DE3616338C2 - - Google Patents
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Description
Vorliegende Erfindung betrifft Streifenmaterial zur
Verwendung bei der Elektrophorese und ähnlichen Methoden,
wie Immunelektrophorese, Affinitätselektrophorese und isoelektrische
Fokussierung. Solche Streifen werden weiter
unten als Diagnosestreifen bezeichnet, obwohl sie auch in
präparativen Methoden verwendbar sind.
Agarose, ein Polysaccharid aus Agar-Agar, der seinerseits
aus Seetang gewonnen wird, wurde schon als Milieu
zur Durchführung solcher elektrophoretischer Trennungen
verwendet. Wie Agar-Agar bildet Agarose ein steifes Gelee,
wenn in Wasser gelöst und getrocknet. Ausrüstungen zur
Herstellung von Agaroseplatten sind seit einigen Jahren erhältlich;
solche Ausrüstungen enthalten Agarosepulver und
Schalen zur Bildung des Agarosegelees. Auf Glasplatten gegossene
Agarose mit einer Schichtdicke von etwa 0,5 mm ist
ebenfalls erhältlich. Die Präparation von Agarose in Schalen
mittels einer Ausrüstung ist jedoch sowohl zeitraubend
als auch teuer. Ferner sind vergleichsweise dicke, vorher
auf Glasplatten gegossene Agaroseschichten noch kostspieliger.
Die Anwendung von Agarose war deshalb sehr beschränkt.
Es wurden nun aber neue, mit einer dünnen, Agarose enthaltenden
Schicht beschichtete Diagnosestreifen gefunden, die
leicht in großen Mengen herstellbar sind und dann zur
leichteren Handhabung getrocknet werden können, aber beim
Einweichen in Wasser oder einer Pufferlösung wieder aufquellen
können und so ein Milieu zur Verwendung bei Elektrophorese
und ähnlichen Methoden liefern.
Gewisse Patentschriften des Standes der Technik
beschreiben Elektrophoreseelemente, die eine geringe Menge
Agarose in der Beschichtung enthalten. Dazu gehören US-Patent 35 78 604
und die europäischen Patentanmeldungen 1 26 638
und 1 26 639, aber in allen diesen bekannten Vorschlägen
besteht das Hauptmilieu zur Elektrophorese aus
vernetztem Polyacrylamid. Agarose oder ein anderes wasserlösliches
Polymer ist dabei in einer gewissen Menge vorhanden,
um die Eigenschaften des vernetzten Polyacrylamids
in den in diesen Patentschriften beschriebenen Aufbauten
einzustellen. Vernetzte Polyacrylamidschichten werden jedoch
durch Vermischen von geradkettigem Polyacrylamid mit
einem Vernetzungsmittel wie Methylen-bis-acrylamid und Gießen
des Gemischs auf einen Träger in Abwesenheit von Sauerstoff
gebildet. Dabei entsteht dann ein verhältnismäßig
dickes vernetztes Polyacrylamidgel. Wird dieses Gel völlig
getrocknet, so sind dann einige Stunden Quellung erforderlich,
um das Gel wieder aufzuquellen, damit es zur Elektrophorese
verwendbar ist.
Bei der Herstellung vernetzter Polyacrylamidschichten,
die nicht zu spröde zur Handhabung sind
und gut am Träger, auf den sie gegossen sind, anhaften, sind
bei diesem Verfahren große Schwierigkeiten aufgetreten.
Gegenstand vorliegender Erfindung ist ein Diagnosestreifen,
der durch einen Träger mit einer aufgegossenen,
getrockneten, durch Beschichtung des Trägers mit einer wäßrigen
Lösung, die 0,5 bis 2,0 Gew.-% Agarose und 0,5 bis 3 Gew.-%
unvernetztes Polyacrylamid bzw. Polyvinylalkohol
oder ein Gemisch dieser Polymeren enthält, gebildeten
Schicht von 0,1 bis 100 µm Dicke und 10 bis 50 Gew.-% Feststoffgehalt
gekennzeichnet ist.
Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren
zur Herstellung von mit Agarose beschichteten Diagnosestreifen,
welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine
Rolle Bahnmaterial so präpariert, daß eine wäßrige Gelatine-Silberhalogenidemulsion
an einer Seite davon anhaften
kann, das aber keine Gelatine- oder sonstige proteinhaltige
Schicht auf der präparierten Seite trägt, dann nach einer
kontinuierlichen Bahngießmethode auf der präparierten
Seite der Bahn bei einer Temperatur von mindestens 40°C
eine Schicht einer wäßrigen Lösung vergießt, die 0,5 bis 2 Gew.-%
Agarose und 0,5 bis 3,0 Gew.-% unvernetztes Polyacrylamid
bzw. Polyvinylalkohol oder ein Gemisch dieser
Polymeren enthält, die gegossene Agarose- und Polymerschicht
auf eine Trockenschichtdicke von 0,1 bis 100 µm und
10 bis 50 Gew.-% Feststoffgehalt trocknet und die beschichtete
Bahn in Streifen der erforderlichen Größe schneidet.
Vorzugsweise beträgt die Dicke der getrockneten
Schicht 5,0 bis 15 µm.
Der Feststoffprozentgehalt in der getrockneten
Schicht beträgt vorzugsweise 15 bis 30 und besonders bevorzugt
ungefähr 20 Gew.-%.
Bei einem Feststoffprozentgehalt der Gießlösung
über 50% ist die Schicht klebrig und läßt sich ohne Beschädigung
nicht richtig trocknen. Liegt der Feststoffprozentgehalt
unter 10%, so baut sich die getrocknete Schicht
beim Einweichen in Wasser und danach in einem Puffer, was
die bevorzugte Methode zur Wiederherrichtung der Schicht
vor der Verwendung darstellt, nicht richtig wieder auf, und
das Material ist dann für keine der weiter unten angeführten
Methoden brauchbar.
Das erfindungsgemäß verwendete Polyacrylamid besteht
vorzugsweise aus geradkettigem Polyacrylamid mit einem
Molekulargewicht unter 100 000 zusammen mit einem geringen
Anteil eines geradkettigen Polyacrylamids mit einem Molekulargewicht
über 400 000. Besonders bevorzugt besteht
es aus einem geradkettigen Polyacrylamid mit einem Molekulargewicht
von 30 000 bis 100 000 zusammen mit einem geringen
Anteil eines Molekulargewichts von 400 000 bis 600 000.
Als Bahnmaterial kommt eine Bahn aus zur Verzögerung
der Wasseraufnahme durch den Träger geleimtem Papiermaterial
in Betracht, wobei die verwendete Leimung nicht
proteinhaltig, aber genügend hydrophiler Art ist, um eine
Beschichtung der Bahn mit einer wäßrigen Gelatine-Silberhalogenidemulsion
zuzulassen. Das Bahnmaterial kann mit
Polyäthylen kaschiertes Papier sein, dessen eine Seite mit
einer Koronaentladung behandelt wurde, um diese Seite für
eine wäßrige Gelatine-Silberhalogenidemulsionsschicht empfänglich
zu machen.
Vorzugsweise stellt das Bahnmaterial jedoch ein
Filmmaterial der als Filmträger für photographische Filme
verwendeten Art dar, aber ohne Gelatine-Substrierschicht.
Solches Flimmaterial kann aus Cellulosetriacetat oder Celluloseacetobutyrat
bestehen, das vorbehandelt wurde, um es
für eine wäßrige Gelatine-Silberhalogenidemulsionsschicht
empfänglich zu machen.
