DK169478B1

DK169478B1 - 7-oxomitosan-derivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf og farmaceutiske præparater indeholdende disse

Info

Publication number: DK169478B1
Application number: DK401385A
Authority: DK
Inventors: Dolatrai Mohanlal Vyas; Terrence William Doyle; Richard A Partyka
Original assignee: Squibb Bristol Myers Co
Priority date: 1984-09-04
Filing date: 1985-09-03
Publication date: 1994-11-07
Also published as: KR900008570B1; NO169441B; KR860002507A; KR900008840B1; CH667094A5; ES8702408A1; DE3531453C2; BE903169A; GB2196006A; CY1585A; SE9004157D0; AU581673B2; CA1254892A; DK401385A; SE465929B; DE3531453A1; NL8502383A; DK401385D0; PT81083A; SE8504093D0

Description

i DK 169478 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte mitomycinanal oger indeholdende en di sulfidgruppe (klasse 260, underklasse 326.24) og fremgangsmåder til fremstilling deraf og farmaceutiske præparater indeholdende disse. Mitomycin A er et antibiotikum, hvis anvendelse er 5 kendt, og de 7-0-substituerede mitosananaloger deraf kan anvendes på lignende måde.

Nomenklatur - Det systematiske navn for mitomycin A ifølge Chemical Abstracts baseret på en nylig revision (Shirhata et al., J. Am. Chem.

Soc., 105, 7199 (1983)) er: 10 [laS-(laj8,8/3,8aa,8bØ)]-8-[((aminocarbonyl)oxy)methyl]-6,8a-dimeth- oxy-l,la,3,8,8a,8b-hexahydro-5-methyl-arizino[2',3',3,4]-pyrrolo-[l,2-a]indol-4,7-dion, iht. hvilket navn azirinopyrroloindolringsystemet er nummereret som følger: 15 I. 8 6 iT^\8a V^8b T>1 4 ' 2^' 20

Chemical Abstracts

Et nomenklatur-trivi al system, som har fundet udbredt anvendelse i 25 mitomycin-litteraturen, identificerer det foregående ringsystem omfattende flere af de karakteristiske substituenter af mitomycinerne som mitosan.

10 O CH-OCONH, 30 ϋ \

L

J> ° 3 2 35

Mi tosan DK 169478 B1 2

Iht. dette system er mitomycin A 7,9a-dimethoxymitosan og mitomycin C er 7-amino-9a-methoxymitosan. Hvad angår den stereokemiske konfiguration af produkterne ifølge opfindelsen, er det meningen, at de, når de identificeres ved stamnavnet "mitosan" eller ved en strukturformel, skal 5 identificeres ved samme stereokemiske konfiguration som den for mitomycin A eller C.

O CH2OCONH2 R» ^1 , Mitomycin A R'=R'j=0CH3 10 _ Mitomycin C R'=NH,,, R'^OCH, o 'V·""'"'

Mitomycin C er et antibiotikum, der fremstilles ved fermentering og salges for tiden med godkendelse af "Food and Drug Administration" til 15 behandling af dissemineret adenocarcinom i mave eller bugspytkirtel i afprøvede kombinationer med andre godkendte kemoterapeutiske midler og til palliativ behandling, når andre modaliteter har svigtet ("Mutamycin®", Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13221,

Physicians' Desk Reference, 37. udgave, 1983, pp. 747 og 748). Mitomycin 20 C og dens fremstilling ved fermentering er omhandlet i US patentskrift nr. 3.660.578, udstedt d. 2. maj 1972, der kræver prioritet fra tidligere ansøgninger inklusive en ansøgning indleveret i Japan d. 6. april 1957.

Strukturen af mitomycinerne A, B, C og porfiromycin blev først 25 offentliggjort af J.S. Webb et al., Lederle Laboratories Division American Cyanamid Company, J. Am. Chem. Soc., 84, 3185-3187 (1962). En af de kemiske transformationer, der anvendtes ved denne strukturundersøgelse til sammenligning af mitomycin A med mitomycin C, var omdannelsen af førstnævnte, 7,9a-dimethoxymitosan, ved omsætning med ammoniak 30 til sidstnævnte, 7-amino-9a-methoxymitosan. Erstatning af 7-methoxygrup-pen af mitomycin A har vist sig at være en reaktion af betydelig interesse ved fremstillingen af aktive antitumor-derivater af mitomycin C. Fornylig har det vist sig, at de stereokemiske konfigurationer af 1-, la-, 8a- og 8b-stiHingerne er som vist ovenfor i forbindelse med 35 nomenklaturen ifølge Chemical Abstracts (Shirhata et al., J. Am. Chem.

Soc., 105, 7199-7200 (1983)). Den tidligere litteratur henviser til enantiomeren.

De følgende artikler og patentskrifter omhandler bl.a. omdannelse DK 169478 B1 3 af mitomycin A til et 7-substitueret aminomitomycin C derivat med antitumor-aktivitet. Formålet med denne forskning var fremstilling af derivater, der var mere aktive og især mindre toxiske end mitomycin C:

Matsui et al., J. Antibiotics, XXI, 189-198 (1969), 5 Konishita et al., J. Med. Chem., 14, 103-109 (1971),

Iyengar et al., J. Med. Chem., 24, 975-981 (1981),

Iyengar, Sami, Remers og Bradner, Abstracts of Papers, 183.

Årsmøde af The American Chemical Society, Las Vegas, Nevada, marts 1982, Abstract nr. MEDI 72, 10 Cosulich et al., US-patentskrift nr. 3.332.944, udstedt d. 25. juli 1967,

Matsui et al., US-patentskrift nr. 3.420.846, udstedt d. 7.januar 1969,

Matsui et al., US-patentskrift nr. 3.450.705, udstedt d. 17. juni 15 1969,

Matsui et al., US-patentskrift nr. 3.514.452, udstedt d. 26. marts 1970,

Nakano et al., US-patentskrift nr. 4.231.916, udstedt d. 4. november 1980, 20 Remers, US-patentskrift nr. 4.268.676, udstedt d. 19. maj 1981.

De følgende patentansøgninger omhandler fremstillingen af 7-sub-stituerede aminomitomycin C derivater, hvori substituenten omfatter en disulfidbinding.

Kono et al., Europæisk patentansøgning nr. 116.208 (1984), 25 Vyas et al., DE offentliggørelsesskrift nr. 3.413.489 (1984).

7-alkoxy-substituerede mitosaner, der er strukturelt beslægtede med mitomycin A, er i en artikel af Urakawa et al., J. Antibiotics, 23, 804-809 (1980) beskrevet som værdifulde antibiotika med aktivitet over for eksperimentelle tumorer i dyr.

30 Mitomycin C er det vigtigste ved fermentering fremstillede mitomycin og er den kommercielt tilgængelige form. Nutidig teknologi til omdannelse af mitomycin C til mitomycin A lider af et antal mangler. Hydrolyse af mitomycin C til den tilsvarende 7-hydroxy-9a-methoxy-mitosan og efterfølgende methylering af dette stof kræver diazomethan, 35 et stof, hvis håndtering i en produktionsmæssig målestok er meget risikabel, og 7-hydroxy-mellemproduktet er meget ustabilt (Matsui et al., J. Antibiotics, XXI, 189-198 (1968)). Et forsøg på at undgå disse vanskeligheder omfatter anvendelsen af 7-acyloxymitosaner (Kyowa Hakko Kogyo DK 169478 B1 4 KK japansk patentskrift nr. J5 6073-085, Farmdoc nr. 56227 D/31). Alko-holyse af mitomycin A som beskrevet af Urakawa et al., J. Antibiotics, 23, 804-809 (1980), er udelukkende begrænset til fremstillingen af specifikke 7-alkoxy strukturtyper p.g.a. de alkoholiske udgangsmaterialers 5 tilgængelighed og reaktivitet.

Den foreliggende opfindelse angår en gruppe mitomycin A analoger med en organisk dithio-substituent inkorporeret i alkoxygruppen i 7-stillingen. Disse forbindelser er repræsenteret ved den følgende almene formel (I) 10 o « ° CH2OOiH2 R-SS-A1 k-0 ,™ Y Os;l hvori R er Cj_j-alkanoylethyl, C^-alkanoyloxyethyl, Cj^alkanoylaminoethyl, l,2-dihydroxy-prop-3-yl, carboxyethyl eller et farmaceutisk acceptabelt 20 salt deraf, carboxyaminoethyl eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, N-methylimidazolylmethyl, di-Cjg-alkylaminoethyl, phenyl, som er usubstitueret eller eventuelt substitueret med en eller to substituenter valgt blandt nitro, methoxy, amino og carboxy, eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, pyridyl, som eventuelt er substitueret med 25 nitro, eller en glutation afledet rest med formlen nh2 ho2cchch2ch2conh 30 hcch2- ho2cch2nhco 35 eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf, R1 er hydrogen eller lavere al kyl, og Alk er Cjg-alkylen.

Forbindelserne ifølge opfindelsen virker som inhibitorer af eksperimentelle tumorer i dyr. Især er de i eksemplerne nr. 2 og 3-16 DK 169478 B1 5 angivne forbindelser hidtil ukendte stoffer. De anvendes på lignende måde som mitomycin C. I afhængighed af deres toxicitet indstilles de anvendte doseringer i forhold til toxiciteten af mitomycin C. I de tilfælde, hvor den nye forbindelse er mindre toxisk, anvendes en højere 5 dosis.

I et yderligere aspekt af opfindelsen tilvejebringes en ny fremgangsmåde til fremstilling af mitosaner med formel (I). Denne nye fremgangsmåde omfatter omsætning af mindst ét ækvivalent af en tri azen med formel (VI) 10

Ar-N=N-NH-Alk-SS-R (VI) hvor R og Alk har den i krav 1 angivne betydning, og Ar er den organiske rest af en diazoterbar aromatisk amin, med en ækvivalent af en mitosan 15 med formel (IV)

O

O 11 jj CH2OCNH2 ,OCH3 2o 17 hvori R* har den i krav 1 angivne betydning, under reaktionsbetingelser 25 i et inert organisk opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. 0° til ca. 60°, indtil der opnås en tilstrækkelig mængde af produktet med formel (I), og når R i forbindelsen med formel (I) er nitrosubstitueret pyridyl, omdannes eventuelt denne ved omsætning i et inert opløsningsmiddel ved en temperatur fra 0°C til 60°C, eventuelt i nærvær af mindst 30 én ækvivalent af en stærk base, med en thiol med formlen R'SH, hvor R' har den ovenfor for R angivne betydning bortset fra nitrosubstitueret pyridyl, og om ønsket omdannes, hvor det er muligt, en opnået forbindelse med formel (I) til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Ovennævnte derivater ifølge opfindelsen, hvor R er nitrosubsti-35 tueret pyridyl, har formlen (Ib) DK 169478 B1 6 _/N02 * p

A lt X

(' 'Vss-Alkr—o, Λ \ / ΎΓ \ OCH, \=ζΐ/ | | V·3 Ib 5 CH3-^\X^n ^J-r

Di sulfidmitosanerne med formel (Ib) fremstilles iht. den heri beskrevne triazen-fremgangsmåde. Mere specielt er mitosanen med formel 10 (Ib), hvori Alk er ethyl en, og R* er hydrogen, beskrevet i eksempel 2 og i US patentansøgning nr. 646.888, indleveret d. 4. september 1984. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nedenfor i skema 2.

Skema 2

15 O

o 11 ° ch2ocnh2

_ - ^-r1 Ar-N=N-NH-Al k-SS-R

20 ^3 π \

VI

TV

hvori R, R* og Alk har de ovenfor anførte betydninger, og Ar er den 25 organiske rest af en diazotiserbar aromatisk amin.

De anvendte aryltriazener med formel (VI) kan fremstilles ifølge de generelle fremgangsmåder, som er beskrevet af E.H. White et al., i Org. Syn., vol. 48, 1968, p. 102-105 og Tetrahedron Letters, nr. 21, 1961, p.

761 bortset fra, at de deri anvendte alkylaminer erstattes med aminodi-30 sulfider med formel (XII) R-SS-A1k-NHg (XII) hvor R og Alk har den ovenfor angivne betydning.

35 Aminodisulfider med formel (XII) er kendte forbindelser og kan fremstilles ved forskellige fremgangsmåder. Eksempelvis kan de fremstilles ved omsætning af den passende thiol RSH med et Bunte-salt med formel DK 169478 B1 7 NH2Alk-SS03Na (XV) eller med et sulfenylthiocarbonat med formel 5 0 NH2Alk-SSCOCH3 (XVI) i henhold til den af Klayman et al., J. Org. Chem., 29, 3737-3738 (1964) 10 beskrevne metode.

Di sulfidudgangsmaterialet med formel (XII) fremstilles fortrinsvis ved omsætning af den passende thiol med et sulfenylthiocarbonat med formel (XVI). Dette er fremgangsmåden ifølge S.J. Brois et al., J. Am.

Chem. Soc., 92, 7629-7631 (1970).

15 Som en foretrukken udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfin delsen tilvejebringes følgende variant til fremstilling af disulfidmito-saner med formel (la) o ch9oInh7 20 R2-SS-CH,CHo0 i TK!3 Ia CH3 S^N0> 25 2 hvori R har samme betydning som R bortset fra 3-nitro-2-pyridyl.

Til fremstilling af di sulfidmitosanerne med formel (Ia) er det foretrukket at anvende 9a-methoxy-7-[2-(3-nitro-2-pyridyldithio)- ethoxy]mitosanen med formel (XVII) i en thiol udvekslingsproces med en o 30 passende organisk thiol med formel R SH som vist i reaktionsskema 3.

Arsagen til dannelsen af di sulfiderne med formel (Ia) er stabiliteten af biproduktet, nemlig 3-nitro-2-mercaptopyridin, der kun består som thionen (XVIII).

8 UK ΒΊ

Skema 3 /πΓ2 X C^°^®2 W 2 2 Y |^\Λ + r2sh _^

XVII

10 2 ,? CH-oInH- R -SS-CH.CH-O^^^^ Å ^Χΐί02

15 i χν^ + (X

ch3'an^X^*n· ^jh XVIII- 20 la

Hvis der alternativt ønskes fremstillet mitosaner med formel (I), hvori Alk har anden betydning end ethyl en, såsom trimethylen eller propyl en, anvendes den hensigtsmæssige tri azen med formel (VI) i den i 25 skema 2 viste fremgangsmåde til fremstilling af di sulfidmitosaner med formel (Ib)

N°2 O

/r\ 1 <=2^ 30 \=/ 1 ifX? 113 \ 3^"r1 hvori Alk og R* har de ovenfor anførte betydninger.

35 I forbindelse med eksemplerne beskrives to almene syntetiserings fremgangsmåder til fremstilling af lipofile såvel som hydrofile mi tosaner med formel (la). Den almene fremgangsmåde A anvendes til fremstilling af enten lipofile eller moderat opløselige di sulfider med DK 169478 B1 9 formel (la), hvorimod den almene fremgangsmåde B anvendes til vandopløselige disulfider med formel (la), som fortrinsvis isoleres som natriumsalte eller som zwitterionformer. Fortrinsvis anvendes mindst ét ækviva-2 lent mercaptan R SH per ækvivalent mitosen med formel (XVII), og omsæt- 5 ningen kan udføres i nærværelse af ca. 1 ækivalent base per ækvivalent 2 mercaptan R SH. Foretrukne baser er de tertiære aminer, fx. triethyl-amin, N-methylmorpholin, N-methylpiperidin, pyridin, 2,6-1 utidin og de uorganiske baser, fx. natriumbicarbonat, kaliumcarbonat, kaliumbicarb-onat o.l. Egnede inerte opløsningsmidler til omsætning af udgangsmate-10 ri al er med formel (XVII) og R SH er de lavere al kanoler, lavere al kan-syrer-lavere alkylestere, lavere alifatiske ketoner, cykliske alifatiske ethere, lavere polyhalogenerede alifatiske carbonhydrider og vand. De organiske opløsningsmidler indeholder op til 8 carboatomer, men opløsningsmidler, der koger ved temperaturer på mindre end 100°C, fore-15 trækkes. Specielt foretrukne opløsningsmidler er methylenchlorid, methanol, acetone, vand og blandinger deraf. Omsætningen kan udføres ved reaktionsblandingens tilbagesvalingstemperatur eller ved op til ca.

60°C. Det er foretrukket at udføre omsætningen ved stuetemperatur eller derunder, fx. i området fra 0 til 25°C.

20 De ovennævnte reaktionsbetingelser og forholdsregler kan generelt anvendes til fremstilling af andre disulfidmitosaner med formlerne (la) og (Ib) iht. den i skema 3 afbildede almene fremgangsmåde.

Forbindelser ifølge opfindelsen anses for at besidde antibakteriel aktivitet over for gram-positive og gram-negative mikroorganismer på 25 lignende måde som iagttaget i tilfælde af de naturligt forekommende mitomyciner, og er således potentielt værdifulde som tereapeutiske midler til behandling af bakterie-infektioner hos mennesker og dyr.

Aktivitet over for P-388 murinleukæmi 30 Tabel 1 indeholder resultaterne af laboratorieforsøg med CDF^-mus,

* C

der intraperitonealt har fået implanteret et tumorpodestof i form af 10 ascites-celler af P-388 museleukæmi og er behandlet med forskellige doser af enten en testforbindelse med formel (I), eller med mitomycin C. Forbindelserne administreredes ved intraperitoneal injektion. Grupper af 35 6 mus anvendtes til hver doseringsmængde og de behandledes med en enkelt dosis af forbindelsen dagen efter podningen. En gruppe af 10 saltvandsbehandlede kontrolmus medtoges i hver forsøgsserie. De mitomycin C behandlede grupper medtoges som en positiv kontrol. Der førtes en 30 dages DK 169478 B1 10 protokol over den gennemsnitlige overlevelsestid udtrykt i dage for hver gruppe mus, og antallet af overlevende ved slutningen af 30 dages perioden noteredes. Musene vejedes før behandlingen og igen på sjettedagen. Vægtforandringen toges som et mål for lægemidlets toxicitet. Der 5 anvendtes mus, som vejede 20 g, og et vægttab på op til ca. 2 g betragtedes ikke som usædvanligt stort. Resultaterne bestemtes udtrykt i % T/C, som er forholdet mellem den gennemsnitlige overlevelsestid for den behandlede gruppe og den gennemsnitlige overlevelsestid for den saltvandsbehandlede kontrolgruppe ganget med 100. De saltvandsbehandlede 10 kontroldyr døde sædvanligvis inden for 9 dage. Den "maksimale virkning" i den følgende tabel er udtrykt i % T/C, og den dosis, der giver denne virkning, er anført. Værdierne i parentes er de med mitomycin C som den positive kontrol opnåede værdier ved sarane forsøg. Således kan forholdet mellem den relative aktivitet af de anførte substanser og mitomycin C 15 vurderes. Den minimale virkning udtrykt i % T/C ansås for at være 125.

Den minimale virksome dosis, der er rapporteret i den følgende tabel, er den dosis, der giver en % T/C på ca. 125. De i hvert tilfælde angivne 2 værdier i søjlen benævnt "gennemsnitlig vægtforandring" er hhv. den gennemsnitlige vægtforandring per mus ved den maksimale virksomme dosis 20 og ved den minimale virksomme dosis.

DK 169478 B1 11 tr> ^ co cn cm ..

σ> γη 2 ^ o o) .E + + 'JZ i.

.t: ό

C C 0 ^ —I CM

in ro _ - .

c i- o ^

C o *H , ro ·—I

QJ M- I T il C +-> 1 C O) <U « 0 > c CM ^ ^ -t C O ° o o -X · v L.

.r in

> in _ O ro Q

E

c 1 « l/)

_ O

c On c° 00 cm # » i D ~ S c Q ; Ξ r “ i « s «η ?Λ Έ t - ,E -o Φ ^ M f-_U3 ^ VO > ^ y; o=y x / \ i- ,η ro s.

i -X ) > 1 fi : s 5-ry 1 '£ i

ω 00 \ f B — "Γ— E^E

„Ω 1 \ { w ro ^ . ro ^ o fU

fu Q- / - - \ ro fn ro vo Cj) co to I” q_ / \_ n 01 ro o O O) _ ru h-O ^ (J Λ ^ λ ro _ ^ /".......“\ H” ED ® Tj* ro E ^ +u

I o a« - S S 2 2 s s S

Φ r X 03 ’d" -O cc U con Ξ 00

C CM (M X _ C

~ 2X 5 « U

^ 2 £ ™ >.

XN rX^Xi r^i ° .2 I

• 0\zXj][vJj CNC-, CT .2 f “ §V W s-s αε w x ncnx ™ c , u) m in tn -z <ro CM cm CM O — X X x X U +J ™ · « U U U U n O) C ^ Æ CM CM CM CM tn cura^T- X x X X U > ^ _· ro V V Y Y g;?™™ S ·“ OJ .? ϋ l/l IJ , - · „ E 5 Φ ro E O) <u ra ·— S C J£ C ^ Ό — \ c ro x

4B ro 0) ro *- fB

Y α. E en D >

£ E

xi ro 0 x ro „ r~~ ....

° *· ^ 1-1 r* CM 00 M* x ro DK 169478 B1 12

Aktivitet over for B16-melanom

Tabel 2 indeholder resultater af antitumor-tests under anvendelse af B16-melanomer dyrket i mus. Der anvendtes BDFj-mus, som podedes subkutant med tumorimplantatet. Der førtes en 60 dages protokol. Grupper 5 af 10 mus anvendtes for hver testet doseringsmængde, og den gennemsnitlige overlevelsestid for hver gruppe bestemtes. Kontrol dyr, der var podet på samme måde som testdyrene og behandlet med injektionsvehi kl en uden lægemiddel udviste en gennemsnitlig overlevelsestid på 24 dage. Overlevelsestiden i forhold til overlevelsestiden af kontrol dyrene (% 10 T/C) anvendtes som en målestok for effektiviteten, og den maksimale virksomme dosis og minimale virksomme dosis for hver testforbindelse bestemtes. Den minimale virksomme dosis bestemtes som den dosis, der udviste en % T/C-værdi på 125. For hvert dosisniveau behandledes testdyrene med testforbindelsen på dag 1, 5 og 9 ad intravenøs vej.

