DE1642631A1 - Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch FermentationInfo
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Description
Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation
Zusammenfassung:
Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation, bei welchem ein Mikroorganismus, welcher imstande
ist, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Nährmedium gezüchtet wird,
das mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle enthält, wobei sich die Proteine direkt in dem
Züchtungsmedium anreichern, und bei welchem anschließend die entstandenen Proteine isoliert und gewonnen werden. Zu den
bevorzugten bei der Fermentation zu verwendenden Kohlenwasserstoffen
gehören Kerosin, η-Paraffine mit 5-25 Kohlenstoffatomen, Olefine, Benzol, niedere Alkyl-substituierte
Derivate des Benzols und verschiedene Erdölfraktionen. Zu den vorteilhaft angewendeten Mikroorganismen gehören:
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Arthrobacter paraffineus, Arthrobacter roseoparaffinus,
Brevibacterium ketoglutamicum, Micrococcus paraffinolyticus,
Corynebacterium hydrocarboclastus, Bacterium aliphaticum, Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium lactula, Candida
lipolytica und Aspergillus oryzae0 Ein Mittel zur Unterstützung
der Abgabe der Proteine in das Medium kann ebenfalls in diesem enthalten sein, z.B. Antibiotika, oberflächenaktive
Mittel, höhere Fettsäuren oder höhere Fettsäureester
.
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Proteinen. Insbesondere betrifft sie ein Verfahren zur
Herstellung von Proteinen durch Fermentation. Speziell betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung von
Proteinen durch Fermentation mit kohlenwasserstoffassimilierenden Mikroorganismen in Gegenwart von Kohlenwasserstoffen
als Hauptkohlenstoffquelle.
In letzter Zeit hat die Produktion von Mikroorganismenzellen aus Kerosin und ähnlichen Kohlenwasserstoffen als
Ausgangsmaterial als eine Möglichkeit zur Herstellung von Nahrungsmitteln und Viehfutter Beachtung gefunden, und verschieiene
Berichte, die sich mit diesem Problem befassen, sind bereits erschienen» Jedoch sind einige Probleme bei
solchen Verfahren ungelöst geblieben, insbesondere im Hin-
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blick auf die mit den Mikroorganismenzellen vermischten
Kohlenwasserstoffe und weiterhin hinsichtlich der Extraktion und Isolierung von Protein aus den Mikroorganismenzellen» um
es praktisch verwerten zu können.
Ganz offensichtlich wäre die Möglichkeit der einfachen und wirksamen Produktion und Isolierung des in den Mikroorganismen
gefundenen Proteins ein entschiedener Vorteil. Erfindungsgemäß sollen demzufolge die oben angegebenen
Probleme überwunden werden. μ
Ziel der vorliegenden Erfindung ist ein verbessertes Verfahren zur Herstellung von Protein, welches die Nachteile
und Mangel der Verfahren nach dem bisherigen Stand der Technik überwindet.
Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation, welches auf
wirksame und einfache Art und Weise durchgeführt werden kanno
Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch !Fermentation, welches vorteilhaft
im industriellen Maßstab bei relativ niedrigen ' Kosten mit einer hohen Produktausbeute.durchgeführt werden
kann.
Ein weiteres Ziel der Erfindung sind Proteine.
Diese und weitere Ziele und Vorteile der vorliegenden Erfindung gehen für den Fachmann aus der folgenden Beschreibung
und den Ansprüchen hervor.
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Erfindungsgemäß wurde gefunden, daß eine bedeutende
Menge an Protein direkt in die Kulturflüssigkeit abgegeben wird, wenn man Mikroorganismen, welche imstande sind,
Kohlenwasserstoffe zu assimilieren, in einem geeigneten, Kohlenwasserstoffe enthaltenden Nährmedium züchtet.
Wurden bisher die Zellen von Mikroorganismen als Nahrungsmittel verwendet, so war die Extraktion der Proteine
aus den Mikroorganismenzellen ein bedeutendes Problem. Es ist ganz klar, daß die angemessene Extraktion des Proteins
aus den Bakterienzellen auf wirksame Art und Weise erforderlich ist, um eine hohe Ausbeute desselben im industriellen
Maßstab zu erhalten; dies ist jedoch bisher äußerst schwierig
oder sogar unmöglich gewesen. Gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung hingegen wird dieses Problem gelöst, da
das Protein hierbei direkt in einer wäßrigen Lösung produziert wird, wodurch es von den verbleibenden Kohlenwasserstoffen
leicht isoliert werden kann« Demzufolge ist es bei dem erfindungsgemäßen Verfahren nicht notwendig, nachfolgend
ein Extraktionsverfahren für das Protein aus den Bakterienzellen durchzuführen. Die Erfindung schlägt folglich ein
außerordentlich vorteilhaftes, im industriellen Maßstab durchführbares Verfahren zur Herstellung von Protein unter
Verwendung von Kohlenwasserstoffen als Ausgangsmaterial vor.
Überdies, da Mikroorganismen, die imstande sind, Kohlenwasserstoffe
auszunutzen, eine starke Affinität zu den Kohlenwasserstoffen besitzen, konnte beobachtet werden, daß sich
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fast die gesamten Mikroorganismenzellen in der Ölsciiioht
sammeln und in der Wasserschicht lediglich existieren.
Demzufolge ist die Abtrennung der Bakterienzellen von den Kohlenwasserstoffen höchst vorteilhaft durchführbar.
Das Verfahren der Produzierung von Mikroorganismenzellen
unter Verwendung von Kohlenwasserstoffen als Ausgangsmaterial ist in der Technik bekannt. Das neuartige Merkmal
der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß zum ersten Mal ein Verfahren zur direkten Anreicherung von Protein in
einem Züchtungsmedium gefunden worden ist.
Man nimmt anv daß die Produktion und Anreicherung von
Proteinen gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung auf der Abgabe des Proteins aus den Mikroorganismenzellen beruht.
In der Tat werden 80 Gew.-$ oder mehr des in den Bakterienzellen enthaltenen Proteins in die wässrige Lösung
abgegeben. Es wird daher für angemessen gehalten, die vorliegende Erfindung als Verfahren zur Herstellung von Proteinen
durch Fermentation zu klassifizieren.
Jeder Mikroorganismus, der imstande ist, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren und unter Ausnutzung derselben zu
wachsen, kann für das erfindungsgemäße Verfahren verwendet werden. Beispiele hierfür sind folgende:
Arthrobacter paraffineus
Arthrobacter roseoparaffinus
Brevibacterium ketoglutamicum
Micrococcus paraffinolyticus
Corynebacterium hydrocarboclastus
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Bacterium aliphaticum
Pseudomonas aeruginosa
Mycobacteriuni lactula
Candida lipolytica
Aspergillus oryzae
Pseudomonas aeruginosa
Mycobacteriuni lactula
Candida lipolytica
Aspergillus oryzae
Wie aus der obigen Aufstellung hervorgeht, existieren Mikroorganismen mit der Fähigkeit zur Produktion und Anreicherung
von Proteinen durch Ausnutzung von Kohlenwasserstoffen als Hauptkohlenstoffquelle in einem weiten Bereich
der Gattung und Familie. Dementsprechend ist die vorliegende Erfindung nicht auf eine besondere Familie oder Gattung von
Mikroorganismen beschränkt.
Entweder ein synthetisches Züchtungsmedium oder ein natürliches Nährmedium ist für die vorliegende Erfindung
geeignet, solange es die für das Wachstum des besonderen verwendeten Stammes notwendigen Nährstoffe enthält. Solche
Nährstoffe sind in der Technik bekannt. Zu ihnen gehören
Substanzen wie z.B. eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstoffquelle,
anorganische Verbindungen und dgl., welche durch den verwendeten Mikroorganismus in geegneten.Mengen ausgenutzt
werden. Gemäß der vorliegenden Erfindung enthält das Medium einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle.
Kerosin ist einer der für das Verfahren der Erfindung bevorzugt verwendeten Kohlenwasserstoffe. Jedoch können auch
andere Kohlenwasserstoffe einfach und vorteilhaft angewendet
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v/erden. Zu derartigen Kohlenwasserstoffen gehören Paraffine
(Alkane) mit geraden und verzweigten Ketten, die 5 25 Kohlenstoffatome enthalten, wie z.B. n-Pentan, n-Oktan,
η-Dekan, n-Dodekan, n-Hexadekan, Isopentan, Isooktan usw.,
Cycloparaffine, wie z.B. Cyclohexan und Cyclooktan, Olefine
mit geraden und verzweigten Ketten wie ζ »Β. Penten-2,
Hexen-1, Okten-1, Okten-2 usw., Cycloolefine wie z.B.
Cyclohexen, aromatische Kohlenwasserstoffe wie z.B. Benzol,
o-Xylol usw., sowie Gemische derselben und gemischte Kohlen- ^ Wasserstoffe wie z.B. Leichtöle, Schweröle, Paraffinöle,
Naphtha usw..
Kleine Mengen anderer Kohlenstoffquellen wie z.B.