Besonders bevorzugtes Bahnmaterial besteht aus Polyesterfilmmaterial,
das nach einem Verfahren hergestellt
wurde, bei dem man nichtorientierten Polyester in Bahnform
in einer Richtung auf einem Spannrahmen orientiert,
dann mindestens eine Fläche des Polyesters mit einem Latexcopolymeren
beschichtet und die Orientierung des Polyesters
in der anderen Richtung gleichzeitig mit einer Thermofixierstufe
zu Ende führt. In manchen Fällen wird danach eine
Koronaentladungsbehandlung der polymerbeschichteten Fläche
durchgeführt. Anschließend gießt man die Agarose- und
Polymerlösung auf die Copolymerfläche des biaxial orientierten
Polyesterfilms.
Besonders bevorzugt enthält das verwendete Copolymer
bis zu 10 Gew.-% Itaconsäure.
Zur Verwendung bei diesem Verfahren geeignete Copolymere
sind in den britischen Patentschriften 15 40 067, 15 83 343
und 15 89 926 beschrieben. Die in den dortigen
Methoden angeführte Koronaentladungsbehandlung biaxial orientierten
Polyesters ist erforderlich, um optimale Haftung
nach dem Aufbringen einer Schicht wäßriger Gießlösung
zu erzielen.
Ein weiteres geeignetes Copolymer ist in der britischen
Patentschrift 15 71 583 beschrieben, wobei aber keine
Koronaentladungsbehandlung der Copolymerschicht nötig ist,
um die Oberfläche für eine wäßrige Gießlösungsschicht empfänglich
zu machen.
Besonders bevorzugt ist das Copolymer ein solches
auf Styrolgrundlage.
Beschichtungen mit einer Trockendicke über 100 µm
lassen sich ebenfalls nach diesem Verfahren herstellen, doch
wird bei solchen Beschichtungen Agarose unnötig verschwendet,
da es sich gezeigt hat, daß nur 5 bis 15 µm dicke Beschichtungen
als Diagnosestreifen schon sehr gute Leistungen
erbringen und eine kürzere Wiederaufquellzeit benötigen.
Verschiedene Zusatzstoffe können der Agarose- und
Polymerlösung vor dem Gießen zugegeben werden. Dazu gehören
Netzmittel als Gießhilfen, Befeuchtungsmittel z. B.
Glycerin, welche zur Weichmachung der gegossenen Schicht
beitragen, und Bakterizide z. B. Phenol zur Verbesserung der
Lagerfähigkeit der beschichteten Streifen. Ebenfalls kann
man Zusatzstoffe, z. B. Sorbit und Galaktomannan, verwenden,
die zu einer Verbesserung der Wasserlöslichkeit der
Agarose beitragen.
Die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten
Streifen werden vor der Verwendung mit einer Flüssigkeit
behandelt, um die Agarose- und Polymerschicht zu
quellen. Diese Flüssigkeit ist üblicherweise Wasser oder
ein ausgewählter wäßriger Puffer. Zur Förderung der Quellung
der Agarose- und Polymerschicht kann man der Agarose-
und Polymergießlösung Zusatzstoffe zugeben, z. B. Harnstoff,
gegebenenfalls zusammen mit weiter unten erwähnten Ampholyten.
Agarose ist ein gereinigtes, festes, lineares Galaktanhydrokolloid,
das aus Agar-Agar isoliert oder direkt aus
agarhaltigen Marinenalgen gewonnen wird. Verschiedene Agarosepräparate
unterscheiden sich erheblich in ihren physikalischen
und chemischen Eigenschaften.
In Form einer Ausrüstung angewandte oder in dicken
Schichten auf Platten gegossene Agarose allein ist erfolgreich
für elektrophoretische Trennungen verwendbar, da im
ersten Fall das Agarosepulver mit dem üblicherweise erforderlichen
Puffer vermischt wird und im zweiten Fall der
Puffer in der teilweise ausgetrockneten, dicken Schicht
vorliegt. Werden aber Schichten aus Agarose allein auf
eine Rolle Bahnmaterial gegossen und die Schicht getrocknet,
so nimmt die getrocknete Agarose eine zur Erzielung
elektrophoretischer Trennungen ungenügende Menge Puffer
oder Wasser auf. Die Trocknung der dünnen Agaroseschicht
führt offenbar zu einer Art Zerfall der Struktur der Agarose.
