DE1642707A1

DE1642707A1 - Verfahren zur Herstellung von L-Glutaminsaeure

Info

Publication number: DE1642707A1
Application number: DE19671642707
Authority: DE
Inventors: Kazuo Kimura; Takeo Suzuki; Katsunobu Tanaka; Ken Yamaguchi
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1966-06-17
Filing date: 1967-06-16
Publication date: 1972-05-25
Also published as: US3764473A; CH488804A; GB1141120A; NL6708243A

Description

K 738

Kyowa Hakko Kogyo Co., Tokyo, Japan

Verfahren zur Herstellung von Ii-G-lutaminsäure

Inhal t s ζ us amri enf as s ung:

Verfahren zur Herstellung von L-G-lutaminsäure durch Züchtung eines Mikroorganismus, der L-G-lutaminsäure zu produzieren vermag, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Nährmedium, welches mindestens einen Kohlenwasserstoff als Haupt-Kohlenstoff quelle sowie ein Antibiotikum und ein Dispergiermittel für den Kohlenwasserstoff enthält« Typische Antibiotika sind Penicillin, Bacitracin, Cycloserin, Kanamycin, Streptomycin, Spiramycin, Cephaloridin, Cefalotin und Novobiocin*

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BAD ORiG)NAl.

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Typische Dispergiermittel sind anionische, kationische und nichtionische Stoffe sowie höhere Fettsäuren und organische Ester» Me Kombination eines Antibiotikums und eines Dispergiermittels in dem Züchtungsmedium ergibt einen synergistischen Effekt, was zu einer merklichen Beschleunigung bei der Herstellung der !-Glutaminsäure führt.

Die vorliegende Erfindung betiifft ein Verfahren zur Herstellung von !-Glutaminsäure. Besonders betrifft sie ein Verfahren zur Herstellung von !-Glutaminsäure durch Fermentation· Insbesondere betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von !-Glutaminsäure durch Fermentation mit Hilfe von Mikroorganismen in einem wässrigen Nährmedium, das Kohlenwasserstoffe enthalte

Bisher sind verschiedene Fermentationsverfahren unter Verwendung von Kohlenwasserstoffen als Kohlenstoffquelle im Nährmedium angewendet worden» Da jedoch eine solche Kohlenstoffquelle nicht wasserlöslich ist, wird die Übertragung der Substanzen in den Fermentationsvorgang zwischen drei Phasen durchgeführt, d.h. dem Mikroorganismus, der wässrigen lösung und dem Kohlenwasserstoff· Aus diesem Problem

BAD ORIGINAL

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resultiert

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!©ultiert ein unwirksameres Verfahren als im Falle der Verwendung von Kohlehj^draten als Kohlenstoffquelle.

Eines der Ziele der vorliegenden Erfindung ist ein verbessertes Verfahren zur Herstellung von L-Glutaminsäure, das die Fachteile und Mangel der Verfahren nach dem früheren Stand der Technik überwindet.

Ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von L-Glutaminsäure durch Fermentation in G-egenwart von Kohlenwasserstoffen als Kohlenstoff quelle, wobei das Verfahren auf wirksame und einfache Art und Weise ausgeführt werden kann.

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung "\on Ε-Glutaminsäure durch Fermentation, das vorteilhaft im industriellen Ma.3-stab mit hoher Produktausbeute durchgeführt werden kann·

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist die Beschleunigung der Fermentation mit Kohlenwasserstoffen, sodass L-Glutaminsäure mit hoher Ausbeute und hoher Wirksamkeit hergestellt werden kann»

Diese und andere Ziele und Vorteile der vorliegenden Erfindung gehen für den Fachmann aus der folgenden Beschreibung und den Ansprüchen hervor.

