DE1518349A1

DE1518349A1 - Verfahren zur Herstellung eledoisinwirksamer Verbindungen

Info

Publication number: DE1518349A1
Application number: DE19651518349
Authority: DE
Inventors: Schroeder Dr Eberhard; Zoellner Dr Georg; Luebke Dr Klaus
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1965-09-21
Filing date: 1965-09-21
Publication date: 1969-08-14
Also published as: DE1518349C3; GB1139333A; US3423390A; DE1518349B2; NL6605702A

Description

SfHFR I NG Afi """' wlf» 15. September 1965

vAjlUjiMlNU J IU MOUwitr. 170472-Fernruf:«OOH

'PATENTABTEILUNG , H.uj.nicbluS Nr.

Dr,WK/br.Mu/Na/P.885* ·*'■ ·

Verfahren zur Herstellung eledoisinwirksamer

Verbindungen

Aus dem französischen Patent No. Ϊ.;529.84Ο ist bekannt, daß das Heptapeptid .

L-Asparagyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methionimamid, . "

dessen freie Carboxylgruppe am Asparagylrest auch durch Amidbildung abgewandelt sein kann, eine starke, insbesondere erweiternde Wirkung auf das Blutgefäßsystem besitzt.

Im Hauptpatent (Patentanmeldung Sch 32 860 IV b/l2 qu)

wird die Synthese von Peptiden der allgemeinen Formel

R-L-Alanyl-L-phenylalanyl-L-a-aminoacyl-glycyl-L-leucyl-L- , methioninamid _Λ

beschrieben, in der R für ein Wasserstoffatom, den L-Asparaginyl- oder L-Glutaminyl- und a-Aminoacyl für den Isoleucyl- oder Valylrest steht, während das Zusatzpatent ... (Patentanmeldung Sch 34 086 IVb/12 qu) lehrt, daß R auch den Glycylrest bedeuten kann. Die Verbindungen der allgemeinen Formel zeigen eine dem Eledoisin, einem vor allem blutdrucksenkenden Uhdekapeptid, vergleichbare biologische Aktivität.

— 2 —

9098 33/ USg

3AD ORIGINAL

iCHERINGAG 1518349 -2- . p. 885 vom 15/9/196$

In einem weiteren Zusatzpatent (Sch 34 464 IV b/12 ςυ) wird, gezeigt,-daß der Rost R eine beliebige, natürlich«,nicht aey-■lierte Aminosäure sein kann, ohne dal die El'edoisinwirkur.g der . Peptide abnimmt.

Es wurde nun gefunden, da3 nicht nur die Verbindungen, in denen P. für einen natürlichen, nicht acylierten Aminoeäurerest steht, eine eledoisinartige Wirkung besitzen, sondern überraschenderweise in verstärktem Maße Jene Verbindungen, in denen H den *- Aaieisensäurerest oder einen beliebigen, funktionell substituierten Rest einer organischen Säure'bedeutet, wie z.3. Aoylresisr.it einer zusätzlichen Carbonyl-, Carboxyl-, Halogen? Hydroxyl- oder nicht α-ständigen Aminogruppe.

R kann auch neben den genannten funktioneilen Substituenten zusätzlich in «»Stellung zur Carboxylgruppe tine ccylierte beispielsweise acetylierte Aminogruppe aufweisen, z.B. R » Säurerest des a-Monoacetyllysins.

Die folgende Tabelle I gibt eine Übersicht Über die biologische Aktivität der Verbindungen R-Ala-Phe-Ileu-Oly-L*u-Ket-KK₂5

' T a b e 1 le I

R Relative Senkung de* ' '

Blutdruckes am narkotisierten Hund bezogen auf Eledoisin&l Bradykinine

Forrnyl	ca.	2	20
g\|Chloracetyl		2	20
Ui ^L-a-Hydroxyisovaleryl		2	20
** , - ■ ■ cn i -A^i ;-.ocapronyl m	ca. *,	2,5 ·	ca. 25

Tabelle I

R Relative Senkung des

Blutdruckes am narkotisierten

Hund bezogen auf 2],edoisin»l Bradykinin S

a-Meno&cefcyl-lysyl 3,5

Die höhere Wirkung der erfindungsgeniäßen Verbindungen ist insofern . unerwartet, da sie sich nicht durch den verhinderten enzymatischem ■ -Abbau nit Aminopeρticasen erklären IMSt. Dies beweist die etwa nur . dem Eledoisin entsprechende Wirkung dee Diaeetyl-lyayl-derivates " und die niedrige Aktivität der C&pronyl- und. Caprinoyl-Verbindungen (JO % bzw. 10 % des Eledoisins), die ebenfalls nicht mit Aninopeptl dasen abbaubar sind.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeichnen eich auch in vielen Fällen gegenüber _dea bisher'-^kannten Produkten durch ihre leichtere Herstellbarkeit aus, beispielsweise, jteil beliebig eub*„, ;?#rt« organische Säuren häufig leichter zugängig sind al« viele Aminosäuren. UIt Synthese der neuen Verbindungen erfolgt nach an sich bekannten Methoden. . -^

ti'·

-4-SAD ORIGINAL

SCHERING AG ** ' ·349 ■ „ * . P, 885 vom 15.9.1965

B e i s ο i e 1 1 ,

Fornyl-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NHg .

