NL8001675A - Mercaptoacyldipeptiden. - Google Patents

Description

/ * 1 Ύ

Mercaptoacyldipeptiden.

Gevonden werd dat verbindingen met de algemene formule 1 R.2 R-S-(CH0) -CH-C-A.-A0 (1) 0 5 en de alkylesters en zouten daarvan een bruikbare hypotensieve activiteit bezitten. In de formule 1 en in de onderstaande beschrijving bezitten de symbolen de volgende betekenissen:

Rj stelt voor waterstof, alkanoyl, benzoyl of een groep met de formule R^ 10 -S-CCH^-CH-C-Aj-A^ R2 stelt voor 0 waterstof, alkyl of fenylalkyl, n is 0 of 1 en Aj en A2 stellen elk voor een α-amino- of α-iminozuurrest, met elkaar verbonden via een peptide-binding.

15 Onder "alkyl" verstaat men in deze beschrijving alkylgroepen met 1-7 koolstofatomen.

Onder "alkanoyl" verstaat men in deze beschrijving alkanoylgroepen met 2-7 koolstofatomen. Acetyl is de voorkeurs alkanoylgroep .

20 De α-amino- en α-iminozuurresten, voorgesteld door Aj en A2, kunnen resten van ofwel in de natuur voorkomende ofwel synthetische zuren zijn. Voorbeelden daarvan zijn proline, 4-hydroxyproline, 4.4-ethyleendioxyproline, 4-methoxypro1ine, 4-thiazolidinecarbonzuur, tryptofaan, glycine, alanine, leucine, 25 isoleucine en valine. Zoals hierboven werd vermeld zijn de groepen Aj en A2 met elkaar verbonden door een "peptide-binding", -C-NH- ff dat wil zeggen de binding 0 tussen de a-carboxylgroep van 80 0 1 6 75 2 de rest Aj en de α-amino- of a-iminogroep van de groep A2.

De mercaptoacyldipeptiden met de formule 1, waarin Rj voorstelt alkanoyl of benzoyl, kunnen worden bereid door acylering van een dipeptide met de formule 2 5 Aj -A2 (2) of een alkylesterderivaat daarvan met een thiozuur met de formule 3 R2

Rl-S-(CH„) -CH-C-OH (3) 1 ^ n „ 0 10 In de formule 3 en de onderstaande beschrijving is Rj * alkanoyl of benzoyl. De bovengenoemde acylering kan worden uitgevoerd onder toepassing van willekeurige in de techniek bekende procedures. De acylering kan bijvoorbeeld worden uitgevoerd in tegenwoordigheid van een koppelingsmiddel, zoals een 15 carbodiïmide, waarvan dicyclohexylcarbodiïmide het meest veelvuldig wordt toegepast. Anderzijds kan het thiozuur met de formule 3 worden geactiveerd door vorming van het gemengde anhydride, symmetrische anhydride, zuurchloride of actieve ester daarvan of door toepassing van Woodward-reagens K of N-ethoxycarbo-20 nyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinoline. Voor een meer uitvoerige bespreking van de verschillende acyleringstechnieken wordt verwezen naar Methoden der organischen Chemie (Houben-Weyl), Vol.

XV, Part II, pag. 1 e.v. (1974).

Een andere synthese voor de verbindingen met de 25 formule 1, waarin Rj voorstelt alkanoyl of benzoyl, omvat de achtereenvolgende acylering, in tegenstelling tot de hierboven beschreven directe acylering, dat wil zeggen de acylering van het aminozuur "Aj" met een mercaptoalkanoylzuur met de formule 3 (onder toepassing van de boven beschreven procedure) onder vor-30 ming van een mercaptoalkanoylaminozuur met de formule *2 R. *-S-(CH0) -CH-C-A.

1 L II 11 1 gevolgd door 0 acylering van het aminozuur "A2" of de alkylester daarvan met 35 een mercaptoalkanoylaminozuur met de formule 4. De acylering kan worden bewerkstelligd onder toepassing van willekeurige in de 80 0 1 6 75 v* * 3 techniek bekende procedures voor de koppeling van aminozuren.

Voor een overzicht van deze technieken wordt verwezen naar Bodanszky en Ondetti, Petide Synthesis, Interscience Publishers (1966).

5 Verbindingen met de formule 1, waarin Rj water stof voorstelt, kunnen worden bereid door ammonolyse'of alkalische hydrolyse van de overeenkomstige verbindingen met de formule I, waarin Rj voorstelt alkanoyl of benzoyl, die verkregen kunnen worden onder toepassing van een van de boven beschreven procedures.

10 De verbindingen met de formule 1, waarin Rj voorstelt *2 -S-(CHJ -CH-C-A.-A- 2 n „ 1 2 0 kunnen worden bereid door oxydatie van het overeenkomstige vrije 15 thiol met de formule 1 met jodium.

Alternatieven voor de bovengenoemde syntheses zullen voor deskundigen duidelijk zijn. Bijvoorbeeld kan, indien een ester van Aj -of wordt gebruikt bij een van de bo vengenoemde syntheses, het overeenkomstige vrije zuur worden ver-20 kregen uit het veresterde produkt door zure of alkalische hydrolyse.

Mercaptoalkanoylzuren met de formule 3 en mercap-toalkanoylarainozuren met de formule 4 en methodes voor de bereiding daarvan zijn in de literatuur beschreven, waarbij bijvoor-25 beeld kan worden verwezen naar de Amerikaanse octrooischriften 4.046.889, 4.105.776 en 4.053.651.

De verbindingen volgens de uitvinding vormen basische zouten met verschillende anorganische en organische basen, welke zouten eveneens binnen het raam van de uitvinding\allen. Der-30 gelijke zouten omvatten ammoniumzouten, alkalimetaalzouten, zoals natrium- en kaliumzouten (die de voorkeur genieten), aard-alkalimetaalzouten, zoals de calcium- en magnesiumzouten, zouten met organische basen, bijvoorbeeld het dicyclohexylaminezout, benzathine-, N-methyl-D-glucamine-, hydrabamine-zouten, zouten met 35 aminozuren, zoals arginine, lysine en dergelijke. De niet-toxische, fysiologisch aanvaardbare zouten genieten de voorkeur, hoewel an- 80 0 1 6 75 4 dere zouten eveneens bruikbaar zijn, bijvoorbeeld bij de isolatie of zuivering van het produkt.

De verbindingen met de formule 1 en de alkyl-esters en zouten daarvan zijn bruikbaar als hypotensieve middelen.

5 Zij remmen de omzetting van het decapeptide angiotensine I in angiotensine II en zijn daarom bruikbaar bij het verminderen of verlichten van met angiotensine verbandhoudende hypertensie. De werking van het enzym renine op angiotensinogeen, een pseudo-globuline in bloedplasma, vormt angiotensine I. Angiotensine I 10 wordt door angiotensine-omzettend enzym (ACE) omgezet in angiotensine II. Deze laatste is een actieve pressor-stof, die als het veroorzakende middel wordt beschouwd van variërende vormen van hypertensie bij verschillende zoogdier-species, bijvoorbeeld ratten en honden. De verbindingen volgens de uitvinding verbreken de 15 omzettingsvolgorde angiotensinogeen ->· (renine) -*· angiotensine I + (ACE) -* angiotensine II door remming (blokkering) van angiotensine-omzettend enzym en vermindering of eliminering van de vorming van de pressor-stof angiotensine II. Aldus wordt door toediening van een preparaat, bevattende ëén of meer verbindingen met de 20 formule 1, de van angiotensine afhankelijke hypertensie bij daaraan lijdende zoogdier-species verminderd. Een enkelvoudige dosis of bij voorkeur 2-4 deeldoses dagelijks, toegediend op een basis van ongeveer 0,1-100 mg per kg lichaamsgewicht per dag en bij voorkeur ongeveer 1-50 mg per kg lichaamsgewicht per dag, is ge-25 schikt voor het verlagen van de bloeddruk. De stof wordt bij voorkeur oraal toegediend, maar parenterale toedieningswijzen, zoals de subcutane, intramusculaire, intraveneuze of intraperitoneale toediening, kunnen eveneens worden toegepast.

De verbindingen met de formule 1 kunnen ten ge-30 bruike bij het verlagen van de bloeddruk worden gebracht in de vorm van preparaten, zoals tabletten, capsules of elixirs voor orale toediening of steriele oplossingen of suspensies voor de parenterale toediening. Ongeveer 10-500 mg van een verbinding of mengsel van verbindingen met de formule 1 worden gemengd met een 35 fysiologisch aanvaardbaar vehikel, dragermateriaal, excipiëns, bindmiddel, conserveermiddel, stabiliseermiddel, smaakstof, etc., 80 0 1 6 75 5 I * in een eenheidsdoseringsvorm als vereist in de aanvaarde farmaceutische praktijk. De hoeveelheid actieve stof in deze preparaten is zodanig, dat een geschikte dosering in het aangegeven traject wordt verkregen.

5 De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet beperkt door de volgende voorbeelden.

Voorbeeld I

l-/N-(acetylthioacetyl)glycyl/-L-proline.

Glycyl-L-proline (1,72 g) wordt opgenomen in 10 10 ml IN. natriumhydroxyde onder roeren in een ijsbad. Hieraan worden 5 ml 2N. natriumhydroxyde toegevoegd, gevolgd door 1,13 g chlooracetylchloride, en het bad wordt verwijderd. Na 3 uren bij kamertemperatuur worden thiolazijnzuur (836 mg) en kaliumcar-bonaat (960 mg) in 10 ml water toegevoegd en het reactiemengsel 15 wordt gedurende ongeveer 16 uren bij kamertemperatuur geroerd.

Het reactiemengsel wordt aangezuurd met gesulfonateerd polysty-reen-kationuitwisselaarhars, geëlueerd met water en in vacuo drooggedampt. Het material werd opgenomen in azijnzuur en het onoplosbare materiaal (smeltpunt boven 320°C) wordt afgefiltreerd.

20 Het filtraat wordt in vacuo drooggedampt en chloroform-azijnzuur (7:3) wordt toegevoegd. Hetprodukt wordt gecentrifugeerd en de bovenstaande vloeistof wordt aangebracht op een silicagel-kolom van 60 g en geëlueerd met chloroform-azijnzuur (7:3), waarbij 1,0 g van de titelverbinding wordt verkregen.

25 Voorbeeld II

1-/N-(mercaptoacetyl)glycyl/-L-proline.

l-/N-(acetylthioacetyl)glycyl/~L-proline (1,0 g) wordt gedurende 30 minuten in een argonatmosfeer behandeld in een oplossing van 6 ml water en 6 ml geconcentreerd natriumhy-30 droxyde. De oplossing wordt in vacuo geconcentreerd, aangezuurd met gesulfonateerd polystyreen-kationuitwisselaarhars, aangebracht op een kolom daarvan en geëlueerd met water. De 800 mg van het daarbij verkregen materiaal (plus 200 mg van een voorgaande bereiding) worden gechromatografeerd op een kolom van 30 g 35 silicagel met chloroform-azijnzuur (7:3). Dit produkt (740 mg) wordt aangebracht op een kolom van 85 ml diethylaminoethyldextran- 80 0 1 6 75 6 anionuitwisselaarhars en geëlueerd met een lineaire gradient van 0,005 M ammoniumhydrogeencarbonaat tot 0,5 M ammoniumhydrogeen-carbonaat (750 ml elk). Het produkt wordt omgezet in het vrije zuur op gesulfonateerd polystyreen-kationuitwisselaarhars en ver-5 volgens behandeld met 7 ml azijnzuur en 350 ml zinkstof onder roeren in een argonatmosfeer gedurende 6 uren. De suspensie wordt gecentrifugeerd en de bovenstaande vloeistof in vacuo droogge-dampt, in water opgenomen en gelyofiliseerd. Het verkregen materiaal wordt aangezuurd met gesulfonateerde polystyreenhars, aan-10 gebracht op een kolom daarvan en geëlueerd met water, waarbij 365 mg van de titelverbinding worden verkregen.

Analyse voor CgH^^O^S.S ^0 Berekend: C 42,95, H 5,68, N 11,13, S 12,72 Gevonden: G 42,92, H 5,78, N 10,94, S 12,68 15 SH: Ber. -1,00; gev. -0,98

Voorbeeld III

t-butylester van (S)-l-/3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl/-L-p r o ly 1-L-pr o 1 ine.

Aan een oplossing van 7,8 g 1/S—3—(acetylthio)-Ι-ΙΟ methyl-l-oxopropyl/-L-proline in 75 ml dichloormethaan worden toegevoegd 5,13 g t-butyl-L-prolinaat en de oplossing wordt afgekoeld tot 5°C. Aan deze oplossing wordt druppelsgewijze toegevoegd een oplossing van dicyclohexylcarbodixmide in 50 ml dichloormethaan.

De reactie wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur gedurende onge-25 veer 16 uren. Nadat het precipitaat is verwijderd wordt de resulterende oplossing achtereenvolgens gewassen met water, 5 %'s na-triumhydrogeencarbonaat, water, 10 %’s kaliumhydrogeensulfaat en water en vervolgens gedroogd boven natriumsulfaat. Het ruwe produkt (12 g), dat verkregen wordt na de verwij dering van het op-30 losmiddel, wordt bij staan vast. Door herkristallisatie uit ethylacetaat-pentaan verkrijgt men de titelverbinding; smeltpunt -104-106°C.

Voorbeeld IV

l-(S-3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-L-proline.

35 t-butylester van l-/S-3-(acetylthio)-2-methyl-l- oxopropyl/-L-proline (12 g) wordt opgenomen in 60 ml herdestil- 800 1 6 75 ♦ * 7 leerd trifluorazijnzuur en de resulterende oplossing laat men gedurende 1 uur bij kamertemperatuur staan. Trifluorazijnzuur wordt in vacuo verwijderd en het residu wordt zorgvuldig in een hoog vacuum gedurende 24 uren gedroogd. De zware olie wordt opge-5 lost in 30 ml methanol en aan de oplossing worden toegevoegd 20 ml geconcentreerd ammoniumhydroxyde. Het mengsel wordt gedurende 1 uur op kamertemperatuur gehouden en het oplosmiddel wordt vervolgens in vacuo verwijderd en het olie-residu wordt gedroogd en behandeld met 6 ml dicyclohexylamine. Het zout wordt behandeld 10 met ether en een olie precipiteert. De olie wordt opgenomen in ethylacetaat en de oplossing wordt gewassen met 10 %'s kaliumhy-drogeensulfaat en vervolgens gedroogd boven natriumsulfaat. Na de verwijdering van het oplosmiddel wordt het residu opgenomen in methanol en de gehele hoeveelheid wordt geadsorbeerd aan silica-15 gel. Het oplosmiddel wordt verwijderd en het silicagel, bevattende het geadsorbeerde produkt, wordt aangebracht op een silica-gel-kolom, toebereid in chloroform. De kolom wordt geëlueerd met chloroform en de mercapto-positieve fracties worden gecombineerd.

Het oplosmiddel wordt verwijderd en het residu wordt uit water 20 gelyofiliseerd, waarbij 1,05 g van de titelverbinding wordt verkregen als een hygroscopische vaste stof.

Analys e voor C ^22^2^4^. 1 / 2^0 Berekend: C 51,99, H 7,17, N 8,66, S 9,92 Gevonden: C 52,12, H 7,44, N 8,18, S 9,37 25 Neutralisatie-equivalent: ber. 323, gev. 341.

Voorbeeld V

N-(acetylthioacety1)-L-valy1-L-proline.

Een oplossing van t-butyloxycarbonyl-L-valyl-L-proline (3,1 g) in trifluorazijnzuur (20 ml) wordt gedurende 15 30 minuten op kamertemperatuur gehouden, het oplosmiddel wordt in vacuo verwijderd en het olie-achtige residu wordt gedurende verscheidene ure in vacuo gedroogd. De olie wordt opgenomen in di-methylformamide (25 ml) en aan deze oplossing wordt N-hydroxy-succinimide-ester van acetylmercaptoazijnzuur (2,2 g) toegevoegd.

35 De reactie wordt uitgevoerd bij een pH van 7,5 (ingesteld met triethylamine) en bij kamertemperatuur gedurende 17 uren. Na de 80 0 1 6 75 8 verwijdering van het oplosmiddel wordt het residu opgenomen in ethylacetaat en wordt de oplossing achtereenvolgens gewassen met water, 10 %’s kaliumhydrogeensulfaat, water, verzadigd natrium-hydro geencarbonaat, water en tenslotte gedroogd boven natrium-5 sulfaat, waarbij 4,8 g van de titelverbinding worden verkregen als een olie.

Voorbeeld VI

N- (mercaptoacetyl)-L-valyl-L-proline.

N-(acetylthioacetyl)-L-valyl-L-proline (4,8 g) 10 wordt opgenomen in een mengsel van 12 ml methanol en 7,5 ml geconcentreerd ammoniumhydroxyde en de resulterende oplossing wordt gedurende 1 uur op kamertemperatuur gehouden. De pH wordt ingesteld op 7 en methanol wordt in vacuo verwijderd. De resterende waterige laag wordt aangezuurd tot een pH van 2 met 2N. chloor-15 waterstofzuur en de oplossing wordt, verzadigd met natriumchlori-de. Het produkt wordt geëxtraheerd met ethylacetaat, de oplossing gedroogd boven natriumsulfaat en het oplosmiddel in vacuo verwijderd, waarbij 2 g materiaal met een smeltpunt van 158-162°C worden verkregen. Door herkristallisatie uit ethylacetaat (onder 20 toevoeging van een kleine hoeveelheid methanol) verkrijgt men het produkt; smeltpunt « 162—165°G. Na droging van een monster bij 55°C gedurende 2 uren bedraagt het smeltpunt 190-192°C.

Voorbeeld VII

1-/S-3- (ηοβίν1ίίιίο)-2-ιηβί1ιν1-1-οχορΓορν1/-1>ρΓο1ν^1νοίη6-25 ethylester

Volgens de procedure van voorbeeld III, maar onder gebruikmaking van 10,4 g l-/S-3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl/-L-proline, 100 ml dichloormethaan, 5,6 g van de ethylester van glycine (bereid uit 5,58 g van het hydrochloride-zout 30 van de ethylester van glycine en 5,6 ml triethylamine in 50 ml dichloormethaan) en 8,24 g dicyclohexylcarbodiïmide, verkrijgt men 11,2 g van de titelverbinding als een viskeuze olie.

Voorbeeld VIII

(S)-1-(3-mercap to-2-methy1-1-oxopropy1)-L-prolylglycine-35 lithiumzout 1—/S—3—(acetylthio)-2-methy1-1-oxopropyl/-L- 80 0 1 6 75 * ·* 9 prolylglycine-ethylester (11,2 g) wordt opgenomen in methanol (200 ml), waaraan een waterige oplossing van kaliumhydroxyde (9 g in 40 ml water) wordt toegevoegd. Men laat de hydrolyse gedurende 2 uren bij kamertemperatuur verlopen. Het organische oplosmiddel 5 wordt in vacuo verwijderd en het waterige residu wordt ingesteld op een pH van 7,0. Het produkt wordt geëxtraheerd met ethyl-acetaat, de oplossing gedroogd boven natriumsulfaat en het oplosmiddel in vacuo verwijderd. Het residu (3,5 g) wordt opgenomen in water en de pH wordt ingesteld op 2,0. Het vrije zuur wordt 10 weer opgenomen in ethylacetaat onder gebruikmaking van natrium- chloride teneinde de oplosbaarheid in water te verminderen. Na de verwijdering van het oplosmiddel wordt het residu uit water ge-lyofiliseerd, waarbij 2,16 g van de vrije base van de titelver-binding worden verkregen. De gehele hoeveelheid werd opgenomen 15 in water en de pH werd zorgvuldig ingesteld op 7,0 onder gebruikmaking van 0,05N. lithiumhydroxyde. De oplossing wordt gelyofili-seerd, waarbij 1050 mg van de titelverbinding worden verkregen als een hygroscopische vaste stof.

Analyse voor C jHj^^O^S.Li 20 Berekend: C 47,14, H 6,12, S 11,44, Li 2,48 Gevonden: C 46,56, H 6,42, S 11,37, Li 2,43.

Voorbeeld IX

(S)-1-(3-mercapto-2-methyl-1-oxopropyl)-L-prólyl-L-alanine.

Volgens de procedure van voorbeelden III, en IV, 25 maar onder gebruikmaking van 7,8 g 1-/S-3-(acetylthio)-2-methyl-1-oxopropyl /-L-p rol ine , 75 ml dimethylformamide, 6,2 g dicyclohexyl-carbodiïmide, 4,2 g van het hydrochloride-zout van de methyl-ester van L-alanine en 4,2 ml triethylamine (pH 7,5-8,0), verkrijgt men 8 g materiaal. Dit materiaal wordt geleid door een 30 silicagel-kolom onder gebruikmaking van ethylacetaat als elueer-middel. Twee fracties worden verkregen (R^ = 0,76 en R^ = 0,4, silicagel, ethylacetaat).

De trager bewegende fractie (2 g, R^ = 0,4) wordt opgenomen in kaliumhydroxyde/waterig methanol (1,5 g kalium-35 hydroxyde in 7 ml water en 35 ml methanol) en de oplossing wordt gedurende 2 uren op kamertemperatuur gehouden. Het organische op- 80 0 1 6 75 10 losmiddel wordt in vacuo verwijderd en de waterige laag wordt aangezuurd tot een pH van 2,0. Na de toevoeging van natriumchlo-ride wordt het produkt vijfmaal geëxtraheerd met ethylacetaat.

De oplossing wordt gedroogd en het oplosmiddel wordt in vacuo 5 verwijderd. Het vaste residu wordt gekristalliseerd uit hete ethylacetaat, waarbij 1 g produkt met een smeltpunt van 128-130°C wordt verkregen.

Voorbeeld X

Acetylthioacetylvalyltryptofaan-methylester.

10 Een oplossing van 15 g van de methylester van t-butyloxycarbonylvalyltryptofaan in 150 ml trifluorazijnzuur en 15 ml anisool wordt gedurende 1 uur in een stikstofatmosfeer geroerd. De oplossing wordt in vacuo gestript tot een olie-achtig residu.

15 Een oplossing van 4,83 g acetylthioazijnzuur en 6,18 g hydroxybenzotriazool-monohydraat in 120 ml tetrahydro-furan wordt afgekoeld tot 0°C en behandeld met een oplossing van 8,16 g dicyclohexylcarbodiïmide in 60 ml tetrahydrofuran. Het mengsel wordt gedurende 0,5 uur bij 0°C geroerd en vervolgens bij 20 kamertemperatuur gedurende 1 uur. Het geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en het filtraat wordt in vacuo gestript tot een witte vaste stof. De actieve ester wordt opgelost in 90 ml di-methylformamide, waarna een oplossing van het bovengenoemde di-peptide-methylestertrifluorazijnzuurzout in 60 ml dimethylform-25 amide worden toegevoegd samen met voldoende N-methylmorfo1ine voor het handhaven van de pH op 7,5 en het resulterende mengsel wordt gedurende 16 uren bij kamertemperatuur geroerd. Het reactie-mengsel wordt in vacuo gestript tot een olie, die verdeeld wordt tussen ethylacetaat en water. De ethylacetaatfase wordt gewassen 30 met 2N. citroenzuur, water, verzadigde natriumhydrogeencarbo- baatoplossing en water, gedroogd boven natriumsulfaat en gestript tot een vaste stof. Het materiaal wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-pentaan, waarbij 10 g van de titelverbinding worden verkregen; smeltpunt = 110—112°C.

35 Voorbeeld XI

N-(mercaptoacetyl)-L-valyl-L-tryptofaan-lithiumzout.

800 1 6 75 π

Acetylthioacetylvalyltryptofaan-methylester (5,0 g) wordt opgelost in 52 ml methanol en een oplossing van 2,1 g kaliumhydroxyde in 10,5 ml water wordt toegevoegd. Het mengsel wordt in een stikstofatmosfeer gedurende 1,5 uren bij kamertempe-5 ratuur geroerd, waarna de methanol in vacuo wordt gestript. Het waterige residu wordt verdund met water, geëxtraheerd met ethyl-acetaat en aangezuurd tot een pH van 2,0 met 6N. chloorwaterstof-zuur. De vaste stof wordt afgefiltreerd, gewassen met water en gedroogd, waarbij 3,4 g materiaal worden verkregen. De vaste stof 10 wordt gechromatografeerd op een Sephadex LH-20 kolom onder gebruikmaking van methanol-water (7:3) als elueermiddel, waarbij 1,5 g van een olie worden verkregen. De olie wordt opgelost in ethanol-water (1:1) en ingesteld op een pH van 7,0 met 0,1N. lithium-hydroxyde. Een kleine hoeveelheid onoplosbaar materiaal wordt 15 door filtratie verwijderd en het filtraat wordt in vacuo gestript tot een olie. De olie wordt opgelost in water en gelyofiliseerd, waarbij 1,5 g van een hygroscopische vaste stof worden verkregen.

Analyse voor C18H22N3°4S*Li Berekend: C 51,54, H 6,25, S 7,65, Li 1,65 20 Gevonden: C 51,94, H 6,03, S 7,28, Li 1,62

Neutralisatie-equivalent: ber. 419; gev. 413.

Voorbeeld XII

(S)-1-/3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl/-L-prolyl-D-alanine-methylester, 25 Aan een oplossing van 1-/S-3-(acetylthio)-2- methyl-l-oxopropyl/-L-proline (7,8 g) in acetonitril (150 ml) wordt carbonyldiïmidazool (4,9 g) toegevoegd bij 0°G. Het mengsel wordt gedurende 1 uur bij deze temperatuur geroerd, waarna de oplossing nagenoeg helder wordt, en D-alanine-methylester-hydrochloride 30 (4,2 g) wordt toegevoegd. De pH wordt ingesteld op 7,5-8,0 met tri- ethylamine (4,2 ml) en het reactiemengsel wordt gedurende 17 uren bij kamertemperatuur geroerd. Het precipitaat en het oplosmiddel worden verwijderd en het olie-achtige residu wordt opgenomen in ethylacetaat. De oplossing wordt achtereenvolgens gewassen met 35 water, 0,1N. HC1, water, verzadigd NaHCO^, water, en gedroogd. Na de verwijdering van het oplosmiddel vertoont de resterende olie 80 0 1 6 75 12 één vlek op een dunnelaagchromatogram (tic) (silicagel, EtOAc en CHCl^MeOH 9:1) bij R^ = 0,5 met een spoor bij R^ « 0,75 (in ethylacetaat); opbrengst 4 g.

Voorbeeld XIII

5 (S)-1-(3-mercapto-2-me thy1-1-oxopropy1)-L-proly1-D-alanine.

(S)-/3-(acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl/-L-prolyl-D-alanine-methylester (4 g) wordt opgenomen in kalium-hydroxyde/waterige methanol (3 g kaliumhydroxyde in 14 ml water en 70 ml methanol) en de oplossing wordt gedurende 2 uren op 10 kamertemperatuur gehouden. Het produkt (2,1 g) wordt geïsoleerd onder toepassing van de in voorbeeld IX beschreven procedure; smeltpunt = 152-155°C als een kristallijne vaste stof.

Analyse voor ci2H20N2°4S Berekend: C 49,98, H 6,99, S 11,12 15 Gevonden: C 50,02, H 7,24, S 10,90

Neutralisatie-equivalent: ber. 288; gev. 284.

Voorbeeld XIV

l-/N-(mercaptoacetyl)-L-alanyl/-L-prOline.

Aan een oplossing van acetylthioazijnzuur (1,3 g) 20 en hydroxybenzotriazool (1,44 g) in tetrahydrofuran (39 ml) wordt dicyclohexylcarbodiïmide (2 g) toegevoegd en het mengsel wordt gedurende 30 minuten bij 0°C en gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het precipitaat wordt door filtratie verwijderd en aan het filtraat wordt toegevoegd L-alanyl-L-proline als het 25 trifluoracetaat-zout daarvan (bereid uit t-butyloxycarbonyl-L-alanyl-L-proline, 2,8 g, en trifluorazijnzuur). De pH wordt ingesteld op 7,5-8,0 met N-methylmorfoline en men laat de reactie gedurende ongeveer 16 uren bij kamertemperatuur verlopen. De oplosmiddelen worden in vacuo verwijderd en het residu wordt op-30 gelost in een mengsel van meethanol (18 ml) en geconcentreerd ammoniumhydroxyde (18 ml). Na 30 minuten wordt het mengsel in vacuo geconcentreerd, het residu wordt opgelost in water en aangebracht op een kolom van gesulfonateerd polystyreen-kationuit-wisselaarhars, waarbij men elueert met water. Dit materiaal wordt 35 verder gezuiverd door silicagel-chromatografie (azijnzuur-chloro-form, 7:3) en gekristalliseerd uit ethylacetaat; 850 mg; smelt- 80 0 1 6 75 • * 13 punt = 152— 155°C; / ct_7D = -128° (c = 1,5 in 50 %'s waterig MeOH).

Voorbeeld XV

l-/N-(mercaptoacetyl)-L-alanyl/-L-thiazolidine-4-carbonzuur.

5 Volgens de procedure van voorbeeld XIV maar onder toepassing van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-thiazo-lidine-4-carbonzuur in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline bij de procedure van voorbeeld XIV, verkrijgt men de titelverbinding.

10 Voorbeeld XVI

1-/N-(mercap toacety1)-L-alany1/-4-methoxy-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-4-methoxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van 15 L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XVII

1-/N-(mercaptoacetyl-L-alanyl/-4-hydroxy-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-4-20 hydroxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XVIII

1/N-(mercaptoacetyl)-L-alanyl/-4.4-ethyleendioxy-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar 25 onder toepassing van L-alany1-4.4-ethyleendioxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline, verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XIX

1-/N-(2-mercaptopropanoyl)-L-alanyl/-L-proline.

30 Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthiopropionzuur in plaats van 2-ace-tylthioazijnzuur verkrijgt men de titelverbinding aLs een wasachtige vaste stof; smeltpunt (47°C) 54-65°C (ontl.).

Analyse voor Cj jHjg^O^S. 1/21^0 35 Berekend: C 46,63, H 6,76, S 9,89 Gevonden: C 46,50, H 6,58, S 9,78 800 1 6 75 14 SH-titratie: 100 %.

Voorbeeld XX

1- /N-(3-mercapto-l-oxopropyl-L-alanyl/-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar 5 onder toepassing van 3-acetylthiopropionzuur in plaats van 2- acetylthioazijnzuur verkrijgt men de titelverbinding als een hygroscopische vaste stof; smp. (6l°C) 75-84°C.

Analyse voor Cj 0,751^0

Berekend: C 45,89, H 6,83, S 11,14 10 Gevonden: C 45,75, H 6,62, S 10,98 SH-titratie: 99,6 %

Voorbeeld XXI

1-/N-(2-mercaptopropanoyl)-L-alany1/-4-hydroxy-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar 15 onder toepassing van 2-acetylthiopropionzuur in plaats van acetylthioazijnzuur en het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-4-hydroxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XXII

20 1-/N-(2-mercaptopropanoyl)-L-alanyl/-L-thiazolidine-4-carbonzuur

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthiopropionzuur in plaats van acetylthioazijnzuur en het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-thia-zolidine-4-carbonzuurzout in plaats van het trifluorazijnzuurzout 25 van L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XXIII

1-/N-(2-mercaptopropanoyl)-L-alanyl/-4-methoxy-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthiopropionzuur in plaats van acetyl-30 thioazijnzuur en het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-4-me- thoxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XXIV

l-/N-(2-mercaptopropanoyl)-L-alanyl/-4.4-ethyleendioxy-L-proline. 35 Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthiopropionzuur in plaats van acetyl- 8 0 0 1 6 75 15 thioazijnzuur en L-alanyl-4.4-ethyleendioxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XXV

5 l-/N-(2-mercapto-3-fenylpropanoyl)-L-alanyl/-4-hydroxy-L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthio-3-fenylpropionzuur in plaats van acetylthioazijnzuur en het trifluorazijnzuurzout van L-ala-ny1-4-hydroxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout 10 van L-alanyl-L-proline, verkrijgt men de titelverbinding. Voorbeeld XXVI

l-/N-(2-mercapto-3-fenylpropanoyl)-L-alanyl/-L-thiazolidine-4-carbonzuur.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar 15 onder toepassing van 2-acetylthio-3-fenylpropionzuur in plaats

van acetylthioazijnzuur en het trifluorazijnzuurzout van L-ala-nyl-L-thiazolidine-4-carbonzuur in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding. Voorbeeld XXVII

20 1-/N- (2-mercapto-3-fenylpropanoyl)-L-alanyl/-4-methoxy- L-proline.

Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthio-3-fenylpropionzuur in plaats van acetylthioazijnzuur en het trifluorazijnzuurzout van L-ala- 25 nyl-4-methoxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van L-alanyl-L-proline, verkrijgt men de titelverbinding.

Voorbeeld XXVIII

l-/N-(2-mercapto-3-propanoyl)-L-alanyl/-4,4-ethyleendioxy- L-proline.

30 Volgens de procedure van voorbeeld XIV, maar onder toepassing van 2-acetylthio-3-fenylpropionzuur in plaats van acetylthioazijnzuur en L-alanyl~4.4-ethyleendioxy-L-proline in plaats van het trifluorazijnzuurzout van. L-alanyl-L-proline verkrijgt men de titelverbinding.

35 Voorbeeld XXIX

l-/N-(mercaptoacetyl)-L-proline/-L-proline.

800 1 6 75 16

Methode A

Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-proline (3 g) wordt gehydrogeneerd in een mengsel van absolute ethanol (50 ml) en N-chloorwaterstofzuur (7,5 ml) in tegenwoordigheid van 10 Z’s 5 palladium op houtskool. Na 5 uren wordt de katalysator afgefiltreerd en het oplosmiddel in vacuo verwijderd. Het residu wordt opgelost in een mengsel van dimethylformamide (15 ml) en triethyl-amine (1,05 ml) en acetylthioazijnzuur N-hydroxysuccinimido-ester (1,7 g) wordt toegevoegd. Na opslag bij kamertemperatuur gedu-10 rende ongeveer 16 uren worden de oplosmiddelen in vacuo verwijderd en wordt het residu gechromatografeerd op een kolom van silicagel (benzeen-hexaan 7:1). Dit materiaal wordt opgelost in trifluorazijnzuur (5 ml) en anisool (2 ml) en de oplossing wordt gedurende 1 uur op kamertemperatuur gehouden. Het reactiemengsel 15 wordt drooggedampt en het residu wordt opgelost in 7,7 ml N.

natriumhydroxyde onder roeren in een argonatmosfeer. Na 15 minuten wordt het mengsel geneutraliseerd met gesulfonateerd poly-styreen-kationuitwisselaarhars, aangebracht op een kolom van hetzelfde hars en geëlueerd met water. Het verkregen materiaal wordt 20 gekristalliseerd uit ethylacetaat en bezit een smeltpunt van 182-183 °C.

Methode B

Dicyclohexylcarbodiïmide (2,06 g) en l-(acetyl-thioacetyl)-L-proline (2,3 g) worden toegevoegd aan een oplossing 25 van L-proline t-butylester (1,7 g) en hydroxybenzotriazool (1,5 g) in dichloormethaan (15 ml), afgekoeld in een ijsbad. Na roeren bij 5°C gedurende ongeveer 16 uren wordt het resulterende precipi-taat afgefiltreerd en het filtraat gewassen tot neutrale reactie. De organische laag wordt drooggedampt en het residu gezuiverd door 30 silicagel-chromatografie en gekristalliseerd uit ether-hexaan, waarbij een materiaal met een smeltpunt van 95-98°C wordt verkregen. Dit materiaal wordt ontdaan van beschermingsgroepen door achtereenvolgende behandeling met trifluorazijnzuur en natriumhydroxyde als beschreven onder methode (A).

35 Voorbeeld XXX

'Acetylthioazijnzuur-L-alanyl-L-tryptofaan-methylester.

800 1 6 75 η L-alanyl-L-tryptofaan-methylesteracetaat (2,5 g) werd opgelost in 20 ml dimethylformamide en 2,0 g acetylthioazijnzuur N-hydroxysuccinimide-ester werden toegevoegd. De pH van de oplossing werd ingesteld op 7,5 met N-methylmorfoline 5 en het mengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Het oplosmiddel werd in vacuo verwijderd en de resterende olie opgenomen in ethylacetaat, gewassen met water, gedroogd en in vacuo gestript, waarbij een schuimachtig residu (3 g) werd verkregen. Het residu werd opgelost in ethylacetaat en aange-10 bracht op een kolom van 1,5 x 45 cm, bevattende 60 g Woelm basisch aluminiumoxyde (activiteit I). Door elutie met ethylacetaat verkreeg men 1,6 g van een schuimachtige vaste stof, die een vlek bij een R^ van 0,69 gaf op een silicagel-dunnelaagchromatogram, chlorofomt-methanol (3:1).

15 Voorbeeld XXXI

N-/N-(mercaptoacetyl)-L-alanyl/-L-tryptofaan-lithiumzout♦

Een oplossing van het produkt van voorbeeld XXX (1,2 g in 36 ml methanol) werd geroerd met 6 ml IN. natrium-hydroxyde-oplossing in een stikstofatmosfeer gedurende 0,5 uur 20 bij kamertemperatuur. Het reactiemengsel werd ingesteld op een pH van 6 en het oplosmiddel werd in vacuo verwijderd. Het residu werd verdeeld tussen ethylacetaat en verzadigde natriumhydro-geencarbonaat-oplossing (1:1). De waterige fase werd gewassen met ethylacetaat, verzadigd met natriumchloride, aangezuurd tot een 25 pH van 2,0 en geëxtraheerd met ethylacetaat. Het ethylacetaat-extract werd gedroogd met natriumsulfaat en in vacuo gestript, waarbij een schuimachtig residu werd verkregen. Het residu werd opgelost in een 50 %'s waterige ethanol-oplossing en de pH werd ingesteld op 7 met IN. lithiumhydroxyde-oplossing. De oplossing 30 werd droog gestript en het residu werd opgenomen in water en ge-lyofiliseerd tot een vuilwitte vaste stof (390 mg).

Analyse voor CjgHjgNgO^S.Li^^O Berekend: C 49,11, H 5,67, N 10,73, S 8,18 Gevonden: C 98,78, H 5,07, N 10,41, S 7,85.

35 80 0 1 6 75 18

Voorbeeld XXXII

(S)—1-(3-mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-B-alanine.

(A) 3,06 g B-alanine-ethylester-hydrochloride en 2,82 ml triethylamine werden toegevoegd aan een oplossing 5 van 5,2 g l-/S-3-acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl/-L-proline en 3,24 g carbonyldiïmidazool bij 0°C en het resulterende mengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Het reactie-mengsel werd door strippen van oplosmiddel ontdaan en het residu werd geëxtraheerd met ethylacetaat. Het ethylacetaatextract werd 10 vervolgens gewassen met water, IN. chloorwaterstofzuuroplossing, weer water, verzadigde natriumhydrogeencarbonaatoplossing en weer water en vervolgens gedroogd boven natriumsulfaat en gestript tot een heldere olie (3,4 g). Uit de spectraal analyse bleek dat dit materiaal (S)-1-(3-acetylthio-2-methyl-1-oxopropyl)-L-prolyl-B-15 alanine was en dit materiaal werd als zodanig in de volgende trap gebruikt.

(B) 3,4 g van het materiaal uit trap (A) werden opgelost in een oplossing van 43 ml methanol en 1,7 g kalium-hydroxyde in 8,6 ml water werden toegevoegd. Het mengsel werd 20 gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd, vervolgens werden 50 ml water toegevoegd en het methanol werd verwijderd. Het waterige residu werd aangezuurd tot een pH van 2,0 met verdund chloorwaterstofzuur. Het oplosmiddel werd vervolgens in vacuo verwijderd en het residu werd geëxtraheerd met methanol. Na de dro-25 ging werd het methanol-oplosmiddel verwijderd onder achterlating van een olie (3,2 g), die gechromatografeerd werd op een LH-20 Sephadex-kolom en geëlueerd werd met een methanol-water-oplossing (1:9), waarbij 1,1 g van de titelverbinding werden verkregen als een heldere olie. TLC één vlek; *» 0,65, silicagel, methanol.

30 Analyse voor Cj2^20^2^4^

Berekend: C 49,99, H 6,99, N 9,71 Gevonden: C 49,81, H 7,29, N 8,67 Voorbeeld XXXIII

(R)-l-/N-(2-mercapto-l-oxo-3-fenylpropyl)-L-alanyl/-L-proline.

35 (A) (R)-2-acetylthio-3-£enylpropionzuur.

Natriumnitriet (32,75 g) werd toegevoegd aan een 800 1 6 75 19 gekoelde oplossing van L-fenylalanine (51 g) en kaliumbromide (125 g) in 620 ml 25N zwavelzuur over een periode van 1 uur onder handhaving van de temperatuur van het reactiemengsel op 0°C. Het reactiemengsel werd gedurende nog 1 uur bij 0°C geroerd en ver-5 volgens gedurende 1 uur bij kamertemperatuur. Het reactiemengsel werd vervolgens geëxtraheerd met ether en het etherextract werd gedroogd boven natriumsulfaat. De ether werd verwijderd onder achterlating van (S)-2-broom-3-fenylpropionzuur als een olie-achtig residu (44,9 g), dat gedestilleerd werd bij 142-I44°C (0,25 mm 10 Hg).

Een mengsel thioazijnzuur (8,7 ml) en kalium-hydroxyde (6,8 g) in 225 ml acetonitril werd gedurende 1,25 uren bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd afgekoeld in een ijsbaden 25,3 g (S)-2-broom-3-fenylpropionzuur in 25 ml aceto-15 nitril werden toegevoegd over een periode van 10 minuten. Na roeren gedurende 5 uren werd het reactiemengsel afgefiltreerd en het oplosmiddel in vacuo verwijderd en het olie-achtige residu werd weer opgelost in ethylacetaat en gedroogd en het oplosmiddel verwijderd, waarbij 24 g ruw (R)-2-acetylthio-3-fenylpropion-20 zuur werden verkregen. Het ruwe materiaal werd gezuiverd via de vorming van het dicyclohexylaminezout onder gebruikmaking van - -25 ether als kristallisatie-oplosmiddel. Het vrije zuur, / a_/ = +62° (c = 2,8 in chloroform), werd geregenereerd met chloorwater-stofzuur en extractie met ethylacetaat.

25 (B) R-(2-acety1thio-3-fenyl)propionyl-L-alanyl-L- proline.

Het bovengenoemde produkt wordt bereid door reactie van (R)-2-acetylthio-3-fenylpropionzuur uit gedeelte (A) met L-alanyl-L-proline volgens de procedure van voorbeeld XIV; 30 smp. (124°) 135-138°C, / a_7^ " “23° (c = 1,4 in chloroform).

(C) R-1-/N-(2-mercapto-l-oxo-2-fenylpropyl)-L- alanyl-L-proline.

Door voortzetting van de procedure van voorbeeld XIV met het materiaal uit gedeelte (B) en onder toepassing van 35 natriumhydroxyde in plaats van ammoniumhydroxyde wordt het titel- - -25 produkt verkregen als een schuimachtige vaste stof / a_/^ = 800 1 6 75 20 -78,4° (c = 1,1 in chloroform).

Analyse voor C ^ * 2H2O

Berekend: C 52,83, H 6,78, N 7,25, S 8,30 Gevonden: C 52,54, H 6,26, N 7,01, S 8,16.

5 Voorbeeld XXXIV

(S)-l-/N-(2-mercapto-1-oxo-3-fenylpropyl)-L-alanyl-L-proline.

(A) (S)-2-acetylthio-3-fenylpropionzuur.

Volgens de procedure van gedeelte (A) van voorbeeld XXXIII en onder toepassing van D-£enylalanine in plaats 10 van L-fenylalanine; smp. 146—147°C uit ethylacetaat als het dicyclohexylamine-zout. Het vrije zuur werd geregenereerd met .. - -25 chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat; / a_/p = -70,1° (c = 1,91 in chloroform).

(B) (S)-(2-acetylthio-3-fenyl)propionyl-L-alanyl- 15 L-proline.

Door reactie van het materiaal uit gedeelte (A) met L-alanyl-L-proline volgens de procedure van voorbeeld XXXIII

(B) wordt de titel-verbinding verkregen als een olie-achtig residu, dat bij samenwrijven met ethylether en hexaan vast wordt; 20 smp. 161—163°G, / a_= -109,6° (c = 1,5 in chloroform).

(C) (S)-l-/N-(2-mercapto-1-oxo-3-fenylpropyl)-L-alanyl-L-proline.

Het bovengenoemde titel-produkt wordt verkregen door behandeling van het materiaal uit gedeelte (B) volgens de 25 procedure van voorbeeld XXXIII (C) als een schuimachtige vaste - -25 o stof; / α_/β = -82,7 (c = 1,5 in chloroform).

Analyse voor .^0

Berekend: C 55,42, H 6,56, N 7,60, S 8,70

Gevonden: C 55,25, H 6,18, N 7,36, S 8,43 30 SH-titratie: 99,1 %.

Voorbeeld XXXV

N-/N-/2-(mercaptomethyl)-l-oxo-3-fenylpropyl/glycyl/-L-arginine. (A) N-/2-/(acetylthio)methyl/-l-oxo-2-fenyl- propyl/glycine.

35 Een 13 g (0,067 mol) monster van benzylmalonzuur werd gemengd met 7,6 g (0,068 mol) 40 %'s waterig dimethylamine 800 1 6 75 21 en 5,4 g (0,068 mol) 37 %’s formaline in 150 ml water. De volumineuze vaste stof, die in 15 minuten werd gevormd, werd na 2 uren afgefiltreerd, gewassen met water en gedeeltelijk gedroogd aan de lucht, waarbij 20,8 g (theorie 16,8 g) werden verkregen. De 5 vaste stof werd gesmolten in een oliebad bij 170°C en gedurende 10 minuten verhit totdat geen amine-ontwikkeling meer optrad en de bellenvorming duidelijk was opgehouden. Het afgekoelde produkt, een beweeglijke vloeistof, werd aangezuurd met 10 %’s KHSO^, geëxtraheerd met hexaan, gedroogd (Na^SO^) en ingedampt, waarbij 10 6,3 g vaste stof werden verkregen. De waterige filtraten van de

Mannich-reactie liet men gedurende de nacht staan en deze werden vervolgens op een stoombad verhit op 100°C totdat de bellenvorming was opgehouden (2 uren). Een afkoeling, aanzuring en extractie als hierboven beschreven gaven nog 1,2 g vaste stof, dus 15 in totaal 7,5 g (75 %) benzylacrylzuur.

Een 6,2 g (0,04 mol) monster van benzylacrylzuur in 350 ml dichloormethaan werd behandeld met 5,4 g (0,04 mol) ethylglycinaat-hydrochloride en 3,9 g (0,04 mol) triethylamine.

Het mengsel werd afgekoeld in ijs en 7,9 g (0,04 mol) dicyclo- 20 hexylcarbodiïmide werden toegevoegd. Het mengsel werd gedurende de nacht bij 25°C geroerd en vervolgens afgefiltreerd. De filtra-\ ten werden geschud met waterig hydrogeencarbonaat, 10 %'s KHSO^ en vervolgens water, en gedroogd (Na2S0^) en ingedampt tot een olie. Deze werd opgenomen in 200 ml methanol en behandeld met 25 een overmaat 10 %'s NaOH. Het mengsel werd gedurende 15 minuten op een stoombad verhit en vervolgens ingedampt tot een waterige suspensie. Deze werd afgefiltreerd en de filtraten werden met ether geëxtraheerd. Het waterige materiaal werd aangezuurd (10 %’s HC1) en geëxtraheerd met chloroform, de extracten werden ge-30 droogd (l^SO^) en ingedampt tot een olie, 7,3 g (80 %) .

Thiolazijnzuur (10 ml) werd toegevoegd aan 3,2 g (0,014 mol) van het glycine-derivaat en de resulterende oplossing werd de volgende dag in vacuo ingedampt. Door samenwrijven met isopropylether verkreeg men een nagenoeg witte vaste stof, 35 2,9 g. Herkristallisatie uit ethylacetaat-hexaan gaf 2,5 g (60 %); smp. = 97-l0l°C.

800 1 6 75 22

Analyse voor Cj^Hj^NO^S

Berekend: C 56,93, H 5,80, N 4,74, S 10,85

Gevonden: C 56,68, H 5,87, N 4,77, S 10,81.

(B) N-/N-/2-/(acetylthio)methyl/-l-oxo-3-fenyl- 5 propyl/glycyl-L-arginine.

Een 0,3 g monster (1 mmol) van het produkt van gedeelte (A) werd opgelost in 25 ml droge tetrahydrofuran, 0,11 g (1,1 mmol) triethylamine werd toegevoegd en het mengsel afgekoeld tot 0°C. Vervolgens werd 0,11 g (1 mmol) ethylchloorformiaat 10 toegevoegd en nadat het mengsel gedurende 40 minuten bij 0°C was geroerd werd het afgefiltreerd in een oplossing van 0,17 g (1 mmol) arginine in 10 ml water. Na roeren bij 25°C gedurende de nacht werd het mengsel ingedampt tot een waterig mengsel, dat verdund werd tot 30 ml met water en voorzichtig werd geëxtraheerd (ter 15 vermijding van emulsies) met ethylacetaat. Het waterige materiaal werd gechromatografeerd over 50 g Avicel in water, waarbij fracties van 25 ml werden afgenomen. De twee Sakaguchi-positieve fracties werden gecombineerd en gefiltreerd door een "nuclepore" polycarbonaat-filter en gelyofiliseerd, waarbij 0,3 g (63 %) van 20 een wit poeder (smeltpunt = 105-120°C) werd verkregen, dat na droging bij 95-100°C gedurende 6 uren in vacuo een correcte analyse gaf op de aanwezigheid van 1,5 molen water.

Analyse voor . 1,5^0

Berekend: C 50,19, H 6,74, N 14,63, S 6,70 25 Gevonden: C 50,38, H 6,56, N 14,95, S 6,50 (C) N-/N-/2-(mercaptomethyl)-1-oxo-3-fenyl-propyl/glycyl/-L-arginine.

Een 0,5 g (1,1 mmol) monster van het produkt van gedeelte (B) werd gekoeld in ijs en behandeld met 4 ml gecon-30 centreerd NH^OH onder argon. Na roeren gedurende 1 uur werd het monster in vacuo ingedampt tot een glas. Dit werd samengewreven met 25 ml acetonitril gedurende 2 uren en vervolgens werd het oplosmiddel gedecanteerd en vervangen door vers oplosmiddel, waarna gedurende 2,5 dagen in een argonatmosfeer werd geroerd. De 35 resulterende witte vaste stof werd afgefiltreerd en gewassen met acetonitril en ether. Droging bij 45°C boven KOH, ^2^5 en 80 0 1 6 75 23 paraflin bij 0,01 mm Hg gedurende de nacht gaf 0,25 g (55 %) vaste stof; smeltpunt = 120-137°C.

Analyse voor 0,-^-11,-0,3.1,75 H-0 18 27 5 4 2

Berekend: C 49,02, H 6,97, N 15,88, S 7,27 5 Gevonden: C 48,89, H 6,67, N 16,17, S 7,28.

800 1 6 75

Claims (28)

1. Verbindingen met de algemene formule *2 R,-S-(CH0) -CH-C-Δ,-Α» 1 fa ii ff 1 L· 5 0 of alkylesters of zouten daarvan, waarin Rj voorstelt waterstof, alkanoyl, benzoyl of een groep met de formule ?2 -S-(CH.) -CH-C-A,-A„ L· 11 ff 1 L· 10 o R2 voorstelt waterstof, alkyl of fenylalkyl, n 0 of 1 is en Aj en A^ elk voorstellen een α-amino- of α-iminozuurrest, met elkaar verbonden door een peptide-binding.

2. Verbindingen volgens conclusie 1, met het 15 kenmerk, dat Rj waterstof voorstelt.

3. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat Rj alkanoyl voorstelt.

4. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat Rj voorstelt een groep met de formule

20 R2 -S-(CHJ -CH-C-Α,-Α. zn „ 1 z 0

5. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R2 waterstof voorstelt.

6. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R2 alkyl voorstelt.

7. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R2 fenylalkyl voorstelt.

8. Verbindingen volgens conclusie 1, met het 30 kenmerk, dat n 0 is.

9. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat η 1 is.

10. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat Aj een a-aminozuurrest en A2 een a-iminozuurrest voor- 35 stellen.

11. Verbindingen volgens conclusie 10, met het 80 0 1 6 75 kenmerk, dat L-proline is.

12. Verbindingen volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat Aj en elk onafhankelijk voorstellen proline, 4-hydroxyproline, 4.4-ethyleendioxyproline, 4-methoxyproline, 5 4-thiazolidinecarbonzuur, tryptofaan, glycine, alanine, leucine, isoleucine of valine. 13. 1-/N-(Acetylthioacetyl)glycyl/-L-proline. 14. 1-(N-(Mercaptoacetyl)glycyl/-L-proline. 15. t-Butylester van (S)-l-/3-(acetylthio)-2- 10 methyl-1-oxo-propy1/-L-prolyl-L-proline. 16. 1-(S-3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L- proly1-L-proline.

17. N-(Ace ty1thioacety1)-L-valy1-L-proline.

18. N-(Mercaptoacetyl)-L-valyl-L-proline. 15 19. l-/S-3-(Acetylthio)-2-methyl-I-oxopropyl/- L-prolylglycine-ethylester. 20. 1-(S-3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L-prolyl-glycine-lithiumzout. 21. (S)-1-(3-Mercapto-2-methy1-1-oxopropy1)-L- 20 prolyl-L-alanine.

22. Acetylthioacetyl-valy1-tryptofaan-methyl- ester.

23. N-(Mercaptoacetyl)-L-valy1-L-tryptofaan- lithiumzout. 25 24. (S)-/3-(Acetylthio)-2-methyl-l-oxopropyl/- L-prolyl-D-alanine-methylester. 25. (S) -0-Mercap to-2-methy1-1-oxopropy1)-L- propyl-D-alanine. 26. l-/N-(Mercaptoacetyl)-L-alanyl/-L-proline. 30 27. I-/N-(3-Mercapto-l-oxopropyl/-L-alanyl-/-L- proline.

28. Acetylthioazijnzuur-L-alanyl-L-tryptofaan.

29. N-/N-(Mercaptoacetyl)-L-aLanyl-L-tryptofaan. 30. (S)-1-(3-AcetyIthio-2-methyl-1-oxo-propyl)-35 L-prolyl-B-alanine. 31. (S)-l-(3-Mercapto-2-methyl-l-oxopropyl)-L- 800 1 6 75 prolyl-B-alanine.

32. R- (2-Acetylthio-3-feny1)propiony1-L-alany1- L-proline.

33. R-1-/N-(2-mercapto-l-oxo-2-fenylpropyl)-L- 5 alanyl-L-proline. 34. (S)-(2-Acetylthio-3-feny1)propiony1-L- alany 1-L-proline . 35. (S)-1-/N-(2-mercapto-1-oxo-3-£enylpropy1)-L- alany1-L-proline.

36. Werkwijze voor het verlagen van de bloed druk bij zoogdieren, met het kenmerk, dat men aan een zoogdier met hoge bloeddruk toedient een doeltreffende hoeveelheid van een verbinding met de formule 15 r1-s-(ch2)ii-ch-c-a1-a2, 0 of een alkylester of een fysiologisch aanvaardbaar zout daarvan, waarin Rj voorstelt waterstof, alkanoyl of een groep met de formule 20 *2 -S-(CH,) -CH-C-A.-A, 2 n „12 0 R2 voorstelt waterstof, alkyl of fenylalkyl, n 0 of 1 is en Aj en A2 elk voorstellen een a-amino- of α-iminozuurrest, ver-25 bonden via een peptide-binding.

37. Werkwijze ter bereiding van verbindingen met de algemene formule *2 R -S-CCHJ -CH-C-A.-A. 1 zn i i 30 of alkylesters of zouten daarvan, waarin Rj voorstelt waterstof, alkanoyl of een groep met de formule *2 -S-(CHJ -CH-C-A.-A. Z Π ff 1 z o

35 R2 voorstelt waterstof, alkyl of fenylalkyl, n 0 of 1 is en Aj en A2 elk voorstellen een α-amino- of α-iminozuurrest, verbonden 800 1 6 75 door een peptide-binding, met het kenmerk, dat men direct of achtereenvolgens een dipeptide met de formule Aj-A2 een alkyl-esterderivaat daarvan acyleert met een thiozuur met de formule *2

5 R'-S-(CRJ -CH-COOH 1. n waarin Rj' voorstelt alkanoyl of benzoyl, onder vorming van produkten, waarin R} voorstelt alkanoyl of benzoyl, en deze pro-dukten onderwerpt aan een gebruikelijke hydrolyse onder vorming 10 van produkten, waarin Rj voorstelt waterstof, en de produkten, waarin Rj waterstof voorstelt, oxydeert onder vorming van produkten, waarin Rj voorstelt een groep met de formule R2 0 -S-(CH2)n-CH-C-A -A2

38. Farmaceutische preparaten, die een of meer van de in conclusie 1 gedefinieerde verbindingen bevatten.

39. Farmaceutische preparaten volgens conclusie 38 in de vorm van farmaceutische voorwerpen, zoals tabletten of dergelijke.

40. Verbindingen, preparaten en werkwijzen als beschreven in de beschrijving en/of voorbeelden. 25 800 1 6 75