Glukose, Fruktose, Mannose, Galaktose, Sukrose, Stärke, Stärkehydrolysate, Abfallmelassen usw., d.h., Kohlehydrate
allgemein, oder jede andere geeignete Kohlenstoffquelle wie
z.B. Glycerin, Mannit, Sorbit und dgl., können in dem Fermentationsmedium zusammen mit dem Kohlenwasserstoff oder
Kohlenwasserstoffgemisch verwendet werden.
Als Stickstoffquelle können verschiedene Arten anorganischer oder organischer Salze oder Verbindungen, wie
z.B. Harnstoff oder Ammoniak oder Ammoniumsalze, z.B. Ammoniumsulfat, Ammoniumchlorid, Ammoniumnitrat usw., oder
natürliche stickstoffhaltige Substanzen, wie z.B. Maisquellflüssigkeit, Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Kaseinhydrolysate,
Fischmehl usw. verwendet werden. Gemische
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zweier oder mehrerer dieser Stoffe können verwendet werden.
Anorganische Verbindungen, die zu dem Züchtungsmedium hinzugesetzt werden können,sind zeB. Magnesiumsulfat,
Kaliumdihydrogenphosphat, Kaliuinmonohydrogenpho sphat,
Natriumchlorid, Eisensulfat 9 ManganChlorid, Calciumchlorid
oder andere üblicherweise verwendete Salze von Magnesium, Eisen, Mangan, Zink, Calcium und dgl.y Gemische solcher
anorganischer Verbindungen können verwendet werden.
Weiterhin können für das Wachstum des besonderen verwendeten Stammes wesentliche Nährstoffe zu dem Medium hinzugefügt
werden, z.B. Vitamine, wie z.B. Biotin, Thiamin, Pantothensäure, p-Aminobenzoesäure, Nikotinsäure usw.,
sowie verschiedene Arten von Aminosäuren, wie z.B. Glutaminsäure usw..
Die Fermentation wird unter aeroben Bedingungen, wie z.B. aerobem Schütteln der Kultur oder durch Rühren einer
Submerskultur unter Einleitung von sterilisierter Luft, bei einer Temperatur von etwa 20 bis 600C durchgeführt. Während
der Züchtung wird der pH auf einen Wert zwischen 4 und 10 (vorzugsweise zwischen 6 und 9) eingestellt durch Zugabe
einer Harnstoffainucelösung, von Ammoniakwasser, Ammoniakgas,
Ammoniumearbon/ oder dgl..
Die Fermentation ist normalerweise innerhalb von 1 bis
3 Tagen abgeschlossen. Zu diesem Zeitpunkt erreicht der gemessene Wert des Gesamtproteins sein Maximum.
Bei der Ausführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wur·
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de auch, gefunden,, daß die Zugabe von Antibiotika, oberflächenaktiven
Mitteln, Fettsäuren und dgl. ein wirksames Mittel zur Beschleunigung der Abgabe des Proteins ist».
Zu den Antibiotika, die zu diesem Zweck verwendet werden können, gehören Penicillin, Bacitracin, Streptomycin,
Cycloserin usw.. Geeignete oberflächenaktive Mittel sind z.B. alle in der Technik bekannten nichtionischen, kationischen,
anionischen oder amphoteren oberflächenaktiven Mittel. Besonders wirksam sind die Polyoxyäthylensorbitan·-
fettsäureester (C^p^ie* Tween-Serie), und die Alkylaminsalze
derselben (c 8~C.j8), ^ie ^olyoxyäthylenalkylamine
(Cj2-Cj8! Nymeen-Serie), die Polyoxyäthylenalkyläther
(Cj2-Cjq), die Polyoxyäthylenalkylallyläther (C8-Cj8), die
Alkyltrimethylammoniuahalogenide (^2""C1J8), d*e -^1^-^eJaz«yldimethylammoniumhalogenide
(G·|2~^·Ι8^' die -^^ylpy3^^1111^^11111111*"
halogenide (C^g-C-tg^* die Alkylbetaine (CJg-C18) und dgl».
Spezielle Beispiele derselben sind z.B. Nymeen S-204,
Nonion E215, Tween 20, Cation SA 2502, Konion 1-4 usw..
Verschiedene Arten höherer !Fettsäuren, wie z.B. ölsäure, '
Palmitinsäure, Stearinsäure usw., ferner Salze derselben,
höhere Fettsäureester, wie z.B. Sorbitanaionooleat, der ölsäureester
von Polyoxyäthylenglykol, der Palmitinsäureester von Polyoxyäthylenglykol, usw., sind ebenfalls geeignet,
und verschiedene Kombinationen dieser Verbindungen sind gleichfalls wirksam.
Nach Abschluß der fermentation kann das erhaltene
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Protein von der Fermentationsflüssigkeit mit den üblichen Mitteln, wie z.B. Zentrifugieren, Ausfällung und dgl.
abgetrennt werden.
Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung erläutern, jedoch nicht begrenzen. Falls nicht
anders angegeben, sind die darin gegebenen Prozentgehalte Gewichtsprozente.
Arthrobacter paraffineus Nr. 2411 ATCC 15591 wird in einem Einsaatmedium, welches aus 1,0 $>
Fleischextrakt, 1,0 # Pepton und 0,5 fi Natriumchlorid besteht, bei einem
pH von 7,2 (vor der Sterilisation) unter aerobem Schütteln
24 Stunden lang gezüchtet. Dann wird das so gezüchtete Bakterium in einem Verhältnis von 10 Vol.~$ in 3,0 Liter
eines Fermentationsmediums, welches in einem 5-Liter-Jarfermenter
enthalten ist, eingeimpft. Das Fermentationsmedium ist wie folgt zusammengesetzt:
0,2 % KgHPO4
0,1 56 MgSO4* 7H2O
0,002 $ MnSO4* 4HgQ
0,02 % FeSO4 · 7H2O
0,001 $> ZnSO4 · 7H2O
0,5 # NH4NO3
0,1 $> Maisquellfltissigkeit
Bie Züchtung wird begonnen, und direkt nach Beginn der Züch-
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tung werden 100 ml eines Gemisches von n-Paraffinen, die
11-18 Kohlenstoff atome enthalten, zu dem JFermentationsmedium
hinzugefügt. Die Züchtung wird unter Rühren bei 600 r.p.m. und einer Belüftung mit steriler Luft mit einer
Geschwindigkeit von yf/ ' /min 40 Stunden lang bei 300C
durchgeführt. Der pH des Züchtungsmediums wird während der Züchtung mit Ammoniakwasser auf einen Wert zwischen 6,5 und
7,5 eingestellt. Nach Beendigung der Züchtung beträgt die in einer wässrigen Lösung produzierte Menge an Protein
Tg/.'.
Anschließend werden 2,8 Liter der wässrigen Lösung, die durch zentrifugale Trennung der Permentationsflüssigkeit
erhalten worden ist, auf einen pH von 3-4 eingestellt. Die zentrifugale Abtrennung dee produzierten Proteins ergibt
19 g Rohprotein. Das so erhaltene Rohprotein wird wiederum in Wasser (pH 7-8) gelöst, und dieses Protein
wird bei einem pH von 3-4 ausgefällt. Es wird wiederum durch Zentrifugieren getrennt. Diese Maßnahmen werden
zweimal wiederholt. Als Ergebnis werden 17 g gereinigtes Protein durch Gefriertrocknung erhalten.
Brevibacterium ketoglutamicum Nr. 2473 ATCC 15588
wird in einem 5 Liter-Jattrfermenter unter denselben Bedingungen
und demselben Medium wie in Beispiel 1 beschrieben worden ist, gezüchtet, mit der Abwandlung, daß als Kohlen-
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stoffquelle Kerosin verwendet wird. Nach 48 Stunden der
Züchtung werden 9 g Protein aus der Fermentationsflüssigkeit
erhalten.
Die Züchtung wird in derselben Weise und in demselben Medium wie in Beispiel 1 durchgeführt, mit der Abwandlung,
daß als Kohlenstoffquelle 200 ml eines Gemisches von η-Paraffinen, die Fraktionen von C^c-C2o enthalten, verwendet
werden. Außerdem werden 10 Einheiten Penicillin pro 1 ml Fermentationsflüssigkeit 15 Stunden nach Beginn der
Züchtung zu dem Medium hinzugefügt. Die Züchtung wird 72 Stunden lang durchgeführt.
Nach Beendigung der Züchtung beträgt die in der Fennen"
tationsflüssigkeit angereichert gefundene Menge Protein 15 g/l.
Aus dieser Beschreibung der Erfindung ist ersichtlich, daß dieselbe in vielfacher Hinsicht abgewandelt
werden kann. Solche Variationen sind nicht als Abweichung vom Grundgedanken und Geltungsbereich der Erfindung anzu-
ό
sehen, sondern alle derartigen Modifikationen sollen in den
sehen, sondern alle derartigen Modifikationen sollen in den
Bereich der folgenden Patentansprüche fallen.
