DE1193509B

DE1193509B - Verfahren zur Herstellung eines neuen Oktapeptids mit vasopressorischer Wirksamkeit

Info

Publication number: DE1193509B
Application number: DEF31364A
Authority: DE
Inventors: Dr Walter Siedel; Dr Karl Sturm; Dr Rolf Geiger
Original assignee: Hoechst AG
Current assignee: Hoechst AG
Priority date: 1960-06-02
Filing date: 1960-06-02
Publication date: 1965-05-26
Also published as: CH424797A; GB927714A; US3415805A; DK104066C

Description

BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLAND

DEUTSCHES

PATENTAMT

AUSLEGESCHRIFT

Int. α.:

C07c

Deutsche Kl.: 12 q-6/01

Nummer: 1193 509

Aktenzeichen: F 31364IV b/12 q

Anmeldetag: 2. Juni 1960

Auslegetag: 26. Mai 1965

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung des Oktapeptids der Formel I

CH₃

NH₂ NHo

H — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys

! J

Pro — Lys — GIy — NH₂

(I)

worin Cys, Tyr, Phe, GIu, Asp, Pro und Lys die Aminosäurereste in der L-Form bedeuten. Dieses Oktapeptid erhält man, wenn man
ein Tripeptidazid der allgemeinen Formel III

Verfahren zur Herstellung eines neuen Oktapeptids mit vasopressorischer Wirksamkeit

Anmelder:

Farbwerke Hoechst Aktiengesellschaft vormals Meister Lucius & Brüning, Frankfurt/M.

Als Erfinder benannt:

Dr. Walter Siedel, Bad Soden (Taunus); Dr. Karl Sturm, Frankfurt/M.- Unterliederbach; Dr. Rolf Geiger, Frankfurt/M.

R' CH₃
R — Cys — Tyr — Phe -

worin R" einen zum Schutz der ε-Aminogruppe ein-

N₃ (III) geführten Benzolsulfonyl- oder Toluolsulfonylrest

bedeutet,

worin R eine zur Stabilisierung der Aminogruppe oder wenn man ein Tripeptid der allgemeinen

eingeführte Gruppe und R' einen zum Schutz der Formel III b
Sulfhydrylgruppe eingeführten Rest bedeutet, mit R' CH₃

einem Hexapeptid der allgemeinen Formel II j [

R—Cys — Tyr — Phe — OH (III b)

I ; worm R und R die oben erwähnte Bedeutung

_TT I₁ _ ^_TTT besitzen, in Gegenwart eines Kondensationsmittels

H — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH_{2 mit dnem} Hexapeptid der Formel II zu einem Nona-

(II) 30 peptid der allgemeinen Formel IV

R-

R' CH₃ NH₂ NH₂ R' R"

1 i '

• Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

(IV)

umsetzt

oder wenn man ein Heptapeptid der allgemeinen Formel V

NH₂ NH₂ R' R"

' i I

H — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

(V)

worin R' und R" die angegebene Bedeutung besitzen, gegebenenfalls substituierten Carbobenzoxyrest bemit einem funktionellen reaktionsfähigen Derivat 45 deutet, acyliert, das entstandene Oktapeptidderivat eines N — R'"-O-Methyl-L-tyrosins, worin R'" einen der allgemeinen Formel VI

CH₃ NH₂ NH₂ R' R"

R'" — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

(VI)

durch Abspalten des Restes R'" und darauffolgende Acylierung der freien Aminogruppe mit einem funktioneilen

509 577/416

reaktionsfähigen Derivat eines

N — R — S — R'-L-Cysteins

zu einem Nonapeptidderivat der allgemeinen Formel IV

R' CH₃ NH₂ NH₂ R' R"

I I¹I i

R — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

umsetzt, in dieser Verbindung die Gruppen R, R' und R" durch Reduktion mit einem Alkalimetall in flüssigem Ammoniak abspaltet, so daß das Nonapeptidderivat der allgemeinen Formel VII