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Erfindungsgemäes wurde gefunden, dass die Zugabe von Antibiotika und Dispergiermitteln für Kohlenwasserstoffe zu einem Znehtungsmedium, das Kohlenwasserstoffe als Kohlenstoffquelle enthält, ein erheblich verbessertes Fermentationsverfahren zur Herstellung von L-G-lutaminsäure mit Hilfe von Mikroorganismen, die diese herzustellen vermögen, ergibt. Dies scheint das Ergebnis einer Beschleunigung bei der Fermentation des Kohlenwasserstoffs zu sein, indem der Synergismus der Wachstumsregelung und des verbesserten Zellmembran-Permeabilitätsvermögens, das Antibiotika besitzen, sowie des Dispergiervermögens für Kohlenwasr-erstof f e, das bestimmte Dispergiermittel aufweisen, ausgenutzt wird.

Die vorliegende Erfindung beruht auf der gemeinsamen Verwendung von Antibiotika und Dispergiermitteln in dem Züchtungsmedium, in dem die Fermentation durchgeführt wird· Es ist bekannt, dass Antibiotika nicht nur eine Regelungsfähigkeit für Mikroorganismen, sondern auch die Fähigkeit zur Verbesserung der Zellmembran-Permeabilität besitzen. Jedoch ist es nicht möglich, die Kohlenwasserstoff-Fermentation durch alleinige Anwendung der Antibiotika wirksam zu beschleunigen« Dies wird hauptsächlich der unzureichenden Dispersion dei Kohlenwasserstoffe

209822/0076 _m,^_io

BAD ORIGINAL

zugeschrieben· Brfindungsgemäss wurde gefunden, dass die Zugabe verschiedener oberflächenaktiver Mittel, höherer Fettsäuren oder ihrer Ester die Dispergierung von Kohlenwasserstoffen in einer wässrigen Lösung bewirkt, wodmrch das oben genannte Problem gelöst wird.

Interessant ist, dass die gemeinsame Verwendung von Antibiotika und Dispergiermitteln in dem Medium eine synergistische Wirkung mit dem Resultat einer merklichen Beschleunigungswirkung auf die Fermentation ergibt. Bine solche Beschleunigung tritt nicht auf, wenn entweder Antibiotika oder Dispergiermittel getrennt verwendet werden.

Erfindungsgemäss anwendbare Antibiotika sind z.B. Penicillin, Bacitracin, Cycloserin (4-Aminoisox^azolidon), usw. Als Dispergiermittel sollen als Beispiele verschiedene oberflächenaktive Mittel genannt werden, wie ζ „Be die Handelsnamen ITimean S-204 (Polyoxyäthylenalkylamin) , Nonion E-215 (Polyoxy äöiylenoleyläther), ffonion LP-2O (Sorbitanmonolaurat) , Cation SA 2502 (Octadecylaminacetat), Nimid F-215 (Polyoxyäthylenaklvlamid), Nonion ST 221 (Polyoxyäthylensorbitanmonostearat), Έonion L-4 (Polyäthylengl;/kolmonolaurat) , ITonion 0-6 (Polyäthylenglykolmonooleat) ( alle hergestellt von Nippon Oil and Fats Co»,

ltd., 209822/0076

-G-

Ltd., Japan), usw., verschiedene höhere Fettsäuren, wie z.B· Oleinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, laurinsäure, usw., oder ihre Salze, z.B. die Alkalisalze, ferner höhere Fettsäureester, wie z.B., Sorbitanmonooleat, der Oleinsäureester von Polyoxyäthylenglykol, die Palmitinsäureester von Polyoxyäthylenglykol usw. Überdies können verschiedene Kombinationen oder Gemische dieser Verbindungen ebenfalls wirksam verwendet werden.

Pi.r die Fermentation an sich ist sowohl sin synthetisches als auch ein natürliches Nährmedium geeignet, solange es die wesentlichen Nährstoffe für /das Wachstum des verwendeten Mikroorganismenstammes enthalte Solche Nährstoffe sind an sich bekannt und umfassen Stoffe wie eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle, anorganische Verbindungen und dgl., die durch den verwendeten Mikroorganismus in geeigneten Mengen ausgenutzt werden. Die erfindungsgemässe Fermentation wird in einem wässrigen Nährmedium durchgeführt, das einen Kohlenwasserstoff oder ein Gemisch von Kohlenwasserstoffen als Hauptkohlenstoffquelle enthält. Solche Kohlenwasserstoffe sind z.B. Paraffine (Alkane) mit geraden und verzweigten Ketten mit 5 bis 24 Kohlenstoffatomen, wie z.B. Pn-Pentan, n-Oktan, η-Dekan, n-Dodekan, n-Hexadekan, Isopentan,

