DE1642708A1

DE1642708A1 - Verfahren zur Herstellung von Sacchariden durch Fermentation

Info

Publication number: DE1642708A1
Application number: DE19671642708
Authority: DE
Inventors: Takeo Suzuki; Katsunobu Tanaka
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1966-07-04
Filing date: 1967-07-03
Publication date: 1972-03-30
Also published as: DE1642708B2; DE1642708C3; GB1174322A; US3655512A

Description

K 740

ICy owa Hakko Kogjo 0o,_t Etäo,. Tokyo, Japan-

Verfahren zur Herstellung von. Sacchariden durch fermentationν

Inhalt s zus βτρτη enf as s unff

Verfahren zur Herstellung von Sacchariden durch fermentation, indem, man einen Mikroorganismus ₉ der imstande ist_y Kohlenwasaerstof fe ' zu. assimilieren und Saccharide za produzieren_s unter aeroben Beäingungen in einem wässrigen Hährmsdiumy das mindestens einen kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoff quelle -sowie 0in.en Zusatzstoff aus der G-ruppej he stehend aus mindestens einem Gberflächenaktiveix^ Mittel _t min-

destens

20S-Ö 14/0-2.3-7 ■

ORIGIiSJALfWSPEGTED

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de st ens- einem Antibiotikum und Gemischen davon_s enthält,, züchtet. Das Verfahren ergibt gute Ausbeuten an Zuckern, wie z.B« Trehalose, G-lukose, Mannose,: Arabinose, Fruktose, Ribose, ihren G-lykosiden und polymerisierten Verbindungen.

Die Erfindung betrifft das Gebiet der Fermentation, insbesondere ein Verfahren zur Herstellung von Sacchariden durch Fermentation im industriellen Maßstab» Insbesondere betrifft die Erfindung ein Verfahren zur signifikanten Beschleunigung der Produktion und Anreicherung von Sacchariden durch Fermentation» indem man Antibiotika oder ihre Derivate so «'ie Wachs tumshemmst of fe zu. fl^m Zucht ungsmedium hinzufügt, in welchem diese Saccharide durch Fermentation produziert werden. ,

.»Als Ergebnis umfangreicher Untersuchungen Über die Produktion von Sacchariden durch die Anwendung "billiger Kohlenwasserstoffe als Ausgangsmaterial bei einem Fermentationsverfahren wurde erfindungsgemäss gefunden, dass Mikroorganismen, die imstande sind, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren oder zu verwerten, grosse Mengen Giukose, Fruktose, Ribose und Polymerisate von Sacchariden zu produzieren, ver-

2 0 0 8 1-4/0 Iff

SAD

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mögenβ Überdies wurde als Ergebnis genauer Untersuchungen über dj.e produzierten Saccharid-Typen, ' die Bedingungen, unter denen sie produziert werden, mögliche Wege der Beschleunigung dieser Produktion und dgl., erfindungsgemäss gefunden, dass Jkntibioti-. ka, wie z.Bo Penicillin oder Wachs turnshemmstoffe_s wie z.B» oberflächenaktive Mittel, die Produktion von Sacchariden durch Fermentation merklich beschleunigen» -Diese Ergebnisse führten'zu der vorliegenden Erfindung. \ . _A

Dementsprechend ist eines der Ziele der vorliegenden Erfindung ein "Verfahren zur Herstellung von Saechariden durch Fermeiitationo

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Sachariden durch Fermentation, das im industriellen Maßstab auf wirksame und einfache Art und Weise durchgeführt werden kann.

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist ein g

Verfahren zur Herstellung von Sacchariden_? das bei niedrigen Koeten mit hohen Pro dukti ons ausbeuten ausführbar ist c

Diese und andere Ziele und Vorteile der vorliegenden Erfindung gehen für den Fachmann aus der folgenden Beschreibung und den .Ansprüchen hervor.

