CH499497A - Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptide - Google Patents

Description

  
 



  Verfahren zur Herstellung neuer Polypeptide
Es ist bekannt, dass das Tetracosapeptid der Formel   
L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl-
L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L- prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-   
L-prolin sowie die entsprechende Verbindung, die statt des Glutamylrestes den Rest des Glutamins aufweist, die Wirkung des natürlichen   Adrenocoitcotropins    (ACTH) hat.



  Das natürliche Hormon, wie auch das oben genannte synthetische Tetracosapeptid enthalten ausschliesslich optisch aktive Aminosäuren der L-Form. Es wurde nun überraschenderweise gefunden, dass Tetracosapeptide der oben genannten Aminosäurezusammensetzung, in welchen die erste Aminosäure (Serin), D- oder D,L-Konfiguration hat, eine bessere adrenocorticotrope Wirkung als das nur   LÁminosäuren    aufweisende Tetracosapeptid besitzen.



   Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein Verfahren zur Herstellung des Tetracosapeptids der Formel
D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl    L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-    tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl    glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-arginyl-Larginyl-L-    prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl
L-prolin, in der die erste Aminosäure D- oder D,L-Konfiguration hat, sowie der entsprechenden Verbindung, welche statt des Glutamylrestes den Rest des Glutamins aufweist, ferner von Säureadditionssalzen und deren Verwendung zur Herstellung von Komplexen der genannten Peptide mit komplexbildenden Metallen, wie Kupfer, Kobalt, und insbesondere Zink, oder schwerlöslichen Salzen oder Hydroxyden dieser Metalle, vor allem Zinkphosphat, Zinkpyrophosphat, Zinkhydroxyd und Zinkcarbonat.

  Die bei einem pH von 7-8 in wässriger Lösung ausfallenden, schwerlöslichen Komplexe enthalten das Peptid chemisch gebunden an die schwerlösliche Metallverbindung, z. B. an Zinkphosphat, vgl. Schweizer Patent Nr. 467 073.



   Die neuen Verbindungen haben eine hohe adrenocorticotrope Wirksamkeit und sollen in der Human- und Veterinärmedizin an Stelle des natürlichen Hormons verwendet werden.



   Die neuen Tetracosapeptide werden erfindungsgemäss erhalten, wenn man die Aminosäuren D-Serin (oder   D,L-Serin),    L-Tyrosin, L-Serin, L-Methionin, L-Glutaminsäure (oder L-Glutamin), L-Histidin, L-Phenylalanin, L-Arginin, L-Tryptophan, Glycin, L-Lysin, L Prolin, L-Valin, Glycin, L-Lysin, L-Lysin, LArginin, L-Arginin, L-Prolin, L-Valin, L-Lysin, L-Valin, L Tyrosin, L-Prolin in der angegebenen Reihenfolge unter intermediärem Schutz der Amino- bzw. Carboxylgruppen miteinander vereinigt. Die Aminosäuren werden in der erwähnten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten verknüpft. Beispielsweise kann man eines der Aminosäure- bzw. Peptidmoleküle in Form eines Esters mit einem weiteren Aminosäure- bzw.

  Peptidmolekül, das eine geschützte Aminogruppe enthält, in Gegenwart eines Kondensationsmittels, wie eines Carbodiimids oder eines Phosphorigsäureesterhalogenids, verknüpfen, oder man kann mit dem Aminosäure- bzw. Peptidester mit freier Aminogruppe eine Aminosäure bzw. ein Peptid mit aktivierter Carboxylgruppe (und geschützter Aminogruppe), z. B.



  ein Säurehalogenid, -azid, -anhydrid, -imidazolid, -isoxazolid (z. B. aus   N-Athyl-5-phenyl-isoxazolium-3'-sul-    fonat, s. Woodward et al., J. Am. Chem. Soc. 89, 1011 [1961]), oder einen aktivierten Ester, wie Cyanmethylester oder Carboxymethylthiolester, umsetzen. Umgekehrt kann auch eine Aminosäure bzw. ein Peptid mit freier Carboxylgruppe (und geschützter Aminogruppe) mit einer Aminosäure bzw. einem Peptid mit aktivierter   Aminogruppe (und geschützter Carboxylgruppe), z. B.



  einem Phosphitamid, zur Reaktion gebracht werden.



   An der Reaktion nicht beteiligte, freie, funktionelle Gruppen werden zweckmässigerweise geschützt,   insbe    sondere mittels durch Hydrolyse oder Reduktion leicht abspaltbarer Reste, die Carboxylgruppe vorzugsweise durch Veresterung, z. B. mit Methanol, tert.-Butanol, Benzylalkohol, p-Nitrobenzylalkohol, die Aminogruppe beispielsweise durch Einführung des Tosyl-, Tritylrestes oder der   Carbobenzoxygruppe    oder farbiger Schutzgruppen, wie der   p-Phenylazo-benzyloxycarbonylgruppe    und der   p-(p'-Methoxyphenylazo)-benzyloxycarbonyl    gruppe, oder insbesondere des   tert.-Butyloxycarbonyl-    restes.

  Zum Schutz der Aminogruppe in der Guanidogruppierung des Arginins ist die Nitrogruppe geeignet; die genannte Aminogruppe des Arginins muss aber bei der Reaktion nicht notwendig geschützt werden. Die Iminogruppe des Histidins kann vorteilhaft durch den Benzyl- oder Tritylrest geschützt werden.



   Die Umwandlung einer geschützten Amino- oder Iminogruppe in eine freie   Gruppe    sowie die   tSberfüh-    rung einer funktionell abgewandelten Carboxylgruppe in eine freie Carboxylgruppe im Verlaufe des Verfahrens erfolgt nach an sich bekannten Methoden durch Behandlung mit hydrolysierenden bzw. reduzierenden Mitteln.



   Vorteilhaft kondensiert man das Dekapeptid der Formel
L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl  (oder glutaminyl-)-L-histidyl-L-phenylalanyl
L-arginyl-L-tryptophyl-glycin, in dem die a-Aminogruppe des Seryls und gegebenenfalls die   y-Carboxylgruppe    des Glutamyls geschützt sind, in Gegenwart eines Carbodiimids mit einem Ester des Tetradecapeptids der Formel
L-Lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L valyl-L-tyrosyl-L-prolin, in dem die e-Aminogruppen des Lysyls geschützt sind.



  Als Schutzgruppen für die a-Aminogruppe des Seryls und die   Aminogruppen    des Lysyls verwendet man   vor-    zugsweise die tert.-Butyloxycarbonylgruppe   (B OC);    die   df^-Carboxylgruppe    des Glutamyls und die Endcarboxylgruppe des Prolins werden vorteilhaft durch die   tert. -    Butylestergruppe geschützt.



   Das genannte Tetradecapeptid kann beispielsweise nach den in der deutschen Patentschrift Nr.   1196    666 oder Nr. 1   214242    beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Das Dekapeptid kann analog dem im Schweizer Patent Nr. 408 948 oder in den deutschen Patenten Nr. 1   212981    oder Nr. 1 210 877 beschriebenen Dekapeptid hergestellt werden. Man kann auch die Iminogruppe des Histidins durch den Benzyl- oder Tritylrest schützen, wie im Schweizer Patent Nr. 409 992 oder im französischen Patent Nr. 85 518 gezeigt, und das so geschützte   Dekapeptidderivat    mit dem Tetradekapeptidester kondensieren.



   Ferner kann man auch vorteilhaft das Tetrapeptid tert.-Butyloxycarbonyl    D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionrn    mit dem Eikosapeptidester    L-Glutamyl-(oder    Glutaminyl-)L-histidyl-L    phenylalanyl-Larginyl-L-tryptophyl-glycyl-L-    lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-Llysyl-L    arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L valyl-L-tyrosyl-L-prolinester,    in dem die   E-Aminogruppen    der Lysinreste durch die   tert . -Butyloxycarbonylgruppe    und die Carboxylgruppen des Prolin- und gegebenenfalls Glutaminsäurerestes durch die tert.-Butylestergruppe geschützt sind, kondensieren, beispielsweise nach der Azidmethode, wie im deutschen Patent Nr.   1196666    (Case 4823) beschrieben.

  Der Eikosapeptidester mit Glutaminsäure als erster Aminosäure wird z. B. erhalten, wenn man Carbobenzoxy    (i,-tert.-butyl) zL-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-   
L-arginyl-L-tryptophyl-glycin mit dem Tritosylat des Tetradekapeptidderivates    E-tert. -Butyl-oxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-    valyl-glycyl-tert.   -butyloxycarbonyl-Llysyl-tert    .  butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl
L-prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl-L lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester kondensiert und die Carbobenzoxygruppe hydrogenolytisch in Gegenwart von Eisessig und Palladiumkohle abspaltet.



   Je nach der Arbeitsweise erhält man die neuen Verbindungen in Form von Basen oder ihren Salzen. Aus den Salzen können in an sich bekannter Weise die Basen gewonnen werden. Von letzteren wiederum lassen sich durch Umsetzung mit Säuren Salze gewinnen, wie z. B.



  solche mit anorganischen Säuren, wie Halogenwasserstoffsäuren, beispielsweise Salzsäure oder Bromwasserstoffsäure, Perchlorsäure, Salpetersäure oder Thiocyansäure, Schwefel- oder Phosphorsäuren, oder organischen Säuren, wie Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure,   Nijialonsäure,    Bernsteinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Apfelsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Ascorbinsäure, Hydroxymaleinsäure,   Dihydroxymaleins äure,    Benzoesäure, Phenylessigsäure,   4-Aminobenzoes äure,    4-Hydroxybenzoesäure, Anthranilsäure, Zimtsäure, Mandelsäure, Salicylsäure,   4-Amino-salicylsäure,    2-Phenoxybenzoesäure, 2-Acetoxybenzoesäure, Methansulfonsäure,   Äthansulfons äure,    Hydroxyäthansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure,

   Naphthalinsulfonsäure oder Sulfanilsäure.



   Die verfahrensgemäss erhaltenen Tetrakosapeptide können in Form von pharmazeutischen Präparaten Verwendung finden. Diese enthalten die Peptide in Mischung mit einem für die enterale oder parenterale Applikation geeigneten pharmazeutischen, organischen oder anorganischen Trägermaterial.



   Die neuen Tetracosapeptide können in analoger Weise wie die nur   L-Konfiguration    aufweisenden Tetracosapeptide in   Kompiexverbindungen    übergeführt werden. So kann man insbesondere Zinkphosphat-, Zinkhydroxyd- und Zinkcarbonatkomplexe oder nach dem in der schweizerischen Patentschrift Nr. 490 337 beschriebenen Verfahren Zinkpyrophosphatkomplexe herstellen. Man erhält diese Komplexe, indem man eine saure wässrige Lösung, welche das Peptid und ein wasserlösliches Zinksalz enthält, mit einem Alkalimetallhydroxyd, -phosphat oder -pyrophosphat umsetzt und das pH auf 7-8 einstellt.

 

   Die Erfindung wird im folgenden Beispiel beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.



   Folgende Systeme wurden für die Dünnschichtchromatographie (an Silicagel) verwendet: System 43: tert.-Amylalkohol-Isopropanol-Wasser    (100 :40:55).   



  System 52: n-Butanol-Essigsäure-Wasser    (100:10:30).     



  System 100: Essigester-Pyridin-Essigsäure-Wasser    (60:20:6:11).   



  System 101: n-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser  (30   :20 : 6: 24).   



   Beispiele 1. tert.-Butyloxycarbonyl-D-serin-hydrat
10,5 g (0,1 Mol) D-Serin werden in 50 ml 2n Natronlauge gelöst und mit einer Lösung von 15,7 g (0,11 Mol)   tert.-Butyloxycarbonylazid    in 50 ml Methanol versetzt. Anschliessend werden 11,1 g (0,11 Mol) Triäthylamin in 100 ml Methanol unter Rühren bei 400 innert 4 Stunden zugetropft. Nach weiterem Rühren während 2 Stunden bei 400 und über Nacht bei Zimmertemperatur wird die Reaktionslösung durch Zugabe von 2n Salzsäure auf pH 6-7 gestellt und darauf im Vakuum bei 300 von Methanol befreit. Die wässrige Lösung wird mit Essigester überschichtet und bei   0     unter Rühren mit konz. Salzsäure auf pH 1-2 gestellt. Die Essigesterphase wird rasch abgetrennt, mehrmals mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen, getrocknet und im Vakuum eingedampft.