Forrr.yl-Ala-Phe-OMe wurde in der üblichen Weise nach dem Anhydrid-Verfahren erhalten I' Γ_ Fp. 115-117° (aus Athanol/Petroläther),
CS'⁷ _Ό ■ -10,8° (0*0,8; DM?|7 und mit der vierfachen Menge Hydrazinhydrat in das Kydrazid übergeführt. Pp. 207 bis 205°C (aus DHP/ Petroläther), CyJ^f* -^9,9° (e=0,5* Eisessig).
Umsetzung von 0,3 g des Hydrazides (Azidbildung mittels tert,-Butylnitrit in Chlorvrasserstoff/Tetrahyarofuran) mit 0/6 g H-Ileu-Gly-Leu-Ket-NHg.HCl führte zu 0,5 g der gewünschten Verbindung,
Pp. 267-268⁰C, ^~a7_D« -42,0° (C=O,5ί DMP).

3 e i sp i e 1 2

::icotinoyl-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂

Aus 3,2. g Kicotinsäurechlorid und "5*7 g H-Ala-Phe-OMe · KCl wurden in Chloroform nach Zugäbe von 8,4 ecm Trläthylamin,5#6 g Nicotinoyl-

Ala-Phe-OMe erhalten, Pp. '16I- bis 162°C (aus Äthanol/Petroläther), Z"?7q * * 32*0° (c«0,5; Eisessig).

Hydrazinolyse mit der vierfachen Menge Hyär&zinhyarat; liefert·

das HydrazidYPp. 209-211°, ^§7^ - -16,6° (c-0,55 Eisessig), das wie In Beispiel 1 mit H-Ileu-Gly-Leu-Met-NH^ . HCl umgesetzt vrurde,

Pp. 272 bis 274°C_# C&v * ~27,5° (c-0,5; DMP).

Beispiel 3

a-Hydroxyisovaleryl-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NHg

Aus 0,3 g L-a-Hydroxylsovaleriansäurehydrazid wurden mit 0,3 ecm .

tert.-Butylnitrit in 2,9com einer 1,5 η Lösung von Chlorwasser-
«* stoff in Tetrahydrofuran das Azid hergestellt, das nach dem Keu-Iw tralisieren mit Triäthylamin mit 1,5 & H-Ala-Phe-ileu-Gly-Leu-Ket-

·■ . ^'V""^; ■■ ·"■■"■■ ■■■■'· .■'■■■■·'■ ^:

NH₂ . HCl und 0,3 ecm Triäthylamin umgesetzt wurde. Ausbeute 1,3 g Pp. 267 bis 27O⁰C, faj^ * -38,7° (c=0,5, DMP)-

BAD -- ■ "^R~

SCHERINGAG

Beispiel· 4
. Chloracetyl-Ala-Phe-Ileu.-Gly-Leu-Ket-NHo 0,2 s Konochloressigsäure v.'urden mit°0,3 ecm Triäthylanin und 0,2 ecm Chlorameisensäureäthylester in das gemischte Anhydrid "übergeführt und dieses mit 1,4 g H-Ala-Phe-Ileu-Gly-Leu-Met-NH₂ gekuppelt.
Ausbeute 1,2 g, Pp. 2}8 bis 242⁰C (BJ^ - -36,4° (c-0,5j DMP).

Beispiel 5

a) Ac-L-Lys(BOC^-NHNH₂ · ■ ■-.

4,0 g (15,4 mMol) H-L-Lys(BOC)-OMe wurden mit 2,8 g (15,4 mMol) Essigsäure-pnitrophenylester acetyliert. Aus dem nur als öl erhaltenen Methylester /" >,9 g (84,1 ^); /δ^² -18,7 (c»l,5; Pyridin)_7 vmrden durch Hydrazinolyse mit der 2,5i"achen Menge Hydrazinhydrät das Hydrarid hergestellt. Ausbeute: 2,1 g (55 '%) Pp. 123 - 125⁰C (aue Beeigester); . -

b) Ac-L-LysiBOOrL-Ala-L-Phe-L-Ileu-Oly-L-L^U-L-Met-NHj, 1,5 g (5mMol) Ac-L-Lys(B0C)-NHNH₂ wurden mit 0,5 com (5,2 mMol) tert.-Butylnitrit in das Azid übergeführt und dieses mit 3,2 g (5 mMol) H-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-NHg gekuppelt. Nach dem üblichen V/aschen der festen Substanz und Umfallen aus DMP/wäßr. Citronensäure betrug die Ausbeute 2,8 g (61,5 %)*» