DE1593974A1 - Bisher unbekannte Polypeptide sowie Verfahren zu deren Herstellung - Google Patents

Description

Patentanwälte"

Dr.W.Schalk, Dipl.-Ing.P.Wi·* r, j »r, OidI -Im G. Dannenberg

Sandoz AG. ^V ^-,"J-Kowarzik

Dr ρ. wi^li Dr. D. Gudel Case 100-2305

6 FrankfurtlM. Gr. Eschenheimer Str. 3?

Bisher unbekannte Polypeptide sowie Verfahren zu deren Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft die neuen Pentacosapeptide der allgemeinen Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-X-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin X einen L-GIutamyl- oder L-GIutaminylrest bedeutet, ihre therapeutisch wirksamen Säureadditionssalze und Schwermetallkomplexe sowie ein Verfahren zu deren Herstellung.

Die neuen Pentacosapeptide der obigen Formel, ihre Salze und Schwermetallkomplexe besitzen eine hohe adrenocortiootrope Wirksamkeit.

Die unter die allgemeine Formel fallenden Pentacosapeptide k'önnen in abgekürzter Schreibweise wie folgt bezeichnet werden:

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1593 97 A 100-2505

*:.D-Ser -Nie -Lys^-lys -Val-NHg^-Pentacosapeptid und D-Ser¹- ·. Nle⁴-Gln⁵-L·ys¹⁷-L·ys^l8-Val-NH₂ ²⁵-Pentacosapeptid.

'..Es war bereits aus dem belgischen Patent Nr. 659048 bekannt, '." dass man ein Pentacosapeptid der Sequenz L-Seryl-L-tyrosyl- ".. L-seryl-L-norleucyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- ; L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L- _t valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid mit corticotroper Wirkung, im Nachstehenden mit Nle^-Iys¹⁷-I$rs^l8-Val-NH₂ ²⁵-Pentacosapeptid bezeichnet, synthetisieren kann.

- Dieses Pentacosapeptid besitzt gegenüber dem natürlichen ACTH den Vorteil, dass es keine antigenen Eigenschaften aufweist. Ein weiterer Vorteil des Nle⁴-Lys¹⁷-lys^l8-Val-NH₂ ²⁵~Pentaoosapeptids ist, dass es in Stellung 4 nicht wie naturliches ACTH einen Methioninrest besitzt, der leicht oxydierbar ist und dadurch das Hormon in eine inaktivierte Form umwandelt, sondern einen Norleucinrest, der dieselben sterischen Eigeneohaften wie der Methioninrest aufweist, hingegen gegen Oxyd&tion beständig ist. Ueberdies weist das Nie -Lya '-Lys VaI-NH₂ -Pentacosapeptid in Stellung 17"und 13 zwei Lysin- reste auf, anstatt der im natürlichen ACTH in diesen Stellungen vorhandenen Argininreste. Hierdurch w.lrd die synthetische Herstellung des Nie -Lys¹⁷-Lys -Val-NHg^-Pentaeosapeptids lehr vereinfacht und überraschenderweise bei der neuen Ver-

10 9 810/2178 _BAD

bindung kein Absinken der biologischen Wirksamkeit festgestellt.

Ueberdies "weist >as Nle^-Lys^-Lys¹ -Val-NH₂ ²⁵-Pentacosap ept id in Stellung 25 einen Valinamidrest auf, der beim natürlichen ACTH an dieser Stelle nicht vorkommt. Der Valinamidrest an Carboxylende schützt die Feptidkette gegen abbauende Enzyme, deich dem natürlichen ACTH weist jedoch das Nie -lye^-Iys¹ -Val-NHM^-Pentacosapeptid in Stellung 1 einen¹ L-Serinrest auf, der bekanntlich gegenüber der abbauenden Wirkung von Aminopeptidasen sehr empfindlich ist. Ee wurde aus diesem Grunde versucht, den L-Serinrest des Nie Lys^-Lys -Val-NHg^-Pentaeosapeptids durch einen Rest zu ■ ersetzen, der gegenüber der abbauenden Wirkung der Aminopeptidasen stabil ist.

Tatsächlich gelang es, durch den Ersatz des endständigen L-Serinrestes mit einem D-Serinrest beim Nie -Lys '-Lys VaI-NHg -Pentacosapeptid, das gegenüber Aminopeptidasen unempfindliche D-Ser¹-Nle^-Lys¹⁷-Lys^l8-Väl-NH₂ ²⁵-Pentacosapeptld zu erhalten. Da aber bekanntlich D-Aminosäurereste in den natürlichen, biologisch aktiven Peptidhormonen nicht vorhanden sind, war es überraschend und nicht vorauszusehen, dass durch den Ersatz eines natürlichen Aminosäurerestes durch einen in der Natur nicht vorkommenden Antipoden eine Verbindung erhalten "wird, die nicht nur qualitativ dieselben biologischen und therapeutischen Eigenschaften wie das natürliche ACTH aufweist, sondern auch noch quantitativ dem natürlichen ACTH, wie später

BADCNGINAL , „ g g , „ , ₂ , _? g

eingehend dargelegt wird, überlegen ist.

Überraschenderweise wurde nun auch festgestellt, dass beim D-Ser¹-Nle*-Lys¹⁷-Lys^l8-Val-NH₂ ²⁵-Pentacosapeptid der Qluta-Hinsäurerest in Stellung 5 durch einen Glutaminrest ohne Verlust der biologischen Wirkung ersetzt werden kann. D-Ser iae*-Gln⁵-Lys¹⁷-Lys^l8-Val-NH_g ²⁵-Pentaoosapeptid weist die

i *

i 4 * 17 l8 oben beschriebenen Vorteile des D-Ser -Nie -Lys '-Lys -VaI- -Pentacosapeptids

Die neuen Fentacosapeptide der allgemeinen Formel können nach für die Synthese von Verbindungen dieser Art allgemein bekannten Methoden hergestellt werden, wobei die Aminosäuren in der, in der obigen Formel festgelegten Reihenfolge einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer Peptide!nheiten miteinander verknüpft werden.

