DE2629568B2 - Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten - Google Patents

Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten

Info

Publication number
DE2629568B2
DE2629568B2 DE2629568A DE2629568A DE2629568B2 DE 2629568 B2 DE2629568 B2 DE 2629568B2 DE 2629568 A DE2629568 A DE 2629568A DE 2629568 A DE2629568 A DE 2629568A DE 2629568 B2 DE2629568 B2 DE 2629568B2
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
insulin
buffer
nacl
derivatives
column
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
DE2629568A
Other languages
English (en)
Other versions
DE2629568C3 (de
DE2629568A1 (de
Inventor
Manfred Dipl.-Chem. Dr. 6000 Frankfurt Zoltobrocki
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hoechst AG
Original Assignee
Hoechst AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst AG filed Critical Hoechst AG
Priority to DE2629568A priority Critical patent/DE2629568C3/de
Priority to NLAANVRAGE7707037,A priority patent/NL188804C/xx
Priority to ES460099A priority patent/ES460099A1/es
Priority to GR53823A priority patent/GR78333B/el
Priority to CH792577A priority patent/CH626051A5/de
Priority to FI772023A priority patent/FI61490C/fi
Priority to IT25221/77A priority patent/IT1080658B/it
Priority to US05/810,979 priority patent/US4129560A/en
Priority to NZ184516A priority patent/NZ184516A/xx
Priority to AT466377A priority patent/AT352922B/de
Priority to AU26604/77A priority patent/AU509110B2/en
Priority to NO772318A priority patent/NO145692C/no
Priority to SE7707612A priority patent/SE440507B/xx
Priority to GB27395/77A priority patent/GB1582056A/en
Priority to IE1358/77A priority patent/IE44766B1/en
Priority to CA000281825A priority patent/CA1086308A/en
Priority to ZA00773964A priority patent/ZA773964B/xx
Priority to DK293277A priority patent/DK149201C/da
Priority to PT66751A priority patent/PT66751B/de
Priority to FR7720310A priority patent/FR2356630A1/fr
Priority to JP7797677A priority patent/JPS535101A/ja
Priority to BE179012A priority patent/BE856385A/xx
Publication of DE2629568A1 publication Critical patent/DE2629568A1/de
Publication of DE2629568B2 publication Critical patent/DE2629568B2/de
Application granted granted Critical
Publication of DE2629568C3 publication Critical patent/DE2629568C3/de
Expired legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • A23K10/32—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms from hydrolysates of wood or straw
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • C07K14/625—Extraction from natural sources
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/854—Glands

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten durch Chromatographie in wäßrigen, gepufferten Lösungsmitteln an Ionenaustauschern das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Chromatographie an basischen Ionenaustauschern mit gepufferten Lösungsmitteln durchführt, in denen nichtionische Detergentien gelöst sind
Es ist bereits bekannt, daß Peptide gleichen oder ähnlichen Molekulargewichts, die sick in ihrer Basizität oder Azidität unterscheiden, an Ionenaustauschern getrennt werden können. Diese Methode versagt jedoch, wenn die unterschiedlichen Peptide miteinander Komplexe bilden, die während der Ionenaustauscherchromatographie erhalten bleiben. Um diese Schwierigkeiten zu umgehen, hat man im Elutionsmittel dissoziierende Bedingungen zu wählen. Bisher hat man zu(r>esem Zweck in den zur Elution verwandten Puffern z. B. entweder Harnstoff oder Harnstoffderivate in hohen Konzentrationen (5 M—9 M) aufgelöst oder man hat in mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln gearbeitet So wurde z.B. Insulin an dem Ionenaustauscher Amberlite* IRC in Phosphatpuffer mit 5 M -8 M Harnstoff Chromatographien (R. D. CoIe, J. BioL Chem. 235,2294 [I960]). Aus der GB-PS 8 81 855 und auch aus Diabetes 21, Suppl. 2 (1972), S. 649 - 656 ist die Verwendung eines mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels, beispielsweise Äthanol, bekannt Extreme pH-Werte, die ebenfalls dissoziierend wirken, sind wegen der Empfindlichkeit der Peptide gegen solche Bedingungen nicht anwendbar. Die bisher bekannten Verfahren hatten aber verschiedene Nachteile. So ist die Isolierung der Substanzen aus harnstoffhaltigen Puffern schwierig und zeitraubend; ferner können im Harnstoff Verunreinigungen enthalten sein, die mit Peptiden wie Insulin reagieren. Bei der Verwendung von Äthanol als organisches Lösungsmittel bereitet die Wiederverwendbarkeit des Ionenaustauschers Schwierigkeiten, zum anderen ist die lonenaustauscherchromatographie mit einem hohen Verlust an Peptid, z. B. Insulin verbunden. Schließlich besteht die Gefahr des Denaturieren« der höhermolekularen Peptide in organischen Lösungsmitteln wie das für Insulin in 60%igem Alkohol bei pH 7 bekannt ist
Überraschenderweise wurden nun gefunden, daß diese Schwierigkeiten durch die Verwendung von nichtionischen Detergentien zur Dissoziation der Peptide umgangen werden können.
Die Wiederverwendbarkeit der Austauscher bereitet keine Schwierigkeiten. Eine Denaturierung der Peptide ist nicht zu beobachten, die Isolierung ist einfach und erfolgt durch Fällung der Peptide mit geeigneten Fällungsmitteln und eventueller anschließender Kristallisation, Die Ausbeuten sind deutlich größer als bei der Verwendung von organischen Lösungsmitteln als dissoziierendes Agens,
Das erfindiragsgemlße Verfahren bezieht sich auf Insuline aller Spezies, auch Humaninsulin, Insulinanaloge z.B. Des-Phe-Bl-Insulin und Insulinderivate z.B. Insulin-B-Kettensulfonat
Diese Verbindungen können sowohl in verhältnismäßig unreinem Zustand als auch in vorgereinigter Form
ίο (z.B. durch Gelchromatographie) eingesetzt werden. Insulin ist nach mehrfacher Kristallisation und auch nach Gelchromatographie noch mit Insulin-ähnlichen Begleitstoffen sehr ähnlichen Molekulargewichtes verunreinigt, die sich bei passend gewähltem pH in ihrem
is Ladungszustand untereinander und vom Insulin unterscheiden, aber mit Insulin Komplexe bilden. Beispiele solcher Substanzen sind: Desamidoinsuli&e. Arginin- und Diarginininsulin, Insulin-äthylester. Sie sind weder durch Gelchromatographie, noch durch Ionenaustauscherchromatographie in nicht dissoziierend wirkenden Elutionsmittein von Insulin abtrennbar.
Geeignete Ionenaustauscher für die Reinigung von Insulin und Insulinanalogen sind die Handelsprodukte Dowex 1, QAE-Sephadex, Biogel DM, DEAE-Sephadex, Amberlyst A 21 und A 29, DEAE-Sepharose CL 6B, DEAE-Cellulose. Besonders gut eignen sich für die Reinigung von Insulin, Insulinanalogen und Insulinderivaten basische Ionenaustauscher auf Dextranbasis wie DEAE-Sephadex oder QAE-Sephadex.
Der Ionenaustauscherprozeß wird in einem gepufferten, wäßrigen Lösungsmittel durchgeführt, in dem nichtionische Detergentien aufgelöst sind
Als solche seien beispielsweise genannt:
Palmitylsorbitanpolyäthytenglykoläther,
Stearylsorbitanpolyäthylenglykoläther,
Oleylsorbitani_dyäthylenglykoläther,
NonylphenolpoIyglykoläKher
(10-30 MOL Athylenoxid/Mol Nonylphenol),
Polymerisationsprodukte aus Propylenoxid und
Äthylenoxid (10-80% Äthylenoxidanteil),
Fettalkoholpolyglykoläther und Polyglykol-
äther von synthetischen Fettalkoholen.
Von besonderem Vorteil sind Fettalkoholpolyglykol-
äther, da sie gut wirksam sind, leicht zu handhaben sind und keine UV-Absorption im Bereich der Absorption von aromatische Gruppen enthaltenden Peptiden zeigen, was die Erkennung der Peptide im Eluat erleichtert. Außerdem sind diese Verbindungen biologisch voll abbaubar, was ihre Verwendung im Hinblick auf die Umweltbelastung problemlos erscheinen läßt
Die Elutionsn.ittel enthatten immer eine Puffersubstanz, um den pH-Wert des Elutionsmittels zu regeln. Vorzugsweise wird bei einem konstanten pH-Wert gearbeitet Bei Verwendung eines Anionenaustauschers kann man pH-Werte zwischen 53 und 10 vorzugsweise zwischen 6 und 9 verwenden. Geeignete Puffersubstanzen sind literaturbekannt
Die Temperatur der lonenaustauscherchromatographie muß konstant gehalten werden und liegt zwischen 0 und 50°C vorzugsweise zwischen 15 und 300C.
Die zur Elution verwandten Lösungen enthalten außer den Puffersubstanzen und nichtionischen Detergentien noch einen Elektrolyten, vorzugsweise ein
« Neutralsalz wie NaCI in Konzentrationen zwischen 0,01 M und 0,5 M vorzugsweise zwischen 0,05 M und 0,3 M oder man eluiert mit einem Elektrolytgradienten durch kontinuierliches Zumischen eines elektrolythaltigen
Puffers zu dem EJutionspuffer ohne Elektrolyt, der ansonsten die gleiche Zusammensetzung hat, in der Weise, daß die Konzentration des verwendeten Elektrolyten in Abhängigkeit des Elqtionsvolumens steigt, und zwar vorzugsweise in linearer Abhängigkeit Die Endkonzentration an Elektrolyt liegt zwischen 0,1 M und 1 M, vorzugsweise zwischen 03 M und 0,8 M.
Die erfindungsgemäße Reinigung von Peptiden wird an den nachfolgenden Beispielen veranschaulicht
