TW201734044A - 抗－ｍｅｔ抗體及其使用方式 - Google Patents

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Abstract

本文提供涉及特異性結合於MET(一種受體酪胺酸激酶)且調節MET之表現及/或活性的抗體的組合物、方法及用途，亦提供用於控制、治療或預防病症(諸如癌症)之用途及方法。

Description

抗-MET抗體及其使用方式
本文提供涉及特異性結合於MET(一種受體酪胺酸激酶)且調節MET之表現及/或活性的抗體的組合物、方法及用途，其用於控制、治療或預防諸如癌症之病症。
肝細胞生長因子(HGF)受體MET(亦稱為HGFR，c-MET)為由MET基因編碼之單程受體酪胺酸激酶。MET酪胺酸激酶為雜二聚體，其包含藉由二硫鍵連接至具有細胞內蛋白質酪胺酸激酶結構域之跨膜β-次單元的細胞外α-次單元(參見例如，Giordano等人，Nature,1989,339：155-156)。MET之細胞外區經組織化為三個功能區。Sema結構域(亦見於信號素及叢蛋白中)覆蓋約500個胺基酸之保守性序列。其為配位體結合及受體二聚所必要的。PSI結構域(見於叢蛋白、信號素及整合素中之結構域(domain found in plexin,semaphorin and integrins))覆蓋自N端開始接下來大致50個殘基。四個IPT(由叢蛋白及轉錄因子共用之免疫球蛋白樣摺疊，immunoglobulin-like fold shared by plexins and transcriptional factors)結構域將PSI結構域連接至跨膜螺旋。MET細胞內區段具有五個關鍵性絲胺酸/酪胺酸殘基(Ser975、Tyr1234、Tyr1235、Tyr1349及Tyr1356)，其調控其酶活性或形成用於接附子及信號轉導子之對接位點 (參見例如，Trusolino及Comoglio,Nat.Rev.Cancer,2002,2：289-300；Kong-Beltran等人，Cancer Cell,2004,6：75-84；Trusolino等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11：834-848)。
已如由Cooper等人，Nature,1984,311：29-33所描述選殖編碼MET激酶之人類MET基因。在結合配位體HGF後，MET激酶藉由催化性酪胺酸殘基Tyr1234及Tyr1235之受體二聚及反磷酸化而活化。Tyr1349及Tyr1356在C端尾部中之後續磷酸化提供用於募集信號轉導接附子及轉導子之對接位點。當與叢蛋白寡聚時，MET亦可藉由信號素以非HGF依賴性方式活化，引起MET下游效應子之刺激。MAPK之成員(包括ERK1/2、JNK及p38)、PI3K-AKT、STAT及NF-κB信號傳導路徑已展示為MET信號傳導之下游信號轉導子(參見例如，Ponzetto等人，Cell,1994,77：261-271；Trusolino等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11：834-848)。
MET功能為胚胎形態發生中各種事件所需的。功能喪失研究指示，MET信號傳導支持肝細胞及胎盤滋胚層細胞之生長及存活及神經系統之恰當連接(wiring)。此外，MET信號傳導在傷口癒合及肝臟與腎臟再生中起重要作用(參見例如，Trusolino等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11：834-848)。
歸因於過度表現、突變或自分泌配位體產生之異常MET活化已牽涉多種癌症。研究指示，異常MET信號傳導不僅對腫瘤生長重要且亦對腫瘤癌轉移重要。
需要調節MET之療法以控制、治療或預防涉及MET及/或異常MET活性(例如，MET信號傳導)或異常MET表現之病狀。
在一個態樣中，本文提供抗體(例如，單株抗體)，包括其抗原結合片段，其特異性結合於MET(諸如人類MET)之細胞外結構域(ECD)。在一個具體態樣中，特異性結合於人類MET之ECD(例如，人類MET-ECD之Sema/PSI結構域)的此類抗-MET抗體以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制MET之磷酸化及抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。本文亦提供包含編碼此類抗體之序列的聚核苷酸及載體、包含此類聚核苷酸或載體之細胞(例如，宿主細胞)、及包含此類抗體之組合物、試劑及套組。在另一態樣中，本文提供用於調節MET活性(例如，抑制MET活性或MET表現水準)之方法、此類抗-MET抗體之診斷方法及用途、及此類抗-MET抗體之治療方法及用途。在某些態樣中，本文提供用於調節配位體依賴性MET活性之方法。在某些態樣中，本文提供用於調節MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性的方法。
在一個態樣中，本文提供一種結合於人類MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段：(a)如藉由MET磷酸化之抑制所測定，抑制細胞中之MET活性；(b)誘導細胞中之MET降解；及(c)抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長；且其中該抗體以人類IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制MET之磷酸化、誘導MET降解或抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。在一個態樣中，單株抗體或其抗原結合片段結合於人類MET之Sema結構域。
在某些態樣中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表1中所闡述的抗體Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及(b)重鏈可變區(VH)，該VH包含如表2中所闡述的抗體Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：1、2及3之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：4、5及6之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：7、8及9之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：10、11及12之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：13、14及15之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、17及18之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：25、26及27之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：28、17及29之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：72、14及15之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO： 16、73及18之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含以下之VL：(i)包含SASSSVX7YMF(SEQ ID NO：41)之胺基酸序列的VL CDR1，其中X7為任何胺基酸，例如N或S；(ii)包含DTX13X14LAS(SEQ ID NO：43)之胺基酸序列的VL CDR2，其中X13為任何胺基酸，例如F或S，且X14為任何胺基酸，例如N或D；(iii)包含QQWSX15YPYT(SEQ ID NO：44)之胺基酸序列的VL CDR3，其中X15為任何胺基酸，例如I或N；及(b)包含以下之VH：(i)包含胺基酸序列X1YWIEW(SEQ ID NO：36)之VH CDR1，其中X1為任何胺基酸，例如N或S；(ii)包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK(SEQ ID NO：38)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X3為任何胺基酸，例如Y或F，且X4為任何胺基酸，例如N或S；及(iii)包含PSTX6PPDC(SEQ ID NO：40)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X6為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：273)之胺基酸序列的VL，其中X136為任何胺基酸，例如T或A，X137 為任何胺基酸，例如N或S，X138為任何胺基酸，例如A或P，X139為任何胺基酸，例如F或S，X140為任何胺基酸，例如N或D，且X141為任何胺基酸，例如I或N。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：48)之胺基酸序列的VL，其中 X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：50)之胺 基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)包含 (SEQ ID NO：273)之胺基酸序列的VL，其中X136為任何胺基酸，例如 T或A，X137為任何胺基酸，例如N或S，X138為任何胺基酸，例如A或P，X139為任何胺基酸，例如F或S，X140為任何胺基酸，例如N或D，且X141為任何胺基酸，例如I或N；及 (b)包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含 (SEQ ID NO：48)之胺基酸序列的VL，其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N；及(b)包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N 或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含以下之VL：(i)包含SEQ ID NO：13或72之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的VL CDR2；(iii)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的VL CDR3；及(b)包含以下之VH：(i)包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C； (ii)包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及(iii)包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含以下之VL：(i)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列的VL CDR2；(iii)包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列的VL CDR3；及(b)包含以下之VH：(i)包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；(ii)包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及(iii)包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何 胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：47)之胺基酸序列 的VL，其中X26為任何胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基 酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含 (SEQ ID NO：47)之胺基酸序列的VL，其中X26為S或G，X27為V或L，X28為D或E，X29為R或T，X30為T或E，X31為K或N，X32為A或S，X33為K或Q，X34為F或S，X35為F或S，X36為D或Q，X37為F或Y，X38為T或S，X39為T或K，X40為S或N，X41為P或S，且X42為A或S；及(b)包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如G或 R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及(a)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及 (b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET及猴MET，但不特異性結合於小鼠MET或犬MET。在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET及猴MET之SEMA結構域，但不特異性結合於小鼠MET或犬MET之SEMA結構域。
在某些實施例中，對MET活性之抑制在SNU-5細胞、A549細胞及/或Hop92細胞中發生。在某些實施例中，在SNU-5細胞中對MET活性之抑制的IC50介於約100pM至約500pM、約25pM至約200pM、或約40pM至約160pM、約50pM至約125pM、或約5pM至約100pM之間。在某些實施例中，在SNU-5細胞中對MET活性之最大抑制百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，IgG2同型在SNU-5細胞中對MET活性之最大抑制百分比介於IgG1同型對MET活性之最大抑制百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。在某些實施例中，在A549細胞中對MET活性之抑制的IC50介於約40PM至約250pM、100pM至約500pM、約25pM至約200pM、或約40pM至約160pM、約50pM至約125pM、或約5pM至約100pM之間。在某些實施例中，在Hop92細胞中對MET活性之抑制的IC50介於約100pM至約500pM、約25pM至約200pM、或約40pM至約160pM、約50pM至約125pM、或約5pM至約100pM之間。在某些實施例中，在Hop92細胞中對MET活性之抑制的IC50介於不結合SEMA結構域(例如，人類SEMA結構域)之人類化抗- MET抗體或結合於SEMA結構域(例如，人類SEMA結構域)之二價IgG4抗-MET抗體的1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100之間。
在某些實施例中，在MET胺基酸殘基Tyr1234及/或Tyr1235處測定MET之磷酸化。
在某些實施例中，對MET降解之誘導在SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中或在腫瘤細胞中發生。在某些實施例中，對MET降解之誘導在表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的細胞中發生。在某些實施例中，對MET降解之誘導在具有經擴增MET之細胞中發生。在某些實施例中，在SNU-5細胞中對MET降解之最大誘導百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，IgG2同型在SNU-5細胞中對MET降解之最大誘導百分比介於IgG1同型對MET降解之最大誘導百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。
在某些實施例中，對腫瘤細胞增殖之抑制在SNU-5腫瘤細胞、EBC-1腫瘤細胞、U87MG腫瘤細胞、A549腫瘤細胞及/或H596腫瘤細胞中發生。在某些實施例中，對腫瘤細胞增殖之抑制在表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的細胞中發生。在某些實施例中，對腫瘤細胞增殖之抑制在具有經擴增MET之細胞中發生。在某些實施例中，對SNU-5腫瘤細胞增殖之 抑制的最大抑制百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，IgG2同型對SNU-5腫瘤細胞增殖之抑制的最大抑制百分比介於IgG1最大抑制百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。在某些實施例中，對EBC-1腫瘤細胞增殖之抑制的最大抑制百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，IgG2同型對EBC-1腫瘤細胞增殖之抑制的最大抑制百分比介於IgG1最大抑制百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。在某些實施例中，在U87MG腫瘤細胞中對腫瘤細胞增殖之抑制的IC50介於約100nM至約500nM、約25nM至約200nM、或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM、或約5nM至約100nM之間。在某些實施例中，在A549腫瘤細胞中對腫瘤細胞增殖之抑制的IC50介於約100nM至約500nM、約25nM至約200nM、或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM、或約5nM至約100nM之間。在某些實施例中，在H596腫瘤細胞中對腫瘤細胞增殖之抑制的IC50介於約100nM至約500nM、約25nM至約200nM、或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM、或約5nM至約100nM之間。
在某些實施例中，腫瘤生長為U87異種移植腫瘤模型、SNU15異種移植腫瘤模型或U87MG正位腫瘤模型。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段抑制MET與細胞上肝細胞生長因子(HGF)之間的相互作用。在某些實施例中，細胞為A549細胞。 在某些實施例中，對MET與A549細胞上HGF之間相互作用之抑制的IC50介於約0.01nM至10,000nM、0.01nM至1,000nM、0.1nM至500nM、0.1nM至100nM或0.1nM至50nM之間。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段在細胞中誘導MET之泛素化。在某些實施例中，細胞為A549細胞。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段在細胞中抑制MET信號傳導。在某些實施例中，細胞為A549細胞。在某些實施例中，MET信號傳導為HGF依賴性的。在某些實施例中，MET信號傳導為非HGF依賴性的。在某些實施例中，MET信號傳導之抑制鑑別為AKT及/或MET磷酸化之抑制。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段抑制HGF誘導的內皮細胞向間葉細胞之轉變(EMT)。在某些實施例中，對HGF誘導之EMT的抑制藉由DU145細胞離散來測定。在某些實施例中，DU145細胞離散之IC50為約50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。在某些實施例中，DU145細胞離散之抑制百分比為約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。
在某些實施例中，與抗體之IgG1同型相比，抗體之IgG2同型改變MET二聚體組態。
本文亦提供結合於MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：(a)輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表1中所闡述的抗體Ab235- Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及(b)重鏈可變區(VH)，該VH包含如表2中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：1、2及3之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：265、5及6之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：7、8及9之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：266、11及12之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：13、14及15之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、17及18之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：19、20及21之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：267、23及24之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：25、26及27之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：28、73及29之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：72、14及15之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、73及18之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：30、31及32之胺基酸序列，且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：33、34及35之胺基酸序列。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含以下之VL：(i)包含SEQ ID NO：13或72之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的VL CDR2；(iii)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的VL CDR3；及(b)包含以下之VH：(i)包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；(ii)包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及(iii)包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T， X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含以下之VL：(i)包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列的VL CDR2；(iii)包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列的VL CDR3；及(b)包含以下之VH：(i)包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；(ii)包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及(iii)包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：47)之胺基酸序列的VL，其中X26為任何胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含 (SEQ ID NO：47)之 胺基酸序列的VL，其中X26為任何胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S；及 (b)包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54 之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及 (b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含： (a)包含以下之VL：(i)包含SASSSVX7YMF(SEQ ID NO：41)之胺基酸序列的VL CDR1，其中X7為任何胺基酸，例如N或S；(ii)包含DTX13X14LAS(SEQ ID NO：43)之胺基酸序列的VL CDR2，其中X13為任何胺基酸，例如F或S，且X14為任何胺基酸，例如N或D；(iii)包含QQWSX15YPYT(SEQ ID NO：44)之胺基酸序列的VL CDR3，其中X15為任何胺基酸，例如I或N；及(b)包含以下之VH：(i)包含胺基酸序列X1YWIEW(SEQ ID NO：36)之VH CDR1，其中X1為任何胺基酸，例如N或S；(ii)包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK(SEQ ID NO：38)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X3為任何胺基酸，例如Y或F，且X4為任何胺基酸，例如N或S；及(iii)包含PSTX6PPDC(SEQ ID NO：40)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X6為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：273)之胺基酸序列的VL，其中X136為任何胺基酸，例如T或A，X137為任何胺基酸，例如N或S，X138為任何胺基酸，例如A或P，X139為任何胺基酸，例如F或S，X140為任何胺基酸，例如N或D，且X141為任何胺基 酸，例如I或N。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：48)之胺基酸序列的VL，其中 X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：50)之胺 基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含 (SEQ ID NO：273)之胺基酸序列的VL，其中X136為任何胺基酸，例如T或A，X137為任何胺基酸，例如N或S，X138為任何胺基酸，例如A或P，X139為任何胺基酸，例如F或S，X140為任何胺基酸，例如N或D，且X141 為任何胺基酸，例如I或N；及(b)包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含 (SEQ ID NO：48)之胺基酸序列的VL，其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N；及 (b)包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL；及(b)包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
本文亦提供結合於MET之Sema結構域的經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：(a)輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表5中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及(b)重鏈可變區(VH)，該VH包含如表6中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
本文亦提供結合於MET之Sema結構域的經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：(a)輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表7中所闡述的抗體Ab235- Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及(b)重鏈可變區(VH)，該VH包含如表8中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段抑制癌轉移。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含人類IgG2 Fc區。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段為嵌合抗體或人類化抗體。在某些態樣中，人類化抗體為去免疫型抗體或複合人類抗體。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段為雙特異性抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段融合於異源多肽。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。在某些實施例中，藥劑適合於成像及療法。在某些實施例中，藥劑為放射性同位素、量子點或其他奈米粒子。在某些實施例中，藥劑為毒素。在某些實施例中，毒素為相思子素、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素、霍亂毒素或白喉毒素。
本文亦提供一種組合物，其包含治療有效量的本文所提供之抗體或抗原結合片段。在某些實施例中，組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
本文亦提供一種聚核苷酸，其包含編碼本文所提供之抗體之VH鏈 區、VL鏈區或VL鏈區及VH鏈區兩者的核苷酸序列。
本文亦提供一種聚核苷酸，其包含編碼本文所提供之抗體之重鏈、輕鏈或重鏈及輕鏈兩者的核苷酸序列。在某些實施例中，聚核苷酸可操作地連接於啟動子。
本文亦提供一種聚核苷酸群體，其包含(i)包含編碼本文所提供之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的第一聚核苷酸，及(ii)包含編碼本文所提供之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的第二多肽。在某些實施例中，第一聚核苷酸可操作地連接於第一啟動子，且第二聚核苷酸可操作地連接於第二啟動子。
本文亦提供一種載體，其包含本文所提供之聚核苷酸。
本文亦提供一種載體群體，其包含(i)包含編碼本文所提供之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的第一載體及(ii)包含編碼本文所提供之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的第二載體。
本文亦提供一種載體群體，其包含(i)包含編碼本文所提供之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的第一載體及(ii)包含編碼本文所提供之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的第二載體。
本文亦提供一種細胞，其包含本文所提供之聚核苷酸。
本文亦提供一種細胞，其包含本文所提供之聚核苷酸群體。
本文亦提供一種細胞，其包含本文所提供之載體。
本文亦提供一種經分離之細胞，其產生本文所提供之抗體或抗原結合片段。
本文亦提供一種細胞群體，其包含(i)第一宿主細胞，該第一宿主細胞包含有包含編碼本文所提供之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的聚核苷 酸，及(ii)第二宿主細胞，該第二宿主細胞包含有包含編碼本文所提供之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的聚核苷酸。
本文亦提供一種細胞群體，其包含(i)第一宿主細胞，該第一宿主細胞包含有包含可操作地連接於第一啟動子的編碼本文所提供之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的聚核苷酸，及(ii)第二宿主細胞，該第二宿主細胞包含有包含編碼本文所提供之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的聚核苷酸。
本文亦提供一種套組，其包含本文所提供之抗體或抗原結合片段。
本文亦提供一種在個體中控制、保護免患或治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所提供之抗體或抗原結合片段。在某些實施例中，癌症為結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、非小細胞肺癌、胃癌(stomach cancer)、食道癌、腦癌、肝癌、腎癌、頭頸癌、甲狀腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰臟癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神經膠質瘤或淋巴癌。在某些實施例中，癌症包含表現MET之癌細胞。在某些實施例中，癌症包含表現EGFR之癌細胞。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些實施例中，癌症包含表現有經擴增之MET的癌細胞。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實 施例中，癌症為胃癌。
本文亦提供一種在個體中控制、保護免患或治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所提供之組合物。在某些實施例中，癌症為結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、非小細胞肺癌、胃癌(stomach cancer)、食道癌、腦癌、肝癌、腎癌、頭頸癌、甲狀腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰臟癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神經膠質瘤或淋巴癌。在某些實施例中，癌症包含表現MET之癌細胞。在某些實施例中，癌症包含表現EGFR之癌細胞。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些實施例中，癌症包含表現有經擴增之MET的癌細胞。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。
本文亦提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療癌轉移之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所提供之抗體或抗原結合片段。
本文亦提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療癌轉移之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所提供之組合物。
在某些實施例中，根據本文所提供之方法治療的個體表現在人類 MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個缺失的MET。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些實施例中，根據本文所提供之方法治療的個體表現在MET胺基酸殘基Thr1010處包含異白胺酸胺基酸取代之MET蛋白質。在某些實施例中，根據本文所提供之方法治療的個體患有癌症，或正用抗癌治療劑對癌症進行治療。
在某些實施例中，癌症包含表現MET之癌細胞。在某些實施例中，癌症包含表現EGFR之癌細胞。
在某些實施例中，本文所提供之方法進一步包含向患者投與另一種藥劑。在某些實施例中，藥劑為化學治療劑。
本文亦提供一種製造特異性結合於人類MET之Sema結構域的抗體或其抗原結合片段的方法，其包含培養本文所提供之細胞以表現該抗體或抗原結合片段。
本文亦提供一種製造特異性結合於人類MET之Sema結構域的抗體或其抗原結合片段的方法，其包含表現本文所提供之聚核苷酸。
圖1描繪人類MET ECD之例示性胺基酸序列，其中胺基酸殘基1-24包含信號序列。
圖2描繪來自與對照載體(1)、與HGF(2)或在Ab237存在下與HGF(3)、與克唑替尼(4)或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體(5)一起培育之細胞的溶胞物的西方墨點圖(western blot)。西方墨點圖使用用於偵測磷酸化MET (「pMet」)、磷酸化Akt(「pAkt」)、微管蛋白、磷酸化MAPK(「pMAPK」)、MET、Akt及MAPK之抗體來探測。
圖3A描繪如藉由西方墨點分析所測定，在與Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239一起或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體一起培育後的U87MG細胞中MET之降解。圖3B描繪如藉由ELISA所測定，在與Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239一起或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體一起培育後的U87MG細胞中MET之降解。圖3C描繪如藉由西方墨點分析所測定，在與Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239一起或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體一起培育後的A549細胞中MET之降解。圖3D描繪如藉由ELISA所測定，在與Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239一起或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體一起培育後的A549細胞中MET之降解。圖3E描繪如藉由ELISA所測定，在與Ab237C、抗-MET-1、抗-MET-2一起或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體一起培育後的H596細胞中MET之降解。圖3F描繪如藉由ELISA所測定，在與Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239一起或與對照嵌合IgG1抗KLH抗體一起培育後的Hop92細胞中MET之降解。
圖4A描繪在用PBS進行兩次腹膜內注射後第4天時，U87MG皮下腫瘤模型之腫瘤樣品中的MET水準之免疫組織化學。圖4B描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體進行兩次腹膜內注射後第4天時，U87MG皮下腫瘤模型之腫瘤樣品中的MET水準之免疫組織化學。圖4C描繪在用Ab240進行兩次腹膜內注射後第4天時，U87MG皮下腫瘤模型之腫瘤樣品中的MET水準之免疫組織化學。圖4D描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體進行兩次腹膜內注射後第4天時，U87MG皮下腫瘤模型之腫瘤樣品中的對照Ig水準之 免疫組織化學。
圖5描繪如藉由對用抗-MET抗體免疫沈澱之蛋白質溶胞物上泛素進行的免疫墨點法所測定，在與對照嵌合IgG1抗KLH抗體、Ab237C-IgG2a或Ab237C一起培育後的A549細胞中MET之泛素化。
圖6A描繪在無HGF存在下，在用Ab235(三角形，尖端向上)、Ab236(方形)、Ab237(三角形，尖端向下)、Ab238(菱形)、Ab239(垂直線)或對照物(x)處理後的U87MG細胞之增殖。圖6B描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體、克唑替尼、Ab235C或Ab236C處理後，在腫瘤植入後指定天數(例如，第28、31、35、42及49天)時，在活體內U87MG正位腫瘤模型之小鼠中所觀測到的生物發光信號。圖6C描繪用對照嵌合IgG1抗KLH抗體(圓形)、克唑替尼(三角形)、Ab235C(方形)或Ab236C(菱形)處理之小鼠在圖6B中之生物發光信號的圖形表示。
圖7A描繪在用對照物(「媒劑」，虛線，實心圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(實線，方形)、Ab235C(實線，空心三角形)、Ab236C(虛線，實心圓形)、Ab237C(實線，實心菱形)、Ab239C(實線，空心菱形)或克唑替尼(虛線，方形)(50mg/kg)處理後，在U87MG皮下腫瘤模型中在腫瘤植入後各天數時之腫瘤體積。圖7B描繪在用對照物(「媒劑」，圓形且用箭頭指示)、30mg/kg對照嵌合IgG1抗KLH抗體(方形且用箭頭指示)、30mg/kg Ab237C(三角形，尖端向上)、10mg/kg Ab237C(三角形尖端向下)、3mg/kg Ab237C(菱形)、1mg/kg Ab237C(圓形且用箭頭指示)或50mg/kg克唑替尼(方形且用箭頭指示)處理後，在U87MG皮下腫瘤模型中在腫瘤植入後各天數時之腫瘤體積。虛線表示終點。
圖8A描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體(「對照物」，三角形，尖端 向上)或用包含人類IgG1恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG1」，圓形)、包含人類IgG2恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG2」，菱形)或包含人類IgG4恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG4」，方形)處理之SNU-5細胞中的MET磷酸化之百分比(相對於對照物)。圖8B描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體(「對照物」，三角形，尖端向上)或用包含人類IgG1人類恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG1」，圓形)、Ab237C-IgG2(菱形)或Ab237C-IgG4(方形)處理之SNU-5細胞中的相對MET表現水準%(相對於無處理)。圖8C描繪用對照嵌合IgG1抗KLH抗體(三角形)或用Ab237C(空心圓形)、Ab237C-IgG2(菱形)或Ab237C-IgG4(方形)處理對SNU-5細胞增殖之影響。圖8D描繪用Ab237C(圓形)、Ab237C-IgG2(菱形)、Ab237C-IgG4(方形)或Ab237單價形式(三角形)處理對EBC-1細胞增殖之影響。圖8E描繪在用包含人類IgG2恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG2」，圓形)或包含人類IgG2恆定區之Ab237的人類化型式(「hum-Ab237C-IgG2」，方形)處理之A549細胞中的MET磷酸化之百分比(相對於對照物)。圖8F描繪在用包含人類IgG2恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG2」，圓形)或包含人類IgG2恆定區之Ab237的人類化型式(「hum-Ab237C-IgG2」，方形)處理之SNU-5細胞中的MET磷酸化之百分比(相對於對照物)。圖8G描繪在用包含人類IgG2恆定區之Ab237C(「Ab237C-IgG2」，圓形)或包含人類IgG2恆定區之Ab237的人類化型式(「hum-Ab237C-IgG2」，方形)處理之SNU-5細胞中的細胞增殖之百分比(相對於對照物)。
圖9A描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體(方形)、Ab237C-IgG2(實心圓形)、Ab238C(其包含IgG1構架；三角形，尖端向上)、包含人類IgG2構架之Ab238C(「Ab238C-IgG2」；三角形，尖端向下)、Ab239C(其包含 IgG1構架；菱形)或包含人類IgG2構架之Ab239C(「Ab239C-IgG2」；空心圓形)處理之SNU-5細胞中的MET磷酸化之百分比(相對於對照物)。圖9B描繪在用對照嵌合IgG1抗KLH抗體(菱形)、Ab237C-IgG2(菱形)、Ab238C(圓形)、Ab238C-IgG2(三角形，尖端向上)、Ab239C(菱形)或Ab239C-IgG2(空心圓形)處理之SNU-5細胞中的相對MET表現水準%(相對於無處理)。圖9C描繪在用Ab235C(其包含IgG1構架；圓形)、包含人類IgG2構架之Ab235C(「Ab235C-IgG2」；方形)、Ab236C(其包含IgG1構架；菱形)或包含人類IgG2構架之Ab236C(「Ab236C-IgG2」；三角形)處理之SNU-5細胞中的MET磷酸化之百分比(相對於對照物)。圖9D描繪在用Ab236C(其包含IgG1構架；圓形)、包含人類IgG2構架之Ab236C(「Ab236C-IgG2」；方形)、Ab235C(其包含IgG1構架；菱形)或包含人類IgG2構架之Ab235C(「Ab235C-IgG2」；三角形)處理之SNU-5細胞中的相對MET表現水準%。
圖10A描繪在U87異種移植小鼠模型中，在腫瘤植入後指定天數時，用PBS(實心圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(實心方形)、Ab237C(空心方形)、Ab237C-IgG2(空心圓形)、Ab237C-IgG4(三角形，尖端向上)或單價抗-MET抗體(三角形，尖端向下)處理對腫瘤體積之作用。圖10B描繪在SNU-5異種移植小鼠模型中，在腫瘤植入後指定天數時，用PBS(實心圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(實心方形)、Ab237C(空心方形)、Ab237C-IgG2(空心圓形)、Ab237C-IgG4(三角形，尖端向上)或單價抗-MET抗體(三角形，尖端向下)處理對腫瘤體積之作用。
圖11A描繪在SNU5異種移植小鼠模型中，在腫瘤植入後指定天數時，在指定抗體劑量下用PBS(黑色圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(黑 色方形)、Ab316(三角形，尖端向上)、Ab317(三角形，尖端向下)、Ab318(菱形)或Ab237C-IgG2(灰色圓形，且用箭頭指示)處理對腫瘤體積之作用。圖11B描繪在SNU5異種移植小鼠模型中，在腫瘤植入後指定天數時，在指定抗體劑量下用PBS(黑色圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(方形)或hum-Ab237C-IgG2(三角形)處理對腫瘤體積之作用。圖11C描繪在U87異種移植小鼠模型中，在腫瘤植入後指定天數時，在指定抗體劑量下用PBS(灰色圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(方形)、Ab316(三角形，尖端向上)、Ab317(三角形，尖端向下)、Ab318(菱形)或Ab237C-IgG2(圓形，且用箭頭指示)處理對腫瘤體積之作用。圖11D描繪在U87異種移植小鼠模型中，在腫瘤植入後指定天數時，在指定抗體劑量下用PBS(灰色圓形)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(方形)、Ab316(三角形，尖端向上)、Ab317(三角形，尖端向下)、Ab318(菱形)或hum-Ab237C-IgG2(圓形，且用箭頭指示)處理對腫瘤體積之作用。
圖12A描繪抗-MET抗體展現其對MET排出無作用。用PMA、HGF或抗-MET抗體處理A549細胞持續24小時。在培育結束時收集細胞培養基，且使用針對MET-ECD之捕獲及偵測抗體藉由ELISA來量測sMET-ECD水準。圖12B描繪抗-MET抗體誘導MET泛素化。用1nM HGF或1nM抗-MET抗體處理A549細胞持續15分鐘。用抗泛素抗體結合之瓊脂糖(Santa Cruz)使細胞溶胞物免疫沈澱，且用抗-MET抗體(Cell Signaling Technology)對其進行免疫墨點法。用抗-MET抗體對來自相同樣品之總細胞溶胞物進行免疫墨點法以展示總MET蛋白質水準。
圖13A描繪抗-MET抗體在具有外顯子14缺失突變之細胞中誘導MET降解。將具有MET外顯子14突變之H596細胞與1nM HGF或1nM抗體一 起培育24小時。藉由ELISA偵測MET蛋白質水準。圖13B描繪抗-MET抗體抑制具有外顯子14缺失突變之細胞的增殖。使H596細胞血清饑餓，且在HGF存在下用指定抗體處理5天，繼而藉由CellTiter-Glo來量測細胞增殖。
圖14描繪抗-MET抗體誘導之MET降解由克唑替尼部分地抑制。將A549細胞與或不與1μM克唑替尼一起預培育1小時。隨後用1nM HGF或1nM抗體處理細胞持續24小時，其後藉由ELISA來量化MET蛋白質水準。
在一個態樣中，本文提供特異性結合於MET多肽(例如，人類MET之ECD)且調節MET活性(例如，MET信號傳導)及/或MET表現的抗體(例如，單株抗體)及其抗原結合片段。本文所提供之抗體顯示對其中MET已牽涉腫瘤生長之臨床前模型中之腫瘤生長的強效抑制。在某些態樣中，本文提供調節配位體依賴性MET活性之抗體。在某些態樣中，本文提供調節MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性的抗體。在一個具體實施例中，特異性結合於人類MET之ECD(例如，Sema/PSI結構域，例如Sema結構域或其一或多個胺基酸殘基，諸如人類MET-ECD之胺基酸殘基Q328、R331、S336、L337及N338中之一或多者)的此類抗體以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制MET活性(例如，抑制MET之磷酸化，誘導MET降解及/或抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長)。亦提供編碼此類抗體及其抗原結合片段的經分離之核酸(聚核苷酸)，諸如互補DNA(cDNA)。進一步提供包含編碼此類抗體或其抗原結合片段之核酸(聚核苷酸)的載體(例如，表現載體)及細胞(例如，宿主細胞)。亦提供製造此類抗體及細胞 (例如，宿主細胞)之方法。在其他態樣中，本文提供用於調節MET表現或MET活性(例如，抑制MET表現或MET活性)或治療或控制本文所描述之某些病狀或病症(諸如治療或控制癌症)的方法及用途。亦提供相關組合物(例如，醫藥組合物)、套組及診斷方法。
如本文所用，術語「c-Met」或「MET」或「MET受體」或「MET多肽」係指如Park等人，1987,Proc.Natl.Sci.,84：6379-6383及Trusolino等人，2010,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,11：834-848中所描述之MET受體酪胺酸激酶。GenBankTM寄存編號NM_001127500.1及NM_000245.2提供例示性人類MET核酸序列。GenBankTM寄存編號NP_001120972.1及NP_000236.2提供例示性人類MET胺基酸序列。原生MET包含有包含α鏈及β鏈之細胞外結構域及包含β鏈之一部分的細胞內結構域。細胞外MET結構域包含一個Sema結構域、一個PSI結構域及四個IPT結構域(參見例如，Trusolino等人，2010,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,11：834-848)。人類MET之ECD的例示性胺基酸序列提供於圖1中。
5.1 抗體
在一個具體態樣中，本文提供特異性結合於人類MET之細胞外結構域(ECD)(例如，人類MET之Sema/PSI結構域，例如Sema結構域)且調節MET表現及/或MET活性的抗體(例如，單株抗體，諸如嵌合或人類化抗體，例如複合人類抗體)。在某些態樣中，本文提供結合於人類MET之Sema/PSI結構域的抗體。在某些態樣中，本文提供結合於人類MET之Sema結構域的抗體。在某些態樣中，本文提供結合於人類MET之胺基酸殘基Q328、R331、S336、L337及N338中之一或多者的抗體。在某些態樣中，該等抗體調節配位體依賴性MET活性。在某些態樣中，該等抗體 調節MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段抑制細胞中之MET活性(例如，配位體依賴性MET活性及/或MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性)，例如藉由抑制MET磷酸化、細胞增殖及/或細胞離散所測定。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段抑制MET配位體(例如，肝細胞生長因子(HGF))結合於MET受體。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段誘導MET受體降解。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段誘導在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET受體的HGF誘導之受體降解。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段阻斷MET配位體(例如，肝細胞生長因子(HGF))結合於MET受體且誘導MET受體降解。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制MET配位體(例如，肝細胞生長因子(HGF))結合於MET受體及誘導MET受體降解。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。在一個具體態樣中，在具有非配位體依賴性MET活性之細胞(例如，EBC-1細胞及SNU-5細胞)中，例如在具有MET擴增或MET突變體(例如，組成性活性MET突變體)之細胞中，特異性結合於人類MET之ECD(例如，人類MET-ECD之Sema/PSI結構域，例如Sema結構域)的本文所提供之抗體以IgG2同型(例如，人類IgG2同型)形式比以IgG1同型(例如，人類IgG1同型)形式更好地抑制MET活性 (例如，抑制MET之磷酸化、誘導MET降解或抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長)。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET及猴MET，但不特異性結合於小鼠MET或犬MET。在某些實施例中，抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET及猴MET之SEMA結構域，但不特異性結合於小鼠MET或犬MET之SEMA結構域。在某些實施例中，本文提供結合於人類MET之胺基酸殘基Q328、R331、S336、L337及N338中之一或多者的抗體。在某些實施例中，本文所描述之抗體或抗原結合片段可包含在動物或哺乳動物(例如，人類)之抗體生殖系譜系內不活體內天然存在的序列。
如本文所用且除非另外規定，否則術語「約」或「大致」意謂處於既定值或範圍之正或負10%內。在其中需要整數之情況下，該等術語意謂處於既定值或範圍之正或負10%內，向上或向下四捨五入以得到最接近之整數。
如本文所用，術語「抗體」及「免疫球蛋白」及「Ig」為此項技術之術語且在本文中可互換地使用，且係指具有特異性結合抗原之抗原結合位點的分子。
抗體可包括例如單株抗體、重組產生之抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(包括雙特異性抗體)、人類抗體、人類化抗體(諸如複合人類抗體或去免疫型抗體)、鼠類抗體(例如，小鼠或大鼠抗體)、嵌合抗體、合成抗體及包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚抗體。在具體實施例中，抗體可包括(但不限於)抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-抗體重鏈對、胞內抗體、異結合物抗體、單域抗體及單價抗體。在一個具體實施例中，抗體可包括抗原結合片段或抗原 決定基結合片段，諸如(但不限於)單鏈抗體或單鏈Fv(scFv)(例如，包括單特異性、雙特異性等)、駱駝化抗體、親和抗體、Fab片段、F(ab')片段、F(ab')2片段及二硫鍵連接之Fv(sdFv)。在某些實施例中，本文所描述之抗體係指多株抗體群體。
抗體可為任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何子類別(例如，IgG2a或IgG2b)之免疫球蛋白分子。在某些實施例中，本文所描述之抗體為IgG抗體或其類別(例如，人類IgG1、IgG2或IgG4)或子類別。在某些實施例中，本文所描述之抗體為IgG2抗體(例如，人類IgG2)或其子類別(例如，人類IgG2a或人類IgG2b或其混合物)。在某些實施例中，本文所描述之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239及Ab241-Ab255)為IgG1抗體(例如，人類IgG1)或其子類別。在某些實施例中，本文所描述之IgG1抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在恆定區中包含一或多個胺基酸取代及/或缺失以使得該抗體起作用之方式更類似IgG2(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)。
如本文所用，「抗原」為含有抗體可特異性結合之抗原決定基的部分或分子。因而，抗原亦由抗體特異性結合。在一個具體實施例中，本文所描述之抗體結合的抗原為人類MET或其片段，例如人類MET之細胞外結構域。在另一個具體實施例中，本文所描述之抗體結合的抗原為人類MET之SEMA/PSI結構域。人類MET之SEMA/PSI結構域係指包含SEMA及PSI結構域之多肽。例示性SEMA/PSI結構域對應於圖1A中所提供之人類MET序列的胺基酸25至562。
如本文所用，「抗原決定基」為此項技術中之術語且係指抗原中抗體可特異性結合之局部區。抗原決定基可為線性抗原決定基或構形異構、非線性或不連續之抗原決定基。例如在多肽抗原之情況下，抗原決定基可為多肽之連續胺基酸(「線性」抗原決定基)或抗原決定基可包含多肽之兩個或超過兩個非連續區的胺基酸(「構形異構」、「非線性」或「不連續」之抗原決定基)。熟習此項技術者應瞭解，一般而言，線性抗原決定基可或可不依賴於二級、三級或四級結構。舉例而言，在一些實施例中，不論本文所描述之抗-MET抗體是否摺疊為天然三維蛋白質結構，其均結合於一組胺基酸。在其他實施例中，本文所描述之抗-MET抗體不識別構成抗原決定基之個別胺基酸殘基，且需要特定構形(例如，彎曲、扭曲、轉彎或摺疊)以便識別及結合該抗原決定基。
如本文所用，術語「免疫特異性結合」、「免疫特異性識別」、「特異性結合」及「特異性識別」在抗體之情形下為類似術語，且係指分子以熟習此項技術者理解之此類結合方式結合於抗原/抗原決定基。舉例而言，特異性結合於抗原之分子可以一般較低之親和力結合於其他肽或多肽，如藉由例如免疫分析、表面電漿子共振分析(例如BiacoreTM、KinExA平台(Sapidyne Instruments,Boise,ID))或此項技術中已知之其他分析所測定。在一個具體實施例中，特異性結合於一種抗原之分子結合於該抗原的Ka為該分子結合於另一種抗原時之Ka的至少2對數級、2.5對數級、3對數級、4對數級或超過4對數級。在另一個具體實施例中，特異性結合於抗原之分子不與其他蛋白質交叉反應。在另一個具體實施例中，特異性結合於抗原之分子不與其他非MET蛋白質交叉反應。
如本文所用，術語「單株抗體」為此項技術中熟知之術語，其係指 自同源或大體上同源之抗體之群體獲得的抗體。術語「單株」不限於用於製造抗體之任何特定方法。一般而言，單株抗體之群體可由細胞、細胞群體或細胞株產生。在具體實施例中，如本文所用之「單株抗體」為由單一細胞或細胞株產生之抗體，其中該抗體免疫特異性結合於MET抗原決定基(例如，人類MET之細胞外結構域的抗原決定基)，如例如藉由ELISA或此項技術中已知之其他抗原結合或競爭性結合分析或在本文所提供之實例中所測定。在特定實施例中，單株抗體可為嵌合抗體或人類化抗體。在特定實施例中，單株抗體可為複合人類抗體。在特定實施例中，單株抗體可為去免疫型抗體。在某些實施例中，單株抗體為單價抗體或多價(例如，二價)抗體。在特定實施例中，單株抗體為單特異性或多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)。
如本文所用，術語「多株抗體」係指包括免疫特異性結合於一或多個抗原內之相同及/或不同抗原決定基的多種不同抗體的抗體群體。
如本文所用，術語「可變區」或「可變域」係指抗體之一部分，一般而言，抗體輕鏈或重鏈之一部分，通常為成熟重鏈中胺基端約110至120個胺基酸及成熟輕鏈中胺基端約90至100個胺基酸。可變區包含側接有構架區(FR)之互補決定區(CDR)。一般而言，CDR及FR之空間取向如下，沿N端至C端方向：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在不希望受任何特定機制或理論束縛的情況下，咸信輕鏈及重鏈之CDR為抗體與抗原之相互作用及抗體對抗原決定基之特異性的主要原因。在一個具體實施例中，本文所描述之抗體的胺基酸位置編號係根據EU指數，如在Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生與公眾服務部(U.S.Department of Health and Human Services),NIH出版物第91-3242號中。在某些實施例中，可變區為人類可變區。在某些實施例中，可變區包含鼠類(例如，小鼠或大鼠)CDR及人類構架區(FR)。在特定實施例中，可變區為靈長類(例如，人類或非人類靈長類)可變區。在某些實施例中，可變區包含鼠類(例如，小鼠或大鼠)CDR及靈長類(例如，人類或非人類靈長類)構架區(FR)。作為一個非限制性實例，本文所描述之可變區由將兩個或超過兩個人類序列片段組裝成複合人類序列而獲得。
在某些態樣中，抗體之CDR可根據以下來確定：(i)Kabat編號系統(Kabat等人(1971)Ann.NY Acad.Sci.190：382-391及Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生與公眾服務部，NIH出版物第91-3242號)；或(ii)Chothia編號方案，其在本文中將稱為「Chothia CDR」(參見例如，Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196：901-917；Al-Lazikani等人，1997,J.Mol.Biol.,273：927-948；Chothia等人，1992,J.Mol.Biol.,227：799-817；Tramontano A等人，1990,J.Mol.Biol.215(1)：175-82；及美國專利第7,709,226號)；或(iii)免疫遺傳學(ImMunoGeneTics，IMGT)編號系統，例如在Lefranc,M.-P.,1999,The Immunologist,7：132-136及Lefranc,M.-P.等人，1999,Nucleic Acids Res.,27：209-212中所描述(「IMGT CDR」)；或(iv)MacCallum等人，1996,J.Mol.Biol.,262：732-745。亦參見例如，Martin,A.,「Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains」，在Antibody Engineering,Kontermann及Dübel編，第31章，第422-439頁，Springer-Verlag,Berlin(2001)中。
參照Kabat編號系統，抗體重鏈分子內之CDR通常存在於胺基酸位置 31至35處(其視情況可在35後包括一個或兩個額外胺基酸(在Kabat編號方案中稱為35A及35B))(CDR1)、胺基酸位置50至65處(CDR2)及胺基酸位置95至102處(CDR3)。使用Kabat編號系統，抗體輕鏈分子內之CDR通常存在於胺基酸位置24至34處(CDR1)、胺基酸位置50至56處(CDR2)及胺基酸位置89至97處(CDR3)。如熟習此項技術者所熟知的，使用Kabat編號系統，抗體可變域之實際線性胺基酸序列可由於FR及/或CDR之縮短或延長而含有較少或額外胺基酸，且因而，胺基酸之Kabat編號並非必需與其線性胺基酸編號相同。
本文所提供之抗體可為任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何子類別(例如，IgG2a或IgG2b，或其混合物)之免疫球蛋白分子。在某些實施例中，本文所描述之抗體為IgG抗體(例如，人類IgG)或其類別(例如，人類IgG1或IgG4)或子類別。在一個具體實施例中，本文所提供之抗體包含IgG2恆定區，例如，人類IgG2恆定區，例如IgG2a或IgG2b抗體。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2a及IgG2b(例如，分別為人類IgG2a及人類IgG2b)包含相同胺基酸序列，但二硫鍵構形不同。參見例如，Dillon,2008,JBC,2 83(23)：16206-15。因此，在某些實施例中，本文所提供之抗體包含IgG2a及IgG2b(例如，分別為人類IgG2a及人類IgG2b)恆定區之混合物。
在一個具體實施例中，本文所提供之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含本文所描述之抗體Ab235-Ab255中之任一者的VL區之CDR及VH區之CDR，且特異性結合MET。舉例而言，本文提供抗體及其抗原結合片段，其特異性結合MET且包含下表9中VL域之CDR及下表10中VH域之 CDR。在一個具體實施例中，本文所提供之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含本文所描述之抗體Ab235-Ab255中之任一者的VL區及VH區。舉例而言，本文提供抗體及其抗原結合片段，其特異性結合MET且包含下表9中之VL域及下表10中之VH域。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含如本文所描述之VL域，其中該VL域不包含信號序列。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含如本文所描述之VH域，其中該VH域不包含信號序列。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含VL域及VH域，其中該VL域不包含信號序列，且其中該VH域不包含信號序列。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含VL域，其中該VL域包含信號序列。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含VH域，其中該VH域包含信號序列。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含VL域及VH域，其中該VL域包含信號序列，且其中該VH域包含信號序列。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：57之VL區及包含SEQ ID NO：66之VH區(例如，抗體Ab235)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：58之VL區及包含SEQ ID NO：67之VH區(例如，抗體Ab236)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：59之VL區及包含SEQ ID NO：68之VH區(例如，抗體Ab237)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：60之VL區及包含SEQ ID NO：69之VH區(例如，抗體Ab238)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：61之 VL區及包含SEQ ID NO：70之VH區(例如，抗體Ab239)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：62之VL區及包含SEQ ID NO：71之VH區(例如，抗體Ab240)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之VL區及包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab241)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之VL區及包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab242)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之VL區及包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab243)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之VL區及包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab244)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之VL區及包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab246)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之VL區及包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab246)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之VL區及包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab247)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之VL區及包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab248)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之VL區及包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab249)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其 抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之VL區及包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab250)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之VL區及包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab251)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之VL區及包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab252)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之VL區及包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab253)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之VL區及包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab254)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之VL區及包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab255)。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：57之VL區(例如，抗體Ab235之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：58之VL區(例如，抗體Ab236之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：59之VL區(例如，抗體Ab237之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：60之VL區(例如，抗體Ab238之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：61之VL區(例如，抗體Ab239之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或 其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：62之VL區(例如，抗體Ab240之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之VL區(例如，抗體Ab241之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之VL區(例如，抗體Ab242之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之VL區(例如，抗體Ab243之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之VL區(例如，抗體Ab244之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之VL區(例如，抗體Ab245之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之VL區(例如，抗體Ab246之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之VL區(例如，抗體Ab247之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之VL區(例如，抗體Ab248之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之VL區(例如，抗體Ab249之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之VL區(例如，抗體Ab250之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之VL區(例如，抗體Ab251之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之VL區(例如，抗體Ab252之 VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之VL區(例如，抗體Ab253之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之VL區(例如，抗體Ab254之VL區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之VL區(例如，抗體Ab255之VL區)。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：66之VH區(例如，抗體Ab235之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：67之VH區(例如，抗體Ab236之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：68之VH區(例如，抗體Ab237之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：69之VH區(例如，抗體Ab238之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：70之VH區(例如，抗體Ab239之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：71之VH區(例如，抗體Ab240之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab241之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab242之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab243之VH區)。在一個具體實施例中，本文 所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab244之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之VH區(例如，抗體Ab245之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab246之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab247之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab248之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab249之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之VH區(例如，抗體Ab250之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab251之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab252之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab253之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab254之VH區)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之VH區(例如，抗體Ab255之VH區)。