CH₃ NH₂ NH₂

ί
H — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

entsteht,

und letztere Verbindung durch Oxydation mittels Luft bei Zimmertemperatur in wäßriger Lösung bei einem pH-Wert von 6,5 bis 8,5 in das gewünschte Endprodukt der Formel I übergeführt. Diese drei Synthesewege werden durch die nachstehenden Übersichten veranschaulicht:

Übersicht

R' CH,

NH. NH. R'

R"

Cys — Tyr — Phe

-N,

H —

GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy

III a R' CH₃

HN₃

NH₂ NH₂ R'

II

R"

Cys — Tyr —Phe

GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy

CH₈

Reduktion mit Na in flüssigem NH₃

NH₂ NH₂

IV

Cys — Tyr — Phe

GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy

-NH₂

CH.

Luftoxydation in wäßriger Lösung bei pH-Werten zwischen 6,5 und 8,5

NH, NH₂

VII

Cys — Tyr — Phe

GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy

R' CH₃

Übersicht 2
NH₂ NH₂ R'

R"

Cys —Tyr —Phe

OH + H-

GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

III b

Kondensationsmittel

II

IV

analog Übersicht 1

• CH₃

Übersicht 3

NH₂ NH₂ R'

R"

R'" —

Tyr

—Υ

+ Η—Phe —Glu —Asp —Cys —Pro —Lys —GIy

NH₂

CH₃

HY
NH₂ NH₈ R'

R"

R'"— Tyr

Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

R'

CH₃

Abspaltung von R'"
NH₂ NH₂ R'

VI

R"

Cys

—Y + H— Tyr Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy

NH₂

-HY

IV

analog Übersicht 1

Hier bedeutet Y eine die Ausbildung der Peptid- 30 für das die Bezeichnung O-Methyl-Lysin-Vasopressin bindung begünstigende reaktive Gruppe, wie die vorgeschlagen wird, besitzt eine dem bekannten, auf Azido-, Äthoxycarboxy- oder p-Nitrophenoxygruppe. synthetischem Wege gewonnenen Lysinvasopressin Das neue Oktapeptid der allgemeinen Formel I, der nachstehenden Formel VIII

NH, NH₉

H — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

(VIII)

vergleichbare gute vasopressorische Aktivität, hat aber gegenüber der bekannten Verbindung den Vorteil, daß — wie aus den in der nachstehenden Tabelle enthaltenen Versuchsergebnissen hervorgeht — die unerwünschte oxytocische Nebenwirkung praktisch verschwunden ist.

	Oxytocin-	Vasopressin-
	wirkung am	wirkung,
	isolierten	bestimmt
	virginellen	durch
Verbindung	Uterus des	Messung des
	Meer	Blutdrucks
	schweinchens	des chemisch
		dekapitierten
		Kaninchens
1. Lysin-Vasopressin	80 IE/mg
VIII	0,2 IE/mg	270 IE/mg
2. Oktapeptid I	125 IE/mg

Die Werte der Tabelle wurden durch nachstehende Methoden erhalten:

Oxytocinwirkung: Der Uterus von virginellen Meerschweinchen wird in einer speziellen Tyrodelösung suspendiert und die Kontraktionen, die durch zugehendes Oxytocin zur Badflüssigkeit hervorgerufen werden, werden kymographisch registriert (Dale und L a i d 1 a w, J. of Pharmacology and Therapeutics, Vol. IV, S. 75 [1912]). Entsprechende Testmethoden sind in den Pharmakopöen der USA. und Großbritanniens enthalten.

Vasopressinwirkung: Ein Kaninchen in Pernoctonnarkose erhält eine Injektion von 0,2 bis 0,5 ecm 30%iger Trichloressigsäure durch das große Hinterhauptloch in das verlängerte Mark. Durch eine vorher eingelegte Trachealkanüle wird das Tier sofort künstlich beatmet und der Blutdruck aus der Arteria carotis communis über eine mechanische Vorrichtung kymographisch registriert. Die Berechnung der Wirksamkeit geschieht entweder durch Vergleich des Ausschlages mit einem Standardpräparat oder im Vierpunktetest nach Schild (Brit. J. of Pharmacology, Vol. II, S. 189 [1947]).