Erfindungsgemäss können die neuen Pentaoosapeptide der allgemeinen Formel beispielsweise hergestellt werden, indem man L-Valyl-glycyl- f-N-R-L-lysyl- £-N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- 6-N-Jl-L-Iysy 1-L-valyl-L-tyrosyl-L-proiyi-L-valinamid, worin R eine Carbo-tert.-bu* toxy- oder eine Carbo-tert.-amyloxy-Gruppe bedeutet, mit dem N-Triphenylmethyl-L-glutaminyl(oder 7-0-tert.-

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'.butyl-L-glutamyl )-Ira-triphenylm8tnyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl-L- ' prolin-a^S-trichlorphenylester, worin R obige Bedeutung hat, kondensiert, das erhaltene N-Triphenylmethyl-L-glutami-.nyl (oder-7-O-tert. -butyl-L-glutamyl)-Im-triphenylmethyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- £ N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-yalyl-glycyl- ^N-R-L-lysyl- £-N-R-L- . lysyl- £ -N-R-L-lysyl- ^-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-f-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R obige Bedeutung hat, nach Abspaltung der N-Triphenylmethy1-Qruppe mit dem N-R'-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucylazid, worin R¹ eine Tripheny!methyl-, eine Carbo-tert.-butoxy- oder eine Carbo-tert.-amyioxy-Gruppe bedeutet, kondensiert und die ge-. samten Schutzgruppen der erhaltenen, neuen, geschützten Pentacosapeptide N-R'-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutaminyl(oder 7-O-tert.-butyl-L-glutamyl)-Im-triphenylmethyI-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-£ -N-R-.L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- £ -N-R-L-lysyl- £-N-R-L-"lysyl- £-N-R-L-lysyl- E-N-R-L-Iysyl-L-prolyl-L-valyl- £-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R und R¹ obige Bedeutung haben, in einer oder in mehreren Stufen im sauren Milieu abspaltet.

Die Ausgangsprodukte zur Herstellung der neuen Pontacoeapeptide der allgemeinen Formel I können, sofern oie bisher noch nicht bekannt waren, nach den für die Peptidchemio bekannten Metho- · den erhalten werden, wobei die Aminosäuren einzeln oder nach

BAD öftiQINAL

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;^; vorheriger Bildung kleinerer Peptideinheiten miteinander

Y; verknüpf t werden. ■; ■■;■..'. .-■".:=■ ".. \. -■'·. Die neuen Pentacosapeptide der allgemeinen Formel I lassen

. sich auch in Form ihrer Salze gewinnen bzw. verwenden. Als Salze kommen solche mit organischen Säuren, wie Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure,

'.Malonsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Salicylsäure,

': 2-Phenoxy- oder 2-Acetoxy-benzoesäure, Mandelsäure, Methansulfonsäuren Aethansulfonsäure, Hydroxyäthansulfonsäure, Benzol- oder Toluolsulfonsäure, Näphathalinsulfonsäure, SuIfanil-

säure sowie polymere Säuren wie Gerbsäure, Alginsäure, PoIygalacturonötture, Polyphloretinphosphat oder Carboxymethyl-

: cellulose und Salze mit anorganischen Säuren, wie Halogenwasser stoff säure, z.B. Salzsäure oder Bromwasserstoffsäure. Salpetersäure, Thiocyansäure, Schwefelsäure und Phosphor-

. säure in Frage. Als Schwermetallkomplex kommt z.B. derjenige des Zinks in Frage. . . ." Die neuen Pentacosapeptide der allgemeinen Formel I, ihre . Salze und Schwermetallkomplexe können beispielsweise für die Behandlung der folgenden Erkrankungen verwendet werden; Akuter und chronischer Gelenkrheumatismus, Colitis ulcerosa, ' ·

Nephrose, . "

Kollftgenosen, wie z.B. Lupus erythematodes, Sklerodermie usw., Allergische Erkrankungen der verschiedenen Org&nsysteme,

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wie Asthma bronchiale, Ekzem« Urticaria, Dermatitis exfoliativa, anaphylaktischer Schock usw., .

Intoxikationen verschiedener Genese,

t .

Tumoren, wie z.B. Leukämien, Lymphosaroomen, Retlculosare^raen usw., zur Verhinderung der Nebennierenrindenatrophie bei der Therapie mit Corticosteroiden, Insuffizienzerscheinungen der Hypophyse.

Ein wesentlicher Vorteil gegenüber natürlichem, aus tierischem Material extrahierten Hormon liegt darin, dass den neuen Pentacosapeptiden antigene Eigenschaften fehlen. Sie können somit bei den oben erwähnten Erkrankungen auch dann unbedenklich verwendet werden, wenn beim Patienten im Verlauf einer früher'-1, Behandlung mit natürlichem ACTH allergische Erscheinungen auftraten.

In den für die Standardisierung üblichen und anerkannten Tests besitzen die erfindungsgemässen Pentacosapeptide im Vergleich zum natürlichen Corticotropin folgende biologische Wirksamkeit: 570 t I4o Corticotropin IE pro mg D-Ser^Nle -LyS¹^LyS

■ 2*5

VaI-NHg -Pentacosapeptid

550 - I4o Corticotropin IE pro mg D-Ser¹-Nle -GIn^-LyS¹^-Ly

VaI-NHg -Pentacosapeptid.

So diente zur Testung der verfahrensgemäss hergestellten Pentacosapeptide der 3* Internationale Standard für Corticotro

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pin, weicher in Form des "International Standard of Corticotropin" zur Verfügung steht und die Einstellung von ACTH-Präparaten auf Internationale Einheiten ermöglicht. Es hat sich herausgestellt, dass die neuen Pentacosapeptide nach intravenöser Verabreichung eine längere Wirkungsdauer besitzen als die bisher bekannten natürlichen und synthetischen ACTH-Präparate, was einen bedeutenden technischen Fortschritt darstellt.

Die unerwartete, bei der Standardisierung festgestellte hohe Wirksamkeit der neuen Pentacosapeptide hat sich bei der therapeutischen Anwendung voll bestätigt, so dass die neuen Pentacosapeptide auf Gewichtsbasis stärker wirken als alle, bis jetzt bekannten natürlichen und synthetischen ACTH-Präparate.

Die Dosierung der verfahrensgemäss hergestellten Pentacosapeptide entspricht derjenigen vom ACTH, d.h. sie νarliiert ungefährt zwischen 40 und 60 IE pro

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^: Tag, in besonderen Fällen zwischen 10 und 100 ZE pro Tag.

Die neuen Pentacosapeptide der allgemeinen Formel I können - als Heilmittel , z.B. in Form pharmazeutischer Präparate, Verwendung finden. Diese enthalten die genannte Verbindung in Mischung mit einem für die parenterale Applikation geeigneten organischen oder anorganischen Trägermaterial. Für dasselbe kommen solche Stoffe in Frage, die mit den neuen Verbindungen nicht reagl'eren, wie z.B. Gelatine, Milchzucker, . Stärke, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche Oele, Benzylalkohol©, Gummi arabicum, Polyalkylenglykole, Vaseline, Cholesterin oder andere bekannte Arzneimitteltriiger. Die pharmazeutischen Präparate können z.B. in flüssiger Form als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegebenenfalls sind sie sterilisiert und bzw. oder enthalten Hilfsstoffe wie Konservierung's-, Stabilisierungs-, Netzmittel oder Emulgiermittel. Sie können auch noch andere, therapeutisch wertvolle Stoffe enthalten. Die neuen Verbindungen können wie natürliches ACTH auch in Form eines Depotpräparates verabreicht werden.

Die neuen Pentacosapeptide der allgemeinen Formel Z und ihre Salze können jedoch auch als Zwischenprodukte zur Herstellung von pharmazeutischen Präparaten Verwendung finden.

Beim Aufbau der neuen Pentacosapeptide der allgemeinen Formal I haben sich für die Blockierung der Aminogruppe des Serlnrestes die Triphenylmethyl-, die Carbo-tert.-butoxy- und die Carbo-

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BAD

tert.-amyloxy-Gruppe bewährt, doch können auch andere geeignete Schutzgruppen, wie die Carbobenzoxy·», die Trifluoraoetyl-, die Acetyl-, die Chloraoetyl-, die Forraylgruppe verwendet werden.

Für die Blockierung der£-Aminogruppe des Lysinrestes hat eich die Carbo-tert.-butoxy- und die Carbo-tert. -arayloxy-Oruppe bewährt, doch können auch andere geeignete Schutzgruppen, wie die Carbobönzoxy-, die Toluolsulfonyl-, die •Phthalyl-, die Formyl- und die Trifluoraoetyl-Gruppe verwendet werden.

Für die Blockierung der γ-Carboxyl-Gruppe des Glutamineäurerestos hat eich die tert.-Butyloxy-Gruppe bewährt, dooh können auch andere 'geeignete Schutzgruppen, wie die Methoxy-, die Aethoxy-, die tert.-Amyloxy-, die Amid- oder die Benzyloxy-Gruppe verwendet werden.

FUr die Blockierung der Iraidazolgruppe des Histldlnrestes hat sich die Triphenylmethylgruppe bewährt, doch können auch andere geeignete Sohutzgruppen, wie die Carbo-tert.-butoxy-, die Carbo-tert.-amyloxy-, die Carbobenzoxy- oder die Benzylgruppe verwendet werden.

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- 11 - ' 100-2505

03s werfen folgende Abkürzungen verwendet: / ' Ϊ., ;'■ ■ ·

■GBO ~{;vf ^:-_{; :}« '.'* -;;, ^v\ Carbo"benzosy ; . \^;·^:.^νών ..-- -.· "_r2r£t.';^:ff;v-;.! "»■;:.. -^:V^::; Trityl » Sriphenylaethyl' V Γ Vv'''.

;_: X ϊρ-'y ^:es -v- ;v. Carbo-terfc.-Tjutylosy .·. <"';·■.'/. ^:. · ·.-·

>'. ... tert.-^utyloxy

Arg V ; ·--'.-;.^:.β·■:_:·.■■_.: !.-arginyl ."."■■·-■.-;■_. ■ ν w'.i..⁴·^-· /·' ' ' GIu".' "^ j;//'«" L-glutarayl · ■' ■'·;·. ^r'-i--" ■'/.. ■■ ">.. * :v ^:· GIn ■·■■"«.. "■ , L-glutaminyl .'" '', ν"'ν · ^ ' Giy ^Λ ' ^: -^: ·"..;·= .... glycyl ■ ""■'./■"' ·^:; '^r-L:C ^V/ - * -"^; · ..

Eis \--\"-· :.^Λν; -β· ·"· !,-^iistidyl · ·. ■··.;■'■ '""·. ■'· W ■·*■'■ ·

Lys - ν....· ; ^s . ■:;..- 1-lyeyl ·· ν . Vv'".;·"-. KIe "■'; ;;_VV «*·.·■· L-norleucyl ._; -.;: - ;;-- .;. . ■ ,-; . ν . ν

"She ...V'· .« '"·;·.-.■ L-phenylalanyl .-■ ■;.·... ."·'_' " . ν ?ro .·., ; β ■■'■;;.- L-prolyl '.:■■:.·.■-.■ .-·".-.-.V¹V- ;

B-Ser ',··■ "■;-.; "' D-seryl ' ■'.'."'-"■.'' Γ; ^:; Try ' β .. I-tryptophanyl ';■■:■■-■ · Tyr β . I-tyrosyl

VaI β L-valyl Im β Imidazolyl

In den folgenden Beispielen, die die Ausführung des Verfahrene erläutern, den Umfang der Brfindung a'oer in keiner Weise einediränken sollen, erfolgen alle feaperaturangalien in Celsiusgraden. BAD ORJGfNAL - _{n n ft} - _n , „ ' „ _n

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100-2305

Herstellung von H-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-R"-His-Phe-Arg-Try-Gly-Iys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-

Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH₂

Teil 1

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Teil 2

1 5 9 3 9 7 A 100-2505

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BAD CRiGINAL

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Beispiel 1; Carbo-tert.-butoxy-D-Seryl-L-tyrosyl-L-sgryl-L-

norleucin · hydrazid (CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNHg) Man löst 5^ g H-Ser-Nle-OMe · HCl und 63 g CBO-Tyr-OH in 860 ml Acetonitril, kühlt auf 0°, gibt 28 ml Triäthylamin zu, kühlt auf -10° und gibt 41 g Dicyclohexylcarbodiimid zu. Das Gemisch wird während l6 Stunden bei 0° gerührt, dann abfiltriert. Der Niederschlag wird mit 1400 ml Pyridin gewaschen. Die vereinigten Filtrate, werden abgedampft und der Rückstand aus Essigester kristallisiert. Man erhält 101 g CBO-Tyr-Ser-NIe-OMe (Smp. l40-l42°, [a]£^u » -15° in Dimethylformamid). Man löst 51 g des so erhaltenen Produktes in 2 Liter einer 1 N Lösung von HCl in Methanol und hydriert in Anwesenheit von 10 g Palladium/Kohle. Nach ca. 2 Stunden beendigt die Aufnahme des Wasserstoffs. Man filtriert, dampft ab und kristallisiert den Rückstand aus einem Gemisch von Methanol-Aether (3:1)«

ΡΩ

Man erhält 42 g H-Tyr-Ser-Nle-OMe · HCl. Smp. 227°, -7° in Dimethylformamid.

Man löst βθ g D-Serinmethylester-hydroohlorid in 200 ml Dimethylformamid und 54 Bl Triäthylamin,*kühlt auf 0° und filtriert das Triäthylamin-hydrochlorid ab. Dimethylformamid wird ι bei Hoohvakuum eingedampft und der Rückstand in 150 ml Pyridin aufgelöst. Man tropft 100 g tert.-Butyloxycarbonylazid zu und lässt 2 Tage bei 20° stehen.

Man dampft das Lösungsmittel ab und nimmt das Produkt in Essig ester auf. Nach Waschen mit Wasser, verdünnter Salzsäure und

109810/2176 *ad original

- 15.- 139397t 100-2505

Kaliumhydrogencarbonatlösung trocknet man über Natriumsulfat. Nach Abdampfen des Essigesters bleibt das CTB-D-Ser-OMe als ein OeI zurück. Man löst den Ester in 500 ml Methanol auf und lässt mit 50 ml Hydrazinhydrat 2 Tage bei 20° stehen. Nach Verdampfen des Methanols kristallisiert das Hydrazid. Aus heissem Essigester umkristallisiert, isoliert man 53 g CTB-D-Ser-NHNHg·

21 "

vom Smp. 114°, [α]_β = -3° in Dimethylformamid. Man löst bei

-10° 10 g CTB-D-Serinhydrazid in I36 ml 1 N Salzsäure« die 15 g Natriumchlorid enthält. Bei dieser Temperatur werden I60 ml Essigester und anschliessend 2,8_g Natriumnitrit in 5 Portionen zugegeben. Unter ständigem Rühren wird bei -10° noch 5 Min. reagieren gelassen. Die Essigesterphase wird abgetrennt, mit kalter _10 #iger Kaliumhydrogencarbonatlösung gewaschen und mit Natriumsulfat getrocknet. Die getrocknete Lösung wird mit einer Lösung, bestehend aus 12 g H-Tyr-Ser-Nle-OMe-Hydrochlorid in 60 ml Dimethylformamid und 6 ml Triäthylamln versetzt. Anschliessend dampft man den Essigester im Vakuum ab und lässt 16 Stunden bei 20° stehen. Das zurückgebliebene Lösungsmittel wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand in Essigester gelöst. Man wäscht mit verdünnter Phosphorsäure und Kaliumhydrogencarbonatlösung aus und trocknet über.Natriumsulfat. Nach Einengen des Lösungsmittels und Fällung mit Aether erhält man 15 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-OMe. Smp. 155°, [ajj:⁰ = -6° in Methanol. Man löst 11 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-OMe in 100 ml Methanol und versetzt.mit 4,5 ml Hydrazinhydrat. Ueber Nacht lässt man bei 20° stehen, worauf das Produkt auskristallisiert.

- 16 - 100-2505

Man filtriert und wäscht mit Methanol und Petroläther. Man erhält 7#7 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-hydrazid vom Smp. 210°,

20
[α]~ β +6,4° in Dimethylformamid.

Beispiel 2: D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutamyl-

L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanylglycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-vaiyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid (H-D-Ser-Tyr- ' Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-VaI-Tyr-Prο-VaI-NHg) Man löst 2,0g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNHg (Beispiel l)in 12 ml Dimethylformamid, gibt 4 ml Wasser zu, kühlt auf -10°, ' gibt 2 ml 6 N Salzsäure zu, versetzt mit 280 mg Natriumnitrit, rührt 5 Min. bei -5°, gibt 500 ml 0,2 ml 0,2 N Kaliumbicarbonatlösung hinzu und zentrifugiert. Man löst das erhaltene CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-N., in 50 ml Dimethylformamid, versetzt mit 10,5 g H-GluiOTBj-iTritjHis-Phe-Arg-Try-Gly-iCTBjLys-Pro-Val-Gly-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Prp-Val-(CTB)Lys-Väl-Tyr-Pro-Val-NHg * Acetat, lässt 12 Stunden bei 0° stehen, gibt noch eine weitere, aus 2,0 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNHg hergestellte Menge von Tetrapeptidazid zu, lässt 6 Stunden bei 0° stehen, dampft ab, 'verarbeitet mit Essigester, wäscht mit heissem Aceton und Essigester und trocknet im Vakuum. Man löst das erhaltene Produkt in 100 ml 90^-iger Trifluoressigsäure, lässt 1 Stunde bei 20° unter Stickstoff stehen, dampft ab, verarbeitet mit Essigester, filtriert und

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trocknet. Man löst das erhaltene Produkt in 500 ml 0,2 H Essig-' säure, behandelt die Lösung mit Amberlit-IRA-410 in Acetatform, filtriert und lyophilisiert. Nach Trocknen über Natriumhydroxyd erhält man 7,3 g H-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Olu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lyß-Pro-Val^Gly-lys-Lys-Lys-Iys-Pro-Val-3Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH₂ Heptaacetat ' Dekahydrat, das sich bei der Chromatographie und der Elektrophorese homogen verhält. '

(Totalhydrolyse gibt die folgenden Aminosäurezusammensetzungen:

Mikroanalyse: Ber.: C 52,6 H 7,6 N 14,9 O 24,7 %

Gef.: C 52,4 H 7*5 N 15,0 O 24,8 % Srap.! 202° mit Zers., Ca]Jj⁰ - -82° in 1 N Essigsäure.

Beispiel 3: Trityl-L-Klutaminyl-Im-trityl-L-hlstidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-ftlycyl- £ -W»carbotert^butoxy-L-lysyl-L-prolin-gt^^S-trichlorphenylester '

(Trit-Oln-(TrIt)His-Phe-Arg-Try-01y-(CTB)Lye-Pro-OCP) Man löst 457 g H-His-Phe-OMe.2 HBr und 266 ml Triiithylamin in 1000 ml Dimethylformamid, rührt 10 Min. bei 0°, filtriert, gibt dem FiItrat 445 g CBO-GIn-OCP zu und lässt l6 Stunden bei 20· stehen. Man dampft das Dimethylformamid ab, löst den Rückstand in Essigester, wäscht mit verdünntem EssigsUure-tfaeser und 1 X Natriumbicarbonatlösung, trocknet über Natriumsulfat, dampft ab und kristallisiert den Rückstand aus Eseigestor. Man erhält

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- 18 - . 100-2505

^: 32Ö g CBO-Gln-His-Phe-OMe. Smp. 195^β/[α]^° » -20° in "Dimethylformamid. - ..... . . . ·· ,

Man löst das oben erhaltene Tripeptid in 3 L Methanol, hydriert in Anwesenheit von 50 g Palladium-Kohle 10 %, filtriert, dampft ab, löst den Rückstand in 1,5 L Methylenchlorid, kühlt auf 0°, gibt 140 ml Triäthylamin und anschliessend 270 g Triphenylchlormethan zu, lässt 16 Stunden bei «20° stehen, wäscht mit verdünnter Essigsäure, Wasser und 1 N Natriumbicarbonatlösung, trocknet und dampft ab. Man löst den Rückstand ■ in Diäthyläther und fällt mit Petroläther. Man erhält 480 g Trit-Oln-(Trit)His-Phe-OMe (Smp· 90° mit Zers.), das man in 1000 ml Methanol löst. Man gibt 50 ml Hydrazin zu, lässt 24 Stunden bei 20° stehen, konzentriert auf 500 ml, gibt 5 L Diäthyläther zu, wäscht'mit 0,1 H Kochsalzlösung, trocknet, konzentriert auf 500 ml und fällt mit Petroläther. Man erhält

380 g Trit-Gln-(Trit)His-Phe-NHNH₂, Sap. 100° mit Zers., 20

jj -12° in Dimethylformamid.

Man löst 41 g Trit-Gln-(Trit)His-Phe-NHNH₂ in 100 ml Dimethylformamid und 100' ml Isopropanol, kühlt auf -10° und gibt 40 ml 4 N Salzsäure und anschliessend unter Rühren 9 al 5 N Hatriumnitritlösung zu. Nach 5 Minuten.fügt man zu 28 ml Triäthylamin und 1000 ml Biswasser zu, nutscht ab, löst den Miederschlag in Essigester, wäscht mit einer gesättigten Koohealζlösung, trocknet, dampft bei 0° ab, löst den Rückstand in' 100 ml Dimethylformamid, gibt 26 g H-Arg-Try-Oly-

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- 19 - " 100-2505

(CTB)Lys-Pro-OH, 2 AcOH und 4,5 ml Triäthylamin zu, lässt "16 Stunden bei 0° stehen, gibt 1000 ml Essigester zu, wäscht mit .0,5 N Essigsäure, Wasser'und 0,5 N Pyridin, dampft ab, löst-den Rückstand in 100 mi Essigester und fällt mit Diäthyläther. Man erhält 46 g Trit-Gln- (Trit )His-Phe-Arg-Try-Gly- (CTB) Lys-Pro-OH, Smp. 190°, [a]jj° » -12° in Dimethylformamid. Man - löst das oben erhaltene Peptid in 200 ml Pyridin, kühlt auf -20°, gibt 350 ml einer 1 H Lösung von Salzsäure in Dioxan zu, rührt 5 Minuten bei -20°, gibt 7*3 ml Triäthylamin zu, konzentriert auf die Hälfte des Volumens, gibt 50 g Tri-(trichlorphenyl)-phosphit zu, lässt 16 Stunden bei 20° stehen, dampft ab, verarbeitet den Rückstand mit Diäthyläther, löst ihn in Essigester, fällt mit Diäthyläther, filtriert und trocknet.

Man erhält 51 g Trit-Gln~(Trit)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-OCP.HCl. Smp. l80° mit Zers. · '

Beispiel 4; D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutaminyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-•'. * ''-. . . glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-^lycyl-L-lysyl-L- - IySyI-L-IySyI-L-IySyI-L-PrOIyI-L-VaIyI-L-IySyI-L- valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid.

' - (H-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Gln-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-■ ' Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-

.·'- Pro-Val-NH₂) ' ' ■

Man löst 6 g Trit-Gln-(Trit)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)Lys-Pro-0CP.HC1 und 5*7 g H-VaI-GIy-(CTB)LyS-(CTB)LyS-(CTB)LyS-(CTB)

109810/2176

_ 20 - . 100-2305

LyS-PrO-VaI-(CTB)LyS-VaI-TyT-PTO-VaI-NHg in 20 ml Dimethylformamid, gibt 0,2 g Imidftzol tu und lUest 2 Tage bei 20° stehen. Man gibt noch. 0,6 g desselben Octapeptid-Hydröchlorid zu, lässt noch 16 Stunden bei 20° stehen, fällt mit Essigester, filtriert, löst den Niederschlag in Aethanol, wiederholt die . Operation, fällt mit Essigester, filtriert und trocknet. Man erhält 8,0 g Trit-Gln-(Trit)His-Phe-Arg-Try-Gly-(CTB )Lys-Pro-Val-GIy. (CTB)LySw(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)LyS-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-

·:■ pro-Val-NHg, (Smp. I98⁰ mit Zers., [α]*^υ = -26° in Dimethyl- . formamid), das man in 200 ml Essigsäure-Wasser (8:2) löst, IUsst 2 Stunden bei 30° stehen, dampft ab, wäscht mit Essigester,

.!filtriert und trocknet. Man erhält 7 g H-GIn-(Trit)His-Phe-Arg-TTy-GIy-(CTB)LyS-PrO-VaI-GIy-(CTB)LyS-(CTB)LyS-(CTB)LyS-(CTB) Lys-Pro-Val-iCTBjLys-Val-Tyr-Pro-Val-NHg ' Aoetat.

' Man löst 1,0 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NH₂ in 6 ml Dimethylformamid, gibt 2 ml Wasser zu, kühlt auf -10°, gibt 1 ml 6 N

·' Salzsäure zu, versetzt mit 140 mg Natriumnitrit, rührt 5 Min.

•bei -5°, gibt 300 ml 0,2 N Kaliumbicarbonatlösung hinzu und' zentrifugiert. Man löst das erhaltene CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-N, ' in 50 ml Dimethylformamid, versetzt mit 5,0 g H-GIn-(Trit)His-

. Phe-Arg-Try-Gly-(CTB)LyS-PrO-VaI-GIy-(CTB)-Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-(CTB)Lys-Pro-Val-(CTB)Lys-Val-Tyr-Pro-VaI-NH₂ · Acetat, lässt 12 Stunden bei 0° stehen, gibt noch eine weitere, aus 1,0 g CTB-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NHNHg hergestcll-

te Menge von Tetrapeptidazid zu, lässt 6 Stunden bei 0° ste-

109810/7 176

- 21 - 100-2505

.hen, dampft ab, verarbeitet mit Essigester, wäscht mit heissera Aceton und Essigester und trocknet im Vakuum. Man löst das erhaltene Produkt in 100 ml Trifluoressigsäure, lässt 1 Stunde bei 20° unter Stickstoff stehen, dämpft ab, verarbeitet mit Essigester, filtriert und trocknet. Man löst das erhaltene Produkt in ^00 ml 0,2 N Essigsäure, behandelt die Lösung mit Amberlit-IRA-410 in Acetatform, filtriert und lyophilisiert. Nach Trocknen über Natriumhydroxyd erhält man 3,5 g H-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Gln-His-Phe-Arg-Try-Sly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-I^rs-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Val-NH_O · Acetat, das sich bei der Chromatographie und der Elektrophorese homogen verhält. (Totalhydrolyse gibt die folgende Aminosäurezusammensetzung:

^Val4,0> ' . -

Mikroanalyse: Ber.: C 52,7 H 7,7 N 15,3 0 2k,J %

Gef.: C 52,4 H 7*8 N 15,1 0 24,6 % Smp.: 204° mit Zers., [a]^ « -80° in 1 N Essigsäure.

BAD ORIGINAL

1 f) «J H I fI / V 1 7 i)

Claims (1)

1. \ 1} Ό ^J yJ

   - 22 - 100-2305

   Patentansprüche;

   1. Verfahren zur Herstellung neuer Pentacosapeptide der allgemeinen Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-

   .X-L-histldyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin X einen L-Glutamyl- oder L-Glutaminyl- rest bedeutet, ihren Säureadditionssalzen und Sohwermetallkomplexen, dadurch gekennzeichnet, dass man die Peptide der

   obigen Formel nach aus der Peptidchemie an sich bekannten Methoden darstellt und anschliessend gegebenenfalls auf an sich bekannte Weise in ihre therapeutisch wirksamen Säureadditionssu-^e mit organischen oder anorganischen Säuren oder Polysäuren oder Schwermetallkomplexe überführt.

   2. Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten Pentacosapeptids der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleueyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl· glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L·: prolyl-L-valinamid, seine Salze und Schwermetallkomplexe, dadurch gekennzeichnet, dass man zweckmässigerweise unter . Schutz der an der Reaktion nicht beteiligten Amino- und Carboxylgruppen, das Tetrapeptid D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleuoin oder ein Derivat dieses Tetrapeptide mit aktivierter endständiger Carboxylgruppe und das Heneoosapepfcid

   Η» Uni*!.·,; ■ '

   10 9 810/? 176 **D

   - 23— 100-2505

   L-Glutarayl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinaraid oder ein Derivat dieses Henecosapeptids mit aktivierter α-Aminogruppe kondensiert, nach Been-Hgung der Kondensation die geschützten Amino- und Carboxylgruppen in Freiheit setzt und, trenn erwünscht« das erhaltene Pentacosapeptid in seine therapeutisch wirksamen Salze oder Schwermetallkomplexe überführt.

   J. Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten Penta-

   1O981O/?176

   - 24 - 100-2305

   eo&apeptids der Formel D-Seryi-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-X-glutaminyl-L-hietidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptopha- /nyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-

   lysyl'-Iirlysyl-L-prblyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl- ·. L-prolyl-L-valinamid/ seiner Salze und Schwermetallkomplexe« /dadurch gekennzeichnet, dass man zweckmässigerweise unter Schutz der an der Reaktion nicht beteiligten Aminogruppen, das Tetrapeptid D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucin oder ein Derivat dieses Tetrapeptide mit aktivierter endstandiger · Carboxylgruppe und das Henecosapeptid L-Glutaminyl-L-histi-' dyl-L-phenylalanyl-L-axginyl-L-tryptophanyl-glycyl-L-lysyl-

   L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-Ir-prolyl-L-valyl-L-lysy 1-L-valyl-L-tyrosyl-L-pr oly 1-L-valinamid.'oder ein Derivat dieses Henecosapeptids mit aktivierter a-Aminogruppe kondensiert, nach Beendigung der Kondensation die gfsohütztea Aminogruppen in Freiheit setzt und wenn er-

   vUneoht, da$ erhaltene Pentacosapeptid in seine therapeutisch ■ wirkeamen Salze oder Schwermetallkomplexe überführt.

   *'|. " Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten Penta-

   cQsapeptids der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-• ^giufcÄroyl-L-h^stidyl-Ii-phsnylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl·- ^lyoyl-Ii-lysyl-I*-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-iyoyi-L-o3Ly ?L-Ii-valyl-L-lysyl-L-valyl-t-tyrosyl-Xi-prolyl-, seiner therapeutisch wirksamen Säureadditions- oder Schwermetalllcomplexe, dadurch gekennzeichnet, dass

   109810/2176 bad

   100-2505

   »an L-v._ln._elyojrl. e._M._R.

   lyeyl- f-H-H-L-ly^l-L L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worm R eine Carbo-frv,-butoxy-, eine Carbo-tert.-amyloxy-, ein· Toluolsulfonyl-, eine Phthalyl-, eine Formyl- oder ein· Trifluoracetyl-Gruppe bedeutet, mit dem N-Triphenylraethyl-L-glutaJoyl(7-O-tert.-butyl)Im-triphenylmethyi-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-, L-tryptophanyl-glycyl- £-N-R-L-Iysy1-L-prolin kondensiert und das so erhalten· N-Triphenylmethyl-L-glutaayl-'y-O-tert.-butyl-Im-triphenylraethyl-L-hietidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycyl- £-K-R-L-lyeyl-L-prolyl-L-valyl-glyoyl- £ -H-R-L-lysyl- ζ -N-R-L-lysyl- f -N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- f-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R obige Bedeutung hat* naoh Abspaltung der a-N-Triphenylmethyl-Gruppe mit des N-R¹ -D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucylwid, worin R¹ ein« Triphenylmethyl-, «in· Carbo-tert.-butoxy- oder eine Carbotert.-amyloxy-, «in« Carbobenzoxy-, eine Trifluoraoetyl-, •in· Aoetyl-, eine Chloraoetyl-, eine"Pormylgruppt bedeuttt, kondensiert, die gesamten Sohutzgruppen des erhaltenen neu·»» gesohUtzten Pentaoosapeptids N-R¹-D-fltryl-L-tyroeyl-L-stryl- :L-norleucyl-L-gluta«yl(7-0-tert.-butyl)Im-triphenylwethyl^L-

   histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glyoyl-f-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-C-N-R-L-lysyl- C-N-R-L- -f -N-R-L-lysyl- i-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-f-N-R-L-

   BAD ORIGINAL

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   - 26 - . 100-2505

   lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin H und R¹ obigt Bedeutung haben« In einer oder In mehreren Stufen abspaltet und das so erhaltene Pentaoosapeptld gegebenenfalls ansohliessend in seine therapeutisch wirksamen Säureadditionssalze oder Schwermetallkomplexe überführt.

   - 5· Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten Pentaoosapeptids der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-Ii-norleucyl-L-glutejninyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-elyoyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lyeyl-L-lyeyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-I.-lygyl-L-valyl-L-tyroeyl-L-prolyl-L-valinamid, seiner therapeutisch wirksamen Säureadditlonssalze oder Sohwermetallkonplexe, dadurch gekennzeichnet, dass nan L-Valyl-glyoyl- f-H-R-L-lysyi- t-M-R-L-Iysy 1- £ -N-R-L-lysyl-1 -N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- £ -H-R-i-lysyl-i,-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamldf worin R ein« Carbotert.-butoxy-, eine Carbo-tert.-aayloxy-, «ine Toluoleulfonyl-, eine Phthalyl-, eine Forrayl- oder ein« Trifluoraoetyl-Gruppe bedeutet, mit dem N-Triphenylmethyl-L-glutaaiinyl-Iii-triphenylmethyl-L-hittidyl-L-phtnylaXanyl-L-arginyl-L-tryptophanylglyoyl- £-N-R-L-Iyty 1-L-prolin kondensiert« und das erhaltene M-Triphenylmethyl-L-glutaminyl-In-triphenylaethyl-L-histldyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glyoyl-f-N-R-L-iysyl-t-prolyl-L-valyl-glyoyl- f-M-R-L-lysyl-f-M-R-L-lyaylf-M-R-L-iysyl- f-N-R-L-lyeyl-L-prolyl-L-valyl-f-H-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R obige Bedeu-

   BAD

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   „27- .. 100-2505

   tung hat, nach Abspaltung der α-N-Triphenylmethyl-Gruppe mit dem N-R^D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleueylazid, worin R¹ eine Triphenylmethyl-, eine Carbo-tert.-butoxy- oder eine Carbo-tert.-amyloxy-, eine Carbobenzoxy-, eine Trifluor- .."^: acetyl-, eine Acetyl-, eine Chloracetyl-, eine Formylgruppe bedeutet, kondensiert, die gesamten Schutzgruppen des erhaitenen neuen, geschützten Fentacosapeptids N-R¹-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-giutaminyl-Ira-triphenylmethyl-L-histidy1-L-pheny IaIany1-L-arginy 1-L-tryptophany 1-glycy1-5-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- ζ-N-R-L-Iysyl- £-N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-lysyl- ζ-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-f -N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinaraid, worin R und R* obige Bedeutung haben, in einer oder in mehreren Stufen abspaltet und das so erhaltene Pentacosapeptid gegebenenfalls anschliessend in seine therapeutisch wirksamen Säureadditionssalze oder Schwermetallkonplexe Überführt.

   6. Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten Polypeptide der pormel· D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryi-L-norleuoyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl- ■ glycyl-L-lyeyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, dadurch gekennzeichnet, dass man aus N-R¹-D-Seryl-L-tyrosyl-L-eeryl-L-norleucyl-L-glutamyl(γ-0-tert.-butyl)Ira-tripheny!«ethyl-L-histidyl-L-phenylal*nyl-L-arginy 1-L-tryptophanyl>-glycy 1-£-N-R-L-Iysy 1-L-prolyl-L-valyr-glycyl-£ -N-R-L-lysyl- ^-N-R-L-lysyl-£ -N-R-L-lysyl-

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   - 28 - · 100-2505

   -H-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl- £-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R und R¹ in der Peptldchemie zum Schutz von Aminogruppen verwendete Schutzgruppen bedeuten, die Schutzgruppen in einer oder in mehreren Stufen abspaltet. . . . ·

   7. Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten PoIypeptids der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutaminyl-L-histidyl-X-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glyeyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glyeyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, dadurch gekennzeichnet, dass man aus N-R¹-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutaminyl-Im-triphenylmethyl'-L-histidyi-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanyl-glycylf-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl- f-N-R-L-lysyl- f -N-R-L-lysyl- Γ-N-R-L-lysyl- £ -N-R-L-Iysyl-L-prolyl-L-valylf-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R uad R¹ in der Peptidchemie zum Schutz von Aminogruppen verwendete Schutzgruppen bedeuten, die Schutzgruppen in einer oder in mehreren Stufen abspaltet. >;·

   8. Verfahren nach Patentanspruch 5 und 6, dadurch gekennzeichnet, dass R eine Carbo-tert.-butoxy-, eine Carbo-tert.-amyloxy-, eine Carbobenzoxy-, eine Toluolsulfonyl-, eine Phthalyl-, eine Formyl- und eine Trifluoracetylgruppe und R¹ eine Triphenylmethyl-, eine Carbo-tert.-butoxy-, eine Carbo-tert.-amyloxy-, eine Carbobenzoxy-, eine Trifluoracetyl-,

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   - 29 - . . 100-2505 eine Acetyl-, eine Chioracetyl-, eine Fonnylgruppe bedeuten.

   9.·- Verfahren zur Herstellung des bisher unbekannten Polypeptide der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutarayl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanylglyoyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valylrL-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, dadurch gekennzeichnet, dass man aus N-R¹-D-Sery 1-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutainyl (7-0-R") Im-R"^f -L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanylglycyl-ζ-N-R-L-Iysyl-L-prolyl-L-valyl-glycylf-N-R-L-lysyl-ξ-N-R-L-Iysy1-f-N-R-L-lysylf-N-R-L-lysyl-L-prolyl-L-valylf-N-R-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-valinamid, worin R und R¹ eine in der Peptidchemie zum Schutz der Arainogruppe verwendete Schutzgruppe und R" entweder eine Carboxylsohutzgruppe oder Wasserstoff und R^nt entweder eine Iraidazolschutzgruppe oder Wasserstoff bedeuten, diese Schutzgruppe η in einer oder in mehreren Stufen abspaltet.

   IQ» Verfahren zur Herstellung dee bisher unbekannten Polypeptide der Formel D-Seryl-L-tyrosyl-L-aeryl-L-norleuoyl-L-glutaminyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophanylglyoyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glyoyl-L-lyeyl-L-lysyl-L-lysyl-Ii-lysyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolyl-L-vallnajTiid, dadurch gekennzeichnet, dass nan aus N-R¹-D-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-norleucyl-L-glutaminyl-I»-

   10981Ό/.2176