在某些實施例中，本文提供一種抗-MET抗體或其抗原結合片段，其 特異性結合於人類MET之ECD且包含有包含如表9中所闡述之胺基酸序列之VL的VL CDR(例如，Kabat CDR、Chothia CDR或IMGT CDR)及包含如表10中所闡述之胺基酸序列之VH的VH CDR(例如，Kabat CDR、Chothia CDR或IMGT CDR)。
在某些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合於人類MET之ECD且包含例如表1及2中所闡述的本文所提供之抗-MET抗體中之任一者的VL及VH CDR。
表3. VL FR胺基酸序列(Kabat)
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗 體或其抗原結合片段包含有包含以下之輕鏈可變區(VL)：(a)包含SASSSVX7YMF(SEQ ID NO：41)之胺基酸序列的VL CDR1，其中X7為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S；(b)包含DTX13X14LAS(SEQ ID NO：43)之胺基酸序列的VL CDR2，其中X13為任何胺基酸，例如F或S，且X14為任何胺基酸，例如N或D；及(c)包含QQWSX15YPYT(SEQ ID NO：44)之胺基酸序列的VL CDR3，其中X15為任何胺基酸，例如I或N。在某些實施例中，X7及X13-X15中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X7為N或S之保守取代，X13為F或S之保守取代，X14為N或D之保守取代，且X15為I或N之保守取代。
如本文所用，「保守胺基酸取代」為其中胺基酸殘基由具有含有相似電荷之側鏈的胺基酸殘基置換的胺基酸取代。具有含有相似電荷之側鏈的胺基酸殘基家族已在此項技術中定義。此等家族包括具有帶電荷之側鏈(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸)、酸性側鏈(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、鹼性側鏈(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電荷之極性側鏈(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β-分支側鏈(例如，蘇胺酸、纈胺酸異白胺酸)及芳族側鏈(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)的胺基酸。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗 體或其抗原結合片段包含有包含以下之輕鏈可變區(VL)：(a)包含SEQ ID NO：13或72之胺基酸序列的VL CDR1；(b)包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的VL CDR2；及(c)包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的VL CDR3。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：1、2及3)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：7、8及9)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：13、14及15)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：19、20及21)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：25、26 及27)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab240之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab240之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：30、31及32)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab241-Ab255中之任一者的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab241之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：72、14及15)。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含以下之重鏈可變區(VH)：(a)包含胺基酸序列X1YWIEW(SEQ ID NO：36)之VH CDR1，其中X1為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S；(b)包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK(SEQ ID NO：38)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X3為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，且X4為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S；及(c)包含PSTX6PPDC(SEQ ID NO：40)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X6為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或V。在某些實施例中，X1、X3、X4及X6中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X1為N或S之保守取代，X3為Y或F之保守取代，X4為N或S之保守取代，且X6為I或V之保守取代。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗 體或其抗原結合片段包含有包含以下之重鏈可變區(VH)：(a)包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或C；(b)包含SISSDGGGTYYRDSVKG(SEQ ID NO：17)之胺基酸序列的VH CDR2；及(c)包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F。在某些實施例中，X2及X16至X25中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X2為S或C之保守取代，X16為G或R之保守取代，X17為I或Y之保守取代，X18為D或T之保守取代，X19為T或G之保守取代，X20為D或T之保守取代，X21為P或G之保守取代，X22為C或W之保守取代，X23為Y之保守取代或不存在，X24為N或D之保守取代，且X25為Y或F之保守取代。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：265、5及6)。在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含 Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如分別如SEQ ID NO：4、5及6中所闡述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：266、11及12)。在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如分別如SEQ ID NO：10、11及12中所闡述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：16、17及18)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：267、23及24)。在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如分別如SEQ ID NO：22、23及24中所闡述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：28、73及29)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含 Ab240之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab240之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：33、34及35)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab241-Ab255中之任一者的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab241之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：16、73及18)。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：265、5及6)；及(ii)Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：1、2及3)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)分別如SEQ ID NO：4、5及6中所闡述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3；及(ii)Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：1、2及3)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：266、11及12)；及(ii)Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：7、8及9)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)分別如 SEQ ID NO：10、11及12中所闡述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3；及(ii)Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：7、8及9)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：16、17及18)；及(ii)Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：13、14及15)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：267、23及24)；及(ii)Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：19、20及21)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)分別如SEQ ID NO：22、23及24中所闡述之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3；及(ii)Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：19、20及21)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：28、29及30)；及(ii)Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：25、26及27)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab240之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab240之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：33、34及35)；及(ii)Ab240之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab240之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：30、31及32)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含(i)Ab241-Ab255中之任一者的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表2中所闡述的Ab241-Ab255中之任一者之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：16、73及18)；及(ii)Ab241-Ab255中之任一者的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表1中所闡述的Ab241-Ab255中之任一者之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：72、14及15)。
在某些實施例中，包含Kabat VL及VH CDR(例如，對抗體Ab235-Ab255中之任一者，分別如表1及2中所描述的Kabat VL CDR 1、2及3以及Kabat VH CDR 1、2及3)的本文所描述之抗體或其抗原結合片段進一步包含在可變區(例如，表9及10中之可變區)中圍繞CDR之構架區，該可變區自N端至C端呈以下型式：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
在某些實施例中，如藉由IMGT(免疫遺傳學)編號系統所確定，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含抗體Ab235-Ab255中之任一者的CDR；參見例如，Lefranc,M.-P.,1999,The Immunologist,7：132-136及Lefranc,M.-P.等人，1999,Nucleic Acids Res.,27：209-212)，其兩者均以全文引用之方式併入本文中。使用IMGT編號系統，抗體重鏈分子 內之CDR通常存在於胺基酸位置26至35處(CDR1)、胺基酸位置51至57處(CDR2)及胺基酸位置93至102處(CDR3)。使用IMGT編號系統，抗體輕鏈分子內之CDR通常存在於胺基酸位置27至32處(CDR1)、胺基酸位置50至52處(CDR2)及胺基酸位置89至97處(CDR3)。
在某些實施例中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其特異性結合於人類MET之ECD且包含Ab235-Ab255中之任一者的VL及VH CDR，例如，如表5及6中所闡述。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含以下之輕鏈可變區(VL)：(a)包含SSVX113Y之VL CDR1，其中X113為任何胺基酸，例如具有 不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S；(b)包含DTX114之VL CDR2，其中X114為任何胺基酸，例如F或S；及(c)包含QQWSX115YPYT之VL CDR3，其中X115為任何胺基酸，例如I或N。在某些實施例中，X113至X115中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X113為N或S之保守取代，X114為F或S之保守取代，且X115為F或S之保守取代。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表5中所闡述的Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：163、164及165)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表5中所闡述的Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：169、170及171)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表5中所闡述的Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：175、176及177)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表5中所闡述的Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：178、179及180)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表5中所闡述的Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：184、185及186)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab241-Ab255中之任一者的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表5中所闡述的Ab241之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：175、176及177)。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含以下之重鏈可變區(VH)：(a)包含GYX116FSX117YW(SEQ ID NO：259)之VH CDR1，其中X116為任何胺基酸，例如具有β-分支側鏈之胺基酸，例如T或I，且X117為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S；(b)包含ILPGSDX118X119(SEQ ID NO：260)之VH CDR2，其中X118為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，且X119為任何胺基酸，例如具有β-分支側鏈之胺基酸，例如I或T；及(c)包含ARPSTX120PPDC(SEQ ID NO：261)之VH CDR3，其中X120為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如，I或V。在某些實施例中，X116至X120中之任一者為任何胺基酸。在具體實施例中，X116為T或I之保守取代，X117為N或S之保守取代，X118為Y或F之保守取代，X119為I或T之保守取代，且X120為I或V之保守取代。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含以下之重鏈可變區(VH)： (a)包含GFX121FX122DX123YX124之VH CDR1，其中X121為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或T，X122為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X123為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如C或S，且X124為任何胺基酸，例如I或不存在；(b)包含SEQ ID NO：173之VH CDR2；及(c)包含TTEX125X126YX127X128X129YYX130YX131X132X133X134X135之VH CDR3，其中X125為任何胺基酸，例如R或G，X126為任何胺基酸，例如I或Y，X127為任何胺基酸，例如T或D，X128為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如G或T，X129為任何胺基酸，例如T或D，X130為任何胺基酸，例如T或D，X131為任何胺基酸，例如P或G，X132為任何胺基酸，例如C或不存在，X133為任何胺基酸，例如F或不存在，X134為任何胺基酸，例如N或不存在，且X135為任何胺基酸，例如Y或不存在。在某些實施例中，X121至X135中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X121為S或T之保守取代，X122為S或T之保守取代，X123為C或S之保守取代，X124為I之保守取代或不存在，X125為R或G之保守取代，X126為I或Y之保守取代，X127為T或D之保守取代，X128為G或T之保守取代，X129為T或D之保守取代，X130為T或D之保守取代，X131為P或G之保守取代，X132為C之保守取代或不存在，X133為F之保守取代或不存在，X134為N之保守取代或不存在，且X135為Y之保守取代或不存在。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表6中所闡述的Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：160、 161及162)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表6中所闡述的Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：166、167及168)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表6中所闡述的Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：172、173及174)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表6中所闡述的Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：178、179及180)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表6中所闡述的Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：184、185及186)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab241-Ab255中之任一者的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表6中所闡述的Ab241之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：172、173及174)。
在某些實施例中，包含IMGT VL及VH CDR(例如，對抗體Ab235-Ab255中之任一者，分別如表5及6中所描述的IMGT VL CDR 1、2及3以 及IMGT VH CDR 1、2及3)的本文所描述之抗體或其抗原結合片段進一步包含在可變區(例如，表9及10中之可變區)中圍繞CDR之構架區，該可變區自N端至C端呈以下型式：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
在某些態樣中，本文所描述之抗體的CDR為Chothia CDR(參見例如，Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196：901-917；及美國專利第7,709,226號)。術語「Chothia CDR」及類似術語為此項技術中公認的，且係指如根據Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.,196：901-917之方法所確定的抗體CDR序列，其在本文中將稱為「Chothia CDR」(亦參見例如，美國專利第7,709,226號及Martin,A.,「Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains」，在Antibody Engineering,Kontermann及Dübel編，第31章，第422-439頁，Springer-Verlag,Berlin(2001)中)。使用編號VH區及VL區中胺基酸殘基之Kabat編號系統，抗體重鏈分子內之Chothia CDR通常存在於胺基酸位置26至32處(CDR1)、胺基酸位置53至55處(CDR2)及胺基酸位置96至101處(CDR3)。使用編號VH區及VL區中胺基酸殘基之Kabat編號系統，抗體輕鏈分子內之Chothia CDR通常存在於胺基酸位置26至33處(CDR1)、胺基酸位置50至52處(CDR2)及胺基酸位置91至96處(CDR3)。在一個具體實施例中，使用編號VH鏈區及VL鏈區中胺基酸殘基之Kabat編號系統，抗體重鏈分子內之Chothia CDR處於胺基酸位置26至32或34處(CDR1)、胺基酸位置52至56處(CDR2；在一個實施例中，CDR2處於位置52A-56處，其中52A在位置52之後)及胺基酸位置95至102處(CDR3；在一個實施例中，在編號為96-100之位置處不存在胺基酸)；且抗體輕鏈分子內之Chothia CDR處於胺基酸位置24至34處(CDR1)、胺基酸位置50至56處(CDR2)及 胺基酸位置89至97處(CDR3)。此等Chothia CDR位置可視抗體而變化，且可根據此項技術中已知之方法來確定。
在某些態樣中，本文亦描述免疫特異性結合於MET多肽之抗體，其包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之VL的一或多個Chothia VL CDR(參見表7)及/或抗體Ab235-Ab255中之任一者之VH的一或多個Chothia VH CDR(參見表8)。在某些實施例中，免疫特異性結合於MET多肽的本文所描述之抗體包含一或多個CDR，其中Chothia及Kabat CDR具有相同胺基酸序列。在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET多肽且其包含Kabat CDR及Chothia CDR之組合。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗 體或其抗原結合片段包含有包含以下之輕鏈可變區(VL)：(a)包含SASSSVX90YMF(SEQ ID NO：248)之VL CDR1，其中X90為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N；(b)包含DX91X92X93LAS(SEQ ID NO：249)之VL CDR2，其中X91為任何胺基酸，例如Y或D，X92為任何胺基酸，例如F或S，且X93為任何胺基酸，例如N或D；及(c)包含QQWSX94X95PYT(SEQ ID NO：250)之VL CDR3，其中X94為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如Y或N，且X95為任何胺基酸，例如Y或不存在。在某些實施例中，X90至X95中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X90為S或N之保守取代，X91為Y或D之保守取代，X92為F或S之保守取代，X93為N或D之保守取代，X94為Y或N之保守取代，且X95為Y之保守取代或不存在。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表7中所闡述的Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：133、134及135)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表7中所闡述的Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：139、140及141)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表7中所闡述的Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：145、 146及147)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表7中所闡述的Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：151、152及153)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表7中所闡述的Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：157、158及159)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab241-Ab255中之任一者的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3，例如，如表7中所闡述的Ab241之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(分別為SEQ ID NO：145、146及264)。在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別如SEQ ID NO：145、146及147中所闡述之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3。在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別如SEQ ID NO：145及146中所闡述之VL CDR1及VL CDR2，以及如SEQ ID NO：147或264中所闡述之VL CDR3。在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別如SEQ ID NO：145及146中所闡述之VL CDR1及VL CDR2，以及如PPTFGX136GT(SEQ ID NO：272)中所闡述之VL CDR3，其中X136為任何胺基酸，例如A或Q。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含以下之重鏈可變區(VH)： (a)包含GYX96FSX97Y(SEQ ID NO：251)之VH CDR1，其中X96為任何胺基酸，例如具有β-分支側鏈之胺基酸，例如I或T，且X97為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N；(b)包含LPGSDX98(SEQ ID NO：252)之VH CDR2，其中X98為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F；及(c)包含PSTX99PPDC之VH CDR3，其中X99為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或V。在某些實施例中，X96至X99中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X96為I或T之保守取代，X97為S或N之保守取代，X98為Y或F之保守取代，且X99為I或V之保守取代。
在一個特定實施例中，特異性結合於MET之ECD的本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含以下之重鏈可變區(VH)：(a)包含GFX100FX101DX102(SEQ ID NO：254)之VH CDR1，其中X100為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X101為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或T，且X102為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或C；(b)包含SEQ ID NO：143之VH CDR2；及(c)包含EX103X104YX105X106X107YYX108YX109X110FX111X112(SEQ ID NO：255)之VH CDR3，其中X103為任何胺基酸，例如G或R，X104為任何胺基酸，例如I或Y，X105為任何胺基酸，例如T或D，X106為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或G，X107為任何胺基酸，例如D或T，X108為任何胺基酸，例如P或G，X109為任何胺基酸，例如C或W，X110為任何胺基酸，例如Y或不存在，X111為任何胺基酸，例 如N或D，且X112為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F。在某些實施例中，X100至X112中之任一者為任何胺基酸。在具體實施例中，X100為T或S之保守取代，X101為S或T之保守取代，X102為S或C之保守取代，X103為G或R之保守取代，X104為I或Y之保守取代，X105為T或D之保守取代，X106為T或G之保守取代，X107為T或D之保守取代，X108為P或G之保守取代，X109為C或W之保守取代，X110為Y之保守取代或不存在，X111為N或D之保守取代，且X112為Y或F之保守取代。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表8中所闡述的Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：130、131及132)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表8中所闡述的Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：136、137及138)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表8中所闡述的Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：142、143及144)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表8中所闡述的Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：148、149及150)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表8中所闡述的Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：154、155及156)。
在一個特定實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含Ab241-Ab255中之任一者的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3，例如，如表8中所闡述的Ab241之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(分別為SEQ ID NO：142、143及144)。
在某些實施例中，包含Chothia VL及VH CDR(例如，對抗體Ab235-Ab255中之任一者，分別如表7及8中所描述的Chothia VL CDR 1、2及3以及Chothia VH CDR 1、2及3)的本文所描述之抗體或其抗原結合片段進一步包含在可變區(例如，表10及11中之可變區)中圍繞CDR之構架區，該可變區自N端至C端呈以下型式：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：47)之VL區，其中 X26為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如具有帶電荷之側鏈(例如酸性側鏈)的胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基 酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S。在某些實施例中，X26至X42中之任一者為任何胺基酸。在具體實施例中，X26為S或G之保守取代，X27為V或L之保守取代，X28為D或E之保守取代，X29為R或T之保守取代，X30為T或E之保守取代，X31為K或N之保守取代，X32為A或S之保守取代，X33為K或Q之保守取代，X34為F或S之保守取代，X35為F或S之保守取代，X36為D或Q之保守取代，X37為F或Y之保守取代，X38為T或S之保守取代，X39為T或K之保守取代，X40為S或N之保守取代，X41為P或S之保守取代，且X42為A或S之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：49)之VH區，其中X49為任何胺基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例 如S或A。在某些實施例中，X49至X56中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X49為G或R之保守取代，X50為G或T之保守取代，X51為T或S之保守取代，X52為S或N之保守取代，X53為T或S之保守取代，X54為Q或H之保守取代，X55為V或T之保守取代，且X56為S或A之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含(a)包含 (SEQ ID NO：47)之VL區，其中X26為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如具有帶電荷之側鏈(例如酸性側鏈)的胺基酸，例如D或E，X28為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S；及 (b)包含 X56(SEQ ID NO：49)之VH區，其中X49為任何胺基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。在某些實施例中，X26至X42及X49至X56中之任一者為任何胺基酸。在具體實施例中，X26為S或G之保守取代，X27為V或L之保守取代，X28為D或E之保守取代，X29為R或T之保守取代，X30為T或E之保守取代，X31為K或N之保守取代，X32為A或S之保守取代，X33為K或Q之保守取代，X34為F或S之保守取代，X35為F或S之保守取代，X36為D或Q之保守取代，X37為F或Y之保守取代，X38為T或S之保守取代，X39為T或K之保守取代，X40為S或N之保守取代，X41為P或S之保守取代，X42為A或S之保守取代，X49為G或R之保守取代，X50為G或T之保守取代，X51為T或S之保守取代，X52為S或N之保守取代，X53為T或S之保守取代，X54為Q或H之保守取代，X55為V或T之保守取代，且X56為S或A之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：238)之VL區，其中X68為 任何胺基酸，例如K或Q，X69為任何胺基酸，例如S或F，X70為任何胺基酸，例如S或F，X71為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y 或F，X72為任何胺基酸，例如T或K，X73為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X74為任何胺基酸，例如P或S，且X75為任何胺基酸，例如I或T。在某些實施例中，X68至X75中之任一者為任何胺基酸。在具體實施例中，X43為T或A之保守取代，X68為K或Q之保守取代，X69為S或F之保守取代，X70為S或F之保守取代，X71為Y或F之保守取代，X72為T或K之保守取代，X73為S或N之保守取代，X74為P或S之保守取代，且X75為I或T之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：239)之VH 區，其中X76為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X77為任何胺基酸，例如D或N，且X78為任何胺基酸，例如T或V。在某些實施例中，X76至X78中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X76為S或N之保守取代，X77為D或N之保守取代，且X78為T或V之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含(a)包含 (SEQ ID NO：238)之VL 區，其中X68為任何胺基酸，例如K或Q，X69為任何胺基酸，例如S或F，X70為任何胺基酸，例如S或F，X71為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X72為任何胺基酸，例如T或K，X73為任何胺基酸，例 如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X74為任何胺基酸，例如P或S，且X75為任何胺基酸，例如I或T；及(b)包含 (SEQ ID NO：239)之VH區，其中X76為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X77為任何胺基酸，例如D或N，且X78為任何胺基酸，例如T或V。在某些實施例中，X68至X78中之任一者為任何胺基酸。在具體實施例中，X43為T或A之保守取代，X68為K或Q之保守取代，X69為S或F之保守取代，X70為S或F之保守取代，X71為Y或F之保守取代，X72為T或K之保守取代，X73為S或N之保守取代，X74為P或S之保守取代，X75為I或T之保守取代，X76為S或N之保守取代，X77為D或N之保守取代，且X78為T或V之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：273)之VL區，其中X136為任何胺基酸，例如T或A，X137為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X138為任何胺基酸，例如A或P，X139為任何胺基酸，例如F或S，X140為任何胺基酸，例如N或D，且X141為任何胺基酸，例如I或N。在某些實施例中，X136至X141中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X136為T或A之保守取代，X137為N或S之保守取代，X138為A或P之保守取代，X139為F或S之 保守取代，X140為N或D之保守取代，且X141為I或N之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：48)之VL區，其中X43為任何 胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N。在某些實施例中，X43至X48中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X43為T或A之保守取代，X44為N或S之保守取代，X45為A或P之保守取代，X46為F或S之保守取代，X47為N或D之保守取代，且X48為I或N之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含有包含 (SEQ ID NO：50)之VH 區，其中X57為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或V。在某些實施例中，X57至X64中 之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X57為V或A之保守取代，X58為I或T之保守取代，X59為N或S之保守取代，X60為Y或F之保守取代，X61為T或I之保守取代，X62為N或S之保守取代，X63為S或N之保守取代，且X64為I或V之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含(a)包含 (SEQ ID NO：273)之VL區，其中X136為任何胺基酸，例如T或A， X137為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X138為任何胺基酸，例如A或P，X139為任何胺基酸，例如F或S，X140為任何胺基酸，例如N或D，且X141為任何胺基酸，例如I或N；及(b)包含 (SEQ ID NO：50)之VH區，其中X57為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或V。在某些實施例中，X43至X48及X57至X64中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施 例中，X136為T或A之保守取代，X137為N或S之保守取代，X138為A或P之保守取代，X139為F或S之保守取代，X1為N或D之保守取代，X141為I或N之保守取代，X57為V或A之保守取代，X58為I或T之保守取代，X59為N或S之保守取代，X60為Y或F之保守取代，X61為T或I之保守取代，X62為N或S之保守取代，X63為S或N之保守取代，且X64為I或V之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體包含(a)包含 (SEQ ID NO：48)之VL區， 其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N；及(b)包含 (SEQ ID NO：50)之VH區，其中X57為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或V。在某些實 施例中，X43至X48及X57至X64中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X43為T或A之保守取代，X44為N或S之保守取代，X45為A或P之保守取代，X46為F或S之保守取代，X47為N或D之保守取代，X48為I或N之保守取代，X57為V或A之保守取代，X58為I或T之保守取代，X59為N或S之保守取代，X60為Y或F之保守取代，X61為T或I之保守取代，X62為N或S之保守取代，X63為S或N之保守取代，且X64為I或V之保守取代。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含如表9中所描述之VL。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段包含如表10中所描述之VH。
表10. VH域胺基酸序列
在某些態樣中，本文所描述之抗體可由其VL區單獨或由其VH區單獨描述，或由其3個VL CDR單獨或由其3個VH CDR單獨描述。參見例如Rader等人，1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95：8910-8915，其以全文引用之方式併入本文中，其描述小鼠抗αvβ3抗體之人類化，該人類化藉由鑑別分別來自人類輕鏈或重鏈文庫之補充輕鏈或重鏈，產生親和力與原始抗體親和力一樣高或高於原始抗體親和力之人類化抗體變異體。亦參見Clackson等人，1991,Nature 352：624-628，其以全文引用之方式併入本文中，其描述產生結合特定抗原之抗體的方法，該方法藉由使用特定VL域(或VH域)及篩選用於互補可變域之文庫來進行。篩選產生14種用於特定VH域之新型搭配物及13種用於特定VL域之新型搭配物，如藉由ELISA所測定，其為強結合子。亦參見Kim及Hong,2007,J.Microbiol.45：572-577，其以全文引用之方式併入本文中，其描述產生結合特定抗原 之抗體的方法，該方法藉由使用特定VH域及篩選用於互補VL域之文庫(例如，人類VL文庫)來進行；所選VL域隨後可用於導引其他互補(例如，人類)VH域之選擇。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗體中一或多個CDR沿著VH(例如，CDR1、CDR2或CDR3)及/或VL(例如，CDR1、CDR2或CDR3)區的位置可變化一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸位置，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。舉例而言，在一個實施例中，界定抗體Ab235-Ab255中任一者之CDR的位置可藉由使該CDR之N端及/或C端邊界相對於該VL或VH(分別參見例如，表9或10)中之CDR位置偏移一個、兩個、三個、四個、五個或六個胺基酸來變化，只要維持結合於MET(例如人類MET)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。在另一個實施例中，本文所描述之抗體中一或多個CDR沿著VH(例如，CDR1、CDR2或CDR3)及/或VL(例如，CDR1、CDR2或CDR3)區的長度可變化(例如，短或長)一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。舉例而言，在一個實施例中，本文所描述之VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3可比由SEQ ID NO：1-35所描述之CDR中的一或多者短一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性 (例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。在另一個實施例中，本文所描述之VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3可比由SEQ ID NO：1-35所描述之CDR中的一或多者長一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。在另一個實施例中，與由SEQ ID NO：1-25所描述之CDR中的一或多者相比較，本文所描述之VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的胺基端可延長一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。在另一個實施例中，與由SEQ ID NO：1-35所描述之CDR中的一或多者相比較，本文所描述之VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的羧基端可延長一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。在另一個實施例中，與由SEQ ID NO：1-35所描述之CDR中的一或多者相比較，本文所描述之VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的胺基端可縮短一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。在一個實施例中，與由SEQ ID NO：1-35所描述之CDR中的一或多者 相比較，本文所描述之VH及/或VL CDR1、CDR2及/或CDR3的羧基端可縮短一個、兩個、三個、四個、五個或超過五個胺基酸，只要維持結合於MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性(例如，大體上維持，例如至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%)即可。此項技術中已知之任何方法可用於確定是否維持與MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性結合，例如在本文所提供之「實例」部分(部分6)中所描述的結合分析及條件。舉例而言，本文所提供之部分6描述用於量測與人類MET ECD之結合的ELISA分析。簡言之，在4℃下用100μL/孔含1μg/mL hu-MET-ECD之硼酸鹽緩衝液塗佈有ELISA盤持續隔夜；隨後向經塗佈之ELISA盤中添加各種濃度之抗-MET抗體且在室溫下於TBST(50mM Tris(pH 7.4)、150mM NaCl、0.1% Tween-20)中培育一小時以允許抗-MET抗體結合於人類MET之ECD。此外，本文所提供之部分6描述使用A549細胞之FACS結合分析以用於確定是否維持抗-MET抗體與MET(例如人類MET ECD，例如SEQ ID NO：190)之免疫特異性結合。
在具體態樣中，本文提供一種包含抗體輕鏈及重鏈之抗體，例如單獨輕鏈及重鏈的抗體。關於輕鏈，在一個具體實施例中，本文所描述之抗體的輕鏈為κ輕鏈。在另一個具體實施例中，本文所描述之抗體的輕鏈為λ輕鏈。在另一個實施例中，輕鏈為混合序列，例如，輕鏈之可變部分包含κ輕鏈序列且輕鏈之恆定區包含λ輕鏈序列，或反過來。在某些實施例中，本文所描述之抗體的輕鏈為人類κ輕鏈或人類λ輕鏈。人類恆定區序列之非限制性實例已描述於此項技術中，例如，參見美國專利第5,693,780號及Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest， 第五版，美國衛生與公眾服務部，NIH出版物第91-3242號。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含以下輕鏈，其中VL鏈區之胺基酸序列包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：52-62)，且其中該輕鏈之恆定區包含人類κ輕鏈恆定區之胺基酸序列。在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含以下輕鏈，其中VL鏈區之胺基酸序列可包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：52-62)，且其中該輕鏈之恆定區包含人類λ輕鏈恆定區之胺基酸序列。
關於重鏈，在一個具體實施例中，本文所描述之抗體的重鏈可為α、δ、ε、γ或μ重鏈。在另一個具體實施例中，所描述之抗體的重鏈可包含人類α、δ、ε、γ或μ重鏈。在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含以下重鏈，其中VH鏈區之胺基酸序列可包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：63-71中之任一者)，且其中該重鏈之恆定區包含人類γ重鏈恆定區之胺基酸序列。人類恆定區序列之非限制性實例已描述於此項技術中，例如，參見美國專利第5,693,780號及Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生與公眾服務部，NIH出版物第91-3242號。
在一個具體實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人類IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY 免疫球蛋白分子之恆定區的胺基酸序列。在另一個具體實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、任何類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或任何子類別(例如，IgG2a及IgG2b，或其混合物)之免疫球蛋白分子的恆定區的胺基酸序列。在一個特定實施例中，恆定區包含人類IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、任何類別(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或任何子類別(例如，IgG2a及IgG2b，或其混合物)之免疫球蛋白分子的恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，IgG2為人類IgG2。在某些實施例中，IgG2(例如，人類IgG2)為IgG2a(例如，人類IgG2a)。在某些實施例中，IgG2(例如，人類IgG2)為IgG2b(例如，人類IgG2b)。在某些實施例中，IgG2(例如，人類IgG2)為IgG2a(例如，人類IgG2a)及IgG2b(例如，人類IgG2b)之混合物。
在又另一個具體實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含人類IgG1(例如，同型a、z或f)或人類IgG4之恆定區的胺基酸序列。在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈 區，且其中恆定區包含人類IgG1(同型f)之恆定區的胺基酸序列。人類恆定區之非限制性實例描述於此項技術中，例如，參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生與公眾服務部，NIH出版物第91-3242號。
在又另一個具體實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255之VL及VH)，且其中恆定區包含人類IgG2(例如，IgG2a或IgG2b，或其混合物)之恆定區的胺基酸序列。在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255之VL及VH)，且其中恆定區包含人類IgG2(同型IgG2a)之恆定區的胺基酸序列。在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255之VL及VH)，且其中恆定區包含人類IgG2(同型IgG2b)之恆定區的胺基酸序列。在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含人類IgG2同型(例如，其中存在IgG2a及IgG2b同型之混合物的人類IgG2同型)之恆定區的胺基酸序列。在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含有包含 本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255之VL及VH)，且其中恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列，例如，如下文所闡述： (SEQ ID NO：191)
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含具有Ab235-Ab255中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中所列之彼等序列)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含具有Ab235-Ab255中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中所列之彼等序列)；(iii)該輕鏈進一步包含有包含人類κ輕鏈恆定域之胺基酸序列的恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈恆定域之胺基酸序列的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，IgG2(例如，人類IgG2)包含IgG2a(例如，人類IgG2a)及IgG2b(例如，人類IgG2b)之混合物。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含Ab235之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中之任一者中所列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含Ab235之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中之任一者中所列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3)；(iii)該輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含Ab236之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中之任一者中所列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含Ab236之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中之任一者中所列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3)；(iii)該輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含Ab237之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中之任一者中所列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含Ab237之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中之任一者中所列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3)；(iii)該輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含Ab238之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中之任一者中所列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含Ab238之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中之任一者中所列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3)；(iii)該輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含Ab239之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中之任一者中所列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含Ab239之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中之任一者中所列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3)；(iii)該輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上 文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含Ab240之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中之任一者中所列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含Ab240之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中之任一者中所列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3)；(iii)該輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域；且(iv)該重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例 如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab235之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：57及66)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab236之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：58及67)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。
在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab237之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：59及68)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab238之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：60及69)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab239之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：61及70)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab240之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：62及71)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab241之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：52及63)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab242之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：53及63)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab243之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：54及63)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab244之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：55及63)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡 述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab245之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：56及63)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab246之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：52及64)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗 體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab247之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：53及64)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab248之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：54及64)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。 在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab249之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：55及64)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab250之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：56及64)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施 例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab251之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：52及65)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab252之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：53及65)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且 重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab253之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：54及65)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab254之VL鏈區及VH鏈區 (分別為SEQ ID NO：55及65)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含Ab255之VL鏈區及VH鏈區(分別為SEQ ID NO：56及65)；其中輕鏈進一步包含人類恆定輕鏈域，且重鏈進一步包含有包含人類IgG2重鏈之恆定域的恆定重鏈域。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，抗體以上文含人類IgG2a之抗體及上文含人類IgG2b之抗體之混合物的形式存在。在某些實施例中，人類IgG2重鏈包含如下文所闡述之胺基酸序列： (SEQ ID NO：191)。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET (例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含VL鏈區，該VL鏈區包含具有Ab235-Ab255中之任一者之胺基酸序列的VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，在表1、5及7中所列之彼等序列)；(ii)該重鏈包含VH鏈區，該VH鏈區包含具有Ab235-Ab255中之任一者之胺基酸序列的VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，在表2、6及8中所列之彼等序列)；(iii)該輕鏈進一步包含恆定輕鏈域，該恆定輕鏈域包含人類κ輕鏈之恆定域的胺基酸序列，例如包含胺基酸序列 (SEQ ID NO：192)；且(iv)該重鏈進一步包含恆定重鏈 域，該恆定重鏈域包含人類IgG2重鏈之恆定域的胺基酸序列，例如包含SEQ ID NO：191之胺基酸序列。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2a。在某些實施例中，人類IgG2為人類IgG2b。在某些實施例中，IgG2(例如，人類IgG2)為IgG2a(例如，人類IgG2a)及IgG2b(例如，人類IgG2b)之混合物。
