DK160992B - Antibiotiske makrolidforbindelser, praeparater indeholdende disse, fremgangmaader til fremstilling af forbindelserne samt fremgangsmaade til anvendelse af forbindelserne eller praeparaterne - Google Patents

Description

DK 160992 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte antibiotiske forbindelser og fremgangsmåder til fremstilling deraf.

I ansøgernes britiske patentansøgning nr. 8522699 beskrives fremstillingen af antibiotika S541, som kan isoleres fra fermenteringsproduk-5 terne af en hidtil ukendt Streptomyces sp. Antibiotika S541 er en gruppe af beslægtede forbindelser med delformlen I

cm ra.iH'ki ,.L. J B ΙΓ -II r*n ieV. °\?/o

Ansøgerne har nu fundet en yderligere gruppe forbindelser med anti-10 biotisk virkning, som kan fremstilles ved kemisk modifikation af antibiotika S541 eller ved isolation fra en kultur af en mikroorganisme af slægten Streptomyces som beskrevet heri. De hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen har antibiotisk virkning. Endvidere er de anvendelige som mellemprodukter ved fremstilling af andre aktive 15 forbindelser og/eller ved isolation og oprensning af antibiotika S541- forbindelser.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er 23-keton-, 23-deoxy- og 23-hydr-oxy- eller substituerede hydroxyanaloge af antibiotika S541 med en hydroxygruppe eller en substitueret hydroxygruppe i 5-stillingen.

20 Opfindelsen angår således i ét aspekt forbindelserne med den almene formel II

2

DK 160992 B

H J 1%

^ll II

J oe Læ OR**- og salte deraf med baser, hvor bA er methyl, ethyl eller isopropyl; 5 r2 er hydrogen eller en gruppe OR-*, og R^ er hydrogen, eller R^ og tilsammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >C=0; OR^ er -OH, -OCOR®, [hvor R® er Cj_.g alkyl (eventuelt substitueret med halogen, C^_4 alkoxy, phenoxy eller phenyl), Cg.g cycloalkyl 10 eller phenyl]; -0C02R^a, hvor R^a er C4 alkyl, der eventuelt er substitueret med halogen; -OCSOR^, (hvor R^ er phenyl, der eventuelt er substitueret med Cj^.4 alkyl); -OR^ [hvor R^ er C^.4 alkyl (eventuelt substitueret med Cg.7 cycloalkyl), Cg.7 cycloalkyl eller C2_8-alkenyl]; -OSO2R® (hvor R^ er C^.4 alkyl eller phenyl, der 15 eventuelt er substitueret med C^_4 alkyl); eller -0C0(CH2)n(C02R9 (hvor R9 er hydrogen eller CjL.4 alkyl, og n er nul, 1 eller 2); og OR^ er -OH, -OCOR^a [hvor R^a er C4 alkyl (eventuelt substitueret med halogen, phenoxy eller tri(C^_4 alkyl)-silyloxy), phenyl eller halogénphenyl]; -0C0(CH2)nC02R9 (hvor R9 er hydrogen eller Cj^.4 20 alkyl, og n er nul, 1 eller 2); -0C02R^ (hvor R^5 er C2_4-alkyl, der 3

DK 160992 B

eventuelt er substitueret med phenyl eller halogen); alkoxy; eller tri(C^_4 alkyl)silyloxy); med undtagelse af de forbindelser, hvor er hydroxy, og OR^ er OH eller OCH3.

5 Opfindelsen angår endvidere en blanding af ovennævnte forbindelser med formlen II, og denne blanding er ejendommelig ved det i krav 7's kendetegnende del angivne.

Fra dansk patentansøgning nr. 5676/78 og dansk patentansøgning nr.

3377/83 kendes forbindelser med beslægtet struktur, idet de fore-10 liggende forbindelser dog adskiller sig fra de kendte ved, at de i 25-stillingen bærer en methyl-, ethyl- eller isopropylsubstitueret isopropenylgruppe, hvor de kendte forbindelser kun bærer en simpel alkylgruppe.

Hvis forbindelserne med den almene formel II skal anvendes som mel-15 lemprodukter, vil én eller begge af grupperne R^ og -OR^ ofte være en beskyttet hydroxygruppe, og opfindelsen omfatter især sådanne beskyttede forbindelser.

Hvis R® eller R7 er alkyl, kan de fx være methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert.butyl eller n-heptyl. Hvis R^ er 20 alkyl substitueret med halogen, kan den være substitueret med fx én eller flere, fx 2 eller 3, halogenatomer (fx chlor eller brom). Hvis R7 er alkyl substitueret med C3.7 cycloalkyl kan den være substitueret med fx cyclopropyl.

Hvis R7 er C2.g-alkenyl, kan den fx være allyl.

25 Hvis R7 er C3.7 cycloalkyl, kan den fx være cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl eller cyclohexyl.

Hvis R^ er Cj__g alkyl substitueret med phenyl, kan den være fx benzyl eller phenethyl.

4

DK 160992 B

Hvis R^ er en gruppe -OSC^R^, kan den fx være methylsulfonyloxy eller p-toluensulfonyloxy.

Specifikke eksempler på tri(C^.^ alkyl)silyloxygrupper er trimethyl-silyloxy og tert.butyldimethylsilyloxy.

5 Hvis eller OR^ er en gruppe 0C0(CH2)nC02R^, kan den fx være en gruppe OCOCC^R^ eller OCOCH2CH2CO2R®, hvor R^ er hydrogen eller Cj^-alkyl, fx methyl eller ethyl.

Forbindelser med den almene formel II indeholdende en sur gruppe kan danne salte med passende baser. Eksempler på sådanne salte omfatter 10 alkalimetalsalte såsom natrium- og kaliumsalte.

En vigtig klasse af forbindelser med den almene formel II er den, i hvilken R^- er methyl, ethyl eller isopropyl, R^ er en gruppe OR5 (hvor QR3 er ffom defineret ovenfor), og R3 er hydrogen, og salte deraf.

15 En anden vigtig gruppe af forbindelser med den almene formel II er den, i hvilken R^ er methyl, ethyl eller isopropyl, R^ og R3 sammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >C=0, og salte deraf.

En yderligere vigtig klasse af forbindelser med den almene formel II 20 er den, i hvilken R-*- er methyl, ethyl eller isopropyl, R^ og R3 hver er hydrogen, og salte deraf.

I forbindelserne med den almene formel II er gruppen R-*- fortrinsvis isopropyl.

Gruppen R^ er fortrinsvis hydrogen eller hydroxy eller en gruppe med 25 den almene formel -OCOR^’ [hvor R^' er C^.g-alkyl (eventuelt substitueret med C]__4-alkoxy) eller phenyl-C^_g-alkyl] , -OCX^R^’ (hvor R6a' er C^.4-alkyl eventuelt substitueret med 1-3 halogenatomer, fx trichlorethyl), -OCOCO2H, -OR^ (hvor K'7 er C^_4-alkyl, Cg.y-cyclo-alkyl, allyl eller cyclopropylmethyl), eller R^ og R3 sammen med det 30 carbonatom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >C=0. Speci- 5

DK 160992 B

fikt er R2 fortrinsvis hydrogen, ethoxy, n-propoxy, n-butoxy, cyclo-propylmethoxy, acetoxy, phenacetoxy, propionyloxy, isobutyryloxy eller cyclopropancarbonyloxy, eller R2 og R3 sammen med det carbon-atom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >C=0.

5 Gruppen -OR^ i forbindelserne med den almene formel II er fortrinsvis hydroxy, methoxy, acetoxy eller methyloxycarbonyloxy.

Vigtige aktive forbindelser ifølge opfindelsen er dem med den almene formel II, i hvilke R^ er methyl, ethyl eller, især isopropyl , R2 er hydrogen, ethoxy, n-propoxy, n-butoxy, acetoxy eller propionyloxy, og 10 R3 er hydrogen, eller R2 og R3 sammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >0=0, og OR^ er hydroxy, acetoxy eller methyloxycarbonyloxy.

Særlig vigtige aktive forbindelser ifølge opfindelsen er dem med den almene formel II, i hvilke: 15 r! er isopropyl, R2 er hydrogen, R3 er hydrogen, og OR^ er hydroxy; r! er isopropyl, R2 er propionyloxy, R3 er hydrogen, og OR^ er hydr oxy; R·^· er isopropyl, R2 og R3 sammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, er >C=0, og -OR^ er hydroxy; 20 R^- er isopropyl, R2 er ethoxy, R3 er hydrogen, og -0R^ er hydroxy; R^- er isopropyl, R2 er n-propoxy, R3 er hydrogen, og -0R^ er hydroxy; r! er methyl, R2 er acetoxy, R3 er hydrogen, og 0R^ er hydroxy; R*· er ethyl, R2 er acetoxy, R3 er hydrogen, og 0R^ er hydroxy; r! er isopropyl, R2 er acetoxy, R3 er hydrogen, og OR4 er hydroxy; 25 R^· er isopropyl, R2 er n-butoxy, R3 er hydrogen, og 0R^ er hydroxy.

6

DK 160992 B

Som tidligere anført, kan forbindelserne ifølge opfindelsen anvendes som antibiotika, og. endvidere som mellemprodukter til fremstilling,af andre aktive forbindelser og/eller ved isolering eller oprensning af antibiotika S541-forbindelser. Hvis forbindelserne ifølge opfindelsen 5 skal anvendes som mellemprodukter, kan grupper R^ og/eller -OR^ være beskyttet hydroxy. Det vil være klart, at en sådan gruppe bør- have et minimum af yderligere funktionalitet for at undgå yderligere reaktionssteder og bør være således, at det er muligt selektivt at regenerere en hydroxygruppe fra den. Eksempler på beskyttede hydroxygrup-10 per er velkendte og er fx beskrevet i "Protective Groups in Organic Synthesis" af Theodora W. Greene (Wiley-Interscience, New York 1981) og "Protective Groups in Organic Chemistry" af J.F.W. McOmie (Plenum Press, London, 1973). Eksempler på R^- og OR^-beskyttede hydroxygrup-per omfatter phenoxyacetoxy, silyloxyacetoxy (fx trimethylsilyloxy-15 acetoxy og tert.butyldimethylsilyloxyacetoxy), og silyloxy såsom trimethylsilyloxy og tert.butyldimethylsilyloxy. Forbindelser ifølge opfindelsen indeholdende sådanne grupper vil primært være anvendelige som mellemprodukter. Andre grupper såsom acetoxy kan tjene som beskyttede hydroxygrupper, men kan også være til stede i de aktive 20 slutforbindelser.

Andre aktive forbindelser ifølge opfindelsen, som også er nyttige som mellemprodukter, er dem med den almene formel II, i hvilke R^ er en gruppe -OCOCO2H. Disse er især anvendelige til isolering og oprensning af antibiotika S541-forbindelser. En særlig nyttig forbindelse i 25 denne henseende er forbindelsen med den almene formel II, hvor R^- er isopropyl, R^ er gruppen -OCOCO2H, R^ er hydrogen, og OR^ er hydroxy, hvilken forbindelse med fordel kan anvendes ved isolering og oprensning af antibiotika S541-forbindelsen med den almene formel V nedenfor, hvor R^-a er isopropyl, og R er hydrogen. Forbindelsen med den 30 almene formel V i uren form kan omdannes til den tilsvarende forbindelse med den almene formel II, hvor R^ er -OCOCO2H, og isoleres, fx i krystallinsk form. Forbindelsen med den almene formel V kan derefter regenereres i i det væsentlige oprenset form fra sidstnævnte forbindelse under anvendelse af de heri beskrevne fremgangsmåder, 35 hvilke isolations- og oprensningsfremgangsmåder udgør yderligere aspekter af den foreliggende opfindelse.

7

DK 160992 B

Forbindelser ifølge opfindelsen har antibiotisk virkning, fx anthel-mintisk virkning, fx mod nematoder, og især anti-endoparasitisk og anti-ectoparasitisk virkning.

Ectoparasitter og endoparasitter inficerer mennesker og en række dyr 5 og er især fremherskende i husdyr såsom svin, får, kvæg, geder og fjerkræ, heste og kæledyr såsom hunde og katte. Parasitisk infektion af husdyr, som fører til anæmi, underernæring og vægttab, og er hovedårsag til økonomisk tab over hele verden.

Eksempler på slægter af endoparasitter, der inficerer sådanne dyr -10 og/eller mennesker, er Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Aspicularis,

Brugia, Bunostomum, Capillaria, Chabertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa,

Necator, Nematodirus, Nematospiroides (Heligomoroides), Nippostrongy-lus, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, Parascaris, 15 Strongylus, Strongyloides, Syphacia, Toxascaris, Toxocara, Trichone-ma, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Uncinaria og Wuchare-r ia.

Eksempler på ectoparasitter, der inficerer mennesker og/eller dyr, er arthropod-ectoparasitter såsom bidende insekter, spyfluer, lopper, 20 lus, mider, sugende insekter, tæger og andre tovingede skadedyr.

Eksempler på slægter af sådanne ectoparasitter, der inficerer dyr og/eller mennesker, er Ambylomma, Boophilus, Chorioptes, Culliphore,

Demodex, Demallenia, Dermatobia, Gastrophilus, HaemaCobia, Haematopi-nus, Haemophysalis, Hyalomma, Hyperderma, Ixodes, Linognathus, Luci-25 lia, Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicephalus, Sarcoptes, Stomoxys og Tabanus.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har vist sig at være virksomme både in vitro og in vivo imod en række endoparasitter og ectoparasitter.

Det har især vist sig, at forbindelser ifølge opfindelsen er aktive 30 mod parasitiske nematoder såsom Haemonchus contortus, Ostertagia cir-cumcincta, Trichostrongylus colubiformis, Dictyocaulus viviparis,

Cooperia oncophera, Ostertagia ostertagi, Nematospiro ides dubius og 8

DK 160992 B

Nippostrongylus braziliensis og parasitiske mider såsom Sarcoptes sp. og Psoroptes sp.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er derfor anvendelige ved behandling af dyr og mennesker med endoparasitiske og/eller ectoparasitiske 5 infektioner, og opfindelsen angår derfor også præparater til anvendelse inden for human- eller veterinærmedicinen, og disse præparater er ejendommelige ved det krav 8's kendetegnende del angivne.

Arten af parasitten vil variere alt efter værten og det fremherskende infektionssted. Således inficerer fx Haemonchus contortus, Ostertagia 10 circumcincta og Trichostrongylus colubiformis i almindelighed får og er fortrinsvis lokaliseret i maven og tyndtarmen, medens Dictyocaulus viviparus, Cooperia oncophora og Ostertagia ostertagi i almindelighed inficerer kvæg og er fortrinsvis lokaliseret i henholdsvis lungerne, tarmen eller maven.

15 Den antibiotiske virkning af forbindelser ifølge opfindelsen kan fx påvises ved deres virkning in vitro mod frit levende nematoder, fx Caenorhabiditis elegans.

Endvidere er forbindelserne ifølge opfindelsen anvendelige som an-tifungale midler, fx mod stammer af Candida sp. såsom Candida albi-20 cans og Candida glabrata og mod gær såsom Saccharomyces carlsbergen-sis.

Forbindelser ifølge opfindelsen er også nyttige til behandling af insekt-, acari og nematodeskadedyr inden for landbrug, havebrug, skovbrug, offentlig sundhed og oplagrede produkter. Skadedyr i jord-25 og planteafgrøder, deriblandt korn (fx hvede, byg, majs og ris), grøntsager (fx soja), frugt (fx æbler, vindruer og citrus) såvel som rodafgrøder (fx sukkerroer, kartofler) kan behandles. Specifikke eksempler på sådanne skadedyr er frugtmider og bladlus såsom Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Hyzus persicae, Nephotettix cincti-30 ceps, Nilparvata lugens, Panonychus ulmi, Phorodon humuli, Phyllocop-truta oleivora, Tetranychus urticae og medlemmer af slægten Trialeu-roides; nematoder såsom medlemmer af slægterne Aphelencoides, Globo-dera, Heterodera, Meloidogyne og Panagrellus\ lepidoptera såsom 9

DK 160992 B

Heliothis, Plutella og Spodoptera\ kornsnudebiller såsom Anthonomus grandis og Sitophilus granarius; melbiller såsom Tribolius castaneum; fluer såsom Musca domestica; stikmyrer; bladminerere; Pear psylla;

ThrLps tabaci; kakerlakker såsom Blatella germanica og Periplaneta 5 americana og myg såsom Aedes aegypti.

Opfindelsen angår derfor også skadedyrsbekæmpende præparater til anvendelse ved bekæmpelse af skadedyr i landbrug, havebrug eller skovbrug, hvilke præparater er ejendommelige ved det i krav 9's kendetegnende del angivne, samt en fremgangsmåde til bekæmpelse af 10 skadedyr i landbrug, havebrug eller skovbrug, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav 12's kendetegnende del angivne.

Opfindelsen angår derfor også forbindelser med den almene formel II som defineret ovenfor, som kan anvendes som antibiotika. De kan specielt anvendes ved behandling af dyr og mennesker med endoparasi-15 tiske, ectoparasitiske og/eller fungale infektioner og inden for landbrug, havebrug eller skovbrug som pesticider til bekæmpelse af insekt-, acari- og nematodeskadedyr. De kan også i almindelighed anvendes som pesticider til bekæmpelse eller regulering af skadedyr under andre omstændigheder, fx i lagre, bygninger eller andre offent-20 lige steder eller på skadedyrenes opholdssted. I almindelighed kan forbindelserne påføres enten på værten (dyr eller menneske eller planter eller anden vegetation) eller på selve skadedyrene eller disses opholdssted.

Forbindelser ifølge opfindelsen kan formuleres til indgift ad en 25 hvilken som helst bekvem vej til anvendelse inden for veterinæreller humanmedicinen, og opfindelsen angår derfor også farmaceutiske præparater, der omfatter en forbindelse ifølge opfindelsen tilpasset til anvendelse inden for veterinær- eller humanmedicinen. Sådanne præparater kan præsenteres til anvendelse på konventionel måde ved 30 hjælp af én eller flere egnede bærere eller excipienser. Præparaterne ifølge opfindelsen omfatter dem, der er i en form specielt formuleret til parenteral (deriblandt intramammar indgift), oral, rektal, topisk, implanteret, ophthalmisk, nasal eller genito-urinær anvendelse.

10

DK 160992 B

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan formuleres til anvendelse inden for veterinær- eller humanmedicinen ved injektion og kan præsenteres i ehhedsdosisform, i ampuller eller andre enhedsdosisbeholdere eller i multi-dosisbeholdere, om nødvendigt med et tilsat konserveringsmid-5 del. Præparaterne til injektion kan være i form af suspensioner, opløsninger eller emulsioner i olieagtige eller vandige bærere og kan indeholde formuleringsmidler såsom suspenderings-, stabiliserings-, solubiliserings- og/eller dispergeringsmidler. Alternativt kan den aktive bestanddel være i steril pulverform til rekonstituering med en 10 egnet bærer, fx sterilt pyrogenfrit vand, før anvendelse. Olieagtige bærere omfatter polyvalente alkoholer og disses estere såsom glycerolestere, fedtsyrer, vegetabilske olier såsom jordnøddeolie eller bomuldsfrøolie, mineralske olier såsom paraffinolie, og ethyloleat og andre lignende forbindelser. Andre bærere såsom propylenglycol kan 15 også anvendes.

Præparater til veterinærmedicin kan også formuleres som intramammare præparater i enten langtidsvirkende eller hurtigt frigørende baser og kan være sterile opløsninger eller suspensioner i vandige eller olieagtige bærere, eventuelt indeholdende et fortyknings- eller suspen-20 deringsmiddel såsom bløde eller hårde paraffiner, bivoks, 12-hydroxy-stearin, hydrogeneret ricinusolie, aluminiumstearater eller glyceryl-monostearat. Konventionelle ikke-ioniske, kationiske eller anioniske overfladeaktive midler kan i præparatet anvendes alene eller i kombination.

25 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan også præsenteres til veterinær eller human anvendelse i en form, der er egnet til oral indgift, fx i form af opløsninger, sirupper eller suspensioner eller et tørt pulver til konstituering med vand eller en anden egnet bærer før anvendelse, eventuelt med smags- og farvestoffer. Faste præparater såsom tablet-30 ter, kapsler, pastiller, piller, boli, pulver, pastaer, granuler, patroner (bullets) eller forblandingspræparater kan også anvendes.

Faste og flydende præparater til oral anvendelse kan fremstilles i overensstemmelse med fremgangsmåder, der er velkendte inden for teknikken. Sådanne præparater kan også indeholde én eller flere far-35 maceutisk acceptable bærere og excipienser, som kan være i fast eller flydende form. Eksempler på egnede farmaceutisk acceptable bærere til 11

DK 160992 B

anvendelse i faste doseringsformer omfatter bindemidler (fx forgela-tineret majsstivelse, polyvinylpyrrolidon eller hydroxypropylmethyl-cellulose); fyldstoffer (fx lactose, mikrokrystallinsk cellulose eller calciumphosphat); glittemidler (fx magnesiumstearat, talkum 5 eller siliciumdioxid); sprængmidler (fx kartoffelstivelse eller natrium-stivelsesglycollat); eller befugtningsmidler (fx natrium-laurylsulfat). Tabletter kan overtrækkes ved fremgangsmåder, der er velkendte inden for teknikken.

Eksempler på egnede farmaceutisk acceptable additiver til anvendelse 10 i flydende doseringsformer omfatter suspenderingsmidler (fx sorbitol-sirup, methylcellulose eller hydrogenerede spiselige fedtstoffer); emulgatorer (fx lechitin eller acacia); ikke-vandige bærere (fx mandelolie, olieagtige estere eller ethylalkohol); og konserveringsmidler (fx methyl- eller propyl-p-hydroxybenzoater eller sorbinsyre); 15 stabiliserings- og solubiliseringsmidler kan også anvendes.

Λ

Pastaer til oral indgift kan formuleres ifølge metoder, der er velkendte inden for teknikken. Eksempler på egnede farmaceutisk acceptable additiver til anvendelse i pastaformuleringer omfatter suspenderings- eller geleringsmidler, fx aluminiumdistearat eller hydro-20 generet ricinusolie; dispergeringsmidler, fx polysorbater, ikke-vandige bærere, fx jordnøddeolie eller olieagtige estere; stabiliserings- og solubiliseringsmidler. Forbindelserne ifølge opfindelsen kan også indgives inden for veterinærmedicinen ved inkorporering deraf i dyrs daglige faste eller flydende foderindtagelse, fx som en del 25 af det daglige dyrefoder eller drikkevand.

Til buccal indgift kan præparatet være i form af tabletter, pastaer eller pastiller formuleret på konventionel måde.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan også indgives oralt inden for veterinærmedicinen i form af en flydende stor dosis såsom en opløs-30 ning, suspension eller dispersion af den aktive bestanddel sammen med en farmaceutisk acceptabel bærer eller excipiens.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fx også formuleres som suppositorier, fx indeholdende konventionelle suppositoriebaser til an- 12

DK 160992 B

vendelse inden for veterinær- eller humanmedicinen eller som pes-sarier, fx indeholdende konventionelle pessariumbaser.

Forbindelser ifølge opfindelsen kan formuleres til topisk indgift til anvendelse inden for veterinær- og humanmedicinen som salver, cremer, 5 lotioner, shampooer, pulvere, pessarier, sprays, dyppemidler, aerosoler, dråber (fx øjen- eller næsedråber) eller påhældningsmidler ("pour-ons"). Salver og cremer kan fx formuleres med en vandig eller olieagtig base med tilsætning af egnede fortyknings- og/eller geleringsmidler. Salver til indgift til øjet kan fremstilles på steril 10 måde under anvendelse af steriliserede bestanddele. Påhældningsmidler kan fx være formuleret til veterinær anvendelse i olier indeholdende organiske opløsningsmidler, eventuelt med formuleringsmidler, fx stabiliserings- og solubiliseringsmidler.