Liegt jedoch in dem erfindungsgemäßen Diagnosestreifen
ein Polymer der weiter oben beschriebenen Art zusätzlich
in der Schicht vor, so wird die erwünschte Struktur
der Agaroseschicht wiederhergestellt, wenn man die getrocknete
Beschichtung in Wasser oder vorzugsweise einer
ausgewählten Pufferlösung rehydratisiert. Diese wiederhergestellte
Schicht ist bei der Elektrophorese oder ähnlichen
Methoden verwendbar. Die Quellungszeit zur Wiederherstellung
der Schicht vor der Verwendung beträgt manchmal nur
0,5 Stunden gegenüber Materialien des Standes der Technik,
bei denen häufig einige Stunden Quellzeit erforderlich
sind.
Der wichtigste Teil der rehydratisierten Beschichtung
ist somit die Agarose mit ihrer Gelfestigkeit, Porosität
und elektroendoosmotischen Eigenschaften. Insbesondere
die Porosität wird durch Trocknen der gegossenen Schicht
beeinträchtigt, außer wenn das oben bezeichnete Polymer
ebenfalls in der gegossenen Schicht vorliegt.
Die physikalischen und chemischen Eigenschaften der
Agarose werden durch die Seetangquelle, einschließlich des
Standortes und der Stufe im Wachstumszyklus, der Gewinnungsmethode
und dem zur Isolierung der Agarose angewandten Verfahren
beeinflußt.
Eigenschaften der Agarose, wie die Geliertemperatur,
Gelfestigkeit, Porosität und Elektroendoosmose lassen sich
durch Vermischen zweier oder mehrerer Chargen einstellen.
Die Gelier- und Schmelztemperaturen stehen in Beziehung mit
dem Methoxylgehalt der Agarose, und Eigenschaften von Agarose
lassen sich durch Einbau von Hydroxyäthylgruppen beeinflussen,
wie z. B. in Miles Seaplaque-Agarose. Agarosegele
sind wegen Mikrokristallinitätsgebieten nicht vollkommen
klar. Kleine Konzentrationen an Harnstoff und
Polyäthylenglykol verringern die Trübung, aber die Gelfestigkeit
wird dabei erniedrigt. Das Agarose- und Polymergerüst
ist zwar vorwiegend neutral, enthält aber einige
anionische Reste, z. B. Sulfat und Pyruvat, mit zugeordneten
hydratisierten Gegenionen. Beim Anlegen eines elektrischen
Stroms wandern die Gegenionen zur Kathode unter Mitnahme
von Hydratwasser und jeglichen neutralen Molekülen in
der Probe, was als Elektroendoosmose bekannt ist. Dies ist
ein Vorteil bei Gegenelektrophorese-Diagnosemethoden, aber
nicht bei der isoelektrischen Fokussierung. Die isoelektrische
Fokussierung bedient sich der Tatsache, daß für
jedes Protein der pH, bei dem es elektrisch neutral ist,
verschieden ist: der isoelektrische Punkt (pI). Proteine
werden nach ihrem pI durch Elektrophorese auf einem Gel
getrennt, in welchem ein stabiles pH-Gefälle durch Einbau
von Ampholyten erzeugt wurde. Die Ampholyte können Gemische
aus Amid- und Carbonsäuregruppen sein, die sich bei
angelegtem elektrischen Feld in Reihenfolge ihres pI anordnen
und auf Grund hoher Pufferkapazität jeweils einen ihrem
pI entsprechenden lokalen pH aufrecherhalten. Die Ampholyte
lassen sich während der Formulierung oder Quellung der
getrockneten Agarose- und Polymerschicht mit nur geringer
Einwirkung auf den erzielten Trennungsgrad einbauen.