15

Tabel 2 B16-melanom

Forbindelse i Maksimal virkning Minimal Gennemsnitlig 1 12 20 eksempel nr. % T/C dosis virksom dosis vægtforandring 10 167(112)3 1,6(3)3 <0,4 -0,9; +1,4 >214(145) 2,4(3) <1,6 -2,4; -1,9 25 2 110(112) 3,2(3) 3,2 +0,5 +0,5 8 152(145) 1,6(3) <1,6 -0,6 -0,6 30 1. mg/kg legemsvægt 2. gennemsnitligt antal g/dag for hver maksimal og minimal virksom dosis 3. værdier i parentes er for mitomycin C tested i samme forløb 35 I betragtning af den iagttagne antitumoraktivitet i forbindelse med eksperimentelle dyretumorer kan forbindelserne ifølge opfindelsen anvendes til inhibering af tumorer i pattedyr. Til dette formål administreres disse systematisk til et pattedyr, der lider af en tumor, i en i det DK 169478 B1 13 væsentlige ikke-toxisk dosis med antitumor-virkning.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er primært beregnet til anvendelse i injektionsform på lignende måde og til samme formål som mitomycin C. Lidt større eller mindre doser kan anvendes i afhængighed af 5 den specielle tumor-følsomhed. De kan let distribueres som tørre farmaceutiske præparater indeholdende fortyndingsmidler, puffere, stabiliseringsmidler, opløselighedsmidler og ingredienser, der bidrager til farmaceutisk anvendeligehd. Disse præparater konstitueres så med et inji-cerbart flydende medium, som er fremstillet på bestilling, umiddelbart 10 før brugen. Egnede injicerbare væsker omfatter vand, isotonisk saltvand o.l.

I de følgende fremgangsmåder og eksempler er alle temperaturer angivet i °C og smeltepunktene er ukorrigerede. De protonkernemagnetiske resonansspektra (½ NMR) blev optegnet på et "Varian XL100", "Joel FX-15 90Q" eller "Bruker WM 360" spektrometer i enten pyridin-d_g eller D2O som vist. Når pyridin-dg anvendes som opløsningsmiddel, anvendes pyridi nresonansen ved 5=8,57 som en intern reference, hvorimod TSP anvendes som intern reference i tilfælde af DgO som opløsningsmiddel. Kemiske skift er rapporteret i 5 enheder og koblingskonstanter i Hertz.

20 Opdelingsmønstre er betegnet som følger: s, singlet, d, dublet, t, triplet, q, kvartet, m, multiplet, bs, bredt signal, dd, dublet af dublet, dt, dublet af triplet. Infrarøde spektre bestemtes enten på et "Beckman Model 4240" spektrometer eller et "Nicolet 5DX FT"-IR-spektro-meter og er angivet i reciproke centimetre. Ultraviolette (UV) spektre 25 bestemtes enten på et "Cary Model 290" spektrometer eller et "Hewlitt Packard 8450A" spektrometer forsynet med en multidiodedetektor. Tyndt-1agskromatografi (TLC) udførtes på 0,25 mm "Analtech silicagel GF" plader. Flashkromatografi udførtes med enten "Woelm" neutralt aluminiumoxid (DCC-kvalitet) eller "Woelm" silicagel (32-63 /tm) og de anførte 30 opløsningsmidler. Alle afdampninger af opløsningsmidler gennemførtes under reduceret tryk ved under 40°C.

l-alkyl-3-aryltriazenerne udgør en klasse af reagenser, som er kendt for at kunne anvendes til omsætning med carboxylsyrer til dannelse af de tilsvarende lavere alkylestere. l-methyl-3-(4-methylphenyl)triazen 35 kan fremstilles som følger: DK 169478 B1 14

Fremgangsmåde 1 7-h.ydroxy-9a-methoxymitosan. Mitomycin C (2,2 g, 6,6 mmol) opløstes i 140 ml 0,1N methanol i sk NaOH (50%) og reaktionsblandingen omrørtes ved stuetemperatur i 30 timer. Opløsningen indstilledes dernæst til ca. pH 5 4,0 med IN HC1 og ekstraheredes med ethyl acetat (4 x 500 ml). De kombi nerede ethyl acetatekstrakter tørredes (Na2S0^) og inddampedes under reduceret tryk ved ca. 30° til ca. 35°C til opnåelse af en fast remanens, der efter opløsning i ether og behandling med overskud af hexan gav en purpur-farvet udfældning. Udfældningen opsamledes og tørredes til 10 opnåelse af titel forbindel sen som et fint purpur-farvet pulver (1,4 g, 63%).

*H NMR (pyridin-dg, 6): 2,05 (s, 3H), 2,14 (bs, IH), 2,74 (bs, IH), 3,13 (d, IH), 3,24 (s, 3H), 3,56 (d, IH), 4,00 (dd, IH), 4,37 (d, IH), 5,05 (t, IH), 5,40 (dd, IH), 5,90 (bs, 2H).

15

Eksempel 1 1-r2-(3-nitro-2-pyridyldithio)ethy11-3-(4-methyl phenyl)tri azen

En opløsning af 4-methylphenyldiazoniumchlorid fremstilles som beskrevet i E.H. White et al., Org. Syn. Vol. 48, 1968, side 102-195 ud 20 fra p-toluidin, og indstilles til pH 6,8-7,2 ved 0°C ligeledes som beskrevet i denne fremgangsmåde. På denne måde fremstilledes en opløsning indeholdende 21,15 mmol diazoniumsalt i 45 ml opløsning og anbragtes i en skilletragt, der var forbundet med en 250 ml 3-halset, rund-bundet kolbe indeholdende 5,34 g (20,0 mmol) 2-(3-nitro-2-pyridyldi-25 thio)ethylamin, 7 g natriumcarbonat og 150 ml dioxan, som var blevet sat til kolben i denne rækkefølge. 6 ml mættet vandig natriumcarbonatopløs-ning og 10 g is sattes til kolben. Kolben afkøledes i et isbad og indholdet omrørtes mekanisk. Fra skilletragten tilsattes derefter diazo-niumsaltopløsningen dråbevis i løbet af 1 time. Efter endt tilsætning 30 fik reaktionsblandingen lov til at antage stuetemperatur og ekstraheredes dernæst med tre 400 ml portioner ether. Tørring og inddampning af ekstrakterne gav det ønskede produkt, som rensedes ved kromatografi under anvendelse af en aluminiumoxid-pakket kolonne, 2,54 cm i diameter og 25,4 cm lang, under anvendelse af hexan:methylenchlorid (4:1), he-35 xan:methylenchlorid (3:2), hexan:methylenchlorid (1:4) og til sidst methylenchlorid indeholdende 1% methanol til udvikling og eluering af kolonnen. De passende fraktioner (idenfificeret ved TLC) kombineredes og inddampedes til opnåelse af 2,5 g af titel forbinde!sen.

DK 169478 B1 . 15

Eksempel 2 9a-methoxy-7-r2-(3-nitro-2-p.yridyldi thi o)ethox.ylmi tosan (20) 7-hydroxy-9a-methoxymitosan, 580 mg (1,73 mmol) anbringes i en rundbundet kolbe og opløses i 60 ml methylenchlorid. Triazenen fra 5 eksempel 1, ca. 2,5 g (5,7 mmol) sattes til opløsningen i kolben og blandingen omrørtes ved 5°C i 14 timer og dernæst ved stuetemperatur i 8 timer. Reaktionsforløbet overvågedes ved silica-TLC under anvendelse af methylenchlorid:methanol (9:1). Reaktionsblandingen holdtes ved stuetemperatur i yderligere 26 timer og oparbejdedes dernæst ved søjlekroma-10 tografi på en kolonne, der var 8,4 mm i diameter, 304,8 mm lang og pakket med aluminiumoxid. De opløsningsmidler, der i rækkefølge anvendtes til udvikling og eluering, var 200 ml portioner af hhv. methylenchlorid, 0,5% methanol i methylenchlorid, 1,0% methanol i methylenchlorid, 1,5% methanol i methylenchlorid, 2% methanol i methylenchlorid og 4% methanol 15 i methylenhlorid. De passende fraktioner kombineredes og inddampedes til opnåelse af titel forbi ndel sen, 470 mg.

Analyse for ^22^*23^5^8^2:

Beregnet: C, 45,65; H, 4,09; N, 11,82 (korrigeret for 0,5 mol-% CHgCl2): 20 Fundet: C, 45,74; H, 4,14; N, 11,61.

IR (KBr), i/max, cm-1: 3440-3200, 3060, 2930, 1720, 1570, 1510, 1395, 1335, 1210, 1055.

*H NMR (pyridin-dg, S): 1,81 (s, 3H), 2,00 (bs, IH), 2,61 (bs, IH), 2,98 (bs, IH), 3,08 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 3,39 (d, IH), 3,83 (dd, IH), 25 4,07 (d, IH), 4,59-4,89 (m, 3H), 5,21 (dd, IH), 7,16 (dd, IH), 8,31 (dd, IH), 8,71 (dd, IH).

Ved at tilpasse fremgangsmåderne fra eksempel 1 og 2 til andre <y-(3-nitro-2-pyridyldithio)alkylaminer med 2-6 carbonatomer i al kyl -gruppen, kan mitosanderivater med følgende formel fremstilles.

30 o N o CH2OCNH2 ^ \>-SS- (CH2)n-0N^^J\^-l /0CH^ 35 o n = 2-6 1 R = H, eller C«j_g alkyl DK 169478 B1 16

Eksempel 3-13 7-alkoxydithio-9a-methoxymitosanerne 3-13 i efterfølgende tabel 3 fremstilledes iht. de almene fremgangsmåder A eller B som beskrevet nedenfor og vist i tabel 3. De fysiske data for mitosanforbindelserne 3-5 16 er rapporteret i den derefter følgende tabel 4.

Fremgangsmåde A

10 Til en deoxygeneret opløsning af mitosan fra eksempel 2 (-0,1 mol) i acetone (3-5 ml) sættes under omrøring, under argon, triethylamin (-1,1 ækvivalenter) efterfulgt af dråbevis eller portionsvis tilsætning af en mercaptan3 (1 ækvivalent) i acetone (1-2 ml). Ved de fleste omsætninger^ overvåges reaktionsforløbet ved silicagel-tyndtlagskroma-15 tografi (10% CHjOH i CH^Clg)- Omsætningens afslutning markeredes ved en forsvinden af den plet, der svarer til udgangsmaterialet, og optræden af produktpletten. På dette tidspunkt koncentreres reaktionsblandingen under reduceret tryk (ved -30°C) og remanensen kromatograferes på en opslæmningspakket neutral "Woelm" al uminiumoxidkolonne (6,4 x 25,4 mm) 20 med 2-5% CHgOH i CHgClg. Denne fremgangsmåde skiller det ønskede mito-sanprodukt fra pyridylthion-biproduktet, der tilbageholdes af kolonnen.

Det således under anvendelse af 2-5% CHjOH i CHgCl2 eluerede produkt renses yderligere omhyggeligt ved flashsil icagelkromatografi under anvendelse af 5-7% CHjOH i CHgCl2 som elueringsmiddel. Hovedbåndet, der 25 svarer til produktet, isoleres, og den amorfe 7-alkoxydithio-9a-methoxy-mitosan karakteriseres.

a) I sådanne tilfælde, hvor udgangsmercaptanen er uren, kræves >1 ækvivalent thiol.

30 b) I sådanne tilfælde, hvor udgangsmitosanen fra eksempel 20 og produktet udviser meget tætliggende R^-værdier ved TLC, anvendes højtryksvæskekromatografi- (HPLC) overvågning (n/tBondapak- C18" -kolonne).

35 Fremgangsmåde B

Til en opløsning af mitosan fra eksempel 2 (-0,1 mmol) i 2-5% acetone3 i methanol (10 ml) sættes en mættet vandig NaHCO^-opløsning^ (-6 dråber) efterfulgt af tilsætning af mercaptan (1 ækvivalent) i DK 169478 B1 17 methanol0 (1 ml). Reaktionsforløbet overvåges ved TLC (siliagel, 10% CHgOH i CHgClg). Efter endt omsætning fortyndes reaktionsblandingen med vand (15 ml) og koncentreres til ca. 10 ml under reduceret tryk ved ca. 30°C. Den resulterende opløsning kromatograferes på en revers fase C-18-5 kolonne med trinvis gradienteluering (100%^ HgO til 80% CH^OH i HgO). Produktet, der elueres som et rødt større bånd, opsamles og koncentreres til opnåelse af 7-alkoxydithio-9a-methoxymitosanen som et amorft fast stof. Hvis yderligere rensning er nødvendig, gentages det ovenfor anførte kromatografitrin.

10 _ a) Methylenchlorid kan også anvendes, men acetone er foretrukket.

b) I det tilfælde, hvor mercaptanen er L-cystein, anvendes denne base ikke.

c) Vand anvendes, hvis udgangsthiolen er vandopløselig.

15 d) Eluering med vand skiller det gule pyridylthion-biprodukt fra produktet, som tilbageholdes på kolonnen.

DK 169478 B1 18

Tabel 3 7-alkoxydithio-9a-methoxymi tosaner (j> π CH-OCNH- O T 2 2 ® A eller 'Vj \ -PCH_ RSH + 2--^ (i li

2 N P)JH

Eks.nr. Thiol (RSH) Fremgangsmåde Produkt 10 _

O

il 3 ethyl—2-me reap to- A R^CI-^CH^QCCH^ acetat

4 . 3-mercapto-l,2- A R=-CH2CH(OH) CH2OH

propandiol 5 3-mercaptopropion- B R=-CH2CH«COO Na"1" syre 6 cystein B R=-CH2CH(NH3+)COO~ 7 thiophenol A R = 8 p-ni trobenzen thiol A R = -y xV-N02 g p-methoxybenzenthiol A R = 10 p-aminobenzenthiol A R = -/^ y—NH? \zz/ DK 169478 B1 19

Tabel 3 (fortsat)

Eks.nr. Thiol (RSH) Fremgangsmåde Produkt 5 COO~Na+ /Vp\

11 2-mercaptobenzoe- B R = —M

syre \ _ / 12 2-nitro-4-mercapto- B R = ^-Ν02 benzoesyre '-\ COO~Na+ 13 4-mercaptopyridin A R = -^/ Vj N \ 14 2-mercaptomethyl-l- A R = -C^-^ | methylimidazol N ^ [ ch3· NH0 I 2 _ + NHCOCH-CH-CHCOO Na I 2 2

15 glutathion B R=-CH_CH

21 -f.

CONHCH2COO Na 16 dimethylamin- B R=-CH2CH2N(CH3)2 ethanbhiol DK 169478 B1 20 .—u S. H ·» «*.

-η o o tn m i ro o* ro kd U B en co ro o PQ O tN i—i t—t r—i

E

- o o o o

X t—i CN CN O

E n} <o m cn

(—{ £ ΓΟ i—( i—1 _ H

?