Lotioner kan formuleres med en vandig eller olieagtig basis og vil i 15 almindelighed også indeholde ét eller flere emulgeringsmidler, stabiliseringsmidler, dispergeringsmidler, suspenderingsmidler, fortykkelsesmidler eller farvestoffer.

Pulvere kan formuleres ved hjælp af en hvilken som helst egnet pulverbasis. Dråber kan formuleres med en vandig eller ikke-vandig basis 20 også omfattende ét eller flere dispergeringsmidler, stabiliseringsmidler, solubiliseringsmidler eller suspenderingsmidler. De kan også indeholde et konserveringsmiddel.

Til topisk indgift ved inhalering kan forbindelserne ifølge opfindelsen afgives til anvendelse inden for veterinær- eller humanmedicinen 25 i form af en aerosolspraypræsentation eller en insufflator.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives i kombination med andre farmaceutisk aktive bestanddele.

De totale daglige doser af forbindelser ifølge opfindelsen anvendt inden for både veterinær- og humanmedicinen vil hensigtsmæssigt være 30 i området 1-2000 /*g/kg legemsvægt, fortrinsvis 50-1000 //g/kg, og disse kan gives i delte doser, fx 1-4 gange daglig.

13

DK 160992 B

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan formuleres ad en hvilken som helst bekvem vej til havebrugs- eller landbrugsanvendelse, og opfindelsen omfatter derfor præparater, der omfatter en forbindelse ifølge opfindelsen og er tilpasset til havebrugs- eller landbrugsanvendelse.

5 Sådanne formuleringer omfatter tørre eller flydende typer, fx puddere omfattende pudderbaser eller koncentrater, pulvere deriblandt opløselige eller befugtelige pulvere, granulater deriblandt mikrogranu-ler og dispergerbare granuler, pellets, flydbare pulvere, emulsioner såsom fortyndede emulsioner eller emulgerbare koncentrater, dyppemid-10 ler såsom roddyppemidler og frødyppemidler, frøbejdsemidler, frøpellets, oliekoncentrater, olieopløsninger, injektionspræparater, fx stængelinjektionspræparater, sprays, røg- og tågepræparater.

I almindelighed vil sådanne formuleringer omfatte forbindelsen i kombination med en egnet bærer eller diluent. Sådanne bærere kan være 15 faste eller flydende og være konstrueret til at hjælpe påføringen af forbindelsen enten ved at dispergere den hvor den skal påføres, eller til at give en formulering, som af brugeren kan laves til et disper-gerbart præparat. Sådanne formuleringer er velkendte inden for teknikken og kan fremstilles ved konventionelle metoder såsom fx ved 20 blanding og/eller formaling af den/de aktive bestanddele sammen med bæreren eller diluenten, fx fast bærer, opløsningsmiddel eller overfladeaktivt middel.

Egnede faste bærere til anvendelse i formuleringer såsom puddere, granulater og pulvere kan vælges blandt fx naturlige mineralfyldstof-25 fer såsom diatomit, talkum, kaolinit, montmorillonit, pyrofyllit eller attapulgit. Høj dispers kiselsyre eller høj disperse absorberende polymerer kan om ønsket inkluderes i præparatet. Granulerede adsor-berende bærere, som kan anvendes, kan være porøse (såsom pimpsten, knust mursten, sepiolit eller bentonit) eller ikke-porøse (såsom cal-30 cit eller sand). Anvendelige egnede forgranulerede materialer kan være organiske eller uorganiske og omfatte dolomit og knuste planterester.

Egnede opløsningsmidler til anvendelse som bærere eller diluenter omfatter aromatiske carbonhydrider, aliphatiske carbonhydrider, 35 alkoholer og glycoler eller ethere deraf, estere, ketoner, syre- 14

DK 160992 B

amider, stærkt polære opløsningsmidler, eventuelt epoxiderede vegetabilske olier og vand.

Konventionelle ikke-ioniske, kationiske eller anioniske overfladeaktive midler, fx ethoxylerede alkylphenoler og -alkoholer, alkali-5 metal- eller jordalkalimetalsalte af alkylbenzensulfonsyrer, lig-nosulfonsyrer eller sulforavsyrer eller sulfonater af polymere phe-noler, som har gode emulgerende, dispergerende og/eller befugtende egenskaber, kan også anvendes enten alene eller i kombination i præparaterne.

10 Stabilisatorer, anti-klumpningsmidler, anti-skummidler, viskositetsregulerende midler, bindemidler og klæbemidler, fotostabilisatorer samt gødningsstoffer, fodringsstimulerende midler eller andre aktive substanser kan, hvis det ønskes, inkluderes i præparaterne. Forbindelserne ifølge opfindelsen kan også formuleres i blanding med andre 15 insekticider, acaricider og nematicider.

I formuleringerne er koncentrationen af aktivt materiale i almindelighed fra 0,01% til 99% og fortrinsvis mellem 0,01% og 40% efter vægt.

Kommercielle produkter leveres i almindelighed som koncentrerede 20 præparater til fortynding til en passende koncentration, fx fra 0,001 til 0,0001% efter vægt.

Til anvendelse inden for veterinærmedicinen eller til havebrugs- og landbrugsanvendelse og hvis forbindelserne ifølge opfindelsen er fermentationsafledte produkter, kan det være ønskeligt at anvende hele 25 fermentationsvæsken som en kilde til de aktive forbindelser. Det kan også være hensigtsmæssigt at anvende tørret dyrkningsvæske (indeholdende mycelier) eller at anvende mycelier, der er skilt fra dyrkningsvæsken og pasteuriseret eller især tørret, fx ved spray-, fryseeller valsetørring. Hvis det ønskes, kan dyrkningsvæsken eller myce-30 lierne formuleres til præparater omfattende konventionelle inerte bærere, excipienser eller diluenter som beskrevet ovenfor.

15

DK 160992 B

De antibiotiske forbindelser ifølge opfindelsen kan indgives eller anvendes i kombination med andre aktive bestanddele.

Især kan de antibiotiske forbindelser ifølge opfindelsen anvendes sammen med antibiotika S541-forbindelser eller med andre antibiotiske 5 forbindelser ifølge opfindelsen. Dette kan fx forekomme, hvis rå fermentationsprodukter ifølge en fremgangsmåde ifølge opfindelsen omsættes uden forudgående eller efterfølgende separation; dette kan være at foretrække fx ved landbrugsmæssig anvendelse af forbindelserne, hvor det er vigtigt at holde lave produktionsomkostninger.

10 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, der er ejendommelig ved det i krav 11's kendetegnende del angivne. I denne fremgangsmåde kan det være nødvendigt at beskytte en hydroxygruppe i 5- eller 23-stillingen i udgangsmaterialet før udførelse af den beskrevne reaktion. I sådanne tilfælde 15 kan det være nødvendigt at afbeskytte den samme hydroxygruppe, når reaktionen har fundet sted, for at få den ønskede forbindelse ifølge opfindelsen. Der kan anvendes konventionelle beskyttelses- og af-beskyttelsesmetoder, fx som beskrevet i de ovennævnte bøger af Greene og McOmie.

20 Således kan fx en acylgruppe såsom en acetylgruppe fjernes ved basisk hydrolyse, fx under anvendelse af natrium- eller kaliumhydroxid i vandig alkohol eller ved sur hydrolyse, fx under anvendelse af koncentreret svovlsyre i methanol. Acetalgrupper såsom tetrahydropyranyl kan fx fjernes under anvendelse af sur hydrolyse (under anvendelse af 25 en syre såsom eddikesyre eller trifluoreddikesyre eller en fortyndet mineralsyre). Silylgrupper kan fjernes under anvendelse af fluoridioner (fx fra et tetraalkylammoniumfluorid såsom tetra-n-butylammo-niumfluorid), hydrogenfluorid i vandig acetonitril eller en syre såsom p-toluensulfonsyre (fx i methanol). Arylmethylgrupper kan fjer-30 nes ved behandling med en Lewis-syre (fx bortrifluoridetherat) i nærværelse af en thiol (fx ethanthiol) i et egnet opløsningsmiddel såsom dichlormethan ved fx stuetemperatur. Selektiv 5-afbeskyttelse af en 5,23-disilylforbindelse kan udføres under anvendelse af te-tra-n-butylammoniumfluorid, medens selektiv 5-afbeskyttelse af en 16

DK 160992 B

5,23-diacetoxyforbindelse kan udføres under anvendelse af natriumhydroxid i vandig methanol.

Forbindelserne ifølge opfindelsen, hvor og/eller -OR^ er substitueret hydroxy, kan i almindelighed fremstilles ved, at antibiotika 5 S541-forbindeiser (fx forbindelser med den almene formel V nedenfor) eller 5- eller 23-O-monosubstituerede derivater deraf omsættes med reagenser, der tjener til at danne en substitueret hydroxygruppe. I almindelighed er 5-hydroxygruppen mere reaktiv end 23-hydroxygruppen. Hydroxygrupper i 5-stillingen afbeskyttes lettere end hydroxygrupper 10 i 23-stillingen. I almindelighed kan 5-monosubstituerede forbindelser ifølge opfindelsen fremstilles ved, at den 5,23-usubstituerede hydroxy- antibiotika S541-forbindelse omsættes med en begrænset mængde reagens under mildere betingelser, medens 5,23-disubstituerede forbindelser dannes under anvendelse af større mængder reagens og mindre 15 milde betingelser og/eller under anvendelse af en katalysator. 23-Mo-nosubstituerede forbindelser ifølge opfindelsen kan fremstilles ved først at danne en 5,23-substitueret forbindelse og selektivt afbeskytte i 5-stillingen. 5,23-Disubstituerede forbindelser ifølge opfindelsen med forskellige substituenter i 5- og 23-stillingerne kan fås 20 ved, at en forbindelse, der er monosubstitueret i enten 5- eller 23-stillingen, omsættes med et reagens, der tjener til at danne en anden substitueret hydroxygruppe i den anden stilling-.

Et yderligere aspekt af opfindelsen angår en fremgangsmåde til frem- Λ

stilling af forbindelser med den almene formel II, i hvilke én af Rz 25 og OR^ er substitueret hydroxy, og den anden er hydroxy eller substitueret hydroxy som defineret ovenfor, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at forbindelser med den almene formel III

17

DK 160992 B

O** JB.

σο,ίΐ'Κ. Ij *Y "I O P V III

l| pH Læ OR> (hvor R^- er som defineret ovenfor, og én af -OR^ og -OR·* er hydroxy, medens den anden er hydroxy eller substitueret hydroxy) omsættes med 5 et tilsvarende reagens, der tjener til at omdanne en hydroxygruppe til en substitueret hydroxygruppe, og om ønsket efterfulgt af selektiv afbeskyttelse af en forbindelse med den almene formel II, hvor R^ og -OR^ begge er substitueret hydroxy, til dannelse af en forbindelse med den almene formel II, i hvilken OR^ er hydroxy, og R^ er sub-10 stitueret hydroxy.

Reaktionen vil i almindelighed være en acylering, formylering, sul-fonylering, etherificering, silylering eller acetaldannelse.

Således kan fx acylering udføres under anvendelse af et acylerings-middel såsom en syre med den almene formel R^COOH eller et reaktivt 15 derivat deraf såsom et syrehalogenid (fx syrechlorid), -anhydrid eller aktiveret ester, eller et reaktivt derivat af en carbonsyre R^OCOOH eller thiocarbonsyre R^OCSOH.

Acyleringer under anvendelse af syrehalogenider og -anhydrider kan, hvis det ønskes, udføres i nærværelse af et syrebindende middel såsom 20 en tertiær amin (fx triethylamin, dimethylanilin eller pyridin), uorganiske baser (fx calciumcarbonat eller natriumhydrogencarbonat) og oxiraner såsom lavere 1,2-alkylenoxider (fx ethylenoxid eller pro- 18

DK 160992 B

pylenoxid), som binder det ved acyleringsreaktionen frigjorte hydro-genhalogenid.

Acyleringer under anvendelse af stærkt elektrofile syrechlorider (fx methoxyacetylchlorid, chloracetylchlorid eller bromacetylchlorid), 5 fortrinsvis i nærværelse af et syreoptagende middel såsom calcium- carbonat, kan anvendes til selektivt at substituere 23-stillingen til dannelse af en forbindelse med den almene formel II, i hvilken er en gruppe OR^, hvor R·* er substitueret hydroxy, og OR^ er hydroxy.

Acyleringer under anvendelse af syrer udføres hensigtsmæssigt i 10 nærværelse af et kondenseringsmiddel, fx et carbodiimid såsom N,N’-dicyclohexylcarbod'iimid eller N-ethyl-N'7-dimethylaminopropyl-carbodiimid; en carbonylforbindelse såsom carbonyldiimidazol; eller et isoxazoliumsalt såsom N-ethyl-5-phenylisoxazoliumperchlorat.

En aktiveret ester kan hensigtsmæssigt dannes in situ under anvendel-15 se af fx 1-hydroxybenzotriazol i nærværelse af et kondenseringsmiddel som beskrevet ovenfor. Alternativt kan den aktiverede ester være dannet på forhånd.

Acyleringsreaktionen kan udføres i vandige eller ikke-vandige reaktionsmedier, hensigtsmæssigt ved en temperatur fra -20°G til +100°C, 20 fx fra.-10eC til +50°C.

Sulfonylering kan udføres med et reaktivt derivat af en sulfonsyre R^SOjH såsom et sulfonylhalogenid, fx et chlorid R®S02Cl, eller et sulfonsyreahhydrid. Sulfonyleringen udføres fortrinsvis i nærværelse af et passende syrebindende middel som beskrevet ovenfor.

25 Etherificering kan udføres under anvendelse af et reagens med den almene formel R^Y, hvor R^ er som defineret ovenfor, og Y er en fraspaltelig enhed såsom chlor, brom eller iod eller hydrocarbylsul-fonyloxy såsom mesyloxy eller tosyloxy eller halogenalkanoyloxy såsom dichloracetoxy). Reaktionen kan udføres ved dannelse af et magnesium-30 alkoxid under anvendelse af et Grignard-reagens såsom et methylmag-nesiumhalogenid, fx methylmagnesiumiodid, eller under anvendelse af 19

DK 160992 B

et trialkylsilylmethylmagnesiurahalogenid, fx trimethylsilylmethylmag-nesiumchlorid efterfulgt af behandling med reagenset R^Y.

Alternativt kan reaktionen udføres i nærværelse af et sølvsalt såsom sølvoxid, sølvperchlorat, sølvcarbonat eller sølvsalicylat eller 5 blandinger deraf, og dette system kan være særlig egnet, hvis etheri-ficering udføres under anvendelse af et alkylhalogenid, fx methyl-iodid.

Etherificering kan hensigtsmæssigt udføres i et opløsningsmiddel såsom en ether, fx diethylether.

10 Ikke-vandige opløsningsmidler, der kan anvendes i ovennævnte reaktioner, omfatter ketoner (fx acetone), amider (fx Ν,Ν-dimethylformamid, Ν,Ν-dimethylacetamid eller hexamethylphosphoramid), ethere (fx cycliske ethere såsom tetrahydrofuran eller dioxan og acycliske ethere såsom dimethoxyethan eller diethyleter), nitriler (fx aceto-15 nitril), carbonhydrider såsom halogenerede carbonhydrider (fx me-thylenchlorid) og estere såsom ethylacetat samt blandinger af to eller flere sådanne opløsningsmidler.

Silylering kan udføres ved omsætning med et silylhalogenid (fx chlo-rid), hensigtsmæssigt i nærværelse af en base såsom imidazol, trieth-20 ylamin eller pyridin under anvendelse af et opløsningsmiddel såsom dimethylformamid.

I mange tilfælde, fx hvis der som udgangsmateriale anvendes en 5,23-dihydroxyforbindelse med den almene formel III, vil der dannes en blanding af slutprodukter, fx en blanding af 5-monosubstituerede 25 og 5,23-disubstituerede derivater. Disse kan imidlertid adskilles ved konventionelle teknikker, fx chromatografi såsom silicagelchromato-grafi eller HPLC. 1 en yderligere fremgangsmåde ifølge opfindelsen kan en forbindelse med den almene formel II, hvor R^ og R^ hver er hydrogen, fremstilles 30 ved, at en forbindelse med den almene formel III, hvor R*· er som defineret ovenfor, og OR^" er substitueret hydroxy, og OR^ er hydroxy, omsættes ved erstatning af 23-hydroxygruppen med et hydrogenatom ef- 20

DK 160992 B

terfulgt af afbeskyttelse af gruppen ΟΚ.\ hvis der ønskes en forbindelse, i hvilken OrA er hydroxy, og, hvis det ønskes, efterfulgt af resubstituering til dannelse af en forbindelse med den almene formel II, hvor OR^ er substitueret hydroxy.

5 Således kan udgangsforbindelseme med den almene formel III, hvor OR^ er substitueret hydroxy, og OR^ er hydroxy, omsættes med et reagens, der tjener til at erstatte hydroxygruppen med en fraspaltelig enhed, hvilket giver forbindelserne med den almene formel IV

L

cH.nnlv i

' I o p V

v 10 ’ o**1· hvor R^· og -ΟρΛ er som defineret ovenfor, og L er et atom eller en gruppe, der kan fjernes ved reduktion, fx ved homolytisk reduktion, såsom gruppen R^OCSO-, hvor R^ er C^.g-alkyl, aryl såsom phenyl eller (Cj__g-alkyl)aryl såsom p-tolyloxythiocarbonyloxy.

15 Egnede reagenser, der kan anvendes til at indføre molekyldelen L omfatter fx arylhalogenthionoformiater såsom p-tolylchlorthionoformiat. Reaktionen kan udføres i nærværelse af en base, fx en amin, såsom pyridin, i et opløsningsmiddel såsom et halogeneret carbonhydrid, fx dichlormethan.

20 Hvis det ønskes, kan mellemproduktforbindelserne med den almene formel IV isoleres.

21

DK 160992 B

Mellemprodukter med den almene formel IV kan derefter reduceres til dannelse af den ønskede forbindelse med den almene formel II under anvendelse af et reduktionsmiddel såsom et alkyltinhydrid (fx tri-n-butyltinhydrid) i nærværelse af en radikalinitiator såsom et 5 peroxid, et azobisisobutyronitril eller lys.

Reaktionen kan hensigtsmæssigt udføres i et egnet opløsningsmiddel, som kan være valgt blandt en keton, fx acetone; en ether, fx dioxan; et carbonhydrid, fx hexan eller toluen; et halogeneret carbonhydrid, fx trichlorbenzen; og en ester, fx ethylacetat. Kombinationer af 10 sådanne opløsningsmidler enten alene eller med vand kan også anvendes .

Reaktionen kan udføres ved en temperatur på 0-200°C, fortrinsvis 20-130°C.

I en yderligere fremgangsmåde ifølge opfindelsen kan en forbindelse 15 med den almene formel II, hvor R^ og R^ sammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, udgør >C=0, fremstilles ved oxidation af en forbindelse med den almene formel III, hvor OR-* er hydroxy, og OR^ er substitueret hydroxy, efterfulgt af afbeskyttelse af gruppen OR^, hvis der ønskes en forbindelse, i hvilken OR^ er hydroxy, og, hvis 20 det ønskes, efterfulgt af gensubstitution til dannelse af en forbindelse med den almene formel II, hvor OR^ er substitueret hydroxy.

Reaktionen kan udføres ved hjælp af et oxidationsmiddel, der tjener til at omdanne en sekundær hydroxygruppe til en oxogruppe, hvorved der fremstilles en forbindelse med den almene formel II.

25 Egnede oxidationsmidler omfatter quinoner i nærværelse af vand, fx 2,3-dichlor-5,6-dicyano-1,4-benzoquinon eller 2,3,5,6-tetrachlor-1,4-benzoquinon; et chrom(VI)-oxidations-middel, fx pyridiniumdichromat eller chromtrioxid i pyridin; et mangan(IV)-o-xidationsmiddel, fx mangandioxid i dichlormethan; et N-halogensucci-30 nimid, fx N-chlorsuccinimid eller N-bromsuccinimid; et dialkylsul-foxid, fx dimethylsulfoxid, i nærværelse af et aktiveringsmiddel såsom N,N’-dicyclohexylcarbodiimid eller et acylhalogenid, fx oxalyl-chlorid; eller et pyridin-svovltrioxid-complex.

22

DK 160992 B

Reaktionen kan hensigtsmæssigt udføres i et egnet opløsningsmiddel, som kan være valgt blandt en keton, fx acetone; en ether, fx diethyl-ether, dioxan eller tetrahydrofuran; et carbonhydrid, fx hexan; et halogeneret carbonhydrid, fx chloroform eller methylenchlorid; og en 5 ester, fx ethylacetat; og et substitueret amid, fx dimethylformamid. Kombinationer af sådanne opløsningsmidler enten alene eller med vand kan også anvendes.

Reaktionen kan udføres ved en temperatur på fra -80°C til +50°C.

Et yderligere aspekt af opfindelsen angår en fremgangsmåde til frem-10 stilling af forbindelser med den almene formel II, hvor R2 og R3 tilsammen med det carbonatom, til hvilke de er bundet, er >C=0, og OR^- er hydroxy eller methoxy, hvilken fremgangsmåde omfatter det trin, at der foretages dyrkning af Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 eller en mutant deraf med i det væsentlige samme egenskaber, 15 og, hvis det ønskes, forbindelsen isoleres derfra, og, også hvis det ønskes, OR^-gruppen modificeres ved metoder såsom de ovenfor beskrevne.

Den ovenfor nævnte foretrukne mikroorganisme, der er i stand til at fremstille de ovennævnte substanser, er stammer af en ny art af 20 slægten Streptomyces, som er blevet døbt Streptomyces thermoarchaensis. En prøve af denne mikroorganisme, som er et jordisolat, er den 10. september 1984 blevet deponeret i den permanente kultursamling hos- National Collections of Industrial and Marine Bacteria, Torry Research Station, Aberdeen, Storbritannien i overensstemmelse med 25 Budapesttraktaten og har fået deponeringsnummeret NCIB 12015. Mutan ter af Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 kan også med fordel anvendes, og fire mutantstammer er den 26. juni 1985 blevet deponeret i den permanente kultursamling hos National Collections of Industrial and Marine Bacteria i overensstemmelse med Budapesttraktaten og har 30 fået deponeringsnumrene NCIB 12111, NCIB 12112, NCIB 12113 og NCIB 12114.

Fremstilling af forbindelser ifølge opfindelsen ved fermentering af organismen udføres på konventionel måde, dvs. ved dyrkning af or- 23

DK 160992 B

ganismen i nærværelse af assimilerbare kilder af carbon, nitrogen og mineralsalte.

Assimilerbare kilder af carbon, nitrogen og mineraler kan tilvejebringes af enten simple eller komplicerede næringsstoffer. Carbonkilder 5 vil i almindelighed omfatte glucose, maltose, stivelse, glycerol, melasse, dextrin, lactose, saccharose, fructose, carboxylsyrer, aminosyrer, glycerider, alkoholer, alkaner og vegetabilske olier. Carbonkilder vil i almindelighed udgøre fra 0,5 til 10 vægtprocent af fermentationsmediet.

10 Nitrogenkilder vil i almindelighed omfatte sojabønnemel, majsstøbevand, opløselige destillationsrester, gærekstrakter, bomuldsfrømel, peptoner, jordnøddemel, maltekstrakt, melasse, casein, aminosyreblan-dinger, ammoniak (gas eller opløsning), ammoniumsalte eller nitrater.

Urea eller andre amider kan også anvendes. Nitrogenkilder vil i 15 almindelighed udgøre fra 0,1 til 10 vægtprocent af fermentationsmediet.

Mineralnæringssalte, som kan inkorporeres i dyrkningsmediet, omfatter de almindeligt anvendte salte, som er i stand til at tilføre natrium-, kalium-, ammonium-, jern-, magnesium-, zink-, nikkel-, cobalt-, 20 mangan-, vanadium-, chrom-, calcium-, kobber-, molybdæn-, bor-, phos-phat-, sulfat-, chlorid- og carbonationer.

