DE3000628C2

DE3000628C2 -

Info

Publication number: DE3000628C2
Application number: DE3000628A
Authority: DE
Inventors: Masaharu Hasuda Saitama Jp Tamai; Takashi Kuki Saitama Jp Adachi; Shigeo Kita-Katsushika Saitama Jp Morimoto; Kiyoshi Kitamoto Saitama Jp Oguma; Kazunori Hanada; Sadafumi Ageo Saitama Jp Omura
Original assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Taisho Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1979-02-27
Filing date: 1980-01-09
Publication date: 1988-09-08
Also published as: IT8047529A1; IT1188891B; IT8047529A0; JPH0154348B2; JPS55115878A; US4333879A; GB2046730B; GB2046730A; US4382889A; FR2450256B1; FR2450256A1; DE3000628A1

Description

Bekannt sind E-64 (US-PS 39 11 111), dessen Zwischen produkte (Chemical Abstracts, 87, 2 02 108y (1977), ibid., 87, 85 238c (1977), ibid., 87, 202125b (1977), ibid. 87, 68 128z (1977)) und Epoxybernsteinsäure derivate gemäß DE-OS 28 09 036 und Chemical Abstracts 87, 68129a (1977).

Die erfindungsgemäßen Verbindungen unterscheiden sich von den bekannten Verbindungen durch ihre Inhibierungsaktivität gegenüber kalziumaktivierter, neutraler Thiolprotease (nachfolgend abgekürzt als CANP), die im Überschuß bei muskeldistrophischen Säugern vorkommt und durch gute Absorption und Verteilung im Gewebe nach der Verabreichung an Säuger, ohne daß die vaskuläre Permeabilität beschleunigt wird.

Die Erfindung betrifft neue Epoxybernsteinsäurederivate der allgemeinen Formel

gemäß Anspruch 1.

Der Ausdruck "Alkyl" bedeutet sowohl geradkettige wie verzweigte Alkylgruppen und die Epoxybernsteinsäurederivate sind auf die Transisomere, bei denen zwei Carbonyl gruppen am Oxyranring in trans-Stellung stehen, beschränkt.

Die Schutzgruppen in den geschützten Carboxy-, Amino- und Guanidinogruppen sind übliche auf dem Gebiet der Aminosäurechemie bekannte Schutzgruppen, wie Carbobenzoxy, Methylbenzyloxycarbonyl, Butoxycarbonyl, Tosyl, Benzyl, Methyl, Ethyl, Acetyl, Formyl und Nitro.

Bevorzugte Verbindungen der Erfindung sind Verbindungen der Formel (I), worin R¹ Wasserstoff oder Alkalimetall, R² Alkyl mit 3 bis 4 Kohlenstoffatomen, R³ Wasserstoff und R⁴ Alkyl mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen bedeutet. Besonders bevorzugte Verbindungen der Erfindung sind die Verbindungen der Formel (I), worin R¹ Wasserstoff, R² Alkyl mit 4 Kohlenstoffatomen und R⁴ Isoamyl bedeuten.

Eine Verbindung der Formel (I) kann z. B. in folgender Weise hergestellt werden: Ein Epoxybernsteinsäuremonoester der Formel

worin R⁷ Wasserstoff oder Alkalimetall bedeutet und R⁸ Alkyl mit 1 bis 2 Kohlenstoffatomen, Cycloalkyl mit 5 bis 6 Kohlenstoffatomen oder Benzyl darstellt, wird mit einem Chlorierungsmittel, wie Oxalylchlorid oder Thionyl chlorid, unter Bildung des entsprechenden Säurechlorids behandelt. Zu dem Säurechlorid gibt man eine Aminosäureverbindung der Formel

worin R², R³ und R⁴ die vorher angegebenen Bedeutungen haben, tropfenweise unter Eiskühlung, wobei man die Verbindung der Formel (I) erhält, in welcher R¹ = R⁸ ist. Bei dieser Amidierung kann die Aminosäureverbindung zusammen mit einer Base, wie Triethylamin, Pyridin oder Methyl morpholin verwendet werden. Wird die Verbindung der Formel (III) in Form eines Säureadditions salzes verwendet, so kann man sie für die Umsetzung einsetzen, nachdem man die Säure mit einer Base, wie einem Alkalihydroxid, Triethylamin, Pyridin oder Methylmorpholin entfernt hat oder indem man sie in Gegenwart einer der erwähnten Basen umsetzt.

Die Verbindung der Formel (II), in welcher R⁷ Wasserstoff bedeutet, kann ebenfalls direkt in die Verbindung der Formel (I), in welcher R¹ = R⁸ ist, ohne Chlorierung überführt werden. In diesem Fall kann man die Verbindung der Formel R², in welcher R⁷ Wasserstoff bedeutet, mit einer Verbindung der Formel (III) in Gegenwart eines Kondensierungs mittels, wie N,N′-Dicyclohexylcarbodiimid oder 1-Ethyl- 3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid (nachfolgend als W.S.C abgekürzt) umsetzen. Bei dieser Umsetzung ist die Zugabe einer N-Hydroxyverbindung, wie N-Hydroxybernsteinsäureimid oder 1-Hydroxybenzotriazol, bevorzugt.

Alternativ kann die Verbindung der Formel (I), in welcher R¹ R⁸ bedeutet, erhalten werden durch Amidierung der Verbindung der Formel (IV)

in welcher R² und R⁸ die vorher angegebenen Bedeutungen haben, mit einem Amin der Formel

in welcher R³ und R⁴ die vorher angegebenen Bedeutungen haben. Diese Amidierung kann durchgeführt werden in gleicher Weise wie die Umsetzung der Verbindung der Formel (II), in welcher R⁷ Wasserstoff bedeutet, mit der Verbindung der Formel (III).

Alternativ kann die Verbindung der Formel (I), in welcher R₁ = R⁸ ist, hergestellt werden durch Esteraustausch der Verbindungen der Formel (I), in welcher R¹ eine andere Gruppe innerhalb des Umfangs von R⁸ ist. Dieser Esteraustausch kann in Gegenwart eines Alkohols durchgeführt werden, welcher die gewünschte Gruppe in R⁸ bildet, wie Methanol, Ethanol, Cyclopentanol, Cyclohexanol oder Benzyl alkohol, und in Gegenwart eines Katalysators, wie Schwefelsäure, einem Alkalialkoholat oder einem Alkali hydroxid, wie Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid.

Die Verbindung der Formel (I), in welcher R¹ ein Alkalimetall bedeutet, wird erhalten, indem man die Verbindung der Formel (I), in welcher R¹ = R⁸ ist, mit einem Alkali hydroxid, wie Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid, umsetzt und dann, sofern erforderlich, anschließend ein organisches Lösungsmittel, wie Ethanol, Aceton, Ethylether oder Petrolether, zugibt.

Die Verbindung der Formel (I), in welcher R¹ Wasserstoff bedeutet, kann hergestellt werden, indem man die Verbindung der Formel (I), in welcher R¹ ein Alkalimetall bedeutet, mit einer anorganischen Säure, wie Chlorwasserstoffsäure oder Schwefelsäure, oder einer organischen Säure, wie Ameisensäure oder Essigsäure, ansäuert und dann mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel, wie Ethylacetat, Ethylether, Benzol oder Chloroform extrahiert.

Falls die Verbindung der Formel (I) ein durch Carbo benzoxy geschütztes Amino, durch eine Nitrogruppe geschütztes Guanidino oder eine Carboxygruppe, die durch Benzyl geschützt ist, hat, können solche Schutzgruppen durch katalytische Reduktion unter Verwendung von Palladium auf Kohle oder Palladiumschwarz entfernt werden.

Die Verbindungen der Formeln (II) und (IV) kann man gemäß dem Verfahren der DE-OS 28 09 036, gegebenenfalls mit gewissen Modifizierungen, herstellen.

Die Verbindung der Formel (III) wird wie folgt hergestellt:

Die Verbindung der Formel (VI)

in welcher R² die vorher angegebene Bedeutung hat und R⁹ eine Schutzgruppe ist, wird mit der Verbindung der Formel (V) umgesetzt und anschließend werden die Schutzgruppen unter Erhalt der gewünschten Verbindung entfernt. Beispiele für Schutzgruppen sind die üblichen bei der Peptidsynthese verwendete, wie t-Butoxycarbonyl, Carbobenzoxy oder Methyl benzyloxycarbonyl. Die Amidierung der Verbindung der Formel (VI) mit der Verbindung der Formel (V) kann in gleicher Weise durchgeführt werden wie die Umsetzung der Formel (II), in welcher R⁷ Wasserstoff bedeutet, mit der Verbindung der Formel (III). Die Entfernung der Schutzgruppe kann in der in der Peptidchemie üblichen Weise vorgenommen werden.

Die Verbindungen der Formeln (V) und (VI) sind in den meisten Fällen im Handel erhältlich.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben eine ausge zeichnete Inhibierungsaktivität gegenüber CANP die im Überschuß in den Muskeln von muskeldistrophischen Säugern vorkommt und haben eine gute Absorption und Verteilung im Gewebe nach der Verabreichung an Säuger im Vergleich zu den Epoxybernsteinsäurederivaten gemäß DE-OS 28 09 036 und Chemical Abstracts, 87, 68 129a (1977). Die muskel distrophische Inhibierungsaktivität wurde nach dem Verfahren von Ishiura et al (J. of Biochem., 84, 225 (1978)) untersucht unter Verwendung von CANP, das aus den Muskeln von unter angeborener Muskeldistrophie leidenden Hühnern bereitet war. Die Werte für eine 50%ige Inhibierung, ausgedrückt durch die Molverhältnisse des Enzyms durch ID₅₀ (Mol/Mol) werden in Tabelle 1 gezeigt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden von Säugern, wie Ratten oder Kaninchen, subkutan absorbiert und mit den Epoxybernsteinsäurederivaten gemäß der vorerwähnten DE-OS und Chemical Abstracts 87 68 129a (1977) verglichen. Um die Absorption festzustellen, wurden diese Verbindungen subkutan an Ratten in einer Menge von 50 mg/kg verabreicht und die Konzentration der Versuchsverbindung in Ratten plasma wurde 1 Stunde nach der Verabreichung gemessen und wird in Tabelle 1 gezeigt.

Tabelle 1

Die erfindungsgemäßen Verbindungen inhibieren auch wirksam und spezifisch Thiolprotease, wie Papain, Bromelaine und einige Arten von Cathepsin, in denen einige Sulfhydryl gruppen für deren Aktivität wesentlich sind. Andererseits haben sie keine Inhibierungsaktivität gegen die Proteolyse von Casein durch Trypsin, Chymotrypsin, Pepsin, einer Säureprotease von Paecilomyces varioti und Subtilisin, gegen Esterolyse von Benzoylaganinethylester durch Kallikrein oder gegen Fibrinolyse durch Humanplasmin.

Die Papaininhibierungsaktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen wurden nach dem Verfahren von K. Hanada et al (Argric. Biol. Chem., 42, Nr. 3, 523 (1978)) unter Verwendung von Papain (80 µg/ml), untersucht. Die Inhibierungsaktivität für eine 50%ige Inhibierung wurde als ID₅₀ ausgedrückt und wird in Tabelle 2 gezeigt.

Tabelle 2

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen keine Neben wirkungen, wie eine Beschleunigung der Vaskularpermeabilität, und unterscheiden sich darin von den Verbindungen des Standes der Technik.

Als Arzneimittel können die erfindungsgemäßen Verbindungen für orale, parenterale und rektale Verabreichung formuliert werden, z. B. als Tabletten, Pulver, Pastillen, Dragees, Kapseln, Lösungen, Suspensionen, sterile injizierbare Zubereitungen oder Suppositorien. Als Träger kann entweder ein Feststoff oder eine Flüssigkeit dienen. Beispiele für feste Träger sind Lactose, Terra alba, Sucrose, Talkum, Gelatine, Agar, Pectin, Acacia, Magnesiumstearat oder Stearinsäure. Beispiele für flüssige Träger sind Sirup, Erdnußöl, Olivenöl und Wasser. Das Verdünnungsmittel oder der Träger können auch verzögernde Substanzen enthalten, wie Glyzerinmonostearat oder Glyzerindistearat, gegebenenfalls zusammen mit einem Wachs.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können zum Inhibieren von CANP, dessen Überschuß im Muskel von unter Muskel distrophie leidenden Säugern durch Verabreichung von etwa 5 bis 40 mg/kg/Tag in Einzeldosierungen oder in zwei bis vier unterteilten Dosen oral oder durch Injektion verabreicht werden.

Die Toxizität der erfindungsgemäßen Verbindungen ist außerordentlich niedrig. Sie zeigen bei oraler Verabreichung praktisch keine akute Toxizität bei Mäusen bei Dosierungen unterhalb 2 g/kg Körpergewicht. Weiterhin wird bei oraler Verabreichung von 1 g/kg/Tag während 30 Tagen bei Versuchstieren keine Nebenwirkung beobachtet.

Die nachfolgenden Beispiele beschreiben die Erfindung.

Beispiel 1

In 30 ml Tetrahydrofuran wurden 1,09 g N-(DL-3-trans- Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyn, 0,43 g amin, 0,60 g 1-Hydroxybenzotriazol und 0,44 g N-Methyl morpholin gelöst. Zu der Lösung wurde nach und nach 0,84 g W.S.C.-Hydrochlorid unter Eiskühlung und Rühren gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden unter Aufrechterhaltung der Temperatur und dann weitere 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde konzentriert und zu dem Rückstand wurden 80 ml Wasser und 80 ml Ethylacetat gegeben. Die Mischung wurde geschüttelt und die Ethylacetat schicht wurde abgetrennt. Die wäßrige Schicht wurde nicht zweimal mit Ethylacetat extrahiert. Die Extrakte wurden mit der Ethylacetatschicht vereint, nacheinander mit 10%iger wäßriger Chlorwasserstoffsäurelösung, einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne konzentriert. Der erhaltene Rückstand wurde durch Kieselgelchromatografie (Chloroform: Aceton = 40 : 1) und Umkristallisieren aus Chloroform/Ethyl ether gereinigt, wobei man 0,97 g N-[′-(DL-3-trans-Ethoxy carbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-cyclohexylamin, F: 168 bis 169°C, erhielt.

Beispiel 2

Arbeitet man wie in Beispiel 1 aber verwendet 1,09 g N-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucin und 0,69 g n-Decylamin, so erhält man 1,0 g N-[′-(DL-3- trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-n-decylamin in Form eines viskosen Öls.

IR μ(cm^-1):32,70 (Amin), 1750 (Ester), 1635, 1560 (Amid), 897 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,92 (d, J=5Hz, 6H), 1,25 (b.s., 22H), 1,6 (b.s., 3H), 3,18 (m, 2H), 3,42 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,48 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,63 (d, J=2Hz, 1H), 4,19 (q, J=7Hz, 2H), 4,0-4,7 (m, 1H), 6,2-6,6 (br., 1H), 6,6-7,1 (br. 1H). Massenspektrum m/e =412 (M⁺)

Beispiel 3

Arbeitet man gemäß Beispiel 1 unter Verwendung von 1,09 g N-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L- leucin und 0,31 g Pyrrolidin, so erhält man 0,89 g öliges N-[′-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L- leucyl]-pyrrolidin.

IR μ(cm^-1):3250 (Amin), 1740 (Ester), 1680, 1620, 1540 (Amid), 895 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,94 (d, J=5Hz, 3H), 0,96 (d, J=5Hz, 3H), 1,28 (t, J=7Hz, 3H), 1,20-2,40 (m, 7H), 3,10-3,60 (m, 5H), 3,69 (d, J=2Hz, 1H), 4,20 (q, J=7Hz, 2H), 4,50-5,00 (m, 1H), 6,80-7,50 (br., 1H) Massenspektrum m/e =326 (M⁺)

Beispiel 4

Arbeitet man gemäß Beispiel 1 und verwendet 1,09 g von N-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucin und 0,37 g Piperidin, so erhält man 0,7 g eines öligen N-[′-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L- leucyl]-piperidins.

IR m(cm^-1):3250 (Amin), 1735 (Ester), 1620, 1540 (Amid), 895 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,93 (t, 5Hz, 6H), 1,29 (t, J=7Hz, 3H), 1,60 (b.s., 9H) 3,45 (b.s., 4H), 4,17 (q, J=7Hz, 2H), 4,65-5,2 (m, 1H), 6,8-7,4 (br., 1H) Massenspektrum m/e =340 (M⁺)

Beispiele 5 bis 9

Arbeitet man gemäß Beispiel 1 unter Verwendung der entsprechenden Ausgangsverbindungen, so erhält man die in Tabelle 3 angegebenen Verbindungen der Formel (I)

Tabelle 3

Beispiel 10

In 10 ml Tetrahydrofuran wurden 0,36 g DL-trans-Benzyl hydrogenoxiran-2,3-dicarboxylat, 0,35 g N-L-Leucyl-N- methylanilin, 0,23 g 1-Hydroxybenzotriazol und 0,17 g N-Methylmorpholin gelöst. Zu der Lösung wurden nach und nach 0,33 g W.S.C.-Hydrochlorid unter Eiskühlung und Rühren gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden bei dieser Temperatur und weitere 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Von der Lösung wurde nahezu alles Tetrahydrofuran abdestilliert und der Rückstand wurde in 50 ml Wasser suspendiert und dreimal mit 50 ml Ethylacetat extrahiert. Die Extrakte wurden vereint, nacheinander mit einer 5%igen wäßrigen Chlorwasserstoffsäurelösung, einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und zur Trockne konzentriert. Das entstandene Öl wurde durch Kieselgelchromatografie (Chloroform : Aceton = 40 : 1) gereinigt, wobei man 0,57 g öliges N-[′-(DL-3-trans- Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-methyl- anilin erhielt.

