DE1905472A1

DE1905472A1 - Verfahren zur Herstellung von Fettsaeureestern von Zuckern

Info

Publication number: DE1905472A1
Application number: DE19691905472
Authority: DE
Inventors: Takeo Suzuki; Katsunobu Tanaka
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1968-02-01
Filing date: 1969-01-31
Publication date: 1970-10-01
Also published as: GB1211674A; DE1965974A1; DE1965972A1; FR2001118A1; DE1965975A1; DE1965973A1; US3637461A

Description

K 880

Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd., Tokyo, Japan

Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern,

Zusammenfassung der Erfindung;

Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von'Zuckern durch Fermentation, wobei ein Kohlenwasserstoffe assimilierender Organismus unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Eahrmedium gezüchtet wird, das als Hauptkohlenstoffquelle Kohlenwasserstoffe enthält. Es werden gute Ausbeuten erzielt unter Verwendung von η-Paraffinen mit 6-25 Kohlenstoffatomen oder von Kerosin als Kohlenwasserstoffe im Medium. Beispiele für geeignete Mikroorganismen sind solche, die zu den Gattungen Arthrobacter, Brevibacterium, Micrococcus, Corynebacterium, Mycobacterium, Candida oder Aspergillus gehören.

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern. Insbesondere betrifft sie ein Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern durch Fermentation und speziell durch Fermentation mit Hilfe von Mikroorganismen, die zur Nutzbar-

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machung von Kohlenwasserstoffen imstande sind.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wurde gefunden, daß. Mikroorganismen, die mit Hilfe der· Verwertung bzw. Nutzbarmachung von Kohlenwasserstoffen wachsen können, im allgemeinen in ihren Zellen oder an der Oberfläche der Zellen oberflächenaktive Substanzen aufweisen. "Ferner wurde durch Extraktion und Identifizierung dieser Substanzen festgestellt, daß es sich um die Fettsäureester von verschiedenen Zuckern handelt. Ester von Zuckern werden im großen Umfange als oberflächenaktive Mittel und in verschiedenen Industriezweigen verwendet. Demzufolgejbesteht ein dringendes Bedürfnis nach einem Permentationsverfahren zur Gewinnung der Fettsäureester von Zuckern auf wenig kostspielige Weise und innerhalb kurzer Zeit.

Ein Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern.

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern durch Fermentation, das in wirksamer und verhältnismäßig einfacher Weise durchgeführt werden kann. .

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern, das vorteilhaft in industriellem Maßstabe, bei niedrigen Kosten und unter Erzielung hoher Produktausbeuten ausgeführt werden kann.

Ein weiteres Ziel der Erfindung sind Fettsäureester von Zuckern.

Diese und weitere Ziele sowie Vorteile der Erfindung gehen für den Fachmann aus der vorliegenden Beschreibung und den Patentansprüchen hervor. , .

Als Ergebnis von Forschungsarbeiten über die Produktion verschiedener Zuckerester auf fermentativem Wege unter Verwendung

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von Mikroorganismen und wenig kostspieligen Ausgangsmaterialien ergab'sich gemäß der vorliegenden Erfindung, daß erhebliche Mengen an Fettsäureestern von Zuckern in der Fermentationsflüssigkeit produziert und angesammelt werden, wenn man zur Verwertung von Kohlenwasserstoffen befähigte Mikroorganismen in einem wässrigen Nährmedium unter aeroben Bedingungen züchtet. Eine große Vielzahl von Mikroorganismen kann für die vorliegende Erfindung benutzt werden. Wie oben angegeben, sollten die Mikroorganismen imstande sein, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren und nutzbar zu machen. Als Beispiele für Mikroorganismen, die zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens geeignet sind, seien die folgenden genannt:

Arthrobacter paraffineus

Arthrobacter roseoparaffinus

Arthrobacter hydrocarboclastus Arthrobaeter simplex

Brevibacterium ketoglutamicum Kicroc.occus paraffinolyticus

Corynebacterium hydrocarboclastus Corynebacterium pseudodiphtheriticum y.ycobacterium smegmatis

Candida lipolytica

Aspergillus oryzae '

