DE1196666B - Verfahren zur Herstellung neuer adrenocorticotrop wirksamer Tetracosapeptide - Google Patents
Verfahren zur Herstellung neuer adrenocorticotrop wirksamer TetracosapeptideInfo
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Description
DEUTSCHES
PATENTAMT
AUSLEGESCHRIFT
Int. α.:
Nummer: Aktenzeichen: Anmeldetag: Auslegetag:
C07c
Deutsche Kl.: 12 q-6/01
1196 666 C26884IVb/12q
2. Mai 1962 15. Juli 1965
Verfahren zur Herstellung neuer adrenocorticotrop wirksamer Tetracosapeptide
Anmelder:
CIBA Aktiengesellschaft, Basel (Schweiz) Vertreter:
Dr.-Ing. Dr. jur. F. Redies, Dr. rer. nat. B. Redies
und Dr. rer. nat. D. Türk, Patentanwälte, Opladen, Rennbaumstr. 27
Als Erfinder benannt:
Dr. Heini Kappeier, Birsfelden; Dr. Robert Schwyzer, Riehen (Schweiz)
Beanspruchte Priorität: Schweiz vom 4. Mai 1961 (5242), vom 24. November 1961 (13 753)
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung des Tetracosapeptids der Formel L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-argi-5
nyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin
sowie der entsprechenden Verbindung, die statt des Glutamylrestes den Rest des Glutamins aufweist, und
ihrer Säureadditionssalze und Schwermetallkomplexe, z. B. derjenigen des Zinks. io
Die neuen Verbindungen haben eine hohe adrenocorticotrope Wirksamkeit und sollen in der Human-
und Veterinärmedizin als reine, einheitliche Stoffe an Stelle von /S-Corticotropin verwendet werden. Die
Verbindungen können ferner als Zwischenprodukte 15 zur Herstellung von Heilmitteln, die eine längere
Kette von Aminosäuren aufweisen, wie der adrenocorticotropen Hormone selbst, verwendet werden.
Die neuen Tetrakosapeptide werden nach den für
die Peptidherstellung bekannten Methoden erhalten, 2°
wobei die Aminosäuren in der erwähnten Reihenfolge
einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer *
die Peptidherstellung bekannten Methoden erhalten, 2°
wobei die Aminosäuren in der erwähnten Reihenfolge
einzeln oder nach vorheriger Bildung kleinerer *
Peptideinheiten verknüpft werden. So kann man eines
der Aminosäure- bzw. Peptidmoleküle in Form eines L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin mit dem
Esters mit einem weiteren Aminosäure- bzw. Peptid- 25 Tetradecapeptid L-Lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-L-lysylmolekül,
das eine geschützte Aminogruppe enthält, in L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-Gegenwart
eines Kondensationsmittels, wie eines L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin kondensiert, wie beispiels-Carbodiimids
oder eines Phosphorigsäureesterhalo- weise im Schema F i g. 1 für die Verbindung, die als
genids, verknüpfen oder man kann mit dem Amino- fünfte Aminosäure L-Glutaminsäure enthält, gezeigt
säure- bzw. Peptidester mit freier Aminogruppe eine 30 ist. BOC bedeutet eine tert.-Butyloxycarbonylgruppe,
Aminosäure bzw. ein Peptid mit aktivierter Carboxyl- tBu eine tert-Butylgruppe und iBu eine Isobutylgruppe.
gruppe (und geschützter Aminogruppe), z. B. ein Das als Ausgangsstoff verwendete Decapeptid kann
Säurehalogenid, -azid, -anhydrid, -imidazolid, -isoxa- z. B. durch Kondensation von tert.-Butyloxycarbonylzolid
(z. B. aus N-Äthyl-S-phenylisoxazolium-S'-sul- ' L-seryl-L-tyrosy-L-serin-azid mit L-Methionyl-L-glutafonat
[s. W ο ο d w a r d et al., J. Am. Chem. Soc, 89, 35 minyl-(oder y-tert.-butyl-L-glutamyl)-L-histidyl-L-phe-S.
1011 {1961}]) oder einen aktivierten Ester, wie nylalänyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycinoderdurchKon-Cyanmethylester
oder Carboxymethylthiolester, um- densation von y-tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosetzen.
Umgekehrt kann auch eine Aminosäure bzw. syl-L-seryl-L-methionin-azid mit L-Glutaminyl-(oder
ein Peptid mit freier Carboxylgruppe (und geschützter tert. - Butyl - L - glutamyl) - L - histidyl - l - phenylalanyl-Aminogruppe)
mit einer Aminosäure bzw. einem Peptid 40 L-arginyl-L-tryptophyl-glycin hergestellt werden. Das
mit aktivierter Aminogruppe (und geschützter Carb- Tetradecapeptid erhält man beispielsweise nach dem
oxylgruppe),z.B.einemPhosphitamid, zur Reaktion ge- Schema der F i g. 1.
