EA018255B1 - Белки, связывающие tweak, и их применение - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к белкам, связывающим TWEAK, и их применению.

Description

Перекрестные ссылки на родственные заявки

По данной заявке испрашивается приоритет по заявке США с порядковым № 60/685149, поданной 27 мая 2005 г., содержание которой полностью включено в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Уровень техники

Цитокины, родственные фактору некроза опухолей (ΤΝΕ), представляют собой суперсемейство белков, которые имеют множество функций, включая те, что вовлечены в иммунную регуляцию и регуляцию апоптоза. ΤνΕΑΚ (ΤΝΕ-йкс \\'сак тбисет οί арор1О818, ΤΝΕ-подобный слабый индуктор апоптоза) является одним из членов этого суперсемейства.

Сущность изобретения

Антитела против ΤνΕΑΚ могут применяться для лечения ряда состояний и нарушений, например воспалительного заболевания, нервного расстройства или других описанных здесь нарушений. Антитело предпочтительно является человеческим, гуманизированным или иным фактически человеческим анти телом при применении для лечения человека.

В одном аспекте описание характеризует белок, который содержит первую и вторую последовательности вариабельного домена иммуноглобулина и который связывается с ΤνΕΑΚ, например с ΤνΕΑΚ человека. Белок может связываться с ΤνΕΑΚ, например, с аффинностью, соответствующей Κ менее чем 10^-7 М, например 10^-8, 10^-9, 10^-10, 10^-11 М или более. Также в данном описании белок именуется антителом против ΤνΕΑΚ. Первая и вторая последовательности вариабельного домена иммуноглобулина могут включать по меньшей мере часть вариабельного домена иммуноглобулина, достаточную для образования антигенсвязывающей области, которая связывается с ΤνΕΑΚ. В большинстве случаев первая и вторая последовательности вариабельного домена иммуноглобулина соответствуют последовательностям вариабельного домена тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина соответственно, например образующих пару или иным образом совместимых тяжелой и легкой цепей.

Антитело может связываться с эпитопом ΤνΕΑΚ, который включает по меньшей мере один, два, три или четыре аминокислотных остатка из эпитопа ΤνΕΑΚ, распознаваемого Ρ2Ό10, может связываться с пептидом из ΤνΕΑΚ, который связывается Ρ2Ό10 (например, с пептидом менее чем из 25, 20 или 15 аминокислот в длину) или с участком ΤνΕΑΚ, распознаваемым Ρ2Ό10. Например, антитело специфически связывается с эпитопом, например линейным или конформационным эпитопом ΤνΕΑΚ, в частности ΤνΕΑΚ человека, например, с растворимым участком ΤνΕΑΚ. Антитело может конкурировать с Ρ2Ό10 за связывание с ΤνΕΑΚ, например с ΤνΕΑΚ человека. Антитело может конкурентно ингибировать связывание Ρ2Ό10 с ΤνΕΑΚ, например с ΤνΕΑΚ человека. В одном варианте осуществления антитело может связываться с эпитопом, который перекрывается с таковым для Ρ2Ό10, например включает по меньшей мере одну, две, три или четыре аминокислоты, общих с эпитопом для Ρ2Ό10, или с эпитопом, который, когда связан, стерически препятствует взаимодействию ΤνΕΑΚ с Ρ2Ό10.

Например, антитело против ΤνΕΑΚ может связываться с ΤνΕΑΚ и модулировать, например ингибировать, взаимодействие (например, связывание) между ΤνΕΑΚ и рецептором ΤνΕΑΚ, например Еп14 (например, Еп14 человека). Также антитело может ослаблять сигнальную активность рецептора ΤνΕΑΚ. Антитело может выявлять ΤνΕΑΚ, связывать ΤνΕΑΚ и/или модулировать стабильность ΤνΕΑΚ ίη νίνο.

В одном варианте осуществления антитело специфически связывается по меньшей мере с частью сайта взаимодействия с ΤνΕΑΚ, который контактирует с Εη14 (например, Εη14 человека). Антитело может конкурировать с Εη14 за связывание с ΤνΕΑΚ, например с ΤνΕΑΚ человека. Антитело может конкурентно ингибировать связывание Εη14 с ΤνΕΑΚ. Антитело может взаимодействовать с эпитопом ΤνΕΑΚ, который при связывании стерически препятствует взаимодействию между ΤνΕΑΚ и Εη14 (например, между ΤνΕΑΚ человека и Εη14 человека).

В одном воплощении антитело может ингибировать одну или несколько активностей, ассоциированных с ΤνΕΑΚ, с 1С₅₀ приблизительно от 50 нМ до 5 пМ, обычно приблизительно от 100 до 250 пМ или менее. Например, антитело может ингибировать способность ΤνΕΑΚ активировать пролиферацию эндотелиальных клеток или новообразование кровеносных сосудов. В одном воплощении антитело против ΤνΕΑΚ снижает по меньшей мере одну активность, ассоциированную с ΤνΕΑΚ, например так, что антитело может регулировать воспалительное состояние при введении субъекту.

В прочих вариантах осуществления антитело может связываться с ΤνΕΑΚ с кинетическими показателями в диапазоне от 10³ до 10⁸ М^-1с^-1, в большинстве случаев от 10⁴ до 10⁷ М^-1с^-1. В еще одном воплощении антитело имеет кинетические показатели диссоциации в диапазоне от 10^-2 до 10^-6 с^-1, обычно от 10^-2 до 10^-5 с^-1. В одном воплощении антитело связывается с ΤνΕΑΚ, например с ΤνΕΑΚ человека, с аффинностью и/или кинетическими характеристиками, сходными (например, в пределах коэффициента пять или десять) с таковыми для моноклонального антитела Ρ2Ό10 или его модифицированных форм, например его химерных форм или гуманизированных форм (например, описанной здесь гуманизированной формы). Аффинность и кинетические показатели связывания антитела против ΤνΕΑΚ могут быть исследованы, например, при применении биосенсорной технологии (ΒIΑСΟΚΕ™).

В одном воплощении антитело представляет собой антигенсвязывающий фрагмент полноразмерного антитела, например ЕаЬ, Е(аЬ')₂, Εν или одноцепочечный Εν-фрагмент. Обычно антитело представляет

- 1 018255 собой полноразмерное антитело. Антитело может быть моноклональным антителом или моноспецифическим антителом. Например, антитело находится в композиции, которая включает менее чем 20 других разновидностей антител против ТАБАК, например в композиции, которая не включает другие разновидности антитела против ТАЕАК.

Антитело может быть фактически человеческим. Фактически человеческое антитело представляет собой антитело, которое включает достаточное количество положений человеческих аминокислот, так что антитело не вызывает иммуногенного ответа у здорового человека. Предпочтительно, чтобы белок не вызывал образования нейтрализующего антитела, например образования антимышиного антитела человека (НАМА). НАМА может быть проблематичным в ряде случаев, например, если ожидается, что антитела будут вводиться неоднократно, например, при лечении хронического или рецидивирующего болезненного состояния. Образование НАМА может сделать потенциально неэффективным неоднократное введение антитела вследствие повышенного выведения антитела из сыворотки (см., например, 8а1еН е! а1., Сапсег 1ттипо1. 1ттипо111ег.. 32:180-190 (1990)) и также вследствие возможных аллергических реакций (см., например, БоВидйо е! а1. (1986) НуЬпбота, 5:5117-5123).

Например, антитело может быть человеческим, гуманизированным, СОЯ-привитым, химерным, мутантным, аффинно созревшим, деиммунизированным, синтетическим или иным образом созданным ш νίΙΐΌ антителом и его комбинациями. В одном варианте осуществления антитело против ТАЕАК представляет собой гуманизированное антитело.

Тяжелая и легкая цепи антитела против ТАЕАК могут быть, по существу, полноразмерными. Белок может включать по меньшей мере одну и предпочтительно две полные тяжелые цепи и по меньшей мере одну и предпочтительно две полные легкие цепи или может включать антигенсвязывающий фрагмент (например, БаЬ, Р(аЬ')₂, Ρν или одноцепочечный Ρν-фрагмент). В других вариантах осуществления антитело содержит константную область тяжелой цепи, выбранную, например, из 1дС1, 1дС2, 1дС3, 1дС4, 1дМ, 1§А1, 1§А2, Ι§ϋ и 1дЕ; в частности выбранную, например, из 1дС1, 1§С2, 1§О3 и Ι§Ο4, конкретнее [дС1 (например, 1дС1 человека). В основном константная область тяжелой цепи является человеческой или модифицированной формой константной области человека. В еще одном воплощении антитело имеет константную область легкой цепи, выбранную, например, из κ-цепи или λ-цепи, в частности - κ-цепь (например, человеческая κ-цепь).

В одном воплощении белок включает по меньшей мере один, два и предпочтительно три СОЯ вариабельной области легкой или тяжелой цепи антитела, раскрытого в настоящем изобретении, например Ρ2Ό10. В данном случае СОЯ-участки относятся к СОЯ, которые определяются гипервариабельными петлями С1ю11иа. Например, белок включает в последовательности вариабельного домена тяжелой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах СОЯ-участка:

СГТГЗЕУАМЗ (СРЯ1) (3ΕΏ Ю N0:1),

ΕΙ33Θ65ΥΡΥΥΡ0ΤνΤ5 (ΟϋΡ2) (ЗЕС Ю N0:2), νΕΥΥϋΥΟΟϋΚΙΕνΜϋΥ (СОКЗ) (3Εζ) Ю N0:3) или СОЯ, имеющий аминокислотную последовательность, которая отличается не более чем 4, 3, 2,5, 2, 1,5, 1 или 0,5 изменениями (например, заменами, инсерциями или делециями) на каждые 10 аминокислот (например, количество отличий пропорционально длине СОЯ) по отношению к последовательности, приведенной выше, например по меньшей мере одним изменением, но не более чем двумя, тремя или четырьмя на СОЯ. Последовательность вариабельного домена тяжелой цепи может включать эти последовательности СОЯ, в частности в СОЯ3, или по меньшей мере в два СОЯ, например СОЯ1 и СОЯ3, СЭР2 и СЭЯ3 или во все три СОЯ.

Белок может включать в последовательности вариабельного домена тяжелой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах СОЯ-участка (аминокислоты в круглых скобках представляют варианты для конкретного положения):

(1) 6<¥Р)-(ШУРЧ8ТОН)-(ЯУ)-У-А-(М1Ь)-(Н8); (8ЕО ГО N0: 4) или (и) У-У-(РУ)-Б-(Т8)-У-(ТК)-О; (8ЕО ΙΌ N0: 5) и (ΐΐΐ) (νΕ)-(ΙΕ)-(ΥΡ)-(ΥΡ)-Ό-(ΥΡ)-Ό; (8ЕО ΙΌ N0: 6) или (ПЕ)-(ЯК)-(1ЕУМ)-(ЕрП)-(УАЕ)-М-(ПЕ); (8ЕО ΙΌ N0: 7).

Белок может включать в последовательности вариабельного домена легкой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах СОЯ-участка:

Я88р8ЕУ88КО№ТУБН; (СОЯ1) (8ЕО ΙΌ N0: 8),

КУ8НЯР8; (СЕЯ2) (8ЕО ΙΌ N0: 9) и

8О8ТНРРРТ; (СЭЯ3) (8Е0 ΙΌ N0: 10) или СОЯ, имеющий аминокислотную последовательность, которая отличается не более чем 4, 3, 2,5, 2, 1,5, 1 или 0,5 изменениями (например, заменами, инсерциями или делециями) на каждые 10 аминокислот (например, количество отличий пропорционально длине СОЯ) по отношению к последовательности, приведенной выше, например, по меньшей мере одним изменением, но не более чем двумя, тремя или четырьмя на СОЯ. Последовательность вариабельного домена легкой цепи может включать эти последовательности СОЯ, в частности в СЭЯ3 или по меньшей мере в две СОЯ, например СЭР! и СОЯ3, СЭР2 и СЭЯ3 или во все три СОЯ.

- 2 018255

Белок может включать в последовательности вариабельного домена легкой цепи по меньшей мере одну, две или три из следующих последовательностей в пределах СПК-участка (аминокислоты в круглых скобках изображают варианты для конкретного положения):

(1) (ΚΚ)-§-§-Ρ-§-(ΕΙ)-(Κν)-8-8-(ΚΚ)-6-Ν-(ΤΝ)-Υ-Ε-(ΕΗΠΝρΥ); (8ЕС ΙΌ N0: 11) или (КК)-8-8-Ц-8(ΕΙ)-ν-8-8-(ΚΚ)-6-Ν-(ΤΝ)-Υ-Ε-Η; (8ΕΟ ΙΌ N0: 12);

(ίί) (ΚΕ)-(Ενΐ)-8-(ΝΥ8)-(Κ^)-(ΕΆΠ)-8; (8ΕΟ ΙΌ Ν0: 13) или Κ(Ενΐ)-8-(ΝΥ8)-Κ-(ΕΛΠ)-8; (8ΕΟ ΙΌ Ν0: 14) и (ίίί) (8М)-Р-(68А)-(8Т)-(НЕР)-(Е^Ъ)-Р; (8ΕΟ ΙΌ Ν0: 15) или 8-0-(68Α)-(8ΙΤ)-(ΗΕΡ)-Ε-Ρ; (8ЕС ΙΌ Ν0: 16).

В одном предпочтительном варианте осуществления белок включает все шесть СЭК из Ρ2Ό10 или близкородственные СПК, например СЭК, которые являются идентичными или которые имеют по меньшей мере одно аминокислотное изменение, но не более чем два, три или четыре изменения (например, замены, делеции или инсерции) или другие СПК, описанные в настоящем изобретении.

В еще одном примере белок включает по меньшей мере один, два или три СПК-участка, которые имеют одинаковые канонические структуры и соответствующие СЛК-участки Сйо1Ыа из Ρ2Ώ10. например те же канонические структуры, что и, по меньшей мере, СЛК1 и/или СЛК2 вариабельных доменов тяжелой и/или легкой цепи Ρ2Ώ10.

Белок может включать одну из следующих последовательностей:

в гумтйтрьзърутрзераз хзскзеоеьуезкеытуъниуьокреазр

ЙЫ^УКУЗНКРЗЗУРСКРЗЗевеаТОРТЬКГОКУЕАЕОТОУУУСЗЙЗТН

ГРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:17)

01УМТЙТРЬЗЬРУТРЗЕРА313СЕЗЗЙЗЬУ83КЗИТУЬИ-геЪЙКР6ЙЗР 0ΒΕΙΥΚνβΝΕΓδθνΡΒΒΓ3θ8<3β{3ΤΒΓΤΒΚΙ3ΚνΕΆΕϋνΘνΥΥΟ303ΤΗ

ГРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:18) оуумтоз РьзьР7ТЪ!30РА51 зскз 8йз^ззкзиту1.нигййерсй5р

ЕЕЫУКУЗНЕРЗЗУРВЕРЗЗЗЗЗЗТВРТЪК13КУЕАЕВУЗУУУС8Й8ТН

РРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:19)

ПУУМТЙЗРЬЗЬРУТЬЗЙРАЗХЗСВЗЗЙЗ^ЗЗКЗЫТУЬНИРййЕРбЙЗР

ΚΕΕΙΥΚν8ΝΕΡ3σνΡΠΕΕ888333ΤΒΡΤΒΚΙ8ΕνΕΆΕΒν3νΥΥ0303ΤΗ

ГРЕТ (8ЕЙ ГО N0:20)

П1¹ ₁7МТ<2ТРЦЗЬ37ТР(30РА313СК3308ЬЦЗЗКСТП’7ЪНРГ7Ъ0КР&ЗЗР

ЙЬЫУКУЗИКРЗСУРОЙРЗеЗЗЗСТОГТЦКТЗРЛ^ЕАЕОУЗУУУСЗЙЗТН

ГРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:21)

П1УМТ0ТРЬЗЪЗУТРЗЙРА313СЕЗЗЙ8ЬУЗЗК6№т.ННУЪ0КР00РР

ЙЦЪ1УСТ5ЫЕР83УРЕЕГЗСЗС53ГОЕТ11К13ЕУЕАЕОТЗУУТС8Й8ТН

ГРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:22)

ПХУМТЙЗРЬЗЬРЙТРЗЕРАЗТЗСКЗЗЙЗЬУЗЗКЗГТТУЦНИУЦЙКР&ЭЗР

ЙЬЫУКУЗЫКЕЗСУРОКГЗЗЗЗЗеТОГТЬКХЗЕТЕАЕВУСУУУСЗйЗТН

ГРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:23)

ΟΤνΜΤ0βΡΕ3ΕΡνΤΡ3ΕΡΑ3Ι8ΟΕ33δ3Ι>ν33Κ3ΝΤΥΒΗΝΥΒ0ΚΡ303Ρ

ОЬЫУЮ/ЗИКГЗЗУРВВЕЗОЗЗЗЗТОРТЫСЕЗР.УЕАЕОУЗУУУСЗСЗТН

ГРЕТ (ЗЕЙ ГО N0:24)

О ТМТЙТРЬЗ 3 РУТЬЗЙРАЗ ТЗСЕЗЗЙЗ^ЗЗКОЫТУЬНИЪЙЙЕРЗЙРЕ

ЕЬЫУЮХЗКЕРЗЗУРСЕРЗаЗЗАЗГОЕТЬКХЗЕУЕАЕВУЗУУУСЗЙБТН

ГРЕТ {8ЕЙ ГО N0:25)

ВХЙМТЙЗРЗЗЬЗАЗУЗОЕУПТСЕЗЗЙЗЬУЗЗКОЫТУЪНЙУЙЙКРЗКЙР КЬЫУКУЗЫЙРЗЗ¥РЗНГЗЗЗЗЗОТВГТЬТ183ЪЙРЕПРАТТУС5ЙЗТН

ГРЕТ (8ЕЙ ГО N0:26) или последовательность, которая имеет менее чем восемь, семь, шесть, пять, четыре, три или два изменения (например, замены, инсерции или делеции, например консервативные замены или замена на аминокислотный остаток в соответствующем положении в Ρ2Ώ10, йиР2П10-Е1 или йиР2П10-Е2). Иллюстративные замены находятся в одном из следующих положений 1<аЬа1: 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69, 85, 87, 98, 99, 101 и 102. Замены могут, например, замещать одну или несколько аминокислот Ρ2Ώ10 в

- 3 018255 соответствующих положениях в каркасной области, например в каркасной области человека, например в РК2 (например, в положении 46 на Р11С согласно последовательной нумерации) и в РК3 (например, в положении 87 на Рйе).

Белок может включать одну из следующих последовательностей в вариабельном домене тяжелой цепи:

СУОВУО5САЕУККРЗАЗУКУ5СКА30ГТРЗЕУАМЗтеЕОАР0О0ЪЕИМС

ΕΣ330Ε3ΥΡΥΥΡΒΤνΤ<3ΕνΤΜΤΕΒΤ3Ι3ΤΑΥΜΕΙ.3ΡΒΕ3ΒΒΤΑνΥΥ€ΑΕ νΕΥΥΒΥΒδΒΗΙΕ (ЗЕО ΙΒ N0:27}

ОУОЬУОЗСАЕУККРСА37КУЗСКА5ЕГТЕЗЕГАМЗИУкаАР0<5КЬЕтЗ

ЕХЗЗСеЗУРУУРВТУТЗКУТХТКВТЗАВТАУМЕЪЗЗЪКЗЕВТАУУУСАК νΤΥΥΕΥΟΟΟΕΙΕ (ЗЕ2 ΙΌ N0:28)

СУОЬУОЗЗАЕУККРбАЗУКУЗСКАЗеРТГЗКУАМЗИУЕОАТЕанЬЕИМа

ΕΙ330Ο3ΥΡΥΥΡΒΤνΤ0ΚνΤΜΤΗΝΤ3Ι3ΤΑ™ΕΒ33ΏΚ3ΕΏΤΑνΥΥΟΑΚ ’ΛΥΥΕΥΒΟΌΕΙΕ (3Ε0 ΙΒ N0:29)

ЗУОЬУОЗОАЕУККРаАЗУКУЗСКАЗаРТРЗЕУАМЗИтаОАРЗСЗЬЕЖЕ

ЕТЗЗБСЗУРУУРЕТУТЗКРТМТТВТЗТЗТАУМЕЬВЗЕЕЗВЕТАРУУСАК νΤΥΥΟΥϋΟΒΕΙΕ (3Ε$ Ю N0:30)

ОГОЪРСЗЗАЕУККРСАЗУМЗЗСКтеЗРТЕЗКТАМЗИУКрАРЗКЗЬЕИМЗ ΕΙΕ3ΕΕ3ΥΡΥΥΡΒΤνΤ0ΕνΤΜΤΕΒΤ3ΤΒΤΑΥΜΕΕΒ3ΒΕ3ΕΒΤΑνΥΥΟΑΤ νΤΥΥΠΥΣΟΕΚΙΕ (ЗЕС ΙΒ N0:31)

0Μ0Ενς33ΑΕνΚΚΤ333νκν33ΚΑ33ΓΤΡ3ΚΥΑΜ3ΝνΚ.0ΑΡ3βΑΒΕΜΜ3

ΕΣ33335ΥΡΥΥΡΒΤνΤ3ΕνΤΣΤΕΠΗ5Μ3ΤΆΥΜΕΙ,38Ι·Ε5ΕΒΤΑΜΥΥΟΑΕ νΕΥΥϋΥΏΘϋΚΙΕ (3Ε0 ЛЗ N0:32) □УОЬУОЗЗАЕУККРСАЗУНУЗСКАЗЗЕТГЗЕУАМЗИтаОАРСаЗЕЕММЗ

ΕΙ33333ΥΡΥΥΡηΤΡΤ3ΚνΤΜΤΙΦΤ3Τ3ΊνΥΜΕΕ33ΕΕ3ΕΟΤΆνΥΥ3ΆΚ νΕΥΥϋΥΒ3βΕΙΕ (5Ε0 Ιϋ N0:33) □ΜςΕνθ3αΡΕνΚΚΡ3Τ3νκν3σΚΑ33ΡΤΡ3ΗΥΑΜ3ΚνΕΟΑΕ0βΕΕΕΜΙ3

ЕТЗЗСЗЗУРУУРОТУ'ТЗЕУПТЕОМЗТЗТАУМЕЬЗЗЪЕЗЕОТАУУУСАА νΕΥΥΌΥΌΟΒΕΙΕ (3Ε0 ΙΌ N0:34)

ЕУОЕУЕЗЗСЗЬУОРЗЗЗЬВЕЗСААЗЗРТГЗЕУАМЗИТЕОАРЗКаЬЕНУА

ΕΙ33Θ33ΥΡΥΥΡΟΤνταΚΕ·ΤΙ3ΚΒΝΑΚΝ3Ι.Υ1₁ΏΜΝ3ΕΕΆΕϋΤΑνΥΥ3ΆΕ ιΤΕΥΥΌΥΒΟϋΕΙΕ (3Ε0 Σϋ N0:3 3)

ЕУ0ЬУЕЗЗЗЗЬУ<2РСЕЗЬЕЬЗСААЗеЕТРЗЕУАМЗНУЕ2АРЗКЗЬЕИУ5

ΕΙ33333ΥΡΥΥΡΒΤνΤ3ΚΕΤΙ3ΚϋΝΑΚΝ3ΕΥη0ΜΝ3ΕΕΑΕΒΤΑΒΥΥ0ΑΚ

0νΐιΥΥΏΥΒ5ΒΚΙΕ (3Ε0 Ю N0:3'6)