Wie aus der vorstehenden Aufzählung hervorgeht, existieren weit verbreitet - unabhängig von Gattung und Familie Kikrοorganismen, die Fettsäureester von Zuckern unter Verwendung von Kohlenwasserstoffen als Hauptkohlenstoffquelle produzieren und anreichern. Für die Züchtung der erfindungsgemäßen Stämme kann -entweder ein synthetisches oder ein natürliches Nährmedium verwendet werden, solange es die für das Wachstum der verwendeten« Stämme erforderlichen Nährstoffe enthalte Perartige Nährstoffe sind bekannt und umfassen Substanzen, wie eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle, anorganische Verbindungen und dgl., die von den verwendeten Mikroorganismen in angemessenen Kengen nutzbar gemacht werden. ■■ - . 0C9S i0> 17 19

BAD ORIGINAL

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung wird die Fermentation in einem wässrigen Nährmedium durchgeführt, das einen Kohlenwasserstoff oder ein Kohlenwasserstoffgemisch als Hauptkohlenstoffquelle enthält. Zu derartigen Kohlenwasserstoffen gehören geradkettige und verzweigtkettige Paraffine (Alkane) mit 6-25 Kohlenstoffatomen, wie z.B. η-Hexan, n-Octan, n-Decan, n-Dodecan, n-Hexadecan, n-Eicosan, Isooctan usw., Cycloparaffine, wie Cyclohexan und Cyclooctan, geradkettige und verzweigtkettige Olefine, wie Hexen-1, Octen-1, Octen-2 usw., Cycloolefine, wie Cyclohexen, aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol, die isomeren Xylole usw. sowie Gemische davon und außerdem Kohlenwasserstoffe, die sich von Erdöl ableiten, z.B. Kerosin, Leichtöle, Schweröle, Paraffinöle usw.. Zusammen mit dem Kohlenwasserstoff können in dem Fermentationsmedium geringe Mengen anderer Kohlenstoffquellen verwendet werden, wie Kohlenhydrate, z.B. Glucose, Fructose, Maltose, Sucrose, Stärke, Stärkehydrolysate, Melassen usw., oder irgendeine andere geeignete Kohlenstoffquelle, wie organische Säuren, z.B. Essigsäure, Milchsäure usw.. Diese Substanzen können entweder einzeln oder im Gemisch von zweien oder mehreren verwendet werden. ..-.-.-

Als Kohlenstoffquelle können verschiedene Arten anorganischer oder organischer Salze oder Verbindungen verwendet werden, wie Harnstoff, wässriges Ammoniak oder .Ammoniumsalze, z.B. Ammonium chlor id, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Ammoniumacetat, Ammoniumphosphat usw., oder natürliche stickstoffhaltige Substanzen, wie Maisquellwasser, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton, Fischmehl, Bouillon, Caseinhydrolysate, Gasaminosäure, Fischpreßsäfte, Reiskleieextrakt usw.. Auch diese Substanzen können entweder einzeln oder in Kombinätiorf von zweiern oder mehreren verwendet werden.

Anorganische Verbindungen, die dem Züchtungsmedium hinzugesetzt werden können, sind z.B. Magnesiumsulfat, Natriumphosphat,. Kaliumdihydrogenphosphat, KaliummonohydrogenphOsphat, Eisensulfat, Kanganchlorid, Kaliumchlorid, iratriumchlorid, Zinksulfat usw.. :■·■ 009840/1719: ;^{; ;}

Außerdem kann es bei bestimmten Stämmen noch notwendig sein, zu dem Züchtungsmedium bestimmte essentielle Nährstoffe hinzuzufügen, -wie Aminosäuren, z.B. Asparaginsäure, Threonin, Methionin usw. und/oder Vitamine, z.B. Biotin, Thiamin, Cobalamin und dgl..

Für die Durchführung der erfindungsgemäßen Züchtung wird das Züchtungsmedium sterilisiert, und dann wird der zu verwendende Mikroorganismus in dieses eingeimpft. Die Züchtung wird unter aeroben Bedingungen durchgeführt, z.B. als aerobe Schüttelkultur oder unter Rühren und Belüften einer Submerskultur, und zwar bei einer Temperatur von beispielsweise etwa 25 bis 4O⁰C und bei einem pH-Wert von beispielsweise etwa 4 bis 9. Während der Züchtung wird der pH-Wert auf den angegebenen Bereich (vorzugsweise pH 6 bis 8) eingestellt, und zwar durch Zusatz z.B. von Harnstofflösung, wässrigem Ammoniak oder einer Ammoniumcarbonatlösung zu dem Medium. Die Züchtung ist üblicherweise innerhalb von 2 bis 5 Tagen vollständig abgelaufen. In der Praxis ist die Züchtung beendet, wenn die Messung der Gesamtester einen Maximalwert ergibt.

Das Fettsäureesterprodukt der Zucker sammelt sich vornehmlich in der öligen Schicht der Züchtungsflüssigkeit an. Demzufolge wird nach vollständigem Ablauf der Züchtung der wässrige Anteil der unteren Schicht der Fermentatiohsflüssigkeit entfernt, indem man die Fermentationsflüssigkeit ruhig in einem kalten Raum stehen läßt oder indem man eine Trennung durch Zentrifugieren anwendet. Eine gemischte Chloroform-Methanol-Lösung (1:1) wird zu der oberen Schicht hinzugefügt, um die Gesamtmenge an Lipoiden darauf zu entfernen. Das Lösungsmittel wird dann unter vermindertem Druck bei 40⁰C entfernt und. der ölige Anteil der oberen Schicht wird durch Zentrifugen-Abtrennung gewonnen. Die so erhaltene Ölschicht wird durch eine Silicagelsäule hindurchgeleitet, und es wird eine Elution mit Hexan vorgenommen, umd die vorhandenen η-Paraffine zu entfernen. Anschließend werden polare Verbindungen durch Elution mit Chloroform entfernt. Die Fettsäureester von Zuckern werden

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erhalten nach Durchführung, einer Elution mit einem Chloroform-Methanol-Gemisch, Auffangen der jeweiligen Fraktionen, Entfernen des Lösungsmittels, Hinzufügen von kaltem Aceton, Sammeln der erhaltenen Niederschläge und schließlich Reinigen mit Hilfe von Aceton.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung erläutern, aber nicht beschränken. Wenn nicht anders angegeben, beziehen sich die Prozentangaben auf das Gewicht pro Liter Fermentationsflüssigkeit. Obwohl hier spezielle Mikroorganismenstamme als Beispiele angegeben-werden, wird darauf hingewiesen, daß 'auch irgendwelche anderen Mikroorganismen oder deren Mutanten mit den vorstehend beschriebenen Eigenschaften Verwendung finden können. ·

Beispiel 1

Arthrobacter paraffineus ATGC 15591 wird in einem-einen.pH-Wert von 7,2 vor dem Sterilisieren aufweisenden Einsaatmedium, das 1,0 io Fleischextrakt, 1,0 °/o Pepton und 0,3 $ Natriumchlorid enthält, unter aerobem Schütteln 24 Stunden lang, gezüchtet. Die erhaltene Einsaatkultur wird in einem Verhältnis von 10 Vol.-io in 3,0 Liter eines Fermentationsmediums eingeimpft, das sich in einem 5-Liter-Jar-Fermentor befindet, und folgende Zusammensetzung aufweist:

0,2 %	KgHPO₄	7H₂O
0,1 %	MgSO₄ ·	4H₂O
0,002 io	MnSO₄ ·	7H₂O
0,02 io	FeSO₄ ·	7HgO
ο,οοι ic	ZnSO₄ ·	2H₂O
1 mg/1	CuCl₄ ·
1»ο io	NH₄NO₃	llwas
0,1 ?°	Maisque

Die Züchtung wird bei 3O⁰C unter Rühren mit einer Rührgeschwindigkeit von 600 rpm und unter Belüftung mit sterilisierter Luft

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D}it einer Durchsatzgeschviindigkeit von 1 Liter pro Liter pro Minute 80 Stunden lang durchgeführt. Zu Beginn der Züchtung werden dem Züchtungsmedium 600 ml eines Gemisches von dl - C₁₀ η-Paraffinen hinzugefügt, und der pH-Wert des Mediums wird mit wässrigem Ammoniak auf 6,8 bis 7,5 eingestellt. Nach Beendigung der Züchtung werden 2,5 Liter der Fermentationsflüssigkeit mittels einer Zentrifuge abgetrennt und der wasserlösliche Teil der unteren Schicht wird durch Absaugen entfernt. Zu 0,4 Liter des oberen Schicht-Anteils wird die fünffache Menge eines Chloroform-Methanol-Gemisches (1;1) hinzugefügt. Nach 3Ö-minütigem Extrahieren unter Rühren bei Raumtemperatur wird der obere Schichtanteil filtriert. Die erhaltenen Niederschläge werden mit dem oben genannten Lösungsmittel gewaschen. Das Filtrat und die gewaschene Lösung werden vermischt und auf ein Volumen von 3,2 Litern eingestellt. Dann wird das darin enthaltene Lösungsmittel bei 40 C unter vermindertem Druck entfernt, und die Lösung wird erhitzt und mittels einer Zentrifuge abgetrennt. Die obere Schicht wird abgenommen und η-Hexan zu derselben hinzugefügt. Dann wird die erhaltene Lösung auf 250 ml verdünnt und durch eine Sllicagelsäule (5,2 cm χ 20 cm) hindurchgeschickt. Danach wird η-Hexan durch die Säule laufen gelassen, um alle zurückgebliebenen η-Paraffine auszuwaschen. Sodann wird Chloroform durch die Säule geleitet, um nicht-polare Substanzen zu entfernen. Nach Sammlung der Fraktionen (600 ml), die mit dem Chloroform-Methanol-Gemisch (95:5) eluiert worden waren, Entfernen des Lösungsmittels bei 4O⁰C unter vermindertem Druck, Hinzufügen von warmem Aceton zwecks Auflösung des Gemisches und Stehenlassen des Gemisches unbewegt in einem kalten Raum wird ein Niederschlag mit gelatinöser Konsistenz erhalten. Wenn man das Auflösen mit Aceton und das Ausfällen in einer ähnlichen Weise wie oben beschrieben wiederholt, werden 5,9 g einer fahlgelben geleeartigen Substanz erhalten.

Als Ergebnis verschiedener IdentifizierungsUntersuchungen wurde festgestellt, daß das erhaltene Produkt ein Gemisch von Estern ist, die eine Esterbindung je 1 Molekül Glucose und ■■-■■'· DG 9 Bi 0 / 1 7 1 9

2 Esterbindungen je 1 Molekül Trehalose mit einer höheren Fettsäure (Arthronsäure), welche Hydroxylgruppen in der ß-Stellung und eine Kettenverzweigung in der α-Stellung besitzt, aufweisen. Das Produkt besitzt die Eigenschaft, zur Dispergierung von Gemischen aus Wasser und Mineralöl oder Gemischen aus Wasser und η-Paraffinen außergewöhnlich wirksam geeignet" zu sein.

Beispiel 2

Corynebacterium hydrocarboclastus ATCC 15592 wird in demselben . Züchtungsmedium und unter den gleichen Bedingungen wie in Beispiel 1 beschrieben gezüchtet, mit der. Abwandlung, daß ein . C₁₁ - C₁. n-Paraffin-Gemisch als Kohlenstoffquelle verwendet wird. Die Züchtung wird in einem 5-Liter-Jar-Fermentor ausgeführt. Nach 72-stündiger Züchtungsdauer werden 2,3 Liter der erhaltenen Züchtungsflüssigkeit in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 behandelt. Demzufolge werden 0,65 Liter eines' Ölschicht-Anteils erhalten. 4,5 Liter eines Gemisches aus Äthanol und Äther (2:1) werden hinzugefügt und nach ausreichendem Mischen wird die Lösung filtriert. Es werden 5»1 Liter der orangegelben Extraktionslösung auf 40 C unter vermindertem Druck erhitzt, uin das Lösungsmittel" aus derselben zu entfernen und, nachdem-die restliche Lösung erhitzt worden ist, wird die durchsichtige Lösung der oberen Schicht durch Zentrifugen-Abtrennung gewonnen. Anschließend wird eine Säuienchromatographie, wie in Beispiel 1 beschrieben, durchgeführt. Als Ergebnis werden 3,6 g des Trehaloseesters einer Fettsäure mit der experimentellen Formel CpQH.^Op als einzelne Substanz abgetrennt. Außerdem werden 0,2 g eines F-ettsäureesters der Glucose abgetrennt.

Beispiel 3 -.

Micrococcüs epidermidis ATCC 155 wird in einem Kulturmedium, welches 2 % Sorbit, 1 % Pepton, -1 f* Fleischextrakt und 0,3 ^ Natriumchlorid enthält, unter 24-stündigem aerobem Schütteln und Verwendung eines C^₂ - G-jc -Fraktionen enthaltenden n-Paraffingemisches als Kohlenstoffquelle^r in der gleichen Weise wie in Beispiel 1 gezüchtet. Die erhaltene Einsaat-Kultur wird im Verhältnis von 10 Vol.-4j in ein Eüchtungsmedium eingeimpft, das

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die folgende Zusammensetzung besitzt: 10 °/o Kerosin
0,2 /ο K₂HPO₄ '

0,2 io KH₂PO₄
0,1 io MgSO₄ · 7H₂O
0,005 Io MnSO₄ · 4H₂O
0,01 io FeSO₄ · 7H₂O
1 mg/1 CuSO₄ · 5H₂O .
1,0 ^a/o (ΪΓΗ. )_oS0,
0,1 $> Maisquellwasser
20 v/l Thiamin

Der pH-Wert des Mediums wird vor dem Sterilisieren auf 7,5 eingestellt. Die Züchtung wird unter aerobem Schütteln der Kultur bei 3O⁰C in einem 5-Liter-Jar-Fermentor gemäß der Arbeitsweise von Beispiel 1 durchgeführt. Die Gewinnung und Reinigung des Produktes geschieht gemäß der Arbeitsweise von Beispiel 2. Als Ergebnis werden 6,3 g eines Zucker-Ester-Gemisches mit der Esterbindung von Trehalose als Zuckerkomponente und 2 Molen Arthronsäure erhalten.

Beispiel 4

Mycobacterium sp. ATCC 12297 wird als Einsaat-Mikroorganismus verwendet und in einem Einsaatmedium gezüchtet, das durch Zusatz von 5 % η-Paraffinen zu der Zusammensetzung des Einsaatmediums gemäß Beispiel 2 hergestellt worden ist. Die Einsaatkultur wird unter aerobem Schütteln 24 Stunden lang gezüchtet. Die erhaltene Einsaatkultur wird in das Fermentationsmedium gemäß Beispiel 1 eingeimpft und auch unter den in Beispiel 1 beschriebenen Bedingungen gezüchtet. Nach Beendigung der Züchtung nach vier Tagen werden 2,3 g des Trehaloseesters einer Monocarbonsäure mit der experimentellen Formel C^₂Hg₄O₂ aus 1,6 Liter der Fermentationsflüssigkeit gewonnen.

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Beispiel 5

Arthrobacter roseoparaffirnis ATCC 15584 wird 72 Stunden lang gemäß der in Beispiel 3 beschriebenen Arbeitsweise gezüchtet. Aus der erhaltenen Züchtungsflüssigkeit werden 1,2 g pro Liter des Stearinsäurediesters der Trehalose, 0,3 g pro Liter des Arthronsäuremonoesters der Glucose und 1,3 g eines Gemisches von Stearinsäuremono- und triestern der Sucrose erhalten.

Beispiel 6 ■ .

Beispiel 4 wird wiederholt mit der Abwandlung, daß Micro coccus paraffinolyticüs ATCC 15582 anstelle von Mycobacterium sp. ATCC 12297 als Einsaatstamm verwendet wird, wobei 3,5 g des Trehaloseesters einer Monocarbonsäure mit der experimentellen Formel Cz₂Hg^O₂ aus 1,6 Liter der erhaltenen Züchtungsflüssigkeit gewonnen werden.