bracht werden. Alle genannten Methoden sind für jede Weiter erhält man das Tetrakosapeptid beispiels-
erfindungsgemäß in Betracht kommende Bildung von weise durch Kondensation des Tetrapeptids L-Seryl-PeptidbindungenanwendbarJedochsinddieindenBei-45
L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin mit dem Eikosapeptid spielen angewandten Verfahren besonders vorteilhaft. L-Glutamyl-(oder Glutaminyl)-L-histidyl-L-phenylala-Wie
bereits erwähnt, bestehen verschiedene Möglich- nyl - L - arginyl - l - tryptophyl - glycyl - l - lysyl - l - prolylkeiten
bezüglich des Aufbaus des Tetrakosapeptids L-valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-l-arginyl-L-arginyl
aus den einzelnen Aminosäuren bzw. kleineren " L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin nach
Peptideinheiten. Ein Verfahren besteht z. B. darin, 50 dem Schema der F i g. 2. Das als Ausgangsstoff verdaß
man das Decapeptid L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl- wendete Tetrapeptidderivat kann z. B. durch Konden-L-methionyl-L-gIutamyl-(oder
glutaminyl)-L-histidyl- sation von tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-
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3 4
L-serin-azid mit L-Methionin-methylester und Über- Beispiel 1
führung des Tetrapeptidesters in das Hydrazid
führung des Tetrapeptidesters in das Hydrazid
(Fig. 1 und 2 siehe Anlage) Stufe *
. + iu α A-u ♦ -A τ>
α v, « PZ-LyS-(BOC)-Pr0-VaI-GIy-NH-NH2
hergestellt werden, das Hexapeptid z. B. durch 5 J
Kondensation von Carbobenzoxy-(y-tert.-butyl)- 1,1Sg(I1SInMQl)PZ-LyS-(BQC)-PrO-YaI-GIy-L-glutamyl-L-hjstiduv-azid
mit L-Phenylalanyl-nitro- OCH3, hergestellt durch Kondensation von PZ-Lys-L-arginyl-L-tryptophyl-^ycin-methylester
und Abspal- (BOC)-OH mit H-Pro-Val-Gly-OCH3, werden in
tung der Estergruppe mit 1 η-Natronlauge in Dioxan. 15 ml absolutem Methanol mit 0,6 ml Hydrazinhydrat
An der Reaktion nicht beteiligte, freie, funktionelle io während einer Stunde am Rückfluß gekocht. Das
Gruppen werden zweckmäßigerweise geschützt, ins- Lösungsmittel dampft man im Vakuum zur Trockne
besondere mittels durch Hydrolyse oder Reduktion ein und fällt das Hydrazid mit viel Äther aus. Das anleicht
abspaltbarer Reste, die Carboxylgruppe Vorzugs- fänglich gallertige Produkt wird beim Kratzen fest,
weise durch Veresterung, z. B. mit Methanol, tert.- Man filtriert ab und wäscht auf der Nutsche gut mit
Butanol, Benzylalkohol, p-Nitrobenzylalkohol, die 15 Äther nach. Nach dem Trocknen über Schwefelsäure
Aminogruppe beispielsweise durch Einführung des gewinnt man 1,1 g PZ-Tetrapeptidhydrazid, F. 130
Tosyl·, Tritylrestes oder der Carbobenzoxygruppe bis 13 Γ.
oder farbiger Schutzgruppen, wie der p-Phenylazo- Eine Probe, aus heißemJWasser umkristallisiert, zeigt
benzyloxycarbonylgruppe und der p-(p'-Methoxy- den gleichen Schmelzpunkt. Das Hydrazid ist in der
phenylazo)-benzyloxycarbonylgruppe, oder insbeson- ao Kälte noch in 25Q/„iger Essigsäure gut löslich,
dere des terL-Butyloxycarbonylrestes. Zum Schutz der
Aminogruppe in der Guanidogruppierung des Arginine
dere des terL-Butyloxycarbonylrestes. Zum Schutz der
Aminogruppe in der Guanidogruppierung des Arginine
ist die Nitrogruppe geeignet; die genannte Amino- Stufe 2
gruppe des Arginins muß aber bei der Reaktion nicht „ . ,XT„ * D „.„
notwendig geschützt werden. 25 Z-Ar8-(NU^-PrO-OCH3
Die Umwandlung einer geschützten SH- oder 3,06 g (23JmMoI) Prolinmethylester in 20 ml Aceto-
NHa-Gruppe in eine, freie Gruppe sowie die Über- nitril gibt man zur Lösung von 7,18 g (20,3 mMol)
führung einer funktionell abgewandelten Carboxyl- Carbobenzoxy-nitro-L-arginin in 20 ml Dimethyl-
gruppe in eine freie Carboxylgruppe im Verlaufe des formamid, kühlt mit Eiskochsalz auf ·» —5 bis —10°
Verfahrens zur Herstellung der Tetrakosapeptide und 30 und versetzt hierauf mit der Lösung von 4,9 g Dicyclo-
Zwischenprodukte erfolgt nach an sich bekannten hexylcarbodümid in 12 ml Dimethylformamid ■—Aceto-
Methoden durch Behandlung mit hydrolysierenden nitril = 1:1. Die Reaktionslösung wird noch mit
bzw. reduzierenden Mitteln. 20 ml eiskaltem Acetonitril verdünnt und 17 Stunden
Die Erfindung betrifft auch diejenigen Ausführungs- bei 0° belassen. Der gebildete Harnstoff wird abfiltriert,
formen des Verfahrens, bei denen von man einer auf 35 mit Acetonitril gewaschen und zur Lösung 5 Tropfen
irgendeiner Stufe des Verfahrens als Zwischenprodukt Eisessig gegeben. Nach 30 Minuten dampft man das
erhältlichen Verbindung ausgeht und die fehlenden Lösungsmittel zur Trockne ein, nimmt den Ver-
Verfahrensschritte durchführt oder das Verfahren auf dampfungsrückstand in Essigester auf, filtriert noch-
irgendeiner Stufe abbricht. mais durch Watte vom abgeschiedenen Harnstoff ab
Je nach der Arbeitsweise erhält man die neuen 4° und wäscht die Essigesterlösung dreimal mit 10 ml
Verbindungen in Form von Basen oder ihren Salzen. ln-Salzsäure, zweimal mit Wasser, so lange mit
Aus den Salzen können in an sich bekannter Weise die ln-Natriumbicarbonatlösung, bis beim Ansäuern der
Basen gewonnen werden. Von letzteren wiederum alkalischen Auszüge keine Trübung mehr feststellbar
lassen sich durch Umsetzung mit Säuren, die zur ist, und zum Schluß mit Wasser neutral.
Bildung therapeutisch verwendbarer Salze geeignet 45 Beim Eindampfen der getrockneten Essigesterlösung
sind, Salze gewinnen, wie z. B. solche mit anorganischen auf ein kleines Volumen fällt der Carbobenzoxydi-
Säuren, wie Halogenwasserstoffsäuren, beispielsweise peptidester beinahe quantitativ aus. Ausbeute: 6,16 g
Salzsäure oder Bromwasserstoffsäure, Perchlorsäure, (65,5«/0 der Theorie), F. 155 bis 157° (Sintern 153°).
