CN107613974A - 抗‑met抗体及其使用方法 - Google Patents

抗‑met抗体及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107613974A
CN107613974A CN201680028538.0A CN201680028538A CN107613974A CN 107613974 A CN107613974 A CN 107613974A CN 201680028538 A CN201680028538 A CN 201680028538A CN 107613974 A CN107613974 A CN 107613974A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
antibody
antigen
binding fragment
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680028538.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107613974B (zh
Inventor
杨艳
斯瑞卡拉·曼迪亚恩
布雷特·罗宾逊
丽达·基梅尔
亚龙·哈达利
蒂莫西·大卫·琼斯
弗朗西斯·约瑟夫·凯尔
罗伯特·乔治·爱德华·霍尔盖特
理查德·韦尔登
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Celldex Therapeutics Inc
Kolltan Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Celldex Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Celldex Therapeutics Inc filed Critical Celldex Therapeutics Inc
Priority to CN202110114408.1A priority Critical patent/CN113150147A/zh
Publication of CN107613974A publication Critical patent/CN107613974A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107613974B publication Critical patent/CN107613974B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell

Abstract

本文提供了涉及特异性结合至MET(受体酪氨酸激酶)并且调节MET的表达和/或活性的抗体的组合物、方法和使用。还提供了控制、治疗或预防病症，如癌症的使用和方法。在一个方面，本文提供了结合至人MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原结合片段。本文还提供了包含本文所提供的抗体或抗原结合片段的试剂盒。本文还提供了控制、保护抵抗或治疗受试者中癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所提供的抗体或抗原结合片段。