Beispiel 1
Es wird ein Puffer folgender Zusammensetzung hergestellt:
0,1 MTris-(hydroxyinethyl)-aminomethan
l%Genapor»SE150
(Fetialkoholpolyglykoläther)
Der pH-Wert wird mit HCl auf 7,0 eingestellt
Ein Teil des obigen Puffers wird mit 0,5 Mol/l NaCI versetzt 450 g [JEAE-Sephadex· A 25 werden in obigem Puffer gequollen und die Suspension anschließend in eine Säule von 0 5 cm und der Länge 100 cm gelfüllt Die Säule wird mit dem Puffer ins Gleichgewicht gebracht 5 g Insulin, das aus Citratpuffer kristallisiert wurde, werden in 75 ml des obigen Puffers (ohne NaCl) gellöst Der End-pH beträgt 83. Die klare Lösung wird auli die Säule gegeben und bei 25° C mit einer Geschwindigkeit von 320 ml/Std. mit obigem Puffer (pH 7,0) eluiert wobei ein linearer NaCl-Gradient in der Weise angelegt wird, daß die NaCl-Konzentration im Eluat bei Durchlau.' von 5,51 Puffer von 0 auf 033 M steigt Fraktionen von 22ml werdn gesammelt Im Eluat wird kontinuierlich die UV-Extinktion bei 278 nm gemessen und aufgezeichnet Der z> ntrale Teil des Insiulinpeaks (von 0,1 M-0,24 M NaCl) (1540 ml) wird gesammelt und mit 70 ml l%iger ZnCIrLösung versetzt. Das amorph ausgefällte Insulin wird abzentrifugiert und sodann in an sich bekannter Weise aus einem Aceton enthaltenden Citratpuffer kristallisiert
Die Ausbeute an reinem Insulin beträgt 3,76 g (75,2%).
Beispiel 2
IEs wird ein Puffer folgender Zusammensetzung hergestellt:
0,1 M Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan
0,12MNaCI
1 % Genapol· ZDM 110 (Polyglykoläther von
geradkettigen, synthetischen Fettalkoholen
(durchschnittliches Molekulargewicht 190)
mit 11 Mol Äthylenoxid/Mol Fettalkohol)
Der pH-Wert wird mit HCI auf 7,0 eingestellt.
13 g QAE-Sephadex* A 25 werden in obigen Puffer gequollen und die Suspension wird in eine Säule von 0 1,5 cm und der Länge 30 cm gefüllt Die Säule wird mit dem Puffer ins Gleichgewicht gebracht 300 mg Insulin, das nach der Kristallisation noch durch Gelchromatographie an Sephadex G 50 in an sich bekannter Weise von höhermolekularen Bestandteilen weitgehend befreit worden war, werden in 15 ml des obigen Puffers gelöst (End-pH: 8,2). Die klare Lösung wird auf die Säule gegeben und bei 250C mit einer Geschwindigkeit von 48 ml/Std. mit dem obigen Puffer (pH 7) eluiert. Fraktionen von 7 ml werden gesammelt. Im Eluat wird kontinuierlich die UV-Extinktion bei 278 nm gemessen und aufgezeichnet. Her zentrale Teil des Insulinpeaks (620 ml) wird gesammelt und mit 28 ml l%iger ZnCIrLösung versetzt Des amorph ausgefallene Insulin wird abzentrifugiert und sodann in an sich bekannter Weise aus einem Aceton enthaltenden Citratpuffer kristallisiert
Die Ausbeute an reinem Insulin beträgt 185 mg (61,6%).
Beispiel 3
Es wird ein Puffer folgender Zusammensetzung ίο hergestellt:
0,1 MTris-(hydroxymethyl)-aminomethan
2% Genapol· SE 150 (siehe Beispiel 1)
Der pH-Wert wird mit HCl auf 7,0 eingestellt
Anteile dieses Puffers werden mit 0,05 Mol/l, 0,1 Mol/l, 0,2 Mol/I und 03 Mol/l NaCl versetzt
450 g DEAE-Sephadex* A 25 werden im obigen Puffer mit 0,05 M NaCl gequollen und die Suspension
anschließend in eine Säule von 0 5 cm und der Länge 100 cm gefüllt Die Säule wird mit dem Puffer ins Gleichgewicht gebracht
5 g Insulin (siehe Beispiel 2) werden in 100 ml des obigen Puffers (0,05 M NaCl) gelöst (End-pH: 8,4), auf
die Säule aufgetragen und bei 25° C mit einer Geschwindigkeit von 290 ml/Std. eluiert. Es werden Fraktionen von 28 ml gesammelt Nach Durchlauf von 1,821 des Puffers mit 0,05 M NaQ werden 4,761 Puffer mit 0,1 M NaCl, 2^41 mit 0,2 M NaCl und schließlich 531 mit 03MNaCI aufgegeben. Die UV-Extinktion des
Eluats wird kontinuierlich gemessen und aufgezeichnet Die Hauptmenge des Insulins wird hier nach Aufgabe
des Puffers mit 03 M NaQ eluiert. Der zentrale Teil des
Insulinpeaks wird gesammelt (820 ml) und mit 37 ml
l%iger ZnCk-Lösung versetzt Der amorphe Niederschlag wird abzentrifugiert und das Insulin sodann in an sich bekannter Weise aus einem Aceton enthaltendem Citratpuffer kristallisiert
Die Ausbeute an reinem insulin beträgt 234 g
(56,8%).
Beispiel 4
Es wird ein Puffer folgender Zusammensetzung « hergestellt:
0,1 M Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan
5% Genapol· SE 100(Fettalkohol-
polyglykoläther)
so Der pH-Wert wird mit HCl auf 7,0 eingestellt.
Ein Teil dieses Puffers wird mit 0,5 Mol/l NaCI versetzt
13 g DEAE Sephadex· A 25 werden im obigen Puffer gequollen (ohne NaCI) und die Suspension anschließend in eine Säule von 0 13 cm und der Länge 30 cm gefüllt Die Säule wird mit dem Puffer ins Gleichgewicht gebracht 300 mg Insulin (siehe Beispiel 2) werden in 15 ml des obigen Puffers (ohne NaCI) gelöst (End-pH:
83). Die klare Lösung wird auf die Säule aufgetragen und bei 25° C mit einer Geschwindigkeit von 48 ml/Std. eluiert, wobei ein linearer NaCl-Gradient in der Weise angelegt wird, daß die NaCl-Konzentration im Eluat bei Durchlauf von 500 ml Puffer von 0 auf 03 M ansteigt. Es
ό5 werden Fraktionen von 7 ml gesammelt. Im Eluat wird kontinuierlich die UV-Extinktion bei 278 nm gemessen und aufgezeichnet. Der zentrale Teil des Insulinpeaks (von 0,09 M-0,22 M NaCl) (100 ml) wird gesammelt
und rait 4,6 mt 1%iger ZnClj-Lösung versetzt Das amorph ausgefällte Insulin wird abzentrifugiert und sodann in an sich bekannter Weise aus einem Aceton enthaltenden Citratpuffer kristallisiert.
Die Ausbeute an reinem Insulin beträgt 160 mg (533%).
Beispiel 5
Wie Beispiel 4 nur unter Verwendung von 1% Arkopal* N 100 (Nonylphenolpolyglykoläther mit 10 Mol Athylenoxid/Mol Nonylphenol) als Detergent
üie kontinuierliche UV-Messung muß wegen der Eigenabsorption des Arkopal N 100 als Differenzmessung durchgeführt werden.
Die Ausbeute an reinem Insulin beträgt 214 mg (713%).
Beispiel 6
Wie Beispiel 4 nur unter Verwendung von 2% Arkopal· N 300 (Nonylphenolpolyglykoläther mit 30MoI Äthylenoxid/Mol Nonylphenol) als Detergent und von QAE-Sephadex* A 25 als Ionenaustauscher.
Die Ausbeute an reinem Insulin beträgt 156 reg (52%).
Die kontinuierliche UV-Messung muß wegen der Eigenabsorption des Arkopal N 300 als Differenzmessung durchgeführt werden.
Die in den Beispielen verwandten Detergentien sind Handelswaren der Firma Hoechst AG.
Die in den Beispielen verwandten Ionenaustauscher sind Handelswaren der Firma Pharmacia Fine Chemicals.

Claims (1)

  1. Patentanspruch:
    Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten durch Chromatographie in wäßrigen, gepufferten Lösungsmitteln an Ionenaustauschern, dadurch gekennzeichnet, daß man die Chromatographie an basischen Ionenaustauschern mit gepufferten Lösungsmitteln durchführt, in denen nichtionische Detergentien gelöst sind
DE2629568A 1976-07-01 1976-07-01 Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten Expired DE2629568C3 (de)

Priority Applications (22)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2629568A DE2629568C3 (de) 1976-07-01 1976-07-01 Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten
NLAANVRAGE7707037,A NL188804C (nl) 1976-07-01 1977-06-24 Werkwijze voor het zuiveren van insuline, analoga en derivaten daarvan.
ES460099A ES460099A1 (es) 1976-07-01 1977-06-25 Procedimiento para la purificacion de peptidos de alto peso molecular.
GR53823A GR78333B (de) 1976-07-01 1977-06-28
CH792577A CH626051A5 (de) 1976-07-01 1977-06-28
IT25221/77A IT1080658B (it) 1976-07-01 1977-06-29 Processo per la purificazione di peptidi macromolecolari
US05/810,979 US4129560A (en) 1976-07-01 1977-06-29 Process for the purification of high molecular weight peptides using non-ionic detergents
NZ184516A NZ184516A (en) 1976-07-01 1977-06-29 Purification of high molecular weight peptides by ion exchange chromatography
FI772023A FI61490C (fi) 1976-07-01 1977-06-29 Foerfarande foer rening av insulin dess analoger och derivat
PT66751A PT66751B (de) 1976-07-01 1977-06-30 Verfahren zur reinigung von hoher molekularen peptiden
NO772318A NO145692C (no) 1976-07-01 1977-06-30 Fremgangsmaate til rensning av insulin, dets analoge og derivater ved kromatografi
SE7707612A SE440507B (sv) 1976-07-01 1977-06-30 Forfarande for kromatografisk rening av insulin, dess analoger och derivat
AT466377A AT352922B (de) 1976-07-01 1977-06-30 Verfahren zur reinigung von hoehermolekularen peptiden
IE1358/77A IE44766B1 (en) 1976-07-01 1977-06-30 Process for the purification of high molecular weight peptides
CA000281825A CA1086308A (en) 1976-07-01 1977-06-30 Process for the purification of high molecular weight peptides
ZA00773964A ZA773964B (en) 1976-07-01 1977-06-30 Process for the purification of high molecular weight peptides
DK293277A DK149201C (da) 1976-07-01 1977-06-30 Fremgangsmaade til rensning af insulin, dets analoge og derivater
AU26604/77A AU509110B2 (en) 1976-07-01 1977-06-30 Purification of high molecular weight peptides
GB27395/77A GB1582056A (en) 1976-07-01 1977-06-30 Process for the purification of high molecular weight peptides
FR7720310A FR2356630A1 (fr) 1976-07-01 1977-07-01 Procede de purification de peptides de haut poids moleculaire
JP7797677A JPS535101A (en) 1976-07-01 1977-07-01 Purifying method of high molecular peptides
BE179012A BE856385A (fr) 1976-07-01 1977-07-01 Procede de purification de peptides de haut poids moleculaire

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2629568A DE2629568C3 (de) 1976-07-01 1976-07-01 Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DE2629568A1 DE2629568A1 (de) 1978-01-12
DE2629568B2 true DE2629568B2 (de) 1980-09-04
DE2629568C3 DE2629568C3 (de) 1981-09-10

Family

ID=5981950

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE2629568A Expired DE2629568C3 (de) 1976-07-01 1976-07-01 Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4129560A (de)
JP (1) JPS535101A (de)
AT (1) AT352922B (de)
AU (1) AU509110B2 (de)
BE (1) BE856385A (de)
CA (1) CA1086308A (de)
CH (1) CH626051A5 (de)
DE (1) DE2629568C3 (de)
DK (1) DK149201C (de)
ES (1) ES460099A1 (de)
FI (1) FI61490C (de)
FR (1) FR2356630A1 (de)
GB (1) GB1582056A (de)
GR (1) GR78333B (de)
IE (1) IE44766B1 (de)
IT (1) IT1080658B (de)
NL (1) NL188804C (de)
NO (1) NO145692C (de)
NZ (1) NZ184516A (de)
PT (1) PT66751B (de)
SE (1) SE440507B (de)
ZA (1) ZA773964B (de)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4701521A (en) * 1978-07-17 1987-10-20 The Trustees Of Boston University Method of effecting cellular uptake of molecules
US4783441A (en) * 1979-04-30 1988-11-08 Hoechst Aktiengesellschaft Aqueous protein solutions stable to denaturation
US4292041A (en) * 1979-11-02 1981-09-29 Merck & Co., Inc. Surfactant assay
US4459226A (en) * 1982-02-26 1984-07-10 Eli Lilly And Company Process for recovering insulin
US4839341A (en) * 1984-05-29 1989-06-13 Eli Lilly And Company Stabilized insulin formulations
DE3511269A1 (de) * 1985-04-12 1986-10-09 Veb Berlin-Chemie, Ddr 1199 Berlin Verfahren zur reinigung von insulin
JPS6230956A (ja) * 1985-07-31 1987-02-09 Sumitomo Chem Co Ltd 合成ペプチド類に含有されるイオン類の分析法
DE3726655A1 (de) * 1987-08-11 1989-02-23 Hoechst Ag Verfahren zur isolierung basischer proteine aus proteingemischen, welche solche basischen proteine enthalten
JPH07119767B2 (ja) * 1989-03-07 1995-12-20 積水化学工業株式会社 梅毒検査用試薬及びその製造法
DE4028120C2 (de) * 1990-09-05 1996-09-19 Hoechst Ag Verfahren zur Reinigung von Insulin und/oder Insulinderivaten
ATE150032T1 (de) * 1991-12-18 1997-03-15 Hoechst Ag Verfahren zur gewinnung von insulinhaltigen lösungen
US6451987B1 (en) * 1999-03-15 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Ion exchange chromatography of proteins and peptides
US6444788B1 (en) 1999-03-15 2002-09-03 Novo Nordisk A/S Ion exchange chromatography of GLP-1, analogs and derivatives thereof
CA2532340A1 (en) * 2003-08-21 2005-03-03 Novo Nordisk A/S Separation of polypeptides comprising a racemized amino acid
US20080090753A1 (en) 2004-03-12 2008-04-17 Biodel, Inc. Rapid Acting Injectable Insulin Compositions
US20080096800A1 (en) * 2004-03-12 2008-04-24 Biodel, Inc. Rapid mucosal gel or film insulin compositions
US20080085298A1 (en) * 2004-03-12 2008-04-10 Biodel, Inc. Rapid Mucosal Gel or Film Insulin Compositions
US8084420B2 (en) 2005-09-29 2011-12-27 Biodel Inc. Rapid acting and long acting insulin combination formulations
US7713929B2 (en) * 2006-04-12 2010-05-11 Biodel Inc. Rapid acting and long acting insulin combination formulations
AU2007238114B2 (en) 2006-04-12 2010-10-14 Biodel, Inc. Rapid acting and long acting insulin combination formulations
US9060927B2 (en) 2009-03-03 2015-06-23 Biodel Inc. Insulin formulations for rapid uptake
AU2012213432B2 (en) 2011-02-01 2016-10-13 Novo Nordisk A/S Purification of insulin
CA2838814A1 (en) 2011-08-25 2013-02-28 F.Hoffmann-La Roche Ag Cation and anion exchange chromatography method
PL2748181T3 (pl) 2011-09-30 2016-08-31 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Sposób oczyszczania rozszczepionej proinsuliny
CN103130868B (zh) * 2013-03-12 2014-09-17 合肥天麦生物科技发展有限公司 一种蛋白质或多肽的纯化方法
US10155799B2 (en) 2014-07-21 2018-12-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Chromatography process for purification of insulin and insulin analogs

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3616235A (en) * 1968-05-16 1971-10-26 Forsch Die Garungsindustrie En Process for precipitating enzymes and enzymatic inactive proteins in solution with synthetic tanning materials
US3607858A (en) * 1970-03-31 1971-09-21 American Cyanamid Co Process for preparing lyophilized human blood proteins such as gamma globulin in the presence of a nonionic surfactant
US3683939A (en) * 1970-05-28 1972-08-15 Wilson Pharm & Chem Corp Proteinaceous cosmetic material for hair conditioning
US3907676A (en) * 1970-07-28 1975-09-23 Novo Terapeutisk Labor As Process for purifying insulin
JPS5328989B2 (de) * 1974-05-27 1978-08-17
US4076800A (en) * 1975-01-13 1978-02-28 The Procter & Gamble Company Protein-containing detergent compositions for protecting keratinous materials