Salpetersäure oder Thiocyansäure, Schwefel- oder
Phoepharsäürea, oder organischen Säuren, wie Amei- 50
Salpetersäure oder Thiocyansäure, Schwefel- oder
Phoepharsäürea, oder organischen Säuren, wie Amei- 50
seasäure, Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, ie *
Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure, Malon- w ATO_c>jni_prn_nrH
säur^BÄfHSteißsäureMaleinsäureFumarsäureÄpfel- s y ϋ 3
säure, Weinsäure, Zitronensäure, Ascorbinsäure, Hy- 8,4 g Z-Arg~(NOa)-Pro-OCH3 werden unter Er-
droxymaleinsäure, Dihydroxymaleinsäure, Benzoe- 55 wärmen in 27 ml Eisessig in der Wärme gelöst und bei
Säure, Phenylessigsäure, 4-Amino-benzoesäure, 4-Hy- Zimmertemperatur mit 27 ml ~ 4n-Bromwasserstoffdroxy-benzoe^ur^AnthranilsäurejZimtsäure.Mandel-Eisessig-Lösung
versetzt. Nach einer Stunde dampft säure, Salicylsäure, 4-Amino-salicylsäure, 2-Phenoxy- man im Vakuum bei 40° auf ein kleines Volumen ein
beozoe&äure, 2-Acetoxy-beazoesäure, Methansulfon- und fällt das Decarbobenzoxylylierungsprodukt mit
säure, ÄthansulfoQSäure, Hydroxyäthansulfonsäure, 60 viel absolutem Äther aus. Das anfänglich klebrige
Benzolsölfonsäure, p-Toluokulfonsäure, Naphthalin- Produkt wird so lange mit absolutem Äther behandelt,
sitffansäure oder SmIfauilsämre. bis ein feines Pulver resultiert. Zur weiteren Reinigung
Die verf&brensgeHiäß erhaltenen Tetrakosapeptide wird das Dihydrobromid des Dipeptidesters noch
könaaen in Form von pharmazeutischen Präparaten einmal aus Methanol—Äther umgefällt. Die leicht gelb-VerweaduHg
flodea. 65 gefärbte Verbindung nimmt man in 4 ml Wasser auf,
Die Erfin4unf wird in den nachfolgenden Beispielen gibt dazu 150 ml Chloroform und kühlt das Gemisch
besehriebea. Die Temperatureo sind in Celsiusgraden im Eisbad auf 0° ab. Unter intensivem Umschwenken
angegeben, gibt man in Portionen so lange festes Kaliumcarbonat
5 6
dazu, bis alles Wasser verbraucht ist und sich das Stufe 6
Kaliumcarbonat fest abscheidet. Das Kaliumcarbonat /r,/-i/-\ τ /r>^/-<\ α /xm \ α m« ν
wird noch ein zweites Mal mit frischem Chloroform T-Lys(BOQ-Lys^OQ-/tfg(NOa)-ArgCNO>)-
extrahiert, die vereinigten Chloroformextrakte über ° ^^"s
wasserfreiem Kaliumcarbonat getrocknet und durch 5 1,07 g (2,01 mMol) H-Arg(NO2)-Arg(NQa)-Proeine
G4-Glasfilternutsche durch wenig Cellit filtriert. OCH3 in 16,5 ml Dimethylformamid—Acetonitril 1: 1
Nach dem Verdampfen des Chloroforms bei 40° werden auf —10° gekühlt. Unter intensivem Rühren
erhält man 5,5 g (90% der Theorie) Nitro-L-arginyl- trägt man rasch 1,44 g T-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OH,
prolin-methylester. Die Verbindung wird ohne weitere hergestelltdurchKondensationvonPZ-Lys(BOC)-OH
Umsetzung weiterverarbeitet. io mit H-LyS(BOC)-OCH3, hydrogenolytische Ab
spaltung der PZ-Gruppe, Tritylierung des geschützten Dipeptidesters und Abspaltung der Estergruppe mit
u ln-Natronlauge in Dioxan, in die Lösung ein, verdünnt
7-ArerNO ϊ-ArefNO ϊ-Pro-OCH 1^ 1Omi vorgekühltem Acetonitril und gibt nach
Z Ar8(NO3) Ar8(NO2) Pro OCH3 ^ 10 Minuten 456 mg (2,2 mMol) Dicyclohexylcarbodi-
8,34 g (25,2 mMol) H-ATg(NO2) -Pro -OCH3 in imid in 5 ml eiskaltem Acetonitril dazu. Nach
25 ml frisch destilliertem Dimethylformamid werden 20stündiger Reaktionszeit bei 0° filtriert man vom
mit der Lösung von 8,92 g (25,2 mMol) Z-Arg(NO2) - Harnstoff ab und dampft das Lösungsmittel im Vakuum
OH vereinigt, mit 50 ml Acetonitril verdünnt und im bei 40° ab. Den nicht umgesetzten Tripeptidester fällt
Kältebad auf —10° gekühlt. Nach 30minutigem 20 man mit viel Essigester aus, dampft hierauf die Essig-Stehen
bei dieser Temperatur gibt man unter Rühren esterlösung zur Trockne ein und nimmt den Ver-5,71
g (27,7 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid, gelöst in dampfungsrückstand in wenig Aceton auf. Nach dem
12,5 ml eiskaltem Acetonitril, dazu und läßt 22 Stunden Filtrieren durch Watte wird der N-Trityl-pentapeptidbei
0° reagieren. Der Harnstoff wird abfiltriert und das ester mit viel Äther ausgefällt.