Description

抗-MET抗体及其使用方法
本发明申请主张2015年3月16日提交的美国临时专利申请No.62/133,789和2015年4月17日提交的美国临时专利申请No.62/149,465的权益，以上每篇专利以其全部内容作为参考并入本文。
对电子提交的序列表的引用
本发明申请作为参考引入了作为标题为“Sequence_Listing_12638_125_228.txt”的文本文件与本发明申请一起提交的序列表，该文本文件于2016年3月7日生成并且大小为153,511字节。
1.技术领域
本文提供了涉及特异性结合至受体酪氨酸激酶MET并调节MET的表达和/或活性以用于控制、治疗或预防病症，如癌症的抗体的组合物、方法和使用。
2.发明背景
肝细胞生长因子(HGF)受体MET(也称为HGFR、c-MET)是由MET基因编码的单次跨膜(single-pass)受体酪氨酸激酶。MET酪氨酸激酶是杂二聚体，其包含通过二硫键连接至跨膜β-亚基的胞外α-亚基以及胞内蛋白酪氨酸激酶域(参见，例如，Giordano等人,Nature,1989,339:155-156)。MET的胞外区组织成3个功能区。Sema域还存在于导向蛋白和丛状蛋白中，其覆盖了约500氨基酸的保存序列。它对配体结合和受体二聚化是必需的。PSI域(对于丛状蛋白、导向蛋白和整合素中存在的域)覆盖了从N-末端开始的随后约50个残基。四个IPT(对于丛状蛋白和转录因子所共有的免疫球蛋白-样折叠)域将PSI域连接至跨膜螺旋。MET胞内部分具有了5个关键丝氨酸/酪氨酸残基(Ser975、Tyr1234、Tyr1235、Tyr1349和Tyr1356)，这些残基调控其酶活力或者形成接合体和信号转导蛋白的停泊位点(参见，例如，Trusolino和Comoglio,Nat.Rev.Cancer,2002,2:289-300；Kong-Beltran等人,CancerCell,2004,6:75-84；Trusolino等人,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11:834-848)。
已克隆了编码MET激酶的人MET基因，如Cooper等人，Nature,1984,311:29-33所述。一旦配体HGF结合，通过催化酪氨酸残基Tyr1234和Tyr1235的受体二聚化和转磷酸化作用激活MET激酶。C末端尾中Tyr1349和Tyr1356的后续磷酸化作用提供了信号转导接合体和转导蛋白募集的停泊位点。当与丛状蛋白寡聚时，还可以通过导向蛋白以不依赖于HGF的方式激活MET，从而导致MET下游效应因子的刺激。已表明MAPK(包括ERK1/2、JNK和p38)、PI3K-AKT、STAT和NF-κB信号通路的成员是MET信号转导的下游信号转导蛋白(参见，例如，Ponzetto等人,Cell,1994,77:261-271；Trusolino等人,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11:834-848)。
对于胚胎形态发生中的多个事件，需要MET功能。功能丧失研究表明MET信号转导支持肝细胞和胎盘滋养母细胞的生长和存活以及神经系统的正确分线(wiring)。此外，MET信号转导在创伤愈合以及肝和肾再生方面起到重要作用(参见，例如，Trusolino等人,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11:834-848)。
由于过表达、突变或自分泌配体生产，异常MET激活已涉及一些癌症。研究表明异常MET信号转导不仅对肿瘤生长，而且对肿瘤转移是重要的。
需要调节MET的疗法以控制、治疗或预防涉及MET和/或异常MET活性(例如，MET信号转导)或异常MET表达的病况。
3.发明概述
在一个方面，本文提供了抗体(例如，单克隆抗体)，其包括其抗原结合片段，所述抗原结合片段特异性结合至MET，如人MET的胞外域(ECD)。在具体的方面，这些特异性结合至人MET的ECD(例如，人MET-ECD的Sema/PSI域)的抗-MET抗体与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时更好地抑制MET磷酸化并且抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。本文还提供了包含编码这些抗体的序列的多核苷酸和载体，包含这些多核苷酸或载体的细胞(例如，宿主细胞)和包含这些抗体的组合物、试剂和试剂盒。在另一个方面，本文提供了调节MET活性，例如，抑制MET活性或MET表达水平的方法、这些抗-MET抗体的诊断方法和使用以及治疗方法和使用。在某些方面，本文提供了调节配体-依赖性MET活性的方法。在某些方面，本文提供了调节MET-增强(例如，独立于配体)的MET活性的方法。
在一个方面，本文提供了结合至人MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段：
(a)抑制细胞中MET的活性，如通过MET磷酸化的抑制所确定的；
(b)引起细胞中MET降解；和
(c)抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长；和
其中与作为IgG1同种型相比，作为人IgG2同种型时，所述抗体更好地抑制MET磷酸化，引起MET降解或者抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。在一个方面，所述单克隆抗体或其抗原-结合片段结合至人MET的Sema域。
在某些方面，所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)轻链可变区(VL)，其包含如表1中所列的抗体Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VLCDR2和VL CDR3；和(b)重链可变区(VH)，其包含如表2中所列的抗体Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：1、2和3的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：4、5和6的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：7、8和9的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：10、11和12的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：13、14和15的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、17和18的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：25、26和27的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：28、17和29的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：72、14和15的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、73和18的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含：
(i)VL CDR1，其包含SASSSVX7YMF的氨基酸序列(SEQ ID NO：41)，其中X7是任意氨基酸，例如，N或S；
(ii)VL CDR2，其包含DTX13X14LAS的氨基酸序列(SEQ ID NO：43)，其中X13是任意氨基酸，例如，F或S，并且X14是任意氨基酸，例如，N或D；
(iii)VL CDR3，其包含QQWSX15YPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：44)，其中X15是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH，其包含：
(i)VH CDR1，其包含X1YWIEW的氨基酸序列(SEQ ID NO：36)，其中X1是任意氨基酸，例如，N或S；
(ii)VH CDR2，其包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK的氨基酸序列(SEQ ID NO：38)，其中X3是任意氨基酸，例如，Y或F，并且X4是任意氨基酸，例如，N或S；和
(iii)VH CDR3，其包含PSTX6PPDC的氨基酸序列(SEQ ID NO：40)，其中X6是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含MGWSCIILFLVATATGVHSQIVLTQSPAIMSX136SPGEKVTMTCSASSSVX137YMFWYQQKX138GSSPRLLIYDTX13 9X140LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX141IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQID NO：273)，其中X136是任意氨基酸，例如，T或A，X137是任意氨基酸，例如，N或S，X138是任意氨基酸，例如，A或P，X139是任意氨基酸，例如，F或S，X140是任意氨基酸，例如，N或D，并且X141是任意氨基酸，例如，I或N。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含
MGWSCIILFLVATATGVHSQIVLTQSPAIMSX136SPGEKVTMTCSASSSVX137YMFWYQQKX138GSSPRLLIYDTX13 9X140LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX141IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQIDNO：273)，其中X136是任意氨基酸，例如，T或A，X137是任意氨基酸，例如，N或S，X138是任意氨基酸，例如，A或P，X139是任意氨基酸，例如，F或S，X140是任意氨基酸，例如，N或D，并且X141是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH，其包含
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，所述VL包含
QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH，其包含
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含：
(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：13或72的氨基酸序列；
ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列；
(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含：
(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQID NO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含：
(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列；
(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列；
(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含：(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQID NO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ IDNO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含
DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是S或G，X27是V或L，X28是D或E，X29是R或T，X30是T或E，X31是K或N，X32是A或S，X33是K或Q，X34是F或S，X35是F或S，X36是D或Q，X37是F或Y，X38是T或S，X39是T或K，X40是S或N，X41是P或S，并且X42是A或S；和
(b)VH，其包含
EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQIDNO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
(a)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET和猴MET，但不结合至小鼠MET或狗MET。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET和猴MET的Sema域，但不结合至小鼠MET或狗MET的SEMA域。
在某些实施方式中，MET活性的抑制发生在SNU-5细胞、A549细胞和/或Hop92细胞中。在某些实施方式中，SNU-5细胞中MET活性抑制的IC50在约100pM至约500pM、约25pM至约200pM，或约40pM至约160pM、约50pM至约125pM，或约5pM至约100pM之间。在某些实施方式中，SNU-5细胞中MET活性抑制的最大百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方式中，在SNU-5细胞中IgG2同种型的MET活性最大抑制百分比比IgG1同种型的MET活性的最大抑制百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方式中，A549细胞中MET活性抑制的IC50在约40pM至约250pM，100pM至约500pM，约25pM至约200pM，或约40pM至约160pM，约50pM至约125pM，或约5pM至约100pM之间。在某些实施方式中，Hop92细胞中MET活性抑制的IC50在约100pM至约500pM、约25pM至约200pM，或约40pM至约160pM、约50pM至约125pM，或约5pM至约100pM之间。在某些实施方式中，Hop92细胞中MET活性抑制的IC50比不结合SEMA域，例如，人SEMA域的人源化抗-MET抗体，或结合至SEMA域，例如，人SEMA域的二价IgG4抗-MET抗体小1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些实施方式中，在MET氨基酸残基Tyr1234和/或Tyr1235处确定MET磷酸化。
在某些实施方式中，在SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中发生MET降解的诱导。在某些实施方式中，MET降解的诱导发生在表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的细胞中。在某些实施方式中，MET降解的诱导发生在具有扩增的MET的细胞中。在某些实施方式中，SNU-5细胞中MET降解的最大诱导百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方式中，在SNU-5细胞中IgG2同种型的MET降解最大诱导百分比比IgG1同种型的MET降解的最大诱导百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
在某些实施方式中，在SNU-5肿瘤细胞、EBC-1肿瘤细胞、U87MG肿瘤细胞、A549肿瘤细胞和/或H596肿瘤细胞中发生肿瘤细胞增殖的抑制。在某些实施方式中，肿瘤细胞增殖的抑制发生在表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的细胞中。在某些实施方式中，肿瘤细胞增殖的抑制发生在具有扩增的MET的细胞中。在某些实施方式中，SNU-5肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方式中，IgG2同种型对于SNU-5肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比比IgG1的最大抑制百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方式中，EBC-1肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方式中，IgG2同种型对于EBC-1肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比比IgG1的最大抑制百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在某些实施方式中，U87MG肿瘤细胞中肿瘤细胞增殖抑制的IC50在约100nM至约500nM、约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM、约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM之间。在某些实施方式中，A549肿瘤细胞中肿瘤细胞增殖抑制的IC50在约100nM至约500nM、约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM、约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM之间。在某些实施方式中，H596肿瘤细胞中肿瘤细胞增殖抑制的IC50在约100nM至约500nM、约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM、约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM之间。
在某些实施方式中，所述肿瘤生长是U87异种移植肿瘤模型、SNU15异种移植肿瘤模型或U87MG正位肿瘤模型。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段抑制细胞上MET和肝细胞生长因子(HGF)之间的相互作用。在某些实施方式中，所述细胞是A549细胞。在某些实施方式中，A549细胞上MET和HGF之间相互作用的抑制的IC50在约0.01nM至10,000nM，0.01nM至1,000nM，0.1nM至500nM，0.1nM至100nM或0.1nM至50nM之间。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段引起细胞中MET的泛素化。在某些实施方式中，所述细胞是A549细胞。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段抑制细胞中的MET信号转导。在某些实施方式中，所述细胞是A549细胞。在某些实施方式中，所述MET信号转导是HGF-依赖的。在某些实施方式中，所述MET信号转导是不依赖于HGF的。在某些实施方式中，将MET信号转导的抑制鉴别为AKT和/或MET磷酸化的抑制。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段抑制HGF-引起的内皮间充质转化(EMT)。在某些实施方式中，通过DU145细胞分散确定HGF-引起的EMT的抑制。在某些实施方式中，所述DU145细胞分散的IC50为约50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。在某些实施方式中，所述DU145细胞分散是抑制百分比，其为约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。
在某些实施方式中，与所述抗体的IgG1同种型相比，所述抗体的IgG2同种型改变了MET二聚体的构型。
本文还提供了结合至MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，其包含如表1中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
(b)重链可变区(VH)，其包含如表2中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：1、2和3的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：265、5和6的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：7、8和9的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：266、11和12的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：13、14和15的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、17和18的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：19、20和21的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：267、23和24的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：25、26和27的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：28、73和29的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：72、14和15的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、73和18的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：30、31和32的氨基酸序列，并且所述抗体或其抗原结合片段的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：33、34和35的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含：
(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：13或72的氨基酸序列；
(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列；
(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含：
(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQID NO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含：
(i)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列；
(ii)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列；
(iii)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含：
(i)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
(ii)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
(iii)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQID NO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ IDNO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，所述VL包含
DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S；和
(b)VH，其包含
EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ IDNO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含：
(i)VL CDR1，其包含SASSSVX7YMF的氨基酸序列(SEQ ID NO：41)，其中X7是任意氨基酸，例如，N或S；
(ii)VL CDR2，其包含DTX13X14LAS的氨基酸序列(SEQ ID NO：43)，其中X13是任意氨基酸，例如，F或S，并且X14是任意氨基酸，例如，N或D；
(iii)VL CDR3，其包含QQWSX15YPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：44)，其中X15是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH，其包含：
(i)VH CDR1，其包含X1YWIEW的氨基酸序列(SEQ ID NO：36)，其中X1是任意氨基酸，例如，N或S；
(ii)VH CDR2，其包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK的氨基酸序列(SEQ ID NO：38)，其中X3是任意氨基酸，例如，Y或F，并且X4是任意氨基酸，例如，N或S；和
(iii)VH CDR3，其包含PSTX6PPDC的氨基酸序列(SEQ ID NO：40)，其中X6是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含MGWSCIILFLVATATGVHSQIVLTQSPAIMSX136SPGEKVTMTCSASSSVX137YMFWYQQKX138GSSPRLLIYDTX13 9X140LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX141IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQID NO：273)，其中X136是任意氨基酸，例如，T或A，X137是任意氨基酸，例如，N或S，X138是任意氨基酸，例如，A或P，X139是任意氨基酸，例如，F或S，X140是任意氨基酸，例如，N或D，并且X141是任意氨基酸，例如，I或N。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含
MGWSCIILFLVATATGVHSQIVLTQSPAIMSX136SPGEKVTMTCSASSSVX137YMFWYQQKX138GSSPRLLIYDTX13 9X140LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX141IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQIDNO：273)，其中X136是任意氨基酸，例如，T或A，X137是任意氨基酸，例如，N或S，X138是任意氨基酸，例如，A或P，X139是任意氨基酸，例如，F或S，X140是任意氨基酸，例如，N或D，并且X141是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH，其包含
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，所述VL包含
QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH，其包含
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含：
(a)VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列；和
(b)VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
本文还提供了结合至MET的Sema域的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，其包含如表5中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
(b)重链可变区(VH)，其包含如表6中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
本文还提供了结合至MET的Sema域的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
(a)轻链可变区(VL)，其包含如表7中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
(b)重链可变区(VH)，其包含如表8中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段抑制转移。
在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段包含人IgG2Fc区。
在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体或人源化抗体。在某些方面，所述人源化抗体是去免疫化抗体或复合人抗体。
在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段是双重特异性抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段融合至异源多肽。
在某些实施方式中，本文所提供的抗体或其抗原结合片段缀合至试剂。在某些实施方式中，所述试剂适合于成象和疗法。在某些实施方式中，所述试剂是放射性同位素、量子点或其他纳米颗粒。在某些实施方式中，所述试剂是毒素。在某些实施方式中，所述毒素是相思豆毒蛋白、篦麻毒素A、假单胞菌外毒素、霍乱毒素或白喉毒素。
本文还提供了包含治疗有效量的本文所提供的抗体或抗原-结合片段的组合物。在某些实施方式中，所述组合物还包含药物可用的载体。
本文还提供了包含编码本文所提供的抗体的VH链区、VL链区或者VL链区和VH链区两者的核苷酸序列的多核苷酸。
本文还提供了包含编码本文所提供的抗体的重链、轻链或重链和轻链两者的核苷酸序列的多核苷酸。在某些实施方式中，所述多核苷酸可操作性地连接至启动子。
本文还提供了包含下列的多核苷酸群体：
(i)包含编码本文所提供的抗体的VH或重链的核苷酸序列的第一多核苷酸，和
(ii)包含编码本文所提供的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的第二多肽。在某些实施方式中，所述第一多核苷酸可操作性地连接至第一启动子，并且第二多核苷酸可操作性地连接至第二启动子。
本文还提供了包含本文所提供的多核苷酸的载体。
本文还提供了包含下列的载体群体：
(i)包含编码本文所提供的抗体的VH或重链的核苷酸序列的第一载体，和
(ii)包含编码本文所提供的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的第二载体。
本文还提供了包含下列的载体群体：
(i)包含编码本文所提供的抗体的VH或重链的核苷酸序列的第一载体，和
(ii)包含编码本文所提供的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的第二载体。
本文还提供了包含本文所提供的多核苷酸的细胞。
本文还提供了包含本文所提供的多核苷酸群体的细胞。
本文还提供了包含本文所提供的载体的细胞。
本文还提供了产生本文所提供的抗体或抗原-结合片段的分离的细胞。
本文还提供了包含下列的细胞群体
(i)第一宿主细胞，其包含含有编码本文所提供的抗体的VH或重链的核苷酸序列的多核苷酸，和
(ii)第二宿主细胞，其包含含有编码本文所提供的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的多核苷酸。
本文还提供了包含下列的细胞群体
(i)第一宿主细胞，其包含含有可操作性地连接至第一启动子的编码本文所提供的抗体的VH或重链的核苷酸序列的多核苷酸，和
(ii)第二宿主细胞，其包含含有编码本文所提供的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的多核苷酸。
本文还提供了试剂盒，其包含本文所提供的抗体或抗原-结合片段。
本文还提供了控制、保护抵抗或治疗受试者中癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所提供的抗体或抗原-结合片段。在某些实施方式中，所述癌症是结直肠癌、胃癌、肺癌、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、食管癌、脑癌、肝癌、肾癌、头颈癌、甲状腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神经胶质瘤或淋巴癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达MET的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症包含表达EGFR的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些实施方式中，所述癌症包含表达扩增的MET的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。
本文还提供了控制、保护抵抗或治疗受试者中癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文提供的组合物。在某些实施方式中，所述癌症是结直肠癌、胃癌、肺癌、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、食管癌、脑癌、肝癌、肾癌、头颈癌、甲状腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神经胶质瘤或淋巴癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达MET的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症包含表达EGFR的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些实施方式中，所述癌症包含表达扩增的MET的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。
本文还提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中转移的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所提供的抗体或抗原-结合片段。
本文还提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中转移的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所提供的组合物。
在某些实施方式中，根据本文所提供的方法治疗的受试者表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变的MET。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些实施方式中，根据本文所提供的方法治疗的受试者表达在MET氨基酸残基Thr1010处包含异亮氨酸氨基酸取代的MET蛋白。在某些实施方式中，根据本文所提供的方法治疗的受试者患有癌症，或正在用抗癌治疗剂治疗癌症。
在某些实施方式中，所述癌症包含表达MET的癌细胞。在某些实施方式中，所述癌症包含表达EGFR的癌细胞。
在某些实施方式中，本文所提供的方法还包括向患者施用另一种试剂。在某些实施方式中，所述试剂是化疗剂。
本文还提供了制备特异性结合至人MET的Sema域的抗体或其抗原-结合片段的方法，其包括培养本文所提供的细胞以表达所述抗体或抗原-结合片段。
本文还提供了制备特异性结合至人MET的Sema域的抗体或其抗原-结合片段的方法，其包括表达本文所提供的多核苷酸。
4.附图说明
图1显示了人MET ECD的示例性氨基酸序列，其中氨基酸残基1-24包含信号序列。
图2显示了来自与对照载体(1)、HGF(2)或存在Ab237情况下的HGF(3)、克唑替尼(Crizotinib)(4)或对照嵌合IgG1抗KLH抗体(5)培育的细胞的裂解液的免疫印迹。用抗体检验免疫印迹以检测磷酸化的MET(“pMet”)、磷酸化的Akt(“pAkt”)、微管蛋白、磷酸化的MAPK(“pMAPK”)、MET、Akt和MAPK。
图3A显示了如通过免疫印迹分析所确定的，与Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239或与对照嵌合IgG1抗KLH抗体培育后，U87MG细胞中MET的降解。图3B显示了如通过ELISA所确定的，与Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239或与对照嵌合IgG1抗KLH抗体培育后，U87MG细胞中MET的降解。图3C显示了如通过免疫印迹分析所确定的，与Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239或与对照嵌合IgG1抗KLH抗体培育后，A549细胞中MET的降解。图3D显示了如通过ELISA所确定的，与Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239或与对照嵌合IgG1抗KLH抗体培育后，A549细胞中MET的降解。图3E显示了如通过ELISA所确定的，与Ab237C、抗-MET-1、抗-MET-2或与对照嵌合IgG1抗KLH抗体培育后，H596细胞中MET的降解。图3F显示了如通过ELISA所确定的，与Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239或与对照嵌合IgG1抗KLH抗体培育后，Hop92细胞中MET的降解。
图4A显示了在用PBS腹膜内注射两次后的第4天，U87MG皮下肿瘤模型的肿瘤样品中MET水平的免疫组织化学。图4B显示了在用对照嵌合IgG1抗KLH抗体腹膜内注射两次后的第4天，U87MG皮下肿瘤模型的肿瘤样品中MET水平的免疫组织化学。图4C显示了在用Ab240腹膜内注射两次后的第4天，U87MG皮下肿瘤模型的肿瘤样品中MET水平的免疫组织化学。图4D显示了在用对照嵌合IgG1抗KLH抗体腹膜内注射两次后的第4天，U87MG皮下肿瘤模型的肿瘤样品中对照Ig水平的免疫组织化学。
图5显示了如通过免疫印迹法对与抗-MET抗体免疫沉淀的蛋白裂解液上的泛素所确定的，在与对照嵌合IgG1抗KLH抗体、Ab237C-IgG2a或Ab237C培育后，A549细胞中MET的泛素化。
图6A显示了通过Ab235(三角形，尖头朝上)、Ab236(正方形)、Ab237(三角形，尖头朝下)、Ab238(菱形)、Ab239(垂线)或对照(x)处理，在不存在HGF的情况下U87MG细胞的增殖。图6B显示了在肿瘤植入后的指定天数(例如，第28、31、35、42和49天)，通过对照嵌合IgG1抗KLH抗体、克唑替尼(crizotinib)、Ab235C或Ab236C处理，U87MG正位肿瘤模型小鼠体内所观察到的生物发光信号。图6C显示了对于用对照嵌合IgG1抗KLH抗体(圆形)、克唑替尼(Crizotinib)(三角形)、Ab235C(正方形)或Ab236C(菱形)处理的小鼠，图6B中生物发光信号的图示。
图7A显示了通过对照(“媒介物”，短划线，实心圆)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(实线，正方形)、Ab235C(实线，空心三角形)、Ab236C(短划线，实心圆)、Ab237C(实线，实心菱形)、Ab239C(实线，空心菱形)或克唑替尼(Crizotinib)(短划线，正方形)(50mg/kg)处理，在U87MG皮下肿瘤模型中肿瘤植入后不同天数时的肿瘤体积。图7B显示了通过对照(“媒介物”，圆形并用箭头表示)、30mg/kg的对照嵌合IgG1抗KLH抗体(正方形并用箭头表示)、30mg/kg的Ab237C(三角形，箭头朝上)、10mg/kg的Ab237C(三角形，尖头朝下)、3mg/kg的Ab237C(菱形)、1mg/kg的Ab237C(圆形并用箭头表示)或50mg/kg的克唑替尼(Crizotinib)(正方形并用箭头表示)处理，在U87MG皮下肿瘤模型中肿瘤植入后不同天数时的肿瘤体积。短划线代表终点。
图8A显示了用对照嵌合IgG1抗KLH抗体(“对照”，三角形，尖头朝上)或用包含人IgG1恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG1”，圆形)、包含人IgG2恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG2”，菱形)或包含人IgG4恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG4”，正方形)处理后的SNU-5细胞中MET磷酸化(相对于对照)的百分比。图8B显示了用对照嵌合IgG1抗KLH抗体(“对照”，三角形，尖头朝上)或用包含人IgG1恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG1”，圆形)、Ab237C-IgG2(菱形)或Ab237C-IgG4(正方形)处理后的SNU-5细胞中MET表达水平(相对于未处理)的百分比。图8C显示了用对照嵌合IgG1抗KLH抗体(三角形)或者用Ab237C(空心圆形)、Ab237C-IgG2(菱形)或Ab237C-IgG4(正方形)处理对SNU-5细胞增殖的影响。图8D显示了用Ab237C(圆形)、Ab237C-IgG2(菱形)、Ab237C-IgG4(正方形)或一价形式的Ab237(三角形)处理对EBC-1细胞增殖的影响。图8E显示了用包含人IgG2恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG2”，圆形)或包含人IgG2恒定区的人源化形式的Ab237(“hum-Ab237C-IgG2”，正方形)处理的A549细胞中MET磷酸化(相对于对照)的百分比。图8F显示了用包含人IgG2恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG2”，圆形)或包含人IgG2恒定区的人源化形式的Ab237(“hum-Ab237C-IgG2”，正方形)处理的SNU-5细胞中MET磷酸化(相对于对照)的百分比。图8G显示了用包含人IgG2恒定区的Ab237C(“Ab237C-IgG2”，圆形)或包含人IgG2恒定区的人源化形式的Ab237(“hum-Ab237C-IgG2”，正方形)处理的SNU-5细胞中细胞增殖(相对于对照)的百分比。
图9A显示了用对照嵌合IgG1抗KLH抗体(正方形)、Ab237C-IgG2(实心圆形)、Ab238C(包含IgG1框架；三角形，尖头朝上)、包含人IgG2框架的Ab238C(“Ab238C-IgG2”；三角形，尖头朝下)、Ab239C(包含IgG1框架；菱形)或包含人IgG2框架的Ab239C(“Ab239C-IgG2”；空心圆形)处理的SNU-5细胞中MET磷酸化(相对于对照)的百分比。图9B显示了用对照嵌合IgG1抗KLH抗体(菱形)、Ab237C-IgG2(菱形)、Ab238C(圆形)、Ab238C-IgG2(三角形，尖头朝上)、Ab239C(菱形)或Ab239C-IgG2(空心圆形)处理的SNU-5细胞中MET表达水平(相对于未处理)的百分比。图9C显示了用Ab235C(包含IgG1框架；圆形)、包含人IgG2框架的Ab235C(“Ab235C-IgG2”；正方形)、Ab236C(包含IgG1框架；菱形)或包含人IgG2框架的Ab236C(“Ab236C-IgG2”；三角形)处理的SNU-5细胞中MET磷酸化(相对于对照)的百分比。图9D显示了用Ab236C(包含IgG1框架；圆形)、包含人IgG2框架的Ab236C(“Ab236C-IgG2”；正方形)、Ab235C(包含IgG1框架；菱形)或包含人IgG2框架的Ab235C(“Ab235C-IgG2”；三角形)处理的SNU-5细胞中相对MET表达水平的百分比。
图10A显示了在U87异种移植小鼠模型中在肿瘤植入后的指定天数，用PBS(实心圆形)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(实心正方形)、Ab237C(空心正方形)、Ab237C-IgG2(空心圆形)、Ab237C-IgG4(三角形，尖头朝上)或一价抗-MET抗体(三角形，尖头朝下)处理对肿瘤体积的影响。图10A显示了在SNU-5异种移植小鼠模型中在肿瘤植入后的指定天数，用PBS(实心圆形)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(实心正方形)、Ab237C(空心正方形)、Ab237C-IgG2(空心圆形)、Ab237C-IgG4(三角形，尖头朝上)或一价抗-MET抗体(三角形，尖头朝下)处理对肿瘤体积的影响。
图11A显示了在SNU5异种移植小鼠模型中，在肿瘤植入后的指定天数以指定抗体剂量，用PBS(实心圆形)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(实心正方形)、Ab316(三角形，尖头朝上)、Ab317(三角形，尖头朝下)、Ab318(菱形)或Ab237C-IgG2(灰色圆形，并用箭头表示)处理对肿瘤体积的影响。图11B显示了在SNU5异种移植小鼠模型中，在肿瘤植入后的指定天数以指定抗体剂量，用PBS(实心圆形)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(正方形)或hum-Ab237C-IgG2(三角形)处理对肿瘤体积的影响。图11C显示了在U87异种移植小鼠模型中，在肿瘤植入后的指定天数以指定抗体剂量，用PBS(灰色圆形)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(正方形)、Ab316(三角形，尖头朝上)、Ab317(三角形，尖头朝下)、Ab318(菱形)或Ab237C-IgG2(圆形，并用箭头表示)处理对肿瘤体积的影响。图11D显示了在U87异种移植小鼠模型中，在肿瘤植入后的指定天数以指定抗体剂量，用PBS(灰色圆形)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(正方形)、Ab316(三角形，尖头朝上)、Ab317(三角形，尖头朝下)、Ab318(菱形)或hum-Ab237C-IgG2(圆形，并用箭头表示)处理对肿瘤体积的影响。
图12A显示抗-MET抗体表明对MET脱落无影响。用PMA、HGF或抗-MET抗体处理A549细胞24小时。在培育结束时，收集细胞培养基并使用抗MET-ECD的捕获和检测抗体通过ELISA测量sMET-ECD水平。图12B显示抗-MET抗体引起MET泛素化。用1nM HGF或者1nM抗-MET抗体处理A549细胞15分钟。用抗泛素抗体缀合的琼脂糖(Santa Cruz)免疫沉淀并用抗-MET抗体(Cell Signaling Technology)免疫印迹细胞裂解液。用抗-MET抗体免疫印迹来自相同样品的总细胞裂解液以显示总MET蛋白水平。
图13A显示在具有外显子14缺失突变的细胞中抗-MET抗体引起MET降解。将具有MET外显子14突变的H596细胞与1nM HGF或者1nM抗体培育24小时。通过ELISA检测MET蛋白水平。图13B显示抗-MET抗体抑制具有外显子14缺失突变的细胞的增殖。使H596细胞血清饥饿并在存在HGF的情况下用指定抗体处理5天，然后通过CellTiter-Glo测量细胞增殖。
图14显示克唑替尼(Crizotinib)部分抑制抗-MET抗体引起的MET降解。将A549细胞与1μM克唑替尼(Crizotinib)预培育1小时或不预培育。然后，用1nM HGF或者1nM抗体处理细胞24小时，随后通过ELISA定量MET蛋白水平。
5.发明详述
在一个方面，本文提供了抗体(例如，单克隆抗体)及其抗原结合片段，其特异性结合至MET多肽(例如，人MET的ECD)并且调节MET活性(例如，MET信号)和/或MET表达。本文所提供的抗体显示在MET已涉及肿瘤生长的临床前模型中有效抑制肿瘤生长。在某些方面，本文提供了调节配体-依赖性MET活性的抗体。在某些方面，本文提供了调节MET-增强(例如，不依赖于配体)的MET活性的抗体。在具体的实施方式中，与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，特异性结合至人MET的ECD(例如，人MET-ECD的Sema/PSI域，例如，Sema域或其一个或多个氨基酸残基，如氨基酸残基Q328、R331、S336、L337和N338中的一个或多个)的这些抗体更好地抑制MET活性(例如，抑制MET磷酸化，引起MET降解和/或抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长)。还提供了编码这些抗体的分离的核酸(多核苷酸)，如互补DNA(cDNA)及其抗原结合片段。还提供了包含编码这些抗体或其抗原结合片段的核酸(多核苷酸)的载体(例如，表达载体)和细胞(例如，宿主细胞)。还提供了制备这些抗体和细胞，例如，宿主细胞的方法。在其他方面，本文提供了用于调节MET表达或MET活性(例如，抑制MET表达或MET活性)或者治疗或控制本文所述的某些病况或病症，如治疗或控制癌症的方法和使用。还提供了相关组合物(例如，药物组合物)、试剂盒和诊断方法。
如本文所使用的，术语“c-Met”或“MET”或“MET受体”或“MET多肽”表示MET受体酪氨酸激酶蛋白，如Park等人,1987,Proc.Natl.Sci.,84:6379-6383和Trusolino等人,2010,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,11:834-848中所述。GenBankTM登录号nM_001127500.1和nM_000245.2提供了示例性人MET核酸序列。GenBankTM登录号NP_001120972.1和NP_000236.2提供了示例性人MET氨基酸序列。天然MET包含胞外域，其包含α链和β链，和胞内域，其包含β链的一部分。胞外MET域包含Sema域、PSI域和四个IPT域(参见，例如，Trusolino等人,2010,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,11:834-848)。图1提供了人MET的ECD的示例性氨基酸序列。
5.1抗体
在具体的方面，本文提供了特异性结合至人MET的胞外域(ECD)(例如，人MET的Sema/PSI域，例如，Sema域)并且调节MET表达和/或MET活性的抗体(例如，单克隆抗体，如嵌合或人源化，例如，复合人抗体)。在某些方面，本文提供了结合至人MET的Sema/PSI域的抗体。在某些方面，本文提供了结合至人MET的Sema域的抗体。在某些方面，本文提供了结合至人MET的一个或多个氨基酸残基Q328、R331、S336、L337和N338的抗体。在某些方面，所述抗体调节配体-依赖性MET活性。在某些方面，所述抗体调节MET-增强(例如，独立于配体)的MET活性。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段抑制细胞中MET活性(例如，配体-依赖性MET活性和/或MET-增强(例如，独立于配体)的MET活性)，例如，如通过MET磷酸化的抑制、细胞增殖和/或细胞分散所确定的。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段抑制结合至MET受体的MET配体(例如，肝细胞生长因子(HGF))。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段引起MET受体降解。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段引起MET受体的HGF-引起的受体降解，所述MET受体在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段阻断结合至MET受体的MET配体(例如，肝细胞生长因子(HGF))并引起MET受体降解。在某些实施方式中，与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段更好地抑制结合至MET受体的MET配体(例如，肝细胞生长因子(HGF))和引起MET受体降解。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。在某些实施方式中，与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段更好地抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。在具体的方面，在具有不依赖于配体的MET活性的细胞(例如，EBC-1细胞和SNU-5细胞)中，例如，在具有MET增强或MET突变体，例如，组成型活性的MET突变体的细胞中，与作为IgG1同种型(例如，人IgG1同种型)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2同种型)时，本文所提供的特异性结合至人MET的ECD(例如，人MET-ECD的Sema/PSI域，例如，Sema域)的抗体更好地抑制MET活性(例如，抑制MET磷酸化，引起MET降解或抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长)。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段特异性结合至人MET和猴MET，但不结合至小鼠MET或狗MET。在某些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET和猴MET的Sema域，但不结合至小鼠MET或狗MET的SEMA域。在某些实施方式中，本文提供了结合至人MET的一个或多个氨基酸残基Q328、R331、S336、L337和N338的抗体。在某些实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段可以包含非天然存在于动物或哺乳动物(例如，人)体内的抗体种系库内的序列。
如本文所使用的并且除非另作说明，否则术语“约”或“大约”表示在给定值或范围的正或负10％内。在其中需要整数的情况下，该术语表示给定值或范围的正或负10％内，并向上或向下圆整至最近的整数。
如本文所用的，术语“抗体”和“免疫球蛋白”和“Ig”是技术术语并且在本文中可互换使用，并且是指具有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。
抗体可以包含(例如)重组产生的单克隆抗体、单特异性抗体、多重特异性抗体(包括双重特异性抗体)、人抗体、人源化抗体，如复合人抗体或去免疫化抗体、鼠科抗体(例如，小鼠或大鼠抗体)、嵌合抗体、合成抗体和包含两个重链和两个轻链分子的四聚体抗体。在具体的实施方式中，抗体可以包括(但不限于)抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-抗体重链对、胞内抗体、异缀合抗体、单域抗体和一价抗体。在具体的实施方式中，抗体可以包括抗原结合片段或表位结合片段，如(但不限于)单链抗体或单链Fv(scFv)(例如，包括单特异性、双重特异性等)、骆驼化抗体、亲和体(affybody)、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段和二硫键-连接的Fv(sdFv)。在某些实施方式中，本文所述的抗体表示多克隆抗体群体。
抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何种类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a或IgG2b)的免疫球蛋白分子。在某些实施方式中，本文所述的抗体是IgG抗体或其同类(例如，人IgG1、IgG2或IgG4)或亚类。在某些实施方式中，本文所述的抗体是IgG2抗体(例如，人IgG2)或其亚类(例如，人IgG2a或人IgG2b或其混合物)。在某些实施方式中，本文所述的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239和Ab241-Ab255)是IgG1抗体(例如，人IgG1)或其亚类。在某些实施方式中，本文所述的IgG1抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)在恒定区中包含一个或多个氨基酸取代和/或缺失，从而所述抗体起更类似于IgG2(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)的功能。
如本文所使用的，“抗原”是含有抗体可以特异地结合的表位的部分或分子。照此，抗体还特异地结合抗原。在具体的实施方式中，本文所述的抗体结合的抗原是人MET或其片段，例如，人MET的胞外域。在另一种具体的实施方式中，本文所述的抗体结合的抗原是人MET的Sema/PSI域。人MET的Sema/PSI域是指包含SEMA和PSI域的多肽。示例性Sema/PSI域对应于图1A中提供的人MET序列的氨基酸25至562。
如本文所用的，“表位”是技术术语并且是指抗体可以特异性结合的抗原的局部化区域。表位可以是直链表位或者具有构象、非直链或不连续的表位。就多肽抗原而言，例如，表位可以是多肽的邻接氨基酸(“直链”表位)或者表位可以包含来自所述多肽的两个或更多个非邻接区的氨基酸(“具有构象”、“非直链”或“不连续”的表位)。本领域技术人员将理解一般地，直链表位可以或可以不依赖于二级、三级或四级结构。例如，在一些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体结合至一组氨基酸，而不考虑它们是否在天然立体蛋白质结构中折叠。在其他实施方式中，本文所述的抗-MET抗体不识别构成表位的单个氨基酸残基，并且需要具体的构象(例如，弯曲、扭转、转角或折叠)以识别和结合表位。
如本文所用的，术语“免疫特异性结合”、“免疫特异性识别”、“特异性结合”和“特异性识别”在抗体的背景下是类似术语并且是指与抗原/表位结合的分子，因为这种结合是本领域技术人员所理解的。例如，特异性结合至抗原的分子可以结合至其他肽或多肽，但通常具有较低的亲和力，如通过(例如)免疫测定、表面等离子共振测定，例如，BiacoreTM,KinExA平台(Sapidyne Instruments,Boise,ID)或其他本领域中已知的测定所确定的。在具体的实施方式中，特异性结合至抗原的分子以Ka至少为21og、2.51og、31og、41og或大于所述分子与另一抗原结合的Ka与所述抗原结合。在另一种具体的实施方式中，特异性结合至抗原的分子不与其他蛋白质交叉反应。在另一种具体的实施方式中，特异性结合至抗原的分子不与其他非MET蛋白质交叉反应。
如本文所用的，术语“单克隆抗体”是熟知的技术术语，它是指得自均一或基本均一抗体的群体的抗体。术语“单克隆”不限于用于制备抗体的任何具体方法。通常，单克隆抗体的群体可以通过细胞、细胞群体或细胞系产生。在具体的实施方式中，如本文所使用的“单克隆抗体”是通过单一细胞或细胞系产生的抗体，其中所述抗体免疫特异性结合至MET表位(例如，人MET的胞外域的表位)，如(例如)通过ELISA或者本领域中或本文提供的实施例中已知的其他抗原-结合测定或竞争性结合测定所确定的。在具体的实施方式中，单克隆抗体可以是嵌合抗体或人源化抗体。在具体的实施方式中，单克隆抗体可以是复合人抗体。在具体的实施方式中，单克隆抗体可以是去免疫化抗体。在某些实施方式中，单克隆抗体是一价抗体或多价(例如，二价)抗体。在具体的实施方式中，单克隆抗体是单特异性或多重特异性抗体(例如，双重特异性抗体)。
如本文所用的，术语“多克隆抗体”是指包括免疫特异性结合至抗原内相同和/或不同表位的多种不同抗体的抗体群体。
如本文所使用的，术语“可变区”或“可变域”是指抗体的一部分，一般为抗体轻链或重链的一部分，典型地在成熟重链中约氨基末端的110至120个氨基酸和在成熟轻链中约氨基末端的90至100个氨基酸。可变区包含框架区(FR)侧接的互补决定区(CDR)。通常，CDR和FR的空间取向如下所示，在N末端至C末端方向：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。不希望受任何具体机制或理论的束缚，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用以及抗体对表位的特异性。在具体的实施方式中，本文所述的抗体的氨基酸位置的编号是根据EU索引，如Kabat等人.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242中所示。在某些实施方式中，所述可变区是人可变区。在某些实施方式中，所述可变区包括鼠科(例如，小鼠或大鼠)CDR和人框架区(FR)。在具体的实施方式中，所述可变区是灵长类(例如，人或非人灵长类)可变区。在某些实施方式中，所述可变区包括鼠科(例如，小鼠或大鼠)CDR和灵长类(例如，人或非人灵长类)框架区(FR)。作为非限制性实例，本文所述的可变区得自将人序列的两个或更多个片段组装成复合人序列。
在某些方面，可以根据以下方法确定抗体的CDR：(i)Kabat编号系统(Kabat等人.(1971)Ann.NY Acad.Sci.190:382-391和Kabat等人.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIHPublication No.91-3242)；或者(ii)Chothia编号方案，其在本文中将被称为“ChothiaCDR”(参见，例如，Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196:901-917；Al-Lazikani等人,1997,J.Mol.Biol.,273:927-948；Chothia等人,1992,J.Mol.Biol.,227:799-817；Tramontano A等人,1990,J.Mol.Biol.215(1):175-82；和美国专利No.7,709,226)；或(iii)ImMunoGeneTics(IMGT)编号系统，例如，如Lefranc,M.-P.,1999,The Immunologist,7:132-136和Lefranc,M.-P.等人,1999,Nucleic Acids Res.,27:209-212中所述(“IMGTCDR”)；或(iv)MacCallum等人,1996,J.Mol.Biol.,262:732-745。还参见，例如，Martin,A.,“Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains,”inAntibody Engineering,Kontermann和Dübel(主编)，第31章，pp.422-439,Springer-Verlag,Berlin(2001)。
就Kabat编号系统而言，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置31至35，其可以任选地包含一个或两个其他氨基酸，然后是35(在Kabat编号方案中称为35A和35B)(CDR1)、氨基酸位置50至65(CDR2)和氨基酸位置95至102(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置24至34(CDR1)、氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。如本领域技术人员所熟知的，使用Kabat编号系统，由于FR和/或CDR的缩短或增长，抗体可变域的真实线性氨基酸序列可以含有较少或其他氨基酸，照此，氨基酸的Kabat编号不必需与其线性氨基酸编号相同。
本文所提供的抗体可以是任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、任何种类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a或IgG2b或其混合物)的免疫球蛋白分子。在某些实施方式中，本文所述的抗体是IgG抗体(例如，人IgG)或其同类(例如，人IgG1或IgG4)或亚类。在具体的实施方式中，本文所提供的抗体包含IgG2恒定区，例如，人IgG2恒定区，例如，IgG2a或IgG2b抗体。不受任何理论的束缚，IgG2a和IgG2b(例如，分别为人IgG2a和人IgG2b)包含相同氨基酸序列，但在二硫键构象中不同。参见，例如，Dillon,2008,JBC,283(23):16206-15。因此，在某些实施方式中，本文所提供的抗体包含IgG2a和IgG2b(例如，分别为人IgG2a和人IgG2b)恒定区的混合物。
在具体的实施方式中，本文所提供的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含本文所述的抗体Ab235-Ab255中的任一个的VL区的CDR和VH区的CDR并且特异地结合MET。例如，本文提供了抗体及其抗原结合片段，其特异地结合MET并且包含下表9中的VL域的CDR和下表10中的VH域的CDR。在具体的实施方式中，本文所提供的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含本文所述的抗体Ab235-Ab255中的任一个的VL区和VH区。例如，本文提供了抗体及其抗原结合片段，其特异地结合MET并且包含下表9中的VL域和下表10中的VH域。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含如本文所述的VL域，其中所述VL域不包含信号序列。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含如本文所述的VH域，其中所述VH域不包含信号序列。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含VL域和VH域，其中所述VL域不包含信号序列，并且其中所述VH域不包含信号序列。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含VL域，其中所述VL域包含信号序列。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含VH域，所述VH域中所述VH域包含信号序列。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含VL域和VH域，其中所述VL域包含信号序列，并且其中所述VH域包含信号序列。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQID NO：57的VL区和含有SEQ ID NO：66的VH区(例如，抗体Ab235)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：58的VL区和含有SEQ ID NO：67的VH区(例如，抗体Ab236)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：59的VL区和含有SEQ ID NO：68的VH区(例如，抗体Ab237)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：60的VL区和含有SEQ ID NO：69的VH区(例如，抗体Ab238)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：61的VL区和含有SEQ ID NO：70的VH区(例如，抗体Ab239)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：62的VL区和含有SEQ ID NO：71的VH区(例如，抗体Ab240)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：52的VL区和含有SEQID NO：63的VH区(例如，抗体Ab241)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：53的VL区和含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab242)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：54的VL区和含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab243)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：55的VL区和含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab244)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：56的VL区和含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab246)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：52的VL区和含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab246)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：53的VL区和含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab247)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：54的VL区和含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab248)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：55的VL区和含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab249)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：56的VL区和含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab250)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：52的VL区和含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab251)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：53的VL区和含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab252)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：54的VL区和含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab253)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：55的VL区和含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab254)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：56的VL区和含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab255)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQID NO：57的VL区(例如，抗体Ab235的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：58的VL区(例如，抗体Ab236的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：59的VL区(例如，抗体Ab237的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：60的VL区(例如，抗体Ab238的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：61的VL区(例如，抗体Ab239的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：62的VL区(例如，抗体Ab240的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：52的VL区(例如，抗体Ab241的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：53的VL区(例如，抗体Ab242的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：54的VL区(例如，抗体Ab243的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：55的VL区(例如，抗体Ab244的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：56的VL区(例如，抗体Ab245的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：52的VL区(例如，抗体Ab246的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：53的VL区(例如，抗体Ab247的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：54的VL区(例如，抗体Ab248的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：55的VL区(例如，抗体Ab249的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：56的VL区(例如，抗体Ab250的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：52的VL区(例如，抗体Ab251的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：53的VL区(例如，抗体Ab252的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：54的VL区(例如，抗体Ab253的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：55的VL区(例如，抗体Ab254的VL区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：56的VL区(例如，抗体Ab255的VL区)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQID NO：66的VH区(例如，抗体Ab235的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：67的VH区(例如，抗体Ab236的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：68的VH区(例如，抗体Ab237的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：69的VH区(例如，抗体Ab238的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：70的VH区(例如，抗体Ab239的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：71的VH区(例如，抗体Ab240的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab241的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab242的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab243的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab244的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：63的VH区(例如，抗体Ab245的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab246的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab247的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ IDNO：64的VH区(例如，抗体Ab248的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab249的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：64的VH区(例如，抗体Ab250的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab251的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab252的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab253的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab254的VH区)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含含有SEQ ID NO：65的VH区(例如，抗体Ab255的VH区)。
在某些实施方式中，本文提供了抗-MET抗体或其抗原-结合片段，其特异性结合至人MET的ECD并且包含含有如表9中所示的氨基酸序列的VL的VL CDR(例如，Kabat CDR、Chothia CDR或IMGT CDR)和含有如表10中所示的氨基酸序列的VH的VH CDR(例如，KabatCDR、Chothia CDR或IMGT CDR)。
在某些实施方式中，本文提供了抗体或其抗原-结合片段，其特异性结合至人MET的ECD并且包含，例如，如表1和2中所示的本文所提供的抗-MET抗体中任一个的VL和VHCDR。
表1.VL CDR氨基酸序列(Kabat)
表2.VH CDR氨基酸序列(Kabat)
表3.VL FR氨基酸序列(Kabat)
表4.VH FR氨基酸序列(Kabat)
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含轻链可变区(VL)，其包含：
(a)VL CDR1，其包含SASSSVX7YMF的氨基酸序列(SEQ ID NO：41)，其中X7是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S；
(b)VL CDR2，其包含DTX13X14LAS的氨基酸序列(SEQ ID NO：43)，其中X13是任意氨基酸，例如，F或S，并且X14是任意氨基酸，例如，N或D；和
(c)VL CDR3，其包含QQWSX15YPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：44)，其中X15是任意氨基酸，例如，I或N。在某些实施方式中，X7和X13-X15中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X7是N或S的保守取代，X13是F或S的保守取代，X14是N或D的保守取代，并且X15是I或N的保守取代。
如本文所使用的，“保守氨基酸取代"是其中氨基酸残基被具有带相似电荷的侧链的氨基酸残基替代的一种取代。已经在本领域中定义了具有带相似电荷的侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有带电侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、门冬氨酸、谷氨酸)、酸性侧链(例如，门冬氨酸、谷氨酸)、碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，门冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天门冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)、β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含轻链可变区(VL)，其包含：
(a)VL CDR1，其包含SEQ ID NO：13或72的氨基酸序列；
(b)VL CDR2，其包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列；和
(c)VL CDR3，其包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：1、2和3)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：7、8和9)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：13、14和15)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：19、20和21)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：25、26和27)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab240的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab240的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：30、31和32)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab241-Ab255中任一个的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1中所示的Ab241的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3(分别为SEQ ID NO：72、14和15)。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含重链可变区(VH)，其包含：
(a)VH CDR1，其包含X1YWIEW的氨基酸序列(SEQ ID NO：36)，其中X1是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S；
(b)VH CDR2，其包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK的氨基酸序列(SEQ ID NO：38)，其中X3是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，并且X4是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S；和
(c)VH CDR3，其包含PSTX6PPDC的氨基酸序列(SEQ ID NO：40)，其中X6是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或V。在某些实施方式中，X1、X3、X4和X6中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X1是N或S的保守取代，X3是Y或F的保守取代，X4是N或S的保守取代，并且X6是I或V的保守取代。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含重链可变区(VH)，其包含：
(a)VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或C；
(b)VH CDR2，其包含SISSDGGGTYYRDSVKG(SEQ ID NO：17)的氨基酸序列；和
(c)VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或
EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F。在某些实施方式中，X2和X16至X25中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X2是S或C的保守取代，X16是G或R的保守取代，X17是I或Y的保守取代，X18是D或T的保守取代，X19是T或G的保守取代，X20是D或T的保守取代，X21是P或G的保守取代，X22是C或W的保守取代，X23是Y的保守取代或不存在，X24是N或D的保守取代，并且X25是Y或F的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：265、5和6)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，分别如SEQ ID NO：4、5和6中所示的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：266、11和12)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，分别如SEQ ID NO：10、11和12中所示的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：16、17和18)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：267、23和24)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，分别如SEQ ID NO：22、23和24中所示的VH CDR1、VHCDR2和VH CDR3。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：28、73和29)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab240的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab240的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：33、34和35)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab241-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2中所示的Ab241的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3(分别为SEQ ID NO：16、73和18)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2所示的Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQ ID NO：265、5和6)；和(ii)Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：1、2和3)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)分别如SEQ ID NO：4、5和6中所示的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3；和(ii)Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：1、2和3)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2所示的Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQ ID NO：266，11和12)；和(ii)Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：7、8和9)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)分别如SEQ ID NO：10、11和12中所示的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；和(ii)Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：7、8和9)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2所示的Ab237的VHCDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQ ID NO：16，17和18)；和(ii)Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：13、14和15)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2所示的Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3(分别为SEQ ID NO：267，23和24)；和(ii)Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：19、20和21)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)分别如SEQ ID NO：22、23和24中所示的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；和(ii)Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab238的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：19、20和21)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2所示的Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQ ID NO：28，29和30)；和(ii)Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab239的VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：25、26和27)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab240的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表2所示的ab240的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQ ID NO：33，34和35)；和(ii)Ab240的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab240的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：30、31和32)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含(i)Ab241-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3，例如，如表2所示的Ab241-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQ ID NO：16，73和18)；和(ii)Ab241-Ab255中任一个的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表1所示的Ab241-Ab255中任一个的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQ ID NO：72，14和15)。
在某些实施方式中，本文所述的包含Kabat VL和VH CDRS(例如，分别如表1和2所述的抗体Ab235-Ab255中任一个的Kabat VL CDR 1、2和3以及Kabat VH CDR 1、2和3)的抗体或其抗原-结合片段还在可变区(例如，表9和10中的可变区)中以从N-末端至C-末端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的形式围绕CDR包含框架区。
在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR，如通过IMGT(免疫遗传学)编号系统所确定的；参见，例如，Lefranc,M.-P.,1999,The Immunologist,7:132-136和Lefranc,M.-P.等人,1999,Nucleic AcidsRes.,27:209-212)，以上两篇文献以其全部内容作为参考并入本文。使用IMGT编号系统，抗体重链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置26至35(CDR1)、氨基酸位置51至57(CDR2)和氨基酸位置93至102(CDR3)。使用IMGT编号系统，抗体轻链分子内的CDR通常存在于氨基酸位置27至32(CDR1)、氨基酸位置50至52(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。
在某些实施方式中，本文提供了抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至人MET的ECD并且包含Ab235-Ab255中任一个的VL和VH CDR，例如，如表5和6中所述。
表5.VL CDR氨基酸序列(IMGT)
表6.VH CDR氨基酸序列(IMGT)
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含轻链可变区(VL)，其包含：
(a)包含SSVX113Y的VL CDR1，其中X113是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S；
(b)包含DTX114的VL CDR2，其中X114是任意氨基酸，例如，F或S；和
(c)包含QQWSX115YPYT的VL CDR3，其中X115是任意氨基酸，例如，I或N。在某些实施方式中，X113至X115中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X113是N或S的保守取代，X114是F或S的保守取代，并且X115是F或S的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表5中所示的Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：163、164和165)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表5中所示的Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：169、170和171)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表5中所示的Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：175、176和177)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表5中所示的Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：178、179和180)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表5中所示的Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：184、185和186)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab241-Ab255中任一个的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表5中所示的Ab241的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3(分别为SEQ ID NO：175、176和177)。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含重链可变区(VH)，其包含：
(a)包含GYX116FSX117YW的VH CDR1(SEQ ID NO：259)，其中X116是任意氨基酸，例如，具有β-支链侧链的氨基酸，例如，T或I，并且X117是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S；
(b)包含ILPGSDX118X119的VH CDR2(SEQ ID NO：260)，其中X118是任意氨基酸，例如，具有芳香族侧链的氨基酸，例如，Y或F，并且X119是任意氨基酸，例如，具有β-支链侧链的氨基酸，例如，I或T；和
(c)包含ARPSTX120PPDC的VH CDR3(SEQ ID NO：261)，其中X120是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或V。在某些实施方式中，X116至X120中的任一个是任意氨基酸。在具体的实施方式中，X116是T或I的保守取代，X117是N或S的保守取代，X118是Y或F的保守取代，X119是I或T的保守取代，并且X120是I或V的保守取代。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含重链可变区(VH)，其包含：
(a)包含GFX121FX122DX123YX124的VH CDR1，其中X121是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或T，X122是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X123是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，C或S，并且X124是任意氨基酸，例如，I或不存在；
(b)包含SEQ ID NO：173的VH CDR2；和
(c)包含TTEX125X126YX127X128X129YYX130YX131X132X133X134X135的VH CDR3，其中X125是任意氨基酸，例如，R或G，X126是任意氨基酸，例如，I或Y，X127是任意氨基酸，例如，T或D，X128是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，G或T，X129是任意氨基酸，例如，T或D，X130是任意氨基酸，例如，T或D，X131是任意氨基酸，例如，P或G，X132是任意氨基酸，例如，C或不存在，X133是任意氨基酸，例如，F或不存在，X134是任意氨基酸，例如，N或不存在，并且X135是任意氨基酸，例如，Y或不存在。在某些实施方式中，X121至X135中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X121是S或T的保守取代，X122是S或T的保守取代，X123是C或S的保守取代，X124是I的保守取代或不存在，X125是R或G的保守取代，X126是I或Y的保守取代，X127是T或D的保守取代，X128是G或T的保守取代，X129是T或D的保守取代，X130是T或D的保守取代，X131是P或G的保守取代，X132是C的保守取代或不存在，X133是F的保守取代或不存在，X134是N的保守取代或不存在，并且X135是Y的保守取代或不存在。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表6中所示的Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：160、161和162)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表6中所示的Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：166、167和168)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表6中所示的Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：172、173和174)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表6中所示的Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：178、179和180)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表6中所示的Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：184、185和186)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab241-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表6中所示的Ab241的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3(分别为SEQ ID NO：172、173和174)。
在某些实施方式中，本文所述的包含IMGT VL和VH CDRS(例如，分别如表5和6所述的抗体Ab235-Ab255中任一个的IMGT VL CDR 1、2和3以及IMGT VH CDR 1、2和3)的抗体或其抗原-结合片段还在可变区(例如，表9和10中的可变区)中以从N-末端至C-末端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的形式围绕CDR包含框架区。
在某些方面，本文所述的抗体的CDR是Chothia CDR(参见，例如，Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196:901-917；和美国专利No.7,709,226)。术语“Chothia CDR”以及类似术语在本领域中是承认的，并且表示如根据Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196:901-917所述的方法所确定的抗体CDR序列，其在本文中将被称为“Chothia CDR”(还参见，例如，美国专利No.7,709,226和Martin、A.,“Protein Sequence and Structure Analysisof Antibody Variable Domains,”in Antibody Engineering,Kontermann和Dübel(主编)，第31章，第422-439页,Springer-Verlag,Berlin(2001))。使用对VH区和VL区中氨基酸残基编号的Kabat编号系统，抗体重链分子内的Chothia CDR通常存在于氨基酸位置26至32(CDR1)，氨基酸位置53至55(CDR2)和氨基酸位置96至101(CDR3)。使用对VH区和VL区中氨基酸残基编号的Kabat编号系统，抗体轻链分子内的Chothia CDR通常存在于氨基酸位置26至33(CDR1)，氨基酸位置50至52(CDR2)和氨基酸位置91至96(CDR3)。在具体的实施方式中，使用对VH链区和VL链区中氨基酸残基编号的Kabat编号系统，抗体重链分子内的Chothia CDR位于氨基酸位置26至32或34(CDR1)，氨基酸位置52至56(CDR2；在一种实施方式中，CDR2位于位置52A-56，其中52A在位置52之后)，和氨基酸位置95至102(CDR3；在一种实施方式中，在编号为96-100的位置无氨基酸)；和抗体轻链分子内的Chothia CDR位于氨基酸位置24至34(CDR1)，氨基酸位置50至56(CDR2)和氨基酸位置89至97(CDR3)。根据抗体，这些ChothiaCDR位置可以是不同的，并且可以根据本领域中已知的方法确定。
在某些方面，本文还描述了免疫特异性结合至MET多肽的抗体，所述MET多肽包含抗体Ab235-Ab255中任一个的VL的一个或多个Chothia VL CDR(参见，表7)和/或抗体Ab235-Ab255中任一个的VH的一个或多个Chothia VH CDR(参见，表8)。在某些实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽的本文所述的抗体包含一个或多个CDR，其中所述Chothia和Kabat CDR具有相同的氨基酸序列。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET多肽并且包含Kabat CDR和Chothia CDR的组合的抗体。
表7.VL CDR氨基酸序列(Chothia)
表8.VH CDR氨基酸序列(Chothia)
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含轻链可变区(VL)，其包含：
(a)VL CDR1，其包含SASSSVX90YMF(SEQ ID NO：248)，其中X90是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N；
(b)VL CDR2，其包含DX91X92X93LAS(SEQ ID NO：249)，其中X91是任意氨基酸，例如，Y或D，X92是任意氨基酸，例如，F或S，并且X93是任意氨基酸，例如，N或D；和
(c)VL CDR3，其包含QQWSX94X95PYT(SEQ ID NO：250)，其中X94是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，Y或N，并且X95是任意氨基酸，例如，Y或不存在。在某些实施方式中，X90至X95中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X90是S或N的保守取代，X91是Y或D的保守取代，X92是F或S的保守取代，X93是N或D的保守取代，X94是Y或N的保守取代，并且X95是Y的保守取代或不存在。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表7中所示的Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：133、134和135)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表7中所示的Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：139、140和141)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表7中所示的Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：145、146和147)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表7中所示的Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：151、152和153)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表7中所示的Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(分别为SEQID NO：157、158和159)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab241-Ab255中任一个的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，例如，如表7中所示的Ab241的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3(分别为SEQ ID NO：145、146和264)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含分别如SEQ ID NO：145、146和147中所示的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3。在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含分别如SEQ ID NO：145和146中所示的VL CDR1和VL CDR2，和如SEQ ID NO：147或264中所示的VL CDR3。在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含分别如SEQ ID NO：145和146中所示的VL CDR1和VL CDR2，和如PPTFGX136GT(SEQ ID NO：272)中所示的VL CDR3，其中X136是任意氨基酸，例如，A或Q。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含重链可变区(VH)，其包含：
(a)VH CDR1，其包含GYX96FSX97Y(SEQ ID NO：251)，其中X96是任意氨基酸，例如，具有β-支链侧链的氨基酸，例如，I或T，并且X97是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N；
(b)VH CDR2，其包含LPGSDX98(SEQ ID NO：252)，其中X98是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F；和
(c)VH CDR3，其包含PSTX99PPDC，其中X99是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或V。在某些实施方式中，X96至X99中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X96是I或T的保守取代，X97是S或N的保守取代，X98是Y或F的保守取代，并且X99是I或V的保守取代。
在具体的实施方式中，特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含重链可变区(VH)，其包含：
(a)VH CDR1，其包含GFX100FX101DX102(SEQ ID NO：254)，其中X100是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X101是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或T，并且X102是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或C；
(b)VH CDR2，其包含SEQ ID NO：143；和
(c)VH CDR3，其包含
EX103X104YX105X106X107YYX108YX109X110FX111X112(SEQ ID NO：255)，其中X103是任意氨基酸，例如，G或R，X104是任意氨基酸，例如，I或Y，X105是任意氨基酸，例如，T或D，X106是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或G，X107是任意氨基酸，例如，D或T，X108是任意氨基酸，例如，P或G，X109是任意氨基酸，例如，C或W，X110是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X111是任意氨基酸，例如，N或D，并且X112是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F。在某些实施方式中，X100至X112中的任一个是任意氨基酸。在具体的实施方式中，X100是T或S的保守取代，X101是S或T的保守取代，X102是S或C的保守取代，X103是G或R的保守取代，X104是I或Y的保守取代，X105是T或D的保守取代，X106是T或G的保守取代，X107是T或D的保守取代，X108是P或G的保守取代，X109是C或W的保守取代，X110是Y的保守取代或不存在，X111是N或D的保守取代，并且X112是Y和F的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表8中所示的Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：130、131和132)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表8中所示的Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：136、137和138)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表8中所示的Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：142、143和144)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表8中所示的Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：148、149和150)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表8中所示的Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(分别为SEQID NO：154、155和156)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含Ab241-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，例如，如表8中所示的Ab241的VH CDR1、VH CDR2和VHCDR3(分别为SEQ ID NO：142、143和144)。
在某些实施方式中，本文所述的包含Chothia VL和VH CDRS(例如，分别如表7和8所述的抗体Ab235-Ab255中任一个的Chothia VL CDR 1、2和3以及Chothia VH CDR 1、2和3)的抗体或其抗原-结合片段还在可变区(例如，表10和11中的可变区)中以从N-末端至C-末端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的形式围绕CDR包含框架区。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VL区，其包含DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，具有带电侧链，例如，酸性侧链的氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S。在某些实施方式中，X26至X42中的任一个是任意氨基酸。在具体的实施方式中，X26是S或G的保守取代，X27是V或L的保守取代，X28是D或E的保守取代，X29是R或T的保守取代，X30是T或E的保守取代，X31是K或N的保守取代，X32是A或S的保守取代，X33是K或Q的保守取代，X34是F或S的保守取代，X35是F或S的保守取代，X36是D或Q的保守取代，X37是F或Y的保守取代，X38是T或S的保守取代，X39是T或K的保守取代，X40是S或N的保守取代，X41是P或S的保守取代，并且X42是A或S的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VH区，其包含EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56(SEQ ID NO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。在某些实施方式中，X49至X56中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X49是G或R的保守取代，X50是G或T的保守取代，X51是T或S的保守取代，X52是S或N的保守取代，X53是T或S的保守取代，X54是Q或H的保守取代，X55是V或T的保守取代，并且X56是S或A的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含
(a)VL区，其包含
DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，具有带电侧链，例如，酸性侧链的氨基酸，例如，D或E，X28是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S；和
(b)VH区，其包含：
EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56(SEQ ID NO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。在某些实施方式中，X26至X42和X49至X56中的任一个是任意氨基酸。在具体的实施方式中，X26是S或G的保守取代，X27是V或L的保守取代，X28是D或E的保守取代，X29是R或T的保守取代，X30是T或E的保守取代，X31是K或N的保守取代，X32是A或S的保守取代，X33是K或Q的保守取代，X34是F或S的保守取代，X35是F或S的保守取代，X36是D或Q的保守取代，X37是F或Y的保守取代，X38是T或S的保守取代，X39是T或K的保守取代，X40是S或N的保守取代，X41是P或S的保守取代，X42是A或S的保守取代，X49是G或R的保守取代，X50是G或T的保守取代，X51是T或S的保守取代，X52是S或N的保守取代，X53是T或S的保守取代，X54是Q或H的保守取代，X55是V或T的保守取代，并且X56是S或A的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VL区，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASADIHSNLAWYQQKPGKAPX68LLIYYGNNLNDGVPSRFSGX69GX70GTDX71TLX72IX73SLQX74EDVAX75YFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：238)，其中X68是任意氨基酸，例如，K或Q，X69是任意氨基酸，例如，S或F，X70是任意氨基酸，例如，S或F，X71是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X72是任意氨基酸，例如，T或K，X73是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X74是任意氨基酸，例如，P或S，并且X75是任意氨基酸，例如，I或T。在某些实施方式中，X68至X75中的任一个是任意氨基酸。在具体的实施方式中，X43是T或A的保守取代，X68是K或Q的保守取代，X69是S或F的保守取代，X70是S或F的保守取代，X71是Y或F的保守取代，X72是T或K的保守取代，X73是S或N的保守取代，X74是P或S的保守取代，并且X75是I或T的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VH区，其包含：EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPGKGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFTISRDNAKX76SLYLQMX77SLRTEDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGQGX78MV(SEQ ID NO：239)，其中X76是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X77是任意氨基酸，例如，D或N，并且X78是任意氨基酸，例如，T或V。在某些实施方式中，X76至X78中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X76是S或N的保守取代，X77是D或N的保守取代，并且X78是T或V的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含
(a)VL区，其包含
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASADIHSNLAWYQQKPGKAPX68LLIYYGNNLNDGVPSRFSGX69GX70GTDX71TLX72IX73SLQX74EDVAX75YFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO：238)，其中X68是任意氨基酸，例如，K或Q，X69是任意氨基酸，例如，S或F，X70是任意氨基酸，例如，S或F，X71是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X72是任意氨基酸，例如，T或K，X73是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X74是任意氨基酸，例如，P或S，并且X75是任意氨基酸，例如，I或T；和
(b)VH区，其包含：
EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPGKGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFTISRDNAKX76SLYLQMX77SLRTEDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGQGX78MV(SEQ ID NO：239)，其中X76是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X77是任意氨基酸，例如，D或N，并且X78是任意氨基酸，例如，T或V。在某些实施方式中，X68至X78中的任一个是任意氨基酸。在具体的实施方式中，X43是T或A的保守取代，X68是K或Q的保守取代，X69是S或F的保守取代，X70是S或F的保守取代，X71是Y或F的保守取代，X72是T或K的保守取代，X73是S或N的保守取代，X74是P或S的保守取代，X75是I或T的保守取代，X76是S或N的保守取代，X77是D或N的保守取代，并且X78是T或V的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VL区，其包含：MGWSCIILFLVATATGVHSQIVLTQSPAIMSX136SPGEKVTMTCSASSSVX137YMFWYQQKX138GSSPRLLIYDTX13 9X140LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX141IYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：273)，其中X136是任意氨基酸，例如，T或A，X137是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X138是任意氨基酸，例如，A或P，X139是任意氨基酸，例如，F或S，X140是任意氨基酸，例如，N或D，并且X141是任意氨基酸，例如，I或N。在某些实施方式中，X136至X141中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X136是T或A的保守取代，X137是N或S的保守取代，X138是A或P的保守取代，X139是F或S的保守取代，X140是N或D的保守取代，并且X141是I或N的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VL区，其包含：QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N。在某些实施方式中，X43至X48中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X43是T或A的保守取代，X44是N或S的保守取代，X45是A或P的保守取代，X46是F或S的保守取代，X47是N或D的保守取代，并且X48是I或N的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含VH区，其包含：QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或V。在某些实施方式中，X57至X64中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X57是V或A的保守取代，X58是I或T的保守取代，X59是N或S的保守取代，X60是Y或F的保守取代，X61是T或I的保守取代，X62是N或S的保守取代，X63是S或N的保守取代，并且X64是I或V的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含
(a)VL区，其包含：
MGWSCIILFLVATATGVHSQIVLTQSPAIMSX136SPGEKVTMTCSASSSVX137YMFWYQQKX138GSSPRLLIYDTX13 9X140LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX141IYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：273)，其中X136是任意氨基酸，例如，T或A，X137是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X138是任意氨基酸，例如，A或P，X139是任意氨基酸，例如，F或S，X140是任意氨基酸，例如，N或D，并且X141是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH区，其包含：
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或V。在某些实施方式中，X43至X48和X57至X64中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X136是T或A的保守取代，X137是N或S的保守取代，X138是A或P的保守取代，X139是F或S的保守取代，X1是N或D的保守取代，X141是I或N的保守取代，X57是V或A的保守取代，X58是I或T的保守取代，X59是N或S的保守取代，X60是Y或F的保守取代，X61是T或I的保守取代，X62是N或S的保守取代，X63是S或N的保守取代，并且X64是I或V的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体包含
(a)VL区，其包含：
QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N；和
(b)VH区，其包含：
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或V。在某些实施方式中，X43至X48和X57至X64中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X43是T或A的保守取代，X44是N或S的保守取代，X45是A或P的保守取代，X46是F或S的保守取代，X47是N或D的保守取代，X48是I或N的保守取代，X57是V或A的保守取代，X58是I或T的保守取代，X59是N或S的保守取代，X60是Y或F的保守取代，X61是T或I的保守取代，X62是N或S的保守取代，X63是S或N的保守取代，并且X64是I或V的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含如表9中所述的VL。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段包含如表10中所述的VH。
表9.VL域氨基酸序列
表10.VH域氨基酸序列
在某些方面，可以通过单独的其VL区或单独的其VH区，或者通过单独的其3个VLCDR或单独的其3个VH CDR描述本文所述的抗体。参见，例如，Rader等人，1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95:8910-8915，以上文献以其全部内容作为参考并入本文，其描述了通过从人轻链或重链文库分别鉴别补体轻链或重链的小鼠抗-αvβ3抗体的人源化，其导致产生了亲合力与原始抗体的亲合力同样高或更高的人源化抗体变体。还参见，Clackson等人，1991,Nature 352:624-628，以上文献以其全部内容作为参考并入本文，其描述了通过使用特异性VL域(或VH域)并且对文库筛选互补可变域来产生结合特异性抗原的抗体的方法。筛选产生了特异性VH域的14个新的配对体和特异性VL域的13个新的配对体，它们是强结合剂，如通过ELISA所确定的。还参见，Kim&Hong,2007,J.Microbiol.45:572-577，以上文献以其全部内容作为参考并入本文，其描述了通过使用特异性VH域并且对文库(例如，人VL文库)筛选互补VL域来产生结合特异性抗原的抗体的方法；反过来，所选的VL域可以用于指导其他互补(例如，人)VH域的选择。
在具体的实施方式中，一个或多个CDR沿本文所述的抗体的VH(例如，CDR1、CDR2或CDR3)和/或VL(例如，CDR1、CDR2或CDR3)区的位置可以相差1、2、3、4、5或6个氨基酸位置，只要维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。例如，在一种实施方式中，相对于VL或VH中CDR的位置(分别参见，例如，表9或10)，限定抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的位置的差别可以在于CDR的N末端和/或C末端边界迁移1、2、3、4、5或6个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一种实施方式中，一个或多个CDR沿本文所述的抗体的VH(例如，CDR1、CDR2或CDR3)和/或VL(例如，CDR1、CDR2或CDR3)区的长度可以相差(例如，缩短或延长)1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人METECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。例如，在一种实施方式中，本文所述的VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3可以比SEQ ID NO：1-35所述的一个或多个CDR短1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一种实施方式中，本文所述的VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3可以比SEQ ID NO：1-35所述的一个或多个CDR长1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一种实施方式中，与SEQ ID NO：1-25所述的一个或多个CDR相比，本文所述的VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3的氨基末端可以延伸1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一种实施方式中，与SEQ ID NO：1-35所述的一个或多个CDR相比，本文所述的VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3的羧基末端可以延伸1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在另一种实施方式中，与SEQ ID NO：1-35所述的一个或多个CDR相比，本文所述的VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3的氨基末端可以缩短1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。在一种实施方式中，与SEQ ID NO：1-35所述的一个或多个CDR相比，本文所述的VH和/或VL CDR1、CDR2和/或CDR3的羧基末端可以缩短1、2、3、4、5或更多个氨基酸，只要维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合(例如，基本维持，例如，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％)。本领域中已知的任何方法可以用于确定是否维持了与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合，例如，本文所提供的“实施例”部分(部分6)中所述的结合测定和条件。例如，本文所提供的部分6描述了用于测量与人MET的ECD结合的ELISA测定。简要地，用100μL/孔的1μg/mL的hu-MET-ECD在硼酸盐缓冲液中的溶液在4℃涂覆ELISA板过夜；然后，将不同浓度的抗-MET抗体加入至涂覆的ELISA板并在TBST(50mM Tris pH 7.4，150mM NaCl，0.1％吐温-20)中在室温下培育1小时以允许抗-MET抗体与人MET ECD结合。另外，本文所提供的部分6描述了与A549细胞的FACS结合测定以用于确定是否维持了抗-MET抗体与MET(例如，人MET ECD，例如，SEQ ID NO：190)的免疫特异性结合。
在具体的方面，本文提供了包含抗体轻链和重链，例如，单独的轻链和重链的抗体。就轻链而言，在具体的实施方式中，本文所述的抗体的轻链是κ轻链。在另一种具体的实施方式中，本文所述的抗体的轻链是λ轻链。在另一种实施方式中，轻链是混合序列，例如，轻链的可变部分包含κ轻链序列，并且轻链的恒定区包含λ轻链序列，或反之亦然。在某些实施方式中，本文所述的抗体的轻链是人κ轻链或人λ轻链。在本领域中描述了人恒定区序列的非限制性实例，例如，参见美国专利No.5,693,780和Kabat等人.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242。
在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如人MET的ECD)的抗体包含轻链，其中VL链区的氨基酸序列包含本文所述的任意氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52-62)，并且其中所述轻链的恒定区包含人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含轻链，其中VL链区的氨基酸序列可以包含本文所述的任意氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52-62)，并且其中所述轻链恒定区包含人λ轻链恒定区的氨基酸序列。
就重链而言，在具体的实施方式中，本文所述的抗体的重链可以是α、δ、ε、γ或μ重链。在另一种具体的实施方式中，所述抗体的重链可以包含人α、δ、ε、γ或μ重链。在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含重链，其中所述VH链区的氨基酸序列可以包含本文所述的任意氨基酸序列(例如，SEQID NO：63-71中的任一个)，并且其中所述重链恒定区包含人γ重链恒定区的氨基酸序列。在本领域中已描述了人恒定区序列的非限制性实例，例如，参见美国专利No.5,693,780和Kabat等人.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242。
在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子，或者人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、任何类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b或其混合物)的免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，所述恒定区包含人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子，任何类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或任何亚类(例如，IgG2a和IgG2b或其混合物)的免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含IgG2的恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述IgG2为人IgG2。在某些实施方式中，所述IgG2(例如，人IgG2)为IgG2a(例如，人IgG2a)。在某些实施方式中，所述IgG2(例如，人IgG2)为IgG2b(例如，人IgG2b)。在某些实施方式中，所述IgG2(例如，人IgG2)是IgG2a(例如，人IgG2a)和IgG2b(例如，人IgG2b)的混合物。
在另一种具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含人IgG1(例如，同种型a、z或f)或人IgG4的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含人IgG1(同种型f)的恒定区的氨基酸序列。在本领域中描述了人恒定区的非限制性实例，例如，参见Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242。
在另一种具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255的VL和VH)，并且其中所述恒定区包含人IgG2(例如，IgG2a或IgG2b或其混合物)的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255的VL和VH)，并且其中所述恒定区包含人IgG2(同种型IgG2a)的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255的VL和VH)，并且其中所述恒定区包含人IgG2(同种型IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含人IgG2同种型(例如，其中存在IgG2a和IgG2b同种型的混合物的人IgG2同种型)的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，本文所述的免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255的VL和VH)，并且其中所述恒定区包含人IgG2的恒定区的氨基酸序列，例如，如下所示：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含具有Ab235-Ab255中任一个的氨基酸序列(例如，表1、5和7中所列那些)的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；(ii)所述重链包含VH链区，其包含具有Ab235-Ab255中任一个的氨基酸序列(例如，表2、6和8中所列那些)的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；(iii)所述轻链还包含轻链恒定域，其包含人κ轻链恒定域的氨基酸序列；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链恒定域的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述IgG2(例如，人IgG2)包含IgG2a(例如，人IgG2a)和IgG2b(例如，人IgG2b)的混合物。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含Ab235的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，表1、5和7中任一个中所列的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3)；(ii)所述重链包含VH链区，其包含Ab235的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，表2、6和8中任一个中所列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3)；(iii)所述轻链还包含人轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链的恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含Ab236的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，表1、5和7中任一个中所列的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3)；(ii)所述重链包含VH链区，其包含Ab236的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，表2、6和8中任一个中所列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3)；(iii)所述轻链还包含人轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链的恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含Ab237的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，表1、5和7中任一个中所列的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3)；(ii)所述重链包含VH链区，其包含Ab237的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，表2、6和8中任一个中所列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3)；(iii)所述轻链还包含人轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链的恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含Ab238的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，表1、5和7中任一个中所列的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3)；(ii)所述重链包含VH链区，其包含Ab238的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，表2、6和8中任一个中所列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3)；(iii)所述轻链还包含人轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链的恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含Ab239的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，表1、5和7中任一个中所列的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3)；(ii)所述重链包含VH链区，其包含Ab239的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，表2、6和8中任一个中所列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3)；(iii)所述轻链还包含人轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链的恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含Ab240的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，表1、5和7中任一个中所列的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3)；(ii)所述重链包含VH链区，其包含Ab240的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，表2、6和8中任一个中所列的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3)；(iii)所述轻链还包含人轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含重链恒定域，其包含人IgG2重链的恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab235的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：57和66)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab236的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：58和67)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab237的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：59和68)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab238的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：60和69)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab239的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：61和70)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab240的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：62和71)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab241的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：52和63)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab242的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：53和63)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab243的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：54和63)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab244的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：55和63)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab245的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：56和63)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab246的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：52和64)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab247的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：53和64)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab248的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：54和64)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab249的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：55和64)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab250的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：56和64)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab251的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：52和65)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab252的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：53和65)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab253的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：54和65)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab254的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：55和65)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含Ab255的VL链区和VH链区(分别为SEQ ID NO：56和65)；其中所述轻链还包含人轻链恒定域并且所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述抗体作为以上含有人IgG2a的抗体和以上含有人IgG2b的抗体的混合物存在。在某些实施方式中，所述人IgG2重链包含如下所示的氨基酸序列：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：191)。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含VL链区，其包含具有Ab235-Ab255中任一个的氨基酸序列(例如，表1、5和7中所列那些)的VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3；(ii)所述重链包含VH链区，其包含具有Ab235-Ab255中任一个的氨基酸序列(例如，表2、6和8中所列那些)的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3；(iii)所述轻链还包含含有人κ轻链恒定域的氨基酸序列，例如，含有氨基酸序列
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：192)的轻链恒定域；和(iv)所述重链还包含含有人IgG2重链恒定域的氨基酸序列，例如，含有SEQ ID NO：191所示氨基酸序列的重链恒定域。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2a。在某些实施方式中，所述人IgG2是人IgG2b。在某些实施方式中，所述IgG2(例如，人IgG2)是IgG2a(例如，人IgG2a)和IgG2b(例如，人IgG2b)的混合物。
在另一种具体的实施方式中，免疫特异性结合至MET多肽(例如，MET，例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体包含轻链和重链，其中(i)所述轻链包含氨基酸序列：
DIQMTQSPGSLSASLGETVTIECLASADIHSNLAWYQQKPGNSPQLLIYYGNNLNDGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDVSIYFCQQSYDSPPTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO：193)；和(ii)所述重链包含氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGRSLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPTKGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFSISRDNAKSSLYLQMDSLRSEDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGHGVMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：194)。
基于CDR编号系统的边界确定本文所述的框架区。换言之，如果通过(例如)Kabat、IMGT或Chothia确定CDR，那么所述框架区是以从N-末端至C-末端：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的形式在可变区中围绕CDR的氨基酸残基。例如，如(例如)Kabat编号系统、IMGT编号系统或Chothia编号系统所定义的，FR1定义为CDR1氨基酸残基N-末端的氨基酸残基，如(例如)Kabat编号系统、IMGT编号系统或Chothia编号系统所定义的，FR2定义为CDR1和CDR2氨基酸残基之间的氨基酸残基，如(例如)Kabat编号系统、IMGT编号系统或Chothia编号系统所定义的，FR3定义为CDR2和CDR3氨基酸残基之间的氨基酸残基，并且如(例如)Kabat编号系统、IMGT编号系统或Chothia编号系统所定义的，FR4定义为CDR3氨基酸残基C-末端的氨基酸残基。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对抗体Ab235-Ab255(例如，参见表3)中任一个所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的方面，在VL序列中VL FR相对于VL CDR处于以下位置：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在具体的方面，在VH序列中VHFR相对于VH CDR处于以下位置：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab235(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：103所示的氨基酸序列，和Ab235的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：111所示的氨基酸序列，和Ab235的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列，和Ab235的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列，和Ab235的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：103所示氨基酸序列的VL FR1，具有SEQ ID NO：111所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：122所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab235的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab236(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：104所示的氨基酸序列，和Ab236的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：112所示的氨基酸序列，和Ab236的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列，和Ab236的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列，和Ab236的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：104所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：112所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：122所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab236的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab237(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：105所示的氨基酸序列，和Ab237的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列，和Ab237的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：123所示的氨基酸序列，和Ab237的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab237的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：105所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：113所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：123所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab237的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab238(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：106所示的氨基酸序列，和Ab238的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：114所示的氨基酸序列，和Ab238的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：124所示的氨基酸序列，和Ab238的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列，和Ab238的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：106所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：114所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：124所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab238的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab239(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列，和Ab239的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：115所示的氨基酸序列，和Ab239的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：125所示的氨基酸序列，和Ab239的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列，和Ab239的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：107所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：115所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：125所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab239的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab240(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：103所示的氨基酸序列，和Ab240的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：111所示的氨基酸序列，和Ab240的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：122所示的氨基酸序列，和Ab240的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：128所示的氨基酸序列，和Ab240的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：103所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQID NO：111所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：122所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab240的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab241(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab241的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列，和Ab241的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列，和Ab241的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab241的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：109所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：117所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab241的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab242(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab242的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab242的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列，和Ab242的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab242的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：103所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：111所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：122所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab242的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab243(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab243的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab243的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：119所示的氨基酸序列，和Ab243的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab243的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：119所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab243的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab244(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab244的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab244的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列，和Ab244的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab244的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：120所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab244的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab245(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab245的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab245的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，和Ab245的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab245的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：121所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：1278所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab245的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab246(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab246的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列，和Ab246的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列，和Ab246的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab246的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：109所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：117所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab246的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab247(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab247的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab247的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列，和Ab247的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab247的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：103所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：111所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：122所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab247的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab248(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab248的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab248的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：119所示的氨基酸序列，和Ab248的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab248的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：119所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab248的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab249(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab249的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab249的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列，和Ab249的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab249的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：120所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab249的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab250(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab250的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab250的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，和Ab250的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab250的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：121所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：1278所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab250的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab251(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab251的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列，和Ab251的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：117所示的氨基酸序列，和Ab251的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab251的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：109所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：117所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab251的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab252(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab252的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab252的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：118所示的氨基酸序列，和Ab252的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab252的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：103所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：111所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：122所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：128所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab252的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab253(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab253的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab253的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：119所示的氨基酸序列，和Ab253的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab253的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VL FR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：119所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab253的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab254(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab254的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab254的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：120所示的氨基酸序列，和Ab254的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab254的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：120所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：127所示氨基酸序列的VL FR4，以及Ab254的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab255(例如，参见表3)所述的氨基酸序列的一个或多个VL框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：102所示的氨基酸序列，和Ab255的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有SEQ ID NO：110所示的氨基酸序列，和Ab255的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有SEQ ID NO：121所示的氨基酸序列，和Ab255的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR4具有SEQ ID NO：127所示的氨基酸序列，和Ab255的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：102所示氨基酸序列的VLFR1，具有SEQ ID NO：110所示氨基酸序列的VL FR2，具有SEQ ID NO：121所示氨基酸序列的VL FR3，和具有SEQ ID NO：1278所示氨基酸序列的VL FR4。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含一个或多个VL框架区(FR)，其具有以下氨基酸序列：(a)SEQ ID NO：240；(b)WYQQKPGKAPX79LLIY(SEQ ID NO：241)，其中X79是任意氨基酸，例如，K或Q；(c)GVPSRFSGX80GX81GTDX82TLX83IX84SLQX85EDVAX86YFC，其中X80是任意氨基酸，例如，S或F，X81是任意氨基酸，例如，S或F，X82是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X83是任意氨基酸，例如，T或K，X84是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X85是任意氨基酸，例如，P或S，并且X86是任意氨基酸，例如，I或T；和(d)SEQ ID NO：243，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VL区。在某些实施方式中，所述VL FR1具有SEQ ID NO：240所示氨基酸序列和Ab235-Ab255中任一个的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR2具有WYQQKPGKAPX79LLIY(SEQ ID NO：241)的氨基酸序列，其中X79是任意氨基酸，例如，K或Q，和Ab235-Ab255中任一个的VL CDR。在一些实施方式中，所述VL FR3具有GVPSRFSGX80GX81GTDX82TLX83IX84SLQX85EDVAX86YFC的氨基酸序列，其中X80是任意氨基酸，例如，S或F，X81是任意氨基酸，例如，S或F，X82是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X83是任意氨基酸，例如，T或K，X84是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X85是任意氨基酸，例如，P或S，并且X86是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或T，和Ab235-Ab255中任一个的VL CDR。在一些实施方式中，所述VLFR4具有SEQ ID NO：243所示氨基酸序列和Ab235-Ab255中任一个的VL CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：240所示氨基酸序列的VLFR1，具有WYQQKPGKAPX79LLIY(SEQ ID NO：241)的氨基酸序列的VL FR2，其中X79是任意氨基酸，例如，K或Q，具有GVPSRFSGX80GX81GTDX82TLX83IX84SLQX85EDVAX86YFC的氨基酸序列的VLFR3，其中X80是任意氨基酸，例如，S或F，X81是任意氨基酸，例如，S或F，X82是任意氨基酸，例如，具有芳族侧链的氨基酸，例如，Y或F，X83是任意氨基酸，例如，T或K，X84是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，X85是任意氨基酸，例如，P或S，并且X86是任意氨基酸，例如，具有非极性侧链的氨基酸，例如，I或T，和具有SEQ ID NO：243所示氨基酸序列的VL FR4。在某些实施方式中，X79至X86中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X79是K或Q的保守取代，X80是S或F的保守取代，X81是S或F的保守取代，X82是Y或F的保守取代，X83是T或K的保守取代，X84是S或N的保守取代，X85是P或S的保守取代，并且X86是I或T的保守取代。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab235(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：75所示的氨基酸序列，和Ab235的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：82所示的氨基酸序列，和Ab235的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：89所示的氨基酸序列，和Ab235的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：268所示的氨基酸序列，和Ab235的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：97所示的氨基酸序列，和Ab235的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：75所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：82所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：89所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：97所示氨基酸序列的VH FR4。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：75所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：82所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：268所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ IDNO：97所示氨基酸序列的VH FR4。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab236(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：76所示的氨基酸序列，和Ab236的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：82所示的氨基酸序列，和Ab236的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：90所示的氨基酸序列，和Ab236的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：269所示的氨基酸序列，和Ab236的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：97所示的氨基酸序列，和Ab236的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：76所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：82所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：90所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：97所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab236的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：76所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：82所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：269所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：97所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab236的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab237(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：77所示的氨基酸序列，和Ab237的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列，和Ab237的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：91所示的氨基酸序列，和Ab237的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：270所示的氨基酸序列，和Ab237的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：98所示的氨基酸序列，和Ab237的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：77所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：83所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：91所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：98所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab237的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：77所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：83所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：270所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：98所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab237的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab238(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：78所示的氨基酸序列，和Ab238的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列，和Ab238的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：271所示的氨基酸序列，和Ab238的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：92所示的氨基酸序列，和Ab238的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：99所示的氨基酸序列，和Ab238的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：78所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：84所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：92所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：99所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab238的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：78所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：271所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：92所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：99所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab238的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab239(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：79所示的氨基酸序列，和Ab239的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列，和Ab239的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：93所示的氨基酸序列，和Ab239的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：100所示的氨基酸序列，和Ab239的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：79所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：83所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：93所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：100所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab239的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab240(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：80所示的氨基酸序列，和Ab240的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：84所示的氨基酸序列，和Ab240的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：94所示的氨基酸序列，和Ab240的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：101所示的氨基酸序列，和Ab240的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：80所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：84所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：94所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：101所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab240的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab241(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab241的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab241的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：86所示的氨基酸序列，和Ab241的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab241的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：86所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab241的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab242(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab242的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab242的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：86所示的氨基酸序列，和Ab242的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab242的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：86所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab242的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab243(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab243的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab243的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：86所示的氨基酸序列，和Ab243的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab243的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：86所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab243的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab244(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab244的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab244的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：86所示的氨基酸序列，和Ab244的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab244的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：86所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab244的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab245(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab245的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab245的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：86所示的氨基酸序列，和Ab245的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab245的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：86所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab245的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab246(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab246的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab246的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列，和Ab246的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab246的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：87所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab246的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab247(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab247的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab247的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列，和Ab247的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab247的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：87所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab247的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab248(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab248的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab248的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列，和Ab248的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab248的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：87所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab248的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab249(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab249的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab249的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列，和Ab249的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab249的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：87所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab249的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab250(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠(例如，啮齿类)、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab250的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab250的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：87所示的氨基酸序列，和Ab250的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：95所示的氨基酸序列，和Ab250的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：87所示氨基酸序列的VH FR3，和具有SEQ ID NO：95所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab250的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab251(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab251的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab251的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列，和Ab251的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：96所示的氨基酸序列，和Ab251的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：88所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：96所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab251的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab252(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab252的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab252的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列，和Ab252的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：96所示的氨基酸序列，和Ab252的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：88所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：96所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab252的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab253(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab253的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab253的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列，和Ab253的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：96所示的氨基酸序列，和Ab253的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：88所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：96所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab253的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab254(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab254的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab254的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列，和Ab254的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：96所示的氨基酸序列，和Ab254的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：88所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：96所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab254的VH CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体包含具有本文对Ab255(例如，参见表4)所述的氨基酸序列的一个或多个VH框架区(FR)，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列，和Ab255的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列，和Ab255的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有SEQ ID NO：88所示的氨基酸序列，和Ab255的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有SEQ ID NO：96所示的氨基酸序列，和Ab255的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：74所示氨基酸序列的VHFR1，具有SEQ ID NO：81所示氨基酸序列的VH FR2，具有SEQ ID NO：88所示氨基酸序列的VHFR3，和具有SEQ ID NO：96所示氨基酸序列的VH FR4，以及Ab255的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含一个或多个VH框架区(FR)，其具有以下氨基酸序列：(a)SEQ IDNO：244；(b)SEQ ID NO：245；(c)RFTISRDNAKX87SLYLQMX88SLRTEDTATYYCTT(SEQ ID NO：246)，其中X87是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，并且X88是任意氨基酸，例如，D或N；和(d)WGQGX89MV(SEQ ID NO：247)，其中X89是任意氨基酸，例如，T或V，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，鼠、啮齿类、嵌合或人源化抗体)包含含有FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4的VH区。在某些实施方式中，所述VH FR1具有SEQ ID NO：244所示氨基酸序列和Ab235-Ab255中任一个的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR2具有SEQ IDNO：245所示氨基酸序列和Ab235-Ab255中任一个的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR3具有RFTISRDNAKX87SLYLQMX88SLRTEDTATYYCTT(SEQ ID NO：246)的氨基酸序列，其中X87是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，并且X88是任意氨基酸，例如，D或N，和Ab235-Ab255中任一个的VH CDR。在一些实施方式中，所述VH FR4具有WGQGX89MV(SEQ ID NO：247)的氨基酸序列，其中X89是任意氨基酸，例如，T或V和Ab235-Ab255中任一个的VH CDR。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含以下中的一个或多个：具有SEQ ID NO：244所示氨基酸序列的VH FR1，具有SEQ ID NO：245所示氨基酸序列的VH FR2，其中X79是任意氨基酸，例如，K或Q，具有RFTISRDNAKX87SLYLQMX88SLRTEDTATYYCTT(SEQ ID NO：246)的氨基酸序列的VH FR3，其中X87是任意氨基酸，例如，具有不带电的极性侧链的氨基酸，例如，S或N，并且X88是任意氨基酸，例如，D或N，和具有WGQGX89MV(SEQ ID NO：247)的氨基酸序列的VH FR4，其中X89是任意氨基酸，例如，T或V。在某些实施方式中，X87至X89中的任一个是任意氨基酸序列。在具体的实施方式中，X87是S或N的保守取代，X88是D或N的保守取代，并且X89是T或V的保守取代。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)，其包含作为人框架区或来源于人框架区的框架区(例如，VL域和/或VH域的框架区)。本领域中描述了人框架区的非限制性实例，例如，参见Kabat等人(1991)，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S.Departmentof Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。在某些实施方式中，本文所述的抗体包含作为灵长类(例如，非人灵长类)框架区或来源于灵长类(例如，非人灵长类)框架区的框架区(例如，VL域和/或VH域的框架区)。
例如，来源于抗原-特异性非人抗体，通常啮齿类来源(例如，小鼠或大鼠)的CDR嫁接到同源人或非人灵长类受体框架。在一种实施方式中，所述非人灵长类受体框架来自于旧大陆猿猴。在具体的实施方式中，所述旧大陆猿猴的受体框架来自于黑猩猩、倭黑猩猩或大猩猩。在具体的实施方式中，所述非人灵长类受体框架来自于黑猩猩(Pantroglodytes)。在具体的实施方式中，所述非人灵长类受体框架是旧大陆猴受体框架。在具体的实施方式中，所述旧大陆猴受体框架来自于猕猴属。在某一实施方式中，所述非人灵长类受体框架来源于食蟹猴(Macaca cynomolgus)。在美国专利申请公开No.US 2005/0208625中描述了非人灵长类框架序列。
在具体的方面，可以使用(例如)Composite Human AntibodyTM技术(AntitopeLtd.,Cambridge,United Kingdom)产生复合人抗体。例如，可以通过将不相关的人抗体可变区部分融合在一起产生复合人抗体，并随后评价它们对T细胞表位包含的避免(参见，例如，Baker等人,2010,Self Nonself.,1(4):314-322；和Bryson等人,2010,BioDrugs,24(1):1-8)，例如，去免疫化(参见，例如，Jones等人,2009,Methods Mol Biol.,525:405-23)。
在某些方面，本文所述的抗体是去免疫化抗体。去免疫化是通过免疫学和分子生物学技术的组合使用来定位和去除T细胞表位的技术(参见，例如，Jones等人,2009,Methods Mol Biol.,525:405-23；和Perry等人,2008,Drugs R D.,9(6):385-96)。例如，通常可以引入除去T细胞表位的突变，例如，在恒定区、VL和/或VH区中，而不会显著降低抗体的结合亲合力。在某些实施方式中，在一个或多个VL CDR和/或VH CDR中引入除去T细胞表位的突变，而不显著降低抗体的结合亲合力。在具体的实施方式中，在抗体的VL CDR和/或VH CDR中未引入除去T细胞表位的突变。在某些实施方式中，在一个或多个VL FR和/或VHFR中引入除去T细胞表位的突变，而不显著降低抗体的结合亲合力。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含相对于Ab235-Ab255中的任一个具有特定同一性百分比的氨基酸序列。
可以使用数学算法完成两条序列(例如，氨基酸序列或者核酸序列)之间的同一性百分比的确定。用于比较两条序列的数学算法的优选、非限制性实例为以下算法：Karlin和Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87:2264 2268,在Karlin和Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:5873 5877中进行修改。这种算法引入至Altschul等人,1990,J.Mol.Biol.215:403中的NBLAST和XBLAST程序。可以通过设置为(例如)得分＝100，字长＝12的NBLAST核苷酸程序参数进行BLAST核苷酸搜索以获得与本文所述的核酸分子相同的核苷酸序列。可以通过设置为(例如)得分＝50，字长＝3的XBLAST程序参数进行BLAST蛋白质搜索以获得与本文所述的蛋白质分子相同的氨基酸序列。出于比较的目的，为了获得空位比对，可以使用Gapped BLAST，如Altschul等人,1997,Nucleic Acids Res.25:33893402中所述。作为另外一种选择，可以使用PSI BLAST进行迭代搜索，其检测分子之间较远的关系(Id.)。当使用BLAST、Gapped BLAST和PSI Blast程序时，可以使用各个程序(例如，XBLAST和NBLAST)的缺省参数(参见，例如，万维网ncbi.nlm.nih.gov上的National Centerfor Biotechnology Information(NCBI))。用于序列比较的数学算法的另一个优选、非限制性实例是Myers和Miller,1988,CABIOS 4:11 17的算法。将这种算法引入ALIGN程序(2.0版)，它是GCG序列比对软件包的一部分。当使用ALIGN程序进行氨基酸序列比较时，可以使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4。
可以在允许或不允许空位的情况下，使用类似于如上所述的那些的技术确定两条序列之间的同一性百分比。在计算同一性百分比时，通常仅对完全匹配计数。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：57所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：57所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab235(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，所述VL域包含与SEQ ID NO：57的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，或至少98％的序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab235的VL CDR相同的VLCDR(例如，如表1、表5或表7中所示)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：66所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％的序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：66所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab235(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，所述VH域包含与SEQ ID NO：66的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％，或至少98％的序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab235(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：57所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：66所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：1)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab235(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其与SEQ IDNO：58所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：58所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab235(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：58的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab236的VL CDR相同的VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所示)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，所述VH域与SEQ ID NO：67所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：67所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab235(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，所述VH域包含与SEQ ID NO：67的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab236(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：58所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：67所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab236(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，所述VL域与SEQ ID NO：59所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：59所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab237(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：59的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab237的VL CDR相同的VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所示)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：68所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：68所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab237(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：68的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab237(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：59所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：68所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab237(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：60所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：60所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab238(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：60的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab238(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：69所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：69所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab238(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：69的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab238(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：60所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：69所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab238(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：61所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：61所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab239(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：61的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab239(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：70所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：70所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab239(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：70的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab239(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：61所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：70所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab239(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：62所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：62所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab240(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：62的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab240(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：71所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：71所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab240(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：71的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab240(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：62所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：71所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab240(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab241(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：52的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab241(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab241(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：63的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab241(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab241(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab242(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：53的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab242(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab242(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：63的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab242(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab242(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab243(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：54的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab243(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab243(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：63的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab243(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab243(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab244(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：55的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab244(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab244(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：63的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab244(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab244(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab245(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：56的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab245(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab245(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：63的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab245(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：63所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190的氨基酸残基25至934)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab245(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab246(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：52的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab246(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab246(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：64的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab246(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab246(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab247(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：53的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab247(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab247(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：64的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab247(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab247(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab248(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：54的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab248(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab248(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：64的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab248(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab248(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab249(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：55的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab249(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab249(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：64的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab249(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab249(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab250(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：56的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab250(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab250(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：64的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab250(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：64所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab250(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab251(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：52的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab251(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab251(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：65的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab251(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：52所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab251(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab252(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：53的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab252(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab252(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：65的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab252(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：53所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab252(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab253(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：54的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab253(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ IDNO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab253(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：65的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab253(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：54所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab253(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab254(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：55的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab254(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab254(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：65的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab254(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：55所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab254(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab255(例如，如表1、表5或表7中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VL域，其包含与SEQID NO：56的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VL框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，所述抗体包含与抗体Ab255(例如，如表1、表5或表7中所示)的VL CDR相同的VL CDR。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH域，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ ID NO：190)，并且其中所述抗体包含与抗体Ab255(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段包含VH域，其包含与SEQID NO：65的框架区的氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性的VH框架区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人MET ECD(SEQ IDNO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体包含与抗体Ab255(例如，如表2、表6或表8中所示)的CDR(例如，VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段分别包含(i)VL域，其与SEQ ID NO：56所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，和(ii)VH域，其与SEQ ID NO：65所示氨基酸序列具有至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或至少98％序列同一性，其中所述抗体免疫特异性结合至MET，例如，人METECD(SEQ ID NO：190)。在具体的实施方式中，这种抗体或其抗原-结合片段包含抗体Ab255(例如，如表1和2，表5和6或表7和8中所示)的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)相同的CDR(例如，VL CDR 1-3和/或VH CDR 1-3)。
本文还提供了结合与本文所述的抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255)相同或重叠的MET表位(例如，位于人MET的ECD中，如Sema域或Sema/PSI域中的表位)的抗体，例如，与本文所述的抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255)竞争(例如，以剂量依赖性方式)结合至MET(例如，人MET的ECD)的抗体，或者竞争性抑制(例如，以剂量依赖性方式)本文所述的抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255)与MET(例如，位于人MET的ECD上的表位)结合的抗体。在某些实施方式中，本文提供了结合至人MET的一个或多个氨基酸残基Q328、R331、S336、L337和N338的抗体。
在具体的方面，本文还提供了结合与抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中的任一个相同或重叠的MET表位(例如，位于人MET的ECD中，如Sema域或Sema/PSI域中的表位)并且与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，能够更好地抑制(例如，部分抑制)MET磷酸化和更好地抑制(例如，部分抑制)肿瘤细胞增殖或肿瘤生长的抗体。在某些实施方式中，本文提供了结合至人MET的一个或多个氨基酸残基Q328、R331、S336、L337和N338的抗体。
可以使用常规技术，如在本文所提供的实施例中使用的那些技术鉴别结合至相同或重叠的MET表位(例如，位于人MET的ECD中，如Sema域或Sema/PSI域中的表位)的抗体。例如，使用免疫测定来表明一个抗体阻止另一个抗体与靶标抗原结合的能力，即竞争性结合测定。竞争结合测定还可以用于确定两个抗体是否对表位具有类似的结合特异性。可以在其中处于测试的免疫球蛋白抑制参考抗体与共同抗原，如MET的特异性结合的测定中确定竞争性结合。多种类型的竞争性结合测定是已知的，例如：固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)，夹心竞争测定(参见Stahli等人,(1983)Methodsin Enzymology 9:242)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见kirkland等人,(1986)J.Immunol.137:3614)；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane,(1988)Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；使用I-125标记物的固相直接标记RIA(参见Morel等人,(1988)Mol.Immunol.25(1):7)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人,(1990)Virology 176:546)；和直接标记RIA。(Moldenhauer等人,(1990)Scand J.Immunol.32:77)。通常，这种测定涉及纯化抗原(例如，MET，如人MET的ECD)的使用，所述纯化抗原结合至具有这些未标记的测试免疫球蛋白和标记的参考免疫球蛋白中任一个的固体表面或细胞。可以在存在测试免疫球蛋白的情况下通过确定结合至所述固体表面或细胞的标记物的量来测量竞争性抑制。通常，测试免疫球蛋白过量存在。通常，当竞争抗体过量存在时，它将参考抗体与共同抗原的特异性结合抑制至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％或以上。可以使用标记抗原或标记抗体将竞争结合测定配置成多种不同形式。在该测定的常规形式中，将抗原固定在96-孔板上。然后，使用放射性或酶标记物测量未标记的抗体阻止标记抗体与抗原结合的能力。有关进一步的详细信息，参见，例如，Wagener等人,J.Immunol.,1983,130:2308-2315；Wagener等人,J.Immunol.Methods,1984,68:269-274；Kuroki等人,Cancer Res.,1990,50:4872-4879；Kuroki等人,Immunol.Invest.,1992,21:523-538；Kuroki等人,Hybridoma,1992,11:391-407和Using Antibodies:A Laboratory Manual,Ed Harlow和David Lane(主编)(ColdSprings Harbor Laboratory Press,Cold Springs Harbor,N.Y.,1999)，第386-389页。
在某些方面，竞争结合测定可以用于确定另一个抗体是否(例如)以剂量依赖性方式竞争性抑制抗体的结合，借此表明所述抗体结合基本相同的表位或重叠表位，例如，空间重叠表位。这些竞争结合测定可以包括(例如)竞争ELISA测定，其可以使用标记抗原或标记抗体配置成全部不同形式。在具体的实施方式中，可以在竞争结合测定中与本文所述的抗体，例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255，或其嵌合或Fab抗体，或包含抗体Ab235-Ab255中任一个的VH CDR和VL CDR的抗体一起测试抗体。
在具体的方面，本文提供了竞争性阻止(例如，以剂量依赖性方式)包含本文所述的氨基酸序列的抗体与MET多肽(例如，MET的ECD，例如人MET)的特异性结合的抗体，如使用本领域技术人员已知的或者本文所述的测定(例如，ELISA竞争性测定)所确定的。在具体的实施方式中，这种竞争性阻断抗体抑制一种或多种MET活性。在具体的方面，本文提供了与包含本文所述的氨基酸序列(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255的VL和/或VH氨基酸序列(参见，例如，SEQ ID NO：52-71))的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)与MET多肽的特异性结合的抗体，如使用本领域技术人员已知的或者本文所述的测定(例如，ELISA竞争性测定)所确定的。
在具体的方面，本文提供了与抗体Ab235-Ab255中的任一个竞争(例如，以剂量依赖性方式)与MET多肽(例如，MET，例如人MET的ECD)的特异性结合的抗体。
在具体的方面，本文提供了与包含具有SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62所示氨基酸序列的VL链区和具有SEQ ID NO：62、63、64、65、66、67、68、69、70或71所示氨基酸序列的VH链区的抗体竞争(例如，以剂量依赖性方式)与MET多肽(例如，MET，例如人MET的ECD)的特异性结合的抗体。
在具体的方面，本文还提供了抗体(i)所述抗体与抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中的任一个竞争(例如，以剂量依赖性方式)与MET多肽的表位(例如，人MET的ECD，如Sema域或Sema/PSI域的表位)的特异性结合，和(ii)与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，所述抗体能够更好地抑制(例如，部分抑制)MET磷酸化和更好地抑制(例如，部分抑制)肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。在具体的方面，本文还提供了抗体(i)所述抗体与抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中的任一个竞争(例如，以剂量依赖性方式)与MET多肽的表位(例如，人MET的ECD，如Sema域或Sema/PSI域的表位)的特异性结合，和(ii)与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，所述抗体能够更好地抑制(例如，部分抑制)MET磷酸化和更好地抑制(例如，部分抑制)肿瘤细胞增殖或肿瘤生长，如，例如，异种移植肿瘤模型(例如，A549细胞、U87MG细胞、Hop92细胞、H596细胞、EBC-1细胞和SNU-5细胞)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体是被特异地结合MET并且包含具有SEQ IDNO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62所示氨基酸序列的VL链区和具有SEQ ID NO：62、63、64、65、66、67、68、69、70或71所示氨基酸序列的VH链区的抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖性方式)与MET多肽(例如，MET，例如人MET的ECD)的特异性结合的抗体。
在具体的方面，本文还提供了抗体(i)所述抗体竞争性阻断(例如，以剂量依赖性方式)抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中的任一个与MET多肽的表位(例如，人MET的ECD，如Sema域或Sema/PSI域的表位)的特异性结合，和(ii)与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，所述抗体能够更好地抑制(例如，部分抑制)MET磷酸化和更好地抑制(例如，部分抑制)肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。
在具体的方面，本文提供了抗体或其抗原-结合片段，其免疫特异性结合至与包含本文所述的氨基酸序列(参见，例如，表1-8)的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个)相同的表位以用于与MET多肽(例如，MET，例如人MET的ECD，如Sema域或Sema/PSI域)特异性结合。本领域技术人员已知的或本文所述的测定(例如，ELISA测定)可以用于确定两个抗体是否结合至相同表位。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体或其抗原-结合片段免疫特异性结合至与特异地结合MET的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个)相同的表位并且包含具有SEQID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62所示氨基酸序列的VL链区和具有SEQ ID NO：62、63、64、65、66、67、68、69、70或71所示氨基酸序列的VH链区。
在具体的方面，本文还提供了抗体(i)所述抗体免疫特异性结合与抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255相同的MET多肽表位(例如，人MET的ECD，如Sema域或Sema/PSI域的表位)；和(ii)与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型时，所述抗体能够更好地抑制(例如，部分抑制)MET磷酸化和更好地抑制(例如，部分抑制)肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。
在一个方面，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或者人MET的ECD中的Sema域)并且可以调节MET的活性和/或表达(例如，抑制MET的活性和/或表达)的抗体。在某些方面，所述抗体调节配体-依赖性MET活性。在某些方面，所述抗体调节MET-增强(例如，独立于配体)的MET活性。在某些实施方式中，本文提供了MET拮抗剂，它是免疫特异性结合至人MET的ECD，例如，人MET的ECD的Sema域并且抑制(例如，部分抑制)至少一种MET活性(例如，MET磷酸化或MET信号转导)的本文所述的抗体。在某些实施方式中，本文所提供的MET拮抗剂是免疫特异性结合至人MET的ECD，例如，人MET的ECD的Sema或PSI域并且抑制或减少/降低MET表达的本文所述的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)抑制细胞中如通过MET磷酸化的抑制所确定的MET活性；(b)引起细胞中MET降解；和(c)抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)抑制MET磷酸化；(b)引起细胞中MET降解；(c)抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长；和/或(d)抑制配体结合至MET的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)引起细胞中MET降解(例如，具有MET增强或MET突变的细胞)；和(b)抑制配体结合至MET(例如，在表达野生型MET的细胞中)的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时具有提高的MET拮抗活性；和(b)抑制配体结合的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时具有提高的MET拮抗活性；和(b)引起受体降解的抗体。
在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且与作为IgG1(例如，人IgG1)同种型相比，作为IgG2(例如，人IgG2)同种型时更好地(a)抑制MET磷酸化；(b)引起细胞中MET降解；(c)抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长；和/或(d)抑制配体结合至MET的抗体。在具体的实施方式中，在具有不依赖于配体的MET活性的细胞(例如，EBC-1细胞和SNU-5细胞)，例如，具有MET增强或组成型活性的MET突变体的细胞中，与人IgG1同种型相比，本文所提供的抗-MET抗体作为人IgG2同种型时显示出更好的MET拮抗活性(例如，阻断MET磷酸化、引起MET降解或抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长)。
MET活性可以涉及MET的任何活性，如本领域中已知或所述的那些。MET活性的非限制性实例包括：MET受体二聚化、MET受体与其他受体(例如，EGFR、HER2、HER3或RET)的异源二聚化、MET受体磷酸化(例如，胞质域中的酪氨酸磷酸化(如MET配体-依赖性磷酸化)或自磷酸化)、MET受体下游信号转导(例如，SHC、Grb2、Stat3、Src、Gab1、PLC-g、p85、PI3K、Crk/CRKL、AKT、Ras或MAPK/ERK信号转导)、细胞增殖，如MET配体(例如，HGF)引起的细胞增殖(例如，癌细胞增殖)或细胞存活(例如，癌细胞)的提高、MET配体(例如，HGF)引起的抗-细胞凋亡。MET活性或MET功能在本文中可互换使用。在某些方面，通过MET配体(例如，HGF)结合至MET受体引起MET活性。在某些实施方式中，由于MET受体的高表达(或过表达)，可以在不存在MET配体(例如，HGF)结合MET受体的情况下发生MET活性或信号转导的提高。细胞中MET的高或过表达是指比已知具有正常MET表达或MET活性的参比细胞的表达水平或者比已知具有正常MET表达或MET活性的细胞群体或样品中MET的平均表达水平高至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％、400％或500％表达水平。可以通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫印迹、ELISA或免疫组织化学)评价MET的表达水平。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且降低MET表达的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且引起MET泛素化的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且引起MET降解或周转的抗体。在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且阻断(例如，部分阻断)MET配体-依赖性和MET-增强(例如，不依赖于配体)的MET信号转导的抗体。不受任何理论束缚，不依赖于配体的MET激活可以包括MET与跨膜蛋白的结合，如(例如)整合素激活、丛状蛋白、CD44、G蛋白偶联受体及其他受体酪氨酸激酶，如(例如)EGFR和RET(参见，例如，Varkaris等人,2013,Int.J.Cancer，133(7):1536-1546)。
在某些实施方式中，与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离和位置中提供提高的变化，从而对MET活性具有提高的拮抗性(例如，配体-依赖性和/或MET-增强)(例如，不依赖于配体)的MET活性)。
在具体的实施方式中，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)不具有激动活性。在某些实施方式中，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)具有低激动活性。通过本领域的技术人员已知的测定进行激动活性鉴定，如(例如)细胞增殖和细胞分散测定、ELISA或免疫印迹测定以评价MET磷酸化或下游MET信号转导组分的活性，如(例如)MAPK和/或AKT。
在具体的实施方式中，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，ELISA测定、流式细胞术或竞争测定所评价的，本文所述的抗体特异性结合至MET的ECD并且将MET配体(例如，HGF)与MET的结合阻断或抑制(例如，部分抑制)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或100％。
在某些方面，可以通过IC50值表征本文所述的抗-MET抗体(例如，单克隆抗体)对MET配体(例如，HGF)结合至MET的抑制，IC50值反映了实现MET配体与MET结合的50％抑制的抗-MET抗体的浓度。因此，在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原-结合片段，或者包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体)抑制MET配体与MET的结合，其IC50为至多约10,000nM、1,000nM、900nM、800nM、700nM、600nM、500nM、400nM、300nM、200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或流式细胞术)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制MET配体与MET的结合，其IC50为至少约10,000nM、1,000nM、900nM、800nM、700nM、600nM、500nM、400nM、300nM、200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或流式细胞术)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制MET配体与MET的结合，其IC50在约0.01nM至10nM、0.1nM至20nM、0.1nM至10nM、0.1nM至5nM或0.01nM至20nM的范围内，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或流式细胞术)所评价的。
