HU181087B

HU181087B - Process for producing mercapto-acyl-dipeptides

Info

Publication number: HU181087B
Application number: HU8080774A
Authority: HU
Inventors: Miguel A Ondetti; Josip Pluscec
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1979-04-02
Filing date: 1980-04-01
Publication date: 1983-05-30
Also published as: IE49653B1; NO800931L; IT8021110A0; GR67752B; GB2045771A; AU5638080A; PT71044A; NO150360C; DK140480A; PH22024A; IE800638L; GB2045771B; ES8104200A1; LU82316A1; ZA801527B; JPS55133345A; ATA179480A; CH645092A5; AT373577B; BE882601A

Description

Ondetti Miguel Angel vegyész, Princeton, Pluscec Josip vegyész, Trenton, New Jersey, Amerikai Egyesült Államok

Szabadalmas:

E. R. Squibb and Sons, Inc., Princeton, New Jersey, Amerikai Egyesült Államok

Eljárás merkapto-acil-dipeptidek előállítására

A találmány tárgya eljárás az I általános képletü új merkapto-acil-dipeptidek és 1 -4 szénatomos alkilésztereik, valamint (R)- és (S)-izomeijeik előállítására.

Az I általános képletben

Rj jelentése hidrogénatom vagy 2-4 szénatomos alkanoilcsoport,

R₂ jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkllcsoport vagy benzilcsoport;

n értéke 0 vagy 1;

Aj Gly-, L-Pro-, L-Val vagy L-Ala csoportot,

A₂ L-Ala-, D—Alá-, L-Pro-, L—Trp- vagy

L-Arg-csoportot jelent, de

Aj és A₂ az L—Pro-csoport kivételével mindig eltérő jelentésű.

Az I általános képletü vegyületeknek és alkilésztereiknek magas vérnyomást csökkentő hatásuk van.

Az Inorg. Chem. 1978, 17(8), 2176-82 (Eng) közlemény —Gly-His- és -(DL-His)₂- szekvenciát tartalmazó, szulfhidril-tartalmú tripeptidek rézkomplexen keresztül való előállítását ismerteti; a Bioinorg. Chem. 1978, 9(6), 521-8 (Eng) N-Merkaptoacetil-glicil-L-tirozin szintézisét úja le. Az ismert vegyületek gyakorlati felhasználására nincs adat.

Előnyös alkanoil-csoport az acetilcsoport. Az Aj és A₂ csoportok „peptidkötéssel” kapcsolódnak, azaz az Aj csoport α-karboxilcsoportja és az A₂ csoport α-amino- vagy imino-csoportja —C-NHkötést alkot. 8

O

Az olyan I általános képletü merkapto-acil-dipeptidek, ahol Rj jelentése 2-4 szénatomos alkanoilcsoport, egy II általános képletü dipeptidnek — Aj és A₂ a fenti - vagy 1—4 szénatomos alkil-észterének adott esetben savaddiciós só alakjában valamiJ0 lyen III általános képletü tiosawal vagy (R)- vagy (S)-izomerjével — Rj’ jelentése 2—4 szénatomos alkanoilcsoport - való acilezésével állíthatók elő. Az acilezés a szakterületen ismert számos acilezési módszer valamelyikével végezhető; például valami15 lyen kapcsoló ágens, így valamilyen karbodiimid jelenlétében (amelyek közül a leggyakrabban használt a diciklohexil-karbodiimid). Más módszer szerint a III általános képletü sav aktiválható vegyes anhidrid, szimmetrikus anhidrid, savklorid vagy aktív 20 észter képzésével vagy Woodward-K-reagenssel vagy N-(etoxi-karbonil)-2-etoxi-l ,2-dihidrokinolinnal. A különböző acilezési módszerek részletes tárgyalására vonatkozólag lásd: Methoden dér organischen Chemie (Houben-Weyl), XV: kötet, Π. rész, 1. oldaltól 25 (1974).

Az olyan I általános képletü vegyületek szintézisére, ahol Rj jelentése 2—4 szénatomos alkanoilcsoport, más módszer a szekvenciális acilezés, azaz az „Aj ” aminosav acilezése egy KI általános képletü 30 merkapto-alkánsawal (az előbb leírt eljárás szerint) egy Illa általános képletü merkapto-alkanoil-aminosawá, majd az „A₂” aminosav vagy alkil-észterének acilezése a Illa általános képletü merkapto-alkanoil-amino-sawal. Az acilezés az aminosavak kapcsolására jól ismert módszerek valamelyikével végezhető. Ezekre a módszerekre vonatkozólag lásd: Bodanszky and Ondetti, Peptide Synthesis (Interscience Publishers, 1966).

Az olyan I általános képletü vegyületek, ahol Rí jelentése hidrogénatom, ammonolízissel vagy lúgos hidrolízissel nyerhetők az előbb leírt eljárások szerint előállított olyan I általános képletü vegyületekből, ahol Rí jelentése 2-4 szénatomos alkanoilcsoport.

Ha egy Aj -A₂ vagy A₂ peptid vagy aminosav észterét használjuk a fenti szintézisek valamelyikében, akkor a megfelelő szabad sav az észterből savas vagy lúgos hidrolízissel kapható.

A III általános képletü merkapto-alkánsavak és a Illa általános képletü merkapto-alkanoil-aminosavak és az előállításukra szolgáló módszerek az irodalomból ismertek. (Lásd például a 4 046 889, 4 105 776 és 4 053 651 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat).

Az I általános képletü vegyületek és alkilésztereik magas vérnyomást csökkentő hatású szerekként használhatók. Gátolják az angiotenzin I dekapeptid angiotenzin ΙΙ-vé való átalakulását, és ennélfogva az angiotenzin okozta magas vérnyomás csökkentésére és megszüntetésére használhatók. A renin enzim hatására angiotenzinogénből, a vérplazmában lévő pszeudoglobulinból keletkezik angiotenzin I. Az angiotenzin I-et az angiotenzin konvertáló enzim (ACE) alakítja át angiotenzin ΙΙ-vé. Az utóbbi hatásos presszor-anyag, amely különböző emlős fajokban, például patkányokban és kutyákban, a hipertenzió különböző formáinak okozójaként tekinthető. A találmány szerinti vegyületek beavatkoznak az angiotenzinogén -> (renin) -> angiotenzin I (ACE) -> angiotenzin II átalakulási sorban az angiotenzin konvertáló enzim gátlásával, és csökkentik vagy megszüntetik az angiotenzin Π presszor anyag képződését. így egy I általános képletü vegyületet önmagában vagy kombinációban tartalmazó gyógyszerkészítmény adagolásával csökkenthető vagy megszüntethető az angiotenzin okozta hipertenzió az ettől szenvedő emlős fajokban. Egyszeri dózisban vagy előnyösen kettő—négy megosztott napi dózisban körülbelül 0,1—100 mg/testsúlykilogramm/nap, előnyösen körülbelül 1-50 mg/testsúlykilogramm/nap alkalmas a vérnyomás csökkentésére. Az anyagot előnyösen szájon át adjuk be, de parenterális úton, például bőr alá, izomba, intravénásán vagy intraperitoneálisan is alkalmazható.

Az I általános képletü vegyületek vérnyomáscsökkentő használatra például tablettaként, kapszulaként vagy elixírként formázhatok szájon át való beadásra, vagy steril oldatként vagy szuszpenzióként parenterális beadásra. Körülbelül 10-500 mg I általános képletü vegyületet vagy ilyenek keverékét keverjük valamilyen fiziológiásán elfogadható töltőanyaggal, hordozóval, segédanyaggal, kötőanyaggal, konzerválószerrel, stabilizálószerrel, ízesítőszerrel, stb., és az elfogadott gyógyszerészeti gyakorlat szerint egységdózis formává elkészítjük. Az ilyen készítmények2 ben lévő hatóanyag mennyisége annyi, hogy a fent megadott alkalmas dózistartományba esik.

A következő példák a találmány megvalósítását szemléltetik.

1. példa l-[N-(Acetiltio-acetil)-glicil]-L-prolin

1,72 g glicil-L-prolint oldunk keverés közben jeges fürdőben 10 ml 1 n nátrium-hidroxid oldatban. Ehhez 5 ml 2 n nátrium-hidroxid oldatot adunk, majd 1,13 g klór-acetil-kloridot, és a fürdőt eltávolítjuk. Szobahőmérsékleten 3 órát keverjük, utána 0,836 g tioecet-S-savat és 0,96 g kálium-karbonát 10 ml vízzel készült oldatát adjuk hozzá, és a reakcióelegyet körülbelül 16 órát keverjük szobahőmérsékleten. Utána a reakcióelegyet szulfonált polisztirol kationcserélő gyantával megsavanyítjuk, a gyantát vízzel eluáljuk, és az oldatot vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot ecetsavval oldjuk, és az oldatlan anyagot (olvadáspont 320 °C felett) kiszűrjük. A szűrletet vákuumban szárazra pároljuk, és kloroform) ecetsav (7 : 3) elegyet adunk hozzá. A terméket centrifugáljuk, és a felülúszót 60 g szilikagéllel töltött oszlopra töltjük, és kloroform/ecetsav (7 :3) eleggyel eluáljuk. így 1,0 g címvegyületet kapunk.

2. példa l-[N-(Merkapto-acetil)-glicil]-L-prolin

1,0 g l-[N-(Acetiltio-acetil)-glicil]-L-prolint 30 percig kevertetünk argongáz alatt 6 ml víz és 6 ml tömény nátrium-hidroxid oldat elegyével. Az oldatot vákuumban bepároljuk, szulfonált polisztirol gyantával megsavanyítjuk az előbbihez hasonló oszlopon, és vízzel eluáljuk. A 800 mg innen kapott anyagot (valamint 200mg-ot egy előbbi előállításból) 30 g szilikagéllel töltött oszlopon kloroform: ecetsav (7 : 3) eleggyel kromatografáljuk. A kapott 740 mg terméket egy dietil-amino-etil-dextrán anioncserélő gyantával töltött 85 ml-es oszlopon 750—750 ml 0,005 mólos ammónium-hidrogén-karbonát oldattal és 0,5 mólos ammónium-hidrogén-karbonát oldattal gradiens módszerrel eluáljuk. A terméket szulfonált polisztirol kationcserélő gyantán a szabad savvá alakítjuk, és utána argongáz alatt 6 órán át kevegük 7 ml ecetsavban 350 mg cinkporral. A szuszpenziót centrifugáljuk, és a felülúszót vákuumban szárazra pároljuk, vízben oldjuk, és liofilizáljuk. A maradékot az előbbihez hasonló oszlopon szulfonált polisztirol gyantával megsavanyítjuk, és vízzel eluálva 365 mg címvegyületet kapunk. Rf = 0,52 (szilikagélen, etil-acetáttal).