Lösungsmittel im Vakuum bis auf ein kleines Volumen 35 Eine mit wasserfreier Trifluoressigsäure gespaltene
eingedampft. Den sirupösen Rückstand nimmt man in Probe des Trityl-pentapeptidesters zeigt im Papier-Chloroform
auf, wäscht dreimal mit 10 mil n-Salzsäure, chromatogramm im System 49 neben dem Pentazweimal
mit 10 ml Wasser und so lange mit In-Na- peptidmethylester Rf 0,29 noch sehr wenig der beiden
triumbicarbonat und 1 n-Sodalösung, bis beim An- Ausgangsmaterialien. (Dipeptid-H-Lys-Lys-OH
säuern der alkalischen Auszüge keine Fällung bzw. 30 [Rf = 0,12] und Tripeptidester Nitro-arginyl-nitro-Trübung
mehr nachweisbar ist. Zum Schluß werden arginyl-prolinmethylester [Rf = 0,53].) die Chloroformauszüge mit Wasser neutral gewaschen Zw Analyse werden 200 mg nach Craig zwischen
und über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Ver- 80% Methanol und Chloroform—Tetrachlorkohlendampfen
des Lösungsmittels erhält man 10,4 g (62%) stoff 1: 1 über 100 Stufen multiplikativ verteilt. Die
rohen Carbobenzoxy-tripeptidester. 35 Hauptmenge der Substanz (180 mg) befindet sich in
Eine Probe des Rohproduktes mit 2n-Bromwasser- den Elementen 16 bis 28. Diese werden vereinigt und
stoff-Eisessig-Lösung, 1 Stunde bei Zimmertemperatur noch einmal aus Aceton—Äther umgefällt. F. 134
gespalten, zeigt im Papierchromatogramm in den bis 136°; [λ]|5 = —41,2 ± 0,4° (c = 2,709 in Me-Systemen
54 und 49 neben dem Tripeptid noch weitere thanol). UV-Spektrum: lmax 271 ΐημ. (ε = 32 500) in
Mengen von Nitroarginin und einem anderen Neben- 40 Feinsprit,
produkt. Zur Reinigung werden 4,6 g Rohprodukt aus Stufe 7
produkt. Zur Reinigung werden 4,6 g Rohprodukt aus Stufe 7
140 ml n-Butanol kristallisiert. Ausbeute: 2,2 g reinen , „ , . . , . , ΤΛ.
Carbobenzoxy-tripeptidester, F. = 120° (Zersetzung); H-Lys(BOQ-LysCBOQ-Arg(NO,)-ArgCNO,)-
[«]» = -43,9° ± 1 ° (c = 1,032 in Methanol). PrO-OCH3
Im UV-Spektrum zeigt der Carbobenzoxy-tripeptid- 45 1,46 g (1,19 mMol) Na-Trityl-pentapeptidmethylester
bei 271 ιημ das für Nitroarginin charakteristische ester (Beispiel 6) werden in 50 ml 75%iger Essigsäure
Maximum (ε = 32 200). während 45 Minuten bei 30° gespalten, dann bei 30°
die Essigsäure im Hochvakuum abgedampft und der
Verdampfungsrückstand zwischen l%iger Essigsäure
btute ->
5o und Äther verteilt. Nach dem Verdampfen der Äther-
H-ArgiNO^-ArgiNO^-Pro-OCHs ^ung gewinnt man in quantitativer Ausbeute das
öv 2/ &V. 2j 3 Tnphenylcarbinol. Die Essigsaurelösung wird ebenfalls
2,19 g (3,3 mMol) Z-ATg(NO2)-Arg(NO2)-Pro- im Hochvakuum bei 40° verdampft und der Rückstand
OCH3 werden in 13,2 ml 2U-BrOmWaSSCrStOfTSaUTe-EiS- im Scheidetrichter zwischen n-Butanol und N-Sodaessig-Lösung
während 1 Stunde bei Zimmertemperatur 55 lösung verteilt. Der pH-Wert der wäßrigen Phase muß
decarbobenzoxyliert. Nach dem Verdampfen der pH 8,5 sein. Die Butanolauszüge wäscht man mit
überschüssigen Säure fällt man das Decarbobenz- Wasser neutral und trocknet sie über Natriumsulfat,
oxylierungsprodukt mit viel absolutem Äther aus. Das Ausbeute: 1,03 g (88%ig)·
Rohprodukt nimmt man in 2 ml Wasser auf, extrahiert Die Verbindung wird ohne weitere Reinigung direkt
zweimal mit frischem Essigester, wäscht die Essigester- 60 weiterverarbeitet,
phasen noch einmal mit Wasser und gibt die ver- Stufe 8
einigten wäßrigen Lösungen auf eine Ionenaustauscher- _,„ T /n^„N „ ,r , „,
säule Merck II. Den freien Tripeptidester eluiert man r^mSP^^w*^
mit 200 ml Wasser und dampft das Wasser im Vakuum Lys(BOC)-Arg(NO2)-Arg(NO2)-
bei 40° ab. Ausbeute: 1,3 g (74% der Theorie). 65 900 mg (1,2 mMol) PZ-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-
Im Papierchromatogramm in den Systemen 43,49 hydrazid werden in 10 ml Dimethylformamid auf
und 54 gibt der freie Tripeptidester mit Ninhydrin nur —10° gekühlt, dann läßt man langsam 4 ml In-SaIzje
einen positiven Fleck. Rf 43/0,42 ,-49/0,67 und 54/0,49. säure einlaufen und tropft anschließend bei —10
i 196 666
7 8
unter gutem Rühren 1,4 ml eiskalte ln-Natriumnitrit- Vorgängig werden 4 g (17,2 mMol) N -BOC-Lysin
lösung dazu. Nach 30 Sekunden beginnt sich das Azid unter Rühren langsam in 32 ml Wasser, das 2,45 ml
als klebrige Verbindung abzuscheiden. Man läßt noch (17,2 mMol) N-Triäthylamin enthält, eingetragen. Die
3 Minuten bei—10° reagieren und versetzt hierauf das letzten Portionen des Ne-BOC-Lysins lösen sich
Reaktionsgemisch mit 150 ml Eiswasser. Das klebrige 5 nicht mehr gut. Beim Abkühlen mit Eis scheidet sich
schlecht filtrierbare Azid wird mit eiskaltem Essigester wieder wenig feste Substanz aus der wäßrigen Lösung
extrahiert und die Essigesterphasen mit Wasser neutral aus. Diese Lösung gibt man rasch unter intensivem
gewaschen (dreimal), dann in der Kälte über Ma- Rühren und Kühlen zu der frisch zubereiteten Lösung
gnesiumsulfat getrocknet und durch eine kalte G4-Glas- des gemischten Anhydrids und läßt 30 Minuten bei
nutsche in die eisgekühlte Lösung von 1,03 g(~ ImMoI) ioZimmertemperatur reagieren. Die Reaktionslösung
H-LysiBOQ-LysiBOQ-ArgiNCy-ArgiNCy-Pro- wird im Vakuum bei 40° auf ein kleines Volumen ein-OCHsfiltriert.Manläßt22Stundenbei0°und3Stunden
gedampft, unter Eiskühlung mit 100ml Wasser und bei 30° reagieren. Die Reaktionslösung wird mit 40 ml 10%iger Zitronensäurelösung versetzt. Die
Wasser (40 ml), viermal mit 10 ml l%iger Essigsäure- schmierige Ausfällung wird beim Zerkratzen mit Äther
lösung, fünfmal mit 10 ml 1 n-Natriumbicarbonat- 15 fest. Das rohe PZ-Valyl-N8 -BOC-Lysin wird ablösung
und zum Schluß mit Wasser und gesättigter filtriert, mit viel Wasser und Äther gewaschen und bei
Kochsalzlösung gewaschen. Beim Eindampfen der 50° im Hochvakuum getrocknet. Ausbeute: 4,41 g;
getrockneten Lösung fällt das Nonapeptidderivat aus. F. 167 bis 169° (Sintern 165°).
Ausbeute: 1,70 g Rohprodukt. Die Ätherphase wird abgetrennt und über Natrium-
Zur weiteren Reinigung nimmt man 1,52 g Roh- ao sulfat getrocknet. Beim Abdampfen des Äthers scheiden
produkt in wenig Chloroform auf und filtriert durch sichnochweiterel,07gPZ-Dipeptidaus.F. 167 bis 169°.
eine Säule von 45 g Siükagel. Einmaliges Umfallen Die Gesamtausbeute beträgt 5,48 g (70% der
des Eluates aus 10 ml Chloroform mit Äther ergibt Theorie). Die Analysenfraktion schmilzt nach ein-1,06
g PZ-Nonapeptidmethylester. F. 134 bis 140° (Zer- maligem Kristallisieren aus Essigester bei 167 bis 169°.
setzung). as Das UV-Spektrum in Feinsprit zeigt bei Xmax 230 πιμ
Im Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel G.; ε = 13400 und Xmax 322 πιμ ε = 23000.
Merck) im System Dioxan—Wasser = 9:1 ist nur
eine Substanz mit dem Rf-Wert 0,75 nachweisbar. In Stufe 11
den Systemen Chloroform—Aceton 7: 3 und Benzol— .. _ntR
Aceton 1: 1 bleibt die Verbindung am Start. Die 3o λ vai iyr rro uxbu
Substanz schmilzt, aus Acetonitril kristallisiert, bei Zu 11,25 g (27,4 mMol) Carbobenzoxy-valyl-tyrosin
136 bis 138°; im UV-Spektrum in Äthanol weist sie (deutsche Auslegeschrift 1 125 942) in 100 ml frisch
Maxima auf bei λ = 272ΐημ (ε == 26600) und destilliertem Acetonitril gibt man die Lösung von
λ = 320 ηιμ (ε = 22400). 4,65 g (27,4 mMol) Prolin-tert.-butylester in 25 ml
35 Acetonitril und kühlt im Eisbad auf 0° ab. Dann gibt
Stufe 9 man die Lösung von 6,21 g Dicyclohexylcarbodiimid
in 10 ml kaltem Acetonitril dazu und läßt 15 Stunden
PZ-LyS(BOC)-PrO-VaI-GIy-LyS(BOC)- bei 0<>
reagieren. Der auskristallisierte Harnstoff wird
LyS(BOC)-A^(NO4)- ATg(NO2)-Pro-OH abfiltriert (90 % der Theorie) und die Reaktionslösung
1,06 g (0,62 mMol) PZ-Nonapeptidester (Stufe 8) 40 mit ImI Eisessig versetzt. Nach 15 Minuten dampft
in 6ml 75%igem Dioxan werden mit 1,24ml 1,95 n-Na- man das Acetonitril im Vakuum ab, nimmt den Ver-
tronlauge während 15 Minuten bei Zimmertemperatur dampfungsrückstand in Essigester auf und filtriert
verseift. Anschließend gießt man die Reaktionslösung nochmals vom ausgeschiedenen Harnstoff ab. Die
in 110 ml Eiswasser, die 2,5 mil η-Salzsäure enthalten, Essigesterlösung wird zweimal mit 10 ml eiskalter
und filtriert die flockige Ausfällung durch eine G3-Glas- 45 2n-Salzsäure extrahiert, anschließend so lange mit
fritte. Den Niederschlag wäscht man gut mit Wasser 2n-Sodalösung — bis angesäuerte Proben keine Aus-
und trocknet ihn über Phosphorpentoxyd im Hoch- fällung mehr anzeigen — und zum Schluß mit Wasser
vakuum. Ausbeute: 970 mg amorphes Produkt. neutral gewaschen. Die Essigesterextrakte trocknet
Rf = 0,52 im Dünnschichtchromatogramm für Di- man über Natriumsulf at und dampft das Lösungsmittel
oxan—Wasser = 9:1. 5° unter vermindertem Druck ab. Ausbeute: 14,1 g
200 mg im System Methanol—Wasser—Chloro- (88 % der Theorie) amorphen Carbobenzoxy-tripeptid-
form—Tetrachlorkohlenstoff =8:2:5:5, über 121 ester.
Stufen verteilt, geben 162 mg reines Peptidderivat Der Carbobenzoxy-tripeptidester ist in den meisten
K = 0,65. organischen Lösungsmitteln, außer Äther, Petroläther
UV-Spektrum: Xmax 320 πψ. (ε = 21700) und 271 ηιμ 55 und Benzol, gut löslich. Er wird ohne weitere Reinigung
(ε = 37200) in Feinsprit. direkt weiter verarbeitet.
