DE3012140A1

DE3012140A1 - Mercaptoacylpeptide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als ace-inhibitoren und bei der behandlung von hochdruck

Info

Publication number: DE3012140A1
Application number: DE19803012140
Authority: DE
Inventors: Miguel A Ondetti; Josip Pluscec
Original assignee: ER Squibb and Sons LLC
Current assignee: ER Squibb and Sons LLC
Priority date: 1979-04-02
Filing date: 1980-03-28
Publication date: 1980-10-23
Also published as: SE8002512L; GB2045771B; ES8104200A1; IE49653B1; AT373577B; ES490166A0; ATA179480A; DK140480A; NO800931L; AU537592B2; BE882601A; IT8021110A0; NZ193142A; FR2453135A1; HU181087B; GB2045771A; CH645092A5; NO150360B; NO150360C; IE800638L

Description

Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.

Der Ausdruck Alkylrest bedeutet Reste mit 1 bis 7 Kohlenstoffatomen. Der Ausdruck Alkanoylrest bedeutet Reste mit 2 bis Kohlenstoffatomen. Die Acetylgruppe ist bevorzugt.

Die CX-Amino säure- und (X-Imino saureres te A. und A₂ können entweder natürliche Säuren oder synthetische Säuren sein. Diese Resta können/Beispielsweise ableiten von Prolin, 4-Hydroxyprolin, 4,4-Äthylendioxyprolin, 4-Methoxyprolin, 4-Thiazolidincarbonsäure, Tryptophan, Glycin, Alanin, Leucin, Isoleucin und Valin. Die Reste A. und Ap sind durch eine

Peptidbindung -C-M- zwischen der Oc-Carboxylgruppe des Rett

stes A., und _Q der cX-Amino- oder ex -Iminogruppe des Restes Ap verbunden.

Die Mercaptoacyldipeptide der allgemeinen Formel I, in der R₁ einen Alkanoylrest oder eine Benzoylgruppe bedeutet, können durch Acylierung eines Dipeptids der allgemeinen Formel J₁

A.4 ' Ap V J-J- /

oder dessen Alkylester mit einer Thiosäure der allgemeinen Formel III

^R2

Rj_ S (CH₂) _n CH C OH

hergestellt werden. Der Rest R' bedeutet einen Alkanoylrest oder eine Benzoylgrappe. Die Acylierung wird nach an sich bekannten Methoden durchgeführt, beispielsweise in Gegenwart eines Kupplungsmittels, wie einem Carbodiimide Dicyclohexyl-

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carbodilmid wird am meisten verwendet. Alternativ kann die Thiosäure der. allgemeinen Formel III auch durch Bildung des gemischten Anhydrids, eines symmetrischen Anhydrids, eines Säurechlorids oder eines aktiven Esters oder durch Verwendung von Woodward Reagens K oder N-Äthoxycarbonyl-2-äthoxy-1,2-dihydrochinolin aktiviert werden. Eine eingehende Diskussion der verschiedenen Acyliarungsmethoden Ist z. B. in Methoden der organischen Chemie (Houben-Weyl), Bd. XV, Teil II

(197¹O, S. 1 ff beschrieben.
10

Eine Alternativsynthese zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, In der R₁ einen Alkanoylrest oder eine Benzoylgruppe bedeutet, besteht in der aufeinander folgenden Acylierung, d. h. in der Acylierung der Aminosäure A₁ mit einer Mercaptoalkanoylsäure der allgemeinen Formel III nach dem vorstehend beschriebenen Verfahren unter Bildung einer Mercaptoalkanoylazslnosäure der allgemeinen Formel iv

I²

R- S (CH ) CH C A (XV)

f £+ XX Il J-

und die anschließende Acylierung der Aminosäure A₂ oder Ihres Alkylesters mit der Mercaptoalkanoylaminosäure der allgemeinen Formel IV. Die Acylierung kann nach üblichen Methoden zur Kupplung von Aminosäuren durchgeführt werden; vgl. Bodanszky und Ondetti, Peptide Synthesis, Intersciene Publishers (1966).

Verbindungen der- allgemeinen Formel I, In der R^ ein Wasserstoff atom ist, können durch Ammonolyse oder alkalische Hydrolyse der entsprechenden Verbindungen der allgemeinen Formel I hergestellt werden, in der R. einen Alkanoylrest oder eine Benzoylgruppe darstellt. Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R. eine Gruppe der allgemeinen Formel

darstellt, &30043/0707

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können durch Oxidation der entsprechenden freien Mercaptane der allgemeinen Formel I mit Jod hergestellt werden.

Es stehen noch Alternativ-Verfahren zur Herstellung der vorstehend aufgeführten Verbindungen zur Verfügung. Beispielsweise kann bei Verwendung eines Esters des Dipeptids der allgemeinen Formel II

oder einer Aminosäure Ap die entsprechende freie Säure aus dem Ester durch saure oder alkalische Hydrolyse erhalten werden.

Mercaptoalkanoylsäuren der allgemeinen Formel III und Mercaptoalkanoylaminosäuren der allgemeinen Formel IV sowie Verfahren zu ihrer Herstellung sind beispielsweise in den üS-PSen k 046 889, 4 105 776 und 4 053 65I beschrieben.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I bilden Salze mit verschiedenen anorganischen und organischen Basen. Beispiele für diese Salze sind Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze, wie Natrium- und Kaliumsalze, die bevorzugt sind, Erdalkalimetallsalze, wie Calcium- und Magnesiumsalze, Salze mit organischen Basen, wie Dicyclohexylamln, Benzathin, N-Methyl-D-glucamin und Hydrabamin, sowie Salze mit Aminosäuren, Arginin und Lysin. Bevorzugt sind ungiftige, physiologisch verträgliche Salze, doch sind auch andere Salze brauchbar, beispielsweise zur Isolierung oder Reinigung der Produkte.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der allgemeinen Formel I, ihre Alkylester und Salze hemmen die Umwandlung des Angiotensin-Converting-Enzyms (ACE) und damit die Umwandlung des Decapeptids Angiotensin I in Angiotensin II. Sie können daher bei der Behandlung von Hochdruck eingesetzt werden.

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Eines der blutdruckregelnden (blutdrucksteigernden) Systeme im menschlichen Organismus ist das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System. Das Enzym Renin wird in den myoepithelialen Zellen des juxtaglomerulären Apparates der Niere produziert und von dort freigesetzt. Der Mechanismus, der die Sekretion von Renin reguliert, scheint primär vom Salz- und Wassergehalt des Blutes und vom Druck, mit dem Blut durch die Niere gepumpt wird, kontrol- . liert zu werden. Vermindern sich diese Parameter, so wird Renin direkt in das Blut abgegeben. Dort trifft es auf das dL.₂~Globulin Angiotensinogen - einen inaktiven Eiweißkörper - als sein Substrat. Das Renin spaltet Angiotensinogen in zwei ebenfalls inaktive Bestandteile, ein Tetrapeptid und das Decapeptid Angiotensin I (AI). Beim Zirkulieren durch die Kapillaren (vor allem der Lunge) trifft A I das Angiotensin Converting Enzym (ACE), das in den Endothelzellen der Kapillaren lokalisiert ist. ACE spaltet das A I in ein Dipeptid und das Octapeptid Angiotensin II (A II), die stärkste bekannte blutdruckerhöhende Substanz im menschlichen Organismus. Die blutdrucksteigernde Wirkung von A II erfolgt sowohl lokal in der

ι Gefäßmuskulatur als auch zentral, indem die area postrema im Gehirn nach Stimulierung durch A II blutdrucksteigernde Impulse an den Organismus weiterleitet. A II hat darüberhinaus noch eine zweite Wirkung. Es ist der physiologische Stimulus für die Sekretion des Mineralkortikoids Aldosteron aus der Neben-

Inierenrinde. Aldosteron steigert die Rückresorption von Natriumionen aus den Nierentubuli, wodurch das effektive Blutvolumen erhöht und damit der Blutdruck über einen zweiten Mechanismus gesteigert wird.

Neben der Umwandlung von A I in A II hat das ACE noch eine weitere Wirkung. Ss spaltet das im Blut vorhandene vasodilatierend wirkende Octapeptid Bradykinin in inaktive Bestandteile. In dieser Funktion wird ACE auch als Kininase II bezeichnet.

Beim Hypertoniker ist das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System gestört und trägt entscheidend zum Hochdruck des Kranken bei. Es gab bisher keinen Arzneistoff, der am ACE angreift, um damit folgende Wirkungen zu erzielen, nämlich

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1. Hemmung der Bildung von A II und dadurch

a) direkte Hemmung der Vasokonstriktion und

b) Hemmung der Ausschüttung von Aldosteron aus der Nebennierenrinde (Hemmung der übermäßigen Wasser- und Salzresorption) sowie

2. durch Hemmung des ACE eine Hemmung der Spaltung von Bradykinin, wodurch dessen gefäßerweiternder (blutdrucksenkender) Effekt erhalten bleibt.

Die Verbindungen der allgemeinen Fomel I sind starke Inhibitoren des ACE. Sie hemmen die Umwandlung des Decapepfcids Angiotensin I in Angiotensin II und vermindern oder beseitigen deshalb die durch Angiotensin II verursachte Hypertonie. Die erfindungsgemäßen Verbindungen greifen in die Umsetzungsfolge Angiotensinögen (Renin)—> Angiotensin I—> Angiotensin II ein, indem sie das ACE blockieren und dadurch die Entstehung der blutdruckerhöhenden Verbindung Angiotensin II vermindern oder ausschalten.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel I werden vorzugsweise oral gegeben, doch können sie auch parenteral, z, B, subcutan, intramuskulär, intravenös oder intraperitoneal in Form üblicher Arzneipräparate verabfolgt werden.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

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- " " 3012U0

· Beispiel 1

l-ZJMAcetylthioaeetyD-glycyU-L-prolin

1,72 g Glycyl-L-prolin werden unter Rühren in einem Eisbad in 10 ml IN Natronlauge gelöst. Diese Lösung wird mit 5 ml 2N Natronlauge und sodann mit 1,13 g Chloracetylchlorid versetzt. Hierauf wird das Eisbad entfernt. Nach 3stündigem Stehen bei Raumtemperatur werden 836 mg Mercaptoessigsäure sowie 96Ο mg Kaliumcarbonat in 10 ml Wasser zugegeben, und das Gemisch wird etwa l6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Hierauf wird das Reaktionsgemisch mit einem sulfonierten Polystyrol-Kationenaustauscherharz angesäuert, mit Wasser eluiert und das Eluat unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Essigsäure aufgenommen, und unlösliche Stoffe (F. oberhalb 32O⁰C) werden abfiltriert. Das Piltrat wird unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft und der Rückstand wird 2i^ einem 7 '· 3 Gemisch aus Chloroform und Essigsäure versetzt. Das Gemisch wird zentrifugiert und der überstand auf eine mit 60 g Kieselgel gefüllte Säule gegeben und mit einen 7 : 3 Gemisch aus Chloroform und Essigsäure eluiert. Das Eluat wird eingedampft. Es werden 1,0 g der Titelverbindung erhalten.

Beispiel 2 l-ZN-(Mercaptoacetyl)-glycyl7-L-prolin

1,0 g l-ZN-(Acetylthioacetyl)-glycy2j~L-prolin wird 30 Minuten unter Argon mit einer Lösung von 6 ml Wasser und 6 ml konzentrierter Natronlauge behandelt. Danach wird die erhaltene Lösung unter vermindertem Druck eingedampft, der Rückstand mit einem sulfonierten Polystyrol-Kationenaustauscherharz angesäuert, auf eine mit dem gleichen Kationenaustauscherharz gefüllte Säule gegeben und mit Wasser eluiert. Das Eluat wird eingedampft. Es werden 800 mg Substanz erhalten. 8OO mg sowie 200 mg aus einem vorherigen Ansatz werden an einer mit 30 g Kieselgel gefüllten Säule mit einem 7 : 3 Gemisch aus Chloro-

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r . -ι

! form und Essigsäure chromatographiert. 740 mg des dabei erhaltenen Produkts werden auf eine mit 85 ml eines Diäthylaminoäthyldextran-Anionenaustauseherharz gefüllte Säule gegeben und mit einem linearen Gradienten von 0,005 bis 0,5M Ammoniumbicarbonatlösung (jeweils 750 ml) eluiert. Das Produkt im Eluat wird mit einem sulfonierten Polystyrol-Kationenaustauscherharz in die freie Säure überführt und hierauf unter Argon als Schutzgas mit 7 ml Essigsäure und 350 mg Zinkstaub 6 Stunden gerührt. Danach wird die; Suspension zentrifugiert und der überstand unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser aufgenommen und gefriergetrocknet. Das erhaltene Produkt wird mit einem sulfonierten Polystyrol-Kationenaustauseherharz angesäuert, auf eine mit dem gleichen Kationenaustauscherharz gefüllte Säule gegeben und mit Wasser eluiert. Das Eluat xtfird eingedampft. Es werden 365 ing der Titel verbindung erhalten.

CHNS

C₉H₁₄N₂O₄S(O^)H₂Os ber.: 42,95 5,68 11,13 12,72

gef.: 42,92 5,78 10,94 12,68

Sh ber.: -1,00; gef.: -0,98

Beispiel 3

(S)-1-^5-(Acetylthio)-2-niethyl-l-oxopropylJ-L-prolyl-L-prolin-tert.-butylester

Eine Lösung von 7,8 g l-ZS-3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolin in 75 ml Dichlormethan wird mit 5»13 g des tert.-Butylesters von L-Prolin versetzt. Die erhaltene Lösung wird auf 5⁰C abgekühlt und tropfenweise mit einer Lösung von Dicyclohexylcarbodiimid in 50 ml Dichlormethan versetzt. Die Umsetzung wird etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt. Danach wird die entstandene Fällung abfiltriert und das Filtrat nacheinander mit Wasser, 5prozentiger Natriumbicarbonatlösung, Wasser, lOprozentiger Kaliumbisulfatlösung und Wasser gewaschen» Hierauf wird die Lösung über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird das Lö-

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γ -ι

sungsmittel abdestilliert» Es werden 12 g Rohprodukt erhalten» Nach ümkristallisation aus einem Gemisch von Äthylacetat und Pentan wird die Titelverbindung vom P» 104 bis