在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时具有提高的MET拮抗活性；和(b)抑制配体结合的抗体。在某些实施方式中，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离或位置中提供提高的改变，从而具有提高的抗-MET活性。在具体的实施方式中，与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)时，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一种或其抗原结合片段，或包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一种的CDR的抗体)以较低的IC50抑制MET配体(例如，HGF)与MET的结合，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或流式细胞术)所评价的。在某些实施方式中，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的IC50在比IgG1同种型的IC50小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍之间，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或流式细胞术)所评价的。
在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原-结合片段或包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)不阻断或抑制MET受体二聚化。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体仅可忽视地(例如，小于约2％或3％或者在标准误或标准偏差内)抑制或降低MET受体二聚化。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体不引起或提高MET受体二聚体解离。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体仅可忽视地(例如，小于约2％或3％或者在标准误或标准偏差内)引起或提高MET受体二聚体的解离。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体可以特异性结合至MET受体二聚体并且不阻断或抑制MET受体二聚化。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体可以特异性结合至MET受体单体并且不阻断或抑制MET受体二聚化。在某些实施方式中，任何这些抗体或其抗原结合片段抑制配体结合至MET。
在某些方面，作为MET活性抑制剂(例如，MET拮抗剂)，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体)可以阻断或抑制(例如，部分抑制)MET二聚化。通常，当MET配体结合至MET时引起MET受体二聚化。因此，在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且在存在MET配体刺激且没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，免疫沉淀测定所评价的，相对于MET受体二聚化，将MET受体二聚化阻断或抑制(例如，部分抑制)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原-结合片段或包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将MET受体二聚化部分抑制约25％至75％。可以在存在MET配体刺激的情况下评价本文所述的抗体对MET受体二聚化的阻断或抑制(例如，部分抑制)。例如，表达MET的细胞可以在存在或不存在本文所述的抗-MET抗体的情况下与MET配体(例如，HGF)接触，并确定MET受体二聚化的水平。在某些实施方式中，在不存在抗-MET抗体的情况下，MET配体引起的MET受体二聚化比在存在本文所提供的抗-MET抗体的情况下的MET受体二聚化高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫沉淀测定)所评价的。MET胞质域中一个或多个残基的酪氨酸磷酸化可以是MET受体二聚化的指示物。
在某些实施方式中，与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离或位置中提供提高的改变，从而具有提高的抗-MET活性。在具体的实施方式中，在存在作为IgG1同种型的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的情况下，MET配体(例如，HGF)-引起的MET受体二聚化比在存在作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的情况下的MET受体二聚化高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫沉淀测定)所评价的。
在某些实施方式中，在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下，相对于MET活性，本文所述的抗-MET抗体可以将MET活性抑制(例如，部分抑制)至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法所评价的。在某些实施方式中，在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下，相对于MET活性，本文所述的抗-MET抗体可以将MET活性抑制(例如，部分抑制)至少约25％至约65％，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法所评价的。MET活性的非限制性实例可以包括：MET受体二聚化、MET受体与其他受体(例如，EGFR、HER2、HER3或RET)的异源二聚化、MET受体磷酸化(例如，胞质域中的酪氨酸磷酸化或自磷酸化)、MET受体下游信号转导(例如，SHC、Grb2、Stat3、Src、Gab1、PLC-g、p85、PI3K、Crk/CRKL、AKT、Ras或MAPK/ERK信号转导)、MET配体(例如，HGF)引起的细胞增殖或细胞存活的提高和MET配体(例如，HGF)引起的抗-细胞凋亡。在某些实施方式中，与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离或位置中提供提高的改变，从而具有提高的MET活性抑制。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制配体-依赖性MET活性。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制MET-增强(例如，不依赖于配体)的MET活性。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制配体-依赖性和MET-增强(例如，不依赖于配体)的MET活性。
作为MET活性抑制剂(例如，MET拮抗剂)，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体)可以阻断(例如，部分阻断)或抑制(例如，部分抑制)MET磷酸化，具体地MET胞质域中一个或多个残基的酪氨酸磷酸化。通常，当MET配体(例如，HGF)结合至MET时，引起MET受体二聚化和磷酸化。然而，在某些方面，MET受体二聚化和/或磷酸化可以独立于MET配体结合至MET受体发生。例如，可以由于MET的功能获得突变(gain-of-function mutations)或过表达发生MET受体二聚化和/或磷酸化。
可以磷酸化，例如，通过配体刺激磷酸化的人MET(例如，GenBank登录号No.NP_001120972.1和NP_000236.2)的胞质域中酪氨酸残基的非限制性实例包括残基1003、1234、1235、1349和1356(参见，例如，Organ和Tsao,2011,Ther.Adv.Med.Oncol.,391Suppl):S7-S19，例如，在图1中)。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体可以在人MET的酪氨酸残基1234和/或1235抑制受体磷酸化。
因此，在具体的实施方式中，相对于在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的磷酸化，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将MET胞质域中酪氨酸磷酸化阻断、抑制或降低了至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，如部分6中所述的ELISA测定或免疫印迹测定所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且将MET胞质域中的酪氨酸磷酸化阻断或抑制至少约25％，任选地至约65％或75％，如通过本文所述的或者本领域技术人员已知的方法，例如，如部分6所述的ELISA测定或免疫印迹测定所评价的。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且将MET胞质域中的酪氨酸磷酸化阻断或抑制至少约25％至约80％，如通过本文所述的或者本领域技术人员已知的方法，例如，如部分6所述的ELISA测定或免疫印迹测定所评价的。在某些实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将MET胞质域的酪氨酸磷酸化阻断或抑制了至少约50％至约80％、90％、95％或100％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，如部分6中所述的ELISA测定或免疫印迹测定所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约400pM或小于约300pM的IC50阻断或抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化，如通过本文所述(例如，如以下部分6中所述的使用表达野生型MET的SNU-5细胞、A549细胞和Hop92细胞的磷酸化抑制测定)或本领域技术人员已知的方法所评价的。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约200pM的IC50阻断或抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约150pM的IC50阻断或抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约50pM的IC50阻断或抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以约30pM至约300pM，100pM至约500pM，约25pM至约200pM，约40pM至约160pM，约50pM至约125pM或约5pM至约100pM范围内的IC50阻断或抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化。例如，可以通过在检测酪氨酸磷酸化的ELISA(例如，如以下部分6所述)中测定来自重组表达MET的细胞，例如，SNU-5细胞、A549细胞和Hop92细胞的裂解液来确定酪氨酸磷酸化抑制的IC50。在某些实施方式中，在磷酸化抑制测定中使用前，分选重组表达MET的细胞，例如，SNU-5细胞、A549细胞和Hop92细胞，例如，分选以选择高度表达MET的细胞。在一些实施方式中，在磷酸化抑制测定中使用前不分选细胞。
在具体的实施方式中，相对于在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的磷酸化，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将MET胞质域中的一个或多个酪氨酸残基的磷酸化阻断或抑制了至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，免疫印迹测定所评价的。在具体的实施方式中，可以测定MET配体刺激下本文所述的抗体对MET胞质域的一个或多个酪氨酸残基的磷酸化的阻断或抑制(例如，部分抑制)。例如，在存在或不存在本文所述的抗-MET抗体的情况下，将表达MET的细胞与MET配体接触，并且可以确定MET胞质域中一个或多个酪氨酸残基的磷酸化水平。
在某些实施方式中，相对于在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的磷酸化，在不存在抗-MET抗体的情况下MET配体引起的MET胞质域的一个或多个酪氨酸残基的磷酸化比存在抗-MET抗体的情况下MET配体引起的MET胞质域的一个或多个酪氨酸残基的磷酸化高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些实施方式中，与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离或位置中提供提高的改变，从而具有提高的抗-MET活性。在具体的实施方式中，与作为IgG1同种型相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)时，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一种或其抗原结合片段，或包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一种的CDR的抗体)以较低的IC50抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或免疫印迹法)所评价的。在某些实施方式中，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的IC50在比IgG1同种型的IC50小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍之间，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或免疫印迹法)所评价的。在某些实施方式中，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的IC50在比IgG1同种型的IC50小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍之间，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA测定或免疫印迹法)所评价的。
在某些实施方式中，与不结合SEMA域的人源化抗-MET抗体(“抗-MET-1”)或者结合至SEMA域的二价IgG4抗-MET抗体(“抗-MET-2”)介导的MET胞质域的酪氨酸磷酸化的抑制的IC50相比，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)以较小的IC50抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体的IC50比抗-MET-1或抗-MET-2抗体的IC50小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍之间。在具体的实施方式中，作为IgG2，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)抑制MET胞质域的酪氨酸磷酸化(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，其最大抑制百分比为至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体或存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的降解，引起MET受体降解或将MET受体降解提高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的降解，引起MET受体降解或者将MET受体降解提高至少约25％或35％，任选地至约75％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的降解，引起MET受体降解或将MET受体降解提高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。
在某些实施方式中，本文提供了免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD或人MET的ECD中的Sema/PSI域)并且(a)与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时具有提高的MET拮抗活性；和(b)引起受体降解的抗体。在某些实施方式中，与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离或位置中提供提高的改变，从而具有提高的抗-MET活性。在具体的实施方式中，作为IgG1同种型，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中任一个的CDR的抗体)引起或提高的MET受体降解(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)比作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)，在存在抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的MET受体降解小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定或免疫印迹测定)所评价的。在具体的实施方式中，作为IgG2，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)引起或提高MET受体降解(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，其最大引起/提高百分比为至少约40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体或存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的泛素化，引起MET受体泛素化或将MET受体泛素化提高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫沉淀和免疫印迹测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的泛素化，引起MET受体泛素化或者将MET受体泛素化提高至少约25％或35％，任选地至约75％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫沉淀和免疫印迹测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的泛素化，引起MET受体泛素化或将MET受体泛素化提高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。
在具体的实施方式中，作为IgG1同种型，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中任一个的CDR的抗体)引起或提高的MET受体泛素化(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)比作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)，在不存在抗体或在存在抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的MET受体泛素化小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定或免疫印迹测定)所评价的。
用于定量或监控细胞表面受体泛素化和/或降解(例如，动力学或降解速率)的技术在本领域中是熟知的并且可以包括多种荧光和放射技术(参见，例如，国际专利申请公开No.WO 2008/153926A2)。例如，可以进行使用放射性标记配体，如125I-HGF的脉冲追踪实验以定量测量MET的降解。作为另外一种选择，可以通过免疫印迹或ELISA分析来分析MET降解，参见，例如，部分6。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体或存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的内化，引起MET受体内化或将MET受体内化提高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的内化，引起MET受体内化或者将MET受体内化提高至少约25％或35％，任选地至约75％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的内化，引起MET受体内化或将MET受体内化提高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，脉冲追踪测定)所评价的。
在具体的实施方式中，作为人IgG1同种型，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中任一个的CDR的抗体)引起或提高的MET受体内化(例如，在细胞中，如(例如)SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中)比作为人IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)，在存在本文所提供的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中任一个的CDR的抗体)的情况下的MET受体内化小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，流式细胞术、脉冲追踪测定或免疫印迹测定)所评价的。
用于定量或监控细胞表面受体的受体内化(例如，内化动力学或速率)的技术在本领域中是熟知的并且可以包括(例如)多种荧光和放射技术(参见，例如，国际专利申请公开No.WO 2008/153926 A2)。例如，可以进行使用放射性标记配体，如125I-HGF的脉冲追踪实验以定量测量MET的内化。
此外，MET受体磷酸化的下游信号事件可以用作MET活性的指示物。例如，结合至其受体MET的MET配体(例如，HGF)刺激一些不同的信号通路，包括(例如)磷脂酰肌醇(PI)3-激酶成员和有丝分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK))(参见Trusolino等人,Nat.Rev.Mol.CellBiol.,2010,11:834-848)。MET胞质域中的磷酸化酪氨酸可以为(例如)PI3K和Grb2提供结合位点。
因此，在某些方面，起MET活性抑制剂作用的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)可以抑制PI3K-Akt、STAT、NFкB或MAPK途径激酶成员的信号转导。在具体的实施方式中，起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体可以抑制与MET胞质域和/或与PI3K-Akt、STAT、NFкB或MAPK途径激酶的一个或多个成员的结合(或抑制相互作用)。在某些实施方式中，起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体可以抑制MET对PI3K-Akt、STAT、NFкB或MAPK途径激酶的一个或多个成员的激活。在某些实施方式中，起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体可以抑制PI3K-Akt、STAT、NFкB或MAPK途径激酶的一个或多个成员的磷酸化(例如，胞质域中的酪氨酸磷酸化)。
在具体的实施方式中，起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)可以抑制下游信号转导，如(例如)MAPK的磷酸化、P13K的磷酸化或AKT的磷酸化。因此，在某些实施方式中，相对于在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的磷酸化，本文所述的抗-MET抗体可以将MAPK的磷酸化(例如，MET配体(例如，HGF)引起的MAPK磷酸化)抑制或降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，如部分6中所述的免疫印迹或ELISA测定或者免疫印迹测定所评价的。因此，在某些实施方式中，相对于在存在MET配体刺激但没有任何抗体或具有不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的磷酸化，本文所述的抗-MET抗体可以将AKT的磷酸化(例如，MET配体(例如，HGF)引起的AKT磷酸化)抑制或降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法，例如，如部分6中所述的免疫印迹或ELISA测定或者免疫印迹测定所评价的。
在具体的实施方式中，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)可以抑制下游信号，如(例如)PI3K-Akt、STAT、NFкB或MAPK途径激酶成员的信号，其比作为IgG1同种型，在不存在抗体的情况下或者在存在抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的这些下游信号大至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，ELISA和免疫测定)所评价的。
在某些方面，可以起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)可以抑制细胞的细胞增殖(例如，癌细胞，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞和H596细胞)，例如，表达MET并且对MET信号起反应的细胞(例如，对MET配体刺激和MET信号起反应而增殖的细胞)。在某些方面，可以起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)可以抑制表达MET的癌细胞的增殖，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞和H596细胞，例如，表达MET并且对MET信号起反应的细胞(例如，对MET配体刺激和MET信号起反应而增殖的细胞)。在本领域中描述了并且本领域技术人员可以容易地进行细胞增殖测定。例如，通过测量溴脱氧尿苷(BrdU)掺入(参见，例如，Hoshino等人,1986,Int.J.Cancer 38,369；Campana等人,1988,J.Immunol.Meth.107:79)或(3H)胸苷掺入(参见，例如，Blechman等人,Cell,1995,80:103-113；Chen,J.,1996,Oncogene 13:1395-403；Jeoung,J.,1995,J.Biol.Chem.270:18367 73)，通过在多个时间间隔(例如，12-小时或24-小时间隔)直接细胞计数，或通过检测已知基因，如原癌基因(例如，fos、myc)或细胞周期标志物(Rb、cdc2、细胞周期蛋白A、D1、D2、D3、E等)的转录、翻译或活性的变化来测定细胞增殖。可以通过本领域熟知的任何方法确定该蛋白和mRNA的水平和活性。例如，可以通过已知的免疫诊断方法，如使用抗体，包括可商购抗体的ELISA、免疫印迹或免疫沉淀来定量蛋白。可以使用本领域中熟知和常规的方法定量mRNA，例如，使用northern分析、RNA酶保护或与反转录有关的聚合酶链反应。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将细胞增殖抑制至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，BrdU掺入测定)所评价的。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约400pM或小于约300pM的IC50阻断或抑制细胞的细胞增殖(例如，癌细胞，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞和H596细胞)，如通过本文所述(例如，如以下部分6所述)或本领域技术人员已知的方法所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约300nM的IC50阻断或抑制细胞的细胞增殖(例如，癌细胞，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞和H596细胞)。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约150nM的IC50阻断或抑制细胞增殖。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约50nM的IC50阻断或抑制细胞增殖。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以约100nM至约500nM，约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM，约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM的范围内的IC50阻断或抑制细胞增殖。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以约1nM至约50nM，约5nM至约30nM或约9nM至约25nM的范围内的IC50阻断或抑制U87MG细胞的细胞增殖。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约50nM，小于约40nM，小于约30nM，小于约20nM，小于约10nM或小于约5nM的IC50阻断或抑制U87MG细胞的细胞增殖。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以约1nM至约30nM，约2.5nM至约20nM或约4nM至约15nM的范围内的IC50阻断或抑制A549细胞的细胞增殖。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约20nM，小于约10nM，小于约7.5nM，小于约6nM，小于约5nM或小于约4.5nM的IC50阻断或抑制A549细胞的细胞增殖。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以约0.01nM至约2nM，约0.1nM至约1.5nM或约0.2nM至约1nM的范围内的IC50阻断或抑制H596细胞的细胞增殖。在某些实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且以小于约1.5nM，小于约1nM，小于约0.5nM，小于约0.01nM，小于约0.05nM或小于约0.01nM的IC50阻断或抑制H596细胞的细胞增殖。
在某些实施方式中，与作为IgG1同种型的抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)相比，作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a、人IgG2b或其混合物)时，本文所提供的抗-MET抗体(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255)具有提高的MET拮抗活性。不受任何理论束缚，IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)可以在MET激酶二聚体的距离或位置中提供提高的改变，从而具有提高的抗-MET活性。在具体的实施方式中，在存在作为IgG1同种型的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的情况下，细胞(例如，癌细胞，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞和H596细胞)，例如，表达MET并且对MET信号起反应(例如，对MET配体刺激和MET信号起反应而增殖的细胞)的细胞增殖抑制比在存在作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的细胞增殖抑制低至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，BrdU掺入测定)所评价的。
在某些方面，可以起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)可以降低或抑制细胞的存活(例如，癌细胞，如(例如)SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞和H596细胞)，例如，表达MET并且对MET信号起反应的细胞(例如，对MET配体刺激和MET信号起反应而增殖的细胞)。在本领域中描述了并且本领域技术人员可以容易地进行细胞存活测定。例如，细胞活力可以通过使用台盼蓝染色或本领域已知的其他细胞死亡或活力标志物来评价。在具体的实施方式中，测量细胞ATP水平来确定细胞活力。在具体的实施方式中，使用本领域中的测定标准，如测量胞内ATP水平的CellTiter-Glo测定试剂盒(Promega)，在3天和7天的时间段内测量细胞活力。细胞ATP的减少表示细胞毒性作用。在另一种具体的实施方式中，可以在中性红吸收测定中测量细胞活力。在其他实施方式中，目视观察形态变化可以包括膨大、成粒、细胞边缘不整齐、膜状外观、变圆、从孔表面分离或其他变化。根据所观察到的细胞毒性程度，这些变化表示为T(100％毒性)、PVH(部分毒性-较重-80％)、PH(部分毒性-重-60％)、P(部分毒性-40％)、Ps(部分毒性-轻-20％)或0(无毒性-0％)。通过这些数据的回归分析确定50％细胞抑制(细胞毒性)浓度(IC50)。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将细胞存活抑制(例如，部分抑制)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，台盼蓝拒染测定)所评价的。
在具体的实施方式中，在存在作为IgG1同种型的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其结合片段或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的情况下，细胞存活的抑制比在不存在抗体的情况下或者在存在作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的细胞存活抑制低至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，台盼蓝拒染测定)所评价的。
适合在本文所述的与MET活性有关的测定中使用的细胞和细胞系是易于获得的(例如，ATCC)或者可以使用本领域中已知的方法容易地鉴别。例如，內源表达MET或者具有MET信号或活性的细胞和/或细胞系是本领域技术人员已知的。在某些实施方式中，适合在本文所述的测定中使用的细胞或细胞系可以內源或重组表达MET。在具体的实施方式中，用于在细胞增殖测定中使用的细胞或细胞系可以內源或重组表达MET，并且对MET配体(例如，HGF)刺激起反应而增殖或提高增殖。用于在细胞活力测定中使用的细胞或细胞系可以內源或重组表达MET，并且对MET配体(例如，HGF)刺激起反应而在细胞活力方面发生变化。用于在细胞凋亡测定中使用的细胞或细胞系可以內源或重组表达MET，并且对MET配体(例如，HGF)刺激起反应而在细胞凋亡方面发生变化。用于在细胞增殖、细胞活力或其他测定中使用的细胞或细胞系可以內源或重组表达MET，并且对MET配体(例如，HGF)刺激起反应而在其他细胞类型的增殖或激活方面发生变化。
可以在本文所述的方法和测定中使用的细胞的非限制性实例包括SNU-5细胞、EBC-1细胞、U87MG细胞、A549细胞、Hop92细胞和H596细胞。可以在本文所述的方法和测定中使用以评价不依赖于配体(例如，HGF)的MET信号和活性的细胞的非限制性实例包括EBC-1细胞和SNU-5细胞。在具体的实施方式中，可以在本文所述的方法和测定中使用以评价不依赖于配体的MET活性的细胞包括MET增强的细胞，如MET增强的肿瘤细胞或表达突变MET(例如，组成型活性突变MET)的细胞。可以在本文所述的方法和测定中使用以评价配体(例如，HGF)依赖性MET信号和活性的细胞的非限制性实例包括A549细胞、U87MG细胞、Hop92细胞和H596细胞。在具体的实施方式中，可以在本文所述的方法和测定中使用以评价配体-依赖性MET活性的细胞包括表达野生型MET的细胞，例如，表达野生型MET的肿瘤细胞或者表达正常水平的MET的细胞(例如，肿瘤细胞)，例如，不包含MET增强的细胞。可以在本文所述的方法和测定中使用的细胞的其他非限制性实例包括原代细胞、转化细胞、干细胞、肥大细胞、原生殖细胞、卵母细胞、精母细胞、胚胎干细胞、造血细胞、红白血病细胞(例如，F36P和TF-1细胞系)、结肠直肠癌细胞系，如SNU-C1、SW48、RKO、COLO 205、SW1417、LS411N、NCI-H508、HT-29、SK-CO-1、SW1116、SW948、T84、LS123、LoVo和SW837，胃癌细胞系，如HGC27、GCIY、MKN7、TMK1,ECC12、AGS、CLS-145、23132/87、MKN-45、SK-GT-2、HGC-27和KATO-III，肺癌细胞系，如H526、DMS153、DMS79、NCI-H2126、NCI-H1299、NCI-H1437、NCI-H1563、NCI-H1573、NCI-H1975、HCI-H661和HCC827，黑素瘤细胞系，如HMCB、SK-MEL-1、SK-MEL-3、SK-MEL-24、SH-4、RPMI-7951、SKA375、G-361和WM-115，人骨髓性白血病细胞系，如MO7E细胞；胃肠道间质瘤细胞系，如ST-882、GIST430和GIST882；成神经细胞瘤细胞系，如SK-N-SH、SK-SY5Y、H-EP1、SK-N-BE(2)、SK-N-BE(ZkM17)、SK-N-BE(2)C、LA-N-l或LA-N-1-5s；小细胞肺癌细胞系，如H526、ECC12、TMK1、MKN7、GCIY和HGC27。在具体的实施方式中，可以在本文所述的方法和测定中使用的细胞包括免疫细胞，如巨噬细胞、树突状细胞和自然杀伤(NK)细胞。在具体的实施方式中，可以在本文所述的方法和测定中使用的细胞包括H1299细胞。
作为另外一种选择，通常可以重组产生表达MET，例如，人MET的细胞和细胞系。可以工程设计以重组表达MET的细胞的非限制性实例包括COS细胞、HEK 293细胞、CHO细胞、H1299细胞、成纤维细胞(例如，人成纤维细胞)，如NIH3T3细胞和MEFS。在具体的实施方式中，用于在本文所述的方法中使用的细胞为表达人MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)的H1299细胞。
在某些方面，可以起MET活性抑制剂的作用的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)在小鼠模型研究中能够抑制或降低转移、抑制肿瘤生长或引起肿瘤消退。例如，可以将肿瘤细胞系引入裸鼠，并且可以向小鼠施用一次或多次本文所述的抗-MET抗体，并且可以在数周和/或数月的一段时间内监控注射的肿瘤细胞的肿瘤发展。在一些情况下，可以在引入肿瘤细胞系前发生抗-MET抗体向裸鼠的施用。可以在本文所述的小鼠异种移植模型中使用任何适合的肿瘤细胞系(例如，表达MET的肿瘤细胞系)。在这些异种移植小鼠模型中使用的肿瘤细胞系的非限制性实例包括非小细胞肺癌细胞系H1299、巨核细胞白血病细胞系，如MO7e；胃肠道间质瘤细胞系，如ST-882、GIST430、GIST48、GIST48B和GIST882；人红白血病细胞系，如HEL和TF-1；人早幼粒细胞性白血病细胞系，HL60；成神经细胞瘤细胞系，如SK-N-SH、SK-SY5Y、H-EP1、SK-N-BE(2)、SK-N-BE(ZkM17)、SK-N-BE(2)C、LA-N-l或LA-N-1-5s；和小细胞肺癌细胞系，如H526、DMS153、DMS79、ECC12、TMK1、MKN7、GCIY和HGC27。其他细胞系包括A549细胞、SNU-5细胞、EBC-1细胞、Hop92细胞和H596细胞。在具体的实施方式中，在异种移植小鼠模型中使用的肿瘤细胞系为GIST882、GIST430、GIST48、GIST48B、HEL、HL60、H526、DMS153或DMS79细胞系。在某些实施方式中，可以通过重组表达MET产生适合在异种移植肿瘤模型中使用的细胞系。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且在小鼠模型中将肿瘤生长抑制或引起肿瘤消退至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原-结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且在小鼠模型中将肿瘤生长抑制或引起肿瘤消退至少约25％或35％，任选地至约75％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且在小鼠模型中将肿瘤生长抑制或引起肿瘤消退至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。
在具体的实施方式中，在存在作为IgG1同种型的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的情况下，小鼠模型中肿瘤生长或引起的肿瘤消退比在存在作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下小鼠模型中肿瘤生长的抑制或肿瘤消退的引起小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。
可以(例如)通过监控一段时间内的肿瘤尺寸，如通过可触肿瘤的物理测量或其他目视检测方法评价肿瘤生长抑制或肿瘤消退。例如，可以产生肿瘤细胞系以重组表达可视化试剂，如绿色荧光蛋白(GFP)或荧光素酶，然后可以通过显微镜进行GFP的体内可视化，并且通过施用荧光素酶底物至异种移植小鼠并检测由于荧光素酶处理荧光素酶底物所造成的发光来进行荧光素酶的体内可视化。GFP或荧光素酶的检测程度或水平与异种移植小鼠中肿瘤尺寸相关。
在某些方面，本文所述的抗-MET抗体特异性结合至MET抗原并且可以提高肿瘤异种移植模型中动物的存活。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且将肿瘤异种移植模型中小鼠的存活提高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原-结合片段或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)特异性结合至MET并且在肿瘤异种移植模型中将小鼠的存活提高至少约25％或35％，任选地至约75％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且将肿瘤异种移植模型中小鼠的存活提高至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。在具体的实施方式中，在存在作为IgG1同种型的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其结合片段或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的情况下，肿瘤异种移植模型中小鼠的存活比在存在作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)的抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的肿瘤异种移植模型中的小鼠的存活低至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法所评价的。可以(例如)在肿瘤细胞系注射后通过绘制存活小鼠数目对时间(例如，天或周)的存活曲线确定存活。
在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在存在不相关的抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的EMT抑制，将内皮向间质转化(EMT)(例如，在细胞中，如(例如)DU145细胞)抑制至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫沉淀和免疫印迹测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或者在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的EMT抑制，将EMT抑制至少约25％或35％，任选地至约75％，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，免疫沉淀和免疫印迹测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗体特异性结合至MET并且相对于在不存在抗体的情况下或在存在不相关抗体(例如，不免疫特异性结合至MET的抗体)的情况下的EMT抑制，将EMT抑制(例如，在细胞中，如(例如)DU145细胞)至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，DU145细胞分散测定)所评价的。在某些实施方式中，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或其抗原-结合片段，或者包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体)抑制EMT，其IC50为至多约50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，DU145细胞分散测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制EMT，其IC50为至少约50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，DU145细胞分散测定)所评价的。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体抑制MET配体与MET的结合，其IC50在约0.1nM至500nM、0.1nM至100nM或0.1nM至50nM的范围内，如通过本文所述的和/或本领域技术人员已知的方法(例如，DU145细胞分散测定)所评价的。
在具体的实施方式中，作为IgG1同种型，本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中的任一个或其抗原结合片段，或者包含抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab239和Ab241-Ab255中任一个的CDR的抗体)对EMT的抑制(例如，在细胞中，如(例如)DU145细胞)比作为IgG2同种型(例如，人IgG2、人IgG2a和人IgG2b或其混合物)，在存在抗-MET抗体或其抗原结合片段的情况下的EMT抑制小至少约1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍，如通过本文所述的或本领域技术人员已知的方法(例如，DU145细胞分散测定)所评价的。用于定量或监控细胞表面受体的EMT的技术在本领域中是熟知的并且包括DU145细胞分散测定，参见，例如，部分6。
5.2抗体缀合物
在一些实施方式中，本文提供了连接，例如缀合或融合至试剂，例如，诊断、可检测或治疗试剂，例如，多肽或小分子的抗体(例如，单克隆抗体，如嵌合或人源化抗体)或其抗原结合片段。所述连接，例如缀合或融合抗体可以用于(例如)监控或预后病况或疾病的发生、发展、进展和/或严重程度，例如，作为临床试验程序的一部分，如通过(例如)成象程序确定特定疗法的效力。所述连接，例如缀合或融合抗体可以用于(例如)治疗或控制本文所述的病况或病症，或治疗或控制本文所述的病况或病症的影响。本文所述的抗体还可以缀合至可以影响抗体的一种或多种生物和/或分子性质，例如，稳定性(例如，血清中)、半衰期、溶解度和抗原性的分子(例如，聚乙二醇)。
在具体的方面，本文提供了包含连接至本文所述的抗体(或其抗原-结合片段)的试剂(例如，治疗剂)的缀合物，所述抗体免疫特异性结合至人MET的ECD，例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体，例如，如表1、2和5-8中所示。
在具体的实施方式中，抗体及其抗原结合片段可以连接至可检测分子或物质，其包括(但不限于)多种酶、辅基(如，但不限于，抗生蛋白链菌素/生物素和抗生物素蛋白/生物素)、荧光分子、生物发光分子、放射性分子，如放射性同位素、量子点或其他纳米颗粒，和使用多种正电子发射断层术的正电子发射金属和非放射性顺磁性金属离子。在其他具体的实施方式中，抗体或其抗原结合片段可以连接至治疗剂，如细胞毒素，例如，细胞抑制或杀细胞性试剂，或放射性金属离子，例如，α发射体。例如，细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害的任何试剂。
在一种实施方式中，所述抗体或抗原-结合片段直接缀合或融合至试剂，例如，诊断或治疗剂。在另一种具体的实施方式中，通过一个或多个接头缀合或融合所述抗体或抗原-结合片段和试剂。在具体的实施方式中，接头是酶-可切割的接头和/或二硫化物接头。
在其他实施方式中，本文所述的抗体或抗原结合片段可以融合至试剂，如肽以有利于纯化。例如，这种肽可以是六组氨酸肽，如pQE载体(QIAGEN,Inc.)中提供的标签，其中多数是可商购的。用于纯化的其他肽标签包括(但不限于)血球凝集素(“HA”)标签、其对应于来源于流感血球凝集素蛋白的表位(Wilson等人,1984,Cell 37:767)和“FLAG”标签。
用于将试剂，包括多肽融合或缀合至抗体的方法是熟知的，参见，例如，Arnon等人,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,inMonoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等人(主编),第243-56页(AlanR.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等人,“Antibodies For Drug Delivery”,in ControlledDrug Delivery(第2版)，Robinson等人(主编)，第623-53页(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”,inMonoclonal Antibodies 84:Biological And Clinical Applications,Pinchera等人(主编),第475-506页(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of TheTherapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”,in MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin等人(主编),第303-16页(Academic Press 1985)，Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.62:119-58；美国专利No.5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、5,723,125、5,783,181、5,908,626、5,844,095和5,112,946；EP 307,434；EP 367,166；EP 394,827；PCT专利公开WO 91/06570、WO96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631和WO 99/04813；Ashkenazi等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:10535-10539,1991；Traunecker等人,Nature,331:84-86,1988；Zheng等人,J.Immunol.,154:5590-5600,1995；Vil等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:11337-11341,1992，以上文献以其全部内容作为参考并入本文。
本文所述的抗体和抗原结合片段还可以贴壁至固体载体。这些固体载体可以包括(但不限于)玻璃、纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。这种贴壁对(例如)免疫测定或靶标抗原纯化可以是有用的。
在某些方面，本文所述的抗体或其抗原-结合片段是包含任选地通过接头连接至在细胞外起作用的药物的抗体的胞外药物缀合物(ECD)(参见，例如，PCT国际专利申请公开No.WO 2011/031870)。例如，在ECD结合靶细胞之后，药物发送信号至细胞中并且不需要缀合物内化。
5.3抗体生产
可以通过本领域中已知的任何方法，例如，通过化学合成或者通过重组表达技术产生免疫特异性结合至MET(例如，人MET的ECD)的本文所述的抗体或抗原结合片段。这些方法可以使用本领域技术范围内的分子生物学、微生物学、基因分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交和相关领域中的常规方法。例如，在本文引用的参考文献中描述了并且在文献中充分解释了这些技术。参见，例如，Maniatis等人.(1982)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor LaboratoryPress；Sambrook等人(1989),Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版,ColdSpring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons(1987以及每年更新版本)；Current Protocols in Immunology,John Wiley&Sons(1987以及每年更新版本)；Gait(主编)(1984)Oligonucleotide Synthesis:A Practical Approach,IRLPress；Eckstein(主编)(1991)Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach,IRL Press；Birren等人(主编)(1999)Genome Analysis:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press。
例如，可以使用本领域中已知的多种技术制备单克隆抗体，包括杂交瘤技术、重组技术和噬菌体展示技术或它们的组合的使用。例如，可以使用杂交瘤技术产生单克隆抗体，所述技术包括本领域中已知的并在以下文献中教导的那些：Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版.1988)；Hammerling等人,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681(Elsevier,N.Y.,1981)。如本文所使用的术语“单克隆抗体”不局限于通过杂交瘤技术产生的抗体。例如，可以从通过工程设计表达本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗-MET抗体)或其片段，例如，该抗体的轻链和/或重链的宿主细胞重组产生单克隆抗体。
此外，还可以使用本领域中已知的多种噬菌体展示方法产生本文所述的抗体或其抗原结合片段。在噬菌体展示方法中，在具有编码它们的多核苷酸序列的噬菌体颗粒表面上展示功能性抗体结构域。可以用于制备本文所述的抗体的噬菌体展示方法的实例包括以下文献中公开的那些：Brinkman等人,1995,J.Immunol.Methods 182:41-50；Ames等人,1995,J.Immunol.Methods 184:177-186；Kettleborough等人,1994,Eur.J.Immunol.24:952-958；Persic等人,1997,Gene 187:9-18；Burton等人,1994,Advances in Immunology57:191-280；PCT专利申请No.PCT/GB91/O1 134；国际专利公开No.WO 90/02809、WO 91/10737、WO 92/01047、WO 92/18619、WO 93/11236、WO 95/15982、WO 95/20401和WO97/13844；和美国专利No.5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。
本文所述的抗体可以(例如)包括嵌合抗体。嵌合抗体是其中抗体的不同部分来源于不同的免疫球蛋白分子的分子。例如，嵌合抗体可以含有融合至人抗体恒定区的小鼠或大鼠单克隆抗体的可变区。用于产生嵌合抗体的方法是本领域已知的。参见，例如，Morrison,1985,Science 229:1202；Oi等人,1986,BioTechniques 4:214；Gillies等人,1989,J.Immunol.Methods 125:191-202；和美国专利No.5,807,715、4,816,567、4,816,397和6,331,415。
可以使用标准、熟知的技术分离使用技术，如本文所述的那些产生的抗体或抗原结合片段。例如，可以通过常规免疫球蛋白纯化程序，如(例如)蛋白A-Sepharose、羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析或亲和色谱法将抗体或抗原结合片段适当地与(例如)培养基、腹水液、血清、细胞裂解液、合成反应材料等分离。如本文所使用的，“分离的”或“纯化的”抗体基本不含细胞材料或来自从中获得抗体的细胞或组织源的其他蛋白，或者当为化学合成时，基本不含化学前体或其他化学品。
本文所述的抗体包括识别特异性MET抗原(例如，MET的ECD)的抗体片段，并且它可以通过本领域技术人员已知的任何技术产生。例如，可以使用酶，如木瓜蛋白酶(产生Fab片段)或者胃蛋白酶(产生F(ab')2片段)通过免疫球蛋白分子的蛋白水解切割产生本文所述的Fab和F(ab')2片段。Fab片段对应于抗体分子两个相同的臂中的一个，并且包含与重链VH和CH1域配对的完整轻链。F(ab')2片段包含通过铰链区中的二硫键连接的抗体分子的两个抗原结合臂。作为另外一种选择，通常可以通过熟知的重组表达技术产生本文所述的抗体片段。参见，例如，PCT专利公开No.WO 92/22324；Mullinax等人,1992,BioTechniques 12(6):864-869；Sawai等人,1995,AJRI 34:26-34；和Better等人,1988,Science 240:1041-1043。
本文所述的抗体可以(例如)包括人源化抗体，例如，去免疫化或复合人抗体。人源化抗体可以包含人恒定区序列。在某些实施方式中，可以从任何类的免疫球蛋白选择人源化抗体，包括IgM、IgG、IgD、IgA和IgE，和从任何同种型中选择，包括IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在某些实施方式中，人源化抗体可以包含κ或λ轻链恒定序列。
可以使用多种本领域中已知的技术生产人源化抗体，其包括(但不限于)CDR-嫁接(欧洲专利No.EP 239,400；国际专利公开No.WO 91/09967；和美国专利No.5,225,539、5,530,101和5,585,089)、镶饰或表面重塑(欧洲专利No.EP 592,106和EP 519,596；Padlan,1991,Molecular Immunology 28(4/5):489-498；Studnicka等人,1994,ProteinEngineering 7(6):805-814；和Roguska等人,1994,PNAS 91:969-973)、链替换(美国专利No.5,565,332)和以下文献中公开的技术，例如，美国专利No.6,407,213、美国专利No.5,766,886、WO 9317105，Tan等人,J.Immunol.169:1119 25(2002)，Caldas等人,ProteinEng.13(5):353-60(2000)，Morea等人,Methods 20(3):267 79(2000)，Baca等人,J.Biol.Chem.272(16):10678-84(1997)，Roguska等人,Protein Eng.9(10):895 904(1996)，Couto等人,Cancer Res.55(23Supp):5973s-5977s(1995)，Couto等人,CancerRes.55(8):1717-22(1995)，Sandhu JS,Gene 150(2):409-10(1994)和Pedersen等人,J.Mol.Biol.235(3):959-73(1994)。还参见美国专利公开No.US 2005/0042664(2005年2月24日)，以上每篇文献以其全部内容作为参考并入本文。
可以使用(例如)Composite Human Antibody技术(Antitope Ltd.,Cambridge,United Kingdom)产生复合人抗体。为了产生复合人抗体，以避免T细胞表位的方式从多个人抗体可变区序列的片段设计可变区序列，借此最小化所得抗体的免疫原性。这些抗体可以包括人恒定区序列，例如，人轻链和/或重链恒定区。
去免疫化抗体是其中T细胞表位已除去的抗体。已描述了制备去免疫化抗体的方法。参见，例如，Jones等人,Methods Mol Biol.2009；525:405-23,xiv和De Groot等人,Cell.Immunol.244:148-153(2006))。去免疫化抗体包括T细胞表位-缺失的可变区和人恒定区。简要地，克隆抗体的VH和VL，并随后在T细胞增殖测定中通过测试来源于抗体的VH和VL的重叠肽来鉴别T细胞表位。通过计算机方法鉴别T细胞表位以鉴别结合至人II型MHC的肽。将突变引入所述VH和VL以终止和人II型MHC的结合。然后，使用突变的VH和VL产生去免疫化抗体。
本文所述的抗体可以是(例如)多重特异性，例如，双重特异性抗体。已描述了用于制备多重特异性(例如，双重特异性抗体)的方法，参见，例如，美国专利No.7951917、7183076、8227577、5837242、5989830、5869620、6132992和8586713。
可以通过本领域熟知的方法产生单域抗体，例如，缺少轻链的抗体。参见Riechmann等人，1999,J.Immunol.231:25-38；Nuttall等人,2000,Curr.Pharm.Biotechnol.1(3):253-263；Muylderman,2001,J.Biotechnol.74(4):277302；美国专利No.6,005,079；和国际专利公开No.WO 94/04678、WO 94/25591和WO 01/44301。
可以使用本领域中已知的任何方法生产人抗体。例如，可以使用不能表达功能性内源鼠科免疫球蛋白，但是可以表达人免疫球蛋白基因的熟知的转基因小鼠。作为另外一种选择，例如，可以使用如上所述的噬菌体展示技术。此外，在一些实施方式中，可以(例如)使用小鼠-人杂交瘤生产人抗体。例如，用埃-巴二氏病毒(EBV)转化的人末梢血淋巴细胞可以与小鼠骨髓瘤细胞融合以产生分泌人单克隆抗体的小鼠-人杂交瘤，并且可以筛选这些小鼠-人杂交瘤以确定分泌免疫特异性结合至靶标抗原(例如，人MET的ECD)的人单克隆抗体的那些。在本领域中已知并且描述了这些方法，参见，例如，Shinmoto等人,Cytotechnology,2004,46:19-23；Naganawa等人,Human Antibodies,2005,14:27-31。
5.3.1多核苷酸、细胞和载体
在某些方面，本文提供了包含编码本文所述的免疫特异性结合至MET抗原的抗体或其片段(例如，可变轻链区和/或可变重链区)的核苷酸序列的多核苷酸和载体，例如，包含在宿主细胞(例如，大肠杆菌(E.coli)和哺乳动物细胞)中用于重组表达的这些多核苷酸的载体。在某些方面，本文提供了细胞(例如，宿主细胞)。本文还提供了制备本文所述的抗体和抗原结合片段的方法。
在某些方面，本文提供了包含编码本文所述的抗体的轻链或重链的核苷酸序列的多核苷酸。在某些实施方式中，本文提供了包含编码本文所述的抗体的轻链和重链的核苷酸序列的多核苷酸。所述多核苷酸可以包含编码轻链的核苷酸序列，所述轻链包含VL FRs和本文所述的抗体的CDR(分别参见，例如，表1、5和7以及表3)。所述多核苷酸可以包含编码重链的核苷酸序列，所述重链包含VH FRs和本文所述的抗体的CDR(分别参见，例如，表2、6和8以及表4)。在具体的实施方式中，本文所述的多核苷酸编码包含SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62所示氨基酸序列的VL链区。在具体的实施方式中，本文所述的多核苷酸编码包含SEQ ID NO：63、64、65、66、67、68、69、70或71中任一个所示的氨基酸序列的VH链区。
在具体的实施方式中，本文提供了包含编码抗-MET抗体的核苷酸序列的多核苷酸，所述抗-MET抗体包含三个VL链CDR，例如，含有抗体Ab235-Ab255中任一个的VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3(例如，参见表1、5和7)。在具体的实施方式中，本文提供了包含三个VH链CDR，例如，含有抗体Ab235-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，参见表2、6和8)的多核苷酸。在具体的实施方式中，本文提供了包含编码抗-MET抗体的核苷酸序列的多核苷酸，所述抗-MET抗体包含三个VH链CDR，例如，含有抗体Ab235-Ab255中任一个的VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3(例如，参见表1、5和7)和三个VH链CDR，例如，含有抗体Ab235-Ab255中任一个的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(例如，参见表2、6和8)。
在具体的实施方式中，本文提供了包含编码抗-MET抗体的核苷酸序列的多核苷酸，所述抗-MET抗体包含VL链区，例如，含有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，并且包含本文所述的氨基酸序列(例如，参见表1、5和7或表3)。在具体的实施方式中，本文提供了包含编码抗-MET抗体的核苷酸序列的多核苷酸，所述抗-MET抗体包含VH链区，例如，含有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，并且包含本文所述的氨基酸序列(例如，参见表2、6和8或表4)。
在某些实施方式中，本文所述的多核苷酸包含编码本文所提供的抗体的核苷酸序列，其包含含有本文所述的氨基酸(例如，参见表9)的可变轻(VL)链区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190。
在某些实施方式中，本文所述的多核苷酸包含编码本文所提供的抗体的核苷酸序列，其包含含有本文所述的氨基酸序列(例如，参见表10)的可变重(VH)链区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ IDNO：190。
在某些方面，多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其包含含有具有本文所述的氨基酸序列(例如，参见表3)的一个或多个VL FR的VL链区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190。在某些方面，多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其包含含有具有本文所述的氨基酸序列(例如，参见表4)的一个或多个VH FR的VH链区，其中所述抗体免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190。
在具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其包含：作为人框架区的框架区(例如，VL域和VH域的框架区)，其中所述抗体免疫特异性结合MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190。
在某一实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含如表11或16所述的核苷酸序列，其分别编码本文所述的抗体的VH或VL，其免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190。
表11.VL核酸序列
表12.VH核酸序列
在某些实施方式中，本文所提供的多核苷酸可操作性地连接至用于在宿主细胞中表达这些多核苷酸序列的启动子。在某些实施方式中，所述启动子来源于哺乳动物细胞的基因组(例如，金属硫蛋白启动子)或者来自哺乳动物病毒(例如，腺病毒晚期启动子、牛痘病毒7.5K启动子)。在具体的实施方式中，编码本文所述的抗体的核苷酸序列的表达是通过组成型启动子、诱导型启动子或组织特异性启动子调控的。
在具体的方面，本文提供了包含编码抗体的核苷酸序列的多核苷酸，所述抗体包含轻链和重链，例如，单独的轻链和重链。就轻链而言，在具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码κ轻链的核苷酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码λ轻链的核苷酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，本文所述的抗体包含人κ轻链或人λ轻链。在具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190，其中所述抗体包含轻链，并且其中所述VL链区的氨基酸序列可以包含本文所述的任意氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62)，并且其中所述轻链恒定区包含人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在另一种具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190，并且包含轻链，其中所述VL链区的氨基酸序列可以包含本文所述的任意氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62)，并且其中所述轻链恒定区包含人λ轻链恒定区的氨基酸序列。例如，人恒定区序列可以是美国专利No.5,693,780中所述的那些。
在具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190，其中所述抗体包含重链，其中所述VH链区的氨基酸序列可以包含本文所述的任意氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63、64、65、66、67、68、69、70或71)，并且其中所述重链恒定区包含人γ重链恒定区，例如，人γ1重链恒定区、人γ2重链恒定区、人γ3重链恒定区或人γ4重链恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体的核苷酸序列，其免疫特异性结合至MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如SEQ ID NO：190，其中所述抗体包含重链，其中所述VH链区的氨基酸序列可以包含任何本文所述的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：63、64、65、66、67、68、69、70或71)，并且其中所述重链的恒定区包含人γ2重链恒定区，例如，人γ2a和/或2b重链恒定区的氨基酸序列。
在另一种具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体(或其抗原-结合片段)的核苷酸序列，其免疫特异性结合MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190，其中所述抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含人IgG1(例如，同种型a、z或f)或者人IgG4的恒定区的氨基酸序列。
在另一种具体的实施方式中，本文所提供的多核苷酸包含编码本文所述的抗体(或其抗原-结合片段)的核苷酸序列，其免疫特异性结合MET多肽，例如，人MET多肽，例如，MET(例如，人MET)的ECD，例如，SEQ ID NO：190，其中所述抗体包含含有本文所述的任意氨基酸序列的VL链区和VH链区，并且其中所述恒定区包含人IgG2(例如，人IgG2a或人IgG2b)的恒定区的氨基酸序列。在具体的实施方式中，所述恒定区具有人IgG2α同种型(例如，人IgG2a)。在具体的实施方式中，所述恒定区具有人IgG2β同种型(例如人IgG2b)。在具体的实施方式中所述恒定区为人IgG2a和人IgG2b同种型的混合物。
在具体的实施方式中，本文提供了包含编码抗-MET抗体或其抗原结合片段或结合域(如本文所示，参见，例如，表1-10，例如，抗体Ab235-Ab255)的核苷酸序列的多核苷酸。
本文还提供了通过(例如)密码子/RNA优化、用异源信号序列替代和mRNA不稳定性元件去除优化的编码抗-MET抗体或其片段的多核苷酸。因此，可以通过调整(例如)美国专利No.5,965,726；6,174,666；6,291,664；6,414,132；和6,794,498中所述的优化方法来实施通过引入密码子变化和/或消除mRNA中的抑制区产生用于重组表达的编码抗-MET抗体或其片段(例如，轻链、重链、VH域或VL域)的优化核酸的方法。例如，可以使RNA内潜在的拼接位点和不稳定性元件(例如，A/T或A/U富含元件)突变，但不改变所述核酸序列所编码的氨基酸来提高用于重组表达的RNA的稳定性。所述改变使用了遗传密码的简并度，例如，使用了相同氨基酸的替代密码子。在一些实施方式中，可以期望改变编码保守突变的一个或多个密码子，例如，与原始氨基酸具有类似化学结构和性质和/或功能的类似氨基酸。相对于未优化的多核苷酸所编码的抗-MET抗体的表达，这些方法可以将抗-MET抗体或其片段的表达提高至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍或更多倍。
可以通过本领域中已知的任何方法产生本文所述的多核苷酸以及所确定的多核苷酸的核苷酸序列。可以使用本领域中熟知的方法确定编码本文所述的抗体，例如，包含表1-10中所述序列并且任选地包含恒定区序列，例如，人恒定区序列的抗体的核苷酸序列，例如，可以以这种方式鉴别并组装已知编码特定氨基酸的核苷酸密码子以产生编码所述抗体的核酸。可以从化学合成的寡核苷酸(例如，如Kutmeier等人,1994,BioTechniques17:242中所述)组装编码抗体的这种多核苷酸，简要地，它包括含有编码所述抗体的序列的部分的重叠寡核苷酸的合成、那些寡核苷酸的退火和连接，然后通过PCR扩增连接的寡核苷酸。作为另外一种选择，可以使用本领域中熟知的方法(例如，PCR及其他分子克隆方法)从核酸产生编码本文所述的抗体的多核苷酸。
5.3.2细胞和载体
在某些方面，本文提供了表达(例如，重组表达)特异性结合至人MET的ECD的本文所述的抗体(或其抗原-结合片段)的细胞(例如，宿主细胞)和相关多核苷酸和表达载体。本文提供了包含含有用于在宿主细胞，优选地在哺乳动物细胞中重组表达的编码抗-MET抗体或片段的核苷酸序列的多核苷酸的载体(例如，表达载体)。本文还提供了包含用于重组表达本文所述的抗-MET抗体(例如，人或人源化抗体)的这些载体的宿主细胞。在具体的方面，本文提供了产生本文所述的抗体的方法，其包括从宿主细胞表达该抗体。
特异性结合至人MET的ECD的本文所述的抗体(例如，全长抗体、抗体的重和/或轻链或本文所述的单链抗体)的重组表达包括构建含有编码所述抗体的多核苷酸的表达载体。一旦获得本文所述的编码抗体分子、抗体的重和/或轻链或其片段(例如，重和/或轻链可变域)的多核苷酸，则可以使用本领域熟知的技术通过DNA重组技术产生用于所述抗体分子生产的载体。因此，本文描述了通过表达含有抗体或抗体片段(例如，轻链或重链)编码核苷酸序列的多核苷酸用于制备蛋白质的方法。可以使用本领域技术人员熟知的方法构建含有抗体或抗体片段(例如，轻链或重链)的编码序列和适当的转录和翻译控制信号的表达载体。这些方法包括(例如)体外重组DNA技术、合成技术和体内基因重组。还提供了包含可操作性地连接至启动子的编码本文所述的抗体分子、抗体的重链或轻链、抗体的重链或轻链可变域或其片段或重链或轻链CDR的核苷酸序列的可复制载体。这些载体可以(例如)包括编码抗体分子恒定区的核苷酸序列(参见，例如，国际专利公开No.WO 86/05807和WO 89/01036；和美国专利No.5,122,464)并且可以将抗体的可变域克隆到该载体中用于表达整个重链、整个轻链或者重链和轻链两者。
可以通过常规方法将表达载体转移到细胞(例如，宿主细胞)中，并且然后可以通过常规方法培养所得细胞以产生本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体)或其片段。因此，本文提供了含有可操作性地连接至启动子的编码本文所述的抗体或其片段，或其重链或轻链，或其片段，或本文所述的单链抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的多核苷酸的宿主细胞以用于在所述宿主细胞中表达这些序列。在某些实施方式中，对于双链抗体的表达，可以在用于表达整个免疫球蛋白分子的宿主细胞中分别共表达编码重链和轻链两者的载体，如下详述。在某些实施方式中，宿主细胞含有包含编码本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的重链和轻链两者或其片段的多核苷酸的载体。在具体的实施方式中，宿主细胞含有两个不同的载体，第一载体包含编码本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的重链或重链可变区或其片段的多核苷酸，并且第二载体包含编码本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的轻链或轻链可变区或其片段的多核苷酸。在其他实施方式中，第一宿主细胞包含含有编码本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的重链或重链可变区或其片段的多核苷酸的第一载体，并且第二宿主细胞包含含有编码本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的轻链或轻链可变区的多核苷酸的第二载体。在具体的实施方式中，通过第一细胞表达的重链/重链可变区与第二细胞的轻链/轻链可变区结合以形成本文所述的抗-MET抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段。在某些实施方式中，本文提供了包含该第一宿主细胞和该第二宿主细胞的宿主细胞群体。
在具体的实施方式中，本文提供了包含含有编码本文所述的抗-MET抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的轻链/轻链可变区的多核苷酸的第一载体，和含有编码本文所述的抗-MET抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)的重链/重链可变区的多核苷酸的第二载体的载体群体。
可以使用多种宿主-表达载体系统以表达本文所述的抗体分子(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)(参见，例如，美国专利No.5,807,715)。这些宿主-表达系统代表了可以通过其产生并随后纯化所关心的编码序列的媒介，其还代表了当被合适的核苷酸编码序列转化或转染时可以原位表达本文所述的抗体分子的细胞。这些包括(但不限于)微生物，如用含有抗体编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化的细菌(例如，大肠杆菌(E.coli)和枯草芽孢杆菌(B.subtilis))；用含有抗体编码序列的重组酵母表达载体转化的酵母(例如，毕赤氏酵母(Saccharomyces Pichia))；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)感染的昆虫细胞系统；用含有抗体编码序列的重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒，CaMV；烟草花叶病毒，TMV)感染的或用含有抗体编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化的植物细胞系统(例如，绿藻，如莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii))；或者具有含有来源于哺乳动物细胞基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或者来源于哺乳动物病毒的启动子(例如，腺病毒晚期启动子；牛痘病毒7.5K启动子)的重组表达构建体的哺乳动物细胞系统(例如，COS、CHO、BHK、MDCK、HEK、293、NS0、PER.C6、VERO、CRL7O3O、HsS78Bst、HeLa和NIH 3T3细胞)。在具体的实施方式中，用于表达本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段的细胞为CHO细胞，例如，来自CHO GS System(Lonza)的CHO细胞。在具体的实施方式中，哺乳动物表达载体为pOptiVEC或pcDNA3.3。在具体的实施方式中，特别是对完整重组抗体分子的表达，将细菌细胞(如大肠杆菌(Escherichia coli))或真核细胞(例如，哺乳动物细胞)用于表达重组抗体分子。例如，与载体(如来源于人巨细胞病毒的主要中间早期基因启动子元件)一起使用的哺乳动物细胞(如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞)是抗体的有效表达系统(Foecking等人,1986,Gene 45:101；和Cockett等人,1990,Bio/Technology 8:2)。在某些实施方式中，通过CHO细胞或NS0细胞产生了本文所述的抗体。在具体的实施方式中，编码免疫特异性结合至MET的ECD的本文所述的抗体的核苷酸序列的表达是通过组成型启动子、诱导型启动子或组织特异性启动子调控的。
在细菌系统中，根据表达的抗体分子的预期用途，可有利地选择一些表达载体。例如，当为了产生抗体分子的药物组合物而生产大量的这种抗体时，指导表达易于纯化的高水平的融合蛋白产物的载体可以是期望的。这些载体包括(但不限于)大肠杆菌(E.coli)表达载体pUR278(Ruther等人,1983,EMBO 12:1791)，其中抗体编码序列可以与lac Z编码区符合读框地单独连接入载体中以产生融合蛋白；pIN载体(Inouye&Inouye,1985,NucleicAcids Res.13:3101-3109；Van Heeke&Schuster,1989,J.Biol.Chem.24:5503-5509)；等。例如，pGEX载体还可以用于表达作为具有谷胱甘肽5-转移酶(GST)的融合蛋白的外源多肽。一般地，这些融合蛋白是可溶的，并且可以通过吸附和结合至谷胱甘肽-琼脂糖珠基质上，然后在游离谷胱甘肽存在的情况下洗脱而从裂解的细胞中容易地纯化。pGEX载体设计以包括凝血酶或Xa因子蛋白酶切割位点，从而使克隆的靶标基因产物可以从GST部分上释放。
在昆虫系统中，例如，苜猜银纹夜蛾(Autographa californica)核型多角体病毒(AcNPV)可以用作表达外源基因的载体。病毒在草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞中生长。抗体编码序列可以单独克隆入病毒的非核心区(例如，多角体蛋白基因)，并且置于AcNPV启动子(例如，多角体蛋白启动子)的控制之下。
在哺乳动物宿主细胞中，可以使用一些病毒基表达系统。在腺病毒用作表达载体的情况下，所关心的抗体编码序列可以与腺病毒转录/翻译控制复合物(例如，晚期启动子和三联前导序列)连接。然后，可以通过体外或体内重组将该嵌合基因插入到腺病毒基因组中。向病毒基因组的非必需区(例如，El或E3区)的插入将产生存活并能够在感染宿主内表达抗体分子的重组病毒(例如，参见，Logan&Shenk,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8 1:355-359)。对于插入的抗体编码序列的有效翻译，还可能需要特定的起始信号。这些信号包括ATG起始密码子和相邻序列。此外，起始密码子必须与期望的编码序列的阅读框相符，以确保整个插入部分的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以是多种来源的，是天然的和合成的。可以通过包含适当的转录增强子元件、转录终止子等来提高表达效率。(参见，例如，Bittner等人,1987,Methods in Enzymol.153:51-544)。
另外，可以选择宿主细胞株，其调节插入序列的表达，或以希望的具体方式修饰和加工基因产物。对于蛋白质的功能来说，蛋白质产物的这些修饰(例如，糖基化作用)和加工(例如，可切割性)可以是重要的。不同的宿主细胞具有蛋白和基因产物的翻译后加工和修饰的特性和特定机制。可以选择合适的细胞系或宿主系统来确保表达的外源蛋白的正确修饰和加工。为了这个目的，可以使用真核宿主细胞，其具有能够适当加工基因产物的初级转录本、糖基化和磷酸化的细胞体系。这些哺乳动物宿主细胞包括(但不限于)CHO、VERO、BHK、HeLa、COS、MDCK、HEK 293、NIH 3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O和T47D、NS0(不会内源产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7O3O和HsS78Bst细胞。在某些实施方式中，在哺乳动物细胞，如CHO细胞中生产本文所述的抗-MET抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)。
对于重组蛋白质的长期、高产量制备，可以产生稳定的表达细胞。例如，可以工程设计稳定表达本文所述的抗-MET抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段的细胞系。在具体的实施方式中，本文所提供的细胞稳定表达结合以形成本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段的轻链/轻链可变区和重链/重链可变区。
在某些方面，可以用被合适的表达控制元件(例如，启动子、增强子、序列、转录终止子、多腺苷酸化位点等)控制的DNA和可选择标志物转化宿主细胞，而不使用包含病毒复制起点的表达载体。引入外源DNA/多核苷酸后，可以让工程细胞在富集培养基中生长1-2天，然后转换到选择性培养基。重组质粒中的可选择标志物赋予了选择抗性，并且允许细胞在其染色体中稳定整合质粒并生长以形成灶，其继而可以被克隆并扩增成细胞系。该方法可以有利地用于表达本文所述的抗-MET抗体或其片段的工程细胞系。这些工程细胞系可以具体地用于筛选和评价直接或间接与抗体分子相互作用的组合物。
可以使用一些选择系统，其包括(但不限于)单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人,1977,Cell 11:223)、黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Szybalska&Szybalski,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:202)和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等人,1980,Cell 22:8-17)基因，它们可以分别用于tk-、hgprt-或aprt-细胞。另外，抗代谢物抗性可用作选择下列基因的基础：dhfr，其赋予甲氨蝶呤抗性(Wigler等人,1980,Natl.Acad.Sci.USA 77:357；O’Hare等人,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:1527)；gpt，其赋予麦考酚酸抗性(Mulligan&Berg,1981，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:2072)；neo，其赋予氨基糖苷G-418抗性(Wu和Wu,1991,Biotherapy3:87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32:573-596；Mulligan,1993,Science 260:926-932；和Morgan和Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62:191-217；May,1993,TIB TECH 11(5):l55-2 15)；和hygro，其赋予潮霉素抗性(Santerre等人,1984,Gene 30:147)。可以将DNA重组技术领域中通常已知的方法常规地应用于选择所需的重组克隆，并且在以下文献中描述了这些方法，例如，Ausubel等人(主编),Current Protocols in Molecular Biology,JohnWiley&Sons,NY(1993)；Kriegler,Gene Transfer and Expression,A LaboratoryManual,Stockton Press,NY(1990)；和在第12和13章,Dracopoli等人(主编),Current Protocols in Human Genetics,John Wiley&Sons,NY(1994)；Colberre-Garapin等人,1981,J.Mol.Biol.150:1，以上文献以其全部内容作为参考并入本文。
可以通过载体扩增提高抗体分子的表达水平(对于综述，参见Bebbington和Hentschel,The use of vectors based on gene amplification for the expressionof cloned genes in mammalian cells in DNA cloning,第3卷(Academic Press,NewYork,1987))。当表达抗体的载体系统中的标志物是可扩增的时，宿主细胞培养中存在的抑制剂水平的提高将提高标志物基因的拷贝数。由于扩增区域与抗体基因有关，因此抗体的产生也将提高(Crouse等人,1983,Mol.Cell.Biol.3:257)。
宿主细胞可以与本文所述的两种或更多种表达载体共转染，其中第一载体编码重链来源的多肽，第二载体编码轻链来源的多肽。两个载体可以含有相同的可选择标志物，其使得重链和轻链多肽同等表达。所述宿主细胞可以与不同量的两种或更多种表达载体共转染。例如，可以以第一表达载体和第二表达载体的以下比值中的任一个转染宿主细胞：1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:12、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45或1:50。
作为另外一种选择，可以使用单一载体，其编码并且能够表达重链和轻链多肽两者。在这种情况下，应将轻链放置在重链之前以避免无毒重链的过量(Proudfoot，1986,Nature 322:52；和Kohler,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:2197-2199)。重链和轻链的编码序列可以包含cDNA或基因组DNA。所述表达载体可以是单顺反子或多顺反子的。多顺反子核酸构建体可以编码2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个，或者范围在2-5、5-10或10-20个基因/核苷酸序列。例如，双顺反子核酸构建体可以按以下顺序包含启动子、第一基因(例如，本文所述的抗体的重链)和第二基因(例如，本文所述的抗体的轻链)。在该表达载体中，可以通过启动子驱动两个基因的转录，而来自第一基因的mRNA的翻译可以是通过帽依赖性扫描机制(cap-dependent scanning mechanism)，来自第二基因的mRNA的翻译可以是通过帽非依赖性机制，例如，通过IRES。
一旦通过重组表达产生了本文所述的抗体分子，则可以通过本领域中已知的用于免疫球蛋白分子纯化的任何方法，例如，通过色谱法(例如，离子交换色谱、亲合色谱，具体地，通过蛋白A后对特定抗原的亲合力，和分选柱色谱法)、离心、差异溶解度或通过蛋白纯化的任何其他标准技术进行纯化。此外，可以将本文所述的抗体融合至本文所述的或本领域中已知的异源多肽序列以有利于纯化。
在具体的实施方式中，分离或纯化了本文所述的抗体或抗原-结合片段。通常，分离的抗体是基本不含具有与该分离的抗体不同的抗原特异性的其他抗体的抗体。例如，在具体的实施方式中，本文所述的抗体的制备物基本不含细胞材料和/或化学前体。语言“基本不含细胞材料”包括抗体制剂，其中该抗体与从中分离或重组产生该抗体的细胞的细胞组分相分离。因此，基本不含细胞材料的抗体包括具有小于约30％、20％、10％、5％、2％、1％、0.5％或0.1％(以干重计)的异源蛋白(在本文中也称为“污染蛋白”)和/或抗体变体(例如，抗体不同的翻译后修饰形式或抗体的其他不同形式(例如，抗体片段))的抗体制剂。当所述抗体经重组产生时，它通常还基本不含培养基，即培养基占蛋白制剂体积的小于约20％、10％、2％、1％、0.5％或0.1％。当通过化学合成产生抗体时，所述抗体通常基本不含化学前体或其他化学物质，即它与蛋白合成中涉及的化学前体或其他化学物质分离。因此，所述抗体制剂具有小于约30％、20％、10％或5％(以干重计)的化学前体或除所关心的抗体以外的化合物。在具体的实施方式中，分离或纯化了本文所述的抗体。
5.4药物组合物和试剂盒
本文提供了包含一种或多种本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗-MET抗体)或其抗原结合片段或其缀合物的组合物、药物组合物和试剂盒。在具体的方面，本文所述的组合物(例如，药物组合物)可以用于体外、体内或离体使用。所述使用的非限制性实例包括用于调节(例如，抑制或引起/提高)MET活性和用于控制或治疗病症，例如，癌症、免疫学病症(例如，自身免疫病或炎症)或血管病症。在具体的实施方式中，本文提供了包含本文所述的抗体(例如，人源化抗体)(或其抗原结合片段)和药物可用的载体或赋形剂的药物组合物。
如本文所使用的，术语“药物可用的”是指已被联邦或州政府的管理机构批准，或者在美国药典、欧洲药典或其他普遍认可的药典中列举的用于动物，并且更具体地用于人的。
可以制备含有一种或多种本文所提供的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段的制剂以用于通过将具有所需纯度的抗体与任选的生理学可用的载剂、赋形剂或稳定剂混合来进行储存(Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA；Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版,(2006)Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD)。这些制剂可以(例如)处于(例如)冻干制剂或水溶液的形式。适合于本文所提供的抗体施用的药物载体包括本领域技术人员所知的适合于特定施用形式的任何这些载体。可用的载剂、赋形剂或稳定剂在所使用的剂量和浓度下对受体是无毒的，并且包括缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；和/或非离子型表面活性剂，如TWEEN、PLURONICS或聚乙二醇(PEG)。
用于体内施用的制剂可以是无菌的。例如，这可以经通过(例如)无菌过滤膜的过滤来容易地实现。
在具体的方面，本文所提供的药物组合物含有在药物可用的载体中的治疗有效量的一种或多种本文所提供的抗体或抗原结合片段。这些药物组合物在本文所述的病况或病症或其一种或多种症状的预防、治疗、控制或改善中是有用的。
本文提供的组合物可以含有一种或多种本文所提供的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段。在一种实施方式中，提供了组合物，其中将本文所述的抗体或抗原结合片段配制成合适的药物制剂，如溶液剂、混悬剂、粉剂、缓释制剂或无菌溶液中的酏剂或用于肠胃外施用的混悬剂，或者经皮贴片制剂和干粉吸入剂。
在一种实施方式中，将本文提供的组合物配制用于单次剂量施用。为了配制组合物，将一定重量分数的化合物以有效浓度(使得所治疗的病况减轻、预防或者使一种或多种症状得到改善)溶解、混悬、分散或另外混合于所选的载剂中。
在某些方面，本文所提供的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)以对所治疗的患者足以发挥治疗有用的效果而不存在不需要的副作用或具有最小或可忽略的不需要的副作用的有效量包含在药物可用的载体中。
本文所提供的药物组合物中抗-MET抗体的浓度将取决于(例如)抗体的物理化学特性、剂量施用时间表和所施用的量以及本领域技术人员已知的其他因素。
提供了用于以单位剂量形式施用于人或动物(例如，哺乳动物)的本文所述的药物组合物，如含有适当的量的化合物或其药物可用的衍生物的无菌肠胃外(例如，静脉内)溶液或混悬液。还提供了用于以单元剂量形式施用于人和动物的药物组合物，如含有适当的量的抗-MET抗体或其药物可用的衍生物的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂和口服或鼻部溶液剂或混悬剂以及水包油乳液剂。在一种实施方式中，以单位剂量形式或多剂量形式配制和施用所述抗体。如本文所使用的单位剂量形式是指如本领域中已知的，适合人或动物(例如，哺乳动物)受试者并且单独包装的物理上分离的单元。每个单位剂量含有与所需的药物载体、媒介物或稀释剂相结合的足以产生所需治疗效果的预定量的抗-MET抗体。单位剂量形式的实例包括安瓿剂和注射剂以及单独包装的片剂或胶囊。可以部分或多次施用单位剂量形式。多剂量形式是包装在单个容器中以分离的单位剂量形式施用的多个相同的单位剂量形式。多剂量形式的实例包括小瓶、片剂或胶囊瓶或者瓶。因此，在具体的方面，多剂量形式是在包装中不分开的多个单位剂量。
在某些实施方式中，本文所述的一种或多种抗-MET抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段处于液体药物制剂形式。可以(例如)通过将抗体和任选的药物佐剂溶解、分散或另外混合在载体，如(例如)水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙二醇等中，从而借此形成溶液或混悬液来制备液体药物可施用的组合物。在某些实施方式中，要施用的本文所提供的药物组合物还可以含有少量无毒助剂物质，如润湿剂、乳化剂、增溶剂和pH缓冲剂等。
制备这些剂量形式的实际方法是已知的或对本领域技术人员是显而易见的；例如，参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA；Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版,(2006)Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD。
在一种实施方式中，肠胃外施用的特征在于注射，本文还考虑了皮下、肌内或静脉内注射。可以将注射剂按常规形式制备成液体溶液剂或混悬剂、适合于在注射前在液体中配制为溶液剂或混悬剂的固体形式，或制备成乳液剂。所述注射剂、溶液剂和乳液剂还含有一种或多种赋形剂。适合的赋形剂为(例如)水、盐水、葡萄糖、甘油或乙醇。其他施用途径可以包括经肠施用、脑内施用、经鼻施用、动脉内施用、心内施用、骨内输注、鞘内施用和腹膜内施用。
用于肠胃外施用的制剂包括待注射的无菌溶液、准备在使用前联合溶剂的无菌干燥可溶性产品(如冻干粉剂)，包括皮下片剂、待注射无菌悬液、准备使用前联合载体的无菌干燥不溶性产品，和无菌乳液。所述溶液可以是水溶液或非水溶液。
如果静脉内施用，则适合的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)和含有增稠剂和增溶剂(如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物)的溶液。
在胃肠外制剂中使用的药物可用的载体包括水性溶媒、非水性溶媒、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮和分散剂、乳化剂、掩蔽剂(sequesteringagent)或螯合剂(chelating agent)和其他药物可用的物质。
药物载剂还包括用于水溶性溶媒的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；和用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
在某些实施方式中，含有本文所述的抗-MET抗体或片段的无菌水溶液的静脉内或动脉内输注是有效的施用形式。另一种实施方式为根据需要注射以产生所期望的药理学效果的含有本文所述的抗-MET抗体的无菌水或油溶液剂或混悬剂。
在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体可以以微粒化或其他适合的形式混悬。所得混合物的形式取决于一些因素，包括预期施用形式和化合物在所选载体或媒介物中的溶解度。
在其他实施方式中，所述药物制剂为冻干粉剂，其可以作为溶液、乳液及其他混合物复原以用于施用。它们还可以复原和配制为固体或凝胶。
可以(例如)通过将本文所提供的抗-MET抗体在适合的溶剂中溶解来制备冻干粉剂。在一些实施方式中，所述冻干粉剂是无菌的。适合的溶剂可以含有赋形剂，其改善了粉剂或由该粉剂制备的复原溶液的稳定性或其他药理学组分。可以使用的赋形剂包括(但不限于)葡萄糖、山梨醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他适合的试剂。适合的溶剂还可以含有缓冲液，如柠檬酸盐、磷酸钠或钾或本领域技术人员已知的其他这种缓冲液，在一种实施方式中，其pH为约中性。在本领域技术人员已知的标准条件下冷冻干燥后，所述溶液的后续无菌过滤提供了制剂的实例。在一种实施方式中，将所得溶液分装至小瓶中用于冻干。冻干粉剂可以在适合条件下储存，如在约4℃至室温。
用注射用水复原该冻干粉剂提供了用于在肠胃外施用中使用的制剂。对于复原，将冻干粉剂加入至无菌水或其他适合的载体。
在某些方面，本文所提供的抗-MET抗体可以配制用于局部施用(localadministration)或局部施用(topical application)，如以凝胶剂、乳膏剂和洗剂的形式局部施用至皮肤和粘膜，如眼中，和应用于眼或用于脑池内或脊柱内应用。对于经皮递送并且还对于眼或粘膜的施用或对于吸入疗法，考虑了局部施用。还可以单独或与其他药物可用的赋形剂联合施用活性化合物的鼻用溶液剂。
还可以配制本文所提供的抗-MET抗体及其他组合物以靶向要治疗受试者的特定组织、器官或其他身体区域。对于本领域技术人员来说，众多这类靶向方法是熟知的。在本文中考虑了所有这些靶向方法在本发明的组合物中的使用。对于靶向方法的非限制性实例，参见，例如，美国专利No.6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874。在一些实施方式中，将本文所述的抗-MET抗体靶向(或另外施用)至视觉器官、骨髓、胃肠道、肺、脑或关节。在具体的实施方式中，本文所述的抗-MET抗体能够跨过血脑屏障。
本文提供了药物包装或试剂盒，其包含一个或多个容器，所述容器中装填了本文所述的药物组合物的一种或多种成分，如一种或多种本文所提供的抗-MET抗体。以管理药物或生物制品的生产、使用或销售的政府部门所规定的形式的报告书可以任选地与该容器相关，该报告书反映了用于人施用的生产、使用或销售部门的批准。
本文还提供了包含本文所述的一种或多种抗体或抗体片段的试剂盒。在一种实施方式中，试剂盒在一个或多个容器中包含本文所述的抗体或抗体片段。在具体的实施方式中，本文所述的试剂盒含有基本分离的MET抗原(例如，人MET的ECD)作为对照。在另一种具体的实施方式中，本文所述的试剂盒还包含不与MET抗原反应的对照抗体。在另一种具体的实施方式中，本文所述的试剂盒含有用于检测修饰抗体与MET抗原结合的一种或多种元件(例如，所述抗体可以缀合至可检测底物，如荧光化合物、酶促底物、放射性化合物或发光化合物，或者识别第一抗体的第二抗体可以缀合至可检测底物)。在具体的实施方式中，本文所提供的试剂盒可以包含重组产生或化学合成的MET抗原。在所述试剂盒中提供的MET抗原还可以连接至固体载体。在更具体的实施方式中，上述试剂盒的检测方式包括连接了MET抗原的固体载体。这种试剂盒还可以包含未连接的报告子-标记的抗人抗体或抗小鼠/大鼠抗体。在这一实施方式中，可以通过所述报告子-标记的抗体的结合来检测所述抗体与MET抗原的结合。
5.5使用和方法
在具体的方面，本文提供了用本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原结合片段调控MET活性的方法。在某些实施方式中，所述抗-MET抗体是MET拮抗剂。
在具体的实施方式中，本文提供了用作为MET拮抗剂的本文所述的抗-MET抗体抑制(例如，部分抑制)MET活性的方法。在某些实施方式中，本文提供了使用作为MET拮抗剂的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)控制或治疗病况或病症的方法。在某些实施方式中，本文提供了使用作为MET拮抗剂或抑制剂的本文所述的抗-MET抗体保护抵抗病况或病症的方法。
在具体的实施方式中，本文提供了控制、治疗、预防或保护受试者(例如，人受试者)抵抗癌症(例如，结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤)、转移或血管生成的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的特异性结合至人MET的ECD的本文所述的抗体(例如，包含抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体)或抗原结合片段。在某些实施方式中，本文提供了减轻、抑制或降低与癌症、转移或血管生成有关的一种或多种症状的发展或严重程度的方法。
在某些实施方式中，用于在本文所提供的方法中使用的抗-MET抗体或其抗原结合片段是包含(例如)如表1、2或5-8中所示的抗体Ab235-Ab255中任一个的CDR的抗体(例如，单克隆抗体，如人源化单克隆抗体)。在具体的实施方式中，抗-MET抗体抑制MET活性(例如，MET磷酸化、MET信号、细胞增殖抑制、配体结合至MET的抑制或者肿瘤生长抑制)。在具体的实施方式中，所述MET活性是MET-增强(例如，不依赖于配体)的MET活性。在具体的实施方式中，所述MET活性是配体-依赖性MET活性。在具体的实施方式中，所述MET活性是配体-依赖性和MET-增强(例如，不依赖于配体)的MET活性。
如本文所使用的，“施用”是指注射或另外物理递送物质(例如，本文所提供的人源化抗-MET抗体或其抗原-结合片段)至受试者或患者(例如，人)，如通过粘膜、局部、皮内、肠胃外、静脉内、皮下、肌内递送和/或任何其他本文所述的或本领域中已知的物理递送方法。
如本文所使用的，术语“有效量”或“治疗有效量”表示足以降低和/或改善给定病况、病症或疾病(例如，癌症、转移或血管生成)和/或与之相关的症状的严重程度和/或持续时间的疗法(例如，本文所提供的抗体或药物组合物)的量。这些术语还涵盖了降低、减缓或改善给定疾病的进展或发展、降低、减缓或改善给定疾病的复发、发展或发生和/或改善或提高另一种疗法(例如，除了本文所提供的抗-MET抗体之外的疗法)的预防或治疗效果所必需的量。在一些实施方式中，如本文所使用的“有效量”还指实现指定结果的本文所述的抗体的量。
如本文所使用的，在其他疗法的施用的背景中，术语“结合”是指不止一种疗法的使用。术语“组合”的使用不限制其中施用疗法的顺序。可以(例如)逐一、顺序、同时或附随地施用疗法。
如本文所使用的，术语“控制”表示不导致与MET有关的病况治愈的受试者得自疗法(例如，预防或治疗剂)的有益效果。在某些实施方式中，向受试者施用一种或多种疗法(例如，预防或治疗剂，如本文所述的抗体)以“控制”本文所述的病况或病症，其一种或多种症状，以防止病况或病症的发展或恶化。
如本文所使用的，术语“阻碍”在本文所提供的病况或病症(例如，自身免疫病、免疫学病症、癌症或炎症)的背景中是指由于本文所提供的疗法或疗法组合(例如，预防或治疗剂，如本文所述的抗体的组合)的施用所造成的本文所提供的病况或病症(例如，癌症、转移或血管生成)和/或与之相关的症状的发展、复发、发生或扩散的完全或部分抑制(例如，小于100％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％或5％)或阻止。
如本文所使用的，术语“副作用”涵盖了疗法(例如，预防或治疗剂)不希望的和不良的作用。不希望的作用不必需是不利的。疗法(例如，预防或治疗剂)的不利作用可以是有害的或不适的或危险的。副作用的实例包括腹泻、咳嗽、肠胃炎、喘息、恶心、呕吐、厌食、腹部绞痛、发烧、疼痛、体重减轻、脱水、脱发、呼吸困难、失眠、眩晕、粘膜炎、神经和肌肉作用、疲劳、口干燥和食欲不振、施用位点的皮疹或肿胀、流感样症状，如发烧、寒战和疲劳、消化道问题和过敏性反应。患者经受的其他不希望的作用是众多的并且是本领域中已知的。多种症状描述于Physician’s Desk Reference(第63版,2009)。
如本文所使用的，术语“受试者”和“患者”是可互换使用的。如本文所使用的，受试者为哺乳动物，如非灵长类(例如，牛、猪、马、猫、狗、山羊、兔、大鼠、小鼠等)或灵长类(例如，猴和人)，例如人。在一种实施方式中，所述受试者为诊断患有本文所提供的病况或病症(例如，癌症、转移或血管生成)的哺乳动物，例如，人。在另一种实施方式中，所述受试者为具有发展本文所提供的病况或病症(例如，癌症、转移或血管生成)风险的哺乳动物，例如，人。在某些实施方式中，所述受试者，如癌症受试者具有HGF的过表达。在具体的实施方式中，所述癌症的特征在于HGF的过表达。在另一种具体的实施方式中，所述受试者，如癌症受试者患有特征在于HGF过表达的肿瘤基质。在另一种实施方式中，所述受试者为人。
在某些实施方式中，受试者，例如，人受试者中MET增强。可以通过本领域的技术人员已知的测定，如(例如)定量反转录PCR、免疫印迹测定、DNA指纹、染色体组型(例如，通过彩色荧光原位杂交(mFISH))、比较基因组杂交和基因表达谱的绘制来进行来自受试者的样品中MET增强的鉴别。作为非限制性实例，可以使用测量存在于样品中的MET蛋白的量的免疫组织化学测定来鉴定肿瘤样品的蛋白质表达。在某些实施方式中，受试者中MET的增强导致产生了受试者细胞中不依赖于配体的MET信号。可以通过本领域的技术人员已知的测定，如(例如)定量反转录PCR或免疫印迹测定来进行受试者中不依赖于配体的MET信号的鉴别。例如，可以提取来自受试者的原代细胞并在存在和不存在MET配体(例如，HGF)的情况下培养，并且可以通过(例如)ELISA或免疫印迹评价MET下游信号事件，如(例如)MAPK和/或AKT的磷酸化。在某些实施方式中，受试者包含表达MET突变体，例如，组成型活性的MET突变体的细胞(例如，肿瘤细胞)。在某些实施方式中，受试者表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些实施方式中，受试者表达在MET氨基酸残基Thr1010处包含异亮氨酸氨基酸取代的MET蛋白。在某些实施方式中，受试者患有癌症，其中所述受试者中的癌细胞表达突变体MET，例如，组成型活性的突变体MET。在某些实施方式中，受试者患有癌症，其中所述受试者中的癌细胞表达包含人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个缺失的MET。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些实施方式中，受试者患有癌症，其中所述受试者中的癌细胞表达在MET氨基酸残基Thr1010处包含异亮氨酸氨基酸取代的MET蛋白。可以通过本领域的技术人员已知的测定，如(例如)DNA提取、互补DNA的产生和cDNA测序来进行来自受试者的样品中突变或缺失的鉴别。通过本领域的技术人员已知的方法，可以(例如)使用cDNA序列来获得翻译产物。可以通过(例如)将来自受试者的样品的序列与野生型和/或共有序列相比较来鉴别遗传缺失和氨基酸取代。
在某些实施方式中，在根据本文所提供的方法处理的受试者中MET增强。通过本领域的技术人员已知的测定，如(例如)定量反转录PCR或免疫印迹测定来进行来自受试者的样品中MET增强的鉴别。在某些实施方式中，受试者表达具有一个或多个氨基酸取代和/或缺失的EGFR，从而EGFR为组成型活性的。通过本领域的技术人员已知的测定，如(例如)DNA提取、互补DNA的产生和cDNA测序来进行来自受试者的样品中突变或缺失的鉴别。通过本领域的技术人员已知的方法，例如，使用cDNA序列来获得翻译产物。通过(例如)将来自受试者的样品的序列与野生型和/或共有序列相比较来鉴别遗传缺失和氨基酸取代。
如本文所使用的，术语“疗法”可以表示可以在病况或病症或其症状(例如，本文所提供的病况或病症(例如，癌症、转移或血管生成)或与之相关的一种或多种症状或病况)的预防、治疗、控制或改善中使用的任何规程、方法、组合物、制剂和/或试剂。在某些实施方式中，术语“疗法”表示在病况或病症或其一种或多种症状(例如，癌症、转移或血管生成或与之相关的一种或多种症状或病况)的治疗、控制、预防或改善中有用的药物疗法、佐剂疗法、放射、手术、生物学疗法、支持疗法和/或其他疗法。在某些实施方式中，术语“疗法”是指除了本文所述的抗-MET抗体或其药物组合物之外的疗法。在具体的实施方式中，“其他疗法”是指除了使用本文所述的抗-MET抗体或其药物组合物的治疗之外的疗法。在具体的实施方式中，疗法包括本文所述的抗-MET抗体作为佐剂疗法的使用。例如，结合药物疗法、生物学疗法、手术和/或支持疗法使用本文所述的抗-MET抗体。
本文提供了通过使用用作MET拮抗剂的本文所述的抗-MET抗体(例如，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254和Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)抑制MET活性来控制或治疗病况(例如，癌症、转移或血管生成)的方法。可以使用MET拮抗剂治疗或控制的病况的非限制性实例包括以下更详细描述的癌症(例如，结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤，如葡萄膜黑素瘤)。
本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中癌症(例如，结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤，如葡萄膜黑素瘤)的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在具体的实施方式中，该方法包括肿瘤生长、癌细胞增殖和癌细胞迁移的抑制。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中结肠直肠癌的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在具体的实施方式中，该方法包括肿瘤生长、癌细胞增殖和癌细胞迁移的抑制。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中胃癌的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在具体的实施方式中，该方法包括肿瘤生长、癌细胞增殖和癌细胞迁移的抑制。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中肺癌的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在具体的实施方式中，该方法包括肿瘤生长、癌细胞增殖和癌细胞迁移的抑制。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中特征为MET-增强的(例如，不依赖于配体)MET信号的癌症，如(例如)特征为MET增强的癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在具体的实施方式中，该方法包括肿瘤生长、癌细胞增殖和癌细胞迁移的抑制。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中黑素瘤(例如，BRAF-突变体黑素瘤)，如葡萄膜黑素瘤的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在具体的实施方式中，该方法包括肿瘤生长、癌细胞增殖和癌细胞迁移的抑制。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
可以在本文所提供的方法中控制、预防、保护抵抗或治疗的癌症的非限制性实例包括结肠直肠癌、胃癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌)、黑素瘤(例如，葡萄膜黑素瘤)、胃癌、食管癌、脑癌、肝癌、肾癌、头颈癌、甲状腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神经胶质瘤或淋巴癌。在某些实施方式中，所述癌症表达或过表达MET。在某些实施方式中，所述癌症表达包含突变的MET。在某些实施方式中，所述癌症表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个缺失的MET基因。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些实施方式中，所述癌症表达在MET氨基酸残基Thr1010处包含异亮氨酸氨基酸取代的MET。在某些实施方式中，所述癌症是BRAF突变，例如，BRAF V600E或V600K。在某些实施方式中，所述癌症是具有BRAF突变，例如，BRAF V600E或V600K的黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症表达或过表达EGFR。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在一个方面，本文提供了控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中转移(例如，与结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤有关的转移)的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
在具体的实施方式中，本文提供了抑制或降低受试者中肿瘤生长或癌症(例如，结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤)细胞增殖的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET活性或者抑制或减少MET表达。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
在具体的实施方式中，本文提供了治疗受试者中癌症(例如，结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤，如葡萄膜黑素瘤)的方法，其包括向对其有需要的受试者施用(例如，同时或顺序施用)(i)本文所述的特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体；参见，例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原结合片段，和(ii)另一种抗癌剂。在某些实施方式中，所述抗癌剂是化疗剂(例如，微管解聚阻断剂、抗代谢物、局部异构酶抑制剂和DNA交联剂或损害剂)。在某些实施方式中，所述抗癌剂是酪氨酸激酶抑制剂(例如，GLEEVEC(伊马替尼甲磺酸盐)或SUTENT(SU11248或舒尼替尼))。酪氨酸激酶抑制剂的其他非限制性实例包括AMG706(莫替沙尼)、RAD00I、PKC412、吉非替尼(IRESSA)、厄洛替尼(TARCEVA)、索拉非尼(NEXAVAR)、帕唑帕尼(VOTRIENT)、阿西替尼、博舒替尼、西地尼布(RECENTIN)、SPRYCEL(达沙替尼)、拉帕替尼(TYKERB)、来他替尼、来那替尼、尼罗替尼(TASIGNA)、司马沙尼(semaxanib)、托西尼布(PALLADIA)、凡德他尼(ZACTIMA)和瓦他拉尼。在某些实施方式中，所述抗癌剂是EGFR抑制剂。在某些实施方式中，所述EGFR抑制剂是西妥昔单抗、厄洛替尼、吉非替尼或AZD9291。在某些实施方式中，所述抗癌剂是BRAF抑制剂。在某些实施方式中，所述BRAF抑制剂是威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(DaiichiSankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些实施方式中，所述抗癌剂是MEK抑制剂。在某些实施方式中，所述MEK抑制剂是司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些实施方式中，所述抗癌剂是组蛋白去乙酰化酶抑制剂(例如，伏立诺他或辛二酰苯胺氧肟酸(SAHA))。在某些实施方式中，所述抗癌剂是抗生长因子受体抗体(例如，抗EGFR抗体、抗VEGFR抗体或抗KIT抗体)或抗生长因子抗体(例如，抗EGF抗体、抗VEGF抗体)。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
在具体的实施方式中，本文提供了抑制对其有需要的受试者中血管生成的方法，其包括向对其有需要的受试者施用(例如，同时或顺序施用)(i)本文所述的特异性结合至人MET的ECD并且抑制MET的抗体(例如，抗体Ab221、Ab224、Ab225和Ab227-Ab234，例如，Ab227-Ab230、Ab233和Ab234中的任一个，或者包含抗体Ab221、Ab224、Ab225和Ab227-Ab234，例如，Ab227-Ab230、Ab233和Ab234中的任一个的CDR的抗体)或其抗原结合片段，和(ii)抗血管原试剂，如(例如)和抗VEGF抗体。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2b恒定区的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述抗体的恒定区包含人IgG2a和人IgG2b的混合物的恒定区的氨基酸序列。
在一个方面，本文提供了使诊断为癌症的受试者对EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在具体的方面，本文提供了使诊断为癌症的受试者对EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)和EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)。在具体的方面，与抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)组合施用的EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)是所述受试者已耐受的相同EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)。在具体的方面，所述受试者已诊断患有EGFR-相关癌症，例如，表达EGFR的癌症或者包含EGFR突变的癌症。在具体的方面，所述受试者已诊断患有具有EGFR表达或过表达的癌症。在具体的方面，所述受试者已诊断患有具有突变的EGFR的癌症。在某些方面，所述受试者已诊断患有特征为EGFR表达的癌症。在某些方面，所述受试者已诊断患有特征为(i)EGFR表达和(ii)EGFR基因表达或增强或者EGFR过表达的癌症。在某些其他方面，本文所提供的方法包括测量EGFR的表达水平，例如，EGFR增强或者蛋白表达或过表达。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量EGFR的表达水平。在某些方面，本文所提供的方法包括测量EGFR的表达水平并且鉴别患有表达EGFR的癌症或者怀疑患有表达EGFR的癌症的受试者。在具体的方面，所述受试者先前已用EGFR-靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)治疗。在某些方面，所述受试者对使用EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)的治疗具有获得耐受性。在具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是西妥昔单抗。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是吉非替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是厄洛替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是AZD9291。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。在某些方面，相对于施用本文所述的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)之前的肿瘤生长或肿瘤细胞增殖，本文所述的用于使诊断患有癌症的受试者对EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)再敏感的方法实现了肿瘤生长或肿瘤细胞增殖至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的减少。用于鉴别对疗法的反应，如再敏感的方法的非限制性实例包括通过ELISA或类似测定测量EGFR的血清浓度、用于检查癌细胞存在的胸膜吸出液的细胞学检查和免疫组织化学测定。例如，本文所述的用于使诊断患有癌症的受试者对EGFR-靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)再敏感的方法实现了以下中的一种或多种：(i)胸膜液中癌细胞减少(例如)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％；(ii)积累的胸膜液的量减少；或者(iii)如通过ELISA或类似测定所确定的，EGFR的血清浓度减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在具体的方面，本文所述的使诊断患有癌症的受试者对EGFR-靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)再敏感的方法将以下中的一种或多种实现了至少约4周、8周、12周、16周、20周、24周、28周、32周、36周、40周、44周、48周、52周、60周、70周、80周、90周或100周：(i)胸膜液中癌细胞减少(例如)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％；(ii)积累的胸膜液的量减少；或者(iii)如通过ELISA或类似测定所确定的，EGFR的血清浓度减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是西妥昔单抗。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是吉非替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是厄洛替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是AZD9291。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌。