209822/0076 isooktan,

-T-

riulhi

lBooktan, usv/., Cyeloparaffine, wie z.B. Cyclohexane und Cyclooktane, ferner Olefine mit geraden und verzweigten Ketten wie z.B. Penten-2, Hexen-1, Okten-1, Okten-2, usw. Cycloolefini wie 2.B. Cyclohexen, aromatische EoJilenwascerstoffe wie z.B. Benzol, o-Xylol usw., und Gemische die_ser Verbindungen, sowie gemischte Kohlenwasserstoffe, wie z.B_o Kerosin, Leichtöle, Schweröle, Paraffinöle usw. Kleine Mengen anderer Kohlenstoffquellen wie z.B. Kohlehydrate, z.B. Glukose, Maltose, Fruktose, Sukrose, Stärke, Stärkehydrolj'sate, Melassen usw., oder irgendeine andere geeignete Kohlenstoff quelle, wie z.B. Glycerin, Mannit, Sorbit, organische Säuren usw. können in dem Permatationsmedium zusammen mit den Kohlenwasserstoffen verwendet werden» Diese Stoffe können entweder einzeln oder in Gemischen zweier oder mehrerer verwendet werden. AIf StickstoffQuelle können verschiedene anorganische oder organische Salze oder Verbindungen wie z.B· Harnstoff oder Ammoniumsalze, z.B. Ammoniumchlprid, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Ammoniumphosphat usw., oder eine oder mehrere Aminosäuren im Gemisch, oder Naturstoffe, die Stickstoff enthalten, wie z.B. Maisquellflüs-aigkeit, Hefe extrakt, Fleischextrakt, Fischmehl, Pepton, Buoillon, Caseinhydrolysate, Fischpreßsäfte, Reiskleieextrakt, usw., verwendet werden. Diese

209822/0076 _stoffe

---· BAD OBlGlNAU

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Stoffe können ebenfalls entweder einzeln oder in einer Kombination zweier oder mehrerer verwendet werden= Anorganische Verbindungen, die dem Züchtungsmedium zugesetzt werden können, sind z.B» Magnesiumsulfat, Natriumphosphat, Kaliumdihydrogenphosphat, Kaliuinmonohydrogenphosphat,Bisensulfat oder andere Eisensalze, Manganchlorid, Calciumchlorid usw. Überdies kann es auch notwendig sein, dem Züchtungsmediuin. bestimmte wesentliche Nährstoffe zuzusetzen, abhängig von dem besonderen verwendeten Mikroorganismus, wie z.B. Aminosäuren, z.B. Asparaginsäure, Threonin, Methionin usw., und/oder Vitamine, z«B. Hotin, Thiamin, Cobalamin und dgl. Die Fermentation wird unter aeroben Bedingungen durchgeführt, wie z.B. aeroben Schütteln der Kultur oder durch Rühren einer Submerskultur, bei einer Temperatur von etwa 20 - 50° C und einem pH von etwa 5,0 - 9,0. Nach etwa 2 bis 5 Tagen der Zv.chtung unter diesen Bedingungen findet man bemerkenswert grosse Mengen L-G-lutaminsäure in der Fermentationsflüsriigkeit angereichert.

Nach vollendeter Fermentation kann die L-G-lutaminsäure aus der Kulturflüssigkeit mit den üblichen Mitteln, wie z.B. Behandlung mit einem I on enaus tausch er har z, Fällung mit Met aussalzen, Chromatographie oder dgl. abgetrennt werden.

Die

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Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung erläutern, jedoch, nicht "beschränken. Die Proζentgehalte sind Gewichtsprozente, falls nicht anders angegeben.

Beispiel 1

Drei Liter des folgenden Züchtungsmediums werden in einem 5-Liter-^HJar"-I'ermenter hergestellt:

0,2 ?b K₂HPO₄

0,01 4 MgSO₄.7H₂O

0,002 # MnSO₄.4H₂O

0,02 ρ PeSO..7H₂O

2,0 <■;,

4 3
3,0 $ CaCO₃

0,3 ^ Maisquellflussigkeit

Der pH-Wert dieses Mediums beträgt 7,0.

Arthrobaeter paraffineus Nr. 2411 AOJCC 15591, zuvor unter aerobem Schütteln in einem Bouillonmedium 24 Stunden lang gezüchtet, wird im Verhältnis von 10 $ in das obige Medium eingeimpft. Die Züchtung wird unter Bewegung bei 600 U/Min· und unter Belüftung mit einem Durchsatz mit 1 Liter Luft pro 1 Liter und Minute und bei 28° C durchgeführt. Sin n-Paraffingemisch

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SAD

igUToj

von Kohlenwasserstoffen mit 12 bis 14 Kohlenstoffatomen wird dem Züchtungsmedium in einer Menge von 2 fj (V/V) zu Beginn der Züchtung und zwischenzeitlich jeweils nach 12 Stunden in der gleichen Menge hinzugefügt .

Nach 12 Stunden der Züchtung werden zu dem Medium 0,005 *■> des oberflächenaktiven Mittels Nonion LP-2OR (Sorbitanmonolaurat: hergestellt von Nippon Oil and Pats Co., Ltd., Japan) alle 12 Stunden hinzugesetzt· Ausserdem werden dem Medium nach 20 Stunden der Züchtung 300 000 Einheiten Penicillin G zugesetzt. Der pH-Wert wird während der Züchtung durch Zugabe von wässrigem Ammoniak auf zwischen 5,0 und 9,0 eingestellt.

Nach 72 Stunden der Züchtung betrug die in der Kultruflüssigkeit produzierte Menge !-Glutaminsäure 65 mg/ml. Etwa 160 g kristalliner L-Glutaminsäure werden durch Adsorption unter Verwendung des Ionenaustauscherharzes Amberlite IR 120 (H )-, Elution mit wässrigem Ammoniak, Entfernung des Ammoniaks unter vermindertem Druck und anschliessende Einstellung des pH auf 3,2 mit Salzsäure erhalten.

Wird derselbe Versuch ohne Verwendung des oberflächenaktiven Mittels oder ohne das Penicillin, oder ohne diese beiden, ausgeführt, betragen die

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Mengen

BAD ORiGINAL

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Mengen der produzierten L-G-lutaminsäure 35 mg/ml bzw. 20 mg/ml "bzw. 1,0 mg/ml.

Beispiel 2

Bin Züchtungsmedium wird hergestellt, indem 5 ml Kerosin und 5 mg Tween 20 zu 50 ml eines Züchtungsmediums, das in einem 500 ml-Sakaguchi-Kolben enthalten ist, und das die folgenden Bestandteile enthält, hinzugefügt werden:

O	,1 ^c,-	KH₂PO₄
O	,1 ['■	Na₂HPO₄012H₂O
O	,0Oi io	MgSO₄07H₂O
O	,002 ?;	MnSO₄04H₂O
O	,02 <;.'	PeSO₄.7H₂O
2	,o ^;	HH₄IO₅
3	,0 <:■	CaCO₅
O	,3 55	Maisquellflüs

Das ZuCtLtUn₀SiHedium, mit einem pH von 7,0, v/ird anschlies .end sterilisiert.

Brevrbaeterium ketoglutamicum Nr. 2473 ATOC 15588, das zuvor 24 Stunden lang unter aeroben Schütteln in einem Buoillonmedium gezüchtet worden ist, wird im Verhältnis von 10 ^c/ in das Kultrumedium

209822/0076 eingeimpft

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eingeimpft. Die Züchtung wird dann unter aerobem Schütteln mit einer Schüttelfrequenz von 130 pro Minute durchgeführt·

!fach 24 Stunden der Züchtung werden 5 Einheiten Penicillin G- zu dem Medium hinzugefügt· Nach 72 Stunden der Züchtung werden 36 mg/ml L-GIutaminsäure in der Kulturflüssigkeit angereichert gefunden. -

Wird die Züchtung unter den gleichen Bedingungen, jedoch ohne Zugabe von Twejpn 20 oder Penicillin zu dem Medium, durchgeführt, betragen die Mengen der produzierten L-G-lutaminsäure 20 mg/ml bzw. 15 mg/ml.