IR μ(cm^ä1):3265 (Amin), 1753 (Ester), 1650, 1530 (Amid), 893 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,38 (d, J=5Hz, 3H), 0,70 (d, J=5Hz, 3H), 1,10-1,80 (m, 3H), 3,16 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,18 (s, 3H), 3,42 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,58 (d, J=2Hz, 1H), 4,20-4,80 (m, 1H), 4,95 (s, 1H), 5,08 (s, 1H), 6,40-6,90 (br., 1H), 6,90-7,70 (m, 10H) Massenspektrum m/e =424 (M⁺)

Beispiel 11

Arbeitet man gemäß Beispiel 10 und verwendet 1,4 g DL-trans-Benzylhydrogenoxiran-2,3-dicarboxylat und 0,99 g N-L-Leucyldimethylamin, so erhält man 1,68 g öliges N-[′-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-leucyl]-dimethylamin.

IR μ(cm^-1):3260 (Amin), 1753 (Ester), 1690, 1630, 1540 (Amid), 895 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,92 (d, J=5Hz, 3H), 0,99 (d, J=5Hz, 3H), 1,10-1,80 (m, 3H), 2,90 (s, 3H), 3,04 (s, 3H), 3,49 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,56 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,66 (d, J=2Hz), 4,70-5,00 (m, 1H), 5,14 (s, 2H), 6,50-7,10 (br., 1H), 7,27 (s, 5H) Massenspektrum m/e =362 (M⁺)

Beispiel 12

Arbeitet man gemäß Beispiel 10 und verwendet 2,2 g DL-trans-Benzylhydrogenoxiran-2,3-dicarboxylat und 2,3 g N-L-Isoleucyl-N-methylbenzylamin, so erhält man 2,8 g öliges N-[′-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-isoleucyl]-N-methylbenzylamin.

IR μ(cm^-1):3255 (Amin), 1750 (Ester), 1685, 1630, 1535 (Amid), 897 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,89 (b.s., 6H), 1,0-2,0 (m, 3H) 2,95 (s, 3H), 3,47 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,52 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,68 (d, J=2Hz, 1H), 4,1-4,95 (m, 3H), 5,10 (2, 2H) 6,5-7,4 (m, 11H) Massenspektrum m/e =438 (M⁺)

Beispiel 13

0,2 g N-[′-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-leucyl]-cyclohexylamin wurden in einer Mischung aus 1 ml Cyclohexylalkohol und 5 ml Benzol gelöst. Nach Zugabe eines Tropfens konzentrierter Schwefelsäure wurde die Lösung 15 Stunden unter Rückfluß behandelt. Anschließend wurden 50 ml Benzol zu der Lösung gegeben. Die Mischung wurde hintereinander mit einer gesättigten wäßrigen Natrium bicarbonatlösung und einer gesättigten, wäßrigen Natrium chloridlösung gewaschen und zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde durch Kieselgelchromatografie (Chloroform: Aceton = 70 : 1) und Umkristallisieren aus Chloroform/Ethyl ether gereinigt, wobei man 0,16 g N-[′-(DL-3-trans-Cyclo hexyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-cyclohexylamin, F 185,5 bis 186,5°C erhielt.

Beispiel 14

Arbeitet man nach dem Verfahren von Beispiel 13 unter Verwendung von 0,2 g N-[′-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyl oxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-cyclopentylamin und 1 ml Cyclopentylalkohol, so erhält man 0,15 g N-[′-(DL-3- trans-Cyclopentyloxycarbonyl)-L-leucyl]-cyclopentylamin, F 158 bis 160°C.

Beispiel 15

0,34 g N-[′-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-leucyl]-isopropylamin wurden in 5 ml Äthanol gelöst und anschließend wurden unter Eiskühlung und Rühren 0,056 g Kaliumhydroxid in 2 ml Ethanol zugegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden unter Eiskühlung gerührt. Zu der Mischung wurden 50 mg Ethylether gegeben und der Niederschlag wurde durch Filtrieren gesammelt, wobei man 0,23 g N-[′- (DL-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl]-isopropyl amin-kaliumsalz, F 174 bis 175°C (unter Zersetzung) erhielt.

Beispiel 16

Arbeitet man nach dem Verfahren von Beispiel 15 und verwendet 0,37 g N-[′-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyloxiran-2- carbonyl)-L-leucyl]-phenethylamin und 0,056 g Kaliumhydroxid, so erhält man 0,23 g N-[′-(DL-3-trans-Carboxyoxiran-2- carbonyl)-L-leucyl]-phenethylamin-kaliumsalz, F 163 bis 165°C (unter Zersetzung).

Beispiel 17

Zu 30 ml einer Benzollösung, enthaltend 1,5 g L-Leucyl-L- leucin-benzylester und 0,55 g Triethylamin, wurden unter Eiskühlung und Rühren im Laufe von 30 Minuten tropfenweise 20 ml einer Benzollösung, enthaltend 1,2 g Epoxy bernsteinsäuremonobenzylesterchlorid, gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden unter Eiskühlung und eine weitere Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Der gebildete Nieder schlag wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde nacheinander mit 5%iger wäßriger Chlorwasserstoffsäure, einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesium sulfat getrocknet und zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde durch Kieselchromatografie (Ethylacetat: n-Hexan = 1 : 2) und Umkristallisieren aus Ethylether/Petrol ether gereinigt, wobei man 1,8 g N-(DL-3-trans-Benzyloxy carbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L-leucin-benzylester, F 91 bis 93°C, erhielt.

Beispiel 18

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 17 unter Verwendung von 0,46 g L-Phenylalanyl-L-phenylalanin- methylester und 0,26 g Epoxybernsteinsäuremonoethylester chlorid, so erhält man 0,27 g N-(DL-3-trans-Ethoxycarbonyl oxiran-2-carbonyl)-L-phenylalanyl-L-phenylalanin-methyl ester, F 142 bis 143°C.

Beispiel 19

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 17 unter Verwendung von 1,3 g L-Leucyl-L-prolin-methylester und 1,4 g Epoxybernsteinsäuremonobenzylesterchlorid, so erhält man 1,32 g öligen N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2- carbonyl)-L-leucyl-L-prolin-methylester.

IR μ(cm^-1):3300 (Amin), 1750 (Ester), 1690, 1630, 1550 (Amid), 900 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,96 (d, J=5Hz, 6H), 1,10-2,40 (m, 7H), 3,30-3,90 (m, 4H), 3,64 (s, 3H), 4,10-4,90 (m, 2H), 5,11 (s, 2H), 6,30-7,00 (br., 1H), 7,27 (s, 5H) Massenspektrum m/e =446 (M⁺)

Beispiel 20

Zu einer Lösung aus 1,5 g DL-trans-Benzylhydrogenoxiran-2,3- dicarboxylat, 1,75 g L-Leucin-L-glutamsäure-dimethylester, 0,88 g 1-Hydroxybenzotriazol und 0,66 g N-Methylmorpholin in 50 ml Tetrahydrofuran wurden unter Eiskühlung und Rühren nach und nach 1,24 g W.S.C.-Hydrochlorid gegeben. Die Mischung wurde 1 Stunde unter Eiskühlung und weitere 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Tetrahydrofuran wurde weitgehend unter vermindertem Druck abdestilliert. 80 ml Wasser wurden zu dem Rückstand gegeben und die Mischung wurde zweimal mit 80 ml Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatextrakte wurden vereint, nacheinander mit 5%iger wäßriger Chlorwasserstoffsäure, einer gesättigten Natriumbicarbonatlösung und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde durch Kieselchromatografie (Chloroform: Aceton = 70 :1) und Umkristallisieren aus Chloroform/ Ethylether gereinigt, wobei man 1,65 g N-(DL-3-trans-Benzyl oxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-l-glutamsäure dimethylester, F 126 bis 128°C, erhielt.

Beispiel 21

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 20 unter Verwendung von 1,3 g DL-trans-Benzylhydrogenoxiran-2,3- dicarboxylat und 1,3 g L-Leucyl-L-isoleucin-methylester, so erhält man 2,2 g öligen N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyl oxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L-isoleucin-methylester.

IR μ(cm^-1):3300 (Amin), 1740 (Ester), 1660, 1550 (Amid), 900 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,92 (b.s., 12H), 1,3-2,0 (m, 6H) 3,45 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,49 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,63 (d, J=2Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 4,2-4,7 (m, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,3-6,7 (br., 2H), 7,26 (s, 5H) Massenspektrum m/e =462 (M⁺)

Beispiel 22

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 20 unter Verwendung von 0,96 g DL-trans-Benzylhydrogenoxiran-2,3- dicarboxylat und 1,12 g D-Leucyl-L-leucin-methylester, so erhält man 1,3 g N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran- 2-carbonyl)-D-leucyl-L-leucin-methylester als viskoses Öl.

IR μ(cm^-1):3260 (Amin), 1740 (Ester), 1670, 1645, 1553 (Amid), 897 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,91 (d, J=5Hz,12H), 1,2-2,0 (m, 6H), 3,46 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,59 (s, 3H), 3,60 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,66 (d, J=2Hz, 1H), 4,20-4,90 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,30-6,70 (br., 2H), 7,24 (s, 5H) Massenspektrum m/e =462 (M⁺)

Beispiel 23

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 20 unter Verwendung von 0,95 g DL-trans-Benzylhydrogenoxiran-2,3- dicarboxylat und 1,1 g L-Leucyl-D-leucin-methylester, so erhält man 1,38 g N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2- carbonyl)-L-leucyl-D-leucin-methylester als viskoses Öl.

IR μ(cm^-1):3270 (Amin), 1740 (Ester), 1670, 1645, 1545 (Amid), 895 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) w =0,90 (d, J=5Hz, 6H), 1,30-1,90 (m, 3H), 3,45 (d, J=2Hz, 0,5H), 3,55-3,70 (m, 1,5H), 3,62 (s, 3H), 4,10-4,80 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 6,30-6,70 (br., 2H), 7,22 (s, 5H) Massenspektrum m/e =462 (M⁺)

Beispiel 24

0,5 g N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-leucyl-D-leucin-methylester, erhalten gemäß Beispiel 23, wurden durch Kieselgelchromatografie (1,5 cm × 40 cm, Chloroform) adsorbiert. 5 g des Kieselgels wurden jeweils in ein Reagenzglas gegeben und durch Dünnschichtchromatografie (Kieselgel, Chloroform : Aceton = 40 : 1) behandelt, wobei man zwei Fraktionen erhielt und die eine die Verbindung mit dem höheren RF-Wert und die andere die Verbindung mit einem niedrigeren Rf-Wert enthielt.

Die Fraktion mit der Verbindung, die den höheren Rf-Wert aufwies, wurde konzentriert und der Rückstand wurde aus Ethylether/Petrolether umkristallisiert, wobei man 0,15 g N-(D-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl- D-leucin-methylester, F 95 bis 97°C, [α] = -51,1 (c=1, Ethanol) erhielt.

Beispiel 25

Die Fraktion mit dem niedrigeren Rf-Wert, die aus dem Kieselgel in Beispiel 24 gewonnen wurde, wurde konzentriert und der Rückstand wurde aus Ethylether/Petrolether umkristallisiert, wobei man 0,14 g N-(L-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran- 2-carbonyl)-L-leucyl-D-leucin-methylester erhielt. F 72 bis 73°C, [α] = +44,0 (c=1, Ethanol).

Beispiele 26 bis 42

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 20 unter Verwendung der entsprechenden Ausgangsverbindungen, so erhält man die in Tabelle 4 aufgezählten Verbindungen der Formel (I).

Tabelle 4

In dieser Tabelle bedeutet Arg(NO₂) die N^G-Nitro-L-arginyl gruppe, Met die Methionylgruppe, Thr die Threonylgruppe, Orn(z) die δ-Carboxybenzoxy-L-ornithylgruppe, Phe die Phenylalanylgruppe, Leu die Leucylgruppe, Trp die Tryptophyl gruppe, Tyr die Tyrosylgruppe, Gly die Glycylgruppe, Val die Valylgruppe, Ala die Alanylgruppe. Die nicht als D- Isomere beschriebenen Verbindungen sind L-Isomere.

Beispiel 43

In einer Mischung aus 8 ml Methanol, 2 ml Essigsäure und 1 ml Wasser wurden 0,1 g des gemäß Beispiel 26 erhaltenen N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl- N^G-nitro-L-arginin-methylesters gelöst. Nach Zugabe von 50 mg 5%igem Palladium auf Kohle wurde die Mischung 4 Stunden bei Raumtemperatur in einem schwachen Wasserstoffstrom gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und das Filtrat konzentriert. Der Rückstand wurde säulenchromatografisch über Sephadex LH-20 (Methanol) behandelt und dann aus Methanol/Chloroform umkristallisiert, wobei man 0,068 g N-(DL-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L- arginin-methylester, F 160 bis 165°C (unter Zersetzung), erhielt.

Beispiel 44

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 43 und verwendet 0,31 g des gemäß Beispiel 30 erhaltenen N-(DL- 3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-δ- carbobenzoxy-L-ornithin-benzylesters und katalysiert das erhaltene Produkt aus Wasser/Aceton, so erhält man 0,1 g N-(DL-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L-ornithin, F 187 bis 188°C.

Beispiel 45

In 20 ml Ethanol wurden 0,5 g des gemäß Beispiel 17 erhaltenen N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)- L-leucyl-L-leucin-benzylesters gelöst. Nach Zugabe von 0,2 g Palladium auf Kohle wurde die Mischung 6 Stunden bei Raumtemperatur in einem schwachen Wasserstoffstrom gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und das Filtrat konzentriert. Der Rückstand wurde aus Ethanol/ Ethylether umkristallisiert, wobei man 0,32 g N-(DL-3- trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl(-L-leucyl-L-leucin, F 121 bis 123°C, erhielt.

Beispiel 46

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 45 und verwendet 0,21 g des gemäß Beispiel 19 erhaltenen N-(DL- 3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl- L-prolin-methylesters und reinigt das erhaltene Konzentrat durch Kieselgelchromatografie (Chloroform : Methanol = 20 : 1), so erhält man 0,095 g des öligen N-(DL-3-trans- Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L-prolin-methylesters.

IR μ(cm^-1):3250 (Amin), 1740 (Ester), 1620, 1560 (Amid), 900 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,96 (d, J=5Hz, 6H), 1,20-2,60 (m, 7H), 3,40-3,90 (m, 4H), 3,68 (s, 3H), 4,10-5,00 (m, 2H), 7,60- 8,00 (br., 1H), 8,80-9,30 (br., 1H)

Beispiel 47

Arbeitet man nach dem Verfahren gemäß Beispiel 46 und verwendet 0,188 g des gemäß Beispiel 20 erhaltenen N-(DL- 3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L- glutamsäure-dimethylesters, so erhält man 0,1 g des öligen N-(DL-3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl- L-glutamsäure-dimethylesters.

IR μ(cm^-1):3280 (Amin), 1730 (Ester), 1650, 1550 (Amid), 900 (Epoxy) NMR (60 MHz, CDCl₃) δ =0,92 (d, J=5Hz, 6H), 1,20-2,70 (m, 7H), 3,57 (s, 3H), 3,63 (s, 3H), 3,45-3,70 (m, 2H), 4,10-4,80 (m, 2H), 5,90-6,50 (m, 2H), 7,10-7,70 (br., 1H)

Beispiel 48

In Benzylalkohol wurden 0,54 g des gemäß Beispiel 17 erhaltenen N-(DL-3-trans-Benzyloxycarbonyloxiran-2-carbonyl)-L-leucyl- L-leucin-benzylester gelöst. Zu der Lösung wurden tropfenweise unter Eiskühlung und Rühren 5 ml einer Benzylalkohollösung, enthaltend 0,56 g Kaliumhydroxid, gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden unter Eiskühlung gerührt. Dann wurde zu dem Reaktionsgemisch Petrolether gegeben und der Niederschlag wurde auf einem Filter gesammelt. Er wurde dann in 10 ml einer 5%igen wäßrigen Chlor wasserstoffsäurelösung gelöst und zweimal mit 10 ml Ethyl acetat extrahiert. Die Extrakte wurden vereint, mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen und konzentriert. Der erhaltene Rückstand wurde durch Kieselgelchromatografie (Chloroform : Methanol = 4 : 1) und Umkristallisieren aus Chloroform/n-Hexan) gereinigt, wobei man 0,23 g N-(DL- 3-trans-Carboxyoxiran-2-carbonyl)-L-leucyl-L-leucin- benzylester, F 103 bis 104°C, erhielt.

Claims

1. Epoxybernsteinsäurederivate der allgemeinen Formel worin bedeuten:R¹Wasserstoff, ein Alkalimetall, Alkyl mit 1 bis 2 Kohlenstoffatomen, Cycloalkyl mit 5 bis 6 Kohlen stoffatomen oder Benzyl, R²Alkyl mit 3 bis 4 Kohlenstoffatomen oder Benzyl, R³Wasserstoff oder Methyl, und R⁴Alkyl mit 1 bis 10 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Benzyl, Phenethyl, Cycloalkyl mit 3 bis 6 Kohlen stoffatomen oder eine Gruppe der Formel worinR⁵Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoff atomen oder Alkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, das durch Hydroxy, Methylmercapto, Phenyl, Hydroxyphenyl, Indolyl substituiert ist, ein gegebenenfalls ge schütztes Carboxy, ein gegebenenfalls geschütztes Amino oder ein gegebenenfalls geschütztes Guanidino bedeutet, und R⁶Hydroxy, Alkylioxy, Alkoxy mit 1 bis 2 Kohlenstoffatomen, Benzyloxy, Amino oder Dimethylamino oder R³ und R⁴zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen 5- bis 6-gliedrigen hetero zyklischen Ring, der eine geschützte Carboxygruppe tragen kann, bilden.

2. Arzneimittel, enthaltend als Wirkstoff eine Verbindung gemäß Anspruch 1, neben üblichen Verdünnungsmitteln oder Trägern.