DE69130605T2

DE69130605T2 - Antihypertensive N-(alpha-substituiertes Pyridyl)-carbonyldipeptide

Info

Publication number: DE69130605T2
Application number: DE69130605T
Authority: DE
Inventors: Lydia 08031 Barcelona Cabeza Llorente; Carlos 08830 Barcelona Malet Falco; Francisco 08012 Barcelona Pubill Coy; Jose 08029 Barcelona Repolles Moliner
Original assignee: Lacer SA
Current assignee: Lacer SA
Priority date: 1991-02-27
Filing date: 1991-02-27
Publication date: 1999-05-20
Anticipated expiration: 2011-02-28
Also published as: RU2098424C1; HU9203324D0; ATE174343T1; EP0500989A1; RO111369B1; CA2081471A1; PT100148B; CZ280952B6; PL296625A1; HUT62313A; US5432159A; NO924076D0; CZ322092A3; BR9204779A; AU1278392A; AU650954B2; ES2037613A1; NO924076L; FI924850A; ES2037613B1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue N-(α-substituiertes Pyridinyl)carbonyldipeptide, die als Inhibitoren des Angiotensin-Converting-Enzyms wirken. Diese neuen Verbindungen können zusammen mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern zu pharmazeutischen Zusammensetzungen formuliert werden, die bei der Behandlung von Hochdruck und anderen kardiovaskulären Störungen, an deren Pathophysiologie das Renin-Angiotensin-Aldosteron-System beteiligt ist, nützlich sind.
In den siebziger Jahren gab es bei der Pharmakotherapie von arteriellem Hochdruck einen wesentlichen Fortschritt, und zwar aufgrund der Entwicklung von Wirkstoffen, die eine direkte Wirkung auf die Renin-Angiotensin- und Kallikrein- Kinin-Systeme zeigten, und insbesondere der Synthese der ersten Verbindungen, die wirksam die enzymatische Umwandlung des Decapeptids Angiotensin I zu dem potenten Vasopresser-Angiotensin II hemmten, d. h. als Inhibitoren des Angiotensin- Converting-Enzyms (ACE) wirkten. Dieses physiologisch wichtige Enzym baut auch das gefäßerweiternde Peptid Bradykinin ab. Mehrere ACE-Inhibitoren haben sich bei Versuchstieren und beim Menschen als fähig erwiesen, die blutdruckerhöhenden Wirkungen von intravenös verabreichtem Angiotensin I zu hemmen, und haben eine Anti-Hochdruckwirkung in Tiermodellen und Patienten mit Hochdruck gezeigt. Ihre Eignung für die Behandlung von Stauungsinsuffizienz ist ebenfalls überzeugend demonstriert worden.
Die US-A-4105776 offenbart N-Acyl-Derivate von a-Aminosäuren, die wirksame ACE-Inhibitoren sind und als solche bei der Behandlung von Hochdruck nützlich sind. Die speziell betroffenen Verbindungen sind Mercapto-Derivate von N- Acyl-L-prolin, einschließlich des repräsentativsten Mitglieds der Reihe, d. h. D-3- Mercäpto-2-methylpropanoyl-L-prolin oder Captopril, des ersten oral wirksamen ACE-Inhibitor-Anti-Hochdruckmittels, das weltweit verfügbar gemacht wurde. Ein anderer wichtiger Durchbruch auf diesem Gebiet, aber mit einem gänzlich verschiedenen Ansatz, wird durch Verbindungen repräsentiert, die in der EP-A- 12401 offenbart sind, bei welchen es sich um Carboxyalkyldipeptid-Derivate handelt und deren repräsentativere Mitglieder Enalaprilat, Enalapril und Lisinopril sind.
Ein besseres Verständnis der ACE-Struktur und der jeweiligen wesentlichen Strukturanforderungen an potentielle Inhibitoren sowie ein Interesse an der Bereitstellung neuer Verbindungen mit verschiedenen Potenz-, kinetischen und/oder Toxizitätsprofilen haben zu einer anhaltenden Entwicklung neuer Klassen von ACE- Inhibitoren geführt. Aus mehreren Untersuchungen der Struktur-Aktivitäts- Beziehungen ist geschlossen worden, daß eine wirksame Hemmung des Enzyms nur mit einem Molekül erreicht werden kann, das mindestens drei klar unterscheidbare Regionen oder Teile zeigt, wie es durch die folgende allgemeine Struktur dargestellt wird:
Die Region A weist gewöhnlich eine Carboxylgruppe in der α-Stellung auf, welche sich stark an eine kationische Stelle der Enzymstruktur bindet. Es wurde in mehreren Untersuchungen gefunden, daß L-Prolin die beste Substruktur für diese Region oder diesen Teil ist, obwohl dessen Pyrrolidinring auch in modifizierter Form vorliegen kann.
Die Region B muß eine funktionelle Gruppe mit einer spezifischen Fähigkeit enthalten, um das in der "aktiven Stelle" des Enzyms angeordnete Kation Zn&spplus;&spplus; zu binden. Bei dieser Zink-bindenden Gruppe, gewöhnlich einer sauren Gruppe, kann es sich um eine Mercaptogruppe (Captopril und Analoga) oder eine Carboxylgruppe (Enalaprilat, Lisinopril und Analoga) sowie um irgendeine Vorstufengruppe handeln, welche durch metabolische Umwandlung eine aktive Gruppe entstehen lassen kann. Beispiele für ACE-Inhibitoren mit Vorstufengruppen sind die Acylthio-Derivate Alacepril und Pivalopril und die Carbonsäureester Enalapril und Perindopril. Einige Klassen von Inhibitoren weisen andere saure Gruppen in der Region B auf, beispielsweise -P(O)(OH)- oder -P(O)(OH)O- in freier oder veresterter Form. In jedem Fall sind alle bekannten Zink-Liganden unveränderlich an eine Alkylgruppe oder manchmal an eine Cycloalkylgruppe geknüpft, aber niemals Teil einer aromatischen Struktur (M. J. Wyvratt, A. A. Patchett, Medicinal Research Reviews 5, 483-531, 1985).
Die Region C wirkt als Brücke zwischen den aktiven Stellen der Regionen A und B und muß offenbar bestimmte stereochemische Anforderungen erfüllen, da die meisten aktiven Verbindungen eine von L-Aminosäure abgeleitete Einheit (z. B. eine L-Alanin- oder L-Lysin-Einheit) in der entsprechenden Dipeptid-Struktur zeigen. In der Gruppe vom Captopril-Typ muß die gleiche Stereochemie am C-2 der 2-Methylpropanoyl-Einheit vorliegen.
Dieses vereinfachte allgemeine Modell gilt für fast alle verschiedenen Strukturen der bekannten ACE-Hemmer, wobei spezielle oder zusätzliche Anforderungen innerhalb jeder speziellen chemischen Klasse erfüllt sein müssen. In diesem Zusammenhang sind die am besten bekannten Struktur-Aktivitäts- Beziehungen sicherlich diejenigen, die in der Mercaptoacylaminosäure (Captopril- Gruppe)- und der Carboxyalkyldipeptid (Enalapril/Lisinopril-Analoga)-Reihe aufgeklärt wurden. Obwohl bei jedem der drei strukturellen Teile systematische Abwandlungen durchgeführt worden sind, ist es erwähnenswert, daß in den beiden erwähnten allgemeinen Reihen die verschiedenen Versuche, Zink-bindende Gruppen zu finden, die von Mercapto oder Carboxy verschieden sind, gewöhnlich zu inaktiven Verbindungen oder zumindest zu einem beträchtlichen Verlust der Aktivität der betreffenden Verbindungen geführt haben. Insbesondere sind in der Klasse von Dipeptid-Derivaten wirksame ACE-Inhibitoren mit N-substituierten Carboxamiden oder Thioamiden als Zink-Liganden bisher noch nicht offenbart worden.
Die DE-A-33 32 633 ist auf pharmazeutisch aktive Dipeptid-Derivate gerichtet, welchen im wesentlichen lediglich gemeinsam ist, daß sie eine Ringstruktur aufweisen müssen, die über eine Carbonylgruppe an das N-terminale Ende derselben gebunden ist. Diese Ringstruktur kann von Benzol, Pyridin, Pyrrol, Furan, Thiophen, Pyrazin, Pyrazol, Naphthalin, Indol, Chinolin, Benzofuran oder Benzothiophen ab stammen und trägt einen Substituenten der Formel -CO&sub2;, wobei Z beispielsweise OH, Alkoxy, Alkylthio oder (substituiertes) Amino ist. Der weitaus größte Teil der speziellen, in diesem Dokument offenbarten Verbindungen weist eine von Benzol abgeleitete Ringstruktur auf. In denjenigen Dipeptid-Derivaten, die eine Pyridinringstruktur enthalten, weist der Pyridinring in Stellung 2 oder 3 eine -COOH- Gruppe auf.
Acta Pharm. Sin. 25(5): 374-378 (Biol. Abs. 90 (1990), 126221) betrifft die Synthese von N-(2-Mercaptopyridyl-3-formyl)-N-alkylglycinen, von denen berichtet wird, daß sie in vorläufigen Tests eine ACE-hemmende Wirkung in vitro gezeigt haben.
Die vorliegende Erfindung stellt neue Dipeptid-Derivate mit ACE-hemmender Aktivität bereit, welche, als grundlegendes und unterscheidendes Merkmal, eine Substruktur zeigen, die aus einem Pyridinring aufgebaut ist, welcher daran geknüpft eine potentiell Zink-bindende Funktionalität, insbesondere einen beispielsweise aus OH, SH und NH&sub2; oder funktionell verwandten oder Vorstufen-Gruppen derselben ausgewählten α-Substituenten, aufweist. Diese α-substituierte Pyridin-Substruktur, die durch eine Carbonylgruppe an die terminale Aminogruppe des Dipeptids geknüpft ist, ist in einem Teil der allgemeinen Struktur angeordnet, welcher der oben besprochenen Region B entspricht. Als Region A wurde die L-Prolin-Substruktur gewählt, mit einer Aminosäure wie beispielsweise L-Alanin in der Brückenregion C.
Wegen der speziellen strukturellen Merkmale können die Dipeptid-Derivate der vorliegenden Erfindung nicht in irgendeine der allgemeinen Klassen oder irgendeine der speziellen chemischen Familien, die bis heute auf dem Gebiet der ACE- Inhibitoren offenbart sind, eingeschlossen oder eingeordnet werden.
Innerhalb der allgemeinen Dipeptid-Klasse sind die Verbindungen der vorliegenden Erfindung klar von den Carboxyalkyldipeptiden verschieden, da sie eine Arylcarbonyldipeptid-Struktur aufweisen. Diese strukturelle Anordnung ist auf dem Gebiet der natürlichen oder synthetischen ACE-Inhibitoren sehr ungewöhnlich. Darüber hinaus sind (α-substituiertes Pyridinyl)carbonyldipeptide im Stand der Technik nicht offenbart oder vorgeschlagen worden, wie es beispielsweise aus den klassischen Übersichtsartikeln zu diesem Gegenstand von E. W. Petrillo und M. A. Ondetti (Medicinal Research Reviews 2,1-41, 1982) und von M. J. Wyvratt und A. A. Patchett (siehe oben) entnommen werden kann.
Weiter muß unter einem praktischen Gesichtspunkt berücksichtigt werden, daß die Carboxyalkyldipeptid-Inhibitoren des Standes der Technik zusätzlich zu den zwei asymmetrischen Kohlenstoffen der Dipeptid-Substruktur einen asymmetrischen Kohlenstoff (in der Region B) aufweisen, was aufgrund der notwendigen optischen Trennung der Rohprodukte ihre Synthese sehr komplex macht und/oder niedrige Ausbeuten zur Folge hat. Da die Verbindungen der vorliegenden Erfindung dieses zusätzliche asymmetrische Kohlenstoffatom nicht aufweisen, können sie leicht in guten Ausbeuten durch Einführung der Pyridinylcarbonyl-Einheit in das gewünschte Peptid über die terminale NH&sub2;-Gruppe desselben erhalten werden.
In ihrem breitesten Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung neue Dipeptid- Derivate der allgemeinen Formel (I):
einschließlich tautomerer Formen derselben, in der:
n für 0 oder 1 steht;
R für OH, SH, NH&sub2;, Halogen, OR&sub4;, SR&sub4;, NHR&sub4; oder N(R&sub4;)&sub2; steht, wobei R&sub4; aus Niederalkyl-, gegebenenfalls substituiert, Aryl- und Acylgruppen ausgewählt ist;
R&sub1; OH, Niederalkoxy-, gegebenenfalls substituiert, Arylniederalkoxy- oder Aryloxygruppen darstellt;
R&sub2; aus Niederalkylgruppen ausgewählt ist;
R&sub3; Halogen, NO&sub2;, Niederalkyl oder Arylniederalkyl darstellt;
und pharmazeutisch annehmbare Salze derselben.
R&sub3; in der Formel (I) kann jede freie Position am Pyridinring einnehmen.
Gleichermaßen kann der substituierte Pyridinring durch die α-, β- oder γ- Positionen des Pyridinringes an die Carbonyldipeptid-Substruktur geknüpft sein, wobei eine der α-Positionen bereits durch die Gruppe R besetzt ist.
Die pharmazeutisch annehmbaren Salze der Verbindungen der Formel (I), beispielsweise wenn R&sub1; OH ist, schließen diejenigen mit Aikalimetallen, wie Natrium oder Kalium, oder Erdalkalimetallen, wie Calcium, ein. Sie schließen auch Ammoniumsalze, beispielsweise mit Ammoniak, substituierten Aminen oder basischen Aminosäuren, ein.
Wie es auf dem Gebiet der Stickstoffhaltigen Heterocyclen wohlbekannt ist, liegen Pyridin-Derivate, die durch Hydroxy- oder Mercaptogruppen α-substituiert sind, gewöhnlich in ihren tautomeren Formen vor, d. h. als 2-Pyridinone bzw. 2- Pyridinthione, d. h. als besondere Typen von cylischen Carboxamiden und Thioamiden. Aus diesem Grund versteht es sich, daß die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in der R für OH oder SH steht, ebenfalls diese Tautomerie zeigen können, wobei die jeweiligen Amid-Formen gewöhlich vorherrschend sind. Obwohl in der Formel (I) eine klassische aromatische Struktur dargestellt ist, ist diese spezielle strukturelle Darstellung nur für den Zweck der Vereinfachung gewählt worden, da es dadurch möglich ist, alle verschiedenen funktionellen Gruppen R in einer einzigen allgemeinen Formel einzuschließen. Weiter zeigt diese strukturelle Darstellung auf einfache Weise die Beziehungen zwischen einigen speziellen Gruppen R, beispielsweise im Fall der verschiedenen Gruppen OR&sub4; und der (unsubstituierten) Gruppe OH. Es ist in der Pyridin-Chemie bekannt, daß beispielsweise α-Alkoxypyridine zu ihren α-Hydroxypyridinen und demzufolge zu den mehr begünstigten α-Pyridinon- Tautomeren hydrolysiert werden können.
Deshalb sollte es offenkundig sein, daß die allgemeine Formel (I) keine spezielle bevorzugte Hydroxy- oder Mercapto-Tautomerie in dem Fall, in dem R für OH oder SH steht, impliziert. Im Gegenteil, die vorherrschenden tautomeren Formen in diesem letztgenannten Fall können durch die allgemeine Formel (Ia) dargestellt werden:
in der A für O oder S steht, R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; wie oben definiert sind und R&sub5; Wasserstoff oder Niederalkyl ist.
In der Formel (Ia) sind nur Verbindungen, bei denen R&sub5; Wasserstoff ist, "wahre" tautomere Formen von Verbindungen der Formel (I), in der R für OH oder SH steht. Verbindungen der Formel (Ia), in der R&sub5; Niederalkyl ist, sind im strengen Sinn, obwohl sie ebenfalls in der vorliegenden Erfindung eingeschlossen sind, keine tautomeren Formen von Verbindungen der Formel (I), in der R für OR&sub4; oder SR&sub4; steht, wobei R&sub4; die Niederalkylgruppe ist.
Bevorzugte Dipeptid-Derivate der vorliegenden Erfindung sind diejenigen, in denen in der obigen allgemeinen Formel (I) n für 0 steht und R, R&sub1;, R&sub2; (und R&sub3;) wie folgt definiert sind:
R: OH, SH, Cl, OR&sub4;, SR&sub4; oder NHR&sub4;, wobei R&sub4; aus Niederalkly-, Aryl- oder Acylgruppen ausgewählt ist; noch mehr bevorzugt sind: OR&sub6;, SR&sub6;, Cl oder NHR&sub7;, worin R&sub6; Wasserstoff, Niederalkyl oder gegebenenfalls substituiertes Phenyl, insbesondere Wasserstoff, Methyl, Ethyl oder Phenyl, ist; und R&sub7; Acyl oder gegebenenfalls substituiertes Phenyl, insbesondere Acetyl oder Phenyl, ist.
R&sub1;: OH oder Niederalkoxy, insbesondere OH, Methoxy und Ethoxy;
R&sub2;: Methyl;
R&sub3;: NO&sub2; und/oder Halogen.
Die Ausdrücke "Niederalkyl", "Niederalkoxy" usw., wie hierin und in den beigefügten Ansprüchen verwendet, sollen die folgenden Gruppen bezeichnen:
- Niederalkyl: lineare oder verzweigte Alkylgruppen mit 1 bis 6, vorzugsweise 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl und Butyl; am bevorzugtesten Methyl und Ethyl;
Niederalkoxy: die wie oben definierte Niederalkylgruppen, an ein Sauerstoffatom geknüpft, vorzugsweise OCH&sub3; und OC&sub2;H&sub5;;
Halogen: F, Cl, Br und 1, insbesondere Cl und Br;
Aryl: vorzugsweise mit 6 bis 14, insbesondere 6 bis 10 Kohlenstoffatomen, wie Phenyl und Naphthyl, gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten substituiert, die beispielsweise aus Niederalkyl (wie Methyl), Niederalkoxy (wie Methoxy), Halogen (wie Cl und F) und NO&sub2; ausgewählt sind;
Acyl: (Alkyl- und Aryl-)carbonylgruppen, vorzugsweise mit insgesamt 1 bis 10, insbesondere 2 bis 7 Kohlenstoffatomen, wie Acetyl, Propionyl, Pivaloyl und Benzoyl;
substituiertes Niederalkyl: die obigen Niederalkylgruppen (insbesondere Methyl und Ethyl), die mit einem oder mehreren, vorzugsweise einem oder zwei und insbesondere einem Substituenten substituiert sind, der aus den obigen Niederalkoxygruppen (wie Methoxy und Ethoxy), Halogen (insbesondere F und Cl), OH, Acyloxy (worin die Acylgruppen wie oben definiert sind) und Di(niederalkyl)amino (wobei Niederalkyl wie oben definiert ist) ausgewählt sind, wobei spezielle Beispiele für substituierte Niederalkylgruppen 1-Acetoxyethyl (Axetil), Pivaloyloxymethyl (Pivoxil) und Dimethylaminoethyl sind;
Arylniederalkyl: die obigen Arylgruppen (insbesondere gegebenenfalls substituiertes Phenyl), die an eine Niederalkylgruppe, wie oben definiert, geknüpft sind, wie beispielsweise Benzyl und 1- und 2-Phenethyl.
Die verbleibenden Ausdrücke können aus den obigen Definitionen abgeleitet werden. Zum Beispiel bedeutet "substituiertes Niederalkoxy" eine substituierte Niederalkylgruppe, wie oben definiert, die an ein Sauerstoffatom geknüpft ist. Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) sowie die Untergruppe von Verbindungen, die auch durch die Formel (Ia) dargestellt werden kann, zeigen die zwei asymmetrischen Zentren der Dipeptid-Substruktur und können demgemäß in mehreren stereoisomeren Formen vorliegen. Obwohl diese Erfindung jede dieser einzelnen stereoisomeren Formen und alle Mischungen derselben umfaßt, sind die bevorzugten Verbindungen diejenigen, in denen beide asymmetrischen Zentren die "S"-Konfiguration aufweisen.
Die Verbindungen der Formel (I) sind Inhibitoren des Angiotensin-Converting- Enzyms und sind als Anti-Hochdruckmittel bei Säugern (einschließlich Menschen) nützlich. Sie können auch bei der Behandlung von Stauungsinsuffizienz und anderen Störungen, die pathophysiologisch mit dem Renin-Angiotensin-Aldosteron- System in Verbindung stehen, verwendet werden.
Demgemäß stellen pharmazeutische Zusammensetzungen einen weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung dar, welche mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) in Kombination mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Trägern oder Hilfsstoffen und gegebenenfalls Adjuvantien und/oder komplementären Mitteln usw. in fester oder flüssiger Form und vorzugsweise in Einheitsdosierungsform umfassen. Die Zusammensetzungen dieser Erfindung können am geeignetesten für eine orale Verabreichung angepaßt werden, obwohl andere Wege der Verabreichung, wie parenteral, rektal oder durch Inhalation, in gewissen Fällen noch vorteilhafter sein können. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können auf herkömmliche Weise, beispielsweise durch einfaches Mischen der Bestandteile der gewünschten Zusammensetzung, hergestellt werden. Geeignete Träger oder Hilfsstoffe sind die üblichen und dem Fachmann wohlbekannten. Die orale Verabreichung wird am besten mit Formulierungen in der Form von Tabletten (überzogen oder nicht überzogen), Kapseln oder Flüssigkeiten, wie Lösungen, Sirupen oder Suspensionen, erreicht. Die orale feste Form kann vom herkömmlichen Typ, d. h. mit schneller Freisetzung, oder mit der Eigenschaft der verzögerten Freisetzung sein.
Für den Zweck der Behandlung von Hochdruck und/oder möglicherweise anderen Störungen, für welche die biologische Aktivität dieser neuen Verbindungen nützlich sein kann, sind Dosierungsmengen in der Größenordnung von 2 bis 1000 mg pro Patient pro Tag in einer einzigen oder mehrfachen Dosis geeignet, obwohl die individuelle Dosierungsmenge bei jedem Patienten von der Aktivität der speziellen verwendeten Verbindung, dem Typ und der Schwere der Beeinträchtigung sowie von individuellen Faktoren, wie Körpergewicht und Geschlecht, und anderen Faktoren, die dem Fachmann gewöhnlich bekannt sind, abhängen. Für die Behandlung von Hochdruck liegt die Dosis bevorzugt im Bereich von 5 bis 500 mg pro Patient pro Tag.
Die Verbindungen dieser Erfindung können auch in Kombination mit anderen pharmazeutisch aktiven Verbindungen, beispielsweise Anti-Hochdruckmitteln oder anderen Mitteln, die in der kardiovaskulären Therapie nützlich sind, wie Diuretika oder β-adrenerge Blocker, verabreicht werden. Diese anderen aktiven Verbindungen können auch zusammen mit den neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) den pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung einverleibt werden.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können durch ein oder mehrere der nachstehend beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Es ist für den Fachmann offensichtlich, daß andere synthetische Vorgehensweisen, die in der Peptid- Chemie wohlbekannt sind, ebenfalls verwendet werden können.
Das erste Verfahren (Verfahren A) umfaßt das Kuppeln einer Carbonsäure der Formel (IIa) mit einem Dipeptid der Formel (III)
worin R, R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und n wie oben definiert sind, aber ausgenommen OH für R&sub1;, in Anwesenheit einer vorzugsweise äquimolaren Menge eines geeigneten Kupplungsmittels, beispielsweise eines Carbodiimids und insbesondere von N,N'-Dicyclohexylcarbodümid (DCC). Im allgemeinen wird die Reaktion in einem geeigneten basischen organischen Lösungsmittel und bei Raumtemperatur durchgeführt.
Das Dipeptid der Formel (III) wird vorzugsweise in Form eines Esters, wie eines Niederalkylesters, verwendet. Die freie Aminogruppe kann gegebenenfalls beispielsweise mit Chlorwasserstoffsäure zum Salz ausgebildet sein. Beispiele für geeignete basische organische Lösungsmittel sind Pyridin und eine Mischung eines tertiären aliphatischen Amins (z. B. Triethylamin) mit einem inerten, vorzugsweise halogenierten Lösungsmittel (wie Chloroform oder Methylenchlorid). Wenn man von dem bevorzugten veresterten Dipeptid ausgeht, wird die gewünschte Verbindung der Formel (I) als Monoester (in der L-Prolin-Substruktur) erhalten.
Gemäß einer Abwandlung des Verfahrens A kann man im wesentlichen das gleiche Verfahren verwenden, aber eine veresterte Aminosäure der Formel H&sub2; N-CH(R&sub2;)-COR&sub1; anstelle des Dipeptids der Formel (III) einsetzen. Der so erhaltene N-(α-substituiertes Pyridinyl)carbonylaminosäureester kann dann hydrolysiert werden, wobei man die resultierende freie Säure mittels der DCC- Reaktion oder irgendeines anderen Verfahrens, das gewöhnlich für die Kupplung von Aminosäuren verwendet wird, mit einem L-Prolinester umsetzt.
Spezielle Verbindungen der Formel (Ia), in der R&sub5; Niederalkyl ist, können ebenfalls durch das Verfahren A oder Abwandlungen desselben erhalten werden. In diesem Fall wird eine geeignete 1-Alkyl-1,α-dihydro-a-(oxo- oder -thioxo)pyridincarbonsäure als Ausgangsmaterial verwendet.
Verbindungen der allgemeinen Formel (I) können auch durch Umsetzung eines Acylhalogenids der Formel (IIb) mit einem Dipeptid der Formel (III) oder beispielsweise dessen Hydrochlorid hergestellt werden (Verfahren B):
worin X Halogen, wie beispielsweise Chlor, ist und R, R&sub1;, R&sub2;, R&sub3; und n wie oben definiert sind. Wenn R&sub1; von OH verschieden ist, wird die Reaktion vorzugsweise in Anwesenheit einer organischen Base, wie Triethylamin, durchgeführt, wohingegen eine anorganischen Base, wie Alkalihydroxide oder -carbonate oder Mischungen derselben, verwendet werden, wenn R&sub1; OH ist.
Wenn das Ausgangs-Dipeptid der Formel (III) eine derivatisierte Carboxylgruppe aufweist und eine organische Base verwendet wird (Verfahren B-a), wird die Reaktion im allgemeinen in einem geeigneten nicht-polaren Lösungsmittel, wie Chloroform, Methylenchlorid oder Dioxan, durchgeführt. Wenn das Dipeptid eine freie Carboxylgruppe aufweist (Verfahren B-b), wird vorteilhaft ein biphasisches System verwendet. Dieses biphasische System umfaßt gewöhnlich eine wäßrige Lösung der anorganischen Base und eine Lösung des Acylhalogenids in einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie Acetonitril, als zweite Phase.
Das Verfahren B (a oder b) kann auch zur Herstellung einer Verbindung der Formel (Ia) verwendet werden, in der R&sub5; Niederalkyl ist. In diesem Fall wird das Dipeptid der Formel (III) mit dem entsprechenden 1-Alkyl-1,α-dihydro-cc-(oxo- oder -thioxo)pyridincarbonylhalogenid umgesetzt.
Die spezielle Untergruppe von N-(α-Mercaptopyridinyl)carbonyldipeptiden, d. h. Verbindungen der Forme) (I), in der R für SH steht (oder in der Formel (Ia) A für S steht und R&sub5; Wasserstoff ist), kann auch in hohen Ausbeuten durch das Verfahren C erhalten werden, welches das Erwärmen einer Verbindung der Formel (I), in der R Halogen ist, mit Natriumthiosulfat in einem geeigneten hydroalkoholischen Medium, wie Mischungen von Wasser und 1,2-Propylenglycol, umfaßt.
Bei jedem der oben beschriebenen Verfahren A bis C können, wenn die neuen Verbindungen der Erfindung als Ester (im Prolin-Rest) erhalten werden, d. h. Verbindungen der Formel (I), in der COR, eine Carbonsäureestergruppe ist, diese Verbindungen mittels Hydrolyse, beispielsweise mit einem Alkalihydroxid in einem polaren Medium, in die jeweiligen freien Carbonsäuren überführt werden. Typische hydrolytische Bedingungen schließen die Verwendung von Kaliumhydroxid, gelöst in niederaliphatischem (z. B. C&sub1;-C&sub3;)Alkohol, allein oder in Mischung mit Wasser, ein. Ein bevorzugter Alkohol ist Ethanol.
Die Pyridincarbonsäuren der Formel (11a), insbesondere diejenigen mit R = Halogen, sind im Handel erhältlich oder können durch wohlbekannte synthetische Verfahren hergestellt werden. Die Säurehalogenide der Formel (IIb) können leicht durch Standardverfahren erhalten werden, ausgehend von den entsprechenden Säuren der Formel (IIa).
Die Ausgangs-Dipeptide der Formel (III) sind ebenfalls handelsübliche Produkte oder können durch Verfahren, die derzeit in der Peptid-Chemie verwendet werden, synthetisiert werden.
Spezielle Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden durch die folgenden nicht-beschränkenden Beispiele erläutert.
Die ¹H-NMR- und ¹³C-NMR-Spektren wurden bei 199,975 MHz bzw. bei 50,289 MHz auf einem Varian XR-200-Spektrometer aufgenommen. Die chemischen Verschiebungen werden als δ-Werte relativ zu Tetramethylsilan angegeben, welches als innerer Standard verwendet wurde. Dünnschichtchromatographie-Analysen (TLC) wurden auf vorbeschichteten Platten mit Merck Kieselgel 60 F&sub2;&sub5;&sub4; durchgeführt, und die Flecken wurden durch UV-Bestrahlung nachgewiesen. Die folgenden Lösungsmittel wurden bei der TLC verwendet:
A: Ethylacetat
B: Ethylacetat/Aceton 3/1
C: Aceton
D: Absolutes Ethanol
E: Ethanol/Essigsäure 3%
F: Ethanol/Essigsäure 5%
und sind in jedem Fall in Klammern angegeben.

Beispiel 1

Synthese von N-[(6-Chlor-2-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 1)

Eine Lösung von L-Alanyl-L-prolinethylesterhydrochlorid (6 g, 0,024 Mol) und Triethylamin (7,4 ml) in wasserfreiem Methylenchlorid (120 ml) wird in einem Eisbad gekühlt. Unter Rühren wird eine Lösung von 6-Chlor-2-pyridincarbonylchlorid (5,1 g, 0,029 Mol) in wasserfreiem Methylenchlorid (30 ml) tropfenweise dazugegeben. Nach Beendigung der Zugabe wird die Lösung 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, und die Reaktionsmischung wird mit 400 ml Methylenchlorid verdünnt. Die resultierende Lösung wird dreimal mit 200 ml 10%-igem wäßrigem Natriumbicarbonat und zweimal mit 200 ml Wasser gewaschen. Die organische Schicht wird ber wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wird unter verringertem Druck abdestilliert, was das Titelprodukt als farbloses Öl ergibt (Ausbeute 99%).
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,24 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,47 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,70 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,15 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,50 (m, 1 H, CH Prolin), 4,90 (m, 1 H, CH Alanin, überführt in q, J = 6,8 Hz, nach Schütteln mit D&sub2;O), 7,40 (dd, J, = 7 Hz, J&sub2; = 1 Hz, 1 H, Ar), 7,75 (dd, J&sub1; = J&sub2; = 7 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,02 (dd, J&sub1; = 7 Hz, J&sub2; = 1 Hz, 1H, Ar), 8,50 (br d, 1 H, NH, verschwindet nach Schütteln mit D&sub2;O).
¹³C-NMR (CDCl&sub3;): 13,9 (CH&sub3; Ethylester), 17,7 (OH&sub3; Alanin), 24,8 (N-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 28,8 (N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 46,7 (CH Alanin und N-CH&sub2; Prolin), 58,9 (CH Prolin), 61,1 (CH&sub2; Ethylester), 120,9 (Ar C-3), 127,2 (Ar C-5), 139,9 (Ar C-4), 150,2 (Ar), 1.50,4 (Ar), 162,5 (CO), 171,0 (CO), 172,1 (CO).
TLC (B): Rf = 0, 46.
Ähnlich werden die folgenden Verbindungen synthetisiert:
N-[(2-Chlor-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 2)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,28 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,54 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,73 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,19 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,54 (m, 1 H, CH Prolin), 4,96 (m, 1 H, CH Alanin), 7,34 (dd, J, = 7,7 Hz, J&sub2; = 4,8 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,55 (br d, 1 H, NH), 8,05 (dd, J, = 7,7 Hz, J&sub2; = 2 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,47 (dd, J&sub1; = 4,8 Hz, J&sub2; = 2 Hz, 1 H, Ar C-6).
TLC (B): Rf = 0,37
N-[(2-Chlor-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 3)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,50 (d, J = 6,9 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,77 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,22 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,57 (m,.1 H, CH Prolin), 4,91 (m, 1 H, CH Alanin), 7,51 (dd, J&sub1; = 5,1 Hz, J&sub2; = 1 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,66 (d, J = 1 Hz, 1 H, Ar C-3), 8,09 (d, J = 7,2 Hz, 1 H, NH), 8,43 (d, J = 5,1 Hz, 1 H, Ar C-6).
TLC (B): Rf = 0,47
N-[(6-Chlor-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 4)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,48 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,15 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CHa Prolin), 3,70 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,17 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,54 (m, 1 H, CH Prolin), 4,94 (m, 1 H, CH Alanin), 7,32 (d, J = 8,4 Hz, 1 H, Ar C-5), 8,03 (dd, J&sub1; = 8,4 Hz, J&sub2; = 2,4 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,78 (d, J = 2, 4 Hz, 1 H, Ar C-2).
TLC (B): Rf = 0,46

Beispiel 2

Synthese von N-[(1,2-Dihydro-2-thioxo-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethyl - ester (Verbindung Nr. 5)

Zu einer Lösung von 4,5 g (0,013 Mol) N-[(2-Chlor-4-pyridinyl)carbonyl]-Lalanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 3) in 45 ml einer 10 : 1-Mischung von 1,2- Propylenglycol : Wasser werden 15,2 g Natriumthiosulfat gegeben, und die Mischung wird 15 Stunden unter Rückfluß erwärmt. Die resultierende Reaktionsmischung wird mit 100 ml Wasser verdünnt und mit vier 100 ml-Portionen Methylenchlorid extrahiert. Die organische Schicht wird dreimal mit 100 ml Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wird unter verringertem Druck abdestilliert. Der erhaltene Rückstand wird durch Kristallisation aus einer Mischung von Aceton : Petrolether gereinigt, was das Titelprodukt als gelben Festkörper ergibt (Ausbeute: 85%).
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,68 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,75 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,28 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,55 (m, 1 H, CH Prolin), 4,75 (m, 1 H, CH Alanin, überführt in q, J = 6,8 Hz, nach Schütteln mit D20), 6,78 (dd, J&sub1; = 6,6 Hz, J&sub2; = 1,6 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,31 (d, J = 6,6 Hz, 1 H, Ar C-6), 7,88 (d, J = 1,6 Hz, 1 H, Ar C-3), 8,70 (br d, 1 H, Amid-NH, verschwindet nach Schütteln mit D&sub2;O).
¹³C-NMR (00013): 13,9 (CH&sub3; Ethylester), 15,5 (CH&sub3; Alanin), 24,7 (N-CH&sub2;-CH, Prolin), 28,7 (N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 46,8 (N-CH&sub2; Prolin), 48,1 (CH Alanin), 59,2 (CH Prolin), 61,2 (OH&sub2; Ethylester), 111,8 (Ar C-5), 130,9 (Ar C-3), 137,1 (Ar C-6), 139,7 (Ar C-4), 165,0 (CO), 171,7 (CO), 172,9 (CO), 178,7 (OS).
TLC (C): Rf = 0,50.
Ähnlich wurden die folgenden Verbindungen synthetisiert:
N-[(1,2-Dihydro-2-thioxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyi-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 6)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,54 (d, J = 6,9 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N =CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,75 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,55 (m, 1 H, CH Prolin), 4,85 (m, 1 H, CH Alanin), 6,72 (dd, J&sub1; = 6,1 Hz, J&sub2; = 7,6 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,65 (dd, J&sub1; = 6,1 Hz, J&sub2; = 1,7 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,46 (dd, J, = 7,6 Hz, J&sub2; = 1,7 Hz, 1 H, Ar C-6), 11,15 (br d, 1 H, NH).
TLC (C): Rf = 0,47.
N-[(1,6-Dihydro-6-thioxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 7)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,51 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 3,72 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,13 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,50 (m, 1 H, CH Prolin), 4,72 (m, 1 H, CH Alanin), 7,19 (d, J = 9,0 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,56 (dd, J, = 9,0 Hz, 1 H, Ar C-4), 7,83 (d, J = 2 Hz, 1 H, Ar C-2), 8,27 (br d, 1 H, NH).
TLC (C): Rf = 0, 55.

Beispiel 3

Synthese von N-[(2-Ethoxycarbonyl-6-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Bezugsverfahren)

Zu einer gerührten Lösung von 4,31 g (0,022 Mol) 6-Ethoxycarbonyl-2- pyridincarbonsäure in 100 ml wasserfreiem Pyridin werden 5,5 g (0,022 Mol) L- Alanyl-L-prolinethylesterhydrochlorid und 4,6 g N,N'-Dicyclohexylcarbodümid gegeben. Das Rühren wird 20 Minuten bei Raumtemperatur fortgesetzt, und der volumenreiche Niederschlag aus Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert und mit Aceton gewaschen. Das Lösungsmittel aus dem Filtrat und die Waschlösungen werden unter verringertem Druck abdestilliert, und das erhaltende Rohprodukt wird durch Säulenchromatographie über Kieselgel unter Verwendung von Chloroform : Aceton (10 : 1) als Eluens gereinigt. Der isolierte Festkörper wird aus einer Aceton/Isopropylether/Petrolether-Mischung kristallisiert, was 4,27 g gewünschtes Produkt als nadelförmige Kristalle ergibt (Ausbeute: 53%).
Ähnlich werden die folgenden Verbindungen synthetisiert:
N-[(5-Brom-1,2-dihydro-2-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 11)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,28 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,53 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 3,75 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,20 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,60 (m, 1 H, CH Prolin), 4,88 (m, 1 H, CH Alanin), 7,71 (d, J = 2,8 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,48 (d, J = 2,8 Hz, 1 H, Ar C-6), 10,10 (br d, 1 H, Amid-NH).
TLC (D): Rf = 0,76.
N-[(1,2-Dihydro-2-oxo-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 12)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,21 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,47 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 3,75 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,12 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,50 (m, 1 H, CH Prolin), 4,80 (m, 1 H, CH Alanin), 6,51 (dd, J&sub1; = 6,7 Hz, J&sub2; = 1,2 Hz, 1 H, Ar C-5), 6,97 (d, J = 1,2 Hz, 1 H, Ar C-3), 7,25 (d, J = 6,7 Hz, 1 H, Ar C-6), 8,46 (br d, 1 H, Amid-NH).
TLC (D): Rf = 0,49.
N-[(1,6-Dihydro-6-oxo-2-pyridinyl)carbonylj-]L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 13)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,22 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,48 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,57 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,17 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,48 (m, 1 H, CH Prolin), 4,90 (m, 1 H, CH Aianin), 6,73 (dd, J&sub1; = 9,2 Hz, J&sub2; = 0,8 Hz, 1 H, Ar C-5), 6,91 (dd, J&sub1; = 7,0 Hz, J&sub2; = 1,0 Hz, 1 H, Ar C-3), 7,44 (dd, J&sub1; = 9,0 Hz, J&sub2; = 7,0 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,46 (br d, 1 H, Amid- NH).
TLC (C): Rf = 0, 43.
N-[(1,6-Dihydro-6-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 14)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,22 (t, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,40 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,75 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,10 (q, J = 7,0 Hz, 2H, GH&sub2; Ethylester), 4,50 (m, 1 H, CH Prolin), 4,85 (m, 1 H, CH Alanin), 6,34 (d, J = 9,0 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1 H, Ar C-4), 7,97 (s, 1 H, Ar C-2), 8,65 (d, J = 6,8 Hz, Amid-NH).
TLC (D): Rf = 0,50.
N-[(2-Phenoxy-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 15)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,15 (t, J = 7,1 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,30 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 4,03 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,05 (q, J = 7,1 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,33 (m, 1 H, CH Prolin), 4,80 (m, 1 H, CH Alanin), 7,21 (m, 5H, O-Ph), 7,42 (m, 2H, Ar), 8,23 (m, 1 H, Ar), 8,78 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, Amid-NH).
TLC (A): Rf = 0,39.

N-[(2-Phenylthio-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 16)

1H-NMR (DMSO): 1,16 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,32 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 1,96 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH,-CH, Prolin), 3,69 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,06 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,35 (m, 1 H, CH Prolin), 4,72 (m, 1 H, CH Alanin), 7,21 (dd, J&sub1; = 8,0 Hz, J&sub2; = 4,8 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,40 (m, 5H, -S-Ph), 7,88 (dd, = 7,6 Hz, J&sub2; = 1,8 Hz, 1H, Ar C-4), 8,33 (dd, J&sub1; 4,8 Hz, J&sub2; = 1,8 Hz, 1H, Ar C-6), 8,87 (d, J = 8,0 Hz, 1 H, Amid-NH).
TLC (A): Rf = 0,33.
N-[(2-Phenylamino-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 17)
¹H-NMR (DMSO): 1,14 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,19 (d, J = 6,6 Hz, 3H, CH&sub3; Aianin), 1,72 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,70 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,03 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,20 (m, 1 H, CH Prolin), 4,56 (m, 1 H, CH Aianin), 7,22 (m, 5H, Ar), 7,45 (dd, J&sub1; = 6,0 Hz, J&sub2; = 4,6 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,60 (d, J = 8 Hz, 1 H, NH), 8,08 (m, 1 H, Ar), 8,47 (dd, J&sub1; = 4,8 Hz, J&sub2; = 1,4 Hz, 1 H, Ar C-6), 8,91 (s, 1 H, Amid-NH).
TLC (A): Rf = 0,22.
N-[(1,2-Dihydro-5-nitro-2-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 18)
¹H-NMR (DMSO): 1,17 (t, J = 7,1 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,29 (d, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,60 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,12 (q, J = 7,1 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,32 (m, 1H, CH Prolin), 4,78 (m, 1H, CH Alanin), 8,77 (d, J = 3,3 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,89 (d, J = 3,3 Hz, 1 H, Ar C-6), 10,01 (d, J = 6,9 Hz, 1 H, NH).
TLC (D): Rf = 0,74.
N-[(1,2-Dihydro-1-methyl-2-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-afanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 19)
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,16 (t, J = 7,0 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH,-CH, Prolin), 3,45 (s, 3H, N-CH&sub3;), 3,60 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,06 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,31 (m, 1 H, CH Prolin), 4,76 (m, 1 H, CH Alanin), 6,48 (dd, J&sub1; = J&sub2; = 7,0 Hz, 1 H, Ar C-5), 8,06 (dd, J, = 7,0 Hz, J&sub2; = 2,2 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,29 (dd, J&sub1; = 7,0 Hz, J&sub2; = 2,2 Hz, 1 H, Ar C-6), 10,23 (br d, 1 H, NH).
TLC (D): Rf = 0,51.
N-[(2-Acetylamino-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 20)
¹H-NMR (d&sub6;-DMSO): 1,17 (t, J = 7,5 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,33 (d, J = 7 Hz, 3H, CH&sub3; Aianin), 1,96 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 2,11 (s, 3H, CH&sub3; Acetylamino), 3,67 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,07 (q, J = 7,5 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,33 (m, 1 H, CH Prolin), 4,72 (m, 1 H, CH Alanin), 7,49 (d, J = 5 Hz, 1 H, Ar C-5), 8,41 (s, 1 H, Ar C-3), 8,43 (d, J = 5 Hz, 1 H, Ar C-6), 8,91 (br d, 1 H, NH, verschwindet nach Schütteln mit D&sub2;O), 10,66 (br s, 1 H, NH Acetylamino, verschwindet nach Schütteln mit D&sub2;O).
TLC (B): Rf = 0,25.

Beispiel 4

Synthese von N-[(1,2-Dihydro-2-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolinethylester (Verbindung Nr. 21)

Zu einer gerührten Lösung von 4,0 g (0,016 Mol) L-Alanyl-L-prolinethylesterhydrochlorid und 8 ml Triethylamin in 200 ml Dioxan, die bei Raumtemperatur gehalten wird, wird tropfenweise über 1 Stunde eine Suspension von 3,0 g (0,019 Mol) 2-Hydroxynicotinoylchlorid in 200 ml wasserfreiem Dioxan gegeben. Nach weiterem 3-stündigen Rühren bei Raumtemperatur wird das Lösungsmittel unter verringertem Druck abdestilliert. Das so erhaltene Rohprodukt wird in 500 ml Chloroform gelöst, und die Lösung wird zweimal mit 100 ml 5%-igem wäßrigem Natriumcarbonat gewaschen. Nach Trocknen der organischen Schicht über wasserfreiem Magnesiumsulfat wird das Lösungsmittel auf einem Rotationsverdampfer entfernt. Der Festkörper kristallisiert aus Methylenchlorid/Isopropylether, was 3,4 g Titelverbindung als weißen mikrokristallinen Festkörper ergibt (Ausbeute: 64%).
¹H-NMR (CDCl&sub3;): 1,23 (t, J = 7,2 Hz, 3H, CH&sub3; Ethylester), 1,47 (d, J = 6,8 Hz, 3H, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,70 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 2H, CH&sub2; Ethylester), 4,50 (m, 1 H, CH Prolin), 4,92 (m, 1 H, CH Alanin, überführt in q, J = 6,8 Hz, wenn mit D20 geschüttelt), 6,44 (dd, J&sub1; = 7,4 Hz, J&sub2; = 6,2 Hz, 1 H, Ar C-5), 7,65 (dd, J&sub1; = 6,2 Hz, J&sub2; = 2,2 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,48 (dd, J&sub1; = 7,4 Hz, J&sub2; = 2,2 Hz, 1 H, Ar C-6), 10,20 (br d, 1 H, Amid-NH, verschwindet, wenn mit D&sub2;O geschüttelt).
¹³C-NMR (CDCl&sub3;): 13,9 (CH&sub3; Ethylester), 17,6 (CH&sub3; Aianin), 24,7 (N-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 28,8 (N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 46,9 (N-CH&sub2; Prolin), 47,1 (CH Alanin), 58,9 (OH Prolin), 61,0 (CH&sub2; Ethylester), 107,4 (Ar C-5), 120,9 (Ar C-3), 138,9 (Ar C-6), 145,1 (Ar C-4), 163,4 (CO), 163,9 (CO), 171,7 (CO), 172,2 (CO).
TLC (C): Rf = 0, 36.

Beispiel 5

Synthese von N-([6-Chlor-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 22) L-Alanyl-L-prolin (1,0 g, 5,4 mMol) wird in einer Mischung von 10,8 ml 0,5 N Kaliumhydroxid und 750 mg (5,4 mMol) wasserfreiem Kaliumcarbonat gelöst, und 10 ml Acetonitril werden zugesetzt. Nach Kühlen in einem Eisbad wird eine konzentrierte Acetonitril-Lösung von 1,2 g 6-Chlornicotinoylchlorid tropfenweise dazugegeben, während man rührt und den pH der Mischung mit 1 N Kaliumhydroxid, wie benötigt, bei 12 bis 13 hält. Das Rühren wird 2 zusätzliche Stunden bei Raumtemperatur fortgesetzt, dann wird die Lösung mit wäßriger Salzsäure auf pH 6 neutralisiert, und das Lösungsmittel wird unter verringertem Druck abdestilliert. Der so erhaltene Rückstand wird in 50 ml absolutem Ethanol suspendiert, das verbleibende Kaliumchlorid wird durch Zentrifugation abgetrennt, und das Lösungsmittel der klaren Lösung wird unter verringertem Druck abdestilliert. Das Rohprodukt wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie gereinigt, wobei man absolutes Ethanol als Eluens verwendet, wodurch man 700 mg gewünschtes Produkt isoliert (Ausbeute: 40%).
¹H-NMR (DMSO + D&sub2;O): 1,26, 1,32 (zwei d, J = 6,8 Hz, CH&sub3; Alanin), 1,90 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH,-CH&sub2; Prolin), 3,50 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,15 (m, 1 H, CH Prolin), 4,70 (m, 1 H, CH Alanin), 7,62 (dd, J&sub1; = 8,2 Hz, J&sub2; = 3,0 Hz, 1 H, Ar C-5), 8,32 (dd, J&sub1; = 8,2 Hz, J&sub2; = 1 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,87 (d, J = 3,0 Hz, 1 H, Ar C 2).
¹³C-NMR (DMSO + D20)*: 16,6, 18,1 (CH&sub3; Alanin), 22,3, 24,7 (N-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 29,4, 31,7 (N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 46,8, 47,6, 47,7 (N-CH&sub2; Prolin und CH Alanin), 61,1, 61,9 (CH Prolin), 124,8 (Ar C-5), 129,6 (Ar C-3), 139,6 (Ar C-4), 149,9 (Ar C-2), 153,4 (Ar C-6), 164,5 (CO Amid-Bindung Pyridinring-Dipeptid), 171,2, 170,7 (CO Peptid-Bindung), 175,6 (COOH Prolin).
TLC (E): Rf = 0,54.
Ähnlich wir die folgende Verbindung hergestellt:
N-[(2-Ethoxy-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 23) 1H-NMR (DMSO + D20)*: 1,26, 1,32 (zwei d, J = 6,8 Hz, CH&sub3; Alanin), 1,90 (m, 4H, N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 3,50 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,15 (m, 1H, CH Prolin), 4,70 (m, 1 H, CH Alanin), 7,62 (dd, J&sub1; = 8,2 Hz, J&sub2; = 3,0 Hz, 1 H, Ar C-3), 8,32 (dd, J&sub1; = 8,2 Hz, J&sub2; = 1 Hz, 1 H, Ar C-4), 8,87 (d, J = 3,0 Hz, 1 H, Ar C-6).
TLC (D): Rf = 0,35.

Beispiel 6

Synthese von N-[(6-Chlor-2-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 24)

Eine Lösung von 4,5 g (0,013 Mol) N-((6-Chlor-2-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl- L-prolinethylester (siehe Beispiel 1) in 42 ml 1 N ethanolischem Kaliumhydroxid wird 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die resultierende Reaktionsmischung wird mit 250 ml absolutem Ethanol verdünnt und mit 6 N ethanolischer Chlorwasserstoffsäure neutralisiert. Der so gebildete Niederschlag aus Kaliumchlorid wird abfiltriert, mehrere Male mit absolutem Ethanol gewaschen, und das Lösungsmittel wird unter verringertem Druck entfernt. Der Rückstand wird durch Säulenchromatographie über Kieselgel gereinigt, wobei man Ethanol als Eluens verwendet, was die Titelverbindung als farblosen Festkörper liefert (Ausbeute: 73%).
¹H-NMR (DMSO)*: 1,36, 1,32 (zwei d, J = 6,8 Hz, CH&sub3; Alanin), 2,10 (m, 4H, N- CH&sub2;-CH&sub2;-CH, Prolin), 3,65 (m, 2H, N-CH&sub2; Prolin), 4,30 (m, 1 H, CH Prolin), 4,51, 4,75 (zwei m, 1 H, CH Alanin), 7,78 (dd, J&sub1; = 7,4 Hz, J&sub2; = 1,6 Hz, 1 H, Ar), 8,03 (dd, J&sub1; = 7,4 Hz, J&sub2; = 1,6 Hz, 1H, Ar), 8,10 (dd, J&sub1; = = 7,4 Hz, 1H, Ar C-4), 8,70 (br d, 1 H, Amid-NH, verschwindet, wenn mit D&sub2;O geschüttelt).
¹³C-NMR (DMSO)*: 17,3, 18,6 (CH&sub3; Ajanin), 21,8, 24,6 (N-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 28,6, 30,8 (N-CH&sub2;-CH&sub2;-CH&sub2; Prolin), 46,3, 46,5, 46,7, 46,8 (N-OH&sub2; Prolin und CH Alanin), 58,7, 59,3 (CH Prolin), 121,5 (C-3 Ar), 127,8 (C-5 Ar), 141,9 (C-4 Ar), 149,6 (Ar), 150,4 (Ar), 161,8 (CO Amid-Bindung Pyridinring-Dipeptid), 170,3, 170,9 (CO Peptid-Bindung), 173,5, 173,8 (COOH Prolin).
TLC (E): Rf = 0,55.
*: Duplizität der Signale beruht auf der Anwesenheit der Isomeren z-cis und ztrans durch die Peptidverknüpfung L-Ala-L-Pro.
Mittels des gleichen Verfahrens werden die folgenden freien Säuren aus ihren entsprechenden Estern erhalten:
N-[(2-Chlor-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 25), TLC (E): Rf = 0,49
N-[(2-Chlor-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 26), TLC (E): Rf = 0, 55
N-[(1,2-Dihydro-2-thioxo-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 27), TLC (E): Rf = 0,46
N-[(1,2-Dihydro-2-thioxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 28), TLC (E): Rf = 0,45
N-[(1,6-Dihydro-6-thioxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 29), TLC (E): Rf = 0,51
N-[(1,2-Dihydro-2-oxo-4-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 33), TLC (F): Rf = 0,34
N-[(1,6-Dihydro-6-oxo-2-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-proün (Verbindung Nr. 34), TLC (F): Rf = 0,40
N-[(1,6-Dihydro-6-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 35), TLC (F): Rf = 0,37
N-[(1,2-Dihydro-2-oxo-3-pyridinyl)carbonyl]-L-alanyl-L-prolin (Verbindung Nr. 36), TLC (F): Rf = 0,37
Die Struktur der oben angegebenen Säuren ist durch ihre spektroskopischen Daten bestätigt.

Beispiel 7

Pharmakologische Ergebnisse

A. Hemmung von Angiotensin I-induzierten Kontraktionen im Meerschweinchen- Ileum

Segmente mit 1,5 cm von frisch herausgeschnittenem und gewaschenem terminalem Ileum wurden in 25 ml-Gewebebädern suspendiert, die Tyrode-Lösung bei 31ºC enthielten und mit 95% 02-5% CO&sub2; durchblubbert wurden. Bei einer anfänglichen Belastung von 1,0 g wurden die Ruhespannung nach Äquilibrierung und die Antworten auf Angiotensin I oder Angiotensin II (beide bei 100 ng/ml) überwacht und mittels eines isometrischen Ealing-Umwandlers und eines Lectromed-Polygraphen aufgezeichnet. Mehrere Verbindungen dieser Erfindung wurden in diesem System getestet, wobei man sie 2 Min. vor dem jeweiligen Agonisten zu dem Bad gab.
Bei End-Badkonzentrationen von 10 ng/ml wurde die Hemmwirkung der getesteten Verbindungen bezüglich der Angiotensin I-induzierten Kontraktionen bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle I angegeben. Alle darin angegebenen % Hemmungen sind der Durchschnitt von Ergebnissen, die mit Segmenten von Ilea von 5 Meerschweinchen erhalten wurden. Bei End-Badkonzentrationen von 1 ug/ml erzeugte keine der getesteten Verbindungen eine nennenswerte Modifikation der Kontraktionen, die durch Angiotensin II induziert wurden. Tabelle I

B. Anti-Hochdruckwirkung bei Ratten mit spontanem Hochdruck (SHR)

In diesem anerkannten Hochdruckmodell wurden männliche Ratten mit spontanem Hochdruck (315 bis 376 g) mit systolischen Blutdrücken (SBD) > 160 mm Hg verwendet. Die systolischen Blutdrücke wurden bei bewußten Tieren mittels eines Schwanzmanschetten-Verfahrens (FS-40 Blutdruck/Puls-Monitor) aufgezeichnet. Vor allen Messungen wurden die Ratten in einen Einschlußzylinder gesetzt. Die Basaldrücke wurden aufgezeichnet, und dann wurden die Testverbindungen (einschließlich Captopril als Bezug) bei Dosen von 30 mg/kg auf oralem Weg verabreicht (n = 5/Gruppe). Die Drücke wurden wiederum 1, 2, 3, 4 und 24 h nach Verabreichung der Testverbindungen überwacht. Eine Kontrollgruppe (n = 18) wurde für Vergleichszwecke eingeschlossen.
Unter den obigen Bedingungen zeigten die Verbindungen Nr. 27 und 21 eine signifikante Anti-Hochdruckwirkung. 1 h nach Verabreichung war in den Gruppen, die mit der Verbindung Nr. 27 (28,4 ± 3,16 mm Hg) und Captopril (17,2 ± 8,49 mm Hg) behandelt wurden, die durchschnittliche Verringerung der SBDs signifikant von der Kontrollgruppe verschieden. Die Verringerungen waren bei der Verbindung Nr. 27 auch nach 2, 3, 4 und 24 h signifikant von der Kontrolle verschieden, wohingegen Captopril nach 24 h inaktiv war (Duncan-Kramer-Test, p < 0,05). Die mittleren Basal- SBDs (167,2 bis 169,0 mm Hg) waren von demjenigen der Kontrolle (167,8 ± 0,61 mm Hg) nicht signifikant verschieden.
Die Verbindung Nr. 21 zeigte bei 30 mg/kg nur nach 2 h eine signifikante Verringerung; bei einer Dosis von 45 mg/kg waren die Verringerungen auch nach 2, 3, 4 und 24 h signifikant.
Anti-Hochdruckwirkungen wurden in diesem Modell auch beobachtet, wenn die Verbindung Nr. 27 bei oralen Dosen von 7,5 und 15 mg/kg getestet wurde.

Claims

1. Dipeptid-Derivate der allgemeinen Formel (I)

einschließlich deren tautomere Formen,

worin:

n 0 oder 1 ist;

R OH, SH, NH&sub2;, Halogen, OR&sub4;, SR&sub4;, NHR&sub4; oder N(R&sub4;)&sub2; ist, wobei R&sub4; aus C&sub1;-C&sub6;- Alkyl-, gegebenenfalls substituiert, Aryl- und Acylgruppen ausgewählt ist;

R&sub1; OH, C&sub1;-C&sub6;-Alkoxy, gegebenenfalls substituiert, Aryl-C&sub1;-C&sub6; alkoxy oder Aryloxy ist;

R&sub2; C&sub1;-C&sub6; Alkyl ist;

R&sub3; Halogen, NO&sub2;, C&sub1;-C&sub6; Alkyl oder Aryl-C&sub1;-C&sub6; alkyl ist;

und deren pharmazeutisch verträgliche Salze.

2. Dipeptid-Derivate gemäß Anspruch 1, worin n in der allgemeinen Formel (I) 0 ist.

3. Dipeptid-Derivate nach irgendeinem der Ansprüche 1 und 2, worin R in der allgemeinen Formel (1) OH, SH, Cl, OR&sub4;, SR&sub4; oder NHR&sub4; ist, wobei R&sub4; ausgewählt ist aus C&sub1;-C&sub6; Alkyl-, Aryl- oder Acylgruppen.

4. Dipeptid-Derivate nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 3, worin R in der allgemeinen Formel (1) OR6, SR&sub5;, Cl oder NHR&sub7; ist, wobei R&sub6; Wasserstoff, Wasserstoff, Methyl, Ethyl oder Phenyl, ist; und

R&sub7; Acyl oder gegebenenfalls substituiertes Phenyl, insbesondere Acetyl oder Phenyl, ist.

5. Dipeptid-Derivate gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4, worin R&sub1; in der allgemeinen Formel (I) OH oder C&sub1;-C&sub6; Alkoxy, insbesondere OH, Methoxy oder Ethoxy, ist.

6. Dipeptid-Derivate gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 5, worin R&sub2; in der allgemeinen Formel (1) Methyl ist.

7. Dipeptid-Derivate gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 6, worin R&sub3; in der allgemeinen Formel (I) NO&sub2; oder Halogen ist.

8. Verfahren zur Herstellung von Dipeptid-Derivaten gemäß Anspruch 1, umfassend die Umsetzung einer Carbonsäure der allgemeinen Formel (IIa) mit einem Dipeptid der allgemeinen Formel (III):

worin n, R, R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; wie in Anspruch 1 definiert sind, vorausgesetzt daß R&sub1; von OH verschieden ist, in Gegenwart eines geeigneten Kupplungsmittels wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, gegebenenfalls gefolgt von Hydrolyse, Salzbildung und/oder jedem anderen für die Umwandlung der erhaltenen Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung gemäß Anspruch 1 erforderlichen Schritt.

9. Verfahren zur Herstellung von Dipeptid-Derivaten gemäß Anspruch 1, umfassend die Umsetzung eines Acylhalogenids der Formel (IIb) mit einem gegebenenfalls in Salzform vorliegenden Dipeptid der Formel (III):

worin X Halogen, insbesondere Cl, ist und n, R, R&sub1;, R&sub2; und R&sub3; wie in Anspruch 1 definiert sind;

in Gegenwart einer organischen Base (R&sub1; + OH) oder einer anorganischen Base (R&sub1; = OH), gegebenenfalls gefolgt von Hydrolyse oder irgendeinem anderen Schritt, der für die Umwandlung der erhaltenen Verbindung der Formel (I) in eine andere Verbindung gemäß Anspruch 1 erforderlich ist.

10. Pharmazeutische Zusammensetzungen, umfassend einen pharmazeutisch verträglichen Träger und wenigstens eine Verbindung gemäß irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7.