DE1642701A1 - Verfahren zur Herstellung von Zuckern durch Fermentierung - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von Zuckern durch FermentierungInfo
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Description
-· 18. Jan. 1967
Dr.-!ng. HANS RUSCHKl
K 712 DipWng. HEINZ AGÜLAR 1642701
K 712 DipWng. HEINZ AGÜLAR 1642701
Kyowa Hakko Kogyo, Oo., Ltd,, Tokyo / Japan
Verfahren zur Herstellung von Zuckern durch ferment ierung
Die Erfindung befasst sich mit der Fermentierung und insbesondere mit einem Verfahren zur Herstellung von Zuckern durch
Fermentierung·
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Permentierungsverfahren
zur Herstellung von Zuckern. Kohlenwasserstoffe, wie n-Paraffine
werden als Hauptkohlenstoffquelle verwendet und Mikroorganismen, die zur Assimilierung von Kohlenwasserstoffen geeignet sind,
werden hiermit unter aeroben Bedingungen in einem wässrigen Hähr~
medium unter Bildung der Zucker kultiviert. Typische gebildete Zucker sind Glukose, Mannose, G-alaktose, Arabinose, Shamnosej
Pruktose, Hibose und ähnliche, sowie deren Polymere»
Es ist bekannt, daß bestimmte Mikroorganismen in Kulturmedien, die Methan, Benzol, Kerosin und dergleichen als einzige Kohlenstoffquelle
enthalten, wachsen. Weiterhin wurde vor kurzem berichtet, daß Aminosäuren, organische. Säuren und dergleichen durch
einige MkrοOrganismen in Kulturmedien, die Kohlenwasserstoffe
als Ausgangsmaterial enthalten, angesammelt werden. Jedoch wurde
209815/020
bisher kein Herstellungsverfahren für Zucker aus Kohlenwasser-
eiy.
stoff/ als Kohlenstoffquelle durch !Ferment ie rung gefunden.
stoff/ als Kohlenstoffquelle durch !Ferment ie rung gefunden.
Ganz allgemein wachsen viele Mikroorganismen in Kulturmedien,
die mindestens eine Zuckerart als Kohlenstoffquelle enthalten. Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung bestand in der industriellen
Herstellung von Zuckern, wie Glukose, Mannose, Galaktose, Arabinose, Rhamnose, Fruktose, Ribose und deren Polymeren aus
billigen Kohlenwasserstoffen als Ausgangsmaterialien. Es wurde festgestellt, daß einige Mikroorganismen mit einer Assimilierfähigkeit
für Kohlenwasserstoffe, die selektiv Kohlenwasserstoffe anstelle von Zucker assimilieren, Zucker bilden.
Eine Aufgabe der Erfindung bestellt in einem i1 er ment ierungs verfahren,
zur Herstellung von Zuckern,
Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht in einem Verfahren zur Herstellung von Zuckern durch eine Fermentierung, die in
wirksamer und einfacher Weise ausgeführt werden kann.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht in einem Verfahren,
zur Herstellung von Zuckern durch ein IPermentierverfahren, welches
vorteilhafterweise im Industriemaßstab unter Verwendung billiger Ausgangsmaterialien ausgeführt werden kann und eine hohe
Produktausbeute ergibt.
209815/0204
Diese und weitere Aufgaben und Vorteile der Erfindung ergeben
sich für den Fachmann aus der nachfolgenden Beschreibung«
Brfiiidungsgemäß wurde festgestellt, daß Zucker durch Fermentierung
gebildet werden, wenn unter aeroben Bedingungen Mikroorganismen kultiviert werden, die die Eigenschaft zur Assimilierung von
Kohlenwasserstoffen in einem Kulturmedium besitzen, welches mindestens eine Kohlenwasserstoffart als Hauptkohlenstoffquelle enthält.
Die gebildeten Zucker können dann aus dem Kulturmedium gewonnen werden.
Verschiedene Arten von Mikroorganismen können zur Bildung von
Zuckern in einem Kulturmedium, welches mindestens eine Kohlenwasserstoff
art als Hauptkohlenstoffquelle enthält, verwendet werden. Wie vorstehend ausgeführt, besitzen diese Mikroorganismen
die Fähigkeit, durch Assimilierung von Kohlenwasserstoffen zu wachsen. Beispiele sind die folgenden:
Arthrobacter paraffineus
Arthrobacter roseoparaffinus Brevibacterium ketoglutamicum Micrococous paraffinolyticus Bacterium aliphaticum
Gorynebacterium hydrocarboclastus Pseudomonas aeruginosa
Mycobacterium lactieola
Candida lipolytica
Arthrobacter roseoparaffinus Brevibacterium ketoglutamicum Micrococous paraffinolyticus Bacterium aliphaticum
Gorynebacterium hydrocarboclastus Pseudomonas aeruginosa
Mycobacterium lactieola
Candida lipolytica
Aspergillus oryzae
20981S/02CH
Es ergibt sich, daß Mikroorganismen mit der Fähigkeit, Zucker aus Kohlenwasserstoffen als Kohlenstoffquelle zu bilden, sowohl
hinsichtlich des -Genus als auch der Familie weit verstreut sind.
Gemäß der vorliegenden Erfindung sind η-Paraffine mit 6 bis 25
Kohlenstoffatomen oder verschiedene Arten von Kohlenwasserstoff—
fraktionen, die η-Paraffine enthalten, als verwendbare Kohlenstoff quelle geeignet. Jedoch kann selbstverständlich jeder Kohlenwasserstoff,
der durch den speziellen Mikroorganismus assimiliert werden kann, verwendet werden.
Die übrigen Einzelheiten der Kultivierung zwecks Herstellung der
gewünschten Zucker durch Fermentierung sind so, wie sie gewöhnlich
auf dem Fachgebiet angewandt werden,, Somit kann entweder ein synthetisches
oder ein natürliches Kulturmedium gemäß der Erfindung verwendet werden, so lange es die wesentlichen Hährstoffe für das
Wachstum des angewandten Stammes zusätzlich zu mindestens einer Kohlenwasserstoffart als Hauptkohlenstoffquelle enthält» Diese
Nährstoffe sind auf dem Fachgebiet bekannt und hierzu gehören ausser der Kohlenstoffquelle Substanzen, wie z.B. eine Stickstoffquelle,
anorganische Verbindungen und dergleichen, die durch den angewandten MikroOrganismen in geeigneten Mengen verwertet werden.
So können z.B. als Stickstoffquelle verschiedene Arten anorganischer
oder organischer Salze oder Verbindungen, wie Harnstoff, oder Ammoniumsalze, wie Ammoniumchlorid, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Ammoniumphosphat und dergleichen,oder eine oder mehrere
209815/0704
Aminosäuren, ciie gegebenenfalls vermischt sein können, oder
na.tarli.che iiubst&nzen, die bticliatoff enthalten, wie Maisqueliriütisivjiceit,
Hefeextrakt, Fleischextrakt, Pepton, IPischuenl,
Kaueinhydrolysate, Kas amino säure, lösliche i'ischprodukte,
Keisschaienextrakt und dergleichen angewandt werden» Diese Substanzen
können sowohl eiuzoln als auch in Kombination von
zv/ei oder mehr verwendet werden. Anorganische Verbindungen, die
dam Kulturmedium zugefügt werden können, umfassen Magnesium-.'u.1--^t,
iv'citriujüphosphat, Kaliumdihydrogenphosphat, Kaliummononydrogentihusphat,
leisen— II—ijulfat, oder weitere Eisensalze, Man—
ranohlorid, Calciumchlorid und dergleichen» Falls ein spezieller
*/uchafaktor für das Wachstum eines speziell eingesetzten Mikroorganismus
notwendig ist, muß auch dieser dem Kulturmedium zu— werden.
Me B^ermentierung oder Kultivierung wird durchgeführt, in,-dem
dor angewandte Mikroorganismus in ein wässriges liährmedixim eingeimpft
und dann dieses unter aeroben Bedingungen bei 25 bis 4O0C
inKubirirt tfird. V/ährend der Kultivierung wird der pH-Wert auf
iiütin v/fjrt zwischen 4 und 10, vorzugsweise 6 — 9 durch Zugabe
beispielsweise einer Harnstofflösung, Ammoniak oder einer
;„:iiüionoaro.matlöüung eingestellt. Übiicherweiae ist die Fermenti
i.runj in *>
bis 3 Tagen beanJet, praktisch zu dem Zeitpunkt,
./ο -u-.r llji./ί-rt dt?r Gresar.ifc aange der Zucker ein Maximum zsigt.
ι u:) a ι h / π 2 ο /,
BAD ORIGINAL
— O —
16A2701
ITaeh beendeter Fermentierung können die Zucker dann aus der
Fermentierflüssigkeit abgetrennt werden. Bin Verfahren hi«rau
besteht in der Filtration dar Fermentierflüssigkeit und Durch leiten
des Filtrates durch eine Kationenaustauschharzkolonne,
wobei sämtliche Aminosäuren und Kationen adsorbiert und entfernt vvsrden. Der Ablauf wird dann durch eine Anionenaustauschharakolonne
zur Entfernung organischer Säuren und anderer anionischem Substanzen geführte Der dabei erhaltene Abfluß wird dann
unter verhindertem Druck eingeengt und in einigen Fällen wird
er nach Entfärbung eingeengt.
Ln dieser Vfeise oder in irgend einer anderen geeigneten weise
lassen sich die Zucker aus der Fermentierflüssigiceit gewinnen.
Vorhandene Zuckerpolymers können vor oder nach dem Durchhielten durch die Kolonne hydrolysiert werden und dann die vorstehend
beschriebenen Verfahren angewandt werden·
Die folgenden Beispiele dienen lediglich zur Erläuterung der Erfindung
ohne sie zu begrenzen. Falls nichts anderes angegeben
ist, sind die Prozentsätze auf das ü-ewicht bezogen. Es sei aufgeführt,
daß sämtliche I-iiLi-oorganismen, die die vorstehend aufgeführten
Kohlenwasserstoffassimiliereigenschaften besitzen, sov/i-3
llutantens'bämme hiervon ang-v./unit v/erden können und daß die vorliegende
Erfindung nicht v\x£ die speziell angegebenen kikrot.r^niw.nan
begrenzt int,
.in I *, / ii Π)<\
BADOftfGlNAL
Arthrobacter paraffineus, ATCO 15591 wurde in einem Impfkulturmedium
aus 1,0 "/> Fleischextrakt, 1,0 f>
Pepton und 0,5 # UaCl während 24 Stunden unter aeroben Schütteln kultivierte Der pH-
\Vert der Flüssigkeit wurde vor der Sterilisierung auf 7»2 eingestellt.
Das erhaltene Impfmedium wird dann in 3 Liter eines Kulturmediums,
welches in einem Schüttelfermentiergefäß von 5 Liter enthalten
ist, im Verhältnis von 10 Volumen-^ inokuliert .■ Das Kulturmedium
hatte folgende Zusammensetzung:
0,2 ^0 K2HPO4
0,1 96 MgSO4.7H2O
0,002 £ MnSO4.4H2O
0,002 ^ FeSO4ο7H2O
0,001 fo ZnSO4.7H2O
1,0 #
0,002 £ MnSO4.4H2O
0,002 ^ FeSO4ο7H2O
0,001 fo ZnSO4.7H2O
1,0 #
0,02 fo Maisquellflüssigkeit
Die Kultivierung wurde' bei 300C unter Rühren mit 600 U/Min,, und
mit Belüftung mit 1 Liter/Min,, steriler Luft während 80 Stunden
durchgeführt. Zu Beginn der Kultivierung wurden 100 ml eines G11 ~ G-jß-n-Paraffingemisches dem Medium zugegeben. Anschliessend
wurden jeweils 100 ml der gleichen Kohlenwasserstoffe_
209815/n?(H
ORiGlNAt*
24 Stunden zugefügt» Der pH-Wert des Kulturmediums wurde auf
6,8 bis ?,5 mit Ammoniakwasser während der Kultivierung eingeregelt. · ·
Nach, beendeter Fermentierung betrug die gebildete Zuokermenge
8 g/Liter (als G-esamtzucker).
Der Zucker wurde dann aus der ]?ermentierflüssigkeit gewonnen»
Zunächst wurden 2,5 Liter der IPermentierflüssigkeit unter Zuhilfenahme
von Gelite 545, hergestellt von Takeda Pharmaceutical Go.,
Ltd., als Mlterhilfe zur Entfernung der Zellen filtriert. Das
erhaltene Piltrat wurde durch 2 Liter einer Kationenaustauschharz—
säule (Diaion SK Nr. 1A, Η-Typ, hergestellt von Mitsubishi Kasei
Go»,Ltd.) geführt und mit Wasser nachgewaschen« 3 Liter des Ablaufes
wurden hierbei erhalten. Der Ablauf wurde dann durch 2 Liter einer Anionenaustauschharzkolonne (Diaion SA 200, OH-Typj
hergestellt durch Mitsubishi Kasei Go«, Ltd.) geführt. Die schliesslieh
erhaltenen 4»3 Liter Ablauf wurden auf 100 ml unter vermindertem Druck eingeengt. Eine Lösung von Salzsäure in Methanol
wurde dann zur Ausfällung der Zucker zugefügt. Die Lösung wurde dann in einen Kühlraum gestellt. Der dabei abgeschiedene Niederschlag
wurde abfiltriert und getrocknet. Es wurden 12g eines weißen GKLukosepolymeren gewonnen.
209815/0204
Arthrobaoter roseoparaffirnis, AICÖ 15584,wurde in einem Kulturmedium,
das Kerosin als Kohlenstoffquelle enthielts in
einem Schüttelfermentiergefäß von 5 1 in der gleichen Weise wie bei Beispiel 1 kultiviert. Nach einer Kultivierung von
72 Stunden wurde die !Fermentierflüssigkeit mit 1n~Sehwefelsäure
"bei 1OCK! während 1 1/2 Stunden behandelt. Die Zucker wurden dann aus dem Hydrolysat entsprechend dem Verfahren
nach Beispiel 1 gewonnen. Is wurden 5»3 g Glukose und 1,3 g Rohrzucker (berechnet als Glukose) aus 2 1 3?ermentierflüssigkeit
erhalten.
Brevibacterium ketoglutamüsum, A02GÖ 15587» vjurde in der
gleichen Weise und in dem gleichen Kulturmedium wie in Beispiel 1, mit der Ausnahme kultiviert, daß n-Paraffine der
O15-bis GpQ-^raktionen als Kohlenstoffquelle verwendet wurden.
Die gebildete Zuokermenge betrug 3S3 g/l (Gesamtzucker)
nach 76-stündiger Kultivierung.
Die Fermentierflüssigkeit wurde mit Schwefelsäure wie in
Beispiel 2 hydrolysiert. Inschließend wurde sie durch ein Ionenaustauschharz gegeben. Hierbei wurden 4S3 g Glukosekristalle
aus 2,5 1 Fermentierflüssigkeit gewonnen«
209815/0204
Gorynebacterium hydrocarboclastus, ATÖC 15592S wurde in
einem Impffculturmedium aus 2 $ Sorbit, 1 $ Pepton, 1 j£
Fleischextrakt und 0,5 $ !Natriumchlorid während 24 Stunden
unter aerobem Schütteln kultiviert. Die ernaltene Impf kultur wurde in das nachfolgend beschriebene Permentiermedium
in einer Menge von 10 Volumen-^ inokuliert. Das angewandte lermentiermedium hatte folgende Zusammensetzung:
10 56 Kerosin (Kohlenwasserstoffquelle)
0,2 # Ε2 ΗΪ04
0,2 $ KH2PO4
0,1 $> MgSO4-TH2O
0,005 i> MnSO4-4H2O
0,001 £ PeSO4-YH2O
2,0 $> HH4NO3
0,02 $ Maiaquellflussigkeit
2 y/1 Oihianiin
Der PjT-Wert des Permentiermediums wurde vor der Sterilisierung
auf 7,5 eingestellt. Anteile von 20 ml des Fermentiermediums
wurden in Sakaguchi-Kolben gegeben * Die Kultivierung wurde dann unter aerobem Schütteln bei 3O0C durchgeführt. Der
p„-Wert wurde auf 6 bis 8 während der Kultivierung durch
Harnstofflösung und Ammoniumcarbonatlösung eingeregelt»
Hach einer Kultivierung während 4 Sagen wurde die erhaltene
Permentierflüssigkeit durch das gleiche Ionenaustauschharz
wie in Beispiel 2 gegeben. 50 ml des Abflusses wurden mit
,...,. 20881S/0204
4 $> Schwefelsäure hydrolysiert, und anschließend wurde dieser
chromatographisch mittels eines Anionenaustauschharzes ■vom Borsäure typ (Dowex 1X8) "behandelt. Es wurden 0,55 g
Glukose, 0,1 g Xylose und 0,1 g Fructose aus 1,3 1 Fermentierflüssigkeit
gewonnen.
Micrococcus paraffinolyticus, AfGG 15582, wurde in einer Impfkultur
kultiviert, die durch Zusatz von 5 # η-Paraffinen mit
C1 c-GoQ-Fraktionen und 0,1 $ Harnstoff zu dem Impfkultunnedium,
wie es in Beispiel 4 "beschrieben ist, hergestellt worden war. Das aerobe Schütteln wurde während 24 Stunden durchgeführt
.
Das erhaltene Impfmedium wurde in dem gleichen Fermentiermedium und gemäß dem in Beispiel 4 "beschriebenen Verfahren kultiviert.
Bach einer Kultivierung während 4 lagen wurde die Fermentierflüssigkeit wie in Beispiel 2 "beschrieben behandelt.
Es wurden 0,8 g Glukose und 0,3 g Rohrzucker aus 1,5 1 Kulturflüssigkeit
gewonnen.
Es wurde die gleiche Kultivierung wie bei Beispiel 5 durchgeführt,
jedoch unter Verwendung von Psaudomonas aeruginosa, A[CGO 7Y00. Nach einer Kultivierung während 120 Stunden waren·
O9V^ g/l Glukose und 0,42 g/l Ribose in der Fermentierflüsgebildet.
209815/0204
BAD ORIGINAL
Wie vorstehend ausgeführt, stellen η-Paraffine mit 6 Ms
25 Kohlenstoffatomen die bevorugte Kohlenwasserstoffquelle für die Verwendung beim er findungs gemäßen Verfahren dar.
Ein einziges η-Paraffin oder ein Gemisch von mehreren dieser
η-Paraffine oder ein Gemisch von einem oder mehreren
dieser η-Paraffine zusammen mit weiteren Kohlenstoffquellen,
beispielsweise Alkoholen, organischen Säuren oder deren
Estern, wobei die η-Paraffine den Hauptbestandteil bilden, können ebenfalls verwendet v/erden.
Die Erfindung wurde im vorstehenden anhand bevorzugter Ausführungsformen
beschrieben. Selbstverständlich können Änderungen daran vorgenommen werden, ohne daß der Bereicn der
Erfindung verlassen wird.
209818^070* BAD ORIGINAL
Claims (7)
1.) Verfahren zur Herstellung von Zuckern, dadurch gekennzeichnet,
daß ein zur Assimilierung von Kohlenwasserstoffen unter aeroben Bedingungen geeigneter Mikroorganismus
in einem wäßrigen Nahrmedium in Gegenwart mindestens einer Art eines Kohlenwasserstoffs als Hauptkohlenstoffquelle
kultiviert wird.
2.) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Kohlenwasserstoff η-Paraffine mit 6 bis 25 Kohlenstoffatomen
verwendet werden.
3.) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzebhnet, daß als
Kohlenwasserstoff Kerosin verwendet wird.
4.) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Kohlenwasserstoff Benzin (benzene) verwendet wird.
5.) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Kultivierung bei einer Temperatur zwisohen etwa 25 und 4<K!
und bei einem pH-¥ert von etwa 4 bis 10 durchgeführt wird.
6.) Verfahren zur Herstellung von Zuokern, dadurch gekennzeichnet,
daß ein zur Assimilierung von Kohlenwasserstoffen un-
209815/0204
ter aeroben Bedingungen geeigneter Mikroorganismus in
einem wäßrigen Nährmedium "bei einer Temperatur von etwa
25 bis 40flß und einem Prr-Wert von etwa 4 bis 10 kultiviert
wird und dann der gebildete Zucker aus der erhaltenen Fermentierflüssigkeit gewonnen wird.
7.) Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Gewinnung mittels mindestens einer Art einer Ionenaus
tauschharzbehandlung durchgeführt wird.
209815/020*
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP411066 | 1966-01-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE1642701A1 true DE1642701A1 (de) | 1972-04-06 |
Family
ID=11575633
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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