NL8104049A

NL8104049A - Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen.

Info

Publication number: NL8104049A
Application number: NL8104049A
Authority: NL
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1976-02-13
Filing date: 1981-09-01
Publication date: 1982-01-04
Also published as: NL179134B; NL178844B; NL8104047A; NL179134C; NL178844C; NL178873C; NL177827B; NL178874B; NL178874C; NL178873B; NL8104046A; NL8104050A; NL8104048A; NL177827C

Description

- 1 - %

Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen.

;

De uitvinding betreft een werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking.

Een dergelijke werkwijze, waarbij men een proline in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt, kan 5 bekend worden geacht uit de Duitse "Offenlegungsschriften" 2.108.043 en 2.124.451. Volgens deze "Offenlegungsschriften" kan men voor de bestrijding van bloeddrukverhoging bepaalde peptiden toepassen met eindstandige prolinegroepen. Gebleken was namelijk, dat deze peptiden in staat zijn het enzym af te remmen, dat angiotensine I, welke 10 stof in het lichaam geproduceerd wordt, omzet in angiotensine II, welke stof een bloeddrukverhogende werking heeft.

Volgens de uitvinding brengt men een verbinding met de formule 1 van het formuleblad, waarin R een hydroxy- of aminogroep of een lagere alkoxygroep, en R4 elk afzonderlijk een 15 waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, R2 een waterstofatoom of een groep COR5 is, waarbij R,. een fenyl, lagere alkylfenyl- of fenyl-lagere alkylgroep voorstelt en R^ een waterstofatoom of een hydroxy of lagere alkylgroep voorstelt, n=0, 1 of 2 en m = 3, of een basisch 20 zout daarvan in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm.

Gevonden werd namelijk, dat deze veel eenvoudigere verbindingen, die geen peptiden zijn, eveneens geschikt zijn om volgens hetzelfde mechanisme te hoge bloeddruk effectief te bestrijden. Van belang is verder, dat zij deze werkingook uitoefenen bij 25 orale toediening.

De lagere alkylgroepen, voorgesteld door de bovengenoemde symbolen, omvatten rechte en vertakte koolwaterstof-resten van methyl tot heptyl, bijvoorbeeld methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t.butyl, pentyl, isopentyl, en dergelij-30 ke. De lagere alkoxygroepen zijn van hetzelfde type met 1-7 kool-stofatomen, verbonden met het zuurstofatoom, bijvoorbeeld methoxy, 8104049 __ .-2- ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, t.butoxy en dergelijke. De groepen met 1-4 koolstofatomen en in het bijzonder met 1 of 2 koolstofatomen genieten de voorkeur. Fenylmethyl is de fenyl-lagere alkylgroep, die de voorkeur geniet.

5 De lagere alkanoylgroepen zijn die met de acylresten van de lagere (C2-Cy) vetzuren, bijvoorbeeld acetyl, propionyl, Butyryl, isoButyryl en dergelijke. De lagere alkanoylgroepen met tot 4 koolstofatomen, in het bijzonder acetyl, genieten de voorkeur.

10 De nieuwe verbindingen met de algemene formule 1 kunnen op een op zichzelf bekende wijze worden bereid.

De verbindingen met de formule 1 en de voorkeurs-subgroepen kunnen volgens de uitvinding onder toepassing van variërende methodes worden bereid.

15 In het algemeen worden de verbindingen volgens de uitvinding Bereid door acyleren van een verbinding met de formule 3 met een zuur met de formule 4 of een chemisch equivalent daarvan.

Zo kan het eindprodukt niet alleen worden verkregen door direkte acylering met een zuur met de formule 4 maar 20 eveneens via tussenprodukten, zoals (a) ω-halogeenalkaanzuren met de formule 5, waarin X broom, chloor of jodium is, of (b) een tosyl-oxyalkaanzuur, dat wil zeggen een zuur met de formule 5, waarin X tosyloxy (CH^ - -S020-), is of (c) een gesubstitueerd acrylzuur met de formule 6. Het produkt van deze acylering wordt vervolgens 25 onderworpen aan een omlegging of een additie met het anion van een thiol of thiozuur met de formule 7.

De acylering kan eveneens worden bewerkstelligd met een thiolacton met de formule 8, waarin η 1 of 2 is, of een mercaptoalkaanzuur met de formule 9, waarin Y voorstelt R2, terwijl, 30 indien een produkt met de formule 3, waarin R2 voorstelt waterstof, wenzelijk is Y eveneens kan voorstellen een beschermende groep, zoals (a) CH3O- © -CH2, (b5 Cf^X> Cc) CH3CONHCK2, R, R, 11 14 (d] R-O-C-CH- -(CHI -S- of een andere zwavelbeschermende groep.

35 De verwijdering van de Beschermende groep kan worden bewerkstelligd onder toepassing van gebruikelijke methodes, zoals door behandeling 8104049

S

- 2a - ' r ' 4 met heet trifluorazijnzuur, koud trifluormethaansulfonzuur, mercuri-acetaat, natrium in vloeibare ammoniak, zink en chloorwaterstofzuur of dergelijke. In verband met deze methodes wordt verwezen naar Methoden der Organische Chemie (Houben-Weyl), Vol. XV, part I, 5 pag. 736 e.v. (1974).

Fanneer het zuur met de formule 4 als acyleer-middel wordt gebruikt kan de acylering worden bewerkstelligd in tegenwoordigheid van een koppelingsmiddel, zoals dicylohexylcarbo-diimide of dergelijke, of het zuur kan worden geactiveerd door IQ vorming van zijn gemengd anhydride, symmetrisch anhydride, zuurchlo-ride, zuurester of toepassing van het Woodward-reagens, K, N-ethoxy-carbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinoline, of dergelijke. In verband met de acyleringsmethodes wordt verwezen naar Methoden der Organischen Chemie (HouBen-Weyl), Vol. XV, part II, pag. 1 e.v.

15 (1974}.

Verbindingen met de formule 3 omvatten onder meer azetidine-2-carbonzuur en de lagere alkylesters daarvan. De acylering van dergelijke verbindingen is hieronder meer uitvoerig beschreven.

20 Volgens een voorkeursmethode ter bereiding van verbindingen met de formule 1, speciaal van verbindingen, warin voorstelt R^-CO-, wordt een zuur of ester met de formule 3 gekoppeld met een halogeenalkaanzuur met de formule 5, waarin X halogeen, bij voorkeur chloor of broom, voorstelt. Dit kan worden bewerkstelligd 25 door toepassing van ëën van de Bekende procedures, waarbij het zuur 4 voor de reactie met het zuur 3 wordt geactiveerd door vorming van een gemengd anhydride, symmetrisch anhydride, zuurchloride of actieve ester of door toepassing van Woodward-reagens K, EEDQ (N-ethaxycarbonyl-2-ethoxy-l.2-dihydroxychinoline) of dergelijke.

30 Het produkt van deze reactie is een verbinding met de formule IQ, Het produkt met de formule 10 wordt onderworpen aan een verplaatsingsreactie met het anion van een thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 11, waarin R2 voorstelt R^CO, welk produkt vervolgens door ammonolyse kan 35 8104049 \ m ^ - 3 - \ worden omgezet in het produkt met de formule 12. Wanneer een beschermende groep is kan de verbinding met de formule 12 worden verkregen door verwijdering van de beschermende groep op de boven beschreven wijze. Wanneer R een estergroep is (dat wil zeggen dat 5 R voorstelt lager alkoxy) kan de estergroep worden verwijderd, bijvoorbeeld wanneer R voorstelt tert.butoxy of tert.amyloxy, door behandeling van de ester met de formule 11 of 12 met trifluorazijn-zuur en anisool, waarbij het overeenkomstige zuur wordt verkregen. Wanneer andere alkoxygroepen aanwezig zijn zal door alkalische 10 hydrolyse het overeenkomstige zuur worden verkregen.

Een variatie op deze procedure omvat de toepassing van een acrylzuur met de formule 6 als uitgangsmateriaal. Dit acrylzuur wordt eerst omgezet in de zuurhalogenidevorm en vervolgens in reactie gebracht met een verbinding met de formule 3 onder vor-15 ming van een verbinding met de formule 13 en dit tussenprodukt wordt onderworpen aan de additiereactie met het thiol of thiozuur 7, zoals hierboven beschreven.

Een tosyloxyalkaanzuur met de formule 14 kan eveneens worden gebruikt als het middel voor de acylering van het 20 zuur met de formule 3, waarna het acyleringsprodukt wordt onderworpen aan de verplaatsingsreactie, etc., zoals hierboven beschreven.

Het acrylzuur met de formule 6 kan anderzijds eerst in reactie worden gebracht met het thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 15, dat wordt omgezet 25 in zijn zuurhalogenide, bijvoorbeeld met thionylchloride, en vervolgens wordt gekoppeld met de verbinding met de formule 3, waarna verder de boven beschreven procedure wordt gevolgd.

Het zuur of de ester met de formule 3 kan eveneens worden geacyleerd met een "beschermde" vorm van een ω-raercapto-30 alkaanzuur met de formule 16, waarin Rg de "beschermende" groep is. Dergelijke "beschermende" groepen kunnen in de hierboven beschreven vorm zijn.

Na de acylering kan de beschermende groep uit het produkt worden verwijderd volgens één van de hierboven beschreven 35 bekende methodes.

8104049 « - 4 -

Nog een ander acyleermiddel is een thiolacton, bijvoorbeeld β-propiothiolacton, a-methyl-g-propiothiolacton of dergelijke.

Verdere details met betrekking tot de voorkeurs-5 methodes voor de bereiding van de verbindingen volgens de uitvinding zijn aangegeven in de onderstaande specifieke voorbeelden.

Volgens een modificatie van de werkwijze# die in het bijzonder de voorkeur geniet, wordt het zuur of de ester met de formule 3 geacyleerd met een halogeenalkanoylhalogenide met de 10 formule 17, waarin elke X onafhankelijk voorstelt een halogeen, bij voorkeur chloor of broom, R voorstelt waterstof, lagere alkyl of fenyl-lagere alkyl en n 0, 1 of 2 is. Deze reactie wordt bewerkstelligd in een alkalisch medium, bijvoorbeeld een verdunde alkali-metaalhydroxyde-oplossing, alkaliraetaalwaterstofcarbonaat- of 15 alkalimetaalcarbonaat-oplossing, bij verlaagde temperatuur, bij voorbeeld omgeveer 0-15° C. Het reactieprodukt wordt onderworpen aan een verplaatsingsreactie met het anion van het thiol of thiozuur met de formule 7, eveneens in een alkalisch medium, bij voorkeur een alkalimetaalcarbonaat-oplossing, en vervolgens op de gebruike-20 lijke wijze opgewerkt. Het produkt van deze reactie, waarin R2 in de formule 1, voorstelt R^-CO, wordt omgezet in het produkt, waarin r2 voorstelt waterstof, door ammonolyse, bijvoorbeeld met alcoholische ammonia of geconcentreerde ammoniumhydroxyde-oplossing, of door alkalische hydrolyse, bijvoorbeeld met een waterig metaal-25 hydroxyde. Wanneer een zuur met de formule 3 als uitgangsmateriaal wordt gebruikt kan het als het vrije carbonzuur verkregen eindprodukt vervolgens worden omgezet in zijn ester, bijvoorbeeld door verestering met een diazoalkaan, zoals diazomethaan, een 1-alkyl- 3-p-tolyltriazeen, zoals l-n-butyl-3-p-tolyltriazeen of dergelijke. 30 De behandeling van een ester, bij voorkeur de methylester, met een alcoholische ammonia-oplossing zet het vrije zuur om in het amide, dat wil zeggen in een produkt, waarin R voorstelt NH^.

Volgens een andere variatie van de werkwijze wordt een ester, bij voorkeur de t.butylester, met de formule 3 in 35 een watervrij medium, zoals dichloormethaan, tetrahydrofuran, 8104049 * "u κ - 5 - dioxan of dergelijke, behandeld met een thioalkaanzuur met de formule 18 in tegenwoordigheid van dicyclohexylcarbodiimide, N.N'-carbonylbisimidazool, ethoxyacetyleen, difenylfosforylazide of analoge koppelingsmiddelen bij een temperatuur van ongeveer 0-10° C. 5 De estergroep (R) kan vervolgens worden verwijderd, bijvoorbeeld door behandeling met trifluorazijnzuur en anisool bij kamertemperatuur.

Wanneer een ester met de formule 3 (bijvoorbeeld R is lager alkoxy, speciaal t.butoxy) wordt geacyleerd met een 10 thiolacton, bijvoorbeeld S-propiothiolacton, a-methyl-$-propiothio-lacton of dergelijke, kan de reactie worden uitgevoerd in een water-vrij oplosmiddel, zoals tetrahydrofuran, dioxan, methyleenchloride of dergelijke, bij ongeveer 0° C tot ongeveer kamertemperatuur.

De estergroep kan vervolgens worden verwijderd met anisool en tri-15 fluorazijnzuur op de boven beschreven wijze.

Produkten met de formule 1 bezitten één of meer asymmetrische koolstof atomen. Wanneer R^, R^ of R4 een andere betekenis bezitten dan waterstof is het koolstofatoom, waaraan deze substituent is vastgehecht, asymmetrisch. Deze koolstofatomen zijn 20 in de formule 1 aangegeven door een sterretje. De verbindingen bestaan daarom in stereo-isomere vormen of in racemische mengsels daarvan. Al deze vormen en mengsels vallen binnen het raam van de uitvinding. Bij de boven beschreven syntheses kunnen als uitgangsmaterialen het racemaat of één van de enantiomeren worden gebruikt. 25 Wanneer het racemisch uitgangsmateriaal wordt gebruikt bij de synthese kunnen de in het produkt verkregen stereo-isomeren worden gescheiden onder toepassing van gebruikelijke chromatografische of gefractioneerde kristallisatie-methodes. In het algemeen is het L-isomeer met betrekking tot het koolstofatoom van het aminozuur 30 de isomere vorm, die de voorkeur geniet. Ook het D-isomeer met betrekking tot het α-koolstofatoom in de acyl-zijketen (dat wil zeggen het koolstofatoom, dat Ej draagt) geniet de voorkeur.

De verbindingen volgens de uitvinding vormen basische zouten met verschillende anorganische en organische basen, 35 welke *Puten eveneens binnen het raam van de uitvinding vallen.

8104049 4 - 6 -

Dergelijke zouten omvatten ammoniumzouten, alkalimetaalzouten, zoals natrium- en kaliumzouten (die de voorkeur genieten), aard-alkalimetaalzouten, zoals de calcium- en magnesiumzouten, zouten met organische basen, bijvoorbeeld het dicyclohexylamine“out, ben-5 zathine-, N-methyl-D-glucamine-, hydrabamine-zouten, zouten met aminozuren, zoals arginine, lysine en dergelijke, De niet-toxische, fysiologisch aanvaardbare zouten genieten de voorkeur, hoewel andere Zouten eveneens bruikbaar zijn, bijvoorbeeld bij de isolatie of zuivering van het produkt, zoals in de voorbeelden geïllustreerd 10 voor het geval van het dicyclohexylaminezout.

De zouten worden op gebruikelijke wijze gevormd door reactie van de vrije Zuurvorm van het produkt met één of meer equivalenten van de geschikte base, die het gewenste kation verschaft, in een oplosmiddel of medium, waarin het zout onoplosbaar 15 is, of in water en verwijdering van het water door vriesdrogen.

Door neutralisatie van het zout met een onoplosbaar zuur, zoals een kationuitwisselaarhard in de waterstofvorm (bijvoorbeeld polysty-reensulfonzUurhars zoals Dowex 50) of met een waterig zuur en extractie met een organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld ethylacetaat, 20 dichloormethaan of dergelijke, kan de vrije zuurvorm worden verkregen en desgewenst een ander zout worden gevormd.

Verdere experimentele details zijn aangegeven in de voorbeelden, die voorkeursuitvoeringsvormen beschrijven en eveneens dienen als model voor de bereiding van andere leden van de 25 groep.

De verbindingen volgens de uitvinding remmen de omzetting vein het decapeptide angiotensine X in angiotensine II en zijn daarom bruikbaar voor het verlagen van de met angiotensine in verband staande hypertensie. Door inwerking van het enzyme renine 30 op angiotensinogeen, een pseudoglobuline in bloedplasma, wordt angiotensine I gevormd. Angiotensine I wordt door angiotensine omzettend enzym (ACE) omgezet in angiotensine II. Dit laatste is een actieve bloeddruk verhogende stof, die beschouwd als de oorzaak van verschillende vorm van hypertensie bij verschillende zoogdier-35 soorten, bijvoorbeeld ratten en honden. De verbindingen volgens de 8104049 - 7 - « ·% .--. * uitvinding blokkeren de omzetting van angiotensine (renine) > angi-otensine I —> angiotensine II door remming van het angiotensine omzettend enzym en vermindering of eliminering van de vorming van het bloeddruk verhogende angiotensine II. Door toediening van een 5 preparaat, bevattende één of meer verbindingen met de formule 1 en/of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan, kan de door angiotensine veroorzaakte hypertensie bij daaraan lijdende zoogdieren worden verminderd. Eén enkele dosis of bij voorkeur 2-4 dagelijkse deeldoses op basis van ongeveer 0,1-100 mg per kg per dag en bij 10 voorkeur ongeveer 1-50 mg per kg per dag is geschikt voor het verlagen van de bloeddruk, zOals blijkt uit de dierproeven, beschreven door S.L. Engel, T.R. Schaeffer, M.H. Waugh en B. Rubin, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973). De stof wordt bij voorkeur oraal toegediend, maar een parenterale toediening, -zoals een 15 subcutane, intramusculaire, intraveneuze of intraperitoneale toediening, kan eveneen worden gebruikt.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen voor het verlagen van de bloeddruk worden gebruikt in de vorm van preparaten, zOals tabletten, capsules of elixirs voor orale toe-20 diening of in steriele oplossing of suspensies voor parenterale toediening. Ongeveer 10-500 mg van een verbinding of mengsel van verbindingen met de formule 1 of fysiologisch aanvaardbare bouten daarvan worden gemengd met fysiologisch aanvaardbare verhikels, dragers, excipiëntia, bindmiddelen, conserveermiddelen, stabili-25 seerraiddelen, smaakmiddelen, etc. onder vorming van een eenheids-doseringsvorm als vereist in de farmaceutische praktijk. De hoeveelheid actieve stof in deze preparaten is èbdanig, dat een geschikte dosis binnen het boven aangegeven traject wordt verkregen.

Voorbeelden van toevoegsels, die opgenomen 30 kunnen worden in tabletten, capsules en dergelijke, fijn de volgende: een bindmiddel, zoals tragacanthgom, acaciagom, maïszetmeel of gelatine, een excipiënt zoals dicalciumfosfaat, een desinte-greermiddel, zoals maïszetmeel, aardappelzetmeel, algineSuur en dergelijke, een smeermiddel, zoals magnesiumstearaat, een SToet-35 middel, Zoals sucrose, lactose of saccharine, en een smaakmiddel 8104049 4 • · 4 - 8 - w « zoals pepermunt, olie van wintergroen of kersen, Wanneer de eenheids-doseringsvorm een capsule is kan deze behalve de materialen van het bovengenoemde type bovendien een vloeibare drager, zoals een vette olie, bevatten. Verschillende andere materialen kunnen aanwezig 5 zijn als bekledingen of voor het verder modificeren van de fysische vorm van de eenheidsdosis. Zo kunnen bijvoorbeeld tabletten worden bekleed met schellak, suiker of beide. Een stroop of elixir kan de actieve verbinding, sucrose als zoetmiddel, methyl- en propylparabens als conserveermiddelen, een kleurstof en een smaakmiddel, 10 zoals kersen- of sinaasappelaroma, bevatten.

Steriele preparaten voor injectie kunnen volgens gebruikelijke farmaceutische procedures worden bereid door oplossen of suspenderen van de actieve stof in een vehikel, zoals water voor injectie, een in de natuur voorkomende plantaardige olie, 15 zoals sesamolie, kokosnootolie, pindaolie, katoenzaadolie, etc., of een synthetisch vet-vehikel, zoals ethyloleaat, of dergelijke.

Indien nodig kunnen buffers, conserveermiddelen, anti-oxydantia en dergelijke worden opgenomen,

De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet 20 beperkt door de volgende voorbeelden.

Voorbeeld I

1—(2-Ben2öylthi oacetyl)-L-pipecolinezuur.

L-pipecolinezuur (6,15 g) wordt opgelost in 25 N. natriumhydroxyde (50 ml) en de oplossing wordt afgekoeld in een ijs-waterbad. Katriumhydroxyde 2 M (26 ml) en chlooracetylchloride (5*65 g) worden toegevoegd en het mengsel wordt gedurende 3 uren bij kamertemperatuur heftig geroerd. Een suspensie van thiobenzóë-zuur (7*5 g) en kaliumcarbonaat (1,8 g) in water (50 ml) wordt toe-30 gevoegd. ïia 18 uren roeren bij kamertemperatuur wordt het reactie- mengsel aangezuurd en geëxtraheerd met ethylacetaat. De ethylacetaat-laag wordt gewassen met water, gedroogd boven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt. Het residu (ll,6 g) wordt opgelost in ethylacetaat (150 ml) en dicyclohexylamine (11 ml) wordt toegevoegd, De 35 kristallen worden afgefiltreerd en herkristalliseerd uit ethylacetaat; 8104049 - 9 -

Teneinde het zout om te zetten in het zuur worden de kristallen opgelost in een mengsel van 5 %'s waterig kaliumhydrogeensulfaat (100 ml) en ethylacetaat (300 ml). De organische fase wordt eenmaal gewassen met water, gedroogd hoven magnesiumsulfaat en drooggedampt 5 in vacuo.

Voorbeeld II

1-(2-Mercaptoacetyl)-L-pipecolinezuur

1-(2-Benzoylthioacetyl)-L-pipecolinezuur (3,2 g) 10 wordt opgelost in een mengsel van water (10,5 ml) en geconcentreerde ammonia (6,1+ ml). Na 1 uur wordt het reactiemengsel met water verdund en afgefiltreerd, Het filtraat wordt geëxtraheerd met ethylacetaat en vervolgens aangezuurd met geconcentreerd chloorwa-terstofzuur, verzadigd met natriumchloride en 2 maal geëxtraheerd 15 met ethylacetaat, De ethylacetaatextracten worden gewassen met verzadigde natriumchloride en drooggedampt. Het produkt, 1-(2-mercapto-acetyl)-L-pipecolinezuur wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat. Voorbeeld III

a) Tert.butylester van L-pipecolinezuur.

20 L-pipecolinezuur (258 g) wordt opgelost in een mengsel van water (1 1) en 5 N. natriumhydroxyde (*K)0 ml). De oplossing wordt afgekoeld in een ijsbad en onder heftig roeren worden 5 N. natriumhydroxyde (h60 ml) en benzyloxycarbonylchloride (3U0 ml) 25 toegevoegd in vijf gelijke porties gedurende een periode van 30 min.. Na 1 uur roeren bij kamertemperatuur wordt het mengsel 2 maal geëxtraheerd met ether en aangezuurd met geconcentreerd chloorwater-stofzuur. Het precipitaat wordt afgefiltreerd en gedroogd.

Het aldus verkregen benzyloxycarbonyl-L-pipeco-30 linezuur wordt opgelost in een mengsel van dichloormethaan (300 ml), vloeibaar isobuteen (800 ml) en geconcentreerd zwavelzuur (7,2 ml). De oplossing wordt geschud in een drukfles gedurende 72 uren. De druk wordt afgelaten en het isobuteen laat men verdampen, waarna - de oplossing wordt gewassen met -'5$'s natriumcarbonaat, water, 35 gedroogd boven magnesiumsulfaat en drooggedampt in vacuo, waarbij 8104049 - 10 - benzyloxycarbonyl-L-pipecolinezure tert.butylester wordt verkregen.

Het benzyloxycarbonyl-L-pipecolinezure tert.butylester wordt opgelost in absolute ethanol (1,2 l) en bij normale druk gehydrogeneerd met 10 %'s Pd op koolstof (10 g) totdat nog 5 slechts een spoor kooldioxyde wordt waargenomen in het uittredende waterstofgas {2b uren), De katalysator wordt afgefiltreerd en het filtraat in vacuo bij 30 mm Hg geconcentreerd. Het residu wordt in vacuo gedestilleerd, waarbij L-pipecolinezure tert.butylester wordt verkregen .

10 b) 1-(3-Acetylthiopropanoyl)-L-pipecolinezure tert.butylester.

L-pipecolinezure tert.butylester (5*55 g) wordt opgelost in dichloormethaan (ho ml) en de oplossing wordt afgekoeld in een ijs-waterbad. Een oplossing van dicyclohexylcarbodiimide 15 (6,18 g) in dichloormethaan (20 ml) wordt toegevoegd, onmiddellijk gevolgd door 3-acetylthiopropionzuur {h,b5 g). Ha 15 min. roeren in het ijs-waterbad en 16 uren bij kamertemperatuur wordt het precipitaat afgefiltreerd en het filtraat in vacuo drooggedampt.

Het residu wordt opgelost in ethylacetaat en gewassen tot neutrale 20 reactie. De organische laag wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat

en in vacuo drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Voorbeeld IV

1-(3-Mereaptopropanoyl)-L-pipecolinezure tert.-butylester (2,5 g) wordt opgelost in een mengsel van anisool (20 ml) 25 en trifluorazijnzuur (U5 ml). Ha een verblijf van 1 uur in een argonatmosfeer bij kamertemperatuur wordt het reactiemengsel in vacuo drooggedampt en het residu verscheidene malen geprecipiteerd uit ethylacetaat-hexaan. Het residu (1,9 g) wordt opgelost in ethylacetaat (30 ml) en dicyclohexylamine (1,85 ml) wordt toegevoegd. 30 Het kristallijne zout wordt af gefiltreerd en herkristalliseerd uit isopropanol.

Het zout wordt omgezet in het zuur, zoals beschreven in voorbeeld I. Het produkt wordt gekristalliseerd uit ethyl-acet aat-hexaan.