Über die Herstellung des erwähnten Lysin-Vasopressins der Formel VIII vgl. V. Du Vigneaud und Mitarbeiter, »J. Am. Chem. Soc«, 78 (1956),

S. 2905, und 79 (1957), S. 5572, sowie R. A. B ο i ss ο η η a s und Mitarbeiter, »Helv. Chim. Acta«, 43 (1960), S. 182.

Das neue O-Methyl-Lysin-Vasopressin der Formel I soll als Arzneimittel, insbesondere als Mittel mit vasopressorischer Wirkung, verwendet werden.

Nach einer vorteilhaften Ausführungsform des Verfahrens gemäß der Erfindung kann man z. B. ein Tripeptidazid der allgemeinen Formel III in einem

7 8

geeigneten Lösungsmittel mit einem Hexapeptid der allgemeinen Formel II unter Bildung eines Nonapeptids der Formel IV

R' CH₃ INH₂ NH₂ R"

! ι i I :

R — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂ (IV)

zur Umsetzung bringen und letztere Verbindung nach werden. Der Reaktionspartner des Hexapeptids, das Abspaltung der Schutzgruppen durch Oxydation mit Tripeptidazid der Formel III, läßt sich z. B. nach Luft bei Zimmertemperatur in wäßriger Lösung bei io folgender Methode herstellen:

einem pH-Wert von 6,5 bis 8,5 in das gewünschte Man behandelt ein N-R-S-R'-L-Cysteinyl-O-methyl-

Oktapeptid der Formel I überführen. L-tyrosin, worin R und R' die angegebene Bedeutung

In den Formeln II, III und IV bedeutet der Rest R besitzen, mit einem L-Phenylalanin-alkylester in einem einen zur Stabilisierung der a-Aminogruppe ein- geeigneten Lösungsmittel, z. B. Essigester, in Gegengeführten Rest, z. B. einen Benzolsulfonyl-, Toluol- 15 wart von Dicyclohexyl-carbodiimid als Kondensulfonyl-, Carbophenoxy-, Carbobenzoxy- oder Carbo- sationsmittel. Der resultierende Tripeptidester der p-brombenzoxyrest, und R' stellt einen zum Schutz allgemeinen Formel III a
der Sulfhydrylgruppen eingeführten Rest, z. B. einen

Benzyl-, p-Brombenzyl- oder p-Methylbenzylrest dar. R CH₃

Der Rest R" bedeutet einen zum Schutz der ε-Amino- 20 ;

gruppe'eingeführten Benzolsulfonyl- oder p-Toluol- R — Cys—Tyr — Phe — O—Alkyl (III a)

sulfonylrest.

Die Umsetzung wird in üblicher Weise vorgenom- wird in an sich bekannter Weise mit Hydrazinhydrat men und kann je nach der Beschaffenheit der einzelnen in das entsprechende Hydrazid überführt und dieses Substituenten variiert und den jeweiligen Verhält- 25 mit Natriumnitrit in Essigsäure/Salzsäure zum entnissen angepaßt werden. Vorteilhaft setzt man die sprechenden Tripeptidazid (III) umgesetzt.
beiden Komponenten unter Verwendung eines geeig- An Stelle des Tripeptidazids der Formel III kann

neten organischen Lösungsmittels, beispielsweise Di- auch ein Tripeptid mit freier Carboxygruppe (HIb) methylsulfoxyd oder Dimethylformamid, bei Zimmer- zur Umsetzung mit dem vorstehend erwähnten temperatur um. Die Reaktionslösung wird einige 30 Hexapeptid der Formel II eingesetzt werden. Hierbei Stunden bei O⁰C und danach noch 1 bis 2 Tage bei kann man in der Weise vorgehen, daß man einen 2O⁰C stehen gelassen. Tripeptidester der allgemeinen Formel III a mit

Zur Aufarbeitung engt man die Mischung zweck- Alkalilauge vorsichtig zur entsprechenden freien Säure mäßig unter vermindertem Druck ein, fällt das Reak- verseift (Tripeptid III b) und diese in Gegenwart tionsprodukt durch Zugabe von Essigester aus, saugt 35 eines geeigneten Kondensationsmittels, beispielsweise die entstandene Fällung ab und trocknet unter ver- Dicyclohexyl-carbodiimid oder Tetraäthyl-pyrophosmindertem Druck über Calciumchlorid. phit, mit dem Hexapeptid der Formel II zum ge-

Das als Ausgangsstoff verwendete Hexapeptid der wünschten Nonapeptid der Formel IV umsetzt,
allgemeinen Formel II kann beispielsweise nach der Nach einer weiteren Ausführungsform des Ver-

von R. A. Boissonnas in »Hei. Chim. Acta«, 40 fahrens gemäß der Erfindung kann man auch von 43 (1960), S. 182, angegebenen Vorschrift hergestellt einem Heptapeptid der Formel V

NH₂ NH₂ R' R"

j ! j I

Η — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₈ (V)

worin R' und R" die angegebene Bedeutung besitzen, nommen und mit einem N-R-S-R'-L-Cystein-nitroausgehen, diese Verbindung nach an sich bekannten phenylester in Gegenwart einer tertiären organischen Methoden in ein Nonapeptidderivat der allgemeinen Base, z. B. Triäthylamin, zum gewünschten Nona-Formel IV und letzteres nach Abspaltung der Schutz- 50 peptid der Formel IV umgesetzt. Die im Nonapepgruppen in der angegebenen Weise durch Oxydation tid IV zum Schutz der funktioneilen Gruppen einmittels Luft in das gewünschte Oktapeptid der geführten Reste werden durch Behandeln mit Alkali-Formel I überführen, wobei sich z. B. folgende metall, vorzugsweise Natrium oder Kalium, in Arbeitsweise als geeignet erwiesen hat: Man läßt auf flüssigem Ammoniak abgespalten. Bei der daraufdas Heptapeptid der Formel V einen N-Carbobenz- 55 folgenden Oxydation mit Luft in wäßriger Lösung oxy-O-methyl-L-tyrosin-nitrophenylester oder ein an- bei einem pH-Wert von 6,5 bis 8,5 entsteht aus den deres reaktionsfähiges funktionelles Derivat des beiden Mercaptogruppen die Disulfidbrücke des N-Carbobenzoxy-O-methyl-L-tyrosins in einem ge- cyclischen Oktapeptids I.

eigneten Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, ein- Die Erfindung wird in den nachfolgenden Beiwirken. Nach mehrstündigem Stehen bei Zimmer- 60 spielen beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiustemperatur fällt man das Reaktionsprodukt mit graden angegeben.

Essigsäureäthylester aus. Der Niederschlag wird mit Folgende Abkürzungen werden verwendet:
einem geeigneten organischen Lösungsmittel gewaschen und getrocknet. Aus dem erhaltenen Reak- Z = Carbobenzoxy.
tionsprodukt wird die Carbobenzoxygruppe in üblicher 65 jj_{z =} Benzyl.
Weise, z. B. mit Bromwasserstoff in Eisessig, abge- , _{1f t}
spalten. Das mit Äther ausgefällte Reaktionsprodukt ^{Tos =} P-Toluolsulionyl.
wird danach sofort in Dimethylformamid aufge- C₆H₄ — NO₂ = p-Nitrophenyl.

9 10

Beispiel 1 mittel ab und kristallisiert den Niederschlag aus

B^-TyriC^-Phe-GMNH^-AspfNH,)- Ethanol um Die Ausbeute beträgt 18,0 g, der

Cys(Bz)-Pro-LysiTos)-GIy-NH₂ Schmelzpunkt hegt be! 167 bis 168°.