СУСЬУЕЗЗЗаЬУКРЗвЗЬКЬЗСААЗЗГТГЗЕУАМЗтаЕОАРеКЗЪЕОТЗ

ΕΣ333Ο3ΥΡΥΥΡΏΤνΤΘΕΕΤΙ3ΕΏΝΑΙζΝ3ΕΥΕ0ΜΝ3ΕΕΆΕϋΤΑνΥΥ3ΑΕ νΐιΥΥΟΥΟΏϋΚΙΕ (3Ε0 1И N0:37)

ЕУОЪУЕЗеЗЗЬУКРЗЗЗЪКЕЗСААЗЙЕТРЗЕУАМЗИУЕОАРЗКЗЬЕтГС

ΕΙ3 3ΘΘ3 ΥΡΥΎΡηΤνΤσΚΡΤΙ3ΚΌυ3Κ1ΓΓΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΤΕϋΤΑνΥΥ€ΤΤ

УЪУТРУВИЖТЕ (3Εβ Ιβ N0:33)

ЕУОЬУЕЗСОСТУЕРЗаЗЩЩЗСААЗеРТРЗЕУАМЗИУЕОАРСК&ЬЕИР'З

ΕΙ3333ΞΥΡΥΥΡβΤνΤ<3ΕΡΤΙ3ΕβΝΑΚΝ3βΥβΩΜΝ3βΕΆΕΒΤΑβΥΗ3ΑΕ νΐιΥΥβΥΒΟβΡΙΕ (3Ε0 Σβ N0:39)

ЕУОЬТЕЗаЗОЫГКРааЗЬЕЬЗСААЗЙРТРЗКУАМЗИУЕОАРЙКаЕЕНР'З

Ε133333ΥΡΥΥΡβΤνΤΟΕΡΤΙ5ΚβΝΑΚΝ3ΕΥΙ:0ΜΝ3βΕΑΕΒΤΑνΥΥΟΆΕ νΒΥΥΒΥβθΒΕΙΕ (3Ε0 ΙΒ N0:40)

ЕУОЬЪЕзеесьУОРеззьвьзсААзертрзЕУАМЗИУЕОАРекеьЕтгз

ΕΙ33333ΥΡΥΥΡβΤνΤ3ΚΓΤΣ3ΕβΝ3ΚΝΤβΥ1·0ΜΝ3βΕΑΕβΤΑνΥΥΟΑΚ νΕΥΥΟΥΟΟΌΕΙΕ (3Εβ ΙΒ N0:41)

- 4 018255

ЗУОЬУЕЗбеатеарекзькъзсАазсЕткзктАМзиткоАРакаьитад. ΕΙ333·33ΥΡΥΥΡΟΤνΤβΡ.ΡΤΙ3ΗΒΝ·3ΚΝΤΒΎ1ζ3ΜΝ3ΒΕΑΕϋΤΑ’ί7ΎΎΟΆΚ ТЫТОТООЦЫЕ (ЗЕС ГО НО:42) ОУОЪТЕЗЭООТУОРбКЗЬЙЬЗОААЗеЕТРЗКУАМЗИтаОАРбКеЬЕИУА Е133333УРУУРП’ГгтеЕРТ13КОЫЗКЫТЬУЪ2’‘»13ЬРЛЕПТДУУУСАН УЪУУПУИЭШСТЕ (ЗЕО ГО N0:43) СУОЪ-тазеостеорскзъкьзсААзагтгзкУАмзитаоАРекоьЕгата. ΕΙ33β53ΤΡΤΥΡ0ΤνΤ3ΚΓΤΙ3ΚΓΙΝ3ΚΝΤΕΥ10ΜΚ3Ι:ΚΑΕϋΤΑνΥΥ0ΆΚ νΕΥΥΌΥΒΟϋΡ.ΙΕ (3Ξζ2 ГО N0:44) СУСЬтезОЗаЭТОРЗКЗЬКЬЗСААЗОРТРЗКТАМЗтПгОАРвКЭЬЕИУА ΕΙ33·333ΥΡΥΥΡΏΤνΤ3ΑΓΤΙ3ΚΕΝ3ΚΝΤΕΥΕ<2ΜΝ3ΥΚΑΕΌΤΑνΥΥ3ΑΕ νΕΥΥΕΥΙΧ3ΟΚΙΕ (ЗЕО ГО ΝΟ:45) ЕУОЬУЕЗССУтеОРеОЗЬКЬЗСААЗЗРТРЗКУАМЗИтаСАРЗКСЬЕетЗ ΕΤ33333ΥΡΥΥΡΕΤνΤ3Ρ^ΤΙ3ΡΤ3Ν3ΚΝ5ΥΥΕ0ΜΝ3ΕΡ,ΤΕΡΤΑΕΥΥ3ΑΚ ЦУЬУТОУИЗОНГЕ (3Εζ) ГО Ν0:46) ЕУОЬТЕЗЗЗеЬУеРЗНЗЪКЪЗСААЗеРТГЗЕУАМЗтгаОАРОКЗЪЕИУЗ Е133335УРУУРЦТУТ0РЕТТЗРЛИАК1'ТЗЦУЬ0Г4К13ьЕ0ЕПТАУУУСАЕ УЪУГОУЦЗПНГЕ (ЗЕО ГО N0:47) ЕУОЦУЕЗЗЗСЬУОРЗЕЗЬРЦЗСТАЗЗГТРЗКУАКЗИРР.ОАРЗКОЬЕТ^З ЕТЗЗЗСЗУРУУРЦТУТОКРПЗЕЦСЗКЗГАУЪОМНЗЦКТЕЕТАУУУСТК УЪУТОУЛеШИЕ (3Ε0 ГО N0:48) етОЕУЕЗОбОЬУОРеЗЗЬР^ЗСААЗЗг’ТГЗЕУАМЗИУЕОАРОКЗЬЕУУЗ ΕΙ33333ΥΡΥΥΡΏΤνΤ3Ε?ΤΙΞΡΧΙΗ3ΚΝΤηΥΕΏΜ33ΕΡΛΕΠ№ΡΖ1Ύ0ΆΚ ТЬУГОТОеЦКГЕ (ЗЕО Го N0:49) или последовательность, которая имеет менее чем восемь, семь, шесть, пять, четыре, три или два изменения (например, замены, инсерции или делеции, например консервативные замены или замена на аминокислотный остаток в соответствующем положении в Ρ2Ό10). Иллюстративные замены находятся в одном из следующих положений КаЬа!: 2, 4, 6, 25, 36, 37, 39, 47, 48, 93, 94, 103, 104, 106 и 107. Замены могут, например, замещать одну или несколько аминокислот Ρ2Ό10 в соответствующих положениях в каркасной области, например каркасной области человека.

В одном варианте осуществления каркасная область тяжелой цепи (например, ЕК1, РР2. ЕК3 по отдельности или последовательность, вмещающая ЕК1, ЕК2 и РР3, но исключающая СПК-участки) включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90%, 95, 97, 98, 99 или более идентична каркасной области тяжелой цепи одной из следующих последовательностей У-сегмента эмбрионального типа: ΌΡ-25, ΌΡ-1, ΌΡ-12, ΌΡ-9, ΌΡ-7, ΌΡ-31, ΌΡ-32, ΌΡ-33, ΌΡ-58, ΌΡ-54, другой последовательности подгруппы УН I эмбрионального типа, другой последовательности подгруппы УН III эмбрионального типа или еще одному гену У, который соответствует классу канонической структуры 13 (см., например, С1ю11иа е! а1. (1992) I. Μοί. ΒίοΙ. 227:799-817; ТотНпзоп е! а1. (1992) I. Μοί. ΒίοΙ. 227:776-798). Другие каркасные области, соответствующие классу канонической структуры 1-3, включают каркасные области с одним или несколькими из следующих остатков согласно нумерации КаЬа!: А1а, С1у, Т11Г или Уа1 в положении 26; С1у в положении 26; Туг, ИНе или С1у в положении 27; Ρ1βυ Уа1, Не или Ьеи в положении 29; Ме!, Не, Ьеи, Уа1, Т1г, Тгр или Не в положении 34; Агд, Т1г, А1а, Ьуз в положении 94; 61у, 8ег, Азп или Азр в положении 54 и Агд в положении 71.

В одном варианте осуществления каркасная область легкой цепи (например, ЕК1, ЕК2, ЕК3 по отдельности или последовательность, вмещающая ЕК1, ЕК2 и ЕК3, но исключающая СПК-участки) включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или более идентична каркасной области легкой цепи последовательности подгруппы Ук II эмбрионального типа или одной из следующих последовательностей У-сегмента эмбрионального типа: А17, А1, А18, А2, А19/А3, А23, последовательности подгруппы Ук I эмбрионального типа (например, последовательности ΌΡΚ9), или еще одному гену У, который соответствует классу канонической структуры 4-1 (см., например, ТотНпзоп е! а1. (1995) ΕΜΒΟ I. 14:4628). Другие каркасные области, соответствующие классу канонической структуры 4-1, включают каркасные области с одним или несколькими из следующих остатков согласно нумерации КаЬа!: Уа1 или Ьеи, или Не в положении 2; 8ег или Ριό в положении 25; Не или Ьеи в положении 27Ь; С1у в положении 29; ИНе или Ьеи в положении 33 и ИНе в положении 71. Кроме того, согласно нумерации КаЬа! положение 48 может представлять собой Не или Уа1.

В еще одном воплощении каркасная область легкой цепи (например, ЕК1, ЕК2, ЕК3 по отдельности или последовательность, вмещающая ЕК1, ЕК2, и ЕК3, но исключающая СПК-участки) включает амино

- 5 018255 кислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или более идентична каркасной области легкой цепи последовательности подгруппы Ук I эмбрионального типа, например последовательности ΌΡΚ9.

В одном воплощении вариабельная каркасная область легкой или тяжелой цепи (например, область, вмещающая по меньшей мере ЕВ.1, ЕВ2, ЕВ3 и, необязательно, ЕВ4) может быть выбрана из (а) вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи, включающей по меньшей мере 80, 90, 95 или предпочтительно 100% аминокислотных остатков вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи человека, например остаток вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи зрелого антитела человека, человеческой последовательности эмбрионального типа, консенсусной последовательности человека или антитела человека, описанного в настоящем изобретении; (Ь) вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи, включающей от 20 до 80%, от 40 до 60%, от 60 до 90% или от 70 до 95% аминокислотных остатков вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи человека, например остаток вариабельной каркасной области легкой или тяжелой цепи зрелого антитела человека, человеческой последовательности эмбрионального типа, консенсусной последовательности человека; (с) каркасной области, не являющейся человеческой (например, каркасной области грызуна); или (б) каркасной области, не являющейся человеческой, которую модифицировали, например, для удаления антигенных или цитотоксических детерминант, например деиммунизировали или частично гуманизировали. В одном варианте осуществления последовательность вариабельного домена тяжелой цепи включает остатки человека или остатки консенсусной последовательности человека в одном или нескольких из следующих положений (предпочтительно по меньшей мере пять, десять, двенадцать или все): (в ЕВ вариабельного домена легкой цепи) 4Ь, 35Ь, 36Ь, 38Ь, 43Ь, 44Ь, 58Ь, 46Ь, 62Ь, 63Ь, 64Ь, 65Ь, 66Ь, 67Ь, 68Ь, 69Ь, 70Ь, 71Ь, 73Ь, 85Ь, 87Ь, 98Ь и/или (в ЕВ вариабельного домена тяжелой цепи) 2Н, 4Н, 24Н, 36Н, 37Н, 39Н, 43Н, 45Н, 49Н, 58Н, 60Н, 67Н, 68Н, 69Н, 70Н, 73Н, 74Н, 75Н, 78Н, 91Н, 92Н, 93Н и/или 103Н (согласно нумерации КаЬа1).

В одном воплощении белок включает по меньшей мере один СЭВ. не являющийся человеческим, например мышиный СОВ, например СОВ из Ρ2Ό10, или его мутантную форму, и по меньшей мере одну каркасную область, которая отличается от каркасной области Ρ2Ό10 по меньшей мере одной аминокислотой, например по меньшей мере 5, 8, 10, 12, 15 или 18 аминокислотами. Например, белки включают один, два, три, четыре, пять или шесть таких СОВ, не являющихся человеческими, и включают по меньшей мере одно аминокислотное отличие по меньшей мере в трех из НС ЕВ1, НС ЕВ2, НС ЕВ3, ЬС ЕВ1, ЬС ЕВ2 и ЬС ЕВ3.

В одном варианте осуществления последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи белка включает аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 97, 98, 99% или более идентична последовательности вариабельного домена описанного здесь антитела, например Ρ2Ό10, 1шР2О10-1 или 1шР2Э10-2; или которая отличается по меньшей мере 1 или 5 остатками, но менее чем 40, 30, 20 или 10 остатками от последовательности вариабельного домена описанного здесь антитела, например Ρ2Ό10, 1ιι.ιΡ2Ο10-1 или 1ιι.ιΡ2Ο10-2.

В одном воплощении один или оба вариабельных домена включают аминокислотные положения в каркасной области, которые получены различным образом и из мышиного антитела (например, Ρ2Ό10), и из гуманизированного антитела (например, 56-84т и К107) или последовательности эмбрионального типа. Например, вариабельный домен будет включать ряд положений, в которых аминокислота идентична как мышиному антителу, так человеческому антителу (или последовательности эмбрионального типа), поскольку две последовательности идентичны в этих положениях. В оставшихся положениях каркасной области, в которых мышиные и человеческие последовательности различаются по меньшей мере 50, 60, 70, 80 или 90% положений вариабельного домена, предпочтительно идентичны антителу человека (или последовательности эмбрионального типа), нежели мышиной. Ни одно или по меньшей мере одно, два, три или четыре из таких оставшихся положений каркасной области могут быть скорее идентичны мышиному антителу, нежели антителу человека. Например, в НС ЕВ1 одно или два таких положения могут быть мышиными; в НС ЕВ2 одно или два таких положения могут быть мышиными; в ЕВ3 одно, два, три или четыре таких положения могут быть мышиными; в ЬС ЕВ1 одно, два, три или четыре таких положения могут быть мышиными; в ЬС ЕВ2 одно или два таких положения могут быть мышиными; в ЬС ЕВ3 одно или два таких положения могут быть мышиными.

В одном воплощении последовательность вариабельного домена тяжелой или легкой цепи белка включает аминокислотную последовательность, кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты, описанной в настоящем изобретении, или нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется с последовательностью нуклеиновой кислоты, описанной в настоящем изобретении (например, с конкретной последовательностью нуклеиновой кислоты или с последовательностью нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность, описанную в настоящем изобретении) или с ее комплементом, например, при условиях пониженной строгости, средней строгости, высокой строгости или очень высокой строгости.

Антитело против ТХУЕЛК может быть производным или связанным с другой функциональной молекулой, например, с другим пептидом, белком или соединением. Например, антитело может быть функ

- 6 018255 ционально связано (например, посредством химического соединения, генетического слияния, нековалентной ассоциации или иным образом) с одним или несколькими другими молекулярными компонентами, среди прочих такими как другое антитело (например, биспецифическое или мультиспецифическое антитело), токсины, радиоизотопы, полимеры, цитотоксические или цитостатические вещества.

В еще одном аспекте изобретение предоставляет композиции, например фармацевтические композиции, которые включают фармацевтически приемлемый носитель и антитело против ТАЕАК, например, антитело против ТАЕАК, описанное в настоящем изобретении.

В еще одном варианте осуществления антитело против ТАЕАК (например, его фармацевтическая композиция) вводится субъекту, который нуждается в лечении антителом против ТАЕАК или чье состояние будет улучшено данным антителом. Например, антитело против ТАЕАК может вводиться субъекту, который имеет воспалительное заболевание, иммунное нарушение, аутоиммунное заболевание, нервное расстройство, новообразование или другое нарушение, описанное в настоящем изобретении, или подвержен его возникновению. В одном воплощении антитело против ТАЕАК, описанное в настоящем изобретении, применяется для получения лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания, иммунного нарушения, аутоиммунного заболевания, нервного расстройства, новообразования или другого нарушения, описанного в настоящем изобретении.

В еще одном аспекте изобретение раскрывает способ лечения у субъекта болезни, связанной с ТАЕАК. Способ включает введение субъекту антитела против ТАЕАК в количестве, достаточном для лечения (например, для улучшения или предупреждения) болезни, связанной с ТАЕАК. Антитело против ТАЕАК может вводиться субъекту отдельно или в сочетании с другими терапевтическими средствами, как описано в настоящем изобретении. В одном варианте осуществления субъект представляет собой млекопитающее, например человека, например человека, имеющего болезнь, связанную с ТАЕАК, например болезнь, описанную в настоящем изобретении. Антитело может применяться для улучшения одного или нескольких симптомов таких болезней. Термин лечение относится к назначению терапии в количестве, способе и/или режиме, эффективных для улучшения или предупреждения состояния, симптома или параметра, связанного с болезнью (например, с болезнью, описанной в настоящем изобретении) или для предупреждения приступа, прогрессии или обострения болезни либо до статистически значимого уровня, либо до уровня, поддающегося обнаружению специалистом в данной области. Таким образом, лечение может достигать терапевтических и/или профилактических результатов. Эффективное количество, способ или режим могут меняться в зависимости от субъекта и могут специально подбираться для субъекта. В одном варианте осуществления антитело против ТАЕАК, описанное в настоящем изобретении, применяется для получения лекарства для лечения болезни, связанной с ТАНАК.

В еще одном аспекте изобретение описывает способ модулирования взаимодействия между ТАЕАК и белком-рецептором ТАЕАК. Например, антитело против ТАЕАК может применяться для ослабления или подавления связывания между ТАЕАК и рецептором ТАЕАК, таким как Еп14. Способ включает контактирование ТАЕАК или комплекса, который содержит ТАЕАК, с антителом. Способ может применяться на клетках ίη νίίτο, например, в культуре, например, ίη νίίτο или ех νίνο. Например, клетки, экспрессирующие рецептор ТАЕАК, можно культивировать ίη νίίτο в культуральной среде и стадию контактирования можно осуществлять посредством добавления антитела против ТАЕАК к культуральной среде. В ином случае процедура может выполняться на клетках, существующих у субъекта, например, в рамках протокола ίη νίνο (например, терапевтического или профилактического). Например, антитело против ТАЕАК может доставляться локально или системно. В одном воплощении антитело против ТАЕАК, описанное в настоящем изобретении, применяется для получения лекарственного средства для модулирования взаимодействия между ТАЕАК и белком-рецептором ТАЕАК.

Способ может включать контактирование ТАЕАК с рецепторным комплексом ТАЕАК или его субъединицей при условиях, которые обеспечивают взаимодействие между ТАЕАК и рецепторным комплексом ТАЕАК или его субъединицей, таким образом образуя смесь ТАЕАК/рецептор ТАЕАК. Как правило, антитело против ТАЕАК предоставляется в эффективном количестве, например в таком, что контактирование смеси ТАЕАК/рецептор ТАЕАК с антителом против ТАЕАК модулирует взаимодействие между ТАЕАК и рецепторным белком, например препятствует (например, ингибирует, блокирует или иным образом уменьшает), или, по меньшей мере, препятствует одной функции ТАЕАК, например опосредованной ТАЕАК передаче сигналов.

Также данное изобретение описывает нуклеиновые кислоты, содержащие нуклеотидные последовательности, которые кодируют вариабельные области тяжелой и легкой цепей антител против ТАЕАК, например которые описаны в настоящем изобретении. Например, изобретение описывает первую и вторую нуклеиновые кислоты, кодирующие вариабельные области тяжелой и легкой цепей Ρ2Ό10 соответственно. В ином аспекте данное изобретение раскрывает клетки-хозяева и векторы, содержащие нуклеиновые кислоты, описанные в настоящем изобретении.

Также изобретение представляет эпитоп ТАЕАК, например ТАЕАК человека, распознаваемый Ρ2Ό10, и белки, способные взаимодействовать с эпитопом. Например, белки и пептиды, которые включают эпитоп, могут применяться для создания или отбора других связывающих соединений, которые

- 7 018255 взаимодействуют с эпитопом, например белков, таких как антитела или малые молекулы. Например, пептид, который содержит эпитоп, может применяться как иммуноген или как мишень при скрининге экспрессионной библиотеки. Также можно оценить соединения по их способности взаимодействовать с пептидом при помощи или картирования, или определения их структуры, оценить соединения по их способности взаимодействовать с эпитопом, например, в отношении зрелого ТХУЕЛК. Иллюстративная оценка включает определение способности данного соединения взаимодействовать с ТХУЕЛК в присутствии конкурирующего антитела Ρ2Ό10.

Также раскрыты способы доставки или нацеливания ίη νίνο вещества, например терапевтического (включая генетический агент) или цитотоксического вещества, антителом против ТХУЕЛК (например, Ρ2Ό10 или иным антителом, описанным в настоящем изобретении) в клетку или структуру, экспрессирующую ТХУЕЛК.

В настоящем описании термин антитело относится к белку, который включает по меньшей мере одну вариабельную область иммуноглобулина, например аминокислотную последовательность, которая обеспечивает вариабельный домен иммуноглобулина или последовательность вариабельного домена иммуноглобулина. Например, антитело может включать вариабельную область тяжелой (Н) цепи (обозначенную здесь как УН) и вариабельную область легкой (Ь) цепи (обозначенную здесь как УЪ). В еще одном примере антитело включает две вариабельные области тяжелой (Н) цепи и две вариабельные области легкой (Ь) цепи. Термин антитело охватывает антигенсвязывающие фрагменты антител (например, одноцепочечные антитела, ЕаЬ-фрагменты, Е(аЬ')₂-фрагменты, Еб-фрагменты, Εν-фрагменты и бАЬфрагменты), а также полноразмерные антитела, например полноразмерные иммуноглобулины типов 1дЛ, 1дО (например, 1дО1, 1дС2. 1дС3. 1дС4). 1дЕ, ΙβΩ. 1дМ (а также их подтипы). Термин полноразмерное антитело относится к антителу, имеющему по меньшей мере 96% от длины природного антитела, которое процессируется для удаления какой-либо сигнальной последовательности. Полноразмерное антитело может включать полную длину природного антитела, например остатки от Ν-концевого остатка природного антитела (например, Ι§01, 1§С2, 1дО3, 1дС4) до его С-концевого остатка.

Последовательность вариабельного домена иммуноглобулина имеет отношение к аминокислотной последовательности, которая может образовывать структуру вариабельного домена иммуноглобулина. Например, последовательность может включать всю аминокислотную последовательность природного вариабельного домена или его часть. Например, последовательность может включать или не включать одну, две или более Ν- или С-концевых аминокислот или может включать другие изменения, которые согласуются с формированием белковой структуры.

Выделенная композиция относится к композиции, которая отделена по меньшей мере от 90% по меньшей мере одного компонента природного образца, из которого может быть получена данная выделенная композиция. Композиции, полученные искусственно или естественно, могут представлять собой композиции по меньшей мере некоторой степени чистоты, если виды или популяция видов, представляющих интерес, по меньшей мере, являются на 5, 10, 25, 50, 75, 80, 90, 95, 98 или 99% чистыми в соотношении вес-вес.

Эпитоп имеет отношение к сайту соединения-мишени, который связывается антителом. В случае, когда соединение-мишень представляет собой, например, белок, эпитоп может относиться к аминокислотам (в частности, боковым цепям аминокислот), которые связываются антителом. Перекрывающиеся эпитопы включают по меньшей мере один общий аминокислотный остаток, например по меньшей мере при 2, 3, 4 или 5 общих аминокислотных остатках.