1O6°C erhalten.
5

Beispiel 4 l-(S-3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-L-prolin

12 g des tert.-Butylesters von l-£S-3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropy3j-L-prolin werden in 60 ml destillierter Trifluoressigsäure gelöst. Die Lösung wird 1 Stunde bei Rauntemperatur stehengelassen» Sodann wird die Trifluoressigsäure unter "vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand 24 Stunden im Hochvakuum getrocknet» Danach wird das erhaltene öl in 30 ml Methanol gelöst und mit 20 ml konzentrierter wäßriger Ammoniaklösung versetzt» Das Gemisch wird 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der ölige Rückstand getrocknet und mit 6 ml Dicyclo-

hexylamin versetzt. Hierauf wird das Reaktionsgemisch mit Diäthylather versetzt. Es scheidet sich ein öl aus, das in Äthylacetat aufgenommen wird. Die Äthylacetatlösung wird mit lOprozentiger wäßriger Kaliumbisulfatlösung gewaschen und danach über Natriumsulfat getrocknet. Hierauf wird das

Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in Methanol aufgenommen und die Lösung an Kieselgel adsorbiert. Das Lösungsmittel wird abdestxlliert und das an Kieselgel adsorbierte Produkt auf eine Säule gegeben, in die Xieselgel mit Chloroform eingeschlämmt worden ist. Die Säule wird mit

Chloroform eluiert, und die produkthaltigen Fraktionen werden vereint. Das Lösungsmittel wird abdestilliert und der Rückstand aus Wasser gefriergetrocknet. Es werden 1,05 g der Titelverbindung als hygroskopischer Peststoff erhalten.

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Γ

" ¹⁴ " 3012U0

CHNS C₁₄H₂₂N₂O₄S.1/2H₂O; ber.: 51,99 7,17 8,66 9,92

gef.: 52,12 7,44 8,18 9,37

Neutralisationsäquivalent ber.: 323; gef.: 34l

Beispiel 5 N-CAcetylthioacetyD-L-valyl-L-prolin

Eine Lösung von 3,1 g tert.-Butyloxyearbonyl-L-valyl-L-prolin in 20 ml Trifluoressigsäure wird 15 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der ölige Rückstand mehrere Stunden unter vermindertem Druck getrocknet. Hierauf wird das öl in 25 ml Dimethylformamid gelöst. Die erhaltene Lösung wird mit 2,2 g des N-Hydroxysuceinimidesters der Acetylmercaptoessigsäure versetzt. Die Umsetzung wird 17 Stunden bei einem pH-Wert von 7,5 (eingestellt mit Triäthylamin) bei Raumtemperatur durchgeführt. Danach wird das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in Äthylacetat aufgenommen und die erhaltene Lösung nacheinander mit Wasser, lOprozentiger wäßriger Kaliumb!sulfatlösung, Wasser, gesättigter wäßriger Natriirabicarbonatlösung und Wasser gewaschen und schließlich über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Eindampfen werden 4,3 g der Tite!verbindung als öl erhalten.

Beispiel 6 N-CMercaptoacctyD-L-valyl-L-prolin

Eine Lösung von 4,8 g N-(Acetylthioacetyi)-L-valyl-L-prolin in 12 ml Methanol und 7,5 ml konzentrierter wäßriger Ammoniaklösung wird 1 Stunde bei Raumtemperatur stehengelassen. Sodann wird der pH-Wert auf 7 eingestellt und das Methanol unter vermindertem Druck abdestilliert. Die zurückbleibende

wäßrige Phase wird mit 2N Salzsäure auf einen pH-Wert von 2

angesäuert und die Lösung mit Natriumchlorid gesättigt. L 030043/0707 _j

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γ -ι

Hierauf wird das Produkt mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Es werden 2 g Rohprodukt vom P. 158 bis l62°C erhalten. Nach nochmaliger Umkristallisation aus Äthylacetat unter Zusatz einer geringen Menge Methanol wird die Titelverbindung vom P. 162 bis 165°C erhalten. Nach 2stündigem Trocknen bei 55°C schmilzt eine Probe bei 190 bis 192°C.

Beispiel 7

l-/S-3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolylglycinäthylester

Beispiel 3 wird wiederholt, jedoch werden 10,4 g l-ZS-3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolin, 100 ml Dichlormethan, 5₃5 g Glycinäthylester (hergestellt aus 5,58 g Glycinäthylestsr-.-:ydrochlorid und 5,6 ml Triäthylamin in 50 ml Dichlornietxian) sowie 8,24 g Dicyclohexylcarbodiimid

verwendet. Es werden 11,2 g der Titelverbindung als vis-20

koses öl erhalten.

Beispiel 8 (S)-I-(3-Marcapto-2-methyl-1-oxopropyl)-L-prolylglycin-Li-

thiumsalz
25

Eine Lösung von 11,2 g l-Z3-3~(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyU-L-prolylglycin-äthylester in 200 ml Methanol wird mit einer Lösung von 9 g Kaliumhydroxid in 40 ml Wasser versetzt. Die Hydrolyse wird 2 Stunden bei Raumtemperatur 30

durchgeführt. Danach wird das organische Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der wäßrige Rückstand auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Das Produkt wird mit Xthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand (3,5 g) wird in Wasser aufgenommen und der pH-Wert auf 2,0 eingestellt.

L 030043/0707 _j

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" ¹⁶ " 3012Η0 Nach Zusatz von Natriumchlorid wird die freie Säure mit Äthylacetat ausgeschüttelt. Der Äthylacetatextrakt wird eingedampft und aus Wasser gefriergetrocknet. Es werden 2,16 g der freien Base der Titelverbindung erhalten. Das gesamte Produkt wird in Wasser aufgenommen und die Lösung wird mit 0,05N Lithiumhydrox.ldlö sung auf 7,0 eingestellt. Danach wird die Lösung gefriergetrocknet» Es werden 1050 mg der Titelverbindung als hygroskopischer Feststoff erhalten.

C H S Li ^C11^H17^N2°4^S-^Li/ ^ber'^: ^⁷'^{14 6}»^{12 1}^^{44 2}»⁴⁸

gef.: 46,56 6,42 11,37 2,43

Beispiel 9 (S)-l-(3-Msreapto-2-methyl-l-oxopropyl)~2-L-prolyl-L-alanin

Die Beispiele 3 und 4 werden wiederholt, jedoch werden 7,8g l-£3-3-(Acetylthio)^-methyl-l-oxopropyU-L-prolin, 75 ml Dimethylformamid, 6,2 g Dicyclohexylcarbodiimid, 4,2 g L-Alanin-methylester-hydrochlorid und 4,2 ml Triäthylamin (pH-Wert 7,5 bis 8,0) verwendet. Es werden 8 g Produkt erhalten. Dieses Produkt wird auf eine mit Kieselgel gefüllte Säule gegeben, die mit äthylacetat eluiert wird. Es werden zwei Fraktionen erhalten mit einem R_f-Wert von 0,76 und 0,4. 2 g der weniger mobilen Fraktion vom R~-Wert 0,4 werden in einer Lösung von 1,5 g Kaliumhydroxid in 7 ml Wasser und 35 ml Methanol gelöst. Die erhaltene Lösung wird 2 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das organische Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der wäßrige Rückstand auf einen pH-Wert von 2,0 angesäuert. Nach Zusatz von Natriumchlorid wird die Lösung 5mal mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird getrock-• net und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der erhaltene feste Rückstand wird aus heißem

Äthylacetat umkristallisiert. Es werden 1 g der Titelverbindung vom F. 128 bis 130°C erhalten.