  Das erhaltene Öl (19,8 g) kristallisiert als Monohydrat beim Verreiben mit wenig Wasser bei   00:    15,95 g   (71 %),    F.   50-520.    Nach Umkristallisieren aus wenig Wasser: F.   =    unverändert;   [a]      2D=      -f-9,10    + 10 (c = 1,1 in Wasser). Die Substanz ist gemäss Dünnschichtchromatogramm einheitlich: Rf43   =   0,31;   Rf1o0=    0,65.



  2. tert.-Butyloxycarbonyl-D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L methionin-methylester.



   8,26 g (20 mMol) L-Tyrosyl-L-seryl-L-methioninmethylester werden unter Erwärmen auf 700 in einem Gemisch von 150 ml Acetonitril und 10 ml Dimethylformamid gelöst und nach Kühlen auf Zimmertemperatur mit 4,46 g (20 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-D-serin versetzt. Die Lösung wird auf   -5     gekühlt, unter Rühren mit einer Lösung von 4,53 g (22 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid in 10 ml Acetonitril versetzt und eine Stunde bei   -5     und über Nacht bei   0     gerührt. Nach Zugabe von 0,15 ml Eisessig wird das Reaktionsgemisch weitere 30 Min. bei   0     gerührt, der ausgeschiedene Dicyclohexyl   harnstoff    abfiltriert und das Filtrat bei 0,1 mm Hg eingedampft.

  Der   Rückstand    wird in Essigester aufgenommen, die Lösung bei   0     mit ln Salzsäure,   1n    Natriumbicarbonat und Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand verfestigt sich beim Verreiben mit Äther; nach Umkristallisieren aus   Methanol-Äther:    9,1 g   (76,    F.   152-1550;      [a]D=      -7,00    + 10 (c = 0,9 in Methanol). Die Substanz zeigt im Dünnschichtchromatogramm folgende Rf-Werte: Rf = 0,29 in Chloroform   +    Methanol   (9:1);    Rf4s = 0,78; Rfioo = 0,85.



  3.   tert.-Butyloxycarbonyl-D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-       methionin-hydrazid.   



   Eine Lösung von 12 g (20 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl - D   -seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-methyl-    ester in 50 ml Methanol wird mit 5 ml (0,1 Mol) Hydrazinhydrat versetzt und bei Zimmertemperatur stehen gelassen. Nach 3 Stunden wird das ausgeschiedene kristalline Hydrazid abfiltriert und mit Wasser und   Äthanol    gewaschen: 9,82 g (82%), F.   148-152 ;    umkristallisiert aus Methanol: F.   150-1530;      [a]2D=-6,3     + 10 (c = 1 in Methanol). Die Substanz ist gemäss Dünnschichtchromatogramm einheitlich:   Rfo3      =    0,65;   Rf,e    = 0,57;   Rftoo    = 0,51.



  4.   tert .-Butyloxycarbonyl-D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-       methionyl-(y-tert.-butyl)-Uglutamyl-L-histidyl-L-    phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin.



   1,43 g (2,4 mMol)   tert.-Butyloxycarbonyl-D-seryl-L-      tyrosyl-L-seryl-L-methionin-hydrazid    werden bei   - 100    in 15 ml Dimethylformamid aufgeschlämmt und bei dieser Temperatur mit 1,58 ml eiskalter 6n Salzsäure versetzt. Hierauf tropft man bei   -XO    0,5 ml eiskalte 5n Natriumnitritlösung dazu und lässt 25 Min. bei   -5     bis 80 reagieren. Gleichzeitig werden 1,65 g   y-tert.-Butyl-L-      glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl    - L - tryptophylglycin (1,9 mMol), in 5 ml warmem Dimethylformamid gelöst, auf   -100    gekühlt und mit 1,85 ml Triäthylamin versetzt.