(Nonapeptid IV) ₅ b) Z-Cys(Bz)-Tyr(CH₃)-Phe-NH-NH₂

7,5 g Z-Cys(Bz)-Tyr(CH₃)-Phe-N₃ mit einem (Tripeptidhydrazid)
Wassergehalt von 10% (Tripeptidazid III) (etwa Man löst den gemäß Beispiel 1, a) hergestellten 0,01 Mol) und 8,1 g (0,009 Mol) H-GIu(NH₈)- Z-CvsiBzVTvriCH VPhe-OCH
Asp(NH₂)-Cys(Bz)-Pro-Lys(Tos)-Gly-NH₂ (Hexa- ^L ^A^) Iy^H₃) Foe UCiI₃
peptid II) werden bei Raumtemperatur in 120 ecm *° (Tripeptid III a) in 300 ml warmem Äthanol und reinem Dimethylformamid gelöst. Nach dem Ab- gibt 25 ml 80%iges Hydrazinhydrat zu. Beim langsaugen von wenig Ungelöstem wird die Reaktions- samen Abkühlen auf Raumtemperatur und Stehen mischung über Nacht bei O⁰C, dann noch 2 Tage über Nacht fallen 10,0 g
bei 2O⁰C gehalten. Anschließend wird sie unter ver- Z-Cys(Bz)-Tyr(CH₃)-Phe-NH-NH₂
mmdertem Druck auf 60 ecm eingeengt und mit 15

500 ecm Essigester durchgeschüttelt. Die farblose aus. Der Schmelzpunkt liegt bei 219 bis 220°.
Fällung wird abgesaugt und zweimal mit 200 ecm

Essigester gewaschen. Das feuchte Nonapeptid IV ^c> ^^?^'^^^^^³

wird dann mit 200 ecm Methanol bei Raumtempe- (Iripeptidazid JIl)

ratur verrieben, abgesaugt und nacheinander mit 2° 6,84 g des gemäß Beispiel 1, b) hergestellten Tri-

100 ecm Methanol, Essigester und Äther gewaschen. peptid-hydrazids werden unter Erwärmen in einer

Nach dem Trocknen im Vakuum über Calcium- Mischung von 220 ecm Eisessig und 35 ecm in Salzchlorid erhält man 7,6 g (55% der Theorie) des säure gelöst. In die auf 5° abgekühlte Lösung werden Verfahrenserzeugnisses in Form eines farblosen Pul- unter mechanischem Rühren innerhalb von 5 Minuten vers. Die Verbindung schmilzt bei 209 bis 211°; 25 11,5 ecm 1 ml Natriumnitritlösung eingetropft. Nach [ck]²d =39,1° (c = 2 in Dimethylformamid). beendeter Zugabe wird die Mischung noch 5 Minuten

_-,,,,_„ _T „ _Λ, . ,_, , .., „ bei 3° gehalten und dann in 500 ecm Eiswasser ein-

O-Methyl-Tyrs-Lys8-Vasopressin (Oktapeptid I) _gerührt ^e _{Dag abgeschiedene} Tripeptid-azid III wird

3,08 g des erhaltenen Nonapeptids IV werden in abgesaugt, mit Eiswasser neutral gewaschen und bei 2000 ml über Kaliumhydroxyd destilliertem, flüssigem 30 0,2 mm Druck über Calciumchlorid getrocknet.
Ammoniak gelöst. In die Lösung werden unter . .

mechanischem Rühren feine, blanke Natriumschnitzel Beispiel 2

eingetragen, bis die Lösung schließlich tiefblau gefärbt 8,3 g Z-Cys(Bz)-Tyr(CH₃)-Phe-OCH₃ werden in