Dyrkning af organismen vil i almindelighed blive udført ved en temperatur på fra 20°C til 50°C, fortrinsvis fra 25°C til 40°C, især omkring 34eC, og vil hensigtsmæssigt finde sted under beluftning og 25 agitation, fx ved rystning eller omrøring. Mediet kan indledningsvis podes med en lille mængde af en sporulerende suspension af mikroorganismen, men med henblik på at undgå en vækstforsinkelse kan et vegetativt inokulum af organismen fremstilles ved at pode en lille mængde af dyrkningsmediet med sporeformen af organismen, og det vundne 30 vegetative inokulum kan overføres til fermentationsmediet eller fortrinsvis til ét eller flere podetrin, hvor yderligere vækst finder sted før overføring til hovedfermentationsmediet. Fermentationen vil i almindelighed blive udført i pH-intervallet 5,5-8,5, fortrinsvis 5,5-7,5.

DK 160992B

24

Fermentationen kan udføres i en periode på 2-10 dage, fx ca. 5 dage.

Hvis det ønskes at fraskille materiale indeholdende forbindelserne ifølge opfindelsen fra hele fermentationsvæsken eller at isolere en hvilken som helst af de individuelle forbindelser, kan dette udføres 5 ved konventionelle isolations- og separationsteknikker. Forbindelserne ifølge opfindelsen er hovedsagelig indeholdt i cellernes mycelium, men kan også findes i fermentationsvæsken, og isolationsteknikkerne kan derfor også anvendes på fermentationsvæsken efter klaring.

Det vil være klart, at valget af isolationsteknikker kan variere i 10 vid udstrækning.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan isoleres og adskilles ved en lang række fraktioneringsteknikker, fx adsorptionseluering, udfældning, fraktioneret krystallisation og solventekstraktion, som kan kombineres på forskellige måder.

15 Solventekstraktion og chromatografi har vist sig at være mest velegnet til-at isolere og separere forbindelserne ifølge opfindelsen.

Efter fermentationen kan myceliet høstes under anvendelse af konventionelle teknikker, fx filtrering eller centrifugering. Derefter kan materialet fx ekstraheres fra myceliet ved hjælp af et passende or-20 ganisk opløsningsmiddel såsom en keton, fx acetone, methylethylketon eller methylisobutylketon; et carbonhydrid, fx hexan; et halogeneret carbonhydrid, fx chloroform, carbontetrachlorid eller methylench-lorid; en alkohol, fx methanol eller ethanol; eller en ester, fx methylacetat eller ethylacetat. Det vil være klart, at hvis myceliet 25 indeholder signifikante mængder vand, vil det være at foretrække at anvende et vandopløseligt opløsningsmiddel.

I almindelighed er mere end én ekstraktion ønskelig til at opnå optimal udvinding. Den første ekstraktion udføres fortrinsvis under anvendelse af et med vand blandbart opløsningsmiddel såsom methanol 30 eller acetone. Antibiotikaene kan udvindes som en rå ekstrakt ved fjernelse af opløsningsmidlet. Opløsningsmiddelekstrakterne kan selv ekstraheres, om ønsket efter reduktion af opløsningsmiddelvolumenet, 25

DK 160992 B

fx ved inddampning. På dette trin foretrækkes det at anvende et med vand ikke blandbart opløsningsmiddel såsom hexan, chloroform, meth-ylenchlorid eller ethylacetat eller blandinger deraf, idet der tilsættes tilstrækkeligt vand til at opnå tilfredsstillende deling af de 5 antibiotiske forbindelser. Fjernelse af den med vand ikkeblandbare fase giver et materiale, der indeholder én eller flere forbindelser ifølge opfindelsen, muligvis sammen med antibiotika S541-forbindelser.

Oprensning og/eller separation af forbindelserne ifølge opfindelsen 10 kan udføres ved konventionelle teknikker såsom chromatografi (der-» iblandt højtydelsesvæskechromatografi, "HPLC") på en passende bærer såsom silicagel, en ikke-funktionel makroretikulær adsorptionsharpiks, fx tværbundne polystyrenharpikser såsom Amberlite® XAD-2, XAD-4 eller XAD-1180 harpikser (Rohm & Haas Ltd.) eller en S112-harpiks 15 (Kasteil Ltd.) eller på en organisk opløsningsmiddel-kompatibel tværbundet dextran såsom Sephadex® LH20 (Pharmacia UK Ltd.) eller, i tilfældet HPLC, omvendt-fasede bærere såsom carbonhydridbundet silicagel, fx C^g-bundet silicagel. Bæreren kan være i form af et leje eller fortrinsvis pakket i en søjle. For ikke-funktionelle makroreti-20 kulære harpikser såsom XAD-1180 eller S112 kan der til eluering anvendes blandinger af organiske opløsningsmidler såsom acetonitril med vand.

En opløsning af forbindelserne i et egnet opløsningsmiddel vil i almindelighed blive anbragt på silicagel- eller Sephadex®-søjlerne, om 25 ønsket efter først at reducere opløsningsmiddelvolumenet. Søjlen kan eventuelt vaskes og derefter elueres med et opløsningsmiddel af passende polaritet. I tilfældet Sephadex® og silicagel kan der som opløsningsmiddel anvendes alkoholer såsom methanol; carbonhydrider såsom hexan; acetonitril; halogenerede carbonhydrider såsom chloro-30 form eller methylenchlorid; eller estere såsom ethylacetat. Kombinationer af sådanne opløsningsmidler enten alene eller med vand kan også anvendes.

Eluering og separation/oprensning af forbindelserne ifølge opfindelsen kan overvåges ved konventionelle teknikker såsom tyndtlagsch- 26

DK 160992 B

romatografi og høj tydelses-væskechromatografi eller ved at udnytte de i det følgende beskrevne egenskaber hos forbindelserne.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indledningsvis oprenses ved chromatografi på silicagel, fortrinsvis under anvendelse af en eluent 5 såsom chloroform/ethylacetat, eventuelt efterfulgt af høj tydelses--væskechromatografi. Det fremstillede oprensede materiale kan derefter underkastes chromatografi på en Sephadex®-søjle, fortrinsvis under anvendelse af en eluent såsom acetonitril, og forbindelser ifølge opfindelsen kan derefter isoleres under anvendelse af høj tydelses--10 væskechromatografi.

Ved passende kombination af de ovennævnte procedurer er forbindelserne med den almene formel II som defineret ovenfor blevet isoleret som faste stoffer i det væsentlige i ren form. Det vil være klart, at den rækkefølge, i hvilken dfe ovennævnte oprensningstrin udføres, val-15 get af de trin, der anvendes, og den opnåede grad af oprensning kan variere inden for vide grænser. Som beskrevet ovenfor kan forbindelserne imidlertid anvendes i renhedsniveauer, der passer til deres påtænkte anvendelse. Til anvendelse inden for humanmedicin er renheder på mindst 90%, fortrinsvis over 95%, ønskelige. Til veterinær 20 eller anden anvendelse er lavere renheder tilstrækkelige, fx 50% eller derunder.

De intermediære antibiotika S541-forbindelser med den almene formel III, hvor 0r5 er hydroxy, og OR^ er hydroxy eller methoxy, kan også fås under anvendelse af de ovenfor beskrevne fermentations- og iso-25 lationsmetoder, fx som beskrevet i sydafrikansk patent nr. 85/7049.

Andre mellemprodukter med den almene formel III kan fremstilles ud fra disse forbindelser under anvendelse af metoder som beskrevet ovenfor til fremstilling af forbindelser med den almene formel II.

Salte af syrer med den almene formel II kan fremstilles ved konven-30 tionelle metoder, fx ved behandling af syren med en base eller omdannelse af ét salt til et andet ved ionbytning.

27

DK 160992 B

1. Aktivitet mod Caenorhabditis elegans

Forbindelser ifølge opfindelsen blev afprøvet med hensyn til deres virkning over for den fritlevende nematode Caenorhabditis elegans.

Der blev fremstillet opløsninger eller suspensioner af forbindelserne 5 i methanol, og der blev foretaget serielle fortyndninger (400 pg/ml) og nedefter i 20% propylenglycol. 10 μΐ af de resulterende opløsninger blev hver blandet med 20 μΐ af en vandig opløsning indeholdende 100-200 Caenorhabditis elegans orme og holdt ved stuetemperatur i 20 timer.

10 Ved den ovenstående test var forbindelserne fra de nedenstående eksempler i almindelighed effektive efter 20 timer til at dræbe/lamme >98% af ormene ved en koncentration på <10 pg/ml, 2. Aktivitet mod Nematospiroides dubius

Effektiviteten hos forbindelserne ifølge opfindelsen mod Nematospi-15 roides dubius inficerede mus blev bestemt. CR/H hunmus (18-22 g) blev påvirket med 100 L3 larver af N. dubius, og infektionen fik lov at udvikle sig (sædvanligvis 3 uger). Musene blev derefter behandlet med en enkelt oral administration af forbindelsen ifølge opfindelsen ved en af 3/4 titrererede dosisniveauer. Forbindelserne blev administre-20 ret i propylenglycol. Musene blev derefter overladt til sig selv i mindst 3 dage (normalt 5 dage) før de mus, som stadig havde udviklede infektioner, blev aflivet, og tyndtarmen blev fjernet. Den udtagne del af tyndtarmen blev åbnet på langs med en afrundet saks for at blotlægge tarmmucosaen. De voksne orme blev opsamlet ved hjælp af et 25 modificeret Baarmann-apparat. Migreringstiden var 5 timer, og i dette tidsrum blev de migrerende orme holdt ved 37°C. Efter 5 timer blev det nylongaze, igennem hvilket ormene havde migreret, undersøgt med et forstørrelsesglas med en forstørrelse på 2 x. De orme, som var fanget i gazen, og de migrerede orme blev talt for at give en total 30 ormebelastning for hver mus, og denne optælling blev sammenlignet med kontroller.

Ved at følge denne fremgangsmåde og ved en dosis på 10 mg/kg blev forbindelser ifølge opfindelsen fundet at reducere ormebelastningerne 28

DK 160992 B

i behandlede mus signifikant. For eksempel gav forbindelserne fra eksemplerne 7, 10, 20, 26, 42,~46, 48, 58, 79, 55, 89, 95, 106, 119, 120-122, 125a, 125b og 28b en procentuel reduktion i den gennemsnitlige ormebelastning i de behandlede mus på over 80% sammenlignet med 5 kontrollerne.

3. Aktivitet mod en række ecto- og endoparasitter i forskellige dyremodeller (a) En enkelt dosis (800 /zg/kg) af forbindelserne fra eksemplerne 26 og 120 indgivet intravenøst eller subkutant 10 eliminerede fuldstændigt Cooperia oncophera i kalve, der var inficeret med denne orm.

(b) Inden for 5 dage efter behandlingen dræbte forbindelsen fra eksempel 26 97% af larven Rhipicephalus appendiculatus i kaniner.

15 (c) Produkterne fra eksemplerne 26 og 120 var fuldstændig effektive, når de blev administreret oralt i en dosis på 200 /zg/kg til heste, der var inficeret med Parascaris.

(d) Både produktet fra eksempel 27 og produktet fra eksempel 120 var lige så effektivt som Ivermectin til at eliminere 20 både larver og voksne individer af Nematodirus battus og voksne individer af Ostertagia circumsincta, Trichostrongy-lus axei, Haemonchus contortus, Nematodirus spathiger, - - Cooperia curticei og Trichostrongylus vitrinus, ved oral administration i en dosis på 200 /zg/kg.

25 (e) Produkterne fra eksemplerne 26 og 120 var fuldstændigt effektive, når de blev administreret oralt i en dosis på 150 /zg/kg til hunde, der var inficeret med Toxocara.

(f) En dosis på 800 /zg/kg af forbindelserne fra eksemplerne 26 og 120 udviste en effektivitet på >98% i grise inficeret 30 med Oesophagostomum.

29

DK 160992 B

Opfindelsen illustreres yderligere ved nedenstående fremstillinger og eksempler.

Forbindelserne er navngivet under henvisning til begyndelses-"faktorer" , som er forbindelserne anført nedenfor med den almene formel V

Ud

OR

Faktor R R^- A -H -CH(CH3)2 B -CH3 -CH3 10 C -H -CH3 D -H -CH2CH3 E -CH3 -CH2CH3 F -CH3 -CH(CH3)2

Faktorerne A, B, C, D, E og F kan fremstilles som beskrevet i sydaf-15 rikansk patent nr. 85/7049.

30

DK 160992 B

EKSEMPEL 1

5-Phenoxyaeetoxy— og 5,23-diphenoxyacetoxy-faktor A

2,0 g faktor A i 25 ml dichlormethan og 0,35 ml pyridin ved 0°C blev behandlet med en opløsning af 0,5 ml phenoxyacetylchlorid i dichlor-5 methan. Efter 18 timer ved 3°C blev opløsningen behandlet med 1,0 ml pyridin og med 1,0 ml phenoxyacetylchlorid i 5 ml dichlormethan.

Opløsningen blev omrørt ved 0-5°C i 30 minutter, før den blev hældt ud i isvand. Der blev tilsat 100 ml ether, og blandingen blev omrørt i 20 minutter. Den vandige fase blev ekstraheret med ether. Ether-10 faserne blev forenede, vasket successivt med vand og saltvand, tørret og inddampet. Remanensen blev oprenset ved silicagelchromatografi under anvendelse af dichlormethan/acetone (40:1), hvilket gav 1,8 g af titelforbindelsen som en blanding (monoacyl/diacyl = 6:1), som blev adskilt ved omvendt-faset præparativ HPLG, hvilket gav 5-phe-15 noxyacetoxy-faktor A: NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 6,8-7,4 (m; 5H) og 4,66 (s; 2H). Massespektrum: omfatter 746, 728, 710, 594 og 576, og 5,23-diphenoxyacetoxy-faktor A: NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 6,8-7,4 (m; 10H), 4,60 (s, 2H) og 20 4,70 (s, 2H).

EKSEMPEL 2

5-Phenoxyacetoxy-23- (4-methylphenoxythionocarbonyloxy) -faktor A

747 mg 5-phenoxyacetoxy-faktor A i 10 ml dichlormethan ved 0°C under nitrogen blev behandlet med 0,81 ml pyridin og derefter med 0,75 g -25 4-methylphenylchlorthionoformiat i 2 ml dichlormethan. Den mørke opløsning blev omrørt i 15 minutter ved 0°C og derefter i 22 timer 31

DK 160992 B

uden afkøling. Blandingen blev hældt ud i koldt vand og saltvand og ekstraheret med ether. De forenede etherfaser blev vasket med vand og saltvand, tørret og inddampet. Remanensen blev oprenset ved silica-gelsøjlechromatografi og omvendt-faset præparativ HPLC, hvilket gav 5 430 mg af titelforbindelsen.

NMR-Spektrum (CDC13): δ omfatter 3,34 (m; IH), 3,58 (m; IH), 3,97 (dlO; IH), 4,72 (s; 2H), 5,4 (m; IH), 5,59 (d6; IH) og 6,9-7,4 (m; 9H).

Massespektrum: omfatter 728, 616, 576, 466, 464, 448, 354, 297, 247, 10 219 og 151.

EKSEMPEL 3 5-Ter t.bu tyldimethyl s ilyloxyace toxy-faktor Å 2,144 g faktor A i 25 ml vandfri ether og 2,5 ml pyridin ved 0°C under nitrogen blev dråbevis behandlet med 1,2 g tert.butyldimethyl-15 silyloxyacetylchlorid i 10 ml ether. Blandingen blev omrørt i 90 minutter ved 0°C, før den dråbevis blev behandlet med yderligere 1,10 g syrechlorid i 10 ml ether. Blandingen blev omrørt ved 0°C i 60 minutter og hældt ud i koldt vand og ether. Den vandige fase blev vasket med ether. De forenede organiske faser blev vasket med vand og 20 saltvand, tørret og inddampet. Remanensen blev oprenset ved silica- gelchromatografi under anvendelse af dichlormethan/acetone (25:1) som eluent, hvilket gav titelforbindelsen.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 0,09 (s; 6H), 0,78 (d6; 3H), 0,90 (s; 9H), 0,93 (d6; 3H), 0,97 (d6; 3H), 1,03 (d6; 3H), 1,51 (s; 3H), 25 1,59 (s; 3H), 1,74 (s; 3H), 3,32 (m; IH), 3,52 (dlO; IH), 3,64 (m; IH), 3,74 (dlO; IH), 3,82 (m; IH), 4,32 (s; 2H) og 5,57 (d5; IH).

Massespektrum: omfatter 784, 766, 748, 595, 577, 484, 466, 354, 314, 297, 265, 247, 237, 219 og 151.

32

DK 160992 B

EKSEMPEL 4

5-Trimethylsilyloxy-faktor A

En opløsning af 250 ml faktor A i 10 ml tørt tetrahydrofuran blev behandlet med 0,12 ml tør triethylamin og 0,11 ml trimethylsilylch-5 lorid. Blandingen blev omrørt i 1 time ved 20“C og hældt ud i ether og vand. Den organiske fase blev vasket med vand, tørret og inddampet. Remanensen blev oprenset ved præparativ TLC under anvendelse af dichlormethan/acetone (10:1) som eluent, hvilket gav titelforbindelsen.

10 NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 0,18 (s; 6H), 0,80 (d6; 3H), 0,96 (d6; 3H), 1,00 (d6; 3H), 1,06 (d6; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,60 (s; 3H), 1,78 (s; 3H), 3,33 (m; IH), 3,75 (dlO; IH) og 4,41 (d6; IH).

Massespektrum: omfatter 684, 666, 651, 633, 484, 466, 448, 354, 314, 297, 265, 248, 247, 237, 219 og 151.

15 EKSEMPEL 5

5-Tert.butyldimethylsilyloxy-faktor A

250 mg faktor A og 163 mg imidazol i 10 ml tør dimethylformamid blev behandlet med 197 mg tert.butyldimethylsilylchlorid. Opløsningen blev omrørt i 2 timer og hældt ud i koldt vand. Blandingen blev ekstra-20 heret grundigt med ether, og de forenede etherekstrakter blev tørret og inddampet. Remanensen blev oprenset ved silicagelchromatografi under anvendelse af dichlormethan/acetone (10:1) som eluent, hvilket gav 235 mg af titelforbindelsen.

NMR-Spektrum (CDCI3): 6 omfatter 0,13 (s; 6H), 0,80 (d6; 3H), 0,92 25 (s, 9H), 0,96 (d6; 3H), 1,00 (d6; 3H), 1,03 (d6; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,60 (s; 3H); 1,80 (s; 3H), 3,37 (m; IH), 3,56 (dlO; IH), 3,64 (m; IH), 3,75 (dlO, IH) og 4,43 (d5; IH).

33

DK 160992 B

Massespektrum: omfatter 726, 708, 691, 651, 633, 466, 448, 354, 314, 297, 265, 247, 219 og 151.

EKSEMPEL 6

5-Acetoxy- og 5,23-diacetoxy-faktor A

5 3,0 g faktor A i 20 ml pyridin ved -5°C blev behandlet med 8 ml ed- dikesyreanhydrid, og den resulterende opløsning blev henstillet ved 3eC i 20 timer. Der blev tilsat 100 ml benzen, og opløsningen blev koncentreret i vakuum. Den tilbageværende olie blev chromatograferet over silicagel under anvendelse af dichlormethan/acetone (40:1) som 10 eluent, hvilket gav 2,06 g af 5-acetatet af faktor A indeholdende 10% af 5,23-diacetatet. Forbindelserne blev adskilt ved omvendt-faset præparativ HPLC, hvilket gav 5-acetoxy-faktor A (79% udbytte).

UV-Spektrum Amax (EtOH) = 244,5 nm 462).

NMR-Spektrum (CDCI3): ^ omfatter 2,14 (s; 3H).

15 Massespektrum: omfatter 654, 594 og 5,76.

5,23-Diacetoxy-faktor A (6,5% udbytte).

NMR-Spektrum (CDCI3): 5 omfatter 2,01 (s; 3H) og 2,13 (s; 3H).

Massespektrum: omfatter 696 og 636.

EKSEMPEL 7

20 5,23-Diacetoxy-faktor A

En opløsning af 600 mg faktor A i 1,0 ml tør pyridin blev behandlet med overskud af eddikesyreanhydrid (0,50 ml) og nogle få krystaller 4-N,N-dimethylaminopyridin. Efter 24 timer ved stuetemperatur blev blandingen hældt ud i ether, og den organiske fase blev derefter vas-

DK 160992 B

34 ket successivt med 2N saltsyre, mættet vandig natriumhydrogencarbona-topløsning og til sidst saltvand. Inddampning af den tørrede organiske fase gav en gummi, som blev oprenset på 45 mg Merck Kieselgel 60, 0,063-0,037 mm. Eluering af søjlen med dichlormethan/ether (9:1) gav 5 560 g af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]26 » +169o (c _ o,48 i CHC13).

D

Forbindelserne i eksemplerne 8 og 9 blev fremstillet på lignende måde, medmindre andet er angivet: 10 EKSEMPEL 8

23-Acetoxy-faktor B

Smp. 256-258eC (sønderdeling).

[c*]22 = +175° (c - 1,40 i CHCI3).

D

15 UV-Spektrum (ethanol): Amax 238,5 (26.200) og 244,5 nm (emax 28.850).

IR-Spektrum (CHBr3) 3460 (OH) og 1708 cm'^- (ester).

NMR-Spektrum (GDCI3): ^ omfatter 5,48 (q, 7Hz, IH), 4,90 (m, IH), 3,99 (d, 5Hz, IH), 3,55 (m, IH), 3,49 (s, 3H), 3,29 (m, IH), 2,00 (s, 3H), 1,79 (s, 3H), 1,66 (d, 6Hz, 3H) 1,58 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 0,98 20 (d, 7Hz, 3H) og 0,71 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 640 (M+).

Ud fra 392 mg faktor B. Den efter ethereksfraktionen vundne gummi blev krystalliseret af petroleumsether (60-80eC) og omkrystalliseret af diisopropylether, hvilket gav titelforbindelsen som nåle.

35

DK 160992 B

EKSEMPEL 9 5,23-Diacetoxy-faktor C Snip. 211-213°C.

[c*]22 - +200° (c - 0,40 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol): Amax 238,5 (30.400) og 245 nm (eraax 32.500).

IR-Spektrnm i/max 3440 (OH) og 1718 cm'^- (acetoxy og ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,90 (m, IH), 4,04 (d, 6Hz, IH), 3,96 (d, 10Hz, IH), 3,58 (m, IH), 3,32 (m, IH), 2,14 (s, 3H), 1,75 10 (s, 3H), 1,67 (d, 6Hz, 3H) 1,60 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 0,99 (d, 6Hz, 3H) og 0,71 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 668 (M+).

Ud fra 312 mg faktor C. Reaktionsblandingen blev hældt ud i ethylace-tat i stedet for ether og til sidst krystalliseret ved triturering 15 med diisopropylether.

EKSEMPEL 10

23-Acetoxy-faktor A

Til en omrørt og afkølet (0-5°C) opløsning af 530 mg af forbindelsen ifølge eksempel 7 i 10 ml methanol blev der dråbevis sat 1 ml af en 20 vandig opløsning af 30 mg natriumhydroxid. Efter 1,3 time blev blandingen hældt ud i ethylacetat, og den organiske fase blev derefter vasket successivt med 2N saltsyre, vand og til sidst saltvand. In-ddampning af den tørrede organiske fase gav en gul gummi, som i di-chlormethan blev sat på en søjle af 50 g Merck Kieselgel 60, 25 0,063-0,037 mm, pakket i samme opløsningsmiddel. Eluering med dich- lormethan/ether (9:1) gav titelforbindelsen, som blev vundet som et 36

DK 160992 B

næsten farveløst fast stof ved inddampning af en n-pentanopløsning.

Dette materiale (330 mg) havde [a]23 = +166° (c =* 0,64 i CHCI3).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amav 239 (26.500) og 245 nm (emax 29.300).

IR-Spektrum i/mav (CHBr3) 3540, 3460 (OH) og 1712 cm"^ (ester).

NMR-Spektrum (GDCI3): S omfatter 4,89 (m, IH), 4,27 (t, 6Hz, IH), 3,93 (d, 6Hz, IH), 3,91 (d, 10Hz, IH), 3,55 (m, IH), 3,25 (m, IH), 2,01 (s, 3H), 1,85 (s, 3H), 1,59 (s, 3H), 1,51 (s, 3H), 1,03 (d, 6Hz, 10 3H), 0,98 (d, 6Hz, 3H), 0,94 (d, 6Hz, 3H) og 0,69 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 654 (M+).

Forbindelserne i eksemplerne 11-13 blev fremstillet på lignende måde:

EKSEMPEL 11 23-Keto-faktor C

15 [a]22 - +110° (c = 0,40 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amav 245 nm (emax 28.500).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3540, 3470 (OH) og 1710 cm'1 (ester og keton).

20 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,47 (d-q, 1 og 6Hz, IH), 4,28 (t, 6Hz, IH), 3,94 (d, 6Hz, IH), 3,74 (d, 11Hz, IH), 3,50 (m, IH), 3,37 (m, IH), 1,87 (s, 3H), 1,69 (d, 6Hz, 3H), 1,50 (s, 3H), 0,99 (d, 6Hz, 3H), og 0,85 (d, 7Hz, 3H).

37

DK 160992 B

Massespektrum: omfatter 582 (M+),

Ud fra 120 mg af forbindelsen ifølge eksempel 19.

EKSEMPEL 12 23-Deoxy-faktor C (80 mg) 5 [a]23 = +104° (c = 0,56 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Afflax 244,5 nm (emax 28.050).

IR-Spektrum i/max (CHBrj) 3540, 3450 (OH) og 1702 cm‘l (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,28 (t 6Hz, IH), 3,95 (d, 6Hz, 10 IH), 3,57 (m, IH), 3,45 (d, 10Hz, IH), 3,26 (m, IH), 1,87 (s, 3H), 1,65 (d, 7Hz, 3H), 1,59 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 0,99 (d, 6Hz, 3H) og 0,69 (dårligt defineret dublet, 5Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 568 (M+).

Ud fra 125 mg af forbindelsen ifølge eksempel 25 som et farveløst 15 skum.

EKSEMPEL 13

23-Acetoxy-faktor C

[a]23 = +139° (c = 0,52 i CH2Cl2)-D

20 UV-Spektrum (ethanol) Amax 244,5 nm (emax 29.400).

IR-Spektrum ymax (CHBr3) 3550, 3480 (OH), 1716 (ester og acetat) og 1255 cm"^- (acetat).

38

DK 160992 B

NMR-Spektrum (CDCI3): 5 omfatter 4,91 (q, 3Hz, IH); 2,03 (s, 3H) og 1,64 (d, 7Hz, 3H) og 1,60 (s, 3H).

Massespektrum: - 626 (M+).

Ud fra forbindelsen ifølge eksempel 9 som et hvidt amorft fast stof.

5 EKSEMPEL 14

23-p-Tolyloxythiocarbonyloxy-faktor B

600 mg' faktor B blev opløst i 5 ml tørt dichlormethan, og til denne opløsning blev der sat 800 mg tørt pyridin og 750 mg p-tolylchlor-thionoformiat. Efter 24 timer ved omgivelsestemperatur blev blandin-10 gen hældt ud i ether, og den organiske opløsning blev oparbejdet, hvad angår neutralt materiale. Det rå thiocarbonat i dichlormethan blev sat på en søjle af 50 g silicagel pakket i samme opløsningsmiddel. Eluering af søjlen med dichlormethan/ether (95:5) gav en hovedkomponent, som blev oprenset yderligere ved præparativ omvendt--15 faset HPLC. Der blev isoleret 417 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]23 = +160° (c = 0,40 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 238 nm (emax 35.900).

20 IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3470, 3530 (OH), 1716 (ester) cm'^.

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 7,18 (d, 9Hz, 2H), 6,98 (d, 9Hz, 2H), 5,49 (q, 6Hz, IH), 4,02 (d, 5Hz, IH), 3,58 (m, IH), 3,31 (m, IH), 3,49 (s, 3H), 2,36 (s, 3H), 1,81 (s, 3H), 1,68 (d, 6Hz, 3H), 1,61 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,00 (d, 6Hz, 3H) og 0,82 (d, 7Hz, 3H).

25 Massespektrum: = 748 (M+).

39

DK 160992 B

Forbindelsen ifølge eksempel 15 blev fremstillet på lignende måde: EKSEMPEL 15 5-Acetoxy,23-p-tolyloxythiocarbonyloxy-faktor C (430 mg) [a]23 _ +133° (c = 0,48 i CHCI3).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amav 237,5 (36.900), 244 (36.900) og 273 nm («max 2·400).

IR-Spektrum vmax (CHBr3) 3500 (OH), 1732 (acetat) og 1710 αιΓ^ (ester) .

10 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 7,17 (d, 8Hz, 2H), 6,99 (d, 8Hz, 2H), 4,04 (d, 6Hz, IH), 3,98 (d, 10Hz, IH), 3,57 (m, IH), 3,31 (m, IH), 2,34 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 1,66 (d, 6Hz, 3H), 1,60 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 0,99 (d, 6Hz, 3H) og 0,81 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: »776 (M+).

15 Ud fra 500 mg af forbindelsen ifølge eksempel 16 som et farveløst skum.

EKSEMPEL 16

5-Acetoxy-faktor C

Til en opløsning af 338 mg faktor C i 0,5 ml tør pyridin blev der sat 20 71 mg eddikesyreanhydrid. Efter 20 timer ved stuetemperatur blev blandingen hældt ud i dichlormethan, og opløsningen blev oparbejdet med hensyn til neutralt materiale. Det således vundne råmateriale blev oprenset ved chromatografi på 28 g Merck K 60, 0,063-0,037 mm silicagel. Eluering af søjlen med dichlormethan/ether (9:1) gav 210 40

DK 160992 B

mg af titelforbindelsen, som blev vundet som et krystallinsk fast stof, smeltepunkt ca. 135°C.

[a]23 - +142° (c - 0,64 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amav 244,5 (emax 31.250).

IR-Spektrum (CHB^) 3490 (OH), 1718 (ester) og 1730 cm'^· (ace- toxy).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,03 (d, 6Hz, IH), 3,79 (d, 10Hz, IH), 3,54 (d, 10Hz, IH), 3,31 (m, IH), 2,14 (s, 3H), 1,74 (s, 3H), 10 1,66 (d, 7Hz, 3H), 1,60 (s, 3H), 1,52 (s, 3H), 0,98 (d, 6Hz, 3H) og 0,78 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: = 626 (M+).

EKSEMPEL 17

5-Acetoxy-23-keto-faktor A

15 En opløsning af 1,96 ml oxalylchlorid i 25 ml tørt dichlormethan ved -70°C under nitrogen blev dråbevis behandlet med en opløsning af 3,19 ml dimethylsulfoxid i 15 ml tørt dichlormethan og derefter dråbevis med en opløsning af 4,91 g 5-acetoxy-faktor A i 30 ml tørt dichlormethan. Den resulterende opløsning blev omrørt ved -70°C i 1,5 time, 20 inden den blev behandlet dråbevis med en opløsning af 12,6 ml trieth-ylamin i 40 ml tørt dichlormethan. Reaktionsblandingen blev omrørt i 1,25 time uden afkøling og hældt ud i en 1:1-blanding af koldt vand og ether. Den vandige fase blev ekstraheret med ether. De forenede organiske faser blev vasket med vand og saltvand, tørret og inddam-25 pet. Det tilbageblevne skum blev chromatograferet på silicagel under anvendelse af dichlormethan/acetone (50:1), hvilket gav 3,4 g af titelforbindelsen.

41

DK 160992 B

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 3,33 (m; IH), 3,49 (m; IH), 3,70 (dlO; IH) og 5,52 (d5; IH).

Massespektrum: omfatter 652, 634, 609, 591, 574, 482, 263, 235 og 151.

5 Forbindelserne i eksemplerne 18 og 19 blev fremstillet på lignende måde.

EKSEMPEL 18 23-Keto-faktor B (160 mg)

Smeltepunkt 213-215°C (blødgøring ca. 209°C).

10 [a]22 - +122° (c = 0,36 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 238,5 (26.400), 244,5 (28.700) og 282 nm (£max 400)· IR-Spektrum vmayi (CHBr3) 3450 (OH) og 1710 cm'*· (ester og keton).

15 NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,47 (q, 6Hz, IH), 4,02 (d, 6Hz, IH), 3,95 (d, 6Hz; IH), 3,73 (d, 10Hz, IH), 3,51 (s, 3H), 3,31 (m, IH), 1,81 (s, 3H), 1,69 (s, 3H), 1,67 (d, 6Hz, 3H), 1,50 (s, 3H), 0,97 (d, 6Hz, 3H) og 0,82 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 596 (M+).

20 Ud fra 599 mg faktor B som et mikrokrystallinsk fast stof ved krystallisation af ether.

42

DK 160992 B

EKSEMPEL 19 5-Acetoxy ,23-keto-faktor C (290 mg)

Smeltepunkt 241-243°C.

[a]23 - +118° (c - 0,60 i CHC13) .

5 » UV-Spektrum (ethanol) Amax 245 nm (emax 30.900).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3460 (OH) og 1712 cm'^- (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,05 (d, 6Hz, IH), 3,75 (d, 10Hz, IH), 3,52 (m, IH), 3,33 (m, IH), 2,14 (s, 3H), 1,76 (s, 3H), 1,69 (s, 10 3H), 1,68 (d, 5Hz, 3H), 1,51 (s, 3H), 0,98 (d, 6Hz, 3H) og 0,85 (d, 7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 624 (M+).

Ud fra forbindelsen ifølge eksempel 16 som mikrokrystallinske nåle efter krystallisation af diisopropylether/ether.

15 EKSEMPEL 20

23-Keto-faktor A

276 mg af forbindelsen fra eksempel 17 i 5 ml methanol ved 0°C blev dråbevis behandlet med en opløsning af 0,42 ml 2N natriumhydroxid i 1,0 ml methanol. Opløsningen blev henstillet ved 5°C i 5 timer, inden 20 den blev hældt ud i koldt vand. Blandingen blev ekstraheret med ether og ethylacetat. De forenede organiske faser blev vasket med saltvand, tørret og inddampet, hvilket efterlod et fast stof, som blev oprenset ved præparativ TLC under anvendelse af dichlormethan/acetone (10:1) som solvent, hvilket gav 140 mg af titelforbindelsen.

43

DK 160992 B

NMR-Spektrum (CDC13): S omfatter 3,28 (m; IH), 3,48 (m; IH), 3,70 (dlO; IH) og 4,28 (tr7; IH).

Massespektrum: omfatter 592, 549, 482, 370, 263, 235 og 151.

EKSEMPEL 21

5 5-Tert.butyldimethyIsilyloxyacetoxy-23-keto-faktor A

300 mg af forbindelsen fra eksempel 3 i 5 ml tørt dimethylformamid ved 22°C blev behandlet med 1,40 g pyridiniumdichromat (PDC) og omrørt i 3,5 timer. Der blev tilsat yderligere 1,0 g PDC, og omrøringen blev fortsat i 1 time. Blandingen blev hældt ud i isvand og 10 ether. Den vandige fase blev vasket grundigt med ether. De forenede organiske faser blev vasket med vand og saltvand, tørret og inddampet. Remanensen blev oprenset ved præparativ silicagel-TLC under anvendelse af dichlormethan/acetone (40:1) som eluent, hvilket gav 150 mg af et fast stof, som ved MS/HPLC blev vist at indeholde titel-15 forbindelsen.

Massespektrum: omfatter 782, 721, 592, 549, 370, 340, 263, 235 og 151.

EKSEMPEL 22 23-Keto-faktor A

20 0,4 ml af en sporesupension af Streptomyces thermoarchaensis NCIB

12015 i 10%'s glycerol blev anvendt til at pode en 250 ml's Erlen-meyer-kolbe indeholdende 50 ml medium indeholdende: 44

DK 160992 B

g/1 D-glucose 15,0

Glycerol 15,0

Soj apepton 15,0 5 NaCl 3,0

CaC03 1,0

Destilleret vand op til 1 1. pH-Værdien blev justeret til 7,0 ved hjælp af vandigt NaOH før autoklavering.

Kolben blev inkuberet ved 28°C i 2 dage på en rotationsryster ved 250 10 omdr./minut med en rotationsbevægelse med en diameter på 50 mm. Por tioner på 4 ml blev derefter anvendt til at pode hver af fire 2-liters fladbundede kolber hver indeholdende 200 ml af samme medium før inkubation under samme betingelser i 2 dage.

Indholdet af de 4 kolber blev derefter anvendt til at pode en 70-li-15 ters fermentationsbeholder indeholdende 40 1 af samme medium suppleret med 0,06% polypropylenglycol 2000. Der blev under hele fermentationen tilsat polypropylenglycol 2000 efter behov for at styre skumningen. Fermentationen blev udført ved 28°C under agitation og beluftning, der var tilstrækkelig til at opretholde et opløst oxygen-20 niveau på over 30%'s mætning. Efter 24 timers fermentation blev portioner på 800 ml og 9 1 overført til henholdsvis en 70-liters fermentor indeholdende 40 1 medium og en 700-liters fermentor indeholdende 450 1 medium. Begge disse fermentorer indeholdt følgende medium: g/1 25 D-glucose 2,5

Maltdextrin (MD30E) 25,0

Arkasoy 50 12,5

Roemelasse 1,5 K2HP04 0,125 30 CaC03 (Ar) 1,25

Silicone 1520 0,6 (Dow Corning) 45

DK 160992 B

Destilleret vand op til 1 1. pH-Værdien blev justeret til 6,5 ved hjælp af vandig H2SO4 før sterilisation.

Disse fermentationer blev udført ved 34°C med agitation og beluftn-ing, der var tilstrækkelig til at opretholde et opløst oxygenniveau 5 på over 30%'s mætning. Der blev tilsat polypropylenglycol 2000 antis -kummiddel efter behov. Efter 24 timer blev pH-værdien i hver fermentor justeret til 7,2 ved tilsætning af vandig H2SO4. Fermentationerne blev høstet og forenet efter 4 dage.

Myceliet (10,4 kg) fra den samlede høstdyrkningsvæske (423 1) blev 10 opsamlet i en Sharpies PS16AY centrifuge. Myceliet blev omrørt kraftigt i 50 1 methanol i 40 minutter og derefter filtreret. Remanensen blev resuspenderet i 15 ml methanol og igen filtreret. De forenede filtrater (55 1) blev derefter blandet med 27 1 vand og 30 1 60-80°C petroleumsether og omrørt i 20 minutter.

15 Faserne blev adskilt i en Westfalia MEM1256 centrifuge, og methanol -fasen (75 1) blev blandet med yderligere 38 1 vand og 30 1 60-80°C petroleumsether. Efter 20 minutter blev faserne igen adskilt i centrifugen, idet der blev sat 2 1 acetone til petroleumsetherfasen for at bryde emulsionen. De 110 1 methanolfase blev blandet med 38 1 vand 20 og 30 1 60-80°C petroleumsether en tredje gang, idet faserne blev adskilt som tidligere. Der blev igen tilsat 3 1 acetone til petroleumsetherfasen for at bryde emulsionen.

De tre hexanfaser blev forenede (90 1) og koncentreret ved lavt tryk (damptemperatur 25°C). Koncentratet (9,8 1) blev tørret med 3 kg 25 natriumsulfat og derefter inddampet til en olie.

Olien blev opløst i 0,5 1 dichlormethan og filtreret gennem Dicalite 478. De 0,9 1 opløsning blev sat på en søjle (150 x 10 cm) af silica-gel (Merck) ved 6 1/time, vasket med 4 1 dichlormethan og elueret med en blanding af chloroform/ethylacetat (3:1 volumen/volumen). Frak-30 tionen, der eluerede mellem 14,6 og 33,3 1 blev koncentreret til et fast stof og genopløst i chloroform/ethylacetat (3:1 volumen/volu-men).

46

DK 160992 B

Opløsningen blev genchromatograferet på en søjle af silicagel med samme opløsningsmiddel. Den fraktion, der eluerede mellem 14,5 og 31,5 1, blev tørret til et fast stof og opløst i chloroform/ethyl-acetat (3:1 volumen/volumen). Denne opløsning blev igen chromatogra-5 feret på silicagel under samme betingelser som før, og den fraktion, der eluerede mellem 14 og 31 1, blev tørret til et fast stof.

Det faste stof blev opløst i 1,23 1 70%'s volumen/volumen acetonitril i vand med tilstrækkelig methanol til at give en klar opløsning.

Opløsningen blev chromatograferet i 5 ml's portioner på en søjle af 10 Spherisorb 0DS2. Søjlen blev elueret med 70%'s acetonitril ved en strømningshastighed, som steg fra 20 ml/minut til 34 ml/minut i løbet af 21 minutter. Den fraktion fra hver portion, som eluerede mellem 12,4 og 16 1 blev samlet sammen og fortyndet med et lige så stort volumen vand. Denne opløsning blev derefter sat på en søjle af 2 1 15 Montedison S112 makroretikulært polystyren. Søjlen blev vasket med 35%’s acetonitril og elueret med acetone. Den fraktion, der eluerede mellem 0,5 og 1,25 1, blev tørret til et fast stof.

Det faste stof blev opløst i 20 ml acetonitril og chromatograferet på en søjle af Sephadex® LH20 i samme opløsningsmiddel. De fraktioner, 20 der eluerede mellem 1,08 og 1,26 1, blev opsamlet og tørret til et fast stof.

Det faste stof blev opløst i 10 ml 60%’s acetonitril med tilstrækkelig methanol til en klar opløsning. Denne blev i 2 ml's portioner igen chromatograferet på søjlen af Spherisorb 0DS2 og elueret med 25 60%'s acetonitril ved 25 ml/minut. De fraktioner, der eluerede mellem 0,95 1 og 1,08 1, blev samlet sammen og tørret til et fast stof. Dette faste stof blev genopløst i 5 ml chloroform og chromatograferet på en søjle af Merck silicagel 60. Det blev elueret med chloroform ved 10 ml/minut, og den fraktion, der eluerede mellem 400 ml og 790 ml, 30 blev tørret, hvilket gav 33 mg af titelforbindelsen som et fast stof. NMR-Spektret var konsistent med at indeholde 23-keto-faktor A.

47

DK 160992 B

E.I.-Massespektroskopi gav en molekylarion ved 610 og gav karakteristiske fragmenter ved 592 549 498 5 482 370 263 151

En prøve viste sig at indeholde 23-keto-faktor A på HPLC ved sammen-10 ligning med autentisk keton fremstillet ved kemisk oxidation af faktor A.

EKSEMPEL 23

5-Phenoxyacetoxy-23-deoxy-faktor A

350 mg af forbindelsen fra eksempel 2 og 25 mg azobisisobutyronitril 15 i 20 ml tørt toluen under nitrogen ved 120°C blev dråbevis behandlet med en opløsning af 0,5 ml tri-n-butyltinhydrid i 10 ml tørt toluen. Opløsningen blev tilbagesvalet i 90 minutter, afkølet og inddampet, og remanensen blev chromatograferet på silicagel under anvendelse af dichlormethan/acetone (40:1) som opløsningsmiddel, hvilket gav 280 mg 20 af titelforbindelsen.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 3,32 (m; IH), 3,42 (dlO; IH), 3,57 (m; IH), 4,71 (s; 2H), 5,59 (d6; IH) og 6,8-7,4 (m; 5H).

Massespektrum: omfatter 730, 712, 578, 560, 468, 450, 356, 314, 299, 249, 248, 221 og 151.

25 Forbindelserne i eksemplerne 24 og 25 blev fremstillet på lignende måde.

EKSEMPEL 24 48

DK 160992 B

23-Deoxy-faktor B

Smeltepunkt 184-186°C.

[o]22 - +158° (c = 0,40 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amay 238,5 (28.150) og 244.5 nm (emax 30.650).

IR-Spektrum t/max (CHBr3) 3450 (OH) og 1705 cm"^ (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): 5 omfatter 4,01 (d, 6Hz, IH), 3,95 (d, 6Hz, IH), 3,49 (s, 3H), 3,29 (m, IH), 1,80 (s, 3H), 1,64 (d, 6Hz, 3H), 10 1,58 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 0,98 (d, 7Hz, 3H) og 0,69 (d, 6Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 582 (M*).

Ud fra 350 mg af forbindelsen fra eksempel 14 med undtagelse af, at remanensen blev ehromatograferet under anvendelse af dichlormethan efterfulgt af dichlormethan/ether (95:5), hvilket gav titelforbindel-15 sen som et krystallinsk fast stof efter triturering med n-pentan.

EKSEMPEL 25 5-Acetoxy-23-deoxy-faktor C (256 mg)

Smeltepunkt 230°C (sønderdeling).

[a]23 = +147° (c = 0,32 i CHCI3).

20 D

UV-Spektrum (ethanol) Amay 238,5 (28.000), 244,5 nm (emax 30.300).

IR-Spektrum ^π,3Χ (CHB^) 3440 (OH) 1730 (acetoxy) og 1710 cm"l (ester) .

49

DK 160992 B

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,05 (d, 5Hz, IH), 3,57 (m, IH), 3,33 (m, IH), 2,15 (s, 3H), 1,75 (s, 3H), 1,64 (d, 6Hz, 3H), 1,59 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 0,99 (d, 6Hz, 3H) og 0,68 (d, 5Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 610 (M+).

5 Ud fra 385 mg af forbindelsen fra eksempel 15 ved krystallisation af n-pentan.

EKSEMPEL 26

23-Deoxy-faktor A

240 mg af forbindelsen fra eksempel 23 blev sat til 10 ml af en 10 mættet opløsning af ammoniak i methanol ved'-5°C. Opløsningen blev omrørt ved 0-10eC i 2 timer, inden den blev inddampet til tørhed.

Remanensen blev chromatograferet på silicagel under anvendelse af dichlormethan/acetone (20:1), hvilket gav 180 mg af titelforbindelsen.

15 NMR-Spektrum (CDC13): S omfatter 3,27 (m; IH), 3,42 (d9; IH), 3,54 (m; IH) og 4,29 (t6; IH).

Massespektrum: omfatter 596, 578, 560, 468, 450, 356, 314, 299, 249, 248, 221 og 151.

EKSEMPEL 27

20 5-Acetoxy-23-mesyloxy-faktor A

En opløsning af 3,46 g 5-acetoxy-faktor A i 30 ml pyridin blev afkølet i et isbad og blev behandlet med 2,2 g methansulfonsyreanhy-drid. Efter 30 minutter fik blandingen lov at varme op til omgivel-sestemperatur, og efter yderligere 60 minutter blev den delt mellem 25 ethylacetat og 2N saltsyre. Den organiske fase blev skilt fra og blev 50

DK 160992 B

vasket successivt med 2N saltsyre, med mættet vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning og til sidst med mættet saltvand. Den organiske opløsning blev tørret over Na2S0^, og opløsningsmidlet blev dampet bort, hvilket gav et skum, som blev chromatograferet på en søjle af 5 silicagel (Merck Art 9385) pakket i hexan (60-80°C)/ethylacetat (3:1) og elueret med samme opløsningsmiddel. Passende fraktioner af hovedkomponenten blev forenet, og opløsningsmidlet blev dampet bort, hvilket gav 2,08 g af titelforbindelsen som et skum.

[cl]22 = +154° (c = 0,56 i CHClo).

10 » UV-Spektrum (CHCI3) Amax 247 nm (emax 29.070).

IR-Spektrum vmax (CHBr3) 3550, 3470 (OH) og 1735 og 1715 cm'1 (ester) .