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Γ

Beispie 110 Acetylthioacetyl-valyl-tryptophan-methylester

Eine Lösung von 15 g Methylester von tert.-Butyloxycarbonylvalyl-tryptophan in 150 ml Trifluoressigsäure und 15 ml Anisol wird 1 Stunde unter Stickstoff als Schutzgas gerührt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Es hinterbleibt ein öliger Rückstand.

Eine Lösung von 4,83 g Acetylthioessigsäure und 6,18 g Hydroxy benzo triazol-monohydrat in 120 ml Tetrahydrofuran wird auf O⁰C abgekühlt und mit einer Lösung von 8,16 g Dicyclohexylcarbodiimid in 60 ml Tetrahydrofuran versetzt. Das•Gemisch wird 30 Minuten bei O⁰C und eine weitere Stunde bei Raumtemperatür gerührt. Danach wird die ausgefällte Harnst off verbindung abfiltriert und das Piltrat unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleibt ein weißer Peststoff. Der erhaltene aktive Ester wird in 90 ml Dimethylformamid gelöst und mit einer Lösung des vorstehend erhaltenen Dipeptidmethylestar-trifluoracetats in 60 ml Dimethylformamid sowie mit einer ausreichenden Menge N-Methylmorpholin versetzt, um den pH-Wert auf 7,5 einzustellen. Das erhaltene Gemisch wird 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reakticnsgemisch unter vermindertem Druck einge-

dampft. Der ölige Rückstand wird zwischen Äthylacetat und Wasser ausgeschüttelt. Die Äthylacetatphase wird mit 2N Citronensäure, Wasser, gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird die Lösung eingedampft. Der erhaltene feste

Rückstand wird aus einem Gemisch von Äthylacetat und Pentan umkristallisiert. Es werden 10 g der Titelverbindung vom P. 110 bis 112°C erhalten.

Beispiel 11 3ö .

N-CMercaptoacetyD-L-valyl-L-tryptophan-Lithiumsalz

BAD
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Γ Π

Eine Lösung von 5,0 g Acetylthioacetyl-valyl-tryptophanmethylester in 52 ml Methanol wird mit einer Lösung von 2,1 g Kaliumhydroxid in 10,5 ml Wasser versetzt» Das Gemisch wird 90 Minuten unter Stickstoff als Schutzgas bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Methanol unter vermindertem Druck abdestilliert. Der wäßrige Rückstand wird mit Wasser verdünnt, mit Äthylacetat extrahiert und mit 6N Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,0 angesäuert. Der erhaltene Peststoff wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Es werden 3,4 g Produkt erhalten, Dieses Produkt wird an einer mit Sephadex LH-20 gefüllten Säule und mit einem 7 : Gemisch aus Methanol und Wasser chromatographiert. Es werden 1,5 g eines Öls erhalten. Das öl wird in einem 1 : 1 Gemisch aus Äthanol und Wasser gelöst und mit O,1N Lithiumhydroxidlösung auf einen pH-Wert von 7»0 eingestellt. Eine geringe Menge unlöslicher Substanzen wird abfiltriert. Das Piltrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der ölige Rückstand wird in Wasser gelöst und gefriergetrocknet. Es werden 1.5 κ eines hygroskopischen Feststoffes erhalten, 20

C H S Li

C₁₈H₂₂N₃O^Li; ber.: 51,54 6,25 7,65 1,65-

gef.i 51,94 6,03 7,28 1,62

Neutralisationsäquivalent ber.: 419; gef.: 413

Beispiel 12 (S)-l-Z3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolyl-D-

alanin-methy!ester
30

Eine Lösung von 7,8 g l-ZS-3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolin in 150 ml Acetonitril wird bei O⁰C mit 4,9 g Carbonyldiimidazol versetzt; Hierauf wird das Gemisch bei dieser Temperatur 1 Stunde gerührt. Danach wird die nahezu klare Lösung mit 4,2 g D-Alanin-methylester-hydrochlorid versetzt. Der pH-Wert wird mit 4,2 ml Triäthylamin

L 030043/0707 _j

auf 7,5 bis 8,0 eingestellt und das Gemisch 17 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach werden die entstandene Fällung und das Lösungsmittel abgetrennt, und der erhaltene ölige Rückstand .wird iii Äthylacet'at aufgenommen. Die Lösung wird nacheinander mit Wasser, O,IN Salzsäure, Wasser, gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen und getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel abdestilliert. Der ölige Rückstand zeigt auf dem Dünnschichtchromatogramm an Kieselgel mit einem 9 : 1 Gemisch aus Äthylacetat und Chloroform als Laufmittel einen Fleck bei einem R_f-Wert von 0,5 sowie die Spur eines Fleckes bei einem R^-Wert von 0,75 (in Äthylacetat). Die Ausbeute an der Titelverbindung beträgt 4 g.

· Beispiel 1.3 (S)-l-(3~Merca?t;o-2-niethyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-D~alanin

Eine Lösung vcn 4 g (S)-£3-(Acetylthio)-2-methyl-l~oxopropyl7-L-prolyl-D-alanin~methylester in einer Lösung von 3 g Kaliumhydroxid in 14 ml Wasser und 70 ml Methanol wird 2 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das Produkt gemäß Beispiel 9 isoliert. Ausbeute 2,1 g der Titelverbindung vom F. 152 bis 155°C.

C₁₂H₂₀N₂O₁₁S; ber.:

gef.:

Neutralisationsäquivalent ber.: 288; gef.: 284

Beispiel 14

l-^N-CMercaptoacetyD-L-alanylZ-L-prolin

Eine Lösung von 1,3 g Acetylthioessigsäure und 1,44 g Hy-

droxybenzotriazol in 39 ml Tetrahydrofuran wird mit 2 g Di-35

cyclohexylcarbodiimid versetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten bei 0⁰C sowie eine weitere Stunde bei Raumtemperatur gerührt,

	C	6	H	S
49	,98	7	,99	11,12
50	,02	,24	10,90

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- ²⁰ - 3012^40

Danach wird die entstandene Fällung ab filtriert und das FiI-trat mit L-Alanyl-L-prolin-trifluoracetat (hergestellt aus 2,8 g tert.-Butyloxycarbonyl-L-alanyl-L-prolin und Trifluoressigsäure) versetzt« Der pH-Wert wird mit N-Methylmorpholin auf 7,5 bis 8,0 eingestellt und die Umsetzung 16 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt. Danach werden die Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert, und der Rückstand wird in einem Gemisch aus 18 ml Methanol und 18 ml konzentrierter wäßriger Ammoniaklösung gelöst. Nach 30 Minuten wird das Gemisch unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in Wasser gelöst und auf eine mit einem sulfonierten Polystyrol-Kationenaustauscherharz gefüllte Säule gegeben und mit Wasser eluiert. Das Eluat wird eingedampft. Sodann wird das Produkt durch Chromatographie an Kieselgel mit einem 7 : 3 Gemisch aus Essigsäure und Chloroform als Laufmittel weiter gereinigt. Das Eluat wird ebenfalls eingedampft und der Rückstand aus Äthylacetat umkristallisiert. Es werden 850 mg der Titel verbindung vom F. 152 bis 155°C erhalten.

/Ö<7_D = -128° (C=I₉5; 50 #iges wäßriges Methanol)* 20

Beispiel 15 l-ZN-(Mercaptoacetyl)-L-alanyl7-L-thiazolidin-4-carbonsäure

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch wird das L-Alanyl-L-thiazolidin-iJ-carbonsäure-trifluoracetat verwendet. Es wird die Titelverbindung erhalten.

Beispiel 16 l-Z3J-(Merca?toacetyl) -L-alanyl^-^-methoxy-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch wird das L-Alanyl-4-methoxy-L-prolin-trifluoracetat verwendet. Es wird die Titel verbindung erhalten.

030043/0707

Beispiel 17 l-Zft-CMercaptoacetyl-L-alanyU-^-hydroxy-L-prolin

Beispiel l4 wird wiederholt, jedoch wird das L-Alanyl-4-hydroxy-L-prolin-trifluoracetat verwendet. Es wird die Titelverbindung erhalten.

Beispiel 18

l-ZN-CMercaptoacetyD-L-alanyXZ-^j^-äthylendioxy-L-prolin 10

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch wird L-Al any 1-4,4 *-äthylendioxy-L-prolin verwendet. Es wird die Titelverbindung erhalten. "

... .

"Beispiel 19

l-£N-(2-Mercaptopropanoyl)-L-alanyl7-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch wird 2-Acetylthiopropionsäure verwendet. Es wird die Titelverbindung als wachsartiger Feststoff vom P. (47°C) 54 bis 65⁰C (Zers J erhalten.

CHS

C₁₁H₁₈N₂O₄S₄l/2H₂0; ber.: 46,63 6,76 9,89

gef.: 46,50 6,58 9,78

Sh-Titration: 100 %

Beispiel 20 !-£?!-( 3-Mercapto-l-oxopropyl-L-alany 17-L-prolin

Beispiel l4. wird wiederholt, jedoch wird 3-Acetylthiopropionsäure verwendet. Es wird die Titelverbindung als hygroskopischer Peststoff vom P. (6l°C) 75 bis 84⁰C erhalten. 35

030043/0707

-22- _{c H}3012_sH0

^Cll^Hl8^N2^OV^O'^75H2^Oi

gef.: 45,75 6,62 10,98

Sh-Titration: 99,6 %
5

Beispiel 21

l-ZJi-C2-Mercaptopi^>opanoyl)-L-alanyl7-ⁱl-hydroxy-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Aeetylthiopropionsäure und L-Alanyl-4-hydroxy-L-prolin-trifluoracei verwendet. Es wird die Titelverbindung erhalten.

B e i s p.i el 2 2 l-/JI-(2-Mercaptopropanoyl)-L-alanyl7-L-thiazolidin-4-c-arb ons äure

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthiopropionsäure und L~Alanyl-L-thiazoli(üii~4-carbonsäure-trifluoracetat ver\i endet. Es wird die Ti te !verbindung erhal-

ten.

Beispiel 23 1 -ZN- (2-Mer capt opr opanoyl) -L-alany]J-4 -rmethoxy-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthiopropionsäure und L-Alanyl-4-methoxy-L-prolin-trifluoracetat verwendet. Bs wird die Titelverbindung erhalten.

3eispiel 24 30

!-/^-(P-Mereaptopropanoy^-L-alanylJ-^^-athylendioxy-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthiopropionsäure und L-Alanyl-4,4-äthylendioxy-L-prolin verwendet. Es wird die Titelverbindung erhalten.

030043/0707

Belspiel25 l-Zft-C 2-Mercapto-3-phenylpropanoyl) -L-alanyl7-4 -hydro xy-L~ prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthio-3-pheny!propionsäure und L-Alanyl-4-hydroxy-L-prolin~trifluoracetat verwendet. Es wird die Titelverbindung erhalten.

Beispiel 2 β l-ZH-(2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)-L-alanylJ-L-thiazolidin-4-carbonsäure

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthio-3~ phenylpropionsäure und L-Alanyl-L-thiazolidin-4-carbonsäuretrifluoracetat verwendet. Es wird die Tite!verbindung erhalten.

Beispiel 27

1 -ZiJ-C 2-Mercapto-3-phenylpropanoyl)~L-alanyl7-ⁱ'-niethoxy-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthio-3-phenylpropionsäure und L-Alanyl-4-methoxy-L-prolin-tri-

fluoracetat verwendet. Es wird die Tite!verbindung erhalten. 25

Beispiel 28 !-$!-( 2-Mer capto-3-propanoyl)-L-alany:iJ-4,4-ä thy lendioxy-L-prolin

Beispiel 14 wird wiederholt, jedoch werden 2-Acetylthio-3-pheny!propionsäure und L-Alanyl-4,4-äthylendioxy-L-prolin verwendet. Es wird die Tltelverbindung erhalten.

Beispiel 29 l-ZN-(Mercaptoacetyl)-L-prolin7-L-prolin

0300A3/0707 j

Γ

- ²²ⁱ - 3012U0

Methode A:

3 g Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-prolin werden In einem Gemisch aus 50 ml wasserfreiem Äthanol und 7,5 ml IN Salzsäure In Gegenwart eines lOprozentigen Palladium-auf-Aktivkohle-Katalysators hydriert. Nach 5 Stunden wird der Katalysator ab filtriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in einem Gemisch aus 15 ml Dimethylformamid und 1,05 ml Triäthylamln gelöst. Die Lösung wird mit 1,7 g des Acetylthioessigsäureesters von N-Hydroxysuccinimid versetzt. Nach etwa löstündigem Stehen bei Raumtemperatur werden die Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert, und der Rückstand wird an einer Kieselgelsäule mit einem 7 : 1 Gemisch aus Benzol und Hexan chromatographiert. Das Eluat wird eingedampft. Der Rückstand wird in 5 ml Trifluoressigsäure sowie 2 ml Anisol gelöst und 1 Stunde'bei Raumtemperatur stehengelassen. Danach wird das Reaktionsgemisch zur Trockene eingedampft und der Rückstand in 7,7 ml IN Natronlauge unter Argon als Schutzgas und unter Rühren gelöst. Nach 15 Minuten wird das Gemisch mit einem sulfonierten Polystyrol-Kationenaustauscherharz neutralisiert, auf eine Säule des gleichen Kationenaustauscherharzes gegeben und mit Wasser eluiert. Das Eluat wird eingedampft und der Rückstand aus Äthylacetat umkristallisiert. Es wird dia Titelverbindung vom P. 182 bis l83°C erhalten.

Methode B:

Eine in einem Eisbad abgekühlte Lösung von 1,7 g L-Prolintert.-butylester und 1,5 g Hydroxybenzotriazol in 15 ml Di-

chlormethan wird mit 2,06 g Dicyclohexylcarbodlimid sowie 2,3 g l-(AcetylthIoacetyl)-L-prolin versetzt. Nach etwa l6stündigem Rühren bei 5°C wird die entstandene Fällung abfiltriert und das Filtrat neutral gewaschen. Die organische Lösung wird zur Trockene eingedampft und der Rückstand an

Kieselgel chromatographiert. Das Eluat wird eingedampft und der Rückstand aus einem Gemisch von Diäthyläther und Hexan

L 030043/0707 _j

-25- 3012HQ

umkristallisiert. Es wird ein Produkt mit einem P, von 95 bis 98°C erhalten. Dieses Material wird durch aufeinanderfolgende Behandlung mit Trifluorassigsäure und Natronlauge gemäß Methode A von der Schutzgruppe befreit.

Beispiel 3 0 Acetylthioacetyl-L-alanyl-L-tryptophan-methylester

Eine Lösung von 2,5 g L-Alanyl-L-tryptophan-methylesteracetat in 20 ml Dimethylformamid wird mit 2,0 g Acetylthioessigsäureester von N-Hydroxysuccinimid versetzt. Der pH-Wert der Lösung wird mit N-Methylmorpholin auf 7,5 eingestellt, und das Gemisch wird etwa 16 Stt.iden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestiliiert und der ölige Rückstand in Äthylacetat aufgenonnen, mit V/asser gewaschen, getrocknet und unter verminderte-: Druck eingedampft. Es hinterbleiben 3 g eines schaumigen Rückstandes. Dieser Rückstand wird in Äthylacetat aufgenommen und auf eine mit 60 g basischem Aluminiumoxid (Aktivität I; Woelm) gefüllte Säule mit den Abmessungen 1,5 x ^5 cm gegeben. Es wird mit Äthylacetat eluiert. Das Eluat wird eingedampft. Es werden 1,6 g eines schaumigen Peststoffes erhalten, der bei der Dünnschichtchromatographie an Kieselgel mit einem 3 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol einen einzigen Fleck bei einem R_f-Wert von 0,69 ergibt.

Beispiel 31

N-ZN-CMercaptoacetyD-L-alanynJ-L-tryptophan-Lithiumsalz 30

Eine Lösung von 1,2 g der in Beispiel 30 erhaltenen Verbindung in 36 ml Methanol wird unter Stickstoff als Schutzgas 30 Minuten bei Raumtemperatur mit 6 ml IN Natronlauge gerührt. Hierauf/das Reaktionsgemisch auf einen pH-Wert von

eingestellt und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird zwischen einem 1 : 1 Gemisch

L 030043/070? _

3012U0

aus Äthylacetat und gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung ausgeschüttelt. Die wäßrige Phase wird mit Äthylacetat gewaschen, mit Kochsalzlösung gesättigt, auf einen pH-Wert von 2,0 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Es wird ein schaumiger Rückstand erhalten» Dieser Rückstand wird in einer 50prozentigen wäßrigen Äthanollösung gelöst,und die Lösung wird mit IN Lithiumhydroxidlösung auf einen pH-Wert von 7 eingestellt. Danach wird die Lösung zur Trockene eingedampft und der erhaltene Rückstand in Wasser aufgenommen und gefriergetrocknet. Es werden 390 mg eines weißlichen Peststoffes erhalten.

.Li.2H₂O;

	49	C	5	H	.10	N	8	S
ber.:	98	,11	5	,67	10	,73	7	,18
gef.:	,78	,07	,41·	,85

Beispiel 32

(S)-l-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-B-alanin 20

A) Eine Lösung von 5,2 g l-ZS-3-(Acetylthio)-2-methyl-loxopropyl_7-L-prolin und 3,24 g Carbonyldiimidazol wird bei 0°C mit 3,06 g 3-Alanin-äthylester-hydrochlorid und 2,82 ml Triäthylamin versetzt» Das erhaltene Gemisch wird etwa 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch eingedampft und der Rückstand mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird nacheinander mit Wasser, IN Salzsäure, Wasser, gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlosung und Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird die Lösung eingedampft. Es hinterbleiben 3,4 g (S)-i-(3-Acetylthio-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-B-alanin als klares öl. Diese Verbindung wird in dsr nächsten Stufe eingesetzt.

B) 3,4 g des Produkts aus Stufe A) werden in einer. Lösung von 43 ml Methanol und 1,7 g Kaliumhydroxid in 8,6 ml

L 030043/0707.

	49	C	6,	H	9	N
ber,:	49	,99	7,	99	8	.71
gef.:	,81	29	.67

- ²⁷ - 3012U0

Wasser gelöst. Das Gemisch wird 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt, sodann mit 50 ml Wasser versetzt und das Methanol abdestilliert. Der wäßrige Rückstand wird mit verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,0 eingestellt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit Methanol extrahiert. Nach dem Trocknen wird das Methanol abdestilliert. Es hinterbleiben 3,2 g eines Öls, das an einer mit Sephadex LH-20 gefüllten Säule und mit einem 1 : 9 Gemisch aus Methanol und Wasser chromatographiert wird.

.1,1 g der
Es. werden / Titelverbindung als klares öl erhalten. Im Dünnschichtchromatogramm an Kieselgel und mit Methanol als Laufmittel zeigt sich ein Fleck bei einem R~-Wert von 0,65.

Beispiel 3 3

(R)-l-/U-(2-Mercapto-l-oxo-3-phenylpropyl)-L-alanyl7-L-prolin

A) (R) ^-Acetylthio^-phenyl-prop ionsäure Eine auf O⁰C abgekühlte Lösung von 51 g L-Phenylalanin und 125 g Kaliumbromid in 620 ml 25N Schwefelsäure wird innerhalb 1 Stunde unter Rühren mit 32,75 g Natriumnitrit versetzt. Das Gemisch wird hierauf eine weitere Stunde bei 0⁰C und sodann 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch mit Diäthylather extrahiert. Der Äther extrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft.

Es hinterbleiben 44,9 g ölige (S)-2-Brom -3-phenylpropionsäure, die bei 142 bis l44°C/O,25 Torr destillieren.

Ein Gemisch von 8,7 ml Thioessigsäure und 6,8 g Kaliumhydroxid in 225 ml Acetonitril wird 1 Stunde und 15 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Hierauf wird das Gemisch in einem Eisbad gekühlt und innerhalb 10 Minuten mit einer

Ö30Ö43/Q707 BAD

-28- 3012U0

Lösung von 25,3 g (S)-2-Brom-3-pheny!propionsäure in 25 ml Acetonitril versetzt. Danach wird das Gemisch 5 Stunden gerührt. Hierauf wird das Reaktionsgemisch abfiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert, Der ölige Rückstand wird in Äthylacetat aufgenommen und getrocknet. Das Lösungsmittel wird abdestilliert. Es werden 24 g rohG (R)-2-Acetylthio-3-phenylpropionsäure erhalten. Das Rohprodukt wird über das Dicyclohexylaminsalz gereinigt, Diäthylather wird zur Umkristallisation verwendet, Die freie Säure wird aus dem Salz mit Salzsäure regeneriert und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird eingedampft %* ' ' " ■ ■ *·' - ■"■-"·.·· Z&7_D ²⁵= +62° (c= 2,8; Chloroform).

B) R-(2~Acetylthio-3-phenyl)-propionyl-L-alanyl-L-prolin Die Titelverbindung wird aus der in Stufe (A) erhaltenen Verbindung durch Umsetzen mit L-Alanyl-L-prolin gemäß Beispiel 14 hergestellt. F. (124⁰C) 135 bis 138°C; •£x/25 ₌ _23° (_c= _1$i_ii Chloroform).

20 35

C) R-l-/Ti-( S-Kerc

prolin
Das in Stufe (3) erhaltene Produkt wird gemäß Beispiel 14 weiter umgesetzt. Anstelle von wäßriger Ammoniaklösung wird

25

Natronlauge verwendet. Es wird die Titelverbindung als schaumiger Feststoff erhalten;

^⁵ = -78.4° (c= 1,1; Chloroform).

30

	52	C	6	H	7	N	8	S
ber.:	52	.83	6	.78	7	.25	8	,30
gef.:	.54	,26	,01	,16

L 030043/0707

Γ "1

- ²⁹ - 3Q12UQ

Beispiel 3 4 (S)-l-/N-(2-Mercapto-l-oxo-3~phenylpropylj^~L-alanyl-L-prolin

A)- (S)-2-Acetylthio-3-pheny!propionsäure Beispiel 33 (A) wird wiederholt, jedoch wird D-Phenylalanin, F. 146 bis 147⁰Cj aus Äthylacetat als Dicyclohexylaminsalz, verwendet. Die freie Säure wird mit Salzsäure regeneriert und mit Äthylacetat extrahiert.
ZÖi7p⁵ = -70,1° (c= 1,91; Chloroform) 10

B) (S)-(2-Acetylthio-3-phenyl)-propionyl-L-alanyl-L-

prolin - - ·

Das Produkt aus Stufe (A) wird gemäß Beispiel 33 (B) mit L-Alanyl-L-prolin umgesetzt. Es wird die Titelverbindung als öliger Rückstand erhalten, die sich beim Digerieren mit Diäthylather und flexan verfestigt. F. l6l bis l63°Cji ψ - -109,6° (c= 1,5; Chloroform).

C) (S)-l-/N-(2-Kercapto-l-oxo-3-phenylpropyl_^-L-alanyl-L-prolin

Die Titelverbindung wird durch Umsetzung des in Stufe (B) erhaltenen Produkts gemäß Beispiel 33 (C) als schaumiger Feststoff erhalten;

/«7p⁵ = -82,7° ic= 1,5; Chloroform). 25

CHNS

^C17^H22^N2°4^SaH2^{O; ber}'^: 55,42 6,56 7,60 8,70

gef.: 55,25 6,18 7,36 8,43

Sh-Titration: 99,1 %

Beispiel 35 N-£Ni-Z"2-(Mercaptoinethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl7-glycyl7-L-arginin

030043/0707 · -J

BAD ORIGINAL

Γ ~Ί

- ³⁰ - 3012Η0

A) N-^5-ZA-cetylthio)-mathylJ-l-oxo~2-phenylpropy]J-glycin

13 g (0,067 Mol) Benzy!malonsäure werden mit 7,6 g (0,068 Mol) 40prozentigem. wäßrigem Dime thy lamin und 5,4 g (0,068 Mol) 37prozentiger wäßriger Pormaldehydlösung in 150 ml Wasser versetzt. Innerhalb 15 Minuten bildet sich ein voluminöser Feststoff. Dieser Feststoff wird nach 2 Stunden abfiltriert, mit Wasser gewaschen und an der Luft teilweise getrocknet. Es werden 20,8 g eines Produkts erhalten; theoretisch sind 16,8 g zu erwarten. Der Feststoff wird in einem auf 17O⁰C erhitzten ölbad geschmolzen und 10 Minuten erhitzt, bis die Aininentwicklung und die Blasenbildung aufhören. Danach wird das. Produkt abgekühlt. Die erhaltene bewegliche Flüssigkeit wird mit lOprozentiger wäßriger Kaliumbisulfatlösung angesäuert und mit Hexan extrahiert. Der Hexanextrakt Tfird über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Es w-rder. 6,3 g eines Feststoffs erhalten. Die wäßrigen Filtrate der Mannich-Reaktion werden etwa l6 Stunden stehengelassen und sodann auf einem Dampfbad auf 100⁰C so lange erhitzt, bis die Blasenbildung aufhört. Dies erfordert etwa 2 Stur.äen. Nach dem Abkühlen, Ansäuern und Extrahieren werden weitere 1,2 g Feststoff, also insgesamt 7,5g (75 % d, Th,) Benzylacrylsäure erhalten.

6,2 g (0,04 Mol) Bensylacrylsäure in 350 ml Dichlormethan werden mit 5,4 g (0,04 Mol) Glycinäthylester-hydrochlorid. und 3,9 g (0,04 Mol) Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird in Eis abgekühlt und mit 7,9 g (0,04 Mol) Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Das erhaltene Gemisch wird etwa 16 Stunden bei 25⁰C gerührt und danach filtriert. Das Filtrat wird mit wäßriger Natriumbicarbonatlösung, lOprozentiger wäßriger Saliumbisulfatlösung und Wasser ausgeschüttelt und sodann über Natriumsulfat getrocknet. Hierauf wird die Lösung eingedampft. Der erhaltene ölige Rückstand wird in 200 ml Methanol aufgenommen und mit überschüssiger lOprozentiger Natronlauge versetzt. Das Gemisch wird 15 Minuten

L D30043/0707 j

Γ Π

- ³¹ - 3 01 21 Λ O

auf einem Dampfbad erhitzt und sodann zu einer wäßrigen Aufschlämmung eingedampft. Diese Aufschlämmung wird abfiltriert und das PiItrat mit Diäthylather extrahiert» Die wäßrige Phase wird mit lOprozenti-ger Salzsäure angesäuert und mit Chloroform extrahiert. Der Chloroformextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft» Es werden 7,3 g (80% d. ¹Di.) eines Öls erhalten.

3,2 g (0,014 Mol) des Glycinderivats werden mit 10 ml Thiolessigsäure versetzt, und die erhaltene Lösung wird nach etwa 18 bis 20 Stunden unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird mit Diisopropyläther digeriert. Es werden nahezu weiße Kristalle in einer Ausbeute von 2,9 g erhalten. Nach Umkristallisation aus einem Gemisch von Äthylacetat und Hexan werden 2,5 g (60 % d. Th.) der Titelverbindung vom P. 97 bis 101⁰C erhalten.

CHNS

C₁₄H₁₇NO^Sj ber.: 56,93 5,80 4,7¹I 10,85

gef.: 56,68 5,87 4_S77 10,81

B) N-ZN-Z2- -(Acetylthib)-methyl?-1-oxo-3-phenylpropy3J-glycyl-L-arginin-

0,3 g (1 mMol) des Produkts von Stufe (A) werden in 25 ml

wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst, mit 0,11 g (1,1 mMol) Triäthylamin versetzt und auf 0⁰C abgekühlt. Sodann werden 0,11 g (1 iaMoi) Chlorameisensäureäthylester zugegeben, das Gemisch wird ^o Minuten bei 0⁰C gerührt und sodann in eine Lösung von 0,17 g (1 mMol) Arginin in 10 ml Wasser filtriert. Nach etwa lostündigem Rühren bei 25⁰C wird das Gemisch eingedampft. Der erhaltene wäßrige Rückstand wird mit Wasser auf 30 ml verdünnt und mit Äthylacetat vorsichtig extrahiert, um eine Eniulsionsbildung zu vermeiden. Sodann wird die wäßrige Phase an 50 g Avicel in Wasser chromatographiert. Es werden Fraktionen von /""aufgefangen. Die zwei Sakaguchi-

Nucleoporepositiven Fraktionen werden vereinigt, durch ein/Polycarbo-

030043/0707 BAD ORIGINAL

Γ "1

- ³² - 3012U0

natfliter filtriert und gefriergetrocknet. Es werden 0,3 g (63% d.Th. ) eines weißen Pulvers vom P. 105 bis 120⁰C erhalten. Nach 6stündigem Trocknen unter vermindertem Druck bei 95 bis 100⁰C paßt die Analyse auf die Gegenwart von 1,5 Mol Wasser.