- Patentansprüche 109882/1384
Claims (18)
1. Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Mikroorganismus,
der imstande ist, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren,
unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen9 mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle
enthaltenden Nährmedium züchtet, wobei sich die Proteine direkt in dem Züchtungsmedium anreichern, und daß
man die entstandenen Proteine anschließend isoliert und gewinnt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, da. durch gekennzeichnet,
daß man als Kohlenwasserstoff Kerosin verwendet.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Kohlenwasserstoff.ein Paraffin mit 5-25 Kohlenstoffatomen
verwendet.
. 4* Verfahren nach Anspruch 1f dadurch gekennzeichnet,
daß man als Kohlenwasserstoff ein Olefin verwendet.
5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß man als Kohlenwasserstoff Benzol oder ein niederes Alkyl-substituiertes Derivat desselben verwendet.
6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kohlenwasserstoff eine Erdölfraktion verwendet.
109882/1384 Ii
7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Mikroorganismus verwendet, der Arthrobacter
paraffineus, Arthrobacter roseoparaffinus, Brevibacterium
ketoglutamicum, Micrococcus paraffinolyticus, Corynebacterium
hydrocarboclastus, Bacterium aliphaticum, Pseudomonas aeruginosa, Mycobacterium lactula, Candida lipolytica oder
Aspergillus oryzae sein kann«
8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Züchtung bei einer Temperatur von etwa 20-600C
und einem pH von etwa 4-10 durchführt.
9. Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Mikroorganismus,
der imstande ist, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Nährmedium
züchtet, das mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle sowie ein Abgabemittel für die
Proteine, das ein Antibiotikum, ein oberflächenaktives Mittel, eine höhere !Fettsäure, ein Ester höherer Fettsäuren
oder Gemische derselben sein kann, enthält, wobei sich die Proteine direkt in dem Züchtungsmedium anreichern, und daß
man anschließend die entstandenen Proteine isoliert und gewinnt.
10. Verfahren nach Anspruch 9» dadurch gekennzeichnet, daß man als Antibiotikum Penicillin, Bacitracin, Streptomycin oder Cycloserin verwendet.
11.
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11. Verfahren nach Anspruch 9» dadurch gekennzeichnet, daß man als oberflächenaktives Mittel eine Polyoxyäthylenverbindung
verwendet.
12. Verfahren nach Anspruch 9» dadurch gekennzeichnet, daf3 man als Kohlenwasserstoff Kerosin, η-Paraffine mit
5-25 Kohlenstoffatomen, Olefine, Benzol, niedere Alkyl-substituierte
Derivate des Benzols, Leichtöle, Schweröle,
Naphtha oder Gemische derselben verwendet. ^
13. Verfahren zur Herstellung von Proteinen durch Fermentation, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Mikroorganismus,
der Arthrobacter paraffineus, Arthrobacter
roseoparaffinus, Brevibacterium ketoglutamicum, Micrococcus
paraffinolyticus, Corynebacterium hydrocarboclastus,
Bacterium aliphaticum, Pseudomonas aeruginosa, My^bacterium
lactula, Candida lipolytica oder Aspergillus oryzae sein
kann, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen, mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle
enthaltenden Nährmedium züchtet, wobei sich die Proteine direkt in dem Züchtungsmedium anreichern, und daß man anschließend
die entstandenen Proteine isoliert und gewinnt.
14. Verfahren nach Anspruch 13» dadurch gekennzeichnet, man die Züchtung bei einer Tempera1
und einem pH von etwa 4-10 durchführt.
daß man die Züchtung bei einer Temperatur von etwa 20-6O0C
15. 1 0 9 8 8.2 / 1 3 8 U
15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kohlenwasserstoff Kerosin, η-Paraffine mit
5-25 Kohlenstoffatomen, Olefine, Benzol, niedere Alkyl-substituierte
Derivate des Benzols, Leichtöle, Schweröle, Naphtha oder Gemische derselben verwendet.
16. Verfahren nach Anspruch 15» dadurch gekennzeichnet,
daß das Nährmedium weiterhin ein Abgabemittel für die Proteine enthält, das ein Antibiotikum, ein oberflächenaktives
Mittel, eine höhere Fettsäure, ein Ester höherer Fettsäuren, oder Gemische derselben sein kann.
17. Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß man als Abgabemittel ein Antibiotikum verwendet, welches
Penicillin, Bacitracin, Streptomycin oder Cycloserin sein kann.
18. Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, daß man als Abgabemittel eine Polyoxyäthylenverbindung
verwendet·
K 766
Mae/Wr
Mae/Wr
109882/1384
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP7072066 | 1966-10-28 |
Publications (1)
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Cited By (2)
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