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,90 (m, IH), 3,05 (s, 3H) og 2,16 15 (s, 3H).

EKSEMPEL 28

23-Tosyloxy-faktor B

250 mg faktor B, 204 mg p-toluensulfonsyreanhydrid og nogle få krystaller af 4-N,N-dimethylaminopyridin blev omrørt sammen i 0,5 ml tørt 20 pyridin i 24 timer. Blandingen blev hældt ud i ether, og den organiske fase blev derefter vasket successivt med 2M saltsyre, mættet vandigt natriunihydrogencarbonat og til sidst saltvand. Inddampning af den over Na2S04 tørrede etheriske fase gav et råmateriale, som i di-chlormethan blev sat på en søjle af 50 g silicagel (Merck kiselgel 25 60, 0,063-0,037 mm) pakket i samme opløsningsmiddel. Eluering med dichlormethan/ether (9:1) gav hovedkomponenten, som blev oprenset yderligere ved præparativ HPLC. Titelforbindelsen blev vundet som en gummi.

51

DK 160992 B

[a]23 = +173° (c = 0,84 i CHC13).

D

UV-Spektrum (EtOH) Amax 235 (30.000) og 244,5 nm (€max 30.800).

IR-Spektrum ^max (Cand) 1708 cm'^ (ester).

5 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 7,82 (d, 10Hz, 2H), 7,29 (d, 10Hz, 2H), 4,83 (q, 3Hz, IH), 3,50 (s, 3H) og 2,43 (s, 3H).

Massespektrum: omfatter 752 (M+).

EKSEMPEL 29

(a) 5-Acetoxy-23-n-butoxy-faktor A

10 1 g sølvcarbonat blev sat til en opløsning af 325 mg 5-acetoxy-faktor A i tør ether efterfulgt af 0,5 ml iodbutan og 550 mg sølvperchlorat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 20 timer, hvorefter der blev tilsat 0,5 ml collidin. Efter omrøring i yderligere 20 minutter blev blandingen filtreret, og filtratet blev vasket successivt med 2N 15 saltsyre, mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og vand. Den tørrede organiske fase blev inddampet til næsten tørhed, og olien blev oprenset ved chromatografi på Merck kiselgel 60, 0,063-0,037 mm. Eluering af søjlen med hexan/ethylacetat (3:1) gav 276 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

20 [ct]22 - +160° (c - 0,94 i CHCl3).

D

UV-Spektrum (EtOH) Amax 245 nm (emax 28.300).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 3,16 (m, IH), 3,43 (m, IH), 3,43 (m, IH), 3,59 (m, IH).

25 Følgende forbindelse blev fremstillet på lignende måde:

(b) 5-Acetoxy-23-ethoxy-faktor A

52

DK 160992 B

Ud fra 5-acetoxy-faktor A og ethyliodid. Titelforbindelsen blev vundet som et farveløst skum.

[a]22 - +167° (c = 1,02 i CHC13).

5 » UV-Spektrum (EtOH) Amax 245 nm (emax 28.070).

NMR-Spektrum (CDCI3): 5 omfatter 3,25 (m, IH), 3,46 (m, IH), 3,64 (m, IH).

EKSEMPEL 30

10 23-Methoxy-faktor B

509 mg sølvsalicylat blev sat til en opløsning af 128 mg faktor B og 0,5 ml methyliodid i 50 ml tør ether, og blandingen blev omrørt i 4 dage ved stuetempertur og derefter filtreret. Filtratet blev inddampet, og den resulterende gummi blev oprenset ved chromatografi på 100 15 ml Merck kiselgel 60, 0,063-0,037 mm. Eluering af søjlen med petrole-umsether (kogepunkt 40-60°C)/ethylacetat (3:1) gav 85 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]22 = +188° (c - 0,56 i CHC13).

D

20 UV-Spektrum (EtOH) Amax 245,5 nm (emax 29.300).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 3,34 (S, 3H), 3,40 (m, IH).

Massespektrum: omfatter 612 (M+).

Forbindelsen ifølge eksempel 31 blev fremstillet på lignende måde.

23-Ethoxy-faktor B (147 mg) EKSEMPEL 31 53

DK 160992 B

[a]21 - +194° (c - 0,72 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (EtOH) Amax 245,5 nm (emax 28.500).

NMR-Spektrum (CDCI3): 6 omfatter 3,26 (m, IH), 3,47 (m, IH), 3,65 (m, IH).

Ud fra 183 mg faktor B og 0,5 ml ethyliodid.

EKSEMPEL 32 10 Faktor A-23-hemioxalat 1 g faktor A (renhed ca. 70%) og 1,5 g calciumcarbonat blev omrørt sammen i 20 ml dichlormethan ved 21°C, og til suspensionen blev der på en gang sat overskud af oxalylchlorid (1,0 ml). Efter 4-5 minutter blev blandingen behandlet med 15 ml vand, og efter yderligere 5 15 minutter med 10 ml 2M HC1 og 70 ml ethylacetat. Den organiske fase blev skilt fra, vasket med vand og saltvand og derefter behandlet med affarvende trækul. Efter 5-10 minutter blev den organiske opløsning filtreret gennem faseseparationspapir, og opløsningsmidlet blev fjernet fra filtratet. Remanensen i 50 ml ether blev klaret ved filtre-20 ring gennem "Hyflo", og fjernelse af opløsningsmiddel gav et svagt gult skum. Triturering af dette materiale med ca. 7 ml diisopropylet-her gav 750 mg af titelforbindelsen som et krystallinsk fast stof efter vask af det faste stof med diisopropylether og n-pentan. De fysiske konstanter og spektrale data svarer til dem, der er beskrevet 25 for produktet fra eksempel 36.

54

DK 160992 B

EKSEMPEL 33 Faktor A

En opløsning af 500 mg 23-hemioxalat-faktor A i 30 ml dichlormethan blev omrørt kraftigt sammen med vandig natriumhydroxid (1,54 g i 30 5 ml vand) i 2 timer ved 21°C. Den organiske fase blev opsamlet, og den vandige fase blev vasket med et lille volumen dichlormethan. De organiske faser blev forenet, vasket med 2M saltsyre, derefter tørret over Na2S04 og fik opløsningsmidlet fjernet, hvilket gav 430 mg af titelforbindelsen som et skum. Forbindelsen viste sig at være faktor 10 A ved sammenligning med en autentisk prøve faktor A.

EKSEMPEL 34

Faktor A, 5-hemisuccinat

En opløsning af 306 mg faktor A og 60 mg ravsyreanhydrid i 0,5 ml tørt pyridin blev omrørt ved 22°C i 24 timer. Blandingen blev fortyn-15 det med ether, og den organiske fase blev derefter vasket med 2N

saltsyre og saltvand. Inddampning af den tørrede etheriske fase gav et sktun, hvorfra titelforbindelsen blev isoleret ved omvendt-faset præparativ HPLC. Produktet i ether blev udfældet som 86 mg af et hvidt amorft fast stof ved tilsætning af n-pentan.

EKSEMPEL 35 5-Acetoxy-faktor A, 23-hemioxalat

DK 160992B

55 600 mg 5-acetoxy-faktor A, 400 mg calciumcarbonat og overskud af oxalylchlorid (0,8 ml) blev omrørt sammen i 20 ml tørt dichlormethan 5 ved 21eC i 1 1/4 time. Blandingen, fortyndet med ether, blev hældt ud i mættet vandig natriumhydrogencarbonat og blev derefter omrørt kraftigt i 20 minutter før syrning til pH-værdi 2 ved hjælp af 2N saltsyre. Inddampning af den over Na2S0^ tørrede organiske fase gav en gul gummi, som blev opløst i acetone, og opløsningen blev derefter 10 omrørt med affarvende trækul. Efter en konventionel oparbejdning blev der vundet et farveløst skum. Dette materiale blev opløst i 5 ml ether, og opløsningen blev fortyndet med n-pentan til udfældning af 403 mg af titelforbindelsen som et amorft hvidt fast stof.

[c*]23 - +160° (c - 0,40 i CHC13).

15 D

UV-Spektrum (EtOH) Amax 245 nm (emax 30.800).

IR-Spektrum i/max (ΟΗΒΓβ) 3530,3445 (OH), 1802 (syremonomer), 1775 (syredimer) og 1728 cm'1 (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter ca. 5,53 (dækket d., IH), 5,12 (m, 20 IH) og 2,16 (s, 3H).

EKSEMPEL 36

Faktor A, 23-hemioxalat

Til en omrørt og afkølet (0-5°C) opløsning af 120 mg 5-acetoxy-faktor A, 23-hemioxalat i 4 ml methanol blev der dråbevis sat en opløsning 25 af 14 mg natriumhydroxid i 1 ml vand. Efter 1 3/4 time blev den svagt gule opløsning hældt ud i ethylacetat/2N saltsyre, og den organiske opløsning blev derefter opsamlet, tørret over Na2S04 og inddampet, 56

DK 160992 B

hvilket gav et næsten farveløst fast skum. Dette materiale blev opløst i n-pentan indeholdende et lille volumen ether, og opløsningen blev derefter ekstraheret med fortyndet vandig kaliunihydrogencarbo-natopløsning. Den vandige opløsning blev gjort sur til pH-værdi 2 ved 5 hjælp af 2N saltsyre, og bundfaldet blev derefter ekstraheret over i dichlormethan. Inddampning af den over NasS0^. tørrede organiske fase gav en gummi, som blev opløst i et lille volumen ether. Fortynding af denne opløsning med n-pentan gav 52 mg af titelforbindelsen som et hvidt fast stof.

10 [a]23 = +156° (c = 0,69 i CHC13).

D

UV-Spektrum· (EtOH) Amax 244,5 nm (emax 28.200).

IR-Spektrum ymay (CHBr3) 3.3^.0-3.600 (OH), 1805 (syremonomer) og 1720 cm’-*· (syredfmer og estere).

15 NMR-Spektrum (CDCI3): S omfafcter 4,30 (d, 5Hz, IH) og 5,14 (m, IH).

0 EKSEMPEL 37

Faktor E-23 -hemioxalat

Titelforbindelsen blev fremstillet ud fra faktor B på en måde i lighed med det i eksempel 35 beskrevne. Den blev oprenset ved om-20 vendt-faset præparativ HPLC og blev vundet som et amorft hvidt pulver (ether/n-pentan).

[c*]23 = +160° (c = 0,20 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (EtOH) Amax 245,5 nm (emax 28.800).

25 IR-Spektrum J/max (CHB^) 3460 (OH), 1800 (syremonomer), 1770 (syredi-mer), 1724 og 1712 cm“* (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,15 (m, IH og 3,50 (s, 3H).

57

DK 160992 B

Massespektrum: omfatter 670 (M+).

EKSEMPEL 38

5-Acetoxy-23-ethyloxalyloxy-faktor A

5 En opløsning af 320 mg 5-acetoxy-faktor A og overskud af ethyloxa-lylchlorid (0,5 ml) i 6 ml tørt dichlormethan blev omrørt sammen i 1 time i nærværelse af 300 mg calciumcarbonat. Blandingen, fortyndet med ether, blev hældt ud i mættet natriumhydrogencarbonat og blev derefter omrørt i 20 minutter før udhældning i ethylacetat. Inddamp-10 ning af den over Na2S0^ tørrede organiske fase gav 325 mg af en gummi, som i dichlormethan blev sat på en søjle af 25 g Merck kiselgel 60, 0,21-0,063 mm siilicagel pakket i samme opløsningsmiddel.

Eluering af søjlen med dichlormethan og derefter 'med dichlormethan/-ether (95:5) gav 265 mg af) titelforbindelsen som et hvidt skum.

15 [ct]23 - +157° (c « 0,41 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (EtOH) Xmax 245 nm (emax 32.800).

IR-Spektrum vmax (CHBrg) 3530, 3480 (OH), 1760 og 1735 cm'-*- (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,4-5,6 (m, 2H); 5,05 (m, IH), 4,32 20 (q, 7Hz, 2H), 2,13 (s, 3H) og 1,35 (t, 7Hz, 3H).

EKSEMPEL 39

23-Hethyloxalyloxy-faktor A

En opløsning af 50 mg 5-acetoxy-23-ethyloxalyloxy-faktor A i 1 ml methanol indeholdende 0,01 ml koncentreret svovlsyre fik lov at 25 henstå ved 21°C i 17 timer. Blandingen blev derefter hældt ud i 58

DK 160992 B

ethylacetat, og den organiske fase blev oparbejdet, hvad angår neutralt materiale. Produktet blev oprenset ved chromatografi på 15 g Merck kiselgel 60, 0,21-0,063 mm, silicagel under anvendelse af først dichlormethan og derefter dichlormethan/ether (9:1) som eluerende 5 opløsningsmidler. Titelforbindelsen blev vundet som 25 mg af en farveløs gummi.

[a]23 - +147° (c = 0,28 i CHC13).

D

UV-Spektrum (EtOH) Amav 245 nm (emax 26.000).

10 IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3550, 3480 (OH), 1763, 1737 og 1710 cm'1 (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): 6 omfatter 4,29 (bred t, 7Hz, IH), 5,09 (m, IH) og 3,88 (s, 3H).

EKSEMPEL 40 15 Faktor A-5,23-bis-hemioxalat 200 mg faktor A og overskud af oxalylchlorid (0,3 ml) blev i 3 ml dichlormethan omrørt i 2 timer i nærværelse af 300 mg calciumcarbonat (Calofort U) ved 21 “C. Blandingen blev hældt ud i ether/mættet vandigt natriumhydrogencarbonat og blev derefter omrørt i yderligere 20 20 minutter inden syrning til pH-værdi 2 ved hjælp af fortyndet saltsyre. Inddampning af den over Na2S0^ tørrede organiske fase gav en gummi, ud fra hvilken titelforbindelsen blev isoleret ved omvendt--faset præparativ HPLC og blev vundet som et amorft fast stof (et-her/n-pentan).

25 [a]22 = +142° (c =0,41 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (EtOH) Amav 245,5 nm (emax 29.200).

59

DK 160992 B

IR-Spektrum umay (CHB^) 3550, 3440 (OH), 1800 og 1775 (syremonomer) og 1730 cm"l (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,64 (m, 2H) og 5,13 (m, IH).

EKSEMPEL 41 5 Faktor B-23-chloracetat 600 mg faktor B og overskud af chloracetylchlorid (0,4 ml) blev omrørt i 20 timer ved 21°C i 10 ml tørt dichlormethan i nærværelse af 380 mg calciumcarbonat (Calofort U). Blandingen blev derefter hældt ud i ethylacetat, og den organiske fase blev skilt fra og vasket med 10 mættet vandigt natriumhydrogencarbonat, 2N saltsyre og saltvand. In-ddampning af den over Na2S0^ tørrede organiske fase gav en gul gummi, som ved triturering med diisopropylether/petroleumsether (40-60eC) gav et krystallinsk fast stof. Omkrystallisaton af dette materiale fra diisopropylether/petroleumsether (40-60°C) gav titelforbindelsen, 15 smeltepunkt 224-225°C.

[a]23 - +77Q (c = 0,60 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (EtOH) Amax 244,5 nm (emax 30.250).

IR-Spektrum umax (CHBr3) 3540, 3470 (OH), 1740 (chloracetat) og 1710 20 cm"^ (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,99 (m, IH) og 3,49 (s, 3H).

Massespektrum: omfatter 674, 676 (M+ 33C1 og 3^C1).

5 - Acetoxy - 23-cyc lopropylcarbonyloxy-faktor A

EKSEMPEL 42 60

DK 160992 B

En opløsning af 140 ml 5-acetoxy-faktor A i 1 ml pyridin blev behandlet med 0,08 ml cyclopropancarboxylsyrechlorid. Efter 3 timer blev 5 reaktionsblandingen delt mellem ethylacetat og 2N saltsyre. Den organiske fase blev skilt fra og blev vasket successivt med 2N saltsyre og mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning. Den organiske opløsning blev tørret over Na2S0^, og opløsningsmidlet blev dampet bort, hvilket efterlod en olie, som blev chromatograferet over en 10 søjle af 80 ml silicagel (Merck Art 9385) pakket i hexan (60-80°C)/-ethylacetat (3:1) og elueret med samme opløsningsmiddel. Passende fraktioner af hovedkomponenten blev forenet, og opløsningsmidlet blev dampet af, hvilket gav 70 mg af titelforbindelsen som et skum.

[et]22 « +143° (c = 0,54 i CHC13).

15 D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 20.310).

IR-Spektrum vmax (GHBr3) 3550, 3470 (OH) og 1733, 1712 (ester) cm'1.

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 2,16 (s; 3H), 3,33 (m; IH), 3,88 (d, J=10Hz, IH), 5,01 (m; IH) og 5,5-5,6 (m; 2H).

20 Forbindelserne i eksemplerne 43-45 blev fremstillet på lignende måde. EKSEMPEL 43

5-Acetoxy-23-cyclobutylcarbonyloxy-faktor A

0,5 g 5-acetoxy-faktor A og 0,25 ml cyclobutancarboxylsyrechlorid gav 0,37 g af titelforbindelsen som et skum.

25 [a]22 - +148° (c = 0,635 i CHC13).

D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 17.980).

61

DK 160992 B

IR-Spektrum t>max (CHB^) 3540, 3460 (OH) og 1729, 1710 (ester) cm'*-.

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 2,16 (s; 3H), 3,12 (kvintet; J=8Hz; IH), 3,32 (m; IH), 3,91 (d; J-10Hz; IH), 4,9-5,1 (m; 2H) og 5,5-5,6 5 (m; 2H).

EKSEMPEL 44

5-Acetoxy-23-cyclopentylcarbonyloxy-faktor A

0,28 g 5-acetoxy-faktor A og 0,2 ml cyclopentylcarbonylchlorid gav 0,17 g af titelforbindelsen som et skum.

10 [a]22 - +149° (c - 0,475 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 19.900).

IR-Spektrum vmax (CHB^) 3480 (OH) og 1730, 1710 (ester) cm'·*·.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 2,16 (s; 3H), 2,74 (kvintet, J=7Hz, 15 IH), 3,32 (m; IH), 3,90 (d, J=10Hz, IH), 4,94 (m; IH), 5,5-5,6 (m; 2H).

EKSEMPEL 45

5-Acetoxy-23-cyclohexylcarbonyloxy-faktor A

0,5 g 5-acetoxy-faktor A og 0,25 ml cyclohexylcarbonylchlorid gav 20 0,51 g af titelforbindelsen som et skum.

[a]20 - +143° (c = 0,58 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 21.570).

62

DK 160992 B

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3540, 3470 (OH), 1730 og 1710 (ester) cm"·*-.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 2,17 (s; 3H), 3,32 (m; IH), 3,91 (d; J=lOHz; IH), 4,9-5,1 (m; 2H), 5,5-5,6 (m; 2H).

5 EKSEMPEL 46

23-Cyclopropylcarbonyloxy-faktor A

En omrørt opløsning af 230 mg 5-acetoxy-23-cyclopropylcarbonyloxy--faktor A i 15 ml methanol blev afkølet i et isbad og blev behandlet med 0,5 ml 3%'s vandig natriumhydroxidopløsning. Efter 5 timer, 10 hvorunder reaktionsblandingen fik lov at varme op til stuetemperatur, blev opløsningen delt mellem ethylacetat og 2N saltsyre. Den organiske fase blev skilt fra, vasket to gange med 2N saltsyre, tørret over Na2S04 hvorefter opløsningsmidlet blev dampet bort. Remanensen blev chromatograferet på en søjle af 150 ml silicagel (Merck Art 9385) 15 pakket i hexan (60-80°C)/ethylacetat og elueret med samme opløsningsmiddel. Passende fraktioner af hovedkomponenten blev forenet, og opløsningsmidlet blev dampet af, hvilket efterlod 170 mg af titelesteren som et skum.

[a]22 = +146 c (c = 0,46 i CHCI3).

20 » UV-Spektrum (CHCI3) Amav 250,2 nm (emax 20.090).

IR-Spektrum umav (CHBr3) 3550, 3480 (OH) og 1709 (ester) cm-1.

NMR-Spektrum (GDCI3): S omfatter 3,26 (m; IH), 3,88 (d, J=10Hz, IH), 4,29 (t, J=7Hz, IH) og 5,01 (m; IH).

25 Forbindelserne i eksemplerne 47-49 blev fremstillet på lignende måde.

23-Cyclobutylcarbonyloxy-faktor Å EKSEMPEL 47 63

DK 160992 B

Afbeskyttelse af 330 mg 5-acetoxy-23-cyclobutylcarbonyloxy-faktor A gav 270 mg af titelesteren som et skum.

5 [a]1 2 3 4 5 6 - +149° (c - 0,63 i CHC13).

D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (€max 20.430).

IR-Spektrum i/mav (CHBr3> 3550, 3480 (OH) og 1710 (ester) cm"'·.

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 3,13 (kvintet; J=8Hz; IH), 3,26 (m; 10 IH), 3,92 (d; J=10Hz; IH), 4,29 (t; J=7Hz; IH), 4,9-5,1 (m; 2H).

EKSEMPEL 48

23-Cyclopentylcarbonyloxy-faktor A

Afbeskyttelse af 0,25 g 5-acetoxy-23-cyclopentylcarbonyloxy-faktor A gav 0,215 g af titelesteren som et skum.

[a]6 - +141° (c - 0,63 i CHCI3).

2

D

3 UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 19.990).

4 IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3550, 3480 (OH) og 1710 (ester) cm"1.

5 NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 2,74 (kvintet, J=7Hz, IH), 3,26 (m, 6 IH), 3,91 (d, J-10Hz; IH), 4,30 (t, J-7Hz, IH), 4,95 (m; IH).

EKSEMPEL 49

23-Cyclohexylcarbonyloxy-faktor A

64

DK 160992 B

Afbeskyttelse af 0,45 g 5-acetoxy-23-cyclohexylcarbonyloxy-faktor A gav 0,42 g af titelesteren som et skum.

5 [a]20 = +132° (c - 0,705 i CHC13).

D

UV-Spektrum (CHCI3) AmaY 250,2 nm (emax 18.510).

IR-Spektrum vmax (CHBr3) 555, 3480 (OH) og 1710 (ester) cm'1.

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 0,69 (d; J=7Hz; 3H), 3,91 (d; 10 J=10Hz; IH), 4,29 (t; J=7Hz; IH), 4,96 (m; IH).

EKSEMPEL 50

23 -Cyclopropylcarbonyloxy-5-methoxycarbonyloxy-faktor A

En opløsning af 0,1 g 23-cyclopropylcarbonyloxy-faktor A i 15 ml tørt dichlormethan blev afkølet i et isbad og blev behandlet med 0,2 ml 15 pyridin efterfulgt af 0,3 ml af en 1M opløsning af methylchlorformiat i dichlormethan. Efter 20 minutter blev opløsningen fortyndet med dichlormethan, vasket med 2N saltsyre og tørret over natriumsulfat, hvorefter opløsningsmidlet blev dampet af. Remanensen blev chromato-graferet på en søjle af 100 ml silicagel (Merck Art 9385) pakket i 20 hexan (60-80°C)/ethylacetat (3:1) og elueret med samme opløsningsmiddel. Passende fraktioner af hovedkomponenten blev forenet, og opløsningsmidlet blev dampet af, hvilket efterlod 0,106 g af titel-forbindelsen som et skum.

[a]20 = +149° (c =0,63 i CHCI3).

25 D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 20.470).

65

DK 160992 B

IR-Spektrum i/max (ΟΗΒΓβ) 3470 (OH), 1745 (carbonat), 1710 (ester) og 998 (C-O) cm'1.

NMR-Spektrum (CDC13): S omfatter 5,56 (s; IH), 5,01 (m; IH), 3,88 (d; J-10Hz; IH), 3,83 (s; 3H), 0,67 (d; J=7Hz; 3H).

5 Forbindelserne i eksemplerne 51-53 blev fremstillet på lignende måde: EKSEMPEL 51 23-Cyclobutylcarbonyloxy-5-methoxycarbonyloxy-faktor A (0,13 g) [q]20 = +149° (c - 0,515 i CHCI3).

D

10 UV-Spektrum (CHCI3) lmax 250,6 nm (emax 20.100).

IR-Spektrum ^max (CHBr3) 3480 (OH), 1744 (carbonat), 1710 (ester) og 996 (C-O) cm'1.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,56 (s; IH), 4,96 (m; IH), 3,92 (d; J=10Hz; IH), 3,83 (s; 3H), 3,13 (kvintet; J=8Hz; IH), 0,70 (d; J=7Hz; 15 3H).

Ud fra 0,12 g 23-cyclobutylcarbonyl-faktor A.

EKSEMPEL 52 23-Cyclopentylcarbonyloxy-5-methoxycarbonyloxy-faktor A (0,115 g) [ce]20 - +141° (c = 0,505 i CHC13).

20 D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 nm (emax 22.160).

66

DK 160992 B

IR-Spektrum i/max (CHB^) 3470 (OH), 1744 (carbonat), 1710 (ester) og 1000 (C-0) cm-1.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,56 (s; IH), 4,95 (m; IH), 3,91 (d; J-10Hz; IH), 3,83 (s; 3H), 2,74 (kvintet; J=8Hz; IH), 0,69 (d; J=7Hz; 5 3H).

Ud fra 0,106 g 23-cyclopentylcarbonyloxy-faktor A.

EKSEMPEL 53 23-Cyclohexylcarbonyloxy-5-methoxycarbonyloxy-faktor A (0,1 g) [a]20 = +136° (c = 0,47 i CHCI3).

10 D

UV-Spektrum (CHCI3) Amax 250,2 rim (emax 20.230).

IR-Spektrum vmax (CHBr3) 3470 (OH), 1744 (carbonat), 1710 (ester) og 996 (C-0) cm'1.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,57 (s; IH), 4,97 (m; 2H), 3,92 (d; 15 J=10Hz; IH), 3,84 (s; 3H), 0,69 (d; J=7Hz; 3H).

Ud fra 0,108 g 23-cyclohexyllcarbonyloxy-faktor A.

EKSEMPEL 54

Faktor A, 5,23-di-n-butyrat

En opløsning af 306 mg faktor A, 0,33 ml n-smørsyreanhydrid og 244 mg 20 4-dimethylaminopyridin i 5 ml pyridin blev omrørt ved 20°C i 18 timer og derefter hældt ud i en blanding af 50 ml ethylacetat og 50 ml 2N saltsyre. Den organiske fase blev vasket med 2N saltsyre, 25 ml mættet natriumhydrogencarbonat og 25 ml saltvand, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed. Remanensen blev oprenset ved 67

DK 160992 B

chromatografi på 40 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let ben-zin/ethylacetat (5:1) gav 200 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]2° _ +144° (c - 1,13 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 245 nm (emax 31.800).

IR-Spektrum vmsyi (CHBr3) 1720 (ester) cm'·*·.

NHR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,94 (m, IH), 3,92 (d, J-10Hz, IH), 2,39 (t, J-7Hz, 2H), 2,28 (t, J-7Hz, 2H) og 0,70 (d, 10 J-7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 752 (M+).

Forbindelserne i eksemplerne 56, 57, 60, 62, 64, 65 og 94 blev fremstillet på lignende måde.

EKSEMPEL 55 15 Faktor A-23-n-butyrat

En opløsning af 160 mg faktor A-5,23-di-n-butyrat i 10 ml methanol blev omrørt ved 0eC, og der blev tilsat 0,25 ml 1M natriumhydroxid.

Den resulterende opløsning blev omrørt i 90 minutter ved 0-5°C, der blev tilsat yderligere 0,25 ml 1M natriumhydroxid, hvorefter omrørin-20 gen blev fortsat i yderligere 4 timer. Opløsningen blev hældt ud i en blanding af 50 ml ethylac-etat og 25 ml 2N saltsyre, og den organiske fase blev vasket med vand og saltvand, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed. Remanensen blev oprenset ved chromatografi på 20 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let benzin/ethylacetat (2:1) 25 gav 68 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]20 - +164° (c = 1,03 i CHCI3).

D

68

DK 160992 B

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244,5 nm (emax 29.600).

IR-Spektrum j/max (CHBrj) 3550 og 3470 (OH) og 1710 cnT^- (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,93 (m, IH), 4,28 (t, J=7Hz, IH), 3,91 (d, J=10Hz, IH), 2,28 (t, J=7Hz, 2H), 1,65 (m, 2H), 0,94 (t, 5 J=7Hz, 3H) og 0,69 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 682 (M+).

Forbindelserne i eksemplerne 59, 61, 63, 66, 88 og 95 blev fremstillet på lignende måde.

EKSEMPEL 56 10 Faktor A-5-acetat-23-n-butyrat (14-3 mg) [a]20 = +152° (c = 0,7 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 27.300).

IR-Spektrum vmax (CHB^) 3490 (OH) og 1720 cm'^· (estere).

15 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH), 2,29 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 0,96 (t, J=7Hz, 3H) og 0,70 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 218 mg faktor A-5-acetat og 0,16 ml n-smørsyreanhydrid.

Faktor A-5,23-diisobutyrat (300 mg) EKSEMPEL 57 69

DK 160992 B

[a]20 - +157° (c = 0,61 i CHCI3).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 29.200).

IR-Spektrum i/max (CHBrg) 3470 (OH) og 1720 cm'^· (estere) .

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,53 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 3,93 (d, J-lOHz, IH), 2,8-2,4 (m, 2H), 1,23 (d, J=7Hz, 6H), 1,20 (d, J=7Hz, 6H) og 0,70 (d, J=7Hz, 3H).

10 Ud fra 306 mg faktor A og 0,2 ml isobutyrylchlorid EKSEMPEL 58

Faktor A-5-acetat-23-isobutyrat

En opløsning af 131 mg faktor A-5-acetat, 0,05 ml isobutyrylchlorid, 0,1 ml pyridin og 25 mg 4-dimethylaminopyridin i 10 ml tørt dichlor-15 methan blev omrørt ved 20°C i 16 timer. Opløsningen blev fortyndet med 30 ml dichlormethan, vasket med 2N saltsyre, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed. Remanensen blev oprenset ved chromatografi på 15 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let ben-zin/ethylacetat (4:1) gav 57 mg af titelforbindelsen som et farveløst 20 skum.

[a]20 = +159° (c - 0,61 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (cmax 30.400).

IR-Spektrum ymav (CHB^) 3480 (OH) og 1713 cm'1 (estere).

70

DK 160992 B

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 3,93 (d, J=10Hz, IH), 2,55 (septet, J=7Hz, IH), 2,17 (s, 3H), 1,20 (d, J=7Hz, 6H) og 0,70 (d, J=7Hz, 3H).

EKSEMPEL 59 5 Faktor A-23 -isobutyrat (280 mg) [α]20 = +162° (c = 0,65 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 31.000).

IR-Spektrum i/^ay (CHBr3) 3560 og 3480 (OH) og 1712 cm"·*· (estere).

10 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,95 (m, IH), 4,29 (t, J=7Hz, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH), 2,54 (septet, J=7Hz, IH), 1,19 (d, J=7Hz, 6H) og 0,69 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 420 mg faktor A-5-acetat-23-isobutyrat.

EKSEMPEL 60 15 Faktor A-5-acetat-23-heptanoat (437 mg) [a]20 = +153o (c _ 06 ± CHCi3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 29.700).

IR-Spektrum (CHBr3) 3490 (OH), 1730 og 1712 cm'·*· (estere).

20 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,93 (m, IH), 3,91 (d, J=10Hz, IH), 2,28 (t, J=8Hz, 2H), 2,13 (s, 3H), 0,86 (t, J=7Hz, 3H) og 0,68 (d, J=7Hz, 3H).

71

DK 160992 B

Ud fra 491 mg faktor A-5-acetat og 0,31 ml heptanoylchlorid.

EKSEMPEL 61

Faktor A-23-heptanoat (230 mg) [a]1 - +149° (c = 0,7 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 30.400).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3550 og 3480 (OH) og 1712 cm'1· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,94 (m, IH), 4,29 (t, J=7Hz, IH), 3,92 (d, J-lOHz, IH) 2,30 (t, J=8Hz, 2H), 0,88 (t, J=7Hz, 3H) og 0,69 10 (d, J-7Hz, 3H).

Ud fra 387 mg faktor A-5-acetat-23-heptanoat.

EKSEMPEL 62

Faktor A-5-acetat-23-pivaloat (70 mg) [a]1 - +159° (c - 0,69 i CHCI3).

15 » UV-Spektrum (ethanol) Araax 244 nm (emax 29.900).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3470 (OH), 1730 og 1710 cm-1 (estere).

NMR-Spektrum (CDC13): s omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,95 (m, IH), 3,91 (d, J=10Hz, IH), 2,16 (s, 3H), 1,22 (s, 9H) og 0,68 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 131 mg faktor A-5-acetat og 0,06 ml pivaloylchlorid.

Faktor A-23-pivaloat (214- mg) EKSEMPEL 63 72

DK 160992 B

[a]20 - +152° (c - 0,74 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 27.500).

IR-Spektrum i/max (CHBrg) 3550, 3500 (OH) og 1710 cm'·*- (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,95 (m, IH), 4,29 (bred s, IH), 3,91 (d, J=10Hz, IH), 1,23 (s, 9H) og 0,69 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 315 mg faktor A-5-acetat-23-pivaloat.

10 EKSEMPEL 64

Faktor A-5-acetat-23-benzoat (180 mg) [a]20 - +153° (c - 0,59 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 236 nm (emax 36.200).

15 IR-Spektrum i/max (CHB^) 3460 (OH), 1730 og 1707 cm"1- (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 8,21 (d, J=7Hz, 2H), 7,56 (t, J=7Hz, IH), 7,44 (t, J=7Hz, 2H), 5,5-5,6 (m, 2H), 4,07 (d, J»10Hz, IH), 2,17 (s, 3H) og 0,75 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 327 mg faktor A-5-acetat og 339 mg benzoeanhydrid.

EKSEMPEL 65

Faktor A-5,23-dibenzoat (370 mg) og 5-benzoat (200 mg) 73

DK 160992 B

Ud fra 613 mg faktor A og 0,35 ml benzoylchlorid; indledende fraktioner gav titeldibenzoatet.

5 [a]20 = +86° (c - 0,65 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 236 nm (emax 46.200).

IR-Spektrum »/max (CHBr3) 3480 (OH), 1710(estere), 1602 og 1585 cm'1 (phenyl).

10 NMR-Spektrum (CDCI3): $ omfatter 8,2-8,0 (m, 4H), 7,7-7,5 (m, 2H), 7,46 (t, J=7Hz, 4H), 5,61 (s, IH), 4,07 (d, J=10Hz, IH) og 0,76 (d, J-7Hz, 3H).

Yderligere fraktioner gav titelbenzoatet.

[a]20 - +80° (c = 0,61 i CHCI3).

15 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 237 nm (emax 39.200).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3500 (OH), 1712 (estere), 1601 og 1585 cm'1 (phenyl).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 8,09 (d, J=7Hz, 2H), 7,58 (t, J-7Hz, 20 IH), 7,45 (t, J*=7Hz, 2H), 5,60 (s, IH), 3,83 (m, IH), 3,76 (d, J-lOHz, IH) og 0,81 (d, J-7Hz, 3H).

EKSEMPEL 66 74

DK 160992 B

Faktor A-23-benzoat (90 mg) [a]20 = +146° (c = 0,63 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax 236 nm (emax 33.800).

IR-Spektrum i/maY (CHBrg) 3560 og 3480 (OH) og 1709 cm-^ (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 8,10 (d, J=7Hz, 2H), 7,55 (t, J=7Hz, IH), 7,44 (t, J=7Hz, 2H), 4,29 (t, J=7Hz, IH), 4,07 (d, J=10Hz, IH) og 0,75 (d, J=7Hz, 3H).

10 Ud fra 315 mg faktor A-5,23-dibenzoat.

EKSEMPEL 67

Faktor A-5-chloracetat

En opløsning af 123 mg faktor A og 0,1 ml pyridin i 5 ml tørt di-chlormethan blev omrørt ved 0°C, og der blev tilsat 0,3 ml af en 1M 15 opløsning af chloracetylchlorid i dichlormethan. Den resulterende opløsning blev omrørt ved 0°C i 15 minutter, hvorefter der blev tilsat yderligere 0,1 ml 1M chloracetylchloridopløsning, og omrøringen blev fortsat i yderligere 15 minutter. Opløsningen blev fortyndet med 50 ml dichlormethan, vasket med 2 x 20 ml 2N saltsyre og 20 ml mættet 20 natriumhydrogencarbonat, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed. Remanensen (140 mg) blev oprenset ved chromatografi på 15 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let benzin/ethylacetat (4:1) gav 90 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]20 - +143° (c - 1,11 i CHCI3).

25 D

UV-Spektrum (ethanol) Amav 245,5 nm (emax 30.400).

75

DK 160992 B

IR-Spektrum i/max (CHB^) 3500 (OH), 1760 (chloracetat) og 1710 cm'*-(ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,18 (s, 2H), ca.

3,81 (m, IH), 3,74 (d, J=10Hz, IH) og 0,80 (d, J=7Hz, 3H).

5 Massespektrum: omfatter 688 (M+, ^Cl).

Forbindelserne i eksemplerne 69-73, 80, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93 og 96-100 blev fremstillet på lignende måde.

EKSEMPEL 68

Faktor A-5-chloracetat-23-keton 10 En opløsning af 276 mg faktor A-5-chloracetat og 602 mg pyridinium-dichromat i 10 ml tørt N,N-dimethylformamid blev omrørt ved 20°C i 48 timer og derefter hældt ud i en blanding af 50 ml ethylacetat og 25 ml 2N saltsyre. Den organiske fase blev vasket med 2N saltsyre og mættet natriumhydrogencarbonat, tørret over magnesiumsulfat og in-15 ddampet til tørhed. Remanensen blev oprenset ved chromatografi på 25 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let benzin/ethylacetat (4:1) gav 85 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[o]20 - +120° (c - 1,05 i CHCI3).

D

20 UV-Spektrum (ethanol) Amax 245 nm (imax 26.500).

IR-Spektrum vmax (CHBr3) 3480 (OH), 1760 (chloracetat) og 1715 cm'^ (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,7 (m, 2H), 4,17 (s, 2H), 3,72 (d, J-lOHz, IH), 2,50 (s, 2H) og 0,85 (d, J=7Hz, 3H).

25 Massespektrum: omfatter 686 (M+, ^Cl).

76

DK 160992 B

Forbindelserne i eksemplerne 82, 84 og 103 blev fremstillet på lignende måde.

EKSEMPEL 69

Faktor A-5-bromacetat (447 mg) 5 [a]20 = +132° (c = 0,77 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Xmax 245,5 nm (emax 31.500).

IR-Spektrum i/max (CHB^) 3495 (OH), 1730 (bromacetat) og 1712 cnT^ (ester).

10 NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 3,97 (d, J=12Hz, IH), 3,90 (d, J=12Hz, IH), 3,81 (m, IH), 3,75 (d, J=10Hz, IH) og 0,81 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 613 g faktor A og 0,13 ml bromacetylbromid.

EKSEMPEL 70 15 Faktor A-5-n-butylcarbonat-23-keton (75 mg) [a]20 = +103° (c = 0,7 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 245 nm (emax 26.200).

IR-Spektrum i/max (CHB^) 3480 (OH), 1738 (carbonat) og 1720 cm"^-20 (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,56 (s, IH), 4,3-4,0 (m, 3H), 3,71 (d, J=10Hz, IH), 0,93 (t, J=7Hz, 3H) og 0,86 (d, J=7Hz, 3H).

77

DK 160992 B

Ud fra 92 mg faktor A 23-keton 0,04 ml n-butylchlorformiat.

EKSEMPEL 71

Faktor A-5-methylcarbonat-23 -isobutyrat (78 mg) [a]20 - +166° (c - 0,7 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 29.400).

IR-Spektrum j/max (CHB^) 3480 (OH), 1743 (carbonat) og 1712 cm'^ (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,55 (s, IH), 4,94 (m, IH), 3,92 (d, 10 J-lOHz, IH), 3,83 (s, 3H), 2,54 (septet, J=7Hz, IH), 1,20 (d, J=7Hz, 6H) og 0,69 (d, J-7Hz, 3H).

Ud fra 103 mg faktor A-23-isobutyrat og 0,3 ml ethylchlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 72 15 Faktor A-5-benzylcarbonat-23-propionat (66 mg) [<*]20 = +123° (c = 0,6 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (£max 30.000).

IR-Spektrum i/mav (CHBr3) 3540 og 3470 (OH) og 1720 ca"^· (estere og 20 carbonat).

NMR-Spektrum (CDCI3): 6 omfatter 7,5-7,3 (m, 5H), 5,56 (s, IH), 4,95 78

DK 160992 B

(m, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH), 2,33 (q, J=7Hz, 2H), 1,15 (t, J=7Hz, 3H) og 0,70 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 100 mg faktor A-23-propionat og 0,05 ml benzylchlorformiat.

EKSEMPEL 73 5 Faktor A-5-methylcarbonat-23-heptanoat (120 mg) [a]20 = +157° (c - 0,69 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 31.600).

IR-Spektrum i/mav (CHB^) 3480 (OH), 1743 (carbonat) og 1712 cm"^ 10 (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,56 (s, IH), 4,95 (m, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH), 3,83 (s, 3H), 2,30 (t, J=7Hz, 2H), 0,88 (t, J=7Hz, 3H) og 0,69 (d, J«7Hz, 3H).

Ud fra 145 mg faktor A-23-heptanoat og 0,4 ml af en 1M opløsning af 15 methylchlorformiat i dichlormethan.

EKSEMPEL 74

Faktor A-5,23-dichloracetat

En blanding af 365 mg faktor A-5-chloracetat, 0,21 ml chloraeetylch-lorid og 265 mg calciumcarbonat i 15 ml tørt dichlormethan blev 20 omrørt ved 20°C i 48 timer. Den resulterende suspension blev fortyndet med 50 ml dichlormethan, vasket med 2N saltsyre og mættet natriumhydrogencarbonat, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed. Remanensen blev oprenset ved chromatografi på 30 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let benzin/ethylacetat (4:1) gav 167 mg af 25 titelforbindelsen som et farveløst skum.

79

DK 160992 B

[α]20 = +151° (c = 1,17 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 245,5 nm (emax 29.400).

IR-Spektrum i/max (ΟΗΒΓβ) 3470 (OH) og 1725 cm'*· (estere).

5 NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 5,00 (m, IH), 4,17 (s, 2H), 4,10 (d, J-15Hz, IH), 4,02 (d, J-15Hz, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH) og 0,73 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 764 (M+, ^”*Cl).

Forbindelserne i eksemplerne 75-79, 90 og 92 blev fremstillet på lig-10 nende måde.

EKSEMPEL 75

Faktor A-5-acetat-23-chloracetat (447 mg) [ct]20 = +161° (c = 0,94 i CHCI3).

D

15 UV-Spektrum (ethanol) Amax 245 nm (emax 29.900).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3470 (OH) og 1730 cm'·*· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,99 (m, IH), 4,10 (d, J=15Hz, IH), 4,02 (d, J=15Hz, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH), 2,17 (s, 3H) og 0,73 (d, J=7Hz, 3H).

20 Massespektrum: omfatter 730 (M+, -^Cl) .

Ud fra 655 mg faktor A-5-acetat og 0,4 ml chloracetylchlorid.

EKSEMPEL 76

Faktor A-5-acetat-23-bromacetat (210 mg) 80

DK 160992 B

[o]20 - +151° (c - 0,91 i CHCI3).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax 245 nm (emax 28.900).

IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3470 (OH) og 1728 cm'^ (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,98 (m, 2H), 3,93 (d, J-lOHz, IH), 3,89 (d, J=13Hz, IH), 3,80 (d, J=13Hz, IH), 2,16 (s, 3H) og 0,75 (d, J=7Hz, 3H).

10 Ud fra 655 mg faktor A-5-acetat og 0,44 ml bromacetylbromid.

EKSEMPEL 77

Faktor A-5,23-dl-bromacetat (430 mg) [et]20 = +132° (c = 1,04 i CHCI3).

D

15 UV-Spektrum (ethanol) Amax 245,5 nm (£max 30.600).

IR-Spektrum umav (CHBrg) 3460 (OH) og 1726 cm*^· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,98 (m, 2H), 4,0-3,7 (m, 6H) og 0,74 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 613 mg faktor A og 0,44 ml bromacetylbromid.

Faktor A-23-methoxyacetat (92 mg) EKSEMPEL 78 81

DK 160992 B

[a]20 - +157° (c - 0,75 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 32.300).

IR-Spektrum vmax (CHBrg) 3560 og 3480 (OH), 1740 (methoxyacetat) og 1712 cm’^· (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,01 (m, IH), 4,28 (t, J=7Hz, IH), 4,01 (s, 2H), 3,89 (d, J-lOHz, IH), 3,46 (s, 3H) og 0,71 (d, J-7Hz, 10 3H).

Ud fra 184 mg faktor A og 0,3 ml methoxyacetylchlorid.

EKSEMPEL 79

Faktor A-23-phenoxyacetat (112 mg) [a]20 - +129° (c = 0,75 i CHCI3).

15 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax 244 nm (emax 25.900).

IR-Spektrum j/max (CHBr3) 3550 og 3470 (OH), 1745 og 1708 cnT^- (estere) .

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 7,30 (t, J=8Hz, 2H), 7,00 (t, J=8Hz, 20 IH), 6,94 (d, J=8Hz, 2H), 5,02 (m, IH), 4,68 (d, J«16Hz, IH), 4,58 (d, J-16Hz, IH), 4,30 (d, J=7Hz, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH) og 0,67 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 184 mg faktor A og 0,38 ml phenoxyacetylchlorid.

EKSEMPEL 80

Faktor A-5-acetat-23-propionat (60 mg) 82

DK 160992 B

[et]20 = +173° (c = 0,85 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amay 245 nm (emax 28.100).

IR-Spektrum i/T1iaY (CHB^) 3460 (OH) og 1725 cm-·*- (estere) .

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,5-5,6 (m, 2H), 4,94 (m, IH), 3,91 (d, J=10Hz, IH), 2,31 (q, J=7Hz, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,15 (t, J=7Hz, 3H) og 0,69 (d, J=7Hz, 3H).

10 Ud fra 100 mg faktor A-23-propionat og 0,5 ml af en 1M opløsning af acetylchlorid i dichlormethan.

EKSEMPEL 81

Faktor A-5-methylcarbonat (475 mg) [a]20 = 146° (c = 1,05 i CHCI3).

15 D

UV-Spektrum (ethanol): Amav = 244 nm (emax 29.400).

IR-Spektrum (CHB^: i/maY = 3500 (OH), 1742 (carbonat) og 1710 cm'·*· (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,56 (s, IH), 3,82 (s, 3H), 3,76 (d, 20 J=10Hz, IH) og 0,81 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 670 (M+).

Ud fra 613 mg faktor A og 0,2 ml methylchlorformiat.

Faktor A-5-methylcarbonat-23-keton (110 mg).

EKSEMPEL 82 83

DK 160992 B

[a]20 - 129° (c = 0,84 i CHCl3).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245,5 nm (emax 28.900).

IR-Spektrum (CHB^) iymax - 3320-3600 (OH), 1745 (carbonat) og 1715 cm'l (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,56 (s, IH), 3,83 (s, 3H), 3,70 (d, J-10Hz, IH), 2,50 (s, 2H) og 0,86 (d, J=7Hz, 3H).

10 Massespektrum: omfatter 668 (M+).

Ud fra 282 mg faktor A-5-methylcarbonat.

EKSEMPEL 83

Faktor A-5-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat (238 g) [a]20 - 119® (c = 0,93 i CHCI3).

15 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 30.700).