209814/0237 ' Erfind tangsgemä

Erfindungsgemäss wurde gefunden, dass sowohl 'bemerkenswerte Mengen als auch, eine 'beschleunigte Produktion von Sacchariden bei einem Fermentationsverf ahren erhalten werden, wenn man Antibiotika, wie z*B. Penicillin, Streptomycin, usw., oder ihre Derivate, sowie Wachstumshemmstoffß, wie z.B*. oberflächenaktive Mittel» usw., zu dem f/üchtungsmeäium, das Mikroorganismen mit der Fähigkeit, Kohlenwasserstoffe un-ter aeroben Bedingungen zu. assimilieren, enthält, hinzufügt* wobei das Züchtungsmedium Kohlenwasserstoffe als Hauptkohlenstoff quelle en.tha.lt* Sowohl einer der Zusatzstoffe, als auch beide Zusatzstoffe können verwendet werden.«

Arrfibiotika, die erfindungsgemäss zu dem Züchtungsmedixm hinzugefügt werden können, sind z.B. Penicillin., Streptomycin, Bacitracin, Cycloserin und dgl. Oberflächenaktive Mittel, die erfindungsgemäss verwendet werden können, sind alle geeigneten, anionischen, kationischen oder nicht-ionisxshen oder amphoteren oberflächenaktiven Mittel, die ,in der Technik bekannt sind· Besonders wirksam sind die Polyoxyäthylensorbiianfettsäureester ( Οτ?""^!«» ^^ween Serie ), und ihre Alkylaminsalze ( Og-Ö.g ), die Polyoxyäthylenalkylamine ( ^2~^Ci8' ^^^^⁵¹^ ^Serie )» die Polyoxyathylenalkyläther ( Ο^^ΐβ )» ^^ie Polyoxy,- '

.. ■■; V.

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äthylenalkylallyläther ( O₃-O₁₈)Y die Alkyltrimethyl-' ammoniumhalogenide ( ^Λ«')» äie AlkylTDenzyldi/- ' methylammoniumhalogeniäe · ( G₁₂-O₁₈ ) _f die Alkylpyridiniumhalogenide ( C₁₂-G₁₈), die AlkyITdeta'ine ( O₁₂-O₁₈ ) _r Tersciiiedene höhere Fettsäuren wie Ölsäure, Palmitiasäurej Stearinsäure us-./«, oder iiire Alkali— oder Brdalkalisalzeγ ferner Sorbitaimonooleat, Ester hönerer Fettsäuren wie ζ,Β» die Ölsäure-' ester von Polyoxyätnylenglykol,_; die Palmitinsäureester von Polyoxyäthylenglykol, u,sw,, und dglo ™

Eypisciie Beispiele solcher o"berf lächenaktiven Hittel umfassen Hirnean S-204 ( Polyoxyäthylenalkylamin ), ITonion E-215 ( Polyoxyäthylenol eyläther ) , Ε"onion IP-2OR ( Sortitanmonolaurat ), IT onion 0-6 ( Polyoxyäthylenglykolmonooleat )» Ifonion L-4 (Polyoxyäthj/lenglykolmonolaurat ), Honion SiU-221 ( Polyoxyäthylensorloitanmonostearat ) [Cween 20 _r Iween $0, Mmid 1-215 ( Poly0xyäthylenalkylamid ) , usw.

Der Zeitpunkt _t zu dem. diese Zusatzstoffe dem Züchtungsmedium tatsächlieh zugesetzt werden^ variiert in. Athäig-gkeit von dem speziellen verwendeteja ¹Sj^-B* Jedooh wird die grösste ¥irkioig festgestellt_r weiaiL man die Zusatzstoffe zu demsellDeBL Zeitpunkt iiinzuf^gt, zu dem. der MikroorganismES iadas Züchtu^gsiaedium eingeimpft wird, odei· während des

2 0 9 Ö H / 013 f Anfan^sstadlums

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Anfangs stadiums der Züchtung· Es wird darauf hingewiesen, dass erwünschtenfalls eine Mischung zweier oder mehrerer der Antibiotika oder der oberflächenaktiven Mittel dem Züchtungsmedium zugesetzt werden kann., wobei solche Kombinationen ebenfalls eine signifiante Beschleunigung der Produktion von Sacohariden durch Fermentation ergeben«

Die günstige Menge des verwendeten Zusatzstoffes kann innerhalb weiter -Grenzen, varriert werden, muss jedoch natürlich eine solche sein, dass das Wachstum des Verwendeten Mikroorganismus nicht gehemmt wird. Die Yariierung der Mengen hängt von den besonderen- Arten der Zusatzstoffe und Mikroorganismen, die bei der Fermentation, verwendet werden, ab. Optimal ist eine Gesamtmenge von. 50 bis 2 000 iig Gesamtzusatzstoff pro 1 ml Züchtungslösung, . ■

Jeder Mikroorganismus, der imstande ist, Kohlenwasserstoffe zu assimilieren, um Saccharide zu produzieren,- kann für das erfind ungs ge masse Te Γι ahr en verwendet werden. Solche Mikroorganismen können, zu den Gattungen Arthrobacter, Brevibaeterium, ßorynebacterium und Micrococcus gehören.

Sowohl ein synthetisches als auch ein

natürliches Züehtungsmedium sind für das erfindungs-

die gemässe Ye rfahr en geeignet, sofern sie/für das Wachs-

turn des'speziellen., verwendeten. Mikroorganismus

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wesentlichen Nährstoffe enthalt en«. Solche Hahrstoff e ■ sind in der Technik bekannt, und ai ihnen gehören . Substanzen wie eine Kohlenstoffquelle, eine Stickstof f quelle _t anorganische Stoffe und dgl», die in geeigneten Mengen von dem verwendeten. Mikroorganismus ausgenutzt werden· .Wie oben angegeben, werdeii bei dem erfindungsgemässen Yerfahfen'Kohlenwässerstoffe als Hauptkohlenstoffquelle verwendet* Die bevorzugten Kohlenwasserstoffe s,ind n-Paraffine mit 6 bis 30 G-Atomen oder versehieiene ,Arten von Eohlenwasserstoffdestillaten, die diese enthalten« Jedoch kann im Prinzip jeder kohlenwasserstoff, der £ir Mikro Organismen verwertbar ist, verwendet werden* Andere Kohlenstoff quellen als Kohlenwasserstoffe können in dem ZUchtungsmedium in kleineren Mengen vorhanden sein, dazu gehören Substanzen wie Kohlehydrate, z»B* Grlukose, FÄtose, Maltose, Sukrose, Stärke,Γ Starke-

gs eignete hydrolysate, Melassen, usw», oder irgendeine/'üLohlenstoff quelle wie z.B» Crlyc er in, Mannit, Sorbit usw.

'■■■■■■■ ■■"..-■"■■ Yerschiedene Gemische davon können verwendet werden,, Als Stickstoffquelle können, verschiedene anorganische und organische Salze und Terb.io.dungen verwendet werden, wie z.B. Harnstoff oder Ammoniumsalze, z.B. Ammoniumchlorid, AmmoniumsUlfat. Ammoniumnitrat, Ammoniumphösphat, usw. oder eine Aminosäure oder

209 8 1Λ/0237 · mahrer«

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mehrere imino säur en. im. Gemisch, oder natürliche Substanzen, die Stickstoff ethalten, wie a.B. M-aisciuellflüssigkeit, Hefeextrakt * fleischextrakt, Pepton, Fischmehl, Gaseinhydrolysate, Öasaminosäure, Fisehpreßsäfte, Reiskleieexträkt usw* Diese Substanzen können ebenfalls als Gemische zweier oder mehrerer verwendet werden_e Anorganische Verbindungen, die zum Züehtungsmedium. hinzugefügt werden können, sind ZoB.- Magnesiumsulf at_# .ITatriumphosphat, Kalium- ^: W^: dihydrogenphesphat» Kaliummonohydrogenphosphat, Eisen-Sulfat oder ändere Eisensalze» Manganehlorid, GaI-ciumchlorid usw. Spezielle Eährstoffej die für das ■ Wachstum des besonderen verwende ten. Mikroorganismus notwendig sind, sollten, ebenfalls zu dem Züchtungsmedium in geeigneten Mengen hinzugefügt werden.

Wie oben angegeben, werden Kohlenwasserstoffe als Hauptkohlenstof£c[uelle bei der er/findungs-

gemässen. Fermentation verwendet, wobei n-P ar affine mit

6 bis 50 G-Atomen bevorzugt werden* Hierzu gehören Paraffine (Alane) mit geraden und verzweigten Ketten wie z.B· η-Hexan, n-Oktan, a—Dekan, id)'odekan, n-Hexadekan, Isooktan usw., Jedoch können auch andere Kohlenwasser- "■=■ Stoffe wie Kerosin und Cycloparaffine wie z.B. Oyclohexan und Oi'elooktan, ferner Olefine mit geraden und verzweigten Ketten, wie 2.B» Penten~2, Hexen~l, Okten-1, Okten-2 usw., Cycloolefine wie z.B. öyclo-

209814/0237 -hexen,.

BAD

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hexen_s aromatische Kohlenwasserstoffe wie Benzol ^ -o-Xylol usw.» sowie Gemische davon? und gemischte Kohlenwasserstoffe? wie z.B₀ Iieiehtöle, Schweröle, Faraffinöle usw. verwendet werden»

Die Fermentation wird unter aeroben Bedingungen, wie z.B.« aerobem Schütteln oder Rühren einer Submerskultur bei einer Temperatur von etwa 25 - 4-0° Q und einem pH von etwa 4»0 bis 9^0 durchgeführt» Falls notwendig, wird der pH auf innerhalb dieses Bereiches durch Zugabe-einer Harnstofflösung, ™

von wässrigem Ammoniak oder einer Ατητηoniumearb onatlösung zujäi dem. Medium während der Züchtung eingestellte Die Fermentation ist gewöhnlich nach etwa 2 bis 4 Tagen unter diesen Bedingungen abgelaufen. Sie ist dann beendet, wenn der Gesamtaucker-Gehalt seinen höchsten gemessenen Wert erreicht,

Nach Beedkiigung der Fermentation wird die Fermentationsfiüssigkeit filtriert und dann über ein Kationenaustauscherharz geschickt₉ sodass sämtliche |

zugleich mit den Saehariden produzierten Aminosäuren sowie die vorliegenden Kationen adsorbiert und entfernt werden» Die Abfl-usslösung wird dann über ein Anionenaustauscherharz geschickt, um organische Säuren und andere saure Substanzen zu entfernen. Die auf diese Weise erhaltene AbflusBlösung wird unter

vermindertem

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vermindertem Druck konzentriert, oder nach einem Entfärbungsvprgang konzentriert» Hieraus können dann die Saccharide gewonnen werden₀

Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende ..Erfindung erläutern, jedoch nicht 'beschränken.-Die Prozentgehalte sind Gewichtsprozente, wenn nicht anders angegeben.

Beispiel 1 .

Arthrobacter paraffiixeus 24-11 ATÖG 15591 wird unter aeroben Bedingungen zur Bildung eira? Einsaatkultur 24 Stunden lang unterSchütteln in einem Züchtungsmedium, das I₉O <fo Fleischextrakt, 1,0 ^c;> Pepto-n und 0,5 ^e[° Natriumchlorid enthalt und einem pH von 7jO ( TTor der Sterilisation ) aufweist, gezüchtet. Die entstehende Einsaatkultur wird in einem Verhältnis von 10 Tol·-^ in einen 5 1 - J ar-Ferment er, der 3 1 eines Ferment ationsmed iums der folgenden Zusammensetzung enthält ( pro Liter V/asser ) ,singeimpftί -

0,2 i* ^K2^HPO4

0,1 ff MgS0₄»7H₂0

0,002 $ JInSO..4H₉O

0,002 ψ FeSQ₄.7H~0

0,001 <fo ZnSO₄ ·7Η₂Ο

1,0 fo HH₄HO₃

0,3 fo Maisaiiellflüasigkeit

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■ '-* ■■'..".; . ■ , Die ·

BAD

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Die Züchtung wird dann. 80 Stunden lang bei 30° Ö" unter Rühren bei 600 TJ/Min<> und Belüftung mit sterilisierter luft bei einer Durchs at zgeschwindjLgkeit "von 1 Liter pro Liter durchgeführt» Zu Beginn der Züchtung, werden zu dem. Medium 4ÖÖ ml n-pf-affine mit 10-18 G-Atomen hinzugesetzt, Fach 10 bis 24
Stunden der Züchtung werden 12 000 Einheiten Penicillin hinzugefügt. Der pH des Züchtungsmediums wird', mit wässrigem Ammoniak auf innerhalb des Bereiches von 6,0 bis 9,0 eingestellt® _t - |

Die bei Abschluss der Fermentation in
der Kulturflüssigkeit» produzierte Menge der Saccharide beträgt 15 g/l Gresamtzucker· ¥ird die Züchtung ohne Zugabe von Penicillin, sonst jedoch unter den gleichen Bedingungen, durchgeführt, beträgt die
produzierte Menge Saccharide nur 6 g/l Gresamtzucker»

Obgleich Typ und Zusammensetzung der produzierten Saccharide mit den. Züöhtungsbedingungen

und dem besonderen verwendeten Stamm variieren, *

setzen sich die hauptsächlich produzierten Zucker
bei dem vorliegenden Beispiel-aus einem Zuckerpolymer, . das !Drehalose, Glukose, ( und ihre Polymerisate ), Mannose und Arabinose enth^ält, zusammen.

Die Abtrennung der Zucker wird folgenderrmasken durchgeführt:

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Uach Abschluss der !Fermentation werden 2,5 1 der Ferment at ionsflüssigkei-fe filtriert unter Yerwendung von Gelite 545 ( hergestellt von liako Pure Chemical Industries ltd. ), und die Bakterienzellen werden abgetrennt und entfernt» Anschliessend wird die lösung über 2 liter eines Kationenaustauscherharzes ( Diatom SK IA, H-Typ* kationisches Austauscherharz aus: Polystyrolsulfonat, hergestellt von Mitsubishi Kasei) geschickt und mit Wasser gewaschen. Als Ergebnis werden 3 1 Abflus sXösung erhalten» Die AlfLusslösung wird dann Iiber 1 liter eines Anionenaustauscherharzes geschickt ( Diaion SA 200, OH-Typ^, anionisches Austauscherharz des vierten Amides von PolystyrolV hergestellt von Misubishi Kasei ) · Die so erhaltenen 4*3 -1 Abflusslösung (_f mit einem pH von'5,4 ) werden unter vermindertem Druck auf 100 ml konzentriert* Eia*z.u wird eine salzsaure Methanollösung hinzugefügt j um. die Saccharide auszufällen. Nachdem man die erzeugten niederschlage in einem kalten Baum stehen gelassen hat, werden sie filtriert und getrocknet· ;Das Endprodukt enthält 25 g eines weissen Saccharid-Gemisches, das 8 g Trehalose, 12 g 6-lukose und 3 g eines Mannosearabinoäe-Polymerisates ■' enthält. .

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Beispiel 2

Die Züchtung wird mit demselben Mikroorganismus , demselben Medium und mter denselben Bedingungen wie in Beispiel 1 durchgeführt. Die Wirkung auf die Produktion von Saccharid en durch Zugabe verschie- ! dener Antibiotika und oberflächenaktiver Mittel nach ' 18 Stunden der Züchtung zu dem Medium ist in Tabelle aufgezeigt, welche die nach 80 Stunden der Züchtung produzierten Mengen von Sac char iden angibt.