В настоящем описании термин гибридизуется при условиях пониженной строгости, средней строгости, высокой строгости или очень высокой строгости описывает условия гибридизации и промывки. Руководство по проведению реакций гибридизации можно найти в Ситгей РгоЮсоЕ ίη Мо1еси1аг Вю1оду, ίοΐιη ^11еу & 8опз, Ν.Υ. (1989), 6.3.1-6.3.6. В этой ссылке описан водный и безводный способы, и может применяться каждый из них. Особыми упоминаемыми здесь условиями гибридизации являются следующие: 1) условия гибридизации низкой строгости в 6Х хлориде натрия/цитрате натрия (88С) примерно при 45°С с последующими двумя промывками в 0,2Х 88С, 0,1% 8Ό8 по меньшей мере при 50°С (температура при промывке может быть увеличена до 55°С при условиях пониженной строгости); 2) условия гибридизации средней строгости в 6Х 88С примерно при 45°С с последующей одной или несколькими промывками в 0,2Х 88С, 0,1% 8Ό8 при 60°С; 3) условия гибридизации высокой строгости в 6Х 88С приблизительно при 45°С с последующей одной или несколькими промывками в 0,2Х 88С, 0,1% 8Ό8 при 65°С и предпочтительно 4) условия гибридизации очень высокой строгости в 0,5М фосфате натрия, 7% 8Ό8 при 65°С с последующей одной или несколькими промывками в 0,2Х 88С, 1% 8Ό8 при 65°С. Условия высокой строгости (3) являются предпочтительными условиями, и это те условия, которые следует использовать, если не оговорено иначе.

Болезнь, связанная с ТХУЕЛК - это любая болезнь, при которой ТХУЕЛК участвует в этиологии, или болезнь, при которой состояние, симптомы или риск появления изменяют посредством предоставления вещества, блокирующего ТХУЕЛК.

Если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют то же значение, что и обычно подразумеваются средним специалистом в данной области, которой принадлежит

- 8 018255 это изобретение. Хотя способы и материалы, схожие с описанными в настоящем изобретении или равноценные им, могут применяться в описанных здесь практической деятельности или испытании, подходящие способы и материалы описаны ниже. Кроме того, варианты осуществления данного изобретения, описанные относительно СЭЯ-участков Сйо1Ыа, также могут быть реализованы при использовании СЭК-участков КаЬаЕ

Все публикации, патентные заявки, патенты и другие ссылки, упомянутые в настоящем изобретении, полностью включены в виде ссылок. В случае возникновении конфликта он регулируется настоящей спецификацией, включая определения. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения.

Подробное описание изобретения

Ρ2Ό10 является иллюстративным мышиным антителом, которое специфически связывается с ТАЕАК человека и подавляет действие ТАЕАК. Также раскрыты варианты антитела Ρ2Ό10, включая иллюстративные гуманизированные модификации. Эти антитела, другие антитела против ТАЕАК и другие блокирующие ТАЕАК агенты могут применяться для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных ТАЕАК, например воспалительных заболеваний и других описанных здесь болезней.

Антитела против ТАЕАК.

Это изобретение включает последовательности характерных примеров антител против ТАЕАК, таких как Ρ2Ό10, 1шР2Э10-1 и 1шР2Э10-2. Конкретные антитела, такие как эти, могут быть созданы, например, посредством получения и экспрессии синтетических генов, которые кодируют представленные аминокислотные последовательности, или посредством мутирования генов человека эмбрионального типа для получения гена, который кодирует представленные аминокислотные последовательности. Более того, эти антитела и другие антитела против ТАЕАК могут быть получены, например, при применении одного или нескольких из следующих способов.

Доступны многочисленные способы получения антител, в частности антител человека. Один иллюстративный способ включает скрининг белковых экспрессионных библиотек, например библиотек на основе фагового или рибосомального дисплея. Фаговый дисплей описан, например, в патенте США 5223409; 8111П11 (1985) 8с1еисе 228:1315-1317; в АО 92/18619; АО 91/17271; АО 92/20791; АО 92/15679; АО 93/01288; АО 92/01047; АО 92/09690 и АО 90/02809. Фаговый дисплей для БаЬ описан, например, в патентах США №№ 5658727; 5667988 и 5885793.

Кроме применения библиотек на основе дисплея, другие способы могут быть использованы для получения антитела, связывающего ТАЕАК. Например, белок ТАЕАК или его пептид может применяться в качестве антигена у животного, не являющегося человеком, например у грызуна, например мыши, хомяка или крысы.

В одном варианте осуществления животное, не являющееся человеком, содержит по меньшей мере часть гена человеческого иммуноглобулина. Например, можно создать породы мышей, не вырабатывающих мышиные антитела, с большими фрагментами локусов 1д человека. При применении гибридомной технологии могут продуцироваться и отбираться антигенспецифические моноклональные антитела, полученные на основе генов с желаемой специфичностью. См., например, ХепоМоике™, Сгееи е! а1. (1994) №1Шге СепеИск 7:13-21, патент США 20030070185, АО 96/34096 и АО 96/33735.

В еще одном воплощении моноклональное антитело получают от животного, не являющегося человеком, и затем модифицируют, например гуманизируют или деиммунизируют. Аш1ег описывает иллюстративный способ прививки СЭЯ, который может применяться для получения гуманизированных антител, описанных в настоящем изобретении (патент США 5225539). Все или некоторые из СПК-участков конкретного антитела человека могут быть заменены по меньшей мере на часть антитела, не являющегося человеческим. Может быть необходимо заменить лишь СПК-участки, требующиеся для связывания, или детерминанты связывания таких СПК-участков для получения подходящего гуманизированного антитела, которое связывается с ТАЕАК.

Гуманизированные антитела могут быть получены посредством замещения последовательностей вариабельной области Ρν, которые не вовлекаются непосредственно в связывание антигена, соответствующими последовательностями вариабельных областей Ρν человека. Основные способы получения гуманизированных антител представлены у Моткой, 8.Ь. (1985) 8с1еисе 229:1202-1207, у О1 е! а1. (1986) ВюТесНпкщек 4:214 и в патенте США 5585089; в патенте США 5693761; в патенте США 5693762; в патенте США 5859205 и в патенте США 6407213. Эти методы включают выделение, обработку и экспрессию последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют все вариабельные области Ρν иммуноглобулина по меньшей мере одной тяжелой или легкой цепи или их часть. Источники такой нуклеиновой кислоты хорошо известны специалистам в данной области и, например, могут быть получены из гибридомы, продуцирующей антитело против выбранной мишени, как описано выше, из иммуноглобулиновых генов эмбрионального типа, или из синтетических конструкций. Затем рекомбинантная ДНК, кодирующая гуманизированное антитело, может быть клонирована в соответствующий экспрессионный вектор.

Человеческие последовательности эмбрионального типа раскрыты, например, у ТошБпкоп, I. А. е! а1. (1992) 1. Мо1. Вю1. 227:776-798; Соок, 6.Ρ. е! а1. (1995) 1ттипо1. Тойау 16: 237-242; Сйо!Ыа, Ό. е! а1.

- 9 018255 (1992) 1. Μοί. Βίο. 227:799-817 и Тотйпкоп и др. (1995) ЕМВО 1. 14:4628-4638. Руководство V ВА8Е предоставляет подробное руководство по последовательностям вариабельной области иммуноглобулина человека (составлено ТотПпкоп, Ι.Α. и др. МВС Сеп1ге £ог Рго1ет Епдшеегтд, СатЬпбдс. иК). Эти последовательности могут применяться в качестве источника последовательности человека, например, для каркасных областей и СЭВ-участков. Также могут использоваться консенсусные каркасные области человека, например, как описано в патенте США № 6300064.

Также связывающее ТАЕАК антитело, не являющееся человеческим, можно модифицировать посредством специфической делеции эпитопов человеческой Т-клетки или деиммунизации при помощи методов, раскрытых в АО 98/52976 и АО 00/34317. Кратко, вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела можно исследовать на наличие пептидов, которые связываются с классом II МНС; эти пептиды представляют собой потенциальные эпитопы Т-клетки (как определено в АО 98/52976 и АО 00/34317). Для обнаружения потенциальных эпитопов Т-клетки, может применяться компьютерное моделирование, называемое рерббе 1йгеабтд, и дополнительно может быть исследована база данных связывающих пептидов класса II МНС человека для обнаружения мотивов, присутствующих в последовательностях ν_Η и ν^ как описано в АО 98/52976 и АО 00/34317. Эти мотивы связываются с любым из 18 основных аллотипов класса II ΌΒ МНС и, таким образом, образуют потенциальные эпитопы Т-клетки. Обнаруженные потенциальные эпитопы Т-клетки могут быть удалены посредством замены небольшого количества аминокислотных остатков в вариабельных областях или предпочтительно посредством одной аминокислотной замены. По возможности осуществляют консервативные замены. Часто, но не всегда, может использоваться аминокислота, свойственная положению в последовательностях антитела эмбрионального типа человека. После выявления деиммунизирующих изменений нуклеиновые кислоты, кодирующие ν_Η и ν^ могут быть сконструированы посредством мутагенеза или других синтетических способов (например, посредством синтеза бе поуо, кассетного замещения и так далее). Мутировавшая вариабельная последовательность может, необязательно, быть слита с константной областью человека, например с ^01 человека или с константными областями к.

В некоторых случаях потенциальный эпитоп Т-клетки будет включать остатки, о которых известно или предсказано, что они важны для функционирования антитела. Например, потенциальные эпитопы Тклетки обычно смещены к СЭВ-участкам. Кроме того, потенциальные эпитопы Т-клетки могут встречаться в остатках каркасной области, важных для структуры и связывания антитела. В некоторых случаях изменения для удаления этих потенциальных эпитопов потребуют более пристального изучения, например, посредством создания и испытания цепей с изменениями и без них. Где возможно, потенциальные эпитопы Т-клетки, которые перекрывают СЭВ-участки, могут быть удалены посредством замен за пределами СПК-участков. В некоторых случаях изменения внутри СЭВ являются единственно возможными, и таким образом могут быть проверены варианты с этой заменой и без нее. В других случаях замена, требующаяся для удаления потенциального эпитопа Т-клетки, находится в положении остатка в пределах каркасной области, которая могла бы быть критической для связывания антитела. В этих случаях исследуются варианты с этой заменой и без нее. Таким образом, в некоторых случаях разрабатывается несколько вариантов деиммунизированных вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, и проверяются различные комбинации тяжелой/легкой цепи для выявления оптимального деиммунизированного антитела. Затем может быть произведен выбор конечного деиммунизированного антитела посредством оценки связывающей аффинности различных вариантов в сочетании со степенью деиммунизации, в частности с количеством потенциальных эпитопов Т-клетки, оставшихся в вариабельной области. Деиммунизация может применяться для изменения любого антитела, например антитела, которое включает последовательность, не являющуюся человеческой, например синтетическое антитело, мышиное антитело, другое моноклональное антитело, не являющееся человеческим, или антитело, выделенное из дисплейной библиотеки.

Также могут применяться другие способы гуманизирования антител. Например, другие способы могут учитывать трехмерную структуру антитела, положения каркасной области, которые находятся в пространственной близости от детерминант связывания, и иммуногенные пептидные последовательности. См., например, АО 90/07861; патенты США №№ 5693762; 5693761; 5585089; 5530101 и 6407213; Тетрек! е! а1. (1991) Вю1есйпо1о§у 9:266-271. Еще один способ называется йцтапеегтд и описывается, например, в И8 2005008625.

Антитело может включать Ее-область человека, например Ге-область дикого типа или Ге-область, которая включает одно или несколько изменений. В одном варианте осуществления изменена константная область, например мутирована, для изменения свойств антитела (например, для увеличения или уменьшения одного или нескольких из следующего: связывание с Гс-рецептором, гликозилирование антитела, количество остатков цистеина, действие эффекторной клетки или функционирование комплемента). Например, константная область ^01 человека может быть мутировавшей в одном или нескольких остатках, например в одном или нескольких из остатков 234 и 237. Антитела могут нести мутации в СН2области тяжелой цепи, что уменьшает или изменяет эффекторную функцию, например связывание Гсрецептора и активацию комплемента. Например, антитела могут иметь мутации, такие как те, что описаны в патентах США №№ 5624821 и 5648260. Также антитела могут нести мутации, которые стабилизи

- 10 018255 руют дисульфидную связь между двумя тяжелыми цепями иммуноглобулина, такие как мутации в шарнирной области 1§С4, которые раскрыты в данной области техники (например, Апда1 е! а1. (1993) Мо1. 1ттипо1. 30:105-08). Также см., например, И8 20050037000.

Созревание аффинности. В одном воплощении антитело против ТХУЕЛК модифицируют, например, посредством мутагенеза для получения пула модифицированных антител. Затем измененные антитела оценивают для выявления одного или нескольких антител, у которых изменились функциональные свойства (например, улучшилось связывание, улучшилась стабильность, уменьшилась антигенность или возросла стабильность ιη νίνο). В одном воплощении применяют технологию дисплейной библиотеки для отбора или скрининга пула модифицированных антител. Затем распознают антитела с более высокой аффинностью из второй библиотеки, например, при применении повышенной точности или более конкурентных условий связывания и промывки. Также могут применяться другие методы скрининга.

В некоторых воплощениях мутагенез нацелен на области, о которых известно, что они находятся на границе связывания или это предполагается. Если, например, выявленные связывающие белки являются антителами, тогда мутагенез может быть направлен на СЭЯ-участки тяжелой или легкой цепи, как описано в настоящем изобретении. Кроме того, мутагенез может быть направлен на каркасные области вблизи СЭЯ-участков или рядом с ними, например на каркасные области, в частности в пределах 10, 5, или 3 аминокислот от границы СЭЯ. В случае с антителами мутагенез также может быть ограничен одним или несколькими СЭЯ-участками, например, для получения пошаговых усовершенствований.

В одном варианте осуществления мутагенез применяется для получения антитела, более идентичного одной или нескольким последовательностям эмбрионального типа. Один иллюстративный способ, затрагивающий последовательности эмбрионального типа, может включать выявление одной или нескольких последовательностей эмбрионального типа, которые идентичны (например, наиболее идентичны в определенной базе данных) последовательности выделенного антитела. Затем в выделенном антителе могут быть получены мутации (на аминокислотном уровне) либо пошагово, либо комплексно, либо двумя этими способами вместе. Например, создана библиотека нуклеиновой кислоты, которая включает последовательности, кодирующие некоторые или все возможные мутации эмбрионального типа. Затем оцениваются мутантные антитела, например, для выявления антитела, которое имеет один или несколько дополнительных остатков эмбрионального типа, относящихся к выделенному антителу, и которое, тем не менее, является пригодным (например, имеет функциональную активность). В одном воплощении в выделенное антитело введено столько остатков эмбрионального типа, сколько возможно.

В одном воплощении мутагенез применяется для замещения или введения одного или нескольких остатков эмбрионального типа в СЭЯ-участок. Например, остаток эмбрионального типа СЭЯ может быть из последовательности эмбрионального типа, которая идентична (например, наиболее идентична) измененной вариабельной области. После мутагенеза активность (например, связывание или другая функциональная активность) антитела может быть оценена для того, чтобы определить, является ли остаток эмбрионального типа или остатки эмбрионального типа допустимыми. Аналогичный мутагенез может быть осуществлен в каркасных областях.

Отбор последовательности эмбрионального типа может осуществляться различными способами. Например, последовательность эмбрионального типа может быть выбрана, если она удовлетворяет установленному критерию избирательности или идентичности, например характеризуется, по меньшей мере, некоторой процентной идентичностью, например по меньшей мере 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 99,5% идентичности по сравнению с донорным антителом, не являющимся человеческим. Выбор может осуществляться при использовании по меньшей мере 2, 3, 5 или 10 последовательностей эмбрионального типа. В случае с СЭЯ1 и СЭЯ2 выявление идентичной последовательности эмбрионального типа может включать выбор одной такой последовательности. В случае с СЭЯ3 выявление идентичной последовательности эмбрионального типа может включать выбор одной такой последовательности, но может включать и две последовательности эмбрионального типа, которые раздельно существуют в Ν-концевой части и С-концевой части. В других воплощениях используется несколько или две последовательности эмбрионального типа, например, для образования консенсусной последовательности.

В прочих вариантах осуществления антитело может быть модифицировано для получения измененного участка гликозилирования (т.е. измененного относительно исходного или природного участка гликозилирования). В этом контексте измененный означает имеющий один или несколько исключенных углеводных фрагментов и/или имеющий один или несколько сайтов гликозилирования, добавленных к исходному антителу. Добавление сайтов гликозилирования к раскрываемым в настоящее время антителам может быть достигнуто посредством изменения аминокислотной последовательности на консенсусные последовательности, содержащие сайт гликозилирования; такие технические приемы хорошо известны в данной области. Другие способы увеличения количества углеводных фрагментов в антителе представляют собой химическое или ферментативное слияние гликозидов с аминокислотными остатками антитела. Эти способы описаны, например, в \УО 87/05330 и Арйп апб \Уп5Юп (1981) СЯС Сгй. Яеν. Вюс11ст. 22:259-306. Удаление любых углеводных фрагментов, присутствующих в антителах, может осуществляться химически или ферментативно, как описано в данной области (Накттиббш е! а1. (1987) Агсй. Вюсйет. Вюрйук. 259:52; Ебде е! а1. (1981) Апа1. Вюсйет. 118:131; и Тйо1акига е! а1. (1987) Ме111. Епху

- 11 018255 то1. 138:350). См., например, в патенте США № 5869046 модификацию, которая увеличит время полужизни ίη νίνο посредством обеспечения сохранения эпитопа, связывающего рецептор.

В одном варианте осуществления антитело имеет последовательности СЭВ, которые лишь несущественно отличаются от таковых в Ρ2Ό10. Незначительные различия включают минимальные аминокислотные изменения, такие как замены 1 или 2 аминокислот вне любой из характерных 5-7 аминокислот в последовательности СЭВ, например СЭВ Сйо1Ыа или ВаЬа!. В основном аминокислоту замещают родственной аминокислотой, имеющей одноименный заряд, гидрофобность или стереохимические характеристики. Такие замены будут находиться в пределах компетентности рядовых специалистов в данной области. В отличие от СЭВ-участков, в структурных каркасных областях (ЕВ) могут быть произведены более значительные изменения без отрицательного воздействия на связывающие свойства антитела. Изменения в ЕВ-областях включают, но не ограничиваются этим, гуманизирование каркасной области, происходящей не от человека, или конструирование определенных остатков каркасной области, которые являются важными для установления связи с антигеном или для стабилизации сайта связывания, например изменение класса или подкласса константной области, изменение специфических аминокислотных остатков, которые могли бы изменять эффекторную функцию, например связывание Ес-рецептора (Ьипб е! а1. (1991) 1. 1ттип. 147:2657-62; Могдап е! а1. (1995) 1ттипо1оду 86:319-24), или смену видов, от которых происходит константная область.

Антитела против ТХУЕЛК могут существовать в виде полноразмерных антител или в виде фрагментов антител, например фрагментов ЕаЬ, Е(аЬ')₂, Еб, бАЬ и 5сЕу. Дополнительные формы содержат белок, который включает единственный вариабельный домен, например верблюда, или домен, идентичный домену верблюда. См., например, патент США 20050079574 и Эау1е5 е! а1. (1996) Рго!еш Епд. 9(6):531-7.

Продукция антитела. Некоторые антитела, например, ЕаЬ', можно продуцировать в бактериальных клетках, например в клетках Е. Сой. Также антитела можно получать в эукариотических клетках. В одном варианте осуществления антитела (например, 5сЕу) экспрессируют в дрожжевых клетках, таких как Р1сЫа (см., например, Ро^егк е! а1. (2001) 1. 1ттипо1. Ме1йоб§. 251:123-35), Нап§еи1а или 8ассЫаготусе5.

В одном предпочтительном воплощении антитела получают в клетках млекопитающих. Иллюстративные клетки-хозяева млекопитающих для экспрессии антитела включают клетки яичника китайского хомячка (клетки СНО) (включая клетки СНО бЫГг, описанные у Иг1аиЬ и С’Ыабп (1980) Ргос. Иа11. Асаб. 8сЕ И8А 77:4216-4220, используемые с селектируемым маркером ЭНЕВ, например, как описано у КаиГтап и 8Ыагр (1982) Мо1. Вю1. 159:601-621), клеточные линии лимфоцитов, например клетки миеломы N80 и клетки 8Р2, клетки СО8 и клетку трансгенного животного, например трансгенного млекопитающего. Например, клетка представляет собой клетку эпителия молочной железы.

В дополнение к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей разнородный иммуноглобулиновый домен, рекомбинантные экспрессионные векторы могут нести дополнительные последовательности, такие как последовательности, которые регулируют репликацию вектора в клетках-хозяевах (например, репликатор) и гены селектируемого маркера. Ген селектируемого маркера облегчает отбор клеток-хозяев, в которые внедрился вектор (см., например, патенты США №№ 4399216; 4634665 и 5179017). Например, обычно ген селектируемого маркера дает клетке-хозяину, в которую внедрился вектор, устойчивость к лекарственным препаратам, таким как С418, гигромицин или метотрексат.

В иллюстративной системе экспрессии антитела рекомбинантный зкспрессионный вектор, кодирующий и тяжелую цепь антитела, и легкую цепь антитела, вводят в клетки СНО бЫГг посредством трансфекции, опосредованной фосфатом кальция. В рекомбинантном экспрессионном векторе каждый ген тяжелой и легкой цепей антитела функционально связан с энхансерными/промоторными регуляторными элементами (например, происходящими из 8У40, СМУ, аденовируса и т.п., как, например, энхансерный регуляторный элемент СМУ/промоторный регуляторный элемент АбМЬР или энхансерный регуляторный элемент 8У40/промоторный регуляторный элемент АбМЬР) для достижения высоких уровней транскрипции генов. Рекомбинантный экспрессионный вектор также несет ген ЭНЕВ, который предусматривает селекцию клеток СНО, которые были трансфицированы вектором, при применении селекции с метотрексатом/амплификации. Отобранные трансформированные клетки-хозяева культивируют для обеспечения экспрессии тяжелой и легкой цепей антитела, и выделяют антитело из культуральной среды. Стандартные молекулярно-биологические технические приемы применяют для получения рекомбинантного экспрессионного вектора, трансфекции клеток-хозяев, селекции трансформантов, культивирования клеток-хозяев и выделения антитела из культуральной среды. Например, некоторые антитела могут быть выделены посредством аффинной хроматографии со связанной матрицей Рго!ет А или Рго!еш С.

Система продукции антитела, которое включает Ес-домен, предпочтительно синтезирует антитела, в которых Ес-область гликозилирована. Например, Ес-домен молекул 1дС гликозилирован в аспарагине 297 в домене СН2. Этот аспарагин представляет собой сайт для модификации олигосахаридами биантенного типа. Было продемонстрировано, что это гликозилирование необходимо для эффекторных функций, опосредованных рецепторами Есу и комплементом С.’1с| (Вийоп апб \УооГ (1992) Абν. 1ттипо1. 51:1-84; ВГГегЬ е! а1. (1998) 1ттипо1. Веν. 163:59-76). В одном варианте осуществления Ес-домен получают в экспрессионной системе млекопитающих, которая должным образом гликозилирует остаток, соответст

- 12 018255 вующий аспарагину 297. Ес-домен или другая область антитела также может включать другие эукариотические посттрансляционные изменения.

Также антитела можно получать при помощи трансгенного животного. Например, патент США № 5849992 описывает способ экспрессии антитела в молочной железе трансгенного млекопитающего. Трансген сконструирован таким образом, что включает специфический для молока промотор и нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело, представляющее интерес, и сигнальную последовательность для секреции. Молоко, вырабатываемое самками таких трансгенных млекопитающих, содержит секретированное антитело, представляющее интерес. Антитело может быть очищено от молока или может быть непосредственно использовано для некоторых случаев применения.

Характеристика.

Связывающие свойства антитела могут быть определены посредством любого стандартного способа, например, одним из следующих способов: исследование В1АСОВЕ™, иммуноферментный твердофазный анализ (ЕЬ18А), резонансный перенос энергии флуоресценции (ЕВЕТ), рентгеноструктурная кристаллография, исследование последовательности и сканирующий мутагенез. Способность белка подавлять одну или несколько функций Т\УЕАК может быть оценена ίη νίΐτο или на модели болезни на животном, например болезни, описанной в настоящем изобретении. Предпочтительно, чтобы антитело имело статистически значимое влияние, что служит признаком того, что антитело ингибирует одну или несколько функций Т\УЕАК.

В одном варианте осуществления оценивают подавление антителом способности Т\УЕАК стимулировать продукцию 1Ь-8, ММР-1, РСЕ2, 1Ь-6, 1Р-10 и ВАЫТЕ8 в фибробластах кожи. См. подходящие условия исследования у СЫсйеройтсйе е! а1. (2002) АтШпбк Век. 4(2): 126-133.

В другом варианте осуществления оценивают способность антитела запрещать Т^ЕАК стимулировать пролиферацию клетки эндотелия. См., например, патент США 2003-0211993, который описывает исследование пролиферации (а также другие полезные испытания) следующим образом: НУЕС засевают в 96-луночные планшеты для микротитрования при субконфлюэнции (4000 клеток на лунку) и культивируют в течение ночи в среде С8-С без добавления вспомогательных средств роста, предоставляемых поставщиком. Среды заменяют полными средами или минимальными средами. Клетки культивируют в минимальных средах со следующими добавками (либо без них): Т\УЕАК (100 нг/мл), ЬЕСЕ, используя разведение ростовой добавки ЬЕСЕ (С1опебск) от 1/500 до 1/1000 или 1 нг/мл (Β&Ό системы), УЕСЕ (10 нг/мл) или сочетания этих факторов. Где указано, также добавляют 10 мкг/мл исследуемого антитела или контрольного антитела. Клетки инкубируют при 37°С с 5% СО₂ в течение трех дней, а пролиферацию оценивали посредством импульсного режима с ³Н-тимидином в течение последних 10 ч культивирования. Задержанная клетками радиоактивность может быть измерена с помощью ВЕТАРЬАТЕ™ (ЕС&С \Уа11ас, СаййегкЬигд, Мб.). Уменьшение пролиферации, опосредованной Т\УЕАК или сочетанием Т\УЕАК и ЬЕСЕ, может означать, что антитело является эффективным при блокировании активности ТА'ЕАК.

Поверхностный плазменный резонанс (ППР).

Связывающее взаимодействие белка, представляющего интерес, и мишени (например, Т\УЕАК) может быть исследовано при использовании ППР. ППР или исследование биомолекулярного взаимодействия (В1А) обнаруживает биоспецифические взаимодействия в реальном времени без мечения любого из участников взаимодействия. Изменения массы на связывающей поверхности (указывающие на явление связывания) В1А-чипа приводят к изменениям показателя преломления света вблизи поверхности (оптический эффект поверхностного плазмонного резонанса (ППР)). Изменения преломляющей способности генерируют детектируемый сигнал, который оценивают как указание на взаимодействия в реальном времени между биологическими молекулами. Способы применения ППР описываются, например, в патенте США № 5641640; ВаеШет (1988) 8нгГасе Р1актопк 8рппдег Уег1ад; 8|о1апбег апб игЬашсхку (1991) Апа1. Сйеш. 63:2338-2345; 8хаЬо е! а1. (1995) Сигг. Ορίη. 81гиск Вю1. 5:699-705 и в онлайнресурсах, предоставляемых В1Асоге 1п1егпабопа1 АВ (Иррка1а, 8\\ебеп). Данные НИР могут использоваться для обеспечения точного и количественного измерения равновесной константы диссоциации (К_б) и кинетических параметров, включая К_оп и К_оГГ, для связывания биомолекулы с мишенью.

Также можно напрямую картировать эпитопы посредством оценки способности различных антител конкурировать друг с другом за связывание с Т\УЕАК (например, с Т\УЕАК человека, в частности с растворимым Т\УЕАК человека), применяя хроматографические методы В1Асоге (Рйатташа В1А1есйпо1оду НапбЬоок, Ерйоре Марршд, 8есйоп 6.3.2, (Мау 1994); также см. боНпе е! а1. (1993) 1. 1ттипо1. МеШобк, 160:191-198). Дополнительное основное руководство для оценки антител, например, по вестерн-блотам и исследованиям иммунопреципитации, можно найти в АпбЬоб1ек: А ЬаЬота1огу Мапиа1, под редакцией Наботе и Ьапе, Со1б 8рппд НагЬог ргекк (1988)).

Заболевания, связанные с Т\УЕАК.

Антитело против Т\УЕАК (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения ряда заболеваний, например заболевания, связанного с Т\УЕАК. Например, антитело может применяться для лечения воспалительных, иммунных или аутоиммунных заболеваний, а также

- 13 018255 новообразований у пациентов. Примеры воспалительных заболеваний, связанных с ΤνΕΑΚ, включают ревматоидный артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит, воспалительные заболевания кишечника (включая язвенный колит и болезнь Крона), псориаз или воспалительный миозит. Кроме того, другие примеры воспалительных заболеваний, которые можно лечить, включают гистиоцитоз клеток Лангерганса, синдром расстройства дыхания у взрослых/облитерирующий бронхиолит, грану ломатоз Вегенера, васкулит, кахексию, стоматит, идиопатический гемосидероз легких, дерматомиозит или полимиозит, неинфекционный склерит, хронический саркоидоз с поражением легких, миелодиспластические синдромы/рефрактерную анемию с избыточными эритробластами, язвенный колит, хроническое обструктивное заболевание легких, от среднего до сильного, и гигантоклеточный артериит.

Субъекту, который может быть подвержен возникновению этих заболеваний, у которого диагностировано такое заболевание или у которого имеется одно из этих заболеваний, может вводиться антитело против ΤνΕΑΚ в количестве и в течение времени, обеспечивающих общий терапевтический эффект. Антитело против ΤνΕΑΚ может вводиться само по себе или в сочетании с другими веществами. Например, υ88Ν 60/679518 описывает способы введения блокирующего ΤνΕΑΚ вещества в сочетании с веществом, блокирующим ΤΝΕ-α. В случае комбинированной терапии количество и время введения могут быть такими, которые обеспечивают, например, взаимно усиливающийся терапевтический эффект. Более того, введение вещества, блокирующего ΤνΕΑΚ (со вторым веществом или без него), может применяться в качестве первичного лечения, например, терапии первой линии, или в качестве вторичного лечения, например, для субъектов, которые имеют несоответствующий ответ на предшествующее лечение (т.е. на терапию, отличную от терапии с веществом, блокирующим ΤνΕΑΚ).

Ревматоидный артрит (РА).

Антитело против ΤνΕΑΚ (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения ревматоидного артрита и родственных заболеваний. Ревматоидный артрит (РА) - это хроническое воспалительное заболевание, которое вызывает боль, опухание, неподвижность и потерю функции, в первую очередь, в суставах. Часто РА начинается в синовиальной оболочке, мембране, которая окружает сустав, создавая защитный мешочек. У многих индивидуумов, страдающих РА, лейкоциты инфильтрируют из кровотока в синовиальную оболочку, вызывая постоянное нетипичное воспаление (например, синовит). Вследствие этого синовиальная оболочка воспаляется, вызывая нагревание, покраснение, опухание и боль. Коллаген в хряще постепенно разрушается, сужая суставную щель и, в конечном итоге, повреждая кость. Воспаление вызывает эрозийное повреждение кости в пораженной зоне. Во время этого процесса клетки синовиальной оболочки растут и делятся абнормально, делая в обычных условиях тонкую синовиальную оболочку толстой и давая в результате сустав, опухший и отекший на ощупь.

По мере того как РА прогрессирует, абнормальные синовиальные клетки могут захватывать и разрушать хрящ и кость в суставе. Окружающая мускулатура, связки и сухожилия, которые поддерживают и стабилизируют сустав, могут стать слабыми и неспособными нормально функционировать. Также РА может вызывать более генерализованную потерю костной массы, что может привести к остеопорозу, делая кости хрупкими и более склонными к переломам. Все эти эффекты вызывают боль, нарушение и деформации, связанные с РА. Участки, которые могут быть поражены, включают запястья, суставы пальцев, колени и подъем свода стопы. Часто могут быть вовлечены многие суставы, и даже может быть поражен позвоночник. Примерно у 25% людей с РА воспаление небольших кровеносных сосудов может служить источником ревматоидных узелков, или вздутий под кожей, которые часто образуются близко к суставам. Также по мере того как заболевание прогрессирует, может накапливаться жидкость, в частности, в лодыжках. Также у многих пациентов с РА развивается анемия, или снижение нормального количества красных кровяных телец.

РА включает ряд подтипов болезни, таких как синдром Фелти, серонегативный РА, классический РА, прогрессирующий и/или рецидивирующий РА и РА с васкулитом. Некоторые специалисты делят данное заболевание на тип 1 или тип 2. Тип 1, малораспространенная форма, чаще всего длится несколько месяцев и не дает стойкой нетрудоспособности. Тип 2 является хроническим и длится в течение многих лет, иногда всю жизнь. Также РА может проявиться в виде подкожных ревматоидных узелков, висцеральных узелков, васкулита, вызывающего изъязвление ног или множественный мононеврит, в виде плеврального или перикардиального выпота, лимфаденопатии, синдрома Фелти, синдрома Шегрена и эписклерита. Эти подтипы болезни, а также субъекты, у которых проявляется один или несколько из вышеприведенных симптомов, могут быть пролечены при применении антител, описанных в настоящем изобретении.

РА может оцениваться с помощью ряда клинических показателей. Некоторые иллюстративные признаки включают критерий Шарпа (Т88), критерий изъязвления Шарпа и индекс нетрудоспособности ΗΑ0. Описанные здесь способы могут применяться для достижения улучшения по меньшей мере по одному из этих показателей. Терапевтические свойства антитела против ΤνΕΑΚ для лечения РА могут быть оценены на модели животного, например, используя мышиную модель артрита, индуцируемого коллагеном (тС1А) (см., например, 81иат1 е! а1., 1. С1т. 1иуе81. 69:673-683 (1982).

- 14 018255

Рассеянный склероз.

Антитело против ТХУЕЛК (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения рассеянного склероза (РС) и родственных заболеваний. РС - это заболевание центральной нервной системы, которое характеризуется воспалением и утратой миелиновых оболочек.

Больных с РС можно распознавать с помощью критериев, оценивающих диагноз клинически определенного РС, как определено на симпозиуме по диагностике РС (Рокег е! а1., Апп. №иго1. (1983) 13:227). Кратко, индивидуум с клиническими признаками РС имел два приступа болезни и клинические признаки либо двух патологических изменений, либо клинические признаки одного патологического изменения и параклинические признаки другого, отдельного патологического изменения. Также окончательный РС может быть диагностирован ввиду признаков двух приступов и олигоклональных бэндов 1§С в спинномозговой жидкости или при сочетании приступа, клинических признаков двух патологических изменений и олигоклонального бэнда 1дС в спинномозговой жидкости.

Эффективное лечение рассеянного склероза может исследоваться несколькими различными способами. Следующие параметры могут применяться для оценки эффективности лечения. Используют три основных критерия: ΕΌδδ (расширенную шкалу нетрудоспособности), проявление обострения болезни или МРТ (магнитно-резонансную томографию). ΕΌδδ представляет собой средство для классификации клинического расстройства, вызванного РС (КиП/ке (1983) №иго1оду 33:1444). Оцениваются восемь функциональных систем по типу и тяжести неврологического расстройства. Кратко, перед лечением у больных оценивается расстройство в следующих системах: пирамидальная, мозжечковая, ствол мозга, сенсорная, пищеварительный тракт и мочевой пузырь, зрительная, черепно-мозговая и прочие. Последующие исследования проводятся через определенные интервалы. Шкала колеблется в пределах от 0 (норма) до 10 (гибель вследствие РС). Снижение ΕΌδδ указывает на эффективное лечение (КиПхке (1994) Апп. №иго1. 36:573-79).

Иллюстративной моделью рассеянного склероза на животном является модель экспериментального аутоиммунного энцефалита (ЕАЕ) у мыши, например, как описано у Тиойу е! а1. (1. 1ттипо1. (1988) 141: 1126-1130), 8оЬе1 е! а1. (1. 1ттипо1. (1984) 132: 2393-2401) и Тгаидой (Се11 1ттипо1. (1989) 119: 114-129). Мышам может вводиться антитело, описанное в настоящем изобретении, перед индуцированием ЕАЕ. У мышей оцениваются характеристические критерии для определения эффективности антитела.

Инсульт.

Антитело против ТХУЕЛК (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения субъекта, который перенес инсульт, например, тромбоэмболический или геморрагический инсульт (например, за последние 48, 24, 12, 8 или 2 ч), или для предупреждения инсульта, например, у субъекта с повышенным риском развития инсульта. Иллюстративные способы описаны в υδδΝ 60/653811. Инсульт - это общий термин для острого мозгового нарушения, происходящего в результате поражения кровеносных сосудов. Инсульт можно классифицировать по меньшей мере по двум основным категориям: геморрагический инсульт (обусловленный просачиванием крови за пределы нормальных кровеносных сосудов) и ишемический инсульт (ишемия головного мозга вследствие недостатка кровоснабжения). Некоторые события, которые могут вызывать ишемический инсульт, включают тромбоз, эмболию и системную недостаточную перфузию (с вытекающей ишемией и гипоксией).

Обычно инсульт вызывает гибель нейронов и поражение мозга вследствие кислородного голодания и вторичных осложнений. Зону мозга, которая погибает в результате недостатка кровоснабжения или другого повреждения, называют инфарктом. В некоторых случаях лечение, описанное в настоящем изобретении, может применяться для уменьшения или сведения к минимуму размера инфаркта, например, посредством уменьшения вторичных осложнений, которые вызывают гибель нейронов или поражение.

Закупорка мозговой артерии, обусловленная тромбом, который нарос на стенке мозговой артерии, обычно называется тромбозом сосудов головного мозга. При церебральной эмболии преграждающее вещество, закупоривающее мозговую артерию, появляется в кровотоке ниже (например, эмбол переносится в мозговую артерию из сердца). Поскольку сложно различить, вызван ли инсульт тромбозом или эмболией, применяется термин тромбоэмболия, чтобы перекрыть оба эти типа инсульта. Системная недостаточная перфузия может возникать как следствие сниженных уровней крови, пониженного гематокрита, низкого кровяного давления или неспособности сердца хорошо перекачивать кровь.

Более того, антитело против ТХУЕЛК может назначаться в качестве профилактической терапии инсульта или как ее компонент, например, субъекту, который перенес транзиторную ишемическую атаку (ТИА) или у которого проявляются симптомы ТИА.

Неврональные нарушения.

Антитело против ТХУЕЛК (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения или предупреждения неврональных нарушений, таких как механические неврональные травмы и нейродегенеративные заболевания. Примеры механических неврональных травм включают повреждение спинного мозга (ПСМ) и черепно-мозговую травму (ЧМТ). Примеры нейродегенеративных нарушений включают боковой амиотрофический склероз (БАС), прогрессирующий бульбарный паралич (ПБП), первичный латеральный склероз (ПЛС), прогрессирующую мышечную атрофию (ПМА), болезнь Паркинсона, болезнь Хантингтона (БХ) и болезнь Альцгеймера. См., например, υδδΝ 60/653813. В од

- 15 018255 ном варианте осуществления неврональное нарушение характеризуется, прежде всего, разрушением или гибелью нервных клеток, например двигательных нейронов (например, ПЛС), стриарных нейронов базального ганглия и/или кортикальных нейронов (например, болезнь Хантингтона), нейронов черной субстанции (например, болезнь Паркинсона). Рак ТАЕАК и его рецепторы могут быть вовлечены в развитие, по меньшей мере, нескольких типов рака, например рака поджелудочной железы. Антитело против ТАЕАК (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может применяться для лечения или предупреждения злокачественных опухолей (например, аденокарцином) и других неопластических нарушений. См., например, ТКЕАТМЕЯТ ΘΕ САЯСЕК, υδδΝ 60/685465, поданный 27 мая 2005 г.

Фармацевтические композиции.

Антитело против ТАЕАК (такое как антитело, описанное в настоящем изобретении) может быть разработано в виде фармацевтической композиции для введения субъекту, например, для лечения заболевания, описанного в настоящем изобретении. Обычно фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый носитель. В данном изобретении фармацевтически приемлемый носитель включает любые и все растворители, дисперсионные среды, оболочки, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и пролонгирующие всасывание вещества и т.п., которые являются физиологически совместимыми. Композиция может включать фармацевтически приемлемую соль, например соль присоединения кислоты или соль присоединения основания (см., например, Вегде, 8.М., е1 а1. (1977) I. РЕагт. 8οΐ. 66:1-19).

Фармацевтическое приготовление смеси представляет собой общепринятую область техники и, более того, описано, например, у Оеппаго (еб.), ВеттдЮп: ТНе 8аепсе апб Ргасбсе о£ РНагтасу, 20‘^ь еб., Ырртсоб, А1Шат§ & Абкнъ (2000) (ΙδΒΝ: 0683306472); Апзе1 е1 а1., РНагтасен11са1 Эо^аде Еогтк апб Эгид Ие1гдегу 8у51ет5, 7-еб., Ырршсоб А1Шат§ & Абкнъ РнЫМюге (1999) (ΙδΒΝ: 0683305727); апб К1ЬЬе (еб.), НапбЬоок о£ РЕагтасеибса1 Ехс1р1ей8 Атепсап РЕагтасеибса1 А^оаабоп, 3^гб еб. (2000) (ΙδΒΝ: 091733096Х).

Фармацевтические композиции могут существовать в разнообразных формах. Они включают, например, жидкую, полутвердую и твердую лекарственные формы, такие как жидкие растворы (например, инъецируемый и инфузионные растворы), дисперсии или суспензии, таблетки, пилюли, порошки, липосомы и суппозитории. Предпочтительная форма может зависеть от предполагаемого способа введения и терапевтического применения. Обычно композиции веществ, описанных в настоящем изобретении, находятся в форме инъецируемого или инфузионного раствора.

В одном варианте осуществления рецептура антитела против ТАЕАК разработана со средами для лекарства, такими как хлорид натрия, вторичный кислый фосфат гептагидрат натрия, первичный кислый фосфат натрия, и со стабилизатором. Оно может быть предоставлено, например, в буферном растворе с подходящей концентрацией и может храниться при 2-8°С.

Такие композиции могут вводиться парентеральным способом (например, посредством внутривенной, подкожной, внутрибрюшинной или внутримышечной инъекции). Используемые здесь словосочетания парентеральное введение и введенный парентерально подразумевают способы введения, отличные от энтерального и местного введения, обычно - инъекцией, и включают, без ограничения, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную, эпидуральную и надчревную инъекцию и инфузию.

Композиция может быть приготовлена в виде раствора, микроэмульсии, дисперсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, пригодной для стабильного хранения при высокой концентрации. Стерильные инъецируемые растворы могут быть получены посредством включения агента, описанного в настоящем изобретении, в требуемом количестве в соответствующий растворитель с одним ингредиентом или с комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, в соответствии с требованиями, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии готовят посредством внесения агента, описанного в настоящем изобретении, в стерильное средство доставки, которое содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъецируемых растворов предпочтительными способами приготовления являются вакуумная сушка и лиофильная сушка, которые дают агент, описанный в настоящем изобретении, в виде порошка плюс любой дополнительный желаемый ингредиент из его раствора, предварительно простерилизованного фильтрованием. Характерная текучесть раствора может поддерживаться, например, посредством применения оболочки, такой как лецитин, посредством поддержания требуемого размера частицы в случае дисперсии и посредством применения поверхностно-активных веществ. Пролонгированное всасывание инъецируемых композиций может достигаться посредством включения в композицию агента, который замедляет всасывание, например, моностеаратов и желатина.

В некоторых вариантах осуществлении антитело против ТАЕАК может быть приготовлено с носителем, который защитит соединение от быстрого высвобождения, например композиция с контролируемым высвобождением, включая импланты и микроинкапсулированные системы доставки. Могут применяться биодеградируемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды,

- 16 018255 полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Многие способы приготовления таких композиций запатентованы или общеизвестны. См., например, 8ийатеб амб Сон1го11сб Ке1са5с Эгид Эебуегу ЗуЧепъ, 1.К. КоЫпкоп, еб., Магсе1 Эеккег. 1пс., Кед Уогк (1978).

Антитело против ΤνΕΑΚ может быть модифицировано, например, при использовании фрагмента, который улучшает его стабилизацию и/или удержание в круговороте, например в крови, сыворотке или других тканях, например, по меньшей мере в 1,5, 2, 5, 10 или 50 раз. Модифицированное антитело может быть оценено, чтобы определить, может ли оно достигать мест воспаления, например суставов.

Например, антитело против ΤνΕΑΚ может быть связано (например, конъюгировано) с полимером, например, по существу, с неантигенным полимером, таким как полиалкиленоксид или полиэтиленоксид. Подходящие полимеры будут в значительной степени варьировать по весу. Могут использоваться полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, колеблющуюся примерно от 200 до 35000 Да (или примерно от 1000 до 15000 и примерно от 2000 до 12500).

Например, антитело против ΤνΕΑΚ может быть конъюгировано с водорастворимым полимером, например, с гидрофильным поливиниловым полимером, например, с поливиниловым спиртом или поливинилпирролидоном. Примеры таких полимеров включают гомополимеры полиалкиленоксида, такие как полиэтиленгликоль (ΡΕΟ) или полипропиленгликоль, полиоксиэтилированные многоатомные спирты, их сополимеры и их блок-сополимеры, при условии, что поддерживается растворимость блок-сополимеров в воде. Дополнительные пригодные полимеры включают полиоксиалкилены, такие как полиоксиэтилен, полиоксипропилен и блок-сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена; полиметакрилаты; карбомеры и разветвленные или неразветвленные полисахариды.

В некоторых воплощениях антитело против ΤνΕΑΚ также может быть соединено или иным образом связано с меткой или другим веществом, например с еще одним терапевтическим веществом, таким как цитотоксическое или цитостатическое вещество, хотя во многих воплощениях эта компоновка является излишней. Примеры цитотоксических и химиотерапевтических веществ включают таксол, цитохалазин В, грамицидин Ό, винбластин, доксорубицин, даунорубицин, майтансиноид (например, майтансинол или майтансиноид ΌΜ1, производное майтансина, содержащее сульфгидрильную группу), митоксантрон, митрамицин, актиномицин Ό, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, таксан, тетракаин, лидокаин, пропранолол и пуромицин и их аналоги или гомологи.

Если антитело против ΤνΕΑΚ используется в сочетании со вторым агентом (например, с антителом против ΤΝΕ-α или другим агентом), два компонента могут быть рецептированы раздельно или совместно. Компоненты могут рецептироваться или использоваться иным образом во взаимно усиливающем эффективном количестве. Также возможно использовать один компонент или оба в количествах, меньших, чем использовалось бы при монотерапии. Например, соответствующие фармацевтические композиции могут смешиваться, например, непосредственно перед введением и вводиться совместно или могут вводиться раздельно, например, в одно и то же время или в разное время.

Также можно применять другие агенты, блокирующие ΤνΕΑΚ, например агенты, описанные в υ88Ν 60/679518. Агент может быть соединением любого типа (например, малой органической или неорганической молекулой, нуклеиновой кислотой, белком или пептидом-миметиком), которое может назначаться субъекту. В одном варианте осуществления блокирующий агент представляет собой биопрепарат, например белок, имеющий молекулярную массу между 5 и 300 кДа. Например, агент, блокирующий ΤνΕΑΚ, может ингибировать связывание ΤνΕΑΚ с рецептором ΤνΕΑΚ.