CHNS

C₂₀H₂₉N₅O₅S.1,5H₂O; ber.: 50,19 6,74 11,63 6,70

gef.: 50,38 6,56 14,95 6,50

C) . N-ZK-Z2-(Mercaptomethyl)-l-oxo-3-phenylpropyl7-glycyl7-L-arginin

°»5 g (1,1 π£ίο1) der in Stufe (B) erhaltenen Verbindung werden in Eis abgekühlt und unter Argon als Schutzgas mit 4 ml konzentrierter wäßriger Ammoniaklösung versetzt. Nach Istundigem Rühren wird die Probe unter vermindertem Druck eingedampft. Der glasartige Rückstand wird 2 Stunden mit 25 ml Acetonitril dizsrier^. Danach wird das Lösungsmittel dekantiert, durch friscnss Lösungsmittel ersetzt und weitere 2 1/2 Tage unter Argon als Schutzgas gerührt. Der erhaltene weiße Peststoff wird ab filtriert und mit Acetonitril und Diäthyläther gewaschen. Schließlich wird das Produkt bei 45°C über Kaliumhydroxid, Phosphorpentoxid und Paraffin bei einem Druck von 0,01 Torr etwa l6 Stunden getrocknet.. Es werden 0,25 g (55 % d. Th.) der Titelverbindung vom P. 120 bis 137°C erhalten.

CHNS

^Cl8^H27^N5^O4^S*^1>75H?^{Oi beis:} ^⁹'^{02 6f97 15>88} ^T'²⁷

gef.: 48,89 6,67 16,17 7,28 30

G300A3/0707

BAD

Claims

u.Z.: P 576 (Vo/ko)
Case: M-257O1-S

E.R. SQUIBB & SONS, INC.
Princeton, N.J., V.St.A.
10

" Mercaptoacylpeptide, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als ACE-Inhibitoren und bei der Behandlung von Hochdruck ⁿ

Priorität: 2.4.1979, V.St.A., Nr. 25 701

Patentansprüche

1. ) Mercaptoacylpeptide der allgemeinen Formel I

R₁-S-(CH₂)_n—CH—C—A₁-A₂,

in der R. ein Wasserstoffatom, einen Alkanoylrest, eine Benzoylgruppe oder eine Gruppe der allgemeinen Formel

-S- (CH₂) ^CH-C-A₁-A₂

darstellt, R₂ ein Wasserstoffatom, einen Alkyl- oder Phenylalkylrest bedeutet, η den Wert O oder 1 hat und A. und Ap

jeweils einen (X-Aminosäure- oder of-Iminosäurerest darstel-35

len, die durch eine Peptidbindung miteinander verbunden sind, **

und ihre Alkylester und Salze. f

_L 030043/0707 _,

f~ -ι

2. Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R ein Wasserstoffatom darstellt.

3» Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R^ einen Alkanoylrest darstellt.

h_t Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R₁ eine Gruppe der allgemeinen Formel

10 ?2

-S-(CH₂) ^CH-C

darstellt.

5. Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R₂ ein ftasserstoffatom darstellt.

6. Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R₂ einen Alkylrast darstellt.

7. Verbindunger, nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der R₂ einen .Thenylalkylrest darstellt.

8, Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der η den Wert 0 hat»

9, Verbindunger, nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der η den Wert 1 hat.

10. Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der A₁ einen CV-Aminosaurerest und A₂ einen & -Iminosäurerest darstellt.

11. Verbindungen nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß A₂ den Rest des L^Prolins bedeutet.

_L 030043/0707

_i

-3- 3Q12HQ

12. Verbindungen nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I, in der A. und A₂, die gleich oder verschieden sind, den Prolin-, ^-Hydroxyprolin-, 4,4-Äthylendioxyprolin-, 4-Methoxyprolin-, Jj-Thiazolidincarbonsäure-, Tryptophan-, Glycin-, Alanin-, Leucin-, Isoleucin- oder Valinrest bedeuten.

13» l-£N-(Acetylthioacetyl)-glycyl7-L-prolin.

14. l-ZN-CMercaptoacetylJ-glycyDj-L-prolin. 10

15» (S)-l-^3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropy3j-L-propyl-L-prolin-tert.-butylester.

16, l-(S-3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-L-prolin.

17» N-(Acetylthioacetyl)-L-valyl-L-prolin.

18, N-(Mercaptoacetyl)-L-valyl-L-prolin. 20

19» l-/S-3-(AcetyIthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolylglycin-äthylestar.

20. l-(S-3-Marcapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolylglycin-Lithiumsalz.

21. (S)-l-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-pi-olyl-L-alanin·

22. Acetylthioacetyl-valyl-tryptophan-methylester.

23. N-CMercaptoacetylJ-L-valyl-L-tryptophan-Lithiumsalz.

24» (S)-Z3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl7-L-prolyl-

D-alanin-methylester.

030043/0707

Γ -1

25. (S)-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-propyl-D-alanin.

26» l-Zfo-CMercaptoacetylJ-L-alanylV-L-prolin.

27. l-ZN-O-Mercapto-l-oxopropy^-L-alanylJ-L-prolin.

28. Acetylthioacetyl-L-älanyl-L-tryptophan.

29. N-/N-(MercaptoacetylJf-L-alanyl-L-tryptophan. 10

30. (S)-l-(3-Acetylthio-2-methyl-l-oxo-propyl)-L-prolyl-B-alanin.

31. (S)-i-(3-Mercapto-2~m9thyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-B-alanin»

32» R-(2-Acetylthio-3-phenyl)-propionyl-L-alanyl-L-prolin.

33. R-l-£k-(2-I-fercapto-l-oxo-2-phenyl-propylV-L.-alanyl-L-prolin.

3¹I. (S)-(2-Acetylthio-3-phenyl)-propionyl-L-alanyl-L-prolin.

35. (S)-l-/N-(2-Mercapto-l-oxo-3-phenyl-i3ropylJ^-L-alanyl-L-prolin»

36. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch

1, dadurch gekennzeichnet, daß man entweder unmittelbar oder

nacheinander ein Dipeptid der allgemeinen Formel. A₁-A₃(II) oder

dessen Alkylester mit einer Thiocarbonsäure der allgemeinen Formel III

^R2

_R.__s_ (CH₂) _n—CH-COOH _(m)

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in der R^ einen Alkanoylrest oder eine Benzoylgruppe darstellt, zu Verbindungen der allgemeinen Formel I umsetzt, in der R₁ einenAlkanoylrest oder eine Benzoylgruppe bedeutet und zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R₁ ein Wasserstoffatom darstellt, diese Verbindungen hydrolysiert und zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R₁ eine Gruppe der allgemeinen Formel

Il

S (CH„) CH C A₁ A₀

zn ι. δ

ist, die Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der R₁ ein Wasserstoffatom darstellt, oxidiert.

37. Verwendung der Verbindungen nach Anspruch 1 bis 35 als ACE-Inhibitoren und bei der Behandlung von Hochdruck.

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