Zahlreiche weitere Methoden zur Elektrophorese und
Immunologie, Zellkultur und Klonierung können mit Agarose-
und Polymerschichten verschiedener physikalischer und chemischer
Eigenschaften durchgeführt werden, z. B. Serumproteinelektrophorese,
Nukleinsäureelektrophorese, Trennung
nach Molekulargewicht, zweidimensionale Elektrophorese,
Zellen- und Viruselektrophorese, Ouchterlony-Geldiffusion,
radiale Immundiffusion, Immunelektrophorese, Laurell-Rockets
und Überkreuzimmunelektrophorese, Gegenelektrophorese
sowie Antigen-Antikörperüberlagerungen.
Sollen die beschichteten Agarose- und Polymerstreifen
zur isoelektrischen Fokussierung verwendet werden, so
kann man der Agarose- und Polymerlösung Ampholyten z. B. Gemische
von Verbindungen mit Amid- und Carbonsäuregruppen,
zusetzen. Vorzugsweise werden die Ampholyten jedoch der
Quellflüssigkeit zugesetzt.
Zum Gießen der Agarose- und Polymerlösung auf die
Bahn verwendbare, kontinuierliche Bahnbeschichtungsmaschinen
schließen alle solche ein, die zur Beschichtung von
Papierbahnen mit Leimlösungen verwendet werden, sowie alle
zum Gießen von Gelatinelösungen auf photographische Trägermaterialien
verwendeten Geräte. Dazu gehören Schlitz-und
Troggießgeräte mit oder ohne Luftrakel oder Rakelklinge
als Vorrichtungen zur Regulierung der Schichtdicke. Kaskaden-
und Vorhanggießgeräte sowie Tiefdruck- und Umkehrtiefdruckbeschichtungsmaschinen
sind ebenfalls verwendbar.
Die wäßrige Agarose- und Polymerlösung läßt sich
dadurch herstellen, daß man die erforderliche Menge Agarosepulver
in Wasser gibt und das Gemisch eine Stunde stehen läßt.
Dann erhitzt man rasch unter kräftigem Rühren
auf über 50°C und hält die erhöhte Temperatur 30 Minuten
lang oder bis zur völligen Auflösung des Pulvers. Dies ist
an einer erheblichen Abnahme der Trübung in der Lösung erkennbar.
Dann erniedrigt man die Temperatur unter ständigem
Rühren auf 5°C über der gewünschten Gießtemperatur und
gibt das Polymer danach zu der Agaroselösung. Die Lösung
wird dann bis zum Gießen in einem thermostatisch kontrollierten
Vorratsgefäß aufbewahrt. Die jeweilige Gießtemperatur
über 40°C hängt von der Art der eingesetzten
Agarose und dem Verwendungszweck der Diagnosestreifen ab.
Die getrockneten Agarose- und Polymerschichten sind
durch Einweichen in einem geeigneten Lösungsmittel leicht
quellbar. Der Quellungsgrad hängt von der Art und Menge
der gegossenen Agarose, der Menge und Art des verwendeten
Polymeren, der Quelltemperatur sowie der Art und dem pH der
verwendeten Lösungsmittel ab. Agarose- und Polymerbeschichtungen
für elektrophoretische Methoden werden in einer verdünnten
Form des zur Proteintrennung zu verwendenden Puffers
eingeweicht.
Ein wichtiges Merkmal der nach dem erfindungsgemäßen
Verfahren hergestellten Streifen besteht darin, daß
sich zwischen dem Polyesterträger und der Agarose- und
Polymerschicht keine Gelatine-Substrierschicht befindet.