Az analízis eredményei a C9H₁₄N₂O₄S · 3H₂O összegképlet alapján:

számított:	C =42,95%,	H = 5,68%,
	N =11,13%,	S =12,72%,
mért:	C =42,92%,	H = 5,78%,
	N =10,94%,	S =12,68%.
SH:
számított:	1,00,	mért: 0,98 mól.

-2181087

3. példa (S)-1 -(3-Acetiltio-2-metil- 1-oxo-propil)-L-prolil-L-prolin-terc-butil-észter

7,8 g (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)-L•prolin (4 046 889 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) 75 ml diklór-metánnal készült oldatához 5,13 g L-prolin-terc-butil-észtert adunk, és az oldatot 0 °C-ra hűtjük. Ehhez az oldathoz cseppenként hozzáadjuk diciklohexil-karbodiimid 50 ml diklór-metánnal készült oldatát. A reakcióelegyet utána szobahőmérsékleten 16 órát keverjük. A kivált csapadék kiszűrése után a kapott oldatot alaposan mossuk vízzel, 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, vízzel, 10%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal és vízzel, majd utána vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldat bepárlása után a 12 g nyerstermék állás közben megszilárdul. Etil-acetát és pentán elegyéből átkristályositva 104—106 °C olvadáspontú címvegyületet kapunk.

4. példa (S)-1 -(3-Merkapto-2 -metil-1 -oxo-propil)-L-prolil-L-prolin g (S)-l-(3-Acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)-L-prolil-L-prolin-terc-butil-észtert beleszórunk 60 ml desztillált trifluor-ecetsavba, és a kapott oldatot szobahőmérsékleten 1 órán át hagyjuk állni. A trifluor-ecetsavat vákuumban eldesztilláljuk, és a maradékot nagyvákuumban 24 órán át szárítjuk. A nehéz olajat 30 ml metanolban oldjuk, és 20 ml tömény ammónium-hidroxid oldatot adunk hozzá. Az elegyet 1 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és az olajos maradékot szárítjuk, és 6 ml diciklo-hexil-aminnal elegyítjük. A sót dietil-éterrel elegyítjük, olaj válik ki. Az olajat etil-acetáttal oldjuk, és az oldatot 10%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk. Az oldószer eltávolítása után a maradékot metanollal oldjuk, és az egész mennyiséget szilikagélen adszorbeáltatjuk. Az oldószert eltávolítjuk, és az adszorbeált terméket tartalmazó szilikagélt kloroformmal oszlopba töltjük. Az oszlopot kloroformmal eluáljuk, és a merkapto-pozitív frakciókat egyesítjük. Az oldószert eltávolítjuk, és a maradékot vízben oldjuk, majd liofilizáljuk. így 1,05 g címvegyületet kapunk higroszkópos szilárd anyagként.

Az analízis eredményei a C14H22N2O4S · 1/2H₂O összegképlet alapján:

számított:	C =51,99%,	H =7,17%,
	N = 8,66%,	S = 9,92%,
mért:	C =52,12%,	H = 7,44%,
	N = 8,18%,	S =9,37%.

Semlegesítési ekvivalens: számított: 323; mért: 3,41.

5. példa

N-(Acetiltio-acetil)-L-valil-L-prolin

3,1 g (terc-butoxi-karbonil)-L-valil-L-prolint oldunk 20 ml trifluor-ecetsavban, és 15 percig hagyjuk szobahőmérsékleten állni, majd az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és az olajos maradékot néhány órán át vákuumban szárítjuk. Az olajat 25 ml dimetil-formamiddal oldjuk, és az oldathoz 2,2 g acetiltio-ecetsav-N-hidroxi-szukcinimid-észtert adunk. A reakciót pH 7,5-ön végezzük (trietil-aminnal beállítva) és szobahőmérsékleten 17 órán át. Az oldószer eltávolítása után a majadékot etil-acetáttal oldjuk, és az oldatot alaposan mossuk vízzel, 10%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal, vízzel, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, vízzel, és végül vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk. így 4,8 g címvegyületet kapunk olajként.

6. példa

N-(Merkapto-acetil)-L-valil-L-prolin

4,8 g N-(acetiltio-acetil)-L-valil-L-prolint oldunk 12 ml metanol és 7,5 ml tömény ammónium-hidroxid oldat elegyében, és az oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni. A pH-t 7-re állítjuk, és a metanolt vákuumban eldesztilláljuk. A visszamaradó vizes részt 2 n sósavoldattal pH 2-re savanyítjuk, és az oldatot nátrium-kloriddal telítjük. A terméket etil-acetáttal extraháljuk, az oldatot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. így 2 g anyagot kapunk, amelynek olvadáspontja 158-162 °C. Etil-acetátból (kevés metanol hozzáadásával) átkristályositva kapjuk a terméket, amely 162-165 °C-on olvad. Egy mintát 2 órán át 55 °C-on szárítva az olvadáspont 190—192 °C-ra emelkedik.

7. példa (S)-1 -(3-Merkapto-2-metil-1 -oxo-propil)-L-prolil-L-alanin

A 3. és 4. példák szerinti eljárásokat követve, de kiindulási anyagként 7,8 g (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)-L-prolint, 75 ml dimetil-formamidot,

6,2 g dícildohexil-karbodiimidet 4,2 g L-alanin-metü-észter-hidrokloridot és 4,2 ml trietil-amint használva (pH 7,5-8,0) 8 g anyagot kapunk. Ezt szilikagéllel töltött oszlopon etil-acetáttal eluálva kromatografáljuk. Két frakciót kapunk. (Rf = 0,76 és R_f = 0,4, szilikagél, etil-acetát).

A 2 g kisebb mozgékonyságú anyagot (Rf = 0,4)

1,5 g kálium-hidroxid 7 ml vízzel és 35 ml metanollal készült oldatában oldjuk, és az oldatot 2 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. A szerves oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a vizes réteget pH 2,0-re savanyítjuk. Az oldathoz nátrium-kloridot adunk, és a terméket ötször egymás után etil-acetáttal extraháljuk. Az oldatot megszárítjuk, és az oldószert

-3181087 vákuumban eltávolítjuk. A szilárd maradékot forró etil-acetátból kristályosítjuk, így lg terméket kapunk, amelynek olvadáspontja 128-130 °C.

8. példa (Acetiltio-acetil)-L-valil-L-triptofán-metil-észter g (terc-butoxi-karbonil)-L-valil-L-triptofán-metil-észtert oldunk 150 ml trifluor-ecetsav és 15 ml anizol elegyében, és nitrogéngáz alatt 1 órán át keveijük. Az oldatot vákuumban bepároljuk, amíg olajos maradékot kapunk.

4,83 g acetiltio-ecetsav és 6,18 g hidroxi-benztriazol-monohidrát 120 ml tetrahidrofuránnal készült oldatát lehűtjük 0 °C-ra, és 8,16 g diciklohexil-karbodiimid 60 ml tetrahidrofuránnal készített oldatával elegyítjük. A reakcióelegyet 0,5 órán át 0 °C-on, majd 1 órán át szobahőmérsékleten keveijük. A kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk, így fehér szilárd anyagot kapunk. Az aktív észtert feloldjuk 90 ml dimetil-formamidban, utána hozzáadjuk a fenti dipeptid-metil-észter-(trifluor-acetát) 60 ml dimetü-formamiddal készült oldatát úgy, hogy a pH-t párhuzamosan adagolt N-metil-morfolinnal állandóan 7,5-ön tartjuk. A reakcióelegyet utána 16 órán át szobahőmérsékleten keveijük. Utána bepároljuk, és a kapott olajat etil-acetáttal és vízzel összerázzuk. Az etil-acetátos fázist 2 n citromsavoldattal, vízzel, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal és vízzel mossuk, majd vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk. Bepárlás után szilárd anyagot kapunk. A nyersterméket etil-acetát/pentán elegyből kristályosítjuk, így 10 g címvegyületet kapunk, amelynek olvadáspontja

110-112 °C.

9. példa (S)-1 -(3-Acetiltio-2-me til-1 -oxo-propil)Dprolil-D-alanin-metil -észter

7,8 g (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)-L prolin 150 ml acetonitrillel készült oldatához 4,9 g karbonil-diimidazolt adunk 0 °C-on. A reakcióeleíjyet 1 órát kevegük ugyanazon a hőmérsékleten, nialatt az oldat csaknem teljesen tiszta lesz, majd

4,2 g D-alanin-metil-észter-hidrokloridot adunk hoz2á. A pH-t 4,2 ml trietil-aminnal 7,5-8,0-ra állítjuk, és a reakcióelegyet 17 órán át keverjük szobahőfokon. A csapadékot és az oldószert eltávolítjuk, és a maradék olajat etil-acetáttal oldjuk. Az oldatot alaposan mossuk vízzel, 0,1 n sósavoldattal, vízzel, telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, vízzel, és szárítjuk. Az oldószer eltávolítása után a maradék olaj szilikagél vékonyrétegen etil-acetáttal és kloroform : metanol (9 :1) eleggyel kifejlesztett kromatogamon is egy foltot ad Rf = 0,5-nél egy nyomnyi szennyezéssel Rf = 0,75-nél (etil-acetátban). Kitermelés: 4 g.

10. példa (S> l-(3-Merkapto-2-metil- 1-oxo-propil)-L-prolil-D-alanin

4g (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-1-oxo-propil)- L-prolil-D-alanin-metil-észtert adunk 3 g kálium-hidroxid 14 ml vízzel és 70 ml etanollal készült oldatához, és az oldatot 2 órán át szobahőmérsékleten keveijük. A 9. példában leírt eljárás szerint 2,1 g terméket különítünk el kristályos szilárd anyagként, amelynek olvadáspontja 152-155 °C.

Az analízis eredménye a C₁₂H₂₀N₂O₄S összegképlet alapján:

számított: C = 49,98%, H = 6,99%,

S =11,12%, mért: C =50,02%, H =7,24%,

S =10,90%.

Semlegesítési ekvivalens: számított: 288, mért: 284.

11. példa l-[N-(Merkapto-acetil)-L-alanil]-L-prolin

1,3 g acetiltio-ecetsav és 1,44 g hidroxi-benztriazol 39 ml tetrahidrofuránnal készült oldatához 2 g diciklohexil-karbodiimidet adunk, és az elegyet 30 percig kevegük 0 °C-on és egy órát szobahőmérsékleten. A csapadékot kiszűijük, és a szűrlethez L-alanil-l-prolint adunk trifluor-ecetsav sójaként (amelyet

2,8 g terc-butoxi-karbonil-L-alanil-L-prolinból és trifluor-ecetsavból állítunk elő). A pH-t N-metil-morfolinnal 7,5—8,0-ra állítjuk, és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten körülbelül 16 órát kevegük. Az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 18 ml metanol és 18 ml tömény ammónium-hidroxid elegyében oldjuk. A reakcióelegyet 30 perc múlva vákuumban bepároljuk, a maradékot vízben feloldjuk, és szulfonált polisztirol kationcserélővei töltött oszlopba töltve vízzel eluáljuk. A kapott anyagot szilikagélen ecetsav : kloroform (7 :3) eleggyel kromatografálva tisztítjuk tovább, és etil-acetátból kristályosítva 850 mg 152-155 °C olvadáspontú anyagot kapunk.

[a]_D = -128° (c = 1,5; 50%-os vizes metanol).

12. példa l-[N-(2-Merkapto-propionil)-L-alanil]-L-prolin

All. példa szerinti eljárást követve, de a 2-acetiltio-ecetsav helyett 2-acetiltio-propionsavat használva a címvegyületet viaszos szilárd anyagként kapjuk, amely (47)-54-65 °C-on olvad bomlás közben. Az analízis eredménye a Ci !HisN₂O₄S · 1/2H₂O összegképlet alapján: számított: C =46,63%, H =6,76%,

S = 9,89%, talált: C =46,50%, H = 6,58%,

S = 9,78%.

SH-titrálás: 100%.

13. példa l-[N-(3-Merkapto-l-oxo-propil)-L-alanil]-Uprolin

A 11. példa szerinti eljárást követve, de 2-acetiltio-ecetsav helyett 3-acetiltio-propionsavat használva kapjuk a címvegyületet higroszkópos szilárd anyagként, amelynek olvadáspontja (61)-75-84 °C. Az analízis eredménye a C\ iHi8N₂O₄S · 0,75H₂0 ¹⁰összegképlet alapján:

számított: C =45,89%, H =6,83%,

S =11,14%, talált: C =45,75%, H =6,62%, ¹⁵

S =10,98%.

SH-titrálás: 99,6%.

14. példa ²⁰ l-[N-(Merkapto-acetil)-L-prolil]-L-prolin

A) módszer g (Benziloxi-karbonil)-L-prolil-L-prolint hidrogénezünk 50 ml vízmentes etanol és 7,5 ml In sósávoldat elegyében katalitikus mennyiségű 10% palládiumot tartalmazó szén-katalizátor jelenlétében. A katalizátort 5 óra elteltével kiszűrjük, és az oldó- ³⁰szert vákuumban eltávolítjuk. A maradékot feloldjuk 15 ml dimetil-formamid és 1,05 ml trietil-amin elegyében és 1,7 g acetiltio-ecetsav-N-hidroxi-szukcinimid-észtert adunk hozzá. A reakcióelegyet körülbelül 16 órán át hagyjuk szobahőmérsékleten állni, ³⁵majd az oldószereket vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot szilikagéllel töltött oszlopon benzol: hexán (7:1) eleggyel kromatografáljuk. Az anyagot feloldjuk 5 ml trifluor-ecetsav és 2 ml anizol elegyében, és az oldatot 1 órán át hagyjuk szobahőmérsék- ⁴⁰létén állni. Utána a reakcióelegyet szárazra pároljuk, és a maradékot argongáz alatt keverés közben feloldjuk 7,7 ml In nátrium-hidroxid oldatban. A reakcióelegyet 15 perc múlva szulfonált polisztirol kationcserélő gyantával semlegesítjük, és ugyanezzel a ⁴⁵gyantával költött oszlopra töltve vízzel eluáljuk. A kapott anyagot etil-acetátból kristályosítjuk, így 182—183 °C olvadáspontú anyagot kapunk.

B) módszer 50

2,06 g diciklohexil-karbodiimidet és 2,3 g l-(acetiltio-acetilj-L-prolint adunk 1,7 g L-prolin-terc-butil-észter és 1,5 g hidroxi-benztriazol 15 ml diklór-metánnal készült és jeges fürdőben lehűtött oldatá- ⁵⁵hoz. A reakcióelegyet körülbelül 16 órán át keverjük 5 °C-on, utána a keletkezett csapadékot kiszűrjük, és a szűrletet addig mossuk, míg semleges lesz. A szerves réteget szárazra pároljuk, és a maradékot szilikagélen kromatografálva és éter/hexán elegyből 60 kristályosítva tisztítjuk, így 95-98 °C olvadáspontú anyagot kapunk. Ezt az anyagot az A)-módszerben leírtak szerint trifluor-ecetsawal, majd utána nátrium-hidroxiddal reagáltatva szabadítjuk meg a védőcsoportoktól. 65

15. példa (Acetiltio-acetil)-L-alanil-L-triptofán-metil-észter

2,5 g L-alanil-L-triptofán-metil-észter-acetátot feloldunk 20 ml dimetil-formamidban és hozzáadunk 2,0 g acetiltio-ecetsav-N-hidroxi-szukcinimid-észtert. Az oldat pH-ját N-metü-morfolinnal 7,5-re állítjuk, és a reakcióelegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keveijük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és a maradék olajat etil-acetáttal oldjuk, vízzel mossuk, szárítjuk, és vákuumban bepárolva 3 g habszerű maradékot kapunk. A maradékot etil-acetátban oldjuk, és 60 g I. aktivitású Woelm bázikus alumíniumoxiddal töltött 1,5 cm x 4,5 cm méretű oszlopra töltjük. Az oszlopot etil-acetáttal eluálva 1,6 g habszerű szilárd anyagot kapunk, amely szilikagélen kloroform: metanol (3:1) eleggyel kifejlesztett vékonyrétegkromatogramon egyetlen 0,69 Rf-értékű foltot ad.

16. példa (R)-1 -[ N-(3-F enil-2 -merkapto-1 -oxo-propil-Ualanilj-L-prolin

A) (R)-2-Acetiltio-3-fenil-propionsav

32,75 g nátrium-nitrátot adunk 51 g L-fenilamjn és 125 g kálium-bromid 620 ml 2,5 n kénsawal készült oldatához egy óra alatt, és közben a reakcióelegy hőmérsékletét 0 °C-on tartjuk. A reakcióelegyet további 1 órán át keverjük 0 °C-on, és utána egy órán át szobahőmérsékleten. A reakcióelegyet utána éterrel extraháljuk, és az éteres extraktumot vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk. Az étert eltávolítva 44,9 g (S)-2-bróm-3-fenil-propionsav marad vissza olajként, amelyet 142-144 °C-on 0,25 Hgmm nyomáson desztillálunk.

8,7 ml tioecetsav és 6,8 g kálium-hidroxid 225 ml acetonitrillel készült elegyét egy óra 15 percen át keveijük szobahőmérsékleten. Az elegyet jeges fürdőben lehűtjük, és 10 perc alatt hozzáadjuk

25,3 g (S)-2-bróm-3-fenil-propionsav 25 ml acetonitrillel készült elegyét, A reakcióelegyet 5 órát keverjük, majd megszűrjük, és az oldószert vákuumban eltávolítjuk, és az olajos maradékot újból oldjuk etil-acetátban, és megszárítjuk. Az oldószer eldesztillálása után 24 g nyers (R)-2-acetiltio-3-fenil-propionsavat kapunk. A nyers anyagot diciklohexil-ammóniumsó képzéssel tisztítjuk dietil-éterből kristályosítva. A szabad savat sósawal regeneráljuk, és etil-acetáttal extraháljuk.

[a]p⁵ = +62° (c = 2,8, kloroform).

B) (RX2-Acetiltio-3-fenil-propionil)-

-L-alanil-L-prolin

A terméket az A) pontban előállított (R)-2-acetil-tio-3-fenil-propionsav és L-alanil-L-prolin reagáltatásával állítjuk elő a 11. példában leírt eljárás szerint. Olvadáspont: (124)-135-138 °C. [α]θ⁵ = -23° (c = 1,4, kloroform).

-511

C) (R)-1 -[ N-(3-Fenil-2-merkapt ο-1 -oxo-propil) -L-alanil]-L-prolin

A 11. példa szerinti eljárást követve a fenti B) pontban kapott anyaggal, és ammónium-hidroxid ⁵helyett nátrium-hidroxidot használva a címvegyületet kapjuk szilárd habként.

[a]²⁵ =78,4° (c = 1,1, kloroform).

Az analízis eredménye a Ci₇H₂₂N₂O₄S · 2H₂O összegképlet alapján: ¹⁰ számított: mért:

C =52,83%,

N = 7,25%,

C =52,54%,

N = 7,01%,

H =6,78%,

S =8,30%,

H = 6,26%,

S =8,16%.

17. példa (S)-l -[N-(3-Fenil-2-merkapto- 1-oxo-propil)- ²⁰

-L-alanil]-L-prolin

A) (S)-2-Acetiltio-3-fenil-propionsav

A 16. példa A) pontja szerinti eljárást követve, de L-fenilalanin helyett D-fenilalalanint használva 146—147 °C olvadáspontú diciklohexil-ammóniumsót kapunk etil-acetátból. A szabad savat sósavval regeneráljuk, és etil-acetáttal extraháljuk. ₃₀ [a]p^S = —70,1° (c= 1,91, kloroform).

B) (S)-2-Acetiltio-3-fenil-propionil)-

-Dalanil-L-prolin

A fenti A) pontban előállított anyagot a 16. B) példa eljárása szerint L-alanil-L-prolinnal reagáltatva olajként kapjuk a címvegyületet, amely etil-acetáttal és hexánnal eldörzsölve megszilárdul. Olvadáspont: 161-163 °C. ⁴θ [α]ρ⁵ =-109,6° (c = 1,5, kloroform).

C) (S)-l-[N-(3-Fenil-2-markapto-l-oxo-propil)-L-alanil]-L-prolin

A címvegyületet a B) pontban előállított anyagnak a 16. C) példában leírt eljárás szerint végzett reagáltatásával kapjuk szilárd habként.

[a]p =-82,7° (c = 1,5, kloroform). 50

Az analízis eredménye a C[ ₇H₂₂N₂O₄S · H₂O összegképlet alapján:

számított:

mért:

C =55,42%,

N = 7,60%,

C =55,25%,

N = 7,36%,

H =6,56%,

S = 8,70%, 55

H =6,18%,

S =8,43%.

SH-titrálás: 99,1%.

18. példa

N-/N-[3-Fenil-2-(merkapto-metil)-l-oxo-propil]-glicil/-L-arginin 65

A) N-[2-(Acetiltio-metil)-3-fenil- 1-oxo-propilj-glicin g (0,067 mól) benzil-malonsavat elegyítünk

7,6 g (0,068 mól) 40%-os vizes dimetil-aminnal és

5,4 g (0,068 mól) 37%-os formáimnál 150 ml vízben. A körülbelül 15 percen belül keletkező voluminózus szilárd anyagot 2 óra múlva kiszűrjük, vízzel mossuk, és levegőn részben megszárítva 20,8 g anyagot kapunk. (Elméleti: 16,8 g). A szilárd anyagot olajfürdőben 170°C-on megolvasztjuk, és 10 percig melegítjük, amíg az aminfejlődés abbamarad, és a habzás láthatóan lecsökken. A lehűtött terméket, amely könnyen folyó anyag, 10%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal megsavanyítjuk, hexánnal extraháljuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepárolva 6,3 g szilárd anyagot kapunk. A Mannich-reakcióból kapott vizes szűrleteket éjszakán át állni hagyjuk, majd 100°C-on addig melegítjük, amíg a buborékolás abbamarad (2 óra). A lehűtés, savanyítás és a fentiek szerinti extrakció után további 1,2 g szilárd anyagot kapunk, azaz összesen 7,5 g (75%) benzil-akrilsavat.

6,2 g (0,04 mól) benzil-akrilsavat 350 ml diklór-metánban 5,4 g (0,04 mól) glicin-etil-észter-hidrokloriddal és 3,9 g (0,04 mól) trietil-aminnal elegyítünk. A reakcióelegyet jeges fürdőben lehűtjük, és

7,9 g (0,04 mól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet éjszakán át 25 °C-on keverjük, majd szűrjük. A szűrletet vizes kálium-hidrogén-karbonát oldattal, 10%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal, majd vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. Olajat kapunk. Ezt 200 ml metanolban oldjuk, és fölös mennyiségű 10%-os nátrium-hidroxid oldattal elegyítjük. Az elegyet 15 percig gőzfürdőn melegítjük, majd bepároljuk, míg vizes zagyot kapunk. Ezt megszűrjük, és a szűrletet éterrel extraháljuk. A vizes fázist 10%-os sósavoldattal megsavanyítjuk, és kloroformmal extraháljuk. Az extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. így 7,3 g (80%) olajat kapunk.

3.2 g (0,014 mól) glicin-származékhoz 10 ml tioecet-S-savat adunk, és a kapott oldatot másnap vákuumban bepároljuk. A maradékot diizopropil-éterrel eldörzsölve 2,9 g csaknem fehér, szilárd anyagot kapunk. Ezt etil-acetát/hexán elegyből átkristályosítva 2,5 g (60%) 97—101 °C olvadáspontú anyaghoz jutunk.

Az analízis eredménye a C_I4H₁₇N0₄S összegképlet alapján:

számított: C =56,93%,

N = 4,74%, mért: C =56,68%,

N = 4,77%,

H = 5,80%,

S =10,85%,

H = 5,87%,

S =10,81%.

B) N/N-[2-(Acetiltio-metil)-3-fenil- 1-oxo-

-propil]-glicil/-L-arginin

0,3 g (1 mmól) A) pontban kapott terméket feloldunk 25 ml vízmentes tetrahidrofuránban, hozzáadunk 0,11 g (1,1 mmól) trietil-amint, és az elegyet

-613 lehűtjük 0 °C-ra. Utána hozzáadunk 0,11 g klór-hangyasav-etil-észtert, és 40 percig 0 °C-on keverjük a reakcióelegyet, majd beleszűrjük 0,17 g (1 mmól) arginin 10 ml vízzel készült oldatába. A reakcióelegyet éjszakán át 25 °C-on keverjük, majd utána bepároljuk vizes elegyig, amelyet meghígítunk 30 ml-re vízzel, és óvatosan (emulzió elkerülésével) extraháljuk etil-acetáttal. A vizes fázist vízzel nedvesített 50 g Avicel-en kromatografáljuk 25 ml-es frakciókat szedve. A két Sakaguchi-pozitív frakciót egyesítjük, és nuklepór polikarbonát szűrőn átszűrjük, és liofilizáljuk. így 0,3 g (63%) fehér port kapunk, amelynek olvadáspontja 105-120 °C. Ezt vákuumban 95-100 °C-on 6 órát szárítjuk, és analizáljuk, így 1,5 mól víz jelenléte mutatható ki.

Az analízis eredménye a C₂oH₂₉N₅O₅S · 1,5H₂O összegképlet alapján:

számított:	C =50,19%,	H =6,74%,
	N = 14,63%,	S =6,70%,
mért:	C= 50,38%,	H =6,56%,
	N = 14,95%,	S =6,50%.

A₂ L-Ala-, D-Ala-, L-Pro-, L—Trp- vagy

L-Arg-csoportot jelent, de

A, és A₂ az L-Pro-csoport kivételével mindig eltérő jelentésű ⁵ azzal jellemezve, hogy olyan I általános képletü vegyületek előállítására, amelyek képletében Rj jelentése 2-4 szénatomos alkanoilcsoport, R2, n, Aj és A2 a tárgyi körben megadott, egy III általános képletü tiosavat — Rj ’ jelentése 2—4 szénatomos alkanoilcsoport, R2 és n a fenti jelentésű vagy reakcióképes származékát adott esetben (R)vagy (S)-izomerje alakjában egy Π általános képletü dipeptiddel — Aj és A2 a fenti jelentésű - vagy 1-4 szénatomos alkilészterével adott esetben sav¹⁵ addíciós só alakjában, vagy először az Aj aminosavval, majd az A2 aminosawal vagy 1—4 szénatomos alkilészterükkel adott esetben savaddíciós só alakjában reagáltatjuk, majd kívánt esetben — olyan I általános képletü vegyület előállítására, amelynek ²⁰ képletében Rj hidrogénatom, R₂, n, Aj és Á₂ a tárgyi körben megadott - a kapott terméket hidrolizáljuk, kívánt esetben egy kapott 1-4 szénatomos alkilésztert hidrolizálunk.

C) N/N-[ 3-Fenil-2-(merkapto-metil)-1 -oxo-

-propil]-glicil/-L-arginin

0,5 g (1,1 mmól) B) pontban előállított terméket jégben lehűtünk, és argongáz alatt hozzáadunk 4 ml tömény ammónium-hidroxid oldatot. Az elegyet 1 órát keveijük, utána vákuumban bepároljuk üvegszerű maradékká. Ezt 25 ml acetonitrillel 2 órán át kevergetjük, majd az oldószert dekantáljuk, és friss oldószert öntünk rá, és 2,5 napig keverjük argongáz alatt. A kapott fehér szilárd anyagot kiszűrjük, és acetonitrillel és dietil-éterrel mossuk. Kálium-hidroxid, foszfor-pentoxid és paraffin felett szárítjuk 45 °C-on 0,01 Hgmm nyomáson éjszakán át. így 0,25 g (55%) 120—137 °C olvadáspontú szilárd anyagot kapunk.

Az analízis eredménye a C₁₈H₂₇N₅O4S · 1,75H₂O összegképlet alapján:

számított:	C =49,02%,	H = 6,97%,
	N =15,88%,	S =7,27%,
mért:	C =48,89%,	H = 6,67%,
	N =16,17%,	S =7,28%.

Szabadalmi igénypontok:

Claims

Szabadalmi igénypontok:

1. Eljárás az I általános képletü merkapto-acil-dipeptidek és 1—4 szénatomos alkilésztereik, valamint (R)- és (S)-izomerjeik előállítására — ebben a képletben

Rj jelentése hidrogénatom vagy 2-4 szénatomos alkanoilcsoport;

R₂ jelentése hidrogénatom, 1-3 szénatomos alkilcsoport vagy benzilcsoport;

n értéke 0 vagy 1;

Aj Gly-, L-pro-, L-Val- vagy L—Ala-csoportot,
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)- L-pro- lil-L-prolin-terc-butilészter előállítására azzal jellemezve, hogy (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)-L-prolint L-prolin-terc-butil-észterrel reagáltatunk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja (8)-1-(3-Γηβ±3ρίο-2-πΐ6ίϊ1-1-οχο-ρΓορΐ1)-ΙζρΓθ· lil-L-prolin előállítására azzal jellemezve, hogy (S)-1 -(3-acetiltio-2-metil-1 -oxo-propil)- L-prolil-L-prolin-(l—4 szénatomos)-alkilésztert hidrolizálunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja N-(acetiltio-, illetve merkapto-acetil)-L-valil-L-prolin előállítására azzal jellemezve, hogy L-valil-L-prolint acetiltio-ecetsav reakcióképes származékával reagáltatunk, majd kívánt esetben a kapott acetiltio-vegyületet hidrolizáljuk.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja (S)-l-(3-merkapto-2-metiI-l-oxo-propil)-L-prolil-L-(vagy D-)-alanin előállítására azzal jellemezve, hogy (S)-l-(3-acetiltio-2-metil-l-oxo-propil)-L-prolin és L* vagy D-alanin-(l-4 szénatomos)-alkilészter reagáltatásával kapott vegyületet hidrolizálunk.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja l-[N-(merkapto-acetil)-L-alanil]-L-prolin előállítására azzal jellemezve, hogy reakcióképes acetiltio-ecetsav és L-alanil-Dprolin reagáltatásával kapott vegyületet hidrolizálunk.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja 1 -[N-(2-merkapto-propionil)-L-alanil]-L-prolin előállítására azzal jellemezve, hogy reakcióképes

2-acetiltio-propionsav és L-alanil-L-prolin reagáltatásával kapott vegyületet hidrolizálunk.
8. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja l-[N-(3-merkapto-l-oxo-propil)-L-alanil]-L-prolin előállítására azzal jellemezve, hogy reak-7- cióképes 3-acetiltio-propionsav és Lalanil-L-prolin reagáltatásával kapott vegyületet hidrolizálunk.
9. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja l-[N-fmerkapto-acetil)-L-prolil]-L-prolin elő- ⁵ állítására azzal jellemezve, hogy L-prolil-L-prolin és reakcióképes acetiltio-ecetsav vagy 1-(acetiltio-acetil)-L-prolin és L-prolin-(l-4 szénatomos)-alkilészter reagáltatásával kapott vegyületet hidrolizálunk.