35 Voorbeeld_V

8104049 t *r - 11 - 1-(3-Benzoylthiopropanoyl)-5-hydroxy-L-pipecolinezuur.

5-Hydroxy-L-pipecolinezuur (7,25 g) wordt opgelost in normaal natriumhydroxyde (50 ml) en de oplossing wordt 5 afgekoeld in een ijsbad. 3-Broompropionylchloride (8,5 g) en 2 N. natriumhydroxyde (27 ml) worden toegevoegd en het mengsel wordt gedurende 10 min. in het ij shad en gedurende 3 uren hij kamertemperatuur geroerd. Een suspensie van thiobenZbëzuur (7,5 g) en kaliumcarhonaat (H,5 g) in water (50 ml) wordt toegevoegd en het 10 mengsel wordt gedurende 18 uren hij kamertemperatuur geroerd. Ra de aanzuring met geconcentreerd zoutsiiur wordt de waterige fase tweemaal geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische lagen worden gedroogd, hoven magnesiumsulfaat en in vacuum drooggedampt, waarbij de in de titel genoemde verbinding wordt verkregen.

15 Voorbeeld VI

1—(3-Mercaptopropanoyl)-5-hydroxy-L-pipecolineZUur.

1-(3-Ben2oylthiopropanoyl)-5-hydroxy-L-pipecoline-zuur (5,1 g) worden opgelost in een mengsel van water (8 ml) en 20 geconcentreerd ammoniumhydroxyde (5,6 ml) en de oplossing wordt onder roeren gedurende 1 uur in een argonatmosfeer gehouden. Het reactie-mengsel wordt verdund met water, afgefiltreerd en het filtraat geëxtraheerd met ethylacetaat. De waterige fase wordt aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur, verzadigd met natriumchlo-25 ride en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische lagen worden gewassen met verzadigde natriumchloride, gedroogd hoven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt. Het residu, de titelverbinding, wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-hexaan.

Voorbeeld VII

30 1-(3-Acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-pipecolinezure tert.butylester.

L-pipecolineZüre tert.butylester (5,5 g) wordt opgelost in dichloormethaan (bo ml) en de oplossing wordt geroerd en afgekoeld in een ijsbad. Dicyclohexylcarbodiimide (6,2 g), opge-35 lost in dichloormethaan (15 ml), wordt toegevoegd, onmiddellijk 810404¾ - 12 - gevolgd door een oplossing van 3-acetylthio-2-methylpropaanzuur (U,9 g) in dichloormethaan (5 ml). Ka 15 min. roeren in het ijsbad en 16 uren bij kamertemperatuur wordt het precipitaat afgefiltreerd en het filtraat in vacuo drooggedampt. Het residu wordt opgelost '5 in ethylacetaat en gewassen tot neutrale reactie. De organische fase wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt. Het residu, 1-(3-acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-pipecolinezure tert.butylester, wordt gezuiverd door kolomchromatografie (silica-gel-chloroform).

10 Voorbeeld VIII

1 -(3-Acetylthio-2-methylpropanoyl )-L-pipecolinegfuur,

De 1-(3-acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-pipeco-lineiure tert.butylester van voorbeeld VII (7,9 g) wordt opgelost 15 in een mengsel van anisool (55 ml) en trifluorazijnzuur (110 ml).

ITa opslag gedurende 1 uur bij kamertemperatuur wordt het oplosmiddel in vacuo verwijderd en het residu verscheidene malen uit ether-hexaan geprecipiteerd. Het residu (6,# g) wordt opgelost in acetonitril (iiO ml) en dicyclohexylamine 5 ml) wordt toegevoegd. 20 Het kristallijne zout wordt gekookt met vers acetonitril (100 ml), afgekoeld tot kamertemperatuur en afgefiltreerd,

Dit materiaal wordt gekristalliseerd uit isopropanol. Het kristallijne dicyclohexylamineaout wordt gesuspendeerd in een mengsel van 5 #’s waterig kaliumhydrogeensulfaat en 25 ethylacetaat. De organische fase wordt gewassen met water en drooggedampt. Het residu wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-hexaan, waarbij 1-(3-acetylthio-2-D-methylpropanoyl)-L-pipecolinezuur wordt verkregen.

Voorbeeld IX

30 1 - (3-Mercapt o-2-D-met hylpropanoyl-) -L-pipecolineSuur.

De thioester (0,85 g) van voorbeeld VIII wordt opgelost in 5,5 N methanolisch ammonia en de oplossing wordt gedurende 2 uren op kamertemperatuur gehouden. Het oplosmiddel 35 wordt in vacuo verwijderd en het residu opgelost in water, aange- 8104049

* V

< - 13 -

bracht op een ionuitwisselaarkolom in de H+ cyclus (Dowex 50» analytische kwaliteit) en geëlueerd met water. De fracties, die een positieve thiolreactie geven, worden gecombineerd en drooggevroren. Het residu wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-hexaan; en 5 levert zuiver 1 -(3-mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-pipecolinezuur op. Voorbeeld X

1—(^-BenZbylthiobutanoyl)-L-pipecolinezuur.

Aan een oplossing van L-pipecolinezuur (3,0 g) 10 in normaal natriumhydroxyde (25 ml), afgekoeld in een ijsbad, worden 2 N. natriumhydroxyde (12,5 ml) en' U-chloorbutyrylchloride (3,5 g) toegevoegd. Het reactiemengsel wordt gedurende 3,5 uren bij kamertemperatuur geroerd en een suspensie van thiobentfbëzuur (3,75 g) en kaliumcarbonaat (2,1). g) in water (25 ml) wordt toegevoegd. Na 15 roeren gedurende de nacht bij kamertemperatuur wordt het reactiemengsel aange2uurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat -De organische laag wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt, Het residu wordt gechromatografeerd over een kolom silicagel met benzreen-20 azijnzuur (7:1). De fracties, die het gewenste materiaal bevatten, worden gecombineerd en drooggedampt. Een klein monster van dit materiaal wordt opgelost in ethylacetaat en dicyclohexylamine wordt toegevoegd tot een pH van 8-10 (bepaald met een nat pH-papiertje). Het dicyclohexylaminezout kristalliseert onmiddellijk uit.

25 Voorbeeld XI

1—(I)—Mere aptobutanoyl )—L—pipe colinezuur.

1 -(l)-Benzylthiobutanoyl) -L-pipecolineZuur (1,15 g) wordt opgelost in een mengsel van water (U ml) en geconcentreer-30 de ammonia (2,7 ml). Na 1 uur roeren bij kamertemperatuur wordt het mengsel met water verdund, af gefiltreerd, geëxtraheerd met ethylacetaat en de waterige fase in vacuo geconcentreerd. Het verkregen ammoniumzout van 1-(U-mercaptobutanoyl)-L-pipecolinezuur wordt gezuiverd door ionenuitwisselingschromatografie op een kolom van 35 diethylaminoethyl-Sephadex (verknoopt dextran) met een gradiënt van ammoniumhydrogeencarbonaat. Het ammoniumzout wordt opgelost in 8104049 - 1¼ - - ·- * water (2 ml) en aangebracht op een kolom van Dowex 50 sulfonzuur-hars (analytische kwaliteit) in de waterstofvorm en het vrije zuur wordt met water geëlueerd, De fracties, die het gewenste materiaal (positieve reactie met sulfhydryl-reagens en carboxyl-reagens) 5 bevatten, worden gecombineerd en gevriesdroogd, waarbij 1-(U-mer-captobutanoyl)-L-pipecolinezuur wordt verkregen. Het dicyclohexyl-amaoniumzout wordt bereid volgens de procedure van voorbeeld X.

Voorbeeld XII

1 -J_ 3-(Acetylthio)-DL-propanoyl_/pipecolinezuur.

10

Pipecolinezuur (6,5 g) wordt gesuspendeerd in 200 ml dimethylaceetamide. 3-Acetylthiopropanoylchloride (8,3 g) wordt druppelsgewijze bij 23° C aan de suspensie toegevoegd. Een heldere oplossing wordt gevormd en de temperatuur stijgt tot 28° C.

15 Aan deze heldere oplossing wordt toegevoegd N-methylmorfoline (10,1 g). Er wordt onmiddellijk een precipitaat gevormd en de temperatuur stijgt tot 3^° C. Het mengsel wordt gedurende 1 uur op een stoombad verhit waarbij een heldere oplossing wordt gevormd.

Na de afkoeling wordt de geprecipiteerde vaste stof afgefiltreerd, 20 waarbij 5,1 g van de titelverbinding worden verkregen; smpt. = 190-200° C. Het oplosmiddel wordt verwijderd en het visceuZ'e residu samengewreven met isopropylether, waarbij 7,8 g produkt worden verkregen; smpt. = 90-101° C. Herkristallisatie uit aceton-hexaan geeft een vaste stof met een constant smeltpunt; smpt. = 25 102-10k° C; 0,72 /_ silicagel, benzeen, azijnzuur (7:2)_/.

Voorbeeld XIII

DL-1—(3-Mercaptopropanoyl)pipecolinezuur.

12 ml geconcentreerd ammoniumhydroxyde wordt in 30 een stikstof atmosfeer bij 10° C gedurende ongeveer 15 min. geroerd en vervolgens wordt vast 3-(acetylthio)-DL-propanoyl __/-pipecolinezuur (6,b g) bij 5-10° C toegevoegd. Er wordt na 2-3 min. een heldere oplossing gevormd. Het ijsbad wordt verwijderd en de oplossing bij kamertemperatuur in een stikstofatmosfeer gedurende 35 ^5 min, geroerd. De oplossing wordt sterk zuur gemaakt met 20 #’s 8104049 - 15 - φ HCl (koeling) en de geprecipiteerde olie wordt geëxtraheerd met 3 x 150 ml ethylacetaat. De ethylacetaat-extracten worden gedroogd boven magnesiumsulfaat en het oplosmiddel wordt verwijderd, waarbij 6,0 g van de titelverbinding worden verkregen; 0,77 /. silicagel, 5 benzeen, azijnzuur (7:1)_/.

Voorbeeld XIV

1-(3-Mercaptopropanoyl)-L-pipecolinezuur.

Door L-pipecolinezuur in plaats van DL-pipecoline-10 zuur te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XII en het produkt vervolgens te onderwerpen aan de procedure van voorbeeld XIII worden 1 -J_ 3-(acetylthio)propanoyl__7-L-pipecolinezuur en 1-(3-mercap-topropanoyl)-L-pipecolinezuur, Rf 0,80 (silicagel, benzeen, azijnzuur (7:1)_/, j_ $_7^ -51 >5° (c 1,0, absolute ethanol) , verkregen.

15 Voorbeeld XV

1-/. 3-(Acetylthio )-2-methylpropanoyl_/-DL-pipecolinezuur.

6,5 g (0,05 mol) pipecolinezuur worden gesuspendeerd in dimethylaceetamide (200 ml), waarna 9,0 g (0,05 mol) 3-20 acetylthio-2-methylpropanoylchloride druppelsgewijze worden toegevoegd. De temperatuur stijgt tot 29° C en een heldere oplossing wordt gevormd. Vervolgens worden 10,1 g R-methylmorfoline in êin keer toegevoegd, waarbij de temperatuur stijgt tot 3^° C. Het mengsel wordt gedurende 1 uur op een stoombad verhit, waarbij een 25 heldere oplossing wordt gevormd. Men laat deze oplossing gedurende de nacht bij kamertemperatuur staan, waarna de geprecipiteerde vaste stof wordt afgefiltreerd; 6,1 g; smpt. = 203-20^° C. Het oplosmiddel wordt verwijderd en het visceuze residu samengewreven met water en 20 %'s HCl. De gele olie wordt geëxtraheerd met 3 x 150 ml 30 ethylacetaat, De ethylacetaat-extracten worden gedroogd boven magnesiumsulfaat en verwijderd, waarbij g van de titelverbinding als een visceuZe olie worden verkregen.

Voorbeeld XVI

1—(3-Mercapto-2-methylpropanoyl)-DL-pipecoline2uur.

35 8104049 - 16 -

Waterig ÏÏH^OH (30 ml water en 20 ml geconcentreerd M^OH) wordt in een stikstof atmosfeer "bij 10° C gedurende 15 min. ge-roered. Dit wordt toegevoegd aan 13*0 g (0,05 mol) 1-/ 3-(acetyl-thio)-2-methyipropanoyl__/-DL-pipecolinezuur en de resulterende op-5 lossing wordt gedurende 10 min. in een stikstofatmosfeer geroerd; vervolgens wordt gedurende 50 min, bij kamertemperatuur geroerd, De oplossing wordt vervolgens behandeld met water en 20 % HC1 en de gele olie wordt geëxtraheerd met 3 x 150 ml ethylacetaat. Het ethylacetaatextract wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en inge-10 dampt, waarbij 11,1 g van de titelverbinding als een viseeuze olie worden verkregen; 0,62 ]_ silicagel, benzeen, azijnzuur (7:2)_/, 15 8104049

Claims

1. Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking, waarbij men een proline in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt, met 5 het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R een hydroxy- of aminogroep of een lagere alkoxygroep, R^ en R^ elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, Rg een waterstofatoom of een groep COR^ is, waarbij R^ een fenyl, lagere alkyl- 10 fenyl- of fenyl-lagere alkylgroep voorstelt, en R^ een waterstofatoom of een hydroxy- of lagere alkylgroep voorstelt en n * 0, 1 of 2 en m = 3, of een basisch Zrout daarvan toepast.

2. Werkwijze ter bereiding van een verbinding die geschikt is om bij de werkwijze volgens conclusie 1, te worden 15 toegepast, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R, R^ Rg, R^, R^, m en n dezelfde betekenis hebben als in conclusie 1, op een voor dergelijke verbindingen gebruikelijke wij2e bereidt. 20 8104049 V' ' · . Reg.nr.: 115.779 R4· Ri ‘ /' i 1 . I v r4—s—(chJ^— ch—COOH X — (CH)* CH—cox 16 17 R/ M M I II !| R2-S-(CHj)m—CH- COOH 18 Rr-M-C-X g Rr- M -C-S-Me^g M Rii R* Rj—N = C= Μ Γ |\ I 9

21 Rf-NH-C-S-(CH)„ —CH-COOH R |_S_R

22 R<> s s R 24 fager alkyl— CO — NHCH^OH [ O I1 " Ri-S-S-R^ RtS— X o 25 26 R4— S —SOjH Rg.— S — SCN 27 ^ 28 (HC)-CH2 Rt Ri ^ I* ! I Γ R — OC — HC- N-CO - CH -(CH\ —S(0)o * * J* v ip 29 E.l. Squibb & Sons, Ine.. te Princeton. New Jersey Ver. S t .v .Amerika 8104049 rs / . Reg.nr.: 115.779 «3 ’ «4 J*1 —(CH)^. R,—s (CH)-CH — CO— N— CH—COR ?* "f-ffl- 3 HN — CH— COR ^ Ri R$ i—S—(CHj^—CH— COOH H W *Ji R4 Ri I I 'll x~(CHk~cH—C00H 5 r4 r CH-C— COOH g φ)ν.—f 8 A~SH s_c

7. Nn R4 R| · O || •ii Y-S-fCH) —CH —COR „ /1 , 1 lyi 9 R4 R, H2C —(CH]W 1Q X— (CHU-CH—CO- N--CH-COR r ^ R, M,C-(CH)* R i—S—/ch)*—CH — CO — N —CH—COR ψ 11 .. ^ 1¾. Η^~^Η)% HS—(CH)^— CH —CO— N —CH—COR R 12 !4 .jU R| H^C (CH)w CH ·= C— CO— N -- CH—COR 13 j*4 Ri C'^~C^S^0~^H^~CH~m0H Ri R U I I' 15 R2— S - CH - CH — COOH E.R. Squibb & Sons, Inc. 8 1 0 4 0 4 9 : .^SitrJers% « · .