Da Gelatine auf Protein basiert, verursacht sie erhebliche
Störungen in Proteintrennungsmethoden. Bei der
bevorzugten erfindungsgemäßen Methode liefert das zwischen
den Streckstufen aufgebrachte, getrocknete Latex-Copolymer
auf Styrolgrundlage eine hydrophile Schicht, auf der die
Agarose- und Polymerlösungen aufgebracht werden und anhaften
können. Vorzugsweise wird der Filmträger nach vollständiger
Orientierung und Thermofixierung mit einer Koronaentladung
behandelt. Dies fördert die Haftung der Agarose-
und Polymerlösung am Träger, ist aber nicht immer
notwendig.
Die nachfolgenden Beispiele dienen der Erläuterung
der Erfindung:
Man verwendet einen Polyäthylenterephthalatpolyesterfilmträger,
hergestellt wie in Beispiel 11 der
britischen Patentschrift Nr. 15 40 067 beschrieben, aber
ohne auf die mit einer Koronaentladung behandelte Filmoberfläche
gegossene Silberhalogenidemulsion.
Eine wäßrige Agaroselösung wird wie folgt
hergestellt:
Agarose (Miles Medium EEO)18,75 g
Geradkettiges
Polyacrylamid mit
Durchschnittsmolekulargewicht
44 000 von Allied Colloids
(20% wäßrige Lösung)150 g (30 g) Polyacrylamid vom
Durchschnittsmolekulargewicht
500 000
(12,5%ige wäßrige Lösung)12 g (1,5 g) Netzmittel (Olin 10G
10%ige wäßrige Lösung)7,5 g Wasser1315,5 g Summe1500 g
Polyacrylamid mit
Durchschnittsmolekulargewicht
44 000 von Allied Colloids
(20% wäßrige Lösung)150 g (30 g) Polyacrylamid vom
Durchschnittsmolekulargewicht
500 000
(12,5%ige wäßrige Lösung)12 g (1,5 g) Netzmittel (Olin 10G
10%ige wäßrige Lösung)7,5 g Wasser1315,5 g Summe1500 g
Die Agarose wird 60 Minuten lang unter Rühren in
Gegenwart des Netzmittels in Wasser eingeweicht. Dann erhitzt
man rasch unter kräftigem Rühren bis zum Sieden bei 96°C.
Die Temperatur wird auf 92°C abgesenkt und dort
gehalten, bis ein opakes Aussehen auftritt. Man erniedrigt
die Temperatur der Lösung auf 65°C und gibt unter ständigem
Rühren die Polyacrylamidlösungen dazu.
Die Agarose- und Polyacrylamidlösung wird dann in
ein thermostatisch kontrolliertes Gießgefäß überführt.
Danach wird die Lösung durch einen Schlitz auf den eben
beschriebenen Polyesterfilmträger gegossen. Dabei wird der
Filmträger mit einer Geschwindigkeit von 4,57 m pro Minute
am Gießschlitz vorbeigeführt, und das pro Flächeneinheit
auf den Filmträger gegossene Lösungsvolumen beträgt 2,1 cm³ · dm-2.
Die Temperatur der Gießlösung beim Gießen beträgt 60°C.
Der Guß wird dann zum Abbinden der Agarose und des
Polyacrylamids abgekühlt und durch Aufblasen von Luft getrocknet.
Die Dicke der gegossenen und getrockneten Agaroseschicht
beträgt 10 µm.
Der mit der getrockneten Agarose- und Polyacrylamidschicht
beschichtete Filmträger wird dann in 5×8 cm lange
Streifen zerschnitten, was eine für Diagnosestreifen geeignete
Größe darstellt.
Sowohl nasse als auch trockene Haftprüfungen werden
gemäß dem britischen Patent 15 40 067 durchgeführt, und
die Agaroseschicht haftet bei beiden Prüfungen sehr gut am
Filmträger.
Einer dieser Streifen wird dazu verwendet, in einem
Elektrophoresetest aufzuzeigen, welche Proteine in einer
Probe menschlichen Serums vorhanden sind. Dabei verwendet
man eine Elektrophoresekammer Shandon 600.