在一个方面，本文提供了使受试者中EGFR表达肿瘤或肿瘤细胞对EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是西妥昔单抗。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是吉非替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是厄洛替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是AZD9291。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在某些方面，本文所提供的方法，如控制或治疗癌症的方法还包括与本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)组合向所述受试者施用治疗有效量的EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)。在具体的方面，与抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)组合施用的EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)是所述受试者已耐受的相同EGFR靶向疗法。在一个方面，所述癌症鉴别为表达EGFR。在某些其他方面，本文所提供的方法包括测量EGFR的表达水平，例如，EGFR增强或者EGFR蛋白表达。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量EGFR的表达水平。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量EGFR的表达水平并且鉴别患有表达EGFR的癌症或者怀疑患有表达EGFR的癌症的受试者。在具体的方面，所述EGFR靶向疗法是西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291。在某些方面，所述癌症是非小细胞肺癌。在另一个方面，所述癌症是转移性的。在某些方面，例如，在用本文所述的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)治疗之前，通过本文所述的方法治疗或控制的癌症已鉴别为对使用抗EGFR抗体，如西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291的治疗耐受。在具体的方面，与所述抗体或其抗原结合片段同时施用所述EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)。在具体的方面，所述EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)和所述抗-MET抗体或其抗原结合片段是顺序施用的。在一个方面，在手术移除所述癌症的肿瘤后施用抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在某些方面，在手术移除所述癌症的肿瘤后施用所述EGFR靶向疗法(例如，西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291)和所述抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在某些方面，控制或治疗癌症的方法还包括向所述受试者施用西妥昔单抗、吉非替尼、厄洛替尼或AZD9291。在具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是西妥昔单抗。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是吉非替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是厄洛替尼。在另一种具体的实施方式中，所述EGFR靶向疗法是AZD9291。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在一个方面，本文提供了使诊断患有癌症的受试者对BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(DaiichiSankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在具体的方面，使诊断患有癌症的受试者对BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感的方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)和BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))。在具体的方面，与抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)组合施用的BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))是所述受试者已耐受的相同BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))。在具体的方面，所述受试者已诊断患有BRAF-相关癌症，例如，表达BRAF的癌症或者包含BRAF突变的癌症。在具体的方面，所述受试者已诊断患有具有BRAF表达或过表达的癌症。在具体的方面，所述受试者已诊断患有具有突变的BRAF的癌症。在某些方面，所述受试者已诊断患有特征为BRAF表达的癌症。在某些方面，所述受试者已诊断患有特征为(i)BRAF表达和(ii)BRAF基因表达或增强或者BRAF过表达的癌症。在某些其他方面，本文所提供的方法包括测量BRAF的表达水平，例如，BRAF增强或者蛋白表达或过表达。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量BRAF的表达水平。在某些方面，本文所提供的方法包括测量BRAF的表达水平并且鉴别患有表达BRAF的癌症或者怀疑患有表达BRAF的癌症的受试者。在具体的方面，所述受试者先前已用BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))治疗。在某些方面，所述受试者对使用BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))的治疗具有获得耐受性。在具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是威罗菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是达拉菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是恩可菲尼(encorafenib)(LGX818，Novartis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-4720。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-8394(DaiichiSankyo)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是CEP-32496(AmbitBiosciences)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是XL281(BMS-908662,Exelixis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在某些方面，相对于施用本文所述的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)之前的肿瘤生长或肿瘤细胞增殖，本文所述的用于使诊断患有癌症的受试者对BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(DaiichiSankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感的方法实现了肿瘤生长或肿瘤细胞增殖至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的减少。用于鉴别对疗法的反应，如再敏感的方法的非限制性实例包括通过ELISA或类似测定测量BRAF的血清浓度、用于检查癌细胞存在的皮肤活体组织检查的细胞学检查和免疫组织化学测定。例如，本文所述的用于使诊断患有癌症的受试者对BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(DaiichiSankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感的方法实现了以下中的一种或多种：(i)皮肤活体组织检查中癌细胞减少(例如)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％；(ii)积累的皮肤活体组织检查的量减少；或者(iii)如通过ELISA或类似测定所确定的，BRAF的血清浓度减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在具体的方面，本文所述的使诊断患有癌症的受试者对BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感的方法将以下中的一种或多种实现了至少约4周、8周、12周、16周、20周、24周、28周、32周、36周、40周、44周、48周、52周、60周、70周、80周、90周或100周：(i)皮肤活体组织检查中癌细胞减少(例如)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％；(ii)积累的皮肤活体组织检查的量减少；或者(iii)如通过ELISA或类似测定所确定的，BRAF的血清浓度减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是威罗菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是达拉菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是恩可菲尼(encorafenib)(LGX818，Novartis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-4720。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-8394(Daiichi Sankyo)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是CEP-32496(Ambit Biosciences)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是XL281(BMS-908662,Exelixis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在一个方面，本文提供了使受试者中BRAF表达肿瘤或肿瘤细胞对BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是威罗菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是达拉菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是恩可菲尼(encorafenib)(LGX818，Novartis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-4720。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-8394(DaiichiSankyo)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是CEP-32496(AmbitBiosciences)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是XL281(BMS-908662,Exelixis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在某些方面，本文所提供的方法，如控制或治疗癌症的方法还包括与本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)组合向所述受试者施用治疗有效量的BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))。在具体的方面，与抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)组合施用的BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(AmbitBiosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))是所述受试者已耐受的相同BRAF靶向疗法。在一个方面，所述癌症鉴别为表达BRAF。在某些其他方面，本文所提供的方法包括测量BRAF的表达水平，例如，BRAF增强或者BRAF蛋白表达。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量BRAF的表达水平。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量BRAF的表达水平并且鉴别患有表达BRAF的癌症或者怀疑患有表达BRAF的癌症的受试者。在具体的方面，所述BRAF靶向疗法是威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(AmbitBiosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些方面，所述癌症是黑素瘤。在另一个方面，所述癌症是转移性的。在某些方面，例如，在使用本文所述的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)治疗前，通过本文所述的方法治疗或控制的癌症已鉴别为对使用抗BRAF抗体的治疗耐受，所述抗BRAF抗体如威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(AmbitBiosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))。在具体的方面，与所述抗体或其抗原结合片段同时施用所述BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(DaiichiSankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))。在具体的方面，所述BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(AmbitBiosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))和所述抗-MET抗体或其抗原结合片段是顺序施用的。在一个方面，在手术移除所述癌症的肿瘤后施用抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如Ab235-Ab255)。在某些方面在手术移除所述癌症的肿瘤后施用所述BRAF靶向疗法(例如，威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(AmbitBiosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))和所述抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在某些方面，控制或治疗癌症的方法还包括向所述受试者施用威罗菲尼达拉菲尼恩可菲尼(encorafenib)(LGX818,novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis)。在具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是威罗菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是达拉菲尼在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是恩可菲尼(encorafenib)(LGX818，Novartis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-4720。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是PLX-8394(DaiichiSankyo)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是CEP-32496(AmbitBiosciences)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是XL281(BMS-908662,Exelixis)。在另一种具体的实施方式中，所述BRAF靶向疗法是RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在一个方面，本文提供了使诊断患有癌症的受试者对MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在具体的方面，使诊断患有癌症的受试者对MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)再敏感的方法包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)和MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(ArdeaBiosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(ArrayBioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)。在具体的方面，与抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)组合施用的MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)是所述受试者已耐受的相同MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(ArdeaBiosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(ArrayBioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)。在具体的方面，所述受试者已诊断患有MEK-相关癌症，例如，表达MEK的癌症或者包含MEK突变的癌症。在具体的方面，所述受试者已诊断患有具有MEK表达或过表达的癌症。在具体的方面，所述受试者已诊断患有具有突变的MEK的癌症。在某些方面，所述受试者已诊断患有特征为MEK表达的癌症。在某些方面，所述受试者已诊断患有特征为(i)MEK表达和(ii)MEK基因表达或增强或者MEK过表达的癌症。在某些其他方面，本文所提供的方法包括测量MEK的表达水平，例如，MEK增强或者蛋白表达或过表达。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量MEK的表达水平。在某些方面，本文所提供的方法包括测量MEK的表达水平并且鉴别患有表达MEK的癌症或者怀疑患有表达MEK的癌症的受试者。在具体的方面，所述受试者先前已用MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)治疗。在某些方面，所述受试者对使用MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)的治疗具有获得耐受性。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是E-6201(Eisai)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MEK-162(Novartis)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是TAK-733(TakedaPhamaceuticals)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是PD-0325901(Pfizer)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MSC2015103(EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述黑素瘤是葡萄膜黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在某些方面，相对于施用本文所述的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)之前的肿瘤生长或肿瘤细胞增殖，本文所述的用于使诊断患有癌症的受试者对MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)再敏感的方法实现了肿瘤生长或肿瘤细胞增殖至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％的减少。用于鉴别对疗法的反应，如再敏感的方法的非限制性实例包括通过ELISA或类似测定测量MEK的血清浓度、用于检查癌细胞存在的皮肤活体组织检查的细胞学检查和免疫组织化学测定。例如，本文所述的用于使诊断患有癌症的受试者对MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(ArdeaBiosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(ArrayBioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)再敏感的方法实现了以下中的一种或多种：(i)皮肤活体组织检查中癌细胞减少(例如)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％；(ii)积累的皮肤活体组织检查的量减少；或者(iii)如通过ELISA或类似测定所确定的，MEK的血清浓度减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在具体的方面，本文所述的使诊断患有癌症的受试者对MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(ArdeaBiosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(ArrayBioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)再敏感的方法将以下中的一种或多种实现了至少约4周、8周、12周、16周、20周、24周、28周、32周、36周、40周、44周、48周、52周、60周、70周、80周、90周或100周：(i)皮肤活体组织检查中癌细胞减少(例如)至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％；(ii)积累的皮肤活体组织检查的量减少；或者(iii)如通过ELISA或类似测定所确定的，MEK的血清浓度减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％或95％。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是E-6201(Eisai)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MEK-162(Novartis)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是TAK-733(Takeda Phamaceuticals)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是PD-0325901(Pfizer)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MSC2015103(EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述黑素瘤是葡萄膜黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在一个方面，本文提供了使受试者中MEK表达肿瘤或肿瘤细胞对MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)再敏感的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是E-6201(Eisai)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MEK-162(Novartis)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是TAK-733(TakedaPhamaceuticals)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是PD-0325901(Pfizer)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MSC2015103(EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述黑素瘤是葡萄膜黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
在某些方面，本文所提供的方法，如控制或治疗癌症的方法还包括与本文所述的抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)组合向所述受试者施用治疗有效量的MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在具体的方面，与抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)组合施用的MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)是所述受试者已耐受的相同MEK靶向疗法。在一个方面，所述癌症鉴别为表达MEK。在某些其他方面，本文所提供的方法包括测量MEK的表达水平，例如，MEK增强或者MEK蛋白表达。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量MEK的表达水平。在具体的方面，本文所提供的方法包括测量MEK的表达水平并且鉴别患有表达MEK的癌症或者怀疑患有表达MEK的癌症的受试者。在具体的方面，所述MEK靶向疗法是司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(ArdeaBiosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(ArrayBioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)。在某些方面，所述癌症是黑素瘤。在另一个方面，所述癌症是转移性的。在某些方面，例如，在使用本文所述的抗-MET抗体(例如，Ab235-Ab255)治疗前，通过本文所述的方法治疗或控制的癌症已鉴别为对使用抗MEK抗体的治疗耐受，所述抗MEK抗体如司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在具体的方面，与所述抗体或其抗原结合片段同时施用所述MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在具体的方面，所述MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(TakedaPhamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)和所述抗-MET抗体或其抗原结合片段是顺序施用的。在一个方面，在手术移除所述癌症的肿瘤后施用抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在某些方面，在手术移除所述癌症的肿瘤后施用所述MEK靶向疗法(例如，司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(ArdeaBiosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(ArrayBioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；ChugaiPharmaceuticals)和所述抗-MET抗体或其抗原结合片段(例如，Ab235-Ab255)。在某些方面，控制或治疗癌症的方法还包括向所述受试者施用司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)、雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是司美替尼(AZD6244,ARRY-142866,AstraZeneca)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是曲美替尼(MEKINIST；GlaxoSmithKline)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是雷法替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是E-6201(Eisai)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MEK-162(Novartis)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis,Roche)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是TAK-733(Takeda Phamaceuticals)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是比尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是PD-0325901(Pfizer)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是皮马瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是MSC2015103(EMDSerono)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是WX-554(Wilex)。在具体的实施方式中，所述MEK靶向疗法是RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些实施方式中，这些方法是控制方法。在某些实施方式中，这些方法是治疗方法。在某些实施方式中，所述癌症是黑素瘤。在某些实施方式中，所述黑素瘤是葡萄膜黑素瘤。在某些实施方式中，所述癌症是非小细胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些实施方式中，所述癌症是脑神经胶质瘤。在某些实施方式中，所述癌症是胃癌。在某些实施方式中，所述癌症包含表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变，例如，缺失的MET的癌细胞。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。在具体的实施方式中，人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中的一个或多个突变突变或移除了Tyr1003位点。
作为用于在本文所提供的方法中使用的MET拮抗剂的本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段能够抑制(例如，部分抑制)或者降低/减小MET表达和/或MET活性。MET的活性在本领域中是已知的。在具体的实施方式中，作为MET拮抗剂的本文所述的抗-MET抗体抑制(例如，部分抑制)以下MET活性中的一种或多种：MET受体(例如，MET的胞质域，如MET的胞质激酶域)磷酸化(例如，自磷酸化)、受体内化、受体降解、MET配体(例如，HGF)结合至MET受体、细胞迁移、细胞存活、MET受体均二聚化和下游信号通路(例如，MAPK级联、PI3K-Akt轴、STAT途径和NF-κB途径)。用于测量这些活性的方法在本领域中是已知的。
在具体的实施方式中，作为MET拮抗剂的本文所述的抗-MET抗体将一种或多种这些MET活性抑制(例如，部分抑制)至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、97％、98％、99％或100％。
5.5.1诊断使用
在一个方面，特异性结合至人MET的ECD的本文所述的抗-MET抗体及其抗原结合片段可以用于诊的目的以检测、诊断或监控本文所述的病况(例如，涉及MET和/或异常MET信号和/或异常MET表达的病况)，如癌症(例如，结肠直肠癌、胃癌、肺癌或黑素瘤)。在具体的实施方式中，标记用于诊的目的的本文所述的抗-MET抗体或其抗原-结合片段。本文所提供的用于诊的目的以检测、诊断或监控本文所述的病况的方法可以是体外法、原位法或离体法。本文所提供的用于诊的目的以检测、诊断或监控本文所述的病况的方法可以是体内法。
在某些实施方式中，本文提供了检测本文所述的病况，如癌症的方法，其包括：(a)使用本文所述的一种或多种抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段测定受试者样品中MET的表达；和(b)将MET表达水平与对照水平，例如，正常组织样品(例如，来自不具有本文所述的病况的患者或者来自病况发生前的相同患者)中的水平相比较，
其中与MET的对照表达水平相比，MET的测定表达水平的升高或降低指示了本文所述的病况。
在某些实施方式中，本文提供了检测表达MET(例如，过表达MET)的癌症的方法，其包括：
(a)使用本文所述的一种或多种抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段测定受试者样品中MET的表达；和
(b)将MET表达水平与对照水平，例如，正常样品(例如，来自不患有癌症的患者，患有不过表达MET的癌症的患者或者来自癌症发生前的相同患者)中的水平相比较。在具体的方面，与MET的对照表达水平相比，MET的测定表达水平的升高或降低指示了表达MET的癌症。
在具体的实施方式中，本文提供了诊断患者中MET-表达癌症的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a)将来自所述患者的生物样品与本文所述的一种或多种抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段接触；和
(b)检测所述抗体或抗原-结合片段与MET的结合以确定来自所述患者的生物样品中MET的蛋白水平；和
(c)将MET蛋白水平与标准MET蛋白水平相比较。
在具体的实施方式中，本文提供了在MET-表达癌症的治疗期间监控患者中MET蛋白水平的方法，其中所述方法包括以下步骤：
(a)将来自所述患者的生物样品与本文所述的一种或多种抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段接触；和
(c)检测所述抗体或抗原-结合片段与MET的结合以确定来自所述患者的生物样品中MET的蛋白水平；和
(d)将MET蛋白水平与标准MET蛋白水平相比较。
可以在本文所提供的诊断方法中使用来自受试者的任何样品(例如，体液或组织样品)。可以在本文所提供的诊断方法中使用的样品的非限制性实例包括血清样品、血浆样品、组织样品、尿样品、肿瘤样品和大便样品。
在一种实施方式中，本文描述了用于治疗患者中癌症(例如，非小细胞肺癌)的方法，其包括向患者施用治疗有效量的一种或多种本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段，其中所述患者具有肿瘤，所述肿瘤的特征在于来自所述肿瘤的细胞：i)表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一个或多个突变或缺失的MET受体。在某些实施方式中，来自所述肿瘤的细胞过表达MET受体。
在某些实施方式中，本文描述了用于确定诊断患有癌症(例如，非小细胞肺癌)的患者是否表示为可能对使用治疗有效量的一种或多种本文所述的抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或者包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段的治疗起反应的方法，其包括测量来自所述患者的肿瘤细胞的样品中MET受体的表达(例如，蛋白水平)，并且还包括确定所述肿瘤细胞是否表达在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一种或多种突变或缺失的MET受体；其中在人MET基因的外显子14(编码，例如，Leu964-Asp1010)中包含一种或多种突变或缺失的MET受体的表达表明诊断患有所述癌症的患者可能对治疗起反应。在某些实施方式中，所述用于确定的方法包括从所述患者获得来自肿瘤的样品的第一步。在某些实施方式中，所述方法包括向指明可能对治疗起反应的患者施用治疗有效量的本文所述的一种或多种抗体(例如，抗体Ab235-Ab255中的任一个或包含抗体Ab235-Ab255中的任一个的CDR的抗体)或其抗原-结合片段的其他步骤。
使用如本文所述的或如本领域技术人员所知的经典免疫组织学方法，本文所述的抗体可以用于测定生物样品中MET的水平(例如，参见，Jalkanen等人,1985,J.Cell.Biol.101:976-985；和Jalkanen等人,1987,J.Cell.Biol.105:3087-3096)。用于检测蛋白质基因表达的其他抗体基方法包括免疫测定，如酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA)。适合的抗体测定标记物是本领域已知的并且包括酶标记物，如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(121In)和锝(99Tc)；发光标记物，如氨基苯二酰肼；和荧光标记物，如荧光素和罗丹明，和生物素。
在一种实施方式中，通过在初始诊断后重复用于诊断的方法一段时间来进行本文所述的病况(例如，涉及MET和/或异常MET信号和/或异常MET表达的病况)，如癌症的监控。
可以使用本领域中已知的用于体内扫描的方法检测受试者中标记分子的存在。熟练的技术人员将能够确定用于检测特定标记物的适当方法。可以在本发明的诊断方法中使用的方法和装置包括(但不限于)计算机断层(CT)、全身扫描如正电子发射体层成像(PET)、磁共振成象(MRI)和声图描记法。
6.实施例
通过说明，而不是通过限制来提供本部分(即部分6)中的实施例。
6.1实施例1：抗-MET抗体的产生
6.1.1材料和方法
6.1.1.1抗-MET抗体的产生
特异性结合至人MET胞外域(ECD)的鼠科单克隆抗体，如小鼠和大鼠单克隆抗体得自用重组人MET-ECD免疫并使用杂交瘤技术产生杂交瘤克隆的小鼠和大鼠。将具有Fc标签的重组人MET-ECD(MET-ECD-Fc；Sinobiological(目录号#10692-H03H))或具有His标签的人MET-ECD(MET-ECD-His)用于免疫。以下是用于免疫的经过处理且未以ECD的成熟形式存在的具有C末端His标签和信号肽(氨基酸残基1-24)的人MET ECD(hu-MET-ECD)的氨基酸序列图示：
1 MKAPAVLAPG ILVLLFTLVQ RSNGECKEAL AKSEMNVNMK YQLPNFTAET PIQNVILHEH
61 HIFLGATNYI YVLNEEDLQK VAEYKTGPVL EHPDCFPCQD CSSKANLSGG VWKDNINMAL
121 VVDTYYDDQL ISCGSVNRGT CQRHVFPHNH TADIQSEVHC IFSPQIEEPS QCPDCVVSAL
181 GAKVLSSVKD RFINFFVGNT INSSYFPDHP LHSISVRRLK ETKDGFMFLT DQSYIDVLPE
241 FRDSYPIKYV HAFESNNFIY FLTVQRETLD AQTFHTRIIR FCSINSGLHS YMEMPLECIL
301 TEKRKKRSTK KEVFNILQAA YVSKPGAQLA RQIGASLNDD ILFGVFAQSK PDSAEPMDRS
361 AMCAFPIKYV NDFFNKIVNK NNVRCLQHFY GPNHEHCFNR TLLRNSSGCE ARRDEYRTEF
421 TTALQRVDLF MGQFSEVLLT SISTFIKGDL TIANLGTSEG RFMQVVVSRS GPSTPHVNFL
481 LDSHPVSPEV IVEHTLNQNG YTLVITGKKI TKIPLNGLGC RHFQSCSQCL SAPPFVQCGW
541 CHDKCVRSEE CLSGTWTQQI CLPAIYKVFP NSAPLEGGTR LTICGWDFGF RRNNKFDLKK
601 TRVLLGNESC TLTLSESTMN TLKCTVGPAM NKHFNMSIII SNGHGTTQYS TFSYVDPVIT
661 SISPKYGPMA GGTLLTLTGN YLNSGNSRHI SIGGKTCTLK SVSNSILECY TPAQTISTEF
721 AVKLKIDLAN RETSIFSYRE DPIVYEIHPT KSFISGGSTI TGVGKNLNSV SVPRMVINVH
781 EAGRNFTVAC QHRSNSEIIC CTTPSLQQLN LQLPLKTKAF FMLDGILSKY FDLIYVHNPV
841 FKPFEKPVMI SMGNENVLEI KGNDIDPEAV KGEVLKVGNK SCENIHLHSE AVLCTVPNDL
901 LKLNSELNIE WKQAISSTVL GKVIVQPDQN FTLEHHHHHH HH(SEQ ID NO：195)
简要地，用对应于hu-MET-ECD(无信号肽的成熟形式)的MET免疫原使Balb/c小鼠和Wistar大鼠免疫。免疫前，将hu-MET-ECD在弗氏完全佐剂中乳化。增强免疫也在弗氏不完全佐剂中乳化。
免疫后，通过ELISA确定抗体血清滴度，并进行细胞融合以产生杂交瘤细胞。对于细胞融合，脾脏细胞得自免疫小鼠和大鼠的脾。通过将淋巴细胞与NS0骨髓瘤融合伴侣细胞融合产生杂交瘤细胞。然后，对杂交瘤细胞筛选结合活性和拮抗剂活性，如通过HGF(MET配体)引起的MET磷酸化的抑制。
用IgG-特异性二抗进行初筛选以鉴别分泌IgG抗体的杂交瘤克隆。将所选样品扩增以用于进一步筛选。
通过ELISA对前亚克隆(Pre-subclones)进行二次筛选对MET免疫原(即人MET的ECD)的结合，并通过细胞基测定对其二次筛选MET磷酸化的阻断，以下部分将对这些内容进行更详细的描述。还对前亚克隆筛选MET磷酸化阻断活性和激动活性，其中选择具有高MET磷酸化阻断活性和低或无激动活性的克隆。对于每种筛选方法，对克隆排序并选择最好的克隆用于亚克隆。
通过ELISA测试亚克隆与hu-MET-ECD免疫原的结合，通过细胞基测定测试MET磷酸化的阻断，通过细胞基测定测试无或低激动活性，通过细胞基测定测试细胞增殖抑制并且通过细胞基测定测试细胞分散抑制。从这些筛选程序，鉴别小鼠IgG1κ同种型抗体和具有κ链或λ链的大鼠IgG2a抗体。
通过PCR方法获得这些小鼠和大鼠抗体的轻链和重链可变区序列。基于Kabat编号系统确定可变轻链区和可变重链区的序列以及CDR和框架区(FR)的序列。
产生了人源化抗体，如去免疫化抗体，例如，复合人抗体。因此，基于得自如上所述的筛选过程的大鼠/小鼠抗-MET抗体的VH和VL氨基酸序列，使用Composite HumanAntibody technology(Antitope Ltd.,Cambridge,United Kingdom)设计其他抗-MET抗体，如复合人抗体以产生具有复合人氨基酸序列的抗-MET抗体。选择三个重链可变区序列(H1、H2和H3)和五个轻链可变区序列(L1、L2、L3、L4和L5)用于基因合成，在哺乳动物细胞中表达并测试与人MET-ECD的直接结合以及阻断肝细胞生长因子(HGF)-引起的MET磷酸化的活性。
将编码H(重链)和L(轻链)可变区氨基酸序列的核酸分子直接克隆至人IgG1VH链和人Vκ链的表达载体。通过测序确认所有构建体。以不同组合将编码IgG1VH(H1-H3)和Vκ(L1-L5)链的载体转染到NS0细胞中以产生抗体。在收获直接在测定中使用或用于纯化的上清液前，将用非线性化DNA瞬时转染的细胞培育4天。使用线性化DNA进行稳定转染以建立表达所述抗体的细胞系，并随后进行药物选择。使用IgG1ELISA测试每个构建体的耐药性集落的上清液的IgG滴度，并基于上清液中超过背景(通常>0.1μg/ml)的IgG滴度选择最好的表达系，并在存在药物选择的情况下通过24-孔和6-孔板、T75和T175组织培养烧瓶扩增，并在每个阶段筛选IgG表达。通过考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE确认抗体表达。
基于这些方法，产生抗-MET抗体Ab235-Ab255。参见表9和10(分别为VL/VH氨基酸序列)以及表11和12(分别为VL-编码/VH-编码核酸序列)。
6.1.1.2通过荧光激活细胞分选术(“FACS”)的结合亲合力
根据生产商的说明，用Alexa 647(Invitrogen)标记抗体。用10mL 2mM EDTA在PBS中的溶液，从T175细胞除去A549细胞(人肺腺癌上皮细胞系)并用5mL PBS漂洗烧瓶。以1,200RPM使细胞旋转沉淀3分钟。将细胞在预冷的FACS缓冲液中再悬浮，并对细胞计数。然后，将细胞稀释至1×106个细胞/毫升，并在FACS缓冲液中在冰上培育1小时。将100μL细胞转移到U型底96孔板的孔中，并以1,200rpm使细胞成粒3分钟，弃去缓冲液。将抗体(100nM初始浓度)在FACS缓冲液中稀释。将50μL稀释的抗体加入至细胞，并将细胞在冰上培育4小时以使抗体结合达到平衡。以1,200rpm将细胞成粒3分钟，并弃去缓冲液。然后，用200μL FACS缓冲液清洗细胞4次(在4℃，以1,200rpm离心3分钟)。将细胞在100μL FACS缓冲液中再悬浮，并在Accuri-C6FACS仪上运行。通过GraphPad Prism软件，使用特异性结合程序对每个点的平均荧光强度作图，并计算结合亲合力。
6.1.1.3种特异性确定
根据生产商的说明，用Alexa 647(Invitrogen)标记抗体。用10mL 2mM EDTA在PBS中的溶液从T175细胞除去人(A549)、猴(4MBr5)、狗(MDCK)和小鼠(MS1)细胞，并用5mL PBS漂洗烧瓶。以1,200RPM使细胞旋转沉淀3分钟。将细胞在预冷的FACS缓冲液中再悬浮，并对细胞计数。然后，将细胞稀释至1×106个细胞/毫升，并在FACS缓冲液中在冰上培育1小时。将100μL细胞转移到U型底96孔板的孔中，并以1,200rpm使细胞成粒3分钟，弃去缓冲液。将Alexa-647-标记的抗体稀释至6nM的最终浓度。将50μL稀释的6nM Alexa-647-标记的抗体在冰上培育4小时以使抗体结合达到平衡。以1,200rpm将细胞成粒3分钟，并弃去缓冲液。然后，用200μL FACS缓冲液清洗细胞4次(在4℃，以1,200rpm离心3分钟)。将细胞在100μLFACS缓冲液中再悬浮，并在Accuri-C6FACS仪上运行。通过GraphPad Prism软件，使用特异性结合程序对每个点的平均荧光强度作图，并计算结合亲合力。
6.1.1.4 MET抗体结合域绘图
将5μg人cMET ECD，小鼠cMET ECD或人/小鼠嵌合体cMET ECD稀释至10mL硼酸盐缓冲液，将100μL加入至96孔板的每个孔中，并将板在4℃培育过夜。除去硼酸盐缓冲液，加入200μL封闭缓冲液并使其在室温下培育1小时。通过轻弹板除去封闭缓冲液至水槽，并将抗体稀释液或者阳性或阴性对照以100μL的体积加入至板中，并在室温下培育1小时，然后用TBST清洗3次。然后，将板与100μL/孔的在1％BSA TBST(0.05％吐温)中1:5000稀释的HRP-缀合的抗体在室温下培育1小时。然后，将板用TBST清洗3次，通过在纸巾上轻敲板除去残留的TBST。然后，如前所述测量发光性。
6.1.1.5评价与荧光标记抗体竞争的ELISA测定
根据生产商的说明，用Alexa 647(Invitrogen)标记抗体。用10mL 2mM EDTA在PBS中的溶液，从T175细胞除去A549细胞并用5mL PBS漂洗烧瓶。以1,200RPM使细胞旋转沉淀3分钟。将细胞在预冷的FACS缓冲液中再悬浮，并对细胞计数。然后，将细胞稀释至1×106个细胞/毫升，并在FACS缓冲液中在冰上培育1小时。将100μL细胞转移到U型底96孔板的孔中，并以1,200rpm使细胞成粒3分钟，弃去缓冲液。将抗体(600nM初始浓度)在FACS缓冲液中稀释，并将Alexa-647-标记的抗体稀释至6nM的最终浓度。将25μL稀释的6nM Alexa-647-标记的抗体和25μL未标记的稀释抗体以不同浓度加入至每个孔中，并将细胞在冰上培育4小时以使抗体结合达到平衡。以1,200rpm将细胞成粒3分钟，并弃去缓冲液。然后，用200μL FACS缓冲液清洗细胞4次(在4℃，以1,200rpm离心3分钟)。将细胞在100μL FACS缓冲液中再悬浮，并在Accuri-C6FACS仪上运行。通过GraphPad Prism软件，使用特异性结合程序对每个点的平均荧光强度作图，并计算结合亲合力。
6.1.1.6评价与抗体竞争的ELISA分析
通过竞争ELISA分析抗-MET抗体与重组MET胞外域(“MET-ECD”)的结合。在用MET-ECD-His预涂覆的板上在室温下培育1小时前，将测试抗体的4倍稀释系列(10μg/ml至0.0024μg/ml)与固定浓度的参比抗体(例如，Ab237C)(0.016μg/ml，最终浓度)预混合。用与HRP缀合的山羊抗大鼠IgG Fc(Bethyl产品目录号no.A110-236P)和TMB底物(ThermoScientific产品目录号no.34029)检测参比抗体的结合。用3M HCl终止反应，在DynexTechnologies MRX TC II酶标仪上在450nm读取吸光度，并对结合曲线作图。将结合曲线用于计算归一化为参比抗体IC50的每个测试抗体的IC50值。
6.1.1.7评价与抗体竞争的FACS分析
使用A549NSCLC细胞(ATCC产品目录号no.CCL-185)，通过竞争FACS分析来分析抗-MET抗体与细胞表面MET的结合。将测试抗体的4倍稀释系列(10μg/ml至0.0097μg/ml)与固定浓度的参比抗-MET抗体(例如，Ab237C抗体)(0.02μg/ml，最终浓度)在FACS缓冲液中预混合。每个抗体稀释加入总计3×105个A549NSCLC细胞，并在冰上培育1小时。清洗细胞，并在冰上培育1小时前，加入在FACS缓冲液中1:100稀释的PE-标记的山羊抗大鼠IgG抗体(BioLegend产品目录号no.405406)。清洗细胞，在300μL FACS缓冲液中再悬浮，并使用Beckton Dickinson FACScalibur分析参比抗-MET抗体(例如，Ab237C抗体)与A549细胞表达表面MET的结合。将几何平均荧光强度对抗体浓度作图。相对于参比抗体的IC50，计算每个测试抗体的IC50。
6.1.1.8 ELISA磷酸化分析
将A549细胞、肺癌细胞系或U87MG细胞、神经胶质瘤细胞系以25,000个细胞/孔(96孔板)的浓度接种，并在标准条件下(本文中，“标准条件”是指以5％CO2，37℃培育细胞)培育过夜。测定前24小时，用100μL/孔的磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)漂洗细胞。然后，将细胞在标准条件下在100μL/孔的包含青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺的F12K饥饿培养基(Gibco)中饥饿过夜。为了确定IC50，从板中除去培养基，并在标准条件下将细胞与在饥饿培养基中稀释的抗体培育2小时。然后，将50μg/mL的HGF在无血清培养基中1:60稀释，并将5μL加入至每个孔中以用于80ng/mL的最终配体浓度，并将其在标准条件下培育10分钟。用冷冻的2×PBS清洗细胞。然后，将细胞在冰上与100μL/孔的裂解缓冲液(50mM Tris pH 7.4，150mM NaCl，1mM EDTA，1％Triton X-100，蛋白酶抑制剂，1mM钒酸Na)培育1小时。
为了制备ELISA捕获板，在4℃用100μL/孔的在1×硼酸盐缓冲液(ThermoScientific)中1:2000稀释的抗-MET抗体(Cell Signaling产品目录号No.3148)涂覆板过夜。然后，除去涂覆的抗体，并用200μL/孔的5％牛血清白蛋白(“BSA”)在tris-缓冲的盐水吐温(“TBST”)中的溶液在室温下封闭1小时。除去封闭缓冲液，并将整个裂解液加入至ELISA板，并在室温下培育2小时。然后，用TBST清洗板3次，随后与100μL/孔的在1％BSATBST(0.05％吐温)中1:5000稀释的抗-1234/1235MET XP抗体(Cell Signaling产品目录号No.3077)在室温下培育2小时。然后，用TBST清洗板3次，随后与100μL/孔的在1％BSA TBST(0.05％吐温)中1:5000稀释的抗-兔-HRP抗体(Invitrogen产品目录号No.656120)在室温下培育1小时。然后，用TBST清洗板3次，并在纸巾上轻敲以除去所有残留的清洗缓冲液。最后，1:1混合SuperSignal West Pico试剂(Thermoscientific)并将100μL加入至每个孔中。根据Luminescence Glow规程，在酶标仪上读取发光性。
6.1.1.9 Akt和Mapk磷酸化分析
将A549细胞仅与HGF或仅与指定抗体培育24小时。从在10％SDS-PAGE凝胶上分离的总蛋白产生免疫印迹。将分离的蛋白质转移到硝化纤维素(Bio-Rad)，用5％脱脂乳在25℃封闭1h，然后在4℃与指定抗体培育过夜。在5％脱脂乳中以1μg/mL的浓度使用抗-pAkt抗体、抗-pMAPK抗体(分别为Cell Signaling产品目录号No.9271和Cell Signaling产品目录号No.4370)和抗-1234/1235MET XP抗体(Cell Signaling产品目录号No.3077)。在25℃，以1:5000稀释使用小鼠和兔二抗(GE Healthcare)1h。根据指导使用WestPicto Chemiluminescent HRP底物(Thermo Scientific产品目录号码No.34078)。
6.1.1.10受体相互作用测定
将His-标签的MET胞外域在PBS中稀释至2μg/mL，并且在室温下将100μL加入至96孔白色高结合力板的每个孔中过夜。然后，用TBST和300μL封闭缓冲液(1％BSA/TBS)将板清洗3次，并在室温下培育1小时。培育后除去所述封闭缓冲液。为了在封闭缓冲液中制备2×抗体溶液，对于全部步骤，通过将100μL所述抗体与200μL饥饿培养基混合，将200nM抗体1:3稀释。类似地，在封闭缓冲液中制备最终浓度0.3nM的2×生物素化的-HGF稀释剂。将50μL 2×抗体溶液和50μL 2×生物素化的-HGF溶液混合，并将100μL混合物加入至每个孔中。将所述细胞在室温下培育2小时。然后，用TBST清洗板3次。然后，将100μL抗生蛋白链菌素-HRP在封闭溶液中的1:2000稀释剂加入至每个孔中并在室温下培育1小时。然后，用TBST清洗板3次。最后，将West Pico试剂1:1混合，并将100μL加入至每个孔中。根据Luminescence Glow规程，在酶标仪上测量发光性。
6.1.1.11抗体-引起的受体降解测定
对于免疫印迹分析、将U87-MG、成胶质细胞瘤细胞系或A549细胞以10,000或20,000个细胞/孔接种至24-孔板中的完全培养基(具有5％胎牛血清、5％青霉素链霉素的达尔伯克氏改良伊格尔培养基)并在标准条件下培养24小时。用PBS漂洗A549细胞，并在标准条件下用F12K饥饿培养基饥饿过夜。用PBS漂洗U87MG细胞，并在标准条件下用MEM饥饿过夜。然后，用1nM最终浓度的指定抗体或用1nM的HGF处理细胞24小时。然后，用冷PBS清洗细胞2次并在250μL/孔裂解缓冲液中收获。然后，通过SDS-PAGE分析等量细胞裂解液并转移到硝化纤维素膜上。在振荡下，将印迹在室温下在TBS+0.1％吐温+3％BSA中封闭2小时。然后，用TBS+0.1％吐温清洗印迹3×，并边振荡边与cMET抗体(Cell Signaling)的1:500稀释剂和兔抗-微管蛋白(Cell Signaling)的1:2000稀释剂在4℃培育过夜。然后，用TBS+0.1％吐温清洗印迹3次，然后边振荡边与1:2500的抗-小鼠HRP二抗和1:5000的抗-兔HRP二抗(Invitrogen)在室温下培育2小时。最后，用TBS+0.1％吐温将印迹清洗3次，用TBS清洗1次，使用Thermo's SuperSignal West Pico底物(1:1混合)成像并在Bio-Rad成象仪上照像。
对于ELISA分析，将A549细胞以25,000个细胞/孔接种至96孔板并在标准条件下培养过夜。将细胞在标准条件下血清饥饿过夜。然后，用1nM HGF或1nM测试抗体处理细胞24小时。培育后，用冷PBS清洗细胞并在100μL裂解缓冲液中裂解。为了制备ELISA捕获板，在4℃用100μL/孔的在1×硼酸盐缓冲液中1:2000稀释的抗c-MET抗体涂覆板过夜。将裂解液加载至板并使其在室温下结合2小时。用TBST清洗板3次，随后在室温下与100μL/孔的在TBST1％BSA中1:2000稀释的生物素化的抗-cMET抗体(R&D Systems产品目录号No.BAF358；0.2mg/mL)培育2小时。然后，用TBST清洗板3次，并在纸巾上轻敲以除去所有残留的清洗缓冲液。最后，将SuperSignal West Pico试剂1:1混合，并将100μL加入至每个孔中。根据Luminescence Glow规程，在酶标仪上测量发光性。
对于免疫印迹分析，将A549细胞(例如，7×106)接种至15cm培养皿中的完全培养基中并培养24小时。用PBS漂洗细胞并饥饿过夜，然后用最终浓度1nM的指定抗体或1nM HGF处理15分钟。用冷PBS清洗细胞两次，通过刮取收集并离心(例如，1200RPM，在4℃微型离心机中)；并将颗粒在300μL裂解缓冲液中再悬浮。随后，将等量细胞裂解液与5μL抗-cMET抗体(例如，细胞信号，Cat#8198)免疫沉淀并通过SDS-PAGE电泳并转移到硝化纤维素膜。边振荡边在室温下将印迹在TBS+0.1％吐温+3％BSA中封闭2小时，用TBS+0.1％吐温清洗1次，然后与抗-泛素抗体(Cell Signaling,Cat#3936)在TBS+0.1％吐温+3％BSA的1:1000稀释剂中培育过夜。用TBS+0.1％吐温清洗印迹3次，然后边振荡边在室温下与1:2500抗-小鼠HRP二抗培育1小时。然后，用TBS+0.1％吐温将印迹清洗3次，用TBS清洗1次，使用Thermo'sSuperSignthel West Pico底物(1:1混合)成像并在Bio-Rthed成象仪上照像。
6.1.1.12MET降解的体内分析
在第0天和第3天，用PBS(n＝3)、对照嵌合IgG1抗KLH抗体(3mg/kg；n＝3)或用Ab237C(3mg/kg；n＝3)处理U87MG皮下异种移植肿瘤小鼠模型。在第4天，将小鼠处死，并制备新鲜冷冻的石蜡包埋的(FFPE)肿瘤。如下所示，制备5μm切片，脱蜡并复水：(1)在Histoclear(Electron Microscopy Services，Cat#64110-04)中清洗3次，每次3分钟；(2)在100％乙醇中清洗2次，每次3分钟；在95％乙醇中清洗2次，每次3分钟；在70％乙醇中清洗1次，3分钟，并用蒸馏水漂洗。对于抗原修复，将切片在柠檬酸缓冲液中在蔬菜蒸锅(vegetable steamer)中处理35分钟，冷却至室温，并用去离子水漂洗。用3％过氧化氢使内源过氧化物淬灭15分钟，并用蒸馏水漂洗。对于免疫组织化学，在室温下用2.5％马血清(Vector Labs Kits,ImmPRESS抗-兔MP-7401)封闭切片30分钟。甩掉过量马血清。随后，将切片在4℃在加湿室中与3％BSA/PBS中的一抗培育过夜。一抗包括：Cell Signalling(D1C2)#8198 1:300，50μg/mL，兔。Ig对照抗体购自Vector Labs(兔IgG+I-1000，5mg/mL)。稀释IgG对照以匹配一抗0.167μg/mL的浓度。用PBS和0.1％吐温20(PBST)漂洗切片，转移到切片架，并在PBS/0.1％吐温20中浸没1小时，其中更换两次PBST。然后，将切片与二抗培育：将ImmPRESS reagent二抗(兔-HRP，Vector Labs MP-7401)加入至切片并将切片返回至加湿室1小时。随后，漂洗切片，然后转移到切片架，并在PBST中放置1.5分钟，其中更换3次PBST。然后，甩掉过量的PBST。对于显像，将0.2mL/切片的IMMPACT DAB底物(Vector LabsSK-4105)与1滴chromagen/1mL缓冲液一起加入至切片10分钟，然后用蒸馏水漂洗。用苏木精(每个切片几滴)染色核，然后在酸化水(2％的冰醋酸)中漂洗。然后，用水漂洗切片，并将3滴水性封固剂(DAKO)加入至切片，并用盖玻片覆盖切片。通过Nikon Eclipse显微镜以20×和40×对切片成象。
6.1.2结果
6.1.2.1抗-MET抗体的产生
表13列出了通过嵌合抗体产生和通过复合人技术从小鼠和大鼠产生的抗-MET抗体的重链和轻链同种型。
*大鼠IgG2与小鼠IgG1和人IgG1具有高序列同源性。
6.1.2.2抗-MET抗体结合至MET的胞外域
确定了假定的抗-MET抗体结合MET的能力。如部分6.1.1.7中所述实施的FACS分析显示抗-MET抗体有效结合至细胞表面表达的MET(表14)。此外，使用重组MET-ECD的ELISA测定表明所产生的抗-MET抗体有效地特异性结合至MET-ECD(表14)。此外，抗-MET抗体不能结合至包含鼠科Sema/PSI域和人Ig域的嵌合融合蛋白。考虑到抗-MET抗体结合人MET，但不能结合鼠科MET，这些数据表明抗-MET抗体结合至MET的Sema/PSI域。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体在结合至人MET方面是有效的并且能够特异地结合ECD。
表14列举了Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239与细胞表面MET或重组MET-ECD结合EC50。
6.1.2.3抗-MET抗体的种特异性
如部分6.1.1.3中所述，评价了抗-MET抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的种特异性。简要地，将人(A549细胞)、猴(4MBr5细胞)、狗(MDCK细胞)或小鼠(MS1细胞)细胞与抗-MET抗体培育并通过FACS评价抗体与细胞表面表达的MET的结合。所测试的5种抗体(即Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239)中的每一种均能够特异性结合至人和猴细胞两者，同时它们未显示出特异地结合狗或小鼠细胞的能力。
6.1.2.4抗-MET抗体的表位结合
如部分6.1.1.7中所述进行竞争研究以确定某些抗-MET抗体是否具有相同或类似的表位。简要地，使用FACS，在存在滴定、未标记的抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239的情况下确定Alexa-647-标记的Ab235结合细胞表面表达的MET的能力。与结合MET的IgG域的对照抗-MET抗体(Ab240)培育不会抑制标记的Ab235的结合。相反，与未标记的抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239培育以浓度依赖的方式成功地抑制了标记的Ab235与细胞表面表达的MET的结合。此外，Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50(实现50％结合抑制的抗体浓度)分别计算为约3nM、1nM、0.5nM、1nM和0.8nM。这些结果表明抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239靶向人MET-ECD中类似的表位。
还如部分6.1.1.7中所述实施了FACS竞争研究以研究与包含人IgG1的Ab237嵌合抗体(Ab237C)相比，抗-MET抗体Ab241-Ab255的结合性质。FACS竞争研究确定了在存在滴定的Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255抗-MET抗体的情况下，标记的Ab237C(人IgG1同种型)结合细胞表面表达的MET的能力。与Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中任一个培育成功地抑制了标记的Ab237C与细胞表面表达的MET的结合。基于Ab237C的IC50值，Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255的相对IC50值分别计算为约1.22、1.03、1.07、0.93、0.86、1.15、1.01、1.17、0.70、0.86、0.99、1.06、0.91、0.78和0.72；通过除以Ab237C的IC50值计算相对IC50值，例如，Ab237C的相对IC50值是1nM。所有所测试的抗-MET抗体表明与MET的结合在Ab237C与MET的结合的1.2倍以内，并且一些显示出小于1的相对IC50，表明比Ab237C更强的结合亲合力。这些数据证明了所测试的抗-MET抗体与细胞表面表达的天然MET，并且具体地，与人MET-ECD相同或类似的表位结合的能力。
如部分6.1.1.6中所述实施了ELISA测定以确定所述抗体与MET-ECD的结合，从而进一步证实来自FACS结合竞争研究的数据。在存在滴定的Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255抗-MET抗体的情况下，测试了标记的Ab237C与固定在ELISA板上的MET-ECD的结合。与Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中任一个培育成功地以浓度依赖的方式抑制了标记的Ab237C与MET-ECD的结合。此外，相对于标准化为1nM的Ab237C的IC50，Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255的IC50分别计算为约0.97、0.82、0.92、1.07、1.09、0.81、0.82、1.04、1.00、1.13、0.98、0.99、0.94、0.80和0.90。所有所测试的抗-MET抗体表明相对IC50在Ab237C的1.15倍以内，并且一些显示出小于1的相对IC50，表明比Ab237C更强的结合亲合力。与FACS结合竞争数据一致，这些数据表明所测试的所有抗-MET抗体特异地结合至纯化的MET的胞外域，并且结合至MET-ECD相同或类似的表位。
6.1.2.5抗-MET抗体阻断MET激活
一旦结合至MET，HGF引起激酶活性，并因此引发MET酪氨酸1234和酪氨酸1235的转磷酸化。为了评价抗-MET抗体阻断MET活性的能力，如部分6.1.1.8中所述，实施了配体-引起的MET-磷酸化研究。简要地，将A549或U87MG细胞与抗-MET抗体培育并且通过ELISA确定MET Tyr1234和Tyr1235磷酸化的水平。抗-MET抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab237C、Ab244、Ab245、Ab249、Ab250、Ab254和Ab255能够在Tyr1234和Tyr1235阻断HGF-引起的MET磷酸化。在A549细胞中，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50分别计算为约217pM、76pM、40pM、93pM和90pM。在更高的测试浓度(例如，>10nM)，所有五个抗体Ab235-Ab239实现了MET磷酸化完全抑制至背景水平。基于Ab237C的IC50，抗体Ab244、Ab245、Ab249、Ab250、Ab254和Ab255的相对IC50分别计算为约0.44、0.23、0.47、0.21、0.23和0.25；通过除以Ab237C的IC50值，计算相对IC50值(Ab237C的相对IC50值为1nM)。U87MG细胞中，抗体Ab235C、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50分别计算为约71pM、47pM、43pM、29pM和44pM。
另外，Ab237和Ab239能够有效抑制Hop92细胞中的MET磷酸化，Hop92细胞是含有包含T1010I突变的MET的肺癌细胞，其导致过度活化的MET信号。Hop92细胞中Ab237-和Ab239-介导的MET磷酸化抑制比通过包含SEQ ID NO：296(VH)和SEQ ID NO：297(VL)的氨基酸序列的人源化抗-MET抗体，如h224G11(ABT-700；AbbVie)(“抗-MET-1”)中的，或者包含SEQ IDNO：294(VH)和SEQ ID NO：295(VL)的氨基酸序列的二价IgG4抗-MET抗体，如emibituzumab(Lilly)(“抗-MET-2”)中的抑制强3-至4-倍。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab237C、Ab244、Ab245、Ab249、Ab250、Ab254和Ab255以及包含与这些抗体相同的CDR并且具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对抑制Tyr1234和Tyr1235处配体(HGF)-引起的MET磷酸化是有效的。此外，这些数据表明所测试的抗-MET抗体抑制MET激活和信号，例如，在与其他抗-MET抗体，如抗-MET-1和/或抗-MET-2相比，通过MET突变，如T1010I突变，具有过度活化的MET信号的癌细胞中。
6.1.2.6抗-MET抗体阻断AKT和MAPK磷酸化
HGF-引起的MET激活促进胞内MET酪氨酸磷酸化和信号蛋白复合物的招募，从而导致下游信号通路激活。对本文所述的抗-MET抗体测定抑制或阻断MET信号，如(例如)AKT和/或MAPK磷酸化的能力。如部分6.1.1.9所述，使用A549NSCLC细胞进行测定。简要地，在存在和不存在抗-MET抗体的情况下用HGF处理后，通过免疫印迹分析AKT和MAPK的磷酸化。与阴性对照(例如，嵌合IgG1抗KLH抗体)处理相反，HGF处理导致MET激活(如通过磷酸化的MET中的诱导所确定的)和下游组件AKT和MAPK的激活(如分别通过磷酸化的AKT和MAPK中的诱导所确定的)；分别参见图2，泳道2、1和5)。相反，用Ab237C或克唑替尼(Crizotinib)(MET的小分子抑制剂，参见，例如，Rodig和Shapiro,Curr.Opin.Investig.Drugs.11(12):1477-1490(2010))处理，MET抑制的激活降低了下游信号组件Akt和MAPK的激活(分别如图2，泳道3和4)。用Ab237C处理引起MET蛋白水平显著降低，这在用克唑替尼(Crizotinib)或对照IgG抗体处理的细胞中未观察到。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对抑制MET和下游信号组件AKT和MAPK的激活有效。
6.1.2.7抗-MET抗体阻断配体-受体相互作用
考虑到所测试的抗-MET抗体结合至MET的胞外域并阻断HGF-引起的信号(分别参见，部分6.1.2.2和6.1.2.6)，如部分6.1.1.10所述，评价了抗体抑制MET和其配体HGF之间的相互作用的能力。用对照嵌合IgG1抗KLH抗体预处理不会削弱MET和HGF之间的结合相互作用。相反，与Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239培育有效地抑制了MET和HGF之间的结合相互作用。抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50分别计算为约2nM、0.5nM、0.5nM、0.4nM和0.3nM。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对抑制配体(HGF)与MET受体的相互作用有效。
6.1.2.8抗-MET抗体引起MET降解
研究了抗体-引起的MET抑制的机制，具体地，抗-MET抗体对MET稳定性的影响。如部分6.1.1.11中所述，评价了与抗-MET抗体培育后MET的稳定性。简要地，将细胞与HGF或与某些抗-MET抗体培育，并通过免疫印迹和ELISA测定评价MET蛋白水平。与抗-MET抗体培育24小时导致成胶质细胞瘤细胞系U87MG和非小细胞肺癌细胞系A549中MET蛋白积累减少(分别如图3A和3B以及图3C和3D)。此外，与抗-MET抗体培育降低了肿瘤细胞系H596(编码在外显子14中包含缺失的MET基因的腺鳞癌细胞)和Hop92(表达包含T1010I氨基酸取代的MET的肺癌细胞)中MET蛋白的积累(分别如图3E和3F)。
为了确认在存在某些抗-MET抗体的情况下体内观察到的MET降解，如部分6.1.1.12所述，在存在Ab237C的情况下，在U87MG皮下异种移植肿瘤模型中分析了MET降解。与体外结果一致，与对照处理相比，用Ab237C处理显著降低了MET蛋白水平，如通过肿瘤样品的免疫组织化学所确定的(分别如图4C、4A和4B)。
这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对体外和体内降解MET有效。也就是说，与肿瘤细胞是生长在组织培养中还是皮下肿瘤异种移植中无关，抗体处理后肿瘤细胞中MET蛋白水平降低。因此，抗体通过阻断HGF结合和促进MET周转两者起作用。
6.1.2.9抗-MET抗体引起MET泛素化
HGF结合至MET引起MET快速泛素化和降解(参见，例如，Taher等人.J Immunol.169(7):3793-3800(2002))。为了确定抗体-引起的MET降解(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239和Ab237C；参见，部分6.1.2.8)是否与MET泛素化有关，用抗-MET抗体Ab237C和Ab237C-IgG2(包含人IgG2恒定区而不是IgG1恒定区的Ab237C)处理A549细胞，MET免疫沉淀并且通过如部分6.1.1.11所述的免疫印迹分析所述免疫沉淀样品的泛素。如所期望的，与HGF培育引起MET泛素化。另外，与Ab237C或Ab237C-IgG2培育也导致MET的泛素化，同时与对照Ig培育或在不存在HGF的情况下不导致泛素化(图5)。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab237以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对引起MET泛素化有效。
6.1.3结论
总之，产生了具有结合细胞表面表达的MET和重组MET-ECD两者的能力的抗-MET抗体。此外，竞争分析显示所述抗体具有相同或类似的表位。本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239能够结合至表达MET的人和猴细胞两者，但不能结合至表达MET的狗或小鼠细胞，从而显示了这些抗体的种特异性。此外，本文所述的抗-MET抗体，例如，Ab235-Ab255能够抑制MET活性，如氨基酸残基Tyr1234和Tyr1235(MET激活中的关键残基)处的MET磷酸化以及下游信号事件，如AKT磷酸化和MAPK磷酸化，并且能够阻断配体(HGF)-受体(MET)相互作用。此外，一旦用本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239处理，MET泛素化并降解。因此，这些数据显示已鉴别了一系列可以有效抑制MET信号的抗-MET抗体，并且表明包含Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的CDR的抗-MET抗体可以抑制MET活性。
6.2实施例2：抗-MET抗体的抗肿瘤性质
6.2.1材料和方法
6.2.1.1肿瘤细胞增殖分析
对于U87MG、A549和EBC1细胞，将50μL约1,000-2,000个细胞/孔接种到Costar超低结合U型底板中并培育4-8天以用于椭球体的形成。将50μL 3×HGF(在无血清培养基中制备)加入至每个孔中至最终HGF浓度50ng/mL。将50mL 3×抗体溶液(在无血清培养基中制备，最终浓度300nM)加入至每个孔中。在标准条件下，将细胞培育5天。培育后，将100μLCell Titer Glow试剂(Promega)加入至每个孔中并将板在定轨振荡器上保持20分钟。然后，将混合物转移到黑壁透明底板中，并如前所述使用酶标仪确定发光信号。
对于H596细胞(腺鳞癌细胞系)，将100μL 5,000个细胞/孔接种到黑壁透明底96孔板中并在标准条件下培养过夜。然后，将细胞血清饥饿过夜。然后，将50μL含有0.5％FBS的2×HGF无血清溶液加入至每个孔中至最终浓度50ng/mL。另外，将50μL含有0.5％FBS的2×抗体无血清溶液加入至每个孔中(最终浓度300nM)。在标准条件下，将细胞培育4天。然后，将细胞与Cell Titer Glow试剂培育并如前所述确定发光信号。然后，在标准条件下，将细胞再培育5天。最后，将细胞再次与Cell Titer Glow试剂培育并如前所述确定发光信号。
6.2.1.2 DU145细胞分散测定
对于DU145细胞(转移性前列腺癌细胞系)，将约3,000个细胞/孔接种到96孔黑壁透明底板中并在标准条件下培养过夜。在存在或不存在测试抗体的情况下，在F12K饥饿培养基中用25ng/mL HGF处理细胞24小时。24小时后，在室温下用4％多聚甲醛在PBS中的溶液固定细胞10分钟，然后用PBS清洗3次。然后，在室温下用0.1％曲拉通在PBS中的溶液使细胞透性化10分钟，随后在室温下用Hoechst H33258(10μg/mL)染色1小时。然后，用PBS清洗细胞3次。使用OPERA成象仪采集图像，并使用内置细胞群集算法进行分析。通过测量存在于群集中的细胞的百分比来定量细胞分散作用。细胞群集定义为含有大于3个细胞的群组。
6.2.1.3 U87MG正位肿瘤模型
使用27g固定针头注射器，将U87MG神经胶质瘤细胞(ATCC,Manassas,VA,cat#HTB-14)颅内植入裸鼠(例如，1×106个细胞/小鼠)。根据实验，对一组10只小鼠施用以下中的一种或多种：PBS、嵌合IgG1抗KLH抗体、克唑替尼(Crizotinib)、Ab235C、Ab236C、Ab237C、Ab237-IgG2、Ab237-IgG4或ab237-一价。
6.2.1.4肿瘤的生物发光
使用27g固定针头注射器，将工程设计以稳定表达荧光素酶(萤火虫荧光素酶基因编码的蛋白质)的U87MG人神经胶质瘤细胞系细胞U87MG-luc颅内植入裸鼠(例如，1×106个细胞/小鼠)。根据实验，对一组10只小鼠施用以下中的一种或多种：PBS、嵌合IgG1抗KLH抗体(30mg/kg)、克唑替尼(Crizotinib)(25mg/kg)、Ab235C(30mg/kg)、Ab236C(30mg/kg)和Ab237C。
在植入后约28天，获得了10-15只小鼠的生物发光成象(BLI)图像以观察肿瘤生长。如果肿瘤尚不可分辨，则在随后4-5天再次获得动物的BLI图像。选择具有达到所需尺寸的肿瘤的动物(例如，平均生物发光信号5×106个光子/sec)，在处理/对照组中随机分配，其中配对在组间实现10％的平均肿瘤负荷匹配。然后，在处理后3、7、14和21天，对处理/对照组中的动物成象。肿瘤测量以光子/秒为单位。
6.2.1.5 U87MG皮下肿瘤模型
细胞培养：在37℃，在5％CO2中空气中的气氛中，将U87MG成胶质细胞瘤肿瘤细胞(ATCC,Manassas,VA,cat#HTB-14)作为单层培养体外保持在补充有10％热失活的胎牛血清的DMEM培养基中。收获在指数生长期中生长的细胞并计数用于肿瘤接种。
动物和肿瘤接种：对雌性，6-8周大，约18-20g重的BALB/c裸鼠接种U87MG细胞。对每只小鼠在右侧皮下接种处于100μL培养基中的U87MG肿瘤细胞(5×106)以用于发展肿瘤。当平均肿瘤尺寸达到约150-200mm3时，开始处理。用抗-MET抗体和某些对照在指定剂量处理每组中的动物(n＝10)。例如，在某些实验中，每两周腹膜内施用30mg/kg(10μL/g剂量体积)的PBS、嵌合IgG1抗KLH抗体、一价Ab237C、Ab237C-IgG2、Ab237C-IgG4和Ab237C中的一种，施用3周。
使用卡尺，以二维尺寸每周测量两次肿瘤尺寸，并且使用公式：V＝0.5a×b2表示体积(mm3)，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。根据下式，对每个组计算肿瘤生长抑制(TGI)：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti是特定天数时处理组的肿瘤体积，T0是第1天处理组的肿瘤体积，Vi是特定天媒介物对照组的肿瘤体积，并且V0是处理第1天媒介物组的肿瘤体积。在研究终止时测量肿瘤重量。计算T/C值(以百分比表示)，其中T和C分别是处理组和对照组的平均肿瘤重量。
6.2.2结果
6.2.2.1抗-MET抗体抑制肿瘤细胞增殖
一些癌症归因于过度活化的MET信号(参见，例如，Trusolino等人,Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.11:834-848(2010))。考虑到抗-MET抗体降解MET和抑制MET信号的能力(分别参见部分6.1.2.8和6.1.2.6)，评价了本文所述的抗-MET抗体阻止肿瘤增殖的能力。简要地，将U87MG或A549肿瘤细胞在存在或不存在本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239的情况下与HGF培育，并且(例如)通过如上所述的发光性评价细胞增殖。用Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239处理抑制肿瘤细胞增殖。在U87MG细胞中，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50分别计算为约25nM、9nM、5.5nM、25nM和19nM，并且在A549细胞中分别计算为约6.6nM、6.3nM、1.7nM、4.8nM和4.4nM。此外，所测试的抗体有效抑制H596细胞的增殖，H596细胞表达不含外显子14所编码的47个氨基酸的突变形式的MET，表明表达这种突变形式的MET的受试者可以受本文所述的抗体处理的作用。此外，在不存在HGF的情况下，用Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239处理U87MG细胞不会导致测试抗体所引起的生长促进激动活性(图6A)。在H596细胞中，抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50分别计算为约0.8nM、0.6nM、0.08nM、0.2nM和0.2nM。在所测试的每个细胞类型中，与其他抗-MET抗体相比，Ab237具有显著较低的IC50。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对抑制肿瘤细胞增殖有效。
6.2.2.2抗-MET抗体抑制DU145细胞分散
HGF是已知的内皮间充质转化(“EMT”)，也称为细胞分散的诱导剂(参见，例如，Thiery和Sleeman，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2:131-142(2006))，内皮间充质转化是上皮细胞丧失它们的细胞-细胞粘附并获得独立迁移能力的过程。细胞分散涉及转移的起始(参见，例如，Tsai和Yang,Genes&Dev.27:2192-2206(2013))。由于本文所述的抗-MET抗体能够抑制肿瘤细胞增殖(部分6.2.2.1)，因此如部分6.2.1.2中所述评价了抗-MET抗体对细胞分散的影响。简要地，在存在或不存在抗-MET抗体的情况下，用HGF处理DU145转移性前列腺癌细胞并通过定量细胞群集确定细胞分散。用本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239处理有效地抑制了DU145细胞分散。抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239的IC50分别计算为约0.48nM、0.08nM、0.08nM、1.4nM和0.24nM。抗体Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239分别能够将DU145细胞分散抑制约72-80％、64-66％、77-81％、77-96％和58-77％。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对抑制EMT有效。
6.2.2.3抗-MET抗体抑制体内肿瘤生长
如部分6.2.1.3、6.2.1.4和6.2.1.5所述，评价了抗-MET抗体抑制体内肿瘤生长的能力。简要地，用对照嵌合IgG1抗KLH抗体、小分子MET抑制剂(克唑替尼(Crizotinib)；25mg/kg，口服)或用嵌合Ab235或Ab236(分别为Ab235C或Ab236C；30mg/kg，静脉内)处理U87MG正位小鼠模型，并在植入后28、31、35、42和49天测量植入的肿瘤细胞的生物发光。每两周，每三至四天进行处理，处理7周。在正位模型中，如通过生物发光信号所确定的，用对照嵌合IgG1抗KLH抗体或用克唑替尼(Crizotinib)处理导致了类似的肿瘤生长。意外地，到肿瘤植入后49天，用Ab235C或Ab236C处理小鼠导致了统计学显著的肿瘤生长抑制(图6B和6C)。
此外，用嵌合Ab235、Ab236、Ab237和Ab239抗体(分别Ab235C、Ab236C、Ab237C和Ab239C；30mg/kg，静脉内，每周两次)处理对U87MG皮下异种移植模型中肿瘤生长的延缓优于媒介物或阴性对照嵌合IgG1抗KLH抗体，并且Ab237C在测试抗体中显示出最有效的效果(图7A)。这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体对抑制肿瘤体内发展有效。
此外，在U87MG皮下异种移植模型中，Ab237C的剂量递增显示少至1mg/kg Ab237C的剂量能够延缓肿瘤生长(图7B)。值得注意地，30mg/kgAb237C处理所引起的肿瘤生长抑制与50mg/kg克唑替尼(Crizotinib)处理相当。此外，Ab237C是良好耐受的并且不会导致重量减轻或可观察的毒性。这些数据表明抗-MET抗体Ab237C以及包含Ab237C CDR的抗体以剂量依赖性方式有效抑制体内肿瘤发展。
6.2.3结论
本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似功能特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体显示出抗肿瘤属性。所述抗体能够抑制体外肿瘤细胞增殖，抑制细胞分散(前体至转移)并损害体内肿瘤生长。总的来说，这些数据表明本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238和Ab239以及包含与这些抗体相同的CDR并具有类似特征(例如，结合表位和亲合力)的抗体显示出可以在癌症，如神经胶质瘤治疗中使用的抗肿瘤活性。
6.3实施例3：Ig同种型交换对抗-MET抗体的影响
6.3.1材料和方法
6.3.1.1同种型转换
为了进行同种型转换，将本文所述的抗体的VL和VH链区克隆到具有人IgG2或IgG4恒定区的框中。随后，将所得构建体在293细胞中瞬时表达并纯化所得抗体。
6.3.1.2 U87MG成胶质细胞瘤异种移植模型
基本如以上部分6.2.1.5中所述进行使用U87MG成胶质细胞瘤异种移植小鼠模型的研究。简要地，将在指数生长期中生长的U87MG肿瘤细胞(ATCC,Manassas,VA,cat#HTB-14)接种到BALB/c裸鼠中(雌性，6-8周，约18-20g重)。对每只小鼠在右侧皮下接种处于100μL培养基中的U87MG肿瘤细胞(例如，5×106个细胞)以用于肿瘤发展。当平均肿瘤尺寸达到约150-200mm3时开始处理。用抗-MET抗体和某些对照以指定剂量处理每组中的动物(n＝10)。使用卡尺，以二维尺寸每周测量两次肿瘤尺寸，并且使用公式：V＝0.5a×b2表示体积(mm3)，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。根据下式，对每个组计算肿瘤生长抑制(TGI)：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti是特定天数时处理组的肿瘤体积，T0是第1天处理组的肿瘤体积，Vi是特定天媒介物对照组的肿瘤体积，并且V0是处理第1天媒介物组的肿瘤体积。
6.3.1.3 SNU-5异种移植模型
细胞培养：在37℃，在5％CO2中空气中的气氛中，将作为MET-增强细胞系的SNU-5人胃癌肿瘤细胞(ATCC,Manassas,VA,cat#CRL-5973)作为单层培养体外保持在补充有20％热失活的胎牛血清的IMDM培养基中。收获在指数生长期中生长的细胞并计数用于肿瘤接种。
动物：将雌性，6-8周大，约18-20g重的BALB/c裸小鼠用于SNU-5肿瘤细胞接种。
肿瘤接种：对每只小鼠在右侧皮下接种处于100μL培养基中的肿瘤细胞(例如，5×106)以用于肿瘤发展。当平均肿瘤尺寸达到约150-200mm3时，开始处理。用抗-MET抗体和某些对照在指定剂量处理每组中的动物(n＝10)。例如，在某些实验中，每两周腹膜内施用30mg/kg(10μL/g剂量体积)的PBS、嵌合IgG1抗KLH抗体、一价Ab237C、Ab237C-IgG2、Ab237C-IgG4或Ab237C中的一种，施用3周。
使用卡尺，以二维尺寸每周测量两次肿瘤尺寸，并且使用公式：V＝0.5a×b2表示体积(mm3)，其中a和b分别是肿瘤的长和短直径。根据下式，对每个组计算肿瘤生长抑制(TGI)：TGI(％)＝[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti是特定天数时处理组的肿瘤体积，T0是第1天处理组的肿瘤体积，Vi是特定天媒介物对照组的肿瘤体积，并且V0是处理第1天媒介物组的肿瘤体积。在研究终止时测量肿瘤重量。计算T/C值(以百分比表示)，其中T和C分别是处理组和对照组的平均肿瘤重量。
6.3.2结果
6.3.2.1 Ab237同种型交换提高了效力
如部分6.3.1.1中所述进行抗-MET抗体的免疫球蛋白同种型交换以研究对抗体功能的影响。产生了包含人IgG2恒定区的抗-MET抗体。IgG2抗体产生后，预期存在α和β(分别为IgG2a和IgG2b)同种型两者。与Ab237C相比，用人IgG4同种型转换Ab237C人IgG1同种型(“Ab237C-IgG4”)对SNU-5细胞增殖抑制的影响最小(图8A)。意外地，相对于Ab237C和Ab237C IgG4两者，用人IgG2同种型转换Ab237C IgG1人同种型显著提高了SNU-5细胞中MET磷酸化的抑制(图8A)。与Ab237C和Ab237C-IgG4相比，在SNU-5细胞中Ab237C-IgG2还显示出提高的MET降解(图8B)。此外，与Ab237C和Ab237C-IgG4以及Ab237的一价形式相比，在SNU-5和EBC-1(肺鳞状细胞癌细胞系)细胞增殖抑制中，Ab237C-IgG2显著更有效(图8C和8D)。这些意外的结果表明将抗-MET抗体Ab237C的人IgG1恒定区与人IgG2恒定区交换显著提高了Ab237C的官能性，如阻断MET活性和抗癌活性。SNU-5和EBC-1细胞均为MET-增强细胞系。在体外U87MG细胞中，Ab237-IgG2抗体抑制MET磷酸化至与Ab237C和Ab237-IgG4抗体相同的程度。然而，与以下提供的立体异种移植模型相反，由于信号饱和，因此没有较多用于同种型转换的空间以在U87MG细胞的二维细胞培养中产生额外的改善。
6.3.2.2 Ab237的人源化形式有效抑制MET活性
为了确定包含人IgG2恒定区的抗体Ab237的人源化形式是否还发挥抑制MET活性的能力，通过用Ab237C-IgG2或包含人IgG2恒定区的Ab237的人源化形式(“hum-Ab237-IgG2)处理，在A549细胞(图8E)和SNU5细胞(图8F)中评价了MET磷酸化。与细胞的Ab237处理一样，用hum-Ab237C-IgG2处理有效抑制了MET磷酸化，表明包含人IgG2恒定区的Ab237的人源化形式能够抑制体外MET激活(图8E和8F)。此外，用hum-Ab237-IgG2处理SNU5细胞有效抑制了细胞增殖，其谱图与通过Ab237C-IgG2对细胞增殖的抑制几乎相同(图8G)。
6.3.2.3 Ig同种型交换对抗体效力的影响是抗体依赖性的
为了确定Ig框架交换在本文所述的其他抗-MET抗体中的影响，对Ab235C、Ab236C、Ab238C和Ab239C产生了人IgG2恒定区变体(在本文中分别称为“Ab235C-IgG2”、“Ab236C-IgG2”、“Ab238C-IgG2”和“Ab239C-IgG2”)。如上所述，产生IgG2抗体后，预期存在α和β(分别为IgG2a和IgG2b)同种型两者。如以上所讨论的，Ab235C-Ab239C在SNU-5细胞中稳健地抑制MET磷酸化并引起MET降解。有趣地，对于Ab235C、Ab236C和Ab239C，人IgG1框架与人IgG2框架交换导致在SNU-5细胞中抑制MET磷酸化和引起MET降解的效力提高，但是对于Ab238C不行(图9A、9B、9C和9D)。
具体地，与对照嵌合人IgG1抗KLH抗体的12％抑制相比，抗体Ab238C、Ab238C-IgG2、Ab239C、Ab239C-IgG2和Ab237C-IgG2能够将SNU-5细胞中MET的磷酸化分别抑制19％、24％、33％、75％和72％(图9A)。与对照嵌合人IgG1抗KLH抗体的17％的最大诱导百分比相比，抗体Ab238C、Ab238C-IgG2、Ab239C、Ab239C-IgG2和Ab237C-IgG2能够在SNU-5细胞中分别以39％、35％、36％、75％和81％的MET降解的最大诱导百分比引起MET降解(图9B)。抗体Ab235C、Ab235C-IgG2、Ab236C和Ab236C-IgG2能够分别将SNU-5细胞中MET的磷酸化抑制10％、64％、17％和75％(图9C)。抗体Ab235C、Ab235C-IgG2、Ab236C和Ab236C-IgG2能够分别在SNU-5细胞中以6％、64％、19％和69％的MET降解的最大诱导百分比引起MET降解(图9D)。这些数据表明与人IgG1同种型相比，作为人IgG2同种型时，本文所述的某些抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237和Ab239对于抑制MET活性和引起MET降解更有效。
6.3.2.4与竞争剂抗-MET抗体相比，Ab237C-IgG2和Ab237的人源化形式有效抑制肿瘤生长
如部分6.3.1.2和6.3.1.3所述，评价了Ab237C-IgG2的抗肿瘤性质。在U87异种移植模型中，与人IgG1和人IgG4Ab237C同种型相比，Ab237C-IgG2对于抑制肿瘤生长更有效(图10A)。在SNU5胃癌异种移植模型中，与对照处理相比，Ab237C(IgG1)和Ab237C-IgG4延缓肿瘤生长(图10B)，但是意外地，在该SNU5胃癌异种移植模型中，Ab237C-IgG2完全消除肿瘤(图10B)。这些数据表明当转化为人IgG2同种型时，Ab237C抗体意外的能力显示出显著改善的抗肿瘤性质。此外，明显注意到Ab237-IgG2抗体处理导致显著的SNU-5肿瘤生长抑制，而且还在抗体处理后将肿瘤消退维持了多至>90天。此外，研究期间90％用Ab237-IgG2处理的SNU-5小鼠显示出无可检测的肿瘤块。
这些数据还表明与人IgG1同种型相比，作为人IgG2时，本文所述的抗-MET抗体，如Ab235、Ab236、Ab237和Ab239对抑制体内肿瘤发展更有效。
然后，与临床已测试的抗-MET抗体相比，如部分6.3.1.2和6.3.1.3所述，评价了Ab237C-IgG2和作为IgG2同种型的Ab237的人源化形式(hum-Ab237C-IgG2)的抗肿瘤性质。Ab316是包含SEQ ID NO：298(轻链)、SEQ ID NO：299(重链凸起(knob))和SEQ ID NO：300(重链孔洞(hole))的氨基酸序列的一价IgG1抗-MET抗体，如奥纳珠单抗(onartuzumab)中(MetMAb；Genentech/Roche)。Ab317是包含SEQ ID NO：294(VH)和SEQ ID NO：295(VL)的氨基酸序列的IgG4抗-MET抗体，如在emibituzumab中(Lilly)。Ab318是包含SEQ ID NO：296(VH)和SEQ ID NO：297(VL)的氨基酸序列的IgG1抗-MET抗体，如在h224G11中(ABT-700；AbbVie)。
在SNU-5异种移植模型中，与Ab316、Ab317和Ab318相比，Ab237C-IgG2对于延缓肿瘤生长更有效，并且完全消除了肿瘤(图11A)。同样地，Ab237抗体的人源化形式的IgG2同种型(hum-Ab237C-IgG2)还显示出完全消除肿瘤的能力(图11B)。此外，在U87异种移植模型中，与Ab316、Ab317和Ab318相比，Ab237C-IgG2也对延缓肿瘤生长更有效(图11C)。最后，在U87异种移植模型中，与Ab316、Ab317和Ab318相比，hum-Ab237C-IgG2对于延缓肿瘤生长更有效(图11D)。
6.3.3结论
这些实施例中所提供的数据显示本文所述的抗体抑制MET活性，如MET磷酸化、MET降解和肿瘤细胞增殖。例如，Ab235、Ab236、Ab237和Ab239也如此，而不显示生长-促进激动剂活性。此外，这些数据还表明抗-MET抗体Ab235、Ab236、Ab237和Ab239的IgG1恒定区与人IgG2同种型的交换显著提高了抗体功能性，如抗体抑制MET活性，如MET磷酸化、MET降解和肿瘤细胞增殖的能力。此外，Ab237和人源化Ab237，具体地，这些Ab237抗体的IgG2同种型对于抑制MET-配体-依赖性和MET-增强的(例如，不依赖于配体)体内肿瘤生长是非常有效的。这与奥纳珠单抗(onartuzumab)相反，例如，奥纳珠单抗(onartuzumab)仅靶向受体-配体相互反应并且仅阻断配体-依赖性MET激活(Martens等人,2006,Clin.Cancer.Res.12(20Pt1):6144-6152)。
6.4实施例4：进一步的表位和降解途径鉴定
6.4.1材料和方法
6.4.1.1 FACS种间结合分析。
为了测量抗体对细胞表面受体的结合亲合力，用Alexa647抗体标记试剂盒标记抗体，并根据生产商的说明(Invitrogen)纯化。将A549(人)、4MBr5(猴)、MDCK(狗)和MS1(鼠)细胞再悬浮在预冷冻的FACS缓冲液中，在冰上培育1小时并以105个细胞/孔分布至96-孔板。将标记抗体的连续稀释加入至每个孔中，并在冰上培育4小时以使抗体结合达到平衡。使用FACS指示器(ACCURITM-C6；BD Biosciences)分析平均荧光强度，并且使用GRAPHPADPRISM软件确定表观结合亲合力。
6.4.1.2通过ELISA的抗体结合
为了通过ELISA测量抗体结合，将10μg人、鼠或嵌合MET-ECD涂覆至96-孔板(Costar)。将抗体的连续稀释加入至板，并在加入HRP-缀合的二抗前，在室温下培育1小时。使用BioTek SYNERGYTM HT酶标仪测量发光性，并且使用GRAPHPAD PRISM软件确定结合EC50值。
6.4.1.3重组蛋白质的表达与纯化。
通过将编码鼠科MET的氨基酸1-561的DNA与编码人MET的氨基酸562-932的DNA连接并插入到pcDNA3.3-His8载体的Xba I/Xho I位点以产生嵌合MET-ECD。通过瞬时转染，在293F细胞中表达人和嵌合MET-ECD-His(氨基酸1-932)两者，并使用Ni-NTA亲和柱，然后使用尺寸排阻色谱纯化蛋白。
6.4.2结果
6.4.2.1抗体结合表位的鉴定
为了确定抗体表位，对Ab237进行种间结合分析。分析显示Ab237以高亲合力结合至人(A549)和猴(4MBr5)细胞系上表达的MET，但是不能结合至报道表达高水平MET的狗(MDCK)或鼠科(MS1)细胞系(表15)。
表15抗-MET抗体与表达MET的人、猴、狗和鼠科细胞系的FACS结合。
克隆 人(A549) 猴(4MBr5) 狗(MDCK) 鼠科(MS1)
Ab235 + + - -
Ab236 + + - -
Ab237 + + - -
Ab238 + + - -
Ab239 + + - -
使用ELISA测定扩大了这一发现。Ab237以高亲合力(EC50＝0.02nM)结合人MET-ECD，但对鼠科MET-ECD未观察到可检测的结合(表16)。另外，含有与人MET PSI-Ig域融合的鼠科MET SEMA域的嵌合蛋白质完全消除了Ab237的结合，表明抗体表位位于SEMA域内(表16)。
表16抗-MET抗体与人、鼠科和嵌合MET-ECD的ELISA结合。
人、猴、狗和鼠科MET受体的蛋白质序列比较以及所发表的MET SEMA-PSI域的晶体结构(Stamos等人,2004,EMBO J.23(12):2325-2335)显示一些表面-暴露的氨基酸可以促进Ab237与来自不同种的MET结合的差异。在人和鼠科SEMA域相差的15个氨基酸中，表面-暴露的氨基酸中的5个非常临近(Q328/R331/S336/L337/N338)。人MET(hMET)蛋白中该表面-暴露的群集被来自狗或鼠科MET的相应氨基酸替代。然后，将hMET突变体转染到CHO细胞并通过流式细胞术测量抗体结合亲合力。与以亚纳摩尔亲合力结合Ab237的野生型hMET受体相比，具有鼠科或狗突变的hMET受体完全消除了Ab237结合，但对结合MET的Ig域的对照抗体无影响(表17)。
表17.通过突变发生分析的Ab237和Ab238的表位定位。(ND＝不可检测)。
类似地，由于该氨基酸群集的突变将Ab238的结合完全消除至与Ab237类似的程度(表17)，因此Ab238与hMET受体的结合还包括Q328/R331/S336/L337/N338，表明Ab237和Ab238共有位于SEMA域的重叠表位。竞争性结合测定(参见部分6.1.2.4)显示抗体Ab235-Ab239和Ab241-Ab255均共有类似的表位，表明这些抗体共有位于SEMA域的重叠表位。
6.4.2.2通过不依赖于外显子14的途径抗体促进的MET降解包括泛素化，但不包括脱出(shedding)
将ELISA测定用于确定Ab237是否可以引起通过膜蛋白酶-介导的受体脱出的受体降解。将A549细胞与1nM抗体(Ab237、Ab238或对照)培育24小时，并使用ELISA测定定量可溶性MET胞外域(sMET-ECD)蛋白向细胞培养基中的释放。与先前报道一致，用PMA(佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-醋酸酯)处理细胞引起大量MET脱出和sMET-ECD释放至培养基，而在HGF-处理的样品中未检测到脱出(图12A)。用抗-MET抗体处理细胞不会导致MET脱出，表明通过不同途径进行所观察到的抗体-引起的受体降解。
然后，研究了抗-MET抗体是否促进MET泛素化和降解。用1nM HGF或抗-MET抗体刺激A549细胞15分钟。用抗泛素抗体缀合的琼脂糖(SantaCruz)沉淀，随后用抗-MET抗体(Cell Signaling Technology)免疫印迹细胞裂解液。HGF和抗体两者处理15分钟引起有效的受体泛素化(图12B)。因此，这些抗体促进了使用泛素化机制而不是蛋白酶-介导的脱出的受体降解。这与先前用抗体，如DN30所观察到的膜蛋白酶-介导的受体脱出相反(Schleter,2010,J.Biol.Chem.285(34):26335-26340)。
MET外显子14突变已在多种癌症中有报道(The Cancer Genome Atlas ResearchNetwork,2014,Nature,511(7511):543-550；Frampton等人,2015,Cancer Discov.5(8):850-859)。MET外显子14突变赋予了降低的HGF-引起的受体降解。如先前所报道的，外显子14(Leu964-Asp1010)的缺失移除了Cbl结合所必需的Tyr1003位点，从而导致HGF-引起的受体降解显著减少(Kong-Beltram等人,2006,Cancer Res.66(1):283-289)。已表明在不存在该肿瘤类型中所观察到的MET基因扩增的情况下，人胃肿瘤中外显子14突变的存在可以解释MET的过表达(Lee等人,2015,Oncotarget 6(29):28211-28222)。在非小-细胞肺癌细胞系H596中，表达了不含外显子14所编码的47个氨基酸的功能性MET蛋白(Kong-Beltram等人,2006,Cancer Res.66(1):283-289)。在该细胞系中，已表明HGF-引起的MET降解受Tyr1003的不存在的损害(Kong-Beltram等人,2006,Cancer Res.66(1):283-289)。与表达野生型MET的细胞系，如A549和U87MG细胞中约80％的降解相比，H596细胞与1nM HGF培育24小时仅导致30％的受体降解。相反，与1nM HGF和1nM Ab237或Ab238抗体培育24小时仍能够引起>70％的MET降解(图13A)。在细胞增殖测定中，在培养基中存在1nM HGF的情况下，抗-MET抗体的加入导致了显著的H596细胞生长抑制(图13B)。
因此，向外显子14突变体细胞中加入Ab237或Ab238抗-MET抗体导致大量MET降解，表明这些抗-MET抗体所使用的降解途径不同于HGF-引起的MET降解并且不太依赖于含有Cbl结合位点的外显子14-编码的近膜区。
为了确定在本文中所观察到的抗体-引起的MET降解是否需要MET激酶活性，研究了MET激酶抑制剂克唑替尼(Crizotinib)对HGF和抗-MET抗体-引起的降解的影响。用1M克唑替尼(Crizotinib)预处理的细胞完全阻断了HGF-引起的MET磷酸化(图2，参见部分6.1.2.6)，并且完全抑制了HGF-引起的MET降解(图14)。与其对HGF的影响不同，克唑替尼(Crizotinib)仅部分降低Ab237-和Ab238-引起的MET降解(图14)。总而言之，然而，这些结果表明这些抗体的降解途径不是HGF所使用的途径并且不同于蛋白酶-引起的脱出。重要地，这些抗体的降解途径在外显子14突变体癌细胞中仍保持功能性。
6.4.3结论
本实施例中的数据显示Ab237和Ab238共有位于SEMA域中的重叠表位。此外，所述抗体(例如，Ab237)使用了HGF未使用的并且不同于蛋白酶-引起的脱出的替代降解途径，从而在外显子14突变体癌细胞(MET-增强的癌症中经常突变的区域)中所述抗体仍保持功能性。
本文所引用的所有参考文献(例如，出版刊物或者专利或者专利申请)以如每篇单独的参考文献(例如，出版刊物或者专利或者专利申请)具体并且单独指明出于所有目的以其全部内容作为参考并入本文相同的程度以其全部内容并且出于所有目的作为参考并入本文。
其他实施方式在以下权利要求的范围内。
序列表
<110> 待命名
<120> 抗-MET抗体及其使用方法
<130> 12638-125-228
<140> 等通知
<141> 等通知
<160> 300
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL CDR1 Kabat
<400> 1
Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met Phe
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL CDR2 Kabat
<400> 2
Asp Thr Phe Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL CDR3 Kabat
<400> 3
Gln Gln Trp Ser Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH CDR1 Kabat
<400> 4
Asn Tyr Trp Ile Glu Trp
1 5
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH CDR2 Kabat
<400> 5
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH CDR3 Kabat
<400> 6
Pro Ser Thr Ile Pro Pro Asp Cys
1 5
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL CDR1 Kabat
<400> 7
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Phe
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL CDR2 Kabat
<400> 8
Asp Thr Ser Asp Leu Ala Ser
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL CDR3 Kabat
<400> 9
Gln Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 10
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH CDR1 Kabat
<400> 10
Ser Tyr Trp Ile Glu Trp
1 5
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH CDR2 Kabat
<400> 11
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Phe Ile Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 12
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH CDR3 Kabat
<400> 12
Pro Ser Thr Val Pro Pro Asp Cys
1 5
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL CDR1 Kabat
<400> 13
Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL CDR2 Kabat
<400> 14
Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp
1 5
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL CDR3 Kabat
<400> 15
Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH CDR1 Kabat
<400> 16
Asp Ser Tyr Met Ala
1 5
<210> 17
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237, Ab239 VH CDR2 Kabat
<400> 17
Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH CDR3 Kabat
<400> 18
Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn Tyr
1 5 10 15
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL CDR1 Kabat
<400> 19
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL CDR2 Kabat
<400> 20
Asn Ala Asn Thr Leu Gln Asn
1 5
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL CDR3 Kabat
<400> 21
Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH CDR1 Kabat
<400> 22
Thr Tyr Gly Met Gly Val
1 5
<210> 23
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH CDR2 Kabat
<400> 23
Asn Ile Trp Trp Asp Asp Val Asn Tyr Ser Asn Pro Ser Leu Lys Asn
1 5 10 15
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH CDR3 Kabat
<400> 24
Ile Gly Thr Ser His Ile Val Asp Ala
1 5
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL CDR1 Kabat
<400> 25
Val Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Arg Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL CDR2 Kabat
<400> 26
Ala Ala Asp Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL CDR3 Kabat
<400> 27
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Ile Asp Ile Val
1 5 10
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH CDR1 Kabat
<400> 28
Asp Cys Tyr Met Ala
1 5
<210> 29
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH CDR3 Kabat
<400> 29
Glu Arg Tyr Tyr Asp Gly Thr Tyr Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL CDR1 Kabat
<400> 30
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL CDR2 Kabat
<400> 31
Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL CDR3 Kabat
<400> 32
Gln Gln Tyr Asp Ser Ser Pro Phe Thr
1 5
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH CDR1 Kabat
<400> 33
Thr Asn Ser Val His
1 5
<210> 34
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH CDR2 Kabat
<400> 34
Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH CDR3 Kabat
<400> 35
Asp Pro Tyr Gln Asn Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 36
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VH CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = Asn或Ser
<400> 36
Xaa Tyr Trp Ile Glu Trp
1 5
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共有序列VH CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Ser或Cys
<400> 37
Asp Xaa Tyr Met Ala
1 5
<210> 38
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VH CDR2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Asn或Ser
<400> 38
Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Xaa Thr Lys Tyr Xaa Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly Lys
<210> 39
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共有序列VH CDR2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = Arg或不存在
<400> 39
Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly Xaa
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VH CDR3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ile或Val
<400> 40
Pro Ser Thr Xaa Pro Pro Asp Cys
1 5
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VL CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Asn或Ser
<400> 41
Ser Ala Ser Ser Ser Val Xaa Tyr Met Phe
1 5 10
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共有序列VL CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ala或Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Tyr或His
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Asp或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Leu或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Aka ir Absebt
<400> 42
Leu Ala Ser Xaa Asp Ile Xaa Ser Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VL CDR2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Asn或Asp
<400> 43
Asp Thr Xaa Xaa Leu Ala Ser
1 5
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VL CDR3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ile或Asn
<400> 44
Gln Gln Trp Ser Xaa Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 45
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共有序列VH CDR3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Gly或Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ile或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 5, 7
<223> Xaa = Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Thr或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Pro或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Cys或Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Tyr或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = Asn或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Tyr或Phe
<400> 45
Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Xaa Xaa Phe Xaa Xaa
1 5 10 15
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH CDR2 Kabat
<400> 46
Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 47
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab241-Ab255共有序列VL
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ser或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Val或Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = Arp或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 21
<223> Xaa = Thr或Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 41
<223> Xaa = Lys或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 42
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 44
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 63, 65
<223> Xaa = Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 68
<223> Xaa = Asp或Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 69
<223> Xaa = Phe或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 70
<223> Xaa = Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 72
<223> Xaa = Thr或Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 74
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 78
<223> Xaa = Pro或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 82
<223> Xaa = Ala或Ser
<400> 47
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Ser Ala Ser Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Xaa Thr Ile Xaa Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn Leu
20 25 30
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Xaa Xaa Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Xaa Gly
50 55 60
Xaa Gly Thr Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Ile Xaa Ser Leu Gln Xaa Glu Asp
65 70 75 80
Val Xaa Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro Thr Phe
85 90 95
Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VL
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Thr或Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 30
<223> Xaa = Asn或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 39
<223> Xaa = Ala或Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> 51
<223> Xaa = Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 52
<223> Xaa = Asn或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 92
<223> Xaa = Ile或Asn
<400> 48
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Xaa Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Xaa Tyr Met
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Xaa Xaa Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Xaa Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab241-Ab255共有序列VH
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa = Gly或Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 42
<223> Xaa = Gly或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 69
<223> Xaa = Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 77
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 88
<223> Xaa = Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 116
<223> Xaa = Gln或His
<220>
<221> VARIANT
<222> 118
<223> Xaa = Val或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 124
<223> Xaa = Ser或Ala
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Xaa
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Xaa Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Xaa Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Xaa Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Xaa Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Xaa Gly Xaa Met Val Thr Val Ser Xaa
115 120
<210> 50
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VH
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Val或Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 28
<223> Xaa = Ile或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 31
<223> Xaa = Asn或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 57
<223> Xaa = Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 58
<223> Xaa = Thr或Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 61
<223> Xaa = Asn或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 85
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 102
<223> Xaa = Ile或Val
<400> 50
Gln Xaa Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Xaa Phe Ser Xaa Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Xaa Xaa Lys Tyr Xaa Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Xaa Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Ser Thr Xaa Pro Pro Asp Cys Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ala
115
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab241-Ab255共有序列VL CDR1
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Asn或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Leu或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Ala或不存在
<400> 51
Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 52
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL变体1
<400> 52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 53
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL变体2
<400> 53
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Phe Gly Phe Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 54
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL变体3
<400> 54
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 55
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL变体4
<400> 55
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 56
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL变体5
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 57
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL
<400> 57
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Thr Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Phe Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ile Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL
<400> 58
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Tyr Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 59
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL
<400> 59
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Glu Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ser Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 60
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL
<400> 60
Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Ala Asn Thr Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Val Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Asn Leu His Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 61
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL
<400> 61
Gly Gln Phe Thr Leu Thr Gln Pro Lys Ser Val Ser Gly Ser Leu Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ile Thr Ile Pro Cys Val Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp
20 25 30
Arg Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Leu Gly Arg Pro Pro Leu Asn
35 40 45
Val Ile Tyr Ala Ala Asp Gln Arg Pro Ser Glu Val Ser Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Thr
65 70 75 80
Asp Leu Gln Met Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Ser Tyr Asp
85 90 95
Ser Asn Ile Asp Ile Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 62
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL
<400> 62
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Phe Tyr Met Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Arg Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Tyr Gln Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Lys
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 63
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH variant 1
<400> 63
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 64
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH variant 2
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 65
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH variant 3
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 66
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH
<400> 66
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Tyr Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Ser Thr Ile Pro Pro Asp Cys Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ala
115
<210> 67
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH
<400> 67
Gln Ala Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Phe Ile Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Asn Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Ser Thr Val Pro Pro Asp Cys Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ala
115
<210> 68
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly His Gly Val Met Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 69
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH
<400> 69
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Val Ala Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Asp Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala Asn Ile Trp Trp Asp Asp Val Asn Tyr Ser Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val
65 70 75 80
Phe Leu Gln Ile Thr Asn Val Asp Thr Ala Glu Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Gly Thr Ser His Ile Val Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Ala Ser Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 70
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Asp Cys
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Arg Tyr Tyr Asp Gly Thr Tyr Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 71
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH
<400> 71
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Leu Ser Leu Thr Thr Asn
20 25 30
Ser Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Arg Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Pro Tyr Gln Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Lys
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-255 VL CDR1 Kabat
<400> 72
Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-255 VH CDR2 Kabat
<400> 73
Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 74
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1, VH2, VH3 HFW1 Kabat
<400> 74
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 75
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HFW1 Kabat
<400> 75
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 76
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HFW1 Kabat
<400> 76
Gln Ala Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Ile Phe Ser
20 25 30
<210> 77
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HFW1 Kabat
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 78
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HFW1 Kabat
<400> 78
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser
20 25 30
<210> 79
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HFW1 Kabat Kabat
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr
20 25 30
<210> 80
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 HFW1 Kabat
<400> 80
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Leu Ser Leu Thr
20 25 30
<210> 81
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1, VH2, VH3, HFW2 Kabat
<400> 81
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235, Ab236 HFW2 Kabat
<400> 82
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 83
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237, Ab239 HFW2 Kabat
<400> 83
Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 84
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HFW2 Kabat
<400> 84
Ala Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Asp Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10 15
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 HFW2 Kabat
<400> 85
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 86
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1 HFW3 Kabat
<400> 86
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asp Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 87
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH2 HFW3 Kabat
<400> 87
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 88
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH3 HFW3 Kabat
<400> 88
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 89
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HFW3 Kabat
<400> 89
Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu
1 5 10 15
Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 90
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HFW3 Kabat
<400> 90
Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu
1 5 10 15
Ser Asn Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 91
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HFW3 Kabat
<400> 91
Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln Met
1 5 10 15
Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 92
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HFW3 Kabat
<400> 92
Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Asn Asn Gln Val Phe Leu Gln
1 5 10 15
Ile Thr Asn Val Asp Thr Ala Glu Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 93
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HFW3 Kabat
<400> 93
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Ser Ser Leu Tyr Leu Glu Met
1 5 10 15
Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 94
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AB240 HFW3 Kabat
<400> 94
Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Arg Ser Gln Val Phe Leu Lys
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1, VH2 HFW4 Kabat
<400> 95
Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH3, HFW4 Kabat
<400> 96
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 97
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235, Ab236 HFW3 Kabat
<400> 97
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HFW3 Kabat
<400> 98
Trp Gly His Gly Val Met Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HFW3 Kabat
<400> 99
Trp Gly Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HFW3 Kabat
<400> 100
Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AB240 HFW3 Kabat
<400> 101
Trp Gly Gln Gly Val Lys Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 102
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL1, VL2, VL3, VL4, VL5 LFW1 Kabat
<400> 102
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 103
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LFW1 Kabat
<400> 103
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Thr Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 104
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LFW1 Kabat
<400> 104
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 105
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LFW1 Kabat
<400> 105
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Glu Cys
20
<210> 106
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LFW1 Kabat
<400> 106
Asp Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Asn Ile Glu Cys
20
<210> 107
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LFW1 Kabat
<400> 107
Gly Gln Phe Thr Leu Thr Gln Pro Lys Ser Val Ser Gly Ser Leu Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ile Thr Ile Pro Cys
20
<210> 108
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AB240 LFW1 Kabat
<400> 108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Pro Phe Tyr Met Pro Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 109
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL1 LFW2 Kabat
<400> 109
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 110
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL2, VL3, VL4, VL5 LFW2 Kabat
<400> 110
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 111
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LFW2 Kabat
<400> 111
Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 112
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LFW2 Kabat
<400> 112
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 113
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LFW2 Kabat
<400> 113
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 114
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LFW2 Kabat
<400> 114
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 115
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LFW2 Kabat
<400> 115
Trp Tyr Gln Gln Arg Leu Gly Arg Pro Pro Leu Asn Val Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 116
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AB240 LFW2 Kabat
<400> 116
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Ile Lys Thr Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 117
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL1 LFW1 Kabat
<400> 117
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 118
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL2 LFW2 Kabat
<400> 118
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Phe Gly Phe Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 119
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL3 LFW3 Kabat
<400> 119
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 120
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL4 LFW4 Kabat
<400> 120
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Ile Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 121
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL5 LFW5 Kabat
<400> 121
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 122
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235, Ab236 LFW3 Kabat Kabat
<400> 122
Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 123
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LFW3 Kabat
<400> 123
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser Glu Asp Val Ser Ile Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 124
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LFW3 Kabat
<400> 124
Gly Val Pro Ser Val Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Lys Ile Asn Asn Leu His Ser Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 125
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LFW3 Kabat
<400> 125
Glu Val Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser
1 5 10 15
Ala Ser Leu Thr Ile Thr Asp Leu Gln Met Asp Asp Glu Ala Asp Tyr
20 25 30
Phe Cys
<210> 126
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AB240 LFW3 Kabat
<400> 126
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 127
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL1, VL2, VL3, VL4, VL5, Ab237 LFW4 Kabat
<400> 127
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 128
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235, Ab236, Ab238, Ab239 LFW4 Kabat
<400> 128
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AB240 LFW4 Kabat
<400> 129
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Arg
1 5 10
<210> 130
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR1 Chothia
<400> 130
Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
1 5
<210> 131
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR2 Chothia
<400> 131
Leu Pro Gly Ser Asp Tyr
1 5
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR3 Chothia
<400> 132
Pro Ser Thr Ile Pro Pro Asp Cys
1 5
<210> 133
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LCDR1 Chothia
<400> 133
Ser Ala Ser Ser Ser Val Asn Tyr Met Phe
1 5 10
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LCDR2 Chothia
<400> 134
Asp Thr Phe Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 135
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LCDR3 Chothia
<400> 135
Gln Gln Trp Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR1 Chothia
<400> 136
Gly Tyr Ile Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 137
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR2 Chothia
<400> 137
Leu Pro Gly Ser Asp Phe
1 5
<210> 138
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR3 Chothia
<400> 138
Pro Ser Thr Val Pro Pro Asp Cys
1 5
<210> 139
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR1 Chothia
<400> 139
Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Phe
1 5 10
<210> 140
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR2 Chothia
<400> 140
Asp Thr Ser Asp Leu Ala Ser
1 5
<210> 141
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR3 Chothia
<400> 141
Gln Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR1 Chothia
<400> 142
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
1 5
<210> 143
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR2 Chothia
<400> 143
Ser Ser Asp Gly Gly Gly
1 5
<210> 144
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR3 Chothia
<400> 144
Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn Tyr
1 5 10 15
<210> 145
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR1 Chothia
<400> 145
Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 146
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR2 Chothia
<400> 146
Asn Asn Leu Asn Asp
1 5
<210> 147
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR3 Chothia
<400> 147
Pro Pro Thr Phe Gly Ala Gly Thr
1 5
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR1 Chothia
<400> 148
Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Gly Met
1 5
<210> 149
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR2 Chothia
<400> 149
Trp Trp Asp Asp Val
1 5
<210> 150
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR3 Chothia
<400> 150
Ile Gly Thr Ser His Ile Val Asp Ala
1 5
<210> 151
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR1 Chothia
<400> 151
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Asp Leu Ala
1 5 10
<210> 152
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR2 Chothia
<400> 152
Asn Ala Asn Thr Leu Gln Asn
1 5
<210> 153
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR3 Chothia
<400> 153
Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 154
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR1 Chothia
<400> 154
Gly Phe Ser Phe Thr Asp Cys
1 5
<210> 155
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR2 Chothia
<400> 155
Ser Ser Asp Gly Gly Gly
1 5
<210> 156
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR3 Chothia
<400> 156
Glu Arg Tyr Tyr Asp Gly Thr Tyr Tyr Gly Tyr Trp Tyr Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 157
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR1 Chothia
<400> 157
Val Arg Ser Ser Gly Asp Ile Gly Asp Arg Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 158
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR2 Chothia
<400> 158
Ala Ala Asp Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR3 Chothia
<400> 159
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Ile Asp Ile Val
1 5 10
<210> 160
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR1 IMGT
<400> 160
Gly Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Trp
1 5
<210> 161
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR2 IMGT
<400> 161
Ile Leu Pro Gly Ser Asp Tyr Thr
1 5
<210> 162
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR3 IMGT
<400> 162
Ala Arg Pro Ser Thr Ile Pro Pro Asp Cys
1 5 10
<210> 163
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LCDR1 IMGT
<400> 163
Ser Ser Val Asn Tyr
1 5
<210> 164
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LCDR2 IMGT
<400> 164
Asp Thr Phe
1
<210> 165
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 LCDR3 IMGT
<400> 165
Gln Gln Trp Ser Ile Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 166
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR1 IMGT
<400> 166
Gly Tyr Ile Phe Ser Ser Tyr Trp
1 5
<210> 167
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR2 IMGT
<400> 167
Ile Leu Pro Gly Ser Asp Phe Ile
1 5
<210> 168
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR3 IMGT
<400> 168
Ala Arg Pro Ser Thr Val Pro Pro Asp Cys
1 5 10
<210> 169
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR1 IMGT
<400> 169
Ser Ser Val Ser Tyr
1 5
<210> 170
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR2 IMGT
<400> 170
Asp Thr Ser
1
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR3 IMGT
<400> 171
Gln Gln Trp Ser Asn Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR1 IMGT
<400> 172
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Tyr
1 5
<210> 173
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR2 IMGT
<400> 173
Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr
1 5
<210> 174
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR3 IMGT
<400> 174
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
1 5 10 15
Tyr
<210> 175
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR1 IMGT
<400> 175
Ala Asp Ile His Ser Asn
1 5
<210> 176
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR2 IMGT
<400> 176
Tyr Gly Asn
1
<210> 177
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR3 IMGT
<400> 177
Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro Thr
1 5
<210> 178
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR1 IMGT
<400> 178
Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Gly Met Gly
1 5 10
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR2 IMGT
<400> 179
Ile Trp Trp Asp Asp Val Asn
1 5
<210> 180
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR3 IMGT
<400> 180
Ala Arg Ile Gly Thr Ser His Ile Val Asp Ala
1 5 10
<210> 181
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR1 IMGT
<400> 181
Glu Asp Ile Tyr Ser Asp
1 5
<210> 182
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR2 IMGT
<400> 182
Asn Ala Asn
1
<210> 183
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR3 IMGT
<400> 183
Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 184
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR1 IMGT
<400> 184
Gly Phe Ser Phe Thr Asp Cys Tyr Ile
1 5
<210> 185
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR2 IMGT
<400> 185
Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr
1 5
<210> 186
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR3 IMGT
<400> 186
Thr Thr Glu Arg Tyr Tyr Asp Gly Thr Tyr Tyr Gly Tyr
1 5 10
<210> 187
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR1 IMGT
<400> 187
Ser Gly Asp Ile Gly Asp Arg Tyr
1 5
<210> 188
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR2 IMGT
<400> 188
Ala Ala Asp
1
<210> 189
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR3 IMGT
<400> 189
Gln Ser Tyr Asp Ser Asn Ile Asp Ile Val
1 5 10
<210> 190
<211> 1384
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> 人Met蛋白
<400> 190
Glu Cys Lys Glu Ala Leu Ala Lys Ser Glu Met Asn Val Asn Met Lys
1 5 10 15
Tyr Gln Leu Pro Asn Phe Thr Ala Glu Thr Pro Ile Gln Asn Val Ile
20 25 30
Leu His Glu His His Ile Phe Leu Gly Ala Thr Asn Tyr Ile Tyr Val
35 40 45
Leu Asn Glu Glu Asp Leu Gln Lys Val Ala Glu Tyr Lys Thr Gly Pro
50 55 60
Val Leu Glu His Pro Asp Cys Phe Pro Cys Gln Asp Cys Ser Ser Lys
65 70 75 80
Ala Asn Leu Ser Gly Gly Val Trp Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu
85 90 95
Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val
100 105 110
Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His Val Phe Pro His Asn His Thr Ala
115 120 125
Asp Ile Gln Ser Glu Val His Cys Ile Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu
130 135 140
Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val
145 150 155 160
Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe Ile Asn Phe Phe Val Gly Asn Thr
165 170 175
Ile Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Asp His Pro Leu His Ser Ile Ser Val
180 185 190
Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln
195 200 205
Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys
210 215 220
Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn Asn Phe Ile Tyr Phe Leu Thr Val
225 230 235 240
Gln Arg Glu Thr Leu Asp Ala Gln Thr Phe His Thr Arg Ile Ile Arg
245 250 255
Phe Cys Ser Ile Asn Ser Gly Leu His Ser Tyr Met Glu Met Pro Leu
260 265 270
Glu Cys Ile Leu Thr Glu Lys Arg Lys Lys Arg Ser Thr Lys Lys Glu
275 280 285
Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala Tyr Val Ser Lys Pro Gly Ala Gln
290 295 300
Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser Leu Asn Asp Asp Ile Leu Phe Gly
305 310 315 320
Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp Ser Ala Glu Pro Met Asp Arg Ser
325 330 335
Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys Tyr Val Asn Asp Phe Phe Asn Lys
340 345 350
Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg Cys Leu Gln His Phe Tyr Gly Pro
355 360 365
Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg Thr Leu Leu Arg Asn Ser Ser Gly
370 375 380
Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr Arg Thr Glu Phe Thr Thr Ala Leu
385 390 395 400
Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly Gln Phe Ser Glu Val Leu Leu Thr
405 410 415
Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly Asp Leu Thr Ile Ala Asn Leu Gly
420 425 430
Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln Val Val Val Ser Arg Ser Gly Pro
435 440 445
Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu Leu Asp Ser His Pro Val Ser Pro
450 455 460
Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu Asn Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Val
465 470 475 480
Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys Ile Pro Leu Asn Gly Leu Gly Cys
485 490 495
Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln Cys Leu Ser Ala Pro Pro Phe Val
500 505 510
Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys Cys Val Arg Ser Glu Glu Cys Leu
515 520 525
Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile Cys Leu Pro Ala Ile Tyr Lys Val
530 535 540
Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu Gly Gly Thr Arg Leu Thr Ile Cys
545 550 555 560
Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg Asn Asn Lys Phe Asp Leu Lys Lys
565 570 575
Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu Ser Cys Thr Leu Thr Leu Ser Glu
580 585 590
Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys Thr Val Gly Pro Ala Met Asn Lys
595 600 605
His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile Ser Asn Gly His Gly Thr Thr Gln
610 615 620
Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp Pro Val Ile Thr Ser Ile Ser Pro
625 630 635 640
Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly Thr Leu Leu Thr Leu Thr Gly Asn
645 650 655
Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg His Ile Ser Ile Gly Gly Lys Thr
660 665 670
Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn Ser Ile Leu Glu Cys Tyr Thr Pro
675 680 685
Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe Ala Val Lys Leu Lys Ile Asp Leu
690 695 700
Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe Ser Tyr Arg Glu Asp Pro Ile Val
705 710 715 720
Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser Phe Ile Ser Thr Trp Trp Lys Glu
725 730 735
Pro Leu Asn Ile Val Ser Phe Leu Phe Cys Phe Ala Ser Gly Gly Ser
740 745 750
Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn Ser Val Ser Val Pro Arg
755 760 765
Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg Asn Phe Thr Val Ala Cys
770 775 780
Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys Cys Thr Thr Pro Ser Leu
785 790 795 800
Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys Thr Lys Ala Phe Phe Met
805 810 815
Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp Leu Ile Tyr Val His Asn
820 825 830
Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val Met Ile Ser Met Gly Asn
835 840 845
Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp Ile Asp Pro Glu Ala Val
850 855 860
Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys Ser Cys Glu Asn Ile His
865 870 875 880
Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val Pro Asn Asp Leu Leu Lys
885 890 895
Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys Gln Ala Ile Ser Ser Thr
900 905 910
Val Leu Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp Gln Asn Phe Thr Gly Leu
915 920 925
Ile Ala Gly Val Val Ser Ile Ser Thr Ala Leu Leu Leu Leu Leu Gly
930 935 940
Phe Phe Leu Trp Leu Lys Lys Arg Lys Gln Ile Lys Asp Leu Gly Ser
945 950 955 960
Glu Leu Val Arg Tyr Asp Ala Arg Val His Thr Pro His Leu Asp Arg
965 970 975
Leu Val Ser Ala Arg Ser Val Ser Pro Thr Thr Glu Met Val Ser Asn
980 985 990
Glu Ser Val Asp Tyr Arg Ala Thr Phe Pro Glu Asp Gln Phe Pro Asn
995 1000 1005
Ser Ser Gln Asn Gly Ser Cys Arg Gln Val Gln Tyr Pro Leu Thr Asp
1010 1015 1020
Met Ser Pro Ile Leu Thr Ser Gly Asp Ser Asp Ile Ser Ser Pro Leu
1025 1030 1035 1040
Leu Gln Asn Thr Val His Ile Asp Leu Ser Ala Leu Asn Pro Glu Leu
1045 1050 1055
Val Gln Ala Val Gln His Val Val Ile Gly Pro Ser Ser Leu Ile Val
1060 1065 1070
His Phe Asn Glu Val Ile Gly Arg Gly His Phe Gly Cys Val Tyr His
1075 1080 1085
Gly Thr Leu Leu Asp Asn Asp Gly Lys Lys Ile His Cys Ala Val Lys
1090 1095 1100
Ser Leu Asn Arg Ile Thr Asp Ile Gly Glu Val Ser Gln Phe Leu Thr
1105 1110 1115 1120
Glu Gly Ile Ile Met Lys Asp Phe Ser His Pro Asn Val Leu Ser Leu
1125 1130 1135
Leu Gly Ile Cys Leu Arg Ser Glu Gly Ser Pro Leu Val Val Leu Pro
1140 1145 1150
Tyr Met Lys His Gly Asp Leu Arg Asn Phe Ile Arg Asn Glu Thr His
1155 1160 1165
Asn Pro Thr Val Lys Asp Leu Ile Gly Phe Gly Leu Gln Val Ala Lys
1170 1175 1180
Gly Met Lys Tyr Leu Ala Ser Lys Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala
1185 1190 1195 1200
Ala Arg Asn Cys Met Leu Asp Glu Lys Phe Thr Val Lys Val Ala Asp
1205 1210 1215
Phe Gly Leu Ala Arg Asp Met Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Ser Val His
1220 1225 1230
Asn Lys Thr Gly Ala Lys Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Leu Glu Ser
1235 1240 1245
Leu Gln Thr Gln Lys Phe Thr Thr Lys Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly
1250 1255 1260
Val Leu Leu Trp Glu Leu Met Thr Arg Gly Ala Pro Pro Tyr Pro Asp
1265 1270 1275 1280
Val Asn Thr Phe Asp Ile Thr Val Tyr Leu Leu Gln Gly Arg Arg Leu
1285 1290 1295
Leu Gln Pro Glu Tyr Cys Pro Asp Pro Leu Tyr Glu Val Met Leu Lys
1300 1305 1310
Cys Trp His Pro Lys Ala Glu Met Arg Pro Ser Phe Ser Glu Leu Val
1315 1320 1325
Ser Arg Ile Ser Ala Ile Phe Ser Thr Phe Ile Gly Glu His Tyr Val
1330 1335 1340
His Val Asn Ala Thr Tyr Val Asn Val Lys Cys Val Ala Pro Tyr Pro
1345 1350 1355 1360
Ser Leu Leu Ser Ser Glu Asp Asn Ala Asp Asp Glu Val Asp Thr Arg
1365 1370 1375
Pro Ala Ser Phe Trp Glu Thr Ser
1380
<210> 191
<211> 326
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> 人IgG2恒定区
<400> 191
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 192
<211> 106
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> 人κ轻链区
<400> 192
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 193
<211> 214
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> 轻链
<400> 193
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Gly Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Glu Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Asn Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ser Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 194
<211> 450
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223>重链
<400> 194
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly His Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg
210 215 220
Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 195
<211> 942
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> hu-MET-ECD
<400> 195
Met Lys Ala Pro Ala Val Leu Ala Pro Gly Ile Leu Val Leu Leu Phe
1 5 10 15
Thr Leu Val Gln Arg Ser Asn Gly Glu Cys Lys Glu Ala Leu Ala Lys
20 25 30
Ser Glu Met Asn Val Asn Met Lys Tyr Gln Leu Pro Asn Phe Thr Ala
35 40 45
Glu Thr Pro Ile Gln Asn Val Ile Leu His Glu His His Ile Phe Leu
50 55 60
Gly Ala Thr Asn Tyr Ile Tyr Val Leu Asn Glu Glu Asp Leu Gln Lys
65 70 75 80
Val Ala Glu Tyr Lys Thr Gly Pro Val Leu Glu His Pro Asp Cys Phe
85 90 95
Pro Cys Gln Asp Cys Ser Ser Lys Ala Asn Leu Ser Gly Gly Val Trp
100 105 110
Lys Asp Asn Ile Asn Met Ala Leu Val Val Asp Thr Tyr Tyr Asp Asp
115 120 125
Gln Leu Ile Ser Cys Gly Ser Val Asn Arg Gly Thr Cys Gln Arg His
130 135 140
Val Phe Pro His Asn His Thr Ala Asp Ile Gln Ser Glu Val His Cys
145 150 155 160
Ile Phe Ser Pro Gln Ile Glu Glu Pro Ser Gln Cys Pro Asp Cys Val
165 170 175
Val Ser Ala Leu Gly Ala Lys Val Leu Ser Ser Val Lys Asp Arg Phe
180 185 190
Ile Asn Phe Phe Val Gly Asn Thr Ile Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Asp
195 200 205
His Pro Leu His Ser Ile Ser Val Arg Arg Leu Lys Glu Thr Lys Asp
210 215 220
Gly Phe Met Phe Leu Thr Asp Gln Ser Tyr Ile Asp Val Leu Pro Glu
225 230 235 240
Phe Arg Asp Ser Tyr Pro Ile Lys Tyr Val His Ala Phe Glu Ser Asn
245 250 255
Asn Phe Ile Tyr Phe Leu Thr Val Gln Arg Glu Thr Leu Asp Ala Gln
260 265 270
Thr Phe His Thr Arg Ile Ile Arg Phe Cys Ser Ile Asn Ser Gly Leu
275 280 285
His Ser Tyr Met Glu Met Pro Leu Glu Cys Ile Leu Thr Glu Lys Arg
290 295 300
Lys Lys Arg Ser Thr Lys Lys Glu Val Phe Asn Ile Leu Gln Ala Ala
305 310 315 320
Tyr Val Ser Lys Pro Gly Ala Gln Leu Ala Arg Gln Ile Gly Ala Ser
325 330 335
Leu Asn Asp Asp Ile Leu Phe Gly Val Phe Ala Gln Ser Lys Pro Asp
340 345 350
Ser Ala Glu Pro Met Asp Arg Ser Ala Met Cys Ala Phe Pro Ile Lys
355 360 365
Tyr Val Asn Asp Phe Phe Asn Lys Ile Val Asn Lys Asn Asn Val Arg
370 375 380
Cys Leu Gln His Phe Tyr Gly Pro Asn His Glu His Cys Phe Asn Arg
385 390 395 400
Thr Leu Leu Arg Asn Ser Ser Gly Cys Glu Ala Arg Arg Asp Glu Tyr
405 410 415
Arg Thr Glu Phe Thr Thr Ala Leu Gln Arg Val Asp Leu Phe Met Gly
420 425 430
Gln Phe Ser Glu Val Leu Leu Thr Ser Ile Ser Thr Phe Ile Lys Gly
435 440 445
Asp Leu Thr Ile Ala Asn Leu Gly Thr Ser Glu Gly Arg Phe Met Gln
450 455 460
Val Val Val Ser Arg Ser Gly Pro Ser Thr Pro His Val Asn Phe Leu
465 470 475 480
Leu Asp Ser His Pro Val Ser Pro Glu Val Ile Val Glu His Thr Leu
485 490 495
Asn Gln Asn Gly Tyr Thr Leu Val Ile Thr Gly Lys Lys Ile Thr Lys
500 505 510
Ile Pro Leu Asn Gly Leu Gly Cys Arg His Phe Gln Ser Cys Ser Gln
515 520 525
Cys Leu Ser Ala Pro Pro Phe Val Gln Cys Gly Trp Cys His Asp Lys
530 535 540
Cys Val Arg Ser Glu Glu Cys Leu Ser Gly Thr Trp Thr Gln Gln Ile
545 550 555 560
Cys Leu Pro Ala Ile Tyr Lys Val Phe Pro Asn Ser Ala Pro Leu Glu
565 570 575
Gly Gly Thr Arg Leu Thr Ile Cys Gly Trp Asp Phe Gly Phe Arg Arg
580 585 590
Asn Asn Lys Phe Asp Leu Lys Lys Thr Arg Val Leu Leu Gly Asn Glu
595 600 605
Ser Cys Thr Leu Thr Leu Ser Glu Ser Thr Met Asn Thr Leu Lys Cys
610 615 620
Thr Val Gly Pro Ala Met Asn Lys His Phe Asn Met Ser Ile Ile Ile
625 630 635 640
Ser Asn Gly His Gly Thr Thr Gln Tyr Ser Thr Phe Ser Tyr Val Asp
645 650 655
Pro Val Ile Thr Ser Ile Ser Pro Lys Tyr Gly Pro Met Ala Gly Gly
660 665 670
Thr Leu Leu Thr Leu Thr Gly Asn Tyr Leu Asn Ser Gly Asn Ser Arg
675 680 685
His Ile Ser Ile Gly Gly Lys Thr Cys Thr Leu Lys Ser Val Ser Asn
690 695 700
Ser Ile Leu Glu Cys Tyr Thr Pro Ala Gln Thr Ile Ser Thr Glu Phe
705 710 715 720
Ala Val Lys Leu Lys Ile Asp Leu Ala Asn Arg Glu Thr Ser Ile Phe
725 730 735
Ser Tyr Arg Glu Asp Pro Ile Val Tyr Glu Ile His Pro Thr Lys Ser
740 745 750
Phe Ile Ser Gly Gly Ser Thr Ile Thr Gly Val Gly Lys Asn Leu Asn
755 760 765
Ser Val Ser Val Pro Arg Met Val Ile Asn Val His Glu Ala Gly Arg
770 775 780
Asn Phe Thr Val Ala Cys Gln His Arg Ser Asn Ser Glu Ile Ile Cys
785 790 795 800
Cys Thr Thr Pro Ser Leu Gln Gln Leu Asn Leu Gln Leu Pro Leu Lys
805 810 815
Thr Lys Ala Phe Phe Met Leu Asp Gly Ile Leu Ser Lys Tyr Phe Asp
820 825 830
Leu Ile Tyr Val His Asn Pro Val Phe Lys Pro Phe Glu Lys Pro Val
835 840 845
Met Ile Ser Met Gly Asn Glu Asn Val Leu Glu Ile Lys Gly Asn Asp
850 855 860
Ile Asp Pro Glu Ala Val Lys Gly Glu Val Leu Lys Val Gly Asn Lys
865 870 875 880
Ser Cys Glu Asn Ile His Leu His Ser Glu Ala Val Leu Cys Thr Val
885 890 895
Pro Asn Asp Leu Leu Lys Leu Asn Ser Glu Leu Asn Ile Glu Trp Lys
900 905 910
Gln Ala Ile Ser Ser Thr Val Leu Gly Lys Val Ile Val Gln Pro Asp
915 920 925
Gln Asn Phe Thr Leu Glu His His His His His His His His
930 935 940
<210> 196
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL核酸序列
<400> 196
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctacgt ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaaat tatatgttct ggtaccagca gaaggcagga 120
tcctccccca gactcctgat ttatgacaca ttcaatctgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtatttacc cgtacacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaagcg g 321
<210> 197
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL核酸序列
<400> 197
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgttct ggtaccagca gaagccagga 120
tcctccccca gactcctgat ttatgacaca tccgacctgg cttctggagt ccctgttcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagccgaat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtaattacc cgtacacgtt cggagggggg 300
accaagctgg aaataaaacg g 321
<210> 198
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL核酸序列
<400> 198
gacattcaga tgacacagtc tccaggttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcacc 60
atcgaatgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaattctc ctcagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacacag tattctctga agatcaacag cctgcaatct 240
gaagatgtct cgatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggagct 300
gggaccaagc tggaactgaa acgg 324
<210> 199
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL核酸序列
<400> 199
gatatccgga tgacacagtc tccagcttcc ctgtctgcat ctctgggaga aactgtcaac 60
atcgaatgtc tagcaagtga ggacatttac agtgatttag catggtatca gcagaagcca 120
gggaaatctc ctcaactcct gatctataat gcaaatacct tgcaaaatgg ggtcccttca 180
gtgtttagtg gcagtggatc tggcacacag tattctctaa aaataaacaa cctgcactct 240
gaagatgtcg cgacttactt ctgtcaacaa tataacaatt atcctccgac gttcggtgga 300
ggcaccaagg tggaattgaa acgg 324
<210> 200
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL核酸序列
<400> 200
cagttcacgc tgactcaacc aaagtccgtg tcaggatctt taagaagcac tatcaccatt 60
ccctgtgtgc gcagcagtgg tgacattggc gataggtatg tgagctggta ccagcaacgc 120
ttgggaagac cccccctcaa tgtgatctat gctgctgatc aaagaccttc tgaagtgtct 180
gatcggttct cgggctccat cgacagctcc tctaactcag cctcactgac catcactgat 240
ctgcagatgg atgatgaggc cgactacttc tgtcagtctt acgatagtaa tattgatatt 300
gttttcggtg gtggaaccaa gctcactgtc ctcggt 336
<210> 201
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL核酸序列
<400> 201
gacatccaga tgacccagac tccattctac atgcctgcat ctctgggaga gcgagtcacc 60
atcagttgca gagcaagtca gggtattagt aaatatctaa attggtatca gcagaaacca 120
gatggaacga ttaaaaccct gatctactac acatccaatt tacagtctgg tgtcccatca 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat tattctctca ccatcagcgg cctggagcct 240
gaagattttg cagtgtatta ctgccaacag tacgatagtt ctccattcac gttcggctca 300
gggacgaagt tggaaataaa acgg 324
<210> 202
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241 VL核酸序列
<400> 202
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctcagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga agatcaacag cctgcaatct 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 203
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab242 VL核酸序列
<400> 203
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga ccatcagcag cctgcaatct 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 204
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab243 VL核酸序列
<400> 204
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 205
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab244 VL核酸序列
<400> 205
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 206
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab245 VL核酸序列
<400> 206
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccacctattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 207
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab246 VL核酸序列
<400> 207
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctcagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga agatcaacag cctgcaatct 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 208
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab247 VL核酸序列
<400> 208
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga ccatcagcag cctgcaatct 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 209
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab248 VL核酸序列
<400> 209
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 210
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab249 VL核酸序列
<400> 210
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 211
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab250 VL核酸序列
<400> 211
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccacctattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 212
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab251 VL核酸序列
<400> 212
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctcagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga agatcaacag cctgcaatct 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 213
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab252 VL核酸序列
<400> 213
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga ccatcagcag cctgcaatct 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 214
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab253 VL核酸序列
<400> 214
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac tataccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 215
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab254 VL核酸序列
<400> 215
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccatttattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 216
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab255 VL核酸序列
<400> 216
gacattcaga tgacacagtc tccaagctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacctgtc tagcaagtgc ggatattcac agtaatttag cttggtatca gcagaagcca 120
gggaaggccc ctaagctcct gatctattat ggaaataact tgaatgatgg cgtcccatca 180
cggttcagtg gcagtggatc tggcacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaaccc 240
gaagatgtcg ccacctattt ctgtcaacag agttatgata gtcctccaac gtttggacag 300
gggaccaagc tggaaatcaa a 321
<210> 217
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH核酸序列
<400> 217
caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ttgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt aactactgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgaatg gattggagag attttacctg gaagtgatta tactaagtat 180
aatgagaaat tcaagggcaa ggccacattc actgcagata catcctccaa cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagaccctct 300
acaattcccc ctgactgctg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 218
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH核酸序列
<400> 218
caggctcagc tgcaacagtc tggagctgag ctgatgaagc ctggggcctc agtgaagata 60
tcctgcaagg ctactggcta catattcagt agttattgga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttacctg gaagtgattt tattaagtac 180
agtgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgcagata cgtcctccaa tacagcctac 240
atgcaactca gcaacctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagaccctct 300
acggttcccc ctgactgctg gggccaaggc accactctca cagtctcctc a 351
<210> 219
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH核酸序列
<400> 219
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaaggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgacgaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attctctatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatgg acagtctgcg gtctgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccacgg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 220
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH核酸序列
<400> 220
caggttactc tgaaagagtc tggccctggg atattgcagc cctcccagac cctcagtctg 60
acttgcactt tctctgggtt ttcactgagc acttatggta tgggtgtggc ctggattcgt 120
cagccgtcag ggaaggatct ggagtggctg gcaaacattt ggtgggatga tgttaactac 180
tccaatccat ctctgaagaa ccgactcaca atctccaagg acacctccaa caaccaagtt 240
ttcctccaga tcaccaatgt ggacactgca gaaactgcca catattactg tgctcggatc 300
ggtacatccc atattgtgga tgcctggggt caaggagctt cagtcactgt ctcctca 357
<210> 221
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH核酸序列
<400> 221
gaggtgcagc tggtggaatc tgggggaggc ttagtgcagc ctggaaggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cagtttcact gactgttaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccaacgaagg gtctggagtg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg atttactatc tccagagata atgcaagaag cagcctatac 240
ctagaaatgg acagtctgag gtctgaggac acggccactt attattgtac cacagaaaga 300
tactatgatg gtacttacta cggctactgg tactttgact tctggggccc aggaaccatg 360
gtcaccgtgt cctca 375
<210> 222
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH核酸序列
<400> 222
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggt ctggtgcagc cctcacagac cctgtccctc 60
acctgctctg tctctggact ctcactaacc accaatagtg tacactggat tcgccagcct 120
ccgggaaggg gtctggagtg gatgggagta atatggggtg atggaagcac agactataat 180
tcagctctca aatcccgact gaccatcagc cgggacacct ccaggagcca agtcttctta 240
aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatttact tctgtgccag agacccgtat 300
cagaactact ttgattactg gggccaagga gtcaaggtca cagtctcctc a 351
<210> 223
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241 VH核酸序列
<400> 223
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatgg acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 224
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab242 VH核酸序列
<400> 224
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatgg acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 225
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab243 VH核酸序列
<400> 225
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatgg acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 226
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab244 VH核酸序列
<400> 226
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatgg acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 227
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab245 VH核酸序列
<400> 227
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatgg acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 228
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab246 VH核酸序列
<400> 228
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 229
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab247 VH核酸序列
<400> 229
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 230
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab248 VH核酸序列
<400> 230
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 231
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab249 VH核酸序列
<400> 231
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 232
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab250 VH核酸序列
<400> 232
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaag cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg agtcatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 233
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab251 VH核酸序列
<400> 233
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaaa cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg aaccatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 234
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab252 VH核酸序列
<400> 234
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaaa cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg aaccatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 235
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab253 VH核酸序列
<400> 235
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaaa cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg aaccatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 236
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab254 VH核酸序列
<400> 236
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaaa cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg aaccatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 237
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab255 VH核酸序列
<400> 237
gaggtgcagc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcagc ctggaggctc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctcaggatt cactttcagt gactcgtaca tggcctgggt ccgccaggct 120
ccgggcaagg gtctggaatg ggtcgcatcc attagttctg atggtggtgg cacttactat 180
cgagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagata atgcgaaaaa cagcctctac 240
ctgcaaatga acagtctgcg gaccgaggac acggccactt attactgtac aacagagggg 300
atttatacta cggattatta cccttattgc tttaattatt ggggccaggg aaccatggtc 360
acagtctcct ca 372
<210> 238
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 VL 共有序列
<220>
<221> VARIANT
<222> 45
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 65, 67
<223> Xaa = Ser或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 71
<223> Xaa = Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 74
<223> Xaa = Thr或Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 76
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 80
<223> Xaa = Pro或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 85
<223> Xaa = Ile或Thr
<400> 238
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Ala Asp Ile His Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Xaa Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Gly Asn Asn Leu Asn Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Xaa Gly Xaa Gly Thr Asp Xaa Thr Leu Xaa Ile Xaa Ser Leu Gln Xaa
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Xaa Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Asp Ser Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 239
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 VH共有序列
<220>
<221> VARIANT
<222> 77
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 84
<223> Xaa = Asp或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 118
<223> Xaa = Thr或Val
<400> 239
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Asp Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Xaa Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Xaa Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Thr Glu Gly Ile Tyr Thr Thr Asp Tyr Tyr Pro Tyr Cys Phe Asn
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Xaa Met Val
115 120
<210> 240
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 LFW1共有序列Kabat
<400> 240
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 241
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 LFW2共有序列Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Lys或Gln
<400> 241
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Xaa Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 242
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 LFW3共有序列Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 9, 11
<223> Xaa = Ser或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = Thr或Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 20
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 24
<223> Xaa = Pro或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 29
<223> Xaa = Ile或Thr
<400> 242
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Xaa Gly Xaa Gly Thr Asp Xaa Thr
1 5 10 15
Leu Xaa Ile Xaa Ser Leu Gln Xaa Glu Asp Val Ala Xaa Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 243
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 LFW4共有序列Kabat
<400> 243
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 244
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 HFW1共有序列Kabat
<400> 244
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 245
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 HFW2共有序列Kabat
<400> 245
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 246
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 HFW3共有序列Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = Asp或Asn
<400> 246
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Xaa Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Xaa Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 247
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 HFW4共有序列Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Thr或Val
<400> 247
Trp Gly Gln Gly Xaa Met Val
1 5
<210> 248
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 LCDR1共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Ser或Asn
<400> 248
Ser Ala Ser Ser Ser Val Xaa Tyr Met Phe
1 5 10
<210> 249
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 LCDR2共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Tyr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Asn或Asp
<400> 249
Asp Xaa Xaa Xaa Leu Ala Ser
1 5
<210> 250
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 LCDR3共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Tyr或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Tyr或不存在
<400> 250
Gln Gln Trp Ser Xaa Xaa Pro Tyr Thr
1 5
<210> 251
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR1共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ile或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ser或Asn
<400> 251
Gly Tyr Xaa Phe Ser Xaa Tyr
1 5
<210> 252
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR2共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Tyr或Phe
<400> 252
Leu Pro Gly Ser Asp Xaa
1 5
<210> 253
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR3共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Ile或Val
<400> 253
Pro Ser Thr Xaa Pro Pro Asp Cys
1 5
<210> 254
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR1共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 3, 5
<223> Xaa = Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Ser或Cys
<400> 254
Gly Phe Xaa Phe Xaa Asp Xaa
1 5
<210> 255
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR3共有序列Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Gly或Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Ile或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Thr或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Asp或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = Pro或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = Cys或Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = Tyr或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Asn或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa = Tyr或Phe
<400> 255
Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Tyr Xaa Xaa Phe Xaa Xaa
1 5 10 15
<210> 256
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 LCDR1共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Asn或Ser
<400> 256
Ser Ser Val Xaa Tyr
1 5
<210> 257
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 LCDR2共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Phe或Ser
<400> 257
Asp Thr Xaa
1
<210> 258
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 LCDR3共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ile或Asn
<400> 258
Gln Gln Trp Ser Xaa Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 259
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR1共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = Thr或Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Asn或Ser
<400> 259
Gly Tyr Xaa Phe Ser Xaa Tyr Trp
1 5
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR2共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Ile或Thr
<400> 260
Ile Leu Pro Gly Ser Asp Xaa Xaa
1 5
<210> 261
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236 HCDR3共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ile或Val
<400> 261
Ala Arg Pro Ser Thr Xaa Pro Pro Asp Cys
1 5 10
<210> 262
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239/Ab241-Ab255 HCDR1共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 3, 5
<223> Xaa = Ser或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Cys或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = Ile或不存在
<400> 262
Gly Phe Xaa Phe Xaa Asp Xaa Tyr Xaa
1 5
<210> 263
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239/Ab241-Ab255 HCDR3共有序列IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = Arg或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = Ile或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = Gly或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 9, 12
<223> Xaa = Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = Gly或Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = Cys或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa = Phe或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = Asn或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = Tyr或不存在
<400> 263
Thr Thr Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa
<210> 264
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255 LCDR3 Chothia
<400> 264
Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
1 5
<210> 265
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR1
<400> 265
Asn Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 266
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR1
<400> 266
Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5
<210> 267
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238, HCDR1
<400> 267
Thr Tyr Gly Met Gly Val Ala
1 5
<210> 268
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH FR3
<400> 268
Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 269
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH FR3
<400> 269
Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Asn Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 270
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH FR3
<400> 270
Arg Phe Ser Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr
20 25 30
<210> 271
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH FR2
<400> 271
Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Asp Leu Glu Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 272
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237, Ab241-Ab255 LCDR3 Chothia 共有序列
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = Ala或Gln
<400> 272
Pro Pro Thr Phe Gly Xaa Gly Thr
1 5
<210> 273
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共有序列VL (具有信号序列)
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa = Thr或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (49)..(49)
<223> Xaa = Asn或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (58)..(58)
<223> Xaa = Ala或Pro
<220>
<221> misc_feature
<222> (70)..(70)
<223> Xaa = Phe或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> Xaa = Asn或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (111)..(111)
<223> Xaa = Ile或Asn
<400> 273
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Xaa
20 25 30
Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val
35 40 45
Xaa Tyr Met Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Xaa Gly Ser Ser Pro Arg Leu
50 55 60
Leu Ile Tyr Asp Thr Xaa Xaa Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Met
85 90 95
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Xaa Ile
100 105 110
Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
<210> 274
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 LCDR1
<400> 274
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 275
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 LCDR2
<400> 275
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 276
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 LCDR3
<400> 276
Gln Gln Tyr Tyr Ala Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 277
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 HCDR1
<400> 277
Ser Tyr Trp Leu His
1 5
<210> 278
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 HCDR2
<400> 278
Met Ile Asp Pro Ser Asn Ser Asp Thr Arg Phe Asn Pro Asn Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 279
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 HCDR3
<400> 279
Tyr Arg Ser Tyr Val Thr Pro Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 280
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 LCDR1
<400> 280
Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile Tyr Leu His
1 5 10
<210> 281
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 LCDR2
<400> 281
Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser
1 5
<210> 282
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 LCDR3
<400> 282
Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 283
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 HCDR1
<400> 283
Asp Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 284
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 HCDR2
<400> 284
Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 285
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 HCDR3
<400> 285
Ala Asn Trp Leu Asp Tyr
1 5
<210> 286
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 LCDR1
<400> 286
Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr Ala Asn Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 287
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 LCDR2
<400> 287
Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 288
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 LCDR3
<400> 288
Gln Gln Ser Lys Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 289
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 HCDR1
<400> 289
Ala Tyr Thr Met His
1 5
<210> 290
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 HCDR2
<400> 290
Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 291
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 HCDR3
<400> 291
Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr
1 5
<210> 292
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 VH
<400> 292
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asn Ser Asp Thr Arg Phe Asn Pro Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Tyr Arg Ser Tyr Val Thr Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 293
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 VL
<400> 293
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr
20 25 30
Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ala Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg
<210> 294
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 VH
<400> 294
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Val Asn Pro Asn Arg Arg Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Asn Trp Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 295
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 VL
<400> 295
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Val Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile
20 25 30
Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Val Tyr Ser Gly Tyr Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 296
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 VH
<400> 296
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Glu Ile Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 297
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 VL
<400> 297
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
20 25 30
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 298
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256轻链
<400> 298
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr
20 25 30
Ser Ser Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ala Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 299
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256重链Knob
<400> 299
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 300
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256重链Hole
<400> 300
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Met Ile Asp Pro Ser Asn Ser Asp Thr Arg Phe Asn Pro Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Tyr Arg Ser Tyr Val Thr Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
355 360 365
Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys

Claims (203)

1.结合至人MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段：
a.抑制细胞中MET的活性，如通过MET磷酸化的抑制所确定的；
b.引起细胞中MET降解；和
c.抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长；和
其中与作为IgG1同种型相比，作为人IgG2同种型时，所述抗体更好地抑制MET磷酸化，引起MET降解或者抑制肿瘤细胞增殖或肿瘤生长。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.轻链可变区(VL)，其包含如表1中所列的抗体Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
b.重链可变区(VH)，其包含如表2中所列的抗体Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
3.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：1、2和3的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：265、5和6的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：7、8和9的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：266、11和12的氨基酸序列。
5.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：13、14和15的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、17和18的氨基酸序列。
6.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：25、26和27的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：28、73和29的氨基酸序列。
7.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3分别包含SEQ ID NO：72、14和15的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、73和18的氨基酸序列。
8.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含：
i.VL CDR1，其包含SASSSVX7YMF的氨基酸序列(SEQ ID NO：41)，其中X7是任意氨基酸，例如，N或S；
ii.VL CDR2，其包含DTX13X14LAS的氨基酸序列(SEQ ID NO：43)，其中X13是任意氨基酸，例如，F或S，并且X14是任意氨基酸，例如，N或D；
iii.VL CDR3，其包含QQWSX15YPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：44)，其中X15是任意氨基酸，例如，I或N；和
b.VH，其包含：
i.VH CDR1，其包含X1YWIEW的氨基酸序列(SEQ ID NO：36)，其中X1是任意氨基酸，例如，N或S；
ii.VH CDR2，其包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK的氨基酸序列(SEQ ID NO：38)，其中X3是任意氨基酸，例如，Y或F，并且X4是任意氨基酸，例如，N或S；和
iii.VH CDR3，其包含PSTX6PPDC的氨基酸序列(SEQ ID NO：40)，其中X6是任意氨基酸，例如，I或V。
9.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含
QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N。
10.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ IDNO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
11.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，所述VL包含
QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N；和
b.VH，其包含
QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ IDNO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
12.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列。
13.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
14.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
15.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列。
16.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
17.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
18.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含：
i.VL CDR1，其包含SEQ ID NO：13或72的氨基酸序列；
ii.VL CDR2，其包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列；
iii.VL CDR3，其包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列；和
b.VH，其包含：
i.VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
ii.VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
iii.VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ IDNO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
19.根据权利要求2所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含：
i.VL CDR1，其包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列；
ii.VL CDR2，其包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列；
iii.VL CDR3，其包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列；和
b.VH，其包含：
i.VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
ii.VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
iii.VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ IDNO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
20.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S。
21.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含
EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ ID NO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
22.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含
DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是S或G，X27是V或L，X28是D或E，X29是R或T，X30是T或E，X31是K或N，X32是A或S，X33是K或Q，X34是F或S，X35是F或S，X36是D或Q，X37是F或Y，X38是T或S，X39是T或K，X40是S或N，X41是P或S，并且X42是A或S；和
b.VH，其包含
EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ ID NO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
23.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列。
24.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列。
25.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列。
26.根据权利要求10所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
27.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列。
28.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列。
29.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列。
30.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
31.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
32.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
33.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
34.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
35.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
36.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
37.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
38.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
39.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
40.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
41.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
42.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
43.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
44.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
45.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
46.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
47.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
48.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
49.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
50.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
51.根据权利要求22所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的抗体或其抗原结合片段特异性结合至人MET和猴MET，但不结合至小鼠MET或狗MET。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述MET活性的抑制发生在SNU-5细胞、A549细胞和/或Hop92细胞中。
54.根据权利要求53所述的抗体或其抗原结合片段，其中SNU-5细胞中MET活性抑制的IC50在约100pM至约500pM、约25pM至约200pM，或约40pM至约160pM、约50pM至约125pM，或约5pM至约100pM之间。
55.根据权利要求53所述的抗体或其抗原结合片段，其中SNU-5细胞中MET活性抑制的最大百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
56.根据权利要求55所述的抗体或其抗原结合片段，其中在SNU-5细胞中IgG2同种型的MET活性最大抑制百分比比IgG1同种型的MET活性的最大抑制百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
57.根据权利要求53所述的抗体或其抗原结合片段，其中A549细胞中MET活性抑制的IC50在约40pM至约250pM，100pM至约500pM，约25pM至约200pM，或约40pM至约160pM，约50pM至约125pM，或约5pM至约100pM之间。
58.根据权利要求53所述的抗体或其抗原结合片段，其中Hop92细胞中MET活性抑制的IC50在约100pM至约500pM、约25pM至约200pM，或约40pM至约160pM、约50pM至约125pM，或约5pM至约100pM之间。
59.根据权利要求57所述的抗体或其抗原结合片段，其中Hop92细胞中MET活性抑制的IC50比不结合SEMA域的人源化抗-MET抗体或者结合至SEMA域的二价IgG4抗-MET抗体小1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中在MET氨基酸残基Tyr1234和/或Tyr1235确定MET磷酸化。
61.根据权利要求1-60中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中在SNU-5细胞、A549细胞、U87MG细胞、H596细胞、Hop92细胞或在肿瘤细胞中发生MET降解的诱导。
62.根据权利要求61所述的抗体或其抗原结合片段，其中SNU-5细胞中MET降解诱导的最大百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
63.根据权利要求61所述的抗体或其抗原结合片段，其中在SNU-5细胞中IgG2同种型的MET降解最大诱导百分比比IgG1同种型的MET降解的最大诱导百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
64.根据权利要求1-63中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中在SNU-5肿瘤细胞、EBC-1肿瘤细胞、U87MG肿瘤细胞、A549肿瘤细胞和/或H596肿瘤细胞中发生肿瘤细胞增殖的抑制。
65.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中SNU-5肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
66.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中IgG2同种型对于SNU-5肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比比IgG1的最大抑制百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
67.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中EBC-1肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比为至少约10％、20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
68.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中IgG2同种型对于EBC-1肿瘤细胞增殖抑制的最大抑制百分比比IgG1的最大抑制百分比大1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
69.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中U87MG肿瘤细胞中肿瘤细胞增殖抑制的IC50在约100nM至约500nM、约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM、约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM之间。
70.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中A549肿瘤细胞中肿瘤细胞增殖抑制的IC50在约100nM至约500nM、约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM、约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM之间。
71.根据权利要求64所述的抗体或其抗原结合片段，其中H596肿瘤细胞中肿瘤细胞增殖抑制的IC50在约100nM至约500nM、约25nM至约200nM，或约40nM至约160nM、约50nM至约125nM，或约5nM至约100nM之间。
72.根据权利要求1-71中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述肿瘤生长是U87异种移植肿瘤模型、SNU15异种移植肿瘤模型或U87MG正位肿瘤模型。
73.根据权利要求1-72中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其抑制细胞上MET和肝细胞生长因子(HGF)之间的相互作用。
74.根据权利要求73所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞是A549细胞。
75.根据权利要求74所述的抗体或其抗原结合片段，其中A549细胞上MET和HGF之间相互作用的抑制的IC50在约0.01nM至10,000nM，0.01nM至1,000nM，0.1nM至500nM，0.1nM至100nM或0.1nM至50nM之间。
76.根据权利要求1-75中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其引起细胞中MET的泛素化。
77.根据权利要求76所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞是A549细胞。
78.根据权利要求1-77中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其抑制细胞中的MET信号。
79.根据权利要求78所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述MET信号是HGF-依赖性的。
80.根据权利要求78所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述MET信号是独立于HGF的。
81.根据权利要求78-80中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中将MET信号的抑制鉴别为AKT和/或MET磷酸化的抑制。
82.根据权利要求78-81中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述细胞是A549细胞。
83.根据权利要求1-82中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其抑制HGF-诱导的内皮间充质转化(EMT)。
84.根据权利要求1-83中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中通过DU145细胞分散(cell scatter)确定HGF-诱导的EMT的抑制。
85.根据权利要求84所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述DU145细胞分散的IC50为约50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。
86.根据权利要求84或85所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述DU145细胞分散是抑制百分比，其为约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％。
87.根据权利要求1-86中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中与所述抗体的IgG1同种型相比，所述抗体的IgG2同种型改变了MET二聚体的构型。
88.结合至MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.轻链可变区(VL)，其包含如表1中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
b.重链可变区(VH)，其包含如表2中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
89.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：1、2和3的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：265、5和6的氨基酸序列。
90.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：7、8和9的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：266、11和12的氨基酸序列。
91.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：13、14和15的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、17和18的氨基酸序列。
92.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：19、20和21的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：267、23和24的氨基酸序列。
93.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：25、26和27的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：28、73和29的氨基酸序列。
94.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：72、14和15的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：16、73和18的氨基酸序列。
95.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：30、31和32的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：33、34和35的氨基酸序列。
96.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含：
i.VL CDR1，其包含SEQ ID NO：13或72的氨基酸序列；
ii.VL CDR2，其包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列；
iii.VL CDR3，其包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列；和
b.VH，其包含：
i.VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
ii.VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
iii.VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ IDNO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
97.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含：
i.VL CDR1，其包含SEQ ID NO：25的氨基酸序列；
ii.VL CDR2，其包含SEQ ID NO：26的氨基酸序列；
iii.VL CDR3，其包含SEQ ID NO：27的氨基酸序列；和
b.VH，其包含：
i.VH CDR1，其包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)的氨基酸序列，其中X2是任意氨基酸，例如，S或C；
ii.VH CDR2，其包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)的氨基酸序列，其中X5是任意氨基酸，例如，R或不存在；和
iii.VH CDR3，其包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ IDNO：45)的氨基酸序列，其中X16是任意氨基酸，例如，G或R，X17是任意氨基酸，例如，I或Y，X18是任意氨基酸，例如，T或D，X19是任意氨基酸，例如，T或G，X20是任意氨基酸，例如，D或T，X21是任意氨基酸，例如，P或G，X22是任意氨基酸，例如，C或W，X23是任意氨基酸，例如，Y或不存在，X24是任意氨基酸，例如，N或D，并且X25是任意氨基酸，例如，Y或F。
98.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述VL CDR1、VL CDR2和VLCDR3分别包含SEQ ID NO：19、20和21的氨基酸序列，并且所述VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3分别包含SEQ ID NO：267、23和24的氨基酸序列。
99.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S。
100.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ ID NO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
101.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，所述VL包含DIQMTQSPX26SLSASX27GX28X29TIX30CLASADIHSNLAWYQQKPGX31X32PX33LLIYGNNLNDGVPSRFSGX34GX35GTX36X37X38LX39IX40SLQX41EDVX42IYFCQQSYDSPPTFGQGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ ID NO：47)，其中X26是任意氨基酸，例如，S或G，X27是任意氨基酸，例如，V或L，X28是任意氨基酸，例如，D或E，X29是任意氨基酸，例如，R或T，X30是任意氨基酸，例如，T或E，X31是任意氨基酸，例如，K或N，X32是任意氨基酸，例如，A或S，X33是任意氨基酸，例如，K或Q，X34是任意氨基酸，例如，F或S，X35是任意氨基酸，例如，F或S，X36是任意氨基酸，例如，D或Q，X37是任意氨基酸，例如，F或Y，X38是任意氨基酸，例如，T或S，X39是任意氨基酸，例如，T或K，X40是任意氨基酸，例如，S或N，X41是任意氨基酸，例如，P或S，并且X42是任意氨基酸，例如，A或S；和
b.VH，其包含EVQLVESGGGLVQPGX49SLKLSCAASGFTFSDSYMAWVRQAPX50KGLEWVASISSDGGGTYYRDSVKGRFX51ISRDNAKX52SLYLQMDSLRX53EDTATYYCTTEGIYTTDYYPYCFNYWGX54GX55MVTVSX56的氨基酸序列(SEQ ID NO：49)，其中X49是任意氨基酸，例如，G或R，X50是任意氨基酸，例如，G或T，X51是任意氨基酸，例如，T或S，X52是任意氨基酸，例如，S或N，X53是任意氨基酸，例如，T或S，X54是任意氨基酸，例如，Q或H，X55是任意氨基酸，例如，V或T，并且X56是任意氨基酸，例如，S或A。
102.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列。
103.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列。
104.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列。
105.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列。
106.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列。
107.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列。
108.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列。
109.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列。
110.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
111.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
112.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
113.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
114.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
115.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：69的氨基酸序列。
116.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：59的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：68的氨基酸序列。
117.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
118.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
119.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
120.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
121.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：63的氨基酸序列。
122.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
123.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
124.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
125.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
126.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：64的氨基酸序列。
127.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：52的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
128.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：53的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
129.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：54的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
130.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：55的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
131.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：56的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：65的氨基酸序列。
132.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：61的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：70的氨基酸序列。
133.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：60的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：69的氨基酸序列。
134.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含：
i.VL CDR1，其包含SASSSVX7YMF的氨基酸序列(SEQ ID NO：41)，其中X7是任意氨基酸，例如，N或S；
ii.VL CDR2，其包含DTX13X14LAS的氨基酸序列(SEQ ID NO：43)，其中X13是任意氨基酸，例如，F或S，并且X14是任意氨基酸，例如，N或D；
iii.VL CDR3，其包含QQWSX15YPYT的氨基酸序列(SEQ ID NO：44)，其中X15是任意氨基酸，例如，I或N；和
b.VH，其包含：
i.VH CDR1，其包含X1YWIEW的氨基酸序列(SEQ ID NO：36)，其中X1是任意氨基酸，例如，N或S；
ii.VH CDR2，其包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK的氨基酸序列(SEQ ID NO：38)，其中X3是任意氨基酸，例如，Y或F，并且X4是任意氨基酸，例如，N或S；和
iii.VH CDR3，其包含PSTX6PPDC的氨基酸序列(SEQ ID NO：40)，其中X6是任意氨基酸，例如，I或V。
135.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，所述VL包含QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ IDNO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N。
136.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
137.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，所述VL包含QIVLTQSPAIMSX43SPGEKVTMTCSASSSVX44YMFWYQQKX45GSSPRLLIYDTX46X47LASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRMEAEDAATYYCQQWSX48IYPYTFGGGTKLEIK的氨基酸序列(SEQ IDNO：48)，其中X43是任意氨基酸，例如，T或A，X44是任意氨基酸，例如，N或S，X45是任意氨基酸，例如，A或P，X46是任意氨基酸，例如，F或S，X47是任意氨基酸，例如，N或D，并且X48是任意氨基酸，例如，I或N；和
b.VH，其包含QX57QLQQSGAELMKPGASVKISCKATGYX58FSX59YWIEWVKQRPGHGLEWIGEILPGSDX60X61KYX62EKFKGKATFTADTSSNTAYMQLSX63LTSEDSAVYYCARPSTX64PPDCWGQGTTLTVSA的氨基酸序列(SEQ ID NO：50)，其中X57是任意氨基酸，例如，V或A，X58是任意氨基酸，例如，I或T，X59是任意氨基酸，例如，N或S，X60是任意氨基酸，例如，Y或F，X61是任意氨基酸，例如，T或I，X62是任意氨基酸，例如，N或S，X63是任意氨基酸，例如，S或N，并且X64是任意氨基酸，例如，I或V。
138.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列。
139.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
140.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：57的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：66的氨基酸序列。
141.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列。
142.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
143.根据权利要求88所述的抗体或抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：58的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：67的氨基酸序列。
144.结合至MET的Sema域的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.轻链可变区(VL)，其包含如表5中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
b.重链可变区(VH)，其包含如表6中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
145.结合至MET的Sema域的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.轻链可变区(VL)，其包含如表7中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VL互补决定区1(CDR1)、VL CDR2和VL CDR3；和
b.重链可变区(VH)，其包含如表8中所列的抗体Ab235-Ab255中任一个的VH互补决定区1(CDR1)、VH CDR2和VH CDR3。
146.结合至MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VL，所述VL包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列。
147.结合至MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含VH，所述VH包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列。
148.结合至MET的Sema/PSI域的单克隆抗体或其抗原-结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：
a.VL，其包含SEQ ID NO：62的氨基酸序列；和
b.VH，其包含SEQ ID NO：71的氨基酸序列。
149.根据权利要求1-148中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其抑制转移。
150.根据权利要求1-149中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG恒定区。
151.根据权利要求150所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG2恒定区。
152.根据权利要求150所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG2a恒定区。
153.根据权利要求150所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG2b恒定区。
154.根据权利要求150所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG2a恒定区和人IgG2b恒定区的混合物。
155.根据权利要求1-149中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人IgG2Fc区。
156.根据权利要求1-155中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人κ轻链恒定区。
157.根据权利要求1-155中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含人λ轻链恒定区。
158.根据权利要求1-157中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合抗体或人源化抗体。
159.根据权利要求1-158中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是双重特异性抗体或其抗原结合片段。
160.根据权利要求1-159中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段融合至异源多肽。
161.根据权利要求1-157中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化抗体是去免疫化抗体或复合人抗体。
162.根据权利要求1-161中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原-结合片段缀合至试剂。
163.根据权利要求162所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述试剂适合于成像和疗法。
164.根据权利要求162或163所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述试剂是放射性同位素、量子点或其他纳米颗粒。
165.根据权利要求162所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述试剂是毒素。
166.根据权利要求165所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述毒素是相思豆毒蛋白、篦麻毒素A、假单胞菌外毒素、霍乱毒素或白喉毒素。
167.根据权利要求1-166中任一项所述的抗体。
168.包含治疗有效量的根据权利要求1-166中任一项所述的抗体或抗原-结合片段的组合物。
169.包含治疗有效量的根据权利要求167所述的抗体的组合物。
170.根据权利要求168所述的组合物还包含药物可用的载体。
171.根据权利要求169所述的组合物还包含药物可用的载体。
172.包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VH链区、VL链区或者VL链区和VH链区两者的核苷酸序列的多核苷酸。
173.包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的重链、轻链或重链和轻链两者的多核苷酸。
174.根据权利要求172或173所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸可操作性地连接至启动子。
175.多核苷酸群体，其包含(i)包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VH或重链的核苷酸序列的第一多核苷酸，和(ii)包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的第二多肽。
176.根据权利要求175所述的多核苷酸群体，其中所述第一多核苷酸可操作性地连接至第一启动子，并且其中所述第二多核苷酸可操作性地连接至第二启动子。
177.载体，其包含根据权利要求172-174中任一项所述的多核苷酸。
178.载体群体，其包含(i)包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VH或重链的核苷酸序列的第一载体，和(ii)包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的第二载体。
179.载体群体，其包含(i)可操作性地连接至第一启动子的包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VH或重链的核苷酸序列的第一载体，和(ii)可操作性地连接至第二启动子的包含编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的第二载体。
180.细胞，其包含根据权利要求172-174中任一项所述的多核苷酸。
181.细胞，其包含根据权利要求175或176所述的多核苷酸群体。
182.细胞，其包含根据权利要求177所述的载体。
183.细胞，其包含根据权利要求178或179所述的载体群体。
184.产生根据权利要求1-166中任一项所述的抗体或抗原-结合片段的分离的细胞。
185.细胞群体，其包含(i)第一宿主细胞，其包含含有编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VH或重链的核苷酸序列的多核苷酸，和(ii)第二宿主细胞，其包含含有编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的多核苷酸。
186.细胞群体，其包含(i)第一宿主细胞，其包含可操作性地连接至第一启动子的含有编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VH或重链的核苷酸序列的多核苷酸，和(ii)第二宿主细胞，其包含可操作性地连接至第二启动子的含有编码根据权利要求1-166中任一项所述的抗体的VL或轻链的核苷酸序列的多核苷酸。
187.试剂盒，其包含根据权利要求1-166中任一项所述的抗体或抗原-结合片段。
188.控制、保护抵抗或治疗受试者中癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-166中任一项所述的抗体或抗原-结合片段。
189.控制、保护抵抗或治疗受试者中癌症的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求168-171中任一项所述的组合物。
190.根据权利要求188或189所述的方法，其中所述癌症是结直肠癌、胃癌、肺癌、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、非小细胞肺癌、胃癌、食管癌、脑癌、肝癌、肾癌、头颈癌、甲状腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神经胶质瘤或淋巴癌。
191.控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中转移的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-166中任一项所述的抗体或抗原-结合片段。
192.控制、预防、保护抵抗或治疗受试者中转移的方法，其包括向对其有需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求168-171中任一项所述的组合物。
193.根据权利要求188-192中任一项所述的方法，其中所述患者表达在人MET基因的外显子14中包含一个或多个缺失的MET。
194.根据权利要求188-192中任一项所述的方法，其中所述患者表达在MET氨基酸残基Thr1010处包含异亮氨酸氨基酸取代的MET蛋白。
195.根据权利要求188-194中任一项所述的方法，其中所述受试者患有癌症，或者正使用抗癌治疗剂治疗癌症。
196.根据权利要求188-195中任一项所述的方法，其中所述癌症包括表达MET的癌细胞。
197.根据权利要求188-196中任一项所述的方法，其中所述癌症包括表达EGFR的癌细胞。
198.根据权利要求188-197中任一项所述的方法，还包括向患者施用另一种试剂。
199.根据权利要求198所述的方法，其中所述试剂是化疗剂。
200.根据权利要求188-199中任一项所述的方法，其中所述方法是控制方法。
201.根据权利要求188-199中任一项所述的方法，其中所述方法是治疗方法。
202.制备特异性结合至人MET的Sema域的抗体或其抗原-结合片段的方法，其包括培养根据权利要求180-186中任一项所述的细胞或细胞群体以表达所述抗体或抗原-结合片段。
203.制备特异性结合至人MET的Sema域的抗体或其抗原-结合片段的方法，其包括表达根据权利要求172-176中任一项所述的多核苷酸。
CN201680028538.0A 2015-03-16 2016-03-15 抗-met抗体及其使用方法 Active CN107613974B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110114408.1A CN113150147A (zh) 2015-03-16 2016-03-15 抗-met抗体及其使用方法

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562133789P 2015-03-16 2015-03-16
US62/133,789 2015-03-16
US201562149465P 2015-04-17 2015-04-17
US62/149,465 2015-04-17
PCT/US2016/022464 WO2016149265A1 (en) 2015-03-16 2016-03-15 Anti-met antibodies and methods of use thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110114408.1A Division CN113150147A (zh) 2015-03-16 2016-03-15 抗-met抗体及其使用方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107613974A true CN107613974A (zh) 2018-01-19
CN107613974B CN107613974B (zh) 2021-01-15

Family

ID=56920094

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680028538.0A Active CN107613974B (zh) 2015-03-16 2016-03-15 抗-met抗体及其使用方法
CN202110114408.1A Pending CN113150147A (zh) 2015-03-16 2016-03-15 抗-met抗体及其使用方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110114408.1A Pending CN113150147A (zh) 2015-03-16 2016-03-15 抗-met抗体及其使用方法

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20180057595A1 (zh)
EP (1) EP3270918A4 (zh)
KR (1) KR20170136536A (zh)
CN (2) CN107613974B (zh)
HK (1) HK1248122A1 (zh)
TW (1) TWI743051B (zh)
WO (1) WO2016149265A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112119098A (zh) * 2018-03-28 2020-12-22 田边三菱制药株式会社 cMET单克隆结合剂的药物缀合物及其用途
CN113195536A (zh) * 2018-12-07 2021-07-30 首尔大学校产学协力团 抗c-Met激动剂抗体及其应用
CN113227145A (zh) * 2018-10-30 2021-08-06 得克萨斯大学体系董事会 抗CD79b抗体和嵌合抗原受体及其使用方法

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2017335062B2 (en) * 2016-09-29 2020-08-06 Mitsubishi Tanabe Pharma Corporation cMET monoclonal binding agents, drug conjugates thereof and uses thereof
TW201825515A (zh) * 2017-01-04 2018-07-16 美商伊繆諾金公司 Ｍｅｔ抗體以及其免疫結合物及用途
JOP20210304A1 (ar) 2019-05-14 2023-01-30 Janssen Biotech Inc علاجات مركبة باستخدام الأجسام المضادة ثنائية النوعية المضادة لمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR)/ مستقبل عامل نمو خلايا الكبد (c-Met) ومثبطات كيناز التيروسين الخاصة بمستقبل عامل نمو البشرة (EGFR) من الجيل الثالث
US11896682B2 (en) 2019-09-16 2024-02-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled MET binding proteins for immuno-PET imaging and methods of use thereof
JOP20220184A1 (ar) * 2020-02-12 2023-01-30 Janssen Biotech Inc علاج مصابي السرطان ممن لديهم طفرات تخطي c-Met إكسون14

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101035808A (zh) * 2004-08-05 2007-09-12 健泰科生物技术公司 人源化抗c－met拮抗剂
WO2010064089A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-10 Pierre Fabre Medicament Novel anti-cmet antibody
WO2013064701A2 (en) * 2011-11-03 2013-05-10 Argen-X B.V. Bispecific antibodies and methods for isolating same
CN103562223A (zh) * 2010-11-03 2014-02-05 阿尔金-X公司 抗c-Met抗体
CN103987730A (zh) * 2011-10-05 2014-08-13 三星电子株式会社 特异性结合c-met的sema域中表位的抗体

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL159177A0 (en) 2001-06-20 2004-06-01 Prochon Biotech Ltd Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof
US20050118165A1 (en) 2001-12-27 2005-06-02 Van Andel Institute; And The Usa As Represented By The Department Of Veterans Affairs Monoclonal antibody imaging and therapy of tumors that express met and bind hepatocyte growth factor
BRPI0407446A (pt) 2003-02-13 2006-01-31 Pharmacia Corp Anticorpos para c-met para o tratamento de cânceres
ITMI20031127A1 (it) 2003-06-05 2004-12-06 Uni Degli Studi Del Piemont E Orientale Am Anticorpi anti-hgf-r e loro uso
EP2367008A3 (en) 2003-06-06 2014-12-24 Genentech, Inc. Modulating the interaction between HGF beta chain and C-Met
DE602004024536D1 (de) 2003-07-07 2010-01-21 Van Andel Res Inst Hemmung der tumor-angiogenese durch eine kombination von thrombospondin-1 und hemmern des vaskulären endothel-wachstumsfaktors
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
WO2005108424A1 (en) 2004-05-06 2005-11-17 Genentech, Inc. Crystal structure of the complex of hepatocyte growth factor bata chain with met receptor and methods of use
JP2008535821A (ja) 2005-03-25 2008-09-04 ジェネンテック・インコーポレーテッド 過剰に安定化したｃ−ｍｅｔを調節するための方法及び組成物
WO2006104912A2 (en) 2005-03-25 2006-10-05 Genentech, Inc. C-met mutations in lung cancer
CN101189023B (zh) 2005-03-31 2013-01-30 通用医疗公司 监测和调制hgf/hgfr活性
PL1981981T3 (pl) * 2006-02-06 2011-11-30 Metheresis Translational Res Sa Przeciwciało monoklonalne anty-Met, jego fragmenty i wektory do leczenia nowotworów oraz odpowiednie produkty
EP2014681A1 (en) * 2007-07-12 2009-01-14 Pierre Fabre Medicament Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
PA8849001A1 (es) * 2008-11-21 2010-06-28 Lilly Co Eli Anticuerpos de c-met
AR074439A1 (es) * 2008-12-02 2011-01-19 Pf Medicament Anticuerpo anti-cmet (receptor c-met)
CN103415619B (zh) * 2010-09-03 2015-10-14 中央研究院 抗-c-met抗体及其使用方法
WO2013003680A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Genentech, Inc. Anti-c-met antibody formulations
KR20130037153A (ko) * 2011-10-05 2013-04-15 삼성전자주식회사 항 ｃ-Ｍｅｔ 항체 및 그의 용도
US20140186308A1 (en) * 2012-12-10 2014-07-03 The Salk Institute For Biological Studies Compositions for directing adipose-derived stem cells to a chondrogenic differentiation and methods of use therefor

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101035808A (zh) * 2004-08-05 2007-09-12 健泰科生物技术公司 人源化抗c－met拮抗剂
WO2010064089A1 (en) * 2008-12-02 2010-06-10 Pierre Fabre Medicament Novel anti-cmet antibody
CN103562223A (zh) * 2010-11-03 2014-02-05 阿尔金-X公司 抗c-Met抗体
CN103987730A (zh) * 2011-10-05 2014-08-13 三星电子株式会社 特异性结合c-met的sema域中表位的抗体
WO2013064701A2 (en) * 2011-11-03 2013-05-10 Argen-X B.V. Bispecific antibodies and methods for isolating same

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YOUNG MI OH,等: "A New Anti-c-Met Antibody Selected by a Mechanism-Based Dual-Screening Method: Therapeutic Potential in Cancer", 《MOLECULES AND CELLS》 *
万佳艺，等: "人源天然Fab噬菌体抗体库的构建及抗c-Met抗体的筛选、鉴定", 《南京医科大学学报(自然科学版)》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112119098A (zh) * 2018-03-28 2020-12-22 田边三菱制药株式会社 cMET单克隆结合剂的药物缀合物及其用途
CN113227145A (zh) * 2018-10-30 2021-08-06 得克萨斯大学体系董事会 抗CD79b抗体和嵌合抗原受体及其使用方法
CN113195536A (zh) * 2018-12-07 2021-07-30 首尔大学校产学协力团 抗c-Met激动剂抗体及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
HK1248122A1 (zh) 2018-10-12
CN113150147A (zh) 2021-07-23
TWI743051B (zh) 2021-10-21
WO2016149265A1 (en) 2016-09-22
US11884734B2 (en) 2024-01-30
TW201734044A (zh) 2017-10-01
CN107613974B (zh) 2021-01-15
US20210130476A1 (en) 2021-05-06
EP3270918A1 (en) 2018-01-24
EP3270918A4 (en) 2018-10-24
KR20170136536A (ko) 2017-12-11
US20180057595A1 (en) 2018-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220204642A1 (en) Antibodies against the ectodomain of erbb3 and uses thereof
US8933202B2 (en) AXL antibodies
CN107613974A (zh) 抗‑met抗体及其使用方法
CN104093743B (zh) 特异于her3的结合分子及其用途
CN109369808A (zh) 用于治疗ror1癌症并抑制转移的抗体和疫苗
CN105037543A (zh) 治疗性dll4结合蛋白
SA111320266B1 (ar) أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني
JP7437317B2 (ja) コネキシン４３抗体およびその使用
CN106459210A (zh) 用于治疗糖尿病黄斑性水肿的组合物和方法
CN108699142A (zh) TGFβ2抗体
CN108025067A (zh) 抗血管内皮生长因子受体2（vegfr2）抗体
CA3041325A1 (en) Use of beta-catenin as a biomarker for treating cancers using anti-dkk-1 antibody
KR20210153039A (ko) 커넥신 43 항체 및 이의 용도
KR20210086671A (ko) 항-vegf 항체 및 항-조직 인자 항체-약물 접합체의 조합을 사용하여 암을 치료하는 방법
US20220127344A1 (en) Anti-sema3a antibodies and their uses for treating a thrombotic disease of the retina
US20220162303A1 (en) Compositions and methods for cancer therapy
US20150152193A1 (en) Axl antibodies

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1248122

Country of ref document: HK

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant