NL8104047A - Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen. - Google Patents

Description

V

* A - - 1 -

Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat, alsmede werkwijze ter bereiding van daarvoor geschikte verbindingen.

De uitvinding betreft een werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking.

Een dergelijke werkwijze, waarbij men een pro-5 line in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt, kan bekend worden geacht uit de Duitse "Offenlegungsschriften" 2.108.043 en 2.124.451. Volgens deze "Offenlegungsschriften" kan men voor de bestrijding van bloeddrukverhoging bepaalde peptiden toepassen met eindstandige prolinegroepen. Gebleken was namelijk, dat 10 deze peptiden in staat zijn het enzym af te remmen, dat angioten-sine I, welke stof in het lichaam geproduceerd wordt, omzet in angiotensine II, welke stof een bloeddrukverhogende werking heeft.

Volgens de uitvinding brengt men een verbinding met de formule 1 van het formuleblad, waarin R een hydroxy- of 15 aminogroep of een lagere alkoxygroep, en elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, R,, een waterstofatoom of een groep COR^ is, waarbij Rj. een fenyl, een lagere alkylfenyl- of fenyl-lagere alkylgroep voorstelt en R^ een waterstofatoom of een 20 hydroxygroep of lagere alkylgroep voorstelt, n = 0, 1 of 2 en m = 1, of een basis/zout daarvan in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm.

Gevonden werd namelijk, dat deze veel eenvoudigere verbindingen, die geen peptiden zijn, eveneens geschikt zijn om 25 volgens hetzelfde mechanisme te hoge bloeddruk effectief te bestrijden. Van belang is verder, dat zij deze werking ook uitoefenen bij orale toediening.

De lagere alkylgroepen, voorgesteld door de bovengenoemde symbolen, omvatten rechte en vertakte koolwaterstof-30 resten van methyl tot heptyl, bijvoorbeeld methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t.butyl, pentyl, isopentyl en dergelijke.

8104047 $ ;v - 2 -

V

De lagere alkoxygroepen zijn van hetzelfde type met 1-7 koolstofatomen, verbonden met het zuurstofatoom, bijvoorbeeld methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, t-butoxy en der-gelijke. De groepen met 1 - 4 koolstofatomen en in het bijzonder 5 met 1 of 2 koolstofatomen genieten de voorkeur. Fenylmethyl is de fenyllagere alkylgroep, die de voorkeur geniet.

De lagere alkanoylgroepen zijn die met de acyl-resten van de lagere (Cg-Cy) vetzuren, bijvoorbeeld acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl en dergelijke. De lagere alkanoyl-10 groepen met tot 4 koolstofatomen, in het bijzonder acetyl, genieten de voorkeur.

De nieuwe verbindingen met de algemene formule 1 kunnen op een op zichzelf bekende wijze worden bereid.

De verbindingen met de formule 1 en de voorkeurs 15 subgroepen kunnen volgens de uitvinding onder toepassing van variërende methodes· worden bereid.

In het algemeen worden .de verbindingen volgens de uitvinding bereid door acyleren van een verbinding met de formule 3 met een zuur met de formule 4 of een chemische equivalent 20 daarvan.

Zo kan het eindprodukt niet alleen worden verkregen door direkte acylering met een Zuur met de formule 4 maar eveneens via tussenprodukten, zoals (a) ω-halogeenalkaanzuren met de formule 5, waarin X broom, chloor of jodium is, of (b) een 25 8104047 • * \ - 3 - tosyloxyalkaanzuur, dat wil zeggen een zuur met de formule 5, waarin X tosyloxy (CH3—-<©>— SCyj-), is of (c) een gesubstitueerd acrylzuur met de formule 6. Het produkt van deze acylering wordt vervolgens onderworpen aan een omlegging of een additie met het 5 anion van een thiol of thiozuur met de formule 7.

De acylering kan eveneens worden bewerkstelligd met een thiolacton met de formule 8, waarin η 1 of 2 is, of een mercaptoalkaanzuur met de formule 9, waarin Y voorstelt terwijl, indien een produkt met de formule 1, waarin R2 voorstelt waterstof, 10 wenselijk is Y eveneens kan voorstellen een beschermende groep, zoals (a) CH30—<§>—ch2, (b) Ql , (c) ch3conhch2, (d) R. R, t 1 I4 R-O-C-CH-(CH) -S- of een andere zwavelbeschermende groep. De ver-n wijdering van de beschermende groep kan worden bewerkstelligd onder 15 toepassing van gebruikelijke methodes, zoals door behandeling met heet trifluorazijnzuur, koud trifluormethaansulfonzuur, mercuri-acetaat, natrium in vloeibare ammoniak, zink en chloorwaterstof-zuur of dergelijke. In verband met deze methodes wordt verwezen naar Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Vol. XV, part 20 I, pag. 736 e.v. (1974).

Wanneer het zuur met de formule 4 als acyleer-middel wordt gebruikt kan de acylering worden bewerkstelligd in tegenwoordigheid van een koppelingsmiddel, zoals dicyclohexylcarbo-diimide of dergelijke, of het zuur kan worden geactiveerd door 25 vorming van zijn gemengd anhydride, symmetrisch anhydride, zuurchlo-ride, zuurester of toepassing van het Wöodward-reagens, K, N-ethoxy-carbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinoline,of dergelijke. In verband met de acyleringsmethodes wordt verwezen naar Methoden der Organischen Chemie (Houben-Weyl), Vol. XV, part II, pag. 1 e.v.

30 (1974).

Verbindingen met de formule 3 omvatten onder meer azetidine-2-carbonzuur en de lagere alkylesters daarvan. De acylering van dergelijke verbindingen is hieronder meer uitvoerig beschreven.

35 Volgens een voorkeursmethode ter bereiding van 8104047 S ? - 4 - verbindingen met de formule 1, speciaal van verbindingen, waarin 1*2 voorstelt R^-CO-, wordt een zuur of ester met de formule 3 gekoppeld met een halogeenalkaanzuur met de formule 5, waarin X halogeen, bij voorkeur chloor of broom, voorstelt. Dit kan worden bewerkstel-5 ligd door toepassing van één van de bekende procedures, waarbij het zuur 4 voor de reactie met het zuur 3 wordt geactiveerd door vorming van een gemengd anhydride, symmetrisch anhydride, zuurchlori-de of actieve ester of door toepassing van Woodward-reagens K, EEDQ (N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l.2-dihydrochinoline) of dergelijke. 10 Het produkt van deze reactie is een verbinding met de formule 10. Het produkt met de formule 10 wordt onderworpen aan een verplaatsingsreactie met het anion van een thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 11, waarin R2 voorstelt Rj.CO, welk produkt vervolgens door ammonolyse kan 15 worden omgezet in het produkt met de formule 12. Wanneer R2 een beschermende groep is kan de verbinding met de formule 12 worden verkregen door verwijdering van de besbhermende groep op de boven beschreven wijze. Wanneer R een estergroep is (dat wil zeggen dat R voorstelt lager alkoxy) kan de estergroep worden verwijderd, 20 bijvoorbeeld wanneer R voorstelt tert.butoxy of tert.amyloxy, door behandeling van de ester met de formule 11 of 12 met trifluorazijn-zuur en anisool, waarbij het overeenkomstige vrije zuur wordt verkregen. Wanneer andere alkoxygroepen aanwezig zijn zal door alkalische hydrolyse het overeenkomstige zuur worden verkregen.

25 Een variatie op deze procedure omvat de toepas sing van een acrylzuur met de formule 6 als uitgangsmateriaal. Dit acrylzuur wordt eerst omgezet in de zuurhalogenidevorm en vervolgens in reactie gebracht met een verbinding met de formule 3 onder vorming van een verbinding met de formule 13 en dit tussenprodukt 30 wordt onderworpen aan de additiereactie met het thiol of thiozuur 7, zoals hierboven beschreven.

Een tosyloxyalkaanzuur met de formule 14 kan eveneens worden gebruikt als het middel voor de acylering van het zuur met de formule 3, waarna het acyleringsprodukt wordt onderwor-35 pen aan de verplaatsingsreactie, etc., zoals hierboven beschreven.

8104047 é *» % - 5 -

Het acrylzuur met de formule 6 kan anderzijds eerst in reactie worden gebracht met het thiozuur met de formule 7 onder vorming van een produkt met de formule 15, dat wordt omgezet in zijn zuurhalogenide, bijvoorbeeld met. thionylchloride, en 5 vervolgens wordt gekoppeld met de verbinding met de formule 3, waarna verder de boven beschreven procedure wordt gevolgd.

Het zuur of de ester met de formule 3 kan eveneens worden geacyleerd met een "beschermdeu vorm van een ω-mercapto-alkaanzuur met de formule 16, waarin Rg de "beschermende" groep is.

10 Dergelijke "beschermende" groepen kunnen in de hierboven beschreven vorm zijn.

Na de acylering kan de beschermende groep uit het produkt worden verwijderd volgens één van de hierboven beschreven bekende methodes.

15 Nog een ander acyleermiddel is een thiolacton, bijvoorbeeld β-propiothiolacton, a-methyl-3-propiothiolacton of dergelijke.