Dann taucht man den Streifen 10 Minuten lang in
200 ml destilliertes Wasser und läßt ihn abtropfen.
Der Streifen wird dann 20 Minuten lang in ein wäßriges
Pufferbad (pH 8,6, 0,1 m) (als Barbital-Bad bekannt)
eingelegt, um die Agarose- und Polyacrylamidschicht zu quellen.
Überschüssiger Puffer wird entfernt und der Streifen
so in die Elektrophoresekammer eingelegt, daß beide Enden
des Streifens in ein 0,05 m-Pufferbad eintauchen.
Mit Hilfe eines handelsüblichen Applikators wird
ein kleines Volumen Serum auf ein Ende des Streifens aufgebracht.
Kleine, bekannte Serumproteine enthaltende Proben
werden in einer Reihe entlang des Streifens am selben
Ende placiert.
Ein konstanter Strom von 4 mA, was 4 mA/5 cm Streifenbreite
entspricht, wird 25 Minuten lang angelegt. Der
Agarose- und Polyacrylamidstreifen wird dann aus der Kammer
herausgenommen und zur Anfärbung der Proteine in eine
konzentrierte Lösung von Coomassieblau in 5%iger Essigsäure
eingelegt.
Fremdfärbungen werden dann durch 10 Minuten langes
Eintauchen in Essigsäure/Methanol/Wasser entfernt, wobei
nur die abgetrennten Proteine angefärbt bleiben.
Danach wird der Streifen getrocknet.
Der getrocknete Streifen zeigt die verschiedenen in
der Serumprobe vorhandenen Proteine getrennt entlang der
Streifenlänge. Die Proteine werden durch Vergleich mit den
bekannten, ebenfalls entlang der Streifenlänge getrennten
Proteinen identifiziert.
Diese Prüfung zeigt, daß die erfindungsgemäß hergestellten
Streifen trotz der sehr dünnen Agarose- und Polymergußschicht
bei einer elektrophoretischen Proteintrennungsmethode
verwendbar sind.
In diesem Beispiel dient die geringe Menge höhermolekularen
Polyacrylamids dazu, die Viskosität der Gießlösung
zu erhöhen, damit man ein geeignetes Agarose- und
Polymergießgewicht erzielen kann.
Es wird ein Streifen auf genau die gleiche
Weise wie in Beispiel 1 hergestellt, außer daß man statt
des Zusatzes der Polyacrylamidlösungen zu der Agaroselösung
30 g Polyvinylalkohol (100% Hydrolyse) vom Molekulargewicht 14 000
verwendet. Der Streifen wird in Wasser und dann in
Puffer wie in Beispiel 1 eingeweicht, und ein ähnlicher
elektrophoretischer Test durchgeführt. Wie in Beispiel 1
trennen sich die verschiedenen in der Serumprobe vorhandenen
Proteinen entlang des Streifens. Dies zeigt, daß der
Streifen bei einer elektrophoretischen Proteintrennmethode
verwendbar ist.
Claims (17)
1. Diagnosestreifen, gekennzeichnet durch einen Träger
mit einer aufgegossenen, getrockneten, durch Beschichtung
des Trägers mit einer wäßrigen Lösung, die 0,5 bis 2,0 Gew.-%
Agarose und 0,5 bis 3 Gew.-% unvernetztes Polyacrylamid
bzw. Polyvinylalkohol oder ein Gemisch dieser Polymeren
enthält, gebildeten Schicht von 0,1 bis 100 µm Dicke und
10 bis 50 Gew.-% Feststoffgehalt.
2. Streifen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß die Dicke der trockenen Schicht 5,0 bis 15,0 µm
beträgt.
3. Verfahren zur Herstellung von mit Agarose beschichteten
Diagnosestreifen, dadurch gekennzeichnet, daß man
eine Rolle Bahnmaterial so präpariert, daß eine wäßrige
Gelatine-Silberhalogenidemulsion an einer Seite davon anhaften
kann, das aber keine Gelatine- oder sonstige proteinhaltige
Schicht auf der präparierten Seite trägt, dann
nach einer kontinuierlichen Bahngießmethode auf der präparierten
Seite der Bahn bei einer Temperatur von mindestens
40°C eine Schicht einer wäßrigen Lösung vergießt, die 0,5
bis 2,0 Gew.-% Agarose und 0,5 bis 3,0 Gew.-% unvernetztes
Polyacrylamid bzw. Polyvinylakohol oder ein Gemisch dieser
Polymere enthält, die gegossene Schicht auf eine Trockenschichtdicke
von 0,1 bis 100 µm und 10 bis 50 Gew.-%
Feststoffgehalt trocknet und die beschichtete Bahn in
Streifen der erforderlichen Größe schneidet.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet,
daß die Dicke der getrockneten Schicht 5,0 bis 15,0 µm
beträgt.
5. Verfahren nach Anspruch 3 oder 4, dadurch gekennzeichnet,
daß das eingesetzte Polyacrylamid aus geradkettigem
Polyacrylamid mit einem Molekulargewicht unter 100 000
mit einem geringen Anteil eines geradkettigen Polyacrylamids
mit einem Molekulargewicht über 400 000 zur Erhöhung der
Viskosität der Gießlösung besteht.
6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet,
daß das eingesetzte Polyacrylamid aus einem geradkettigen
Polyacrylamid mit einem Molekulargewicht von 30 000 bis 100 000
zusammen mit einem geringen Anteil eines geradkettigen
Polyacrylamids mit einem Molekulargewicht von 400 000
bis 600 000 besteht.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 6, dadurch
gekennzeichnet, daß als Bahnmaterial eine Bahn aus mit
Polyäthylen kaschiertem Papier vorliegt, deren zu beschichtende
Seite mit einer Koronaentladung behandelt wurde.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 5, dadurch
gekennzeichnet, daß als Bahnmaterial biaxial orientierter
Polyester vorliegt, der nach einem Verfahren hergestellt
wurde, bei dem man eine Bahn aus nichtorientiertem Polyester
in einer Richtung orientiert, einen Copolymerlatex
auf eine Fläche des Polyesters aufbringt, die Orientierung
zu Ende führt und den beschichteten Polyester thermofixiert.
9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet,
daß das Copolymer bis zu 10 Gew.-% Itakonsäure enthält.
10. Verfahren nach Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet,
daß als Colpolymer ein solches auf Styrolgrundlage
vorliegt.
11. Verfahren nach einem der Ansprüche 8 bis 10, dadurch
gekennzeichnet, daß man die Polyesterbahn nach der
biaxialen Orientierung auf der einen, mit dem Copolymeren
beschichteten Seite einer Koronaentladung unterwirft.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 11, dadurch
gekennzeichnet, daß die wäßrige Agarose- und Polymerlösung
mittels eines Schlitz-, Trog-, Kaskaden oder
Vorhanggießgeräts auf die Bahn gegossen wird.
13. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 12, dadurch
gekennzeichnet, daß man der wäßrigen Agarose- und
Polymergießlösug ein Netzmittel zusetzt.
14. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 13, dadurch
gekennzeichnet, daß man der wäßrigen Agarose- und
Polymerlösung ein Quellmittel zusetzt.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 14, dadurch
gekennzeichnet, daß man der wäßrigen Agarose- und
Polymerlösung einen Ampholyten zusetzt.
16. Mit Agarose und Polymer beschichtete Diagnosestreifen,
hergestellt gemäß dem Verfahren nach einem der Ansprüche 3
bis 15.
17. Verwendung von Diagnosestreifen nach einem der Ansprüche 1, 2
oder 16 bei einer Elektrophoresemethode oder
isoelektrischen Fokussiermethode nach Rehydratisierung der
Agarose- und Polymerschicht in einem wäßrigen Bad.
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