Beispiel 3

Corynebacterium hydrocarboclastus Nr. 2438 ATGC I5592 wird in ein wie in Beispiel 1 beschriebenes Züchtungsmedium eingeimpft. Die Züchtung wird unter Belüftung und Bewegung bei 28° C ausgeführt. Die Bewegung beträgt 800 U/Min., die Belüftung 1 Liter pro Liter und Minute.

Ein C₁₁-^c18~^{Gemiscn von} η-Paraffinen in der Menge von 10 £ (G/G) und Tween 80 { 1 mg/ml), werden nach Sterilisation vor Beginn der Züchtung, hinzugefügt, wodurch sich eine Konzentration von

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BAD

1 mg/ml in dem Medium ergibt„ Nach 8 Stunden der Züchtung werden ferner 300 000 Einheiten Procain-Penicillin in Öl zu dem Medium hinzugefügt. Hach 72 Stunden der Züchtung beträgt die in dem Medium produzierte Menge !-Glutaminsäure 75 mg/ml.. .. . Wird der gleiche Versuch in dem gleichen Medium und unter denselben Bedingungen ausgeführt, jedoch ohne Zugabe von ΐν/een 80, Penicillin, oder beider, so beträgt die angereicherte Menge L-Glutaminsäure 50 mg/ml bzw. 30 mg/ml bzw. 15 mg/ml.

Beispiel 4

Die Züchtung wird in dem gleichen Medium und unter den gleichen Bedingungen wie in Beispiel 3 durchgeführt, jedoch unter "Verwendung von 0,1 °ß> Stearinsäure als Dispergiermittel und 100 Jig/ml Bacitracin als zugesetztes Antibiotikum. Die produzierte Menge L-GrI ut amins äure beträgt 56 mg/ml·

Wird die Züchtung unter den gleichen Bedingungen, jedoch ohne Zugabe von Stearinsäure, Bacitracin, oder eines G-emischs davon, durchgeführt, betragen die angereicherten Mengen Glutaminsäure 36 mg/ml, bzw·. 16 m^/inl bzw. 10 mg/ml.

Beispiel 5

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Beispiel 5

Ein Fermentationsmedium der folgenden Zusammensetzung wird hergestellt: 0,1 ^ KH₂PO₄
0,1 ^c/> Na₂HPO₄.12H₂O 0,05 & MgSO₄.7H₂O
0,01 < PeSO₄.7H₂O
0,002 '/: MnSO₄.4H₂O
0,3 P Maisquellflüssigkeit 2,0 $ NH₄IIO₃
10 -/> n-TJndekan
10 mg/jril Phenolrot

Der pH der Lösung "beträgt 7,0.

20 ml-Anteile des Züchtungsmediums v/erden in 25Ο ml-Kolben gebracht. Der Mikroorganismenstamm Corynebacterium hydrocarboclastus 2438 ATOC 15592 wird dann in die verschiedenen Kolben eingeimpft. Die Züchtung wird dann 72 Stunden lang unter aeroben Schütteln bei 30° C durchgeführt. Der pH des Mediums wird während der Züchtung mit (!ML)₂CO₃ auf 6,0-7,0 eingestellt. Me in der Fernientationsflusrigkeit angereicherten Mengen l-Glutaminsatre\Lm Falle der ZugEibe verschiedener Fettsäuren oder diec-er Fettsäuren plus Antibiotika zu dem Züchtungsmedium sind in Tabelle 1 angegeben»

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le 1

Tabelle 1

Zugesetzte Fettsäure	Konzen tration der Zugabe	i	Zugabe zeit	Produzierte L-Glutamin- s äur e-ίί eng e (mg/ml)	B
		Stunden		6,5
Laurlnsäure	500	16	A	5,6
Myristinsäure	500	16	16,1	6,6
Palmitinsäure	500	16	15,2	5,3
Stearinsäure	500	• 16	15,3	5,5
Linolensäure	500	16	15,8	6,2
Linolsäure	500	16	14,6	8,9 I
Abietinsäure	500	16	14,5	2,1
Keine Zugabe		14,9
10,5

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A: 50 Einheiten pro ml Penicillin G- werden

nach 24 Stunden der Züchtung hinzugefügt. B: Keine Zugabe von Penicillin.

Beispiel 6

Die Z .chtung wird mit demselben Stamm, demselben ÜTährmedium und unter denselben Bedingungen wie in Beispiel 5 durchgeführt· Die angereicherten Mengen L-G-lutaminsäure im Falle der Zugabe verschiedener oberflächenaktiver Mittel oder einer kombinierten Zugabe dieser oberflächenaktiver. Mittel mit Anitbiotika zu dem Züchtungsmedium sind in Tabelle 2 gezeigt.

Tabelle

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T	; Zugefügte ■' oberflachen-	a b e 1 1 e	2	Zugabe- zeit	Produzierte L-Grlutaminsäure- Menge (mg/ml)	B
	• aktive Mittel			Stunden	A	7,0
; Uonion HS-215 ^: (Polyoxyäthylen- alkylaryläther)	Konzen tration der Zugabe	O - 16	15,2	6,9
Nonion LP-20R (Sorbitanmonolaurat)	mg/ml	0-16	14,1	7,0
, Nonion OT-221 ! (Polyoxyäthylen- sorbitanmonooleat)	1	0-16	13,9	7,2
; Nonion PT-221 (Polyoxyäthylen- sorbitanmono- palmitat)	1	0-16	13,2	• 7,3
■ ÜTonion ST-221 (Polyoxyäthylen- sorbitanmono- ^: stearat)	1	0-16	14,4	6,8
Cation P2-50 J (Alkyldimethyl- ! benzylanunonium- ! Chlorid)	1	0 - 16	13,5	■ 7,o ;
! Cation PB-40 ! (Trimethylhexa- d e cylammonium- : chlorid)	1	0-16	14,6	8,7 ι
Softer Ho. 601 ■ (Alkylbetain)	1	0-16	14,8	7,2
I Anon BF ;■ (Alkylbetain)		0-16	13,9	7,3
^; Pronon 102 ; (hochmolekulares ; oberflächenaktives Mittel)	1	0-16	14,4	2,1
Keine Zugabe	1		8,9

-

A: 50 Einheiten/ml Penicillin G werden nach 24 Stunden der Züchtung zugesetzt.

B: Keine Zugabe von Penicillin.

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Beispiel 7

Ein Fermentationsmedium der folgenden Zusammen setzung wird hergestellt:

0,1 <

0,1 <;'. Ha₂EPO₄.12H₂O

0,05 </■>

0,01 </, FeSO..7H₂O
0,002 <■/. MnSO₄.4H₂O
0,3 ^c,^r- Maiscuellflüssigksit

20 <-·' NH, NO _
4 3

10 ^c/> n-ITndekan
10 mg/l Phenolrat

Der pH dieses Mediums beträft 7,0.

20 ml-liiteile des obigen Züciitungsmediunis werden in 250 ml-Kolben gebracht» Der Mikroorganismus Corynebacterium hydrocarboclastus Ur, 2438 ATHC 15592 wird in einer Menge von 10 Vol.-:· in die verschiedenen Kolben eingeimpft. Die Züchtung wird dann 72 Ljtunden lang unter aerobem Sch'.tteln bei 30° C durchgeführt» Während der Züchtung wird der pH des Mediums mit (MHJ₂CO₃ auf 6,0-7,0 eingestellt. Die produzierten Mengen L-G-lutaminsäure im Falle der Zugabe sowohl verschiedener Antibiotika als auch dieser Antibiotika plus dem oberflächenaktiven Mittel Tween 80 sind in Tabelle 3 gezeigt.

209822/0076 Tabelle 3

SADORIGfNAL Tabelle

Zugefügte
Antibiotika

Konzentration der Zugabe

Zugabe-

zeit Stunden

Produzierte Menge Ii-G-lutaminsäure (mg/ml)

! Kanamycin
Streptomycin

j Streptomycinkomplex

; Cycloserin

■ Spiramycin

(Kephrin)
Cefalotin

(Seboran)

Cephaloridin

: Bacitracin
Novobiocin
Penicillin G

Keine Zugabe

50 ψ/ml

100 W/ml

50 l^v/ml

100 WmI

50 //ml

100 jA/ml

100
100

100 IVmI

V/

. 50

Einheiten/ml

12,9 10,8

10,1

8,2

13,0 9,5

i 12,8 i	! 10,2 i
i i 12,5	! : 11,0
j ; 18,1 ί 15,-2	¹ 15,2 13,0
12,1	10,2
11,8	9,6
14,4	12,8
3,0	2,5

A: 100

Tveen 80 werden zu Beginn der Züchtung zugesetzt

B: Keine Zugabe von Tween

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Das Dispergiermittel, das erfindungsgemäss dem Nä,hrmediuEi hinzugefügt wird, kann entweder anionisch, kationisch oder nicht-ionisch sein« Die einzige Vorbedingung ist, dase es imstande ist, den in dem Medium vorliegenden Kohlenwasserstoff zu dispergieren· Beispiele solcher Dispergiermittel sind oben gezeigt wordene Sie sind aus dem Stand der Technik gut bekannt, und umfassen im allgemeinen solche Stoffe wie die Hatriums/afce höhermolekularer Alkylsulf ate oder-sulf onate , Pol3^roxvätlr^rlenglykol—Derivate, höhere Fettsäuren mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen, ζ.Β« laurinsäure, M^ rlstinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, Oleinsäure u. dgl«, organische Ester höherer Fettsäuren, wie z.B, Sorbitanmonooleat, us". Typische Antibiotika, die für das erfindungF-gemäe^e Verfall: en verwendet werfen können, sind ebenfalls gezeigt worden. Die zu dem Medium hinzuzufügenden Mengen an Antibiotikum und Dispergiermittel können gegebenenfalls entsprechend den besonderen verwendeten Bedingungen, variiert werden, jedoch wird vorzugsweise eine Menge von 10 ug/ml bis 100 ug/ml jedes Antibiotikums und 100 Ug/ml bis 2 mg/ml jedes Dispergiermittels vorteilhaft angewendet»

ji's wird darauf hingewiesen, das;:- jeder Mikroorganismus, dor imstande ist, !-Glutaminsäure

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durch. Fermentation zu produzieren, erfindungsgemäss zu verwenden ist, und dass die Erfindung nicht auf die lediglich zur Erläuterung speziell genannten Mikroorganismen beschränkt ist»

Η ach dieser Beschreibung der Erfindung ist klar, das;:; sie in vieler Hinsicht variiert vrerden kann» Solche Variationen sind keine Abweichungen von Grundidee und Geltungsbereich der Erfindung, und solche Modifikationen sollen sämtlich in den Bereich der folgenden Patentansprüche fallen=

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Claims

Patentansprüche:

1» jPermentatioiisverfahren zur Herstellung; von !-Glutaminsäure durch Züchtung eines Mikroorganismus, der imstande ist, L-Giutaminsäure zu produzieren, unter aeroben Bedingungen in einem Fährmedium, das als Hauptkohlenstoffquelle mindestens einen Kohlenwasserstoff enthält, dadurch gekennzeichnet, dass zu dem Medium sowohl ein Antibiotikum als auch ein Dispergiermittel für den Kohlenwasserstoff hinzugefügt werden»

2* Verfahren zur Herstellung von L-G-lutaminsäure, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mikroorganismus, der L-Glut amins äure zu produzieren vermag, unter aeroben Bediifengen in einem wässrigen Hährmedium gezüchtet wird, das als Hauptkohlenstoff uelle mindestens

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einen

einen Kohl enwas ε er stoff sowie ein Antibiotikum und ein Dispergiermittel für den Kohlenwasserstoff enthält.

