL)溶液に、ＨＡＴＵ(３６.８mg、０.０９７mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで５分撹拌し、続いてＮ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド、２ＨＣｌ(３０mg、０.０７４mmol)およびＤＩＰＥＡ(０.１３mL、０.７４４mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。粗製抽出物を精製することなく次工程反応で使用した。
実施例２７：５−シクロヘキシル−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２−(シクロヘキサンカルボニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)ヒドラジンカルボキサミド(３０mg、０.０６８mmol)のＰＯＣｌ３(０.３mL、３.２２mmol)中の反応混合物を窒素気流で１分パージし、次いでバイアルを密封し、１００℃で３時間、加熱した。反応混合物を冷却した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例２７化合物(１３mg、０.０３０mmol、４４％収率)を得た。LC-MS C25H31FN4Oの分析計算値 422.25, 実測値[M+H] 423.1, Tr = 1.37分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.88 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.79-7.68 (m, 1H), 7.59 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 2.99-2.85 (m, 1H), 2.71 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 1.97-1.53 (m, 13H), 1.48-1.26 (m, 4H), 1.24-1.09 (m, 5H)
実施例２８〜３５化合物を、対応する酸を使用して、実施例２５または実施例２７の方法に従い、製造した。
実施例３６
Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４−(４−メトキシフェニル)チアゾール−２−アミン
３６Ａ：１−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チオ尿素
Ｏ−((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル)カルボノイソチオシアナチデート(９１mg、０.３２３mmol)のＤＣＥ(２mL)中の反応混合物に、ＤＩＰＥＡ(０.１１mL、０.５９mmol)および(Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エタナミン(８０mg、０.２９４mmol)(中間体)のＤＣＭ(２mL)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物に、さらにＯ−((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メチル)カルボノイソチオシアナチデート(２０mg)およびＴＨＦ(２ml)を加えた。反応混合物をｒｔで一夜撹拌した。反応混合物にピペリジン(０.６０mL、５.９mmol)をを加え、反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで希釈し、減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、０〜５０％の１０％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体３６Ａ(白色固体、１１mg、０.０３３mmol、１１.３％収率)を得た。LC-MS C18H22FN3Sの分析計算値 331.45, 実測値[M+H] 332.5. Tr = 0.63分(方法A)
実施例３６：Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４−(４−メトキシフェニル)チアゾール−２−アミン
１−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チオ尿素(１１mg、０.０３３mmol)および２−ブロモ−１−(４−メトキシフェニル)エタノン(１１.４０mg、０.０５０mmol)中の反応混合物に、１,４−ジオキサン(３mL)を加えた。得られた混合物を６８℃で１.５時間、加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例３６化合物(１０.７mg、０.０２３mmol、６９％収率)を得た。LC-MS C27H28FN3OSの分析計算値 461.19, 実測値[M+H] 462.3 Tr = 1.34分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.80 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 8.00-7.92 (m, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.69-7.60 (m, 1H), 7.55-7.47 (m, 2H), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.79 (s, 1H), 4.19 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.44 (br. s., 1H), 1.99-1.54 (m, 9H), 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H)
実施例３７
４−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チアゾール−２−アミン
３７Ａ：１−(４−クロロフェニル)−２−チオシアナトエタノン
２−ブロモ−１−(４−クロロフェニル)エタノン(０.６ｇ、２.５７mmol)、アンモニウムチオシアナート(０.２６ｇ、３.３５mmol)のアセトニトリル(１０mL)中の反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。固体が析出した。上層溶液を次工程反応で使用した。LC-MS C9H6ClNOSの分析計算値 210.99, 実測値[M+H] 211.9 Tr = 0.92分(方法A)
実施例３７：４−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チアゾール−２−アミン
(Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エタナミン(３０mg、０.１１０mmol)のジオキサン(２mL)溶液に、１−(４−クロロフェニル)−２−チオシアナトエタノン(２５.６mg、０.１２１mmol)のＣＨ３ＣＮ中の粗製溶液を加えた。反応混合物を６５℃で１時間、加熱した。さらに１−(４−クロロフェニル)−２−チオシアナトエタノン(２５.６mg、０.１２１mmol)のＣＨ３ＣＮおよびＴＥＡ(０.３mL)溶液を加え、次いで１００℃で２.５時間、加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例３７化合物(９.４mg、０.０２０mmol、１８.１％収率)を得た。LC-MS C26H25ClFN3Sの分析計算値 465.14, 実測値[M+H] 465.9 Tr = 1.55分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.80 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 8.00-7.91 (m, 1H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.70-7.56 (m, 2H), 7.49 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.04 (s, 1H), 4.21 (br. s., 1H), 3.89 (s, 1H), 1.98-1.51 (m, 9H), 1.24 (d, J = 6.3 Hz, 3H)
実施例３８
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール−２−アミン
３８Ａ：１−(２−(４−クロロフェニル)−２−オキソエチル)−３−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)尿素
(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(１２０mg、０.３９８mmol)のトルエン(５mL)溶液に、ＤＰＰＡ(０.１１mL、０.５mmol)およびトリエチルアミン(０.１mL、０.６mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応物をｒｔに冷却し、減圧下濃縮した。残留物を精製することなく次工程反応で使用した。粗製６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−イソシアナトエチル)シクロヘキシル)キノリン(８５mg、０.２８５mmol)のＴＨＦ(２mL)溶液に、２−アミノ−１−(４−クロロフェニル)エタノン、ＨＣｌ(８８mg、０.４２７mmol)(中間体)およびＤＩＰＥＡ(０.３mL、１.７１mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、中間体３８ＡをＴＦＡ塩(白色固体、９０mg、０.１３９mmol、４９％収率)として得た。LC-MS C26H27ClFN3O2・TFAの分析計算値 467.17, 実測値[M+H] 468.2. Tr = 0.80分(方法A)
実施例３８：５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール−２−アミン
１−(２−(４−クロロフェニル)−２−オキソエチル)−３−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)尿素、ＴＦＡ(３２mg、０.０５５mmol)のＰＯＣｌ３(０.３mL、２.１５mmol)中の反応混合物を１１０℃で一夜加熱し。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例３８化合物(６.５mg、０.０１４mmol、２６％収率)を得た。LC-MS C26H25ClFN3Oの分析計算値 449.17, 実測値[M+H] 450.1 Tr = 1.50分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (br. s., 1H), 8.08 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.75-7.60 (m, 1H), 7.53-7.33 (m, 6H), 4.01 (br. s., 1H), 1.97-1.48 (m, 10H), 1.20 (d, J = 6.4 Hz, 3H)
実施例３９
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チアゾール−２−アミン
実施例３９：５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チアゾール−２−アミン
１−(２−(４−クロロフェニル)−２−オキソエチル)−３−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)尿素、ＴＦＡ(４５mg、０.０７７mmol)およびローソン試薬(１２５mg、０.３１mmol)のトルエン(２mL)およびＤＩＰＥＡ(０.３mL)中の反応混合物を、１１０℃で２０時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ ＮａＯＨ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例３９化合物(１.１mg、０.００２mmol、２.８％収率)を得た。LC-MS C26H25ClFN3Sの分析計算値 465.14, 実測値[M+H] 466.3. Tr = 1.59分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.82 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 6.0 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.54-7.27 (m, 5H), 4.12 (br. s., 1H), 3.85-3.71 (m, 1H), 1.99-1.56 (m, 9H), 1.21 (d, J = 6.4 Hz, 3H)
実施例４０
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
４０Ａ：Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチルカルバモチオイル)ベンズアミド
ベンゾイルイソチオシアネート(７９mg、０.４８５mmol)のアセトニトリル(４mL)溶液に、(Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エタナミン(１１０mg、０.４０４mmol)(中間体)のＴＨＦ(２mL)およびＤＩＰＥＡ(０.１４１mL、０.８０８mmol)溶液を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ヘキサン中０〜３０％ｏｆ酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体４０Ａ(白色固体、１５５mg、０.３５６mmol、８８％収率)を得た。LC-MS C25H26FN3OSの分析計算値 435.18, 実測値[M+H] 436.3 Tr = 0.91分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 10.81 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.76 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.1, 5.6 Hz, 1H), 7.93-7.82 (m, 2H), 7.65 (dd, J = 10.6, 2.6 Hz, 1H), 7.62-7.55 (m, 1H), 7.53-7.38 (m, 4H), 4.91 (dt, J = 9.6, 6.4 Hz, 1H), 3.34-3.20 (m, 1H), 1.16-1.65 (m, 9H), 1.35 (d, J = 6.6 Hz, 3H)
４０Ｂ：１−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チオ尿素
Ｎ−(((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)カルバモチオイル)ベンズアミド(１５５mg、０.３５６mmol)のＴＨＦ(３mL)中の反応混合物に、１Ｎ 水酸化ナトリウム溶液(２.１４mL、２.１４mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層を減圧下濃縮して、中間体４０Ｂ(白色固体、１００mg、０.３０２mmol、８５％収率)を得た。LC-MS C18H22FN3Sの分析計算値 331.15, 実測値[M+H] 332.3 Tr = 0.61分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.74 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 10.7, 2.5 Hz, 1H), 7.67-7.49 (m, 2H), 4.79-4.67 (m, 1H), 3.45-3.34 (m, 1H), 2.22-1.59 (m, 9H), 1.21 (d, J = 6.4 Hz, 3H)
４０Ｃ：メチル(Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチルカルバムイミドチオエート
１−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チオ尿素(１７０mg、０.５１３mmol)のアセトニトリル(８mL)溶液に、ヨードメタン(０.１mL、１.６mmol)を加えた。反応混合物を窒素気流下、ｒｔで１８時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体４０Ｃ(白色固体、１０６mg、０.３０７mmol、６０％収率)を得た。LC-MS C19H24FN3Sの分析計算値 345.17, 実測値[M+H] 346.2 Tr = 0.62分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.81 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 10.7, 2.8 Hz, 1H), 7.47 (ddd, J = 9.2, 8.0, 2.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.31 (br. s., 1H), 3.37-3.18 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.06-1.59 (m, 9H), 1.30-1.23 (m, 3H)
実施例４０：５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中の、４−クロロベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２３.０１mg、０.１１１mmol)およびメチル((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)カルバムイミドチオエート(３２mg、０.０９３mmol)のピリジン(０.８mL)およびＴＥＡ(０.０７７mL、０.５５６mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で２０時間、加熱した。反応混合物にさらに４−クロロベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２３.０１mg、０.１１１mmol)およびＴＥＡ(０.０７７mL、０.５５６mmol)をを加え、反応混合物を１３４℃でさらに２時間、加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４０化合物(８.７mg、０.０１９mmol、２０.７％収率)を得た。LC-MS C25H25ClFN5の分析計算値 449.18, 実測値[M+H] 450.1, Tr = 1.25分(方法T). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.83 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 6.55 (br. s., 1H), 3.94 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 3.39 (br. s., 1H), 1.96 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 1.88-1.48 (m, 8H), 1.17 (d, J = 6.0 Hz, 3H)
実施例４１
４−(５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチルアミノ)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)ベンゾニトリル
封管中の、４−シアノベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２１.９７mg、０.１１１mmol)およびメチル((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)カルバムイミドチオエート(３２mg、０.０９３mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０７７mL、０.５５６mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で２０時間、加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４１化合物(１１.５mg、０.０２５mmol、２７％収率)を得た。LC-MS C26H25FN6の分析計算値 440.21, 実測値[M+H] 441.2, Tr = 1.14分(方法T). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.84 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.13-8.02 (m, 3H), 7.97 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.66 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.70 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.02-1.55 (m, 9H), 1.24-1.12 (m, 4H)
実施例４２
Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中の、４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２２.５２mg、０.１１１mmol)およびメチル((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)カルバムイミドチオエート(３２mg、０.０９３mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０７７mL、０.５５６mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で２０時間、加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４２化合物(７.７mg、０.０１７mmol、１８.３％収率)を得た。LC-MS C26H28FN5Oの分析計算値 445.23, 実測値[M+H] 446.0, Tr = 1.11分(方法T). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.83 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.70-7.62 (m, 1H), 7.54 (br. s., 1H), 6.96 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.45 (br. s., 1H), 4.03-3.88 (m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.41 (br. s., 1H), 2.03-1.52 (m, 9H), 1.17 (d, J = 6.1 Hz, 3H)
実施例４３
５−(４−クロロフェニル)−２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール
４３Ａ：２−アミノ−１−(４−クロロフェニル)エタノン
２−ブロモ−１−(４−クロロフェニル)エタノン(１.２ｇ、５.１４mmol)およびヘキサメチレンテトラミン(０.９２mL、８.７４mmol)のＣＨＣｌ３(２５mL)溶液をｒｔで２０時間撹拌した。沈殿を濾取し、固体をＤＣＭで洗浄し、高真空で乾燥させた。固体にエタノール(９５％)(２０mL)および濃ＨＣｌ(４.７mL、１５４mmol)を加えた。得られた混合物を２時間加熱還流し、次いでｒｔで２時間撹拌した。固体が冷却中に析出し、固体を濾取し、エーテルで洗浄して、中間体４３ＡをＨＣｌ塩(白色固体、１.０ｇ、４.８５mmol、９４％収率)として得た。LC-MS C8H8ClNO・HClの分析計算値 169.03, 実測値[M+H] 170.0. Tr = 0.51分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 8.49 (br. s., 2H), 8.15-7.93 (m, 2H), 7.78-7.63 (m, 2H), 4.74-4.45 (m, 2H)
４３Ｂ. (Ｒ)−Ｎ−(２−(４−クロロフェニル)−２−オキソエチル)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンアミド
(Ｒ)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(５０mg、０.１６６mmol)のＤＭＦ(２mL)溶液に、ＨＡＴＵ(７６mg、０.１９９mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで５分撹拌し、続いて２−アミノ−１−(４−クロロフェニル)エタノン、ＨＣｌ(３７.６mg、０.１８３mmol)およびＮ−メチルモルホリン(０.１mL、０.７mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで３時間撹拌した。
反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、１Ｎ ＨＣｌ溶液、塩水およびＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮し、残留物をＤＣＭ中０〜６０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体４３Ｂ(白色固体、４８mg、０.１０６mmol、６４％収率)を得た。LC-MS C26H26ClFN2O2の分析計算値 452.17, 実測値[M+H] 453.3. Tr = 0.78分(方法A). ) 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.83 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.98-7.88 (m, 2H), 7.66 (dd, J = 10.5, 2.8 Hz, 1H), 7.53-7.44 (m, 3H), 7.37 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 6.57 (t, J = 4.0 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 4.4 Hz, 2H), 3.37-3.21 (m, 1H), 2.72-2.60 (m, 1H), 2.00-1.59 (m, 9H), 1.27-1.20 (m, 3H)
実施例４３：５−(４−クロロフェニル)−２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール
(Ｒ)−Ｎ−(２−(４−クロロフェニル)−２−オキソエチル)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンアミド(２０mg、０.０４４mmol)のＰＯＣｌ３(０.１mL、１.０７３mmol)中の反応混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４３化合物(１０.７mg、０.０２５mmol、５６％収率)を得た。LC-MS C26H24ClFN2Oの分析計算値 434.16, 実測値[M+H] 435.1 Tr = 1.95分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.82 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 9.1, 6.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.68-7.63 (m, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.59 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.43 (br. s., 1H), 2.07 (br. s., 1H), 1.98 (br. s., 1H), 1.91-1.58 (m, 7H), 1.34 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.29 (d, J = 10.7 Hz, 1H)
実施例４４
４−((１ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−クロロフェニル)−１Ｈ−イミダゾール−２−イル)エチル)シクロヘキシル)−６−フルオロキノリン
(Ｒ)−Ｎ−(２−(４−クロロフェニル)−２−オキソエチル)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンアミド(２０mg、０.０４４mmol)、酢酸アンモニウム(６８.１mg、０.８８３mmol)のキシレン(１mL、２.７０mmol)および酢酸(０.２５３mL、４.４２mmol)中の反応混合物を１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４４化合物をＴＦＡ塩(４.０mg、０.００７３mmol、１６.５％収率)として得た。LC-MS C26H25ClFN3・TFAの分析計算値 433.17, 実測値[M+H] 434.3. Tr = 1.71分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.87 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.14-8.10 (m, 2H), 8.00 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.69 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.64-7.55 (m, 3H), 3.68-3.40 (m, 1H), 2.17 (br. s., 1H), 2.08-1.68 (m, 7H), 1.59 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.06 (d, J = 13.8 Hz, 1H)
実施例４５
５−(４−フルオロフェニル)−２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール
(Ｒ)−Ｎ−(２−(４−フルオロフェニル)−２−オキソエチル)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンアミド(３０mg、０.０６９mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を、１００℃で２時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４５化合物(２１mg、０.０５０mmol、７２％収率)を得た。LC-MS C26H24F2N2Oの分析計算値 418.19, 実測値[M+H] 419.1. Tr = 1.81分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 8.8, 6.1 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.73-7.66 (m, 2H), 7.63 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.26 (t, J = 8.6 Hz, 2H), 3.80 (br. s., 1H), 2.02 (br. s., 1H), 1.94 (br. s., 1H), 1.87-1.55 (m, 7H), 1.30 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.22 (d, J = 12.7 Hz, 1H)
実施例４６
４−(２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール−５−イル)ベンゾニトリル
実施例４６ ４−(２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール−５−イル)ベンゾニトリルを実施例４３に準ずる方法で製造した。
(Ｒ)−Ｎ−(２−(４−シアノフェニル)−２−オキソエチル)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンアミド(１８mg、０.０４１mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を、１００℃で２時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４６化合物(６.１mg、０.０１４mmol、３５％収率)を得た。LC-MS C27H24FN3Oの分析計算値 425.19, 実測値[M+H] 426.1. Tr = 1.66分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.93-7.88 (m, 2H), 7.87-7.83 (m, 2H), 7.82 (s, 1H), 7.71-7.61 (m, 1H), 7.58 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 1H), 3.43-3.36 (m, 1H), 2.07 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.97 (br. s., 1H), 1.92-1.57 (m, 6H), 1.34 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.26 (d, J = 12.0 Hz, 1H)
実施例４７
６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−フルオロフェニル)−１Ｈ−イミダゾール−２−イル)エチル)シクロヘキシル)キノリン
(Ｒ)−Ｎ−(２−(４−フルオロフェニル)−２−オキソエチル)−２−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパンアミド(２０mg、０.０４６mmol)、酢酸アンモニウム(７０.６mg、０.９１６mmol)のキシレン(１mL、２.７０mmol)および酢酸(０.２５３mL、４.４２mmol)中の反応混合物を１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルで抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４７化合物(１.８mg、０.００４３mmol、９.４％収率)を得た。LC-MS C26H25F2N3の分析計算値 417.20, 実測値[M+H] 418.4. Tr = 1.29分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.80 (br. s., 1H), 8.07 (dd, J = 8.9, 5.7 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 7.78-7.70 (m, 2H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.57 (br. s., 1H), 7.41 (br. s., 1H), 7.14 (t, J = 8.7 Hz, 2H), 3.71 (br. s., 1H), 3.39-3.20 (m, 1H), 2.12-1.43 (m, 8H), 1.25 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.20-1.09 (m, 1H)
実施例４８
Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
４８Ａ：エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート
エチル２−(４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(中間体)(５ｇ、１７.００mmol)をジオキサン(２８.３ml)および水(７.０８ml)に溶解した。４−クロロ−６−フルオロキノリン(２.５７ｇ、１４.１５mmol)、続いてＫ２ＣＯ３(５.８７ｇ、４２.５mmol)を加えた。混合物を窒素気流で５分バブリングし、Ｐｄ(Ｐｈ３Ｐ)４(０.３２７ｇ、０.２８３mmol)を加えた。次いで、反応物を排気し、Ｎ２で３回戻し充填し、次いで、密封し(バイアルをパラフィルムで密封)、１００℃で１６時間加熱した。反応物を減圧下濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで直接精製して、中間体４８Ａ(４.２２ｇ、１３.４７mmol、９５％収率)を得た。LC-MS C19H20FNO2の分析計算値 313.15, 実測値[M+H] 314.1 Tr = 0.75分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.80 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 10.1, 2.8 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J = 9.2, 8.0, 2.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 2.9, 1.7 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.61-2.16 (m, 6H), 2.08-1.96 (m, 2H), 1.59 (dtd, J = 12.9, 10.6, 5.4 Hz, 1H), 1.36-1.26 (m, 3H)
４８Ｂ：エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート
エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(４.２２ｇ、１３.４７mmol)をＭｅＯＨ(６７.３ml)に溶解し、ギ酸アンモニウム(４.２５ｇ、６７.３mmol)を加えた。容器に還流凝縮器を設置し、排気し、窒素気流で３回フラッシュした。次いで、パラジウム炭素(０.１４３ｇ、１.３４７mmol)(湿、デグサタイプ)を加え、反応物を１時間加熱還流した。反応物を冷却し、減圧下濃縮し、ＤＣＭで希釈し。固形物を濾取し、濾液を濃縮して、粗製中間体４８Ｂ(４.２０ｇ、１３.３２mmol、９９％収率)をｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−ジアステレオマー混合物として得た。LC-MS C19H22FNO2の分析計算値 315.16, 実測値[M+H] 316.2 Tr = 0.76分(方法A)
４８Ｃ：エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート
ＴＨＦ(６mL)を含むフラスコに、リチウムジイソプロピルアミド(２.０ＭのＴＨＦ溶液)(３.１７mL、６.３４mmol)を、−７８℃で加え、続いて１,３−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２(１Ｈ)−オン(０.５７３mL、４.７６mmol)およびエチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート(１.０ｇ、３.１７mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液を−７８℃で滴下した。得られた混合物は褐色溶液に変わり、−７８℃で１時間撹拌し、次いでヨードエタン(０.５１mL、６.３４mmol)をゆっくり加えた。反応混合物を氷浴温度で１時間撹拌し、ｒｔで一夜温めた。水に注加することにより反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ヘキサン中０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーで精製して、中間体４８Ｃ(油状物、０.８１ｇ、２.３５９mmol、７４.４％収率)を得た。LC-MS C21H26FNO2, 343.19, 実測値[M+H]の分析計算値 344.3. Tr = 0.87-0.88分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.88-8.77 (m, 1H), 8.18-8.06 (m, 1H), 7.66 (dd, J = 10.6, 2.6 Hz, 1H), 7.47 (ddd, J = 9.2, 8.0, 2.9 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.25-4.15 (m, 2H), 3.34-3.09 (m, 1H), 2.70-2.16 (m, 1H), 2.13-1.49 (m, 13 H), 1.36-1.24 (m, 3H), 1.00-0.90 (m, 3H)
４８Ｄ：２−((１ｒ,４ｒ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸
エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート(０.８１ｇ、２.３５９mmol)のＴＨＦ(４mL)およびＭｅＯＨ(７mL)溶液に、ＬｉＯＨ溶液(７.１mL、１４.２mmol)をゆっくり加えた。反応混合物をｒｔで一夜撹拌した。翌日、反応混合物にさらにＬｉＯＨ溶液(７.１mL、１４.２mmol)を加え、得られた反応混合物を７０℃で２８時間、加熱した。反応混合物を冷却し、混合物に酢酸エチルを加えた。水層を分離し、水層に１Ｎ ＨＣｌ溶液を加えてｐＨを５〜６に調節した。得られた混合物を水およびＣＨＣｌ３：２−プロパノール(２：１)で希釈した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体４８Ｄをｃｉｓおよびｔｒａｎｓ(３：２)異性体の混合物(０.６４ｇ、２.０２９mmol、８６％収率)として得た。LC-MS C19H22FNO2の分析計算値 315.16, 実測値[M+H] 316.3. Tr = 0.72分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.83 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.30-8.03 (m, 1H), 7.67 (dd, J = 10.6, 2.4 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J = 9.2, 7.9, 2.6 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.32-7.27 (m, 1H), 3.37-3.07 (m, 1H), 2.77-2.21 (m, 1H), 2.11-1.30 (m, 11H), 1.07-1.00 (m, 3H)
４８Ｅ：６−フルオロ−４−(４−(１−イソシアナトプロピル)シクロヘキシル)キノリン
２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸(１５０mg、０.４７６mmol)のトルエン(４mL)懸濁液に、ジフェニルホスホリルアジド(０.１２mL、０.５５mmol)およびＴＥＡ(０.０９mL、０.６２mmol)を加えた。密封バイアル中の反応混合物は、ＴＥＡを加えた後透明溶液になった。バイアルを密封し、７０℃で２時間加熱した。反応物をｒｔに冷却し、減圧下濃縮した。粗製物を次工程反応で使用した。LC-MS C19H21FN2Oの分析計算値 312.16, 実測値[M+H] 313.3. Tr = 0.90分(方法A)
４８Ｆ：Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド
６−フルオロ−４−(４−(１−イソシアナトプロピル)シクロヘキシル)キノリン(７５mg、０.２４０mmol)のＴＨＦ(２mL)懸濁液に、４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(５８.４mg、０.２８８mmol)およびＴＥＡ(０.１７mL、１.２０mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。反応混合物をＭｅＯＨで反応停止させ、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、主要異性体中間体４８Ｆ ａｓ ＴＦＡ塩(７６mg、０.１２８mmol、５３.４％収率)を得た。LC-MS C27H31FN4O3・TFAの分析計算値 478.24, 実測値[M+H] 479.3 Tr = 0.75分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 9.01 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.39-8.19 (m, 2H), 8.07 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.35-7.14 (m, 2H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.25-3.98 (m, 1H), 3.88-3.80 (m, 3H), 3.66 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 2.30-1.61 (m, 10H), 1.46-1.23 (m, 1H), 1.11-0.96 (m, 3H)
実施例４８：Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(５０mg、０.０８４mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を、９５℃で２時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例４８化合物(２３mg、０.０５０mmol、５９.２％収率)を得た。LC-MS C27H29FN4O2の分析計算値 460.22, 実測値[M+H] 461.0;Tr = 1.42分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.80 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.68-7.55 (m, 2H), 7.51 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.79 (s, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.39 (br. s., 1H), 1.91-1.56 (m, 10H), 1.51-1.35 (m, 1H), 0.90 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
実施例４９
Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン(絶対立体化学は未確定)
立体異性体分離を方法Ｄに記載のとおりに実施した。約１５mg サンプルを分割した。フラクション(“ピーク１”および“ピーク２”)をＭｅＯＨ中に集め、減圧下濃縮し、凍結乾燥して、２つの単離物を得た。実施例４９−１、エナンチオマー１、３０分ランでＴｒ＝９.３６分(方法Ｈ)。実施例２、エナンチオマー２、３０分でＴｒ＝１１.１２分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例４９−１(４.５mg、０.００９７mmol、３７.１％収率)。LC-MS C27H29FN4O2の分析計算値 460.23, 実測値[M+H] 461.4, Tr = 0.79分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.2, 5.5 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 10.7, 2.8 Hz, 1H), 7.84-7.76 (m, 2H), 7.63 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.58 (ddd, J = 9.2, 8.1, 2.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.12-3.91 (m, 1H), 3.88-3.82 (m, 3H), 3.54-3.39 (m, 1H), 2.18-1.72 (m, 10H), 1.64-1.46 (m, 1H), 1.02 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
二番目に溶離した、実施例４９−２(４.５mg、０.００９７mmol、３７.１％収率)。LC-MS C27H29FN4O2の分析計算値 460.23, 実測値[M+H] 461.4, Tr = 0.79分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.77 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.4, 5.6 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 10.8, 2.6 Hz, 1H), 7.84-7.78 (m, 2H), 7.63 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.58 (ddd, J = 9.2, 8.1, 2.8 Hz, 1H), 7.12-6.97 (m, 2H), 4.05-3.93 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.57-3.38 (m, 1H), 2.09-1.73 (m, 10H), 1.54 (dt, J = 14.9, 7.4 Hz, 1H), 1.02 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
実施例５０
Ｎ−(１−((１ｒ,４ｒ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
実施例５０化合物を、実施例４８の副中間体４８Ｆを使用して、実施例４８に準ずる方法で製造した。
Ｎ−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(３６mg、０.０６１mmol)のＰＯＣｌ３(０.２mL、２.１４６mmol)中の反応混合物を、１００℃で２時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例５０化合物(１０.２mg、０.０２２mmol、３５.８％収率)を得た。LC-MS C27H29FN4O2の分析計算値 460.22, 実測値[M+H] 461.0 Tr = 1.39分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.78 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.9, 5.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.68-7.53 (m, 2H), 7.44 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.44 (br. s., 1H), 3.27 (br. s., 1H), 2.00-1.81 (m, 4H), 1.74-1.36 (m, 7H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
実施例５１
６−フルオロ−４−(４−(１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)プロピル)シクロヘキシル)キノリン
５１Ａ：ｔｅｒｔ−ブチル２−(２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノイル)ヒドラジンカルボキシレート
２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸(１７０mg、０.５３９mmol)のＤＭＦ(３mL)溶液に、ＨＡＴＵ(２４６mg、０.６４７mmol)を加え、反応混合物をｒｔで５分撹拌し、続いてｔｅｒｔ−ブチルカルバゼート(８５mg、０.６４７mmol)およびＤＩＰＥＡ(０.１５mL、０.８６２mmol)を加えた。得られた混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、０〜４０％の(１０％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液)で溶出するフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、主要異性体中間体５１Ａ(白色固体、１２５mg、０.２９１mmol、５４％収率)を得た。LC-MS C24H32FN3O3の分析計算値 429.24, 実測値[M+H] 430.4. Tr = 0.72分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.98-8.81 (m, 1H), 8.71 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 9.0, 5.5 Hz, 1H), 7.73-7.56 (m, 1H), 7.52-7.38 (m, 1H), 7.22 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 6.94-6.72 (m, 1H), 3.25 (br. s., 1H), 3.15-2.89 (m, 1H), 2.58-2.33 (m, 1H), 2.17-1.54 (m, 10H), 1.44 (d, J = 2.4 Hz, 9H), 1.01 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
５１Ｂ：２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド
ｔｅｒｔ−ブチル２−(２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノイル)ヒドラジンカルボキシレート(１２５mg、０.２９１mmol)のＤＣＭ(１.０mL)溶液に、ＨＣｌ(４.０Ｍのジオキサン溶液)(１.０９mL、４.３７mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで１時間撹拌した。白色固体が析出した。混合物を減圧下濃縮して、中間体５１Ｂを２.ＨＣｌ塩(白色固体、１１７mg、０.２９１mmol、１００％収率)として得た。LC-MS C19H24FN3O・2HClの分析計算値 329.19, 実測値[M+H] 330.3. Tr = 0.64分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 11.33 (s, 1H), 9.08 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.30 (dd, J = 9.2, 5.3 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.99-7.83 (m, 2H), 3.55-3.45 (m, 1H), 2.83-2.70 (m, 1H), 2.07-1.53 (m, 10H), 1.51-1.33 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
実施例５１：６−フルオロ−４−(４−(１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)プロピル)シクロヘキシル)キノリン
封管中の、４−(プロパン−２−イルオキシ)ベンゼン−１−カルボキシミドアミド(２３.０４mg、０.１２９mmol)および２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド、２ＨＣｌ(４０mg、０.０９９mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０５５mL、０.３９８mmol)(０.１mL)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を１３５℃でさらに３時間、加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例５１化合物(１３.８mg、０.０２８mmol、２８％収率)を得た。LC-MS C29H33FN4Oの分析計算値 472.26, 実測値[M+H] 473.0. Tr = 1.45分(方法B). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 8.84 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.09 (dd, J = 9.1, 5.9 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.72-7.62 (m, 1H), 7.56 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 4.79-4.49 (m, 1H), 2.22-1.95 (m, 2H), 1.92-1.46 (m, 9H), 1.27 (d, J = 5.9 Hz, 6H), 1.23-1.09 (m, 2H), 0.73 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
実施例５２
２−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−イソプロポキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール
封管中の、４−(プロパン−２−イルオキシ)ベンゼン−１−カルボキシミドアミド(２３.０４mg、０.１２９mmol)および２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド、２ＨＣｌ(４０mg、０.０９９mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０５５mL、０.３９８mmol)(０.１mL)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を１３５℃でさらに３時間、加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、他の化合物実施例５２化合物(４.６mg、０.００９７mmol、９.７％収率)を得た。LC-MS C29H32FN3O2, 473.25, 実測値[M+H]の分析計算値 474.3. Tr = 2.01分(方法B). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.92-7.78 (m, 2H), 7.65 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 4.72 (dt, J = 11.8, 5.9 Hz, 1H), 3.53-3.40 (m, 1H), 2.15 (br. s., 1H), 2.04-1.54 (m, 9H), 1.28 (d, J = 5.9 Hz, 6H), 1.21 (br. s., 2H), 0.81 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
実施例５３
６−フルオロ−４−(４−(１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)プロピル)シクロヘキシル)キノリン
実施例５３ ６−フルオロ−４−(４−(１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)プロピル)シクロヘキシル)キノリンを、実施例５１の副異性体中間体５１Ｂを使用して、実施例５１に準ずる方法で製造した。
封管中の、４−(プロパン−２−イルオキシ)ベンゼン−１−カルボキシミドアミド(１８.４３mg、０.１０３mol)および２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド、２ＨＣｌ(３２mg、０.０８０mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０４４mL、０.３１８mmol)(０.１mL)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１３０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例５３化合物(７.５mg、０.０１６mmol、１９.８％収率)を得た。LC-MS C29H33FN4Oの分析計算値 472.26, 実測値[M+H] 473.2 Tr = 1.38分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.77 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.14-8.00 (m, 1H), 7.97-7.82 (m, 3H), 7.63 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.65 (br. s., 1H), 3.53 (br. s., 1H), 3.34-3.09 (m, 1H), 2.12-1.67 (m, 6H), 1.62-1.41 (m, 3H), 1.37-1.21 (m, 8H), 0.74 (t, J = 6.9 Hz, 3H)
実施例５４
２−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−イソプロポキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール
実施例５４ ２−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−イソプロポキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール
封管中の、４−(プロパン−２−イルオキシ)ベンゼン−１−カルボキシミドアミド(１８.４mg、０.１０３mmol)および中間体２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド、２ＨＣｌ(少量異性体)(３２mg、０.０８０mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.０５５mL、０.３９８mmol)(０.１mL)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を１３５℃でさらに３時間、加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、他の化合物実施例５４化合物(１０.６mg、０.０１７mmol、２１.８％収率)を得た。LC-MS C29H32FN3O2の分析計算値 473.25, 実測値[M+H] 474. Tr = 1.84分(方法B). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 8.80 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 8.8, 5.7 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.65 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.82-4.63 (m, 1H), 3.34-3.20 (m, 1H), 2.91 (br. s., 1H), 2.03-1.78 (m, 6H), 1.73-1.47 (m, 3H), 1.40 (br. s., 2H), 1.29 (d, J = 5.9 Hz, 6H), 0.85 (t, J = 7.1 Hz, 3H)
実施例５５
５−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中の、メチル(４−メトキシフェニル)カルバムイミドチオエート、ヨウ化物塩(４７.０mg、０.１４５mmol)および中間体２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド、２ＨＣｌ(主異性体)(４５mg、０.１１２mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.１mL、０.６８mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で２０時間、加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例５５化合物(８.３mg、０.０１８mmol、１５.７％収率)を得た。LC-MS C27H30FN5Oの分析計算値 459.24, 実測値[M+H] 460.0, Tr = 1.13分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.83 (br. s., 1H), 8.71 (br. s., 1H), 8.08 (dd, J = 9.0, 5.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.79 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 3.71-3.42 (m, 3H), 2.99 (br. s., 1H), 2.11-1.44 (m, 10H), 1.21 (br. s., 2H), 0.74 (t, J = 7.1 Hz, 3H)
実施例５６
５−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン
封管中の、メチル(４−メトキシフェニル)カルバムイミドチオエート、ヨウ化物塩(３９.７mg、０.１２３mmol)および中間体２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタンヒドラジド、２ＨＣｌ(副異性体)(３８mg、０.０９４mmol)のピリジン(１mL)およびＴＥＡ(０.１mL、０.６８mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、１２０℃で２０時間、加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよびＮＨ４Ｃｌ溶液で希釈した。有機層を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例５６化合物(７.７mg、０.０１６mmol、１６.５％収率)を得た。LC-MS C27H30FN5Oの分析計算値 459.24, 実測値[M+H] 460.2, Tr = 1.09分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.79 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.07 (dd, J = 9.1, 5.9 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.76-7.60 (m, 1H), 7.51-7.37 (m, 3H), 6.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.33-3.18 (m, 1H), 2.10-1.66 (m, 6H), 1.64-1.43 (m, 3H), 1.41-1.27 (m, 2H), 1.22 (s, 1H), 0.77 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
実施例５７
Ｎ−(２−エトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン(絶対立体化学は未確定)
５７Ａ：エチル３−エトキシ−２−(４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシ−３−エニル)プロパノエート
ＴＨＦ(１５mL)を含むフラスコに、ＬＤＡ(１.５Ｍのシクロヘキサン溶液)(１６.７mL、２４.９９mmol)を−７８℃で加え、続いてエチル２−(４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(６３Ｂ)(３.３ｇ、１１.９０mmol)のＴＨＦ(８mL)溶液を−７８℃で滴下し、ＤＭＰＵ(２.２mL、１７.９mmol)を加えた。得られた混合物を−７８℃で１.５時間撹拌し、次いでクロロメチルエチルエーテル(２.３mL、２３.８０mmol)を加えた。反応混合物を−７８℃で撹拌し、次いで３時間かけて徐々に温めた。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液で反応停止させた。得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。抽出物をヘキサン中の０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体５７Ａ(油状物、１.８ｇ、５.３７mmol、４５.１％収率)を得た。LC-MS C19H26FNO3の分析計算値 335.19, 実測値[M+H] 336.3. Tr = 1.05分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 7.94 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.87 (dd, J = 5.1, 0.7 Hz, 1H), 5.73-5.49 (m, 1H), 4.31-4.12 (m, 2H), 3.79-3.60 (m, 2H), 3.58-3.38 (m, 2H), 2.76-2.57 (m, 1H), 2.42-2.14 (m, 6H), 2.11-1.81 (m, 3H), 1.54-1.41 (m, 1H), 1.35-1.25 (m, 3H), 1.19 (td, J = 6.9, 1.3 Hz, 3H)
５７Ｂ：エチル３−エトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノエート
エチル３−エトキシ−２−(４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)プロパノエート(１.８ｇ、５.３７mmol)のＭｅＯＨ(４０mL)溶液を排気し、次いで窒素気流下ギ酸アンモニウム(１.６９ｇ、２６.８mmol)およびＰｄ−Ｃ(０.５７１ｇ、０.５３７mmol)(１０％wt湿)をｒｔで加えた。得られた混合物を８０℃で５時間、加熱した。加熱後、大量の泡が形成された。反応混合物を冷却し、セライトパッドで濾過した。濾液を減圧下濃縮した。残留物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。混合物をさらにＳＦＣで精製して、２フラクションを得た。主フラクションを減圧下濃縮して、表題化合物中間体５７Ｂをｃｉｓ異性体(油状物、０.７６ｇ、２.２５mmol、４２％)として得た。LC-MS C19H28FNO3の分析計算値 337.21, 実測値[M+H] 338.2. Tr = 1.04分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 7.99 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.30-4.17 (m, 2H), 3.71-3.40 (m, 4H), 3.06 (ddd, J = 11.2, 9.0, 5.5 Hz, 1H), 2.89-2.73 (m, 1H), 2.23 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 2.06 (dt, J = 11.0, 3.4 Hz, 1H), 1.90-1.57 (m, 8H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.19 (t, J = 7.0 Hz, 3H)
５７Ｃ：３−エトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸
エチル３−エトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノエート(０.７２ｇ、２.１３４mmol)のＴＨＦ(１０mL)およびＭｅＯＨ(４mL)溶液に、ＬｉＯＨ溶液(２Ｍ)(１０.７mL、２１.３４mmol)を加えた。得られた混合物を４５℃で５.５時間加熱した。反応混合物を冷却し、反応混合物に、１Ｎ ＨＣｌ溶液を加えて、ｐＨを約５に調節した。白色固体が析出した。得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体５７Ｃを粘性固体(白色固体、０.６ｇ、１.９４mmol、９１％)として得た。LC-MS C17H24FNO3の分析計算値 309.17, 実測値[M+H] 310.2. Tr = 0.86分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.00-7.93 (m, 1H), 7.25 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.79-3.41 (m, 4H), 3.04 (ddd, J = 11.1, 9.3, 4.7 Hz, 1H), 2.98-2.85 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.01 (br. s., 1H), 1.93-1.48 (m, 8H), 1.17 (t, J = 7.0 Hz, 3H)
５７Ｄ：Ｎ−(２−エトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド
粗製３−エトキシ−２−(４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(０.３８ｇ、１.２２８mmol)のトルエン(１０mL)懸濁液に、ジフェニルホスホリルアジド(０.３２mL、１.４７mmol)およびＴＥＡ(０.３４mL、２.４６mmol)を加えた。密封バイアル中の反応混合物は、ＴＥＡを加えた後透明溶液になった。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応物をｒｔに冷却した。反応混合物を減圧下濃縮した。粗製中間体４−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−エトキシ−１−イソシアナトエチル)シクロヘキシル)−２−フルオロ−３−メチルピリジン(５０mg、０.１６３mmol)の一部のＴＨＦ(３mL)溶液に、４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(４９.６mg、０.２４５mmol)およびＤＩＰＥＡ(０.１１mL、０.６５mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで３時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、中間体５７ＤをＴＦＡ塩(白色固体、６０mg、０.１０２mmol、６２.７％)として得た。LC-MS C25H33FN4O4・TFAの分析計算値 472.5, 実測値[M+H] 473.2. Tr = 0.88分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 7.98-7.78 (m, 3H), 7.51-7.35 (m, 1H), 7.31-7.17 (m, 3H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.24 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.64 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 3.56-3.42 (m, 2H), 3.05-2.83 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.09-1.44 (m, 9H), 1.16 (d, J = 13.9 Hz, 3H)
実施例５７、２異性体Ｎ−(２−エトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
封管中の、Ｎ−(２−エトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(６０mg、０.１０２mmol)のＰＯＣｌ３(０.４mL、４.２９mmol)中の反応混合物を窒素気流で１分パージし、密封し、、９５℃で２時間、加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、２異性体の混合物を得た。異性体を分取ＳＦＣ(方法ＡＳカラム上で１０％ＭｅＯＨ−ＤＥＡ)でさらに分離して、２単離体を得た。実施例５７−１、エナンチオマー、１０分ランにわたりＴｒ＝４.６８分(方法Ｋ)。実施例５７−２、エナンチオマー２、１０分にわたりＴｒ＝７.３０分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例５７−１(１０.６mg、０.０２３mmol、２２.３％収率)。LC-MS C25H31FN4O3の分析計算値 454.23, 実測値[M+H] 455.2. Tr = 1.98分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 7.97 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (br. s., 1H), 3.80 (s, 3H), 3.55-3.34 (m, 4H), 2.86 (br. s., 1H), 2.17 (s, 3H), 2.00-1.77 (m, 3H), 1.74-1.40 (m, 6H), 1.06 (t, J = 7.0 Hz, 3H)
二番目に溶離した、実施例５７−２(１０.７mg、０.０２３mmol、２２.５％収率)。LC-MS C25H31FN4O3の分析計算値 454.23, 実測値[M+H] 455.2. Tr = 1.99分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 7.97 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.02 (br. s., 1H), 3.80 (s, 3H), 3.55-3.34 (m, 4H), 2.86 (br. s., 1H), 2.17 (s, 3H), 2.00-1.77 (m, 3H), 1.74-1.40 (m, 6H), 1.06 (t, J = 7.0 Hz, 3H)
実施例５８
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン(絶対立体化学未確定)
５８Ａ：エチル２−(４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エニル)アセテート
４−クロロ−６−(トリフルオロメチル)キノリン(２.０５ｇ、８.８５mmol)、エチル２−(４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(３.１２ｇ、１０.６２mmol)の１,４−ジオキサン(３５mL)溶液に、炭酸カリウム(３.６７ｇ、２６.６mmol)および水(７mL)を加えた。反応混合物を窒素気流で３分パージし、続いてＰｄ(Ｐｈ３Ｐ)４(０.４０９ｇ、０.３５４mmol)を加えた。得られた混合物を窒素気流下、１００℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄したおよびＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮し、残留物をヘキサン中０〜５０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体５８Ａ(油状物、３.０ｇ、８.２６mmol、９３％収率)を得た。LC-MS C20H20F3NO2の分析計算値 363.14, 実測値[M+H] 364.5. Tr = 0.97分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.95 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.87 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 5.86 (dd, J = 2.8, 1.7 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.65-2.24 (m, 5H), 2.15-1.96 (m, 2H), 1.73-1.54 (m, 2H), 1.36-1.29 (m, 3H)
５８Ｂ：エチル２−(４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート
エチル２−(４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(３.０ｇ、８.２６mmol)、ギ酸アンモニウム(２.０８ｇ、３３.０mmol)のＭｅＯＨ(５０mL)中の反応混合物を窒素気流で３分パージし、続いてＰｄ−Ｃ(０.８８ｇ、０.４１mmol)を加えた。得られた混合物を８５℃で２時間、加熱した。反応混合物を冷却した。反応混合物をセライトパッドで濾過し、フィルターケーキをＭｅＯＨで洗浄した。濾液を減圧下濃縮した。残留物を酢酸エチルで抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液、塩水で連続的に洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾液を減圧下濃縮して、中間体５８Ｂ(油状物、２.６ｇ、７.１２mmol、８６％収率)をｃｉｓ−およびｔｒａｎｓ−ジアステレオマー混合物として得た。LC-MS C20H22F3NO2の分析計算値 365.16, 実測値[M+H] 366.2. Tr = 0.94分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 9.05-8.85 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.51-7.33 (m, 1H), 4.29-4.03 (m, 2H), 3.51-3.23 (m, 1H), 2.61-2.29 (m, 2H), 2.12-1.35 (m, 9H), 1.32-1.21 (m, 3H)
５８Ｃ：エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート
ＴＨＦ(１５mL)を含むフラスコに、リチウムジイソプロピルアミド(２.０ＭのＴＨＦ溶液)(７.６５mL、１５.３０mmol)を−７８℃で加え、続いて１,３−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２(１Ｈ)−オン(１.２９mL、１０.６７mmol)およびエチル２−(４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート(２.６ｇ、７.１２mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液を−７８℃で滴下した。得られた混合物は暗褐色溶液となり、−７８℃で１時間撹拌し、次いでヨードエタン(１.１４mL、１４.２３mmol)をゆっくり加えた。反応混合物をｒｔに温め、３時間撹拌した。水に注加することにより反応停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を減圧下濃縮した。抽出物をヘキサン中の０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、副ｔｒａｎｓ異性体および主要ｃｉｓ異性体中間体５８Ｃ(油状物、１.１ｇ、２.７７mmol、３９％収率)を得た。ｃｉｓ異性体に少量のｔｒａｎｓ異性体が混入していた。LC-MS C22H26F3NO2の分析計算値 393.19, 実測値[M+H] 394.3. Tr = 0.97分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.97 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.57-3.32 (m, 1H), 2.64 (td, J = 10.8, 4.0 Hz, 1H), 2.14-1.58 (m, 11H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
５８Ｄ：２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸
主要異性体エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート(１.１ｇ、２.８０mmol)のＴＨＦ(２０mL)およびＭｅＯＨ(８mL)中の反応混合物に、水酸化リチウム溶液(２.０Ｍ溶液)(１３.９８mL、２８.０mmol)を加えた。得られた混合物を６５℃で週末の間加熱した。反応混合物を冷却し、水で希釈した。混合物に１Ｎ ＨＣｌ溶液を加えて、ｐＨを約５に調節した。白色固体がｐＨ５〜６で析出した。得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体５８Ｄをラセミ体(黄色固体、０.９３ｇ、２.５５mmol、９１％収率)として得た。LC-MS C20H22F3NO2の分析計算値 365.16, 実測値[M+H] 366.3. Tr = 0.81分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 12.10 (br. s., 1H), 8.99 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.7, 1.9 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 1.96-1.54 (m, 11H), 1.49-1.29 (m, 1H), 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
５８Ｅ：２−(４−クロロベンゾイル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)ヒドラジンカルボキサミド
２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸(１００mg、０.２７４mmol)のトルエン(５mL)溶液に、ＤＰＰＡ(０.１mL、０.４mmol)およびトリエチルアミン(０.０５mL、０.４mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応物をｒｔに冷却し、減圧下濃縮した。残留物を精製することなく次工程反応で使用した。粗製４−((１ｓ,４ｓ)−４−(１−イソシアナトプロピル)シクロヘキシル)−６−(トリフルオロメチル)キノリン(３３mg、０.０９１mmol)のＴＨＦ(３mL)溶液に、４−クロロベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２３mg、０.１１mmol)およびＤＩＰＥＡ(０.１mL、０.６mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで一夜撹拌した。反応混合物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮した。LC-MS C27H28ClF3N4O2の分析計算値 532.18, 実測値[M+H] 533.1. Tr = 0.89分(方法A)
実施例５８：５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２−(４−クロロベンゾイル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)ヒドラジンカルボキサミド(３６mg、０.０６８mmol)のＰＯＣｌ３(０.４mL、４.２９mmol)中の粗製反応混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、２異性体の混合物を得た。異性体を分取ＳＦＣ(方法Ｆ)でさらに分離して、２単離体を得た。実施例５８−１、エナンチオマー１、３０分ランにわたりＴｒ＝１５.３６分(方法Ｇ)。実施例５８−２、エナンチオマー２、３０分にわたりＴｒ＝１６.８９分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例５８−１(８.６mg、０.０１７mmol、２４.５％収率)。LC-MS C27H26ClF3N4Oの分析計算値 514.17, 実測値[M+H] 515.4. Tr = 1.86分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 9.01 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.55 (br. s., 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.85-7.71 (m, 3H), 7.67-7.52 (m, 3H), 3.90 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 3.62 (br. s., 1H), 1.94-1.61 (m, 10H), 1.55-1.37 (m, 1H), 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