  Bei   -150    trägt man die eiskalte Lösung des BOC-Tetrapeptidazides ein, rührt noch 1 Stunde bei   -100    und lässt über Nacht bei   0     weiterreagieren. Aus der Reaktionslösung scheidet sich wenig anorganisches Salz aus. Dieses wird durch Filtration abgetrennt und die resultierende Lösung am Hochvakuum auf ein kleines Volumen eingeengt. Das rohe amorphe BOC-Dekapeptid wird mit 100 ml 2n Ammoniumhydroxydlösung ausgefällt,   abgenutscht    und mit Wasser neutral gewaschen.



  Nach dem Trocknen erhält man 1,88 g rohes   DekaPep-    tidderivat. Die Kristallisation aus 50 ml   90 %igem    Methanol gibt 1,2 g reines BOC-Dekapeptid. F. 2080 (Zers.). Die Dünnschichtchromatogramme auf Silikagel in den Systemen 52 und 101 zeigen nur je einen Fleck mit Pauly-Ehrlich- und Reindel-Hoppe-Reagens.   Rf5e    0,2 und   Rflol    = 0,6. [a]D =   -160      1    10 (c = 0,9 in   50 %igem    Pyridin).



  5.   tert.-Butyloxycarbonyl-D-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-       methionyl-(r-tert. -butyl)    -L-glutamyl-L-histidyl-L phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-tert. butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl    tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-tert.-butyloxy- carbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-    valyl-tert. -butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L    tyrosyl-L-prolin-tert.-butylester.   



   Unter Stickstoff werden 0,725 g    tert.-Butyloxycarbonyl-l)-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-       methionyl-(y-tert.-butyl)    -L-glutamyl-L histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl glycin (0,5 mMol) und 1,11 g  (0,5 mMol) e-tert.-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-L    prolyl-L-valyl-glycyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-    lysyl-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-tert.  butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L    prolin-tert .-butylester-trihydrochlorid    in 5 ml 90   Sigem    Pyridin während 1 Stunde bei 500 gerührt, dann gibt man 175 mg (0,85 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid dazu und nach 5 Stunden nochmals die gleiche Menge Carbodiimid. 

  Man lässt 24 Stunden bei der erwähnten Temperatur reagieren, filtriert vom abgeschiedenen Dicyclohexylharnstoff ab (161 mg) und fällt das rohe Reaktionsprodukt mit viel Essigester aus (1,77 g). Das Hydrochlorid wird an einem Ionenaustauscher Amberlite IR-4B (Acetatform)   (m    16 mm, h = 27 cm) in das Triacetat übergeführt. Zur Reinigung wird die gesamte Menge des geschützten Tetracosapeptidesters in 50 % tert.-Butanol an einer Carboxymethylcellulosesäule   (e    16 mm,   h = 17    cm) mittels 50   zeigen    tert.-Butanols, enthaltend steigende Konzentrationen von 2n Essigsäure, chromatographiert.

  Neben Randfraktionen lässt sich der reine geschützte Tetracosapeptidester mittels   50%gen    tert.-Butanols und 2n Essigsäure   (96 : 4) eluieren.    Ausbeute: 740 mg.  



   Im Dünnschichtchromatogramm zeigt diese Fraktion im System 101 nur 1 Fleck mit Pauly-, Reindel Hoppe- oder   Ninhydrin-Reagens,    Rf = 0,6. [a]D = 490 + 20 (c = 0,62 in Methanol).



  U. V.-Spektrum in 0,1n Natronlauge in Methanol:    man 283 ma, e = 8600 und ;tmax 289 mu, zur = 8950.



  Verhältnis Tyr 1,9.



   Try    6. D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-    valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-hexaacetat.   



   500 mg geschützter   Tetracosapeptid-tert.-butylester    werden mit 5,5 ml   9ûSiger    Trifluoressigsäure während 30 Min. bei Zimmertemperatur gespalten. Das Trifluoracetat wird mit viel peroxydfreiem Äther ausgefällt, abfiltriert mit viel Äther und zum Schluss mit Petroläther gewaschen. Der amorphe Rückstand wird in Wasser gelöst und das Trifluoracetat ins Acetat an einer Ionenaustauschersäule von Amberlite IR-45 übergeführt. Ausbeute: 450 mg dünnschichtchromatographisch reines Tetracosapeptid.   Rftot    = 0,5 (an Aluminiumoxyd).



     k.]D    =   -850      +      1,5     (c = 0,62 in 1 %iger Essigsäure).