IR-Spektrum (CHBr3) = 3500 (OH), 1755 (carbonat) og 1710 cm'·*· (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,60 (s, IH), 4,90 og 4,75 (ABq, 20 J-12Hz, 2H), 3,81 (m, IH), 3,75 (d, J=10Hz, IH) og 0,80 (d, J=7Hz, 3H).

84

DK 160992 B

Massespektrum: omfatter 786 (M+, ^Cl).

Ud fra 306 mg faktor A og 0,9 ml 2,2,2-trichlorethylchlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 84 5 Faktor A-5- (2,2,2-trichlorethyl)carbonat-23-keton (65 mg) [a]20 _ +98o (C _ ifQ7 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amav - 245,5 nm (emax 28.300).

IR-Spektrum (CHBrj) i/mav = 3300-3600 (OH), 1755 (carbonat) og 1710 10 cm-^ (ester og keton) .

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,61 (s, IH), 4,90 og 4,75 (ABq, J=12Hz, 2H), 3,72 (d, J=10Hz, IH), 2,51 (s, 2H) og 0,87 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 784 (M+, ^Cl), 15 Ud fra 186 mg faktor A-5-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat.

EKSEMPEL 85

Faktor A-5,23-di-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat (362 mg) [α]22 = +110° (c = 0,94 i CHCI3).

D

20 UV-Spektrum (ethanol) Amav = 244 nm (emax 28.000).

IR-Spektrum (CHBrg) t/mav = 3550 og 3460 (OH), 1750 (carbonat) og 1710 cm"^· (ester).

85

DK 160992 B

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,60 (s, IH), 4,89 og 4,75 (ABq, J=12Hz, 2H), 4,85 (m, IH), 4,81 og 4,71 (ABq, J=14Hz, 2H) og 0,79 (d, J«7Hz, 3H).

Ud fra 306 mg faktor A og 0,14 ml 2,2,2-trichlorethylchlorformiat.

5 EKSEMPEL 86

Faktor A-23-(2,2,2 -trichlorethyl)carbonat

En opløsning af 200 mg faktor A-5,23-di-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat i 10 ml dioxan blev omrørt ved ca. 20°C, og der blev tilsat 0,5 ml 1M natriumhydroxid. Den resulterende opløsning blev omrørt i 30 minut-10 ter, hvorefter der blev tilsat yderligere 1 ml 1M natriumhydroxid, og omrøringen blev fortsat i yderligere 1 time. Opløsningen blev fortyndet med 50 ml ethylacetat, vasket med 2N saltsyre, tørret over magnesiumsulfat og inddampet til tørhed. Remanensen blev oprenset ved chromatografi på 15 g kiselgel 60. Eluering af søjlen med let ben-15 zin/ethylacetat (2:1) gav 80 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]20 = +142° (c = 0,92 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 run (emax 29.200).

20 IR-Spektrum (CHB^) i/max = 3560 og 3500 (OH), 1745 (carbonat) og 1710 cm‘1 (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,40 (s, IH), 4,80 og 4,70 (ABq, J-14HZ,. 2H), 4,28 (m, IH) og 0,79 (d, J=7Hz, 3H).

Faktor A-5-acetat-23-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat (385 mg) EKSEMPEL 87 86

DK 160992 B

[a]20 - +140° (c - 1,07 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax — 245,5 run (emav 29.200).

IR-Spektrum (CHBr3) i/max = 3300-3620 (OH), 1738 (carbonat) og 1720 cm'l (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,53 (s, IH), 4,81 og 4,70 (ABq, J=14Hz, 2H), 4,84 (m, IH), 3,98 (d, J=10Hz, IH), 2,16 (s, 3H) og 0,79 10 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 393 mg faktor A-5-acetat og 2 ml 2,2,2-trichlorethylchlor-formiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 88

Faktor A-23-methylcarbonat (155 mg) 15 [a]20 - +169° (c = 0,81 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 26.600).

IR-Spektrum (0ΗΒγ3) i/max = 3300-3610 (OH), 1735 (carbonat) og 1710 cm"^· (ester).

20 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,40 (s, IH), 4,28 (m, IH), 3,94 (d, J-lOHz, IH), 3,77 (s, 3H) og 0,76 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 670 (M+).

Ud fra 300 mg faktor A-5-acetat-23-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat 23-Deoxy-faktor A-5-methylcarbonat (57 mg) EKSEMPEL 89 87

DK 160992 B

[a]20 - +152° (c - 0,6 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax - 244,5 nm (emax 28.200).

IR-Spektrum (CHB^) ^max = 3530 og 3460 (OH), 1740 (carbonat) og 1707 cm-1· (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,55 (s, IH), 3,82 (s, 3H), 3.42 (d.

J-lOHz, IH) og 0,69 (d, J=4Hz, 3H).

10 Ud fra 90 mg 23-deoxy-faktor A og 0,3 ml methylchlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 90

Faktor A-23-bromacetat (190 mg) [a]20 = +154° (c = 0,93 i CHCI3).

15 D

UV-Spektrum (ethanol) Afflax = 245 nm (emax 28.900).

IR-Spektrum (CHB^) i/max - 3565 og 3500 (OH), 1720 og 1715 cm'*· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,41 (s, IH), 4,29 (m, IH), 3,93 (d, 20 J-lOHz, IH), 3,89 og 3,81 (ABq, J=12Hz, 2H) og 0,75 (d. J=7Hz, 3H).

Ud fra 306 mg faktor A og 0,22 ml bromacetylbromid.

Faktor A-5-methylcarbonat-23-bromacetat (85 mg) EKSEMPEL 91

DK 160992B

88 [a]20 - +152° (c = 0,65 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax - 244,5 nm (emax 29.600).

IR-Spektrum (ΟΗΒΓβ) vmax = 3480 (OH), 1742 (carbonat) og 1720 cm'1-(estere).

NMR-Spektrum (GDGI3): δ omfatter 5,55 (s, IH), 3,97 (m, IH), 3,88 og 3,80 (ABq, J=12Hz, 2H), 3,82 (s, 3H) og 0,74 (d, J=7Hz, 3H).

10 Ud fra 110 mg faktor A-23-bromacetat og 0,3 ml methylchlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 92

Faktor A-23-chloracetat (193 mg) [a]20 = +162° (c - 1,04 i CHCI3).

15 0 UV-Spektrum (ethanol) Amay = 245 nm (emax 28.900).

IR-Spektrum (CHBr3) ^max “ 3320-3620 (OH), 1748 (chloracetat) og 1710 cm"*- (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,42 (s, IH), 4,28 (m, IH), 4,09 og 20 4,01 (ABq, J=15Hz, 2H), 3,91 (d, J=10Hz, IH) og 0,73 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 688 (M+, ^Cl).

Ud fra 306 mg faktor A og 0,2 ml chloracetylchlorid.

EKSEMPEL 93

Faktor A-5-methylcarbonat-23-chloracetat (53 mg) 89

DK 160992 B

[a]20 - +162° (c - 0,57 i CHCI3).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax - 245,5 ran (cmax 28.800).

IR-Spektrum (CHBrg) vmax = 3540 og 3470 (OH) , 1743 (carbonat og chloracetat) og 1710 cm'·1· (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,55 (s, IH), 5,00 (m, IH), 4,10 og 4,02 (ABq, J-15Hz, 2H), 3,92 (d, J-10Hz, IH), 3,82 (s, 3H) og 0,73 10 (d, J=Hz, 3H).

Ud fra 104 mg faktor A-23-chloracetat og 0,3 ml methylchlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 94

Faktor A-5-23-dipropionat (387 mg) 15 [a]20 - +157° (c - 0,96 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax - 244,5 nm (emax 30.200).

IR-Spektrum (CHB^) - 3500 (OH) og 1720 cm'*· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,52 (s, IH), 3,93 (d, J=10Hz, IH), 20 2,43 (q, J-7Hz, 2H), 2,32 (q, J=7Hz, 2H), 1,18 (t, J=7Hz, 3H), 1,16 (t, J=7Hz, 3H) og 0,70 (d, J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 724 (M+).

Ud fra 613 mg faktor A og 0,5 ml propionsyreanhydrid.

90

DK 160992 B

EKSEMPEL 95

Faktor A-23-propionat (155 mg) [a]1 = +168° (c = 1,03 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) lmax = 244,5 nm (emax 30.600).

IR-Spektrum (CHBrj) j/max = 3550 og 3480 (OH)og 1710 cm"·*· (ester) .

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,39 (s, IH), 4,27 (m, IH), 3,91 (d, J=10Hz, IH), 2,31 (q, J=7Hz, 2H), 1,14 (t, J=7Hz, 3H) og 0,69 (d, 10 J=7Hz, 3H).

Massespektrum: omfatter 668 (M+).

Ud fra 327 mg faktor A-5,23-dipropionat.

EKSEMPEL 96

Faktor A-5-methylcarbonat-23 -propionat (85 mg) 15 [a]1 - +172° (c = 0,88 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 28.700).

IR-Spektrum (CHBrj) i/max = 3550 og 3460 (OH), 1740 (carbonat), 1718 og 1710 cm'·*· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 5,55 (s, IH), 4,94 (m, IH), 3,91 (d, 91

DK 160992 B

J-lOHz, IH), 3,82 (s, 3H), 2,32 (q, J=7Hz, 2H), 1,15 (t, J=7Hz, 3H) og 0,70 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 100 mg faktor A-23-propionat og 0,3 ml methylformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

5 EKSEMPEL 97

Faktor A-5-(2,2,2-trichlorethyl)carbonat-23-propionat (125 mg) [et]20 - +110° (c = 1,02 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax « 245 nm (emaX 27.000).

10 IR-Spektrum (CHB^) i/max = 3530 og 3470 (OH), 1762 (carbonat) og 1712 cm"*· (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,60 (s, IH), 4,90 og 4,75 (ABq, J=12Hz, IH), 3,92 (d, J=10Hz, IH), 2,31 (q, J=7Hz, 2H), 1,14 (t, J-7Hz, 3H) og 0,67 (d, J-7Hz, 3H).

15 Ud fra 100 mg faktor A-23-propionat og 0,3 ml 2,2,2-trichlorethyl-chlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 98

Faktor A-5-methylcarbonat-23-keton (830 mg) [a]20 ~ +132° (c - 0,82 i CHCI3).

20 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 29.800).

IR- og NMR-spektrene mindede om spektrene for forbindelsen beskrevet i eksempel 86.

DK 160992B

Ud fra 916 mg faktor A-23-keton og 0,23 ml methylchlorformiat.

92 EKSEMPEL 99

Faktor A-5-ethylcarbonat-23-keton (65 mg) [a]20 - +127° (c = 0,5 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax - 245,5 nm (emax 29.600).

IR-Spektrum (CHBr3) i/max = 3540 og 3480 (OH), 1740 (carbonat) og 1716 cnT^- (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,57 (s, IH), 4,24 (q, J=7Hz, 2H), 10 3,70 (d, J»10Hz, IH), 2,50 (s, 2H), 1,33 (t, J=7Hz, 3H) og 0,87 (d, J=7Hz, 3H).

Ud fra 92 mg faktor A-23-keton og 0,3 ml ethylchlorformiat af en 1M opløsning i dichlormethan.

EKSEMPEL 100 15 Faktor A-5-benzylcarbonat-23-keton (57 mg) [a]20 « +99° (c = 0,4 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245,5 nm (emax 29.600).

IR-Spektrum (CHBr3) vmax = 3600, 3550 og 3480 (OH), 1740 (carbonat) 20 og 1715 cm“^ (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): 5 omfatter 7,5-7,2 (m, 5H), 5,57 (s, IH), 5,21 (s, 2H), 3,70 (d, J=10Hz, IH), 2,49 (s, 2H) og 0,86 (d, J=6Hz, 3H).

Ud fra 92 mg faktor A-23-keton og 0,05 ml benzylchlorformiat.

93

DK 160992 B

EKSEMPEL 101

Faktor A-5-(i-chlorbenzoat)

Til en opløsning af 612 mg faktor A i 2 ml tørt dichlormethan og 0,5 5 ml pyridin blev der sat 210 mg 4-chlorbenzoylchlorid. Efter 16 timer ved 23eC blev blandingen hældt ud i ethylacetat/vand, og den organiske fase blev oparbejdet hvad angår neutralt materiale. Det rå produkt blev oprenset ved chromatografi på 50 g Merck kiselgel 60, 0,063-0,037 mm silicagel under anvendelse af først dichlormethan og 10 derefter dichlormethan/ether (19:1) som elueringsfaser. Dette gav en gul gummi, som efter behandling med affarvende trækul gav 500 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]23 = +46° (c - 0,80 i CHC13).

D

15 UV-Spektrum (ethanol) Amax = 246 nm (emax 42.300).

IR-Spektrum (CHB^) i/max = 1715 cm*^· (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 7,41 (d, 8Hz, 2H), 8,00 (d, 8Hz, 2H) og ca. 3,8 dækket m, IH), (d, 2H), 8,00 (d, 2H) og 3,75-3,86 (m, IH).

Massespektrum: omfatter 750, 752 (M+, 33C1 og 3^C1).

20 EKSEMPEL 102 23-Keto-faktor A-5-(4-chlorbenzoat) (150 mg)

Forbindelsen krystalliserede ved triturering med diisopropylether, smeltepunkt 230-232°C.

94

DK 160992 B

[a]23 = +25° (c = 0,48 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 (50.600) og 281,5 nmv-.(emax 1.100).

IR-Spektrum (CHB^) i/max = 3480 (OH) og 1718 cra'^· (estere og keton).

5 NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 8,00 (d, 8Hz, 2H), 7,40 (d, 8Hz, 2H) og 2,50 (s, 2H).

Massespektrum: omfatter 748, 750 (M+, 33C1 og 32C1).

Ud fra 420 mg faktor A-5-(4-chlorbenzoat).

EKSEMPEL 103

10 5-Acetoxy-23-n-butoxy-faktor A

1 g sølvcarbonat blev sat til en opløsning af 325 mg 5-acetoxy-faktor A i tør ether efterfulgt af 0,5 ml iodbutan og 550 mg sølvperchlorat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 20 timer, hvorefter der blev tilsat 0,5 ml collidin. Efter omrøring i yderligere 20 minutter 15 blev blandingen filtreret, og filtratet blev successivt vasket med 2N saltsyre, mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og vand. Den tørrede organiske fase blev inddampet næsten til tørhed, og olien blev oprenset ved chromatografi på 100 ml Merck kiselgel 60, 0,063-0,037 mm. Eluering af søjlen med hexan/ethylacetat (3:1) gav 20 276 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum (78¾).

[a]22 = +160o (c = 0,94 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (e^y 28.300).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 3,16 (m, IH), 3,43 (m, IH), 3,59 (m, 25 IH).

95

DK 160992 B

Forbindelserne i eksemplerne 104-106 blev fremstillet på en måde i lighed med forbindelsen fra eksempel 28(a).

EKSEMPEL 104

5-Acetoxy-23-cyclopentyloxy-faktor A

5 [α]21 = +166° (c = 1,60 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244 nm («max 28.050).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 3,95 (m; IH), 3,45 (m; IH), 2,14 (s; 3H).

10 Ud fra 5-acetoxy-faktor A og cyclopentylbromid.

EKSEMPEL 105

5-Acetoxy-23-isopropoxy-faktor A

[α]2ί = +169° (c = 1,00 i CHCI3).

D

15 IR-Spektrum i/max (CHBr3) 3470 (OH), 1732 og 1710 cm4 (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 5,5-5,6 (m; 2H), 3,93 (d 10; IH), 3,5-3,7 (m; 2H), 3,53 (m, IH), 2,16 (s; 3H), 1,13 (d 6; 3H), 1,03 (d 7; 6H), 0,71 (d 7; 3H).

Ud fra 5-acetoxy-faktor A og 2-iodpropan.

EKSEMPEL 106 96

DK 160992 B

5-Acetoxy-23-cyclopropylmethoxy-faktor A

[α]21 = +174° (c = 1,74 i CHCI3).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amav = 244 nm (emax 28.360).

IR-Spektrum (CHBrø) i/max “ 3470 (OH), 1732, 1710 (estere) og 998 cm'·*· (C-0).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 5,5-5,6 (m; 2H), 3,96 (d 10; IH), 3,49 (m; IH), 3,37 (dd 6, 10; IH), 3,17 (dd 6,10; IH), 2,16 (s; 3H), 10 0,76 (d 7; 3H), 0,44 (m; 2H), 0,22 (m; 2H).

Ud fra 5-acetoxy-faktor A og brommethylcyclopropan.

EKSEMPEL 107

5-tert .Butyldimethylsilyloxy-23 -methoxy-faktor A

0,35 ml af en 3M opløsning af methylmagnesiumiodid i ether blev ved 15 stuetemperatur og under nitrogen sat til en magnetisk omrørt opløsning af 239 mg 5-tert.butyldimethylsilyloxy-faktor A i 18 ml tørt hexamethylphosphortriamid under brusen. Efter 30 minutter blev der tilsat 0,4 ml iodmethan, og den resulterende blanding blev omrørt i 5 timer, fortyndet med 100 ml ether og vasket grundigt med vand. Ether-20 opløsningen blev derefter vasket med 50 ml saltvand, og den tørrede organiske fase blev inddampet. Det resulterende skum (280 mg) blev oprenset ved chromatografi på 80 ml Merck kiselgel 60, 0,063-0,037 mm. Eluering med hexan/ethylacetat (5:1) gav titelforbindelsen som et farveløst skum (46%).

25 [a]21 = +142° (c = 1,13 i CHCI3).

D

97

DK 160992 B

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244 nm (emax 27.900).

IR-Spektrum (CHBrj) i/max = 3460 (OH), 1708 (bred; ester) og 995 cm"·*· (C-0).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 4,42 (m; IH), 3,92 (d 10; IH), 5 3,3-3,4 (m; 2H), 3,32 (s; 3H), 0,92 (s; 9H), 0,75 (d 7; 3H), 0,12 (s; 6H).

Forbindelsen i eksempel 108 blev fremstillet på lignende måde: EKSEMPEL 108

5-tert.butyldimethylsilyloxy-23-n-propyloxy-faktor A

10 [α]21 - +153° (c - 1,16 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax - 244 nm (emax 29.950).

IR-Spektrum (CHBrj) i/max = 3460 (OH), 1706 (ester) og 995 crn'^· (C-0).

NMR-Spektrum (CDCI3): 6 omfatter 4,44 (m; IH), 3,96 (d 10; IH), 3,56 15 (m; IH), 3,45 (m; IH), 3,14 (m; IH), 0,93 (s; 9H), 0,75 (d 7; 3H), 0,13 (s; 6H).

Ud fra 5-tert.butyldimethylsilyloxy-faktor A og 1-iodpropan.

EKSEMPEL 109

Faktor A-5-acetat-23-p-tolylthionocarbonat 20 En opløsning af 4,000 g faktor A-5-acetat i 50 ml tørt dichlormethan og 4,9 ml tørt pyridin under nitrogen blev dråbevis i løbet af 10 minutter behandlet med 3,7 ml p-tolylchlorthionoformiat. Den resulterende mørke opløsning blev omrørt ved stuetemperatur i 45 timer.

98

DK 160992 B

Opløsningen blev fortyndet med 200 ml dichlormethan, vasket successivt med 2N saltsyre, mættet natriumhydrogencarbonatopløsning, vand og 2 x 200 ml mættet saltvand, og tørret over magnesiumsulfat, hvorefter opløsningsmidlet blev dampet bort, hvilket gav et mørkegrønt 5 skum. Dette blev genopløst i 200 ml ethylacetat og behandlet med aktiveret trækul. Filtrering efterfulgt af inddampning gav et svagt grønt skum, som blev chromatograferet på silicagel (Merck kiselgel 60, partikelstørrelse 0,040-0,063 mm) under atmosfærisk tryk elueret med hexan/ethylacetat (2:1), hvilket gav 3,946 g af titelforbindelsen 10 som et svagt gult skum.

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 34.200).

IR-Spektrum (CHBr3) ^max = 3620-3340 (OH), 1731 (acetat) og 1710 cm'·'· (carbonyl).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 6,81 (d, 6Hz, 3H), 2,16 (s, 3H), 15 2,36 (s, 3H), 3,34 (m, IH), 6,99 (d, 9Hz, 2H), 7,20 (d, 9Hz, 2H).

EKSEMPEL 110 23-Deoxy-faktor A-5~acetat

En opløsning af 10,194 g faktor A-5-acetat-23-p-tolylthionocarbonat i 100 ml tørt toluen blev opvarmet til tilbagesvaling under nitrogen og 20 behandlet med 509 mg α-azo-bis-isobutyronitril. En opløsning af 10,25 ml tri-n-butyltinhydrid i 60 ml tørt toluen blev i løbet af 25 minutter tilsat dråbevis, idet tilbagesvalingen blev opretholdt. Blandingen blev omrørt i yderligere 25 minutter og derefter afkølet til -stuetemperatur, og opløsningsmidlet blev dampet bort, hvilket gav en 25 gul olie. Denne blev opløst i 600 ml acetonitril og vasket med hexan. Opløsningsmidlet blev dampet bort, hvilket gav et hvidt skum, som blev chromatograferet på silicagel (Merck kiselgel 60, partikelstørrelse 0,040-0,063 mm) elueret med hexan/ethylacetat (4:1), hvilket gav 2,442 g af titelforbindelsen.

99

DK 160992 B

[α]22 - +144° (c = 0,43 i chloroform).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245,5 nm (emax 29.650).

IR-Spektrum (CHB^) vmax - 3420-3340 (OH), 1732 (acetat) og 1710 cnT^ 5 (carbonyl).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 0,68 (d, 5Hz, 3H), 2,16 (s, 3H), 3,32 (m, IH).

På en måde i lighed med fremstillingen af de tilsvarende faktor A-derivater ovenfor blev der fremstillet følgende faktor D-derivater 10 ifølge eksemplerne 111-118.

EKSEMPEL 111 5-Acetoxy-faktor D (923 mg) [c*]21 - +143,9° (c - 0,9 i CHC13).

D

15 UV-Spektrum (ethanol) Amax = 239 (28.700) og 245 nm (emax 31.000).

IR-Spektrum (CHB^) i/max = 3490 (OH), 1730 og 1710 cnT^ (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 0,81 (d, 7Hz; 3H), 0,99 (d, 7Hz; 3H), 1,00 (t, 7Hz; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,59 (s; 3H), 1,75 (s; 3H), 2,16 (s; 3H), 3,32 (m; IH), 3,65 (m; IH), 4,04 (d, 6Hz; IH) og 5,53 20 (m; 2H).

Massespektrum: omfatter 640 (M+).

Ud fra 2,5 g faktor D og 0,47 ml eddikesyreanhydrid.

EKSEMPEL 112 100

DK 160992 B

5,23-Diacetoxy-faktor D (286 mg)

Smeltepunkt 147-149°C (rhomber fra pentan i ether).

[α]21 = +152,6° (c = 0,9 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 232,5 (21.500), 238 (26.600) og 244,5 nm (emax 28.800).

IR-Spektrum (CHBrj) ^max = 1720 cm'^- (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 0,72 (d, 6Hz; 3H), 0,99 (d, 6Hz; 10 3H), 1,01 (t, 7Hz; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,60 (s; 3H), 1,75 (s; 3H), 2,02 (s; 3H), 2,15 (s; 3H), 3,31 (m; IH), 4,04 (d, 6Hz, IH), 4,91 (m; IH) og 5,5-5,6 (m; 2H).

Massespektrum: omfatter 682 (M+).

Ud fra 439 mg faktor D og 0,25 ml eddikesyreanhydrid, 15 EKSEMPEL 113 23-Acetoxy-faktor D (127 mg) [α]21 = +150° (c = 0,5 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 238 (29,200) og 244,5 nm (emax 15.600).

20 IR-Spektrum (CHB^) i/max = 3300, 3590 (OH) og 1710 cm'-*- (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 0,72 (d, 7Hz, 3H), 0,99 (d, 7Hz; 3H), 1,01 (t, 7Hz; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,60 (s; 3H), 1,86 (s; 3H), 3,26 (m; IH), 3,95 (d, 6Hz; IH), 4,26 (t, 6Hz; IH) og 4,91 (m; IH).

101

DK 160992 B

Massespektrum: omfatter 640 (M+).

Ud fra 207 mg 5,23-diacetoxy-faktor D.

EKSEMPEL 114 23-p-Tolyloxythiocarbonyloxy-faktor D-5-acetat (610 mg) 5 [cr]21 - +132° (c - 0,4 i CHCl3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax - 238,5 (34.800) og 244,5 nm («max 35.400).

IR-Spektrum (CHB^) t»max - 359 og 3560 (OH) og 1730 cm-^ (ester).

10 NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 0,81 (d, 7Hz; 3H), 0,99 (d, 7Hz; 3H), 1,00 (t, 7H, 3H), 1,53 (s; 3H), 1,61 (s; 3H), 1,75 (s; 3H), 2,15 (s; 3H), 2,36 (s; 3H), 3,33 (m; IH), 3,98 (d, 10Hz, IH), 4,04 (d, 6Hz; IH), 5,5-5,6 (m; 2H), 6,98 (d, 9Hz; 2H) og 7,19 (d, 9Hz; 2H).

Massespektrum: omfatter 790 (M+).

15 Ud fra 776 mg 5-acetoxy-faktor D og 0,75 ml p-tolylchlorthionoformi-at.

EKSEMPEL 115 5-Acetoxy-23-deoxy-faktor D (367 mg)

En portion af denne prøve blev omkrystalliseret af hexan, hvilket gav 20 analytisk rent materiale ifølge HPLC, smeltepunkt 222-224°C.

[a]21 - +134° (c - 0,9 i CHCI3).

D

102

DK 160992 B

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 32.400).

IR-Spektrum (ΟΗΒΓβ) vmax - 3550, 3460 (H), 1735 og 1710 cm'^ (ester).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 0,69 (d, 6Hz; 3H), 1,00 (d, 6Hz; 3H), 1,00 (t, 7Hz; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,59 (s; 3H), 1,76 (s; 3H), 5 2,14 (s, 3H), 3,31 (m; IH), 3,44 (d, 10Hz; IH), 4,05 (d, 6Hz; IH) og 5,5-5,6 (m; 2H).

Massespektrum: omfatter 624 (M+).

Ud fra 582 mg 5-acetoxy-23-p-tolyloxythiocarbonyloxy-faktor D.

EKSEMPEL 116 10 23-Deoxy-faktor D (159 mg) [a]21 = +123° (c - 0,5 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244,6 nm (%ax 28.300).

IR-Spektrum (CHB^) i/max = 3550 og 3460 (OH) og 1705 cm'^- (ester).

15 NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 0,69 (d, 6Hz; 3H), 1,00 (d, 6Hz; 3H), 1,00 (6, 7Hz; 3H), 1,53 (s; 3H), 1,59 (s; 3H), 1,87 (s; 3H), 3,26 (m; IH), 3,44 (d, 10Hz; IH), 3,96 (d, 6Hz; IH) og 4,28 (t, 6Hz; IH).

Massespektrum: omfatter 582 (M+).

20 Ud fra 231 mg 5-acetoxy-23-dihydro-faktor D.

103

DK 160992 B

EKSEMPEL 117 S-Acetoxy-23-keto-faktor D (152 mg)

Smeltepunkt 228-230°C.

[a]21 - +84° (c - 0,6 i CHC13).

5 D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244,5 nm (emax 31.100).

IR-Spektrum (CHB^) vmax = 3500 (OH), 1732 og 1714 cm-·*- (ester og keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 0,86 (d, 6Hz; 3H), 0,98 (d, 6Hz; 10 3H), 1,00 (t, 7Hz; 3H), 1,49 (s; 3H), 1,67 (s; 3H), 1,74 (s; 3H), 2,14 (s; 3H), 3,33 (m; IH), 4,03 (d, 6Hz; IH) og 5,5-5,6 (m; 2H).

Massespektrum: omfatter 638 (M+).

Ud fra 336 mg 5-acetoxy-faktor D.

EKSEMPEL 118 15 23-Keto-faktor D (59 mg) [a]21 - +84° (c = 0,4 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244,5 nm (emax 28.000).

IR-Spektrum (CHB^) i'max = 3550 og 3500 (OH) og 1712 cm'1 (ester og 20 keton).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 0,86 (d, 6Hz; 3H), 0,98 (d, 7Hz; 3H), 1,00 (t, 7Hz; 3H), 1,50 (s; 3H), 1,68 (s; 3H); 1,86 (s; 3H), 104

DK 160992 B

3,27 (m; IH), 3,73 (d, 10Hz; IH), 3,95 (d, 6Hz; IH) og 4,27 (t, 6Hz; IH).

Ud fra 96 mg 5-acetoxy-23-keto-faktor D.

EKSEMPEL 119 5 Faktor A-23-phenylacetat (2AO mg) [ce]20 = +140° (c = 0,92 i CHCl3) .

D

IR-Spektrum (CHB^) vmax = 3550 og 3470 (OH) og 1730 cm'^ (estere).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 7,32 (s, 5H), 5,0 (m, IH), 4,29 (t, 10 J=7Hz, IH), 3,88 (d, J=10Hz, IH), 3,62 (s, 2H) og 0,54 (d, J=7Hz, 3H) blev fremstillet på en måde i lighed med forbindelsen i eksempel 79 ud fra 306 mg faktor A og 0,33 ml phenylacetylchlorid.

EKSEMPEL 120

23-Ethoxy-faktor A

15 En opløsning af 806 mg 5-acetoxy-23-ethoxy-faktor A i 18 ml methanol blev afkølet i et isbad, der blev tilsat 1,3 ml IN vandigt natriumhydroxid, og den lysegule opløsning blev omrørt i et isbad i 1,25 time. Opløsningen blev fortyndet med 80 ml ethylacetat og derefter vasket successivt med IN saltsyre, vand og saltvand. Den tørrede or-20 ganiske fase blev inddampet, og den resulterende gummi blev oprenset ved chromatografi på 200 ml Merck kiselgel 60 silicagel, 0,063-0,037 mm. Eluering af søjlen med 15% ethylacetat i dichlormethan gav 623 mg af titelforbindelsen som et farveløst skum.

[a]21 = +178° (c - 1,13 i CHCI3).

25 D

105

DK 160992 B

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244 nm (emax 29.400).

NMR-Spektrum (CDCI3): 8 omfatter 4,29 (t, 7; IH), 3,65 (m; IH), 3,47 (m; IH), 3,26 (m; 2H), 1,15 (t, 7; 3H).

Forbindelserne i eksemplerne 121-124 blev fremstillet på lignende 5 måde: EKSEMPEL 121 23-n-Butoxy-faktor A (61%) blev vundet som et farveløst skum [a]21 - +161° (c = 1,47 i CHCI3).

D

10 UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244 nm (emax 33.100).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,30 (t, 7; IH), 3,60 (m; IH), 3,43 (m; IH), 3,17 (m; IH).

Ud fra 5-acetoxy-23-n-butoxy-faktor A.

EKSEMPEL 122 15 23-n-Propoxy-faktor A (83%) blev vundet som et farveløst skum [ce]21 - +165° (c = 1,01 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax - 2,45 nm (emax 30.970).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,29 (t, 7; H), 3,55 (m; IH), 3,44 20 (m; IH), 3,13 (m; IH).

Ud fra 5-acetoxy-23-n-propoxy-faktor A.

106

DK 160992 B

EKSEMPEL 123 23-Methoxy-faktor A (66%) blev vundet som et farveløst skum [a]21 = +175° (c = 1,01 i CHC13).

D

5 UV-Spektrum (ethanol) Amax = 244 nm (emax 19.100).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,29 (t, 7; IH), 3,40 (m; IH), 3,33 (s; 3H).

Ud fra 5-acetoxy-23-methoxy-faktor A.

EKSEMPEL 124 10 23-Cyclopentyloxy-faktor A (75%) blev vundet som et farveløst skum [a]21 = +160° (c = 1,65 i GHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax — 244 nm (€max 19.800).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ omfatter 4,29 (t, 7, IH), ca. 3,96 (dækket m; 15 IH), 3,95 (d, 5; IH), 3,91 (d, 10; IH), 3,46 (m; IH), 0,69 (d, 7; 3H).

Ud fra 5-acetoxy-23-cyclopentyloxy-faktor A.

EKSEMPEL 125

(a) 5-Acetoxy-23-allyloxy-faktor A

20 872 mg sølvsalicylat blev sat til en opløsning af 207 mg 5-acetoxy-- faktor A og 1,0 ml allyliodid i 25 ml tør ether, og blandingen blev 107

DK 160992 B

omrørt ved stuetemperatur i 4 dage og derefter filtreret. Filtratet blev inddampet, hvilket gav en gul olie, som blev oprenset ved chrom-atografi på Merck kiselgel 60, 0,063-0,037 mm. Eluering med dichlor-methan/ethylacetat (19:1) gav 105 mg af titelforbindelsen som et 5 farveløst skum.

(a) 21 „ +152° (c - 1,00 i CHC13).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 28.400).

NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 3,54 (m, IH), 4,14 (m, IH).

10 Følgende forbindelser blev fremstillet på lignende måde:

(b) 5-Acetoxy-23-n-propyloxy-faktor A

Ud fra 5-acetoxy-faktor A og n-propyliodid. Oprensning ved chromato-grafi på Merck kiselgel 60 silicagel, 0,063-0,037 mm elueret med hexan/ethylacetat (3:1) gav titelforbindelsen som et farveløst skum.

15 [a]22 - +160° (c =0,75 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 27.600).

NMR-Spektrum (CDCI3): £ omfatter 3,33 (s, 3H), 3,39 (m, IH).

(c) 5-Acetoxy-23-methoxy-faktor A

20 Ud fra 5-acetoxy-faktor A og methyliodid. Titelforbindelsen blev vundet som et farveløst skum.

Ια]22 = +159° (c = 0,98 i CHCI3).

D

UV-Spektrum (ethanol) Amax = 245 nm (emax 27.600).

DK 160992B

108 NMR-Spektrum (CDCI3): S omfatter 3,33 (s, 3H), 3,39 (m, IH).

Nedenstående er eksempler på formuleringer ifølge opfindelsen. Udtrykket "aktiv bestanddel" som anvendt i det følgende betegner en forbindelse ifølge opfindelsen og kan fx være forbindelserne fra ek-5 sempierne 9, 12, 19, 25, 95, 120 eller 121.

MULTIDOSIS- PARENTERALT INJEKTIONSPRÆPARAT

% w/v Område

Aktiv bestanddel 4,0 0,1-7,5% w/v

Benzylalkohol 2,0 10 Glyceryltriacetat 30,0

Propylenglycol op til 100,0

Opløs den aktive bestanddel i benzylalkohol og glyceryltriacetatet.

Tilsæt propylenglycol og fyld op til volumen. Steriliser produktet ved konventionelle farmaceutiske metoder, fx steril filtrering eller 15 ved opvarmning i en autoklave, og pak aseptisk.

AEROSOLSPRAY

% w/w Område

Aktiv bestanddel 0,1 0,01-2,0% w/w

Trichlorethan 29,9 20 Trichlorfluormethan 35,0

Dichlordifluormethan 35,0

Bland den aktive bestanddel med trichlorethan og fyld i aerosolbeholderen. Tøm topvolumenet med det gasformige drivmiddel og krymp ventilen på plads. Fyld den påkrævede mængde væskeformigt drivmiddel 25 under tryk gennem ventilen. Udløsere og støvhætter monteres.

109

DK 160992 B

TABLET

Fremstillingsmetode - våd granulering mg

Aktiv bestanddel 250,0 5 Magnesiumstearat 4,5

Maj sstivelse 22,5

Natrium-stivelsesglycolat 9,0

Natriumlaurylsulfat 4,5

Mikrokrystallinsk cellulose op til tabletkernevægt på 450 mg 10 Tilsæt tilstrækkelig mængde af en 10%'s stivelsespasta til den aktive bestanddel til at give en våd masse, der er egnet til granulering.

Fremstil granulerne og tør dem under anvendelse af en bakke-tørrer eller fluid-bed-tørrer. Sigt gennem en sigte, tilsæt de øvrige ingredienser og pres til tabletter.

15 Hvis det ønskes, filmovertræk tabletkernerne under anvendelse af hydroxypropylmethylcellulose eller andet lignende filmdannende materiale under anvendelse af enten et vandigt eller et ikke-vandigt opløsningsmiddelsystem. Et blødgøringsmiddel og passende farve kan inkluderes i filmovertrækningsopløsningen.

20 VETERINÆR TABLET TIL ANVENDELSE TIL HUSDYR/SMA DYR

Fremstillingsmetode - tør granulering mg

Aktiv bestanddel 50,0

Magnesiumstearat 7,5 25 Mikrokrystallinsk cellulose til tabletkernevægt på 75,0

Bland den aktive bestanddel med magnesiumstearatet og den mikrokrys-tallinske cellulose. Kompakter blandingen til kugler. Nedbryd kugler-

DK 160992B

110 ne ved passage gennem en rotationsgranulator til at give fritflydende granuler. Pres til tabletter.

Tabletkernerne kan derefter, hvis det ønskes, filmovertrækkes som beskrevet ovenfor.

5 VETERINÆRT INTRAMAMMART INJEKTIONSPRÆPARAT

mg/åosis Område

Aktiv bestanddel 150 mg 0,05 - 1,0 g

Polysorbat 60 3,0% w/w )

Hvidt bivoks 6,0% w/w op til 3 g) op til 3 eller 15 g 10 Jordnøddeolie 91,0% w/w )

Opvarm jordnøddeolien, det hvide bivoks og polysorbat 60 til 160°C under omrøring. Hold det ved 160°C i 2 timer og afkøl derefter til stuetemperatur under omrøring. Sæt den aktive bestanddel til bæreren aseptisk og disperger under anvendelse af en høj-hastighedsblander.

15 Raffiner ved passage gennem en kolloidmølle. Fyld produktet aseptisk i sterile plastiksprøjter.

VETERINÆRT ORALT VÆSKEPRÆPARAT

% w/w Område

Aktiv bestanddel 0,35 0,01-2% w/w 20 Polysorbat 85 5,0

Benzylalkohol 3,0

Propylenglycol 30,0

Phosphatpuffer som pH 6,0 - 6,5

Vand op til 100,0 25 Opløs den aktive bestanddel i polysorbat 85, benzylalkohol og propylenglycol. Tilsæt en portion af vandet og juster pH-værdien til 111

DK 160992 B

6,0-6,5 ved hjælp af phosphatpuffer, om nødvendigt. Fyld op til slut-volumen med vandet. Fyld produktet i væskepræparatbeholderen.

VETERINÆR ORAL PASTA

% w/w Område 5 Aktiv bestanddel 7,5 1 - 30% w/w

Saccharin 25,0

Polysorbat 85 3,0

Aluminiumdistearat 5,0

Fraktioneret kokosnøddeolie op til 100,0 10 Disperger aluminiumdistearatet i den fraktionerede kokosnøddeolie og polysorbat 85 ved opvarmning. Afkøl til stuetemperatur og disperger saccharinet i den olieagtige bærer. Sæt den aktive bestanddel til basen. Fyld i plastiksprøjter.

GRANULER TIL VETERINÆR INDGIVELSE I FODER

15 % w/w Område

Aktive bestanddel 2,5 0,05-5% w/w

Calciumsulfat-hemihydrat op til 100,0

Bland den aktive bestanddel med calciumsulfatet. Fremstil granulerne under anvendelse af en vådgranuleringsproces. Tør under anvendelse af 20 en bakke- eller fluid-bed-tørrer. Fyld i passende beholdere.

112

DK 160992 B

EMULGERBART KONCENTRAT

Aktiv bestanddel 50 g

Anionisk emulgator 40 g (fx phenylsulfonat (CALX) 5 Ikke-ionisk emulgator 60 g (fx Syperonic NP13)

Aromatisk opløsningsmiddel (fx Solvesso® 100) op til 1 liter Bland alle ingredienser, omrør indtil opløsning.

GRANULER

10 (a) Aktiv bestanddel 50 g

Træharpiks 40 g

Gipsgranuler (0,84-0,25 mm) op til 1 kg (fx Agsorb 100A) (b) Aktiv bestanddel 50 g 15 Syperonic NP13 40 g

Gipsgranuler (0,84-0,25 mm) op til 1 kg

Opløs alle ingredienser i et flygtigt opløsningsmiddel, fx methy-lenchlorid, og tilsæt granuler rystet i blander. Tør til fjernelse af opløsningsmidlet.

Claims (12)

1. Makrolidforbindelse med den almene formel II ti.1 Qi CH. >0» α,Λ’Κ (I ii 11. p \· jl OhJ^H OR*** 5 og salte deraf med baser, hvor r! er methyl, ethyl eller isopropyl; R^ er hydrogen eller en gruppe OR^, og R^ er hydrogen, eller R^ og R·^ tilsammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >C-0;

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R^- er isopropyl.

3. Forbindelse ifølge krav 1, 10 kendetegnet ved, at R2 er hydrogen, ethoxy, n-propoxy, cyclopropylmethoxy, acetoxy, phenacetoxy, propionyloxy, isobutyryloxy eller cyclopropancarbonyloxy, og R^ er hydrogen, eller R2 og R2 tilsammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner en gruppe >C=0.

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at -OR^ er hydroxy, methoxy, acetoxy eller methyloxycarbonyloxy.

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R1- er isopropyl, R2 er hydrogen, O 20 ethoxy, n-propoxy, acetoxy eller propionyloxy, og R er hydrogen, eller R2 og R2 tilsammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner gruppen >C=0, og OR4 er hydroxy, acetoxy eller methyloxycarbonyloxy .

6. Forbindelse ifølge krav 1, 25 kendetegnet ved, at: R^ er isopropyl, R2 er hydrogen, R^ er hydrogen, og OR^ er hydroxyl; r! er isopropyl, R2 er propionyloxy, R2 er hydrogen, og 0R^ er hydroxyl ; DK 160992 B rA er isopropyl, R2 og R^ tilsammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, er >00, og -OR4 er hydroxyl; r! er isopropyl, R2 er ethoxy, R3 er hydrogen, og -OR4 er hydroxyl; R1 er isopropyl, R2 er n-propoxy, R3 er hydrogen, og -OR4 er hydrox- 5 yl; Ri er methyl, R2 er acetoxy, R3 er hydrogen, og OR4 er hydroxyl; r! er ethyl, R2 er acetoxy, R3 er hydrogen, og OR4 er hydroxyl; eller R^- er isopropyl, R2 er acetoxy, R3 er hydrogen, og OR4 er hydroxyl.

7. Blanding indeholdende forbindelser som defineret i krav 1, 10 kendetegnet ved, at R2 og R3 tilsammen med det carbonatom, til hvilket de er bundet, danner >C=0, og R4 er hydroxy eller meth-oxy, og at blandingen er i form af en fuldstændig fermentationsvæske indeholdende mindst én sådan forbindelse, de faste dele af en fuldstændig fermentationsvæske indeholdende mindst én sådan forbindelse, 15 intakte eller lyserede mycelier skilt fra en sådan dyrkningsvæske, eller de faste dele af en sådan dyrkningsvæske efter fraskillelse af intakte eller lyserede mycelier; eller en sådan dyrkningsvæske efter fraskillelse af mycelierne.

8. Præparat til anvendelse inden for human- eller veterinærmedicinen, 20 kendetegnet ved, at det indeholder en virksom mængde af mindst én forbindelse ifølge krav 1 sammen med én eller flere bærere og/eller excipienser.

9. Skadedyrsbekæmpende præparat til anvendelse ved bekæmpelse af skadedyr i landbrug, havebrug eller skovbrug, 25 kendetegnet ved, at det indeholder en virksom mængde af mindst én forbindelse ifølge krav 1 sammen med én eller flere bærere og/eller excipienser. DK 160992 B

10. Præparat ifølge krav 7 eller 8, kendetegnet ved, at det indeholder en forbindelse ifølge krav 6.

10 OR^ er -OH, -OCOR^, [hvor Rb er C^.g alkyl (eventuelt substitueret med halogen, C^_4 alkoxy, phenoxy eller phenyl), C3.6 cycloalkyl eller phenyl]; -0C02Rba, hvor R^a er C^.4 alkyl, der eventuelt er substitueret med halogen; -0CS0R®b, (hvor R6b er phenyl, der eventuelt er substitueret med 0^.4 alkyl); -OR^ [hvor er C^.4 alkyl 15 (eventuelt substitueret med C3.7 cycloalkyl), C3.7 cycloalkyl eller C2_8-alkenyl]! OSO2R® (hvor R® er C^.4 alkyl eller phenyl, der eventuelt er substitueret med Cj^.4 alkyl); eller -0C0(CH2)nC02R^ (hvor R^ er hydrogen eller C^.4 alkyl, og n er nul, 1 eller 2); og OR^ er -OH, -0C0R^a [hvor R^a er Cj^.4 alkyl (eventuelt substitueret 20 med halogen, phenoxy eller tri(C^_4 alkyl)-silyloxy), phenyl eller DK 160992 B halogenphenyl]; - OGO (0¾) nC02R^ (hvor er hydrogen eller C^_4 alkyl, og n er nul, 1 eller 2); -OCC^R^3 (hvor R^3 er C2.4-alkyl, der eventuelt er substitueret med phenyl eller halogen); C^.4 alkoxy; eller tri(C^_4 alkyl)silyloxy; 5 med undtagelse af de forbindelser, hvor R2 er hydroxy, og OR^ er OH eller OCH3.

11. Fremgangsmåde til fremstilling af en makrolidforbindelse ifølge 5 krav 1, kendetegnet ved, at (a) til fremstilling af en forbindelse, i hvilken én eller begge af K.2 og OR^ er substitueret hydroxy, en tilsvarende forbindelse, i hvilken én eller begge af R^ og OR^ er hydroxy, omsættes med et 10 tilsvarende hydroxysubstituerende reagens, idet OR^ er en inter- mediært beskyttet hydroxygruppe under reaktionen ved fremstilling af forbindelser, i hvilke OR^ er -OH; (b) til fremstilling af en forbindelse, i hvilken R^ og R^ begge er hydrogen, en tilsvarende forbindelse, i hvilken R^ er et homolytisk 15 reducerbart atom eller gruppe, reduceres; (c) til fremstilling af en forbindelse, i hvilken og R^ tilsammen danner en oxo-gruppe, en tilsvarende forbindelse, i hvilken R^ er -OH oxideres, idet OR^ er en intermediært beskyttet hydroxygruppe ved fremstillingen af forbindelser, i hvilke OR^ er -OH; 20 (d) til fremstilling af en forbindelse, i hvilken R^ eller OR^ er hydroxy, beskyttelsesgruppen fra en tilsvarende forbindelse, i hvilken R^ eller OR^ er beskyttet hydroxy, fjernes; (e) til fremstilling af et salt af en syre med den almene formel II, syren behandles med en base, eller et salt omdannes til et andet ved 25 ionbytning; eller (f) til fremstilling af en forbindelse, i hvilken og R^ tilsammen er en oxo-gruppe, og OR^ er -OH eller methoxy, der foretages dyrkning af Streptomyces thermoarchaensis NCIB 12015 eller en mutant deraf med i det væsentlige samme egenskaber i nærværelse af assimilerbare 30 kilder af carbon, nitrogen og mineralsalte, hvorefter forbindelsen som ønsket isoleres. DK 160992 B

12. Fremgangsmåde til bekæmpelse af skadedyr i landbrug, havebrug eller skovbrug, kendetegnet ved, at der til planter eller anden vegetation eller til skadedyrenes lokalitet påføres en virksom mængde af én 5 eller flere forbindelser ifølge krav 1 eller et præparat ifølge krav 9.