Die Substanz schmilzt, aus Acetonitril kristallisiert,
bei 140 bis 145° (Zersetzung). Stufe 12
bei 140 bis 145° (Zersetzung). Stufe 12
Stufe 10 60 H-Val-Tyr-Pro-OtBu
P7 Va1 TWROO OH 14,13 g (24,9 mMol) Z-Val-Tyr-Pro-OtBu werden
VL-Val-Lys(BUC)-OH in ^50 mi 90%igem Methanol, enthaltend 4,5 ml Eis-
4,75 g (13,4 mMol) PZ-Valin in 65 ml absolutem essig, in Gegenwart von 2 g 10 %igem Pd-Kohlekataly-
Dioxan werden in Eiswasser so gekühlt, daß ein Teil satorhydrogenolytisch gespalten. Das gebildete Kohlendes
Dioxans fest ist. Dann man 3,45 ml (14,4 mMol) 65 dioxyd wird mit Kalilauge in einer zweiten, dazwischen-
N-Tributylamin und nach weiteren 5 Minuten 1,38 ml geschalteten Hydrierente absorbiert. Nach 2 Stunden
(13,4 mMol) Chlorameisensäureäthylester dazu und ist die Wasserstoffaufnahme beendet. Die vom Kata-
läßt 15 Minuten unter Kühlung reagieren. lysator befreite Lösung dampft man im Vakuum bei
9 10
40° zur Trockne ein und verteilt den Verdampfungs- In den Systemen 54 und 49 wandert die Verbindung
rückstand zwischen 200 ml Essigester und zweimal mit der Lösungsmittelfront.
20 ml eiskalter 2n-Sodalösung. Die Sodalösungen Im Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel G) im
werden nochmals mit frischem Essigester extrahiert, System Dioxan—Wasser = 9: 1 ist der Rf-Wert 0,65.
die Essigesterphasen mit Wasser neutral gewaschen 5
und über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels im Vakuum gewinnt man ature 15 7,69 g (71 % der Theorie) freien Tripeptidester. PZ-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Im Papierchromatogramm in den Systemen 43, 45 Lys(BOC)-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Pro-Val- und 54 wandert der Tnpeptidester mit der Losungs- io LvsfBOO-Val-Tvr-Pro-OtBu mittelfront und gibt mit Ninhydrin und Paulyreagens
und über Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Verdampfen des Lösungsmittels im Vakuum gewinnt man ature 15 7,69 g (71 % der Theorie) freien Tripeptidester. PZ-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Im Papierchromatogramm in den Systemen 43, 45 Lys(BOC)-Arg(NO2)-Arg(NO2)-Pro-Val- und 54 wandert der Tnpeptidester mit der Losungs- io LvsfBOO-Val-Tvr-Pro-OtBu mittelfront und gibt mit Ninhydrin und Paulyreagens
je ein Fleck. 276 mg (0,16 mMol) PZ-Lys-Pro-Val-Gly-
Stufe 13 Lys(BOC) - Lys(BOC) - ATg(NO2) - Arg(NO2) - Pro -
_,„ ΛΤ , T ,„„„, ,, , „ ,.. „iT>
OCH3 (über Phosphorpentoxyd im Hochvakuum bei
PZ-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu ij$ 80oC g^trocknet) ^erc£n im 'Gemisch 1 ^ absolutes
Die Lösung von 10,36 g (17,7 mMol) PZ-VaI- Dimethylformamid, 2 ml absoluter Tetrahydrofuran
Lys(BOC)-OH und 7,69 g (17,7 mMol) H-Val-Tyr- gelöst und im Eiskochsalz-Kältebad auf —10° gekühlt.
Pro-OtBu in 140 ml frisch destilliertem Dimethyl- Dann gibt man 0,16 mMol Triäthylamin in 1,6 ml
formamid wird bei 0° mit 4,2 g Dicyclohexylcarbodi- Tetrahydrofuran dazu und nach weiteren 5 Minuten
imid (15%iger Überschuß) in 12 ml Dimethylform- 20 0,16 mMol Chlorameisensäur-eisobutylester in 1,6 ml
amid versetzt und 2 Tage bei 0° belassen. Die vom absolutem Tetrahydrofuran. Man läßt 15 Minuten im
Harnstoff befreite Lösung läßt man noch weitere Kältebad reagieren und gibt dann 140 mg H-VaI-30
Minuten mit 0,5 ml Eisessig stehen, dampft das Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu, gelöst in 2 ml abLösungsmittel
im Vakuum bis auf ein kleines Volumen solutem Tetrahydrofuran, dazu.- Man rührt noch
ab und nimmt den sirupösen Rückstand in viel Essig- 25 15 Minuten im Eisbad und anschließend 1 Stunde
ester auf. Die Essigesterphase wird viermal mit 25 ml bei Zimmertemperatur, dann dämpft man das ■ Lö-O,2n-Ammoniumhydroxydlösung,
zweimal mit 30 ml sungsmittel im Vakuum bei 40° ab und fällt das
Wasser, zweimal mit 30 ml eiskalter 10%iger Zitronen- Reaktionsprodukt mit viel Äther aus. Das getrocknete
säurelösung und zum Schluß mit Wasser neutral Rohprodukt (395 mg) wird ίή; 4 ml alkoholfreiem
gewaschen. Nach dem Trocknen mit Natriumsulfat 30 Chloroform auf eine Aluminiumoxydsäule (Akti-
und Verdampfen des Lösungsmittels erhält man 17 g vitätlll; 40 g) gegeben und mit 100 ml Chloroform
rohes amorphes Reaktionsprodukt. Zur weiteren durchgewaschen. Die gelbe Zone mit dem Peptid-Reinigung
gibt man das Rohprodukt, in 100 ml derivat wandert dabei nur langsam. Anschließend
Chloroform gelöst, auf eine mit 10%igem Wasser wird mit 80 ml Chloroform—Methanol = 95: 5
desaktivierte Silikagelsäule (570g Durchmesser; 5,6cm, 35 durchgewaschen. Dabei lassen sich 290 mg chromatoh
= 41 cm). Mit Chloroform eluiert, wandert die graphisch einheitliches Produkt eluieren. Rf = 0,75,
orangerote Zone nur langsam, während mit Chloro- Dioxan—Wasser = 9:1 im Dünnschichtchromatoform—Essigester
2: 1 sich zwei Fraktionen aus- gramm.