Es ist ersichtlich, daß die Erfindung auf verschiedene Weise, variiert werden kann. Derartige Variationen und Modifikationen sollen nicht als Abweichung von dem Erfindungsgegenstand angesehen werden, sondern gehören zum Geltungsbereich der vorliegenden Erfindung.

Patentansprüche:

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Claims

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Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Kohlenwasserstoffe assimilierenden Mikroorganismus, der zur Produktion dieser Ester imstande ist, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Nährmedium züchtet, das einen Kohlenwasserstoff oder ein Kohlenwasserstoffgemisch als Hauptkohlenstoffquelle enthält, und daß man die Fettsäureester in der erhaltenen Züchtungsflüssigkeit anreichert.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kohlenwasserstoff ein η-Paraffin mit 6 bis 25 Kohlenstoffatomen verwendet.

3- Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kohlenwasserstoff Kerosin verwendet.

4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Mikroorganismus verwendet, der zu einer der folgenden Gattungen gehört Arthrobacter, BreVibacterium, Microeoccus, Corynebacterium, Mycobacterium, Candida oder Aspergillus.

5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Züchtung bei einer Temperatur von etw bei einem pH-Wert von 4 bis 9 durchführt.

die Züchtung bei einer Temperatur von etwa 25 bis 40 G und

Verfahren^, zur Herstellung von Fettsäureestern von Zuckern, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Kohlenwasserstoff assimilierenden Mikroorganismus der zur Produktion dieser Ester imstande ist und zu einer der Gattungen Arthrobacter, Brevibacterium, Micrococcus, Corynebacterium, Mycobacterium, Candida oder Aspergillus gehört, unter aeroben Bedingungen bei einer Temperatur von etwa 25 bis 40⁰C und bei einem pH-Wert von etwa 4 bis 9 in einem wässrigen Nährmedium züchtet, das einen Kohlenwasserstoff oder ein Kohlenwasserstoff gemisch als Hauptkohlenstoffquelle enthält, und daß man die Fettsäureester in der erhaltenen Kulturflüssigkeit anreichert und diese Fettsäureester aus derselben gewinnt.

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7. Verfahr®^ nach Anspruch"&_t dadurch gekennzeichnet, daß man als KohlenwaeSeretoff öia jj-ParaifiJQ mit 6 bis 25 Kohlenstoff at©men verwendet.-*..

8. Verfahren nach Anspruch Iy dadurch gekennzeicshnet, daß man als Köhlönwaeserstoif ©in η-Paraffin mit 11 bis 18 Kohlen-

verwendet.

9· Verfahren nach Anspruch 6_f dadurch gekennzeichnet, daß man als Kolxleiiwasser stoff Kerosin verwendet.

10. Verfahren üaeh Anspruch 6_t iadureh gekennseichnet, daß man die Fettsäureester aus dem- Öiaehl@h&-Anieil der erhaltenen ZÜchtUßgeflilseigkeit geiiinat.

11» Verfahren· nach Anspruch; '.6 ,dadurch - gekems©i©hQet $_ daS man '■-■' ■als-.Mikf'oqrg.anisaus Arthrdbaeter.paraffifieiis;ATCC. 15591

12.:Verfahren n&&h &MBpmieh..'6$ iaiurcM gekB&mmBiQhnet₉ &slB aaa

verwendet.

13 · Verfahren nach Anspruch 6_f iaÄursh gekenagsiehaet, -daß in an als Mikroprganisiatte Mieroeoecus epidermidis ATCG 155 ver-',-■ Sendet'*. ; ' "' ■" ■ - '"'^;'..- — _^: ■-.- "..-, / -"...-- ':-" --. - - . -".;

14. Verfahren nach Anspruch 6₉ äadureh gekennseishaet, iai man als KlkroDrganisffius lljeobacteriua sj>. '-12297 verwendet.

15. Verfahren nach Anspruch 6_? dadurch gekennaeiehnet, daß man als Hikroörgahisiius Arthrobacter rosepparaffinus AfCC 15584

16. Verfahren naöh Anspruch % daduröh gekennzeichnet, daß man als Mikroorganisaus Hicrocoöcusparaffinolyticus ATCC 15582

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