DE1518349C3

DE1518349C3 - Verfahren zur Herstellung eledoisinwirksamer Verbindungen

Info

Publication number: DE1518349C3
Application number: DE1518349A
Authority: DE
Inventors: Klaus Dr. Luebke; Eberhard Dr. Schroeder; Georg Dr. Zoellner
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1965-09-21
Filing date: 1965-09-21
Publication date: 1975-03-20
Also published as: DE1518349A1; GB1139333A; US3423390A; DE1518349B2; NL6605702A

Description

R—L-Alanyl-L-phenylalanyl-L-a-aminoacylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid,

in der R den Formyl-, Nicotinyl-, -x-Hydroxyisovaleryl-, Chloracetyl-, «-Acetyl-L-lysyl-, α,ε-Diacetyl-L-lysyl- oder ε-Aminocapronylrest bedeutet und L-iX-Aminoacyl für den L-Isoleucyl- oder L-Valylrest steht, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Säure der Formel ROH mit L-Alanin, L-Phenylalanin, L-Isoleucin bzw. L-Valin, Glycin, L-Leucin und L-Methioninamid oder deren reaktionsfähigen Derivaten nach in der Proteinchemie bekannten Methoden verknüpft.

In einem weiteren Zusatzpatent 1518 344 wird gezeigt, daß der Rest R eine beliebige, natürliche, nicht acylierte Aminosäure sein kann, ohne daß die Eledoisinwirkung der Peptide abnimmt. Es wurde nun gefunden, daß nicht nur die Verbindungen, in denen R für einen natürlichen, nicht acylierten Aminosäurerest steht, eine eledoisinartige Wirkung besitzen, sondern überraschenderweise in verstärktem Maße jene Verbindungen, in denen R den ίο Formyl-, Nicotinyl-, a-Hydroxyisovaleryl-, Chloracetyl-, a-Acetyl-L-lysyl-, α-ε-Diacetyl-L-lysyl- oder ε-Aminocapronylrest bedeutet.

Die Erfindung betrifft demnach Verbindungen der allgemeinen Formel

R—L-Alanyl-L-phenylalanyl-L-a-aminoacylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid,

in der R den Formyl-, Nicotinyl-, a-Hydroxyisovaleryl-, Chloracetyl-, a-Acetyl-L-lysyl-, α,ε-Diacetyl-L-lysyl- oder ε-Aminocapronylrest bedeutet, und L-a-Aminoacyl für den L-Isoleucyl- oder L-Valylrest steht.

Die folgende Tabelle gibt eine Übersicht über die

biologische Aktivität der Verbindungen

R-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH, :

Tabelle

Aus dem französischen Patent 1 329 840 ist bekannt, daß das Heptapeptid

L-Asparagyl-L-alanyl -L-phenylalanyl-L-isoleucylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid,

dessen freie Carboxylgruppe am Asparagylrest auch durch Amidbildung abgewandelt sein kann, eine starke, insbesondere erweiternde Wirkung auf das Blutgefäßsystem besitzt.

Im Hauptpatent 1 518 340 wird die Synthese von Peptiden der allgemeinen Formel

R—L-AIanyl-L-phenylalanyl-L-a-aminoacylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid

beschrieben, in der R für ein Wasserstoffatom, den L-Asparaginyl- oder L-Glutaminyl- und «-Aminoacyl für den Isoleucyl- oder Valylrest steht, während das Zusatzpatent 1 518 342 lehrt, daß R auch den Glycylrest bedeuten kann. Die Verbindungen der allgemeinen Formel zeigen eine dem Eledoisin, einem vor allem blutdrucksenkenden Undekapeptid, vergleichbare biologische Aktivität.

	Relative Senkung	Bradykinin = 1
	des Blutdruckes
R	am narkotisierten
	Hund, bezogen	20
	auf Eledoisin = 1	20
Formyl	etwa 2
Chloracetyl	2	20
L-a-Hydroxyiso-		etwa 25
valeryl	2	etwa 15
ε-Aminocapronyl	etwa 2,5
Nicotinyl	1,5	35
a-Monoacetyl-
lysyl	3,5

Die höhere Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen ist insofern unerwartet, da sie sich nicht durch den verhinderten enzymatischen Abbau mit Aminopeptidasen erklären läßt. Dies beweist die etwa nur dem Eledoisin entsprechende Wirkung, des Diacetyl-lysyl-derivates und die niedrige Aktivität der Capronyl- und Caprinoyl-Verbindungen (30% bzw. 10% des Eledoisins), die ebenfalls nicht mit Aminopeptidasen abbaubar sind.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeichnen sich auch in vielen Fällen gegenüber den bisher bekannten Produkten durch ihre leichtere Herstellbarkeit aus, beispielsweise weil beliebig substituierte organische Säuren häufig leichter zugängig sind als viele Aminosäuren. Die Synthese der neuen Verbindungen erfolgt nach an sich bekannten Methoden.

B e i s ρ i e 1 1

Formyl-ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met- NH₂

Formyl-Ala-Phe-OMe wurde in der üblichen Weise nach dem Anhydrid-Verfahren erhalten [Fp. 115 bis

117°C (aus Äthanol/Petroläther), [a]₀ = -10,8° (c = 0,8; DMF)] und mit der vierfachen Menge Hydrazinhydrat in das Hydrazid übergeführt. Fp. 207

3 4

bis 208⁰C (aus DMF/Petroläther), [oi]_D = — 49,9° dem üblichen Waschen der festen Substanz und

(c = 0,5; Eisessig). Umfallen aus DMF/wäßriger Citronensäure betrug

Umsetzung von 0,3 g des Hydrazides (Azidbildung die Ausbeute 2,8 g (61,5%); Fp. 249 bis 254° C,

mittels tert.-Butylnitrit in Chlorwasserstoff/Tetra- [«]? =—40,8° (c = 0,5; Eisessig),
hydrofuran) mit 0,6 g H-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂ · HCl 5

führte zu 0,5 g der gewünschten Verbindung, Fp. 267 c) Ac-L-Lys-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-

bis 268° C, [a]_D = -42,0° (c = 0,5; DMF). NH₂

B e i s ρ i e 1 2 wurde in quantitativer Ausbeute durch Schutzgruppen-

lo abspaltung mit HCl/Eisessig aus der in 5 b) dargestell-Nicotinoyl-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂ ten Verbindung erhalten.

Fp. 225 bis 245⁰C, [<x]f = -42,5° (c = 0,5; Eis-Aus 3,2 g Nicotinsäurechlorid und 5,7 g essig).

H-Ala-Phe-OMe · HCl wurden in Chloroform nach B e i s ρ i e 1 6

Zugabe von 8,4 ecm Triäthylamin 5,6 g Nicotinoyl- 15

Ala-Phe-OMe erhalten, Fp. 161 bis 162⁰C (aus a) BOC-L-Lys-(Ac)-OH

Äthanol/Petroläther), [<x]_D = +32,0° (c = 0,5; Eisessig). 2,3 g (12 mMol) H-L-LyS-(Ac)-OH wurden in Hydrazinolyse mit der vierfachen Menge Hydrazin- Dioxan/Wasser 1:1 gelöst und in Gegenwart von hydrat lieferte das Hydrazid [Fp. 209 bis 211⁰C, 20 1,5 g (36 mMol) Magnesiumoxyd mit 3,4 g (14,2 mMol) [<x]d = 16,6° (c = 0,5; Eisessig), das wie in Beispiel 1 tert.-Butyloxycarbonyl-p-nitro-phenylester umgesetzt, mit H-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂ · HCl umgesetzt wurde, Ausbeute: 1,31g (38%); Fp. 137 bis 138°C (aus Fp. 272 bis 274⁰C, [»]_D = -27,5° (c = 0,5; DMF). Essigester/Petroläther); [<%]? = -10,1° (c = 0,5; Eisessig).
Beispiel3 25

b) BOC-L-LyS-(Ac)-OPhNO₂
(X-Hydroxyisovaleryl-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂

1,0 g (3,4 mMol) BOC-L-Lys-(Ac)-OH wurde mit

Aus 0,3 g L-«-Hydroxyisovaleriansäurehydrazid 0,6 g (4,5 mMol) p-Nitrophenol nach der Carbodiwurden mit 0,3 ecm tert.-Butylnitrit in 2,9 ecm einer 30 imid-Methode verestert. Ausbeute: 1,3 g (92 %); Fp. 96 1,5 η-Lösung von Chlorwasserstoff in Tetrahydrofuran bis 98° C (aus Essigester/Petroläther), [«]? = —24,3° das Azid hergestellt, das nach dem Neutralisieren (c = 0,5; Äthanol),
mit Triäthylamin mit 1,5 g H-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-

Met-NH₂ ■ HCl und 0,3 ecm Triäthylamin umgesetzt c) BOC-L-Lys-(Ac)-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-

wurde. Ausbeute 1,3 g, Fp. 267 bis 270⁰C, [<x]_D 35 L-Leu-L-Met-NH₂

= -38,7 (c = 0,5; DMF).

1,2 g (3 mMol) BOC-L-LyS-(Ac)-OPhNO₂ wurden

B e i s ρ i e 1 4 mit 2,0 g (3 mMol) H-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-

L-Met-NH₂ in DMF 3 Tage bei 40° C umgesetzt. Nach

Chloracetyl-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NHjs 40 der üblichen Aufarbeitung wurden 1,3 g (48 %)

erhalten. Fp. 239 bis 260° C, [«]? = -44,0° (c = 0,5; 0,2 g Monochloressigsäure wurden mit 0,3 ecm Eisessig).
Triäthylamin und 0,2 ecm Chlorameisensäureäthylester in das gemischte Anhydrid übergeführt und d) H-L-LyS-(Ac)-L-AIa-L-PtIe-L-IIeU-GIy-L-LeUr
dieses mit 1,4 g H-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂ 45 L-Met-NH₂
gekuppelt.

Ausbeute 1,2 g, Fp. 238 bis 242° C, [«]/> = —36,4° wurde aus der geschützten Verbindung durch Schutz-(c = 0,5; DMF). · gruppenabspaltung mit HCl/Eisessig erhalten. Fp. etwa

230°C (Zers.); [<x]f = -27,0° (c = 0,5; Eisessig). Beispiel 5 50 C₃₉H₆₅N₉O₈S · 1,6 HCl · 3 H₂O (932 · 45)

a) Ac-L-LyS-(BOC)-NHNH₂ e) Ac-L-Lys-(Ac)-L-Ala-L-Phe-Ileu-

Gly-L-Leu-L-Met-NH₂

4,0 g (15,4 mMol) H-L-LyS-(BOC)-OMe wurden

mit 2,8 g (15,4 mMol) Essigsäure-p-nitrophenylester 55 800 mg (0,9 mMol) a-Acetyl-Lysin-Heptapeptidacetyliert. Aus dem nur als öl erhaltenen Methylester amid Hydrochlorid wurden nach dem Freisetzen mit [3,9 g (84,1%); [ot\S = -18,7° (c = 1,5; Pyridin)] 0,13 ecm Triäthylamin in DMF mit 360 mg (2 mMol) wurden durch Hydrazinolyse mit der 2,5fachen Menge Essigsäure-p-nitrophenylester in üblicher Weise umge-Hydrazinhydrat das Hydrazid hergestellt. Ausbeute: setzt. Ausbeute: 640 mg (80%), Fp. 260 bis 266°C, 2,1g (55%), Fp. 123 bis 125° C (aus Essigester). 60 [«]? =-44,8° (c = 0,5; Eisessig).

tyAc-L-Lys-iBOQ-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu- Beispiel 7

L-Met-NH_{2 a)} £.BOC-aminocapronsäure-(BOC-6-Acap-OH)

1,5 g (5 mMol) Ac-L-LyS-(BOC)-NHNH₂ wurden 65 Aus der ε-Aminocapronsäure mit tert.-Butyloxymit 0,5 ecm (5,2 mMol) tert.-Butylnitrit in das Azid carbonyl-p-nitrophenylester werden in der üblichen übergeführt und dieses mit 3,2 g (5 mMol) H-L-AIa- Weise 77 % eines kristallisierenden Öls erhalten. L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-NH₂ gekuppelt. Nach Fp. 30 bis 31° C.

5 6

b) BOC-e-Acap-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-

L-Met-NH₂ c) H-e-Acap-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-

L-Met-NH₂ · HCl

Nach der Anhydrid-Methode wurden aus 1,4 g

(6 mMol) BOC-e-aminocapronsäure und 3,9 g (6 mMol) 5 Durch Schutzgruppenabspaltung mit HCl/Eisessig

H-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-NH.; 4,1 g wurde das Hydrochlorid in quantitativer Ausbeute

(78%) erhalten. Fp. 247 bis 248° C; [«]? = -33,6° erhalten. Fp. 221 bis 23O⁰C, [<x]f = -35,0° (c = 0,5;

(c = 0,6 DMF). DMF).

Claims

Patentansprüche :

1. Verbindungen der allgemeinen Formel

R—L-Alanyl-L-phenylalanyl-L-a-aminoacylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid,

in der R den Formyl-, Nicotinyl-, a-Hydroxyisovaleryl-, Chloracetyl-, a-Acetyl-L-lysyl-, α,ε-Diacetyl-L-lysyl- oder e-Aminocapronylrest bedeutet und L-a-Aminoacyl für den L-Isoleucyl- oder L-Valylrest steht.

2. Formyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

3. Nicotinyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

4. Λ-Hydroxyisovaleryl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

5. Chloracetyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-Ieucyl-L-methioninamid.

6. α - Acetyl - L - lysyl - L -'alanyl -L - phenylalanyl L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

7. «,fi-Diacetyl-L-lysyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

8. ε -Aminocapronyl -L- alanyl - L- phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

9. Verfahren gemäß Patent 1 518 340 zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel