NL8104046A

NL8104046A - Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen.

Info

Publication number: NL8104046A
Application number: NL8104046A
Authority: NL
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1976-02-13
Filing date: 1981-09-01
Publication date: 1982-01-04
Also published as: NL179134B; NL178874B; NL179134C; NL8104047A; NL178874C; NL8104048A; NL178844C; NL8104049A; NL178873B; NL178873C; NL177827C; NL177827B; NL8104050A; NL178844B

Description

- 1 - i a *>

Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen,

De uitvinding betreft een werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking, waarbij men een proline in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt, 5 Een dergelijke werkwijze kan bekend worden ge acht uit de Duitse "Offenlegungsschriften" 2,108.043 en 2,124,451. Volgens deze "Offenlegungsschriften" kan men voor de bestrijding van bloeddrukverhoging bepaalde peptiden toepassen met eindstandige prolinegroepen. Gebleken was namelijk, dat deze peptiden in staat 10 zijn het enzym af te remmen, dat angiotensine I, welke stof in het . lichaam geproduceerd wordt, omzet in angiotensine II, welke stof een bloeddrukverhogende werking heeft.

Volgens de uitvinding brengt men een verbinding met de formule 1, van het formuleblad waarin R een hydroxy- of 15 aminogroep of een lagere alkoxygroep, Rj en R4 elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, R^ een waterstofatoom of een hydroxy of lagere alkylgroep voorstelt en R2 een lagere alkyl- of fenylgroep of een gesubstitueerde fenylgroep, waarvan de substituent 20 een halogeenatoom, een lagere alkyl- of alkoxygroep, een fenyl- lagere alkyl-, difenyl-lagere alkyl- of trifenyl-lagere alkyl, een lagere alkylthiomethyl, fenyl-lagere alkylmethyl-, of lagere alka-noylamidomethylgroep of de groep Μ M of een

II II

R5-M-C , R5-NH-C , Rg-S

25 groep met de formule 29 voorstelt, waarbij Rj. een lagere alkyl-, fenyl- of fenyl-lagere alkylgroep is en Rg een lagere alkyl- of fenylgroep of een gesubstitueerde fenylgroep is met als substituent een halogeenatoom, een lagere alkyl- of alkoxygroep, een hydroxy- lager alkyl- of amino(carboxy)-lagere alkylgroep is en M een zuur- P ,en 30 stof of zwavelatoom voorstelt,/n =0, 1 of 2 en m = 2, of een basisch zout daarvan in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm, 8-1 0 4 0 4 6 - 2 -

Gevonden werd namelijk, dat deze veel eenvoudigere prolines, die geen peptiden zijn, eveneens geschikt zijn om volgens hetzelfde mechanisme te hoge bloeddruk effectief te bestrijden, Van belang is verder, dat zij deze werking ook uitoefenen bij 5 orale toediening.

De stereo-isomeren van de prolines met de formule 2 in de L-vorm genieten de voorkeur.

De lagere alkylgroepen, voorgesteld door de bovengenoemde symbolen, omvatten rechte en vertakte koolwaterstof-10 resten van methyl tot heptyl, bijvoorbeeld methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, isopentyl en dergelijke, De lagere alkoxygroepen zijn van hetzelfde type met 1-7 koolstof-atomen, verbonden met het zuurstofatoom, bijvoorbeeld methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, t-butoxy en derge-15 lijke. De groepen met 1-4 koolstof atomen en in het bijzonder met 1 of 2 koolstofatomen genieten de voorkeur. Fenylmethyl is de fenyl-lagere alkylgroep, die de voorkeur geniet.

De lagere alkanoylgroepen zijn die met de acyl-resten van de lagere ^-C^) vetzuren, bijvoorbeeld acetyl, propio-20 nyl, butyryl, isobutyryl en dergelijke. De lagere alkanoylgroepen met tot 4 koolstofatomen, in het bijzonder acetyl, genieten de voorkeur.

De uitdrukking "halogeen" omvat de vier gebruikelijke halogenen, maar chloor en broom genieten de voorkeur. De gesubstitueerde fenylgroepen bevatten de substituent bij voorkeur 25 op de 4-plaats van de ring. De hydroxy-lagere alkylgroepen bevatten een hydroxygroep aan een alkylketen op dezelfde wijze als die welke hierboven zijn beschreven, bij voorkeur aan het eindstandige kool-stofatoom, bijvoorbeeld hydroxymethyl, 2-hydroxyethyl, etc. De amino(carboxy) lagere alkylgroepen bevatten één aminogroep en één 30 carboxygroep aan een lagere alkylgroep, zoals die welke hierboven zijn beschreven, bij voorkeur beide aan één koolstofatoom, bijvoorbeeld aan het eindstandige koolstofatoom, zoals in de voorkeurs 2-amino-2-carboxyethylgroep.

De nieuwe verbindingen met de algemene formule 1 35 kunnen op een op zichzelf bekende wijze worden bereid.

8104046 Λ ~ - 3 -

In het algemeen worden de verbindingen volgens de uitvinding bereid door een verbinding met de formule 3 te acyle-ren met een zuur met de formule 4 of een chemisch equivalent daarvan.

5 Het eindprodukt kan niet alleen worden verkregen door direkte acylering met een zuur met de formule 4 maar eveneens via tussenprodukten, zoals (a) ω-halogeenalkaanzuren met de formule 5, waarin X broom, chloor of jodium is, of (b) een tosyloxyalkaan-zuur, dat wil zeggen een zuur met de formule 5, waarin X tosyloxy 10 (ch3 -<§> —“ SC^O-) is of (c) een gesubstitueerd acrylzuur met de for mule 6. Het produkt van deze acylering wordt vervolgens onderworpen aan een omlegging of een additie met het anion van een thiol of thiozuur met de formule 7.

Wanneer het zuur met de formule 4 als acyleer-15 middel wordt gebruikt kan de acylering worden bewerkstelligd in tegenwoordigheid van een koppelingsmiddel, zoals dicyclohexylcarbo-diimide of dergelijke, of het zuur kan worden geactiveerd door vorming van zijn gemengde anhydride, symmetrische anhydride, zuur-chloride, zuurester of toepassing van het Woodward-reagens K, N-20 ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinoline, of dergelijke. In verband met de acyleringsmethodes wordt verwezen naar Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Vol. XV, part II, pag. 1 e.v. (1974).

Verbindingen met de formule 3 omvatten bijvoor-25 beeld proline, hydroxyproline, 4-methylproline en de lager alkyl-esters daarvan en dergelijke. De acylering van dergelijke verbindingen is hieronder meer uitvoerig beschreven.

Volgens een voorkeursmethode ter bereiding van verbinding met de formule 1, wordt een zuur of ester met de 30 formule 3 gekoppeld met een halogeenalkaanzuur met de formule 5, waarin X halogeen, bij voorkeur chloor of broom, voorstelt. Dit kan worden bewerkstelligd door toepassing van één van de bekende procedures, waarbij het zuur 4 voor de reactie met het zuur 3 wordt geactiveerd door vorming van een gemengd anhydride, symmetrisch 35 anhydride, zuurchloride of actieve ester of door toepassing van 8104046 * * - 4 - *

Woodward-reagens K, EEDQ (N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydroxy-chinoline) of dergelijke.

Het produkt van deze reactie is een verbinding met de formule 10. Het produkt met de formule 10 wordt onderworpen 5 aan een verplaatsingsreactie met het anion van een thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 11. Wanneer R een estergroep is (dat wil zeggen dat R voorstelt een lager alkoxygroep) kan de estergroep uit een ester met de formule 11 worden verwijderd door behandeling met trifluorazijnzuur en anisool, 10 waarbij het overeenkomstige vrije zuur wordt verkregen. Ook door alkalische hydrolyse kan het overeenkomstige zuur worden verkregen.

Een variatie op deze procedure omvat de toepassing van een acrylzuur met de formule 6 als uitgangsmateriaal. Dit acrylzuur wordt eerst omgezet in de zuurhalogenidevorm en vervolgens 15 in reactie gebracht met een verbinding met de formule 3 onder vorming van een verbinding met de formule 13 en dit tussenprodukt wordt onderworpen aan de additiereactie met het thiol of thiozuur 7, zoals hierboven beschreven.

Een tosyloxyalkaanzuur met de formule 14 kan 20 eveneens worden gebruikt als het middel voor de acylering van het zuur met de formule 3, waarna het acyleringsprodukt wordt onderworpen aan de verplaatsingsreactie, etc., zoals hierboven beschreven.

Het acrylzuur met de formule 6 kan anderzijds eerst in reactie worden gebracht met het thiozuur met de formule 7 25 onder vorming van een produkt met de formule 15, dat wordt omgezet in zijn zuurhalogenide, bijvoorbeeld met thionylchloride, en vervolgens wordt gekoppeld met de verbinding met de formule 3, waarna verder de boven beschreven procedure wordt gevolgd.

Het zuur of de ester met de formule 3 kan even-30 eens worden geacyleerd met een "beschermde" vorm van een ω-mercap-toalkaanzuur met de formule 16, waarin Rg de "beschermende" groep is. Dergelijke "beschermende" groepen kunnen in de hierboven beschreven vorm zijn.

Na de acylering kan de beschermende groep uit het 35 produkt worden verwijderd volgens één van de hierboven beschreven 8104046 * Λ » - 5 - bekende methodes.

Verdere details met betrekking tot de voorkeursmethodes voor de bereiding van de verbindingen volgens de uitvinding zijn aangegeven in de onderstaande specifieke voorbeelden.

5 Volgens een modificatie van de werkwijze, die in het bijzonder de voorkeur geniet, wordt het zuur of de ester met de formule 3 geacyleerd met een halogeenalkanoylhalogenide met de formule 17, waarin elke X onafhankelijk voorstelt een halogeen, bij voorkeur chloor of broom, R voorstelt waterstof, lager alkyl of 10 fenyl-lager alkyl en n 0, 1 of 2 is. Deze reactie wordt bewerkstelligd in een alkalisch medium, bijvoorbeeld een verdunde alkalime-taalhydroxyde-oplossing, alkalimetaalhydrogeencarbonaat- of alkali-metaalcarbonaat-oplossing, bij verlaagde temperatuur, bijvoorbeeld ongeveer 0-15° c. Het reactieprodukt wordt onderworpen aan een 15 verplaatsingsreactie met het anion van het thiol of thiozuur met de formule 7, eveneens in een alkalisch medium, bij voorkeur een alkalimetaalcarbonaat-oplossing, en/voïgens op de gebruikelijke wijze opgewerkt. Wanneer een zuur met de formule 3 als uitgangsmateriaal wordt gebruikt kan het als het vrije carbonzuur verkregen 20 eindprodukt vervolgens worden omgezet in zijn ester, bijvoorbeeld door verestering met een diazoalkaan, zoals diazomethaan, een 1-alkyl-3-p-tolyltriazeen, zoals l-n-butyl-3-p-tolyltriazeen of dergelijke. De behandeling van een ester, bij voorkeur de methyl-ester, met een alcoholische ammonia-oplossing zet het vrije zuur 25 om in het amide, dat wil zeggen in een produkt, waarin R voor stelt nh2.

Volgens een andere variatie van de werkwijze wordt een ester, bij voorkeur de t-butylester, met de formule 3 in een watervrij medium, zoals dichloormethaan, tetrahydrofuran, dioxan 30 of dergelijke, behandeld met een thioalkaanzuur met de formule 18 in tegenwoordigheid van dicyclohexylcarbodiimide, N.N'-carbonylbis-imidazool, ethoxyacetyleen, difenylfosforylazide of analoge kpppelingsmiddelen bij een temperatuur vein ongeveer 0-10° C. De estergroep (R) kan vervolgens worden verwijderd, bijvoorbeeld door 35 behandeling mettrifluorazijnzuur en emisool bij kamertemperatuur.

8104046 « δ - 6 -

Produkten met de formule 1, waarin de groep M

I· R,.-M-c- voorstelt bereidt men door reactie van een verbinding met de formule 12 (zie moederoctrooiaanvrage 77.01457) met een gehalo-5 geneerde verbinding met de formule 19 of door reactie van een verbinding met de formule 10 met een alkalimetaalzout of aardalkali-metaalzout van een verbinding met de formule 20, waarin Me het alkalimetaal of aardalkalimetaal voorstelt.

Een produkt met de formule 1, waarin 1*2 de groep

10 M

II

R,.-NH-C- voorstelt wordt bereid door reactie van een verbinding met de formule 12 met een geschikt gesubstitueerd isocyanaat of isothio-cyanaat met de formule 21. Anderzijds kunnen dezelfde produkten worden verkregen door koppeling van een zuur met de formule 22 met een 15 aminozuur met de formule 3.

Verbindingen met de formule 1, waarin R^ voorstelt lager alkyl, fenyl, gesubstitueerd fenyl, fenyl-lager alkyl, trifenyl-lager alkyl, lager alkylthiomethyl of fenyl-lager alkyl-thiomethyl, worden verkregen door reactie vein een verbinding met de 20 formule 12 met het overeenkomstige halogenide R2X of door reactie van een verbinding met de formule 10 met het overeenkomstige thiol R2SH op dezelfde wijze als hierboven beschreven.

Een verbinding met de formule 1, waarin R2 een lagere alkanoylaminomethylgroep voorstelt, kan worden bereid door 25 condensatie van een verbinding met de formule 12 met een overeenkomstig hydroxymethyl-lager alkanoylamide met de formule 23 in tegenwoordigheid van een zure katalysator, zoals trifluorazijnzuur.

Een verbinding met de formule 1, waarin R2 de groep R,-S voorstelt, kan worden bereid onder toepassing van bekende Ό 30 methodes voor de synthese van gemengde disulfiden, bijvoorbeeld door reactie van een verbinding met de formule 12 met een thiosulfinaat met de formule 24, thiosulfonaat met de formule 25, sulfenylhaloge-nide met de formule 26, thiosulfaat met de formule 27 of sulfenyl-thiocyanaat met de formule 28.

35 In het speciale geval waarin een groep met de 81 0 4 0 4 ο ί * - 7 - formule 29 voorstelt en R, Rj, R^ en R^ dezelfde betekenissen bezitten als de overeenkomstige substituenten in de formule 1 en p 0 is kunnen de symmetrische disulfiden worden verkregen door direkte oxydatie van een verbinding met de formule 12 met jodium.

5 Wanneer p 1 of 2 is kunnen dergelijke produkten worden verkregen door trapsgewijze oxydatie van de overeenkomstige verbinding, waarin p 0 is. Gemengde disulfiden worden verkregen onder toepassing van de in de voorbeelden beschreven modificatie.

Produkten met de formule 1 bezitten één of meer 10 asymmetrische koolstof atomen. Wanneer R^, R^ of R^ een andere betekenis bezitten dan waterstof is het koolstofatoom, waaraan deze substituent is vastgehecht, asymmetrisch. Deze koolstofatomen zijn in de formule 1 aangegeven door een sterretje. De verbindingen bestaan daarom in stereo-isomere vormen of in racemische mengsels 15 daarvan. Al deze vormen en mengsels vallen binnen het raam van de uitvinding. Bij de boven beschreven syntheses kunnen als uitgangsmaterialen het racemaat of één van de enantiomeren worden gebruikt. Wanneer het racemisch uitgangsmateriaal wordt gebruikt bij de synthese kunnen de in het produkt verkregen stereoisomeren worden 20 gescheiden onder toepassing van gebruikelijke chromatografische of gefractioneerd kristallisatie-methodes, In het algemeen is het L-isomeer met betrekking tot het koolstofatoom van het aminozuur de isomere vorm, die de voorkeur geniet. Ook het D-isomeer met betrekking tot het α-koolstofatoom in de acyl-zijketen (dat wil 25 zeggen het koolstofatoom, dat draagt) geniet de voorkeur.

De verbindingen volgens de uitvinding vormen basische zouten met verschillende anorganische en organische basen, welke zouten eveneens binnen het raam van de uitvinding vallen. Dergelijke zouten omvatten ammoniumzouten, alkalimetaalzouten, zoals 30 natrium- en kaliumzouten (die de voorkeur genieten), aardalkali-metaalzouten, zoals de calcium- en magnesiumzouten, zouten met organische basen, bijvoorbeeld het dicyclohexylaminezout, benzathine-, N-methyl-D-glucamine-, hydrabamine-zouten, zouten met aminozuren, zoals arginine, lysine en dergelijke. De niet-toxische, fysiolo-35 gisch aanvaardbare zouten genieten de voorkeur, hoewel andere 8104043 ♦ ? - 8 - • zouten eveneens bruikbaar zijn, bijvoorbeeld bij de isolatie of zuivering van het produkt, zoals in de voorbeelden geïllustreerd voor het geval van het dicyclohexylaminezout.

De zouten worden op gebruikelijke wijze gevormd 5 door reactie van de vrije zuurvorra van het produkt met één of meer equivalenten van de geschikte base, die het gewenste kation verschaft, in een oplosmiddel of.medium, waarin het zout onoplosbaar is, of in water en verwijdering van het water door vriesdrogen. Door neutralisatie van het zout met een onoplosbaar zuur, zoals een 10 kationuitwisselaarhars in de waterstofvorm (bijvoorbeeld polysty- reensulfonzuurhars zoals Dowex 50) of met een waterig zuur en extractie met een organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld ethylacetaat, di-chloormethaan of dergelijke, kan de vrije zuurvorm worden verkregen en desgewenst een ander zout worden gevormd.

15 Verdere experimentele details zijn aangegeven in de voorbeelden, die voorkeursuitvoeringsvormen beschrijven en eveneens dienen als model voor de bereiding van andere leden van de groep.

De verbindingen volgens de uitvinding remmen de 20 omzetting van het decapeptide angiotensine I in angiotensine II en zijn daarom bruikbaar voor het verlagen van de met angiotensine in verband staande hypertensie. Door inwerking van het enzyme renine op angiotensinogeen, een pseudoglobuline in bloedplasma, wordt angiotensine I gevormd. Angiotensine I wordt door angiotensine omzettend 25 enzym (ACE) omgezet in angiotensine II, Dit laatste is een actieve bloeddruk verhogende stof, die beschouwd wordt als de oorzaak van verschillende vormen van hypertensie bij verschillende zoogdier-soorten, bijvoorbeeld ratten en honden, De verbindingen volgens de uitvinding blokkeren de omzetting angiotensine (renine) -* angio-30 tensine I -^ angiotensine II door remming van het angiotensine omzettend enzym en vermindering of eliminering van de Vorming van het bloeddruk verhogene angiotensine II, Door toediening van een preparaat, bevattende één of meer verbindingen met de formule 1 en/of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan, kan de door angio-35 tensine veroorzaakte hypertensie bij daaraan lijdende zoogdieren 8104046 ; « - 9 - worden verminderd. Eén enkele dosis of bij voorkeur 2-4 dagelijkse deeldoses op basis van ongeveer 0,1-100 mg per kg per dag en bij voorkeur ongeveer 1-50 mg per kg per dag is geschikt voor het verlagen van de bloeddruk, zoals blijkt uit de dierproeven, beschreven 5 door S.L. Engel, T.R. Schaeffer, M.H. Waugh en B. Rubin, Proc. Soc.

Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973). De stof wordt bij voorkeur oraal toegediend, maar een parenterale toediening, zoals een subcutane, intramusculaire, intraveneuze of intraperitoneale toediening, kan eveneens worden toegepast.

10 De verbindingen volgens de uitvinding kunnen voor het verlagen van de bloeddruk worden gebruikt in de vorm van preparaten, zoals tabletten, capsules of elixirs voor orale toediening of in steriele oplossingen of suspensies voor parenterale toediening. Ongeveer 10-500 mg van een verbinding of mengsel van verbindingen 15 met de formule 1 of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan worden gemengd met fysiologisch aanvaardbare vehikels, dragers, excipiëntia, bindmiddelen, conserveermiddelen, stabiliseermiddelen, smaakmiddelen, etc. onder vorming vain een eenheidsdoseringsvorm als vereist in de farmaceutische praktijk. De hoeveelheid actieve stof in deze prepa-20 raten is zodanig, dat een geschikte dosis binnen het boven aangegeven traject wordt verkregen.

Voorbeelden van toevoegsels, die opgenomen kunnen worden in tabletten, capsules en dergelijke, zijn de volgende! een bindmiddel, zoals tragacanthgom, acaciagom, maïszetmeel of gelatine, 25 een excipiént, zoals dicalciumfosfaat, een desintegreermiddel, zoals maïszetmeel, aardappelzetmeel, alginezuur en dergelijke, een smeermiddel, zoals magnesiumstearaat, een zoetmiddel, zoals sucrose, lactose of saccharine, en een smaakmiddel, zoals pepermunt, olie van wintergroen of kersen. Wanneer de eenheidsdoseringsvorm een 30 capsule is kan deze behalve de materialen van het bovengenoemde type bovendien een vloeibare drager, zoals een vette olie, bevatten, Verschillende andere materialen kunnen aanwezig zijn als bekledingen of voor het verder modificeren van de fysische vorm van de eenheids-dosis. Zo kunnen bijvoorbeeld tabletten worden bekleed met schellak, 35 suiker of beide. Een stroop of elixir kan de actieve verbinding, 8104046 * 'C- - 10 - sucrose als zoetmiddel, methyl- en propyl-parabenz als conserveermiddelen, een kleurstof en een smaakmiddel, zoals kersen- of sinaasappelaroma, bevatten.

Steriele preparaten voor injectie kunnen volgens 5 gebruikelijke farmaceutische procedures worden bereid door oplossen of suspenderen van de actieve stof in een vehikel, zoals water voor injectie, een in de natuur voorkomende plantaardige olie, zoals sesamolie, kokosnootolie, pindaolie, katoen-zaadolie, etc., of een synthetisch vet-vehikel, zoals ethyloleaat of derge-10 lijke. Indien nodig kunnen buffers, conserveermiddelen, anti-oxydantia en dergelijke worden opgenomen.

De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet beperkt door de volgende voorbeelden.

Voorbeeld_I

IV 3-£ (Ethoxy) carbonyl_/thio_/propanoyl-L-proline.

Ethylchloorformiaat (1,2 g) wordt toegevoegd aan een oplossing van 3-mercaptopropanoyl-L-proline (2,03 g) in normaal natriumhydrogeencarbonaat (30 ml) en het mengsel wordt heftig ge-20 roerd bij 5° C gedurende 1 uur en bij kamertemperatuur gedurende 2 uren. Na de aanzuring met geconcentreerd chloorwaterstofzuur wordt het mengsel met ethylacetaat geëxtraheerd. De organische fase wordt gewassen met water, gedroogd boven magnesiumsulfaat en droog-gedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

25 v°orbeeld_II

1-/ 3-/_ /_ (Ethoxy) thiocarbonyl_/thio__/porpanoyl_/-L-proline.

Waterig 2 N. natriumhydroxyde (25 ml) en 3-broom-propionylchloride (8,5 g) worden toegevoegd aan een oplossing van 30 L-proline (5,75 g) in N. natriumhydroxyde (50 ml), afgekoeld en geroerd in een ijsbad. Na 5 min. wordt het ijsbad verwijderd en het roeren bij kamertemperatuur voortgezet. Na 3 uren wordt ethylcan-thogeenzuurkaliumzout (9,6 g) toegevoegd en het mengsel wordt gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. De oplossing 35 wordt aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geêxtra- 8104046 i - π - heerd met ethylacetaat, De organische laag wordt drooggedampt en het residu gechromatografeerd over een kolom silicagel met een mengsel van benzeen-azijnzuur (7ïl) als oplosmiddel, waarbij de titel-verbinding wordt verkregen? smpt. 94-95° C.

5 Voorbeeld III

1-/ 3-/_ /_ (Benzylthio) carbonyl_/thio_/propanoyl_/-L-proline.

Een oplossing van benzylthiocarbonylchloride (11 ml) in dioxan (20 ml) wordt in 5 porties toegevoegd aan een oplos-10 sing van l-(3-mercaptopropanoyl)-L-proline (1,6 g) in normaal natriumhydrogeencarbonaat (24 ral), afgekoeld in een ijsbad, over een periode van 30 min.. Het ijsbad wordt verwijderd en het roeren wordt gedurende 2,5 uren bij kamertemperatuur voortgezet. Na de aanzuring met geconcentreerd chloorwaterstofzuur wordt de waterige 15 fase met ethylacetaat geëxtraheerd. De organische fase wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en drooggedampt, waarbij de titel-verbinding wordt verkregen.

Voorbeeld IV_ 1V 3*V / (Ethylthio)thiocarbonyl_/thio_/propanoyl_/-L-proline, 20

Waterig 2N. natriumhydroxyde (25 ml) en 3-broom-propionylchloride (8,5 g) worden toegevoegd aan een oplossing van L-proline (5,75 g) in N. natriumhydroxyde (50 ml), afgekoeld en geroerd in een ijsbad. Na 5 min. wordt het ijsbad verwijderd en 25 het roeren bij kamertemperatuur voortgezet. Na 3 uren wordt ethyl-trithiocarbonaatkaliumzout (10,5 g) toegevoegd en het mengsel wordt gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Na de aanzuring met geconcentreerd chloorwaterstofzuur wordt het mengsel met ethylacetaat geëxtraheerd, De organische laag wordt gedroogd boven magne-30 siumsulfaat en drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

Voorbeeld V

3-/ / (Methylamino)thiocarbonyl__/thio_/propionzuur.

35 Methylisothiocyanaat (4 g) wordt toegevoegd aan 8104046 %

·· X

- 12 - s een oplossing van 3-mercaptopropionzuur (5,3 g) in een mengsel van pyridine (250 ml) en 0,5 N. natriumhydroxyde (100 ml). De oplossing wordt gedurende 2 uren op 40° C gehouden en in vacuo drooggedampt. Het residu wordt opgelost in water (100 ml), aangezuurd met gecon-5 centreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ether. De organische fase wordt drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen; smpt. = 86-87° C.

Voorbeeld VI

1-/3 ~LL (Me thylamine) - thiocarbony 1_/ thio_/propanoy 1_/ -L-pro 1 ine -10 tert.butylester.

Aan een oplossing van L-proline-tert.butylester (1,71 g) en hydroxybenzotriazool (1,35 g) in dichloormethaan (10 ml), afgekoeld en geroerd in een ijsbad, worden dicyclohexylcarbo-15 diimide (2,06 g) en 3-methylaminothiocarbonylthiopropionzuur (1,79 g) toegevoegd. Na 15 min. wordt het bad verwijderd en het roeren wordt gedurende de nacht voortgezet. Het precipitaat wordt afgefiltreerd en het filtraat verdund met ethylacetaat en gewassen tot neutrale reactie. De organische fase wordt drooggedampt, waarbij 20 de titelverbinding wordt verkregen; smpt. = 129-130° C.

Voorbeeld_VlI

l-/_ 3/_ / (Methylamino) thiocarbony 1__/thio__/propanoyl_/-L-proline.

(A) 1- (methylaminothiocarbonylthiopropanoyl) - 25 L-proline-tert.butylester (0,98 g) wordt opgelost in een mengsel van anisool (3,6 ml) en trifluorazijnzuur (7,5 ml). Na 1 uur bij kamertemperatuur wordt het mengsel in vacuo drooggedampt en het residu 3 maal uit ether-hexaan geprecipiteerd. Dit materiaal wordt gechromatografeerd over een kolom silicagel met een oplosmiddelmeng-30 sel van benzeenjlazijnzuur (75:25), waarbij de titelverbinding wordt verkregen; = 0,4 silicagel-benzeen:azijnzuur (75:25)_/. Het dicyclohexylamraoniumzout bezit een smpt. van 127-129° C.

(B) Methylisothiocyanaat (4 g) wordt toegevoegd aan een oplossing van 3-mercaptopropanoyl-L-proline (10,1 g) in 35 een mengsel van pyridine (250 ml) en 0,5 N. natriumhydroxyde (100 ml). De oplossing wordt gedurende 2 uren op 40° C gehouden en 8104046 » ι"1 - 13 - vervolgens in vacuo drooggedampt. Het residu wordt opgelost in water (100 ml), aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische fase wordt drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

5 Voorbeeld VIII

1-/ 3-/ f_ (Ethylamino) carbonyl_/thio__/propanoyl_/-L-proline.

Ethylisocyanaat (0,45 ml) wordt toegevoegd aan een oplossing van l-(3-mercaptopropanoyl)-L-proline (1 g) in een 10 mengsel van N. natriumhydroxyde (5 ml) en pyridine (5 ml). De oplossing wordt gedurende 4 uren op 40° C verhit en in vacuo geconcentreerd. Het residu wordt verdeeld tussen 0,1 N, chloorwaterstofzuur en ethylacetaat. De organische laag wordt gewassen met water, gedroogd boven magnesiumsulfaat en drooggedampt, waarbij de titel-15 verbinding wordt verkregen. Het dicyclohexylammoniumzout wordt bereid door toevoeging van dicyclohexylamine aan een oplossing van het vrije zuur in ethylacetaat; smpt. = 150-152° C.

Voorbeeld IX

1-/ 3-/ / (Ethoxy) car bony l__/thio_y-2-me thy lpropanoyl__/-L-proline.

20

Door 1-(3-mercapto-2-methylpropanoyl)-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld I wordt de titelverbinding verkregen,

Voorbeeld_X

25 l-/_ 3-/ L (Ethoxy) carbonyl__/thio__/butanoyl_/-L-proline.

Door 1-/ 3-mercaptobutanoyl_/-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld I wordt 1V 3-/ /_ (ethoxy) carbonyl^/thio__/butanoyl_/-L-30 proline verkregen.

v22E5eelÉ-$I

l-/_ 4-/ / (Benzylthio) carbonyl>_/thio_/butanoyl_/-L-proline.

Door 4-mercaptobutanoyl-L-proline in plaats van 35 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van 8104046 t ί- - 14 - voorbeeld III wordt l-/_ 4-/ / (benzylthio)carbonyl_/thio_/propa-noyl_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld_XII

1 -/"2-ΓΓ (Benzyl thio) carbonyl_/ thio_/propanoyl_/-L-proline.

5

Door 2-mercaptopropanoyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld III wordt 1-/ 2-/ / (benzylthio)carbonyl_/thio_/propanoyl_/-L-proline verkregen.

10 Y22?*S?®iSL2iii 1 -/_ 3-/ f_ (Ethylthio) thiocarbonyl_/thio_/propanoyl__/-L-proline-methylester.

Een oplossing van l-/_ 3-/ /_ (ethyl thio) thio-15 carbonyl_/thio_/propanoyl_/-L-proline in ethylacetaat wordt behandeld met een etherische oplossing van diazomethaan totdat een blijvende gele kleur is verkregen. Na de verwijdering van de gele kleur met enkele druppels azijnzuur worden de oplosmiddelen in vacuo verwijderd, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

20 Y22E£®2iiL5ïY_ 1—/ 3-/_ /_ (Methylamino) thiocsu:bonyl_/thio>_/-2-methylpropanoyl_/-L-prolineamide.

Door l-(3-mercapto-2-methylpropanoyl)-L-proline-25 amide in plaats van 3-mercaptopropêinoyl-L-proline te gebruiken bij procedure B van voorbeeld VII wordt l-/_ 3V / (methylamino) thio-carbonyl_/thio_/-2-methylpropanoy 1^/-L-proline-amide verkregen. Voorbeeld XV

1-/ 3-/ / (Fenoxy)carbonyl_/thio /propanoyl /-L-proline.

30

Door fenylchloorformiaat in plaats van ethyl-chloorformiaat te gebruiken bij de procedure van voorbeeld I wordt 1-/ 3-/ /“(fenoxy)carbonyl__/thio_/propanoyl_/^-L-proline verkregen.

35 8104046 * - 15 -

Voorbeeld_XVI

1 -/3-//^ (Penoxy) carbonyl_/thio_/butanoyl_/-L-proline.

Door fenylchloorformiaat in plaats van ethyl-5 chloorformiaat en 4-mercaptobutanoyl-L-proline in plaats van 3- mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld I wordt IV 3V / (fenoxy)carbonyl_/thio_Tbutanoyl__/-L-proline verkregen.

Voorbeeldxyil 10 IV 3V / (Fenylamino)carbonyl_/thio_/propanoyl__/-L-proline.

Door fenylisocyanaat in plaats van ethylisocya-naat te gebruiken bij de procedure van voorbeeld VIII wordt IV 3-/_ /_ (fenylamino)carbonyl_/1hio_/propanoy 1_/-L-proline verkregen.

15 Voorbeeld XVIII

IV 3-/ / (Fenethylamino)carbonyl_/thio_/propanoyl_/-L-proline.

Door fenethylisocyanaat in plaats van ethyliso-cyanaat te gebruiken bij de procedure van voorbeeld VIII wordt 20 IV 3V / (fenethylamino) carbonyl_/thio__/propanoyl_/-L-proline verkregen.

Y°°£beeldJCIX

IV 3-/ / (Ethylamino)carbonyl__/thio__/-2-benzylpropanoyl_/-L-proline.

25 Door 1-(3-mercapto-2-benzylpropanoyl)-L-proline in plaats van 1-(3-rnercaptopropanoyl)-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld VIII wordt 1V 3-/ A (ethylamino)carbo-nyl_/thio_A-2-benzylpropanoyl_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld XX

30 1-(3-Methylthiopropanoyl)-L-proline.

(A) Methyl-3-methylthiopropionaat (51 g) wordt verzeept met een 10 %'s natriumhydroxyde-oplossing (150 ml, 30 min. bij 100° C). De afgekoelde oplossing wordt geëxtraheerd met ether 35 en vervolgens aangezuurd. Het aldus verkregen ruwe zuur wordt 8104046 « Λ - 16 - gedestilleerd en omgezet in het zuurchloride met thionylchloride.

Een oplossing van L-proline (11,5 g) in N. natriumhydroxyde (100 ml) wordt afgekoeld in een ijsbad en 3-raethylthiopropaanzuurchloride (6,9 g) wordt druppelsgewijze onder heftig roeren over een periode 5 van 10 min. toegevoegd. Na 5 uren wordt het reactiemengsel aangezuurd en geëxtraheerd met ethylether, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Het dicyclohexylammoniumzout wordt bereid door toevoeging van dicyclohexylamine aan een oplossing van het vrije zuur in ethylacetaat; smpt. = 169-171° C.

10 (B) Methyljodide (71 g) wordt toegevoegd aan een oplossing van l-(3-mercaptopropanoyl)-L-proline-ethylester (115 g) en natrium (11,5 g) in ethanol (400 ml). Men laat de reactie gedurende de nacht verlopen, waarna de ethanol in vacuo wordt verwijderd en het residu wordt opgelost in een mengsel van ethylacetaat en 15 water. De organische laag wordt gedroogd en in vacuo drooggedampt.

De resulterende 1-(3-methylthiopropanoyl)-L-proline-ethylester (98 g) wordt gesuspendeerd in een mengsel van methanol (200 ml) en 5 N. natriumhydroxyde (200 ml) en bij kamertemperatuur gedurende uren geroerd. De methanol wordt in vacuo verwijderd en de waterige fase wordt 20 geëxtraheerd met ethylacetaat, aangezuurd en herextraheerd met

ethylacetaat. Deze laatste organische fase wordt gewassen met water, gedroogd en drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Voorbeeld^XXI

1-/ 3-(4-Chloorfenylthio)propanoyl_/-L-proline.

25

Waterig 2 N, natriumhydroxyde (25 ml) en 3-broom-propionylchloride (8,5 g) worden toegevoegd aan een oplossing van L-proline (5,75 g) in N. natriumhydroxyde (50 ml), afgekoeld en geroerd in een ijsbad. Na 5 min. wordt het ijsbad verwijderd en het 30 roeren wordt gedurende 3 uren bij kamertemperatuur voortgezet. Het reactiemengsel wordt aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstof-zuur en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische laag wordt gewassen met water, gedroogd en in vacuo drooggedampt. Het residu wordt opgelost in een mengsel van 4-chloorbenzeenthiol (8 g), na-35 triumhydroxyde (4,2 g) en ethanol (300 ml). De oplossing wordt 8104046 V r - 17 -

gedurende 6 uren onder terugvloeikoeling verwarmd. Het oplosmiddel wordt in vacuo verwijderd en het residu opgelost in water, aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische laag wordt gewassen met water, gedroogd 5 en in vacuo drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Voorbeeld XXII

1-/ / (3-Benzylthiomethyl)thio_/propanoyl_/-L-proline.

1-(3-Mercaptopropanoyl)-L-proline (8,1 g) wordt 10 opgelost in kokende vloeibare ammoniak (100 ml) en kleine stukjes natrium worden toegevoegd totdat een blijvende blauwe kleur is verkregen, die vervolgens wordt verwijderd met een klein stukje ammoniumchloride. Benzylthiomethylchloride (6,9 g) wordt toegevoegd en men laat de ammoniak verdampen. De laatste sporen ammoniak worden 15 in vacuo verwijderd, het residu wordt opgelost in water en geëxtraheerd met ethylacetaat. De waterige fase wordt aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat.

De organische laag wordt gewassen met water,gedroogd en in vacuo drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

20 1-/ /_ (3-Aceetamidomethyl) thio__/propanoyl_/-L-proline.

1-(3-Mercaptopropanoyl)-L-proline (2 g) en N-hydroxymethylaceetamide (0,89 g) worden opgelost in trifluorazijn-25 zuur (10 ml) en de oplossing wordt gedurende 1 uur opgeslagen bij kamertemperatuur. De overmaat trifluorazijnzuur wordt in vacuo verwijderd en het residu wordt verscheidene malen uit ether-hexaan geprecipiteerd. Tenslotte wordt het residu verdeeld tussen verdund chloorwaterstofzuur en ethylacetaat. De organische laag wordt 30 gewassen met water, gedroogd en drooggedampt, waarbij de titelver-binding wordt verkregen.

Voorbeeld_XXIV_ 1-(Methylthioacetyl)-L-proline.

35 Door methylmethylthioacetaat in plaats van 8104046 -18- methyl-3-methylthiopropionaat te gebruiken bij procedure A van voorbeeld XX wordt 1-(methylthioacetyl)-L-proline, (smpt. = 123— 124° C) verkregen.

Voorbeeld XXV

5 l-(Benzylthioacetyl)-L-proline.

Door benzylthioacetylchloride in plaats van 3-methylthiopropanoylchloride te gebruiken bij procedure A van voorbeeld XX wordt l-(benzylthioacetyl)-L-proline (smpt. = 86-88° C) 10 verkregen.

Voorbeeld _10CVI_ 1-/ 3-/_ (2-Fenylethyl)thio_/propanoyl_/-L-proline.

Door fenethylbromide in plaats van methyljodide 15 te gebruiken bij procedure B van voorbeeld XX wordt l-/_ 3-/_ (2-fenylethyl)thio_/propanoyl_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld_XXVII

1-/ 3-/ (Trifenylmethyl) thio_/propanoyl_/-L-proline.

20 Door trifenylmethylchloride in plaats van methyl jodide te gebruiken bij procedure B van voorbeeld XX wordt l-/_ 3-f_ (trifenylmethyl)thio_/propanoyl_/-L-proline verkregen.

1-(3-Methylthio-2-me thylpropanoyl)-L-proline-amide.

25

Door 1-(3-mercapto-2-methylpropanoyl)-L-proline-amide in plaats van l-(3-mercaptopropanoyl)-L-proline-ethylester te gebruiken bij procedure B van voorbeeld XX en de verzepingstrap weg te laten wordt 1-(3-methylthio-2-methylpropanoyl)-L-proline-30 amide verkregen.

Voorbeeld_XXIX

1-/3-(4-Methoxyfenylthio)propanoyl_yL-proline.

Door 4-methoxybenzeenthiol in plaats van 4-35 chloorbenzeenthiol te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXI wordt l-/_3-(4-methoxyfenylthio)propanoyl_/-L-proline verkregen.

8104046 - 19 -

Vqorbegld XXX

1-/2-(4-Chloorfenylthio)propanoyl_/-L-proline.

Door 2-broompropionylchloride in plaats van 5 3-broompropionylchloride te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXI wordt 1-/ 2-(4-chloorfenylthio)propanoyl_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld XXXI

1-/ 3-/ (Difenylmethyl) thio_/-2-benzylpropanoyl_/-L-proline.

10

Difenylmethanol (0,92 g) en l-(3-mercapto-2-benzylpropanoyl)-L-proline (1,5 g) worden opgelost in trifluor-azijnzuur (10 ml) en de oplossing wordt gedurende 30 min. op kamer-temperatuur gehouden. De overmaat trifluorazijnzuur wordt in vacuo 15 verwijderd, waarbij 1-/ 3-/ (difenylmethyl)thio_/-2-benzylpropano-yl_/-L-proline wordt verkregen.

Voorbeeld XXXII

1-/ 4-(4-Chloorfenylthio)butanoyl_/-L-proline.

20 Door 4-broompropionylchloride in plaats van 3-broompropionylchloride te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXI wordt 1-/ 4-(4-chloorfenylthio)butanoyl__/-L-proline verkregen.

25 1-/ 3-/ (Benzylthiomethyl) thio__/butanoyl__/-L-proline.

Door 3-mercaptobutanoyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXII wordt l-/_ 3-/_ (benzylthiomethyl) thio__/butanoyl_/-L-30 proline verkregen.

Voorbeeld XXXIV

1-/ / 4-/”’(Aceetamidomethyl)thio_/-2-methylbutanoyl_y-L-proline.

Door 1-(4-mercapto-2-methylbutanoyl)-L-proline 35 in plaats van 1-(3-mercaptopropanoyl)-L-proline te gebruiken bij de 8104046 - 20 - procedure van voorbeeld XXIII wordt 1-/ £ 4-(accetamidomethyl)-thio_7-2-methylbutanoy1_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld XXXV

1 -f~3- (Ethyldithio) propanoyW-L-proline.

5 (A) 3-Mercaptopropêinoyl-L-proline (10 g) wordt toegevoegd aan een oplossing van ethylthiosulfinaat (8,4 g) in methanol (100 ml) en het reactiemengsel wordt heftig geroerd bij kamertemperatuur gedurende 4 uren. De methanol wordt in vacuo ver- 10 wijderd, waarbij l-(3-ethyldithiopropanoyl)-L-proline wordt verkregen.

(B) Een oplossing van ethylthiosulfinaat (8,4 g) in ethanol (50 ml) wordt toegevoegd aan een waterige oplossing van 3-mercaptopropanoyl-L-proline (10 g), die op een pH van 6-7 15 wordt gehouden door voorzichtig toevoegen van natriumhydroxyde.

Het mengsel wordt heftig geroerd bij kamertemperatuur totdat de reactie op thiol negatief is. Het mengsel wordt verdund met water, ingesteld op pH 8 en geëxtraheerd met ethylacetaat, de waterige fase aangezuurd tot pH 3 en weer geëxtraheerd met ethylacetaat.

20 Dit laatste extract wordt gewassen met water, gedroogd en droogge-dampt, waarbij !-/_ 3-(ethyldithio)propanoyl_/-L-proline wordt verkregen.

1-/ 3-/ (4-Methylfenyl)dithio__/propanoyl__/-L-proline.

25

Een oplossing van 4-methylfenylsulfenylchloride (1,76 g) in ether (20 ml) wordt toegevoegd aan een oplossing van 3-mercaptopropanoyl-L-proline (2 g) in 0,5 N. natriumhydroxyde (20 ml) afgekoeld in een ijsbad. Het mengsel wordt gedurende 1 uur 30 heftig geroerd en de waterige fase afgescheiden, aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat, De organische fase wordt gewassen met water, gedroogd en droogge-dampt, waarbij IV /, 3-(4-methylfenyl)dithio_/propanoyl_/-L-proline wordt verkregen, 35 8104046

J

- 21 -

Voorbeeld xxxvn IV 3-(Fenyldithio)propanoyl_/-L-proline.

Door fenylthiosulfinaat /_ bereid uit fenyldisul-5 fide volgens U. Weber en P. Hartter, Z. Physiol. Chem., 351, 1384 (1970)_y in plaats van ethylthiosulfinaat te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXXV wordt IV 3-{fenyldithio)propanoyl_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld XXXVIII

10 1V. 3V (2-Penylethyl) dithio__/propanoyl_/-L-proline.

Door 2-fenylethylthiosulfinaat (bereid uit fene-thyldisulfide) in plaats van ethylthiosulfinaat te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXXV wordt l-/~3-/"”(2-fenylethyl)dithio_/-15 propanoyl__/-L-proline verkregen.

Voorbeeld XXXIX_ IV 3V (2-Hydroxyethyl) dithio_/ptopanoyl_/-L-proline.

Aan een oplossing van 1,1'V (sulfinylthio)bis-20 (3-propanoyl)_J-bis-L-proline (21 g) in methanol (100 ml), wordt mercaptoethanol (4,2 g) toegevoegd en het reactiemengsel wordt heftig geroerd bij kamertemperatuur gedurende 4 uren. De methanol wordt in vacuo verwijderd en het residu gezuiverd door chromatogra-fie over een silicagelkolom, waarbij 1-/ 3V (2-hydroxyethyl)dithio_/~ 25 propanoyl^/-L-proline wordt verkregen.

Voorbeeld XL

1-/2- (E thyldi thio) propanoyl__/ -L-proline.

Door 2-mercaptopropanoyl-L-proline in plaats van 30 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXXV wordt 1-/ 2-(ethyldithio)propanoyl_/-L-proline verkregen.

Voorbeeld_XLI

IV 3V (4-Methylfenyl)dithio__/butanoyl__/-L-proline.

35 8104046

V

- 22 -

Door 3-mercaptobutanoyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXXVI wordt l-/_ 3- (4-methylfenyl)dithio__/butanoyl__/-L-proline verkregen.

5 Y22E522i!Lïïïi 1-/—3- (Ethyldithio) - 2 -me thy lpr opanoy 1__/-L-pro line -me thy le s ter.

Door l-(3-mercapto-2-methylpropanoyl)-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de 10 procedure van voorbeeld XXXV en het vervolgens te behandelen met diazomethaan volgens de procedure van voorbeeld V wordt 1-/ 3-(ethyldithio) -2-methylpropanoyl__/-L-proline-methylester verkregen. Voorbeeld_XLIII

1 3-/_ (4-Methylfenyl)dithio_y-2-methylpropanoyl_/2L-hydroxyproline.

15

Door l-(3-mercapto-2-methylpropanoyl)-L-hydroxy-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXXVI wordt 1-/ 3-/ (4-methylfenyl)-dithio_/-2 -me thylpropanoyl__/-L-hydroxypro line verkregen.

20 Y°2£beeld_XLIV

IV 3V (2-Amino-2-carboxyethyl)dithio /propanoyl__/-L-proline.

Een 0,5 M oplossing van thiocyanogeen in ijs-azijn wordt bereid door schudden gedurende 10 min. in een afgesloten 25 kolf van 600 mg droog loodthiocyanaat met een oplossing van 75 jil broom in 3 ral azijnzuur. Na de verwijdering van loodbromide en de overmaat loodthiocyanaat door centrifugeren worden 2,5 ml van deze oplossing gemengd met 2,5 ral van een 0,41 M oplossing van cysteIne-hydrochloride, die van tevoren is geneutraliseerd met verdund 30 natriumhydroxyde. Dit mengsel wordt onmiddellijk toegevoegd aan 0,75 ml van een 1,9 M oplossing van 3-mercaptopropanoyl-L-proline, die van tevoren is geneutraliseerd met verdund natriumhydroxyde.

Na 20 min. wordt het mengsel met alcoholisch jodium getitreerd tot een beginnende bruine kleur en ingesteld op een pH van 3. Het pre-35 cipitaat wordt door filtratie verwijderd en het filtraat aangebracht 8104046 - 23 - op een kolom kationuitwisselaarhars (Dowex 50). De kolom wordt gewassen met water totdat geen zuur materiaal meer wordt verwijderd en vervolgens geëlueerd met pyridine-acetaat-buffer met pH 6,0. De fracties, bevattende het disulfide van cysteine en 3-mercaptopropanoyl-5 L-proline, worden verzameld en drooggedampt.

Voorbeeld XLV

1,1'-/ Dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-proline.

3-Mercaptopropanoyl-L-proline (0,95 g) wordt 10 opgelost in water (20 ml) en de pH wordt met N. natriumhydroxyde ingesteld op 6,5. Een ethanolische oplossing van jodium wordt druppelsgewijze toegevoegd onder handhaving van de pH op 6,5 door voorzichte toevoeging van N, natriumhydroxyde. Wanneer een blijvende gele kleur is verkregen wordt de toevoeging van jodium gestaakt en 15 de kleur verwijderd met een kleine hoeveelheid natriumthiosulfaat.

Het reactiemengsel wordt aangezuurd met geconcentreerd chloorwater-stofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische fase wordt gewassen met water, gedroogd en drooggedampt, waarbij 1.1* —dithiobis (3-propanoyl)/-bis-L-proline wordt verkregen. Het dicyclohexyΙΣΟ ammoniumzout wordt bereid door toevoeging van dicyclohexylamine aan een oplossing van het vrije zuur in acetonitril; smpt. = 179-180° C. Voorbeeld XLVI

1,1'-/ Dithiobis(2-D-methyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline.

25 Door 3-mercapto-2D-methylpropanoyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1,1'-/ dithiobis(2-D-methy1-3-propanoyl )_ƒ -bis-L-proline verkregen,· smpt. =» 236-237° C.

Voorbeeld_XLVII

30 1.11 -/_ Dithiobis (2-propanoyl) __/-bis-L-proline.

Door 2-mercaptopropanoyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1'V dithiobis(2-propanoyl)_/-bis-L-proline 35 verkregen.

8104046 - 24 -

Voorbeeld_KLVIII

1.1* — (Dithiobisacetyl)-bis-L-hydroxyproline.

Door 1-(2-mercaptoacetyl)-L-hydroxyproline in 5 plaats van 3-mercaptopropionyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1,1'-(dithiobisacetyl)-bis-L-hydroxy-proline verkregen.

Y22ï£eeld_XLlx 1.1'-/ Dithiobis(3-propanoyl) _/-bis-4-methy1-L-proline.

10

Door 1-(3-mercaptopropanoyl)-4-methyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1'-/ dithiobis(3-propanoyl)__/-bis-4-methyl-L-proline verkregen.

15 Voorbeeld L_ 1.1'-/_ Dithiobis (2-benzyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline.

Door 1-(3-mercapto-2-benzylpropanoyl)-L-proline in plaats vein 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de 20 procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1·-/ dithiobis(2-benzyl-3-propanoy1)_/-bis-L-proline verkregen.

1.1'Dithiobis(4-butanoyl)_/-bis-L-proline.

25 Door 4-mercaptobutanoyl-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1'-/ dithiobis(4-butanoyl)_/-bis-L-proline verkregen.

Y2orbeeld Lil 30 1.1'-/ Dithiobis(2-benzyl-4-butanoyl)_/-bis-L-proline.

Door l-(4-mercapto-2-benzylbutanoyl)-L-proline in plaats van 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1'-/ dithiobis(2-benzyl-4-buta-35 noyl)_/-bis-L-proline verkregen.

8104046

X

- 25 -

Voorbeeldzin 1.11-/_Dithiobis(3-butanoyl)_/-bis-L-proline.

Door 3-mercaptobutanoyl-L-proline in plaats van 5 3-mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1dithiobis(3-butanoyl)_/-bis-L-proline verkregen.

Voorbeeld LIV

1.1'-/ Dithiobis(3-propanoyl)V-bis-L-proline-me thyles ter· 10

Een oplossing van 1,1'-/ dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-proline in methanol wordt behandeld met etherisch diazomethaan totdat een blijvende gele kleur is verkregen. Na 15 min. worden enkele druppels azijnzuur toegevoegd, waarna de oplosmiddelen in 15 vacuo worden verwijderd, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Voorbeeld LV

1.1'-/ Dithiobis(3-propanoyl) _/-bis-L-proline-amide.

Een oplossing van 1.1'-/ dithiobis(3-propanoyl)_/~ 20 bis-L-proline-methylester in methanol wordt verzadigd met ammonia omnder koeling in een ijs-waterbad. Het reactiemengsel wordt gedurende 16 uren bij kamertemperatuur in een drukfles opgeslagen en vervolgens worden de oplosmiddelen in vacuo verwijderd, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

25 Voorbeeld LVI

1.1'-/"Dithiobis(2-fenyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline.

Door 1-(3-mercapto-2-fenylpropanoyl)-L-proline in plaats van 3 -mercaptopropanoyl-L-proline te gebruiken bij de 30 procedure van voorbeeld XLV wordt 1.1*-/ dithiobis(2-feny1-3-propanoyl)_/-bis-L-proline verkregen.

Voorbeeld LVII

1.1 (sulfinylthio)-bis (3-propanoyl) _/-bis-L-proline.

35 Onder koeling in een ijsbad worden 0,12 ml 8104046 -ï · - 26 - perazijnzuur toegevoegd aan een geroerde oplossing van 1.1'V dithiobis (3-propanoyl) V-bis-L-proline (40 g) in ijsazijn (500 ml). Men laat het reactiemengsel gedurende de nacht bij kamertemperatuur staan en verwijdert vervolgens het oplosmiddel in vacuo, waarbij 5 de titelverbinding wordt verkregen.

Voorbeeld LVIII

1.1(Sulfonylthio)-bis-(3-propanoyl) _/-bis-L-proline.

Een 30 %'s oplossing van waterstofperoxyde (2,0 10 ml) wordt toegevoegd aan een oplossing van 1.1'dithiobis(3-pro-panoyl)_/-bis-L-proline (4 g) in ijsazijn (80 ml) en de oplossing wordt gedurende 30 uren bij kamertemperatuur opgeslagen. Het oplosmiddel wordt in vacuo verwijderd, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

15 Voorbeeld_LIX

1.1(Sulfinylthio)-bis(2-propanoyl)>_/-bis-L-proline.

Door 1,1'-/ dithiobis (2-propanoyl)__/-bis-L-proline in plaats van 1.1dithiobis (3-propanoyl)_/-bis-L-proline 20 te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVIX wordt 1.1'-/ (sulfinylthio) -bis-(2-propanoyl)_/-bis-L-proline verkregen.

Voorbeeld LX

Door 1.1'-(dithiobisacetyl)-bis-L-azetidine-carbonzuur in plaats van 1.1'-/ dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-25 proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVI1 wordt 1.1'-/ (sulfinylthio)-bis-acetyl_/-bis-L-azetidine-2-carbonzuur verkregen.

Voorbeeld LXX

1.1* —/_ (Sulfinylthio)-bis-(3-propanoyl)_/-bis-4-methyl-L-proline.

30

Door 1.1'-/ dithiobis (3-propanoyl)__/-bis-4-methyl-L-proline in plaats van 1.1'-/ dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVII wordt 1.1'-/ (sulfinylthio)-bis-(3-propanoyl)__/-bis-4-methyl-L-proline 35 verkregen.

8104046 - 27 -

Voorbeeld LXII

1.i'-/ (Sulfinylthio)-bis-(2-benzyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline.

Door 1.1' -/_dithiobis(2-benzyl-3-propanoyl) 5 bis-L-proline in plaats van 1.1’—/_ dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVII wordt 1,1'-/ (sulfinylthio) -bis-(2-benzyl-3-propanoyl)__/-bis-L-proline verkregen.

10 1.1' -/~ (Sulf inylthio) -bis- (4-butanoy.l) __/-bis-L-proline.

Door 1.1*-/ dithiobis(4-butanoyl)_/-bis-L-pro-line in plaats van 1.1'V dithiobis (3-propanoyl)^_/bis-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVII wordt 1.1'-/ (sul-15 finylthio)-bis-(4-butanoyl)_7-bis-L-proline verkregen.

Voorbeeld LXIV

1.1'-/ (Sulfinylthio)-bis-(3-butanoy1)_/-bis-L-proline,

Door 1.1'-/ dithiobis(3-butanoyl) _/-bis-L-pro-20 line in plaats van 1.1' V dithiobis (3-propanoyl)__/-bis-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVII wordt 1.1'-/ (sulfinylthio) -bis-(3-butanoyl)_/-bis-L-proline verkregen.

Voorbeeld_LXV

1.1'-/"* (Sulfinylthio)-bis-(2-methyl-3 -propanoyl) _/-bis-L-proline.

25

Door 1.1'-/ dithiobis(2-methyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline in plaats van 1.1'V dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVII wordt 1.1*-/~ (sulfinylthio)-bis-(2-methyl-3-propanoyl) _/-bis-L-proline 30 verkregen.

Voorbeeld LXVI

1.1*-/ Sulfinylthio)-bis-(2-fenyl-3-propanoyl)__/bis-L-proline.

Door 1.1' -/"dithiobi s (2-f eny 1-3 -propanoyl) __/ -bis-35 L-proline in plaats van 1.1'-/ dithiobis(3-propanoyl)_/-bis-L-proli- 8 1 0 4 0 4 ö - 28 - ne te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVII wordt 1.1'-(_ (sulfinylthio) -bis-(2-fenyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline verkregen.

1-/3-/ £ 3-(2-Carboxy-l-pyrrolidinyl)-3-oxopropyl_/dithio_/-2-me-5 thylpropanoyl_/-L-proline.

Door 1.1'-/ {sulfinylthio)-bis(2-methyl-3-propa-noyl)_/-bis-L-proline in plaats van ethylthiosulfinaat te gebruiken bij de procedure van voorbeeld XXXV wordt \-/_ 3-/_ /_ 3-(2-carboxy-l-10 pyrrolidinyl) -3 -oxopropyl_/dithio_/-2-methylpropanoyl__/-L-proline verkregen.

Voorbegld LXVIII

1.1' -/_ (Sulfonylthio) -bi s-ace tyl_/ -bi s-L-hydroxyproline.

15 Door 1.1'-(dithiobisacetyl)-bis-L-hydroxyproline in plaats van 1.1* —/_ dithiobis{3-propanoyl)-bis-L-proline te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVIII wordt 1.1'—/_ (sulfonylthio) -bis-acetyl_/ -bis-L-hydroxyproline verkregen.

Y22^2ë^_^H

20 1.1'-/ (Sulfonylthio)-bis-(2-benzyl-4-butanoyl)_/-bis-L-proline.

Door 1.1'-/ dithiobis(2-benzyl-4-butanoyl)_/-bis-L-proline in plaats van 1.1'-/_ dithiobis (3-propanoyl)__/-bis-L-pro-line te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LVIII wordt 1.1'— 25 / (sulfonylthio)-bis-(2-benzyl-4-butanoyl)_/-bis-L-proline verkre gen .

Voorbeeld LXX

a) 3-/_ (4-Methoxyfenyl) methylthio_/-2-methylpropaanzuur.

30 p-Methoxy-a-tolueenthiol (15,4 g; 0,1 mol) wordt toegevoegd aan een oplossing van methacrylzuur (8,6 g; 0,1 mol) in 50 ml 2 N. natriumhydroxyde. Het mengsel wordt gedurende 3 uren op een stoombad verhit, vervolgens gedurende 2 uren onder terugvloeï-koeling verhit en afgekoeld. Het mengsel wordt geëxtraheerd met 35 ether en de waterige laag wordt aangezuurd met geconcentreerd HC1 8104046 - 29 - en geëxtraheerd met dichloormethaan. De zure extracten worden gewassen met keukenzoutoplossing, gedroogd (magnesiumsulfaat) en in vacuo ingedampt. De resulterende halfvaste stof wordt opgenomen in 50 ml dichloorme thaan, verdund met 50 ml hexaan en afgekoeld. De 5 titelverbinding wordt verkregen in de vorm vein een witte kristallijne vaste stof; smpt. = 74-82° C (5,5 g).

b) \-/_ 3-(4-Methoxyfenyl)methylthio_/-2-methylpropanoyl-L-proline-tert.butylester.

10 3-/ (4-Methoxyfenyl) methyl thio__/-2-methylpropaan- zuur (3,6 g, 0,015 mol) L-proline-tert.butylester (2,6 g, 0,015 mol) en dicyclohexylcarbodiimide (3,1 g, 0,015 mol) worden opgelost in 50 ml dichloormethaan en gedurende 30 min. bij 0° C geroerd. Het koelbad wordt verwijderd en het mengsel wordt gedurende de nacht 15 geroerd (16 uren). De resulterende suspensie wordt afgefiltreerd en het filtraat gewassen met 5 %'s kaliumwaterstofsulfaat, verzadigde natriumwaterstofcarbonaat en keukenzoutoplossing, vervolgens gedroogd (magnesiumsulfaat) en in vacuo ingedampt. De resulterende heldere olie wordt aangebracht op een silicagelkolom van 250 ml en 20 gechromatografeerd onder gebruikmaking van 20 % ethylacetaat/hexaan als elueermiddel. De hoofdfractie (R^ = 0,70, silicagel, ethylace-taat) wordt ingedampt tot 5,5 g (93 %) l-/_3-(4-methoxyfenyl)methyl ~ thio /-2-methylpropanoyl-L-proline-tert.butylester als een heldere olie R^ = 0,70 (silicagel, ethylacetaat), Rf = 0,60 (silicagel, 25 ether).

Voorbeeld LXXI

1-/—Dithiobis(2-methyl-3-propanoyl)_/-bis-L-proline.

Door 3.3'-dithiobis-2-methylpropaanzuur in plaats 30 van 3-acetylthio-2-methylpropaanzuur te gebruiken bij de procedure van voorbeeld wordt 1-/ dithiobis- (2-methyl-3-propanoyl)__/- bis-L-proline verkregen.

Voorbeeld LXXII

3-Benzylthio-2-methylpropaanzuur 35 8104046 - 30 - a) Door cx-tolueenthiol in plaats van p-methoxy-a-tolueenthiol te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LXXa wordt 3-benzylthio-2-methylpropaanzuur verkregen.

b) 1 3-(benzylthio) -2-methylpropanoy 1_/-L-pro1ine-tert.butylester.

5 ” "

Door 3-benzylthio-2-methylpropaanzuur in plaats van 3V (4-methoxyfenyl)methylthio_/-2-methylpropaanzuur te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LXXb wordt l-/_ 3-(benzylthio)- 2-methylpropanoyl_/-L-proline-tert.butylester verkregen.

1° Voorbeeld LXXIII

1-/ 3-(Benzylthio)-2-methylpropanoyl_/-L-proline.

1-/ 3-(Benzylthio)-2-methylpropanoyl_/-L-proline-ter t.butylester (7,8 g) wordt opgelost in een mengsel van anisool 15 (55 ml) en trifluorazijnzuur (11-0 ml). Na 1 uur opslag bij kamer temperatuur wordt het oplosmiddel in vacuo verwijderd en het residu opgelpst in ether, verscheidene malen gewassen met verzadigd natrium-chloride, gedroogd boven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Rf 0,5 (silicagel, ben-20 zeen/azijnzuur 3:1) 0,5, (Silicagel, methylethylketon/azijnzuur/ pyridine/water 14:1:2:1).

Y22£keeld_LXXlV_ a) 3-Trifenylmethylthio-2-methylpropaanzuur.

25 Een oplossing van 3-mercapto-2-methylpropaanzuur (1,2 g) en tritylchloride (2,9 g) in methyleenchloride (50 ml) wordt gedurende 2 uren op kamertemperatuur gehouden. Het mengsel wordt in een stoombad gedurende 20 min. verwarmd en vervolgens in vacuo drooggedampt en het residu wordt opgelost in verzadigd waterig 30 natriuiuwaterstofcarbonaat en de oplossing gewassen met ethylacetaat. De waterige fase wordt aangezuurd tot een pH van 3 en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische laag wordt gedroogd en drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen. R^ 0,8 (silicagel, benzeen/azijnzuur 3:1).

35 8104046 - 31 - b) 1-/ 3-(Trif enylmethylthio}-2-methylpropanoyl_/-L-proline-tert.-butylester.

Door 3-trifenylmethylthio-2-methylpropaanzuur 5 in plaats van 3-/_ (4-methoxyfenyl)methylthio_/-2-methylpropaanzuur te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LXXb wordt de titel-verbinding verkregen.

Voorbeeld LXXV

l-/_ 3-(Trifenylmethylthio)-2-methylpropanoyl_/-L-proline.

10 3-Trifenylmethylthio-2-methylpropaanzuur (1,8 g) en N.N'-carbonyldiimidazool (0,8 g) worden opgelost in tetrahydro-furan (10 ml) onder roeren bij kamertemperatuur. Na 20 min. wordt de oplossing toegevoegd aan een mengsel van L-proline (0,6 g) en 15 N-methylmorfoline (1 g) in dimethylaceetamide (20 ml). Het resulterende mengsel wordt gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd, drooggedampt en het residu opgelost in een mengsel van ethylacetaat en 10 %'s waterig kaliumwaterstofsulfaat. De organische laag wordt afgescheiden en gedroogd en in vacuo drooggedampt, 20 waarbij de titelverbinding wordt verkregen. Rf: 0,4 (silicagel, benzeen/azijnzuur 3:1), R^ 1,0 (silicagel, methylethylketon/azijn-zuur/pyridine/water 14:1:2:1).

a) 3-(Tetrahydropyran-2-yIthio)-2-methylpropaanzuur.

25

Aan een oplossing van 3-mercapto-2-methylpropaanzuur (2,4 g) en vers gedestilleerd 2.3-dihydro-4H-pyraan (1,9 g) in benzeen (60 ml) wordt boortrifluoride-etheraat (2,8 g) toegevoegd. Na 2 uren wordt kaliumcarbonaat (4 g) toegevoegd, het meng-30 sel geroerd en afgefiltreerd. Het filtraat wordt drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

b) 1-/ 3-(Tetrahydropyran-2-yIthio)-2-methylpropanoyl__/-L-proline.

Door 3-(tetrahydropyran-2-ylthio)-2-methylpro-35 paanzuur in plaats van 3-trifenylmethylthio-2-methylpropaanzuur te 8104046 r "V· t - 32 - gebruiken bij de procedure van voorbeeld LXXV wordt de titelver-binding verkregen. Rf: 0/8 (silicagel, benzeen/azijnzuur 3:1, Rf:

0,75 (silicagel, methylethylketon/azijnzuur/pyridine/water 14:1:2:1). Y°°£keeld_LXXVII

5 a) 3-Aceetamidomethylthio-2-methylpropaanzuur.

3-Mercapto-2-methylpropaanzuur (2,4 g) en N-hy-droxymethylaceetamide (1,8 g) worden opgelost in trifluorazijnzuur en de oplossing wordt gedurende 1 uur bij kamertemperatuur opgesla-10 gen. Het trifluorazijnzuur wordt in vacuo verwijderd en het residu in vacuo boven kaliumhydroxyde gedroogd, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

b) 1-/ 3-(Aceetamidomethylthio)-2-methylpropanoyl_/-L-proline.

15 Door 3-aceetamidomethylthio-2-methylpropaanzuur in plaats van 3-(tetrahydropyran-2-ylthio)-2-methylpropaanzuur te gebruiken bij de procedure van voorbeeld LXXVIb wordt de titelverbinding verkregen, Rj0,2 (silicagel, benzeen/azijnzuur 3:1), R^ 0,3 (silicagel, methylethylketon/azijnzuur/pyridine/water 14:1:2:1).

20 Voorfaeeld_LXXYIIX_ 1000 Tabletten, elk bevattende 100 mg l-(2-mer-captopropanoyl)-L-proline, worden vervaardigd uit de volgende bestanddelen: 1.1* —/_ dithiobis-(2-D-methyl-3-propa-25 noylj/-bis-L-proline 100 g

Maïszetmeel 50 g

Gelatine 7,5 g

Avicel (microkristallijne cellulose) 25 g

Magnesiumstearaat 2,5 g 30 Het l-(2-mercaptopropanoyl)-L-proline en maïs zetmeel worden gemengd met een waterige oplossing van het gelatine. Het mengsel wordt gedroogd en gemalen tot een fijn poeder. De Avicel en vervolgens het magnesiumstearaat worden gemengd met het granulaat. Het mengsel wordt vervolgens samengeperst tot tabletten onder vorming 35 van 1000 tabletten, die elk 100 mg actief bestanddeel bevatten.

8104046

Claims

1. Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking, waarbij men een proline in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt, met 5 het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R een hydroxy- of aminogroep of een lagere alkoxygroep, Rj en R^ elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, R^ een waterstofatoom of een hydroxy- of lagere alkylgroep voorstelt, en R2 een 10 lagere alkyl- of fenylgroep of een gesubstitueerde fenylgroep, waarvan de substituent een halogeenatoora, een lagere alkyl- of alkoxygroep, een fenyl-lagere alkyl-, difenyl-lagere alkyl- of trifenyl-lagere alkyl-, een lagere alkylthiomethyl, fenyl-lagere alkylmethyΙοί lagere alkanoylamidomethylgroep of de groep Μ M (I ff

15. R5-M-C, Rg-NH-C-, RgS of een groep met de formule 29 voorstelt, waarbij R,. een lagere alkyl-, fenyl- of fenyl-lagere alkylgroep is en Rg een lagere alkyl-of fenylgroep of een gesubstitueerde fenylgroep is met als substituent een halogeenatoom, een lagere alkyl- of alkoxygroep, een 20 hydroxy-lagere alkyl- of amino(carboxy)-lagere alkylgroep is en M een B zuurstof of zwavelatoom voorstelt,/en n = 0, 1 of 2 en m = 2 of een basisch zout daarvan toepast.

2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat men 1.1'V dithiobis(2-D-methyl-3-propanoyl2/-bis-L-proline 25 toepast.

3. Werkwijze ter bereiding van een verbinding, die geschikt is om bij de werkwijze volgens conclusie 1 te worden toegepast, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R, R^, R2, R^, Rj, ra en n dezelfde betekenis hebben als in 30 conclusie 1, op een voor dergelijke verbindingen gebruikelijke wijze bereidt. 35 8104046 • Λ * . RaR‘nr»i Π5.776 R4 R( RJ| Ri ,l , 1 ,1 . ' v Re-s—(CHI — CH—COOH X — (ch)„ CH—COX 16 17 Rj Μ M I II l| Ri-S-(CH2),— CH- COOH 18 Rr-M-C-X g Rr-.M -C-S-Me^Q M Ri, R-f Rs_ N = C=M II I . I 0

21 Rf NH —C S (CH)W CH COOH R_|_S_R 22 <> 24 .lager alkyl- CO — NHCHaOH 0 ?3 11 iS R^-S-S-R^ Ris—x o 25 26 R4~ S~S°3H27 1¾— S — SCN (H C) CHj ^ I* I I I R-OC— HC-N-CO-CH -fCI-ή —S(oL * * J* k /p 29 S.R. Squibb & Sons, Inc. te Princeton, New Jersey, 8104046 Ver.St.v .Amerika r3 Reg.nr.: 115,776 A ** R2 —S-fCH)-CH — CO —N— CH—COR * Ri , T1 r^i HN — CH— COR ^ Ri z1 . I 4 R$ ——S—(ChJ^—CH— COOH H F* ΐ M1 x“(chL”ch—C00H 5 CH«·C — COOH g \ Ri — SH 1* R4 R( H2C-(ch]„ 10 χ— (Ch]^—CH—CO- N- CH-COR r R4 R, Η,£-(άψ. R;—S—/ch)„—CH — CO—N —CH—COR ψ 11 Ri, R, HeC-CCH)^ HS—(ChJ„— CH —CO— N—CH—COR R

12 I3 Ril Ri HjC (CH)W I I I I CH-C—CO-N- CH—COR 13 _ f1 C^/isOiO-iCHl-CH-MOH ' K Γ Ir 15 Rg— S - CH - CH — COOH E.R. Squibb & Sons, Inc. 8 1 0 4 0 4 6 te Princeton, New Jersey Ver. S t .v .Amerika