二番目に溶離した、実施例５８−２(７.９mg、０.０１５mmol、２２.５％収率)。LC-MS C27H26ClF3N4Oの分析計算値 514.17, 実測値[M+H] 515.4. Tr = 1.86分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 9.01 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.85-7.71 (m, 3H), 7.63 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.90 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.62 (br. s., 1H), 2.00-1.58 (m, 10H), 1.46 (dt, J = 14.5, 7.4 Hz, 1H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
実施例５９〜６２化合物を、対応する酸を使用して、実施例５８の方法に従い、製造した。
実施例６３、２異性体
Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
４−ブロモ−２−フルオロ−３−メチルピリジン
ＬＤＡ(２Ｍ溶液)(３４mL、６８.０mmol)のＴＨＦ(６５mL)中の均一混合物に、−７０℃でアルゴン下、４−ブロモ−２−フルオロピリジン(９.３ｇ、５２.８mmol)のＴＨＦ(５mL)溶液をゆっくり加えた。混合物を５時間、−７０℃で撹拌し、ＥｔＩ(６.９mL、１１１mmol)を反応温度を−６５℃以下に維持しながら加えた。反応物を−６０℃に温め、水(１００mL)を加えた。混合物を撹拌し、ｒｔに一夜温めた。反応混合物を分液漏斗に移した。水相をエーテルで抽出し、水、塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮して、黄色−橙色油状物を得る。抽出物をヘキサン中の０〜２５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６３Ａ(油状物、６.６６ｇ、３５.０mmol、６６％収率)を得た。LC-MS C6H5BrFNの分析計算値 188.96, 実測値[M+H] 191.9. Tr = 0.85分(方法A). 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ: 7.96 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 2.30-2.28 (m, 3H)
６３Ｂ. エチル２−(４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシ−３−エニル)アセテート
エチル２−(４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(５.９３ｇ、２０.１７mmol)のジオキサン(１２０mL)溶液を含む反応フラスコに、４−ブロモ−２−フルオロ−３−メチルピリジン(３.７２ｇ、１９.５８mmol)、水(４０.０mL)およびＮａ２ＣＯ３(８.３０ｇ、７８mmol)を加えた。混合物をＡｒで１０〜１５分脱気後、Ｐｄ(Ｐｈ３Ｐ)４(１.１３ｇ、０.９７９mmol)を加えた。フラスコを密封し、混合物を１００℃で一夜加熱した。反応混合物をｒｔに冷却した。少量の固体白色物質が反応フラスコの底に存在する。反応物をＥｔＯＡｃおよび水で希釈し、加えて超音波処理して固形物を破壊し、次いで分液漏斗に移した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃでさらに１回抽出した。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮して、薄い金色残留物中の白色沈殿を得た。抽出物をヘキサン中の０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６３Ｂ(薄い金色油状物、５.０１ｇ、１７.７２mmol、９１％収率)を得た。LC-MS C16H20FNO2の分析計算値 277.15, 実測値[M+H] 278.1. Tr = 1.02分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 7.93 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 6.91-6.85 (m, 1H), 5.64-5.57 (m, J = 2.9, 1.7 Hz, 1H), 4.17 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.41-2.28 (m, 5H), 2.21-2.18 (m, 4H), 1.98-1.87 (m, 2H), 1.54-1.42 (m, J = 12.8, 10.6, 10.6, 5.4 Hz, 1H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
６３Ｃ：エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート
ＴＨＦ(１５mL)を含むフラスコに、ＬＤＡ(１.５Ｍのシクロヘキサン溶液)(１１.０mL、１６.５４mmol)およびＤＭＰＵ(１.３６mL、１１.２８mmol)を−７８℃で加え、続いてエチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート(２.１ｇ、７.５２mmol)のＴＨＦ(８mL)溶液を−７８℃で滴下した。得られた橙色溶液混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いでヨードエタン(０.９７mL、１２.０３mmol)を加えた。反応混合物を−７８℃で撹拌し、次いで徐々にｒｔまで４時間温めた。反応混合物は濁った黄色混合物に変わった。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液で反応停止させた。得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出物の有機層を合わせ、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。抽出物をヘキサン中の０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６３Ｃ(油状物、１.３１ｇ、４.２６mmol、５６.７％収率)を得た。LC-MS C18H26FNO2の分析計算値 307.1, 実測値[M+H] 308.2. Tr = 1.08分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 7.98 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.93-2.74 (m, 1H), 2.62 (td, J = 10.8, 3.9 Hz, 1H), 2.23 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 2.04-1.86 (m, 2H), 1.77-1.43 (m, 9H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
６３Ｄ：２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸
エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート(０.９ｇ、２.９３mmol)のＴＨＦ(１０mL)およびＭｅＯＨ(６mL)中の反応混合物にＬｉＯＨ溶液(２Ｍ)(１４.６４mL、２９.３mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で一夜加熱した。反応は完了しなかった。反応混合物に、さらにＬｉＯＨ溶液(２Ｍ)(４mL、８mmol)およびＭｅＯＨ(６mL)を加えた。反応混合物を７０℃でさらに２０時間、加熱した。反応混合物を冷却し、反応混合物に２mLの酢酸を加えて、ｐＨを約５に調節した。得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出し、有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、中間体６３Ｄ(４２５mg、１.５０６mmol、５１.４％収率)を得た。LC-MS C16H22FNO2の分析計算値 279.16, 実測値[M+H] 280.1. Tr = 0.89分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 7.94 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.24 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 2.93 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 2.65 (td, J = 10.8, 3.7 Hz, 1H), 2.25 (d, J = 0.9 Hz, 3H), 1.95 (br. s., 2H), 1.83-1.40 (m, 9H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
６３Ｅ：Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド
２−(４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸(０.２４ｇ、０.８５９mmol)のトルエン(８mL)懸濁液に、ジフェニルホスホリルアジド(０.２３mL、１.０３mmol)およびＴＥＡ(０.４２mL、３.０１mmol)を加えた。密封バイアル中の反応混合物は、ＴＥＡを加えた後透明溶液になった。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応物をｒｔに冷却し、減圧下濃縮した。中間体２−フルオロ−４−((１ｓ,４ｓ)−４−(１−イソシアナトプロピル)シクロヘキシル)−３−メチルピリジン(４５mg、０.１６３mmol)の一部のＴＨＦ(１mL)溶液を４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(３９.６mg、０.１９５mmol)のＴＨＦ(１mL)懸濁液に加え、続いてＤＩＰＥＡ(０.１１mL、０.６５mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮して、粗製生成物を得た。これを精製することなく次工程で使用した。LC-MS C24H31FN4O3の分析計算値 442.2, 実測値[M+H] 443.1. Tr = 0.89分(方法A)
実施例６３、２異性体Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド(６０mg、０.１３６mmol)のＰＯＣｌ３(０.４mL、４.２９mmol)中の粗製反応混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、２異性体の混合物を得た。異性体を分取ＳＦＣ(方法Ｊ)でさらに分離して、２単離体を得た。実施例６３−１、エナンチオマー１、８分ランにわたりＴｒ＝３.７３分(方法Ｊ)。実施例６３−２、エナンチオマー２、８分にｗたりＴｒ＝５.８０分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例６３−１(６.９mg、０.０１６mmol、１１.９％収率)。LC-MS C24H29FN4O2の分析計算値 424.22, 実測値[M+H] 425.2. Tr = 1.93分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 7.99 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.01-3.73 (m, 4H), 2.87 (br. s., 1H), 2.18 (s, 3H), 1.92-1.34 (m, 11H), 0.91 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
二番目に溶離した、実施例６３−２(６.７mg、０.０１６mmol、１１.５％収率)。LC-MS C24H29FN4O2の分析計算値 424.22, 実測値[M+H] 425.1. Tr = 1.93分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 7.99 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.01-3.73 (m, 4H), 2.87 (br. s., 1H), 2.18 (s, 3H), 1.92-1.34 (m, 11H), 0.91 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
実施例６４、２異性体
５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｒ,４Ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
６４Ａ：２−((１ｒ,４ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)ブタン酸
エチル２−((１ｒ,４ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)ブタノエート(０.１３ｇ、０.３８１mmol)のＴＨＦ(６mL)およびＭｅＯＨ(１mL)溶液に、ＬｉＯＨ溶液(２Ｍ)(１.９１mL、３.８１mmol)を加えた。反応混合物を４５℃で４日加熱した。反応混合物に水および１Ｎ ＨＣｌ溶液を加え、ｐＨを約６とした。得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。抽出物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下濃縮して、中間体６４Ａ(白色固体、０.１ｇ、０.３１９mmol、８４％収率)を得た。LC-MS C19H23NO3の分析計算値 313.17, 実測値[M+H] 314.2. Tr = 0.68分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.93 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.24-7.99 (m, 2H), 7.87 (ddd, J = 8.4, 6.9, 1.2 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.18-4.91 (m, 1H), 2.55-2.29 (m, 2H), 2.21-2.02 (m, 2H), 1.98-1.87 (m, 1H), 1.83-1.56 (m, 5H), 1.50-1.25 (m, 2H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
６４Ｂ：２−(４−メトキシベンゾイル)−Ｎ−(１−((１ｒ,４ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)プロピル)ヒドラジンカルボキサミド
２−((１ｒ,４ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)ブタン酸(０.１ｇ、０.３１９mmol)のトルエン(６mL)溶液に、ＴＥＡ(０.１４mL、０.９６mmol)およびジフェニルホスホリルアジド(０.１mL、０.４２mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で１.５時間、加熱した。反応混合物を減圧下濃縮して、中間体を得た。４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(４２.４mg、０.２０９mmol)のＴＨＦ(２mL)懸濁液に、ＤＩＰＥＡ(０.１７mL、０.９７mmol)および中間体４−(((１ｒ,４ｒ)−４−(１−イソシアナトプロピル)シクロヘキシル)オキシ)キノリン(５０mg、０.１６１mmol)のＴＨＦ(２mL)溶液を加えた。反応混合物をｒｔで３時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物を酢酸エチルで抽出した。有機層を減圧下濃縮した。粗製生成物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを合わせ、減圧下濃縮して、中間体６４Ｂ ＴＦＡ塩(白色固体、６０mg、０.１０２mmol、６３％収率)を得た。LC-MS C27H32N4O4・TFAの分析計算値 476.24, 実測値[M+H] 477.2. Tr = 0.70分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.89 (d, J = 6.6 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 7.91-7.79 (m, 3H), 7.52 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.34-7.13 (m, 3H), 7.01-6.91 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.63-3.47 (m, 1H), 2.35 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 2.13-1.83 (m, 2H), 1.78-1.15 (m, 8H), 0.97 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
実施例６４、２異性体５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｒ,４Ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
封管中の、２−(４−メトキシベンゾイル)−Ｎ−(１−((１ｒ,４ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)プロピル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(６０mg、０.１０２mmol)のＰＯＣｌ３(０.４mL、４.２９mmol)中の反応混合物を窒素気流でパージし、次いで密封し、９０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、２異性体の混合物を得た。異性体を分取ＳＦＣ(方法Ｌ)でさらに分離して、２単離体を得た。実施例６４−１、エナンチオマー１、１０分ランにわたりＴｒ＝６３.４６分(方法Ｌ)。実施例６４−２、エナンチオマー２、１０分にわたりＴｒ＝６.２０分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例６４−１(８.２mg、０.０１７mmol、１７.４％収率)。LC-MS C27H30N4O3の分析計算値 458.23, 実測値[M+H] 459.3. Tr = 1.58分(方法B). 1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ: 8.65 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15-6.98 (m, 3H), 4.83-4.35 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.45-3.32 (m, 1H), 2.22 (d, J = 10.7 Hz, 2H), 1.93-1.79 (m, 2H), 1.72-1.25 (m, 7H), 0.90 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
二番目に溶離した、実施例６４−２(８.１mg、０.０１７mmol、１７.２％収率)。LC-MS C27H30N4O3の分析計算値 458.23, 実測値[M+H] 459.0. Tr = 1.58分(方法B). 1H NMR (600MHz, DMSO-d6) δ: 8.65 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.81-7.66 (m, 3H), 7.58 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.20-6.97 (m, 3H), 4.75-4.46 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.47-3.30 (m, 1H), 2.22 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 1.85 (br. s., 2H), 1.70-1.41 (m, 5H), 1.32 (br. s., 2H), 0.90 (t, J = 7.3 Hz, 3H)
実施例６５、２異性体
Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−２−メトキシエチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
６５Ａ：エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート
エチル２−(４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(中間体ＢＢＲＣが提供される)(５ｇ、１７.００mmol)をジオキサン(２８.３ml)および水(７.０８ml)に溶解した。４−クロロ−６−フルオロキノリン(２.５７ｇ、１４.１５mmol)、続いてＫ２ＣＯ３(５.８７ｇ、４２.５mmol)を加えた。混合物を窒素気流で５分バブリングし、Ｐｄ(Ｐｈ３Ｐ)４(０.３２７ｇ、０.２８３mmol)を加えた。加えた後、反応物を排気し、Ｎ２で３回戻し充填し、次いで、密封し(バイアルをパラフィルムで密封)、１００℃で１６時間加熱した。反応物を減圧下濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで直接精製して、中間体６５Ａ(４.２２ｇ、１３.４７mmol、９５％収率)を得た。LC-MS C19H20FNO2の分析計算値 313.15, 実測値[M+H] 314.1 Tr = 0.75分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.80 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 9.2, 5.6 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 10.2, 2.9 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J = 9.2, 8.1, 2.8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.82 (dd, J = 2.9, 1.7 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.60-2.20 (m, 6H), 2.10-1.94 (m, 2H), 1.67-1.51 (m, 1H), 1.37-1.28 (m, 3H)
６５Ｂ：エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エニル)−３−メトキシプロパノエート
ＴＨＦ(８mL)を含むフラスコに、ＬＤＡ(１.５Ｍヘキサン溶液)(４.８９mL、７.３４mmol)を−７８℃で加え、続いて１,３−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２(１Ｈ)−オン(０.５４mL、４.４７mmol)およびエチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(１.０ｇ、３.１９mmol)のＴＨＦ(３mL)溶液を−７８℃で滴下した。得られた混合物は緑色に変わり、−７８℃で１時間撹拌し、次いでＭＯＭＣｌ(０.３９mL、５.１１mmol)をゆっくり加えた。反応混合物を−７８℃で０.５時間撹拌し、次いで約−２０℃で４時間温め、次いでｒｔで一夜温めた。反応混合物を水で反応停止させ、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ＤＣＭ中の０〜３０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６５Ｂ(淡褐色油状物、０.８ｇ、２.２３８mmol、７０％収率)を得た。LC-MS C21H24FNO3の分析計算値 357.17, 実測値[M+H] 358.2. Tr = 0.78分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.80 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 9.2, 5.5 Hz, 1H), 7.60 (dt, J = 10.1, 2.9 Hz, 1H), 7.47 (ddd, J = 9.1, 8.0, 2.9 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.97-5.69 (m, 1H), 4.45-4.13 (m, 2H), 3.92-3.59 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 2.83-2.63 (m, 1H), 2.57-1.83 (m, 6H), 1.70-1.59 (m, 1H), 1.33 (td, J = 7.2, 1.8 Hz, 3H)
６５Ｃ：エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−３−メトキシプロパノエート
エチル２−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)−３−メトキシプロパノエート(１.０８ｇ、３.０２mmol)のメタノール(２０mL)溶液に、Ｐｄ−Ｃ(１０％wt湿)(０.６４ｇ、０.３０mmol)を加えた。反応混合物を排気し、水素で充填し、再び排気し、水素バルーン下、ｒｔで一夜水素化した。反応混合物をセライトパッドで濾過し、パッドを酢酸エチルおよびＭｅＯＨで洗浄した。濾液を減圧下濃縮した。粗製生成物をＳＦＣ精製により分離した(方法：Waters BEH ２−エチルピリジンカラムで１０％ＩＰＡ)。主生成物フラクションを集め、減圧下濃縮して、中間体６５Ｃ(無色油状物、０.４４ｇ、１.２２４mmol、４０.５％収率)を得た。LC-MS C21H26FNO3の分析計算値 359.19, 実測値[M+H] 360.2. Tr = 0.74分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.83 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 9.2, 5.7 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 10.6, 2.6 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J = 9.2, 7.9, 2.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.22 (dd, J = 12.0, 7.2 Hz, 2H), 3.74-3.48 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.32-3.19 (m, 1H), 3.06 (ddd, J = 10.9, 9.2, 5.0 Hz, 1H), 2.12 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.98-1.64 (m, 8H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
６５Ｄ：２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−３−メトキシプロパン酸
エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−３−メトキシプロパノエート(０.４４ｇ、１.２２mmol)のＴＨＦ(５mL)およびＭｅＯＨ(５mL)溶液に、ＬｉＯＨ溶液(２.０ｍ溶液)(３.６７mL、７.３４mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで一夜撹拌した。反応混合物にさらにＭｅＯＨ(５mL)(２mL)およびＬｉＯＨ溶液(２.０ｍ溶液)(３.６７mL、７.３４mmol)(４mL)をを加え、反応混合物を６５℃で６時間加熱し、次いで４０℃で週末の間撹拌した。反応混合物を冷却し、水で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ溶液でｐＨを４〜５に調節し、得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体６５Ｄ(淡褐色油状物、０.３８ｇ、１.１４７mmol、９４％収率)を得た。LC-MS C19H22FNO3の分析計算値 331.15, 実測値[M+H] 332.2. Tr = 0.62分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.99 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.32-8.16 (m, 2H), 7.95 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.89 (ddd, J = 9.2, 7.9, 2.6 Hz, 1H), 3.82-3.54 (m, 3H), 3.36 (s, 3H), 3.07 (ddd, J = 11.1, 9.0, 4.8 Hz, 1H), 2.09 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 2.03-1.74 (m, 8H)
６５Ｅ：Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−２−メトキシエチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド
２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−３−メトキシプロパン酸、ＴＦＡ(５０mg、０.１１２mmol)のトルエン(４mL)懸濁液に、ジフェニルホスホリルアジド(０.０３mL、０.１４６mmol)およびＴＥＡ(０.０６３mL、０.４４９mmol)を加えた。密封バイアル中の反応混合物は、ＴＥＡを加えた後透明溶液になった。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応物をｒｔに冷却し、減圧下濃縮した。粗製６−フルオロ−４−((１ｓ,４ｓ)−４−(１−イソシアナト−２−メトキシエチル)シクロヘキシル)キノリン(３０mg、０.０９１mmol)のＴＨＦ(２mL)に４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２４.０７mg、０.１１９mmol)およびＴＥＡ(０.０６４mL、０.４５７mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物を酢酸エチルで抽出した。有機層を減圧下濃縮した。粗製生成物を精製することなく次工程反応で使用した。LC-MS C27H31FN4O4の分析計算値 494.23, 実測値[M+H] 495.3. Tr = 0.67分(方法A)
実施例６５、２異性体Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−２−メトキシエチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
粗製Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−２−メトキシエチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド(３５mg、０.０７１mmol)のＰＯＣｌ３(０.３５mL、３.７５mmol)中の混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、２異性体の混合物を得た。異性体を分取ＳＦＣ(方法Ｉ)でさらに分離して、２単離体を得た。実施例６５−１、エナンチオマー１、１０分ランにわたりＴｒ＝３.８７分(方法Ｉ)。実施例６５−２、エナンチオマー２、１０分にわたりＴｒ＝５.５８分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例６５−１(２.９mg、０.００６mmol、８.４％収率)。LC-MS C27H29FN4O3の分析計算値 476.22, 実測値[M+H] 477.3. Tr = 1.41分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.68-7.61 (m, 1H), 7.50 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.05 (br. s., 1H), 3.80 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 2.02-1.58 (m, 10H), 1.21 (s, 2H)
二番目に溶離した、実施例６５−２(３.０mg、０.００６mmol、８.６％収率)。LC-MS C27H29FN4O3の分析計算値 476.22, 実測値[M+H] 477.3. Tr = 1.43分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.81 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.08 (dd, J = 9.1, 5.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.68-7.61 (m, 1H), 7.50 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.05 (br. s., 1H), 3.80 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 2.02-1.58 (m, 10H), 1.21 (s, 2H)
実施例６６
Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
６６Ａ：エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート
エチル２−(４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)アセテート(４.８ｇ、１３.２１mmol)、ギ酸アンモニウム(２.５０ｇ、３９.６mmol)のＭｅＯＨ(８０mL)中の反応混合物を窒素気流でパージし、次いで排気し、続いてＰｄ−Ｃ(１.１２５ｇ、０.５２８mmol、１０％wt湿)を加えた。得られた混合物を７８℃で２時間、加熱した。反応混合物を冷却した。反応混合物にさらにＰｄ−Ｃ(１.１２５ｇ、０.５２８mmol)(０.５ｇ)およびＭｅＯＨ(２０mL)をを加え、反応混合物を７８℃で一夜加熱した。反応混合物を濾過し、フィルターケーキをＭｅＯＨで洗浄した。濾液を減圧下濃縮した。
残留物を酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、減圧下濃縮して、無色油状物を得た。異性体をＳＦＣ(方法ＯＪ−Ｈカラム上の１２％ＭｅＯＨ)で分離して、主異性体中間体６６Ａ(無色油状物、２.５ｇ、６.８４mmol、５１.８％収率)を得た。LC-MS C20H22F3NO2の分析計算値 365.16, 実測値[M+H] 366.1. Tr = 092分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.96 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.18 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.46-3.31 (m, 1H), 2.57-2.43 (m, 3H), 1.99-1.72 (m, 8H), 1.29 (t, J = 7.0 Hz, 3H)
６６Ｂ：エチル３−メトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノエート
ＴＨＦ(１０mL)を含むフラスコに、ＬＤＡ溶液(１.５Ｍのシクロヘキサン溶液)(３.６５mL、５.４７mmol)を−７８℃で加え、続いて１,３−ジメチルテトラヒドロピリミジン−２(１Ｈ)−オン(０.４mL、３.３mmol)およびエチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)アセテート(０.８ｇ、２.１８９mmol)のＴＨＦ(５mL)溶液を−７８℃で滴下した。得られた混合物は褐色に変わり、−７８℃で１時間撹拌し、次いでＭＯＭＣｌ(０.２５mL、３.２８mmol)をゆっくり加えた。反応混合物を−７８℃で２時間撹拌し、次いで２０時間撹拌した。反応混合物を水で反応停止させ、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。残留物をＤＣＭに溶解し、ヘキサン中の０〜５０％酢酸エチルで溶出するゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６６Ｂ(淡黄色油状物、０.３９ｇ、０.９５３mmol、４３.５％収率)を得た。LC-MS C22H26F3NO3の分析計算値 409.18, 実測値[M+H] 410.2. Tr = 0.96分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 8.97 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.88 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.22 (dddd, J = 18.2, 11.1, 7.1, 3.6 Hz, 2H), 3.76-3.54 (m, 2H), 3.49-3.40 (m, 1H), 3.38-3.35 (m, 3H), 3.06 (ddd, J = 11.0, 9.1, 5.0 Hz, 1H), 2.29-1.67 (m, 9H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
６６Ｃ：３−メトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸
エチル３−メトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパノエート(０.４９ｇ、１.１９７mmol)のＴＨＦ(６mL)およびＭｅＯＨ(６mL)溶液に、ＬｉＯＨ溶液(２.０Ｍ溶液)(７.２mL、１４.４mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で５時間加熱した。反応混合物を冷却し、混合物に水および１Ｎ ＨＣｌを加えて、ｐＨを６に調節し、２mLの酢酸を加えて、ｐＨを４に調節した。白色固体が析出し、得られた混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体６６Ｃ(白色固体、０.３８ｇ、０.９９６mmol、８３％収率)を得た。分析的サンプルを分取ＨＰＬＣで精製した。LC-MS C20H22F3NO3の分析計算値 381.15, 実測値[M+H] 382.2. Tr = 0.75分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 9.07 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.30 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 3.90-3.52 (m, 3H), 3.40-3.34 (m, 3H), 3.07 (ddd, J = 11.1, 9.0, 4.8 Hz, 1H), 2.19-1.67 (m, 9H)
６６Ｄ：Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド
３−メトキシ−２−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロパン酸(０.２６ｇ、０.６８２mmol)のトルエン(８mL)懸濁液に、ＤＰＰＡ(０.１８mL、０.８１８mmol)およびＴＥＡ(０.１５mL、１.０３mmol)を加えた。密封バイアル中の反応混合物は、ＴＥＡを加えた後透明溶液になった。反応混合物を７０℃で２時間加熱した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物４−((１ｓ,４ｓ)−４−(１−イソシアナト−２−メトキシエチル)シクロヘキシル)−６−(トリフルオロメチル)キノリン(２５mg、０.０６６mmol)の一部のＴＨＦ(２mL)懸濁液に、４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(１６mg、０.０８mmol)およびＴＥＡ(０.１mL、０.７mmol)を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、分取ＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を含むフラクションを減圧下濃縮して、中間体６６ＤをＴＦＡ塩(白色固体、１５mg、０.０２８mmol,４２％収率)として得た。LC-MS C28H31F3N4O4の分析計算値 544.23, 実測値[M+H] 545.3. Tr = 0.77分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 9.07 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.30 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.10-6.84 (m, 2H), 4.28 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 3.93-3.81 (m, 4H), 3.77-3.59 (m, 1H), 3.55-3.45 (m, 1H), 3.37 (s, 3H), 2.17-1.61 (m, 9H)
実施例６６、Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−２−(４−メトキシベンゾイル)ヒドラジンカルボキサミド、ＴＦＡ(１４mg、０.０２１mmol)のＰＯＣｌ３(０.３５mL、３.７５mmol)の混合物を９０℃で一夜加熱した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例６６化合物(６.４mg、０.０１２mmol、５５％収率)を得た。LC-MS C28H29F3N4O3の分析計算値 526.22, 実測値[M+H] 527.3, Tr = 1.67分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 9.00 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.64 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.07 (br. s., 1H), 3.81 (s, 3H), 3.69-3.47 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.05-1.56 (m, 9H), 1.22 (s, 1H)
実施例６７
５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