	Tabelle 1	Produzierte Saccharid-iienge . .(als Gesamtzucker)	Zugabe	Zugabe
Zusatzstoff	hinzugefügte Menge	keine ί	g/l	12.1 g/l
		3	g/l	- 8.2 g/l
Penicillin G ( Kalium-Salz )	50 Binheiten/ml ,	3	g/l	11,0 g/l
Streptomyc^ii- sulfat Γ	10 Einheiten/ml	3	g/l	11.3 g/l
Mitomycin	5 Binheiten/ml	"^3	g/l	8.5 g/l
Bacitracin-	20 Binheiten/ml	3	g/l	7.8 g/l
Öycloserin	50 Binhe iten/ml	3	g/l	6.9 g/l
S or bit anmono- oleat .	1 mg/ml	3	g/l	13.0 g/l
Iween 60	1 rag/ml	3	g/l	9.5 g/l
Penicillin + Tween 40	4 Bimiieiten/ial bzv. 1 mg/ml	VjJ		Beispiel 3
Hirne an S-204	1 mg/ml
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Beispiel 3 : . ,-; ., , . \

Brevibacterium ketoglutamicum 2473 ATCC 15588 wird unter Verwendung eines Destillates, das η-Paraffine mit 11 "bis 20 C-Atomen enthält, gezüchtet« Die Züchtung wird unter denselben Mingungen und mit demselben. Medium v/ie in Beispiel 1 durchge- · führt.

Fach 18 Stunden der Züchtung werden 50 Einheiten. Penieillin ( pro ml Züchtungsflüssigkeit ) zu dem Züchtungsmedium hinzugefügt. Die produzierte Menge von. Sacchariden nach 92 Stunden der Züchtung beträgt 6,0 g/l, gemessen als Wert des GesamtZuckergehaltes. Wird die Züchtung unter denselben Bedih-* gungen, jedoch ohne Zugabe des Penicillins, durchgeführ.i>, beträgt die produzierte Saecharid-^tenge 2,0 g/l·

Beispiel 4 '

Die Züchtung wird wiederum unter demselben Bediigingen und in demselben Medium wie in Beispiel 1 durchgeführt, ausser, dass Corynebacterium hydrocarboclastus ATCC 15592 als Mikroorganismus und leichtöl ( Erdölkerosin ) als Hauptkohlenstoff quelle verv/endet werden.

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100 Einheiten 3?enicillin pro ml Zuehtungsflüssigkeit werden, dem Medium zugesetzt ο Als Ergebnis beträgt die Menge von Sacehariden, die nach-96 Stunden der Züchtung produziert worden ist, 5»0 g/l. Wird die Züchtung unter genau denselben Bedingungen, jedoch ohne Zugabe von Penicillin, durehgefiihrt, Werden nur 2,0 g/l Saccharide produziert«. " .

Beispiel 5 · '

Die iermentationsflussikgieit, die erhalten wird, wenn man Arthrobacter paraffineus 2411- ATGÖ 15591 in demselben Medium und. unter, denselben Bedingungen wie in~Beispiel 1 züchtet, wird filtriert» Dann werden 2,5 1 des Filtrats unter Verwendung von Diaion SK-IJl ( H-Typ ) ent salzt, und die mit Schwefelsäure erzeugten Fiederschläge werden daraus entfant. Danach wird eine äquivalente Menge Methanol hinzugefügt, sοdass das Zuckerpolymerisat ausgefällt wird. ¥ach Rückgewinnung des Methanols wird die überstehende lösung durch Chromatographie unter Verwendung von Kohlenstoff ( gereinigt, von ."Shirasagi", Takeda Yakukko ) in eine gemischte Lösung von G-lukose, Puictose, Ribose, Arabinose und Trehalose getrennt*