在另一個特定實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的本文所描述之抗體包含輕鏈及重鏈，其中(i)該輕鏈包含胺基酸序列： (SEQ ID NO：193)；且(ii)該重鏈包含胺基酸序列：EVQLVESGGGLVQPGRSL (SEQ ID NO：194)。
基於CDR編號系統之邊界確定本文所描述之構架區。換言之，若藉由例如Kabat、IMGT或Chothia來確定CDR，則構架區為在可變區中圍繞CDR之胺基酸殘基，該可變區自N端至C端呈以下型式：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。舉例而言，FR1定義為N端至如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義之CDR1胺基酸殘基的胺基酸殘基，FR2定義為介於如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義之CDR1與CDR2胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，FR3定義為介於如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義之CDR2與CDR3胺基酸殘基之間的胺基酸殘基，且FR4定義為C端至如由例如Kabat編號系統、IMGT編號系統或Chothia編號系統所定義之CDR3胺基酸殘基的胺基酸殘基。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對抗體Ab235-Ab255中之任一者所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架 區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體態樣中，VL FR在VL序列中相對於VL CDR處於以下位置：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在具體態樣中，VH FR在VH序列中相對於VH CDR處於以下位置：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab235所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列及Ab235之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列及Ab235之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列及Ab235之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列及Ab235之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab235之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab236所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、 CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：104之胺基酸序列及Ab236之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：112之胺基酸序列及Ab236之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列及Ab236之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列及Ab236之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：104之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：112之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab236之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab237所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：105之胺基酸序列及Ab237之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：113之胺基酸序列及Ab237之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：123之胺基酸序列及Ab237之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab237之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：105之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：113之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：123之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab237之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab238所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：106之胺基酸序列及Ab238之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：114之胺基酸序列及Ab238之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：124之胺基酸序列及Ab238之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列及Ab238之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：106之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：114之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：124之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab238之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab239所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：107之胺基酸序列及Ab239之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：115之胺基酸序列及Ab239之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：125之胺基酸序列及Ab239之VL CDR。在一些實施例中， VL FR4具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列及Ab239之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：107之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：115之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：125之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab239之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab240所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列及Ab240之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列及Ab240之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列及Ab240之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列及Ab240之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab240之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab241所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動 物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab241之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：109之胺基酸序列及Ab241之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：117之胺基酸序列及Ab241之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab241之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：109之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：117之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab241之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab242所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab242之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab242之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：118之胺基酸序列及Ab242之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab242之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的 VL FR4中之一或多者，及Ab242之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab243所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab243之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab243之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：119之胺基酸序列及Ab243之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab243之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：119之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab243之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab244所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab244之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab244之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具 有SEQ ID NO：120之胺基酸序列及Ab244之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab244之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：120之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab244之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab245所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab245之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab245之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：121之胺基酸序列及Ab245之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab245之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：121之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：1278之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab245之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab246所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab246之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：109之胺基酸序列及Ab246之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：117之胺基酸序列及Ab246之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab246之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：109之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：117之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab246之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab247所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab247之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab247之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：118之胺基酸序列及Ab247之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab247之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab247之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab248所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab248之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab248之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：119之胺基酸序列及Ab248之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab248之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：119之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab248之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab249所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab249之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab249之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：120之胺基酸序列及Ab249之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab249之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：120之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab249之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab2550所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab250之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab250之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：121之胺基酸序列及Ab250之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab250之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：121之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：1278之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab250之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab251所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗 體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab251之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：109之胺基酸序列及Ab251之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：117之胺基酸序列及Ab251之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab251之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：109之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：117之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab251之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab252所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab252之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab252之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：118之胺基酸序列及Ab252之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab252之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：103之胺基酸序列的 VL FR1、具有SEQ ID NO：111之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：122之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：128之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab252之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab253所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab253之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab253之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：119之胺基酸序列及Ab253之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab253之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：119之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab253之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab254所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之 胺基酸序列及Ab254之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab254之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：120之胺基酸序列及Ab254之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab254之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：120之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者，及Ab254之VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab255所描述之胺基酸序列(例如，參見表3)的VL構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列及Ab255之VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列及Ab255之VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有SEQ ID NO：121之胺基酸序列及Ab255之VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：127之胺基酸序列及Ab255之VL CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：102之胺基酸序列的VL FR1、具有SEQ ID NO：110之胺基酸序列的VL FR2、具有SEQ ID NO：121之胺基酸序列的VL FR3及具有SEQ ID NO：1278之胺基酸序列的VL FR4中之一或多者。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有以下胺基酸 序列之VL構架區(FR)：(a)SEQ ID NO：240；(b)WYQQKPGKAPX79LLIY(SEQ ID NO：241)，其中X79為任何胺基酸，例如K或Q；(c)GVPSRFSGX80GX81GTDX82TLX83IX84SLQX85EDVAX86YFC，其中X80為任何胺基酸，例如S或F，X81為任何胺基酸，例如S或F，X82為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X83為任何胺基酸，例如T或K，X84為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X85為任何胺基酸，例如P或S，且X86為任何胺基酸，例如I或T；及(d)SEQ ID NO：243，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VL區。在某些實施例中，VL FR1具有SEQ ID NO：240之胺基酸序列；及Ab235-Ab255中之任一者的VL CDR。在一些實施例中，VL FR2具有WYQQKPGKAPX79LLIY(SEQ ID NO：241)之胺基酸序列，其中X79為任何胺基酸，例如K或Q；及Ab235-Ab255中之任一者的VL CDR。在一些實施例中，VL FR3具有GVPSRFSGX80GX81GTDX82TLX83IX84SLQX85EDVAX86YFC之胺基酸序列，其中X80為任何胺基酸，例如S或F，X81為任何胺基酸，例如S或F，X82為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X83為任何胺基酸，例如T或K，X84為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X85為任何胺基酸，例如P或S，且X86為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或T；及Ab235-Ab255中之任一者的VL CDR。在一些實施例中，VL FR4具有SEQ ID NO：243之胺基酸序列；及Ab235-Ab255中之任一者的VL CDR。在某些實施例中，本文 所描述之抗體包含以下中之一或多者：具有SEQ ID NO：240之胺基酸序列的VL FR1；具有WYQQKPGKAPX79LLIY(SEQ ID NO：241)之胺基酸序列的VL FR2，其中X79為任何胺基酸，例如K或Q；具有GVPSRFSGX80GX81GTDX82TLX83IX84SLQX85EDVAX86YFC之胺基酸序列的VL FR3，其中X80為任何胺基酸，例如S或F，X81為任何胺基酸，例如S或F，X82為任何胺基酸，例如具有芳族側鏈之胺基酸，例如Y或F，X83為任何胺基酸，例如T或K，X84為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，X85為任何胺基酸，例如P或S，且X86為任何胺基酸，例如具有非極性側鏈之胺基酸，例如I或T；及具有SEQ ID NO：243之胺基酸序列的VL FR4。在某些實施例中，X79至X86中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X79為K或Q之保守取代，X80為S或F之保守取代，X81為S或F之保守取代，X82為Y或F之保守取代，X83為T或K之保守取代，X84為S或N之保守取代，X85為P或S之保守取代，且X86為I或T之保守取代。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab235所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：75之胺基酸序列及Ab235之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：82之胺基酸序列及Ab235之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：89之胺基酸序列及Ab235之VH CDR。在一些實施例中， VH FR3具有SEQ ID NO：268之胺基酸序列及Ab235之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：97之胺基酸序列及Ab235之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：75之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：82之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：89之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：97之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：75之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：82之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：268之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：97之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab236所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：76之胺基酸序列及Ab236之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：82之胺基酸序列及Ab236之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：90之胺基酸序列及Ab236之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：269之胺基酸序列及Ab236之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：97之胺基酸序列及Ab236之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：76之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：82之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：90之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：97之胺基酸 序列的VH FR4中之一或多者，及Ab236之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：76之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：82之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：269之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：97之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab236之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab237所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：77之胺基酸序列及Ab237之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：83之胺基酸序列及Ab237之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：91之胺基酸序列及Ab237之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：270之胺基酸序列及Ab237之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：98之胺基酸序列及Ab237之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：77之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：83之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：91之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：98之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab237之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：77之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：83之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：270之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：98之胺基酸序列的VH FR4中之一或 多者，及Ab237之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab238所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：78之胺基酸序列及Ab238之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：84之胺基酸序列及Ab238之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：271之胺基酸序列及Ab238之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：92之胺基酸序列及Ab238之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：99之胺基酸序列及Ab238之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：78之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：84之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：92之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：99之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab238之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：78之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：271之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：92之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：99之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab238之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab239所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：79之胺基酸序列及Ab239之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：83之胺基酸序列及Ab239之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：93之胺基酸序列及Ab239之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：100之胺基酸序列及Ab239之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：79之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：83之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：93之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：100之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab239之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab240所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：80之胺基酸序列及Ab240之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：84之胺基酸序列及Ab240之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：94之胺基酸序列及Ab240之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：101之胺基酸序列及Ab240之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：80之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：84之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：94之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：101之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab240之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab241所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab241之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab241之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列及Ab241之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab241之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab241之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab242所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab242之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab242之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列及Ab242之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab242之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab242之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab243所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab243之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab243之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列及Ab243之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab243之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab243之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab244所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗 體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab244之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab244之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列及Ab244之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab244之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab244之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab245所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab245之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab245之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列及Ab245之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab245之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的 VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：86之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab245之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab246所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab246之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab246之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列及Ab246之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab246之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab246之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab247所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之 胺基酸序列及Ab247之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab247之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列及Ab247之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab247之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab247之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab248所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab248之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab248之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列及Ab248之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab248之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab248之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對 Ab249所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab249之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab249之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列及Ab249之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab249之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab249之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab250所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類(例如嚙齒動物)、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab250之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab250之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列及Ab250之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列及Ab250之VH CDR。在某些 實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：87之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：95之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab250之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab251所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab251之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab251之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列及Ab251之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列及Ab251之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab251之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab252所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、 CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab252之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab252之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列及Ab252之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列及Ab252之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab252之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab253所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab253之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab253之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列及Ab253之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列及Ab253之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab253之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab254所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab254之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab254之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列及Ab254之VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列及Ab254之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab254之VH CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有本文對Ab255所描述之胺基酸序列(例如，參見表4)的VH構架區(FR)，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列及Ab255之VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列及Ab255之VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列及Ab255之VH CDR。在一些實施例中， VH FR4具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列及Ab255之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含具有SEQ ID NO：74之胺基酸序列的VH FR1、具有SEQ ID NO：81之胺基酸序列的VH FR2、具有SEQ ID NO：88之胺基酸序列的VH FR3及具有SEQ ID NO：96之胺基酸序列的VH FR4中之一或多者，及Ab255之VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗體包含一或多個具有以下胺基酸序列之VH構架區(FR)：(a)SEQ ID NO：244；(b)SEQ ID NO：245；(c)RFTISRDNAKX87SLYLQMX88SLRTEDTATYYCTT(SEQ ID NO：246)，其中X87為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，且X88為任何胺基酸，例如D或N；及(d)WGQGX89MV(SEQ ID NO：247)，其中X89為任何胺基酸，例如T或V，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，鼠類、嚙齒動物、嵌合或人類化抗體)包含有包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4之VH區。在某些實施例中，VH FR1具有SEQ ID NO：244之胺基酸序列；及Ab235-Ab255中之任一者的VH CDR。在一些實施例中，VH FR2具有SEQ ID NO：245之胺基酸序列；及Ab235-Ab255中之任一者的VH CDR。在一些實施例中，VH FR3具有RFTISRDNAKX87SLYLQMX88SLRTEDTATYYCTT(SEQ ID NO：246)之胺基酸序列，其中X87為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，且X88為任何胺基酸，例如D或N；及Ab235-Ab255中之任一者的VH CDR。在一些實施例中，VH FR4具有WGQGX89MV(SEQ ID NO：247)之胺基酸序列，其中X89為任何胺基酸，例如T或V；及Ab235-Ab255中之任一者的VH CDR。在某些實施例中，本文所描述之抗 體包含以下中之一或多者：具有SEQ ID NO：244之胺基酸序列的VH FR1；具有SEQ ID NO：245之胺基酸序列的VH FR2，其中X79為任何胺基酸，例如K或Q；具有RFTISRDNAKX87SLYLQMX88SLRTEDTATYYCTT(SEQ ID NO：246)之胺基酸序列的VH FR3，其中X87為任何胺基酸，例如具有不帶電荷之極性側鏈的胺基酸，例如S或N，且X88為任何胺基酸，例如D或N；及具有WGQGX89MV(SEQ ID NO：247)之胺基酸序列的VH FR4，其中X89為任何胺基酸，例如T或V。在某些實施例中，X87至X89中之任一者為任何胺基酸序列。在具體實施例中，X87為S或N之保守取代，X88為D或N之保守取代，且X89為T或V之保守取代。
在具體實施例中，免疫特異性結合於MET多肽(例如，人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190))的本文所描述之抗體包含本身為人類構架區或源於人類構架區之構架區(例如，VL域及/或VH域之構架區)。人類構架區之非限制性實例描述於此項技術中，例如，參見Kabat等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生與公眾服務部，NIH出版物第91-3242號)。在某一實施例中，本文所描述之抗體包含本身為靈長類(例如，非人類靈長類)構架區或源於靈長類(例如，非人類靈長類)構架區之構架區(例如，VL域及/或VH域之構架區)。
舉例而言，將來自抗原特異性非人類抗體(通常源於嚙齒動物，例如小鼠或大鼠)之CDR接枝至同源人類或非人類靈長類受體構架上。在一個實施例中，非人類靈長類受體構架來自古猿(Old Worldape)。在一個具體實施例中，古猿受體構架來自黑猩猩(Pan troglodytes)、倭黑猩猩(Pan paniscus)或大猩猩(Gorilla gorilla)。在一個特定實施例中，非人類靈長 類受體構架來自黑猩猩(chimpanzee Pan troglodytes)。在一個特定實施例中，非人類靈長類受體構架為舊世界猴(Old World monkey)受體構架。在一個具體實施例中，舊世界猴受體構架來自獼猴(Macaca)屬。在某一實施例中，非人類靈長類受體構架源於食蟹獼猴(cynomolgus monkey Macaca cynomolgus)。非人類靈長類構架序列描述於美國專利申請公開案第US 2005/0208625號中。
在具體態樣中，複合人類抗體可使用例如Composite Human AntibodyTM技術(Antitope Ltd.,Cambridge,United Kingdom)來產生。舉例而言，複合人類抗體可藉由將不相關人類抗體可變區之區段融合在一起來產生，隨後評估其對T細胞抗原決定基包括之避免(參見例如，Baker等人，2010,Self Nonself.,1(4)：314-322；及Bryson等人，2010,BioDrugs,24(1)：1-8)，例如去免疫(參見例如，Jones等人，2009,Methods Mol Biol.,525：405-23)。
在某些態樣中，本文所描述之抗體為去免疫型抗體。去免疫為經由組合使用免疫及分子生物學技術來定位及移除T細胞抗原決定基之技術(參見例如，Jones等人，2009,Methods Mol Biol.,525：405-23；及Perry等人，2008,Drugs R D.,9(6)：385-96)。舉例而言，可一般例如在恆定區、VL及/或VH區中引入移除T細胞抗原決定基之突變，而不顯著地降低抗體之結合親和力。在某些實施例中，在一或多個VL CDR及/或VH CDR中引入移除T細胞抗原決定基之突變，而不顯著地降低抗體之結合親和力。在具體實施例中，在抗體之VL CDR及/或VH CDR中不引入移除T細胞抗原決定基之突變。在某些實施例中，在一或多VL FR及/或VH FR中引入移除T細胞抗原決定基之突變，而不顯著地降低抗體之結合親和力。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含相對於Ab235-Ab255中之任一者具有一定一致性百分比的胺基酸序列。
確定兩個序列(例如，胺基酸序列或核酸序列)之間的一致性百分比可使用數學演算法來實現。用於比較兩個序列之數學演算法的較佳非限制性實例為Karlin及Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：2264 2268之演算法，如在Karlin及Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90：5873 5877中所修改。將此類演算法併入至Altschul等人，1990,J.Mol.Biol.215：403之NBLAST及XBLAST程式中。可用NBLAST核苷酸程式參數設定(例如對於評分=100，字長=12)進行BLAST核苷酸檢索，以獲得與本文所描述之核酸分子同源的核苷酸序列。可用XBLAST程式參數設定(例如對評分50，字長=3)進行BLAST蛋白質檢索，以獲得與本文所描述之蛋白質分子同源的胺基酸序列。為獲得間隙比對以達成比較目的，可如Altschul等人，1997,Nucleic Acids Res.25：3389 3402中所描述利用間隙式BLAST。或者，PSI BLAST可用於進行迭代檢索，其偵測分子間之遠距離關係(Id.)。當利用BLAST、間隙式BLAST及PSI Blast程式時，可使用相應方案(例如，XBLAST及NBLAST)之默認參數(參見例如，全球資訊網上之國家生物技術資訊中心(NCBI)，ncbi.nlm.nih.gov)。用於比較序列之數學演算法的另一個較佳非限制性實例為Myers及Miller,1988,CABIOS 4：11 17之演算法。此類演算法併入於ALIGN程式(2.0版)中，該ALIGN程式為GCG序列比對軟體套件之一部分。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時，可使用PAM120權重殘基表、空隙長度罰分12及空隙罰分4。
兩個序列之間的一致性百分比可在允許有空隙或不允許有空隙的情 況下，使用與上文所描述類似的技術來確定。在計算一致性百分比時，通常僅對精確匹配進行計數。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab235之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：57之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab235之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗 體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab235之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：66之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab235之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：57之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：66之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：1)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab235之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：58之胺基酸序列具有至少80%、 至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab236之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：58之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab236之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：67之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：67之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab236之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：67之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體 實施例中，此類抗體包含與抗體Ab236之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：58之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：67之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab236之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：59之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：59之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab237之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：59之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體 免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab237之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab237之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：68之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab237之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：59之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：68之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD (SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab237之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab238之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：60之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab238之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：69之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗 體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：69之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab238之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：69之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab238之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：60之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：69之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab238之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：61之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例 如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：61之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab239之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：61之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab239之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab239之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：70之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少 90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab239之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：61之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：70之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab239之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：62之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：62之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab240之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含 與SEQ ID NO：62之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab240之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：71之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：71之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab240之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：71之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab240之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：62之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：71之胺基酸 序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab240之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab241之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：52之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab241之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95% 或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab241之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：63之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab241之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab241之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab242之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：53之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab242之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab242之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：63之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab242之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab242之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab243之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、 表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：54之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab243之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab243之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：63之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab243之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i) 與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab243之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab244之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：55之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab244之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab244之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：63之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab244之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab244之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或 VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab245之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：56之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab245之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其 中該抗體包含與抗體Ab245之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：63之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab245之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：63之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190之胺基酸殘基25至934)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab245之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗 體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab246之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：52之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab246之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab246之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：64之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab246之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例 如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab246之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab247之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：53之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個 特定實施例中，抗體包含與抗體Ab247之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab247之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：64之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab247之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與 抗體Ab247之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab248之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：54之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab248之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、 至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab248之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：64之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab248之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab248之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗 體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab249之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：55之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab249之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab249之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：64之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體 免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab249之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab249之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab250之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：56之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少 90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab250之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab250之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：64之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab250之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：64之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致 性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab250之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab251之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：52之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab251之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例 如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab251之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：65之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab251之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：52之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab251之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95% 或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab252之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：53之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab252之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab252之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含 與SEQ ID NO：65之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab252之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：53之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab252之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab253之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：54之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab253之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab253之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：65之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab253之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：54之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至 少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab253之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab254之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：55之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab254之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab254之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：65之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab254之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：55之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab254之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab255之CDR(例如，VL CDR 1-3)(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：56之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VL構架區的VL域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在一個特定實施例中，抗體包含與抗體Ab255之VL CDR(例如，如表1、表5或表7中所闡述)一致的VL CDR。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)，且其中該抗體包含與抗體Ab255之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、 表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含有包含與SEQ ID NO：65之構架區之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性之VH構架區的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體包含與抗體Ab255之CDR(例如，VH CDR 1-3)(例如，如表2、表6或表8中所闡述)一致的CDR(例如，VH CDR 1-3)。