waschen lassen. Die Substanz schmilzt, aus Acetonitril kristallisiert,
waschen lassen. Die Substanz schmilzt, aus Acetonitril kristallisiert,
Die erste Fraktion, 4,8 g, ist noch stark mitDicyclo- 40 bei 160 bis 165°. Das UV-Spektrum in Äthanol weist
hexylharnstoff und PZ-Dipeptid verunreinigt und läßt Maxima bei Λ = 272ΐημ (ε = 36800) und 319 ΐημ
sich aus Acetonitril nur in schlechter Ausbeute (ε = 20400) auf.
kristallisieren, während die zweite Fraktion (7,2 g) . ·
aus 200 ml Acetonitril als gallertiges Produkt wieder btute 16
ausfällt, Ausbeute: 5,1 g PZ-Pentapeptidester, F. 154 45 H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-
«· * 1 , , · ,·,-,· · Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-
Die Analysenfraktion schmilzt nach einer weiteren Val-Tyr-Pro-OtBu 3 CH COOH
Kristallisation bei 157 bis 159°. ' " 3
Im UV-Spektrum (in Feinsprit aufgenommen) 320mgPZ-Tetradecapeptid-tert.-butylester(Stufel4)
zeigt die Verbindung zwei Maxima bei 227 und 322 ΐημ 5° werden in 6 ml 90%iger Essigsäure und in Gegenwart
mit den ε-Werten 20700 und 21100. von 100 mg 10°/0igeni Palladiumkohlekatalysator wäh-
Im Dünnschichtchromatogramm (Kieselgel G; rend 5 Stunden bei 5 at mit Wasserstoff geschüttelt.
Merck) sind die Rf-Werte: 0,23 (Chloroform—Aceton Anschließend füllt man die Reaktionslösung in eine
= 95: 5) und 0,60 (Benzol—Aceton = 1:1). Hydrierente, und schüttelt noch weitere 17 Stunden
55 mit 100 mg frischem Pd-Katalysator unter Normal-Stufe
14 bedingungen weiter. Zur Absorption des gebildeten
Kohlendioxyds wird noch eine zweite Hydrierente
H-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu mit Kalilauge dazwischengeschaltet. Den abfiltrierten
1,4 g PZ-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu werden Katalysator wäscht man gut mit 90%iger Essigsäure
in 100 ml Methanol in Gegenwart von 400 mg 60 und Methanol und dampft das Lösungsmittel im
10%igenPalladiumkohlekatalysatorwährend 6 Stunden Vakuum zur Trockne ein. Nach dem Trocknen erhält
bei 5 at mit Wasserstoff im Autoklav geschüttelt. man 220 mg eines weißen amorphen Pulvers.
Man filtriert vom Katalysator ab, wäscht ihn wiederholt Das UV-Spektrum zeigt in Feinsprit bei 278 ΐημ
mit Methanol und dampft das Lösungsmittel im das für Tyrosin charakteristische Maximum (ε = 1500).
Vakuum ab. Der Verdampfungsrückstand wird mit 65 Im Papierchromatogramm in den Systemen 49, 50
viel Äther zerkratzt und im Hochvakuum getrocknet. und 54 wandert die Verbindung mit der Lösungsmittel-
Es resultiert ein feines amorphes Pulver. Ausbeute: wand und gibt positive Reaktionen mit Ninhydrin,
mg. Pauly- und Sakaguchi-Reagens.
Stufe 17
BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-
Val-Tyr-Pro-OtBu
210 mg Tetradekapeptid-tert.-butylester (Stufe 16)
werden bei 0° in 10 ml Y^n-Salzsäure gelöst und die
resultierende Lösung im Hochvakuum lyophil getrocknet. Den feinen weißen Rückstand trocknet man
noch 2 Stunden bei 50° im Hochvakuum über Phosphorpentoxyd. Gleichzeitig werden 160 mg
(0,11 mMol) BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH,
hergestellt durch Kondensation von tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl- 1S
L-serin-azid mit i^Methionyl-y-tert.-butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin
oder durch Kondensation von tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-azid
mit y-lert.-Butyl-L-glutamyl-L-histidyl-L-phenyklanyl-L-arginylao
L-tryptophyl-glycin, in der Wärme in 1 ml frisch
destilliertem Dimethylformamid gelöst, wieder auf Zimmertemperatur abgekühlt und zum Trihydrochlorid
des Tetradekapeptids gegeben. Man verdünnt noch mit weiteren 2,5 ml Dimethylformamid und a5
erhält nach 10 bis 15 Minuten eine klare Lösung.
Nach 2stündigem Stehen im Eisbad gibt man 42 mg (0,2 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid in 0,6 ml eiskaltem
Acetonitril dazu, läßt 13 Stunden bei 0° und 48 Stunden bei Zimmertemperatur reagieren. Das rohe
Reaktionsprodukt wird dann mit viel Essigester ausgefällt und im Hochvakuum bei 40° getrocknet.
Rohausbeute: 330 mg.
