RO111369B1

RO111369B1 - Derivati dipeptidici cu activitate antihipertensiva si procedee de obtinere a acestora

Info

Publication number: RO111369B1
Application number: RO92-01349A
Authority: RO
Inventors: Moliner Jose Repolles; Coy Francisco Pubill; Llorente Lydia Cabeza; Falco Carlos Malet
Original assignee: Lacer Sa
Priority date: 1991-02-27
Filing date: 1992-02-26
Publication date: 1996-09-30
Also published as: AU1278392A; ATE174343T1; US5432159A; BR9204779A; CZ280952B6; DE69130605T2; JPH05507295A; PL167915B1; NO924076L; HUT62313A; EP0500989B1; ES2037613B1; DE69130605D1; NO924076D0; PT100148B; CZ322092A3; HU9203324D0; PL296625A1; EP0500989A1; FI924850A0

Description

Prezenta invenție se referă la derivați dipeptidici cu activitate antihipertensivă, care acționează ca inhibitori ai enzimei modificatoare a angiotensinei și la un procedeu de obținere a acestora. Acești noi compuși 5 pot fi formulați, împreună cu purtători acceptabili farmaceutic în compoziții farmaceutice utile în tratamentul hipertensiunii și a altor tulburări cardiovasculare a căror patofiziologie implică sistemul io renină-angiotensivă-aldosteronă.

In timpul anilor 1970 farmacoterapia hipertensiunii arteriale a suferit un important progres, datorită descoperirii agenților prezentând acțiune directă asupra siste- 15 melor renină-angiotensivă și kaeikreină-kinină și, în special datorită sintezei primului compus care inhibă efectiv transformarea enzimatică a decapeptidei angiotensină I în angiotensină II potențial vasopresoare, 2 0 adică, acționând ca inhibitori ai enzimei de transformare a angiotensinei (ACE). Această enzimă, importantă fiziologic degradează de asemenea peptida vasodilatatoare bradikinină. Mai mulți inhibitori ai ACE s-au 25 dovedit capabili, pe animale experimentale și la oameni, de a inhiba efectele personale ale angiotensinei I administrate intravenos, și au prezentat activitate antihipertensivă pe modele animale și la pacienți hipertensivi. A 30 fost demonstrat, de asemenea, faptul că aceștia sunt potriviți pentru tratamentul crizei cardiace congestive.

Brevetul US 41Q5776 prezintă N-acil derivați de aminoacizi, utili în tratamentul 35 hipertensiunii. Compușii implicați în mod specific sunt derivații mercapto ai N - acil- L - pralinei incluzând cel mai reprezentativ membru al seriei, adică D-3-mercapto-2metilpropanoil-L-prolină sau captopril, primul 4 o agent antihipertensiv inhibitor de ACE activ oral care a fost făcut accesibil în lume.

Altă realizare importantă în acest domeniu, dar cu un mod de acțiune total diferit, este reprezentată de compușii 4 5 dezvăluiți în EP-A-12401, care sunt carboxialchil derivați de peptide și ai căror membri cei mai reprezentativi sunt enalaprilat, enalapril și lisinopril.

înțelegere mai bună a structurii 5o

ACE și a necesităților structurale esențiale respective pentru inhibitorii potențiali, ca și un interes în realizarea de noi compuși cu diferite profiluri de potență, cinetică și/sau toxicitate, au condus la o dezvoltare continuă a noii clase de inhibitori-ACE. Din mai multe studii ale relației dintre structură și activitate s-a tras concluzia că se poate realiza o inhibare eficace a enzimei numai cu o moleculă care prezintă cel puțin trei regiuni sau părți care se pot distinge clar, așa cum este reprezentată prin următoarea structură generală:

COOH

Regiunea A prezintă, de obicei, o grupare carboxil în poziția a, grupă care se leagă puternic la un situs cationic al structurii enzimei. In mai multe studii s-a descoperit că L-propina este cea mai bună substructură pentru această regiune sau parte, deși inelul său pirolidinic poate fi prezentat, de asemenea, într-o formă modificată.

Regiunea B trebuie să conțină ^rgrupare funcțională cu o capacitate specifică de a lega cationul Zn⁺⁺ localizat în situsu activ al enzimei. Această grupare de legare a zincului, de obicei una acidă, poate fi o grupare mercapto (captopril și analogii) sau o grupare carboxil (enalaprilat, lisinopril și analogii) ca și orice grupare precursoare care poate da naștere unei grupări active prin transformarea metabolică. Exemple de inhibitori ACE cu grupări precursoare sunt derivații tioacil alacepril și pivalopril și esterii carboxilici enalapril și perindopril. Unele clase de inhibitori au alte grupări acide ii regiunea B, de exemplu -P(0) (OH) - sau P(O](OH)O- sub formă liberă sau esterificată. In orice caz, toți liganzii de zinc cunoscuți sunt legați invariabil la o grupare alchil sau, uneori, la o grupare cicloalchil, dar niciodată, ca parte a unei structuri aromatice, așa cum este descris în M.J.Wyvratt, A.A.Patchett, Medicinal Research Reviews 5, 483 - 531, 1985.

Regiunea C acționează ca o punte între situsurile active ale regiunilor A și B și în aparența trebuie să satisfacă necesitățile stereochimice definite, întrucât compușii cei mai activi prezintă o unitate derivată de la un

RO 111369 Bl

L-amino acid (de exemplu, o unitate de Lalamină sau L-lisină) în structura dipeptidică corespunzătoare. In grupa de tip captopril, aceeași stereochimie trebuie să fie prezentă la atomul de C2 al unității 2-metil-propanoil.

Acest model general simplificat se aplică la aproape toate structurile diferite ale inhibitorilor ACE cunoscuți, în fiecare clasă chimică particulară urmând a fi satisfăcute cerințe speciale sau suplimentare. In acest context, cele mai bine cunoscute relații structură-activitate sunt desigur cele elucidate în seriile mecapto acil-aminoacid (grupa captopril] și carboxialchil dipeptidă (analogii de analapril/lisinopril], Deși au fost realizate variații sistematice în fiecare dintre cele trei părți structurale, trebuie menționat că, în ambele din seriile generale menționate, diferitele încercări de a găsi grupări de legare a zincului altele decât mercapto sau carboxi au condus de obicei la compuși inactivi sau cel puțin la o pierdere considerabilă în activitatea compușilor impliciți. In particular, în clasa derivaților dipeptidici, până acum nu au fost dezvăluiți inhibitori ACE eficace cu carboxamide Nsubstituite sau tioamide N-substituite ca liganzi pentru zinc.

Invenția de față oferă noi derivați dipeptidici cu activitate de inhibare ACE și prezentând, ca trăsătură fundamentală și distinctivă, o substructură constituită dintrun ciclu de piridină având atașat la acesta o grupare de legare potențială a zincului, în mod caracteristic un substituent - a selectat din, de exemplu, OH, SH, NH_a și CDOH sau grupări funcționale înrudite sau precursori ai acestor grupări. Această substructură de piridină a - substituită, legată printr-o grupare carbonil la gruparea amino terminală a dipeptidei, este localizată într-o porțiune a structurii generale care corespunde regiunii B discutate mai sus. Ca regiunea A, a fost aleasă substructură de Lprolină, cu un aminoacid cum ar fi L-alanină în regiunea C de punte.

Datorită trăsăturilor structurale specifice, menționate, derivații dipeptidici din invenția de față nu pot fi incluși sau catalogată în nici una dintre clasele generale sau în oricare dintre familiile chimice particulare dezvăluite până în prezent în domeniul inhibitorilor de ACE.

In clasa generală a dipeptidelor, compușii din prezenta invenție sunt în mod clar diferiți de carboxilalchil dipeptide, întrucât aceștia au o structură arilcarbonildipeptidică. Aranjamentele structurale menționate sunt foarte neobișnuite în domeniul inhibitorilor de ACE naturali sau sintetici. Mai mult, (a - substituit - piridinil) carbonil dipeptidele nu au fost dezvăluite b < sugerate în literatura de specialitate anterioară după cum se poate menționa, de exemplu, din recenziile clasice privind acest subiect de E.W. Petrillo și M.A Ondetti (Medicinal Research Reviews 2, 1 - 41, 1982] și de M.J. Wyvratt și A.A. Patchett.

Suplimentar, dintr-un punct de vedere practic, trebuie ținut cont că inhibitorii carboxilalchil dipeptidici din stadiul tehnicii au un carbon asimetric (în regiunea B) în plus față de cei doi carboni asimetrici ai substructurii dipeptidice, ceea ce face ca sinteza lor să fie foarte complexă și/sau conduce la randamente scăzute datorită rezoluției optice necesare pentru produsele brute. întrucât compușii din prezenta invenție nu au acest atom de carbon suplimentar, asimetric, aceștia pot fi obținuți, cu ușurință cu randamente bune prin introducerea radicalului piridinil-carbonil, în dipeptidă dorită, prin intermediul grupării NH₂ terminale al acesteia.

In aspectul său cel mai larg, prezenta invenție, se referă la noi derivați dipeptidici cu activitate antihipertensivă având formula generală I:

--CONH-CH-CON \

W γ

COR, (I) incluzând și formele tautomere ale acestora, în care: n este □ sau un întreg de la 1 la 3; R este OH, SH, COOH, NH_a, halogen, OP, SR₄ C00R₄, NHR₄ sau N(R₄)₂;

R₄ fiind selectat dintre grupări alchil inferioare, opțional substituite, arii și acil;

R, reprezintă grupări OH, alcoxi inferioare, opțional substituite, arii alcoxi inferior, ariloxi sau amino disubștituite;

R₂ este selectat dintre grupări alchil, inferioare și amine alchil inferioare;

R_a reprezintă halogen, N0₂, alchil inferior,

RO 111369 Bl haloalchil inferior, arii alchil inferior sau arii; și săruri acceptabile farmaceutic ale acestora.

De asemenea, ciclul de piridină substituit poate fi legat la structura carbonil-dipeptidică prin intermediul pozițiilor a, β sau γ ale ciclului piridinic, una dintre poziții fiind deja ocupată de gruparea R.

Sărurile acceptabile farmaceutic ale compușilor cu formula I, de exemplu, când R, este OH și/sau R este COOH, includ pe acelea cu metale alcaline, cum ar fi sodiu sau potasiu sau cu metale alcalinopământoase, cum ar fi calciu. Acestea includ, de asemenea, săruri de amoniu, de exemplu, cu amoniac, amine substituite sau amino acizi bazici,n în formula generală (I) este O sau 1, preferabil O.

După cum bine se știe în domeniul heterociclilor conținând azot, derivații de piridină a - substituiți cu grupări hidroxi sau mercapto sunt prezenți, de obicei, în formele lor tautomerice, adică ca 2piridinone și 2-piridintione respectiv, adică, ca tipuri particulare ale carboximidelor și tioamidelor ciclice. Din acest motiv, se subînțelege că, compușii cu formula generală I, în care R este OH sau SH, pot, de asemenea, să prezintă acest tautomerism, formele amidice respective fiind predominante de obicei. Deși în formula (I) este arătată o structură aromatică clasică, această reprezentare structurală specifică a fost aleasă numai în scopul simplificării, întrucât prin aceasta, este posibil să fie incluse toate grupările funcționale diferite R, într-o unică formulă generală. Mai mult, această reprezentare structurală prezintă cu claritate relația între unele grupări R specifice, de exemplu, în cazul grupărilor 0R₄ diferite și gruparea OH (nesubstituită]. In chimia piridinei se știe că, de exemplu, a alcoxi - piridinele pot fi hidrolizate la a hidroxi-piridinele corespunzătoare și, apoi, la tautomerii α-piridinone mai favorabile.

Prin urmare, va fi evident că formula generală I nu implică un tautomerism hidroxi - sau mercapto preferat, în mod specific, în cazul în care R este OH sau SH. Din contră, formele tautomere predominante în acest ultim caz pot fi reprezentate prin formula generală la:

r₅ (la) în care, A reprezintă O sau S, R_v R₂ și R₃sunt așa cum au fost definiți mai sus, și R₅este hidrogen sau alchil inferior.

In formula la, numai compușii pentru care R₅ este hidrogen, sunt forme tautomere adevărate ale compușilor cu formula I, în care: R este OH sau SH. Compușii cu formula la în care: R₅ este alchil inferior, deși sunt, de asememea, incluse în prezenta invenție, în sens strict nu sunt forme tautomere ale compușilor cu formula (I) în care: R este 0R₄ sau SR₄, R₄fiind gruparea alchilică inferioară menționată.

Derivații dipeptidici din prezenta invenție sunt cei în care, în formula generală I de mai sus, n este O sau 1, preferabil O, și R, R_v R₂ și R₃ sunt definiți după cum urmează:

R este OH, SH, COOH, Cl, 0R₄, SR₄, NHR₄ sau C00R₄, R₄ fiind selectat dintre grupări alchil inferioare, arii sau acil, R este OR₅, SR₅, Cl, NHR₆ sau COOR₇, în care R₅este hidrogen, alchil inferior sau fenil opțional substituit, preferabil hidrogen, mei etil, sau fenil, R₆ este acil sau fenil, opțional substituit, preferabil acetil sau fenil și R₇este hidrogen sau alchil inferior, preferabil hidrogen, metil sau etil;

R,: OH sau alcoxi inferior, preferabil OH, metoxi sau etoxi;

R₂: alchil inferior, preferabil metil;

R₃: N0₂ și/sau halogen, în special, N0₂și/sau Br.

Termenii alchil inferior, alcoxi inferior, etc. așa cum sunt utilizați aici reprezintă următoarele grupări:

- alchil inferior: grupări alchil liniare sau ramificate având 1 la 6, preferabil 1 la 4 atomi de carbon, cum ar fi metil, etil, npropil, Apropii și butii; cel mai preferabil metil și etil;

- alcoxi inferior: grupări alchil inferioare așa cum au fost definite mai sus, atașate la un atom de oxigen, preferabil 0CH₃ și 0C₂H₅;

*

RO 111369 Bl

- halogen: F, Cl, Br și I, în special, Cl și Br;

- arii: preferabil având 6 la 14 atomi de carbon, în special 6 la 10 atomi de carbon, cum ar fi fenil și naftil, substituit opțional cu unul sau mai mulți substituenți selectați dintre, de exemplu, alchil inferior (cum ar fi metil), alcoxi inferior (cum ar fi metoxi), halogen (cum ar fi Cl și F) și N0₂;

- acil: grupări (alchil și arii) carbonil, preferabil având un total de 1 la 10, în special 2 la 7, atomi de carbon, cum ar fi acetil, propionil, pivaloil și benzoil;

- alchil inferior substituit: grupările alchil inferioare de mai sus (în special, metil și etil) substituite cu unul sau mai mulți substituenți preferabil unul sau doi, în special, un substituent selectat dintre grupările alcoxi inferioare de mai sus (cum ar fi metoxi și etoxi), halogen (în special, F și Cl), OH, aciloxi (în care grupările acil sunt definite ca mai sus) și di (alchil inferior) amino (alchilul inferior fiind definit ca mai sus), exemple specifice de grupări alchil inferioare substituite fiind l-acetoxi-etil (axetil), pivaloiloximetil (pivoxil) și dimetilaminoetil;

- haloalchil inferior: grupările alchil inferioare de mai sus (în special, metil și etil) substituite cu unul sau mai mulți atomi de halogen, preferabil, selectați dintre F, Cl și Br, în special, F și Cl, cum ar fi CF₃, CCI₃, CHCI₂ și CH₂CI;

- arii alchil inferior: grupările arii de mai sus (în special, fenil substituit opțional) atașate la o grupare alchilică inferioară așa cum a fost definită mai sus, cum ar fi benzii și 1 -feniletil și 2-fenetil;

- amino disubstituit: o grupare NH₂ în care ambii atomi de hidrogen au fost înlocuiți de grupări conținând carbon, în special, grupări alchil inferioare așa cum au fost definite mai sus, exemple specifice ale acestora fiind dimetilamino și dietilamino.

Restul termenilor pot fi deduși din definițiile de mai înainte. De exemplu, alcoxi inferior substituit semnifică o grupare alchil inferioară substituită, așa cum a fost definită, atașată la un atom de oxigen.

Atunci când n în formula generală I are valoarea 1, gruparea R₃ este localizată de preferință într-o poziție β a ciclului piridinic, și în special, în poziția β - opusă poziției a - ocupate de gruparea R.

Compușii de formula generală I, ca și subgrupa de compuși care pot fi reprezentați, de asemenea, prin formula la, prezintă 2 centre de asimetrie ale substructurii dipeptidice și sunt, astfel, în stare să existe în mai multe forme stereoizomere. Deși această invenție prezintă fiecare dintre aceste forme stereo izomerice individuale și orice amestecuri ale acestora, compușii preferați sunt cei în care ambele centre asimetrice au confiquratia S.

Compușii de formula I sunt inhibitori ai enzimei de transformare a angiotensinei și sunt utili ca agenți antihipertensivi la mamifere (inclusiv oameni). Aceștia pot fi utilizați, de asmenea, în tratamentul crizei cardiace congenitive și a altor tulburări patofiziologice asociate cu sistemul reninăangiotensină-aldosteronă.

Astfel, un alt aspect al prezentei invenții este reprezentat de derivații dipeptidici utilizați sub formă de compoziții farmaceutice conținând cel puțin un compus de formula generală l/Γη combinație cu unul sau mai mulți purtători sau excipienți acceptabili farmaceutic și opțional, adjuvanți și/sau agenți complementari, etc., în formă solidă sau lichidă și preferabil sub formă de unități de dozare. Compozițiile din prezenta invenție pot, cel mai bine, să fie adaptate pentru administrare orală, deși și alte căi de administrare cum ar fi parenterală, reci· sau prin inhalare pot fi chiar și mai avantajoase în anumite situații. Compozițiile farmaceutice din prezenta invenție pot fi preparate în mod convențional, de exemplu, prin simpla amestecare a ingredientelor compoziției dorite. Purtătorii sau excipienții adecvați sunt cei convenționali și bine cunoscuți persoanelor de specialitate Administrarea orală este realizată, cel mai bine, cu formulări sub formă de tablete (drajeficate sau nedrajeficate], capsule sau lichide, cum ar fi soluții, siropuri sau suspensii. Forma orală solidă poate fi de tip convențional, adică cu caracteristici de eliberare de durată.

In scopul tratării hipertensiunii și/sau altor tulburări posibile pentru care activitatea biologică a acestor noi compuși poate fi utilă, sunt adecvate niveluri de

RO 111369 Bl dozări de ordinul 2 la 1OOO mg de pacient pe zi, în doze unice sau multiple, deși nivelul de dozare individuală pentru fiecare pacient va depinde de activitatea compusului specific utilizat, de tipul și gravitatea afecțiunii ca și de factori individuali, cum ar fi, greutatea corporală, sexul și alți factori cunoscuți în mod uzual specialiștilor în domeniu. Pentru tratamentul hipertensiunii, doza se va situa preferabil în domeniul de la 5 la 500 mg la pacient pe zi.

Compușii, conform acestei invenții, pot fi administrați, de asemenea, cu alți compuși activi farmaceutic, de exemplu, agenți hipertensivi și alți agenți utili în terapia cardiovasculară, cum ar fi diuretice sau blocanți β - adrenaegici. Acești alți compuși activi pot fi, de asemenea, incorporați în compoziția farmaceutică din prezenta invenție împreună cu compușii noi având formula generală I.

Compușii cu formula generală I, pot fi preparați printr-unul sau mai multe procedee descrise mai jos. Va fi limpede specialiștilor în domeniu că pot fi adoptate și alte căi de sinteză binecunoscute în chimia peptidelor.

Primul procedeu pentru obținerea unor derivați dipeptidici constă în reacția unui acid carboxilic de formula Ila cu o dipeptidă de formula III.

CORi (Ha) (III) în care: R, R₁₍ R₂, R₃ și n sunt așa cum au fost definiți mai sus, cu condiția că R este diferit de COCH și Rt diferit de OH în prezența unui agent de cuplare adecvat, N, Ν' - diciclohexilcarbodiimidă (DCC) urmată opțional de hidroliză și transformare în sare. In general, reacția este realizată într-un solvent organic bazic adecvat și la temperatura camerei.

Dipeptidă de formula III este folosită, de preferință, sub forma unui ester cum ar fi un ester alchilic inferior. Gruparea aminică liberă poate fi, după dorință, transformată în sare, de exemplu, cu acid clorhidric. Exemple de solvenți organici bazici potriviți sunt piridină și un amestec dintr-o amină alifatică terțiară (de exemplu, trietilamină) cu un solvent inert, preferabil halogenat (cum ar fi cloroform sau clorură de metilen). Când se pleacă de la dipeptidă preferată esterificată, compusul de formula I dorit, este obținut ca monoester (în substructura de L-prolină) în cazul în care R este o grupă diferită de C00R₄, sau ca diester, când se utilizează un compus de formula Ila cu R = C00R₄ (R₄ = alchil, arii).

Va fi evident că, atunci când dipeptidă utilizată ca materie primă are o grupare aminică suplimentară, adică, atunci când R₂este amino alchil inferior, respectva grupare aminică trebuie să fie prezentă sub formă protejată, de exemplu, protejată cu o grupare benzioxicarbonil sau orice altă grupare care poate fi îndepărtată cu ușurință prin metode cunoscute specialiștilor.

Conform unei variante a acestui procedeu, se poate folosi în principiu aceeași procedură, dar dipeptidă de formula III se substituie cu un aminoacid esterificat de formula H₂N-CH(R₂)-C0R₁. Esterul N-(cc substituit-piridinil) carbonil-aminoacidului astfel obținut poate fi apoi hidrolizat, reacționând acidul liber rezultat cu un este^Fal L-prolinei prin reacția cu DCC sau ρπ>. orice altă metodă folosită în mod uzual pentru cuplarea aminoacizilor.

Prin procedee sau prin variante ale acestuia se pot obține, de asemenea, compuși specifici de formula la în care, R₅este alchil inferior. In acest caz, se utilizează ca materie primă un acid 1-alchil1, a-dihidro-a-(oxo-sau tioxoj-piridincarboxilic.

Un alt procedeu pentru obținerea derivaților dipeptidici constă în reacția unui halogenuri de acil cu formula Ilb cu dipeptidă opțională transformată în sare având formula III:

(Hb)

RO 111369 Bl în care: X este halogen în special CI și n, R, R_n R₂ și R₃ sunt așa cum au fost definiți mai sus, în prezența unei baze organice [R_n= OH) sau anorganice (Rt = OH), urmată opțional de hidroliză.

Atunci când dipeptida inițială având formula III are o grupare carboxil derivată și de utilizează o bază organică (procedeul B-a) reacția este, în general, condusă într-un solvent nepolar potrivit, cum ar fi cloroform, clorură de metilen sau dioxan. Când dipeptida respectivă are o grupare carboxil liberă (procedeul B-b), se folosește avantajos un sistem dibazic. Sistemul bifazic menționat cuprinde de obicei o soluție apoasă a unei baze anorganice și o soluție de halogenură de acil într-un solvent organic adecvat, cum ar fi acetonitril, drept fază secundară.

Atunci când compușii inițiali având formulele lla sau llb au două grupări COOH sau grupări derivate de la acesta, învecinate, adică atunci când R este COOH sau C00R₄ și COOH sau COX ocupă poziția 3, procedeele A sau B pot conduce la producerea de imide ciclice dacă condițiile de reacție (temperatură, timp de reacție) sunt astfel, încât este favorizată o ciclizare intramoleculară a produselor de reacție. In acest caz sunt preferate condițiile reacției blânde, și, în special, temperaturi joase, pentru a minimaliza apariția produselor secundare de reacție ciclizate.

Ca și în cazul procedeului A, atunci când este aplicată metoda B la o dipeptidă de formula (III) în care R₂ este o grupare amino alchil inferior, respectiva grupare aminică necesită protecție prealabilă cu o grupare care poate fi îndepărtată cu ușurință.

Procedeul B (a sau b) poate fi, de asemenea, utilizat pentru prepararea unui compus de formula la în care, R₅ este alchil inferior. In acest caz, dipeptida de formula III este reacționată cu halogenură de 1-alchil1, a-dihidro-a-(oxo-sau tioxoj-piridin carbonil corespunzătoare.

Gruparea specifică de N-(amercaptopiridinil) carbonildipeptide, adică compușii de formula I în care, R este SH (sau A este S și R₅ este hidrogen în formulă la poate fi, de asemenea, obținută cu randamente înalte prin procedeul C, procedeu care cuprinde încălzirea unui compus de formula I în care

R este halogen cu tiosulfat de sodiu într-un mediu hidroalcoolic adecvat cum ar fi amestecuri de apă și 1,2-propilenglicol.

Cu oricare dintre procedeele A la C descrise mai sus, când noii compuș. lin invenție sunt obținuți sub formă de monoesteri (la restul de pralină) sau sub formă de diesteri (α-substituiți la ciclul piridinic cu o grupare de ester carboxilic), adică compuși de formula (I) în care numai COR., sau împreună COR., și R sunt grupări de ester de acid carboxilic, compușii respectivi pot fi transformați la respectivii acizi mono sau dicarboxilici prin hidroliză, de exemplu cu un hidroxid alcalin într-un mediu polar. Condițiile hidrolitice tipice includ utilizarea hidroxidului de potasiu dizolvat întrun alcool alifatic inferior (de exemplu, C-j-C^, singur sau în amestec cu apă. Un alcool preferat este etanol.

Invenția prezintă următoarele avantaje:

- acești derivați dipeptidici au în minus un atom de carbon asimetric (în regiunea B), astfel ei putând fi obținuți cu ușurință, cu randamente bune;

- materiile prime sunt accesibile din comerț sau pot fi preparate prin procedee cunoscute.

Acizii piridincarboxilixi de formula lla, în special, cei cu R = halogen, halogenurile acide de formula llb pot fi obținute j ușurință prin metode standard, pomina de la acizii corespunzători de formula lla, iar dipeptidele inițiale de formula III sunt, de asemenea, produse comerciale sau pot fi sinterizate prin metodele utilizate în mod curent în chimia peptidelor.

In continuare, se prezintă următoarele exemple de realizare, a invenției.

Spectrele ¹H-RMN și ¹³C-RMN au fost înregistrate la 199, 975 MHz și respectiv ’a 50, 289 MHz, pe un spectrometru Vai ian XR-200. Deplasările chimice sunt date cu valori δ - față de tetrametilsilan, care se utilizează ca standard intern. Analizele cromatografice în strat subțire (TLC) au fost realizate pe plăcuțe preacoperite cu silicage* 60 F₂₅₄ Merck, și spoturile au fost detectate prin iradiere UV. La TLC s-au utilizat următorii solvenți:

A: Acetat de etil;

B. Acetat de etil/acetonă 3/1 ;

RO 111369 Bl

C: Acetonă;

D. Etanol absolut;

E; Etanol/acid acetic 3%;

F: Etanol/acid acetic 5%;

și sunt indicați în ficare caz între paranteze.

Exemplul 1. Sinteza esterului etilic al N-[[6-clor-2-piridinil]carbonil]-L-alanil-L-prolinei [compusul 1)

Pe o baie de gheață este răcită o soluție de clorhidrat de ester etilic al Lalanil-L-prolinei [7,4 ml) în 1 20 ml clorură de metilen anhidră.

In timp ce se agită, se adaugă în picătură o soluție din 5,1 g (0,029 moli) clorură de 6-clor-2-piridincarbonil în 30 ml clorură de metilen anhidră. După terminarea adăugării, soluția este agitată timp de 3 h la temperatura camerei și amestecul de reacție este diluat cu 400 ml clorură de metilen. Soluția rezultată este spălată de trei ori cu 200 ml bicarbonat de sodiu apos 10% și de două ori cu 200 ml de apă. Stratul organic este îndepărtat prin distilare la presiune redusă pentru a da produsul dorit ca un ulei incolor (randament 99%).

¹H RMN (CDCIg): 1,24 (t, 3=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,47 (d, J=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină). 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină),3,7O (m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,15 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic),

4,50 (m, 1H, CH prolină), 4,90 (m, 1H, CH alanină, transformată la q, J=6,8 Hz, după agitare cu D₂0), 7,40 (dd, 3,=Hz, J₂=1 Hz, 1H, ar), 7,75 [dd, 3,=3₂=7 Hz, 1H, ar 04), 8,02 (dd, 3,=7 Hz, J₂=1 Hz, 1 H, ar), 8,50 (br d, 1H, NH, dispare după agitare cu D₂0).

¹³ORMN (CDCIg): 13,9 (CH₃ ester etilic), 17,7 (CH₃ alanină), 24,8 (N-CH₂-CH₂prolină), 28,8 (N-CH₂-CH₂-CH₂ prolină), 46,7 (CH alanină și N-CH₂ prolină), 58,9 (CH prolină), 61,1 (CH₂ ester etilic), 120,9 (ar 03), 127,2 (ar 05), 139,9 (ar. 04).

150,2 (ar). 150,4 (ar). 162,5 (CO), 171,0 (CO), 172,1 (CO).

TLC(B): R_f = 0,46.

In mod similar sunt sintetizați următorii compuși:

Ester etilic al N-[(2-clor-3-piridinil) carbonilj-L-alanil-L-prolinei [compusul 2) ¹H-RMN (CDCI₃): 1,28(t, 3=7,2 Hz. 3H, CHg ester etilic), 1,54 (d, J=6,8 Hz.

3H. CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH_a prolină), 3,73 [m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,19[q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic),

4,54 (m, 1H, CH prolină), 4,96 (m, 1H, CH alanină), 7,34 (dd, /=7,7 Hz, J₂=4,3 Hz, 1H, ar 05), 7,55 (br d, 1H, NH), 8,05 [dd, 3,=7,7 Hz, J₂=2 Hz, 1H, ar 04), 8,47 (dd,

3,4,8 Hz, 3₂=2 Hz, 1H, arC-6).

TLC(B): R_f = 0,37

Ester etilic al N-[(2-clor-4-piridinil) carbonil]-L-alanil-L-prolinei [compusul 3) ¹H-RMN (CDCI₃): 1,27(t, 3=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic], 1,50 (d, 3=6,9 hz, 3H, C-H₃ alanină), 2,10 [m, 4H, N-CH -CH₂CH₂ prolină), 3,77 (m, 2H, N-CH, p.i a], 4,22 (q, 3=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester c... ,cj, 4,57 (m, 1H, CH prolină), 4,91 (m, 1H, CH alanină), 7,51 (dd, 3,=5,1 Hz, 3₂= 1 Hz, 1 H, ar 05), 7,66 (d, 3,= 1 Hz, 1 H, C3), 8,09 (d, 3,=7,2 Hz, 1H, NH), 8,4C . : 3=5,1 Hz, 1H, ar 06).

TLC(B): R_f = 0,47

Ester etilic al N-[[6-clor-3-pir carbonil]-L-alanil-L- prolinei [compusul

Ή-RMN (CDCIg): 1,27 (t, 3=7. 3H, CH₃ ester etilic), 1,48 (d, 3=6,t 3H, CHg alanină), 2,15 (m, 4H, N-CH₂-i_. h CH₂ prolină), 3,70 (m, 2H, N-CH₂ prolină),

4,17 [q, 3=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic),

4,54 (m, 1H, CH prolină), 4,94 (m, 1H, CH alanină), 7,32 (d, 3,=8,4 Hz. 3_a= 1 Hz, 1H, ar 05), 8,03 (dd. 3,=8,4 Hz, 3₂=2,4 Hz 1H, ar 04), 8,78 (d, 3=2,4 Hz. 1H, ar C2).

TLC(B): R, = 0,46

Exemplul 2. Sinteza esterului etilic al N-[[ 1,2-dihidro-2-tioxo-4-piridinil)carbonil]-Lalanil-L-prolinei [compusul 5).

La o soluție de 4,5 g (0,013 mol) de ester etilic de N-[(2-clor-4-piridinil)carbonil]-Lalanil-L-prolină (compusul 3) în 45 ml amestec 10:1 de 1,2-propilenglicol: apă se adaugă 15,2 g tiosulfat de sodiu și amestecul este încălzit sub reflux, timp de 15 h. Amestecul de reacție rezultat este diluat cu 100 ml de apă și extras c.

100 ml porțiuni de clorură de metilen.

Stratul organic este spălat de trei ori cu

100 ml de apă. uscat pe sulfat de magneziu anhidru, și solventul este îndepărtat prin distilare la presiune redusă. Reziduul obținut este purificat prin cristalizare dintr-un

RO 111369 Bl amestec de acetonă: eter de petrol, pentru a da produsul dorit ca un solid galben (randament: 85%).

¹H-RMN(CDCI₃) : 1,27 (t, 3=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,68 (d, 3=7,0 Hz, 5 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H N-CH₂-CH₂CH_a prolină), 3,75 (m, 2H, N-CH₂ prolină),

4,28 (q, J =7,2 Hz, 2H, CH_a ester etilic],

4,55 (m, 1H, CH prolină), 4,75 (m, 1H, CH alanină, transformat la H=6,8 Hz, după io agitare cu D₂0), 6,78 (dd, 3.,=6,6 Hz, J₂=1,6 Hz, 1H, ar C-5), 7,31 (d, J=6,6 Hz, 1H, ar C-6), 7,88 (d, 3=1,6 Hz, 1H, ar C3], 8,70 (br d, 1H, NH amidic, dispare după agitare cu D₂0). 15 ¹³C-RMN (CDCI₃): 13,9 [CH₃ ester etilic], 15,5 (CH₃ alanină], 24,7 (N-CH_aCH_aprolină], 28,7 (N-CH₂-CH₂-CH_a prolină), 46,8 (N-CH₂ prolină), 48,1 (CH alanină), 59,2 (CH prolină), 61,2 (CH₂ ester etilic], 111,8 2C (ar C-5), 130,9 (ar C-3], 137,1 (ar C-6],

139,7 (ar C-4), 165,0 (CO), 171,7 [CO], 172,0 (CO). 178,7 (CS).

TLC(C): R_f = 0,50

Similar au fost sinterizați următorii 25 compuși:

Ester etilic al N-[( 1.2-dihidro-2-tioxo-3piridinil]carbonil]-L-alanil-L-pirolinei (compusul 6) ¹H-RMN (CDCI3): 1,21 (t, 3=7.2 Hz, 30 3H, CH₃ ester etilic), 1,54 (d, J=6,9 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH_aCH_a prolină), 3,75 (m, 2H, N-CH_a prolină),

4.12 (q, J=,2 Hz, 2H, CH_a ester etilic),

4.55 (m, 1H, CH prolină), 4,85 (m, 1H, CH 35 alanină), 6,72 (dd, J_n=B,1 Hz, J_a=7,6 Hz, 1H, ar C-5), 7,65 (dd, 3,=6,1 Hz, J₂=1,7 Hz, 1H, ar C-4), 8,46 (dd, 3,=7,6 Hz, J_a=1,7 Hz, 1H, ar C-6), 11,15 (br d, 1H.NH). 40

TLC(C): R_f = 0,47

Ester etilic al N-[[ 1, B-dihidro-6-tioxo-3piridinil]carbonil]-L-alanil-L-pirolinei (compusul 7] ¹H-RMN (CDCI3): 1,17 (t, 3=7,2 Hz, 45 3H, CH₃ ester etilic), 1,51 (d, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină), 3,72 (m, 2H, N-CH₂ prolină),

4.13 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic),

4,50 (m, 1H, CH pralină), 4,72 (m, 1H, CH 50 alanină), 7,19 (d, J=9,0 Hz, 1H, ar C-5],

7.56 (dd, 3,=9,0 Hz, 1H, ar 04), 7,83 (d, 3=2 Hz, 1H, ar C-2), 8,27 (br d, 1H, NH).

TLC(C): R_f = 0,55.

Exemplul 3. Sinteza esterului etilic al

N-[[2-etoxicarbonil-6-piridinil}carbonil]-L-alanilL-prolinei [compusul 8)

La o soluție agitată de 4,31 g (0,022 mol) de acid 6-etoxicarbonil-2-piriclincarboxilic în 100 ml piridină anhidră sunt adăugate 5,5 g (0,022 mol) de clorhidrat de ester etilic al L-alanil-L-prolinei și 4,6 g de Ν,Ν'-diciclohexil carbomiimidă. Agitarea este continuată timp de 20 min la temperatura camerei și precipitatul voluminos de diciclohexil uree este filtrat și spălat cu acetonă. Solventul din filtrat și apele de spălare sunt îndepărtate prin, distilare la presiune redusă si produsul brut obținut este purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel utilizând ca eluant ci. ·· : rn: acetonă (10:1). Solidul izolat este c . .-nt din amestec acetonă/izopropil eter/. ie petrol, pentru a da 4,27 g din produ: 1 sub formă de cristale aciculare (ran<. x 53%).

'H-RMN (CDCI3): 1,28 (t, 3=7. λ 3H, CH₃ ester alifatic), 1,46 (t, 3H, 3 Hz, CH₃ ester a romatic), 1,55 (d, J Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,15 (m, 4H N CH₂-CH₂ prolină), 3,75 (m, 2H, N> prolină), 4,21 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ e> alifatic), 4,48 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH_aaromatic), 4,53 (m, 1H, CH prolină), 5,00 (m, 1H, CH alanină, transformată la q, J=6,8 Hz, după agitare cu D₂0), 7,99 (dd 3,=3_a=7,6 Hz, 1H, ar C-4), 8,22 (dd, 3 ^;

Hz, J₂=1 Hz, 1H, ar), 8,33 (dd, 3,=7,6 Hz, 3₂=1 Hz, 1H, ar), 8,70 (br d, 1H, NH amidic, dispare după agitare cu D₂0).

¹³C-RMN (CDCL₃): 14,1 (CH_a ester etilic), 14,2 (CH₃ ester etilic), 17,8 (CH₃alanină), 24,9 (N-CH₂-CH₂ prolină), 29,0 (N-CH₂-CH₂-CH₂ prolină), 46,9 (CH alanină și N-CH₂ pralină), 59,3 (CH alanină), 61,3 (CH₂ ester etilic), 62,4 (CH_a ester etilic),

125.5 (ar), 127,6 (ar), 138,7 (ar, C-4),

147.6 (ar), 150,1 (ar), 163,5 (CO), 165J (CO), 171,2 (CO), 172,4 (CO).

TLC(B): R_f = 0,63

Similar au fost sinterizați următorii compuși:

Ester etilic al N-[[2-metoxicarbonil-5piridinil)carbonil-L-alanil-L-pirolinei [compusul 9) ¹H-RMN (CDCI3): 1,26 (t, 3=7,2 Hz,

RO 111369 Bl

3H, CH₃ ester etilic alifatic], 1,51 (d, J=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină], 2,10 (m, 4H, N-CH_aCH_a-CH_a prolină), 3,80 (m, 2H, N-CH₂prolină), 4,03 (s, 3H, CH₃ ester metilic aromatic), 4,17 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ester etilic), 4,55 (m, 1H, CH prolină), 4,99 (m, 1H, CH alanină], 8,12 (d, J=8,4 Hz, 1H, ar 03), 8,26 (dd, J₁=8,4 Hz, J₂=2,0 Hz, 1H, ar 04), 8,43 (d, J=7,4 Hz, 1H, NH), 9,12 (d, J=2,0 Hz, 1H, ar C-6).

TLC(B): R_f = 0,36

Ester etilic al N-[(2-metoxicarbonil-3piridil)carbonil]-L-alanil-L-prolinei [compusul 10) ¹H-RMN (CDCI₃): 1,23 (t, J=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,50 (d, J=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH_a-CH_aCH_a prolină), 3,70 (m, 2H, N-CH_a prolină), 3,94 (s, 3H, CH₃ ester metilic), 4,15 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic], 4,50 (m, 1H, CH prolină), 4,80 (m, 1H, CH alanină), 7,0 (br d, 1H, NH), 7,45 (dd, Jf=7,8 Hz, J_a=4,7 Hz, 1H, ar C-5), 7,84 (dd, ^=7,8 Hz, J_a=1,7 Hz, 1H, ar, 04), 8,70 (dd, J₁₌4,7 Hz, J₂=1,7 Hz, 1H, ar C-6).

TLC(B): R_f = 0,27

Ester etilic al N[[5-brom-1,2-dihidro-2oxo-3-piridil)carbonil]-L-alanil-L-prolinei [compusul 11) ¹H-RMN (CDCI₃): 1,20 (t, J=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,53 (d, J=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH_aCH₂ prolină), 3,75 (m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,20 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic), 4,60 (m, 1H, CH prolină), 4,88 (m, 1H, CH alanină), 7,71 (d, J=2,8 Hz, 1H, ar 04],

8,48 (d, J=2,8 Hz, 1H, ar 06), 10,10 (br d, 1H, NH amidic).

TLC(D): R_f = 0,76

Ester etilic al N[[ 1,2-dihidro-2-oxo-4piridinil) carbonil] - L-alanil-L-prolinei [compusul 12) 'H-RMN (CDCI₃): 1,21 (t, J=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic) , 1,47 (d, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină), 3,75 (m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,12 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₃ ester etilic),

4,50 (m, 1H, CH prolină), 4,80 (m, 1H, CH alanină], 6,51 (dd, J.,=6,7 Hz, J₂=1,2 Hz, 1H, ar 05), 6,97 (d, J=1,2 Hz, 1H, ar O 3), 7,25 (d, J=6,7 Hz, 1H, ar 06), 8,46 (br, d, 1H, NH amidic).

TLC(B): R_f = 0,49

Ester etilic al N[[1,6-dihidro-6-oxo-2piridinil] carbonil] - L-alanil-L-prolinei [compusul 13] ¹H-RMN (CDCI3): 1,22 (t, J=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic) , 1,48 (d, J=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH_a prolină), 3,57 (m, 2H, N-CH_a prolină),

4,17 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic),

4,48 (m, 1H, CH prolină), 4,90 (m, 1H, CH alanină), 6,73 (dd, Jf=9,2 Hz, J_a=0,8 Hz, 1H, ar C-5), 6,91 (dd, ^=7,0 Hz, J₂=1,0 Hz, 1H, ar C-3), 7,44 (dd, ^=9,0 Hz, J_a=7,0 Hz, 1H, ar 04), 8,46 (br, d, 1H, NH amidic).

TLC(C): R_f = 0,43

Ester etilic al N[[1,6-dihidro-6-oxo-3 piridinil] carbonil] - L-alanil-L-prolinei (compusul 14] ¹H-RMN (CDCI3): 1,22 (t, J=7,0 Hz, 3H, CH_a ester etilic], 1,40 (d, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină), 3,75 (m, 2H, N-CH_a prolină), 4,10 (q, J=7,0 Hz, 2H, CH_a ester etilic),

4,50 (m, 1H, CH prolină), 4,85 (m, 1H, CH alanină), 6,34 (dd, J=9,0 Hz, 1H, ar C-5), 7,80 (d, J=8,8 Hz, 1H, ar 04), 7,97 (s, 1H, ar 02), 8,65 (d, J=6,8 Hz, NH amidic·¹

TLC(D): R_f = 0,50

Ester etilic al N[(2-fenoxi-3-piridinil) carbonil] - L-alanil-L-prolinei [compusul 15) ¹H-RMN (CDCIg): 1,15 (t, J=7,1 Hz 3H, CH₃ ester etilic), 1,30 (d, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină), 4,03 (m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,05 (q, J=7,1 Hz, 2H, CH₂ ester etilic), 4,33(m, 1H, CH prolină), 4,80 (m, 1H, CH alanină), 7,21 (m, 5H, O-Ph), 7,42 (m, 2H, ar), 8,23 (m, 1H, ar), 8,78 (d, J=8,0 ^?' NH amidic).

TLC(A): R_f = 0,39

Ester etilic al N[[2-feniltio-3-piridinil) carbonil] - L-alanil-L-prolinei (compusul 16) ¹H-RMN (CDCI3): 1,16 (t, J=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic) , 1,32 (d, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ alanină), 1,96 (m, 4H, N-CH₂-CH_aCH₂ prolină), 3,69 (m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,06 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic), 4,35 (m, 1H, CH prolină), 4,72 (m, 1H, CH alanină), 7,21 (dd, ^=8,0 Hz, J₂=4,8 Hz, 1H, ar 05), 7,40 (m, 5H, -S-Ph), 7,88(dd, J₁=7,6 Hz, J₂=1,8 Hz, 1H, ar 04), 8,33 (dd, J₁=4,8 Hz, J₂=1,8 Hz, 1H, ar 06], 8,87 (d, J=8,0 Hz 1H, NH amidic).

RO 111369 Bl

TLC(A): R_f = 0,33

Ester etilic al N[(2-fenilamină-3piridinii] carbonil] - L-alanil-L-prolinei [compusul 17} 'H-RMN (CDCIg): 1,14 (t, 3=7,2 Hz, 3H, CH₃ ester etilic], 1,19 [d, J=6,6 Hz, 3H, CH₃ alanină), 1,72 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH_a pralină), 3,70 (m, 2H, N-CH₂ pralină], 4,03 (q, J=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic], 4,20 (m, 1H, CH pralină], 4,56 [m, 1H, CH alanină), 7,22 (m, 5H, ar), 7,45 (dd, 3,=6,0 Hz, J₂=4,6 Hz, 1H, ar 05), 7,60 (d, 3=8 Hz, 1H, NH), 8,08 (m, 1H, ar), 8,47 (dd, 3,=4,8 Hz, J₂=1,4 Hz, 1H, ar C-6), 8,91 (s, 1H, NH amidic).

TLC(A): R_f = 0,22

Ester etilic al N[{1,2-dihidro-5-nitro2-oxo-3-piridinil] carbonil] - L-alanil-L-prolinei (compusul 18)

Ή-RMN (CDCIg): 1,17 (t, 3=7,1 Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,29 (d, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,0 (m, 4H, N-CH_a-CH_aCH₂ prolină], 3,60 (m, 2H, N-CH₂ pralină), 4,12 (q, J=7,1 Hz, 2H, CH₂ ester etilic), 4,32 (m, 1H, CH prolină), 4,78 (m, 1H, CH alanină), 8,77 (d, J=3,3 Hz, 1H, ar C-4), 8,89 (d, 3=3,3 Hz, 1H, ar C-6), 10,01 (d, 3=6,9 Hz, 1H, NH)

TLC(D): R_t = 0,74

Ester etilic al N[(1,2-dihidro-1 metil·· 2-oxo-3-piridinil)carbonil] - L-alanil-L-prolinei (compusul 19) 'H-RMN (CDCI₃): 1,1 6 (t, J=7,0 Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,28 (d, J=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH_a-CH_aCH₂ pralină), 3,45 (s, 3H, N-CH₃), 3,60 (m, 2H, N-CH_a prolină) 3,45 (s, 3H, N-CH₃), 3,60 (m, 2H, N-CH_a prolină), 4,06 (q,

J=7,2 Hz, 2H, CH_a ester etilic), 4,31 (m, 1H, CH pralină), 4,76 (m, 1H, CH alanină),

6,48 (dd, 3,=3_a=7,0 Hz, 1H, ar C-5), 8,06 (dd, 3,=7,0 Hz, 3₂ = 2,2 Hz, 1H, ar 04),

8,29 (dd, 3,=7,0 Hz, 3_a=2,2 Hz, 1H, ar O 6) 10,23 (br d, 1H, NH)

TLC(D): R_f = 0,51

Ester etilic al N[(2-acetilamino-4piridiniljcarbonil] - L-alanil-L-prolinei (compusul 20) 'H-RMN (d_B - DMSO): 1,17 (t, 3=7,5

Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,33 (d, 3=7 Hz,

3H, CH₃ alanină), 1,96 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină), 2,11 (s, 3H, CH₃ acetilamino),

3,67 [m, 2H, N-CH₂ pralină), 4,07 (q,

3=7,5 Hz, 2H, CH₂ ester etilic], 4,33 (m,

1H, CH pralină), 4,72 (m, 1H, CH alanină),

7.49 (d, 3=5,0 Hz, 1H, ar C-5), 8,41 (s, 1H, ar C-3), 8,43 (d, 3=5 Hz, 1H, ar C-6) 8,91 (br d, 1H, NH, dispare după agitare cu D₂0), 10,66 (br s, 1H, NH acetilamino, dispare după agitare cu D_a0).

TLC[B): Rf = 0,25

Exemplul 4. Sinteza esterului etilic al N-[(1,2-dihidro-2-oxo-3-piridinil] carbonil]-Lalanil-L-prolinei (compusul 21)

La o soluție agitată din 4,0 g (0,016 mol) de colorhidrat de ester etilic al L-alanilL-prolinei și 8 ml trietilemină în 200 ml dioxan, menținută la temperatura camerei, se adaugă în picătură de-a lungul unei ore o suspensie din 3,0 g (0,019 mol) clorură de 2-hidroxinicotinoilîn 200 ml dioxan. După agitare timp de încă 3 h la temperatura camerei, solventul este distilat sub presiune redusă. Produsul brut obținut astfel este dizolvat în 500 ml cloroform și soluția se spală de două ori cu 100 ml carbonat de sodiu apos 5%. După uscarea stratului organic pe sulfat de magneziu anhidru, solventul este îndepărtat într-un evaporator rotativ. Solidul cristalizează din clorură de metilen/eter izopropilic pentru a da 3,4 g din compusul dorit ca un solid alb microcristalin (randament: 64%).

'H-RMN(CDCIg): 1,23 (t, 3=7,2Hz, 3H, CH₃ ester etilic), 1,47 (d, 3=6,8 Hz, 3H, CH₃ alanină), 2,10 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ pralină), 3,70 (m, 2H, N-CH₂ prolină),

4,18 (q, 3=7,2 Hz, 2H, CH₂ ester etilic),

4.50 (m, 1H, CH prolină), 4,92 (m, 1H, CH alanină, transformată la q, 3=6,8 Hz, când se agită cu D_a0), 6,44 (dd, 3,=7,4 Hz, 3_a-

6,2 Hz, 1H, ar C-5), 7,65 (dd, 3,=6,2 H7 3_a2,2 Hz, 1H, ar 04), 8,48 (dd, 3,=7% % 3_a=2,2 Hz, 1H, ar C-6), 10,20 (br o.

NH amidic dispare la agitare cu D_a0)'³C-RMN (CDCIg): 13,9 (CH₃ ester etilic), 17,6 (CH₃ alanină), 24,7 (N-CH_a-CH prolină), 28,8 (N-CH₂-CH₂-CH₂ pralină), 46,h (N-CH₂ prolină], 47,1 (CH alanină), 58,9 (CH prolină), 61,0 (CH₂ ester etilic), 107,4 (ar C-5), 120,9 (ar C-3), 138,9 (ar 06] 145,1 (ar 04), 163,4 (CO), 163,9 (CO),

171,7 (CO), 172,2 (CO).

TLC(C): Rf = 0,36

Exemplul 5. Sinteza N-[(6-clor-3piridinil)carbonil]-L-alanikL-prolinei (compusul

RO 111369 Bl

22]

Intr-un amestec de 10,8 ml hidroxid de potasiu 0,5 N și 750 mg (5,4 moli) carbonat de potasiu se dizolvă 1,0 g (5,4 moli) L-alanil-L-prolină, și se adaugă 10 ml acetonitril. După răcire într-o baie de gheață se adaugă în picătură o soluție concentrată în acetonitril din 1,2 g de clorură de 6-clornicotinoil, în timp ce se agită amestecul și pH-ul este menținut la 12 ... 13 cu hidroxid de potasiu 1N, după cum este necesar. Agitarea este continuată timp de încă 2 h la temperatura camerei, apoi soluția este neutralizată la pH 6 cu acid clorhidric apos, și solventul este îndepărtat prin distilare la presiune redusă. Reziduul astfel obținut este suspendat în 50 ml etanol absolut, clorură de potasiu rămasă este separată prin centrifugare și solventul din soluția limpede este îndepărtat prin distilare la presiune redusă. Produsul brut și purificat prin cromatografie pe coloană cu silicagel, utilizând ca eluant etanol absolut, pentru a izola 700 mg din produsul dorit (randament: 40%).

¹H-RMN(DMS0 + D₂0): 1,26, 1,32 (2d, 3=6 Hz, 3H, CH₃ alanină), 1,90 (m, 4H, N-CH₂-CH₂-CH₂ prolină), 3,50 (m, 2H, N-CH₂ prolină), 4,15 (m, 1H, CH prolină),

4,70 (m, 1H, CH alanină), 7,62 (dd, 3-1=8,2 Hz, J₂=3, Hz, 1 H, ar C-5), 8,32 (dd, 3,=8,2 Hz, 3₂. 1 Hz, 1H, ar 04), 8,87 (d, 3=3,0 Hz, 1H, ar C-2).

¹³ORMN (DMSO + D₂0]*: 16,6, 18,1 (CH₃ alanină),22,3, 24,7 (N-CH₂-CH₂prolină), 29,4, 31,7 (N-CH₂-CH₂-CH₂ prolină), 4.6,8, 47,6, 47,7 (N-CH₂ prolină și CH alanină), 61,1, 61,9 (CH prolinăj,

124,8 (ar 05), 1 29,6 (ar 03), 139,6 (ar 04), 149,9 (ar 02), 153,4 (ar 06), 164,5 (CO legătură amidică ciclu piridinic dipeptidă), 171,2, 170,7 (CO legătură peptidică), 175,6 (COOH prolină).

TLC(E): R_f = 0,54

In mod similar este preparat următorul compus:

N-[[2-etoxi-3-piridinil]carbonil]-L-alanilL-pirolină [compusul 23] ¹H-RMN (DMSO + D₂0)*: 1,26. 1,32 (doi d, 3=6,8 Hz, CH₃ alanină), 1,90 (m, 4H, N-CH₂-CH₂CH₂ prolină), 3,50 (m, 2H, N-CH₂ prolină) 4,15 (m, 1H, CH prolină),

4,70 (m, 1H, CH alanină), 7,62 (dd, 3^8,2

Hz, 3₂ =1 Hz, 1H, ar 04), 8,87 (d, 3=3,0

Hz, 1H, ar 06).

TLC (D): R_f = 0,35

Exemplul 6. Sinteza N-[(6-clor-2piridinil]carbonil]-L-alanil-L-prolinei [compusul 24)

La temperatura camerei se agită timp de 3 h o soluție din 4,5 g (0,01 3 mol, ester etilic al N-[(6-clor-2-piridinil)carbonil)-Lalanil-L-prolinei (din exemplul 1) în 24 ml hidroxid de potasiu etanolic 1N. Amestecul de reacție rezultat este diuluat cu 250 ml etanol absolut și neutralizat cu acid clorhidric etanolic 6N. Precipiititul de clorură de potasiu astfel format este filtrat, spălat de mai multe ori cu etanol i'..,. lut, și solventul este eliminat la presiu λ că. Reziduul este purificat prin crame.., pe coloană cu silicagel, utilizând eta a eluant, pentru a duce la ob;a compusului dorit ca un solid ;. (randament: 73%).

H-RMN (DMSO) *: 1,36, 1,3. tu d, H=6 .8 Hz, CH₃ alanină), 2,10 (m, b CH₂-CH₂CH₂ prolină), 3,65 (m, 2H, :.‘ prolină) 4,30 (m, 1H, CH prolină), a>.

4,75 (doi m, 1H, CH alanină), 7,78(o.i

3.,=1,6 Hz, 3₂=1,6 Hz, 1H ar), 8,03(d l

3,=7.4 Hz, 3₂=1,6 Hz, 1H, ar). 8,10(dd

J₁₌J₂=7,4 Hz, 1H, ar C-4), 8,70 (br d, 1H, NH amidic, dispare la agitare cu D₂0).

¹³ORMN (DMSO)*: 17,3, 18,6 (CHL alanină), 21,8, 24,6 (N-CH₂-CH₂ prolină), 28,6, 30,8 (N-CH₂-CH₂-CH₂ prolină) 46,3,

46,5, 46,7, 46,8 (N-CH₂ prolină și CH alanină), 58,7, 59,3 (CH prolină), 121,5 (C3 ar), 127,8 (C-5 ar), 141,9 (C-4 ar),

149,6 (ar), 150,4 (ar). 161,8 (CO legătură amidică ciclu piridinic-dipeptidă) 170,.;

170,9 (CO legătură peptidică), 173,5,

173,8 (COOH prolină).

TLC (E): R_f = 0,55 *: Duplicitatea semnalelor se datoreaz: prezenței izomerilor z-cis și z-trans În legătură peptidică L-Ala-L-Pro.

Prin același procedeu se obțin următorii acizi liberi din esterii lor corespunzători:

N-((2-clor-3-piridinil)carbonil]-L-alanil-Lprolină(compus nr. 25), TLC(E): R_t = 0,49;

Μ(2-ουη4-ρίπ3ίηΐΙ]θ3ΐ±)οηίΓΗ_-θΐ3ηίΙ4_-ρΓθΙίΓΐ§

RO 111369 Bl (compus nr. 26), TLC (E): R_t = 0,55:

N - [ (1 ,2-dihidro-2-tioxo-4piridinil)carbonil-L-alanil-L-prolină (compus nr. 27), TLC(E):R_f = 0,46;

N-[( 1 ,2-dihidro-2-tioxo-3- 5 piridinil)carbonil-L-alanil-L-prolină (compus nr. 28), TLC(E):R_f = 0,45;

N - [ ( Ί ,6-dihidro-6-tioxo-3piridinil)carbonil)-L-alanil-L-prolină (compus nr. 29), TLC(E): R = 0,51; 10

N-[(2-carboxi-6-piridinil)carbonil]-Lalanil-L-prolină (compus nr. 30), TLC(D): R_f = 0,29;

N-[(2-carboxi-5-piridinil)carbonil]-Lalanil-L-prolină 15 (compus nr. 31), TLC(D): R_f = 0,25;

N-[(2-carboxi-3-piridinil)carbonil]-Lalanil-L-prolină (compus nr. 32], TLC(D): R_f = 0,1 8;

N - (( 1 , 2 - d i h i d r o - 2 - o x o - 4 - 20 piridinil)carbonil]-L-alanil-L-prolină (compus nr. 33), TLC(F): R_f = 0,34;

N-((1,6-dihidro-6-oxo-2piridinil)carbonil]-L-alanil-L-prolină (compus nr. 34), TLC(F): R_f = 0,40; 2 5

N - [(1 , 6-dihidro-6-oxo-3piridinil)carbonil]-L-alanil-L-prolină (compus nr. 35), TLC(F): R_f = 0,37;

N - [(1 ,2-dihidro-2-oxo-3pirid in iljcar bonil]-L-a lani l-L-proli nă 3 o (compus nr. 36), TLC(F): R_f = 0,37.

Structura mono și diacizilor dați mai sus este configurată prin datele lor spectroscopice.

Exemplu de utilizare a compușilor dipeptidici:

A. Inhibarea contracțiilor ileonulu. cobaiului induse cu Angiotensină -1

Segmente de 1,5 cm ileon terminal proaspăt și spălate sunt suspendate în băi de țesut de 25 ml conținând soluția lui Tyrode la 31 °C și sunt barbotate cu 95% 0g-5% C0₂. Cu o încărcătură inițiala de 1,0 g, tensiunea rămasă după eclui.Urare și răspunsurile la Angionesina I sau Angiotensină II (ambele la 100 ma/iil] sunt monitorizate și înregistrate prin u . · mediul unui traductor izomeric Ealing . - unui poligraf Lectromed. In acest sistm ir.st tratați mai mulți compuși din . >tă invenție, adăugându-i la baie cu In înaintea agonistului respectiv.

La concentrații finale ale bă- :□ mg/ml a fost determinat efectul ini... ; al compușilor de testat vis-a-vis de coriu . . induse de Angiotensina-I. Rezult., obținute sunt date în tabel. Toate % . inhibare date aici sunt rezultatele medii obținute cu segmente de ileon de la 5 cobai La concentrații finale ale băii de 1 pg/ml mei unul dintre compușii testați nu produc < modificare apreciabilă a contracțiilor induse de Angiotensină II.

Compusul	% Inhibare
21	30,7
24	20,6
27	18,1
29	16,2
35	16,0
Captopril	28.9 ~l

B. Activitatea antihipertensivă la șobolani hipertensivi spontan (SHR)

In acest model de hipertensiune recunoscut s-au utilizat șobolani hipertensivi spontan, masculi (315 la 376 g) cu presiunea sângelui sistolică (SBP) 160 mm

Hg. Presiunile de sânge sistolice au fost înregistrate pe animale conștiente printr-o metodă cu manșetă pe coadă (FS-40 presiune sanguină/monitor.de puls). înainte

RO 111369 Bl de toate măsurătorile, șobolanii au fost plasați într-un cilindru de detenție. Presiunile bazale au fost înregistrate și apoi au fost administrați compușii de testare (incluzând captopril ca referință) pe cale orală la doze de 30 mg/kg (n=5/grup). Presiunile au fost din nou monitorizate la 1, 2, 3, 4 și 24 h după administrarea compușilor de testare. Un grup de control (n=18) a fost inclus în scopul comparării.

In condițiile de mai sus, compușii 8, 27 și 21 au prezentat un efect antihipertensiv semnificativ. La 1 h după administrare reducerea medie a SBP-urilor a fost semnificativ diferită de grupul de control la grupurile tratate cu compusul 27 (28,4 ± 3,16 mm Hg], compusul 8 (32,6 ±

7,49 mm Hg) și captopril (17,28 ± 8,49 mm Hg). Reducerile au fost, de asemenea, semnificativ diferite de control după 2,3,4 și 24 h pentru compușii 8 și 27, pe când captoprilul a fost inactiv după 24 h (test Dincan-Kramer, p < 0,05). SBP-ul bazai mediu (167,2 la 169,0 mm Hg) nu a fost semnificativ diferit de acela al controlului (167,8±0,61 mm Hg).

Compusul 21 a prezentat o reducere semnificativă la 30 mg/kg numai după 2h; la o doză de 45 mg/kg, reducerile au fost, de asemenea, semnificative după 2, 3, 4 si 24 h.

Efectele antihipertensive au fost observate, de asemenea, în acest model când au fost testați compușii 8 și 27 la doze orale de 7,5 și 1 5 mg/kg.

Claims

Revendicări

1. Derivați dipeptidici cu activitate antihipertensivă, caracterizați prin aceea că au formula generală I:

(^L ^Rî |^j|-—CONH-CH-CON^p (j) .

COR, incluzând și formele tautomere ale acestora, în care: n este O sau un număr întreg de la 1 la 3;

R este OH, SH, COOH, NH₂ halogen, 0R₄ SR₄ C00R₄ NHR₄ sau N(R₄)₂, R₄ fiind selectat dintre grupări alchil inferioare, opțional substituite, arii și acil;

Rt reprezintă grupări OH, alcoxi inferioare, opțional substituite, arii alcoxi inferior , ariloxi sau amino disubstituite;

R₂ este selectat dintre grupări alchi' inferioare și amino alchil inferioare;

R₃ reprezintă halogen, N0₂, alchil inferior, haloalchil inferior, arii alchil inferior sau arii; și săruri acceptabile farmaceutice ale acestora.
2. Derivați dipeptidici, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că n în formula generală I este O sau -1, preferabil O.
3. Derivați dipeptidici, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că R în formula generală I este OH, SH, COOH, CI, 0R₄, SR₄, NHR₄ sau C00R₄, R₄ fiind selectat dintre grupări alchil inferioare, arii sau acil, R este 0R₅, SR₅, CI NHR₆ sau C00R₇, în care R₅ este hidrogen, alchil inferior sau fenil opțional substituit, preferabil hidrogen, metil, etil sau feu.Î, R₀este acil sau fenil opțional substituit, preferabil acetil sau fenil și R₇ este hidrogen sau alchil inferior, preferabil hidrogen, metil sau etil.
4. Derivați dipeptidici, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că R₁ în formula generală I este OH sau alee inferior, preferabil OH, metoxi sau etoxi.
5. Derivați dipeptidici, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că R₂ în formula generală I este alchil inferior, preferabil metil.
6. Derivați dipeptidici, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea ct R₃ în formula generală I este selectat dintre N0₂ si/sau halogen, în special, N0₂ si/sau Br.
7. Procedeu pentru obținerea unc_:derivați dipeptidici, caracterizat prin aceea că se efectuează reacția unui acid carboxilic de formulă generală Ila cu o dipeptidă de formulă generală III:

CORi (Ha) · * ‘ .(III)

RO 111369 Bl în care, X estehalogen, în special, CI și n, R,

Rl R₂ și R_a sunt așa cum au fost definiți, în prezența unei baze organice [R, = OH) sau anorganice (R, = OH), urmată opțional de hidroliză.

9. Derivați dipeptidici, conform revendicării 1, caracterizați prin aceea că se utilizează sub formă de compoziții farmaceutice împreună cu purtători acceptabili farmaceutic.

în care, n, R, R_v R₂ și R₃ au semnificațiile de mai sus, cu condiția că R este diferit de COOH și R, este diferit de OH, în prezența unui agent decuplare adecvat cum ar fi N,N’diciclohexilcarbodiimidă, urmată opțional de 5 hidroliza, transformare în sare.
8. Procedeu pentru obținerea unor derivați dipeptidici, caracterizat prin aceea că se efectuează reacția unei halogenuri de acil de formula Ilb cu dipeptidă opțional io transformată în sare având formula III:

(Rj)n\ r₂ A I r\ 4—COX HjN-CH-CON ; V\_D γ R I COR, (Hb) (III)

Președintele comisiei de examinare: ing. Barbu Mara Examinator: ing. Pușcaș Corina