在某些實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段包含分別(i)與SEQ ID NO：56之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VL域，及(ii)與SEQ ID NO：65之胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少98%序列一致性的VH域，其中該抗體免疫特異性結合於MET，例如人類MET ECD(SEQ ID NO：190)。在具體實施例中，此類抗體或其抗原結合片段包含與抗體Ab255之CDR(例如，VL CDR1-3及/或VH CDR 1-3)(例如，如表1及2、表5及6或表7及8中所闡述)一致的CDR(例如，VL CDR 1-3及/或VH CDR 1-3)。
本文亦提供與本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255)結合MET之相同或重疊抗原決定基(例如，位於人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域中的抗原決定基)的抗體，例如與本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、 Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255)競爭(例如，以劑量依賴性方式競爭)結合於MET(例如，人類MET之ECD)的抗體，或競爭性抑制(例如，以劑量依賴性方式競爭性抑制)本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255)結合於MET(例如，位於人類MET之ECD上的抗原決定基)的抗體。在某些實施例中，本文提供結合於人類MET之胺基酸殘基Q328、R331、S336、L337及N338中之一或多者的抗體。
在一個具體態樣中，本文亦提供以下抗體：其與抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中之任一者結合MET之相同或重疊抗原決定基(例如，位於人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域中的抗原決定基)，且能夠以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制(例如，部分地抑制)MET之磷酸化及抑制(例如，部分地抑制)腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。在某些實施例中，本文提供結合於人類MET之胺基酸殘基Q328、R331、S336、L337及N338中之一或多者的抗體。
結合於MET之相同或重疊抗原決定基(例如，位於人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域中的抗原決定基)的抗體可使用常規技術，諸如本文所呈現之實例中所利用的彼等技術來鑑別。舉例而言，免疫分析用於展現一種抗體阻斷另一種抗體與標靶抗原之結合的能力，亦即，競爭性結合分析。競爭結合分析亦可用於確定兩種抗體是否具有與一種抗 原決定基之類似結合特異性。競爭性結合可在受測試之免疫球蛋白抑制參考抗體與共同抗原(諸如MET)之特異性結合的分析中加以測定。已知許多類型之競爭性結合分析，例如：固相直接或間接放射免疫分析(RIA)、固相直接或間接酶免疫分析(EIA)、夾心競爭分析(參見Stahli等人，(1983)Methods in Enzymology 9：242)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(參見Kirkland等人，(1986)J.Immunol.137：3614)；固相直接標記分析、固相直接標記夾心分析(參見Harlow及Lane,(1988)Antibodies：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press)；使用I-125標記之固相直接標記RIA(參見Morel等人，(1988)Mol.Immunol.25(1)：7)；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，(1990)Virology 176：546)；及直接標記RIA(Moldenhauer等人，(1990)Scand J.Immunol.32：77)。通常，此類分析涉及使用結合於攜有此等未經標記之測試免疫球蛋白及經標記之參考免疫球蛋白抗原中之任一者的固體表面或細胞的經純化之抗原(例如，MET，諸如人類MET之ECD)。藉由測定在測試免疫球蛋白存在下結合於固體表面或細胞之標記的量來量測競爭性抑制。測試免疫球蛋白通常過量存在。通常，當競爭抗體過量存在時，其將抑制參考抗體與共同抗原之特異性結合至少50%-55%、55%-60%、60%-65%、65%-70%、70%-75%或更大。競爭結合分析可使用經標記之抗原或經標記之抗體以大量不同形式組態。在此分析之常見型式中，將抗原固定化在96孔培養盤上。隨後使用放射性標記或酶標記量測未經標記之抗體阻斷經標記之抗體結合於抗原的能力。其他細節參見例如Wagener等人，J.Immunol.,1983,130：2308-2315；Wagener等人，J.Immunol.Methods,1984,68：269-274；Kuroki等人，Cancer Res.,1990,50：4872-4879；Kuroki等人， Immunol.Invest.,1992,21：523-538；Kuroki等人，Hybridoma,1992,11：391-407及Using Antibodies：A Laboratory Manual,Ed Harlow及David Lane編(Cold Springs Harbor Laboratory Press,Cold Springs Harbor,N.Y.,1999)，第386-389頁。
在某些態樣中，競爭結合分析可用於確定一種抗體之結合是否由另一種抗體競爭性抑制(例如，以劑量依賴性方式競爭性抑制)，藉此給出抗體結合基本上相同抗原決定基或重疊抗原決定基(例如，空間重疊抗原決定基)的信號。此類競爭結合分析可包括例如競爭ELISA分析，其可使用經標記之抗原或經標記之抗體以所有數目之不同形式組態。在一個特定實施例中，抗體可在競爭結合分析中用本文所描述之抗體進行測試，例如抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255，或其嵌合或Fab抗體，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之VH CDR及VL CDR的抗體。
在具體態樣中，本文提供一種以下抗體，如使用熟習此項技術者已知或本文所描述之分析(例如，ELISA競爭性分析)所測定，該抗體競爭性阻斷(例如，以劑量依賴性方式競爭性阻斷)包含本文所描述之胺基酸序列的抗體特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的結合。在特定實施例中，此類競爭性阻斷抗體抑制一或多種MET活性。在具體態樣中，本文提供一種以下抗體，如使用熟習此項技術者已知或本文所描述之分析(例如，ELISA競爭性分析)所測定，該抗體與包含本文所描述之胺基酸序列(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、 Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255之VL及/或VH胺基酸序列(參見例如，SEQ ID NO：52-71))的抗體競爭(例如，以劑量依賴性方式競爭)特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)。
在具體態樣中，本文提供一種以下抗體，其與抗體Ab235-Ab255中之任一者競爭(例如，以劑量依賴性方式競爭)特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)。
在具體態樣中，本文提供一種以下抗體，其與包含具有SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62之胺基酸序列之VL鏈區及具有SEQ ID NO：62、63、64、65、66、67、68、69、70或71之胺基酸序列之VH鏈區的抗體競爭(例如，以劑量依賴性方式競爭)特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)。
在一個具體態樣中，本文亦提供以下抗體，(i)其與抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中之任一者競爭(例如，以劑量依賴性方式競爭)特異性結合於MET多肽之抗原決定基(例如，人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域的抗原決定基)，且(ii)其能夠以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制(例如，部分地抑制)MET之磷酸化及抑制(例如，部分地抑制)腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。在一個具體態樣中，本文亦提供以下抗體，(i)其與抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中之任一者競爭(例如，以劑量 依賴性方式競爭)特異性結合於MET多肽之抗原決定基(例如，人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域的抗原決定基)，且(ii)其能夠以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制(例如，部分地抑制)MET之磷酸化及抑制(例如，部分地抑制)腫瘤細胞增殖或腫瘤生長，諸如異種移植腫瘤模型(例如，A549細胞、U87MG細胞、Hop92細胞、H596細胞、EBC-1細胞及SNU-5細胞)。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗體為由特異性結合MET且包含具有SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62之胺基酸序列之VL鏈區及具有SEQ ID NO：62、63、64、65、66、67、68、69、70或71之胺基酸序列之VH鏈區的抗體競爭性阻斷(例如，以劑量依賴性方式競爭性阻斷)特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD)的抗體。
在一個具體態樣中，本文亦提供以下抗體，(i)其競爭性阻斷(例如，以劑量依賴性方式競爭性阻斷)抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中之任一者特異性結合於MET多肽之抗原決定基(例如，人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域的抗原決定基)，且(ii)其能夠以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制(例如，部分地抑制)MET之磷酸化及抑制(例如，部分地抑制)腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。
在具體態樣中，本文提供一種抗體或其抗原結合片段，其與包含本文所描述之胺基酸序列(參見例如，表1-8)的抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者)免疫特異性結合於相同抗原決定基，該等本文所描述 之胺基酸序列用於特異性結合於MET多肽(例如，MET(例如人類MET)之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域之ECD)。熟習此項技術者已知或本文所描述之分析(例如，ELISA分析)可用於確定兩種抗體是否結合於相同抗原決定基。
在一個具體實施例中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段與特異性結合MET且包含具有SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62之胺基酸序列之VL鏈區及具有SEQ ID NO：62、63、64、65、66、67、68、69、70或71之胺基酸序列之VH鏈區的抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者)免疫特異性結合於相同抗原決定基。
在一個具體態樣中，本文亦提供以下抗體，(i)其與抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255免疫特異性結合MET多肽之相同抗原決定基(例如，人類MET之ECD，諸如Sema結構域或Sema/PSI結構域的抗原決定基)，且(ii)其能夠以IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制(例如，部分地抑制)MET之磷酸化及抑制(例如，部分地抑制)腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。
在一個態樣中，本文提供免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema結構域)且可調節MET活性及/或表現(例如，抑制MET活性及/或表現)的抗體。在某些態樣中，該等抗體調節配位體依賴性MET活性。在某些態樣中，該等抗體調節MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性。在某些實施例中，本文提供MET拮抗劑，其為免疫特異性結合於人類MET之ECD(例如人類MET之ECD的Sema結構域)且抑制(例如，部分地抑制)至少一種MET活性(例如，MET 磷酸化或MET信號傳導)的本文所描述之抗體。在某些實施例中，本文所提供之MET拮抗劑為免疫特異性結合於人類MET之ECD(例如人類MET之ECD的Sema或PSI結構域)且抑制或減少(decrease/reduce)MET表現的本文所描述之抗體。在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)如藉由MET磷酸化之抑制所測定，抑制細胞中之MET活性；(b)誘導細胞中之MET降解；及(c)抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)抑制MET之磷酸化；(b)誘導細胞中之MET降解；(c)抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長；及/或(d)抑制配位體結合於MET。在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)誘導細胞(例如，具有MET擴增或MET突變之細胞)中之MET降解；及(b)抑制配位體結合於MET(例如，在表現野生型MET之細胞中)。在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加；及(b)抑制配位體結合。在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，在呈IgG2同型(例如，人 類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加；及(b)誘導受體降解。
在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其以IgG2(例如，人類IgG2)同型形式比以IgG1(例如，人類IgG1)同型形式更好地(a)抑制MET之磷酸化；(b)誘導細胞中之MET降解；(c)抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長；及/或(d)抑制配位體結合於MET。在具體實施例中，在具有非配位體依賴性MET活性之細胞(例如，EBC-1細胞及SNU-5細胞)中，例如在具有MET擴增或組成性活性MET突變體之細胞中，本文所提供之抗-MET抗體以IgG2同型形式比IgG1同型形式展現更好的MET拮抗活性(例如，阻斷MET磷酸化、誘導MET降解或抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長)。
MET活性可係關於MET之任何活性，諸如此項技術中已知或描述之彼等活性。MET活性之非限制性實例包括：MET受體二聚、MET受體與其他受體(例如，EGFR、HER2、HER3或RET)雜二聚、MET受體磷酸化(例如，在細胞質域中酪胺酸磷酸化(諸如MET配位體依賴性磷酸化)或自體磷酸化)、MET受體下游之信號傳導(例如，SHC、Grb2、Stat3、Src、Gab1、PLC-g、p85、PI3K、Crk/CRKL、AKT、Ras或MAPK/ERK信號傳導)、細胞增殖(諸如MET配位體(例如，HGF)誘導之細胞增殖(例如，癌細胞增殖)增加)或細胞存活(例如，癌細胞)、MET配位體(例如，HGF)誘導之抗細胞凋亡。MET活性或MET功能在本文中可互換地使用。在某些態樣中，MET活性由結合於MET受體之MET配位體(例如，HGF)誘導。在某些實施例中，在無結合MET受體之MET配位體(例如，HGF)存在 下，由於MET受體之高表現(或過度表現)，可發生MET活性或信號傳導增加。MET在細胞中之高或過度表現係指比已知具有正常MET表現或MET活性之參考細胞的表現水準或已知具有正常MET表現或MET活性之細胞群體或樣品中的MET平均表現水準高至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、400%或500%的表現水準。MET之表現水準可藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，西方墨點法、ELISA或免疫組織化學)來評定。在某些實施例中，本文提供免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且減少MET表現的抗體。在某些實施例中，本文提供免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且誘導MET之泛素化的抗體。在某些實施例中，本文提供免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且誘導MET降解或周轉的抗體。在某些實施例中，本文提供免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且阻斷(例如，部分地阻斷)MET配位體依賴性及MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET信號傳導的抗體。在不受任何理論束縛的情況下，非配位體依賴性MET活化可涉及使MET與跨膜蛋白質締合，諸如整合素活化、叢蛋白、CD44、G蛋白質偶合受體及其他受體酪胺酸激酶，諸如EGFR及RET(參見例如，Varkaris等人，2013,Int.J.Cancer,133(7)：1536-1546)。
在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同 型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許針對MET活性(例如，配位體依賴性及/或MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性)的拮抗特性增強。
在特定實施例中，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)不具有促效活性。在某些實施例中，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)具有較低促效活性。促效活性之鑑別藉由一般技術者已知之分析來進行，諸如細胞增殖及細胞離散分析、評定MET之磷酸化或下游MET信號傳導組件(諸如MAPK及/或AKT)之活性的ELISA或免疫墨點分析。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析、流式細胞測量術或競爭分析)所評定，本文所描述之抗體特異性結合於MET之ECD且阻斷或抑制(例如，部分地抑制)MET配位體(例如，HGF)與MET之結合至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或100%。
在某些態樣中，藉由本文所描述之抗-MET抗體(例如，單株抗體)對MET配位體(例如，HGF)與MET之結合的抑制可由IC50值表徵，其反映達成MET配位體與MET之結合之50%抑制的抗-MET抗體之濃度。因此，在具體實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或流式細胞測量術)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體 Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)抑制MET配位體與MET之結合的IC50為至多約10,000nM、1,000nM、900nM、800nM、700nM、600nM、500nM、400nM、300nM、200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。在具體實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或流式細胞測量術)所評定，本文所描述之抗-MET抗體抑制MET配位體與MET之結合的IC50為至少約10,000nM、1,000nM、900nM、800nM、700nM、600nM、500nM、400nM、300nM、200nM、100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。在特定實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或流式細胞測量術)所評定，本文所描述之抗-MET抗體抑制MET配位體與MET之結合的IC50在約0.01nM至10nM、0.1nM至20nM、0.1nM至10nM、0.1nM至5nM或0.01nM至20nM範圍內。
在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加；及(b)抑制配位體結合。在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、 Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許抗-MET活性增強。在具體實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或流式細胞測量術)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)抑制MET配位體(例如，HGF)與MET之結合的IC50在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式的情況下比在呈IgG1同型形式的情況下低。在某些實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或流式細胞測量術)所評定，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)的IC50介於IgG1同型之IC50的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100之間。
在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-255中之任一者之CDR的抗體)不阻斷或抑制MET受體二聚。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體僅可忽視地(例如，小於約2%或3%或在誤差或偏差之標 準內)抑制或減少MET受體二聚。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體不誘導或增強MET受體二聚體解離。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體僅可忽視地(例如，小於約2%或3%或在誤差或偏差之標準內)誘導或增強MET受體二聚體解離。在一個特定實施例中，本文所描述之抗-MET抗體可特異性結合於MET受體二聚體且不阻斷或抑制MET受體二聚。在一個特定實施例中，本文所描述之抗-MET抗體可特異性結合於MET受體單體且不阻斷或抑制MET受體二聚。在某些實施例中，任何此類抗體或其抗原結合片段抑制配位體結合於MET。
在某些態樣中，作為MET活性之抑制劑(例如，MET拮抗劑)，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)可阻斷或抑制(例如，部分地抑制)MET之二聚。一般而言，當MET配位體結合於MET時，誘導MET受體二聚。因此，在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱分析)所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的MET受體在MET配位體刺激存在下之二聚，本文所描述之抗體阻斷或抑制(例如，部分地抑制)MET受體之二聚至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在一個具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET且使MET受體之二聚部分地抑制約25%到75%。本文所描述之抗體對MET受體之二聚的阻斷或抑制(例如，部分 抑制)可在MET配位體刺激存在下進行評定。舉例而言，可在本文所描述之抗-MET抗體存在或不存在下使表現MET之細胞與MET配位體(例如，HGF)接觸，且測定MET受體二聚之水準。在某些實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱分析)所評定，在無抗-MET抗體存在下的MET配位體誘導之MET受體二聚為在本文所提供之抗-MET抗體存在下之MET受體二聚的至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。MET之細胞質域中一或多個殘基的酪胺酸磷酸化可為MET受體二聚之指示。
在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許抗-MET活性增強。在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱分析)所評定，在呈IgG1同型形式的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)存在下的MET配位體(例如，HGF)誘導之MET受體二聚為在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混 合物)形式的本文所提供之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)存在下之MET受體二聚的至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之MET活性，本文所描述之抗-MET抗體可抑制(例如，部分地抑制)MET活性至少約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%。在某些實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之MET活性，本文所描述之抗-MET抗體可抑制(例如，部分地抑制)MET活性至少約25%至約65%。MET活性之非限制性實例可包括MET受體二聚、MET受體與其他受體(例如，EGFR、HER2、HER3或RET)雜二聚、MET受體磷酸化(例如，在細胞質域中酪胺酸磷酸化或自體磷酸化)、MET受體下游之信號傳導(例如，SHC、Grb2、Stat3、Src、Gab1、PLC-g、p85、PI3K、Crk/CRKL、AKT、Ras或MAPK/ERK信號傳導)、MET配位體(例如，HGF)誘導之細胞增殖增加或細胞存活及MET配位體(例如，HGF)誘導之 抗細胞凋亡。在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許對MET活性之抑制增強。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體抑制配位體依賴性MET活性。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體抑制MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體抑制配位體依賴性及MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性。
作為MET活性之抑制劑(例如，MET拮抗劑)，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)可阻斷(例如，部分地阻斷)或抑制(例如，部分地抑制)MET之磷酸化，具體言之，MET之細胞質域中一或多個殘基的酪胺酸磷酸化。一般而言，當MET配位體(例如HGF)結合於MET時，誘導MET受體二聚及磷酸化。然而，在某些態樣中，MET受體二聚及/或磷酸化可不依賴於MET配位體結合於MET受體而發生。舉例而言，MET受體二聚及/或磷酸化可由於MET之功能獲得性突變或過度表現而發生。
人類MET之細胞質域中例如在配位體刺激後可磷酸化之酪胺酸殘基的非限制性實例(例如，GenBank寄存編號NP_001120972.1及NP_000236.2)包括殘基1003、1234、1235、1349及1356(參見例如， Organ及Tsao,2011,Ther.Adv.Med.Oncol.,391增刊)：S7-S19，例如，在圖1處)。在一個具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體可抑制人類MET之酪胺酸殘基1234及/或1235處的受體磷酸化。
因此，在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，如部分6中所描述之ELISA分析，或免疫墨點分析)所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之磷酸化，本文所描述之抗體阻斷、抑制MET之細胞質域中的酪胺酸磷酸化或使其減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%。在特定實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，如部分6中所描述之ELISA分析，或免疫墨點分析)所評定，本文所描述之抗體阻斷或抑制MET之細胞質域中的酪胺酸磷酸化至少約25%，視情況至約65%或75%。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，如部分6中所描述之ELISA分析，或免疫墨點分析)所評定，本文所描述之抗體阻斷或抑制MET之細胞質域的酪胺酸磷酸化至少約25%至約80%。在某些實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，如部分6中所描述之 ELISA分析，或免疫墨點分析)所評定，本文所描述之抗體阻斷或抑制MET之細胞質域的酪胺酸磷酸化至少約50%至約80%、90%、95%或100%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述之方法(例如，如下文部分6中所描述的使用表現野生型MET之SNU-5細胞、A549細胞及Hop92細胞的磷酸化抑制分析)或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體阻斷或抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50小於約400pM或小於約300pM。
在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50小於約200pM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50小於約150pM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50小於約50pM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50在約30pM至約300pM、100pM至約500pM、約25pM至約200pM、約40pM至約160pM、約50pM至約125pM或約5pM至約100pM範圍內。舉例而言，抑制酪胺酸磷酸化之IC50可藉由在偵測酪胺酸磷酸化之ELISA中(例如，如下文部分6中所描述)分析來自重組表現MET之細胞(例如，SNU-5細胞、A549細胞及Hop92細胞)的溶胞物來測定。在某些實施例中，在用於磷酸化抑制分析中之前，分選重組表現MET之細胞(例如，SNU-5細胞、A549細胞及Hop92細胞)，例如，分選該等細胞以選擇高度表現MET之細胞。在一些實施例中，在用於磷酸化抑制分析中之前，不分選細胞。
在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之 任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫墨點分析)所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之磷酸化，本文所描述之抗體阻斷或抑制MET之細胞質域中一或多個酪胺酸殘基的酪胺酸磷酸化至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%。在具體實施例中，本文所描述之抗體對MET之細胞質域之一或多個酪胺酸殘基之磷酸化的阻斷或抑制(例如，部分抑制)可在MET配位體刺激後進行評定。舉例而言，在本文所描述之抗-MET抗體存在或不存在下使表現MET之細胞與MET配位體接觸，且可測定MET之細胞質域中一或多個酪胺酸殘基的磷酸化水準。
在某些實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫墨點分析)所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之磷酸化，在無抗-MET抗體存在下的MET配位體誘導的MET之細胞質域之一或多個酪胺酸殘基之磷酸化為在抗-MET抗體存在下的MET配位體誘導的MET之細胞質域之一或多個酪胺酸殘基之磷酸化的至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗 體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許抗-MET活性增強。在具體實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或免疫墨點法)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式的情況下比在呈IgG1同型形式的情況下低。在某些實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或免疫墨點法)所評定，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)的IC50介於IgG1同型之IC50的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100之間。在某些實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，ELISA分析或免疫墨點法)所評定，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)的IC50介於IgG1同型之IC50的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100之間。
在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化的IC50比由不結合SEMA結構域之人類化抗-MET抗體(「抗-MET-1」)或結合於SEMA結構域之二價IgG4抗-MET抗體(「抗-MET-2」)介導的MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化抑制的IC50低。在某些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體的IC50約介於抗-MET-1或抗-MET-2抗體之IC50的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100之間。在具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以IgG2形式抑制MET之細胞質域之酪胺酸磷酸化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)的最大抑制百分比為至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之降解，本文所描述之抗體誘導MET受體降解(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)或使其增強至少約5%、10%、15%、20%、 25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之降解，本文所描述之抗體誘導MET受體降解或使其增強至少約25%或35%，視情況至約75%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之降解，本文所描述之抗體誘導MET受體降解(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)或使其增強至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些實施例中，本文提供以下抗體，其免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD，或人類MET之ECD中的Sema/PSI結構域)且其(a)與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加；及(b)誘導受體降解。在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同 型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許抗-MET活性增強。在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析或免疫墨點分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以IgG1同型形式誘導或增強MET受體降解(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)為在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下之MET受體降解的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。在具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以IgG2形式誘導或增強MET受體降解(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)的最大誘導/增強百分比為至少約40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由 本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱及免疫墨點分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之泛素化，本文所描述之抗體誘導MET受體泛素化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)或使其增強至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱及免疫墨點分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之泛素化，本文所描述之抗體誘導MET受體泛素化或使其增強至少約25%或35%，視情況至約75%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之泛素化，本文所描述之抗體誘導MET受體泛素化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)或使其增強至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析或免疫墨點分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一 者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以IgG1同型形式誘導或增強MET受體泛素化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)為在無抗體存在下或在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下之MET受體泛素化的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。
用於定量或監測細胞表面受體之泛素化及/或降解(例如，降解之動力學或速率)的技術為此項技術中所熟知的，且可涉及多種螢光及放射性技術(參見例如，國際專利申請公開案第WO 2008/153926 A2號)。舉例而言，可進行脈衝追蹤實驗或使用放射性標記之配位體(諸如125I-HGF)的實驗以定量量測MET之降解。或者，可藉由西方墨點法或ELISA分析來分析MET降解，參見例如部分6。
在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之內化，本文所描述之抗體誘導MET受體內化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)或使其增強至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在具體實施例中，本文所描述之 抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之內化，本文所描述之抗體誘導MET受體內化或使其增強至少約25%或35%，視情況至約75%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，脈衝追蹤分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下之內化，本文所描述之抗體誘導MET受體內化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)或使其增強至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，流式細胞測量術、脈衝追蹤分析或免疫墨點分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以人類IgG1同型形式誘導或增強MET受體內化(例如，在細胞中，諸如SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中，或在腫瘤細胞中)為以人類IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式在本文所提供之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的 抗體)存在下之MET受體內化的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。
用於定量或監測細胞表面受體之受體內化(例如，內化之動力學或速率)的技術為此項技術中所熟知的，且可涉及例如多種螢光及放射性技術(參見例如，國際專利申請公開案第WO 2008/153926 A2號)。舉例而言，可進行脈衝追蹤實驗或使用放射性標記之配位體(諸如125I-HGF)的實驗以定量量測MET之內化。
此外，MET受體磷酸化下游之信號傳導事件可充當MET活性之指示。舉例而言，結合於其受體MET之MET配位體(例如，HGF)刺激若干不同信號傳導路徑，包括例如磷脂醯肌醇(PI)3-激酶之成員及有絲分裂原活化之蛋白激酶(MAPK)(參見Trusolino等人，Nat.Rev.Mol.Cell Biol.,2010,11：834-848)。MET之細胞質域中經磷酸化之酪胺酸可提供用於例如PI3K及Grb2之結合位點。
因此，在某些態樣中，充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)可抑制PI3K-Akt、STAT、NFκB或MAPK路徑激酶之成員的信號傳導。在特定實施例中，充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體可抑制與MET之細胞質域及/或與PI3K-Akt、STAT、NFκB或MAPK路徑激酶之一或多個成員的結合(或抑制其相互作用)。在某些實施例中，充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體可抑制MET對PI3K-Akt、STAT、NFκB或MAPK路徑激酶之一或多個成員的活化。在某些實施例中，充當MET活性之抑 制劑的本文所描述之抗-MET抗體可抑制PI3K-Akt、STAT、NFκB或MAPK路徑激酶之一或多個成員的磷酸化(例如，細胞質域中之酪胺酸磷酸化)。
在特定實施例中，充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)可可抑制下游信號傳導，諸如MAPK之磷酸化、P13K之磷酸化或AKT之磷酸化。因此，在某些實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，如部分6中所描述之西方墨點法或ELISA分析，或免疫墨點分析)所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之磷酸化，本文所描述之抗-MET抗體可抑制MAPK之磷酸化(例如，MET配位體(例如，HGF)誘導的MAPK之磷酸化)或使其減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在某些實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，如部分6中所描述之西方墨點法或ELISA分析，或免疫墨點分析)所評定，相對於在無任何抗體或具有不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)之情況下的在MET配位體刺激存在下之磷酸化，本文所描述之抗-MET抗體可抑制AKT之磷酸化(例如，MET配位體(例如，HGF)誘導的AKT之磷酸化)或使其減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法 (例如，ELISA及免疫分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)抑制下游信號傳導(諸如PI3K-Akt、STAT、NFκB或MAPK路徑激酶之成員的信號傳導)可為在無抗體存在下或在呈IgG1同型形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下抑制此類下游信號傳導的至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在某些態樣中，可充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或活性可抑制細胞(例如，癌細胞，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞及H596細胞)，例如表現MET且對MET信號傳導有反應之細胞(例如，響應於MET配位體刺激及MET信號傳導而增殖之細胞)的細胞增殖。在某些態樣中，可充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或活性可抑制表現MET之癌細胞(諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞及H596細胞)，例如表現MET且對MET信號傳導有反應之細胞(例如，響應於MET配位體刺激及MET信號傳導而增殖之細胞)的細胞增殖。細胞增殖分析描述於此項技術中，且可由熟習此項技術者容易地進行。舉例而言，可藉由以下來分析細胞增 殖：量測溴脫氧尿苷(BrdU)併入(參見例如，Hoshino等人，1986,Int.J.Cancer 38,369；Campana等人，1988,J.Immunol.Meth.107：79)或(3H)胸苷併入(參見例如，Blechman等人，Cell,1995,80：103-113；Chen,J.,1996,Oncogene 13：1395-403；Jeoung,J.,1995,J.Biol.Chem.270：18367 73)；以各種時間間隔(例如，12小時或24小時間隔)進行直接細胞計數；或偵測已知基因，諸如原癌基因(例如fos、myc)或細胞循環標記物(Rb、cdc2、細胞週期調節蛋白A、D1、D2、D3、E等)之轉錄、轉譯或活性的變化。此類蛋白質及mRNA及活性之水準可藉由此項技術中熟知之任何方法測定。舉例而言，可藉由已知免疫診斷方法(諸如ELISA、西方墨點法或免疫沈澱)使用抗體(包括市售可得之抗體)來對蛋白質進行定量。可使用此項技術中熟知且常規之方法來對mRNA進行定量，例如使用北方雜交分析(northern analysis)、RNA酶保護或與反轉錄結合之聚合酶鏈反應。
在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，BrdU併入分析)所評定，本文所描述之抗體抑制細胞增殖至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。
在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述之方法(例如，如下文部分6中所描述)或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體阻斷或抑制細胞(例如，癌細胞，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞及H596細胞)的IC50 小於約400pM或小於約300pM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制細胞(例如，癌細胞，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞及H596細胞)的IC50小於約300nM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制細胞增殖的IC50小於約150nM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制細胞增殖的IC50小於約50nM。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制細胞增殖的IC50在約100nM至約500nM、約25nM至約200nM或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM或約5nM至約100nM範圍內。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制U87MG細胞之細胞增殖的IC50在約1nM至約50nM、約5nM至約30nM或約9nM至約25nM範圍內。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制U87MG細胞之細胞增殖的IC50小於約50nM、小於約40nM、小於約30nM、小於約20nM、小於約10nM或小於約5nM。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制A549細胞之細胞增殖的IC50在約1nM至約30nM、約2.5nM至約20nM或約4nM至約15nM範圍內。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制A549細胞之細胞增殖的IC50小於約20nM、小於約10nM、小於約7.5nM、小於約6nM、小於約5nM或小於約4.5nM。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制H596細胞之細胞增殖的IC50在約0.01nM至約2nM、約0.1nM至約1.5nM或約0.2nM至約1nM範圍內。在某些實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且阻斷或抑制H596細胞之細胞增殖的IC50小於約1.5 nM、小於約1nM、小於約0.5nM、小於約0.01nM、小於約0.05nM或小於約0.01nM。
在某些實施例中，與呈IgG1同型形式之抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)相比，本文所提供之抗-MET抗體(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255)在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a、人類IgG2b或其混合物)形式的情況下，MET拮抗活性增加。在不受任何理論束縛的情況下，IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)可在MET激酶二聚體之距離或定位中提供變化增強，從而允許抗-MET活性增強。在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，BrdU併入分析)所評定，在呈IgG1同型形式的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)存在下對細胞(例如，癌細胞，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞及H596細胞)，例如表現MET且對MET信號傳導有反應之細胞(例如，響應於MET配位體刺激及MET信號傳導而增殖之細胞)之細胞增殖的抑制為在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下對細胞增殖之抑制的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。
在某些態樣中，可充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體 Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)可降低或抑制細胞(例如，癌細胞，諸如SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞及H596細胞)，例如表現MET且對MET信號傳導有反應之細胞(例如，響應於MET配位體刺激及MET信號傳導而增殖之細胞)的存活。細胞存活分析描述於此項技術中，且可由熟習此項技術者容易地進行。舉例而言，可藉由使用錐蟲藍染色或此項技術中已知之其他細胞死亡或生存標記物來評定細胞生存力。在一個具體實施例中，量測細胞ATP之水準以確定細胞生存力。在具體實施例中，在三天及七天時間段內使用此項技術中之分析標準，諸如量測細胞內ATP水準之CellTiter-Glo分析套組(Promega)來量測細胞生存力。細胞ATP之降低指示細胞毒性作用。在另一個具體實施例中，可在中性紅吸收分析中量測細胞生存力。在其他實施例中，對形態變化之目視觀測可包括增大、粒度、具有粗糙邊緣之細胞、膜狀外觀、圓化、自孔表面脫離或其他變化。與所見細胞毒性程度相符，將此等變化命名為T(100%毒性)、PVH(部分毒性-極重-80%)、PH(部分毒性-重-60%)、P(部分毒性-40%)、Ps(部分毒性-輕微-20%)或0(無毒性-0%)。50%細胞抑制性(細胞毒性)濃度(IC50)藉由對此等資料之回歸分析來確定。
在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，錐蟲藍排出分析)所評定，本文所描述之抗體抑制(例如，部分地抑制)細胞存活至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，錐蟲藍排出分析)所評定，在呈IgG1同型形式的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)存在下對細胞存活之抑制為在無抗體存在下或在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下對細胞存活之抑制的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。
適合用於本文所描述關於MET活性之分析中的細胞及細胞株為可容易獲得的(例如，ATCC)或可使用此項技術中已知之方法容易地鑑別。舉例而言，內源性表現MET或具有MET信號傳導或活性之細胞及/或細胞株為熟習此項技術者已知的。在某些實施例中，適合用於本文所描述之分析中的細胞或細胞株可內源性或重組地表現MET。在特定實施例中，用於細胞增殖分析中之細胞或細胞株可內源性或重組地表現MET，且響應於MET配位體(例如，HGF)刺激而增殖或增加增殖。用於細胞生存力分析中之細胞或細胞株可內源性或重組地表現MET，且響應於MET配位體(例如，HGF)刺激而使細胞生存力變化。用於細胞凋亡分析中之細胞或細胞株可內源性或重組地表現MET，且響應於MET配位體(例如，HGF)刺激而使細胞凋亡變化。用於細胞增殖、細胞生存力或其他分析中之細胞或細胞株可內源性或重組地表現MET，且響應於MET配位體(例如，HGF)刺激而使其他細胞類型之增殖或活化變化。
可用於本文所描述之方法及分析中的細胞之非限制性實例包括SNU-5細胞、EBC-1細胞、U87MG細胞、A549細胞、Hop92細胞及H596細胞。可用於本文所描述之評定非配位體(例如，HGF)依賴性MET信號傳導及活性之方法及分析中的細胞之非限制性實例包括EBC-1細胞及SNU-5細胞。在具體實施例中，可用於本文所描述之評定非配位體依賴性MET活性之方法及分析中的細胞包括MET擴增之細胞(諸如MET擴增之腫瘤細胞)或表現突變型MET(例如組成性活性突變型MET)之細胞。可用於本文所描述之評定配位體(例如，HGF)依賴性MET信號傳導及活性之方法及分析中的細胞之非限制性實例包括A549細胞、U87MG細胞、Hop92細胞及H596細胞。在具體實施例中，可用於本文所描述之評定配位體依賴性MET活性之方法及分析中的細胞包括表現野生型MET之細胞，例如表現野生型MET之腫瘤細胞，或表現正常水準之MET的細胞(例如，腫瘤細胞)，例如，不含有MET擴增之細胞。可用於本文所描述之方法及分析中的細胞之其他非限制性實例包括原代細胞；經轉型細胞；幹細胞；肥大細胞；原生胚細胞；卵母細胞；精母細胞；胚胎幹細胞；造血細胞；紅白血病細胞(例如，F36P及TF-1細胞株)；結腸直腸癌細胞株，諸如SNU-C1、SW48、RKO、COLO 205、SW1417、LS411N、NCI-H508、HT-29、SK-CO-1、SW1116、SW948、T84、LS123、LoVo及SW837；胃癌細胞株；諸如HGC27、GCIY、MKN7、TMK1、ECC12、AGS、CLS-145、23132/87、MKN-45、SK-GT-2、HGC-27及KATO-III；肺癌細胞株，諸如H526、DMS153、DMS79、NCI-H2126、NCI-H1299、NCI-H1437、NCI-H1563、NCI-H1573、NCI-H1975、HCI-H661及HCC827；黑素瘤細胞株，諸如HMCB、SK-MEL-1、SK-MEL-3、SK-MEL-24、SH-4、 RPMI-7951、SKA375、G-361及WM-115；人類骨髓白血病細胞株，諸如MO7E細胞；胃腸基質腫瘤細胞株，諸如ST-882、GIST430及GIST882；神經母細胞瘤細胞株，諸如SK-N-SH、SK-SY5Y、H-EP1、SK-N-BE(2)、SK-N-BE(ZkM17)、SK-N-BE(2)C、LA-N-1或LA-N-1-5s；小細胞肺癌細胞株，諸如H526、ECC12、TMK1、MKN7、GCIY及HGC27。在特定實施例中，可用於本文所描述之方法及分析中的細胞包括免疫細胞，諸如巨噬細胞、樹突狀細胞及天然殺手(NK)細胞。在特定實施例中，可用於本文所描述之方法及分析中的細胞包括H1299細胞。
或者，表現MET(例如，人類MET)之細胞及細胞株可常規地重組產生。可經工程改造以重組地表現MET之細胞的非限制性實例包括COS細胞、HEK 293細胞、CHO細胞、H1299細胞、纖維母細胞(例如，人類纖維母細胞，諸如NIH3T3細胞)及MEFS。在一個具體實施例中，用於本文所描述之方法中的細胞為表現人類MET ECD(例如，SEQ ID NO：190)之H1299細胞。
在某些態樣中，可充當MET活性之抑制劑的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)能夠在小鼠模型研究中抑制或減少癌轉移、抑制腫瘤生長或誘導腫瘤消退。舉例而言，可將腫瘤細胞株引入至裸鼠中，且可向小鼠投與本文所描述之抗-MET抗體一或多次，且可歷經數週及/或數月之時段監測所注射腫瘤細胞之腫瘤進程。在一些情況下，向裸鼠投與抗-MET抗體可在引入腫瘤細胞株之前發生。任何適當腫瘤細胞株(例如，表現MET之腫瘤細胞株)均可用於本文所描述之小鼠異種移植物模型中。用於此等異種移植小鼠模型中之腫瘤細胞株的非限制性實 例包括非小細胞肺癌細胞株H1299；巨核母細胞白血病細胞株，諸如MO7e；胃腸基質腫瘤細胞株，諸如ST-882、GIST430、GIST48、GIST48B及GIST882；人類紅白血病細胞株，諸如HEL及TF-1；人類前髓細胞性白血病細胞株HL60；神經母細胞瘤細胞株，諸如SK-N-SH、SK-SY5Y、H-EP1、SK-N-BE(2)、SK-N-BE(ZkM17)、SK-N-BE(2)C、LA-N-1或LA-N-1-5s；及小細胞肺癌細胞株，諸如H526、DMS153、DMS79、ECC12、TMK1、MKN7、GCIY及HGC27。其他細胞株包括A549細胞、SNU-5細胞、EBC-1細胞、Hop92細胞及H596細胞。在一個具體實施例中，用於異種移植小鼠模型中之腫瘤細胞株為GIST882、GIST430、GIST48、GIST48B、HEL、HL60、H526、DMS153或DMS79細胞株。在某些實施例中，適合用於異種移植腫瘤模型中之細胞株可藉由重組表現MET來產生。
在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體在小鼠模型中抑制腫瘤生長或誘導腫瘤消退至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%或100%。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體在小鼠模型中抑制腫瘤生長或誘導腫瘤消退至少約25%或35%，視情況至約75%。在具體實施例中，本 文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體在小鼠模型中抑制腫瘤生長或誘導腫瘤消退至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，在呈IgG1同型形式的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)存在下在小鼠模型中之腫瘤生長或誘導腫瘤消退為在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下在小鼠模型中之腫瘤生長抑制或腫瘤消退誘導的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。