3ο Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Antibiotikum Penicillin, Bacitracin, Cycloserin, Kanamycin, Streptomycin, Spiramycin, Cefalotin ( Kephrin ), Cephaloridin, (Seboran ) oder Novobiocin verwendet wird.,

4· Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Antibiotikumein Penicillin verwendet wird»

5· Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergiermittel ein anionisches Mittel verwendet wird»

6. Verfahren nach Anspruch 2„ dadurch gekennzeichnet, das^r als Disiier^iermittel ein kationisches Mittel verwendet wird.=

7ο Verfahren nach"^; Anspruch 2; dadurch geke-nzeiehnet, dass als Disper£ler-mit';el ein nicbt-ioiiis-ches Mittel verwendet wird« - . ._:- -

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:- t-.Vei-rf ihren

6AD ORIGINAL

8. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet _r dass als Dispergiermittel ein Fatriumsalz eines hochmolekularen Alkylsulfates oder -sulfonates verwendet wird..

9· Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergiermittel ein PoIyoxyäthylenglykol-Derivat verwendet wird«.

10. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergiermittel eine höhere Fettsäure mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen verwendet wird»

11 ο Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Dispergiermittel Laurinsäure, MjTlstinsäure, Palmitinsäure, Stearinsäure, Oleinsäure, Lino lens äure, Linolsäure oder Abietinsäure verwendet wird·

12. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergiermittel ein organischer Ester einer höheren Fettsäure mit 12 "bis Kohlenstoffatomen verv/endet wird.

2 0 9 8 2 2/0076 BAD ORIGINAL

13· Verfahren nach Anspruch 12,ciadurcli gekennzeichnet, dass als organischer Bster ein Ester: von Sorbit und einer höheren Fettsäure verwendet

wird. ■ '-■--.. ...".-■

14· Verfahren nach-■ Anspruch. 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenwasserstoff ein η-Paraffin Terwendet wird· , . -' . :.

15. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, das& als Kohlenvfasserstoff Kerosin, Iteichtöl, Schweröl * Kaphtha oder ein öemisch zweier ■ oder mehrerer solcher Kohlenwasserstoffe verwendet . wird c

16. ^erfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass als Mikroorganismus Arthrobäcter paraffineus Hr. 2411 AITCC 15591» Brevifcacterium ketoglutakicum iFr. 2475 ATCC 15588 oder Cor^nehacterium hvdrocarboclastus ITr. 2438 AOiCC 15592 verwendet wird.

17· Verfahren zur Herstellung von ü-Crlutaminsäure, dadurch gekennzeichnet^ das : ein Mikroor— ganisiaus, der imstande ist, Ii-Glutaminsäure zu produzieren, unter aeroben Bedingungen bei einer iEempera-

tur BAD ORIGINAL

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tür von etwa 20 - 50° C und einem pH von etwa 5,0 bis 9,0 in einem wässrigen Bahrmedium gezüchtet wird, das mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle sowie ein Antibiotikum und ein Dispergiermittel für den Kohlen'-wasserairoff enthält.

18. Verfahren nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass als Mikroorganismus Arthrohaeter paraffineus ITr. 2411 A(ECC 15591, Brevibacteketoglutamicum. Mr. 2473 ATCG 15588 oder CoÄe-

hjdroearboclastus Efr· 2438 ATCC 15592 verwendet wird. =

19· Verfahren nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass als Antibiotikum Penicillin, Bacitracin, Cycloserin, Kanamycin, Streptomycin, Spiramycin, Cefalotin (Eephrin) , Cephaloridin, (Seboran) oder Novobiocin verwendet wird.

20. Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergiermittel ein PoIy-

verwendet wird·

21. Verfahren naeh Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergieren, ttel eine höhere Fettsäure mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen verwendet wird »

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22. Verfahren- nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass als Dispergiermittel ein organischer. Ester einer höheren Fettsäure, mit 12 bis 20 Kohlenstoffatomen verwendet wird*

23» Verfahren nach .Anspruch 19» dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenwasserstoff ein η-Paraffin verwendet wird.

24. Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenwasserstoff Kerosin, Leichtöl, Schweröl, Naphtha oder ein Gemisch zweier oder mehrerer solcher Kohlenwasserstoffe verwendet wird.

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