ist und die Färbung 1 Minute bestehenbleibt. Nach 100 ml Dioxan gelöst. Man gibt bei Raumtemperatur Zugabe von 1,0 g Ammoniumchlorid läßt man das 35 20 ml Methanol und 15 ml ln-Natronlauge zu. Die Ammoniak bei Raumtemperatur abdampfen, nimmt anfangs inhomogene Lösung wird unterVibromischung den sirupösen Rückstand mit 2000 ml 0,2%iger homogen. Nach 2 Stunden versetzt man die Lösung Essigsäure auf und stellt die Lösung mit 5%iger mit 15,2 ml ln-Schwefelsäure, entfernt das Lösungs-Essigsäure auf einen pH-Wert von 8,0 ein. Nach mittel unter vermindertem Druck, nimmt den Rück-3stündigem Einleiten von kohlendioxydfreier Luft 40 stand in Essigester auf, schüttelt die Essigesterlösung wird filtriert, das farblose Filtrat mit Eisessig auf mit etwas Wasser aus, trocknet über Natriumsulfat einen pH-Wert von 4,5 eingestellt und gefriergetrock- und dampft das Filtrat unter vermindertem Druck ein. net. Das Rohprodukt wird durch Gegenstromver- Es hinterbleiben 7,7 g eines harzigen Rückstandes, teilung zwischen sek. Butanol und 0,08molarer p-To- der aus Z-Cys(Bz)-Tyr(CH₃)-Phe-OH besteht. Den luolsulf onsäure gereinigt. Die biologisch aktive Frak- 45 harzigen Rückstand nimmt man in 60 ml Dimethyltion mit dem Verteilungskoeffizienten K = 0,82 ent- formamid auf, gibt 8,9 g H-GIu(NHa)-ASp(NH₂)-hält 45% des Gesamtstickstoffs und zeigt eine CySfPoZ)-PrO-LyS(TOs)-GIy-NH₂(HeXaPePtId II) und Aktivität von 125 ± 15 IE Vasopressinwirkung (Blut- 2,1g Dicyclohexylcarbodiimid zu und läßt das Reakdruck des chemisch dekapitierten Kaninchens) und tionsgemisch 2 Tage lang bei Raumtemperatur stehen. 0,2 ± 0,05 IE Oxytocinwirkung (isolierter, virgineller 50 Dann erwärmt man auf etwa 40°, saugt vom Nieder-Meerschweinchenuterus). Der RE-Wert liegt bei 0,33 schlag ab und wäscht den Rückstand mit warmem (Methyläthylketon—Pyridin—Wasser 65:15:20). Dimethylformamid. Das Produkt enthält noch Spuren

Das als Ausgangsstoff verwendete Tripeptidazid an DicyclohexylharnstofF.
der Formel III kann z. B. wie folgt hergestellt werden: Die Ausbeute an Nonapeptid IV beträgt 7,5 g.

al 7 CWR₇^ Tvrfrw ¹I Php ΟΓΗ ^{55 M}" ⁼ ~³⁸° (^c = ^{2 in} Dimethylformamid).

a; ^-Cysitizj-lyrlCty-Phe-UCHs _{Die weitere} Verarbeitung des Nonapeptids IV wird

17,2 g Z-Cys(Bz)-Tyr(CH₃)-OH werden in 80 ml entsprechend der im Beispiel 1 angegebenen Arbeits-Essigester gelöst und mit einer Mischung von 8,0 g Vorschrift vorgenommen.
H-Phe-OCH₃ · HCl, 5,4 ml Triäthylamin und 80 ml

Chloroform versetzt. Dann gibt man bei 0° eine 60 Beispiel 3

Lösung von 7,1 g Dicyclohexyl-carbodiimid in 20 ml 1,0 g H-Phe-Glu(NH₂)-Asp(NH₂)-Cys(Bz)-Pro-

Chloroform zu und läßt einen Tag bei Raumtempera- Lys(Tos)-Gly-NH₂ (Heptapeptid V) und 0,5 g Z-Tyr tür stehen. Der Niederschlag wird abgesaugt und (CH₃)-O-C_eH₄-NO₂ werden in 10 ml Dimethylformmit 200 ml Essigester ausgekocht Die vereinigten amid gelöst. Nach 24 stündigem Stehen bei Raum-Filtrate scheiden schon beim Einengen auf ein Viertel 65 temperatur versetzt man die halbfeste Masse mit 150 ml des ursprünglichen Volumens eine gallertige Kristall- Essigsäureäthylester, saugt ab, wäscht den Niedermasse ab, die aus dem gewünschten Tripeptidester III a schlag mit 100 ml Äthanol und dann mit 50 ml besteht. Man saugt nach dem Abkühlen vom Lösungs- Essigester. Das Produkt wiegt nach dem Trocknen

1,05 g und ist für die weitere Umsetzung genügend rein.

