DE69726874T2 - Beta-glukan produkte und deren extraktionsverfahren aus cerealien - Google Patents

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Description

  • Gebiet der Erfindung
  • Diese Erfindung betrifft neue Substanzen, die aus Getreide extrahiert werden können, neue Extraktionsverfahren, sowie die Verwendung der Produkte als therapeutische Mittel, biokompatible Filme und als Zusätze in Nahrungsmitteln und Kosmetikprodukten.
  • Hintergrund
  • In Getreide vorhandene β-Glucan-polysaccaride umfassen D-Glucopyranosyl-Einheiten. Die Einheiten sind durch (1 -> 3) oder (1 -> 4) β-Bindungen miteinander verknüpft. β-Glucane dieses Typs umfassen bis zu etwa 15% der Feststoffe in Hafer- und Gerste-Getreideprodukten. Sie haben typischerweise ein Molekulargewicht von etwa 2,5 Millionen.
  • β-Glucane sind als lösliche diätetische Fasern geeignet. Lösliche Fasern bleiben unverdaut, außer durch die Darmmikroflora im unteren Darmbereich. Dies verstärkt das Wachstum von Bakterien, die der Gesundheit zuträglich sind. Lösliche diätetische Fasern sollen bei der Prävention von gewissen Krankheiten, einschließlich Darmkrebs, sowie Krankheiten, die mit hohen Serum-Cholesterinkonzentrationen assoziiert sind, eine Rolle spielen. Lösliche Fasern können zur Behandlung und Prävention von Verstopfung, zur Verbesserung der Darmregelmäßigkeit, sowie für die Regulierung der glykämischen Antwort, die mit der Verdauung von vielen Substanzen zusammenhängt, verwendet werden.
  • Man nimmt an, dass β-Glucane eine hypocholesterolämische Aktivität haben. β-Glucane sind auch nützlich als Nahrungsmittelbestandteile. Sie haben einen neutralen Geschmack und stellen zusätzlich zu einem gewünschten Mundgefühl und Konsistenzeigenschaften Volumen bereit. In diesem Zusammenhang sind β-Glucane als Fettersatz in einigen Nahrungsmitteln bekannt.
  • Die offenbarten Verfahren zum Extrahieren von β-Glucanen aus Getreide beinhalten eine Anzahl von Schritten. Zunächst wird das gemahlene Getreide behandelt, um Enzyme, die mit dem Getreide assoziiert sind, zu deaktivieren. Anschließend wird das β-Glucan aus dem Getreide in warmes Wasser extrahiert, anschließend werden die Feststoffe aus der Lösung entfernt. Große Mengen an Wasser-mischbaren organischen Lösungsmitteln werden zu der Lösung hinzugegeben, um das β-Glucan auszufällen, im Allgemeinen zusammen mit weiteren Polysaccariden. Das β-Glucan ist von geringer Reinheit und im Allgemeinen hohem Molekulargewicht.
  • Es ist ebenfalls bekannt, den Enzymdeaktivierungsschritt nach der Extraktion mit Wasser durchzuführen, statt als ersten Schritt. Der Deaktivierungsschritt inhibiert die Hydrolyse des β-Glucans, wobei ein hohes mittleres Molekulargewicht des β-Glucans erhalten wird.
  • US-A-5512287 beschreibt ein Verfahren zum Erhalten von β-Glucan aus Getreidekörnern, das den Schritt des Zerstörens von β-Glucanaseaktivität umfasst.
  • Wässrige Lösungen des durch die bekannten Verfahren erhaltenen β-Glucans haben minimale Funktionalität hinsichtlich der Temperatur. Sie sind im Allgemeinen pflanzliche Gummistoffe mit hohem Molekulargewicht und bilden viskose wässrige Lösungen, obwohl sie sich nicht leicht in Wasser lösen.
  • Die nach bekannten Verfahren erhaltenen β-Glucane können Arabinoxylane und Stärke enthalten. Diese Verunreinigungen können für die Bildung von viskosen wässrigen Lösungen während der Extraktion verantwortlich sein, die schwierig zu verarbeiten sind. Gummiartige oder klebrige Feststoffe können entstehen, wenn die Feststoffe als trockenes Produkt gewonnen werden. Diese Produkte können nur schwer wieder gelöst werden, selbst bei hohen Temperaturen.
  • Die bekannten Verfahren zur Gewinnung von β-Glucan aus der wässrigen Lösung umfassen das Ausfällen des β-Glucans durch die Zugabe eines wassermischbaren organischen Lösungsmittels (wie etwa Ethanol), gefolgt von einer Filtration, sowie Sprüh- oder Gefrier-Trocknen des Präzipitats.
  • Die im Stand der Technik vorgeschlagenen Extraktionsverfahren haben wegen der Anzahl von Schritten und somit der damit verbundenen Kosten beschränktes wirtschaftliches Potential.
  • Zusammenfassung der Erfindung
  • Es ist eine Aufgabe dieser Erfindung, ein β-Glucan-Produkt bereitzustellen, sowie eine einfache und wirksame Methode zum Extrahieren von β-Glucan, oder zumindest der Öffentlichkeit eine geeignete Alternative bereizustellen.
  • In einem ersten Aspekt dieser Erfindung wird ein Verfahren zum Erhalten von β-Glucan aus Getreide bereitgestellt, das ein geringeres mittleres Molekulargewicht aufweist als in seinem nativen Zustand, umfassend:
    • – Mischen des Getreides mit Wasser, um eine Aufschlämmung einer wässrigen Lösung von β-Glucan und einem festen Rückstand zu bilden, so dass das β-Glucan durch ein oder mehrere mit dem Getreide assoziierte Enzyme teilweise hydrolysiert wird, um ein β-Glucan mit einem niedrigeren mittleren Molekulargewicht als in seinem nativen Zustand zu ergeben,
    • – Abtrennen der wässrigen Lösung von dem festen Rückstand, und
    • – Gewinnen des β-Glucans aus der wässrigen Lösung,
    wobei während des Verfahrens kein Deaktivierungsschritt des einen oder der mehreren Enzyme stattfindet.
  • Gemäß einem weiteren Aspekt dieser Erfindung wird ein Verfahren zum Gewinnen von β-Glucan aus einer wässrigen Lösung aus β-Glucan bereitgestellt, umfassend:
    • Frieren der Lösung,
    • – Auftauen der Lösung, um ein Präzipitat in Wasser zu ergeben, und
    • – Abtrennen des Präzipitats von dem Wasser,
    wobei die nicht-wässrige Hauptkomponente des Präzipitats β-Glucan ist.
  • Diese Erfindung stellt β-Glucan bereit, das durch jedwedes der Verfahren des ersten und zweiten Aspekts dieser Erfindung hergestellt ist.
  • Die Erfindung stellt auch aus Getreide extrahiertes β-Glucan bereit, welches, wenn es in erwärmtem Wasser gelöst wird und dann abkühlt, ein Gel bildet.
  • Gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung wird eine Zusammensetzung bereitgestellt, die β-Glucan enthält, zur Verwendung als hypocholesterolämisches Mittel. Eine β-Glucan-enthaltende Zusammensetzung wird auch zur Verwendung bei der Behandlung oder zur Prävention von Verstopfung, für die Regulierung der Darmtätigkeit, oder für die Regulierung der glykämischen Antwort bereitgestellt.
  • Die Erfindung stellt auch ein Verfahren zur Behandlung von Hypercholesterolämie in einem bedürftigen Patienten bereit, umfassend das Verabreichen an den Patienten einer wirksamen Menge an β-Glucan.
  • Die Erfindung stellt auch ein Verfahren zur Behandlung oder Prävention von Verstopfung, ein Verfahren zum Regulieren der Darmtätigkeit, sowie ein Verfahren zur Regulierung der glykämischen Antwort bereit, wobei jedes Verfahren das Verabreichen an einen bedürftigen Patienten einer wirksamen Menge an β-Glucan umfasst.
  • Die Erfindung stellt die Verwendung eines β-Glucans als Nahrungsmittelbestandteil, als einen Zusatzstoff in kosmetischen Zusammensetzungen, als ein filmbildendes Mittel in Wundverbänden und in Nahrungsmittelbeschichtungen, als Matrix für die langsame Abgabe eines in der Matrix vorhandenen Mittels, sowie für die Modifizierung der Eigenschaften von weiteren Polysaccariden bereit.
  • Diese Erfindung stellt auch ein Tiernahrungsmittel bereit, bestehend aus Getreide, aus dem das β-Glucan im Wesentlichen extrahiert wurde. Die Erfindung stellt auch ein Getreide bereit zur Verwendung in Brauverfahren, wobei das β-Glucan aus dem Getreide extrahiert wurde.
  • DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
  • Das in dieser Erfindung verwendete Getreide kann jedes β-Glucan-enthaltende Korn oder Pflanzenmaterial sein, einschließlich aber nicht beschränkt auf Gerste, Hafer, Reis, Roggen, Triticale, Mais und Weizen. Das bevorzugte Getreide ist Gerste. Zusätzlich haben wachshaltige Getreide den Vorteil gegenüber nicht-wachshaltigen Getreiden, dass aus den Stärkekörnern weniger Amylose in die Extraktionslösung ausgewaschen wird.
  • Die physikalischen Eigenschaften von β-Glucanen hängen im Wesentlichen von ihrem mittleren Molekulargewicht ab. Der Ausdruck "β-Glucan mit hohem Molekulargewicht" wie hierin verwendet, bedeutet β-Glucan mit einem mittlerem Molekulargewicht, das im Wesentlichen dem mittleren Molekulargewicht von β-Glucan ähnlich ist, das man in Getreide findet (typischerweise 2 × 106 – 3 × 106). Der Ausdruck "β-Glucan mit niedrigem Molekulargewicht", wie hierin verwendet, bedeutet ein β-Glucan mit einem niedrigeren mitteleren Molekulargewicht (5 × 103 – 1,5 × 106) im Verhältnis zu dem mittleren Molekulargewicht von β-Glucan, das man in Getreide findet.
  • Das mittlere Molekulargewicht des aus dem Getreide extrahierten β-Glucans ist eine Funktion der Zeitdauer, die das β-Glucan in Kontakt mit einem oder mit mehreren Hydrolaseenzymen verbringt, die mit dem Getreide assoziiert sind. Wenn somit das Getreide mit Wasser gemischt wird, nimmt man an, dass das eine oder die mehreren Hydrolaseenzyme im Hinblick auf die Reaktion mit dem β-Glucan aktiviert werden. Ein Teil der β-Glucan-Moleküle wird zu kleineren Einheiten hydrolysiert, was dazu führt, dass das aus dem Extraktionsverfahren gewonnene β-Glucan ein niedriges Molekulargewicht hat.
  • Die mit dem Getreide assoziierten Hydrolaseenzyme umfassen eigene Getreideenzyme und auch Enzyme, die in Mikroorganismen, die an dem Getreide haften, vorhanden sind oder von diesen produziert werden.
  • Das mittlere Molekulargewicht von β-Glucan, das aus der wässrigen Extraktion von Getreide erhalten wurde, ohne Deaktivierung von Hydrolaseenzymen, kann durch das Kontrollieren der Zeit der Extraktion gesteuert werden. In dem Verfahren des ersten Aspekts der Erfindung wird Getreide mit Wasser gemischt, um eine Aufschlämmung zu bilden, so dass β-Glucan aus dem Getreide in die Lösung extrahiert wird. Je länger die Extraktionszeit, desto größer ist die Menge an Hydrolyse des β-Glucans. Daher kann ein β-Glucan mit niedrigem Molekulargewicht erhalten werden, wenn keine Deaktivierung der Enzyme geschieht. Zusätzlich kann ein β-Glucan eines vorbestimmten mittleren Molekulargewichts erhalten werden, indem die Extraktionszeit vorbestimmt wird.
  • Das Getreide kann mit Wasser bei jeder Temperatur im Bereich von 0–80°C, vorzugsweise 30–70°C oder stärker bevorzugt 45–60°C extrahiert werden. Bei Temperaturen von oberhalb etwa 80°C werden die mit dem Getreide assoziierten Enzyme wahrscheinlich deaktiviert.
  • Es wird verständlich sein, dass die Ausbeute an β-Glucan, das aus dem Getreide gewonnen wurde, mit der Wassertemperatur während des Extraktionsverfahrens variiert. Eine höhere Temperatur ergibt im Allgemeinen eine höhere Ausbeute.
  • Das Getreide kann mit Wasser, das auf einen pH-Wert im Bereich von 1–10, vorzugsweise 5–8 eingestellt wurde, gemischt werden.
  • Zusätzlich zum Kontrollieren des mittleren Molekulargewichts des β-Glucans durch Kontrollieren der Extraktionszeit, wird erwartet, dass die partielle Hydrolyse des β-Glucans durch die Zugabe von exogenen β-Glucan-hydrolysierenden Enzymen zu dem Gemisch oder durch die Zugabe von Säure zu dem Gemisch gefördert wird.
  • Es wird auch angenommen, dass die Behandlung des wässrigen Gemisches mit einem Arabinoxylan-abbauenden Enzym, wie etwa Xylanase, oder einem Stärkeabbauend en Enzym, wie etwa Amylase, zu einem β-Glucan-Produkt mit verbesserter Reinheit führt.
  • Das Abkühlen der wässrigen Lösung von β-Glucan auf eine Temperatur zwischen etwa 0°C und 10°C kann zur Bildung eines Gels führen.
  • Jedes der bekannten Verfahren zur Gewinnung von β-Glucan aus einer wässrigen Lösung oder das Verfahren gemäß dem zweiten Aspekt dieser Erfindung kann verwendet werden, um das β-Glucan mit niedrigem Molekulargewicht zu gewinnen.
  • Das Getreide, das in Form des ganzen Korns, Kleie, Pollard, Mehl oder eines anderen auf die gewünschte Partikelgröße gemahlenes Pulver sein kann, kann mit Wasser bei etwa 50°C gerührt werden, bis eine gewünschte Menge β-Glucan in die Lösung extrahiert wurde, beispielsweise bis zu 48 Stunden, vorzugsweise bis zu 10 Stunden, stärker bevorzugt bis zu 3 Stunden. Die wässrige Phase kann dann von den verbliebenen Feststoffen durch Zentrifugieren abgetrennt werden, gefolgt vom Abgießen oder Filtrieren. Das in der wässrigen Lösung vorhandene β-Glucan wird dann vorzugsweise durch das Verfahren des zweiten Aspekts dieser Erfindung gewonnen.
  • Das mittlere Molekulargewicht des gewonnenen β-Glucans mit niedrigem Molekulargewicht kann im Bereich von bis zu 1.500.000, vorzugsweise bis zu 600.000, stärker bevorzugt bis zu 300.000, beispielsweise 5.000–50.000 sein. Es sollte verständlich sein, dass das mittlere Molekulargewicht des gewonnenen β-Glucans von Getreide zu Getreide unterschiedlich sein kann und je nach Form des Getreides variieren kann. Somit kann einiges Experimentieren erforderlich sein, um das mittlere Molekulargewicht des Produkts für eine bestimmte Mischzeit vorzubestimmen.
  • Das Verfahren des zweiten Aspekts der Erfindung betrifft die Gewinnung von β-Glucan aus einer wässrigen Lösung von β-Glucan durch Frieren-Auftauen der Lösung.
  • In diesem Verfahren kann eine wässrige Lösung gemäß dem Verfahren des ersten Aspekts dieser Erfindung hergestellt werden, oder nach einem der bekannten Verfahren, die zu einem β-Glucan-Produkt mit niedrigem Molekulargewicht führen. Die bekannten Verfahren erfordern im Allgemeinen vor der wässrigen Extraktion des β-Glucans eine Deaktivierung der im Getreide vorhandenen Enzyme. Das β-Glucan wird dann teilweise enzymatisch hydrolysiert oder durch Behandlung mit Säure hydrolysiert, um das β-Glucan mit niedrigem Molekulargewicht zu ergeben.
  • Die wässrige Lösung wird bei einer Temperatur von unterhalb 0°C gefroren, vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen etwa –20°C und –10°C: Es scheint nicht ausschlaggebend zu sein, wie lange die Lösung im gefrorenen Zustand gehalten wird. Die gefrorene Lösung lässt man dann auftauen, vorzugsweise durch Stehenlassen bei Raumtemperatur (15–25°C).
  • Das β-Glucan-Produkt wird als weißlicher, teilchenförmiger Feststoff gewonnen, als gelatineartiges oder ziehendes Material, das aus der Lösung ausgefallen ist. Dies wird durch Filtration oder andere Mittel von der wässrigen Phase abgetrennt und ist im Wesentlichen in kaltem Wasser unlöslich. Anschließend wird das β-Glucan-Produkt getrocknet. Dem Trocknen kann durch Frieren des Präzipitats und anschließendes Auftauen nachgeholfen werden. Dieses Verfahren entfernt weiteres Wasser vom festen Material.
  • Das Präzipitat kann dann durch irgendein bekanntes Verfahren, einschließlich Lufttrocknen, Pressen, Waschen mit einem Alkohol, Erwärmen oder Gefriertrocknen getrocknet werden.
  • Man beobachtete, dass das resultierende β-Glucan-Produkt eine hohe Reinheit aufweist, im Allgemeinen 70 Gew.-% bezogen auf den Gesamtfeststoffgehalt oder darüber. Das Wiederauflösen des β-Glucan-haltigen Produkts in Wasser, gefolgt von wiederholten Schritten des Frierens und Auftauens, ergibt ein β-Glucan-Produkt von höherer Reinheit, beispielsweise über 90%.
  • Obgleich das Verfahren ein β-Glucan-Produkt von hoher Reinheit ergibt, ist zu erwarten, dass die Verwendung eines Arabinoxylan-abbauend en Enzyms, wie etwa Xylanase, und/oder eines Stärke-abbauend en Enzyms, wie etwa Amylase, die Reinheit des β-Glucans verbessert, indem es leichter ist, unerwünschte Arabinoxylane und Stärke als leicht lösliche Oligosaccharide zu entfernen. Das Abbauen der Enzyme kann entweder vor den Schritten des Frierens und Auftauens verwendet werden, oder das nach den Schritten des Frierens und Auftauens gewonnene β-Glucan-Produkt kann in Wasser wieder gelöst werden und mit einem oder mehreren solcher abbauenden Enzyme behandelt werden.
  • Die so isolierten β-Glucane haben neue funktionelle Eigenschaften. Aus bekannten Verfahren erhaltene Produkte bilden viskose Lösungen, die keine oder wenig Struktur über einen Temperaturbereich von 0–100°C aufweisen. Das gemäß der vorliegenden Erfindung hergestellte β-Glucan bildet frei fließende Lösungen, die eine beträchtliche Struktur entwickeln können. Bei Temperaturen unterhalb etwa 60°C und Konzentrationen oberhalb etwa 0,5% Gewicht/Gewicht, vorzugsweise oberhalb von 1% Gewicht/Gewicht können sich Gele bilden.
  • Der Ausdruck "Gel", wie hierin verwendet, wird definiert als teilweise coagulierter Feststoff, in dem eine Flüssigkeit dispergiert ist. Gele sind im Allgemeinen halb fest, aber leicht verformbar. Gummis sind in Wasser löslich, um viskose Lösungen zu ergeben, coagulieren jedoch nicht zu Gelen.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird ein β-Glucan-Produkt bereitgestellt, das bei einer Konzentration von oberhalb etwa 0,5% Gewicht/Gewicht ein weiches Gel bildet.
  • Vorzugsweise wird das β-Glucan-Produkt gelöst, wenn das Wasser auf oberhalb etwa 60°C erwärmt wird. Ein Gel bildet sich, wenn die Lösung abkühlt.
  • Im Allgemeinen bildet β-Glucan mit niedrigem Molekulargewicht schnell Gele. So kann beispielsweise ein β-Glucan mit einem Molekulargewicht von 30.000 nach etwa 15 Minuten beginnen fest zu werden, während ein β-Glucan mit einem Molekulargewicht von 400.000 etwa 2 Stunden braucht, um ein Gel zu bilden.
  • Ein weiteres Merkmal der Erfindung ist die Verwendung eines β-Glucans mit niedrigem Molekulargewicht, um die Eigenschaften weiterer Polysaccaride, beispielsweise weiterer β-Glucane mit hohem Molekulargewicht zu modifizieren.
  • Das β-Glucan-Produkt dieser Erfindung kann als hypocholesterolämisches Mittel verwendet werden. Es ist auch für die Behandlung oder Prävention von Verstopfung und für die Regulierung der Darmtätigkeit geeignet. Zusätzlich kann das β-Glucan-Produkt verwendet werden, um die glykämische Antwort zu regulieren, d. h. erhöhte Blutzuckerspiegel im Anschluss an die Verdauung gewisser Nahrungsmittel.
  • Die therapeutischen Mittel der Erfindung können in Form von Zusammensetzungen hergestellt werden, die als Tabletten, Kapseln, Lösungen, Suspensionen oder anderer Arten von Zusammensetzungen eingenommen werden. Diese Zusammensetzungen können nach bekannten Verfahren hergestellt werden.
  • Das β-Glucan mit niedrigem Molekulargewicht gemäß der Endung kann für andere Zwecke als den des hypocholesterolämischen Mittels eingesetzt werden. Die einzigartigen funktionellen Eigenschaften haben eine Vielzahl von Verwendungen, insbesondere in Fertignahrungsmittelprodukten. Gemäß der Erfindung ist es bevorzugt, zu diesen Nahrungsmittelprodukten einfach das β-Glucan hinzuzugeben. Da β-Glucane natürliche Nahrungsmittelkomponenten sind, wird angenommen, dass die Abneigung der Verbraucher gegen modifizierte oder nicht natürliche Nahrungsmittelzusätze hier nicht vorherrscht.
  • Eine Eigenschaft des β-Glucans mit niedrigem Molekulargewicht gemäß dieser Erfindung ist, dass sie sich im Mund gut anfühlen. Dies macht sie geeignet als Fettmimetika in Nahrungsmittelprodukten. Ihre Fähigkeit, essbare Filme zu bilden, macht sie potentiell geeignet als Nahrungsmittelbeschichtungen, beispielsweise Glasierungen. Die filmbildenden Eigenschaften von β-Glucanen erlauben es ihnen auch, als Filme für Wundpflaster geeignet zu sein. β-Glucane scheinen die Bildung von Eiskristallen in gefrorenen Nahrungsmitteln zu inhibieren. Sie sind daher nützlich in gefrorenen Nahrungsmitteln, wo ein weiches Mundgefühl gewünscht wird, beispielsweise in Speiseeis.
  • Zusätzlich wird erwartet, dass die Poren in der festen Struktur des gelförmigen oder getrockneten β-Glucan-Produkts dieser Erfindung es den β-Glucanen ermöglichen, als Mittel mit langsamer Freigabe für pharmazeutische Produkte und für Geschmacksstoffe, beispielsweise in Nahrungsmitteln zu dienen.
  • β-Glucan-haltige Getreideprodukte werden als Viehfutter, insbesondere als Geflügel- oder Schweinefutter verwendet. Sie sind nicht so wirksam als Nährstoff aufgrund der Anti-Nährstoffaktivität der β-Glucane. Indem die β-Glucane extrahiert werden, hat das verbleibende feste Material einen erhöhten Wert als Tierfutter. Dies ist insbesondere bei Gerste der Fall.
  • Die Erfindung stellt weiterhin ein Tierfutter bereit, das Getreideprodukte enthält, aus denen die β-Glucane durch ein Verfahren, dass das Lösen der β-Glucane in einer wässrigen Lösung und Entfernen des festen Materials als Tierfutter umfasst, entfernt wurden. Das feste Material kann auch in Brauvorgängen verwendet werden, um Probleme, wie etwa verstopfte Filter/Füllmittel, zu reduzieren, was durch das Ausfällen von β-Glucanen aus der Lösung während des Verfahrens hervorgerufen wird. Typischerweise wurden mindestens 30% des β-Glucans aus dem Getreide entfernt. Vorzugsweise wurden mindestens 50% entfernt, stärker bevorzugt wurden mindestens 80% des β-Glucans entfernt.
  • Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, sollen jedoch nicht als beschränkend aufgefasst werden:
  • Beispiel 1
  • 1 kg einer Gerstenmehl-Fertigpollard-Fraktion wurde mit 5 l Wasser bei 55°C für 3 Stunden sanft gerührt. Die Feststoffe wurden abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –20°C gefroren. Die Lösung wurde dann aufgetaut, und die in der aufgetauten Lösung verbleibenden β-Glucan-Feststoffe wurden filtriert und getrocknet. Die Ausbeute an β-Glucan-Produkt betrug 26 g. Das Produkt wurde durch 13C-Lösungs-NMR charakterisiert (Tabelle 1).
  • Tabelle 1
    Figure 00090001
  • Beispiel 2
  • 5 g einer Gerstenmehl-Fertigpollard-Fraktion, die 3,9% β-Glucan enthielt, wurden mit 25 ml Wasser bei 55°C gemischt. Das Gemisch wurde gelegentlich gerührt. Nach 2 Stunden wurden die Feststoffe abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –20°C für 12 Stunden gefroren. Die gefrorene Lösung wurde dann bei Raumtemperatur aufgetaut, und das ausgefällte β-Glucan-Produkt wurde filtriert und bei 80°C ofengetrocknet. Die Gesamtausbeute von β-Glucan-Produkt betrug 0,19 g.
  • Beispiel 3
  • 5 g einer Gerstenkleiemehlfraktion wurden mit 25 ml Wasser bei 55°C gemischt. Das Gemisch wurde gelegentlich gerührt. Nach 2 Stunden wurden die Feststoffe abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –20°C für 12 Stunden gefroren. Die gefrorene Lösung wurde bei Raumtemperatur aufgetaut, und das ausgefällte β-Glucan-Produkt wurde filtriert und bei 80°C ofengetrocknet. Die Gesamtausbeute von β-Glucan-Produkt betrug 0,065 g.
  • Beispiel 4
  • 5 g einer Gerstenpollardmehlfraktion wurden mit 25 ml Wasser bei 55°C gemischt. Das Gemisch wurde gelegentlich gerührt: Nach 2 Stunden wurden die Feststoffe abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –20°C für 12 Stunden gefroren. Die gefrorene Lösung wurde bei Raumtemperatur aufgetaut, und das ausgefällte β-Glucan-Produkt wurde filtriert und bei 80°C ofengetrocknet. Die nach dem Zentrifugieren verbliebenen Feststoffe wurden einem weiteren Extraktionsverfahren unterzogen, das mit dem ersten Extraktionsverfahren identisch war. Die Gesamtausbeute des gewonnenen β-Glucan-Produkts betrug 0,19 g.
  • Beispiel 5
  • 5 g einer Fertigpollard-Gerstenmehlfraktion wurde unter gelegentlichem Rühren in 25 ml destilliertem Wasser auf 55°C für ½ Stunde erwärmt. Die Feststoffe wurden abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –10°C gefroren. Die gefrorene Lösung wurde aufgetaut, und das ausgefällte β-Glucan-Produkt wurde filtriert und getrocknet. Die Ausbeute an β-Glucan-Produkt betrug etwa 0,16 g. Das Molekulargewicht des Produkts wurde unter Verwendung von Gelpermeationschromatographie (GPC) untersucht. Die Ergebnisse legen nahe, dass das mittlere Molekulargewicht dieses Produkts etwa 560.000 betrug.
  • Beispiel 6
  • 140 g einer Gerstenpollardmehlfraktion wurden bei 50°C in 700 ml unter gelegentlichem Rühren erwärmt. Nach 0,5 Stunden wurden die Feststoffe durch Zentrifugieren entfernt. Der gewonnene Überstand wurde dann bei –10°C gefroren. Nach einem Tag wurde der gefrorene Überstand bei Raumtemperatur aufgetaut. Die aufgetaute Lösung bestand aus einem gelatineartigen Präzipitat des β-Glucan-Produkts, das durch Zentrifugieren entfernt wurde. Das gelatineartige β-Glucan-Produkt wurde gewaschen und dann ein zweites Mal gefroren und aufgetaut, um ein stärker faseriges β-Glucan-Produkt zu ergeben. Dieses Produkt konnte durch Auspressen des überschüssigen Wassers, Waschen mit Ethanol und anschließendem Lufttrocknen weiter entwässert werden. Die Ausbeute an faserartigem β-Glucan-Produkt betrug etwa 3 g.
  • Beispiel 7
  • Ein sehr reines β-Glucan-Produkt wurde wie folgt hergestellt: 100 g einer Gerstenpollardmehlfraktion wurden mit 500 ml Wasser bei 55°C gemischt. Nach 2 Stunden wurden die Feststoffe abzentrifugiert, und der Überstand wurde anschließend bei –10°C für einen Tag gefroren. Der gefrorene Überstand wurde aufgetaut, und das ausgefällte β-Glucan-Produkt wurde durch Filtration entfernt. Das gewonnene Material wurde dann bei 80°C wieder in Wasser gelöst. Die β-Glucan-Lösung wurde wiederum bei –10°C für einen Tag gefroren und aufgetaut. Das β-Glucan-Produkt wurde durch Filtration aus dieser Lösung gewonnen und mit Wasser gewaschen. Das Filtrat wurde dann ofengetrocknet. Die Ausbeute an β-Glucan-Produkt betrug 3 g, und ein McCleary-Assay [1] zeigte, dass die Reinheit 95% betrug.
  • Beispiel 8
  • In einer Reihe von Experimenten wurde eine Gerstenpollardfraktion bei verschiedenen Temperaturen und für unterschiedliche Zeiten extrahiert. Extraktionstemperaturen variierten zwischen Umgebungstemperatur (25°C) bis 55°C, und Extraktionszeiten variierten von 0,5 Stunden bis 5 Stunden. Die Molekulargewichte wurden durch Gelpermeationschromatographie (GPC) bestimmt. Für jedes Experiment wurde β-Glucan aus 5 g Gerstenpollard in 25 ml Wasser für unterschiedliche Zeiten und Extraktionstemperaturen extrahiert. Die Feststoffe wurden abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –10°C für einen Tag gefroren. Die Lösung wurde dann bei Raumtemperatur aufgetaut. Das ausgefällte β-Glucan wurde filtriert und getrocknet. Die Ausbeute wurde festgehalten, und das Molekulargewichtsprofil wurde durch GPC bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Prozentuale Ausbeuten, die in Tabelle 2 angegeben sind, basieren auf dem Gesamt-β-Glucan-Gehalt (6,8%) im getrockneten Gerstenpollard [1]. Die Ausbeute wurde für die Menge an Flüssigkeit, die nach dem Zentrifugieren in den Feststoffen verblieb und durch Annahme des β-Glucan-Gehalts des Frieren/Auftauen-Präzipitats von 80% (wenn nicht tatsächlich bestimmt) korrigiert.
  • Im Allgemeinen wurde beobachtet, dass die Ausbeute nur von der Temperatur des Extraktionsverfahrens abhing, während das Molekulargewicht beim GPC-Peakmaximum nur von der Extraktionszeit abhing.
  • Tabelle 2
    Figure 00120001
  • [1] McCleary, B. V. und Codd, R. (1991) Journal of the Science of Food and Agriculture, 55, 303–312.
  • Beispiel 9
  • 5 g eines Gerstenfertigpollardmehls wurden mit 0,02 mol/l Salzsäurelösung gemischt und das Gemisch für 0,5 Stunden stehen gelassen. Die Säure wurde anschließend abzentrifugiert und das verbleibende Mehl mit 2 Teilen Wasser gewaschen. Alles verbliebene Wasser wurde abzentrifugiert. Das feuchte Mehl wurde dann mit 25 ml Wasser gemischt, und das Wasser-Mehlgemisch wurde für 2 Stunden auf 55°C erwärmt. Die Feststoffe wurden abzentrifugiert, und der Überstand wurde bei –10°C für 12 Stunden gefroren. Die gefrorene Lösung wurde dann aufgetaut, und das gelatineartige Präzipitat wurde gesammelt und getrocknet. Die Ausbeute an β-Glucan-Produkt betrug 0,07 g.
  • Beispiel 10
  • 5 g Gerstenfertigpollardmehl wurden mit 25 ml Wasser gemischt. Das Gemisch wurde mit Natriumcarbonatlösung auf pH = 10 eingestellt. Das Gemisch wurde dann für 2 Stunden auf 45°C erhitzt. Feststoffe wurden abzentrifugiert und der Überstand wurde anschließend bei –10°C für 12 Stunden gefroren. Die gefrorene Lösung wurde dann aufgetaut, und das faserartige Präzipitat wurde gesammelt und getrocknet. Die Ausbeute an β-Glucan-Produkt betrug 0,15 g.
  • Beispiel 11
  • Ein qualitativ hochwertiges β-Glucan-Produkt wurde durch eine siebenschrittige Pilotpflanzenextraktion hergestellt.
  • 1. Extraktion
  • 78,9 kg schwarzer Gerstenfertigpollard wurde mit 400,2 kg Leitungswasser bei 50°C gemischt. Die Gerste/WasserAufschlämmung wurde für 30 Minuten bei 50°C gehalten.
  • 2. Feststoffentfernung
  • Die Aufschlämmung wurde dann durch eine APV-Scrolldecanter-Zentrifuge bei 2,95 kg/Minute hindurchgeführt. Es wurden 313,6 kg Überstand produziert.
  • 3. Klärung
  • Der Überstand aus dem Scrolldecanter wurde durch eine Westfalia SAOH Disc Stack Zentrifuge bei 1,9 kg/Minute hindurchgeführt. Es wurden 303,2 kg Überstand gesammelt.
  • 4. Frieren-Auftauen 1
  • Der geklärte Überstand wurde gefroren und für 2 Tage bei 18°C gehalten. Der gefrorene Überstand wurde dann bei Raumtemperatur für 3 Tage aufgetaut.
  • 5. Konzentration des präzipitierten β-Glucans aus Frieren/Auftauen 1
  • Der Überstand wurde mit einer peristaltischen Pumpe dekantiert. Es verblieben 60 kg Präzipitataufschlämmung nach dem Dekantieren.
  • 6. Klären und Wiederauflösen des β-Glucans
  • Die Präzipitataufschlämmung wurde für 30 Minuten auf 80°C erwärmt, um das präzipitierte β-Glucan-Produkt wieder aufzulösen. Die Lösung wurde dann durch eine Westfalia Zentrifuge bei 80°C hindurchgeführt, um Feinanteile zu entfernen. Es wurden 56,1 kg geklärter Überstand erhalten.
  • 7. Frieren/Auftauen 2
  • Das wiedergelöste β-Glucan wurde bei –18°C für 2 Tage gefroren. Das gefrorene β-Glucan wurde bei Raumtemperatur für 3 Tage aufgetaut. Die Aufschlämmung des β-Glucan-Produkts und Überstands aus dem zweiten Frieren/Auftauen wurde dann durch eine Sharples Korbzentrifuge bei 1 l pro Minute hindurchgeführt. Das gelatineartige β-Glucan-Produkt wurde dann gefriergetrocknet, um die verbliebene Feuchtigkeit zu entfernen.
  • 8. Ausbeute
  • Die Ausbeute an β-Glucan-Produkt aus dem Verfahren betrug 1,64 kg.
  • Beispiel 12
  • Aus dem in Beispiel 6 hergestellten β-Glucan-Produkt wurde wie folgt ein Film hergestellt. 17 mg des β-Glucan-Produkts wurden in 0,5 ml Wasser bei 80°C gelöst, um eine klare Lösung zu ergeben. Eine 2,5 cm große runde Lache der Lösung wurde dann auf einer Polyethylenschablone getrockent. Der getrocknete Film des Glucan-Produkts hatte eine gute Klarheit und Zugfestigkeit.
  • Beispiel 13
  • Aus den folgenden Bestandteilen und dem in Beispiel 11 hergestellten β-Glucan-Produkt wurde eine Feuchtigkeitscreme hergestellt.
  • Gemisch A
    Figure 00140001
  • Gemisch B
    Figure 00150001
  • Das Gemisch B wurde auf 70°C erhitzt, bis das gesamte β-Glucan-Produkt gelöst war. Das Gemisch A wurde bei 70°C geschmolzen. Das Gemisch B wurde zusammen mit 0,2 g N-Propyl-4-hydroxybenzoat mit Gemisch A bei 70°C schnell gerührt. Die Formulierung wurde dann abgekühlt, um die Feuchtigkeitscreme zu ergeben.
  • Beispiel 14
  • Aus den folgenden Bestandteilen und dem in Beispiel 11 hergestellten β-Glucan-Produkt wurde ein italienisches Dressing hergestellt.
  • Figure 00150002
  • Das β-Glucan-Produkt wurde in dem Wasser bei einer Temperatur von 80°C gelöst. Alle Bestandteile wurden sofort miteinander gemischt und für 3 Minuten in einem Mixer, der mit einer Klinge ausgestattet war, gemischt. Das Gemisch ließ man dann abkühlen und ein Gel bilden bei einer Temperatur von 4°C, um das Dressing zu ergeben.
  • Beispiel 15
  • Ein Speiseeis wurde unter Verwendung der folgenden Bestandteile und des in Beispiel 11 hergestellten β-Glucan-Produkts hergestellt.
  • Figure 00160001
  • Das β-Glucan-Produkt wurde in dem Wasser bei 80°C gelöst und dann sofort mit den anderen Bestandteilen in einem Mixer, der mit einer Klinge ausgestattet war, gemischt. Das Gemisch wurde für 5 Minuten mit dem Mixer bearbeitet. Das verarbeitete Gemisch wurde dann bei einer Temperatur von –15°C gefroren, um ein Speiseeis zu ergeben, das wenig oder keine Kristallbildung aufwies.
  • Beispiel 16
  • Aus dem in Beispiel 11 hergestellten β-Glucan-Produkt und den folgenden Bestandteilen wurde ein Apfelsinenkuchen, der kein zusätzliches Fett enthielt, hergestellt.
  • Figure 00160002
  • Der Orangensaft und das Wasser wurden zusammengegeben und dann auf eine Temperatur von 80°C erwärmt. Anschließend wurde das β-Glucan-Produkt in dem Wasser-Orangengemisch bei einer Temperatur von 80°C gelöst. Dann wurde das Gemisch für etwa 20 Minuten stehen gelassen, damit es abkühlen und ein Gel bilden konnte. Die Eier und der Zucker wurden in einem Kuchenmischer für 5 Minuten gemischt. Die trockenen Bestandteile wurden zusammengegeben und mit dem Ei und Zuckergemisch vermischt. Das gelförmige Orangen-Wassergemisch wurde dann zu diesem Gemisch zugegeben und gemischt. Der resultierende Teig wurde in einem Ofen bei 160°C für 20 Minuten gebacken.
  • GEWERBLICHE ANWENDBARKEIT
  • Die β-Glucan-Produkte dieser Erfindung haben eine Vielzahl von Verwendungen. Sie sind geeignet als Zusätze in Nahrungsmitteln und in Kosmetika aufgrund ihrer gelbildenden Eigenschaften. Sie können Filme bilden, was bedeutet, dass sie als biokompatible Filme, beispielsweise essbare Filme für Nahrungsmittel und Filme zur Verwendung in Wundpflastern geeignet sind. Die β-Glucan-Produkte haben auch Anwendungen als pharmazeutische Produkte, insbesondere als cholesterinreduzierende Mittel.

Claims (17)

  1. Verfahren zum Erhalten eines β-Glucans mit einem niedrigeren durchschnittlichen Molekulargewicht, als in seinem nativen Zustand, aus Getreide, umfassend: – Mischen des Getreides mit Wasser bei einer Temperatur von zwischen 0°C und 80°C, um eine Aufschlämmung einer wäßrigen Lösung von β-Glucan und einem festen Rückstand zu bilden, so daß das β-Glucan durch ein oder mehrere mit dem Getreide assoziierte Enzyme teilweise hydrolysiert wird, um ein β-Glucan mit einem niedrgeren durchschnittlichen Molekulargewicht als in seinem nativen Zustand zu ergeben, – Abtrennen der wäßrigen Lösung von dem festen Rückstand, und – Gewinnen des β-Glucans aus der wäßrigen Lösung, dadurch gekennzeichnet, daß während des Verfahrens kein Deaktivierungsschritt des einen oder der mehreren Enzyme stattfindet.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Getreide ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Gerste, Hafer, Reis, Roggen, Triticale, Mais und Weizen.
  3. Verfahren nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei das Mischen bei einer Temperatur von zwischen 45°C und 60°C durchgeführt wird.
  4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die vom festen Rückstand abgetrennte wäßrige Lösung auf eine Temperatur von zwischen 0°C und 10°C abgekühlt wird, so daß sich ein Gel bildet, und das β-Glucan aus dem Gel gewonnen wird.
  5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, weiterhin umfassend den Schritt des Hinzufügens einer Säure oder eines oder mehrerer Enzyme zu der Aufschlämmung oder zu der im Abtrennungsschritt erhaltenen wäßrigen Lösung, um die teilweise Hydrolyse des β-Glucans zu unterstützen.
  6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, weiterhin umfassend das Behandeln der Aufschlämmung oder der im Abtrennungsschritt erhaltenen wäßrigen Lösung mit einem arabinoxylan-abbauenden Enzym oder einem stärkeabbauenden Enzym, so daß das erhaltene β-Glucan eine verringerte Menge an Arabinoxylan- oder Stärkeverunreinigungen enthält.
  7. Verfahren zur Gewinnung von β-Glucan aus einer wäßrigen Lösung aus β-Glucan, dadurch gekennzeichnet, daß das Verfahren umfaßt: – Frieren der Lösung – Auftauen der Lösung, um ein Präzipitat in Wasser zu ergeben, und – Abtrennen des Präzipitats vom Wasser, wobei der nichtwäßrige Hauptbestandteil des Präzipitats β-Glucan ist.
  8. Verfahren nach Anspruch 7, wobei das Frieren bei einer Temperatur von zwischen –20°C und 0°C durchgeführt wird.
  9. Verfahren nach Anspruch 7 oder Anspruch 8, wobei das Auftauen bei einer Temperatur von 15–20°C durchgeführt wird.
  10. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 9, wobei vor dem Frieren der β-Glucan-enthaltenden wäßrigen Lösung ein arabinoxylan-abbauendes Enzym oder ein stärkeabbauendes Enzym zu der wäßrigen Lösung hinzugefügt wird, so daß unerwünschtes Arabinoxylan oder Stärke abgebaut werden und die aus der Suspension gewonnenen Feststoffe verringerte Mengen an Arabinoxylan- oder Stärkeverunreinigungen aufweisen.
  11. Verfahren nach einem der Ansprüche 7 bis 9, wobei die aus der Suspension gewonnenen Feststoffe wieder in Wasser gelöst werden und mit einem arabinoxylan-abbauenden Enzym oder einem stärkeabbauenden Enzym behandelt werden, gefolgt von den Schritten des Wiederholens des Frierens, Auftauens und Abtrennens, um ein Präzipitat zu ergeben, das verringerte Mengen an Arabinoxylan- oder Stärkeverunreinigungen aufweist.
  12. Verfahren nach einem der Ansprüche 6, 10 oder 11, wobei das stärkeabbauende Enzym Xylanase ist.
  13. Verfahren nach einem der Ansprüche 6, 10 oder 11, wobei das stärkeabbauende Enzym Amylase ist.
  14. β-Glucan, erhältlich durch ein Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche.
  15. β-Glucan, erhältlich durch Extraktion aus Getreide, wobei das β-Glucan ein Gel bildet, wenn es bei einer Temperatur von über 60°C in Wasser gelöst und dann abgekühlt wird.
  16. Zusammensetzung, enthaltend β-Glucan nach Anspruch 14 oder Anspruch 15 zusammen mit einem annehmbaren Träger.
  17. Verwendung von β-Glucan nach Anspruch 14 oder Anspruch 15 als Nahrungsmittelinhaltsstoff oder als Zusatzstoff in kosmetischen Zusammensetzungen.
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