Also Published As

Publication number Publication date
IT1080658B (it) 1985-05-16
ATA466377A (de) 1979-03-15
ES460099A1 (es) 1978-05-01
US4129560A (en) 1978-12-12
BE856385A (fr) 1978-01-02
FI772023A (de) 1978-01-02
IE44766B1 (en) 1982-03-24
CH626051A5 (de) 1981-10-30
IE44766L (en) 1978-01-01
FR2356630A1 (fr) 1978-01-27
NL188804B (nl) 1992-05-06
JPS535101A (en) 1978-01-18
DK149201B (da) 1986-03-10
GB1582056A (en) 1980-12-31
SE7707612L (sv) 1978-01-02
AU2660477A (en) 1979-01-04
DE2629568C3 (de) 1981-09-10
CA1086308A (en) 1980-09-23
DK293277A (da) 1978-01-02
GR78333B (de) 1984-09-26
NO145692B (no) 1982-02-01
JPS6126560B2 (de) 1986-06-20
NZ184516A (en) 1979-10-25
ZA773964B (en) 1978-05-30
AU509110B2 (en) 1980-04-17
SE440507B (sv) 1985-08-05
DE2629568A1 (de) 1978-01-12
NO145692C (no) 1982-05-12
PT66751B (de) 1979-01-22
FR2356630B1 (de) 1983-10-07
NO772318L (no) 1978-01-03
AT352922B (de) 1979-10-10
DK149201C (da) 1986-08-04
NL188804C (nl) 1992-10-01
FI61490C (fi) 1982-08-10
FI61490B (fi) 1982-04-30
PT66751A (de) 1977-07-01
NL7707037A (nl) 1978-01-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE2629568C3 (de) Verfahren zur Reinigung von Insulin, seinen Analogen und Derivaten
DE2954076C2 (de)
EP0305760B1 (de) Verfahren zur Isolierung basischer Proteine aus Proteingemischen
DE2600971A1 (de) Therapeutisches insulinpraeparat sowie verfahren zur herstellung eines stabilen insulinpraeparats mit dauerwirkung.
EP0046979B1 (de) Analoga des Insulins
DE3229674C2 (de)
CH652030A5 (de) Verfahren zur herstellung eines faktor-viii-hochkonzentrates aus blutplasma.
WO1991010677A1 (de) Verfahren zur anreicherung bzw. reinigung von biomolekülen
DE3236126A1 (de) Verfahren zur herstellung von zur intravenoesen verabreichung geeignetem (gamma)-globulin
DD148298A5 (de) Verfahren zur reinigung von insulin
DE1940130C2 (de) Verfahren zur Reinigung von Insulin, nach diesem Verfahren gereinigtes Insulin und dessen Verwendung
DE1000390C2 (de) Verfahren zur Herstellung von S-Acetyl-glutathion
DE2428955C3 (de) Verfahren zur Abtrennung der enzymatischen Komponente mit in vivo antikoagulierender und in vitro koagulierender Wirkung aus dem Gift der Schlange Ancistrodon rhodostoma und daraus hergestellte Mittel
DE1695308C3 (de) Verfahren zur Isolierung von Adenosintriphosphat
DE2259404A1 (de) Verfahren zur gewinnung von orgotein aus tierischem gewebe
DE1966573C3 (de) Verfahren zur Reinigung von Insulin
EP0083734B1 (de) Kristallines Human-Leukocyten-Interferon
DE4318235B4 (de) Verfahren zur Herstellung von hochreinen Deferoxamin-Salzen
DE2154557A1 (de) Verfahren zur reinigung und kristallisation von kaudinogease (kallikrein)
DE2839670A1 (de) Verfahren zur herstellung von reinem kristallinem cefamandol
DE2023447A1 (de) Insulinderivate und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP0437846A2 (de) Decaplaninsalzlösungen, deren Herstellung und deren Verwendung, sowie kristalline Decaplaninsalze, deren Herstellung und deren Verwendung
AT231062B (de) Verfahren zur Herstellung von Insulinkristallsuspensionen mit protrahierter Wirkung
DE1617661A1 (de) Verfahren zur Herstellung hochreiner Gonadotropine auf chromatographischem Wege
DE3919852A1 (de) Mini-proinsulin, seine herstellung und verwendung

Legal Events

Date Code Title Description
OD Request for examination
C3 Grant after two publication steps (3rd publication)