Man suspendiert die Verbindung in 7 ml Eisessig und gibt 8 ml 4n-Bromwasserstofflösung in Eisessig zu. Nach 2 Stunden versetzt man das Reaktionsgemisch mit 150 ml trockenem Äther, wascht das ausgefallene Hydrobromid mehrmals mit Äther und löst es in 10 ml Dimethylformamid. Dann fügt man 1,2 ml Triäthylamin und 0,45 g Z-CyS(Bz)-O-C₆H₄-NO₂ zu. Nach 2 Tagen gibt man zu der festen Masse ml Essigester, saugt den Niederschlag ab, wäscht ihn mit 100 ml Äthanol, 50 ml Essigester und trocknet ihn unter vermindertem Druck. Die Ausbeute an Nonapeptid IV beträgt 0,9 g, der Schmelzpunkt liegt bei 210 bis 213°. [»['S = -39,5° (c = 2 in Dimethylformamid).

Claims

Patentanspruch:

Verfahren zur Herstellung eines Oktapeptids mit vasopressorischer Wirksamkeit der Formel I

CH_a

NH₂ NH₃

H — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

worin Cys, Tyr, Phe, GIu, Asp, Pro und Lys die Aminosäurereste in der L-Form bedeuten, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Tripeptidazid der Formel

R' CH₃

R — Cys — Tyr — Phe — N₃

worin R eine zur Stabilisierung der Aminogruppe eingeführte Gruppe und R' einen zum Schutz der Sulfhydrylgruppe eingeführten Rest bedeutet, mit einem Hexapeptid der Formel

worin R" einen zum Schutz der ε-Ammogruppe eingeführten Benzolsulfonyl- oder Toluolsulfonylrest bedeutet,

oder daß man ein Tripeptid der allgemeinen Formel

R' CH₃

1 I

R —Cys —Tyr —Phe —OH

worin R und R' die oben erwähnte Bedeutung besitzen, in Gegenwart eines Kondensationsmittels mit dem genannten Hexapeptid II zu einem Nonapeptid der Formel

NH₂ NH₂ R' R"

H—GIu—Asp—Cys—Pro—Lys—GIy—NH₂

R' CH₃ NH₂ NH₂ R' R"

R — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

umsetzt

oder daß man ein Heptapeptid der Formel

NH₂ NH₂ R' R"

III

H — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

worin R' und R" die angegebene Bedeutung besitzen, mit einem funktionellen reaktionsfähigen Derivat eines N-R'"-O-Methyl-L-tyrosins, worin R'" einen gegebenenfalls substituierten Carbobenzoxyrest bedeutet, acyliert, das entstandene Oktapeptidderivat der Formel

CH₃ NH₂ NH₂ R' R"

R"' _ Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

durch Abspalten des Restes R'" und darauffolgende Acylierung der freien Aminogruppe mit einem funktionellen reaktionsfähigen Derivat eines N-R-S-R'-L-Cysteins zu dem angegebenen Nonapeptidderivat umsetzt, in dieser Verbindung die Gruppen R, R' und R" durch Reduktion mit einem Alkalimetall in flüssigem Ammoniak abspaltet, so daß das Nonapeptidderivat der Formel

CH₃

NH₂ NH₂

H — Cys — Tyr — Phe — GIu — Asp — Cys — Pro — Lys — GIy — NH₂

entsteht _T _ _ , , .„

und letztere Verbindung durch Oxydation mittels ^In Betracht gezogene Druckschriften:

Luft bei Zimmertemperatur in wäßriger Lösung Deutsche Patentschriften Nr. 1 030 835, 1 038 053,

bei einem pH-Wert von 6,5 bis 8,5 in das ge- 65 1 108 232;

wünschte Endprodukt der Formel I überführt. HeIv. Chim. Acta, Nr. 44 (1961), S. 213, 231.

509 577/+16 5.65 © Bundesdruckerei Berlin