2098 U/0237 Hach

--16 - Ki

Mach Hosen. 2Zi 2n Natronlauge- werden, die Zuckerpolymerisat—Niederschläge mit 1 1 EeMing* scher -lösung gemischt.. Die als Hupfersalz gefällten Saccharide werden, durch Zentrifugieren gesammelt j,jait iMmnol gewaschen und mit Salzsäure-salzsaurem Ltiianol land !.thanollösungen B'eliandelt· Dies- gil)t 5 »2 g eines weissen. Zuekerpolyiaerisates» JEaeii Hydrolyse werden.. Hannose, Arabinose xoid kmlnoznekeT erhalten.

Wie oTsen angesehen, ist die -vorliegende Erfinduag gekeaanzeicniiet durch. Zugabe τποη jkitilbiötika oder oberf läciienaictiTren EEitteln, oder G-emieelien davon zu einer Eultürflflssigkeit» um darin dureii fermentation grdsse Stengen iron Sacchariden zu. produzieren und anzureienern« Die JntiMotika oder die öberf läcnenaMsiTen Hittel können einzeln irerwendet werden, oder sie M5nnen in Xonibination irerwendet werden» Terscniedezie intiMotüka und olaerfläenenalcti"ve Uittel sind ol)en speziell aufgezählt worden, Jedoch kgnnen zahlreiche Jxten davon innerhalb des Anwendungsbereiches der vorü eg end en Erfindung verwendet werden, solange sie für das Wachstum des speziell verwendeten Hiiroor^aniemus nicht schädlich ₌ sind. Unter oberflächenaktiven Mitteln versteht man in der Technik gewöhnlich synthetische organische Verbindungen, die Oberflächenaktivität entfalten.

Zu 20981 A/0237 η

bad

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Zu diesen gehören netzmittel, Detergentien, Durchdringungsmittel, YerteiLungsmittel, Dispergiermittel, Schaumbildner usw· Alle diese Arten von Bubstanzen sollen in. den Bereich des Begriffes " oberflächenaktive Mittel " der vorliegenden Anmeldung fallen. Antibiotika sind antibaeterielle Substanzen biologischen Ursprungs, und der Ausdruck "antibiotisch¹⁵ wird hier in diesem Sinne/verwendet.

Die Erfindung kann in. vielfacher Hinsicht -^

variiert werden. Solche Tariationen werden nicht als Abweichung vom Sr und ge danken und Geltungsbereich der Erfindung betrachtet, und sollen in den Bereich der folgenden Ansprüche fallen. ■

Patentansprüche

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Claims

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Patentansprüche:

1. Terf ahren. zur Herstellung -von Sacchäriden durch Fermentation, indem ein Mikroorganismus, der Kohlenwasserstoffe zu assimilieren und Saccharide zu produzieren vermag, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen JTahrm-eidjum, welches mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoff quelle enthält, gezüchtet wird» dadurch gekennzeichnet, dass man eine Substanz, die mindestens ein Antibiotikum oder mindestens ein oberflächenaktives Mittel oder ein Gemisch davon sein kann, zu diesem Hährmedium hinzufügt. .

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenwasserstoff Keicsin, leichtöl, Scneröl, Naphtha, Buthan, Propan, Äthan,

20981 A/0237 ; * He than, ,

ORIGINAL

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Methan, Erdgas oder ein Gemisch, zweier oder mehrerer solcher Kohlenwasserstoffe verwendet wird«, ■

5· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als oberflächenaktives Mittel Polyoxyathylensortitanfettsäureester mit 12—18 Kohlenstoffatomen, Alkyl aminsalze mit 8-18 Kohlenmtoffatomeii, Polyoxyäthylenalkylamine mit 12-18 Kphlenrstoffatomen, Polyoxyäthy^enalkyläther mit 12-18EOh- g

1enstoffatomen, Polyoxyäthylenalkylallyläther mit 8-18 Kohlenstoffatomen, Mkyitrimethylaiimoniumhalogenide mit 12-18 Kohlenstoff al; omen, ilkyltenzyldimeiihylammoniumhalogenide mit 12-18 Kohlenstoff atomen, Jlkyl^ ■ pyridiniumhalögenide mit 12-18 KoHenst off atomen, Alkyrbetaine mit 12-18 Kolii enst off atomen, höhere Fett- " säuren, Alkali- und Brdalkalisalz.e höherer fettsäuren oder Ester höherer/ Fettsäuren verwendet werden.