実施例６７化合物を、実施例６６に準ずる方法で製造した。
LC-MS C27H26ClF3N4O2の分析計算値 530.17, 実測値[M+H] 531.2, Tr = 1.84分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 9.01 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.67-7.53 (m, 3H), 4.10 (br. s., 1H), 3.70-3.48 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.05-1.55 (m, 10H)
実施例６８、４異性体
５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
６８Ａ：エチル２−(４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エニル)ブタノエート
４−クロロ−８−(トリフルオロメチル)キノリン(０.８ｇ、３.４５mmol)、エチル２−(４−(４,４,５,５−テトラメチル−１,３,２−ジオキサボロラン−２−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)ブタノエート(１.１３５ｇ、３.５２mmol)(中間体)の１,４−ジオキサン(２５mL)溶液に、炭酸カリウム(１.１９３ｇ、８.６４mmol)および水(５mL)を加えた。反応混合物を窒素気流で３分パージし、続いてＰｄ(Ｐｈ３Ｐ)４(０.１６ｇ、０.１４mmol)を加えた。得られた混合物を窒素気流下、１００℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルおよび飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮した。抽出物をヘキサン中の０〜２５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６８Ａ(油状物、０.９８ｇ、２.５０４mmol、７２.５％収率)を得た。LC-MS C22H24F3NO2の分析計算値 391.17, 実測値[M+H] 392.1. Tr = 1.15分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 9.00 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.21 (dd, J = 7.6, 4.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.28 (br. s., 1H), 5.82 (br. s., 1H), 4.22 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.59-1.85 (m, 8H), 1.78-1.68 (m, 2H), 1.32 (td, J = 7.1, 1.9 Hz, 3H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
６８Ｂ：エチル２−(４−(８−(トリフルオロメチル)−１,２,３,４−テトラヒドロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート
エチル２−(４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシ−３−エン−１−イル)ブタノエート(０.９５ｇ、２.４２７mmol)のＭｅＯＨ(２０mL)中の反応混合物を窒素気流で３分パージし、続いてＰｄ−Ｃ(１０％wt.、湿)(０.１５５ｇ、０.１４６mmol)を加えた。得られた混合物を排気し、水素バルーンで、ｒｔで２０時間水素化した。反応混合物を濾過し、フィルターケーキをＭｅＯＨで洗浄した。濾液を減圧下濃縮し、残留物をヘキサン中０〜１５％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、中間体６８Ｂ(油状物、０.８５ｇ、２.１３９mmol、８８％収率)を得た。LC-MS C22H30F3NO2の分析計算値 397.22, 実測値[M+H] 398.2. Tr = 1.22分(方法A)
６８Ｃ：エチル２−((１ｓ,４ｓ)−４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート
エチル２−(４−(８−(トリフルオロメチル)−１,２,３,４−テトラヒドロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート(０.８ｇ、２.０１３mmol)のトルエン(２０mL)溶液に、ＤＤＱ(０.５５ｇ、２.４１５mmol)を加えた。暗紫−赤色反応混合物を１００℃で２時間加熱した。反応混合物は淡褐色混合物に変わった。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、濾過した。濾液を減圧下濃縮し、残留物をヘキサン中の０〜２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物異性体混合物(油状物、０.６９ｇ、１.７５４mmol、８７％収率)を得た。異性体をＳＦＣでさらに分離して、主異性体を中間体６８Ｃ(方法：Chiral ICカラムで１０％ＭｅＯＨ)として得た(油状物、０.２９ｇ、０.７３７mmol、３６.６％収率)。LC-MS C22H26F3NO2の分析計算値 393.19, 実測値[M+H] 394.1. Tr = 1.20分(方法A). 1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ: 9.02 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.57-3.30 (m, 1H), 2.64 (td, J = 10.8, 4.0 Hz, 1H), 2.17-1.56 (m, 11H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.95 (t, J = 7.5 Hz, 3H)
６８Ｄ：２−(４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸
エチル２−(４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタノエート(０.２９ｇ、０.７３７mmol)のＴＨＦ(５mL)およびＭｅＯＨ(５mL)溶液に、ＬｉＯＨ(２.０Ｍ溶液)(３.５６mL、７.１２mmol)を加えた。得られた混合物を７０℃で一夜加熱した。反応混合物に、さらにＬｉＯＨ(２.０Ｍ溶液)(３.５６mL、７.１２mmol)およびＴＨＦ(４mL)を加えた。反応混合物を７０℃で３０時間、加熱した。反応混合物を冷却し、水で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ溶液を加えてｐＨを７に調節し、次いで２mLのＨＯＡｃを加えてｐＨ＝５〜６に調節した。得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を減圧下濃縮して、中間体６８Ｄ(淡褐色固体、０.２４ｇ、０.６５７mmol、８９％収率)を得た。LC-MS C20H22F3NO2の分析計算値 365.16, 実測値[M+H] 366.1. Tr = 0.98分(方法A). 1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ: 8.90 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.62-3.49 (m, 1H), 2.73-2.59 (m, 1H), 1.98-1.34 (m, 11H), 0.98 (t, J = 7.4 Hz, 3H)
６８Ｅ：２−(４−メトキシベンゾイル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)ヒドラジンカルボキサミド
２−(４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)ブタン酸(０.１８ｇ、０.４９３mmol)のトルエン(６mL)溶液に、ＴＥＡ(０.１３７mL、０.９８５mmol)およびＤＰＰＡ(０.１３３mL、０.６１６mmol)を加えた。反応混合物を７０℃で１.５時間、加熱した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物の一部を次工程で使用した。４−メトキシベンゾヒドラジド、ＨＣｌ(２５.４mg、０.１２６mmol)のＴＨＦ(１mL)懸濁液に、ＤＩＰＥＡ(０.１３５mL、０.７７３mmol)および４−((１ｓ,４ｓ)−４−(１−イソシアナトプロピル)シクロヘキシル)−８−(トリフルオロメチル)キノリン(３５mg、０.０９７mmol)溶液を加えた。反応混合物をｒｔで２時間撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物を精製することなく次工程反応で使用した。LC-MS C28H31F3N4O3の分析計算値 528.23, 実測値[M+H] 529.2. Tr = 0.97分(方法A)
実施例６８：５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン
２−(４−メトキシベンゾイル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)ヒドラジンカルボキサミド(４０mg、０.０７６mmol)のＰＯＣｌ３(０.６mL、６.４４mmol)中の反応混合物を、１００℃で４時間加熱した。反応混合物を冷却した。反応混合物を減圧下濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製して、実施例６８化合物(２６mg、０.０５０mmol、６６.６％収率)を得た。LC-MS C28H29F3N4O2の分析計算値 510.22, 実測値[M+H] 510.9, Tr = 2.19分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.97 (dd, J = 19.8, 4.2 Hz, 1H), 8.56 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.17 (br. s., 1H), 7.81-7.70 (m, 3H), 7.65-7.47 (m, 2H), 7.08 (t, J = 8.3 Hz, 2H), 3.94-3.84 (m, 1H), 3.82 (d, J = 4.0 Hz, 3H), 2.01-1.37 (m, 12H), 0.93 (d, J = 5.4 Hz, 3H)
ジアステレオマー混合物をキラル分離(方法Ｍ)でさらに精製して、４異性体を得た。実施例６８−１、エナンチオマー１、４５分ランにわたりＴｒ＝２５分(方法Ｎ)。実施例６５−２、エナンチオマー２、４５分でＴｒ＝２８分、エナンチオマー３、４５分でＴｒ＝３６分、エナンチオマー４、４５分でＴｒ＝４２分(絶対立体化学は未確定)。
最初に溶離した、実施例６８−１(５.９mg、０.０１１mmol、１５.１％収率)。LC-MS C28H29F3N4O2の分析計算値 510.22, 実測値[M+H] 511.2. Tr = 2.17分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.98 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 7.62 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.58-3.48 (m, 1H), 1.96-1.60 (m, 10H), 1.55-1.36 (m, 1H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
二番目に溶離した、実施例６８−２(５.１mg、０.０１０mmol、１２.９％収率)。LC-MS C28H29F3N4O2の分析計算値 510.22, 実測値[M+H] 511.2. Tr = 2.17分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.98 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.5 Hz, 3H), 7.62 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 3.87 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.58-3.48 (m, 1H), 1.96-1.60 (m, 10H), 1.55-1.36 (m, 1H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
三番目に溶出した、実施例６８−３(４.７mg、０.００９mmol、１２.０％収率)。LC-MS C28H29F3N4O2の分析計算値 510.22, 実測値[M+H] 511.2. Tr = 2.16分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.94 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.84-7.66 (m, 3H), 7.55 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.54 (br. s., 1H), 3.46-3.29 (m, 1H), 1.93 (br. s., 4H), 1.74-1.32 (m, 7H), 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
四番目に溶出した、実施例６８−４(４.７mg、０.００９mmol、１２.０％収率)。LC-MS C28H29F3N4O2の分析計算値 510.22, 実測値[M+H] 511.0. Tr = 2.16分(方法B). 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ: 8.94 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.84-7.66 (m, 3H), 7.55 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.54 (br. s., 1H), 3.46-3.29 (m, 1H), 1.93 (br. s., 4H), 1.74-1.32 (m, 7H), 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
材料および方法
次の一般的材料および方法を、記載されている場面で使用したか、または記載した実施例で実施使用し得る。
分子生物学の標準的方法は以下の科学文献に記載されている(例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001)；および細菌細胞におけるクローニングおよびＤＮＡ変異誘発(Vol. 1)、哺乳動物細胞および酵母におけるクローニング(Vol. 2)、糖複合体およびタンパク質発現(Vol. 3)ならびにバイオインフォマティクス(Vol. 4)を記載するAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY (2001)参照)。
科学文献には、免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化、ならびに化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の産生およびタンパク質の糖鎖付加を含むタンパク質精製の方法が記載されている(例えば、Coligan et al., Current Protocols in Protein Science, Vols. 1-2, John Wiley and Sons, Inc., NY (2000)参照)。
例えば、抗原性フラグメント、リーダー配列、タンパク質折りたたみ、機能的ドメイン、糖鎖付加部位および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージおよびデータベースは入手可能である(例えば、GCG(登録商標)Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA)；およびDeCypher(登録商標)(TimeLogic Corp., Crystal Bay, NV)参照)。
ここに記載する化合物の評価の基礎として役立ち得るアッセイおよび他の実験技術は科学文献に豊富に記載されている。
ＩＤＯ酵素アッセイおよびキヌレニン(ＫＹＮ)の細胞産生は、Sarkar, S.A. et al., Diabetes, 56: 72-79 (2007)に記載される。簡潔には、特記しない限り、全ての化学物質はSigma-Aldrich(St. Louis, MO)から購入できる。１,０００個のヒト島群を１mL培地中、サイトカインと２４時間培養し、５分、８００×ｇの遠心分離により回収し、プロテアーゼ阻害剤含有１５０μL ＰＢＳ中、超音波処理し得る(セット２；Calbiochem, EMD Biosciences, San Diego, CA)。超音波処理物を１０分、１０,０００×ｇで遠心分離し、上清を、トリプリケートで、４０μl サンプルと等量の４０mmol／Ｌ アスコルビン酸(ｐＨ７.０に中和)、１００μmol／Ｌ メチレンブルー、２００μｇ／mLカタラーゼおよび４００μmol／ｌ Ｌ−Ｔｒｐを含む１００mmol／Ｌ リン酸カリウム緩衝液、ｐＨ６.５を３０分、３７℃でインキュベートすることによりアッセイし得る。アッセイを１６μL ３０％(ｗ／ｖ) トリクロロ酢酸(ＴＣＡ)を加えて停止させ、さらに６０℃で１５分インキュベートして、Ｎ−ホルミルキヌレニンをＫＹＮに加水分解し得る。混合物を次いで１２,０００rpmで１５分遠心分離でき、ＫＹＮを、９６ウェルマイクロタイタープレート中、等量の上清と２％(ｗ／ｖ) エールリッヒ試薬を氷酢酸中で混合し、４８０nmの吸光度をＬ−ＫＹＮを標準として使用して読むことにより定量し得る。島サンプルのタンパク質を、５９５nmでのBio-Radタンパク質アッセイにより定量し得る。島培養上清におけるＬ−ＫＹＮの検出のために、タンパク質を５％(ｗ／ｖ) ＴＣＡで沈殿させ、１２,０００rpmで１５分遠心分離し、上清中のＫＹＮを、上記のとおりエールリッヒ試薬で検出し得る。ＩＬ−４(１０μｇ／mL；５００〜２,０００単位／mL)および１−α−メチルＴｒｐ(１−ＭＴ；４０μmol／Ｌ)を記載するとおり、インキュベーション培地に加え得る。このアッセイはまた細胞ベースのアッセイの形に基づいてもよく、ＵＶ／Ｖｉｓ検出の代替としてＬＣＭＳ／ＭＳで定量し得る。
ウェスタンブロット分析。２４時間、マイアミ培地でサイトカイン存在下インキュベートした１,０００〜１,２００島の群を、上記のとおりＰＢＳ中に採取し、超音波処理でき、５０μｇタンパク質サンプルを１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで電気泳動し得る。ヒト−ＩＤＯプラスミド(３μｇ)または空ベクター細胞でトランスフェクトしたＣＯＳ７細胞(０.６×１０６細胞／６０mm３ペトリ皿)を、それぞれ陽性および陰性対照として使用し得る。タンパク質を、電気泳動により半乾燥方法でポリビニリジンフルオライド膜に移し、５％(ｗ／ｖ)脱脂粉乳でＴｒｉｓ緩衝化食塩水および０.１％Ｔｗｅｅｎ中１時間遮断し、一夜、抗ヒトマウスＩＤＯ抗体(１：５００；Chemicon, Temecula, CA)、ホスホ−ＳＴＡＴ１α ｐ９１およびＳＴＡＴ１α ｐ９１(１：５００；Zymed, San Francisco, CA)とインキュベートし得る。抗マウスホースラディッシュペルオキシダーゼ標識二次抗体(Jackson Immunolabs, West Grove, PA)と１時間インキュベーション後、免疫反応性タンパク質をECL PLUS(登録商標)ウェスタンブロッティング検出試薬(Amersham BioSciences, Buckinghamshire, U.K.)で可視化し得る。
ＩＤＯの免疫組織化学的検出。島を、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド(Invitrogen)で１時間固定し、溶融１０％ブタヒフゼラチンブロックに固定化し(３７℃)、最適切断温度化合物に包埋し得る。島組織に対する免疫蛍光染色を、膵臓・十二指腸ホメオボックス１(ＰＤＸ１)およびＩＤＯに対して生じさせた抗体で染色した７μm切片で実施し得る。抗原検索を、９７℃で、１０mmol／ｌ Ｔｒｉｓおよび１mmol／ｌ ＥＤＴＡ(ｐＨ９.０)を含む緩衝液中、３０分、水浴で実施し得る。切片を、ＰＢＳ中５％正常ヤギ血清で１時間遮断し得る。次いで、組織を、加湿チャンバー中、一夜、室温でマウスモノクローナル抗ヒトＩＤＯ抗体(１：２０；Chemicon)およびヤギポリクローナル抗ヒトＰＤＸ１抗体(１：２,０００；Dr. Chris Wright, School of Medicine, Vanderbilt, TNに依頼できる)と反応させ得る。二次抗体抗ヤギ(Ｃｙ３で標識)および抗マウス(Ｃｙ２で標識)をJackson Immunolabsから購入でき、１：２００濃度で使用し得る。核をHoechst 33258(Molecular Probes, Eugene, OR)で染色し得る。オリンパスＤＳＵ(スピニングディスク共焦点)および浜松ORCA IIER単色ＣＣＤカメラを備えたオリンパス１Ｘ８１倒立電動顕微鏡からIntelligent Imaging Systemソフトウェアにより画像を取得できる。
本発明のＩＤＯ阻害剤を評価する別の手段はＷＯ２０１０／０２３３１６６に記載され、以下に要約する。
生化学アッセイ。ヒトおよびマウス両者のＩＤＯについてのｃＤＮＡクローンは単離され、配列決定により確認されており、市販されている。生化学的試験のためにＩＤＯを調製するために、Ｃ末端ＨｉｓタグＩＤＯタンパク質を、ＩＰＴＧ誘導型ｐＥＴ５ａベクター系を使用して大腸菌で産生させ、ニッケルカラムで単離し得る。一部精製したタンパク質の収量を、ゲル電気泳動により確認でき、濃度をタンパク質標準との比較により推定する。ＩＤＯ酵素活性をアッセイするために、キヌレニン産生のための９６ウェルプレート分光学的定量法を、公開されている手順により実施し得る(例えば、Littlejohn, T.K. et al., Prot. Exp. Purif., 19: 22-29 (2000)参照)。ＩＤＯ阻害性活性スクリーニングのために、化合物を、１００μL 反応体積中の５０ngのＩＤＯ酵素に対して、例えば、２００μMの単一濃度で、トリプトファンを、例えば、０μM、２μM、２０μMおよび２００μMの漸増濃度で加えて、評価し得る。キヌレニン産生を１時間目に測定し得る。
細胞ベースのアッセイ。ＣＯＳ−１細胞を、製造業者が推奨するとおり、リポフェクタミン２０００(Invitrogen)を使用してＩＤＯ ｃＤＮＡを発現するＣＭＶプロモーター駆動プラスミドに一過性にトランスフェクトし得る。細胞のコンパニオンセットを、ＴＤＯ発現プラスミドで一過性にトランスフェクトし得る。トランスフェクション４８時間後、細胞を、６×１０４細胞／ウェルで９６ウェル形式に割り当て得る。翌日、ウェルを洗浄してよく、２０μｇ／mL トリプトファンを含む新規媒体(無フェノールレッド)を阻害剤と共に加え得る。酵素アッセイについて先に記載のとおり、５時間で反応を停止させ、上清を採り、キヌレニンについて分光光度的にアッセイし得る。ＩＤＯ活性の最初の確認を得るために、化合物を、例えば、１００μMの単一濃度で評価し得る。選択した化合物について、より詳細な用量漸増プロファイルを集め得る。
薬力学および薬物動態評価。薬力学アッセイは、キヌレニンおよびトリプトファンの両方の血清レベルの測定に基づき得て、キヌレニン／トリプトファン比の計算は、ベースライントリプトファンレベルと無関係のＩＤＯ活性の推定値を提供する。血清トリプトファンおよびキヌレニンレベルをＨＰＬＣにより決定でき、血清化合物レベルはまた場合により同一ＨＰＬＣランで決定し得る。
化合物を、最初にマウスをＬＰＳで負荷し、次いで血清キヌレニンレベルがプラトーになった時点で化合物のボーラス用量を投与することにより評価し得る。キヌレニンプールが、１０分未満の活性半減期で急速に入れ替わるため、既存のキヌレニンは、ＩＤＯ阻害剤がキヌレニン産生に対して有する影響を過度にマスクすることは予測されない。各実験は、非ＬＰＳ暴露マウス(他のマウスの比較対照となるベースラインキヌレニンレベルを決定するため)および媒体単独を投与されているＬＰＳ暴露マウスのセット(ＩＤＯ活性化の陽性対照を提供するため)を含み得る。各化合物を、最初にマウスにおいて少なくとも１００mg／kgの範囲の高ｉ.ｐ.ボーラス用量で評価し得る。キヌレニンおよびトリプトファンレベルのＨＰＬＣ分析(薬力学分析)ならびに化合物レベル(薬物動態分析)のために、規定した間隔で採血し得る(例えば、化合物投与５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間および２４時間後、５０μL サンプル)。薬物動態データから、達成される化合物のピーク血清濃度を決定し、クリアランス速度を推定できる。種々の時点でキヌレニン／トリプトファン比に対して血清中の化合物レベルを比較することにより、インビボでのＩＤＯ阻害の有効ＩＣ５０がおおまかに推定され得る。有効性を示す化合物を評価して、ピーク濃度で１００％ＩＤＯ阻害を達成する最大用量を決定し得る。
生物学的活性の評価
実施例化合物を、ＩＤＯ活性阻害について試験した。実験法および結果を下に提供する。
ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトＩＤＯ１ ｃＤＮＡ(NM 002164.2)を担持するｐＣＤＮＡベースの哺乳動物発現ベクターでエレクトロポレーションによりトランスフェクトした。２週間、１mg／ml Ｇ４１８含有培地(１０％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ)で培養した。ＩＤＯ阻害アッセイのためにヒトＩＤＯ１タンパク質を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞のクローンを選択し、増殖させた。
ヒトＩＤＯ１／ＨＥＫ２９３細胞を、３８４ウェル黒色壁透明底組織培養プレート(Matrix Technologies LLC)で、１０％ＦＢＳ含有無ＲＰＭＩ／フェノールレッド培地中、１０,０００細胞／５０μL／ウェルで播種した。１００nLの一定濃度の化合物をＥＣＨＯ液体ハンドリングシステムを使用して各ウェルに加えた。細胞を、２０時間、５％ＣＯ２の３７℃インキュベーターでインキュベートした。
化合物処理を、最終濃度０.２％でトリクロロ酢酸(Sigma-Aldrich)を加えて、停止させた。細胞プレートをさらに５０℃で３０分インキュベートした。新規透明底３８４ウェルプレートで、等量の上清(２０μL)および０.２％(ｗ／ｖ) エールリッヒ試薬(４−ジメチルアミノベンズアルデヒド、Sigma-Aldrich)を氷酢酸中混合した。このプレートを室温で３０分インキュベートした。４９０nmでの吸光度を、Envisionプレートリーダーで測定した。
０％阻害を、５００nMの対照標準処理のカウントを１００％阻害および化合物ではないが、ＤＭＳＯで処理したカウントを０％阻害として使用して、計算した。
ここに記載する化合物の活性を下に提供し、ここで、効力レベルを次のとおり提供する：(効力：ＩＤＯ ＩＣ５０：Ａ＜０.０５μm；Ｂ＜０.２５μm；Ｃ ＜２μm)。
ＨｅＬａ細胞ベースのインドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼ(ＩＤＯ)アッセイにおける阻害剤活性の評価
ＨｅＬａ(ATCC(登録商標)CCL-2)細胞をＡＴＣＣ(登録商標)から得て、４.５ｇ／Ｌ グルコース、４.５ｇ／Ｌ Ｌ−グルタミンおよび４.５ｇ／Ｌ ピルビン酸ナトリウム(#10-013-CV, Corning)、２mM Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンジペプチド(#35050-061、Gibco)、１００Ｕ／mL ペニシリン、１００μｇ／mL ストレプトマイシン(#SV30010、HyClone)および１０％ウシ胎児血清(#SH30071.03, HyClone)添加ダルベッコ改変イーグル培地で培養した。細胞を、加湿インキュベーターで、３７℃で５％ＣＯ２中、インキュベートした。
ＩＤＯ活性を、次のとおりキヌレニン産生の関数として評価した：ＨｅＬａ細胞を、９６ウェル培養プレートに５,０００細胞／ウェルの密度で播種し、一夜平衡化させた。２４時間後、培地を吸引し、最終濃度２５ng／mLでＩＦＮγ(#285-IF/CF, R&D Systems)を含む培地と置き換えた。各試験化合物の連続希釈を、総体積２００μLの培養培地で細胞に加えた。さらに４８時間インキュベーション後、１７０μLの上清を、新しい９６ウェルプレートの各ウェルに移した。１２.１μLの６.１Ｎ トリクロロ酢酸(#T0699、Sigma-Aldrich)を各ウェルに加え、混合し、続いて６５℃で２０分インキュベートして、インドールアミン２,３−ジオキシゲナーゼの生成物であるＮ−ホルミルキヌレニンをキヌレニンに加水分解させた。反応混合物を１０分、５００×ｇで遠心分離して、沈殿を沈降させた。１００μLの上清を、新しい９６ウェルプレートの各ウェルに移した。１００μlの２％(ｗ／ｖ) ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド(#15647-7、Sigma-Aldrich)の酢酸(#A6283、Sigma-Aldrich)溶液を各ウェルに加え、混合し、室温で２０分インキュベートした。キヌレニン濃度を４８０nmでの吸光度の測定により決定し、SPECTRAMAX(登録商標)M2eマイクロプレートリーダー(Molecular Devices)を使用して、Ｌ−キヌレニン(#K8625、Sigma-Aldrich)標準曲線に対して検量した。各阻害剤濃度の活性パーセントを決定し、ＩＣ５０値を非線形回帰を使用して評価した。
ここに記載する化合物の活性を下に示し、ここで、効力レベルを次のとおりに示す：(効力：ＩＤＯ ＩＣ５０：Ａ＜０.１μm；Ｂ＜１μm；Ｃ＜１０μm)
ＩＤＯアッセイの結果を、下表に示す。

Claims (18)

  1. 式Ｉまたは式II
    〔式中、
    ＸはＣＨまたはＮであり；
    ＴはＣＨまたはＮであり；
    Ｖは結合またはＯであり；
    ＹはＣＨまたはＮであり；
    Ｗは−ＣＨ−、−Ｃ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)−またはＮであり；
    ｎは０、１、２、３または４であり；
    Ｌは場合により独立してＣ１−Ｃ６アルキルまたは−Ｃ１−Ｃ６アルクＯＣ１−Ｃ６アルキルである１、２または３置換基で置換されていてよいＣ１−Ｃ６アルキレンであり；
    Ｚは結合、−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)であり；
    Ａはトリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、チアゾリルまたはイミダゾリルであり；
    Ｚ’は結合、−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)であり；
    Ｒ１はＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであり；
    Ｒ１ＡはＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６ハロアルキルであり；
    Ｒ２は場合により独立してハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたは場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいヘテロアリールである１、２または３置換基で置換されていてよいアリール；
    場合により独立してハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたは場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいヘテロアリールから選択される１、２または３置換基で置換されていてよいＣ３−Ｃ１０シクロアルキル；
    Ｃ１−Ｃ６アルク−Ｏ−Ｃ１−Ｃ６アルキル；または
    場合により独立してハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたは場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいヘテロアリールである１、２または３置換基で置換されていてよいヘテロアリール
    である。〕
    の化合物またはその薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体もしくは溶媒和物。
  2. 式Ｉの化合物である、請求項１に記載の化合物。
  3. 式IIの化合物である、請求項１に記載の化合物。
  4. ｎが２である、請求項１〜３の何れかに記載の化合物。
  5. Ｖが結合である、請求項１〜４の何れかに記載の化合物。
  6. Ｙが−ＣＨ−であり、Ｗが−ＣＨ−である、請求項１〜５の何れかに記載の化合物。
  7. Ｌが１個のＣ１−Ｃ６アルキルで置換されているＣ１アルキレンである、請求項１〜６の何れかに記載の化合物。
  8. Ｚが結合である、請求項１〜７の何れかに記載の化合物。
  9. Ｚが−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である、請求項１〜７の何れかに記載の化合物。
  10. Ｚ’が結合である、請求項１〜９の何れかに記載の化合物。
  11. Ｚ’が−ＮＨ−または−Ｎ(Ｃ１−Ｃ６アルキル)である、請求項１〜９の何れかに記載の化合物。
  12. Ｒ１がＨ、Ｆまたは−ＣＦ３である、請求項１〜１１の何れかに記載の化合物。
  13. Ｒ１ＡがＨである、請求項１〜１２の何れかに記載の化合物。
  14. Ｒ２が場合により独立してハロ、−ＣＮ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＣ１−Ｃ６アルキルまたは場合によりＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてよいヘテロアリールである１、２または３置換基で置換されていてよいアリールである、請求項１〜１３の何れかに記載の化合物。
  15. 次のものである、請求項１に記載の化合物：
    ４−((１ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−クロロフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)−６−フルオロキノリン；
    ２−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ６−フルオロ−４−((１ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−フルオロフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ２−(４−クロロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ２−(４−クロロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール；
    ４−(５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−イル)ベンゾニトリル；
    Ｎ−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン；
    ３−(４−シアノフェニル)−１−(４−メトキシベンジル)−１−((１ｒ,４ｒ)−４−フェニルシクロヘキシル)尿素；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(３−フルオロ−４−メチルフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(３−クロロ−４−フルオロフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)−６−フルオロキノリン；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−フェニル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(３−フルオロフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−ｐ−トリル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    ２−(３−フルオロ−４−メチルフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ２−(３−クロロ−４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−イソプロポキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−フェニル−１,３,４−オキサジアゾール；
    ５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    Ｎ−(４−フルオロフェニル)−５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    ５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−Ｎ−フェニル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−チアジアゾール−２−アミン；
    ５−シクロヘキシル−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−シクロプロピル−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ４−(５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチルアミノ)−１,３,４−オキサジアゾール−２−イル)ベンゾニトリル；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(５−メチルチアゾール−２−イル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−フルオロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メチルチアゾール−２−イル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(６−メトキシピリジン−３−イル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(メトキシメチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−(チアゾール−２−イル)フェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４−(４−メトキシフェニル)チアゾール−２−アミン；
    ４−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チアゾール−２−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール−２−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)チアゾール−２−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    ４−(５−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチルアミノ)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)ベンゾニトリル；
    Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール；
    ４−((１ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−クロロフェニル)−１Ｈ−イミダゾール−２−イル)エチル)シクロヘキシル)−６−フルオロキノリン；
    ５−(４−フルオロフェニル)−２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール；
    ４−(２−((Ｒ)−１−((１ｓ,４Ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)オキサゾール−５−イル)ベンゾニトリル；
    ６−フルオロ−４−((１Ｓ,４ｓ)−４−((Ｒ)−１−(５−(４−フルオロフェニル)−１Ｈ−イミダゾール−２−イル)エチル)シクロヘキシル)キノロン；
    Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−(１−((１ｒ,４ｒ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ６−フルオロ−４−(４−(１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)プロピル)シクロヘキシル)キノロン；
    ２−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−イソプロポキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ６−フルオロ−４−(４−(１−(５−(４−イソプロポキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−イル)プロピル)シクロヘキシル)キノロン；
    ２−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−イソプロポキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール；
    ５−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    ５−(１−(４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−Ｎ−(４−メトキシフェニル)−４Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−アミン；
    Ｎ−(２−エトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−フルオロフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−フルオロフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(２−フルオロ−３−メチルピリジン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−((Ｒ)−１−((１ｒ,４Ｒ)−４−(キノリン−４−イルオキシ)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−フルオロキノリン−４−イル)シクロヘキシル)−２−メトキシエチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−５−(４−メトキシフェニル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    ５−(４−クロロフェニル)−Ｎ−(２−メトキシ−１−((１ｓ,４ｓ)−４−(６−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)エチル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；または
    ５−(４−メトキシフェニル)−Ｎ−(１−((１ｓ,４ｓ)−４−(８−(トリフルオロメチル)キノリン−４−イル)シクロヘキシル)プロピル)−１,３,４−オキサジアゾール−２−アミン；
    またはその薬学的に許容される塩、立体異性体、互変異性体もしくは溶媒和物。
  16. 請求項１〜１５の何れかに記載の化合物および薬学的に許容される添加物を含む、医薬組成物。
  17. ヤーボイ、オプジーボまたはキイトルーダまたはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
  18. 処置を必要とする対象における癌を処置する方法であって、該患者に治療有効量の請求項１〜１４の何れかに記載の化合物を投与することを含む、方法。
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