DE1518342C3

DE1518342C3 - Eledoisinwirksame Heptapeptide und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE1518342C3
Application number: DE1518342A
Authority: DE
Inventors: Klaus Dr. Luebke; Ralph Dr. Schmiechen; Eberhard Dr. Schroeder
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1963-03-01
Filing date: 1963-10-31
Publication date: 1974-05-09
Also published as: DE1518340A1; NL142150B; DE1518342A1; US3415803A; DE1518344C3; NL6401975A; DE1518344A1; DE1518342B2; BE644609A; DE1518344B2; CH488662A; GB1054191A

Description

mit Äther gefällt und aus Methanol-Äther umkristallisiert.

Ausbeute 45,9 g (80% der Theorie), Schmelzpunkt 154 bis 156° C [oc]_D = -58,5° (c = l.Eisessig).

b) BOC - GIy - L - AIa - L - Phe - OMe

17,5 g BOC-GIy-OH werden bei -15⁰C in 150 ml Dimethylformamid mit 14,0 ml Triethylamin und 10,0 ml Chlorameisenäthylester in das gemischte Anhydrid überführt und mit einer Lösung von 31,5 g H-L-Ala-L-Phe-OMe-HCl und 15,4ml Triäthylamin in 150 ml Dimethylformamid umgesetzt. Nach der üblichen Aufarbeitung werden 31,5 g (77% der Theorie) erhalten.

Schmelzpunkt 106 bis 108⁰C, [<x]_D = —24,6° (c = 1, Methanol).

c) BOC - GIy - L - AIa - L - Phe - NHNH₂

Die Verbindung wird aus dem Methylester durch Umsetzung mit der 4fachen Menge Hydrazinhydrat in Methanol erhalten, Ausbeute 89% der Theorie, Schmelzpunkt 177 bis 183° C [a]_D = -21,T (c = 1, Eisessig).

Met-NH₂

d) BOC - L - Heu - GIy - L - Leu - L

Aus 11,6- g BOC - L - Heu - OH und 21,3 g H - GIy - L - Leu - L - Met - NH_? · HCl werden nach der Anhydrid-Methode (Chlorameisensäureäthylester, Triäthylamin in Dimethylformamid bei —15°C) 22,0 g (84% der Theorie) an BOC - L-Heu - GIy-L - Leu - L - Met - NH₂ erhalten. Schmelzpunkt 207 bis 209⁰C, [<x]d = -33,2° (c = 1, Eisessig).

e) H-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-NH₂-HCl

21,2 g der erhaltenen BOC-Verbindung werden in 150 ml Eisessig gelöst. Die Schutzgruppe wird durch ^stühdiges Einleiten von Chlorwasserstoff abgespalten. Nach dem Fällen mit Äther wird aus Methanol-Äther umkristallisiert. Ausbeute 14,0 g (75 % der Theorie) an H-L- Heu - GIy - L - Leu - L - Met NH₂HCl, Schmelzpunkt 160 bis 200⁰C (Zersetzung), [a]_D = -27,1° (c = 1, Methanol).

f) BOC - GIy - L - AIa - L - Phe - L - Heu - GIy L - Leu - L - Met - NH₂

1,22 g BOC-GIy-L-Ala-L-Phe-NHNH₂ werden bei -2O⁰C in 3,6 ml einer 2,2 η-Lösung von Chlorwasserstoff in Tetrahydrofuran suspendiert und mit 0,37 ml tert.-Butylnitritindas Azid überführt. Nach dem Versetzen mit 40 ml kaltem Essigester wird mit einer gesättigten NaHCO₃-Lösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Diese Azidlösung wird mit einem Gemisch von 1,4 g H-L- Heu - GIy -L-Leu - L - Met -NH₂- HCl und 0,42 ml Triäthylamin in 15 ml Dimethylformamid umgesetzt.

Nach dem Einengen wird mit 10%iger Citronensäurelösung, Wasser, NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen und getrocknet. Ausbeute 2,16 g (89 % der Theorie) an BOC - GIy - L - AIa - L - Phe - L -Heu Gly-L-Leu-L-Met-MHa, Schmelzpunkt 252 bis 255°C [oc]d = -27,0° (c = 1, Dimethylformamid).

g) H - GIy - L - AIa - L - Phe - L - Heu - GIy - L

- Leu - L - Met - NH₂HCl · 1,5 H₂O

Aus 2,0 g der BOC-Verbindung werden durch Schutzgruppenabspaltung mit Chlorwasserstoff in Eisessig in der wie oben beschriebenen Weise 1,6 g (88% der Theorie) an H - GIy-L-AIa-L - Phe

- L - Heu - GIy - L - Leu - L - Met - NH₂HCl -1,5 H₂O erhalten. Schmelzpunkt 240 bis 260⁰C, [oc]_D = —45,8° (c = 1, Eisessig).

■ Auf analogem Wege wird aus BOC - GIy - L - AIa

- L - Phe - NHNH₂ und H - L - VaI - GIy - L - Leu

- L - Met - NH₂ · HCl das entsprechende Valin-Derivat erhalten. Das durch ,die Abspaltung der Schutzgruppe entstandene Heptapeptidamid-Hydrochlorid wird mit LiOH in Äthanol-Wasser in die freie Base H - GIy - L - AIa - L - Phe - L - VaI - GIy - L - Leu

- L - Met - NH₂ übergeführt, Schmelzpunkt 225 bis 229° C, [<x]d = — 52,2° (c = 1, Trifluoressigsäure): Das für diese Synthese erforderliche Tetrapeptidamid BOC - L - VaI - GIy - L - Leu - L - Met - NH₂ ist auch aus BOC - L - VaI - GIy - NHNH₂ und H-L - Leu - L - Met - NH₂ zugänglich.

Claims

Patentansprüche:

1. Verbindungen der allgemeinen Formel GIycyl-L-alanyl-L-phenyl-alanyl-L-a-aminoacyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid, in der L-«-Aminoacyl für den L-Leucyl-, L-Isoleucyl- oder L-Valylrest steht.

2. Verfahren gemäß Patent 1518 340 zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel Glycyl-L-alanyl-L-pheiiylalanyl-L-ix-aminoacylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid, in derL-a-Aminoacyl für denL-Leucyl-j L-Isoleucyl- oderL-Valylrest steht, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise Glycin, L-Alanin, L-Phenylalanin, L-Leucin bzw. L-Isoleucin bzw. L-Valin, Glycin, L-Leucin und L-Methioninamid in dieser Reihenfolge kondensiert.

1 ng 2 ng 5 ng .10 ng Tabelle 50 ng 100 ng 200 ng Relative Wirksamkeit
bezogen auf
Bradykinin I Eledoisin 1
1 , Verbindung 2%
97o
8 7o 13 %
.13%
19% " 19%
18%
27% 32%
28%
30% ., 20 ng 44%
42%
20 %
38% 49%
40%
22% 50%
50% 10
10 bis 20 I
II
III
Eledoisin 34%
32%
77o
33%

Die in der letzten Doppelspalte der Tabelle aufgeführten relativen Wirksamkeiten sind gegeben durch den Quotienten aus gleich stark wirkenden Dosen der erfindungsgemäßen Verbindungen und des Bradykinins bzw. Eledoisins.

Die Erfindung der neuen Heptapeptide bedeutet vor allem einen Fortschritt auf synthetischem Gebiet.

Die Problematik der Synthese asparagin- oder asparaginsäurehaltiger Peptide (geringe Ausbeuten, Möglichkeiten von Nebenreaktionen durch Dehydratisierung oder Succinimid-Bildung und aufwendige .Synthesen der erforderlichen Ausgangsderivate) ist in der Literatur oft diskutiert worden (vgl. z. B. Battersby und R ob in son J. Chem. Soc. 1955, S. 259; John und Young J. Chem. Soc. 1954, S. 2870; Katsoyannis et al J. American Chem. Soc. 80, S. 2558 [1958], ferner die Übersichten Rudinger Coll. Czech. Chem. Comm. 24, S. 95 [1959] und die Monographie von Greenstein und W i η i t ζ »Chemistry of the Amino Acids« Wiley u. Sons, New York, London). Es bedeutet daher einen erheblichen Vorteil, Asparaginsäure, Asparagin und auch Glutamin, für das Ähnliches gilt, durch das einfachere und präparativ günstigere Glycin zu ersetzen.

Die Synthese der neuen Verbindungen kann nach den üblichen Methoden der Peptidkupplung, wie sie beispielsweise in der oben bereits erwähnten Monographie von Greenstein und W i η i t ζ beschrieben sind, vorzugsweise nach der Anhydrid-, der Acid-, der Carbodiimid- oder der Aktivierte-Ester-Methode,. erfolgen. Dabei wird die Aminosäuresequenz vorteilhaft aus kleineren Peptideinheiten aufgebaut; gegebenenfalls werden die an der Kondensation nicht beteiligten funktionellen Gruppen intermediär durch z. B. reduktiv oder hydrolytisch leicht abspaltbare Reste geschützt. . Im Beispiel werden folgende Abkürzungen verwendet:

H-L-AIa-OH

H -L -Phe- OH

H-L-VaIrQH.

H-GIy-OH

H - L - Leu - OH

H - L - Met - OH

H-L-Heu-OH

Cbo

BOC

Me

= L-Alanin
= L-Phenylalanin
= L-Valin
= Glycin
= L-Leucin
= L-Methionin
= L-Isoleucin
: Carbobenzoxy
= Carbo-t-butoxy
= Methyl

Beispiel
a) H - L - AIa - L - Phe - OMe · HCl

69,5 g BOC-L-Ala-L-Phe-OMe werden in 100 mi Eisessig gelöst; es wird 30 Minuten Chlorwasserstoff eingeleitet. Nach weiteren 30 Minuten wird