4. Terfahren nach Anspruch 1, dadurch, ge- - " kennzeichnet, dass als Antilaiotikum Penicillin, Streptomycin, Bacitracin, Mitomycin oder Cycloserin verwendet wird* "

5-· Verfahren zur Herstellung von Sacchariden durch Fermentation, dadurch gekennzeichnet, '

2098U/0237 dass

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dass man einen Mikroorganismus, der Kohlenwasserstoffe zu assimilieren und Saccharide zu ^produzieren vermag, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Fährmedium., welches mindestens einen Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoff quelle sowie mindestens ein oberflächenaktives Mittel enthält, züchtet und dLe jüröduzierten Saccharide aus der entstehenden Kulturflüssigkeit gewinnt.

60 Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass als oberflächenaktives Mittel Polyoxyäthylensorbitanfettsäureester mit 12-18 - Koh/lenstof fat omen, Alkyl amins al ze mit 8-18 Kohlenstoffatomen, Polyoayäthylenalkylamine mit 12-18 Kohlenstoffatomen^ Polyoxyäthylenalkyläther mit 12-18 Kohlenstoffatomen, P oly oxy äthylenalkyl ally lather mit 8—18 Kohlenstoffatomen, Alkyltrimethylammoniumhalogenide mit 12-18 Kohlenstoffatomen, Alkylbenzyldimethylammoniumhalogenide mit 12-18 Kohlenstoffatomen, AlkXylpyridinlumhalogenide mit 12-18 Kohlenstoffatomen, ükylbetaine mit 12-18 Kohlenstoffatomen, höhere Fettsäuren, Alkali- und Erdalkalisalze höherer Fettsäure oder Ester höherer Fettsäuren verwendet werden. . '

7.Verfahren

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7. Verfahren nach Anspruch S, dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenwasserstoff ein n-Paraffin mit 6-30 Kohlenstoffatomen verwendet wird.

8. Verfahren nach/Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Züchtung hei einer Temperatur von 25-40°" G und "bei einem pH von 4,0 Ms 9,0 durchgeführt wird«,

9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mikroorganismus der Gattungen Arthrobacter, Bre%ibacterium, Oorynebacterium oder Micrococcus verwendet wird.

10- Verfahren zur Herstellung von Sacchariden durch !Fermentation, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Mikroorganismus* der Kohlenwasserstoffe zu assimilieren und Saccharide zu produzieren vermag, unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen lährmedium, welches mindestens einen. Kohlenwasserstoff als Hauptkohlenstoffquelle sowie minestens.ein Antibiotikum enthält, züchtet, und die produzierten Saccharide aus der entetehenden Kulturflüssigkeit gewinnt.

ll»Verfahren

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11» Verfahren nach Anspruch 10» dadurch gekennzeichnet, dass als Antibiotikum Penicillin, Streptomycin, Bacitracin, Mitomycin oder Cycloserin verwendet wird.

12o Verfahren nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenwasserstoff ein n-Paraff in mit 6-30 Kohlenstoff atomen verwendet wird»

13· Verfahren nach Anspruch 12_? dadurch gekennzeichnet, dass die Züchtung bei einer Temperatur von 25-40° C und einem pH von 4,0 - 9»0 durchgeführt wird.

14. Verfahren nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mikroorganismus der Gattungen Arthrobaeter, Brevibaeterium, Corynebacterium oder Micrococcus verwendet wird·

Mae/Br.
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