Иллюстративные блокирующие ΤνΕΑΚ агенты, отличные от антител, которые связываются с ΤνΕΑΚ, включают антитела, которые связываются с ΤνΕΑΚ-К и растворимыми формами ΤνΕΑΚ-Κ (например, Εη14), которые конкурируют с ΤνΕΑΚ-К на поверхности клетки за связывание с ΤνΕΑΚ. Прочие терапевтические средства, описанные в настоящем изобретении, также могут предоставляться в виде фармацевтической композиции, например, посредством стандартных способов или способа, описанного в настоящем изобретении.

Введение.

Антитело против ΤνΕΑΚ может вводиться субъекту, например человеку, посредством ряда способов. Для большинства случаев применения путь введения представляет собой один из следующих: внутривенная инъекция или инфузия (IV), подкожная инъекция (8С), внутрибрюшинно (ΙΡ) или внутримышечная инъекция. Также можно использовать внутрисуставную доставку. Также могут использоваться другие пути парентерального введения. Примеры таких путей включают внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, внутриглазничную, внутрисердечную, внутрикожную, транстрахеальную, подкутикулярную, внутрисуставную, подкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и эпидуральную и надчревную инъекцию. В некоторых случаях введение может осуществляться непосредственно в участок воспаления, например сустав, или в другое воспаленное место.

Путь и/или способ введения антитела также может быть специально приспособлен к частному случаю, например, посредством наблюдения субъекта, например, используя томографию, неврологическое исследование и стандартные параметры, связанные с конкретным заболеванием, например критерии для оценки ревматоидного артрита.

Антитело может назначаться в виде фиксированной дозы или в виде дозы мг/кг. Также доза может

- 17 018255 быть выбрана, чтобы уменьшить или прекратить продукцию антител к антителу против ТХУЕЛК. Режимы дозирования приспособлены для обеспечения желаемого ответа, например терапевтического ответа или комбинационного терапевтического эффекта. Как правило, дозы антитела против ТХУЕЛК (и необязательно - второго агента) могут применяться для того, чтобы обеспечить субъекта веществом в биодоступных количествах. Например, могут назначаться дозы в пределах 0,1-100, 0,5-100, 1-100, 0,5-20, 0,1-10 или 1-10 мг/кг. Также могут использоваться другие дозы.

В настоящем изобретении единица лекарственной формы или фиксированная доза относится к физически дискретным единицам, соответствующим однократным дозировкам для пролечиваемых субъектов; каждая единица содержит установленное количество активного соединения, рассчитанного, чтобы давать желаемый терапевтический эффект совместно с требуемым фармацевтическим носителем и необязательно совместно с другим агентом. Могут назначаться однократные или многократные дозировки. В качестве альтернативы или дополнительно может вводиться антитело посредством длительной инфузии.

Доза антитела против ТХУЕЛК может вводиться, например, с периодическим интервалом на протяжении времени (курса лечения), достаточного для включения по меньшей мере 2, 3, 5, 10 доз или более, например однократно или двукратно ежедневно, или примерно от одного до четырех раз в неделю или предпочтительно раз в неделю, раз в две недели, раз в месяц, например в течение от 1 до 12 недель, предпочтительно от 2 до 8 недель, более предпочтительно примерно от 3 до 7 недель и даже более предпочтительно в течение примерно 4, 5 или 6 недель. Факторы, которые могут влиять на дозировку и распределение во времени, необходимые для эффективного лечения субъекта, включают, например, тяжесть заболевания или нарушения, композицию, путь доставки, предшествующее лечение, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и другие имеющиеся заболевания. Кроме того, лечение субъекта терапевтически эффективным количеством соединения может включать однократную терапию или предпочтительно может включать серийную терапию. Также могут использоваться модели на животных для определения пригодной дозы, например начальной дозы или режима.

Если субъект подвержен развитию воспаления или другого заболевания, описанного в настоящем изобретении, антитело может назначаться прежде полного проявления данной болезни, например, в качестве предупредительной меры. Такое предупредительное лечение может представлять собой однократную дозировку антитела, или лечение может продолжиться (например, многократные дозировки). Например, субъект с повышенным риском заболевания или тот, кто имеет предрасположенность к заболеванию, может лечиться антителом в течение дней, недель, месяцев или даже лет с тем, чтобы предупредить проявление или бурное протекание болезни.

Фармацевтическая композиция может включать терапевтически эффективное количество компонента, описанного в настоящем изобретении. Такие эффективные количества могут быть определены, исходя из эффекта введенного компонента или комбинационного эффекта компонентов при использовании нескольких веществ. Терапевтически эффективное количество вещества также может варьировать согласно показателям, таким как болезненное состояние, возраст, пол и масса индивидуума, и согласно способности соединения вызывать желаемый ответ у индивидуума, например улучшение по меньшей мере одного параметра болезни или улучшение по меньшей мере одного симптома болезни. Терапевтически эффективное количество также является тем параметром, при котором любые токсические или неблагоприятные эффекты данной композиции перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами.

Оборудование и наборы для терапии.

Фармацевтические композиции, которые включают антитело против ТХУЕЛК, могут вводиться при использовании медицинского оборудования. Оборудование может разрабатываться с характеристиками, такими как портативность, хранение при комнатной температуре и удобство применения, с тем, чтобы его можно было применять в экстремальных ситуациях, например, необученному человеку или персоналу службы экстренной помощи в полевых условиях, вдали от медицинских приспособлений и другого медицинского оборудования. Оборудование может включать, например, одно или несколько хранилищ для хранения фармацевтических препаратов, которые содержат антитело против ТХУЕЛК, и может быть скомпоновано для доставки одной или нескольких доз антитела. Более того, оборудование может быть скомпоновано для введения второго компонента, например антитела против ТИЕ-а, либо в виде единой фармацевтической композиции, которая дополнительно включает антитело против ТХУЕЛК, либо в виде двух отдельных фармацевтических композиций.

Например, фармацевтическая композиция может вводиться безыгольным подкожным инъектором, таким как устройства, раскрытые в патентах США 5399163; 5383851; 5312335; 5064413; 4941880; 4790824 или 4596556. Примеры хорошо известных имплантов и модулей включают: патент США 4487603, который раскрывает вживляемый микроинфузионный насос для дозирования лекарственного средства с контролируемой скоростью; патент США 4486194, который раскрывает терапевтическое устройство для введения медикаментов через кожу; патент США 4447233, который раскрывает инфузионный насос для лекарственного средства для доставки лекарства с точной скоростью инфузии; патент США 4447224, который раскрывает регулируемый вживляемый инфузионный аппарат для непрерывной

- 18 018255 доставки лекарственного препарата; патент США 4439196, который раскрывает осмотическую систему доставки лекарственного препарата, имеющую многокамерные отделения; и патент США 4475196, который раскрывает осмотическую систему доставки лекарственного препарата. Также известно множество других устройств, имплантов, систем доставки и модулей.

Антитело против ΤνΕΑΚ может предоставляться в наборе. В одном варианте осуществления данный набор включает (а) контейнер, который содержит композицию, которая включает антитело против ΤνΕΑΚ, и, необязательно, (Ь) информационный материал. Информационный материал может быть описательным, инструктивным, маркетинговым или другим материалом, который имеет отношение к способам, описанным в настоящем изобретении, и/или к применению агентов для терапевтического благоприятного воздействия.

В одном воплощении данный набор также включает второй агент для лечения воспалительного заболевания, например антитело против ΤΝΡ-α. Например, набор включает первый контейнер, который содержит композицию, которая включает антитело против ΤνΕΑΚ, и второй контейнер, который включает второй агент.

Информационный материал наборов не ограничен по своей форме. В одном варианте осуществления информационный материал может включать информацию о получении данного соединения, молекулярной массе соединения, концентрации, конечном сроке действия, партии, или информацию о месте производства и так далее. В одном воплощении информационный материал затрагивает способы введения антитела против ΤνΕΑΚ, например, в подходящей дозе, лекарственной форме, или режим введения (например, дозу, лекарственную форму или способ введения, описанный в настоящем изобретении) для лечения субъекта, который подвергался или подвергается возникновению воспалительного или другого заболевания, описанного в настоящем изобретении. Информация может предоставляться в различных форматах, содержать печатный текст, считываемый компьютером материал, видеозапись или аудиозапись или информацию, которая предоставляет ссылку или адрес на основной материал, например, в Интернете.

Кроме антитела композиция в наборе может содержать другие ингредиенты, такие как растворитель или буфер, стабилизатор или консервант. Антитело может предоставляться в любом виде, например, в жидком, высушенном или лиофилизированном виде, предпочтительно в значительной степени чистом и/или стерильном. Если компоненты представлены в жидком растворе, жидкий раствор предпочтительно является водным раствором. Если компоненты представлены в сухом виде, восстановление, как правило, осуществляется посредством добавления подходящего растворителя. Растворитель, например, стерильная вода или буфер, может необязательно предоставляться в наборе.

Набор может содержать один или несколько контейнеров для композиции или композиций, включающих реагенты. В некоторых вариантах осуществления данный набор включает раздельные контейнеры, разделители или отделения для композиции и информационный материал. Например, композиция может находиться в бутыли, флаконе или шприце, и информационный материал может находиться в пластиковом чехле или пакете. В других вариантах осуществления отдельные части набора находятся внутри одного неразделенного контейнера. Например, композиция находится в бутыли, флаконе или шприце, к которому прикреплен информационный материал в виде наклейки. В некоторых воплощениях набор включает множество (например, группу) одиночных контейнеров, каждый из которых содержит одну или несколько единиц лекарственных форм (например, лекарственную форму, описанную в настоящем изобретении) активных компонентов. Контейнеры могут включать комбинированную единицу дозировки, например единицу, которая включает и антитело против ΤνΕΑΚ, и второй компонент, например, в желаемом соотношении. Например, набор включает множество шприцов, ампул, пакетов из фольги, блистерных упаковок или медицинских приборов, каждый из которых, например, содержит отдельную комбинированную единицу дозы. Контейнеры из наборов могут быть герметичными, влагостойкими (например, непроницаемые для изменений во влажности или испарения) и/или светонепроницаемыми.

Необязательно набор включает устройство, пригодное для введения композиции, например шприц или другое подходящее устройство доставки. Устройство может предоставляться предварительно наполненным одним или обоими агентами или может быть пустым, но подходящим для наполнения.

Нацеливание на клетки, экспрессируюцщие ΤνΕΑΚ.

Антитела против ΤνΕΑΚ, описанные в настоящем изобретении, могут применяться для целевой доставки полезного груза к клетке, экспрессирующей ΤνΕΑΚ, или к ткани, или другой структуре, связанной с ΤνΕΑΚ. Например, антитела могут быть прикреплены к вирусу или вирусоподобной частице, которые доставляют экзогенный ген (например, для генной терапии), или к липосоме, например, к липосоме, которая обволакивает терапевтический агент или экзогенный ген. Иллюстративный способ применения антитела для выявления вируса описан у Коих е! а1. (1989) Ргос №111 Асаб 8οί υδΑ (1989) 86:90799083. См. также, например, Сигг Сепе ΤΙκγ. (2005) 5:63-70 и Нит Сепе Τ№γ. (2004) 15:1034-1044.

Также антитела против ΤνΕΑΚ согласно данному изобретению могут быть прикреплены к липосомам, содержащим терапевтический агент, например химиотерапевтические агенты. Прикрепление антител к липосомам может быть осуществлено при помощи любых известных перекрестно-сшивающих

- 19 018255 агентов, таких как гетеробифункциональные перекрестно-сшивающие агенты, которые широко использовались для соединения токсинов или химиотерапевтических агентов с антителами для адресной доставки. Например, конъюгирование с липосомами может осуществляться при применении ориентированного на углевод перекрестно-сшивающего реагента гидразида 4-(4-малеимидофенил)масляной кислоты (МРВН) (Όιιζβΐπκκ е! а1. (1992) I. Се11. В|осНет. АЬк!. 8ирр1. 16Е 77). Также липосомы, содержащие антитела, могут быть получены посредством хорошо известных способов (см., например, ΌΕ 3218121; Ерк!еш е1 а1. (1985) Ргос. Ναΐ1. Асаб. 8ск И8Л, 82:3688-92; Пиана е! а1. (1980) Ргос. Ναΐ1. Асаб. 8ск И8Л, 77:403034; патенты США 4485045 и 4544545).

Диагностическое применение.

Антитела против ТУЕАК могут применяться в диагностическом методе для обнаружения присутствия ТУЕАК ίη νίίΐΌ (например, в биологическом образце, таком как ткань, биопсия) или ίη νί\Ό (например, у субъекта при визуализации ίη νί\Ό). Например, человеческие или фактически человеческие антитела против ТУЕАК могут вводиться субъекту для обнаружения ТУЕАК у самого субъекта. Например, антитело может быть маркировано, например, детектируемой меткой для МРТ или радиометкой. Может быть проведена оценка субъекта при применении средств для обнаружения детектируемой метки. Например, субъекту может быть проведено сканирование, чтобы определить локализацию антитела у самого субъекта. Например, получают изображение для субъекта посредством ЯМР или других томографических способов.

Примеры меток, пригодных для диагностической визуализации, включают радиометки, такие как

мин, активные метки для ядерного магнитного резонанса, позитронно-активные изотопы, обнаруживаемые при помощи сканера для позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ), хемилюминофоры, такие как люциферин, и ферментативные маркеры, такие как пероксидаза или фосфатаза. Также могут применяться генераторы излучения короткопробежных частиц, таких как изотопы, детектируемые посредством короткобежных детекторных зондов. Белковый лиганд может быть мечен такими реагентами при применении известных технических приемов. Например, см. технические приемы, относящиеся к мечению антител радиоактивными изотопами, у \Уег18е1 и Меагек (1983) Κаб^ο^ттиηο^тад^ηд а11б Κаб^ο^ттиηοШегару, Е18еи1ег, №\ν Υο^к и Со1сНег е! а1. (1986) Ме111. Εηζутο1. 121: 802-816.

Для субъекта может быть получено изображение ίη νί\Ό при применении известных способов, таких как радиоизотопное сканирование с использованием, например, гамма-камеры или эмиссионной томографии. См., например, А.К ВгабиеП е! а1., Эеие^ртегИк ίη АпиЬобу 1тадтд, Мοηοс1οηа1 Ай1Ьоб1ек £ог Самсе!· ^е!есί^οη аг1б Тйегару, РАУ. Ва1биаг1 е! а1., (ебк.), рр 65-85 (Асабетю Ргекк 1985). В ином случае может применяться сканер для позитронной эмиссионной поперечной томографии, такой как разработанный Ре! VI, расположенный в ВгоокНауег! Набогий ЬаЬота!оту, в котором радиометка испускает позитроны (например, ^ПС, ¹⁸Е, ¹⁵О и ¹³Ν).

Контрастные вещества для МРТ.

Магнитно-резонансная томография (МРТ) использует ЯМР для визуализации характеристик внутренних органов живого субъекта, и она пригодна для прогноза, диагностики, лечения и хирургии. МРТ может применяться без соединений, содержащих радиоактивную метку, по причине видимой выгоды. Некоторые технические приемы для МРТ резюмированы в ЕРО 502814 А. Как правило, для получения изображения используют различия, затрагивающие константы времени релаксации Т1 и Т2 протонов воды при различных условиях. Однако эти различия могут быть недостаточными для обеспечения контрастных изображений с высоким разрешением.

Различия в этих константах времени релаксации могут быть увеличены посредством контрастных веществ. Примеры таких контрастных веществ включают целый ряд магнитоактивных агентов, парамагнитных агентов (которые главным образом изменяют Т1) и ферромагнитных или суперпарамагнитных агентов (которые главным образом изменяют Т2-ответ). Хелаты (например, хелаты ЕЭТЛ, ЭТРЛ и ΝΓΑ) могут применяться для присоединения (и снижения токсичности) некоторых парамагнитных субстанций (например, Ее³⁺, Μη²⁺, Сб³⁺). Другие агенты могут существовать в виде частиц с диаметром, например, менее чем от 10 мкм до 10 нм. Частицы могут иметь ферромагнитные, антиферромагнитные или суперпарамагнитные свойства. Частицы могут включать, например, магнетит (Ее₃О₄), у-Ее₂О₃, ферриты и прочие магнитоактивные минеральные соединения переходных элементов. Магнитные частицы могут содержать один или несколько магнитных кристаллов с немагнитным веществом и без него. Немагнитное вещество может содержать синтетические или природные полимеры (такие как сефароза, декстран, декстрин, крахмал и т.п.).

Также антитела против ТУЕАК могут быть помечены индикаторной группой, содержащей ЯМРактивный атом ¹⁹Е или множество таких атомов, так как (ί) в основном все распространенные в природе атомы фтора представляют собой изотоп ¹⁹Е и, таким образом, в основном все фторсодержащие соединения являются ЯМР-активными; (ίί) многие химически активные полифторированные соединения, такие как трифторуксусный ангидрид, доступны коммерчески по относительно низкой цене, и (ίίί) было обнаружено, что многие фторированные соединения приемлемы, с медицинской точки зрения, для применения у людей, например, перфторированные полиэфиры, используемые для доставки кислорода при заме

- 20 018255 не гемоглобина. После выдерживания определенного времени для инкубации осуществляют общую МРТ, используя прибор, такой как один из описанных у Ρукеΐΐ (1982) 8с1еп(1Пс Лшепсап, 246:78-88 для обнаружения и визуализации распределения ТАЕАК.

В еще одном аспекте изобретение представляет способ обнаружения присутствия ТАЕАК в образце ίπ νίΙΐΌ (например, в биологическом образце, таком как сыворотка, плазма, ткань, биопсия). Способ может применяться для диагностирования заболевания, например заболевания, связанного с иммунной клеткой. Способ включает (1) контактирование образца или контрольного образца с антителом против ТАЕАК и (ίί) оценку присутствия ТАЕАК в образце, например, посредством обнаружения образования комплекса между антителом против ТАЕАК и ТАЕАК или посредством обнаружения присутствия антитела или ТАЕАК. Например, антитело может быть иммобилизовано, например, на подложке, и детектируется удержание антигена на подложке и/или наоборот. Может участвовать контрольный образец. Статистически значимое изменение при образовании комплекса в образце при сравнении с контрольным образцом может служить признаком присутствия ТАЕАК в образце. Как правило, антитело против ТАЕАК может использоваться для прикладных задач, которые включают флуоресцентную поляризацию, микроскопию, ЕЫЗА, центрифугирование, хроматографию и клеточный сортинг (например, клеточный сортинг с активацией флуоресценции).

Пример 1.

Последовательность вариабельного домена тяжелой цепи мышиного Ρ2Ό10 с подчеркнутыми СЭКучастками представляет собой следующее:

еуоъуезово ьукрсззькь есааззртев кудмзиукоз реэжьинуае ⁵¹ 15300ΒΥΡΥΥ РРТУТЗК.РТ1 ΒΕΟΝΑΚΝΤΡΥ ЬЕМЗЗЬКВЕР ТАМУУСАКУЬ ¹⁰¹ ΥΥΡΥΡΒΡΑΙΕ УМРУИВОаТА У1УЗЗ (ВЕС Ιϋ N0:50)

Это вариабельный домен тяжелой цепи мышиной подгруппы 3Ό.

Последовательность вариабельного домена легкой цепи мышиного Ρ2Ό10 с подчеркнутыми СПКучастками представляет собой следующее:

руумтсзръв рзузьнроаз хзсвзвозъу взквытуьнв уьокрсозрк

ЕЫУКУЗЫКВ ЗбУРПЕЕЗеЗ ОЙОТОРТЬК! ВКУААШШЗУ ΥΕΟ305ΤΗΕΡ

101 КТИЗеОТТЬЕ ΙΚ (ЗЕО ΙΡ N0:51)

Это κ-область легкой цепи мышиной подгруппы 2.

Следующие акцепторные каркасные области человека были выбраны для 1ιι.ιΡ2Ο10: вариабельный домен тяжелой цепи человека, подгруппа 3, 56-84т (регистрационный номер в базе данных ЫСВ1 61:33318898, 8сатцгга е! а1., непосредственное рассмотрение). Последовательность с подчеркнутыми СПК-участками представляет собой следующее:

ЕУОЬУЕВВОС ЬУОРЕСЗЬЕЬ 5САА5СТТРВ ЗУИМВОТДОА РВКОЬЕИУАК

ΙΚ0ΡΟ3ΕΚΎΥ УРЗУК5ЕРТ1 ЗЙРЫАКЫЗЬУ ΙΟΜΝΒΡΕΑΕΡ ТАУУУСАЕРР

101 МТТУУКР31Л ТЫРУМЗОСТЪ ντνεβ (ВЕС ХР N0:52)

Последовательность вариабельного домена легкой цепи человека подгруппы 2, К107 (регистрационный номер в базе данных ЫСВ1 61:21669075, АкаНои е! а1., непосредственное рассмотрение) с подчеркнутыми СПК-участками представляет собой следующее:

рутатозрьз ьрутрзерав хзсвзаоеы. нзысумуьрв уцокрвоврй

ЬЫУЪаЗЫКА ВОУРРКГЗВВ СЗЗТБРТЦК1 ВЕУЕАЕРУОТ ΥΥΟΜΰΆΙίβΤΡ

101 ЬТГСССЗТКУЕ ΙΚ (5ΕΩ ΙΡ N0:53)

В показанных акцепторных последовательностях человека СПК-участки (которые подчеркнуты) той же самой длины и канонических классов, что и таковые в вариабельных доменах ιηι.ιΡ2Ο10.

Ниже показано выравнивание мышиного Ρ2Ό10 (верхняя часть) и человеческих акцепторных, 5684т (нижняя часть) вариабельных доменов тяжелой цепи (68,8% сходства):

ЕУ0ЪУЕ5дОСЬУаР<За5ЬК11РСЬАЗ<ЗРТР5К¥АМЗУТУК05РВКНЬЕИУАЕ 50

111111111111. И111:1 ΙΙΙΙΙΙΙΙΙ I 111111-1 I ΙΙΙΙΙ

ЕУ0ЪУЕ5аС5ЬУ0Реа5ЬКЬ5САА50ГТР5ВУИМдНУК0АРдкдЬЕИУАК 50

133аСЗУРУУРРТУТаКРТ13КВЫАККГГЬУЬЕМЗЗЪКЗЕРТАМУУСАХУЬ 100

I Η II 1'1 111111111111.111 = I -11IIII -11III

1К0РСеВКУУУР8УКаКГТ18КРИАКЫдЬУЪ0МЯ31ДАЕРТАУУУСАЯРР 100

101 УУРУРЗРЕХЕУМРУКОС(ЗТАУ1УЗЗ 125 (ВЕЙ ΙΡ N0:54) : ΙΗΙίΙ I III

101 МТТУУКРЗЬАТЫРУВбОдТЬУТУЗЗ 125 (3Ηβ ΙΡ N0:55)

- 21 018255

Ниже показано выравнивание мышиного Ρ2Ό10 (верхняя часть) и человеческих акцепторных К107 (нижняя часть, вариабельных доменов легкой цепи, (75,9% сходства):

100

100

КТР303ТТЬЕ1К 112 (ЗЕО 10 N0:56)

НИИ <111

ЦТРЗССТКУЕХК 112 (ВЕО ГО N0:57)

Существует два варианта легкой цепи НиР2Э10 (Ь1 и Ь2). Антитело 1шР2Э10-1 относится к антителу, которое включает Н1 из 1шР2Э10 и Ь1 из 1шР2Э10. Антитело 1шР2Э10-2 относится к антителу, которое включает Н1 из НиР2Э10 и Ь2 из НиР2Э10.

Ниже показано выравнивание человеческого акцептора, 56-84т (верхняя часть) и вариабельного домена тяжелой цепи Н1 из 1шР2Э10 (нижняя часть):

ВУ0ЪУЕ5б5С0У2РСЗЗЪКЬ5САЬ53РТР55УИМаЗДУК0АРСКеЬЕИ^тУАН

И 111Π11 Π111111111111ΤΓΪΤΪ Г II 111 II III11111 Г

ЕУ0ЪУЕ5СЗСЬУ0Ра35ЬЕ1,5СААВдГТРдр//А145КУК0АР5КЗЪЕИУАЕ

101

101

100

100

101

101 УУРУРСРЕТЕУМРУКООСТОУТУЗВ 125 (ВЕЙ 10 N0:59)

СЭЯ-участки подчеркнуты. Тяжелая цепь 1шР2Э10 представляет собой прямой перенос СОЯ (т.е. в каркасной области нет обратных мутаций).

Ниже показано выравнивание человеческого акцептора κ, К107 (верхняя часть) и вариабельного домена легкой цепи Ь1 из 1шР2Э10 (нижняя часть):

100

100

ЦТРЖЭТКУЕХК 112 (8Е0 Ю N0:60)

ΙΙΙΙΙΙ1ΙΙΙ1

КТРССЗТКУЕ1К 112 (ЗЕО ГО N0:61)

СЭЯ-участки подчеркнуты. Легкая цепь Ь1 из 1шР2Э10 имеет две обратные мутации, которые отмечены строчными буквами, в каркасной области, показанной выше: Ь46Р в РЯ2 и Υ87Ρ в РЯ3.

Ниже показано выравнивание человеческого акцептора К107 (верхняя часть) и вариабельного домена легкой цепи Ь2 из 1шР2Э10 (нижняя часть):

101

101 ъыуьдвнкАздтгррккзсЁаязтргтысхгкУЕАЕРУСУГУсмоАьотр

100

101

101

ХЛТОЗЗТКУЕТК 112 (ВЕС ΙΟ N0:62)

111111)1111

ЕТРЗЗСТКУЕ1К 112 (3Εζ2 ГО N0:63)

СЭЯ-участки подчеркнуты. Легкая цепь Ь2 из 1шР2Э10 представляет собой прямой перенос СЭЯ (без обратных мутаций в каркасной области).

Это иллюстративная аминокислотная последовательность тяжелой цепи Н1 !дС1 зрелого 1шР2Э10:

- 22 018255

ЕУйЬТЕЗЗвЭ ЬУОРООЗЬВЬ ЗСААЗСЕТРЗ ΕΥΑΜΒΜνκΟΑ РЯКеЬЕИУАЕ

Ι53ΟΘ3ΥΡΥΥ РРТУТСНЕТ1 ЗШЖАИГЗЪТ ΙιΟΜΝΒΙΒΑΕΟ ТАУУТСАКУЪ

101 ΥΥϋΥηΟΟΕΙΕ УМОУИеОЗТЬ ντν33Ά3ΤΚα РЗУРРЬАРЗЗ КЗТЗЗСТААЬ

151 ССЬ’ЛЩУГРЕ РУТУЗНИЗбА ЬТЗОТНТЕРА УЬОЗЕПЬУЗЬ ЗЗУТТУРЗЗЗ

201 ΙώΤΟΤΥΙΟΝν ННКРЗЯТКИ> КЮТРКЗСОК ТНТСРРСРАР ЗЬЬ&ЗРЗУГЪ

251 ррркркотш ΐΞΕΤΡΕντσν утоузиерре νκΞίπτγνησν ешптакткре

301 ΕΕΟΥΗδΤΥΕν УЗУЬТТЬН&О ИШОКЕГКСК УЗМКАЬРАР! ΕΚΓΙ3ΚΑΚΟ2

351 ΡΚΕΡΟΫΥΤΕΡ РЗЕРВЬТКИР УЗЬТСЬУКСЕ ΥΡ3ΟΙΑ7ΕΗΕ 3Μ3ΟΡΕΝΝΥΚ

401 ТТРРТЪЬЗРС ЗГРЬУЗКЬТУ ркзкиооетг езсвумнеаь нынутокбьз

451 ЬЗРО (ЗВО ΙΠ N0:64)

Нумерация КаЬа! для участка У_Н вариабельного домена тяжелой цепи (8ΕΌ ΙΌ N0: 65) показана ниже:

КаЬаЬ Но.

Ьргто

1234567890 ЕТОБУЕзеас

1234567890 СТОРСЗСБЬКЬ

1234567890 ЗСААЗеРТЕЗ

1234567890 ЙУАМЕИтаОА

1234567890 рексъЕитав

12а3456789 Ι33ΟΏ3ΥΡΪΎ

01234567В9 ΡΟΤνΤΘΕΡΤΙ

0123456739 ЗИЖГАКПЗЬУ

012аЬс3456 адмызыишс

78901234 ТАУУУСАЕ

КаЬаЪ Но

ПР2Р10

Это иллюстративная аминокислотная последовательность легкой цепи Ь1 зрелого 1шР2Э10

ЬРУТРЗЕРАЗ

РУУМТСЗРЬЗ

13СК83СЗЬУ зекеитуьни

УЪОКРСОЗРО

ГЬТУКУЙИКР

ЗБУРОЕРВСЗ

ЕЗСТПРТЬКГ

ЕКУЕАЕОУЭТ

УРСЗОЗТНГР

101 κτροοατκνΕ

ΙΚΚΤνΑΑΡΒν

РХРРРЗЭЕаЪ

КЗБТАЗУУСЬ

ЪЫЯРУРНЕАК

151

УОИКТОЯАЪО

50Ν30Ε5νΤΕ срзквзтузь

ЗЗТЬТЪЗКАР

УЕКНКХТУАСЕ νΤΗβ3υ33Ρν

Нумерация КаЬа! для этого участка У_ъ показана ниже (8ЕО ΙΌ N0: 67) άβ89012345 аекбнтуьнк

201

ТКЗРЫКБЕС (ЗЕО ΙΡ N0:66)

КаЪа! Но. БР2Э10

1234567890

ОУУМТ05РЬ8

1234567890 ΙίΡνΤΡΕΕΡΑε

1234567аЬс

15СЕ33051ДГ

6789012345 УЬОКРЗОЗРО

КаЬаЬ Но.

ЬР2РЮ

6789012345 РЫУКУЗННР

6789012345 зстрЕНРзав

6789012345 СЗОТРГТЬК!

6789012345 ЗЕУЕАЕЕУСТ

6789012345

УРСЗОЗТНРР

Это иллюстративная аминокислотная последовательность легкой цепи Ь2 зрелого 1шР2Э10

1	ЕУУМТОбРЬЗ ЬРУТРБЕРАЗ 15С?.8305Ь7 ББКЙИТУЬНИ ТЬОКРЗОБРС
51	ΙΛΙΥΚνδΝΚΡ ЗЭТРРКЕЗОЕ ОЙСТРЕТЬК! ЙНУЕАЕЕГЭТ УУСЗОБТНРР
101	ЕТРСССТКУЕ ΙΚΗΤνΑΑΡδν Р1РРРЗРЕ2Ь КЗОТАЗУУСЬ ΗΝΝΓΥΡΗΕΑΚ
151	νΟΗΚνΡΝΑΙΟ 5δΝ8ςΕ8νΤΕ ОРЗКРЗТУЭЬ ЗЗТЬТЬЗКАР УЕКНКУУАСЕ
201	УТВДОЬЗЗРУ ТКВИЖЗЕС (3Εβ Ιϋ N0:68)

Нумерация КаЬа! для этого участка У_ь показана ниже (8ЕО ΙΌ N0: 69) άε89Ο12345 ББКСМГУЬНИ

КаЬа! Νο. 11Р2Р10

1234567890 РУУМТОЗРЬЗ

1234567890

ЬРУТРСЕРАЗ

1234567аЬс тбскббозьу

6789012345 УЬОКРСОБРО

КаЪаЬ Νο,

ЦР2Р10

6789012345 ЬЫУКУБЫКЕ

6789012345 зсурркгзсб

67В9012345 ОБОГРЕТЬΚΙ

6789012345

ΒΗνΕΑΒΡνβν

6789012345

ТЕС503ТНРР

Пример 2.

Блокирующее моноклональное антитело к ТХУЕАК. ιηΡ2Ω10. значительно снижает клиническую тяжесть на моделях рассеянного склероза, инсульта и ревматоидного артрита. Была смоделирована фармакокинетика (ФК) моноклонального антитела против ТХУЕАК, тР2О10, исходя из внутривенного (1У) введения.

ιηΡ2Ω10 вводили мышам по 1, 10 или 100 мг/кг с помощью ГУ инъекции. Сывороточные концентрации ιηΡ2Ω10 определяли, применяя ЕЬГБА. Профиль ФК изменения концентрации лекарственного вещества исследовали, применяя двухкомпонентную модель с исключением первого порядка или с исключением Михаэлиса-Ментен из основного компонента с объемом УГ. Константы скорости двух компонентов составили К12 (уходящий компонент от 1 к 2) и К21 (уходящий компонент от 2 к 1). В модели

- 23 018255 исключения первого порядка константа скорости выведения представляла собой К10. В модели исключения Михаэлиса-Ментен лекарственный препарат очищали со скоростью Vт·С1/(Кт+С1), где С1 - концентрация 1ПР2Э10 в основном компоненте, Vт и Кт - константы. Данные были приведены в соответствие с программным обеспечением АЭАРТ II (П'Агдешо, Ό.Ζ. и Α. 8скиткхку. АЭАРТ II Икег'к Сшбе: Ркагтасоктебс/Ркагтасобупатк Зукктк Апа1у818 8ой^аге. Вктебка1 81ти1абоп8 Векоигсе, Ьок Апде1ек, 1997) при использовании оценки методом максимального правдоподобия.

В двухкомпонентной линейной модели исключения ν1 составил 23,2 мл/кг, К10 составила 0,0096 ч^-1, К12 составила 2,501 и К21 составила 1,053. Величина области под кривой (АК.’) составила 298, а значение Шварца - 304,2. В двухкомпонентной нелинейной модели исключения ν1 составил 0,0235. Vт составила 9,22 мг/кг/ч, Кт составила 484,2 мкг/мл. К12 составила 2,348 ч^-1, а К21 - 0,966 ч^-1. Величина АТС составила 269, а значение Шварца составило 276. ФК тР2О10 прогнозировалась лучше посредством нелинейной модели, нежели посредством линейной модели.

Профили динамики изменения концентрации тР2Э10 лучше прогнозировались посредством двухкомпонентной модели с исключением Михаэлиса-Ментен, нежели с исключением первого порядка.

Специалисты в данной области обнаружат или смогут выявить, используя не более чем стандартные эксперименты, множество вариантов осуществления, равноценных конкретным воплощениям, описанным в настоящем изобретении.

Список последовательностей <ш>

Етодеп Шее МА 1пс.

<120>

АНТИТЕЛА, СВЯЗЫВАЮЩИЕ ТИЕАК <130>

10274-116ИО1 <14 0>

<141>

РСТ/и32006/019706

2006-05-25 <150>

<151>

из 60/685,149

2005-05-27 <160>

<170>

ЕазЬЗЕф для КхпЦоиз 7егз2оп 4.0 <210>

<211>

<212>

<213>

БЕЛОК

Миз тпизсиТиз <400>

С1у РЬе ТЬг РЬе Зег

Агд

Туг

Зег <210>

<211>

<212>

<213>

БЕЛОК

Миз гпизсиТиз <4 00>

<31и 11е Зег Бег С1у

С1у

С1у

Бег

Туг Ргф

Туг Туг Рго Аар

ТЬг Уа1 ТЬг <210>

<211>

<212>

<213>

БЕЛОК

Низ тизсиТиз <4 00>

Уа1 Ъеи Туг Туг Азр

Туг

Азр

С1у Азр

Агд Не С1и А?а1

Ме£ Азр Туг <210>

<211>

<212>

<213>

БЕЛОК

Искусственная последовательность <220>

<223>

Пептид, полученный синтетически <220>

<221>

<222>

<223>

νΑΒΙΆΜΤ

Хаа = Туг или РЬе

- 24 018255 <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 3 <223> Хаа — Авп или ТЬг <220>

<221> ΐΆΕΙΑΝΤ <222> 5 <223> Хаа = Зег, ТЬг, Азр или Азд <220>

<221> νΑΒ,ΙΑΝΤ <222> 6 <223> Хаа = Агд или Туг <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 9 <223> хаа >= Мек, Не или Пей <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 10 <223> Хаа = Н±е или Зег <4ОО> 4

С1у Хаа Хаа Рке Хаа Хаа Туг А1а Хаа Хаа 15 10 <210> 5 <211> 8 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<220> <221> <222> <223>	νΑΗΙΑΝΤ 3
Хаа =	Рго	ИЛИ	Уа1
<220>
<221>	νΑΕΙΑΝΤ
<222>	5
<223>	Хаа	ТЬг	или	Зег
<220>
<221>	νΑΚ,ΙΑΝΤ
<222>	7
<223>	Хаа =	ТЬг	или	Ьуз
<400>	5
Туг Туг Хаа	Авр	Хаа	Уа1
1			5

<210>	€
<211>	7
<212>	БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

- 25 018255

<220> <223> Пептид, полученный синтетически

<220

<221> νΑΚΙΑΝΤ

<222> 1

<223> Хаа = Уа1 или Ьеи

<220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ

<222> 2

<223> Хаа = Не или Ьеи

<220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ

<222> 3, 4, 6

<223> Хаа = Туг или РЬе

<400> 6

Хаа Хаа Хаа Хаа Азр Хаа Αερ

5 <210> 7 <2Η> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220 <221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 1 <223> Хаа = Αερ или С1п <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 2 <223> Хаа = Алд или Ьуз <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 3 <223> Хаа « Не, Ьеп, Уа1 или Меб <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 4 <223> Хаа = С1о, С1п или Аар <220 <221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 5 <223> Уа1, А1а или Ьеи <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 7 <223> Хаа = Αερ или 31и <400> 7

Хаа Хаа Хаа Хаа Хаа Меб Хаа

- 26 018255 <210> 8 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Миг шизси1из <400> 8

Агд Зег Зег С1п Зег Ьеи Уа1 Зег Зег Ьуз б1у Азп ТЬг Туг Ееи ΗΪ3

10 15 <210> 9 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Миз шизси1из <400> 9

Ьуз Уа1 Зег Азп Агд РЬе Зег

5 <210> 10 <211> 9 <212> БЕЛОК <213> Миз тизсиТиз <400> 10

Зег С1п Зег ТЬг Ηίδ РЬе Рго Агд ТЬг

5 <210> 11 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 1 <223> Хаа = Агд или Ьуз <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 6 <223> Хаа = Ьеи или Не <220>

<221> νΑΡ.ΙΑΝΤ <222> 7 <223> Хаа = Ьуз или Уа1 <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 10 <223> Хаа = Ьуз или Агд <220>

<221> УАР.1АМТ <222> 13 <223> Хаа = ТЬг или Азп <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 16 <223> Хаа = С1и, Н1з, Азр, Азп, С1п или Туг <400> 11

Хаа Зег Зег С1п Зег Хаа Хаа Зег Зег Хаа С1у Азп Хаа Туг Ьеи Хаа

10 15 <210> 12 <211> 16 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220>

<221> νΆΚΙΑΝΤ <222> 1 <223> Хаа = Агд или Ьуз <220>

<221> νΑΡ.ΙΑΝΤ <222> 6 <223> Хаа = Ьеи или Не <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 10 <223> Хаа = Ьуз или Агд <220>

<221> νΑΒ,ΙΑΝΤ <222> 13 <223> Хаа = ТЬг или Азп <400> 12

Хаа Зег Зег С1п Зег Хаа Уа1 Зег Зег Хаа С1у Азп Хаа Туг Ьеи Нхз

10 15 <210> 13 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220>

<221> νΑΡ.ΙΑΝΤ <222> 1 <223> Хаа = Ьуз или С1и <220>

<221> νΑΡ.ΙΑΝΤ <222> 2 <223> Хаа = Ьеи, Уа1 или Не <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 4 <223> Хаа = Азгц	, Туг или Зег
<220> <221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 5 <223> Хаа « Агд	или Тгр
<220> <221> 7ΆΚΙΑΝΤ <222> 6 <223> Хаа = Рйе,	А1а или Аар
<400> 13 Хаа Хаа Зег Хаа	Хаа Хаа Зег

5 <210> 14 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220>

<221> νΑ^ΙΑΝΓ <222> 2 <223> Хаа = Кеи, Уа1 или Не <220>

<221> νΑΗΤΑΝΤ <222> 4

<223>	Хаа = Азп,	Туг или Зег
<220> <221> <222> <223>	νΑΒίΑΝΤ б Хаа = РЬе,	А1а или Аар

<400> 14

Ьуд Хаа Зег Хаа Агд Хаа Зег

5 <210> 15 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 1 <223> Хаа = Зег или Ме± <220>

<221> νΑΚΙΑΝΤ <222> 3 <223> Хаа = С1у, Зег или А1а

- 28 018255 <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 4 <223> Хаа = Зег или ТЬг <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 5 <223> Хаа = ΗΪ5, С1и или С1п <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 6 <223> Хаа = РЬе, Тгр или Ьеи <400> 15

Хаа С1п Хаа Хаа Хаа Хаа Рго

5 <210> 16 <211> 7 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 3 <223> Хаа = С1у, Зег или А1а <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 4 <223> Хаа = Зег, Не или ТЬг <220>

<221> νΑΒΙΑΝΤ <222> 5 <223> Хаа = Ηΐε, 61и или С1п <400> 16

Зег С1п Хаа Хаа Хаа РЬе Рго

5 <210> 17 <211> 102 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 17

Азр Не Уа1 МеГ ТЬг С1п ТЬг Рго Теи Зег Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго С1у 15 1015

С1и Рго А1а Зег 11е Зег Суз Агд Зег Зег С1п Зег Ьеи Уа1 Зег Зег

2530

Ьуз (Ну Азп ТЬг Туг Ьеи НЬз Тгр Туг Ьеи С1п Ьуз Рго С1у С1п Зег

4045

Рго

С1п 50

Ьеи Ьеи

11е

Туг

Ьуз Уа1 Зег Азп Агд РЬе

Зег

С1у Уа1

Рго

55

60

Авр

Агд

РЬе

Зег

С1у

£ег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

<л1П

Зег

85

90

95

ТЬг

НХ5

РЬе

рго

Агд

ТЬг

100

<210> 18 <211> 102 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 18

Азр

11е

Уа1

МеЬ

ТЬг

61п

ТЬг

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

ΗΪ3

Тгр

Туг

Ьеи

<31п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

ν3ι

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

5ег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

□1п

Зег

85

90

95

ТЬг

ΗΪ3

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

100

<210> 19 <211> 102 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 19 Азр Уа1 Уа1

МеЬ

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Ьеи

(31у

1

5

10

15

С1п Рго А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

νβΐ

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз 31у Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

ΗΪ3

Тгр

РЬе

С1п

61п

Агд

Рго

<31у

01п

Зег

35

40

45

Рго Агд Агд

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Зег

б1у

Зег

С1у

Зег

б1у

ТЬг

Αερ

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

20

75

80

Зег Агд Уа1

61и

А1а

С1и

Азр

Уа1

51у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

е1п

Зег

90 95

ТЬг ΗΪ5 РЬе Рго Агд ТЬг

100 <210> 20 <211> 102 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<40(

3> 2<

Азр

Уа1

Уа1

МеЕ

ТЬг

б1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Ьеи

С1у

1

5

10

15

С1п

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

Нхз

Тгр

РЬе

С1п

<Э1п

Агд

Рго

С1у

31п

Зег

35

40

45

Рго

Агд

Агд

Пей

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

С1п

Зег

85

90

95

ТЫ

Ηίε

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

100 <210> 21 <211> 102 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 21

Азр Не Уа1

МеЕ

ТЬг

С1п

ТЬг

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

νβΐ

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1п Рго А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз 51у Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

Ηίε

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго С1п Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег Агд Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

С1п

Зег

85

90

95

ТЬг Ηίε РЬе

Рго

Агд

ТЬг

100

<210> 22 <211> 102 <212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 22 Азр 11е Уа1

МеЕ

ТЬг

С1п

ТЬг

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1п Рго А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз С1у Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

Ηϊδ

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Рго

35

40

45

Рго С1п Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Αερ Агд РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

70 75 80

Бег Агд Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Бег

С1п

Бег

85

90

95

ТЬг Ηίε РЬе

Рго

Агд

ТЬг

100

<210> 23 <211> 102 <212> БЕЛОК

<213? Искусственная

последовательность

<220>

<22 3> Пептид, полученный синтетически

<400> 23 Авр Не УаЬ

МеЕ

ТЬг

С1п

Бег

Рго

Ьеи

Бег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЫ

Рго

С1у

1

5

10

15

Б1и Рго А1а

Бег

Не

Зег

Суз

Агд

Бег

Бег

<31п

Бег

Ьеи

Уа1

Бег

Бег

20

25

30

Ьуз 61у Азп

ТЬг

Туг

Леи

ΗΪ5

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуэ

Рго

С1у

О1п

Бег

35

40

45

Рго С1п Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

V®!

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Бег

С1у

Бег

С1у

Бег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег Агд Уа1

С1и

А1а

б1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Бег

С1п

Бег

85

90

95

ТЬг Н13 РЬе

Рго

Агд

ТЬг

100

<210> 24

<211> 102

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 24

Азр Не Уа1

МеЕ

ТЬг

С1п

Бег

Рго

Ьеи

Бег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и Рго А1а

Бег

Не

Бег

Суз

Агд

Бег

Бег

С1п

Бег

Ьеи

Уа1

Бег

Бег

20

25

30

Ьуз С1у Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

НЬз

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Бег

35

40

45

Рго С1п Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Бег

Азп

Агд

РЬе

Бег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Бег

С1у

Бег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег Агд Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Бег

С1п

Бег

85

90

95

ТЫ ΗΪ3 РЬе

Рго

Агд

ТЬг

100 <210> 25 <211> 102 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 25

Азр 11е '

С1п Рго I

Уа1

А1а

Ьуз 31у

Рго Агд

Азр Агд

Зег Агд

Азп

РЬе

Уа1

ТЬг Н1з

РЬе <210>

<2Н> <212> <213>

<220>

<223>

<400:

Азр :

Азр 1

МеС ТЬг О1п ТЬг 5

Зег Не Зег Суз

ТЬг Туг Беи Ηί3

Рго

Агд

Тгр

Уа1

Зег

Зег

А1а

Уа1

С1у

С1у

Зег

Зег

Зег Рго

С1п Зег δΐη

С1п Агд

А.зп

ТЬг

Уа1

Агд РЬе

Азр РЬе

Туг Туг

Уа1 ТЬг

С1п

Уа1

ТЬг Ьеи Буз

Суз Зег С1П

С1у

Зег

Рго

Рго

102

БЕЛОК

Искусственная последовательность

Пептид, полученный синтетически )> 26

11е (

С1п

МеС

Агд

Уа1

Буз

С1у

Рго

Зег

Зег

Агд

Азп

ТЬг

ТЬг

ТЬг

11е

Туг

Не

РЬ<

Зег

С1у

Зег

С1п

С1п

ТЬг

5ег

Суз

ΗΪ3

Туг

ТЬг

ΗΪ3

РЬе

Рго

100

Рго

Агд

Зег

С1и

С1у

Азр

ТЬг

Рго Зег

Агд Зег

Тгр Туг

Уа1 Зег

Зег С1у

РЬе А1а <210>

<211>

<212>

<213>

но

БЕЛОК

Искусственная последовательность <220>

<223>

Пептид, полученный синтетически

С1п Беи

А1а МеЬ

Уа1 С1п Зег С1у А1а С1<

10

Зег Суз Буз А1а Зег С1;

Уа1 Агд

Буз Уа1

Зег Тгр

С1у <31и 11е Зег

ТЬг С1у Агд Уа1

Мес С1и Беи Зег

А1а Агд Уа1

Беи Туг Туг Азр Туг Азр С1у Азр Агд 11е С1и

100 105 110 <210>

<211>

<212>

<213>

НО

БЕЛОК

Искусственная последовательность <220>

<223>

Пептид, полученный синтетически <400>

С1п Уа1 С1п

5ез

Уа1 Буз

А1а МеС Зег

С1у С1и Не

ТЬг С1у Агд

МеС С1и Беи

А1а Агд Уа1 <210>

<211>

<212>

<213>

<220>

<223>

Уа1

Тгр

Уа1

Зег

Уа1

Зез

Уа1

Зег

100

Зег

ТЬг

Зег

Туг но БЕЛОК Искусственная

С1п Зег С1у А1а

Туг Азр Туг Азр

105

С1и Уа1 Буз Буз Рго <31у А1а 10 15

С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Агд Туг

С1у С1п Агд Беи С1и Тгр МеС 45

Рго Туг Туг Рго Азр ТЬг Уа1

ТЬг Зег А1а Зег ТЬг А1а Туг

80

Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз 90 ·

С1у Азр Агд Не С1и

НО последовательность

Пептид, полученный синтетически <4 00>

Уа1

С1п

Зег

С1п

Уа1

А1а

МеС

С1у

ТЬг

МеС

С1и 50

С1у

Зег

Не

Уа1

Тгр

Уа1

Зег

Уа1

Зег

А1а

С1п

Суз

Агд

Зег

Зез

С1у

А1а

А1а

С1п

С1у

Агд

С1и

Агд <210>

<211>

<212>

<213>

<220>

<223>

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

100

Зег

Туг

МеС

С1у

ТЬг

А1а

Зег

Агд

Агд

Туг

Азр

Зег

ТЬг

Туг

Аз η

Зег

С1и

Туг

Азр

105

Агд Ту1

110

БЕЛОК

Искусственная последовательное:

Пептид, полученный синтетически <4 00>

С1п Уа1 С1п Беи Уа1 С1п Зег 21у А1а С1и Уа1 Буз Буз Рго С1у А1<

- 31 018255

1015

Зег Уа1 Ьуз Уа1 Зег Суз Ьуз А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Агд Туг 20 2530

А1а МеД Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у <31п С1у Ьеи С1и Тгр Ме5 35 4045

С1у С1и Не Зег Зег С1у С1у Зег Туг Рго Туг Туг Рго Азр ТЬг Уа1 50 5560

ТЬг С1у Агд Уа1 ТЬг МеД ТЬг ТЬг Азр ТЬг Зег ТЬг Зег ТЬг А1а Туг 65 70 7580

Μβΐ: С1и Ьеи

Агд

Зег

Ьеи

Агд

Зег

Азр

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а Агд Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

110

<210> 31

<211> 110

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<220

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 31

С1п Уа1 С1п

Ьеи

Уа1

С1п

Зег

С1у

А1а

С1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

С1у

А1а

1

5

10

15

Зег Уа1 Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

Уа1

Зег

б1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а Ме£ Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

51у

Ьуз

С1у

Ьеи

б1и

Тгр

МеЬ

35

40

45

б1у <31и Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг 01у Агд

Уа1

ТЬг

Мер

ТЬг

С1и

Азр

ТЬг

Зег

ТЬг

Азр

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Мед С1и Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а ТЬг Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Ые

С1и

100

105

110

<210> 32

<211> 110

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 32

61п Мер С1п

Ьеи

Уа1

С1п

Зег

С1у

А1а

С1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

ТЬг

С1у

Зег

1

5

10

15

Зег Уа1 Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а МеС Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

О1у

С1п

А1а

Ьеи

С1и

Тгр

МеЬ

35

40

45

01у (31и Не

Зег

Зег

<31у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг С1у Агд

Уа1

ТЬг

Ые

ТЬг

Агд

Азр

Агд

Зег

МеЬ

Зег

ТЬг

А1а

Туг

65

70

75

80

Ме1 61и Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

С1и

Азр

ТЬг

А1а

МеЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а Агд Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

б1у

Азр

Агд

11е

С1и

100

105

110

<210> 33 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220 <223> Пептид, полученный синтетически <400> 33

51П

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1п

Зег

С1у

А1а

С1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

<31у

А1а

1

5

10

15

Зег

Уа1

Ьуз

Уа1

зег

Суз

Ьуз

АЬа

Зег

01у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

МеЬ

Зег

Тгр

7а1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

С1п

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Мее

35

40

45

С1у

С1и

Ые

Зег

5ег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

Уа1

ТЬг

МеЬ

ТЫ

Агд

Азр

ТЬг

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

Уа1

Туг

65

70

75

80

Μβΐ

61и

Ьеи

Зег

Зег

Ьеи

Агд

Зег

<31и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1 у

Азр

Агд

Ые

С1и

100

105

110

<210> 34 <211> 108 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 34 С1п МеЬ С1п

Ьеи

Уа1

С1п

Зет

С1у

Рго

С1и

Уа1

Ьуз

Ьуз

Рго

С1у

ТЬг

1

5

10

15

Зег Уа1 Ьуз

Уа1

Зег

Суз

Ьуз

А1а

Зег

с1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а Меь Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

Агд

С1п

Агд

Ьеи

С1и

Тгр

11е

<31у

(31и

35

40

45

Ые 5ег Зег

01у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

ТЬг

С1у

50

55

60

Агд Уа1 ТЬг

Ые

ТЬг

Агд

Азр

МеС

Зег

ТЬг

Зег

ТЬг

А1а

Туг

МеЬ

С1и

65

70

75

80

Ьеи Зег Зег

Ьеи

Агд

Зег

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

А1а

А1а

85

90

95

Уа1 Ьеи Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Ые

С1и

100

105

<210>	35
<211>	110
<212>	БЕЛОК
<213>	Искусственна я	последовательность
<220>
<223>	Пептид, полученный синтетически
<4 00>	35
С1и Уа1 31п Ьеи Уа1	С1и Зег <31у <31у 61у Ьеи Уа1 <31п	Рго <31у	С1у
1	5	10	15
Зег Ьеи Агд Ьеи Зег	Суз А1а А1а Зег (31у РЬе ТЬг РЬе	Зег Агд	Туг

25 30

А1а МеС Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Буз С1у Беи С1и Тгр Уа1 35 4045

А1а О1и Не 5ег Зег С1у 01у Зег Туг Рго Туг Туг Рго Азр ТЬг Уа1 50 5560

ТЬг С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Буз Азп Зег БеиТуг

70- 7580

Беи О1п Ме£ Азп Зег Беи Агд А1а 51и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг ТугСуз

9095

А1а Агд Уа1 Беи Туг Туг Азр Туг Азр С1у Азр Агд 11е С1и

100 105 НО <210> 36 <211> 111 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 36

С1и Уа1 С1п Беи Уа1 31и Зег С1у С1у С1у Беи Уа1 С1п Рго С1у Агд 15 1015

Зег Беи Агд Беи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Агд Туг 20 2530

А1а Мер Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Буз С1у Беи С1и Тгр Уа1 35 4045

Зег С1и Не Зег Зег С1у С1у Зег Туг Рго Туг Туг Рго Азр ТЬг Уа1 50 5560

ТЬг С1у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Буз Азп Зег БеиТуг

70 7580

Беи С1п Мер Азп Зег Беи Агд А1а С1и Азр ТЬг А1а Беи Туг ТугСуз

9095

А1а Буз Азр Уа1 Беи Туг Туг Азр Туг Азр С1у Азр Агд 11е С1и

100 105110 <210> 37 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 37

С1п

Уа1 С1п

Беи

Уа1

С1и

Зег

С1у

С1у

С1у

Беи

Уа1

Буз

Рго

С1у

<31у

1

5

10

15

Зег

Беи Агд

Беи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мер Зег

Тгр

Не

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Буз

С1у

Беи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

Зег

С1и Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Буз

Азп

Зег

Беи

Туг

65

70

75

80

Беи

С1п Мер

Азп

Зег

Беи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд Уа1

Беи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

110

<210> 38

<211> НО

<212>

БЕЛОК

<213>

Искусственная

последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> зе

О1и

Уа1

С1п

Беи

Уа1

61и

Зег

01у

О1у

С1у

Беи

ν3ι

Буз

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Беи

Агд

Беи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мег

5ег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

РГО

С1у

Буз

С1у

Беи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

С1у

С1и

Не

Зег

Зег

(31 у

<31 у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азр

Зег

Буз

Азп

ТЬг

Беи

Туг

65

70

75

80

Беи

С1п

Мег

А5П

Зег

Беи

Буг

ТЫ

С1и

Азр

ТЫ

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

ТЬг

ТЬг

Уа1

Беи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

О1у

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

но

<210> 39 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 39

61и

νθΐ

С1п

Беи

ν$1

01и

Зег

61у

О1у

О1у

Уа1

УаБ

Агд

Рго

ОБу

С1у

1

5

10

15

Зег

Беи

Агд

Беи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

61 у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зех

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мег

Зег

Тгр

Уа1

Агд

О1п

А1а

Рго

01у

Буз

О1у

Беи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

Зег

01и

Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Агр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

01 у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Буз

Азп

Зег

Беи

Туг

65

70

75

80

Беи

01 п

Мег

Азп

Зег

Беи

Агд

А1а

61и

Азр

ТЬг

А1а

Беи

Туг

НБз

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Беи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

О1у

Азр

Агд

Не

51и

100

105

110

<210>

40

<211>

но

<212>

БЕЛОК

<213>

Искусственная

последовательность

<220>

<223>

Пептид, полученный синтетически

<4 00>

40

61и Уа1 61п

Беи

Уа1

61и

Зег

61у

21у

С1у

Беи

νβΐ

Буз

Рго

61у

61 у

1

5

10

15

Зег Беи Агд

Беи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

01 у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а МеЬ Зег

Тгр

Уа1

Агд

61п

А1а

Рго

61у

Буз

61у

Беи

61 и

Тгр

Уа1

35

40

45

Зег 61и Не

Зег

Зег

ОБу

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Бег

Беи

Туг

65

70

75

80

Лед

СЬп

Меб

Азп

Бег

Леи

Агд

АЬа

С1и

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

УаЬ

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

сьу

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

110

<210> 41 <2Ы> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 41

СЬи

УаЬ

СЬп

Ьеи

Ьеи

СЬи

Бег

СЬу

СЬу

СЬу

Ьеи

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

СЬу

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

А1а

Бег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Бег

Агд

Туг

20

25

30

АЬа

Меб

Бег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

<31у

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

Бег

С1и

Не

Бег

Бег

СЬу

СЬу

Бег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

УаЬ

50

55

60

ТЬг

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

Бег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

МеЬ

Азп

Бег

Ьеи

Агд

АЬа

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Ьуз

УаЬ

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

СЬу

Азр

Агд

Не

СЬи

100

105

110

<210> 42 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 42

СЬп

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Бег

СЬу

СЬу

СЬу

УаЬ

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Агд

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

АЬа

Бег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мес

Бег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

А1а

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

С1и

Тгр

УаЬ

35

40

45

А1а

СЬи

Не

Бег

Бег

СЬу

СЬу

Бег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

УаЬ

50

55

60

ТЬг

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

Бег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Меб

Азп

Бег

Ьеи

Агд

А1а

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Ьуз

УаЬ

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

СЬу

Азр

Агд

Не

СЬи

100

105

110

<210> 43 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400 43

СЬп

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Бег

С1у

СЬу

СЬу

УаЬ

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Агд

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

АЬа

Бег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Бег

Агд

Туг

20

25

30

АЬа

Ме5

Бег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

АЬа

СЬи

Не

Бег

Бег

СЬу

СЬу

Бег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

УаЬ

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Бег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Мет

Азп

Бег

Ьеи

Агд

АЬа

СЬи

Азр

ТЬг

АЬа

УаЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

УаЬ

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

ЗЬу

Азр

Агд

Не

СЬи

100 105 110 <210 44 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 44

СЬп

УаЬ

СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Зег

СЬу

СЬу

СЬу

УаЬ

УаЬ

СЬп

Рго

СЬу

Агд

1

5

10

15

Бег

Ьеи

Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

АЬа

Зег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Бег

Агд

Туг

20

25

30

АЬа

МеР

Бег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

С1у

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

А1а

СЬи

1Ье

Бег

Бег

С1у

СЬу

Бег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

УаЬ

50

55

60

ТЬг

СЬу

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Бег

Агд

Азр

Азп

Бег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

СЬп

Мер

Азп

Бег

Ьеи

Агд

АЬа

СЬи

Азр

ТЬг

А1а

УаЬ

Туг

Туг

Суз

85

90

95

АЬа

Ьуз

УаЬ

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

СЬу

Азр

Агд

1Ье

СЬи

100

105

110

<210>

45

<2И>

ыо

<212>

БЕЛОК

<213>

Искусственная

последовательность

<220>

<223>

Пептид, полученный синтетически

<400>

45

СЬп УаЬ СЬп

Ьеи

УаЬ

СЬи

Бег

СЬу

сьу

СЬу

УаЬ

УаЬ

еьп

Рго

СЬу

Агд

1

5

10

15

Бег Ьеи Агд

Ьеи

Бег

Суз

АЬа

АЬа

Бег

СЬу

РЬе

ТЬг

РЬе

Бег

Агд

Туг

20

25

30

АЬа Мер Бег

Тгр

УаЬ

Агд

СЬп

АЬа

Рго

СЬу

Ьуз

СЬу

Ьеи

СЬи

Тгр

УаЬ

35

40

45

АЬа СЬи Не

Зег

Бег

СЬу

СЬу

Бег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

УаЬ

50

55

60

ТЬг СЬу Агд

РЬе

ТЬг

11е

Бег

Агд

Азр

Азп

Бег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

70 75 80

Ьеи С1п Мер	Азп	Зег	Ьеи Агд	А1а	С1и	Азр	ТЬг	А1а	Уа1 Туг	Туг Суз
		85				90				95
А1а Агд Уа1	Ьеи	Туг	Туг Аар	Туг	Азр	С1у	Азр	Агд	Не О1и
	100				105				110
<210> 46
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная	последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 46

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

01у

Уа1

Уа1

Уа1

С1п

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мер

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

01и

Тгр

Уа1

35

40

45

Зег

С1и

11е

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

ТЬг

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Ьеи

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Ьуз

Азр

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

НО

<210> 47 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 47

С1и Уа1 1

С1п

Ьеи Уа1 С1и 5

Зег

С1у

С1у С1у 10

Ьеи Уа1

С1п

Рго С1у С1у 15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

МеР

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

Зег

С1и

Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

Азр

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

НО

<210> 48 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 48

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

С1у

С1у

Ьеи

Уа1

О1п

Рго

С1у

Агд

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

ТЬг

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мер

Зег

Тгр

РЬе

Агд

Θ1Π

А1а

Рго

61у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

С1у

О1и

Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

С1у

Зег

Ьуз

Зег

Не

А1а

Туг

65

70

75

80

Ьеи

51п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Ьуз

ТЬг

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

ТЬг

Агд

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

11е

С1и

100

105

НО

<210> 49 <211> 110 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 49

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

С1у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мер

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Туг

Уа1

35

40

45

Зег

С1и

Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

νβΐ

50

55

60

ТЬг

51у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

Зег

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

С1у

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

Мер

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

е1у

Азр

Агд

Не

С1и

100

105

но

<210> 50 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Миз тизсиЬиз

<400> 50

б1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

5ег

С1у

С1у

С1у

Ьеи

Уа1

Агд

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

РЬе

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мер

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

5ег

Рго

С1и

Ьуз

Агд

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

б1и

Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

5ег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1и

Мер

Зег

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Мер

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

Не

С1и

Уа1

МеР

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

А1а

Уа1

Не

Уа1

Зег

Зег

115

120

125

<210> 51 <2Η> 112 <212> БЕЛОК <213> Миз тпи5си1и5 <400> 51

Азр

Уа1

Уа1

Мек

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Уа1

Зег

Ьеи

01у

1

5

10

15

Азр

С1п

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз

б1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

ΗΪ3

Тгр

Туг

Ьеи

61п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Ьуз

РЬе

Беи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

61у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

А1а

А1а

С1и

Азр

Ьеи

С1у

Уа1

Туг

РЬе

Суз

Зег

<31п

Зег

85

90

95

ТЬг

ΗΪ3

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

ТЬг

Ьеи

<31и

Не

Ьуз

100

105

110

<210> 52

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Ното :

зарУепз

<400> 52

С1и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

С1у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Зег

Туг

20

25

30

Тгр

МеС

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

Азп

Не

Ьуз

С1п

Азр

С1у

Зег

С1и

Ьуз

Туг

Туг

Уа1

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мес

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Рго

МеС

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Ьуз

Рго

Зег

Ьеи

А1а

ТЬг

Азп

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

125

<210> 53

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Ното ;

зариепз

<400> 53

Азр Уа1 Уа1

МеС

ТЬг

61п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и Рго А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Ьеи

ΗΪ3

Зег

20

25

30

Азп С1у Туг

Азп

Туг

Ьеи

Азр

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

б1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго С1п Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьеи

С1у

Зег

Азп

Агд

А1а

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

70 75 80

Зег Агд Уа1 С1и

А1а 65

С1и

Азр

V®! С1у Уа1 Туг Туг Суз МеС <31п А1а

90

95

Ьеи С1п ТЬг

Рго

Ьеи

ТЬГ

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

<51и

Не

Ьуз

100

105

но

<210> 54 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Миз тигсиЬиз

<400> 54

С1и

Уа1

<л!п

Ьеи

Уа1

51 и

Зег

51у

61у

С1у

Ьеи

Уа1

Агд

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Ьуз

Ьеи

РЬе

Суз

А1а

А1а

Зег

31у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Мес

Зег

Тгр

Уа1

Агд

51п

Зег

Рго

51и

Ьуз

Агд

Ьеи

51и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

С1и

11е

Зег

Зег

51у

С1у

Зег

Туг

РГО

Туг

Туг

Рго

Азр

тьр

νβΐ

50

55

60

ТЬг

Й1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

ТЬг

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1и

МеС

Зег

Зег

Ьеи

Ьуз

Зег

51и

Азр

ТЬг

А1а

МеС

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Тух

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

11е

51и

Уа1

МеС

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

А1а

Уа1

11е

Уа1

Зег

Зег

115

120

125

<210> 5!

<21;

ι> 1;

25

<212? Б1

2ЛОК

<213? Н<

это ;

зархепз

<400? 5!

С1и

Уа1

51п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

С1у

С1у

Ьеи

Уа1

51п

Рго

С1у

51у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суэ

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Зег

Туг

20

25

30

Тгр

Мер

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

Азп

11е

Ьуз

С1п

Азр

С1у

Зег

С1и

Ьуз

Туг

Туг

νβΐ

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

б1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

7а1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Рго

МеС

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Ьуз

Рго

Зег

Ьеи

А1а

ТЬг

Азп

100

105

но

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

125

<210?	56 .
<211>	112
<212?	БЕЛОК
<213>	Миз тизси!	.из
<400?	56
Азр Уа1 7а1	МеС	ТЬг	С1п Зег	Рго	Ьеи Зег Ьеи Зег Уа1	Зег Ьеи	С1у
1			5			10	15
Азр 51п А1а	Зег	11е	5ег Суз	Агд	Зег Зег <31п 5ег Ьеи	Уа1 Зег	Зег

25 30

Ьуз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

НЬз

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

О1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

Ьуз

РЬе

Ьеи

11е

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЫ

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

А1а

А1а

С1и

Азр

Ьеи

С1у

Уа1

Туг

РЬе

Суз

Зег

<31п

Зег

85

90

95

ТЬг

НЬз

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

<31у

ТЬг

ТЬг

Ьеи

01и

11е

Ьуз

100

105

но

<2И

0> 5'

7

<21:

1> ι:

12

<21;

>> БЕЛОК

<21:

3> Ното ;

вар1<

эпз

<4 0(

)> 57

Азр

Уа1

Уа1

Мер

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

б!п

Зег

Ьеи

Ьеи

Низ

Зег

20

25

30

Азп

С1у

Туг

Азп

Туг

Ьеи

Азр

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьеи

С1у

Зег

Азп

Агд

А1а

Зег

О1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

<31у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

МеЕ

С1п

А1а

85

90

95

Ьеи

С1п

ТЬг

Рго

Ьеи

ты

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

11е

Ьуз

100

105

110

<210> 58

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Ното :

зар!епз

<400> 58

<31и

Уа1

С1п

Ьеи

Уа1

С1и

Зег

С1у

О1у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Ьеи

Агд

Ьеи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЫ

РЬе

Зег

Зег

Туг

20

25

30

Тгр

Мер

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

Азп

11е

Ьуз

С1п

Азр

С1у

Зег

С1и

Ьуз

Туг

Туг

Уа1

Азр

Зег

Уа1

50

55

60

Ьуз

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Азр

Рго

Мер

ТЬг

ТЬг

Уа1

Уа1

Ьуз

Рго

Зег

Ьеи

А1а

ТЬг

Азп

100

105

110

Азр

Туг

Тгр

С1у

С1п

О1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

125

<210> 59 <211> 125 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 59

С1и Уа1 С1п

Ьеи

Уа1

61и

Зег

61у

С1у

С1у

Ьеи

Уа1

С1п

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег Ьеи Агд

Ьеи

Зег

Суа

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а Мер Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Ьуз

С1у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а 01и Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЫ С1у Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи 01п Мер

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

б1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а Агд Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

11е

С1и

Уа1

Мер

100

105

110

Азр Туг Тгр

С1у

С1п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

115

120

125

<210> 60

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Ното заргепз

<400> 60

Азр νβΐ Уа1

МеЬ

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

61и Рго А1а

Зег

11е

Зег

Суа

Агд

Зег

Зег

61п

Зег

Ьеи

Ьеи

Н1з

Зег

20

25

30

Азп С1у Туг

Азп

Туг

Ьеи

Азр

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго С1п Ьеи

Ьеи

11е

Туг

Ьеи

С1у

Зег

Азп

Агд

А1а

Бег

<31у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Зег

С1у

Зег

51у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

11е

65

70

75

80

Зег Агд Уа1

<31и

А1а

С1и

Азр

Уа1

<Э1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Мер

<31п

А1а

85

90

95

Ьеи С1п ТЬг

Рго

Ьеи

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

11е

Ьуз

100

105

НО

<210> 61

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 61

Азр Уа1 Уа1 Мер ТЬг С1п Зег Рго Ьеи Зег Ьеи Рго Уа1 ТЬг Рго С1у 15 1015

01и Рго А1а Зег Не Зег Суз Агд Зег Зег 01п Зег Ьеи Уа1 Зег Зег

2530

Ьуз С1у Азп ТЬг Туг Ьеи Низ Тгр Туг Ьеи С1п Ьуз Рго О1у С1п Зег 35 4045

Рго 51п РЬе Ьеи Не Туг Ьуз Уа1 Зег Азп Агд РЬе Зег С1у Уа1 Рго 50 5560

Азр Агд РЬе Зег С1у Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ЬузНе

70 7580

Зег Агд Уа1 61и А1а С1и Азр Уа1 С1у Уа1 Туг Суз Зег С1п ЗегТЬг

9095

ΗΪ3

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

РЬе

О1у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

11е

Ьуз

100

105

но

<21

0> 6:

2

<21

1> 1:

12

<21:

2> Б)

5ЛОК

<21:

3> Н(

=ар!<

епз

<401

Э> 62

Азр

Уа1

Уа1

Мей

ТЬг

<31п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

61и

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

01п

Зег

Ьеи

Ьеи

ΗΪ3

Зег

20

25

30

Аеп

С1у

Туг

Азп

Туг

Ьеи

Азр

Тгр

Туг

Ьеи

С1п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьеи

С1у

Зег

Азп

Агд

А1а

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

5ег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1.и

Азр

Уа1

С1у

νβΐ

Туг

Туг

Суз

Мей

С1п

А1а

85

90

95

Ьеи

С1п

ТЬг

Рго

Ьеи

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

<31у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

Не

Ьуз

100 105 110 <210> 63 <211> 112 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<4 0ί

)> б:

3

Азр

Уа1

Уа1

Мей

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Ьеи

Зег

Ьеи

Рго

Уа1

ТЫ

Рго

(Ну

1

5

10

15

С1и

Рго

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Ьеи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Ьуз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Ьеи

Нхз

Тгр

Туг

Ьеи

<31п

Ьуз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

Ьеи

Ьеи

Не

Туг

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

Ьуз

Не

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

С1п

Зег

85

90

95

ТЬг

Нхз

РЬе

Рго

Агд

ТЫ

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

Ьуз

Уа1

С1и

Не

Ьуз

100

105

110

<210> 64 <211> 454 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 64

С1и Уа1 01п Ьеи Уа1 С1и Зег С1у <31у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго С1у С1у

15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег (Ну РЬе ТЫ РЬе Зег Агд Туг

20

25

30

А1а

Мей

Зег

Тгр

Уа1

Агд

(51п

А1а

Рго

(Ну

Ьуз

<31 у

Ьеи

С1и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

С1и

Не

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Его

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЬг

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

Не

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Ьуз

Азп

Зег

Ьеи

Туг

65

70

75

80

Ьеи

С1п

Мей.

Азп

Зег

Ьеи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

Уа1

Ьеи

Туг

Туг

Азр

Туг

Азр

С1у

Азр

Агд

11е

С1и

7а1

Мей

100

105

НО

Азр

Туг

Тгр

С1у

<31п

С1у

ТЬг

Ьеи

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Зег

А1а

Зег

ТЬг

115

120

125

Ьуз

С1у

Рго

Зег

Уа1

РЬе

Рго

Ьеи

А1а

Рго

Зег

Зег

Ьуз

Зег

ТЬг

Зег

130

135

140

С1у

С1у

ТЫ

А1а

А1а

Ьеи

(Ну

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

Азр

Туг

РЬе

Рго

(Ни

145

150

155

160

Рго

Уа1

ТЬг

Уа1

Зег

Тгр

Азп

Зег

С1у

А1а

Ьеи

ТЬг

Зег

С1у

Уа1

Ηίε

165

170

175

ТЬг

РЬе

Рго

А1а

Уа1

Ьеи

С1п

Зег

Зег

С1у

Ьеи

Туг

Зег

Ьеи

Зег

Зег

180

165

190

Уа1

Уа1

ТЬг

Уа1

Рго

Зег

Зег

Зег

Ьеи

(Ну

ТЬг

С1п

ТЬг

Туг

Не

Суз

195

200

205

Азп

Уа1

Азп

Нхз

Ьуз

Рго

Зег

Азп

ТЬг

Ьуз

Уа1

Азр

Ьуз

Ьуз

Уа1

С1и

210

215

220

Рго

Ьуз

Зег

Суз

Азр

Ьуз

ТЬг

НХЗ

ТЬг

Суз

Рго

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

225

230

235

240

С1и

Ьеи

Ьеи

С1у

С1у

Рго

Зег

Уа1

РЬе

Ьеи

РЬе

Рго

Рго

Ьуз

Рго

Ьуз

245

250

255

Азр

ТЬг

Ьеи

Мей

Не

Зег

Агд

ТЬг

Рго

51 и

Уа1

ТЫ

Суз

Уа1

Уа1

уа1

260

265

270

Азр

Уа1

Зег

Нхз

(Ни

Азр

Рго

С1и

Уа1

Ьуз

РЬе

Азп

Тгр

Туг

Уа1

Азр

275

280

285

61у

Уа1

51и

Уа1

Нхз

Азп

А1а

Ьуз

ТЬг

Ьуз

Рго

Агд

С1и

С1и

61п

Туг

290

295

300

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

Уа1

Уа1

Зег

Уа1

Ьеи

ТЬг

Уа1

Ьеи

Нхз

51п

Азр

305

310

315

320

Тгр

Ьеи

Азп

С1у

Ьуз

С1и

Туг

Ьуз

Суз

Ьуз

Уа1

Зег

Азп

Ьуз

А1а

Ьеи

325

330

335

Рго

А1а

Рго

11е

С1и

Ьуз

ТЬг

11е

Зег

Ьуз

А1а

Ьуз

(Ну

<31п

рго

Агд

340

345

350

С1и

Рго

61п

Уа1

Туг

ТЬг

Ьеи

Рго

Рго

Зег

Агд

Азр

31и

Ьеи

ТЬг

Ьуз

355

360

365

Азп

С1п

Уа1

Зег

Ьеи

ТЬг

Суз

Ьеи

Уа1

Ьуз

(Ну

РЬе

Туг

Рго

Зег

Азр

370

375

380

Не

А1а

Уа1

С1и

Тгр

С1и

Зег

Азп

С1у

С1П

Рго

С1и

Азп

Азп

Туг

Ьуз

385

390

395

400

ТЬг

ТЬг

Рго

Рго

Уа1

Ьеи

Азр

Зег

Азр

(Ну

Зег

РЬе

РЬе

Ьеи

Туг

Зег

405

410

415

Ьуз

Ьеи

ТЬг

Уа1

Азр

Ьуз

Зег

Агд

Тгр

С1п

С1п

61у

Азп

Уа1

РЬе

Зег

420

425

430

Суз

Зег

Уа1

Мей

Ηίε

С1и

А1а

Ьеи

Нхз

Азп

ΗΪ3

Туг

ТЬг

С1п

Ьуз

Зег

435

440

445

Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у

450 <210> 65 <211> 98 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 65

С1и

Уа1

61п

Беи

Уа1

С1и

Зег

61у

<31у

С1у

Беи

Уа1

С1п

Рго

С1у

С1у

1

5

10

15

Зег

Беи

Агд

Беи

Зег

Суз

А1а

А1а

Зег

С1у

РЬе

ТЬг

РЬе

Зег

Агд

Туг

20

25

30

А1а

Ме5

Зег

Тгр

Уа1

Агд

С1п

А1а

Рго

С1у

Буз

С1у

Беи

01и

Тгр

Уа1

35

40

45

А1а

С1и

11е

Зег

Зег

С1у

С1у

Зег

Туг

Рго

Туг

Туг

Рго

Азр

ТЫ

Уа1

50

55

60

ТЬг

С1у

Агд

РЬе

ТЬг

11е

Зег

Агд

Азр

Азп

А1а

Буз

Азп

Зег

Беи

Туг

65

70

75

80

Беи

С1п

МеГ

Азп

Зег

Беи

Агд

А1а

С1и

Азр

ТЬг

А1а

Уа1

Туг

Туг

Суз

85

90

95

А1а

Агд

<210> 66 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически <400> 66

Азр

νβΐ

Уа1

Ме£

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Беи

Зег

Беи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Беи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Буз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Беи

ΗΪ3

Тгр

Туг

Беи

С1п

Буз

Рго

<31у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

РЬе

Беи

11е

Туг

Буз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

<31у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Беи

Буз

Не

65

70

75

80

Зег Агд Уа1 С1и А1а С1и Азр Уа1 С1у Уа1 Туг РЬе Суз Зег 01п Зег

9095

ТЬг Ηϊδ РЬе Рго Агд ТЬг РЬе С1у С1у О1у ТЬг Буз Уа1 О1и Не Вуз

100 105110

Агд ТЬг Уа1 А1а А1а Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и 115 120125

С1п Беи Буз Зег С1у ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Беи Беи Азп Азп РЬе 130 135140

Туг Рго Агд С1и А1а Буз УаБ С1п Тгр Буз Уа1 Азр Азп А1а БеиС1п

145 150 155160

Зег Б1у Азп Зег С1п С1и Зег Уа1 ТЬг О1и С1п Азр Зег Буз АзрЗег

165 170175

ТЬг Туг Зег Беи Зег Зег ТЬг Беи ТЬг Беи Зег Буз А1а Азр Туг С1и

180 185190

Буз ΗΪ3 Буз Уа1 Туг А1а Суз С1и Уа1 ТЬг НБз С1п С1у Беи Зег Зег

195 Рго Уа1 ТЬг Буз Зег 210

200 РЬе Азп Агд С1у С1и Суз 215

205

<210 67 <211> 100 <212> БЕЛОК

<213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> Пептиг

1, полученный

синтетически

<400> 67 Азр 5/а1 Уа1

МеЬ

ТЬг

С1п

Зег

Рго

Беи

Зег

Беи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и Рго А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

С1п

Зег

Беи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Буз С1у Азп

ТЬг

Туг

Беи

Н1з

Тгр

Туг

Беи

С1п

Буз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго С1п РЬе

Беи

11е

Туг

Буз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Ча1

Рго

50

55

60

Азр Агд РЬе

Зег

С1у

Зег

<31у

Зег

61у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Беи

Буз

11е

65

70

75

80

Зег Агд Уа!

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

О1у

Уа1

Туг

РЬе

Суз

Зег

С1п

Зег

85

90

95

ТЬг НБз РЬе

Рго

100

<210> 68 <211> 219 <212> БЕЛОК <213> Искусственная

последовательность

<220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<400> 68

Азр

Уа1

Уа1

МеБ

ТЬг

<31п

Зег

Рго

Беи

Зег

Беи

Рго

Уа1

ТЬг

Рго

С1у

1

5

10

15

С1и

Рго

А1а

Зег

11е

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

б1п

Зег

Беи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Буз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Беи

ΗΪ3

Тгр

Туг

Беи

61л

Буз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

Беи

Беи

Не

Туг

Буз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

С1у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

31у

Зег

О1у

Зег

С1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Беи

Буз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

Туг

Суз

Зег

С1п

Зег

85

90

95

ТЬг

ΗΪ3

РЬе

Рго

Агд

ТЬг

РЬе

С1у

С1у

С1у

ТЬг

Буз

Уа1

С1и

11е

Буз

100

105

НО

Агд

ТЬг

Уа1

А1а

А1а

Рго

Бег

Уа1

РЬе

Не

РЬе

Рго

Рго

Бег

Азр

С1и

115

120

125

<31п

Беи

Вуз

Зег

С1у

ТЬг

А1а

Зег

Уа1

Уа1

Суз

Беи

Беи

Азп

Азп

РЬе

130

135

140

Туг

Рго

Агд

С1и

А1а

Буз

Уа1

С1п

Тгр

Буз

Уа1

Азр

Азп

А1а

Беи

С1п

145

150

155

160

Зег

С1у

Аэп

Зег

С1п

С1и

Зег

Уа1

ТЬг

С1и

<31п

Азр

Зег

Вуз

Азр

Зег

165

170

175

ТЬг

Туг

Зег

Беи

Зег

Зег

ТЬг

Беи

ТЬг

Беи

Зег

Буз

А1а

Азр

Туг

С1и

180

185

190

Буз

Ηϊδ

Буз

Уа1

Туг

А1а

Суз

С1и

Уа1

ТЬг

Ηίδ

С1п

С1у

Беи

Бег

Зег

195

200

205

Рго Уа1 ТЬг Буз Зег РЬе Азп Агд С1у С1и Суз 210 215 <210> 69 <211> 100 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Пептид, полученный синтетически

<4 0·

б!

9

Азр

Уа1

Уа1

МеС

ГНг

С1п

Зег

Рго

Беи

Зег

Беи

Рго

Уа1

ТИг

Рго

С1у

1

5

10

15

С31и

Рго

А1а

Зег

Не

Зег

Суз

Агд

Зег

Зег

<31п

Зег

Беи

Уа1

Зег

Зег

20

25

30

Буз

С1у

Азп

ТЬг

Туг

Беи

Н1з

Тгр

Туг

Беи

С1п

Буз

Рго

С1у

С1п

Зег

35

40

45

Рго

С1п

Беи

Беи

11е

Туг

Буз

Уа1

Зег

Азп

Агд

РЬе

Зег

01у

Уа1

Рго

50

55

60

Азр

Агд

РЬе

Зег

С1у

Зег

С1у

Зег

С1у

ТНг

Азр

РКе

ТИг

Беи

Буз

11е

65

70

75

80

Зег

Агд

Уа1

С1и

А1а

С1и

Азр

Уа1

С1у

Уа1

Туг

РБе

Суз

Зег

31п

Зег

85

90

95

Тйг Ηίδ РЬе Рго

Claims (46)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Выделенный белок, содержащий последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина и последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина, которые могут формировать антигенсвязывающую область, которая связывается с ТАЕАК человека (ТИР-подобный слабый индуктор апоптоза), в котором:

   (a) последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 50; или (b) последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 51; или (c) последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина в совокупности по меньшей мере на 95% идентичны в СИЯ-участках (определяющих комплементарность участках) СИЯ-участкам антитела с последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 50 и последовательностью вариабельного домена легкой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 51; или (ά) последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина в совокупности по меньшей мере на 95% идентичны в каркасных областях каркасным областям антитела с последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 50 и последовательностью вариабельного домена легкой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 51; или (е) последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина кодируется нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется в условиях высокой строгости с последовательностью, комплементарной последовательности, кодирующей 8Е0 ΙΌ N0: 50; или (ί) последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина кодируется нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется в условиях высокой строгости с последовательностью, комплементарной последовательности, кодирующей 8Е0 ΙΌ N0: 51.
2. 2. Выделенный белок, содержащий последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина и последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина, которые могут формировать антигенсвязывающую область, которая связывается с ТАЕАК человека (ТИР-подобный слабый индуктор апоптоза), в котором:

   (a) последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 59; или (b) последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 80% идентична аминокислотной последовательности 8Е0 ΙΌ N0: 61 или 8Е0 ΙΌ N0: 63; или (c) последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина в совокупности по меньшей мере на 95% идентичны в СИЯ-участках (определяющих комплементарность участках) СИЯ-участкам антитела с последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 59 и последовательностью вариабельного домена легкой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 61 или 8Е0 ΙΌ N0: 63; или (ά) последовательности вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей иммуноглобулина в совокупности по меньшей мере на 95% идентичны в каркасных областях каркасным областям антитела с последовательностью вариабельного домена тяжелой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 59 и последовательностью вариабельного домена легкой цепи 8Е0 ΙΌ N0: 61 или 8Е0 ΙΌ N0: 63; или (е) последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина кодируется нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется в условиях высокой строгости с последовательностью, комплементарной последовательности, кодирующей 8Е0 ΙΌ N0: 59; или (ί) последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина кодируется нуклеиновой кислотой, которая гибридизуется в условиях высокой строгости с последовательностью, комплементарной последовательности, кодирующей 8Е0 ΙΌ N0: 61 или 8Е0 ΙΌ N0: 63.
3. 3. Белок по любому из пп.1, 2, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит один или несколько из следующих СИЯ-участков:

   0ΡΤΡ3ΚΥΑΜ5 (ΟϋΚΙ) (5Е0 ΙΏ N0:1),

   ΕΙ83Θ<13ΥΡΥΥ₽ΟΤνΤβ (ΟϋΚ2) (ЗЕО ΙΏ N0:2) и νΕΥΥϋΥΌΟΟΚΙΕνΜΌΥ (0ΌΚ3) (ЗЕ(2 Ιϋ N0:3} .
4. 4. Белок по любому из пп.1-3, в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи

   - 40 018255 иммуноглобулина содержит один или несколько из следующих СЭВ-участков:

   ЕЗЗОЗЬУЗЗКОЫТУЬН (СОЯ1) (ЗЕО ΙϋΝΟ:8),

   КУЗМКРЗ (СОЕ2) (ЗЕО И N0:9) и

   508ТНЕРЕТ (СБЕЗ) (ЗЕО ΙΌ N0:10).
5. 5. Белок по п.3, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит следующие СЭВ-участки:

   СГТГЗЕУАМЗ (СЭЕ1) (ЗЕО Ιϋ N0:1),

   ΕΙ33005ΥΡΥΥΡ0ΤνΤ0 (0ΏΚ2) (5Е0 ΙΟ N0:2) и νΐ,ΥΥΟΥΟεΟΚΙΕνΜΟΥ (ΟϋΚ3) (ЗЕО Ю N0:3); и в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина содержит один или несколько из следующих СЭВ-участков:

   ЕЗЗОБЬУЗЗКОЫТУЬН (С0Е1) (ЗЕО ΙΌ N0:8),

   ΚνδΝΕΓΕ (СПЕ2) (8Е<2 ΙΌ N0:9) и

   803ТНЕРЕТ (0ΌΕ3) (ΞΕΟ ΙΏΝΟ:10).
6. 6. Белок по любому из пп.1, 2, который является рекомбинантным полноразмерным 1дС.
7. 7. Белок по любому из пп.1, 2, который содержит человеческую Ес-область.
8. 8. Белок по любому из пп.1, 2, который содержит человеческую Ес-область с тремя или менее аминокислотными замещениями.
9. 9. Белок по любому из пп.1, 2, который представляет собой ЕаЬ или ксЕν.
10. 10. Белок по любому из пп.1, 2, который содержит каркасные области, которые по меньшей мере на 90% идентичны человеческим каркасным областям эмбрионального типа.
11. 11. Белок по любому из пп.1, 2, в котором каркасные области последовательности вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 95% идентичны в совокупности последовательности подгруппы Ук1 эмбрионального типа.
12. 12. Белок по любому из пп.1, 2, в котором каркасные области последовательности вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 95% идентичны в совокупности последовательности ЭР54 эмбрионального типа.
13. 13. Белок по любому из пп.1, 2, в котором каркасные области последовательности вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 95% идентичны в совокупности последовательности ЭРК9 эмбрионального типа.
14. 14. Белок по любому из пп.1, 2, в котором каркасные области последовательности вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина по меньшей мере на 95% идентичны в совокупности последовательности подгруппы УН I эмбрионального типа.
15. 15. Белок по любому из пп.1, 2, который содержит гипервариабельные петли, которые имеют ту же каноническую структуру, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из:

    ί) антитела, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи БЕР ΙΌ N0: 50 и вариабельный домен легкой цепи БЕР ΙΌ N0: 51;

    и) антитела, содержащего вариабельный домен тяжелой цепи БЕР ΙΌ N0: 59 и вариабельный домен легкой цепи БЕр ΙΌ N0: 61; и

    ш) антитела, содержащего тяжелую цепь БЕР ΙΌ N0: 59 и легкую цепь БЕР ΙΌ N0: 63.
16. 16. Белок по п.2, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную БЕР ΙΌ N0: 65.
17. 17. Белок по п.16, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит БЕР ΙΌ N0: 65.
18. 18. Белок по п.2, в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина содержит последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную БЕр ΙΌ N0: 67 или 69.
19. 19. Белок по п.18, в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина содержит БЕр ΙΌ N0: 67 или 69.
20. 20. Белок по любому из пп.1, 2, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит любую последовательность из БЕр ΙΌ N0: 27-49 или последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную ей.
21. 21. Белок по любому из пп.1, 2, в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина содержит любую последовательность из БЕр ΙΌ N0: 17-18, 20-22 и 24-26 или последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную ей.
22. 22. Белок по п.2, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную БЕр ΙΌ N0: 59.
23. 23. Белок по п.22, в котором последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина содержит БЕр ΙΌ N0: 59.
24. 24. Белок по п.2 или 22, в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи имму

    - 41 018255 ноглобулина содержит последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную 8Ε0 Ш N0: 61 или 63.
25. 25. Белок по п.24, в котором последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина содержит 8Ε0 Ш N0: 61 или 63.
26. 26. Белок по п.2, где белок содержит последовательность тяжелой цепи, которая по меньшей мере на 95% идентична 8Ε0 Ш N0: 64.
27. 27. Белок по п.26, где белок содержит последовательность тяжелой цепи 8Ε0 Ш N0: 64.
28. 28. Белок по п.2, где белок содержит последовательность легкой цепи, которая по меньшей мере на 95% идентична 8Ε0 Ш N0: 66 или 68.
29. 29. Белок по п.28, где белок содержит последовательность легкой цепи 8Ε0 Ш N0: 66 или 68.
30. 30. Белок по п.29, где белок содержит последовательность легкой цепи 8Ε0 Ш N0: 68.
31. 31. Белок по пп.27 и 29, где белок содержит последовательность тяжелой цепи 8Ε0 Ш N0: 64 и последовательность легкой цепи 8Ε0 Ш N0: 66 или 68.
32. 32. Белок по п.31, где белок содержит последовательность легкой цепи 8Ε0 Ш N0: 68.
33. 33. Белок по любому из пп.1, 2, где белок связан с одной или несколькими другими функциональными молекулами.
34. 34. Белок по п.33, в котором функциональная молекула представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.
35. 35. Белок по п.34, где белок связан с одной или несколькими 5сЕу.
36. 36. Фармацевтическая композиция, содержащая белок по любому предшествующему пункту и фармацевтически приемлемый носитель.
37. 37. Способ получения выделенного белка, содержащего последовательность вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина и последовательность вариабельного домена легкой цепи иммуноглобулина, которые могут формировать антигенсвязывающую область, которая связывается с ΤνΕΑΚ человека, включающий:

    (ί) получение клетки-хозяина, которая содержит последовательности рекомбинантной нуклеиновой кислоты для экспрессии белка по любому из пп.1, 2; и (ίί) культивирование клетки в условиях, при которых экспрессируется белок.
38. 38. Способ лечения аутоиммунного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения аутоиммунного заболевания.
39. 39. Способ лечения ревматоидного артрита у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения ревматоидного артрита.
40. 40. Способ лечения рассеянного склероза у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения рассеянного склероза.
41. 41. Способ лечения инсульта у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения инсульта.
42. 42. Способ лечения воспалительного заболевания у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения воспалительного заболевания.
43. 43. Способ по п.42, где воспалительное заболевание выбрано из псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, воспалительного заболевания кишечника, язвенного колита, болезни Крона, псориаза, воспалительного миозита, гистиоцитоза клеток Лангерганса, синдрома расстройства дыхания у взрослых, облитерирующего бронхиолита, грануломатоза Вегенера, васкулита, кахексии, стоматита, идиопатического легочного фиброза, дерматомиозита или полимиозита, неинфекционного склерита, хронического саркоидоза с поражением легких, миелодиспластического синдрома, рефрактерной анемии с избыточными эритробластами, обструктивного заболевания легких и гигантоклеточного артериита.
44. 44. Способ лечения невронального нарушения у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения невронального нарушения.
45. 45. Способ по п.44, где неврональное нарушение выбрано из повреждения спинного мозга, черепномозговой травмы, бокового амиотрофического склероза, прогрессирующего бульбарного паралича, первичного латерального склероза, прогрессирующей мышечной атрофии, болезни Паркинсона, болезни Хантингтона и болезни Альцгеймера.
46. 46. Способ лечения волчанки, системной красной волчанки и волчаночного нефрита у субъекта, включающий введение субъекту фармацевтической композиции по п.36 в количестве, эффективном для лечения волчанки, системной красной волчанки и волчаночного нефрита.

    Евразийская патентная организация, ЕАПВ

    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2