  UV.-Spektrum in   0,ln    Natronlauge:   imaX    283   m    e = 8300 und 288   m,m,    e = 8600.



  Das Peptid lässt sich nicht mit Leucinaminopeptidase spalten.



  Im Saffran- und Sayertest zeigt es eine hohe adrenocorticotrope Wirkung.



   PATENTANSPRUCH I
Verfahren zur Herstellung der neuen Tetracosapeptide der Formel    D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-    glutamyl- (oder   L glutaminyl)-L-histidyl-L-    phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L-    lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L- arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-    valyl-L-tyrosyl-L-prolin sowie der entsprechenden Verbindungen, welche statt des D-Serylrestes den Rest des D,L-Serins aufweisen, und ihrer Salze, dadurch   gekennzeichnet,    dass man die Aminosäuren D-Serin (oder D,L-Serin), L-Tyrosin, L Serin, L-Methionin, L-Glutaminsäure (oder L-Glutamin), L-Histidin, L-Phenylalanin, L-Arginin, L-Tryptophan, Glycin, L-Lysin, L-Prolin, L-Valin, Glycin, L-Lysin, L-Lysin, L-Arginin, L-Arginin, L-Prolin,   Valin,    L Lysin,

   L-Valin,   Tyrosin,    L-Prolin in der angegebenen Reihenfolge unter intermediärem Schutz von Amino- und/oder Carboxylgruppen miteinander vereinigt.



   UNTERANSPRÜCHE
1. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man    D-Seryl-Utyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutainyl-
L-hlstidyl-L-phenylalanyl-L- arginyl-L-    tryptophyl-glycin, dessen   a-Amino-    und   r-Carboxylgruppen    geschützt sind, mit   
L-Lysyl-Uprolyl-L-valyi-glycyl-L-lysyl-L-Wsyl-L- arginyl-L- arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L- valyl-L-tyrosyl-Uprolin,    dessen e-Aminogruppen und terminale Carboxylgruppe geschützt sind, kondensiert.



   2. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man tert.-Butyloxycarbonyl-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L methionyl-y-tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin mit   
Nd-tert.-Butyloxyearbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L- v alyl-glycyl-tert . -butyloxycarbonyl-L-lysyl- tert.-butyloxycarb onyl-L-lysyl-L- arginyl-L-    arginyl-L-prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl
L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert butylester kondensiert.



   3. Verfahren nach Patentanspruch I oder dem Unteranspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man die erhaltenen basischen Verbindungen in ihre Säureadditionssalze überführt.

 

   PATENTANSPRUCH II
Verwendung von nach Patentanspruch I hergestellten Tetracosapeptiden der Formel
D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L glutamyl-(oder L-glutaminyl)-L-histidyl-L phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L- arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L valyl-L-tyrosyl-L-prolin oder der entsprechenden Verbindungen, die statt des D Serylrestes den Rest des D,L-Serins aufweisen, zur Herstellung von Komplexen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine saure wässrige Lösung, welche das Peptid und ein wasserlösliches Zinksalz enthält, mit einem Alkalimetallhydroxyd, -phosphat oder -pyrophosphat umsetzt und das pH auf 7-8 einstellt.

**WARNUNG** Ende DESC Feld konnte Anfang CLMS uberlappen**.



   

Claims (1)

1. **WARNUNG** Anfang CLMS Feld konnte Ende DESC uberlappen **.

   Im Dünnschichtchromatogramm zeigt diese Fraktion im System 101 nur 1 Fleck mit Pauly-, Reindel Hoppe- oder Ninhydrin-Reagens, Rf = 0,6. [a]D = 490 + 20 (c = 0,62 in Methanol).

   U. V.-Spektrum in 0,1n Natronlauge in Methanol: man 283 ma, e = 8600 und ;tmax 289 mu, zur = 8950.

   Verhältnis Tyr 1,9.

   Try 6. D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L- valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-hexaacetat.

   500 mg geschützter Tetracosapeptid-tert.-butylester werden mit 5,5 ml 9ûSiger Trifluoressigsäure während 30 Min. bei Zimmertemperatur gespalten. Das Trifluoracetat wird mit viel peroxydfreiem Äther ausgefällt, abfiltriert mit viel Äther und zum Schluss mit Petroläther gewaschen. Der amorphe Rückstand wird in Wasser gelöst und das Trifluoracetat ins Acetat an einer Ionenaustauschersäule von Amberlite IR-45 übergeführt. Ausbeute: 450 mg dünnschichtchromatographisch reines Tetracosapeptid. Rftot = 0,5 (an Aluminiumoxyd).

   k.]D = -850 + 1,5 (c = 0,62 in 1 %iger Essigsäure).

   UV.-Spektrum in 0,ln Natronlauge: imaX 283 m e = 8300 und 288 m,m, e = 8600.

   Das Peptid lässt sich nicht mit Leucinaminopeptidase spalten.

   Im Saffran- und Sayertest zeigt es eine hohe adrenocorticotrope Wirkung.

   PATENTANSPRUCH I Verfahren zur Herstellung der neuen Tetracosapeptide der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L- glutamyl- (oder L glutaminyl)-L-histidyl-L- phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L- lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L- arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L- valyl-L-tyrosyl-L-prolin sowie der entsprechenden Verbindungen, welche statt des D-Serylrestes den Rest des D,L-Serins aufweisen, und ihrer Salze, dadurch gekennzeichnet, dass man die Aminosäuren D-Serin (oder D,L-Serin), L-Tyrosin, L Serin, L-Methionin, L-Glutaminsäure (oder L-Glutamin), L-Histidin, L-Phenylalanin, L-Arginin, L-Tryptophan, Glycin, L-Lysin, L-Prolin, L-Valin, Glycin, L-Lysin, L-Lysin, L-Arginin, L-Arginin, L-Prolin, Valin, L Lysin,

   L-Valin, Tyrosin, L-Prolin in der angegebenen Reihenfolge unter intermediärem Schutz von Amino- und/oder Carboxylgruppen miteinander vereinigt.

   UNTERANSPRÜCHE 1. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man D-Seryl-Utyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutainyl- L-hlstidyl-L-phenylalanyl-L- arginyl-L- tryptophyl-glycin, dessen a-Amino- und r-Carboxylgruppen geschützt sind, mit L-Lysyl-Uprolyl-L-valyi-glycyl-L-lysyl-L-Wsyl-L- arginyl-L- arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L- valyl-L-tyrosyl-Uprolin, dessen e-Aminogruppen und terminale Carboxylgruppe geschützt sind, kondensiert.

   2. Verfahren nach Patentanspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass man tert.-Butyloxycarbonyl-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L methionyl-y-tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin mit Nd-tert.-Butyloxyearbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L- v alyl-glycyl-tert . -butyloxycarbonyl-L-lysyl- tert.-butyloxycarb onyl-L-lysyl-L- arginyl-L- arginyl-L-prolyl-L-valyl-tert.-butyloxycarbonyl L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin-tert butylester kondensiert.

   3. Verfahren nach Patentanspruch I oder dem Unteranspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass man die erhaltenen basischen Verbindungen in ihre Säureadditionssalze überführt.

   PATENTANSPRUCH II Verwendung von nach Patentanspruch I hergestellten Tetracosapeptiden der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L glutamyl-(oder L-glutaminyl)-L-histidyl-L phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L- arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L valyl-L-tyrosyl-L-prolin oder der entsprechenden Verbindungen, die statt des D Serylrestes den Rest des D,L-Serins aufweisen, zur Herstellung von Komplexen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine saure wässrige Lösung, welche das Peptid und ein wasserlösliches Zinksalz enthält, mit einem Alkalimetallhydroxyd, -phosphat oder -pyrophosphat umsetzt und das pH auf 7-8 einstellt.