確定腫瘤生長抑制或腫瘤消退可例如藉由歷經一段時間監測腫瘤尺寸，諸如藉由物理量測可觸腫瘤或其他目視偵測方法來評定。舉例而言，可產生腫瘤細胞株以重組地表現目測劑，諸如綠色螢光蛋白(GFP)或螢光素酶，隨後GFP之活體內目測可藉由顯微鏡檢查來進行，且螢光素酶之活體內目測可藉由向異種移植小鼠中投與螢光素酶受質及偵測由螢光素酶處理螢光素酶受質所致之發光來進行。GFP或螢光素酶偵測之程度或水準與異種移植小鼠中腫瘤之尺寸相關。
在某些態樣中，本文所描述之抗-MET抗體特異性地結合於MET抗 原，且可增加腫瘤異種移植物模型中動物之存活率。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體使腫瘤異種移植物模型中小鼠之存活率增加至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在具體實施例中，本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體使腫瘤異種移植物模型中小鼠之存活率增加至少約25%或35%，視情況至約75%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，本文所描述之抗體使腫瘤異種移植物模型中小鼠之存活率增加至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法所評定，在呈IgG1同型形式的本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)存在下在腫瘤異種移植物模型中小鼠之存活率為在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在 下在腫瘤異種移植物模型中小鼠之存活率的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。存活率可例如藉由繪製存活小鼠數目相對於腫瘤細胞株注射後之時間(例如，天數或週數)的存活率曲線來確定。
在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱及免疫墨點分析)所評定，相對於在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下的EMT抑制，本文所描述之抗體抑制內皮細胞向間葉細胞轉變(EMT)(例如，在細胞中，諸如DU145細胞中)至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，免疫沈澱及免疫墨點分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下的EMT抑制，本文所描述之抗體抑制EMT至少約25%或35%，視情況至約75%。在具體實施例中，本文所描述之抗體特異性結合於MET，且如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，DU145細胞離散分析)所評定，相對於在無抗體存在下或在不相關抗體(例如，不免疫特異性結合於MET之抗體)存在下的EMT抑制，本文所描述之抗體抑制EMT(例如，在細胞中，諸如DU145細胞中)至少約1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍 或100倍。在某些實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，DU145細胞離散分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)抑制EMT的IC50為至多約50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。在具體實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，DU145細胞離散分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體抑制EMT的IC50為至少約50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。在特定實施例中，如藉由本文所描述及/或熟習此項技術者已知之方法(例如，DU145細胞離散分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體抑制MET配位體MET配位體與MET之結合的IC50在約0.1nM至500nM、0.1nM至100nM或0.1nM至50nM範圍內。
在具體實施例中，如藉由本文所描述或熟習此項技術者已知之方法(例如，DU145細胞離散分析)所評定，本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者或其抗原結合片段，或包含抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab239及Ab241-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以IgG1同型形式抑制EMT(例如，在細胞中，諸如DU145細胞中)為在呈IgG2同型(例如，人類IgG2、人類IgG2a及人類IgG2b或其混合物)形式之抗-MET抗體或其抗原結合片段存在下之EMT抑制的至多約1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、 1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100。用於定量或監測細胞表面受體之EMT的技術為此項技術中所熟知的，且涉及DU145細胞離散分析，參見例如部分6。
5.2 抗體結合物
在一些實施例中，本文提供以下抗體(例如，單株抗體，諸如嵌合或人類化抗體)或其抗原結合片段，其連接(例如結合或融合)於藥劑，例如診斷劑、可偵測劑或治療劑，例如多肽或小分子。連接(例如結合或融合)之抗體可適用於例如監測或預測或疾病之發作、發展、進程及/或嚴重性例如作為臨床測試程序之部分，諸如藉由例如成像程序來確定特定療法之功效。連接(例如結合或融合)之抗體可適用於例如治療或控制本文所描述之病狀或病症，或用於治療或控制本文所描述之病狀或病症的作用。本文所描述之抗體亦可與分子(例如，聚乙二醇)結合，該分子可影響該等抗體之一或多種生物學及/或分子特性，例如穩定性(例如，在血清中)、半衰期、可溶性及抗原性。
在一個特定態樣中，本文提供包含連接於本文所描述之抗體(或其抗原結合片段)之藥劑(例如，治療劑)的結合物，該抗體免疫特異性結合於人類MET之ECD，例如包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體，例如，如表1、2及5-8中所闡述。
在特定實施例中，抗體及其抗原結合片段可連接於可偵測分子或物質，包括(但不限於)各種酶、輔基(諸如(但不限於)抗生蛋白鏈菌素/生物素及抗生物素蛋白/生物素)、螢光分子、生物發光分子、放射性分子(諸如放射性同位素)、量子點或其他奈米粒子，及使用各種正電子發射斷層攝影之正電子發射金屬及非放射性之順磁性金屬離子。在其他特定實施例 中，抗體或其抗原結合片段可連接於治療劑，諸如細胞毒素，例如細胞生長抑制劑或殺細胞劑，或放射性金屬離子，例如α-發射體。舉例而言，細胞毒素或細胞毒性劑包括對細胞有害之任何藥劑。
在一個實施例中，抗體或抗原結合片段直接結合或融合於藥劑，例如診斷劑或治療劑。在另一個具體實施例中，抗體或抗原結合片段與藥劑經由一或多種連接子結合或融合。在特定實施例中，連接子為酶可裂解連接子及/或二硫鍵連接子。
在又其他實施例中，本文所描述之抗體或抗原結合片段可融合於藥劑(諸如肽)以便於純化。舉例而言，此類肽可尤其為六組胺酸肽，諸如提供於pQE載體(QIAGEN,Inc.)中之標籤，其中許多為市售可得的。適用於純化之其他肽標籤包括(但不限於)紅血球凝集素(「HA」)標籤，其對應於源於流感紅血球凝集素蛋白之抗原決定基(Wilson等人，1984,Cell 37：767)，及「FLAG」標籤。
用於使藥劑(包括多肽)融合或結合於抗體之方法為熟知的，參見例如，Arnon等人，「Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy」，在Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等人(編)，第243-56頁(Alan R.Liss,Inc.1985)中；Hellstrom等人，「Antibodies For Drug Delivery」，在Controlled Drug Delivery(第2版),Robinson等人(編)，第623-53頁(Marcel Dekker,Inc.1987)中；Thorpe,「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy：A Review」，在Monoclonal Antibodies 84：Biological And Clinical Applications,Pinchera等人(編)，第475-506頁(1985)中；「Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy」，在Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin等人(編)，第303-16頁(Academic Press 1985)中；Thorpe等人，1982,Immunol.Rev.62：119-58；美國專利第5,336,603號、第5,622,929號、第5,359,046號、第5,349,053號、第5,447,851號、第5,723,125號、第5,783,181號、第5,908,626號、第5,844,095號及第5,112,946；EP 307,434；EP 367,166；EP 394,827；PCT公開案WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631及WO 99/04813；Ashkenazi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88：10535-10539,1991；Traunecker等人，Nature,331：84-86,1988；Zheng等人，J.Immunol.,154：5590-5600,1995；Vil等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：11337-11341,1992，其以全文引用之方式併入本文中。
本文所描述之抗體及抗原結合片段亦可附接於固體支撐物。此類固體支撐物可包括(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。此類附接可適用於例如標靶抗原之免疫分析或純化。
在某一態樣中，本文所描述之抗體或其抗原結合片段為細胞外藥物結合物(ECD)，其包含視情況藉由連接子連接於在細胞外側起作用之藥物的抗體(參見例如，PCT國際專利申請公開案第WO 2011/031870號)。舉例而言，在ECD結合標靶細胞之後，藥物將信號傳送至細胞中且不需要結合物之內化。
5.3 抗體產生
免疫特異性結合於MET(例如，人類MET之ECD)的本文所描述之抗 體或抗原結合片段可藉由此項技術中已知之任何方法產生，例如藉由化學合成或藉由重組表現技術。此類方法可採用分子生物學、微生物學、遺傳分析、重組DNA、有機化學、生物化學、PCR、寡核苷酸合成及修飾、核酸雜交及此項技術技能內之相關領域的習知技術。此等技術描述於例如本文所引用之參考文獻中，且充分解釋於文獻中。參見例如，Maniatis等人(1982)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(1989),Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook等人(2001)Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons(1987及每年更新)；Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons(1987及每年更新)Gait(編)(1984)Oligonucleotide Synthesis：A Practical Approach,IRL Press；Eckstein(編)(1991)Oligonucleotides and Analogues：A Practical Approach,IRL Press；Birren等人(編)(1999)Genome Analysis：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press。
單株抗體可例如使用此項技術中已知之多種技術來製備，包括使用融合瘤、重組及噬菌體呈現技術或其組合。舉例而言，單株抗體可使用融合瘤技術來產生，包括此項技術中已知且教示於例如Harlow等人，Antibodies：A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版1988)；Hammerling等人，在Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681(Elsevier,N.Y.,1981)中之彼等技術。如本 文所用之術語「單株抗體」不限於經由融合瘤技術產生之抗體。舉例而言，單株抗體可由經工程改造以表現本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗-MET抗體)或其片段(例如此類抗體之輕鏈及/或重鏈)的宿主細胞重組地產生。
此外，本文所描述之抗體或其抗原結合片段亦可使用此項技術中已知之各種噬菌體呈現方法來產生。在噬菌體呈現方法中，功能抗體域呈現於攜帶編碼其之聚核苷酸序列之噬菌體粒子的表面上。可用於製造本文所描述之抗體的噬菌體呈現方法之實例包括揭示於以下中之彼等方法：Brinkman等人，1995,J.Immunol.Methods 182：41-50；Ames等人，1995,J.Immunol.Methods 184：177-186；Kettleborough等人，1994,Eur.J.Immunol.24：952-958；Persic等人，1997,Gene 187：9-18；Burton等人，1994,Advances in Immunology 57：191-280；PCT申請案第PCT/GB91/O1 134號；國際公開案第WO 90/02809號、第WO 91/10737號、第WO 92/01047號、第WO 92/18619號、第WO 93/1 1236號、第WO 95/15982號、第WO 95/20401號及第WO97/13844號；以及美國專利第5,698,426號、第5,223,409號、第5,403,484號、第5,580,717號、第5,427,908號、第5,750,753號、第5,821,047號、第5,571,698號、第5,427,908號、第5,516,637號、第5,780,225號、第5,658,727號、第5,733,743號及第5,969,108號。
本文所描述之抗體可例如包括嵌合抗體。嵌合抗體為其中抗體之不同部分源於不同免疫球蛋白分子的分子。舉例而言，嵌合抗體可含有小鼠或大鼠單株抗體之可變區融合於人類抗體之恆定區。用於產生嵌合抗體之方法為此項技術中已知的。參見例如，Morrison,1985,Science 229：1202；Oi等人，1986,BioTechniques 4：214；Gillies等人，1989,J.Immunol.Methods 125：191-202；及美國專利第5,807,715號、第4,816,567號、第4,816,397號及第6,331,415號。
使用諸如本文所描述之彼等技術的技術產生的抗體或抗原結合片段可使用標準、熟知技術來加以分離。舉例而言，抗體或抗原結合片段可藉由習知免疫球蛋白純化程序(諸如蛋白A-瓊脂糖、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析)來適合地與例如培養基、腹水液、血清、細胞溶胞物、合成反應材料或其類似物分離。如本文所用，「經分離」或「經純化」之抗體大體上不含來自得到抗體之細胞或組織源的細胞材料或其他蛋白質，或當以化學方式合成時大體上不含化學前驅物或其他化學品。
本文所描述之抗體包括識別特定MET抗原(例如，MET之ECD)之抗體片段，且可由熟習此項技術者已知之任何技術產生。舉例而言，本文所描述之Fab及F(ab')2片段可藉由使用酶，諸如番木瓜蛋白酶(用於產生Fab片段)或胃蛋白酶(用於產生F(ab')2片段)對免疫球蛋白分子進行蛋白水解裂解來產生。Fab片段對應於抗體分子之兩個相同臂中之一者，且含有與重鏈之VH及CH1域配對的輕鏈。F(ab')2片段含有抗體分子中的在鉸鏈區中由二硫鍵連接之兩個抗原結合臂。或者，本文所描述之抗體片段可經由熟知重組表現技術常規地產生。參見例如，PCT公開案第WO 92/22324號；Mullinax等人，1992,BioTechniques 12(6)：864-869；Sawai等人，1995,AJRI 34：26-34；及Better等人，1988,Science 240：1041-1043。
本文所描述之抗體可例如包括人類化抗體，例如去免疫型或複合人類抗體。人類化抗體可包含人類恆定區序列。在某些實施例中，人類化抗體可選自任何類別之免疫球蛋白，包括IgM、IgG、IgD、IgA及IgE；及 任何同型，包括IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。在某些實施例中，人類化抗體可包含κ或λ輕鏈恆定序列。
人類化抗體可使用此項技術中已知之多種技術來產生，包括(但不限於)CDR移植(歐洲專利第EP 239,400號；國際公開案第WO 91/09967號；及美國專利第5,225,539號、第5,530,101號及第5,585,089號)、面飾(veneering)或表面再塑(resurfacing)(歐洲專利第EP 592,106號及第EP 519,596號；Padlan,1991,Molecular Immunology 28(4/5)：489-498；Studnicka等人，1994,Protein Engineering 7(6)：805-814；及Roguska等人，1994,PNAS 91：969-973)、鏈改組(美國專利第5,565,332號)及揭示於以下中之技術：例如，美國專利第6,407,213號；美國專利第5,766,886號；WO 9317105；Tan等人，J.Immunol.169：1119 25(2002)；Caldas等人，Protein Eng.13(5)：353-60(2000)；Morea等人，Methods 20(3)：267 79(2000)；Baca等人，J.Biol.Chem.272(16)：10678-84(1997)；Roguska等人，Protein Eng.9(10)：895 904(1996)；Couto等人，Cancer Res.55(23增刊)：5973s-5977s(1995)；Couto等人，Cancer Res.55(8)：1717-22(1995)；Sandhu JS,Gene 150(2)：409-10(1994)及Pedersen等人，J.Mol.Biol.235(3)：959-73(1994)。亦參見美國專利公開案第US 2005/0042664 A1號(2005年2月24日)，其中之每一者均以全文引用之方式併入本文中。
複合人類抗體可使用例如Composite Human AntibodyTM技術(Antitope Ltd.,Cambridge,United Kingdom)來產生。為產生複合人類抗體，以避免T細胞抗原決定基的方式由多個人類抗體可變區序列之片段設計可變區序列，藉此使所得抗體之免疫原性最小化。此類抗體可包含人類 恆定區序列，例如人類輕鏈及/或重鏈恆定區。
去免疫型抗體為其中已移除T細胞抗原決定基之抗體。已描述用於製造去免疫型抗體之方法。參見例如，Jones等人，Methods Mol Biol.2009；525：405-23,xiv及De Groot等人，Cell.Immunol.244：148-153(2006))。去免疫型抗體包含去除T細胞抗原決定基之可變區及人類恆定區。簡言之，對抗體之VH及VL進行選殖，且隨後藉由在T細胞增殖分析中測試源於該抗體VH及VL之重疊肽來鑑別T細胞抗原決定基。經由計算機模擬方法鑑別T細胞抗原決定基以鑑別結合於人類II類MHC之肽。在VH及VL中引入突變以消除與人類II類MHC之結合。經突變之VH及VL隨後用於產生去免疫型抗體。
本文所描述之抗體可例如為多特異性(例如雙特異性)抗體。已描述用於製造多特異性(例如雙特異性抗體)之方法，參見例如美國專利第7951917號、第7183076號、第8227577號、第5837242號、第5989830號、第5869620號、第6132992號及第8586713號。
單域抗體(例如缺乏輕鏈之抗體)可藉由此項技術中熟知之方法產生。參見Riechmann等人，1999,J.Immunol.231：25-38；Nuttall等人，2000,Curr.Pharm.Biotechnol.1(3)：253-263；Muylderman,2001,J.Biotechnol.74(4)：277302；美國專利第6,005,079號；及國際公開案第WO 94/04678號、第WO 94/25591號及第WO 01/44301號。
人類抗體可使用此項技術中已知之任何方法來產生。舉例而言，可使用熟知的不能表現功能內源性鼠類免疫球蛋白但可表現人類免疫球蛋白基因之轉殖基因小鼠。或者，舉例而言，可利用上文所描述之噬菌體呈現技術。此外，在一些實施例中，人類抗體可例如使用小鼠-人類融合瘤來 產生。舉例而言，可將用艾伯斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus；EBV)轉型之人類周邊血液淋巴球與小鼠骨髓瘤細胞融合以產生分泌人類單株抗體之小鼠-人類融合瘤，且可篩選此等小鼠-人類融合瘤以確定分泌免疫特異性結合於標靶抗原(例如，人類MET之ECD)之人類單株抗體的融合瘤。此類方法為此項技術中已知且描述的，參見例如，Shinmoto等人，Cytotechnology,2004,46：19-23；Naganawa等人，Human Antibodies,2005,14：27-31。
5.3.1 聚核苷酸、細胞及載體
在某些態樣中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼免疫特異性結合於MET抗原的本文所描述之抗體或其片段(例如，可變輕鏈區及/或可變重鏈區)的核苷酸序列；及載體，例如包含此類聚核苷酸以用於在宿主細胞(例如，大腸桿菌及哺乳動物細胞)中重組表現的載體。在某些態樣中，本文提供細胞(例如宿主細胞)。本文亦提供製造本文所描述之抗體及抗原結合片段的方法。
在某些態樣中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼本文所描述之抗體之輕鏈或重鏈的核苷酸序列。在某些實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼本文所描述之抗體之輕鏈及重鏈的核苷酸序列。聚核苷酸可包含以下核苷酸序列，其編碼包含本文所描述之抗體之VL FR及CDR(分別參見例如，表1、5及7以及表3)的輕鏈。聚核苷酸可包含以下核苷酸序列，其編碼包含本文所描述之抗體之VH FR及CDR(分別參見例如，表2、6及8以及表4)的重鏈。在具體實施例中，本文所描述之聚核苷酸編碼包含SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62之胺基酸序列的VL鏈區。在具體實施例中，本文所描述之聚核苷酸編碼包含 SEQ ID NO：63、64、65、66、67、68、69、70或71中之任一者之胺基酸序列的VH鏈區。
在特定實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼包含三個VL鏈CDR，例如含有抗體Ab235-Ab255中之任一者之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，參見表1、5及7)之抗-MET抗體的核苷酸序列。在具體實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含三個VH鏈CDR，例如含有抗體Ab235-Ab255中之任一者之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，參見表2、6及8)。在具體實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼包含三個VL鏈CDR，例如含有抗體Ab235-Ab255中之任一者之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3(例如，參見表1、5及7)及三個VH鏈CDR，例如含有抗體Ab235-Ab255中之任一者之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3(例如，參見表2、6及8)之抗-MET抗體的核苷酸序列。
在特定實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼包含VL鏈區，例如含有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，包含本文所描述之胺基酸序列(例如，參見表1、5及7或表3)之抗-MET抗體的核苷酸序列。在特定實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼包含VH鏈區，例如含有FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4，包含本文所描述之胺基酸序列(例如，參見表2、6及8或表4)之抗-MET抗體的核苷酸序列。
在某些實施例中，本文所描述之聚核苷酸包含以下核苷酸序列，其編碼包含有包含本文所描述之胺基酸之可變輕鏈(VL)區(例如，參見表9)的本文所提供之抗體，其中該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190。
在某些實施例中，本文所描述之聚核苷酸包含以下核苷酸序列，其編碼包含有包含本文所描述之胺基酸之可變重鏈(VH)區(例如，參見表10)的本文所提供之抗體，其中該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190。
在某些實施例中，聚核苷酸包含以下核苷酸序列，其編碼包含有包含一或多個具有本文所描述之胺基酸之VL FR(例如，參見表3)的VL鏈區的本文所提供之抗體，其中該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190。在某些實施例中，聚核苷酸包含以下核苷酸序列，其編碼包含有包含一或多個具有本文所描述之胺基酸之VH FR(例如，參見表4)的VH鏈區的本文所提供之抗體，其中該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190。
在具體實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼包含以下的本文所描述之抗體的核苷酸序列：本身為人類構架區之構架區(例如，VL域及VH域之構架區)，其中該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190。
在某一實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含如表11或16中所描述的分別編碼本文所描述之抗體(例如，Ab235-Ab255)之VH或VL的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190。
在某些實施例中，本文所提供之聚核苷酸可操作地連接於用於在宿 主細胞中表現此類聚核苷酸序列之啟動子。在某些實施例中，啟動子源於哺乳動物細胞之基因組(例如，金屬硫蛋白啟動子)或源於哺乳動物病毒(例如，腺病毒晚期啟動子、牛痘病毒7.5K啟動子)。在一個具體實施例中，編碼本文所描述之抗體之核苷酸序列的表現藉由組成性啟動子、誘導性啟動子或組織特異性啟動子調節。
在具體態樣中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼包含輕鏈及重鏈，例如單獨輕鏈及重鏈之抗體的核苷酸序列。關於輕鏈，在一個具體實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼κ輕鏈之核苷酸序列。在另一個具體實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼λ輕鏈之核苷酸序列。在又另一個具體實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼包含人類κ輕鏈或人類λ輕鏈的本文所描述之抗體的核苷酸序列。在一個特定實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼本文所描述之抗體的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190，其中該抗體包含輕鏈，且其中VL鏈區之胺基酸序列可包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62)，且其中該輕鏈之恆定區包含人類κ輕鏈恆定區之胺基酸序列。在另一個特定實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼本文所描述之抗體的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190，且該抗體包含輕鏈，其中VL鏈區之胺基酸序列可包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：52、53、54、55、56、57、58、59、60、61或62)，且其中該輕鏈之恆定區包含人類λ輕鏈恆定區之胺基酸序列。舉例而言，人類恆定區序列可為 美國專利第5,693,780號中所描述之彼等序列。
在一個特定實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼本文所描述之抗體的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190，其中該抗體包含重鏈，其中VH鏈區之胺基酸序列可包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：63、64、65、66、67、68、69、70或71)，且其中該重鏈之恆定區包含人類γ重鏈恆定區之胺基酸序列，例如人類γ1重鏈恆定區、人類γ2重鏈恆定區、人類γ3重鏈恆定區或人類γ4重鏈恆定區。在一個特定實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼本文所描述之抗體的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合於MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190，其中該抗體包含重鏈，其中VH鏈區之胺基酸序列可包含本文所描述之任何胺基酸序列(例如，SEQ ID NO：63、64、65、66、67、68、69、70或71)，且其中該重鏈之恆定區包含人類γ2重鏈恆定區之胺基酸序列，例如人類γ2a及/或2b重鏈恆定區。
在又另一個具體實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼本文所描述之抗體(或其抗原結合片段)的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190，其中該抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含人類IgG1(例如，同型a、z或f)或人類IgG4恆定區之胺基酸序列。
在又另一個具體實施例中，本文所提供之聚核苷酸包含編碼本文所描述之抗體(或其抗原結合片段)的核苷酸序列，該抗體免疫特異性結合 MET多肽，例如人類MET多肽，例如MET(例如，人類MET)之ECD，例如SEQ ID NO：190，其中該抗體包含有包含本文所描述之任何胺基酸序列的VL鏈區及VH鏈區，且其中恆定區包含人類IgG2(例如，人類IgG2a或人類IgG2b)恆定區之胺基酸序列。在一個具體實施例中，恆定區具有人類IgG2 α同型(例如，人類IgG2a)。在一個具體實施例中，恆定區具有人類IgG2 β同型(例如，人類IgG2b)。在一個具體實施例中，恆定區為人類IgG2a及人類IgG2b同型之混合物。
在一個具體實施例中，本文提供以下聚核苷酸，其包含編碼本文中所指定之抗-MET抗體或其抗原結合片段或結構域(參見例如表1-10，例如抗體Ab235-Ab255)的核苷酸序列。
本文亦提供以下編碼抗-MET抗體或其片段之聚核苷酸，其經最佳化，例如藉由密碼子/RNA最佳化、用異源信號序列置換及消除mRNA不穩定性元件來最佳化。藉由在mRNA中引入密碼子變化及/或消除抑制性區來產生經最佳化的編碼抗-MET抗體或其片段(例如，輕鏈、重鏈、VH域或VL域)之核酸以用於重組表現的方法可藉由相應地調試例如，美國專利第5,965,726號；第6,174,666號；第6,291,664號；第6,414,132號；及第6,794,498號中所描述之最佳化方法來進行。舉例而言，RNA內之潛在剪接位點及不穩定性元件(例如，富含A/T或A/U之元件)可在不改變由核酸序列編碼之胺基酸的情況下進行突變以提高用於重組表現之RNA的穩定性。改變利用遺傳密碼之簡併，例如對相同胺基酸使用替代性密碼子。在一些實施例中，可能需要改變一或多個密碼子以編碼保守性突變，例如，具有類似化學結構及特性及/或充當原始胺基酸之類似胺基酸。相對於由未經最佳化之聚核苷酸編碼之抗-MET抗體的表現，此類方法可使抗- MET抗體或其片段之表現增加至少1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍或超過100倍。
可藉由此項技術中已知之任何方法來產生本文所描述之聚核苷酸及測定該等聚核苷酸之核苷酸序列。編碼本文所描述之抗體，例如包含表1-10中所描述之序列且視情況包含恆定區序列(例如人類恆定區序列)之抗體的核苷酸序列可使用此項技術中熟知之方法來確定，例如，可鑑別已知編碼特定胺基酸之核苷酸密碼子且以產生編碼該抗體之核酸的方式組裝。編碼抗體之此類聚核苷酸可由以化學方式合成之寡核苷酸組裝(例如，如Kutmeier等人，1994,BioTechniques 17：242中所描述)，簡言之，其涉及合成含有編碼該抗體之序列之部分的重疊寡核苷酸，黏接及接合彼等寡核苷酸，及隨後藉由PCR使接合之寡核苷酸擴增。或者，編碼本文所描述之抗體的聚核苷酸可使用此項技術中熟知之方法(例如，PCR及其他分子選殖方法)來由一或多種核酸產生。
5.3.2 細胞及載體
在某些態樣中，本文提供表現(例如，重組地表現)特異性結合於人類MET之ECD的本文所描述之抗體(或其抗原結合片段)的細胞(例如，宿主細胞)，及相關聚核苷酸及表現載體。本文提供以下載體(例如，表現載體)，其包含有包含編碼抗-MET抗體或片段之核苷酸序列的聚核苷酸以用於在宿主細胞中(較佳在哺乳動物細胞中)重組表現。本文亦提供以下宿主細胞，其包含此類載體以用於重組地表現本文所描述之抗-MET抗體(例如，人類或人類化抗體)。在一個特定態樣中，本文提供用於產生本文所描述之抗體的方法，其包含由宿主細胞表現此類抗體。
重組表現特異性結合於人類MET之ECD的本文所描述之抗體(例如，全長抗體、抗體之重鏈及/或輕鏈、或本文所描述之單鏈抗體)涉及構築含有編碼該抗體之聚核苷酸的表現載體。一旦已獲得編碼本文所描述之抗體分子、抗體之重鏈及/或輕鏈、或其片段(例如，重鏈及/或輕鏈可變域)的聚核苷酸，即可藉由重組DNA技術使用此項技術中熟知之技術來產生用於產生該抗體分子之載體。因此，本文描述用於製備蛋白質之方法，其藉由表現含有編碼抗體或抗體片段(例如，輕鏈或重鏈)之核苷酸序列的聚核苷酸來進行。熟習此項技術者熟知之方法可用於構築含有抗體或抗體片段(例如，輕鏈或重鏈)編碼序列及適當轉錄及轉譯控制信號的表現載體。此等方法包括例如活體外重組DNA技術、合成技術及活體內遺傳重組。亦提供以下可複製載體，其包含編碼本文所描述之抗體分子、抗體之重鏈或輕鏈、抗體之重鏈或輕鏈可變域或其片段、或重鏈或輕鏈CDR的核苷酸序列，該核苷酸序列可操作地連接於啟動子。此類載體可例如包括編碼抗體分子之恆定區的核苷酸序列(參見例如，國際公開案第WO 86/05807號及第WO 89/01036號；及美國專利第5,122,464號)，且可將抗體之可變域選殖至此類載體中以用於表現完整重鏈、完整輕鏈或完整重鏈及輕鏈兩者。
可藉由習知技術將表現載體轉移至細胞(例如，宿主細胞)中，且可隨後藉由習知技術來培養所得細胞以產生本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其片段。因此，本文提供以下宿主細胞，其含有編碼本文所描述之抗體或其片段、或其重鏈或輕鏈或其片段、或本文所描述之單鏈抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)的聚核苷酸，該聚核苷酸可操作地連接於啟動子以用於在該宿主細胞中表現此類序列。在某些實施例中，如下文所詳述，為表 現雙鏈抗體，個別地編碼重鏈及輕鏈兩者之載體可在宿主細胞中共表現以用於表現完整免疫球蛋白分子。在某些實施例中，宿主細胞含有載體，該載體包含編碼本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之重鏈及輕鏈兩者或其片段的聚核苷酸。在具體實施例中，宿主細胞含有兩種不同載體，第一載體包含編碼本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之重鏈或重鏈可變區或其片段的聚核苷酸，且第二載體包含編碼本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之輕鏈或輕鏈可變區或其片段的聚核苷酸。在其他實施例中，第一宿主細胞包含第一載體，該第一載體包含編碼本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之重鏈或重鏈可變區或其片段的聚核苷酸，且第二宿主細胞包含第二載體，該第二載體包含編碼本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之輕鏈或輕鏈可變區的聚核苷酸。在具體實施例中，由第一細胞表現之重鏈/重鏈可變區與第二細胞之輕鏈/輕鏈可變區締合以形成本文所描述之抗-MET抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段。在某些實施例中，本文提供宿主細胞群體，其包含此類第一宿主細胞及此類第二宿主細胞。
在一個特定實施例中，本文提供包含第一載體及第二載體之載體群體，該第一載體包含編碼本文所描述之抗-MET抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之輕鏈/輕鏈可變區的聚核苷酸，該第二載體包含編碼本文所描述之抗-MET抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)之重鏈/重鏈可變區的聚核苷酸。
多種宿主-表現載體系統可用於表現本文所描述之抗體分子(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)(參見例如，美國專利第5,807,715號)。此類宿主-表現系統表示可產生且隨後純化所關注之編碼序列的媒劑，且亦表示可在經適當核苷酸編碼序列轉型或轉染時原位表現本文所描述之抗體分子的細胞。此等系統包括(但不限於)微生物，諸如經含有抗體編碼序列之重組噬菌體DNA、質體DNA或黏質體DNA表現載體轉型的細菌(例如，大腸桿菌及枯草桿菌)；經含有抗體編碼序列之重組酵母表現載體轉型的酵母(例如，畢赤酵母(Saccharomyces Pichia))；經含有抗體編碼序列之重組病毒表現載體(例如，桿狀病毒)感染的昆蟲細胞系統；經含有抗體編碼序列之重組病毒表現載體(例如，花椰菜嵌紋病毒，CaMV；菸草嵌紋病毒，TMV))感染或經含有抗體編碼序列之重組質體表現載體(例如，Ti質體)轉型的植物細胞系統(例如，綠藻，諸如萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii))；或具有含有源於哺乳動物細胞之基因組(例如，金屬硫蛋白啟動子)或源於哺乳動物病毒(例如，腺病毒晚期啟動子；牛痘病毒7.5K啟動子)之啟動子的重組表現構築體的哺乳動物細胞系統(例如，COS、CHO、BHK、MDCK、HEK 293、NS0、PER.C6、VERO、CRL7O3O、HsS78Bst、HeLa及NIH 3T3細胞)。在一個具體實施例中，用於表現本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段的細胞為CHO細胞，例如來自CHO GS SystemTM(Lonza)之CHO細胞。在一個具體實施例中，哺乳動物表現載體為pOptiVECTM或pcDNA3.3。在一個特定實施例中，尤其用於表現整個重組抗體分子的細菌細胞(諸如大腸桿菌)或真核細胞(例如，哺乳動物細胞)用於表現重組抗體分子。舉例而言，與載體(諸如來自人類細胞 巨大病毒之主要中間早期基因啟動子元件)結合之哺乳動物細胞(諸如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞)為抗體之有效表現系統(Foecking等人，1986,Gene 45：101；及Cockett等人，1990,Bio/Technology 8：2)。在某些實施例中，本文所描述之抗體由CHO細胞或NS0細胞產生。在一個具體實施例中，編碼免疫特異性結合於MET ECD之本文所描述之抗體的核苷酸序列的表現藉由組成性啟動子、誘導性啟動子或組織特異性啟動子調節。
在細菌系統中，多個表現載體可有利地視所表現之抗體分子的預期用途而選擇。舉例而言，當待產生大量此類蛋白質時，為產生抗體分子之醫藥組合物，可能需要導引高水準之容易純化的融合蛋白產物之表現的載體。此類載體包括(但不限於)大腸桿菌表現載體pUR278(Ruther等人，1983,EMBO 12：1791)，其中可將抗體編碼序列個別地接合至載體中與lac Z編碼區同框以產生融合蛋白；pIN載體(Inouye及Inouye,1985,Nucleic Acids Res.13：3101-3109；Van Heeke及Schuster,1989,J.Biol.Chem.24：5503-5509)；及其類似載體。舉例而言，pGEX載體亦可用於將外源多肽表現為具有麩胱甘肽5-轉移酶(GST)之融合蛋白。一般而言，此類融合蛋白為可溶的，且可藉由吸附及結合於麩胱甘肽瓊脂糖珠粒基質，繼而在游離麩胱甘肽存在下溶離而容易地自溶解細胞純化。pGEX載體經設計以包括凝血酶或Xa因子蛋白酶裂解位點，以使得可自GST部分釋放選殖標靶基因產物。
在昆蟲系統中，舉例而言，苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcNPV)可用作載體來表現外源基因。病毒生長於草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞中。可將抗體編碼序列個別地選殖至病毒之非必需區(例如多角體蛋白基因)中，且置放於AcNPV啟動子(例如多角體蛋白啟動子) 之控制下。
在哺乳動物宿主細胞中，可利用多種基於病毒之表現系統。在其中使用腺病毒作為表現載體的情況下，所關注之抗體編碼序列可接合至腺病毒轉錄/轉譯控制複合物，例如晚期啟動子及三聯前導序列。此嵌合基因可隨後藉由活體外或活體內重組而插入在腺病毒基因組中。在非必需區中插入病毒基因組(例如，區EL或E3)將產生可存活且能夠在感染之宿主中表現抗體分子的重組病毒(例如，參見Logan及Shenk,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8 1：355-359)。為高效轉譯所插入之抗體編碼序列亦可需要特定起始信號。此等信號包括ATG起始密碼子及相鄰序列。此外，起始密碼子必須與所要之編碼序列的閱讀框架同相，以確保完整插入物之轉譯。此等外源性轉譯控制信號及起始密碼子可為多種來源，天然及合成兩者。可藉由包括適當轉錄強化子元件、轉錄終止子等來提高表現效率(參見例如Bittner等人，1987,Methods in Enzymol.153：51-544)。
另外，可選擇調節插入序列之表現或以所需特定方式修飾及處理基因產物的宿主細胞品系。蛋白質產物之此類修飾(例如，糖基化)及處理(例如，裂解)對該蛋白質之功能可為至關重要的。不同宿主細胞具有蛋白質及基因產物之轉譯後處理及修飾的特徵及特定機制。可選擇適當細胞株或宿主系統以確保所表現之外源蛋白質的正確修飾及處理。為此目的，可使用具有恰當處理初級轉錄物、基因產物之糖基化及磷酸化的細胞機制之真核宿主細胞。此類哺乳動物宿主細胞包括(但不限於)CHO、VERO、BHK、Hela、COS、MDCK、HEK 293、NIH 3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT2O及T47D、NS0(不內源性產生任何免疫球蛋白鏈之鼠類骨髓瘤細胞株)、CRL7O3O及HsS78Bst細胞。在某些實施例中， 本文所描述之抗-MET抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)在哺乳動物細胞(諸如CHO細胞)中產生。
為長期高產率產生重組蛋白質，可產生穩定表現細胞。舉例而言，可對穩定表現本文所描述之抗-MET抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段進行工程改造。在具體實施例中，本文所提供之細胞穩定表現締合以形成本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段的輕鏈/輕鏈可變域及重鏈/重鏈可變域。
在某些態樣中，宿主細胞可用由適當表現控制元件(例如，啟動子、強化子、序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等)控制之DNA及可選標記物轉型，而非使用含有病毒複製起點之表現載體。在引入外源DNA/聚核苷酸後，可使經工程改造之細胞在豐富培養基(enriched media)中生長1-2天，且隨後交換至選擇性培養基中。重組質體中之可選標記物賦予選擇抗性，且允許細胞將質體穩定地整合至其染色體中且生長形成變異區(foci)，該變異區繼而可選殖及擴增至細胞株中。此方法可有利地用於對表現本文所描述之抗-MET抗體或其片段的細胞株進行工程改造。此類經工程改造之細胞株可特別適用於篩選及評估與抗體分子直接或間接相互作用之組合物。
可使用多種選擇系統，分別可在tk-、hgprt-或aprt-細胞中使用包括(但不限於)單純性疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，1977,Cell 11：223)、次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(Szybalska及Szybalski,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48：202)及腺嘌呤磷酸核糖轉移酶(Lowy等人，1980,Cell 22：8-17)基因。另外，抗代謝物抗性可用作對以下基因進行選擇基礎： dhfr，其賦予對甲胺喋呤之抗性(Wigler等人，1980,Natl.Acad.Sci.USA 77：357；O'Hare等人，1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：1527)；gpt，其對黴酚酸之抗性(Mulligan及Berg,1981,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：2072)；neo，其賦予對胺基醣苷G-418之抗性(Wu及Wu,1991,Biotherapy 3：87-95；Tolstoshev,1993,Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.32：573-596；Mulligan,1993,Science 260：926-932；及Morgan及Anderson,1993,Ann.Rev.Biochem.62：191-217；May,1993,TIB TECH 11(5)：155-2 15)；及hygro，其賦予對潮黴素之抗性(Santerre等人，1984,Gene 30：147)。重組DNA技術領域中通常已知之方法可常規地應用於選擇所要之重組純系，且此類方法描述於例如以下中：Ausubel等人(編),Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley & Sons,NY(1993)；Kriegler,Gene Transfer and Expression,A Laboratory Manual,Stockton Press,NY(1990)；及在Dracopoli等人(編),Current Protocols in Human Genetics,John Wiley & Sons,NY(1994)第12及13章中；Colberre-Garapin等人，1981,J.Mol.Biol.150：1，其以全文引用之方式併入本文中。
抗體分子之表現水準可藉由載體擴增來增加(綜述參見Bebbington及Hentschel,The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells在DNA cloning，第3卷(Academic Press,New York,1987)中)。當表現抗體之載體系統中的標記物可擴增時，存在於宿主細胞培養物中之抑制劑的水準增加將增加標記基因複本之數目。由於擴增區與抗體基因相關聯，抗體之產生亦將增加(Crouse等人，1983,Mol.Cell.Biol.3：257)。
宿主細胞可經兩種或超過兩種本文所描述之表現載體共轉染，第一載體編碼重鏈源性多肽且第二載體編碼輕鏈源性多肽。兩種載體可含有相同之可選標記物，其使得能夠等量表現重鏈及輕鏈多肽。宿主細胞可經不同量的兩種或超過兩種表現載體共轉染。舉例而言，宿主細胞可經以下任一比率的第一表現載體與第二表現載體轉染：1：1、1：2、1：3、1：4、1：5、1：6、1：7、1：8、1：9、1：10、1：12、1：15、1：20、1：25、1：30、1：35、1：40、1：45或1：50。
或者，可使用編碼且能夠表現重鏈及輕鏈多肽兩者之單個載體。在此等情形下，輕鏈應在重鏈之前置放以避免過量之有毒游離重鏈(Proudfoot,1986,Nature 322：52；及Kohler,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：2197-2199)。重鏈及輕鏈之編碼序列可包含cDNA或基因組DNA。表現載體可為單順反子或多順反子。多順反子核酸構築體可編碼2、3、4、5、6、7、8、9、10個或超過10個，或介於2-5、5-10或10-20個範圍內之基因/核苷酸序列。舉例而言，雙順反子核酸構築體可按以下次序包含啟動子、第一基因(例如，本文所描述之抗體的重鏈)及第二基因及(例如，本文所描述之抗體的輕鏈)。在此類表現載體中，兩種基因之轉錄均可由啟動子驅動，而來自第一基因之mRNA的轉譯可藉由帽依賴性掃描機制進行，且來自第二基因之mRNA的轉譯可藉由非帽依賴性機制(例如藉由IRES)來進行。
一旦已藉由重組表現而產生本文所描述之抗體分子，其可藉由此項技術中已知用於純化免疫球蛋白分子之任何方法來純化，例如藉由層析(例如，離子交換層析；親和層析，對用於蛋白A之特異性抗原尤其藉由親和層析；及篩分管柱層析)、離心、可溶性差異，或藉由用於蛋白質純化 之任何其他標準技術。此外，本文所描述之抗體可融合於本文所描述或此項技術中另外已知之異源多肽序列以便於純化。
在具體實施例中，本文所描述之抗體或抗原結合片段經分離或經純化。一般而言，經分離之抗體為大體上不含抗原特異性與經分離之抗體不同之其他抗體的抗體。舉例而言，在一個特定實施例中，本文所描述之抗體的製劑大體上不含細胞材料及/或化學前驅物。語言「大體上不含細胞材料」包括其中抗體與自其中分離或重組地產生該抗體之細胞的細胞組分分離的抗體製劑。因此，大體上不含細胞材料之抗體包括具有少於約30%、20%、10%、5%、2%、1%、0.5%或0.1%(以乾重計)的異源蛋白質(在本文中亦稱為「污染性蛋白質」)及/或抗體變異體(例如抗體之經不同轉譯後修飾之形式或抗體之其他不同型式(例如，抗體片段)的抗體製劑。當重組地產生抗體時，其亦一般大體上不含培養基，亦即，培養基占蛋白質製劑體積之少於約20%、10%、2%、1%、0.5%或0.1%。當藉由化學合成產生抗體時，其一般大體上不含化學前驅物或其他化學品，亦即，其與參與合成該蛋白質之化學前驅物或其他化學品分離。因此，此類抗體製劑具有少於約30%、20%、10%或5%(以乾重計)的除所關注抗體以外之化學前驅物或化合物。在一個具體實施例中，本文所描述之抗體經分離或經純化。
5.4 醫藥組合物及套組
本文提供組合物、醫藥組合物及套組，其包含一或多種本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗-MET抗體)或其抗原結合片段，或其結合物。在特定態樣中，本文所描述之組合物(例如，醫藥組合物)可用於活體外、活體內或離體用途。用途之非限制性 實例包括調節(例如，抑制或誘導/增強)MET活性之用途及控制或治療病症，例如癌症、免疫病症(例如，自體免疫病症或發炎)或血管病症的用途。在具體實施例中，本文提供一種醫藥組合物，其包含本文所描述之抗體(例如，人類化抗體)(或其抗原結合片段)及醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受」意謂聯邦或州政府之監管機構批准或列於美國藥典(U.S.Pharmacopeia)、歐洲藥典(European Pharmacopeia)或其他公認藥典中用於動物，去更尤其人類。
含有一或多種本文所提供之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段的調配物可藉由將具有所要之純度的該抗體與視情況選用的生理學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合來製備以用於儲存(Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA；Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版(2006)Lippincott Williams & Wilkins,Baltimore,MD)。此類調配物可例如呈例如凍乾調配物或水溶液形式。適合於投與本文所提供之抗體的醫藥載劑包括熟習此項技術者已知適合於特定投藥模式之任何此類載劑。之可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒性，且包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；及/或非離子型界面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
待用於活體內投藥之調配物可為無菌的。此可例如藉由經由例如無菌過濾膜過濾來容易地實現。
在具體態樣中，本文所提供之醫藥組合物在醫藥學上可接受之載劑 中含有治療有效量的本文所提供之抗體或抗原結合片段中之一或多者。此類醫藥組合物適用於預防、治療控制或改善本文所描述之病狀或病症或其一或多種症狀。
本文所提供之組合物可含有一或多種本文所提供之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段。在一個實施例中，提供以下組合物，其中本文所描述之抗體或抗原結合片段調配為適合之藥物製劑，諸如在無菌溶液或懸浮液中調配為溶液、懸浮液、粉末、持續釋放調配物或酏劑以用於非經腸投藥，或調配為經皮貼片製劑及乾粉吸入劑。
在一個實施例中，調配本文所提供之組合物以用於單劑量投藥。為調配組合物，將一定重量分數之化合物以有效濃度溶解、懸浮、分散或以其他方式混合在所選載體中，以使得所治療之病狀得到減輕、預防，或一或多種症狀得到改善。
在某些態樣中，本文所提供之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)以足以發揮治療學上適用之作用而對所治療之患者不存在或具有最少或可忽略之非所需副作用的有效量包括於醫藥學上可接受之載劑中。
抗-MET抗體在本文所提供之醫藥組合物中的濃度將視例如該抗體之物理化學特徵、給藥時程及投與量以及熟習此項技術者已知之其他因素而定。
以諸如以下之單位劑型提供本文所描述之醫藥組合物以用於向人類或動物(例如，哺乳動物)投與：含有適合量之化合物或其醫藥學上可接受之衍生物的無菌非經腸(例如，靜脈內)溶液或懸浮液。亦以諸如以下之單 位劑型提供本文所描述之醫藥組合物以用於向人類或動物投與：含有適合量之抗-MET抗體或其醫藥學上可接受之衍生物的錠劑、膠囊、丸劑、散劑、顆粒及口服或鼻用溶液或懸浮液，及油-水乳液。在一個實施例中，抗體以單位劑型或多重劑型形式調配及投與。如本文所用之單位劑型係指如此項技術中已知適合於人類或動物(例如，哺乳動物)個體且個別封裝的物理上分開之單元。各單位劑量含有與所需藥物載劑、媒劑或稀釋劑結合的預定量之抗-MET抗體，其足以產生所要之治療作用。單位劑型之實例包括安瓿及注射器及個別封裝之錠劑或膠囊。單位劑型可以其分數份或倍數份投與。多重劑型為複數個封裝於單一容器中的待以分離之單位劑型形式投與的相同單位劑型。多重劑型之實例包括小瓶、錠劑或膠囊瓶或瓶子。因此，在具體態樣中，多重劑型為未在封裝中分離的多個單位劑量。
在某些實施例中，一或多種本文所描述之抗-MET抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab256中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段呈液體醫藥調配物形式。液體的醫藥學上可投與之組合物可例如藉由將抗體及視情況選用之醫藥佐劑溶解、分散或以其他方式混合在載體(諸如水、鹽水、右旋糖水溶液、丙三醇、二醇及其類似物)中從而形成溶液或懸浮液來製備。在某些實施例中，待投與的本文所提供之醫藥組合物亦可含有少量無毒性輔助物質，諸如潤濕劑、乳化劑、增溶劑及pH緩衝劑及其類似物。
製備此類劑型之實際方法為熟習此項技術者已知或將顯而易見的；舉例而言參見例如，Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA；Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版(2006)Lippincott Williams & Wilkins,Baltimore,MD。
在一個實施例中，非經腸投與之特徵在於皮下、肌肉內或靜脈內注射，其亦涵蓋於本文中。可注射劑可呈習知形式，以液體溶液或懸浮液形式，以適用於在注射之前溶解或懸浮之固體形式或以乳液形式製備。可注射劑、溶液及乳液亦含有一或多種賦形劑。適合之賦形劑為例如水、鹽水、右旋糖、丙三醇或乙醇。其他投藥途徑可包括腸溶投藥、腦內投藥、經鼻投藥、動脈內投藥、心內投藥、骨內輸注、鞘內投藥及腹膜內投藥。
用於非經腸投藥之製劑包括可立即用於注射之無菌溶液、在臨用之前可立即與溶劑組合的無菌無水可溶產品(諸如凍乾粉末)(包括皮下錠劑)、可立即用於注射之無菌懸浮液、在臨用之前可立即與媒劑組合的無菌無水不可溶產品、以及無菌乳液。溶液可為水溶液或非水溶液。
若靜脈內投與，則適合之載劑包括生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)，及含有增稠劑及增溶劑(諸如葡萄糖、聚乙二醇及聚丙二醇及其混合物)之溶液。
用於非經腸製劑中的醫藥學上可接受之載劑包括水性媒劑、非水性媒劑、抗微生物劑、等張劑、緩衝劑、抗氧化劑、局部麻醉劑、懸浮劑及分散劑、乳化劑、鉗合劑或螯合劑及其他醫藥學上可接受之物質。
醫藥載劑亦包括作為與水可混溶之媒劑的乙醇、聚乙二醇及丙二醇，及用於pH調節之氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。
在某些實施例中，靜脈內或動脈內輸注含有本文所描述之抗-MET抗體或片段的無菌水溶液為有效投藥模式。另一個實施例為含有本文所描述之抗-MET抗體的無菌水性或油性溶液或懸浮液，其視需要注射以產生所要之藥理學作用。
在具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體可以微米尺寸化形式或 其他適合之形式懸浮。所得混合物之形式視多種因素而定，包括預定投藥模式及化合物於所選載劑或媒劑中之溶解度。
在其他實施例中，醫藥調配物為凍乾粉末，其可經復原以用於以溶液、乳液及其他混合物形式投藥。其亦可經復原且調配成固體或凝膠形式。
凍乾粉末可例如藉由將本文所提供之抗-MET抗體溶解於適合之溶劑中來製備。在一些實施例中，凍乾粉末為無菌的。適合之溶劑可含有改良粉末或由粉末製備之復原溶液的穩定性或其他藥理學組分的賦形劑。可使用之賦形劑包括(但不限於)右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他適合之試劑。適合之溶劑亦可含有緩衝劑，諸如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀，或熟習此項技術者已知之其他此類緩衝劑，在一個實施例中，其為約中性pH值。隨後無菌過濾溶液，繼而在熟習此項技術者已知之標準條件下凍乾，以提供調配物之實例。在一個實施例中，所得溶液將分配至小瓶中用於凍乾。凍乾粉末可儲存在適當條件下，諸如在約4℃至室溫下。
用注射用水復原此凍乾粉末得到用於非經腸投與之調配物。對於復原，將凍乾粉末添加至無菌水或其他適合之載體中。
在某些態樣中，本文所提供之抗-MET抗體可經調配以用於局部投與或表面施用，諸如用於表面施用至皮膚及黏膜，諸如眼睛中，調配為凝膠、乳膏及乳液形式；及用於施用至眼睛或用於腦池內或脊柱內施用。涵蓋表面投藥以用於經皮遞送以及向眼睛或黏膜投與，或用於吸入療法。亦可投與單獨或與其他醫藥學上可接受之賦形劑組合的活性化合物之鼻用溶液。
本文所提供之抗-MET抗體及其他組合物亦可調配為靶向待治療之個體的特定組織、器官或其他身體區域。許多此類靶向方法為熟習此項技術者熟知的。本文涵蓋所有此類靶向方法用於本發明之組合物中。靶向方法之非限制性實例參見例如，美國專利第6,316,652號、第6,274,552號、第6,271,359號、第6,253,872號、第6,139,865號、第6,131,570號、第6,120,751號、第6,071,495號、第6,060,082號、第6,048,736號、第6,039,975號、第6,004,534號、第5,985,307號、第5,972,366號、第5,900,252號、第5,840,674號、第5,759,542號及第5,709,874號。在一些實施例中，本文所描述之抗-MET抗體靶向(或以其他方式投與至)視覺器官、骨髓、胃腸道、肺、大腦或關節。在具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體能夠跨越血腦屏障。
本文提供一種醫藥封裝或套組，其包含一或多個填充有本文所描述之醫藥組合物成分中之一或多者，諸如一或多種本文所提供之抗-MET抗體的容器。視情況與此類容器相關聯的可為由管理醫藥或生物產品之製造、使用或銷售之政府機構所規定形式之注意事項，該注意事項反映由人類投藥之製造、使用或銷售機構之批准。
本文亦提供包含本文所描述之抗體或抗體片段中之一或多者的套組。在一個實施例中，套組在一或多個容器中包含本文所描述之抗體或抗體片段。在一個具體實施例中，本文所描述之套組含有大體上經分離之MET抗原(例如，人類MET之ECD)作為對照物。在另一個具體實施例中，本文所描述之套組進一步包含不與MET抗原反應之對照抗體。在另一個具體實施例中，本文所描述之套組含有一或多個用於偵測經修飾之抗體與MET抗原之結合的元件(例如，抗體可與可偵測受質結合，諸如螢光 化合物、酶受質、放射性化合物或發光化合物，或識別第一抗體之第二抗體可與可偵測受質結合)。在具體實施例中，本文所提供之套組可包括重組地產生或以化學方式合成之MET抗原。提供於套組中之MET抗原亦可附接於固體支撐物。在一個更具體實施例中，上文所描述之套組的偵測手段包括MET抗原所附接之固體支撐物。此類套組亦可包括未附接的經報導體標記之抗人類抗體或抗小鼠/大鼠抗體。在此實施例中，抗體與MET抗原之結合可藉由結合該經報導體標記之抗體來偵測。
5.5 用途及方法
在特定態樣中，本文提供用本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段調節MET活性的方法。在某些實施例中，抗-MET抗體為MET拮抗劑。
在具體實施例中，本文提供用本文所描述之抗-MET抗體(其為MET拮抗劑)來抑制(例如，部分地抑制)MET活性的方法。在某些實施例中，本文提供使用本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)(其為MET拮抗劑)來控制或治療病狀或病症的方法。在某些實施例中，本文提供使用本文所描述之抗-MET抗體(其為MET拮抗劑或抑制劑)來保護免患病狀或病症的方法。
在特定實施例中，本文提供用於在個體(例如，人類個體)中控制、治療、預防或保護免患癌症(例如，結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤)、癌轉移或血管生成的方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或抗 原結合片段，該抗體或抗原結合片段特異性地結合於人類MET之ECD。在某些實施例中，本文提供一種減輕、抑制或減少與癌症、癌轉移或血管生成相關聯之一或多種症狀之進程或嚴重性的方法。
在某些實施例中，用於本文所提供之方法中的抗-MET抗體或其抗原結合片段為包含例如，如表1、2或5-8中所闡述之抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體(例如，單株抗體，諸如人類化單株抗體)。在特定實施例中，抗-MET抗體抑制MET活性(例如，MET之磷酸化、MET信號傳導、抑制細胞增殖、抑制配位體結合於MET或抑制腫瘤生長)。在特定實施例中，MET活性為MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性。在特定實施例中，MET活性為配位體依賴性MET活性。在特定實施例中，MET活性為配位體依賴性及MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET活性。
如本文所用，「投與」或「投藥」係指向個體或患者(例如，人類)注射或以其他方式物理地遞送物質(例如，本文所提供之人類化抗-MET抗體或其抗原結合片段)的動作，諸如藉由經黏膜、表面、皮內、非經腸、靜脈內、皮下、肌肉內遞送及/或本文所描述或此項技術中已知之任何其他物理遞送方法。
如本文所用，術語「有效量」或「治療有效量」係指足以降低及/或改善既定病狀、病症或疾病(例如，癌症、癌轉移或血管生成)及/或其相關症狀之嚴重性及/或持續時間的療法(例如，本文所提供之抗體或醫藥組合物)之量。此等術語亦涵蓋減少、減緩或改善既定疾病之進展或進程，減少、減緩或改善既定疾病之復發、發展或發作，及/或改良或增強另一種療法(例如，除本文所提供之抗-MET抗體以外的療法)之預防或治療作用 所必要的量。在一些實施例中，如本文所用之「有效量」亦係指達成指定結果的本文所描述之抗體的量。
如本文所用，術語「組合」在投與其他療法的情形下係指使用超過一種療法。使用術語「組合」不限定投與療法之次序。療法可例如連續、依序、並行或伴隨投與。
如本文所用，術語「控制(manage/managing/management)」係指個體由療法(例如，預防劑或治療劑)得到之有益作用，其不引起與MET相關聯病狀之的治癒。在某些實施例中，向個體投與一或多種療法(例如，預防劑或治療劑，諸如本文所描述之抗體)以「控制」本文所描述之病狀或病症、其一或多種症狀，以便預防該病狀或病症之進程或惡化。
如本文所用，術語「阻礙(impede/impeding)」在本文所提供之病狀或病症(例如，自體免疫病症、免疫病症、癌症或炎症)的情形下係指由於投與本文所提供之療法或療法組合(例如，預防劑或治療劑之組合，諸如本文所描述之抗體)，總體或部分抑制(例如，小於100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%或5%)或阻斷本文所提供之病狀或病症(例如，癌症、癌轉移或血管生成)及/或其相關症狀的發展、復發、發作或擴散。
如本文所用，術語「副作用」涵蓋療法(例如，預防劑或治療劑)的不合需要及不良之作用。不合需要之作用未必不良。療法(例如，預防劑或治療劑)之不良作用可能為有害或不適或有風險的。副作用之實例包括腹瀉、咳嗽、胃腸炎、哮喘、噁心、嘔吐、厭食、腹部痙攣、發熱、疼痛、體重減輕、脫水、禿髮症、呼吸困難、失眠、頭暈、黏膜炎、神經及肌肉作用、疲乏、口乾及食慾不振、在投藥位點處皮疹或腫脹、流感樣症狀 (諸如發熱、發冷及疲乏)、消化道問題及過敏反應。患者經歷之其他非所要作用為此項技術中大量且已知的。許多描述於Physician's Desk Reference(第63版，2009)中。
如本文所用，術語「個體」及「患者」可互換地使用。如本文所用，個體為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如，牛、豬、馬、貓、犬、羊、兔、大鼠、小鼠等)或靈長類動物(例如，猴及人類)，例如人類。在一個實施例中，個體為經診斷患有本文所提供之病狀或病症(例如，癌症、癌轉移或血管生成)的哺乳動物，例如人類。在另一個實施例中，個體為具有發展出本文所提供之病狀或病症(例如，癌症、癌轉移或血管生成)之風險的哺乳動物，例如人類。在某些實施例中，個體(諸如癌症個體)具有HGF之過度表現。在特定實施例中，癌症之由HGF之過度表現表徵。在另一個特定實施例中，個體(諸如癌症個體)具有由HGF之過度表現表徵的腫瘤基質。在另一個實施例中，個體為人類。
在某些實施例中，MET在個體(例如人類個體)中進行擴增。在來自個體之樣品中鑑別MET擴增可藉由一般技術者已知之分析來進行，諸如定量反轉錄PCR、免疫墨點分析、DNA指紋識別、核型分析(例如藉由多色螢光原位雜交(mFISH))、比較性基因組雜交及基因表現特徵分析(profiling)。作為非限制性實例，腫瘤樣品之蛋白質表現可使用免疫組織化學分析量測存在於樣品中之MET蛋白質的量來表徵。在某些實施例中，個體中之MET擴增引起個體細胞中之非配位體依賴性MET信號傳導。在個體中鑑別非配位體依賴性MET信號傳導可藉由一般技術者已知之分析來進行，諸如定量反轉錄PCR或免疫墨點分析。舉例而言，可提取來自個體之原代細胞，且MET配位體(例如，HGF)存在及不存在下培養， 且MET下游信號傳導事件(諸如MAPK及/或AKT之磷酸化)可藉由例如ELISA或免疫墨點法來評定。在某些實施例中，個體包含表現MET突變體，例如組成性活性MET突變體之細胞(例如，腫瘤細胞)。在某些實施例中，個體表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)的MET。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些實施例中，個體表現在MET胺基酸殘基Thr1010處包含異白胺酸胺基酸取代之MET蛋白質。在某些實施例中，個體患有癌症，其中該個體中之癌細胞表現突變型MET，例如組成性活性突變型MET。在某些實施例中，個體患有癌症，其中該個體中之癌細胞表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個缺失的MET。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些實施例中，個體患有癌症，其中該個體中之癌細胞表現在MET胺基酸殘基Thr1010處包含異白胺酸胺基酸取代之MET蛋白質。在來自個體之樣品中鑑別突變或缺失可藉由一般技術者已知之分析來進行，諸如DNA萃取、互補DNA產生及cDNA定序。舉例而言，cDNA序列可用以藉由一般技術者已知之方法獲得轉譯產物。基因缺失及胺基酸取代可藉由例如將來自個體樣品之序列與野生型及/或共同序列相比較來鑑別。
在某些實施例中，MET在根據本文所提供之方法治療的個體中進行擴增。在來自個體之樣品中鑑別MET擴增藉由一般技術者已知之分析來進行，諸如定量反轉錄PCR或免疫墨點分析。在某些實施例中，個體表現具有一或多個胺基酸取代及/或缺失以使得該EGFR具有組成性活性的EGFR。在來自個體之樣品中鑑別突變或缺失藉由一般技術者已知之分析來進行，諸如DNA萃取、互補DNA產生及cDNA定序。舉例而言，cDNA序列用以藉由一般技術者已知之方法獲得轉譯產物。基因缺失及胺基酸取代藉由例如將來自個體樣品之序列與野生型及/或共同序列相比較來鑑別。
如本文所用，術語「療法(therapies/therapy)」可指可用於預防、治療、控制或改善病狀或病症或其症狀(例如，本文所提供之病狀或病症(例如，癌症、癌轉移或血管生成)或與其相關之一或多種症狀或病狀)的任何方案、方法、組合物、調配物及/或藥劑。在某些實施例中，術語「療法」係指適用於治療、控制、預防或改善病狀或病症或其一或多種症狀(例如，癌症、癌轉移或血管生成，或與其相關之一或多種症狀或病狀)的藥物療法、佐劑療法、放射、手術、生物療法、支持療法及/或其他療法。在某些實施例中，術語「療法」係指除本文所描述之抗-MET抗體或其醫藥組合物以外的療法。在具體實施例中，「其他療法(additional therapy/additional therapies)」係指除使用本文所描述之抗-MET抗體或其醫藥組合物之治療以外的療法。在一個具體實施例中，療法包括使用本文所描述之抗-MET抗體作為佐劑療法。舉例而言，使用本文所描述之抗-MET抗體與藥物療法、生物療法、手術及/或支持療法結合。
本文提供控制或治療病狀(例如，癌症、癌轉移或血管生成)之方法， 其藉由用本文所描述之抗-MET抗體(例如，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab240、Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254及Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)充當MET拮抗劑抑制MET之活性來進行。可用MET拮抗劑治療或控制之病狀的非限制性實例包括下文更詳細描述之癌症(例如，結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤，諸如葡萄膜黑素瘤)。
本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療癌症(例如，結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤，諸如葡萄膜黑素瘤)之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在特定實施例中，此類方法涉及抑制腫瘤生長、癌細胞增殖及癌細胞遷移。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療結腸直腸癌之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段， 該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在特定實施例中，此類方法涉及抑制腫瘤生長、癌細胞增殖及癌細胞遷移。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療胃癌之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在特定實施例中，此類方法涉及抑制腫瘤生長、癌細胞增殖及癌細胞遷移。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療肺癌之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制 或減少MET表現。在特定實施例中，此類方法涉及抑制腫瘤生長、癌細胞增殖及癌細胞遷移。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療由MET擴增之(例如，非配位體依賴性)MET信號傳導表徵之癌症(諸如由MET擴增表徵之癌症)的方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在特定實施例中，此類方法涉及抑制腫瘤生長、癌細胞增殖及癌細胞遷移。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療黑素瘤(例如，BRAF突變型黑素瘤，諸如葡萄膜黑素瘤)之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性 結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在特定實施例中，此類方法涉及抑制腫瘤生長、癌細胞增殖及癌細胞遷移。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
可在本文所提供之方法中加以控制、預防、保護免患或治療之癌症的非限制性實例包括結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌(例如，非小細胞肺癌)、黑素瘤(例如，葡萄膜黑素瘤)、胃癌(stomach cancer)、食道癌、腦癌、肝癌、腎癌、頭頸癌、甲狀腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰臟癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神經膠質瘤或淋巴癌。在某些實施例中，癌症表現或過度表現MET。在某些實施例中，癌症表現包含突變之MET。在某些實施例中，癌症表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個缺失的MET基因。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些實施例中，癌症表現在MET胺基酸殘基Thr1010處包含異白胺酸胺基酸取代之MET。在某些實施例中，癌症BRAF突變，例如，BRAF V600E或V600K。在某些實施例中，癌症為具有BRAF突變(例如，BRAF V600E或V600K)之黑素瘤。在某些實施例中，癌症表現或過度表現EGFR。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌 (例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在一個態樣中，本文提供一種在個體中控制、預防、保護免患或治療癌轉移(例如，與結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤相關聯之癌轉移)的方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
在一個特定實施例中，本文提供一種在個體中抑制或減少腫瘤生長或癌(例如，結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤)細胞增殖之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結 合片段特異性結合於人類MET之ECD，且抑制MET活性或抑制或減少MET表現。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
在一個具體實施例中，本文提供一種在個體中治療癌症(例如，結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤，諸如葡萄膜黑素瘤)之方法，其包含向有需要之個體投與(例如，並行或依序投與)(i)本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體；參見例如，表1、2、5、6、7或8)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD且抑制MET，及(ii)另一種抗癌劑。在某些實施例中，抗癌劑為化學治療劑(例如，微管分解阻斷劑、抗代謝物、拓撲異構酶抑制劑及DNA交聯劑或損傷劑)。在某些實施例中，抗癌劑為酪胺酸激酶抑制劑(例如，GLEEVEC®(甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate))或SUTENT®(SU11248或舒尼替尼(Sunitinib))。酪胺酸激酶抑制劑之其他非限制性實例包括AMG706(莫替沙尼(motesanib))、RAD00I、PKC412、吉非替尼(gefitinib)(IRESSATM)、埃羅替尼(erlotinib)(TARCEVA®)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR®)、帕佐泮尼(pazopanib)(VOTRIENTTM)、阿西替尼(axitinib)、伯舒替尼(bosutinib)、西地尼布(cediranib)(RECENTIN®)、SPRYCEL®(達沙替尼(dasatinib))、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®)、來他替尼(lestaurtinib)、來那替尼(neratinib)、尼羅替尼(nilotinib)(TASIGNA®)、 司馬沙尼(semaxanib)、妥賽蘭尼(toceranib)(PALLADIATM)、凡德他尼(vandetanib)(ZACTIMATM)及凡塔藍尼(vatalanib)。在某些實施例中，抗癌劑為EGFR抑制劑。在某些實施例中，EGFR抑制劑西妥昔單抗(cetuximab)、埃羅替尼、吉非替尼或AZD9291。在某些實施例中，抗癌劑為BRAF抑制劑。在某些實施例中，BRAF抑制劑為維羅非尼(vemurafenib)(ZELBORAF®)、達拉菲尼(dabrafenib)(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(encorafenib)(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某些實施例中，抗癌劑為MEK抑制劑。在某些實施例中，MEK抑制劑為司美替尼(selumetinib)(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(trametinib)(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(refametinib)(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(cobimetinib)(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(binimetinib)(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(pimasertib)(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些實施例中，抗癌劑為組蛋白脫乙醯基酶抑制劑(例如，伏立諾他(vorinostat)或辛二醯苯胺異羥肟酸(SAHA))。在某些實施例中，抗癌劑為抗生長因子受體抗體(例如，抗EGFR抗體、抗VEGFR抗體或抗KIT抗體)或抗生長因子抗體(例如，抗EGF抗體、抗VEGF抗體)。在某些實施例 中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
在一個具體實施例中，本文提供一種在有需要之個體中抑制血管生成的方法，其包含向有需要之個體投與(例如，並行或依序投與)(i)本文所描述之抗體(例如，抗體Ab221、Ab224、Ab225及Ab227-Ab234(例如Ab227-Ab230、Ab233及Ab234)中之任一者，或包含抗體Ab221、Ab224、Ab225及Ab227-Ab234(例如Ab227-Ab230、Ab233及Ab234)中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段特異性結合於人類MET之ECD且抑制MET，及(ii)抗血管生成劑，諸如及抗VEGF抗體。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2b之恆定區的胺基酸序列。在某些實施例中，抗體之恆定區包含人類IgG2a及人類IgG2b之混合物的恆定區的胺基酸序列。
在一個態樣中，本文提供一種使經診斷患有癌症之個體對EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)再敏感化的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)。在一個特定態樣中，使經診斷患有癌症之個體對EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)再敏感化的方法包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之 抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)及EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)。在具體態樣中，與抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)組合投與之EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)與個體針對其已具有抗性之EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)相同。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有EGFR相關癌症，例如表現EGFR之癌症或包含EGFR突變之癌症。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有具有EGFR表現或過度表現之癌症。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有具有經突變EGFR之癌症。在某一態樣中，個體已經診斷患有由EGFR表現表徵之癌症。在某一態樣中，個體已經診斷患有由(i)EGFR表現及(ii)EGFR基因表現或擴增或EGFR過度表現表徵的癌症。在某另一態樣中，本文所提供之方法包含量測EGFR之表現水準，例如EGFR擴增或蛋白質表現或過度表現。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測EGFR之表現水準。在某一態樣中，本文所提供之方法包含量測EGFR之表現水準及鑑別患有表現EGFR之癌症或疑似患有表現EGFR之癌症的個體。在一個特定態樣中，個體先前已經EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)治療。在某一態樣中，個體已獲得對用EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)治療的抗性。在一個特定實施例中，EGFR靶向療法為西妥昔單抗。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為吉非替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為埃羅替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為AZD9291。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為非小細胞 肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。在某些態樣中，相對於在投與本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)之前的腫瘤生長或腫瘤細胞增殖，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)再敏感化的方法達成腫瘤生長或腫瘤細胞增殖減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。用於表徵對療法之反應(諸如再敏感化)的方法的非限制性實例包括藉由ELISA或類似分析量測血清EGFR濃度，對所抽吸之胸膜液中癌細胞的存在進行細胞學檢查，及免疫組織化學分析。舉例而言，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)再敏感化的方法達成以下中之一或多者：(i)胸膜液中癌細胞減少，例如減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%；(ii)積聚之胸膜液的量減少；或(iii)如藉由ELISA或類似分析所測定，血清EGFR濃度減少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個特定態樣中，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對EGFR靶向療法(例如， 西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)再敏感化的方法達成以下中之一或多者持續至少約4週、8週、12週、16週、20週、24週、28週、32週、36週、40週、44週、48週、52週、60週、70週、80週、90週或100週：(i)胸膜液中癌細胞減少，例如減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%；(ii)積聚之胸膜液的量減少；或(iii)如藉由ELISA或類似分析所測定，血清EGFR濃度減少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個特定實施例中，EGFR靶向療法為西妥昔單抗。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為吉非替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為埃羅替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為AZD9291。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌。
在一個態樣中，本文提供一種在個體中使表現EGFR之腫瘤或腫瘤細胞對EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)再敏感化的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)。在一個特定實施例中，EGFR靶向療法為西妥昔單抗。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為吉非替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為埃羅替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為AZD9291。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施 例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在某些態樣中，本文所提供之方法(諸如控制或治療癌症之方法)進一步包含向個體投與治療有效量之EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)與本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)組合。在一個特定態樣中，與抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)組合投與之EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)與個體針對其已具有抗性之EGFR靶向療法相同。在一個態樣中，癌症表徵為表現EGFR。在某另一態樣中，本文所提供之方法包含量測EGFR之表現水準，例如EGFR擴增或EGFR蛋白表現。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測EGFR之表現水準。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測EGFR之表現水準及鑑別患有表現EGFR之癌症或疑似患有表現EGFR之癌症的個體。在一個特定態樣中，EGFR靶向療法為西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291。在某一態樣中，癌症為非小細胞肺癌。在另一態樣中，癌症為轉移性的。在某一態樣中，例如在用本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)治療之前，待由本文所描述之方法治療或控制的癌症已表徵為對用抗EGFR抗體(諸如西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)治療具有抗性。在一個特定態樣中，EGFR靶向療法(例如，西 妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)與抗體或其抗原結合片段並行投與。在一個具體態樣中，依序投與EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)及抗-MET抗體或其抗原結合片段。在一個態樣中，抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)在手術移除癌症腫瘤之後投與。在某一態樣中，EGFR靶向療法(例如，西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291)及抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)在手術移除癌症腫瘤之後投與。在某一態樣中，控制或治療癌症之方法進一步包含向個體投與西妥昔單抗、吉非替尼、埃羅替尼或AZD9291。在一個特定實施例中，EGFR靶向療法為西妥昔單抗。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為吉非替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為埃羅替尼。在另一個特定實施例中，EGFR靶向療法為AZD9291。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在一個態樣中，本文提供一種使經診斷患有癌症之個體對BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054, Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感化的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)。在一個特定態樣中，使經診斷患有癌症之個體對BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感化的方法包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)及BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))。在具體態樣中，與抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)組合投與之BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))與個體針對其已具有抗性之BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、 PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))相同。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有BRAF相關癌症，例如表現BRAF之癌症或包含BRAF突變之癌症。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有具有BRAF表現或過度表現之癌症。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有具有經突變BRAF之癌症。在某一態樣中，個體已經診斷患有由BRAF表現表徵之癌症。在某一態樣中，個體已經診斷患有由(i)BRAF表現及(ii)BRAF基因表現或擴增或BRAF過度表現表徵的癌症。在某另一態樣中，本文所提供之方法包含量測BRAF之表現水準，例如BRAF擴增或蛋白質表現或過度表現。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測BRAF之表現水準。在某一態樣中，本文所提供之方法包含量測BRAF之表現水準及鑑別患有表現BRAF之癌症或疑似患有表現BRAF之癌症的個體。在一個特定態樣中，個體先前已經BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))治療。在某一態樣中，個體已獲得對用BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))治療的抗性。在一個特定實施例中，BRAF靶向療法為維羅非尼(ZELBORAF®)。在另 一個特定實施例中，BRAF靶向療法為達拉菲尼(TAFINLAR®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為恩拉菲尼(LGX818，Novartis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-4720。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-3603(RO5212054，Roche/Genentech)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-8394(Daiichi Sankyo)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為CEP-32496(Ambit Biosciences)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為XL281(BMS-908662，Exelixis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為RAF265(CHIR-265，Novartis)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在某些態樣中，相對於在投與本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)之前的腫瘤生長或腫瘤細胞增殖，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感化的方法達成腫瘤生長或腫瘤細胞增殖減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。用於表徵對療法之反應(諸如再敏感化)的方法的非限制性實例包括藉由ELISA或類似分析量測血清BRAF濃度，對皮膚生物檢體中癌細胞的存在進行細胞學檢查，及免疫組織化學分析。舉例而言，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感化的方法達成以下中之一或多者：(i)皮膚生物檢體中癌細胞減少，例如減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%；(ii)積聚之皮膚生物檢體的量減少；或(iii)如藉由ELISA或類似分析所測定，血清BRAF濃度減少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個特定態樣中，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感化的方法達成以下中之一或多者持續至少約4週、8週、12週、16週、20週、24 週、28週、32週、36週、40週、44週、48週、52週、60週、70週、80週、90週或100週：(i)皮膚生物檢體中癌細胞減少，例如減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%；(ii)積聚之皮膚生物檢體的量減少；或(iii)如藉由ELISA或類似分析所測定，血清BRAF濃度減少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個特定實施例中，BRAF靶向療法為維羅非尼(ZELBORAF®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為達拉菲尼(TAFINLAR®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為恩拉菲尼(LGX818，Novartis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-4720。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-3603(RO5212054，Roche/Genentech)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-8394(Daiichi Sankyo)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為CEP-32496(Ambit Biosciences)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為XL281(BMS-908662，Exelixis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為RAF265(CHIR-265，Novartis)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼 例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在一個態樣中，本文提供一種在個體中使表現BRAF之腫瘤或腫瘤細胞對BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))再敏感化的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)。在一個特定實施例中，BRAF靶向療法為維羅非尼(ZELBORAF®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為達拉菲尼(TAFINLAR®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為恩拉菲尼(LGX818，Novartis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-4720。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-3603(RO5212054，Roche/Genentech)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-8394(Daiichi Sankyo)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為CEP-32496(Ambit Biosciences)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為XL281(BMS-908662，Exelixis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為RAF265(CHIR-265，Novartis)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或 多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在某些態樣中，本文所提供之方法(諸如控制或治療癌症之方法)進一步包含向個體投與治療有效量之BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))與本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)組合。在一個特定態樣中，與抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)組合投與之BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))與個體針對其已具有抗性之BRAF靶向療法相同。在一個態樣中，癌症表徵為表現BRAF。在某另一態樣中，本文所提供之方法包含量測BRAF之表現水準，例如BRAF擴增或BRAF蛋白質表現。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測BRAF之表現水準。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測BRAF之表現水準及鑑別患有表現BRAF之癌症或疑似患有表現BRAF之癌症的個體。在一個特定態樣中，BRAF 抑制劑為維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis)。在某一態樣中，癌症為黑素瘤。在另一態樣中，癌症為轉移性的。在某一態樣中，例如在用本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)治療之前，待由本文所描述之方法治療或控制的癌症已表徵為對用抗BRAF抗體(諸如維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))治療具有抗性。在一個特定態樣中，BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))與抗體或其抗原結合片段並行投與。在一個具體態樣中，依序投與BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))及抗-MET抗體或其抗原結合片段。在一個態樣中，抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)在手術移除癌 症腫瘤之後投與。在某一態樣中，BRAF靶向療法(例如，維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis))及抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)在手術移除癌症腫瘤之後投與。在某一態樣中，在某一態樣中，控制或治療癌症之方法進一步包含向個體投與維羅非尼(ZELBORAF®)、達拉菲尼(TAFINLAR®)、恩拉菲尼(LGX818，Novartis)、PLX-4720、PLX-3603(RO5212054,Roche/Genentech)、PLX-8394(Daiichi Sankyo)、CEP-32496(Ambit Biosciences)、XL281(BMS-908662,Exelixis)或RAF265(CHIR-265,Novartis)。在一個特定實施例中，BRAF靶向療法為維羅非尼(ZELBORAF®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為達拉菲尼(TAFINLAR®)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為恩拉菲尼(LGX818，Novartis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-4720。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-3603(RO5212054，Roche/Genentech)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為PLX-8394(Daiichi Sankyo)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為CEP-32496(Ambit Biosciences)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為XL281(BMS-908662，Exelixis)。在另一個特定實施例中，BRAF靶向療法為RAF265(CHIR-265，Novartis)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺 腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在一個態樣中，本文提供一種使經診斷患有癌症之個體對MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))再敏感化的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)。在一個特定態樣中，使經診斷患有癌症之個體對MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))再敏感化的方法包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)及MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))。在具體態樣中，與抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)組合投與之MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))與個體針對其已具有抗性之MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Riosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC- 0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))相同。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有MEK相關癌症，例如表現MEK之癌症或包含MEK突變之癌症。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有具有MEK表現或過度表現之癌症。在一個具體態樣中，個體已經診斷患有具有經突變MEK之癌症。在某一態樣中，個體已經診斷患有由MEK表現表徵之癌症。在某一態樣中，個體已經診斷患有由(i)MEK表現及(ii)MEK基因表現或擴增或MEK過度表現表徵的癌症。在某另一態樣中，本文所提供之方法包含量測MEK之表現水準，例如MEK擴增或蛋白質表現或過度表現。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測MEK之表現水準。在某一態樣中，本文所提供之方法包含量測MEK之表現水準及鑑別患有表現MEK之癌症或疑似患有表現MEK之癌症的個體。在一個特定態樣中，個體先前已經MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))治療。在某一態樣中，個體已獲得對用MEK靶向療法 (例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))治療的抗性。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(Wilex)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為瑞法美替尼(Ardea Biosciences)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為E-6201(Eisai)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MEK-162(Novartis)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為TAK-733(Takeda Phamaceuticals)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為畢尼替尼(Array BioPharma)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為PD-0325901(Pfizer)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MSC2015103(EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(WILEX)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施 例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，黑素瘤為葡萄膜黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在某些態樣中，相對於在投與本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)之前的腫瘤生長或腫瘤細胞增殖，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))再敏感化的方法達成腫瘤生長或腫瘤細胞增殖減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。用於表徵對療法之反應(諸如再敏感化)的方法的非限制性實例包括藉由ELISA或類似分析量測血清MEK濃度，對皮膚生檢中癌細胞 的存在進行細胞學檢查，及免疫組織化學分析。舉例而言，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))再敏感化的方法達成以下中之一或多者：(i)皮膚生物檢體中癌細胞減少，例如減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%；(ii)積聚之皮膚生物檢體的量減少；或(iii)如藉由ELISA或類似分析所測定，血清MEK濃度減少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個特定態樣中，本文所描述的用於使經診斷患有癌症之個體對MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))再 敏感化的方法達成以下中之一或多者持續至少約4週、8週、12週、16週、20週、24週、28週、32週、36週、40週、44週、48週、52週、60週、70週、80週、90週或100週：(i)皮膚生物檢體中癌細胞減少，例如減少至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%；(ii)積聚之皮膚生物檢體的量減少；或(iii)如藉由ELISA或類似分析所測定，血清MEK濃度減少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(Wilex)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為瑞法美替尼(Ardea Biosciences)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為E-6201(Eisai)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MEK-162(Novartis)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為TAK-733(Takeda Phamaceuticals)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為畢尼替尼(Array BioPharma)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為PD-0325901(Pfizer)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MSC2015103(EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(WILEX)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施 例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，黑素瘤為葡萄膜黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在一個態樣中，本文提供一種在個體中使表現MEK之腫瘤或腫瘤細胞對MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))再敏感化的方法，其包含向該個體投與治療有效量的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(Wilex)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)。在 一個特定實施例中，MEK靶向療法為瑞法美替尼(Ardea Biosciences)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為E-6201(Eisai)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MEK-162(Novartis)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為TAK-733(Takeda Phamaceuticals)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為畢尼替尼(Array BioPharma)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為PD-0325901(Pfizer)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MSC2015103(EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(WILEX)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，黑素瘤為葡萄膜黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
在某些態樣中，本文所提供之方法(諸如控制或治療癌症之方法)進一步包含向個體投與治療有效量之MEK靶向療法(例如，司美替尼 (AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))與本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)組合。在一個特定態樣中，與抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)組合投與之MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))與個體針對其已具有抗性之MEK靶向療法相同。在一個態樣中，癌症表徵為表現MEK。在某另一態樣中，本文所提供之方法包含量測MEK之表現水準，例如MEK擴增或MEK蛋白質表現。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測MEK之表現水準。在一個特定態樣中，本文所提供之方法包含量測MEK之表現水準及鑑別患有表現MEK之癌症或疑似患有表現MEK之癌症的個體。在一個特定態樣中，MEK靶向療法為司美替尼 (AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某一態樣中，癌症為黑素瘤。在另一態樣中，癌症為轉移性的。在某一態樣中，例如在用本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)治療之前，待由本文所描述之方法治療或控制的癌症已表徵為對用抗MEK抗體(諸如司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))治療具有抗性。在一個特定態樣中，MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、 皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))與抗體或其抗原結合片段並行投與。在一個具體態樣中，依序投與MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))及抗-MET抗體或其抗原結合片段。在一個態樣中，抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)在手術移除癌症腫瘤之後投與。在某一態樣中，MEK靶向療法(例如，司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals))及抗-MET抗體或其抗原結合片段(例如，Ab235-Ab255)在手術移除癌症腫瘤之後投與。在某一態樣中，在某一態樣中，控制或治療癌症之方法進一 步包含向個體投與司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)、WX-554(Wilex)、曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)、瑞法美替尼(Ardea Biosciences)、E-6201(Eisai)、MEK-162(Novartis)、考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)、TAK-733(Takeda Phamaceuticals)、畢尼替尼(Array BioPharma)、PD-0325901(Pfizer)、皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)、MSC2015103(EMD Serono)、WX-554(WILEX)或RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為司美替尼(AZD6244、ARRY-142866，AstraZeneca)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(Wilex)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為曲美替尼(MEKINIST®；GlaxoSmithKline)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為瑞法美替尼(Ardea Biosciences)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為E-6201(Eisai)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MEK-162(Novartis)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法考比替尼(GDC-0973；XL-518；Exelixis，Roche)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為TAK-733(Takeda Phamaceuticals)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為畢尼替尼(Array BioPharma)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為PD-0325901(Pfizer)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為皮馬瑟替(MSC1936369；EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為MSC2015103(EMD Serono)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為WX-554(WILEX)。在一個特定實施例中，MEK靶向療法為RO48987655(CH4987655；CIF/RG7167；Chugai Pharmaceuticals)。在某些實施例中，此類方法為控制方法。在某些實施 例中，此類方法為治療方法。在某些實施例中，癌症為黑素瘤。在某些實施例中，黑素瘤為葡萄膜黑素瘤。在某些實施例中，癌症為非小細胞肺癌(例如，肺腺癌)。在某些實施例中，癌症為腦神經膠質瘤。在某些實施例中，癌症為胃癌。在某些實施例中，癌症包含表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變(例如，缺失)之MET的癌細胞。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變提供HGF誘導之受體降解減少。在具體實施例中，在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中的一或多個突變使Tyr1003位點突變或將其移除。
本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段(其為用於本文所提供之方法中的MET拮抗劑)能夠抑制(例如，部分地抑制)或減少/降低MET表現及/或MET活性。MET之活性為此項技術中已知的。在具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體(其為MET拮抗劑)抑制(例如，部分地抑制)以下MET活性中之一或多者：MET受體(例如，MET之細胞質域，諸如MET之細胞質激酶域)的磷酸化(例如，自體磷酸化)、受體內化、受體降解、MET配位體(例如，HGF)與MET受體之結合、細胞遷移、細胞存活、MET受體均二聚及下游信號傳導路徑(例如，MAPK級聯、PI3K-Akt軸、STAT路徑及NF-κB路徑)。用於量測此等活性之方法為此項技術中已知的。
在具體實施例中，本文所描述之抗-MET抗體(其為MET拮抗劑)抑制(例如，部分地抑制)一或多種此類MET活性至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、97%、98%、99%或100%。
5.5.1 診斷用途
在一個態樣中，特異性結合於人類MET之ECD的本文所描述之抗體抗-MET及其抗原結合片段出於診斷目的可用以偵測、診斷或監測本文所描述之病狀(例如，涉及MET及/或異常MET信號傳導及/或異常MET表現之病狀)，諸如癌症(例如，結腸直腸癌、胃癌、肺癌或黑素瘤)。在具體實施例中，用於診斷目的的本文所描述之抗-MET抗體或其抗原結合片段經標記。本文所提供的出於診斷目的用以偵測、診斷或監測本文所描述之病狀的方法可為活體外方法、原位方法或離體方法。本文所提供的出於診斷目的用以偵測、診斷或監測本文所描述之病狀的方法可為活體內方法。
在某些實施例中，本文提供用於偵測本文所描述之病狀(諸如癌症)的方法，其包含：(a)使用一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段來分析個體樣品中MET之表現；及(b)將MET表現之水準與對照水準(例如，在正常組織樣品中之水準，例如來自不具有本文所描述之病狀的患者或來自病狀發作前之同一患者)相比較，其中所分析之MET表現水準與MET表現對照水準相比較的增加或減少指示本文所描述之病狀。
在某些實施例中，本文提供用於偵測表現MET(例如，過度表現MET)之癌症的方法，其包含：(a)使用一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段來分析個體樣品中MET之表現；及(b)將MET表現之水準與對照水準(例如，在正常樣品中之水準，例如來自未患有癌症之患者、患有不過度表現MET之癌症的患者或來自病狀發作前之同一患者)相比較。在具體態樣中，所分析之MET表現水準與MET表現 對照水準相比較的增加或減少指示表現MET之癌症。
在一個具體實施例中，本文提供一種在患者中診斷MET表現性癌症之方法，其中該方法包含以下步驟：(a)使來自患者之生物樣品與一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段接觸；(b)偵測該抗體或抗原結合片段與MET之結合以確定來自患者之生物樣品中的MET蛋白質水準；及(c)將該MET蛋白質水準與標準MET蛋白質水準相比較。
在一個具體實施例中，本文提供一種在於患者中治療MET表現性癌症期間監測MET蛋白質水準的方法，其中該方法包含以下步驟：(a)使來自患者之生物樣品與一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段接觸；(c)偵測該抗體或抗原結合片段與MET之結合以確定來自患者之生物樣品中的MET蛋白質水準；及(d)將該MET蛋白質水準與標準MET蛋白質水準相比較。
來自個體之任何樣品(例如，體液或組織樣品)均可用於本文所提供之診斷方法中。可用於本文所提供之診斷方法中的樣品之非限制性實例包括血清樣品、血漿樣品、組織樣品、尿液樣品、腫瘤樣品及糞便樣品。
在一個實施例中，本文描述用於在患者中治療癌症(例如非小細胞肺癌)之方法，其包含向患者投與治療有效量的一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任 一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段，其中該患者具有其特徵在於以下的腫瘤，來自該腫瘤之細胞：i)表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變或缺失的MET受體。在某些實施例中，來自腫瘤之細胞過度表現MET受體。
在某些實施例中，本文描述用於確定經診斷患有癌症(例如，非小細胞肺癌)之患者是否指示為很可能對用治療有效量的一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段治療有反應的方法，其包含量測來自患者之腫瘤細胞樣品中的MET受體之表現(例如，蛋白質水準)，且進一步包含確定腫瘤細胞是否表現在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變或缺失的MET受體；其中在人類MET基因之外顯子14(編碼例如Leu964-Asp1010)中包含一或多個突變或缺失的MET受體的表現指示經診斷患有該癌症之患者很可能對治療有反應。在某些實施例中，用於確定之該方法包含自來自患者之腫瘤獲得樣品的第一步驟。在某些實施例中，該方法包含向指示為很可能對治療有反應之患者投與治療有效量之一或多種本文所描述之抗體(例如，抗體Ab235-Ab255中之任一者，或包含抗體Ab235-Ab255中之任一者之CDR的抗體)或其抗原結合片段的額外步驟。
本文所描述之抗體可用於使用如本文所描述或如熟習此項技術者已知之經典免疫組織化學方法(例如，參見Jalkanen等人，1985,J.Cell.Biol.101：976-985；及Jalkanen等人，1987,J.Cell.Biol.105：3087-3096)來分析生物樣品中之MET水準。適用於偵測蛋白質基因表現的其他基於抗體之方法包括免疫分析，諸如酶聯免疫吸附分析(ELISA)及放射免 疫分析(RIA)。適合之抗體分析標記為此項技術中已知的，且包括酶標記，諸如葡萄糖氧化酶；放射性同位素，諸如碘(125I、121I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(121In)及鎝(99Tc)；發光標記，諸如魯米諾；及螢光標記，諸如螢光素及若丹明，及生物素。
在一個實施例中，對本文所描述之病狀(例如，涉及MET及/或異常MET信號傳導及/或異常MET表現之病狀，諸如癌症)的監測藉由在初始診斷之後重複診斷方法持續一段時間來進行。
經標記之分子的存在可使用此項技術中已知用於活體內掃描之方法來在個體中偵測。熟練的技術人員將能夠決定用於偵測特定標記之適當方法。可用於本發明之診斷方法中的方法及裝置包括(但不限於)計算機斷層攝影術(CT)、諸如正電子發射斷層攝影法(PET)的全身掃描、磁共振成像(MRI)及超音波掃描(sonography)。
6. 實例
此部分(亦即部分6)中之實例作為說明而非作為限制提供。
6.1 實例1：產生抗-MET抗體 6.1.1 材料及方法 6.1.1.1 產生抗-MET抗體
自經重組人類MET-ECD免疫接種之小鼠及大鼠且使用產生融合瘤純系之融合瘤技術以獲得特異性結合於人類MET之細胞外結構域的(ECD)鼠類單株抗體(諸如小鼠及大鼠單株抗體)。使用具有Fc標籤之重組人類MET-ECD(MET-ECD-Fc；Sinobiological(目錄號10692-H03H))或具有His標籤之人類MET-ECD(MET-ECD-His)用於免疫接種。以下為具有C端His標籤及信號肽(胺基酸殘基1-24)之人類MET ECD(hu-MET-ECD)的 胺基酸序列表示，其經加工且不以用於免疫接種之ECD成熟形式存在： (SEQ ID NO：195)
簡言之，用對應於hu-MET-ECD的MET免疫原(無信號肽之成熟形式)免疫接種Balb/c小鼠及韋斯大鼠(Wistar rat)。在免疫接種之前，在弗氏完全佐劑(Freund's Complete Adjuvant)中使hu-MET-ECD免疫原乳化。亦使免疫接種加強劑在弗氏不完全佐劑中乳化。
在免疫接種之後藉由ELISA測定抗體血清效價，且進行細胞融合以產生融合瘤細胞。對於細胞融合，自經免疫接種之小鼠及大鼠的脾臟獲得脾臟細胞。藉由使淋巴球與NS0骨髓瘤融合搭配物細胞融合來產生融合瘤細胞。隨後針對結合活性及拮抗活性，諸如對由HGF(一種MET配位體)誘導之MET磷酸化的抑制來篩選融合瘤細胞。
用IgG特異性二級抗體進行一級篩選以鑑別分泌IgG抗體之融合瘤純系。使所選樣品擴增以用於進一步篩選。
藉由ELISA針對與MET免疫原(亦即人類MET之ECD)之結合且藉由基於細胞之分析針對阻斷MET磷酸化來第二次篩選前次純系，其更詳細 地描述於以下部分中。亦針對阻斷MET磷酸化活性及促效活性篩選前次純系，其中選擇具有較高阻斷MET磷酸化活性及較低或無促效活性的純系。對於各篩選方法，對純系進行分級，且選擇最佳純系用於次選殖。
藉由ELISA測試次純系與hu-MET-ECD免疫原之結合，藉由基於細胞之分析測試其阻斷MET磷酸化，藉由基於細胞之分析測試其無或具有較低促效活性，藉由基於細胞之分析測試其細胞增殖抑制，且藉由基於細胞之分析測試其細胞離散抑制。自此等篩選程序，鑑別小鼠IgG1 κ同型抗體及具有κ鏈或λ鏈之大鼠IgG2a抗體。
藉由PCR方法獲得此等小鼠及大鼠抗體之輕鏈及重鏈可變區的序列。基於Kabat編號系統確定可變輕鏈區及可變重鏈區之序列以及CDR及構架區(FR)之序列。
產生人類化抗體，諸如去免疫型抗體，例如複合人類抗體。因此，使用Composite Human AntibodyTM technology(Antitope Ltd.,Cambridge,United Kingdom)基於自上文所描述之篩選方法獲得的大鼠/小鼠抗-MET抗體之VH及VL胺基酸序列設計其他抗-MET抗體(諸如複合人類抗體)以產生具有複合人類胺基酸序列之抗-MET抗體。選擇三個重鏈可變區序列(H1、H2及H3)及五個輕鏈可變區序列(L1、L2、L3、L4及L5)以用於基因合成、在哺乳動物細胞中表現及測試與人類MET-ECD之直接結合以及在阻斷肝細胞生長因子(HGF)誘導之MET磷酸化中的活性。
將編碼H(重鏈)及L(輕鏈)可變區胺基酸序列之核酸分子直接選殖至用於人類IgG1 VH鏈及人類Vκ鏈之表現載體中。藉由定序確認所有構築體。將編碼IgG1 VH(H1-H3)及Vκ(L1-L5)鏈之載體以不同組合轉染至NS0細胞中以產生抗體。培育經非線性化DNA暫時轉染之細胞四天，隨後 採集上清液，其直接用於分析或用於純化。使用線性化DNA確立表現抗體之細胞株的穩定轉染，且隨後進行藥物選擇。使用IgG1 ELISA測試來自各構築體之抗藥性群落的上清液的IgG效價，且基於上清液中高於背景(通常>0.1μg/ml)之IgG效價選擇最佳表現株，且在藥物選擇存在下經由24孔及6孔培養盤、T75及T175組織培養瓶擴增，其中在每一階段針對IgG表現進行篩選。藉由考馬斯藍染色之SDS-PAGE確認抗體表現。
基於此等方法，產生抗-MET抗體Ab235-Ab255。參見表9及10(分別為VL/VH胺基酸序列)及表11及12(分別為編碼VL/編碼VH之核酸序列)。
6.1.1.2 藉由螢光活化細胞分選(「FACS」)得到之結合親和力
根據製造商之說明書用Alexa 647(Invitrogen)標記抗體。用10mL含2mM EDTA之PBS自T175單元移出A549細胞(一種人類肺腺癌上皮細胞株)，且用5mL PBS沖洗燒瓶。將細胞以1,200RPM短暫離心3分鐘。將細胞再懸浮於預冷卻之FACS緩衝液中，且對細胞進行計數。隨後將細胞稀釋至1×106個細胞/毫升，且在FACS緩衝液中在冰上培育1小時。將100μL細胞轉移至U形底96孔培養盤之孔中，且以1,200rpm使細胞集結3分鐘，且棄去緩衝液。在FACS緩衝液中稀釋抗體(100nM初始濃度)。向細胞中添加50μL經稀釋之抗體，且將細胞在冰上培育4小時以使抗體結合達到平衡。以1,200rpm使細胞集結3分鐘，且棄去緩衝液。接著，用200μL FACS緩衝液洗滌細胞四次(在4℃下以1,200rpm離心3分鐘)。使細胞再懸浮於100μL FACS緩衝液中，且在Accuri-C6 FACS機器上流動通過。用GraphPad Prism軟體使用特異性結合程式繪製各點之平均螢光強度，且計算結合親和力。
6.1.1.3 物種特異性測定
根據製造商之說明書用Alexa 647(Invitrogen)標記抗體。用10mL含2mM EDTA之PBS自T175單元移出人類(A549)、猴(4MBr5)、犬(MDCK)及小鼠(MS1)細胞，且用5mL PBS沖洗燒瓶。將細胞以1,200RPM短暫離心3分鐘。將細胞再懸浮於預冷卻之FACS緩衝液中，且對細胞進行計數。隨後將細胞稀釋至1×106個細胞/毫升，且在FACS緩衝液中在冰上培育1小時。將100μL細胞轉移至U形底96孔培養盤之孔中，且以1,200rpm使細胞集結3分鐘，且棄去緩衝液。將經Alexa-647標記之抗體稀釋至最終濃度6nM。將50μL 6nM經Alexa-647標記之抗體在冰上培育4小時以使抗體結合達到平衡。以1,200rpm使細胞集結3分鐘，且棄去緩衝液。接著，用200μL FACS緩衝液洗滌細胞四次(在4℃下以1,200rpm離心3分鐘)。使細胞再懸浮於100μL FACS緩衝液中，且在Accuri-C6 FACS機器上流動通過。用GraphPad Prism軟體使用特異性結合程式繪製各點之平均螢光強度，且計算結合親和力。
6.1.1.4 MET抗體結合結構域定位
將5μg之人類cMET ECD、小鼠cMET ECD或人類/小鼠嵌合體cMET ECD稀釋至10mL硼酸鹽緩衝液中，向96孔培養盤之各孔中添加100μL，且將培養盤在4℃下培育隔夜。移除硼酸鹽緩衝液，且添加200μL阻斷緩衝液，且使其在室溫下培育一小時。藉由輕擊培養盤來將阻斷緩衝液移除至水槽中，且以100μL之體積向培養盤中添加抗體稀釋液或陽性或陰性對照物，且在室溫下培育一小時，且隨後用TBST洗滌三次。隨後將培養盤與每孔100μL之HRP結合抗體(在1%BSA TBST(0.05%Tween)中1：5000稀釋)一起在室溫下培育1小時。隨後用TBST洗滌 培養盤三次，且藉由在紙巾上輕拍培養盤來移除殘餘TBST。隨後如先前所描述量測發光。
6.1.1.5 進行ELISA分析以評定與經螢光標記之抗體的競爭
根據製造商之說明書用Alexa 647(Invitrogen)標記抗體。用10mL含2mM EDTA之PBS自T175單元移出A549細胞，且用5mL PBS沖洗燒瓶。將細胞以1,200RPM短暫離心3分鐘。將細胞再懸浮於預冷卻之FACS緩衝液中，且對細胞進行計數。隨後將細胞稀釋至1×106個細胞/毫升，且在FACS緩衝液中在冰上培育1小時。將100μL細胞轉移至U形底96孔培養盤之孔中，且以1,200rpm使細胞集結3分鐘，且棄去緩衝液。在FACS緩衝液中稀釋抗體(600nM初始濃度)，且將經Alexa-647標記之抗體稀釋至最終濃度6nM。向各孔中添加25μL經稀釋的6nM經Alexa-647標記之抗體及25μL不同濃度的未經標記之經稀釋之抗體，且將細胞在冰上培育4小時以使抗體結合達到平衡。以1,200rpm使細胞集結3分鐘，且棄去緩衝液。接著，用200μL FACS緩衝液洗滌細胞四次(在4℃下以1,200rpm離心3分鐘)。使細胞再懸浮於100μL FACS緩衝液中，且在Accuri-C6 FACS機器上流動通過。用GraphPad Prism軟體使用特異性結合程式繪製各點之平均螢光強度，且計算結合親和力。
6.1.1.6 進行ELISA分析以評定與抗體之競爭
藉由競爭ELISA分析抗-MET抗體與重組MET細胞外結構域(「MET-ECD」)之結合。將測試抗體之四倍稀釋系列(10μg/ml至0.0024μg/ml)與恆定濃度之參考抗體(例如，Ab237C)(0.016μg/ml，最終濃度)預混合，隨後在室溫下在預塗有MET-ECD-His之培養盤上培育1小時。用與HRP(Bethyl目錄號A110-236P)及TMB受質(Thermo Scientific目錄號34029)結 合之山羊抗大鼠IgG Fc偵測參考抗體之結合。用3M HCl使反應中止，在Dynex Technologies MRX TC II盤讀取器上在450nm處讀取吸收，且繪製結合曲線。結合曲線用於計算相對於參考抗體之IC50正規化的各測試抗體之IC50值。
6.1.1.7 進行FACS分析以評定與抗體之競爭
使用A549 NSCLC細胞(ATCC目錄號CCL-185)藉由競爭FACS分析來分析抗-MET抗體與細胞表面MET之結合。將測試抗體之四倍稀釋系列(10μg/ml至0.0097μg/ml)與恆定濃度之參考抗-MET抗體(例如，Ab237C抗體)(0.02μg/ml，最終濃度)在FACS緩衝液中預混合。每份抗體稀釋液添加總計3×105個A549 NSCLC細胞，且在冰上培育1小時。洗滌細胞且添加經PE標記之山羊抗大鼠IgG抗體(BioLegend目錄號405406)於FACS緩衝液中的1：100稀釋液，隨後在冰上培育1小時。洗滌細胞，將其再懸浮於300μl FACS緩衝液中，且使用Beckton Dickinson FACScalibur來分析參考抗-MET抗體(例如，Ab237C抗體)與表現表面MET之A549細胞的結合。針對抗體濃度繪製幾何平均螢光強度。相對於參考抗體之IC50計算測試抗體中之每一者的IC50。
6.1.1.8 ELISA磷酸化分析
以96孔培養盤每孔25,000個細胞之濃度接種A549細胞(一種肺癌細胞株)或U87MG細胞(一種神經膠質瘤細胞株)，且在標準條件(本文中，「標準條件」係指在5% CO2，37℃下培育細胞)下培育隔夜。在分析之前24小時時，用每孔100μL磷酸鹽緩衝鹽水(「PBS」)沖洗細胞。接著，在標準條件下在每孔100μL的包含青黴素/鏈黴素及L-麩醯胺之F12K饑餓培養基(Gibco)中使細胞饑餓隔夜。為測定IC50，自培養盤移除培養基，且將細 胞與在饑餓培養基中稀釋之抗體一起在標準條件下培育2小時。接著，將50μg/mL HGF在無血清培養基DMEM中以1：60稀釋，向各孔中添加5μL以得到80ng/mL之最終配位體濃度，且在標準條件下培育10分鐘。用冷卻之2×PBS洗滌細胞。接著，將細胞與每孔100μL之溶解緩衝液(50mM Tris(pH 7.4)、150mM NaCl、1mM EDTA、1% Triton X-100、蛋白酶抑制劑、1mM釩酸鈉)一起在冰上培育1小時。
為製備ELISA捕獲盤，在4℃下用每孔100μL的以1：2000稀釋於1×硼酸鹽緩衝液(Thermo Scientific)中之抗-MET抗體(Cell Signaling目錄號3148)塗佈捕獲盤隔夜。接著，移除塗佈抗體，且在室溫下用每孔200μL含5%牛血清白蛋白(「BSA」)之tris緩衝鹽水tween(「TBST」)阻斷該等盤1小時。移除阻斷緩衝液，且將全部溶胞物添加至ELISA盤中，且在室溫下培育2小時。隨後用TBST洗滌該等盤三次，且隨後與每孔100μL的以1：5000稀釋於1% BSA TBST(0.05% Tween)中之抗-1234/1235 MET XP抗體(Cell Signaling目錄號3077)一起在室溫下培育2小時。隨後用TBST洗滌該等盤三次，且隨後與每孔100μL的以1：5000稀釋於1% BSA TBST(0.05% Tween)中之抗兔-HRP抗體(Invitrogen目錄號656120)一起在室溫下培育1小時。隨後用TBST洗滌該等盤三次，且在紙巾上輕拍以移除所有洗滌緩衝液殘餘物。最後，1：1混合SuperSignal® West Pico試劑(Thermoscientific)，且向各孔中添加100μL。在盤讀取器上用發光輝光方案(Luminescence Glow protocol)讀取發光。
6.1.1.9 Akt及Mapk磷酸化分析
將A549細胞僅與HGF或僅與指定抗體一起培育24小時。由在10% SDS-PAGE凝膠上分離之總蛋白質產生西方墨點圖。將經解析之蛋白質轉 移至硝化纖維素(Bio-Rad)上，用5%脫脂牛奶在25℃下阻斷1小時，且隨後與指定抗體一起在4℃下培育隔夜。在5%脫脂牛奶中以1μg/mL之濃度使用抗pAkt抗體、抗pMAPK抗體(分別為Cell Signaling目錄號9271及Cell Signaling目錄號4370)及抗-1234/1235 MET XP抗體(Cell Signaling目錄號3077)。在25℃下以1：5000稀釋度使用二級小鼠及兔抗體(GE Healthcare)持續1小時。如所引導，使用SuperSignal® West Picto化學發光HRP受質(Thermo Scientific目錄號34078)。
6.1.1.10 受體相互作用分析
將His標記之MET細胞外結構域在PBS中稀釋至2μg/mL，且在室溫下向96孔白色高結合培養盤之各孔中添加100μL持續隔夜。隨後用TBST及300μL阻斷緩衝液(1% BSA/TBS)洗滌培養盤三次，且在室溫下培育一小時。在培育之後，移除阻斷緩衝液。為製備阻斷緩衝液中之2×抗體溶液，對全部步驟，藉由將100μL抗體與200μL饑餓培養基組合來以1：3稀釋200nM抗體。類似地，在阻斷緩衝液中製備2×經生物素標記之HGF稀釋液得到0.3nM之最終濃度。混合50μL 2×抗體溶液及50μL 2×經生物素標記之HGF溶液，且將100μL混合物添加至各孔中。將細胞在室溫下培育兩小時。隨後用TBST洗滌培養盤三次。接著，向各孔中添加100μL抗生蛋白鏈菌素-HRP於阻斷溶液中之1：2000稀釋液，且在室溫下培育一小時。隨後用TBST洗滌培養盤三次。最後，1：1混合SuperSignal® West Pico試劑，且向各孔中添加100μL。在盤讀取器上根據發光輝光方案量測發光。
6.1.1.11 抗體誘導之受體降解分析
對於西方墨點分析，以每孔10,000或20,000個細胞將U87-MG(一種 神經膠母細胞瘤細胞株)或A549細胞接種在24孔培養盤中之完全培養基(具有5%胎牛血清、5%青黴素鏈黴素的杜爾貝科氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's modified eagle medium))中，且在標準條件下培養24小時。用PBS沖洗A549細胞，且在標準條件下用F12K饑餓培養基使其饑餓隔夜。用PBS沖洗U87MG細胞，且在標準條件下用MEM使其饑餓隔夜。隨後用最終濃度為1nM之指定抗體或用1nM HGF處理細胞24小時。接著，用冷PBS洗滌細胞兩次，且在每孔250μl溶解緩衝液中採集。接著，藉由SDS-PAGE分析等量之細胞溶胞物，且將其轉移至硝化纖維素膜上。在室溫下用震盪使墨點在TBS+0.1% Tween+3% BSA中阻斷2小時。隨後用TBS+0.1% Tween洗滌墨點3次，且將其與cMET抗體(Cell Signaling)之1：500稀釋液及兔抗微管蛋白(Cell Signaling)之1：2000稀釋液一起在4℃下震盪培育隔夜。接著，用TBS+0.1% Tween洗滌墨點三次，且隨後將其與1：2500抗小鼠HRP二級抗體及1：5000抗兔HRP二級抗體(Invitrogen)一起在室溫下震盪培育2小時。最後，用TBS+0.1% Tween洗滌墨點三次，且用TBS洗滌一次，使用Thermo的SuperSignal® West Pico受質(1：1混合物)使其顯影，且在Bio-Rad影像儀上攝影。
對於ELISA分析，以每孔25,000個細胞將A549細胞接種在96孔培養盤中，且在標準條件下培養隔夜。在標準條件下使細胞血清饑餓隔夜。隨後用1nM HGF或1nM測試抗體處理細胞24小時。在培育之後，用冷PBS洗滌細胞，且在100μL溶解緩衝液中使其溶解。為製備ELISA捕獲盤，在4℃下用每孔100μL的以1：2000稀釋於1×硼酸鹽緩衝液中之抗c-MET抗體塗佈捕獲盤隔夜。使溶胞物負載至該盤上，且使其在室溫下結合2小時。隨後用TBST洗滌該等盤三次，且隨後與每孔100μL的以1：2000稀釋於 TBST 1% BSA中之經生物素標記之抗-cMET抗體(R&D Systems目錄號BAF358；0.2mg/mL)一起在室溫下培育2小時。隨後用TBST洗滌該等盤三次，且在紙巾上輕拍以移除所有洗滌緩衝液殘餘物。最後，1：1混合SuperSignal® West Pico試劑，且向各孔中添加100μL。在盤讀取器上根據發光輝光方案量測發光。
對於西方墨點分析，將A549細胞(例如，7×106個)接種在15cm培養皿中之完全培養基中，且培養24小時。用PBS沖洗細胞，且使其饑餓隔夜，隨後用最終濃度為1nM之指定抗體或1nM HGF處理15分鐘。用冷PBS洗滌細胞兩次，藉由刮擦收集，且離心(例如，在4℃微觀離心機中1200RPM)；且使集結粒再懸浮於300μl溶解緩衝液中。隨後，用5μl抗-cMET抗體(例如，Cell Signaling，目錄號8198)使等量之細胞溶胞物免疫沈澱，且藉由SDS-PAGE進行電泳，且將其轉移至硝化纖維素膜上。在室溫下用震盪使墨點在TBS+0.1% Tween+3% BSA中阻斷2小時，用TBS+0.1% Tween洗滌一次，且隨後與抗泛素抗體(Cell Signaling，目錄號3936)於TBS+0.1% Tween+3% BSA中之1：1000稀釋液一起培育隔夜。用TBS+0.1% Tween洗滌墨點三次，且隨後將其與1：2500抗小鼠HRP二級抗體一起在室溫下震盪培育1小時。隨後用TBS+0.1% Tween洗滌墨點三次，且用TBS洗滌一次，使用Thermo的SuperSignal® West Pico受質(1：1混合物)使其顯影，且在Bio-Rad影像儀上攝影。
6.1.1.12 MET降解之活體內分析
在第0天及第3天用PBS(n=3)、對照嵌合IgG1抗KLH抗體(3mg/kg；n=3)或用Ab237C(3mg/kg；n=3)處理U87MG皮下異種移植腫瘤小鼠模型。在第4天殺死小鼠，且製備新鮮冷凍石蠟包埋(FFPE)腫瘤。製 備5μm切片，脫石蠟，且如下復水：(1)在Histoclear(Electron Microscopy Services，目錄號64110-04)中洗滌三次，每次三分鐘；(2)在100%乙醇中洗滌兩次，每次三分鐘；在95%乙醇中洗滌兩次，每次三分鐘；在70%乙醇中洗滌一次，持續三分鐘；及用蒸餾水沖洗。對於抗原修復，在蔬菜蒸鍋中在檸檬酸鹽緩衝液中處理載玻片三十五分鐘，使其冷卻至室溫，且用去離子水沖洗。用3%過氧化氫使內源性過氧化物淬滅15分鐘，且用蒸餾水沖洗。對於免疫組織化學，在室溫下用2.5%馬血清(Vector Labs Kits，ImmPRESS抗兔MP-7401)使載玻片阻斷30分鐘。震盪除去過量馬血清。隨後將載玻片與含初級抗體之3% BSA/PBS一起在潮濕腔室中在4℃下培育隔夜。初級抗體包括：Cell Signalling(D1C2)#8198 1：300，50μg/mL，兔。Ig對照抗體購自Vector Labs(兔IgG+I-1000，5mg/mL)。稀釋IgG對照物以匹配0.167μg/mL之初級抗體濃度。用含0.1% tween 20之PBS(PBST)沖洗載玻片，將其轉移至載玻片架上，且浸沒在PBS/0.1% tween 20中持續1小時，其中更換PBST兩次。隨後將載玻片與二級抗體一起培育：向載玻片上添加ImmPRESS二級試劑(兔HRP，Vector Labs MP-7401)，且將載玻片放回潮濕腔室持續一小時。隨後沖洗載玻片，且隨後將其轉移至架上，且置放於PBST中持續1.5分鐘，其中更換PBST三次。隨後震盪除去過量PBST。對顯影，向載玻片上添加每載玻片0.2mL IMMPACT DAB受質(Vector Labs SK-4105)以及每1mL緩衝液1滴色素原持續10分鐘，繼而用蒸餾水沖洗。用蘇木精(每載玻片幾滴)使原子核染色，且隨後在酸化水(2%冰乙酸)中沖洗。隨後用水沖洗載玻片，且向載玻片上添加三滴封固培養基水溶液(DAKO)，且用蓋玻片覆蓋載玻片。用Nikon Eclipse顯微鏡在20×及40×下使載玻片成像。
6.1.2 結果 6.1.2.1 產生抗-MET抗體
*大鼠IgG2與小鼠IgG1及人類IgG1具有高序列同源性。
6.1.2.2 抗-MET抗體結合於MET之細胞外結構域
測定推定抗-MET抗體結合MET之能力。如部分6.1.1.7中所描述而進行之FACS分析揭露，抗-MET抗體有效結合於細胞表面表現之MET(表14)。此外，使用重組MET-ECD之ELISA分析展現，所產生之抗-MET抗體特異性地有效結合於MET-ECD(表14)。此外，抗-MET抗體不能結合於包含鼠類SEMA/PSI結構域及人類Ig結構域之嵌合融合蛋白。鑒於抗-MET抗體結合人類MET而不結合鼠類MET，故此等資料指示抗-MET抗體結合於MET之SEMA/PSI結構域。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體有效結合於人類MET且能夠特異性結合ECD。
6.1.2.3 抗-MET抗體之物種特異性
如部分6.1.1.3中所描述來評估抗-MET抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之物種特異性。簡言之，將人類(A549細胞)、猴(4MBr5細胞)、犬(MDCK細胞)或小鼠(MS1細胞)細胞與抗-MET抗體一起 培育，且藉由FACS評定抗體與細胞表面表現之MET的結合。所測試之五種抗體(亦即Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)中之每一者均能夠特異性結合於人類及猴細胞兩者，而其不展現特異性結合犬或小鼠細胞之能力。
6.1.2.4 抗-MET抗體之抗原決定基結合
如部分6.1.1.7中所描述來進行競爭研究，以確定某些抗-MET抗體是否共用相同或類似抗原決定基。簡言之，在經滴定的未經標記之抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239存在下，利用FACS來測定經Alexa-647標記之Ab235結合細胞表面表現之MET的能力。與結合MET之IgG結構域的對照抗-MET抗體(Ab240)一起培育不抑制經標記之Ab235的結合。相比之下，與未經標記之抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239一起培育以濃度依賴性方式成功地抑制經標記之Ab235與細胞表面表現之MET的結合。此外，Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50(實現50%結合抑制之抗體濃度)分別計算為大致3nM、1nM、0.5nM、1nM及0.8nM。此等結果展現，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239靶向人類MET-ECD中之類似抗原決定基。
亦如部分6.1.1.7中所描述來進行FAC競爭研究，以研究抗-MET抗體Ab241-Ab255與包含人類IgG1之Ab237嵌合抗體(Ab237C)相比較的結合特性。FACS競爭研究測定在經滴定之Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255抗-MET抗體存在下，經標記之Ab237C(人類IgG1同型)結合於細胞表面表現之MET的能力。與Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、 Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中之任一者一起培育成功地抑制經標記之Ab237C與細胞表面表現之MET的結合。基於Ab237C之IC50值，Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255之相對IC50值分別計算為大致1.22、1.03、1.07、0.93、0.86、1.15、1.01、1.17、0.70、0.86、0.99、1.06、0.91、0.78及0.72；該相對IC50值藉由除以Ab237C之IC50值來計算，舉例而言，Ab237C之相對IC50值為1nM。所測試之抗-MET抗體均展現，與MET之結合在Ab237C與MET之結合的1.2倍內，且一些抗體展示相對IC50小於1，指示比Ab237C強之結合親和力。此等資料展現所測試之抗-MET抗體結合於細胞表面表現之原生MET，且尤其結合於人類MET-ECD之相同或類似抗原決定基的能力。
如部分6.1.1.6中所描述來進行ELISA分析，以確定抗體與MET-ECD之結合以進一步證實來自FACS結合競爭研究之資料。測試在經滴定之Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255抗-MET抗體存在下，經標記之Ab237C與固定化在ELISA盤上之MET-ECD的結合。與Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255中之任一者一起培育以濃度依賴性方式成功地抑制經標記之Ab237C與MET-ECD的結合。此外，相對於標準化為1nM的Ab237C之IC50，Ab241、Ab242、Ab243、Ab244、Ab245、Ab246、Ab247、Ab248、Ab249、Ab250、Ab251、Ab252、Ab253、Ab254或Ab255之IC50分別計算為大致0.97、0.82、0.92、1.07、1.09、0.81、0.82、1.04、1.00、1.13、0.98、0.99、 0.94、0.80及0.90。所測試之抗-MET抗體均展現，相對IC50在Ab237C之1.15倍內，且一些抗體展示相對IC50小於1，指示比Ab237C強之結合親和力。與FACS結合競爭資料相符之此等資料展現，所測試之抗-MET抗體特異性地結合於經純化之MET的細胞外結構域，且特異性地結合於MET-ECD之相同或類似抗原決定基。
6.1.2.5 抗-MET抗體阻斷MET活化
HGF在結合於MET後誘導激酶活性，因此觸發MET酪胺酸1234及酪胺酸1235之轉磷酸化。為評定抗-MET抗體阻斷MET活性之能力，如部分6.1.1.8中所描述來進行配位體誘導之MET磷酸化的研究。簡言之，將A549或U87MG細胞與抗-MET抗體一起培育，且藉由ELISA來測定MET Tyr1234及Tyr1235磷酸化之水準。抗-MET抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab237C、Ab244、Ab245、Ab249、Ab250、Ab254及Ab255能夠阻斷Tyr1234及Tyr1235處的HGF誘導之MET磷酸化。在A549細胞中，抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50分別計算為大致217pM、76pM、40pM、93pM及90pM。在所測試之較高濃度(例如，>10nM)下，所有五種抗體Ab235-Ab239達成將MET磷酸化完全抑制至背景水準。基於Ab237C之IC50，Ab244、Ab245、Ab249、Ab250、Ab254及Ab255之相對IC50分別計算為大致0.44、0.23、0.47、0.21、0.23及0.25；該相對IC50值藉由除以Ab237C之IC50值來計算(Ab237C之相對IC50值為1nM)。在U87MG細胞中，抗體Ab235C、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50分別計算為大致71pM、47pM、43pM、29pM及44pM。
另外，Ab237及Ab239能夠強力抑制Hop92細胞中之MET磷酸化，該 等Hop92細胞為含有包含T1010I突變之MET的肺癌細胞，其引起過度活化MET信號傳導。Hop92細胞中的Ab237及Ab239介導之MET磷酸化抑制的效力為使用包含SEQ ID NO：296(VH)及SEQ ID NO：297(VL)之胺基酸序列的人類化抗-MET抗體(如在h224G11(ABT-700；AbbVie)中)(「抗-MET-1」)或使用包含SEQ ID NO：294(VH)及SEQ ID NO：295(VL)之胺基酸序列的二價IgG4抗-MET抗體(如在艾比圖單抗(emibituzumab)(Lilly)中)(「抗-MET-2」)之抑制的3至4倍。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239、Ab237C、Ab244、Ab245、Ab249、Ab250、Ab254及Ab255)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對抑制Tyr1234及Tyr1235處的配位體(HGF)誘導之MET磷酸化有效。此外，此等資料指示，與其他抗-MET抗體(諸如抗-MET-1及/或抗-MET-2)相比，所測試之抗-MET抗體抑制MET活化及信號傳導，例如在具有經由MET突變(諸如T1010I突變)過度活化之MET信號傳導的癌細胞中抑制。
6.1.2.6 抗-MET抗體阻斷AKT及MAPK磷酸化
HGF誘導之MET活化促進細胞內MET酪胺酸磷酸化及信號傳導蛋白質複合物之募集，導致下游信號傳導路徑之活化。分析本文所描述之抗-MET抗體抑制或阻斷MET信號傳導(諸如AKT及/或MAPK磷酸化)的能力。如部分6.1.1.9中所描述使用A549 NSCLC細胞進行該等分析。簡言之，在抗-MET抗體存在及不存在下用HGF處理後，藉由西方墨點法分析AKT及MAPK之磷酸化。相比於用陰性對照物(例如，嵌合IgG1抗KLH抗體)處理，HGF處理引起MET活化(如藉由對磷酸化之MET的誘導所測定) 及下游組分AKT及MAPK之活化(如分別藉由對磷酸化之AKT及MAPK的誘導所測定)；參見分別圖2，色帶2、1及5)。相比之下，用Ab237C或克唑替尼(MET之小分子抑制劑，參見例如Rodig及Shapiro,Curr.Opin.Investig.Drugs.11(12)：1477-1490(2010))處理抑制MET之活化且減少下游信號傳導組分Akt及MAPK之活化(圖2，分別為色帶3及4)。用Ab237C處理誘導MET蛋白質水準顯著降低，其在用克唑替尼或對照IgG抗體處理之細胞中未觀測到。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對抑制MET及下游信號傳導組分AKT及MAPK之活化有效。
6.1.2.7 抗-MET抗體阻斷配位體-受體相互作用
鑒於所測試之抗-MET抗體結合於MET之細胞外結構域且阻斷HGF誘導之信號傳導(分別參見部分6.1.2.2及6.1.2.6)，如部分6.1.1.10中所描述來評定抗體抑制MET與其配位體HGF之間相互作用的能力。用對照嵌合IgG1抗KLH抗體預處理不削弱MET與HGF之間的結合相互作用。相比之下，與Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239一起培育有效抑制MET與HGF之間的結合相互作用。抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50分別計算為大致2nM、0.5nM、0.5nM、0.4nM及0.3nM。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對抑制配位體(HGF)與MET受體相互作用有效。
6.1.2.8 抗-MET抗體誘導MET降解
研究抗體誘導之MET抑制的機制，具體言之，研究抗-MET抗體對MET穩定性之影響。如部分6.1.1.11中所描述來評定MET在與抗-MET抗體一起培育後的穩定性。簡言之，將細胞與HGF或與某些抗-MET抗體一起培育，且藉由西方墨點法及ELISA分析來評定MET蛋白質水準。與抗-MET抗體一起培育二十四小時引起神經膠母細胞瘤細胞株U87MG及非小細胞肺癌細胞株A549中MET蛋白質之積聚減少(分別為圖3A及3B以及圖3C及3D)。此外，與抗-MET抗體一起培育減少腫瘤細胞株H596(其為編碼在外顯子14中包含缺失之MET基因的腺鱗癌細胞)及Hop92(其為表現包含T1010I胺基酸取代之MET的肺癌細胞)中MET蛋白質之積聚(分別為圖3E及3F)。
為確認活體內觀測到MET在某些抗-MET抗體存在下之降解，如部分6.1.1.12中所描述，在U87MG皮下異種移植腫瘤模型中在Ab237C存在下分析MET降解。與活體外結果相符，如藉由腫瘤樣品與對照物處理相比之免疫組織化學所測定，用Ab237C處理明顯地降低MET蛋白質水準(分別為圖4C、4A及4B)。
此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對活體外及活體內使MET降解有效。亦即，在抗體處理之後，不依賴於腫瘤細胞是在組織培養物中還是以皮下腫瘤異種移植物形式生長，MET蛋白質水準均降低。因此，抗體藉由阻斷HGF結合及促進MET周轉兩者起作用。
6.1.2.9 抗-MET抗體誘導MET泛素化
結合於MET之HGF誘導MET之快速泛素化及降解(參見例如，Taher 等人J Immunol.169(7)：3793-3800(2002))。為確定抗體誘導之MET降解(例如，Ab235、Ab236、Ab237、Ab238、Ab239及Ab237C；參見部分6.1.2.8)是否與MET泛素化有關，用抗-MET抗體Ab237C及Ab237C-IgG2(包含人類IgG2恆定區代替IgG1恆定區之Ab237C)處理A549細胞，使MET免疫沈澱，且藉由如部分6.1.1.11中所描述之免疫墨點法分析免疫沈澱之樣品的泛素。正如預期，與HGF一起培育誘導MET之泛素化。另外，與Ab237C或Ab237C-IgG2一起培育亦引起MET之泛素化，而與對照Ig一起培育或在無HGF存在下培育不引起泛素化(圖5)。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab237)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對誘導MET泛素化有效。
6.1.3 結論
總之，產生能夠結合細胞表面表現之MET及重組MET-ECD兩者的抗-MET抗體。此外，競爭分析展現，抗體共用相同或類似抗原決定基。本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)能夠結合於表現MET之人類及猴細胞兩者，但不結合於表現MET之犬或小鼠細胞，展現此等抗體之物種特異性。此外，本文所描述之抗-MET抗體(例如，Ab235-Ab255)能夠抑制MET活性，諸如胺基酸殘基Tyr1234及Tyr1235(MET活化之關鍵殘基)處的MET磷酸化，以及下游信號傳導事件，諸如Akt磷酸化及MAPK磷酸化，且能夠阻斷配位體(HGF)-受體(MET)相互作用。此外，MET在用本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)處理後進行泛素化且降解。因此，此等資料展示，已鑑別一系列可強力抑制MET信號傳導之抗-MET抗 體，且指示包含Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之CDR的抗-MET抗體可抑制MET活性。
6.2 實例2：抗-MET抗體之抗腫瘤特性 6.2.1 材料及方法 6.2.1.1 腫瘤細胞增殖分析
對於U87MG、A549及EBC1細胞，將每孔大致1,000-2,000個細胞以50μL接種在Costar超低結合U形底培養盤中，且培育4-8天以使球狀體形成。向各孔中添加50μL之3×HGF(在無血清培養基中製備)得到50ng/mL之最終HGF濃度。向各孔中添加50mL之3×抗體溶液(在無血清培養基中製備，最終濃度300nM)。將細胞在標準條件下培育5天。在培育之後，向各孔中添加100μl之細胞效價輝光(Cell Titer Glow)試劑(Promega)，且將培養盤在定軌震盪器上保持20分鐘。隨後將混合物轉移至黑壁透明底培養盤中，且如先前所描述使用盤讀取器來測定發光信號。
對於H596細胞(腺鱗癌細胞株)，將每孔5,000個細胞以100μL接種在黑壁透明底96孔培養盤中，且在標準條件下培養隔夜。隨後使細胞血清饑餓隔夜。接著，向各孔中添加50μL含有0.5% FBS之2×HGF無血清溶液得到50ng/mL之最終濃度。另外，向各孔中添加50μL含有0.5% FBS之2×抗體無血清溶液(最終濃度300nM)。將細胞在標準條件下培育4天。隨後將細胞與細胞效價輝光試劑一起培育，且如先前所描述測定發光信號。隨後將細胞在標準條件下再培育5天。最後，再次將細胞與細胞效價輝光試劑一起培育，且如先前所描述測定發光信號。
6.2.1.2 DU145細胞離散分析
對於DU145細胞(轉移性前列腺癌細胞株)，將每孔大致3,000個細胞 接種在96孔黑壁透明底培養盤中，且在標準條件下培養隔夜。在測試抗體存在或不存在下，在F12K饑餓培養基中用25ng/mL HGF處理細胞持續24小時。在24小時之後，在室溫下用含4%多聚甲醛之PBS固定細胞10分鐘，繼而用PBS洗滌三次。隨後在室溫下用含0.1% triton之PBS滲透細胞10分鐘，且隨後在室溫下用Hoechst H33258(10μg/mL)染色1小時。隨後用PBS洗滌細胞三次。使用OPERA影像儀獲得影像，且使用內置式細胞集群演算法分析。藉由量測集群中存在之細胞的百分比來對細胞離散作用進行定量。細胞集群定義為含有超過3個細胞之群。
6.2.1.3 U87MG正位腫瘤模型
使用27g固定針頭注射器將U87MG神經膠質瘤細胞(ATCC®，Manassas,VA，目錄號HTB-14)顱內植入至裸小鼠中(例如，每隻小鼠1×106個細胞)。視實驗而定，向10隻一組的小鼠中投與以下中之一或多者：PBS、嵌合IgG1抗KLH抗體、克唑替尼、Ab235C、Ab236C、Ab237C、Ab237-IgG2、Ab237-IgG4或單價Ab237。
6.2.1.4 腫瘤之生物發光
使用27g固定針頭注射器將經工程改造以穩定表現螢光素酶(由螢火蟲螢光素酶基因編碼之蛋白質)之U87MG人類神經膠質瘤細胞株細胞(U87MG-luc)顱內植入至裸小鼠中(例如，每隻小鼠1×106個細胞)。視實驗而定，向10隻一組的小鼠中投與以下中之一或多者：PBS、嵌合IgG1抗KLH抗體(30mg/kg)、克唑替尼(25mg/kg)、Ab235C(30mg/kg)、Ab236C(30mg/kg)及Ab237C。
獲得植入後大致28天時10-15隻小鼠的生物發光成像(BLI)影像以觀測腫瘤生長。若腫瘤尚不可區別，則在4-5天後再次獲得動物之BLI影 像。選擇具有達到所要尺寸之腫瘤(例如，平均生物發光信號為5×106個光子/秒)的動物，隨機分成治療/對照組，其中成對匹配以達成10%之組間平均腫瘤負荷匹配。隨後，在治療後第3、7、14及21天時使治療/對照組中之動物成像。以光子/秒為單位進行腫瘤量測。
6.2.1.5 U87MG皮下腫瘤模型
細胞培養：在37℃下在含5% CO2之空氣的氛圍中，將U87MG神經膠母細胞瘤腫瘤細胞(ATCC®，Manassas,VA，目錄號HTB-14)以單層培養物形式活體外維持在補充有10%熱不活化之胎牛血清的DMEM培養基中。採集在指數生長期中生長之細胞。且計數以用於腫瘤接種。
動物及腫瘤接種：用U87MG細胞接種稱重為大致18-20g的6-8週齡雌性BALB/c裸鼠。對各小鼠在右側腹皮下接種含U87MG腫瘤細胞(5×106)之100μl培養基以用於腫瘤發展。當平均腫瘤尺寸達到大致150-200mm3時開始處理。以指定劑量用抗-MET抗體及某些對照物處理各組(n=10)中之動物。舉例而言，在某些實驗中，每週兩次腹膜內投與30mg/kg(給藥體積10μl/g)之PBS、嵌合IgG1抗KLH抗體、單價Ab237C、Ab237C-IgG2、Ab237C-IgG4及Ab237C之一持續三週。
使用測徑規在二維中每週兩次量測腫瘤尺寸，且以mm3為單位使用下式表示體積：V=0.5 a×b2，其中a及b分別為腫瘤之長徑及短徑。根據下式計算各組之腫瘤生長抑制(TGI)：TGI(%)=[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti為特定天時治療組之腫瘤體積，T0為第一天時治療組之腫瘤體積，Vi為特定天時媒劑對照組之腫瘤體積，且V0為治療第一天時媒劑組之腫瘤體積。在研究終止時量測腫瘤重量。計算T/C值(以百分比為單位)，其中T及C分別為治療組及對照組之平均腫瘤重量。
6.2.2 結果 6.2.2.1 抗-MET抗體抑制腫瘤細胞增殖
若干癌症歸因於過度活化之MET信號傳導(參見例如，Trusolino等人Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.11：834-848(2010))。鑒於抗-MET抗體使MET降解及抑制MET信號傳導之能力(分別參見部分6.1.2.8及6.1.2.6)，評定本文所描述之抗-MET抗體消除腫瘤增殖的能力。簡言之，將U87MG或A549腫瘤細胞與HGF一起且在本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239)存在或不存在下培育，且例如藉由發光如上文所描述評定細胞增殖。用Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239處理抑制腫瘤細胞增殖。抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50在U87MG細胞中分別計算為大致25nM、9nM、5.5nM、25nM及19nM，且在A549細胞中分別計算為大致6.6nM、6.3nM、1.7nM、4.8nM及4.4nM。此外，所測試之抗體強力抑制H596細胞(其表現不具有由外顯子14編碼之47個胺基酸的經突變形式之MET)的增殖，指示表現此類經突變形式之MET的個體可能易受用本文所描述之抗體處理影響。此外，在無HGF存在下用Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239處理U87MG細胞不引起由所測試之抗體誘導的促進生長之促效活性(圖6A)。抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50在H596細胞中分別計算為大致0.8nM、0.6nM、0.08nM、0.2nM及0.2nM。在所測試之各細胞類型中，與其他抗-MET抗體相比，Ab237之IC50明顯較低。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對抑制腫瘤細胞增殖有效。
6.2.2.2 抗-MET抗體抑制DU145細胞離散
HGF為內皮細胞向間葉細胞轉變(「EMT」，亦稱為細胞離散)之已知誘導劑(參見例如，Thiery及Sleeman,Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2：131-142(2006))，上皮細胞藉由該過程失去其細胞間黏附力且獲得獨立遷移之能力。細胞離散參與癌轉移起始(參見例如，Tsai及Yang,Genes & Dev.27：2192-2206(2013))。因為本文所描述之抗-MET抗體能夠抑制腫瘤細胞增殖(部分6.2.2.1)，所以如部分6.2.1.2中所描述來評定抗-MET抗體對細胞離散之影響。簡言之，在抗-MET抗體存在或不存在下用HGF處理DU145轉移性前列腺癌細胞，且藉由量化細胞集群來測定細胞離散。用本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238或Ab239)處理高效地抑制DU145細胞離散。抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239之IC50分別計算為大致0.48nM、0.08nM、0.08nM、1.4nM及0.24nM。抗體Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239能夠分別抑制DU145細胞離散大致72%-80%、64%-66%、77%-81%、77%-96%及58%-77%。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對抑制EMT有效。
6.2.2.3 抗-MET抗體活體內抑制腫瘤生長
如部分6.2.1.3、6.2.1.4及6.2.1.5中所描述來評定抗-MET抗體活體內抑制腫瘤生長之能力。簡言之，用對照嵌合IgG1抗KLH抗體、MET之小分子抑制劑(克唑替尼；經口25mg/kg)或用嵌合Ab235或Ab236(分別為Ab235C或Ab236C；靜脈內30mg/kg)處理U87MG正位小鼠模型，且在植入後28、31、35、42及49天時量測植入腫瘤細胞之生物發光(圖6B及 6C)。每週兩次，每三至四天進行處理，持續七週。如藉由正位模型中之生物發光信號所測定，用對照嵌合IgG1抗KLH抗體或用克唑替尼處理引起類似腫瘤生長。出乎意料地，在腫瘤植入後49天內，用Ab235C或Ab236C處理小鼠引起統計學上顯著之腫瘤生長抑制(圖6B及6C)。
此外，用嵌合Ab235、Ab236、Ab237及Ab239抗體(分別為Ab235C、Ab236C、Ab237C及Ab239C；靜脈內30mg/kg，每週兩次)處理在U87MG皮下異種移植物模型中比媒劑或陰性對照嵌合IgG1抗KLH抗體更好地延遲腫瘤生長。且Ab237C在所測試之抗體當中顯示最強效作用(圖7A)。此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體針對活體內抑制腫瘤進程有效。
此外，Ab237C在U87MG皮下異種移植物模型中之劑量遞增展現，少至1mg/kg之劑量的Ab237C能夠延遲腫瘤生長(圖7B)。值得注意地，30mg/kg Ab237C處理誘導之腫瘤生長抑制與50mg/kg克唑替尼處理相當。此外，Ab237C具有良好耐受性，且不引起體重減輕或觀測毒性。此等資料指示，抗-MET抗體Ab237C以及包含Ab237C之CDR的抗體以劑量依賴性方式針對活體內抑制腫瘤進程有效。
6.2.3 結論
此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體顯示抗腫瘤特質。抗體能夠活體外抑制腫瘤細胞增殖，抑制細胞離散(癌轉移之前驅物)，且活體內削弱腫瘤生長。結合在一起，此等資料指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如 Ab235、Ab236、Ab237、Ab238及Ab239)以及包含與此等抗體相同之CDR且具有類似特徵(例如，結合抗原決定基及親和力)的抗體展現可適用於治療癌症(諸如神經膠質瘤)的抗腫瘤活性。
6.3 實例3：Ig同型交換對抗-MET抗體之作用 6.3.1 材料及方法 6.3.1.1 同型轉換
為進行同型轉換，將本文所描述之抗體的VL及VH鏈區與人類IgG2或IgG4之恆定區同框選殖。隨後在293細胞中短暫表現所得構築體，且純化所得抗體。
6.3.1.2 U87MG神經膠母細胞瘤異種移植物模型
基本上如上文在部分6.2.1.5中所描述進行U87MG神經膠母細胞瘤異種移植物小鼠模型的研究。簡言之，將在指數生長期中生長的U87MG腫瘤細胞(ATCC®，Manassas,VA，目錄號HTB-14)接種至BALB/c裸小鼠(雌性，6-8週，稱重為大致18-20g)中。對各小鼠在右側腹皮下接種含U87MG腫瘤細胞(5×106個細胞)之100μl培養基以用於腫瘤發展。當平均腫瘤尺寸達到大致150-200mm3時開始處理。以指定劑量用抗-MET抗體及某些對照物處理各組(n=10)中之動物。使用測徑規在二維中每週兩次量測腫瘤尺寸，且以mm3為單位使用下式表示體積：V=0.5 a×b2，其中a及b分別為腫瘤之長徑及短徑。根據下式計算各組之腫瘤生長抑制(TGI)：TGI(%)=[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti為特定天時治療組之腫瘤體積，T0為第一天時治療組之腫瘤體積，Vi為特定天時媒劑對照組之腫瘤體積，且V0為治療第一天時媒劑組之腫瘤體積。
6.3.1.3 SNU-5異種移植物模型
細胞培養：在37℃下在含5% CO2之空氣的氛圍中，將SNU-5人類胃癌腫瘤細胞(ATCC®，Manassas,VA，目錄號CRL-5973)(MET擴增之細胞株)以單層培養物形式活體外維持在補充有20%熱不活化之胎牛血清的IMDM培養基中。採集在指數生長期中生長之細胞。且計數以用於腫瘤接種。
動物：稱重為大致18-20g的6-8週齡雌性BALB/c裸鼠用於SNU-5腫瘤細胞接種。
腫瘤接種：對各小鼠在右側腹皮下接種含腫瘤細胞(5×106)之100μl培養基以用於腫瘤發展。當平均腫瘤尺寸達到大致150-200mm3時開始處理。以指定劑量用抗-MET抗體及某些對照物處理各組(n=10)中之動物。舉例而言，在某些實驗中，每週兩次腹膜內投與30mg/kg(給藥體積10μl/g)之PBS、嵌合IgG1抗KLH抗體、單價Ab237C、Ab237C-IgG2、Ab237C-IgG4及Ab237C中之一者持續三週。
使用測徑規在二維中每週兩次量測腫瘤尺寸，且以mm3為單位使用下式表示體積：V=0.5 a×b2，其中a及b分別為腫瘤之長徑及短徑。根據下式計算各組之腫瘤生長抑制(TGI)：TGI(%)=[1-(Ti-T0)/(Vi-V0)]×100；Ti為特定天時治療組之腫瘤體積，T0為第一天時治療組之腫瘤體積，Vi為特定天時媒劑對照組之腫瘤體積，且V0為治療第一天時媒劑組之腫瘤體積。在研究終止時量測腫瘤重量。計算T/C值(以百分比為單位)，其中T及C分別為治療組及對照組之平均腫瘤重量。
6.3.2 結果 6.3.2.1 Ab237同型交換增強效力
如部分6.3.1.1中所描述來進行抗-MET抗體之免疫球蛋白同型交換以 探索對抗體功能之影響。產生包含人類IgG2恆定區之抗-MET抗體。在產生IgG2抗體之後，吾人預期存在α及β同功異型物兩者(分別為IgG2a及IgG2b)。與Ab237C相比，用人類IgG4同型轉換Ab237C人類IgG1同型(「Ab237C-IgG4」)對SNU-5細胞增殖抑制之影響最小(圖8A)。出乎意料地，相對於Ab237C及Ab237C IgG4兩者，用人類IgG2同型轉換Ab237C IgG1人類同型在SNU-5細胞中顯著增強MET磷酸化之抑制(圖8A)。與Ab237C及Ab237C-IgG4相比，Ab237C-IgG2亦展現在SNU-5細胞中MET降解增強(圖8B)。此外，與Ab237C及Ab237C-IgG4以及單價形式之Ab237相比，Ab237C-IgG2在SNU-5及EBC-1(肺鱗狀細胞癌細胞株)細胞增殖抑制中顯著地更強效(圖8C及8D)。此等意外結果指示，用人類IgG2恆定區交換抗-MET抗體Ab237C之人類IgG1恆定區顯著增強Ab237C功能性，諸如阻斷MET活性及抗癌活性。SNU-5及EBC-1細胞均為MET擴增之細胞株。活體外在U87MG細胞中，Ab237-IgG2抗體以與Ab237C及Ab237-IgG4抗體相同之程度抑制MET磷酸化。然而，歸因於信號飽和，相比於下文呈現之三維異種移植物模型，在U87MG細胞之二維細胞培養物中，不存在太多用於進行同型轉換以產生其他改良的空間。
6.3.2.2 人類化形式之Ab237強力抑制MET活性
為確定包含人類IgG2恆定區的人類化形式之抗體Ab237是否亦發揮抑制MET活性之能力，在用Ab237C-IgG2或包含人類IgG2恆定區的人類化形式之Ab237(「hum-Ab237-IgG2」)處理後，在A549細胞(圖8E)及SNU5細胞(圖8F)中評估MET磷酸化。如用Ab237處理細胞一般，用hum-Ab237C-IgG2處理強力抑制MET之磷酸化，指示包含人類IgG2恆定區的人類化形式之Ab237能夠活體外抑制MET活化(圖8E及8F)。此外，用 hum-Ab237-IgG2處理SNU5細胞強力抑制細胞增殖，其特徵曲線與用Ab237C-IgG2抑制細胞增殖一致(圖8G)。
6.3.2.3 Ig同型交換對抗體效力之影響為抗體依賴性的
為確定Ig構架交換在本文所描述之其他抗-MET抗體中的作用，對Ab235C、Ab236C、Ab238C及Ab239C產生人類IgG2恆定區變異體(本文中分別稱為「Ab235C-IgG2」、「Ab236C-IgG2」、「Ab238C-IgG2」及「Ab239C-IgG2」)。如上文所提及，在產生IgG2抗體之後，吾人預期存在α及β同功異型物兩者(分別為IgG2a及IgG2b)。如上文所論述，Ab235C-Ab239C在SNU-5細胞中強勢抑制MET磷酸化且誘導MET降解。有趣的是，對於Ab235C、Ab236C及Ab239C但不對於Ab238C，將人類IgG1構架交換為人類IgG2構架在SNU-5細胞中引起抑制MET磷酸化及誘導MET降解之效力增強(圖9A、9B、9C及9D)。
特定言之，與對照嵌合人類IgG1抗KLH抗體之12%抑制相比，抗體Ab238C、Ab238C-IgG2、Ab239C、Ab239C-IgG2及Ab237C-IgG2能夠在SNU-5細胞中分別抑制MET磷酸化19%、24%、33%、75%及72%(圖9A)。與對照嵌合人類IgG1抗KLH抗體之17%最大誘導百分比相比，抗體Ab238C、Ab238C-IgG2、Ab239C、Ab239C-IgG2及Ab237C-IgG2能夠在SNU-5細胞中誘導MET降解的對MET降解之最大誘導百分比分別為39%、35%、36%、75%及81%(圖9B)。抗體Ab235C、Ab235C-IgG2、Ab236C及Ab236C-IgG2能夠在SNU-5細胞中分別抑制MET磷酸化10%、64%、17%及75%(圖9C)。抗體Ab235C、Ab235C-IgG2、Ab236C及Ab236C-IgG2能夠在SNU-5細胞中誘導MET降解的對MET降解之最大誘導百分比分別為6%、64%、19%及69%(圖9D)。此等資料指示，本文所 描述之某些抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237及Ab239)以人類IgG2同型形式比以人類IgG1同型形式更有效抑制MET活性及誘導MET降解。
6.3.2.4 與競爭者抗-MET抗體相比，Ab237C-IgG 2 及人類化形式之Ab237強力抑制腫瘤生長
如部分6.3.1.2及6.3.1.3中所描述來評定Ab237C-IgG2之抗腫瘤特性。在U87異種移植物模型中，與人類IgG1及人類IgG4 Ab237C同型相比，Ab237C-IgG2更有效延遲腫瘤生長(圖10A)。在SNU5胃癌異種移植物模型中，與對照物處理相比，Ab237C(IgG1)及Ab237C-IgG4延遲腫瘤生長(圖10B)，但出乎意料地，在此SNU5胃癌異種移植物模型中，Ab237C-IgG2完全消除腫瘤(圖10B)。此等資料展現Ab237C抗體在轉化成人類IgG2同型時展現顯著改良抗腫瘤特性的意外能力。此外，明顯應注意，Ab237-IgG2抗體處理引起極度SNU-5腫瘤生長抑制，且亦在抗體處理後支持腫瘤消退持續高達>90天。此外，90%的用Ab237-IgG2處理之SNU-5小鼠在研究時期期間不展示可偵測之腫瘤塊。
此等資料亦指示，本文所描述之抗-MET抗體(諸如Ab235、Ab236、Ab237及Ab239)以人類IgG2同型形式比以人類IgG1同型形式針對活體內抑制腫瘤進程更有效。
接著，與已在臨床中測試之抗-MET抗體相比，如部分6.3.1.2及6.3.1.3中所描述來評定Ab237C-IgG2及IgG2同型的人類化形式之Ab237(hum-Ab237C-IgG2)的抗腫瘤特性。Ab316為包含SEQ ID NO：298(輕鏈)、SEQ ID NO：299(重鏈鈕)及SEQ ID NO：300(重鏈扣)之胺基酸序列的單價IgG1抗-MET抗體，如在奧那組單抗(onartuzumab)(MetMAb； Genentech/Roche)中。Ab317為包含SEQ ID NO：294(VH)及SEQ ID NO：295(VL)之胺基酸序列的IgG4抗-MET抗體，如在艾比圖單抗(Lilly)中。Ab318為包含SEQ ID NO：296(VH)及SEQ ID NO：297(VL)之胺基酸序列的IgG1抗-MET抗體，如在h224G11(ABT-700；AbbVie)中。
在SNU-5異種移植物模型中，與Ab316、Ab317及Ab318相比，Ab237C-IgG2更有效延遲腫瘤生長且完全消除腫瘤(圖11A)。同樣，人類化形式之Ab237抗體的IgG2同型(hum-Ab237C-IgG2)亦展現完全消除腫瘤之能力(圖11B)。此外，在U87異種移植物模型中，與Ab316、Ab317及Ab318相比，Ab237C-IgG2亦更有效延遲腫瘤生長(圖11C)。最後，在U87異種移植物模型中，與Ab316、Ab317及Ab318相比，hum-Ab237C-IgG2更有效延遲腫瘤生長(圖11D)。
6.3.3 結論
在此等實例中呈現之資料展現，本文所描述之抗體抑制MET活性，諸如MET磷酸化、MET降解及腫瘤細胞增殖。舉例而言，Ab235、Ab236、Ab237及Ab239抑制MET活性而不展現促進生長之促效活性。此外，此等資料亦展現，將抗-MET抗體Ab235、Ab236、Ab237及Ab239之IgG1恆定區交換為人類IgG2同型顯著增加抗體功能性，諸如抗體抑制MET活性(諸如MET磷酸化、MET降解及腫瘤細胞增殖)之能力。此外，Ab237及人類化Ab237(尤其此等Ab237抗體IgG2同型)極有效地活體內抑制MET配位體依賴性及MET擴增之(例如，非配位體依賴性)腫瘤生長。此與奧那組單抗相反，舉例而言，該奧那組單抗僅僅靶向受體-配位體相互作用且僅阻斷配位體依賴性MET活化(Martens等人，2006,Clin.Cancer.Res.12(20 Pt 1)：6144-6152)。
6.4 實例4：進一步抗原決定基及降解路徑表徵 6.4.1 材料及方法 6.4.1.1 FACS跨物種結合分析
為量測抗體針對細胞表面受體之結合親和力，用Alexa647抗體標記套組標記抗體，且按製造商之說明書(Invitrogen)來純化。使A549(人類)、4MBr5(猴)、MDCK(犬類)及MS1(鼠類)細胞再懸浮於預先冷卻之FACS緩衝液中，在冰上培育1小時，且以105個細胞/孔分佈至96孔培養盤中。向各孔中添加經標記之抗體的連續稀釋液，且在冰上培育4小時以允許抗體結合達到平衡。使用FACS讀取器(ACCURITM-C6；BD Biosciences)分析平均螢光強度，且使用GRAPH PADPRISM®軟體來測定表觀結合親和力。
6.4.1.2 藉由ELISA量測抗體結合
為藉由ELISA量測抗體結合，將10μg人類、鼠類或嵌合MET-ECD塗佈至96孔培養盤(Costar)上。向培養盤中添加抗體之連續稀釋液，且在室溫下培育1小時，隨後添加HRP結合之二級抗體。用BioTek SYNERGYTM HT盤讀取器量測發光，且使用GRAPHPAD PRISM®軟體來測定結合EC50值。
6.4.1.3 重組蛋白質表現及純化
藉由將編碼鼠類MET之胺基酸1-561的DNA與編碼人類MET之胺基酸562-932的DNA接合且插入至pcDNA3.3-His8載體之Xba I/Xho I位點中來產生嵌合MET-ECD。在293F細胞中藉由短暫轉染來表現人類及嵌合MET-ECD-His(胺基酸1-932)兩者，且使用Ni-NTA親和管柱，繼而使用尺寸排阻層析來純化蛋白質。
6.4.2 結果 6.4.2.1 抗體結合抗原決定基表徵
為確定抗體抗原決定基，對Ab237進行跨物種結合分析。該分析揭露，Ab237以高親和力結合於人類(A549)及猴(4MBr5)細胞株上所表現之MET，但不結合於據報導表現高水準之MET的犬類(MDCK)或鼠類(MS1)細胞株(表15)。
使用ELISA分析來擴展此發現。Ab237以高親和力(EC50=0.02nM)結合人類MET-ECD，且未觀測到與鼠類MET-ECD之可偵測結合(表16)。另外，含有與人類MET PSI-Ig結構域融合之鼠類MET SEMA結構域的嵌合蛋白質完全消除Ab237之結合，表明抗體抗原決定基位於SEMA結構域內(表16)。
人類、猴、犬類及鼠類MET受體之蛋白質序列比較及公開的METSEMA-PSI結構域之結晶學結構(Stamos等人，2004,EMBO J.23(12)：2325-2335)揭露，若干表面暴露之胺基酸可造成Ab237與來自各種物種之MET之結合的差異。在人類與鼠類SEMA結構域中不同的15個胺基酸中，五個表面暴露之胺基酸的位置非常接近(Q328/R331/S336/L337/N338)。人類MET(hMET)蛋白質中的此表面暴露之集群由來自犬類或鼠類MET之相對應胺基酸置換。隨後將hMET突變體轉染至CHO細胞中，且藉由流式細胞測量術量測抗體結合親和力。與以亞奈莫耳親和力結合Ab237的野生型hMET受體相比較，具有鼠類或犬類突變之hMET受體完全消除Ab237結合，但對結合MET之Ig結構域的對照抗體無影響(表17)。
類似地，結合於hMET受體之Ab238亦涉及Q328/R331/S336/L337/N338，此係由於此胺基酸集群之突變完全消除Ab238結合達到與 Ab237類似之程度(表17)，指示Ab237及Ab238共用定位於SEMA結構域中之重疊抗原決定基。競爭性結合分析(參見部分6.1.2.4)展現，抗體Ab235-Ab239及Ab241-Ab255均共用類似抗原決定基，指示此等抗體共用定位於SEMA結構域中之重疊抗原決定基。
6.4.2.2 經由非外顯子14依賴性路徑的抗體促進之MET降解涉及泛素化但不涉及排出
ELISA分析用於確定Ab237是否可經由膜蛋白酶介導之受體排出誘導受體降解。將A549細胞與1nM抗體(Ab237、Ab238或對照物)一起培育24小時，且使用ELISA分析來對可溶性MET細胞外結構域(sMET-ECD)蛋白質向細胞培養基中之釋放進行定量。與先前報告相符，用PMA(佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯)處理細胞誘導實質性MET排出且將sMET-ECD釋放至培養基中，而在HGF處理之樣品中未偵測到排出(圖12A)。用抗-MET抗體處理細胞不引起MET排出，指示所觀測之抗體誘導的受體降解經由不同路徑進行。
接著研究抗-MET抗體是否促進MET泛素化及降解。用1nM之HGF或抗-MET抗體刺激A549細胞持續15分鐘。用抗泛素抗體結合之瓊脂糖(Santa Cruz)使細胞溶胞物沈澱，繼而用抗-MET抗體(Cell Signaling Technology)進行免疫墨點法。HGF及抗體處理15分鐘均誘導強效受體泛素化(圖12B)。因此，此等抗體使用泛素化機制代替蛋白酶介導之排出來促進受體降解。此與先前在使用諸如DN30之抗體的情況下觀測到的膜蛋白酶介導之受體排出相反(Schleter,2010,J.Biol.Chem.285(34)：26335-26340)。
已在許多癌症中報導MET外顯子14突變(The Cancer Genome Atlas Research Network,2014,Nature,511(7511)：543-550；Frampton等人，2015,Cancer Discov.5(8)：850-859)。MET外顯子14突變賦予HGF誘導之受體降解減少。外顯子14(Leu964-Asp1010)之缺失移除Cbl結合必要之Tyr1003位點，導致如先前所報導的HGF誘導之受體降解實質性減少(Kong-Beltram等人，2006,Cancer Res.66(1)：283-289)。已表明，外顯子14突變在人類胃腫瘤中之存在可解釋在此腫瘤類型中觀測到的在無MET基因擴增存在下之MET過度表現(Lee等人，2015,Oncotarget 6(29)：28211-28222)。在非小細胞肺癌細胞株H596中，在無由外顯子14編碼之47個胺基酸的情況下表現功能性MET蛋白質(Kong-Beltram等人，2006,Cancer Res.66(1)：283-289)。在此細胞株中，已展現HGF誘導之MET降解因Tyr1003不存在而受損(Kong-Beltram等人，2006,Cancer Res.66(1)：283-289)。與在表現野生型MET之細胞株(諸如A549及U87MG細胞)中的大致80%降解相比較，將H596細胞與1nM HGF一起培育24小時僅引起30%受體降解。相比之下，與1nM HGF及1nM之Ab237或Ab238抗體一起培育24小時仍能夠誘導>70%之MET降解(圖13A)。在細胞增殖分析中，添加抗-MET抗體在含1nM HGF之培養基存在下導致H596細胞之顯著生長抑制(圖13B)。
因此，向外顯子14突變型細胞中添加Ab237或Ab238抗-MET抗體引起實質性MET降解，指示此等抗-MET抗體採用與HGF誘導之MET降解不同的降解路徑且較少依賴於外顯子14編碼的含有Cbl結合位點之近膜區。
為確定本文所觀測到的抗體誘導之MET降解是否需要MET激酶活性，研究MET激酶抑制劑克唑替尼對HGF及抗-MET抗體誘導之降解的作用。用1μM克唑替尼預處理之細胞完全阻斷HGF誘導之MET磷酸化(圖 2，參見部分6.1.2.6)，且完全抑制HGF誘導之MET降解(圖14)。與其對HGF之作用不同，克唑替尼僅部分地減少Ab237及Ab238誘導之MET降解(圖14)。然而，總而言之，此等結果指示，此等抗體之降解路徑並非HGF利用之降解路徑且不同於蛋白酶誘導之排出。重要的是，此等抗體之降解路徑在外顯子14突變型癌細胞中保持起作用。
6.4.3 結論
此實例中之資料展示，Ab237及Ab238共用定位於SEMA結構域中之重疊抗原決定基。此外，抗體(例如，Ab237)利用不由HGF利用且不同於蛋白酶誘導之排出的替代性降解路徑，以使得抗體在外顯子14突變型癌細胞(MET擴增之癌症中常突變之區)中保持起作用。
本文所引用之所有參考文獻(例如，公開案或專利或專利申請案)均以全文引用之方式且出於所有目的併入本文中，其併入程度如同各個別參考文獻(例如，公開案或專利或專利申請案)具體且個別地指示為以全文引用之方式出於所有目的併入一般。
其他實施例在以下申請專利範圍內。
<110> 容後補呈
<120> 抗-MET抗體及其使用方式
<130> 12638-125-228
<140> TBA
<141> On even date herewith
<160> 300
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL CDR1 Kabat
<400> 1
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> Ab235 VL CDR2 Kabat
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<212> PRT
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL CDR1 Kabat
<400> 13
<210> 14
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL CDR2 Kabat
<400> 14
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL CDR3 Kabat
<400> 15
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH CDR1 Kabat
<400> 16
<210> 17
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237、Ab239 VH CDR2 Kabat
<400> 17
<210> 18
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH CDR3 Kabat
<400> 18
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL CDR1 Kabat
<400> 19
<210> 20
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL CDR2 Kabat
<400> 20
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL CDR3 Kabat
<400> 21
<210> 22
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH CDR1 Kabat
<400> 22
<210> 23
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH CDR2 Kabat
<400> 23
<210> 24
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH CDR3 Kabat
<400> 24
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL CDR1 Kabat
<400> 25
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL CDR2 Kabat
<400> 26
<210> 27
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL CDR3 Kabat
<400> 27
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH CDR1 Kabat
<400> 28
<210> 29
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH CDR3 Kabat
<400> 29
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL CDR1 Kabat
<400> 30
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL CDR2 Kabat
<400> 31
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL CDR3 Kabat
<400> 32
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH CDR1 Kabat
<400> 33
<210> 34
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH CDR2 Kabat
<400> 34
<210> 35
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH CDR3 Kabat
<400> 35
<210> 36
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VH CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa=Asn或Ser
<400> 36
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共同VH CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=Ser或Cys
<400> 37
<210> 38
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VH CDR2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa=Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa=Asn或Ser
<400> 38
<210> 39
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共同VH CDR2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa=Arg或不存在
<400> 39
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VH CDR3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Ile或Val
<400> 40
<210> 41
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VL CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Asn或Ser
<400> 41
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共同VL CDR1 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Ala或Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Tyr或His
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=Asp或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa=Leu或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa=Aka或不存在
<400> 42
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VL CDR2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Asn或Asp
<400> 43
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VL CDR3 Kabat
<‘220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Ile或Asn
<400> 44
<210> 45
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239共同VH CDR3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=Gly或Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Ile或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 5,7
<223> Xaa=Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Thr或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa=Pro或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa=Cys或Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa=Tyr或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa=Asn或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa=Tyr或Phe
<400> 45
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH CDR2 Kabat
<400> 46
<210> 47
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab241-Ab255共同VL
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=Ser或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa=Val或Leu
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa=Asp或Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa=Arp或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 21
<223> Xaa=Thr或Glu
<220>
<221> VARIANT
<222> 41
<223> Xaa=Lys或Asn
<220>
<221> VARIANI
<222> 42
<223> Xaa=Ala或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 44
<223> Xaa=Lys或Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 63,65
<223> Xaa=Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 68
<223> xaa=Asp或Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 69
<223> Xaa=Phe或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 70
<223> Xaa=Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 72
<223> Xaa=Thr或Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 74
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 78
<223> Xaa=Pro或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 82
<223> Xaa=Ala或Ser
<400> 47
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VL
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa=Thr或Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 30
<223> Xaa=Asn或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 39
<223> Xaa=Ala或Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> 51
<223> Xaa=Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 52
<223> Xaa=Asn或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 92
<223> Xaa=Ile或Asn
<400> 48
<210> 49
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab241-Ab255共同VH
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa=Gly或Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 42
<223> Xaa=Gly或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 69
<223> Xaa=Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 77
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 88
<223> Xaa=Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 116
<223> Xaa=Gln或His
<220>
<221> VARIANT
<222> 118
<223> Xaa=Val或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 124
<223> Xaa=Ser或Ala
<400> 49
<210> 50
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VH
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=Val或Ala
<220>
<221> VARIANT
<222> 28
<223> Xaa=Ile或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 31
<223> Xaa=Asn或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 57
<223> Xaa=Tyr或PPhe
<220>
<221> VARIANT
<222> 58
<223> Xaa=Thr或Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 61
<223> Xaa=Asn或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 85
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 102
<223> Xaa=Ile或Val
<400> 50
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab241-Ab255共同VL CDR1
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=Asn或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa=Leu或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa=Ala或不存在
<400> 51
<210> 52
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL變異體1
<400> 52
<210> 53
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL變異體2
<400> 53
<210> 54
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL變異體3
<400> 54
<210> 55
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL變異體4
<400> 55
<210> 56
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL變異體5
<400> 56
<210> 57
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL
<400> 57
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL
<400> 58
<210> 59
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL
<400> 59
<210> 60
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL
<400> 60
<210> 61
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL
<400> 61
<210> 62
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL
<400> 62
<210> 63
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH變異體1
<400> 63
<210> 64
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH變異體2
<400> 64
<210> 65
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH變異體3
<400> 65
<210> 66
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH
<400> 66
<210> 67
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH
<400> 67
<210> 68
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH
<400> 68
<210> 69
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH
<400> 69
<210> 70
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH
<400> 70
<210> 71
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH
<400> 71
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-255 VL CDR1 Kabat
<400> 72
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-255 VH CDR2 Kabat
<400> 73
<210> 74
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1、VH2、VH3 HFW1 Kabat
<400> 74
<210> 75
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HFW1 Kabat
<400> 75
<210> 76
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HFW1 Kabat
<400> 76
<210> 77
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HFW1 Kabat
<400> 77
<210> 78
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HFW1 Kabat
<400> 78
<210> 79
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239HFW1 Kabat Kabat
<400> 79
<210> 80
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 HFW1 Kabat
<400> 80
<210> 81
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1、VH2、VH3 HFW2 Kabat
<400> 81
<210> 82
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<200>
<223> Ab235、Ab236 HFW2 Kabat
<400> 82
<210> 83
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237、Ab239 HFW2 Kabat
<400> 83
<210> 84
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HFW2 Kabat
<400> 84
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 HFW2 Kabat
<400> 85
<210> 86
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH1HFW3 Kabat
<400> 86
<210> 87
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH2 HFW3 Kabat
<400> 87
<210> 88
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VH3 HFW3 Kabat
<400> 88
<210> 89
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HFW3 Kabat
<400> 89
<210> 90
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HFW3 Kabat
<400> 90
<210> 91
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HFW3 Kabat
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<210> 92
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR1 IMGT
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR2 IMGT
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 LCDR3 IMGT
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> Ab237 HCDR2 IMGT
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 HCDR3 IMGT
<400> 174
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR1 IMGT
<400> 175
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR2 IMGT
<400> 176
<210> 177
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 LCDR3 IMGT
<400> 177
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR1 IMGT
<400> 178
<210> 179
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR2 IMGT
<400> 179
<210> 180
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 HCDR3 IMGT
<400> 180
<210> 181
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR1 1MGT
<400> 181
<210> 182
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR2 IMGT
<400> 182
<210> 183
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 LCDR3 IMGT
<400> 183
<210> 184
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR1 IMGT
<400> 184
<210> 185
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR2 IMGT
<400> 185
<210> 186
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 HCDR3 IMGT
<400> 186
<210> 187
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR1 IMGT
<400> 187
<210> 188
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR2 IMGT
<400> 188
<210> 189
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 LCDR3 IMGT
<400> 189
<210> 190
<211> 1384
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人類Met蛋白質
<400> 190
<210> 191
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人類IgG2恆定區
<400> 191
<210> 192
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人類κ輕鏈區
<400> 192
<210> 193
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 輕鏈
<400> 193
<210> 194
<211> 450
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 重鏈
<400> 194
<210> 195
<211> 942
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> hu-MET-ECD
<400> 195
<210> 196
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VL核酸序列序列
<400> 196
<210> 197
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VL核酸序列序列
<400> 197
<210> 198
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VL核酸序列序列
<400> 198
<210> 199
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VL核酸序列
<400> 199
<210> 200
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VL核酸序列
<400> 200
<210> 201
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VL核酸序列
<400> 201
<210> 202
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241 VL核酸序列
<400> 202
<210> 203
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab242 VL核酸序列
<400> 203
<210> 204
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab243 VL核酸序列
<400> 204
<210> 205
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab244 VL核酸序列
<400> 205
<210> 206
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab245 VL核酸序列
<400> 206
<210> 207
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab246 VL核酸序列
<400> 207
<210> 208
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab247 VL核酸序列
<400> 208
<210> 209
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab248 VL核酸序列
<400> 209
<210> 210
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab249 VL核酸序列
<400> 210
<210> 211
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab250 VL核酸序列
<400> 211
<210> 212
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab251 VL核酸序列
<400> 212
<210> 213
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab252 VL核酸序列
<400> 213
<210> 214
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab253 VL核酸序列
<400> 214
<210> 215
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab254 VL核酸序列
<400> 215
<210> 216
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab255 VL核酸序列
<400> 216
<210> 217
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH核酸序列
<400> 217
<210> 218
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH核酸序列
<400> 218
<210> 219
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH核酸序列
<400> 219
<210> 220
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH核酸序列
<400> 220
<210> 221
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab239 VH核酸序列
<400> 221
<210> 222
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab240 VH核酸序列
<400> 222
<210> 223
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241 VH核酸序列
<400> 223
<210> 224
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab242 VH核酸序列
<400> 224
<210> 225
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab243 VH核酸序列
<400> 225
<210> 226
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab244 VH核酸序列
<400> 226
<210> 227
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab245 VH核酸序列
<400> 227
<210> 228
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab246 VH核酸序列
<400> 228
<210> 229
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab247 VH核酸序列
<400> 229
<210> 230
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab248 VH核酸序列
<400> 230
<210> 231
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab249 VH核酸序列
<400> 231
<210> 232
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab250 VH核酸序列
<400> 232
<210> 233
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab251 VH核酸序列
<400> 233
<210> 234
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab252 VH核酸序列
<400> 234
<210> 235
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab253 VH核酸序列
<400> 235
<210> 236
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab254 VH核酸序列
<400> 236
<210> 237
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab255 VH核酸序列
<400> 237
<210> 238
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同VL
<220>
<221> VARIANT
<222> 45
<223> Xaa=Lys或Gln
<220>
<221> VARIANT
<222> 65,67
<223> Xaa=Ser或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 71
<223> Xaa=Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 74
<223> Xaa=Thr或Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 76
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 80
<223> Xaa=Pro或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 85
<223> Xaa=Ile或Thr
<400> 238
<210> 239
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同VH
<220>
<221> VARIANT
<222> 77
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 84
<223> Xaa=Asp或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 118
<223> Xaa=Thr或Val
<400> 239
<210> 240
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同LFW1 Kabat
<400> 240
<210> 241
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同LFW2 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa=Lys或Gln
<400> 241
<210> 242
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同LFW3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 9,11
<223> Xaa=Ser或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa=Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa=Thr或Lys
<220>
<221> VARIANT
<222> 20
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 24
<223> Xaa=Pro或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 29
<223> Xaa=Ile或Thr
<400> 242
<210> 243
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同LFW4 Kabat
<400> 243
<210> 244
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同HFW1 Kabat
<400> 244
<210> 245
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同HFW2 Kabat
<400> 245
<210> 246
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同HFW3 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa=Ser或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa=Asp或Asn
<400> 246
<210> 247
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同HFW4 Kabat
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Thr或Val
<400> 247
<210> 248
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同LCDR1 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Ser或Asn
<400> 248
<210> 249
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同LCDR2 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=Tyr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Phe或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Asn或Asp
<400> 249
<210> 250
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同LCDR3 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Tyr或Asn
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Tyr或不存在
<400> 250
<210> 251
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR1 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Ile或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Ser或Asn
<400> 251
<210> 252
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR2 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Tyr或Phe
<400> 252
<210> 253
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR3 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Ile或Val
<400> 253
<210> 254
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR1 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 3,5
<223> Xaa=Thr或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Ser或Cys
<400> 254
<210> 255
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR3 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa=Gly或Arg
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Ile或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Thr或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Asp或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa=Pro或Gly
<220>
<221> VARIANI
<222> 12
<223> Xaa=Cys或Trp
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa=Tyr或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa=Asn或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa=Tyr或Phe
<400> 255
<210> 256
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同LCDR1 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Asn或Ser
<400> 256
<210> 257
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同LCDR2 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Phe或Ser
<400> 257
<210> 258
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同LCDR3 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Ile或Asn
<400> 258
<210> 259
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR1 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa=Thr或Ile
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Asn或Ser
<400> 259
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR2 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Tyr或Phe
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa=Ile或Thr
<400> 260
<210> 261
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同HCDR3 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Ile或Val
<400> 261
<210> 262
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239/Ab241-Ab255共同HCDR1 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 3,5
<223> Xaa=Ser或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Cys或Ser
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa=Ile或不存在
<400> 262
<210> 263
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237/Ab239/Ab241-Ab255共同HCDR3 IMGT
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa=Arg或Gly
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa=Ile或Tyr
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa=Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa=Gly或Thr
<220>
<221> VARIANT
<222> 9,12
<223> Xaa=Thr或Asp
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa=Gly或Pro
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa=Cys或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa=Phe或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa=Asn或不存在
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa=Tyr或不存在
<400> 263
<210> 264
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab241-Ab255共同LCDR3 Chothia
<400> 264
<210> 265
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 HCDR1
<400> 265
<210> 266
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 HCDR1
<400> 266
<210> 267
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238、HCDR1
<400> 267
<210> 268
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235 VH FR3
<400> 268
<210> 269
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab236 VH FR3
<400> 269
<210> 270
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237 VH FR3
<400> 270
<210> 271
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab238 VH FR2
<400> 271
<210> 272
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab237、Ab241-Ab255共同LCDR3 Chothia
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa=Ala或Gln
<400> 272
<210> 273
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab235/Ab236共同VL(具有信號序列)
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa=Thr或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (49)..(49)
<223> Xaa=Asn或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (58)..(58)
<223> Xaa=Ala或Pro
<220>
<221> misc_feature
<220>
<221> misc_feature
<222> (71)..(71)
<223> Xaa=Asn或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (111)..(111)
<223> Xaa=Ile或Asn
<400> 273
<210> 274
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 LCDR1
<400> 274
<210> 275
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 LCDR2
<400> 275
<210> 276
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 LCDR3
<400> 276
<210> 277
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 HCDR1
<400> 277
<210> 278
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 HCDR2
<400> 278
<210> 279
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 HCDR3
<400> 279
<210> 280
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 LCDR1
<400> 280
<210> 281
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 LCDR2
<400> 281
<210> 282
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 LCDR3
<400> 282
<210> 283
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 HCDR1
<400> 283
<210> 284
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 HCDR2
<400> 284
<210> 285
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 HCDR3
<400> 285
<210> 286
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 LCDR1
<400> 286
<210> 287
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 LCDR2
<400> 287
<210> 288
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 LCDR3
<400> 288
<210> 289
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 HCDR1
<400> 289
<210> 290
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 HCDR2
<400> 290
<210> 291
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 HCDR3
<400> 291
<210> 292
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 VH
<400> 292
<210> 293
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256 VL
<400> 293
<210> 294
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 VH
<400> 294
<210> 295
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab257 VL
<400> 295
<210> 296
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 VH
<400> 296
<210> 297
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab258 VL
<400> 297
<210> 298
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256輕鏈
<400> 298
<210> 299
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256重鏈鈕
<400> 299
<210> 300
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Ab256重鏈扣
<400> 300

Claims (203)

  1. 一種結合於人類MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段：a.如藉由MET磷酸化之抑制所測定，抑制細胞中之MET活性；b.誘導細胞中之MET降解；及c.抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長；且其中該抗體以人類IgG2同型形式比以IgG1同型形式更好地抑制MET之磷酸化、誘導MET降解或抑制腫瘤細胞增殖或腫瘤生長。
  2. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表1中所闡述的抗體Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及b.重鏈可變區(VH)，該VH包含如表2中所闡述的抗體Ab235-Ab237、Ab239或Ab241-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
  3. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：1、2及3之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：265、5及6之胺基酸序列。
  4. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：7、8及9之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：266、11及12之胺基酸序列。
  5. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：13、14及15之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、17及18之胺基酸序列。
  6. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：25、26及27之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：28、73及29之胺基酸序列。
  7. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：72、14及15之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、73及18之胺基酸序列。
  8. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含以下之VL： i.包含SASSSVX7YMF(SEQ ID NO：41)之胺基酸序列的VL CDR1，其中X7為任何胺基酸，例如N或S；ii.包含DTX13X14LAS(SEQ ID NO：43)之胺基酸序列的VL CDR2，其中X13為任何胺基酸，例如F或S，且X14為任何胺基酸，例如N或D；iii.包含QQWSX15YPYT(SEQ ID NO：44)之胺基酸序列的VL CDR3，其中X15為任何胺基酸，例如I或N；及b.包含以下之VH：i.包含胺基酸序列X1YWIEW(SEQ ID NO：36)之VH CDR1，其中X1為任何胺基酸，例如N或S；ii.包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK(SEQ ID NO：38)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X3為任何胺基酸，例如Y或F，且X4為任何胺基酸，例如N或S；及iii.包含PSTX6PPDC(SEQ ID NO：40)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X6為任何胺基酸，例如I或V。
  9. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：48)之胺基酸序列的VL，其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N。
  10. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
  11. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 (SEQ ID NO： 48)之胺基酸序列的VL，其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N；及b.包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
  12. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL。
  13. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
  14. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
  15. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL。
  16. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
  17. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
  18. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含以下之VL：i.包含SEQ ID NO：13或72之胺基酸序列的VL CDR1；ii.包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的VL CDR2；iii.包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的VL CDR3；及b.包含以下之VH：i.包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；ii.包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及iii.包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為 任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
  19. 如請求項2之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含以下之VL：i,包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列的VL CDR1；ii.包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列的VL CDR2；iii.包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列的VL CDR3；及b.包含以下之VH：i,包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；ii.包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及iii.包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
  20. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段， 其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：47)之胺基酸序列 的VL，其中X26為任何胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S。
  21. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如 G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
  22. 如請求項1之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 (SEQ ID NO：47)之胺基酸序列的VL，其中X26為S或G，X27為V或L，X28為D或E，X29為R或T，X30為T或E，X31為K或N，X32為A或S，X33為K或Q，X34為F或S，X35為F或S，X36為D或Q，X37為F或Y，X38為T或S，X39為T或K，X40為S或N，X41為P或S，且X42為A或S；及b.包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
  23. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL。
  24. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL。
  25. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL。
  26. 如請求項10之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL。
  27. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL。
  28. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL。
  29. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL。
  30. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
  31. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  32. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段 包含有包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  33. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  34. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
  35. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
  36. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  37. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  38. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  39. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  40. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  41. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  42. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及 b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  43. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  44. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  45. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  46. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  47. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段 包含：a.包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  48. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  49. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  50. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  51. 如請求項22之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
  52. 如請求項1至51中任一項之抗體或其抗原結合片段，其特異性結合於人類MET及猴MET，但不結合於小鼠MET或犬MET。
  53. 如請求項1至52中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中對MET活性之抑制在SNU-5細胞、A549細胞及/或Hop92細胞中發生。
  54. 如請求項53之抗體或其抗原結合片段，其中在SNU-5細胞中對MET活性之抑制的IC50介於約100pM至約500pM、約25pM至約200pM、或約40pM至約160pM、約50pM至約125pM、或約5pM至約100pM之間。
  55. 如請求項53之抗體或其抗原結合片段，其中在SNU-5細胞中對MET活性之最大抑制百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
  56. 如請求項55之抗體或其抗原結合片段，其中IgG2同型在SNU-5細胞中對MET活性之最大抑制百分比介於IgG1同型對MET活性之最大抑制百分比的1倍、1,2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。
  57. 如請求項53之抗體或其抗原結合片段，其中在A549細胞中對MET活性之抑制的IC50介於約40PM至約250pM、100pM至約500pM、約25 pM至約200pM、或約40pM至約160pM、約50pM至約125pM、或約5pM至約100pM之間。
  58. 如請求項53之抗體或其抗原結合片段，其中在Hop92細胞中對MET活性之抑制的IC50介於約100pM至約500pM、約25pM至約200pM、或約40pM至約160pM、約50pM至約125pM、或約5pM至約100pM之間。
  59. 如請求項57之抗體或其抗原結合片段，其中在Hop92細胞中對MET活性之抑制的IC50介於不結合SEMA結構域之人類化抗-MET抗體或結合於該SEMA結構域之二價IgG4抗-MET抗體的1倍、1/1.2、1/1.3、1/1.4、1/1.5、1/2、1/2.5、1/3、1/3.5、1/4、1/4.5、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/15、1/20、1/30、1/40、1/50、1/60、1/70、1/80、1/90或1/100之間。
  60. 如請求項1至59中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中在MET胺基酸殘基Tyr1234及/或Tyr1235處測定MET之磷酸化。
  61. 如請求項1至60中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中對MET降解之誘導在SNU-5細胞、A549細胞、U87MG細胞、H596細胞、Hop92細胞中或在腫瘤細胞中發生。
  62. 如請求項61之抗體或其抗原結合片段，其中在SNU-5細胞中對MET 降解之最大誘導百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
  63. 如請求項61之抗體或其抗原結合片段，其中IgG2同型在SNU-5細胞中對MET降解之最大誘導百分比介於IgG1同型對MET降解之最大誘導百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。
  64. 如請求項1至63中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中對腫瘤細胞增殖之抑制在SNU-5腫瘤細胞、EBC-1腫瘤細胞、U87MG腫瘤細胞、A549腫瘤細胞及/或H596腫瘤細胞中發生。
  65. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中對SNU-5腫瘤細胞增殖之抑制的最大抑制百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
  66. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中IgG2同型對SNU-5腫瘤細胞增殖之抑制的最大抑制百分比介於IgG1最大抑制百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。
  67. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中對EBC-1腫瘤細胞增殖 之抑制的最大抑制百分比為至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
  68. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中IgG2同型對EBC-1腫瘤細胞增殖之抑制的最大抑制百分比介於IgG1最大抑制百分比的1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍之間。
  69. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中在U87MG腫瘤細胞中對腫瘤細胞增殖之抑制的IC50介於約100nM至約500nM、約25nM至約200nM、或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM、或約5nM至約100nM之間。
  70. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中在A549腫瘤細胞中對腫瘤細胞增殖之抑制的IC50介於約100nM至約500nM、約25nM至約200nM、或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM、或約5nM至約100nM之間。
  71. 如請求項64之抗體或其抗原結合片段，其中在H596腫瘤細胞中對腫瘤細胞增殖之抑制的IC50介於約100nM至約500nM、約25nM至約200nM、或約40nM至約160nM、約50nM至約125nM、或約5nM至約100nM之間。
  72. 如請求項1至71中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該腫瘤生長為U87異種移植腫瘤模型、SNU15異種移植腫瘤模型或U87MG正位腫瘤模型。
  73. 如請求項1至72中任一項之抗體或其抗原結合片段，其抑制MET與細胞上肝細胞生長因子(HGF)之間的相互作用。
  74. 如請求項73之抗體或其抗原結合片段，其中該等細胞為A549細胞。
  75. 如請求項74之抗體或其抗原結合片段，其中對MET與該等A549細胞上HGF之間相互作用之抑制的IC50介於約0.01nM至10,000nM、0.01nM至1,000nM、0.1nM至500nM、0.1nM至100nM或0.1nM至50nM之間。
  76. 如請求項1至75中任一項之抗體或其抗原結合片段，其在細胞中誘導MET之泛素化。
  77. 如請求項76之抗體或其抗原結合片段，其中該等細胞為A549細胞。
  78. 如請求項1至77中任一項之抗體或其抗原結合片段，其在細胞中抑制MET信號傳導。
  79. 如請求項78之抗體或其抗原結合片段，其中該MET信號傳導為HGF依賴性的。
  80. 如請求項78之抗體或其抗原結合片段，其中該MET信號傳導為非HGF依賴性的。
  81. 如請求項78至80中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中MET信號傳導之抑制鑑別為AKT及/或MET磷酸化之抑制。
  82. 如請求項78至81中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該等細胞為A549細胞。
  83. 如請求項1至82中任一項之抗體或其抗原結合片段，其抑制HGF誘導的內皮細胞向間葉細胞之轉變(EMT)。
  84. 如請求項1至83中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中對HGF誘導之EMT的抑制藉由DU145細胞離散來測定。
  85. 如請求項84之抗體或其抗原結合片段，其中該DU145細胞離散之IC50為約50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、1nM、0.75nM、0.5nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、0.005nM或0.001nM。
  86. 如請求項84或85之抗體或其抗原結合片段，其中該DU145細胞離散 之抑制百分比為約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%。
  87. 如請求項1至86中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中與該抗體之IgG1同型相比，該抗體之IgG2同型改變MET二聚體組態。
  88. 一種結合於MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表1中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及b.重鏈可變區(VH)，該VH包含如表2中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
  89. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：1、2及3之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：265、5及6之胺基酸序列。
  90. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：7、8及9之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：266、11及12之胺基酸序 列。
  91. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：13、14及15之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、17及18之胺基酸序列。
  92. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：19、20及21之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：267、23及24之胺基酸序列。
  93. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：25、26及27之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：28、73及29之胺基酸序列。
  94. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：72、14及15之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：16、73及18之胺基酸序列。
  95. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及 VL CDR3分別包含SEQ ID NO：30、31及32之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：33、34及35之胺基酸序列。
  96. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含以下之VL：i.包含SEQ ID NO：13或72之胺基酸序列的VL CDR1；ii.包含SEQ ID NO：14之胺基酸序列的VL CDR2；iii.包含SEQ ID NO：15之胺基酸序列的VL CDR3；及b.包含以下之VH：i.包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；ii.包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及iii.包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y 或F。
  97. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含以下之VL：i.包含SEQ ID NO：25之胺基酸序列的VL CDR1；ii.包含SEQ ID NO：26之胺基酸序列的VL CDR2；iii.包含SEQ ID NO：27之胺基酸序列的VL CDR3；及b.包含以下之VH：i.包含SEQ ID NO：16、28或DX2YMA(SEQ ID NO：37)之胺基酸序列的VH CDR1，其中X2為任何胺基酸，例如S或C；ii.包含SEQ ID NO：17或46或SISSDGGGTYYRDSVKGX5(SEQ ID NO：39)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X5為任何胺基酸，例如R或不存在；及iii.包含SEQ ID NO：18或29或EX16X17YX18X19X20YYX21X22X23FX24X25(SEQ ID NO：45)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X16為任何胺基酸，例如G或R，X17為任何胺基酸，例如I或Y，X18為任何胺基酸，例如T或D，X19為任何胺基酸，例如T或G，X20為任何胺基酸，例如D或T，X21為任何胺基酸，例如P或G，X22為任何胺基酸，例如C或W，X23為任何胺基酸，例如Y或不存在，X24為任何胺基酸，例如N或D，且X25為任何胺基酸，例如Y或F。
  98. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO：19、20及21之胺基酸序列，且該VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO：267、23及24之胺基酸序列。
  99. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：47)之 胺基酸序列的VL，其中X26為任何胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S。
  100. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺基酸，例如 G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
  101. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 ID NO：47)之胺基酸序列的VL，其中X26為任何胺基酸，例如S或G，X27為任何胺基酸，例如V或L，X28為任何胺基酸，例如D或E，X29為任何胺基酸，例如R或T，X30為任何胺基酸，例如T或E，X31為任何胺基酸，例如K或N，X32為任何胺基酸，例如A或S，X33為任何胺基酸，例如K或Q，X34為任何胺基酸，例如F或S，X35為任何胺基酸，例如F或S，X36為任何胺基酸，例如D或Q，X37為任何胺基酸，例如F或Y，X38為任何胺基酸，例如T或S，X39為任何胺基酸，例如T或K，X40為任何胺基酸，例如S或N，X41為任何胺基酸，例如P或S，且X42為任何胺基酸，例如A或S；及b.包含 (SEQ ID NO：49)之胺基酸序列的VH，其中X49為任何胺 基酸，例如G或R，X50為任何胺基酸，例如G或T，X51為任何胺基酸，例如T或S，X52為任何胺基酸，例如S或N，X53為任何胺基酸，例如T或S，X54為任何胺基酸，例如Q或H，X55為任何胺基酸，例如V或T，且X56為任何胺基酸，例如S或A。
  102. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL。
  103. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL。
  104. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL。
  105. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL。
  106. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL。
  107. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL。
  108. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL。
  109. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列的VL。
  110. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
  111. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  112. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  113. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  114. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
  115. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的VH。
  116. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：68之胺基酸序列的VH。
  117. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  118. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  119. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  120. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含： a.包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  121. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：63之胺基酸序列的VH。
  122. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  123. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  124. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  125. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  126. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：64之胺基酸序列的VH。
  127. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  128. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  129. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列的VL；及 b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  130. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  131. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：65之胺基酸序列的VH。
  132. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：70之胺基酸序列的VH。
  133. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：69之胺基酸序列的VH。
  134. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段 包含：a.包含以下之VL：i.包含SASSSVX7YMF(SEQ ID NO：41)之胺基酸序列的VL CDR1，其中X7為任何胺基酸，例如N或S；ii.包含DTX13X14LAS(SEQ ID NO：43)之胺基酸序列的VL CDR2，其中X13為任何胺基酸，例如F或S，且X14為任何胺基酸，例如N或D；iii.包含QQWSX15YPYT(SEQ ID NO：44)之胺基酸序列的VL CDR3，其中X15為任何胺基酸，例如I或N；及b.包含以下之VH：i.包含胺基酸序列X1YWIEW(SEQ ID NO：36)之VH CDR1，其中X1為任何胺基酸，例如N或S；ii.包含EILPGSDX3TKYX4EKFKGK(SEQ ID NO：38)之胺基酸序列的VH CDR2，其中X3為任何胺基酸，例如Y或F，且X4為任何胺基酸，例如N或S；及iii.包含PSTX6PPDC(SEQ ID NO：40)之胺基酸序列的VH CDR3，其中X6為任何胺基酸，例如I或V。
  135. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：48)之胺基 酸序列的VL，其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例 如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N。
  136. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
  137. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含 (SEQ ID NO： 48)之胺基酸序列的VL，其中X43為任何胺基酸，例如T或A，X44為任何胺基酸，例如N或S，X45為任何胺基酸，例如A或P，X46為任何胺基酸，例如F或S，X47為任何胺基酸，例如N或D，且X48為任何胺基酸，例如I或N；及 b.包含 (SEQ ID NO：50)之胺基酸序列的VH，其中X57為任何胺基酸，例如V或A，X58為任何胺基酸，例如I或T，X59為任何胺基酸，例如N或S，X60為任何胺基酸，例如Y或F，X61為任何胺基酸，例如T或I，X62為任何胺基酸，例如N或S，X63為任何胺基酸，例如S或N，且X64為任何胺基酸，例如I或V。
  138. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL。
  139. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
  140. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：66之胺基酸序列的VH。
  141. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL。
  142. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
  143. 如請求項88之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：67之胺基酸序列的VH。
  144. 一種結合於MET之Sema結構域的經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表5中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及b.重鏈可變區(VH)，該VH包含如表6中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
  145. 一種結合於MET之Sema結構域的經分離之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.輕鏈可變區(VL)，該VL包含如表7中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VL互補決定區1(CDR1)、VL CDR2及VL CDR3；及b.重鏈可變區(VH)，該VH包含如表8中所闡述的抗體Ab235-Ab255中任一者之VH互補決定區1(CDR1)、VH CDR2及VH CDR3。
  146. 一種結合於MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的VL。
  147. 一種結合於MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含有包含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的VH。
  148. 一種結合於MET之Sema/PSI結構域的單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：a.包含SEQ ID NO：62之胺基酸序列的VL；及b.包含SEQ ID NO：71之胺基酸序列的VH。
  149. 如請求項1至148中任一項之抗體或其抗原結合片段，其抑制癌轉移。
  150. 如請求項1至149中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG恆定區。
  151. 如請求項150之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG2恆定區。
  152. 如請求項150之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG2a恆定區。
  153. 如請求項150之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG2b恆定區。
  154. 如請求項150之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG2a恆定區及人類IgG2b恆定區之混合物。
  155. 如請求項1至149中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類IgG2 Fc區。
  156. 如請求項1至155中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類κ輕鏈恆定區。
  157. 如請求項1至155中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體包含人類λ輕鏈恆定區。
  158. 如請求項1至157中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為嵌合抗體或人類化抗體。
  159. 如請求項1至158中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體為雙特異性抗體或其抗原結合片段。
  160. 如請求項1至159中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段融合於異源多肽。
  161. 如請求項1至157中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該人類化抗體為去免疫型抗體或複合人類抗體。
  162. 如請求項1至161中任一項之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段與藥劑結合。
  163. 如請求項162之抗體或其抗原結合片段，其中該藥劑適合於成像及療法。
  164. 如請求項162或163之抗體或其抗原結合片段，其中該藥劑為放射性同位素、量子點或其他奈米粒子。
  165. 如請求項162之抗體或其抗原結合片段，其中該藥劑為毒素。
  166. 如請求項165之抗體或其抗原結合片段，其中該毒素為相思子素、蓖麻毒素A、假單胞菌外毒素、霍亂毒素或白喉毒素。
  167. 如請求項1至166中任一項之抗體。
  168. 一種組合物，其包含治療有效量的如請求項1至166中任一項之抗體或抗原結合片段。
  169. 一種組合物，其包含治療有效量的如請求項167之抗體。
  170. 如請求項168之組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
  171. 如請求項169之組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
  172. 一種聚核苷酸，其包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VH鏈區、VL鏈區或VL鏈區及VH鏈區兩者的核苷酸序列。
  173. 一種聚核苷酸，其包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之重鏈、輕鏈或重鏈及輕鏈兩者的核苷酸序列。
  174. 如請求項172或173之聚核苷酸，其中該聚核苷酸可操作地連接於啟動子。
  175. 一種聚核苷酸群體，其包含(i)包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的第一聚核苷酸，及(ii)包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的第二多肽。
  176. 如請求項175之聚核苷酸群體，其中該第一聚核苷酸可操作地連接於 第一啟動子，且其中該第二聚核苷酸可操作地連接於第二啟動子。
  177. 一種載體，其包含如請求項172至174中任一項之聚核苷酸。
  178. 一種載體群體，其包含(i)包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的第一載體及(ii)包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的第二載體。
  179. 一種載體群體，其包含(i)第一載體，該第一載體包含可操作地連接於第一啟動子的編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列，及(ii)第二載體，該第二載體包含可操作地連接於第二啟動子的編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列。
  180. 一種細胞，其包含如請求項172至174中任一項之聚核苷酸。
  181. 一種細胞，其包含如請求項175或176之聚核苷酸群體。
  182. 一種細胞，其包含如請求項177之載體。
  183. 一種細胞，其包含如請求項178或179之載體群體。
  184. 一種經分離之細胞，其產生如請求項1至166中任一項之抗體或抗原結合片段。
  185. 一種細胞群體，其包含(i)第一宿主細胞，該第一宿主細胞包含有包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的聚核苷酸，及(ii)第二宿主細胞，該第二宿主細胞包含有包含編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的聚核苷酸。
  186. 一種細胞群體，其包含(i)第一宿主細胞，該第一宿主細胞包含有包含可操作地連接於第一啟動子的編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列的聚核苷酸，及(ii)第二宿主細胞，該第二宿主細胞包含有包含可操作地連接於第二啟動子的編碼如請求項1至166中任一項之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列的聚核苷酸。
  187. 一種套組，其包含如請求項1至166中任一項之抗體或抗原結合片段。
  188. 一種在個體中控制、保護免患或治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如請求項1至166中任一項之抗體或抗原結合片段。
  189. 一種在個體中控制、保護免患或治療癌症之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如請求項168至171中任一項之組合物。
  190. 如請求項188或189之方法，其中該癌症為結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、肺癌、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、非小細胞肺癌、胃癌(stomach cancer)、食道癌、腦癌、肝癌、腎癌、頭頸癌、甲狀腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰臟癌、乳癌、結腸癌、口腔癌、肌肉癌、骨癌、神經膠質瘤或淋巴癌。
  191. 一種在個體中控制、預防、保護免患或治療癌轉移之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如請求項1至166中任一項之抗體或抗原結合片段。
  192. 一種在個體中控制、預防、保護免患或治療癌轉移之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如請求項168至171中任一項之組合物。
  193. 如請求項188至192中任一項之方法，其中該患者表現在人類MET基因之外顯子14中包含一或多個缺失的MET。
  194. 如請求項188至192中任一項之方法，其中該患者表現在MET胺基酸殘基Thr1010處包含異白胺酸胺基酸取代之MET蛋白質。
  195. 如請求項188至194中任一項之方法，其中該個體患有癌症，或正用抗癌治療劑對癌症進行治療。
  196. 如請求項188至195中任一項之方法，其中該癌症包含表現MET之癌 細胞。
  197. 如請求項188至196中任一項之方法，其中該癌症包含表現EGFR之癌細胞。
  198. 如請求項188至197中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與另一種藥劑。
  199. 如請求項198之方法，其中該藥劑為化學治療劑。
  200. 如請求項188至199中任一項之方法，其中該方法為控制方法。
  201. 如請求項188至199中任一項之方法，其中該方法為治療方法。
  202. 一種製造特異性結合於人類MET之Sema結構域的抗體或其抗原結合片段的方法，其包含培養如請求項180至186中任一項之細胞或細胞群體以表現該抗體或抗原結合片段。
  203. 一種製造特異性結合於人類MET之Sema結構域的抗體或其抗原結合片段的方法，其包含表現如請求項172至176中任一項之聚核苷酸。
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