Verdere details met betrekking tot de voorkeursmethodes voor de bereiding van de verbindingen volgens de uitvinding 20 zijn aangegeven in de onderstaande specifieke voorbeelden.

Volgens een modificatie van de werkwijze, die in het bijzonder de voorkeur geniet, wordt het zuur of de ester met de formule 3 geacyleerd met een halogeenalkanoylhalogenide met de formule 17, waarin elke X onafhankelijk voorstelt een halogeen, bij 25 voorkeur chloor of broom, R voorstelt waterstof, lager alkyl of fenyl-lager alkyl en n 0, 1 of 2 is. Deze reactie wordt bewerkstelligd in een alkalisch medium, bijvoorbeeld een verdunde alkalimetaal-hydroxyde-oplossing, alkalimetaalyaterstofcarbonaat- of alkalimetaal-carbonaat-oplossing, bij verlaagde temperatuur, bijvoorbeeld onge-30 veer 0-15° C. Het reactieprodukt wordt onderworpen aan een ver-plaatsingsreactie met het anion van het thiol of thiozuur met de formule 7, eveneens in een alkalisch medium, bij voorkeur een alkalimetaalcarbonaat-oplossing, en vervolgens op de gebruikelijke wijze opgewerkt. Het produkt van deze reactie, waarin in de 35 formule 1 voorstelt R^-CO, wordt omgezet in het produkt, waarin R2 8104047

0 V

' - 6 - voorstelt waterstof, door ammonolyse, bijvoorbeeld met alcoholische ammonia of geconcentreerde ammoniumhydroxyde-oplossing, of door alkalische hydrolyse, bijvoorbeeld met waterig metaalhydroxyde. Wanneer een zuur met de formule 3 als uitgangsmateriaal wordt 5 gebruikt kan het als het vrije carbonzuur verkregen eindprodukt vervolgens worden omgezet in zijn ester, bijvoorbeeld door vereste-ring met een diazoalkaan, zoals diazomethaan, een l-alkyl-3-p-to-lyltriazeen, zoals l-n-butyl-3-p-tolyltriazeen of dergelijke.

De behandeling van een ester, bij voorkeur de methylester, met een 10 alcoholische ammonia-oplossing zet het vrije zuur om in het amide, dat wil zeggen in een produkt, waarin R voorstelt NI^.

Volgens een andere variatie van de werkwijze wordt een ester, bij voorkeur de t.butylester, met de formule 3, in een watervrij medium, zoals dichloormethaan, tetrahydrofuran, 15 dioxan of dergelijke, behandeld met een thioalkaanzuur met de formule 18 in tegenwoordigheid van dicyclohexylcarbodiimide, N,N'-carbonylbisimidazool, ethoxyacetyleen, difenylfosforylazide of analoge koppelingsmiddelen bij een temperatuur van ongeveer 0-10° C. De estergroep (R) kan vervolgens worden verwijderd, 20 bijvoorbeeld door behandeling met trifluorazijnzuur en anisool bij kamertemperatuur.

Wanneer een ester met de formule 3 (bijvoorbeeld R is lager alkoxy, speciaal t.butoxy) wordt geacyleerd met een thiolacton, bijvoorbeeld β-propiothiolacton, a-methyl-β-propio-25 thiolacton of dergelijke, kan de reactie worden uitgevoerd in een watervrij oplosmiddel, zoals tetrahydrofuran, dioxan, methyleen-chloride of dergelijke, bij ongeveer 0° C tot ongeveer kamertemperatuur. De estergroep kan vervolgens worden verwijderd met anisool en trifluorazijnzuur op de boven beschreven wijze.

30 Produkten met de formule 1 bezitten één of meer asymmetrische koolstofatomen. Wanneer R^, R^ of R^ een andere betekenis bezitten dan waterstof is het koolstof atoom, waaraan deze substituent is vastgehecht, asymmetrisch. Deze koolstofatomen zijn in de formule 1 aangegeven door een sterretje. De verbindingen 35 bestaan daarom in stereo-isomere vormen of in racemische mengsels 8104047 - 7 - daarvan. Al deze vormen en mengsels vallen binnen het raam van de uitvinding. Bij de boven beschreven syntheses kunnen als uitgangsmaterialen het racemaat of één van de enantiomeren worden gebruikt. Wanneer het racemisch uitgangsmateriaal wordt gebruikt bij de 5 synthese kunnen de in het produkt verkregen stereo-isomeren worden gescheiden onder toepassing van gebruikelijke chromatografische of gefractioneerde kristallisatie-methodes. In het algemeen is het L-isomeer met betrekking tot het koolstofatoom van het aminozuur de isomere vorm, die de voorkeur geniet. Ook het D-isomeer met betrek-10 king tot het α-koolstofatoom in de acyl-zijketen (dat wil zeggen het koolstofatoom, dat draagt) geniet de voorkeur.

De verbindingen volgens de uitvinding vormen basische zouten met verschillende anorganische en organische basen, welke zouten eveneens binnen het raam van de uitvinding vallen.

15 Dergelijke zouten omvatten ammoniumzouten, alkalimetaalzouten, zoals natrium- en kaliumzouten (die de voorkeur genieten), aardalka-limetaalzouten, zoals de calcium- en magnesiumzouten, zouten met organische basen, bijvoorbeeld het dicyclohexylaminezout, benzathine-, N-methyl-D-glucamine-, hydrabaminelzouten, zouten met aminozuren, 20 zoals arginine, lysine en dergelijke. De niet-toxische, fysiologisch aanvaardbare zouten genieten de voorkeur, hoewel andere zouten eveneens bruikbaar zijn, bijvoorbeeld bij de isolatie of zuivering van het produkt, zoals in de voorbeelden geïllustreerd voor het geval van het dicyclohexylaminezout.

25 De zouten worden op gebruikelijke wijze gevormd door reactie van de vrije zuurvorm van het produkt met één of meer equivalenten van de geschikte base, die het gewenste kation verschaft, in een oplosmiddel of medium, waarin het zout onoplosbaar is, of in water en verwijdering van het water door vriesdrogen.

30 Door neutralisatie van het zout met een onoplosbaar zuur, zoals een kationuitwisselaarhars in de waterstofvorm (bijvoorbeeld polystyreen-sulfonzuurhars zoals Dowex 50) of met een waterig zuur en extractie met een organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld ethylacetaat, dichloor-methaan of dergelijke, kan de vrije zuurvorm worden verkregen en 35 desgewenst een ander zout worden gevormd.

8104047 *<r v - 8 -

Verdere experimentele details zijn aangegeven in de voorbeelden, die voorkeursuitvoeringsvormen beschrijven en eveneens dienen als model voor de bereiding van andere leden van de groep.

5 De verbindingen volgens de uitvinding remmen de omzetting van het decapeptide angiotensine I in angiotensine II en zijn daarom bruikbaar voor het verlagen van de met angiotensine in verband staande hypertensie. Door inwerking van het enzyme renine op angiotensinogeen, een pseudoglobuline in bloedplasma, wordt 10 angiotensine I gevormd. Angiotensine I wordt door angiotensine omzettend enzym (ACE) omgezet in angiotensine II. Dit laatste is een actieve bloeddruk verhogende stof, die beschouwd wordt als de oorzaak van verschillende vormen van hypertensie bij verschillende zoogdiersoorten, bijvoorbeeld ratten en honden. De verbindingen 15 volgens de uitvinding blokkeren de omzetting angiotensine (renine) angiotensine I —► angiotensine IX door remming van het angiotensine omzettend enzym en vermindering of eliminering van de vorming van het bloeddruk verhogende angiotensine II. Door toediening van een preparaat, bevattende één of meer verbindingen met de formule 1 20 en/of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan, kan de door angiotensine veroorzaakte hypertensie bij daaraan lijdende zoogdieren worden verminderd. Eén enkele dosis of bij voorkeur 2-4 dagelijkse deeldoses op basis van ongeveer 0,1-100 mg per kg per dag en bij voorkeur ongeveer 1-50 mg per kg per dag is geschikt voor het 25 verlagen van de bloeddruk, zoals blijkt uit de dierproeven, beschreven door S.L. Engel, T.R. Schaeffer, M.H. Waugh, en B. Rubin, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 143, 483 (1973). De stof wordt bij voorkeur oraal toegediend, maar een parenterale toediening, zoals een subcu-tane, intramusculaire, intraveneuze of intraperitoneale toediening, 30 kan eveneens worden toegepast.

De verbindingen volgens de uitvinding kunnen voor het verlagen van de bloeddruk worden gebruikt in de vorm van preparaten, zoals tabletten, capsules of elixirs voor orale toediening of in steriele oplossingen of suspensies voor parenterale 35 toediening. Ongeveer 10-500 mg van een verbinding of mengsel van 8104047 - 9 - verbindingen met de formule 1 of fysiologisch aanvaardbare zouten daarvan worden gemengd met fysiologisch aanvaardbare dragers, bindmiddelen, conserveermiddelen, stabiliseermiddelen, smaak-middelen, etc. onder vorming van een eenheidsdoseringsvorm als 5 vereist in de farmaceutische praktijk. De hoeveelheid actieve stof in deze preparaten is zodanig, dat een geschikte dosis binnen het boven aangegeven traject wordt verkregen.

Voorbeelden van toevoegsels, die opgenomen kunnen worden in tabletten, capsules en dergelijke, zijn de volgende: 10 een bindmiddel, zoals tragacanthgom, acaciagom, maïszetmeel of gelatine, een drager, zoals dicalciumfosfaat, een desintegreer-middel, zoals maïszetmeel, aardappelzetmeel, alginezuur en dergelijke, een smeermiddel, zoals magnesiumstearaat, een zoetmiddel, zoals saccharose, lactose of saccharine, en een smaakmiddel zoals 15 pepermunt, olie van wintergroen of kersen. Wanneer de eenheidsdoseringsvorm een capsule is kan deze behalve de materialen van het bovengenoemde type bovendien een vloeibare drager, zoals een vette olie, bevatten. Verschillende andere materialen kunnen aanwezig zijn als bekledingen of voor het verder modificeren van de 20 fysische vorm van de eenheidsdosis. Zo kunnen bijvoorbeeld tabletten worden bekleed met schellak, suiker of beide. Een stroop of elixir kan de actieve verbinding, saccharose als zoetmiddel, methyl- en propyl-parabens als conserveermiddelen, een kleurstof en een smaakmiddel, zoals kersen- of sinaasappelaroma, bevatten.

25 Steriele preparaten voor injectie kunnen volgens gebruikelijke farmaceutische procedures worden bereid door oplossen of suspenderen van de actieve stof in een drager, zoals water voor injectie, een in de natuur voorkomende plantaardige olie, zoals sesamolie, kokosnootolie, pindaolie, katoenzaadolie, etc., 30 of een synthetisch vet, zoals ethyloleaat of dergelijke. Indien nodig kunnen buffers, conserveermiddelen, anti-oxydantia en dergelijke worden opgenomen.

De uitvinding wordt verder toegelicht maar niet beperkt door de volgende voorbeelden.

35 8104047 .> "v - 10 -

Voorbeeld_I

1-(2-Benzoylthioacetyl)-L-azetidine-2-carbonzuur L-azetidine-2-carbonzuur (5,05 g) wordt opgelost 5 in N. natriumhydroxyde (50 ml) en de oplossing wordt afgekoeld in een ijs-waterbad. Natriumhydroxyde 2N (26 ml) en chlooracetylchlo-ride (5,65 g) worden toegevoegd en het mengsel wordt gedurende 3 uren bij. kamertemperatuur heftig geroerd. Een suspensie van thiobenzoë-zuur (7,5 g) en kaliumcarbonaat (4,8 g) in water (50 ml) wordt 10 toegevoegd. Na 18 uren roeren bij kamertemperatuur wordt het reac-tiemengsel aangezuurd en geëxtraheerd met ethylacetaat. De ethyl-acetaatlaag wordt gewassen met water, gedroogd boven magnesium-sulfaat en in vacuo drooggedampt. Het residu (14,6 g) wordt opgelost in ethylacetaat (150 ml) en dicyclohexylamine (11 ml) wordt 15 toegevoegd. De kristallen worden afgefiltreerd en herkristalliseerd uit ethylacetaat. Teneinde het zout om te zetten in het zuur worden de kristallen opgelost in een mengsel van 5 %'s waterig kalium-hydrogeensulfaat (100 ml) en ethylacetaat (300 ml). De organische fase wordt eenmaal gewassen met water, gedroogd boven raagnesium-20 sulfaat en drooggedampt in vacuo.

Voorbeeld II

1-(2-Mercaptoacetyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

1-(2-Benzoylthioacetyl)-L-azetidine-2-carbonzuur 25 (3,29 g) wordt opgelost in een mengsel van water (10,5 ml) en geconcentreerde ammonia (6,4 ml). Na 1 uur wordt het reactiemengsel met water verdund en afgefiltreerd. Het filtraat wordt geëxtraheerd met ethylacetaat en vervolgens aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur, verzadigd met natriumchloride en 2 maal geëx-30 traheerd met ethylacetaat. De ethylacetaatextracten worden gewassen met verzadigde natriumchloride en drooggedampt;

Het produkt, 1-(2-mercaptoacetyl-L-azetidine-2-carborizuur wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat.

35 8104047 - 11 -

Voorbeeld^III

a) Tert.butylester van L-azetidine-2-carbonzuur.

L-Azetidine-2-carbonzuur (202 g) wordt opgelost 5 in een mengsel van water (1 1) en 5 N. natriumhydroxyde (400 ml).

De oplossing wordt afgekoeld in een ijsbad en onder heftig roeren worden 5 N. natriumhydroxyde (460 ml) en benzyloxycarbonylchloride (340 ml) toegevoegd in vijf gelijke porties gedurende een periode 0 van 30 min.. Na 1 uur roren bij kamertemperatuur wordt het mengsel 10 2 maal geëxtraheerd met ether en aangezuurd met geconcentreerd chloorwaterstofzuur. Het precipitaat wordt afgefiltreerd en gedroogd.

Het aldus verkregen benzyloxycarbonyl-L-azeti-dine-2-carbonzuur wordt opgelost in een mengsel van dichloormethaan (300 ml), vloeibaar isobuteen (800 ml) en geconcentreerd zwavelzuur 15 (7,2 ml). De oplossing wordt geschud in een drukfles gedurende 72 uren. De druk wordt afgelaten en het isobuteen laat men verdampen, waarna de oplossing wordt gewassen met 5 %'s natriumcarbonaat, water, gedroogd boven magnesiumsulfaat en drooggedampt in vacuo, waarbij benzyloxycarbonyl-L-azetidine-2-carbonzuur tert.butylester wordt 20 verkregen.

Benzyloxycarbonyl-L-azetidine-2-carbonzure tert.-butylester (109 g) wordt opgelost in absolute ethanol (1,2 1) en bij normale druk gehydrogeneerd met 10 %'s Pd op koolstof (10 g) totdat nog slechts een spoor kooldioxyde wordt waargenomen in het uittre-25 dende waterstofgas (24 uren). De katalysator wordt afgefiltreerd en het filtraat in vacuo bij 30 mm Hg geconcentreerd. Het residu wordt in vacuo gedestilleerd, waarbij de tert.butylester van azetidine-2-carbonzuur wordt verkregen.

b) 1-(3-Acetylthiopropanoy1)-L-azetidine-2-carbonzure tert.butyl-30 ester.

L-Azetidine-2-carbonzure tert.butylester (4,71 g) wordt opgelost in dichloormethaan (40 ml) en de oplossing wordt afgekoeld in een ijswaterbad. Een oplossing van dicyclohexylcarbo-35 diimide (6,18 g) in dichloormethaan (20 ml) wordt toegevoegd, 8104047

*V

- 12 - onmiddellijk gevolgd door 3-acetylthiopropionzuur (4,45 g). Na 15 min, roeren in het ijs-waterbad en 16 uren bij kamertemperatuur wordt het precipitaat afgefiltreerd en het filtraat in vacuo drooggedampt. Het residu wordt opgelost in ethylacetaat en gewassen tot 5 neutrale reactie. De organische laag wordt gedroogd boven magne-siumsulfaat en in vacuo drooggedampt, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

Voorbeeld_IV

1-(3-Acetylthiopropanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

10 ’ 1-(3-Acetylthiopropanoyl)-L-azetidine-2-carbon-zure tert.butylester (4,5 g) wordt opgelost in een mengsel van anisool (34 ml) en trifluorazijnzuur (68 ml) en het mengsel wordt gedurende 1 uur op kamertemperatuur gehouden. De oplosmiddelen 15 worden in vacuo verwijderd en het residu wordt verscheidene malen geprecipiteerd uit ether-hexaan. Het residu (3,5 g) wordt opgelost in acetonitril (25 ml) en dicyclohexylamine (2,8 ml) wordt toegevoegd. Het kristallijne zout wordt afgefiltreerd en herkristalli-seerd uit isopropanol; opbrengst 3,8 g; smpt, = 176-177° C. Het 20 zout wordt weer omgezet in l-(3-acetylthiopropanoyl)-azetidine-2-carbonzuur zoals in voorbeeld I.

Voorbeeld V

1-(3-Mercaptopropanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

25 1-(3-Acetylthiopropanoyl)-L-azetidine-2-carbon- zuur (0,75 g) wordt opgelost in 5,5 N, methanolische ammonia (5 ml) en de oplossing wordt bij kamertemperatuur in een argonatmosfeer gehouden. Na 2 uren wordt het oplosmiddel in vacuo verwijderd, het residu in water opgelost en de oplossing gebracht in een ionenuit-30 wisselaarkolom in de H+ cyclus /_Dowex 50 (analytische kwaliteit) _/ en geëlueerd met water. De fracties, die een positieve thiolreactie geven, worden verzameld en drooggedampt; dit produkt wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-hexaan, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.

35 8104047 < - 13 -

Voorbeeld_VI

1-(3-Acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-azetidine-2-carbonzure tert.-butylester.

5 L-Azetidine-2-carbonzure tert.butylester (4,8 g) wordt opgelost in dichloormethaan (40 ml) en de oplossing wordt geroerd en afgekoeld in een ijsbad. Dicyclohexylcarbodiimide (6,2 g) opgelost in dichloormethaan (15 ml), wordt toegevoegd, onmiddellijk gevolgd door een oplossing van 3-acetylthio-2-methylpropaanzuur 10 (4,9 g) in dichloormethaan (5 ml). Na 15 min. roeren in het ijsbad en 16 uren bij kamertemperatuur wordt het precipitaat afgefiltreerd en het filtraat in vacuo drooggedampt. Het residu wordt opgelost in ethylacetaat en gewassen tot neutrale reactie. De organische fase wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt.

15 Het residu, 1-(3-acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-azetidine-2-car-bonzure tert.butylester, wordt gezuiverd door kolomchromatografie (silicagel-chloroform).

Voorbeeld_VII

1- (3-Acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

20

De 1-(3-acetylthio-2-methylpropanoyl)-L-azetidine- 2- carbonzure tert.butylester van voorbeeld VI (7,3 g) wordt opgelost in een mengsel van anisool (55 ml) en trifluorazijnzuur (110 ml).

Na opslag gedurende 1 uur bij kamertemperatuur wordt het oplosmiddel 25 in vacuo verwijderd en het residu verscheidene malen uit ether- hexaan geprecipiteerd. Het residu (6,8 g) wordt opgelost in aceto-nitril (40 ml) en dicyclohexylamine (4,5 ml) wordt toegevoegd. Het kristallijne zout wordt gekookt met vers acetonitril (100 ml), afge-koeld tot kamertemperatuur en af gefiltreerd. Dit materiaal wordt 30 gekristalliseerd uit isopropanol. Het kristallijne dicyclohexylamine-zout wordt gesuspendeerd in een mengsel van 5 %'s waterig kalium-hydrogeensulfaat en ethylacetaat. De organische fase wordt gewassen met water en drooggedampt. Het residu wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-hexaan, waarbij 1-(3-acetylthio-2-D-methylpropanoy1-L-35 azetidine-2-carbonzuur wordt verkregen.

8104047 - 14 - Y22£keeld_viii 1-(3-Mercapto-2-D-methylpropanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuür.

De thio-ester (0,80 g) wordt opgelost in 5,5 N.

5 methanolisch ammonia en de oplossing wordt gedurende 2 uren op kamertemperatuur gehouden. Het oplosmiddel wordt in vacuo verwijderd en het residu opgelost in water, aangebracht op een ionuitwisselaar-kolom in de H+ cyclus (Dowex 50, analytische kwaliteit) en geëlueerd met water. De fracties, die een positieve thiolreactie geven, worden 10 gecombineerd en drooggevroren. Het residu wordt gekristalliseerd uit ethylacetaat-hexaan.

Voorbeeld_IX

1-(4-Benzoylthiobutanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

15 Aan een oplossing van L-azetidine-2-carbonzuur (2,53 g) in normaal natriumhydroxyde (25 ml), afgekoeld in een ijs-bad, worden 2 N, natriumhydroxyde (12,5 ml) en 4-chloorbutyryl-chloride (3,5 g) toegevoegd. Het reactiemengsel wordt gedurende 3,5 uren bij kamertemperatuur geroerd en een suspensie van thio-20 benzoëzuur (3,75 g) en kaliumcarbonaat (2,4 g) in water (25 ml)

wordt toegevoegd. Na roeren gedurende de nacht bij kamertemperatuur wordt het reactiemengsel aangezuurd met geconcentreerd chloorwater-stofzuur en geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische laag wordt gedroogd boven magnesiumsulfaat en in vacuo drooggedampt. Het 25 residu wordt gechromatografeerd over een kolom silicagel met benzeenazijnzuur (7:1). De fracties, die het gewenste materiaal bevatten, worden gecombineerd en drooggedampt. Een klein monster van dit materiaal wordt opgelost in ethylacetaat en dicyclohexylamine wordt toegevoegd tot een pH van 8-10 (bepaald met een nat pH-papier-30 tje). Het dicyclohexylaminezout kristalliseert onmiddellijk uit. Voorbeeld X

1-(4-Mercaptobutanoyl)-L-azetidine-2-carbonzuur.

1-(4-Benzylthiobutanoyl)-L-azetidine-2-carbon-35 zuur (1,01 g) wordt opgelost in een mengsel van water (4 ml) en 8104047 - 15 - geconcentreerde ammonia (2,7 ml). Na 1 uur roeren bij kamertemperatuur wordt het mengsel met water verdund, afgefiltreerd, geëxtraheerd met ethylacetaat en de waterige fase in vacuo geconcentreerd. Het verkregen ammoniumzout van 1-(4-mercaptobutanoyl)-L-proline 5 wordt gezuiverd door ionuitwisselingschromatografie op een kolom van diethylaninoethyl-Sephadex (verknoopt dextran) met een gradiënt van ammoniumwaterstefcarbcnaat. Het ammoniumzout wordt opgelost in water (2 ml) en aangebracht op een kolom van Dowex 50 sulfonzuur-hars (analytische kwaliteit) in de waterstofvorm en het vrije zuur 10 wordt met water geëlueerd. De. fracties, die het gewenste materiaal (positieve reactie met sulfhydryl-reagens en carboxyl-reagens) bevatten, worden gecombineerd en gevriesdroogd, waarbij 1-(4-mercaptobutanoyl) -L-azetidine-2-carbonzuur wordt verkregen. Het dicyclohexylammoniumzout wordt bereid volgens de procedure van 15 voorbeeld IX.

8104047

Claims (4)

1. Werkwijze ter bereiding van een therapeutisch preparaat met bloeddrukverlagende werking, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R een hydroxy- of amino-5 groep of een lagere alkoxygroep, R^ en R4 elk afzonderlijk een waterstofatoom, een eventueel met een fenylgroep gesubstitueerde lagere alkylgroep of een fenylgroep, R^ een waterstofatoom of een groep COR^ is, waarbij Rg een fenyl, een lagere alkylfenyl- of fenyl-lagere alkylgroep voorstelt, en R^ een waterstofatoom of 10 een hydroxy- of lagere alkylgroep voorstelt en n = 0, 1 of 2 en m = 1, of een basis zout daarvan, in een voor therapeutische toepassing geschikte vorm brengt.

2. Werkwijze ter bereiding van een verbinding die geschikt is om bij de werkwijze volgens conclusie 1 te worden 15 toegepast, met het kenmerk, dat men een verbinding met de formule 1, waarin R, R^, R2, R^, R^, m en n dezelfde betekenis hebben als in conclusie 1, op een voor dergelijke verbindingen gebruikelijke wijze bereidt. 20 8104047 . *v ' · . Rtg.nr.i 115.777 R4 R) Ri, Rl ,1 , 1 J . I V Rj-S—(ChJ — CH—COOH X — (CH),,-CH—COX 16 17 Ri Μ M I η II Ri-S-(CH8)W—CH- COOH 18 Ry-M-C-Xg Rj—M-C-S-Me^g M Rii Rj—N = C= Μ Η I ' I 0

21 Ri-NH-C-S-(CH)W—Ch-COOH i_s_R 22 24 lager alkyl— CO — NHCH^OH 0 po μ ά Ré - s - s - r6 R<;S — x o 25 26 Rt—S —S0JH R&—S — SCN 27 28 f» (HO——CH, R, Ri ^ I* IS I1 I R-OC—HC-N-CO-CH-(CH\—S(oL * * «Λ Λ ,p 29 E.R. Squibb & Sons» Inc. te Princeton. New Jersey ·ι I I mu «r «y · Ver, St .V, Amerika 8104047 * ' Rj .1 . ReK. nr.: 113.777 «4 R, h4c-(ch)^ R,—s—- (C Η)-CH — CO —N-— CH—COR * ' * ' n ^ . .·*· ?» H*c — (Crt)». 3 HN — CH— COR *1 Rt , I 4 Rj— S— (chJ„— CH—COOH H J* }! R4 Ri X—(CH^-CH—COOH 5 CH=-C —COOH g (ίΗ)--ίΗ 8 Ri— SH s_c

7 S0 RJ, R, Ί* y-s-(ch)-ch-cor g R4 Rf h2c — (ch]w 10 x— (CH)eT— CH-CO— N-- CH-COR Rj R4 Rl H*C-(CH),. R^—S—(ch)„—CH — CO —N— CH—COR 1» 11 Rk R, HS—(ch) — CH —CO— N—CH —COR R 12 1 fty R·) HjC -(CH)W CH ~ C— CO— N- CH—COR 13 r4 R, . Λ-Λ I I CH^/ySO^O-fCH^-CH-COOH R u r i1 is Rg—S —CH — CH — COOH E.R. Squibb 4 Sons, Inc. 8104047 ta Princeton, New .Jersey Var.St.v.Amerika