Stufe 18
H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH,
CH3COOH
35
40
100 mg rohes geschütztes Tetrakosapeptid (Stufe 17), das noch mit Ausgangspeptiden verunreinigt ist,
werden 1 Stunde bei Zimmertemperatur mit 2 ml wasserfreier Trifiuoressigsäure behandelt. Die überschüssige
Säure wird bei Zimmertemperatur im Vakuum abgedampft und der resultierende Rückstand
mit viel absolutem Äther zerkratzt. Das amorphe Spaltprodukt wird in 4,5 ml O,5n-Essigsäure einer
kontinuierlichen Hochspannungselektrophorese unterworfen (700VoIt; 3OmA) Auftragsgeschwindigkeit:
1 ml/h. Total werden 23 Fraktionen aufgefangen. Die Fraktionen 1 bis 9, 10, 12 und 13, 14 und 15, 16 und
17 bis 23 werden eingedampft. Die elektrophoretische Analyse zeigt, daß in den Fraktionen 12 bis 15 die
Hauptmenge des gewünschten Tetrakosapeptides enthalten ist Zur weiteren Reinigung gibt man die
vereinigten Fraktionen 12 bis 15, in 2 ml 1J100XaOIaXeIa
Ammoniumacetatpuffer gelöst, auf eine Carboxymethylcellulosesäule (Durchmesser lern; 1,16cm;
2,5 g). — Die Carboxymethylcellulose wird mit 100 ml V100molarem Ammoniumacetatpuffer in die Säule
eingefüllt und noch mit weiteren 50 ml des gleichen Puffers durchgewaschen. — Das Peptid wird dann mit
Ammoniumacetatpuffer (pH = 5,4) steigender Molarität (0,1 bis 0,7 m) von der Säule eluiert.
Es werden Fraktionen von 10 ml Volumen mit einem automatischen Fraktionensammler aufgefangen. Nach
15 Fraktionen ist das Peptid wieder quantitativ von der Säule getrennt. Man erhält total 15 Fraktionen.
Die Gläschen 10 bis 13 enthalten elektrophoretisch reines Tetrakosapeptid. Der zurückgelegte Weg nach
einer Stunde bei 3000 Volt und pH 1,9 beträgt 13 bis cm.
Im In-vitro-Test nach S äff ran und Schally
zeigt das erhaltene Peptid eine starke ACTH-Aktivität.
Eine Lösung von 5,1mg (~1,5 · 10~e Mol) des
obigen Tetrakosapeptids in 2,0 ml 0,1 n-Kaliumchloridlösung
wird mit 0,020 ml 0,1 η-Salzsäure und 0,020 ml Ojlmolarer Zinksulfatlösung versetzt. Sie enthält also:
HCl: 2 · 10-e Mol, Zn+2 2 · 10-" Mol; Tetrakosapeptid
~1,5 · 10-e Mol.
Die Lösung wird mit Ο,ΐη-Natronlauge titriert.
Die Titrationskurve zeigt einen Zinkkomplex mit pK = 8,35 an. Bei und oberhalb vom pH-Wert 8,35
beginnt der schwerlösliche Komplex in sehr feinverteilter, gelartiger Form auszufallen. Er wird bei
pH 9,5 abzentrifugiert und mit Wasser gewaschen. Der Komplex besitzt eine starke ACTH-Aktivität.
Claims (6)
1. Verfahren zur Herstellung neuer adrenocorticotrop wirksamer Tetracosapeptide der Formel
L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutaminyl-(oderglutamyl)-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycyl-L-lysyl-L-prolyl-L
- valyl-glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin,
ihrer Salze und Schwermetallkomplexe, dadurch gekennzeichnet, daß man zweckmäßigerweise unter
Schutz der an der Reaktion nicht beteiligten Amino- und Carboxylgruppen,
a) das Decapeptid L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutaminyl-(oderglutamyl)-i.-histidyl
L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl-glycin
oder ein Derivat dieses Decapeptids mit aktivierter endständiger Carboxylgruppe und
das Tetradecapeptid L-Lysyl-L-prolyl-L-valylglycyl
-L- lysyl - l - lysyl - l - arginyl -L- arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin
oder ein Derivat dieses Tetradecapeptids mit aktivierter «-Aminogruppe oder
b) das Tetrapeptid L-Seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin
oder ein Derivat dieses Tetrapeptide mit aktivierter Carboxylgruppe und das Eikosapeptid r-Glutaminyl-(oder Glutamyl)-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophyl
- glycyl - l - lysyl - l - prolyl - l - valyl - glycyl-L-lysyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolin
oder ein Derivat dieses Eikosapeptids mit aktivierter «-Aminogruppe
kondensiert, nach Beendigung der Kondensation die geschützten Aminogruppen und Carboxylgruppen
in Freiheit setzt und, wenn erwünscht, das erhaltene Tetracosapeptid in seine Salze oder
Schwermetallkomplexe überführt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die ε-Aminogruppen des Lysins
durch den tert-Butyloxycarbonylrest schützt.
3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionyl-L-glutamyl-(y-tert.-butylester)-L-histidyl-L-phenylalanyl-L-argi-
nyl-L-tryptophyl-glycin mit einem Νε-tert-Butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-NMert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-N^tert-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-arginyl-L-arginyl-L-prolyl-L-valyl-N8-tert.
- butyloxycarbonyl - l - lysyl - l - valyl -L- tyrosyl-L-prolinester
kondensiert und die Aminogruppen und Carboxylgruppen in Freiheit setzt.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet,
daß man die Kondensation in Gegenwart eines Carbodiimids ausführt.
5. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man das Tetrapeptid tert.-Butyloxycarbonyl-L-seryl-L-tyrosyl-L-seryl-L-methionin-azidmiteinemL-Glutamyl-(tert.-butylester)-
IO
L-histidyl-L-phenylalanyl-L-arginyl-L-tryptophylglycyl-N'-tert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-prolyl-L-valyl-glycyl-Ne-tert.-butyloxycarbonyI-L-lysyl-NMert.-butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-arginyl-i.-arginyl-L
- prolyl- L - valyl - N8 - tert. - butyloxycarbonyl-L-lysyl-L-valyl-L-tyrosyl-L-prolinester
kondensiert und die Aminogruppen und Carboxylgruppen in Freiheit setzt.
6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man den Tetrakosapeptid in einen
Zinkkomplex überführt.
In Betracht gezogene Druckschriften:
HeIv. Chim. Acta 44 (1961), S. 1136.
HeIv. Chim. Acta 44 (1961), S. 1136.
Bei der Bekanntmachung der Anmeldung sind zwei Prioritätsbelege ausgelegt worden.
Hierzu 2 Blatt Formeltabellen
509 600/410 7.65 © Bundesdruckerei Berlin
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CH220863 | 1963-02-21 | ||
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