— O o O O O

[ ί1 ΰ (Ί Π

CO Γ' LO CN O

Γ0 i—( t—I i—( i—i E "g o ε ro o- 5; cn U X ™ — (ti p: O co > cn i-t

13 — LD CN

- N

£_ (ti E * “

Q) . — r—( — -ί-J CO

C in - - cn r~~ — f co r^j| jj S - CN CN O* |Λ - — C~N [— i—[ ^ C30 —

° * n-^coio^r-cN

·- j- σ> +J ~ - o' ► 1 ¥N η Z -H - — - <o E —· - ^

_ X 2 M l·-\ "H - CO N _ - E E

^ 2 0=0 X /V S-| .—. .-.-EETtirHCN-

,_ 2 O X,,/ \ >, g Ε Μ N O ti ^ ·> H

0) CU cn X. } É ft n -···" (N £ - -o E S3 / 2Γ '—CU - vo en *«h - Ό CO I U*~\ COE- — j5 \ / rø - —'r-iEr'^Ein—- i \ / +jto Tg«*«CNoeor—(»-in

o / \ (ti— CD 111 t. ► V » N

·- / \ Q * Λ 4J Ο Λ ti ' · 2 o—\ /=0 t i-η — ·—' - n —* — tn ·— \ / e •.cTico^KinN" 2 \-/ 2 Λ in en E >—i o E —

£ _E' cocncn-cn-o<-E

E Λη S - - ^cnr-i - to o

™ / '—NN — ENEO

i-, ( voEEci'-tEcNi—i \ [s σι Is oi - co - -

OD

W rHt^-VOCN'— O’ — 'O

PS

CO

E

, O

g O

S CN

o K

P o

^ CN

E

U

II

PS

Sn

C

m co Λ! π

E

DK 169478 B1 21 o o o o 2 je ° ° I CNCO^r' u B r-mroo 2 PQ U rH M rH rH „ - v - . ^ m" o lo o o 2 ° «3 m ΰ ^ (N ^ Η B CN Η Η H _ v . . . .

~ o in in in o ° ° ° S £ •^mioocM ro in uo o lo

er lo O' ro O ^ lo -er ro O

Γ0 i—1 rH rH t t CO rH rH rH rH

κ g 0 Ξ ro η ^ rvo K - ™ ro U * .

c irT o ° B i N ^ ^ 'Τη Λ Ό 5 Λ Μ K S £ - ™ s ^ i V1 o rT “· CN ^ ~ ~ w eoHj-VO-1^ — I VOXCOrHCTiOOO^X! f'-rOlUO^-'X) £ .H nj.^-srorrov ™ ω ^ .

S *0 v £ T H. T! 't ^ ^ T o ^ - o -

° "iH— So'-'d Ξ ° μ K ^*" K

£ 5, ^ ro ► o - uo

* C O, ta O V n - ^ ; S ; ” s n T ί J

^.grrHrgrH^ j§ η ,ο mum ‘ ^ Η ^ ·ΰ ^ ° " N ' ; : * j S avtt^ — in-vondr lo -Ko£^ I— Q ^rOrN-ffir-'t- -ε^ -^Τ - 1 rH-roK'S'rH'TUO- ro— r'q'CO^r P5 - vo - oj - - - cm ~ ^ ^ ^ '

3 ^-.-.-KOr-^æ c ® w" i - S

S æSErorH — ffiin-t m ~ κ ^ tj< ,η Z nM^rH -VO-l-- ^ N M J· ' rT·

~4 N ^ [2 ^ S

rH m ^ ta m Ό rgsiXJ ω ^ 4-1 2 2 w. -w» «—' „ w» *--JU '—' ^ N ' ►*« t-. n r~ ^ -=r *. r^ id co r- K r- ro in o £ 2 o ^ oo Λ in rvo r-O'rHCD *- m ; r; ro S π S -7 Η >n ,w r^ ro ro rH m +

H (Q

<L' Z

£ K I

sh O Q

O CN O

fe κ o

O CN

MK K

0—0 · o

CN CN

K K

0 O

1 I

II A

« *

IH

c

W ^ lO

Ai

H

DK 169478 B1 22 .-< muio m in o m < —i σι o r> o in r^’Cfn r' m n c cg 0 .-1--1--1 ·—i —1 ·—' —1 2 - - - · ~ ' — o in o o ooinun X csj c-~ -s* vo cn ro m o c3 n o in o o 000--1 ίΞ f\J r~< r-i ·—i r*J o-I f—! r-1 > s s - v " v s /- — oinoo o o o o ro o in i -c· o in —

-¾1 O «3· OJ -C \D -¾1 CO

ro r-c —< f—i -0--1--10

S C

o c oo -^r o ^

s N OJ IN

CJ v oo lo ro — ro - - *· g O r-H 0-3·

> -< O CO O CN

0 cn ro cn in tN «- —> cn o

O .O

.-i Λ S3 - 23 te CT\ -C 23 ·- νΟ-Ο'^’Γ'-ΙΝ . ΓΜ'.Γ'·^ CD ·—<*«- * * in - -—. - jQ Ό -—- —- r- r^i ro N co .—. —'O^-ON^

1 «. 23 > 23 h ^ VO ^ 33 CN

1 ,__O O CN 000^0-- ς- O·--·' ~ ro · g ~ n~ ,~j -w in in ·ο* E cn ·· o' — .-h *· +J rQ ·.<—<·» — «.ro ' Is π 13

CO g v S OD ^-.~in-CN

*2 U— ^01-1¾1 S3 — N · ro t *>- g m - » - r-π 32 23 ^ o3

0 &1Ο4 «π Ό Ό* · ^roo'-'^O

ci- —-Qu «. ». 13 cfl ^ w η E ^ n /1 κι η S S c ,* ai ·*. I r-ι o to S '-^'-•iH'-Cr-it-'·--.

JJ to tn »· r-c S3 CO CTl OO ·»*-*- to i— m — σι >rs - in «- cn o ro g Ό p~ 23

cu q. ► <3 rr .. o * ► ^ — Ό ^ fN

~ , ro—'^Oc-i η n o· m — —. · 1 _ CJ «. LO -—- Ή - «. s. «. "O' CO CO Γ» 2 Λ n n · æ . 23 «- cn 22 ^ 2 S v S 5 23 23 - CN 23 ro ro ro *-1 ^3* ro ro - * in - ro i S3 - t—1 -.-- * *· Ό —- * C'' * r-i cn^^4J23 ω E Ό n v 'd ^ S3 23 ^ w S 2 S ^

ro ro 1—10 - in OO CN O' r—i r-H O

a s v o d o- ¢1 00 »- » " m .. cd Ό «-O ·- » - ro g Ό - r—i — -— μ- —" .-t ro ro .—1 —· r* t—1 (1) ε

So ►*< £ 8

CN U

23 23 ^ I

"> V

O

11 II

U

C

• 10 r-

CD

W

DK 169478 B1 23 f s g i i s £ £ § s i £ g ^ 2 ^ rH ^ ^ ^ .

- x s ; g s s § s s s g s a λ £ 2 r7 -i -i

i OLnooo ° 2 S 2 2 S

u->r_ir^-o>-i vø ή cn n <h ^

£ £ £ ^ ^ ^ ^ h S

pr, ,-H ,_, r-l ^ ^,Η,-Ιγ-Ι,-Ηγ-Ι a g 0 Ξ vo

Jp 2 η

H S

g ^ £ > ^ ™ £ D — ^ _ *.·»*. cN — ^ ,_7 7Γ fO ^ ro . w _i fc ^ 2. 2. _ r- υ ^v.rron-æ ' * „7 7Γ _ m 01 w -T 10 S " 0^2- K S 00 V1 ^ ί H 'f “ N w CO s VO ri O _«.

S f r~ O - - o X S ° ° ^ Η N

+-> ^ m « « - - - m cn m· ~ ^ £ 7 <N - f 2 “1 “ H - S N 2 Ϊ7 'H " P 2 - = .—. a in n ·- · o 7 7? a-CN-CMNCN l - s :- ; " 7 5 S ε·ϊ;;;5 ^ 1 « - - g g 3 s “ S £ Ί a m ” ji S - 5 ό - ' S - o N s s ® 1 - 2 _: 2 i s s « g ' Ϊ . ° 4J H s _ as - w - - - I a 5 a ^ — a °o H H 5 1 ^ “1 3 Z M * r-l - 10 O *· ^" J· 2 ,_, „ rn ·. λ CD ·· 00 *· ID “ T3 · ‘ ' —, -r ® £ s i ; rt as " - 2 S S K - « ^ λ ^ S - g - S “I 2 s ^ °! n. h a - ¾ ~ ~ ^ S ° ~ ^fsnr-itNNr-' ^nnnrH^w n

^ CN U

go o ε 2 ^ i i 0 6 " 11 « a

M

d m oo cri Λί

W

DK 169478 B1 24 f—i o m o o ο ο o in m ___ | og r- *—* *—! m co cn i—i og S4*c οί in ^ og cn in m og o CQ G CM rH .—4 rH <*\J r-H r—ir—I ri ftS - ' —- o o o o m o m tn in o ><; o~ m m o co o co m o r~ m co ^ m o m co τ m o f—iQ m i—i i—i >—i —i mi—i·—ii—ii—i o o m in in oomoo in cg <n m o cn cg m c .-g ^ i— ^ oi t-g m r— tn m m m i—4 i—i i—i i—e m i—i i—i i—i i—i

X *g OG

m og vo ^ 2 - in "S* cg 0 v og og in --3- - c co o > γη i-i og p — m og m __L * »* *-r« H-t *—« hM ·** W—4 (0 ,-H —i ^ *“ «* V *» m - co - 2 W - - Ό ·— g-> i^| - - cn cg og Χ5-— — '—S'— ' 1 —^ cg cn — — — — a cg in i—i co n -—.

I NSSO'r-^T'd cnmao-oafg +-> 2 m in - - - —- in - co · £ · -s* 2 ^ -H co - - -n— i og · · cn . ry -— r~ .i-i !£> vj - g N s s .-10-.- og xj og -o- - r- $_ ·Η co— ^g —. og - - N ' i-i — co .—. - co O j_| -l-g-tg-Ooa ·—.in -cg . n oo tz. >iS Sr-iKSie^-cg 2 cn 2 2 ^ 2 · Ξ p, q, rH'-r-go'-''-'—v«- r-g-r-go-'a'r^i-i — &, -m - ·- η h x m - og -·„_>·- - +) i ό ri in 'f h - 6 - Ό ή 2 o 2 Ό · i-" iti- — CO-^i-l - - - S — — —'T-gOgrHrH'—^- S +jto m cn r- - ^ in cn cg in n co - - - - incg le ni'— o - mog - -XJ cnæmoggogrooi- H- q og ► ► — — — t3 •og··'— •'O·!'* 1 og » n g1 N N ^ '— ·—i ‘ · m 'T in ^ —-co· pj -,-.--22000- -co - -in - m - O' S ^ S Λ K ir) io - m — 2 ♦ 2 cg — 2 KiH2r-g--in - 2 2 2 1-1^-1.2 2 m - ro - ogo - o~ m og m - - - o- og —i S — W — ·—* —i ·— — i—i μ x κι Ό - - N — cn x> cn Ό N Ό ® 'd — —- — — asa n n λ w ^01-^1-100¾ CDOCOO'EiCOa'— O- r-cooco - - - og r- cn o co h <j in ^ *.*··. ►'O-pr—fr- · · · · (N · * * * r-ι og m n — —-ι-ιαο i-gogr-om—imn-r-co og *·*

»M

z + Λ fj; II 11 π a 2

O H

Η H

DK 169478 B1 25 Τ' ',Τ ~ ο m m m .I S ° ° n> in m mé r~ m m r^mc cqu r—i .—i i i i "Ί o o o o o o un o V m co o r- CNmo^n CS te ση m π- o ^ ^ ^ H Fg OJ pH rH p-C 04λ-1γ-(^Ι

V *· *» V

i oooun ooc?2 ^rcNiniH mm un o ^<ιο·^(Ν rrmnrm

Γ0 rH pri rH m r-H m pH

►r« C

0 ^ ' rH CM

J0 ^ CM m S x s ~ “1 s «; o 10 ^ gi (N m ™ ^ » CO ' aa æ »ae η cm o » * m· 1 1 ^ » cn —. 'a* 1/3 ~ g· aza· 2 to aj in n » » un ^ " S Ξ .ϋ , 1 maemae-- o £ n r- “ on j η h , n if n m—-aeotnm ^ v o » » » . ** o un *· -Q · +z -η Μ ^ h g s p. ς N ° r ^ o ^ ; rtJ rpl ^»-»—-rHNae *--'Η*° ο J2 ^ oo m m » æ rH m tH —. m -» ~ · tf u ae m - m ό un » ^ N ·- n Ν

i ί α » m » ^ - 00 £_ ra- ii i ° ^ “1 £ S

ii’r.si å = sass».„; 5 n ~ " p' E ^ “ °1 a" i i - i i i

£ ί ri ~ ri ri n m ~ rncNm^oJ^NM

Pi »O CO η a <ί N “ ~ ^ ~ ~ ~ S Λ m - » m - ac -»4-)-~.ac*--.Ln-- 1 a ^ n a r > n to — p-) CM »rHO » » »rH^n **·** ^ v » , . » rH —~ ro aeo»ro —

m CO —» N ^ » N *· M ‘ S i 3 ^ S

»> to ϊ v S É K —'m —’ E

mffiævornn-rH to »com^inmæ £ £ “ o - - - r--.oco - ™ _» n< ».»cn *· .g o ό »as - » m

H CO H rj ^ ri - —( rri m m rH m CN

+ , « m cn 2

S O I

H 2 0

η I O

£ riN-u r/sN

v 0 11 Ji" ea « i s “ ™ m ^ H rri

W

26 DK 169478 B1 %. ·1 s. ·· 1» · —< o o tn in c> m in o o __ 1 cn co ro o cn ro o -( ro u - B r~- m ro r-c ^ o rr cn o a o γμγ-.^γη,_ι

2· oooo O O in o LO

v i£) η ιπ h cn m un o ud S n <n o -o' cn £12 2 2 2

W S CN 1—i r-l t—i ro r-l r-< ι-l rH

^ V N V s « V 2 S k 2 w o o o o 1-n o ud o o in m tn cn o ud co h co ^ o

^ ^ ^ Π O ΓΠ Γ"1 LO Π H

ro .—i <—f <—i ^—» PDi-Hi-it—it—i 22 £ °n ^ n ^ a - cn O X ro 2.

c co o lo -c1 > r< ri 01 CN cs 0 - tN m ro in a _ N N O rø

tg CN «· a a SO CTiO

„ w« >. IN 1/1 njr-1 1 - (A Ό«··- 1-1·· ^ ro o m co — So ^ ro a N 1 ro vo 1 fOO \& — <-< r-||r-l_01-1-_ { r1. „ o vo «· »in ·. h ^ j- .. ro —. »· n1 -a1 τ ση Ό 1- 1· - 1- cn ^ a o1 - - r .. 73 ro ro —- .

+j ^3 _ ro ». ry ^

(O . 1 ___ M ». __K ·» r r 00 r-» S CN

JS n ~ 3 a cn n -» a ar-cNSN-c -

t1 >, £ Γ-l N 1— K S ή CNN-rHa-S

o p? q, - r ro O CN 1. S ro «· in ro ·

<4- w £, Cfl <31 Ν' «_ >· Ό rg N »O r Η lO

w Λ - i-ι cn τ3 Ό - —. o 1 'o· (1 «. a CO i-h ^ '—· — 00 S r-ι r-1 a 4J «ο m η ·> > h m 10 - /0 lo » <n vr i— (0^ in «- .—. Ν' 1—I CN '—!CO 1- »'i'·. ».

cu q «-OS·-···· - - cn ro ~ Ό ~ n

"2 . M W Η 1Γ ^ Π CNCN'— •»^'-'NK

l_ a ^ CO ^ r · " ^ CO ' ' « fN S Γ" 2 Λ σ\ S a — —. — _SCNNSOtn·- 2 a1-—''-iNaa acN»-ar-i-~o ro m o - a ή CN ro ·» ro ή - ^ o -· a » » <ί irt in ' ^ -4J-»-t3^i-i·» rH W^^O-SD1 cnrOr-rN'Or-.^in ^ N (O ^ N w w · a 1-^ ^ 3- 1^1 n1 a ·» n· 1-< σ> in rHinin1-o,;3,'-',:J‘ r».«._, co ». co σι n in 1· o t"· -11

·- ·. S · 3 1 1- ^«-E1-1-£-i-,!:S

r-l CO CO CO >—I N1 CO r-CCN·—'0100·—1 i—I

+ CT3 2 8 + CN u cti ht·« 1ψ1 i~r ♦-M HH 1i—1

2-0 I

CN O

a o h u u

G) CN CN

ε _ a a $ f=\ xn s s fa z 2-0 u 2 Ύ / a a o

γ 2—0—O

CN ™ a a u u I 1 II » a a ti c m 2 W i-1 —^ 1—i

W

DK 169478 B1 27

r-W

U E

cq υ *x

(¾ (O

H E

»τ' g 0 c ro rri ^ f

»M

U X

—- Λ

E

> -< nj '"Tn « Τ5| 1 *- 'o

I rs g - O

+> c - ^ -r· *· as oj in S ^

**} rn > O ri 'S

£ -H _ .. „ OJ —.

S n—w^eN -M

** >1 ε »—i i · æ ^ w Οι a ·· o o oi ^ m in

•-^QjtilCD'a'-r'·· r-H

Λ , .. © in © i— nj w — rsi ro '—1 ** 1 1 £? £ 4J «o m - " “ ^ ' -2 nj «—· o\ — n ·* m io £ Q ► ffi 33 - - * 1 ιΗ Π ro 'i N ^ 'T!

Cd ·.·.*.·· 35 *·

a ^gmfflinE E

2 33 -— —' 1—· — '—* <D

m n CD ' 04 - EG * ID O ·ϋ --< Ό m ,π UJ ^ *· Ό - Ό —' C4 ro v 35 ^ rt» rv «. *· *4* Ή UD i- CO *. 04 ^ - s æ r no j.

h ic in n - m <u c |H (N on (L) —n o

En - +-> 2 K "i 0 U 5 *4 ^ p— 2 ,Γ~ 04 +-3

35 CO

CJ CD

04 +i 35 Ί2 u g i > 11 5 tf Λ . o

Li <NJ

£ O

c «•»"•s • fσ CQ ^

S

Claims

25 HCCH2- ho2cch2nhco eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf,
30 R* er hydrogen eller lavere al kyl, og Alk er Cj_g-alkylen.
2. Derivat ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at Alk er ethyl en, og R^ er hydrogen.
3. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er acetylamino- ethyl.
4. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R acetyloxyethyl. DK 169478 Bl 29
5. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 1,2-di hydroxy-prop-3-yl.
6. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er carboxyethyl 5 eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
7. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 1-carboxy-aminoethyl eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
8. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 1-methylimid- azol-2-yl-methyl.
9. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er dimethyl -aminoethyl. 15
10. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er phenyl.
11. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 4-nitro-phenyl. 20
12. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 4-methoxy-phenyl.
13. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 4-amino- 25 phenyl.
14. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 2-carboxy-phenyl eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
15. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 4-nitro-3- carboxyphenyl eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
16. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at R er 4-pyridyl. 35 DK 169478 B1 30
17. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at det har formlen ?H2 O ho2cchch2ch2conh O ch2ocnh2
5 CHCHoSSCH_CH„0 1 I 2 λ λ \ ØCH0 ho2cck2nhco 3 “'T 10 eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
18. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at det har formel (Ib) _,N02 O /r\ lv 1 f2c£m2 (' '/-SS-Alk—O. Jk \ / tT ir \ OCH, VZZN7 Νξ' 3 Ib 20 ° hvori R og Al kg er som defineret i krav 1.
19. Derivat ifølge krav 1-2, KENDETEGNET ved, at det har formlen 25 -F°2 O ch2ocnh2 \ >ØCH, XVII 30 \— N 3 3 o
20. Farmaceutisk præparat, KENDETEGNET ved, at det omfatter et derivat ifølge krav 1 i forbindelse med et farmaceutisk acceptabelt opløsningsmiddel, fortyndingsmiddel, en adjuvans eller bærer. DK 169478 B1 31
21. Fremgangsmåde til fremstilling af et derivat ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at man omsætter mindst ét ækvivalent af en tri azen med formel (VI)
5 Ar-N=N-NH-Alk-SS-R (VI) hvor R og Alk har den i krav 1 angivne betydning, og Ar er den organiske rest af en diazoterbar aromatisk amin, med en ækvivalent af en mitosan med formel (IV) 10. i? jj CH2OCNH2 /OCH3 hvori R* har den i krav 1 angivne betydning, under reaktionsbetingelser i et inert organisk opløsningsmiddel ved en temperatur fra ca. 0° til ca. 60°, indtil der opnås en tilstrækkelig mængde af produktet med 20 formel (I), og når R i forbindelsen med formel (I) er nitrosubstitueret pyridyl, omdannes eventuelt denne ved omsætning i et inert opløsningsmiddel ved en temperatur fra 0°C til 60°C, eventuelt i nærvær af mindst én ækvivalent af en stærk base, med en thiol med formlen R'SH, hvor R' har den ovenfor for R angivne betydning bortset fra nitrosubstitueret 25 pyridyl, og om ønsket omdannes, hvor det er muligt, en opnået forbindelse med formel (I) til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.
22. Fremgangsmåde ifølge krav 21, KENDETEGNET ved, at man som triazenen med formel (VI) anvender l-[2-(3-nitro-2-pyridyldithio)ethyl]- 30 3-(4-methylphenyl)triazen.
23. Fremgangsmåde ifølge krav 21, KENDETEGNET ved, at Alk er ethyl en, og R* er hydrogen.
24. Fremgangsmåde ifølge krav 21, KENDETEGNET ved, at der anvendes et ækvivalent base ved omsætningen. DK 169478 Bl 32
25. Fremgangsmåde ifølge krav 21-24, KENDETEGNET ved, at der anvendes en lavere alkanol, en lavere al kansyre-lavere al kyl ester, en lavere alifatisk keton, en cyklisk al i fati sk ether eller et lavere polyhalogeneret alifatisk carbonhydrid med op til 8 carbonatomer eller vand som 5 reaktionsmedium.
26. Fremgangsmåde ifølge krav 25, KENDETEGNET ved, at der anvendes et reaktionsinert, organisk, flydende opløsningsmiddel som reaktionsmedium for mi tosanen. 10
27. Fremgangsmåde ifølge krav 25, KENDETEGNET ved, at der anvendes en lavere alkanol, en lavere al kyl alkansyreester, en di lavere al kyl-ether, et lavere polyhalogeneret alifatisk carbonhydrid eller en cyklisk alifatisk ether med op til 8 carbonatomer som reaktionsmedium. 15
28. Fremgangsmåde ifølge krav 25, KENDETEGNET ved, at der anvendes methylenchlorid, methanol, diethylether, ethylacetat eller en blanding af to eller flere deraf som reaktionsmedium.
29. Fremgangsmåde ifølge krav 25, KENDETEGNET ved, at reaktionstem peraturen er fra 0° til 60°C.
30. Fremgangsmåde ifølge krav 25, KENDETEGNET ved, at reaktionstemperaturen er fra 0° til 25°C. 25 Bristol-Myers Squibb Company ved TH. OSTENFELD PATENTBUREAU A/S 30 i_ Peter Engl^'
35 København, den 23. september 1994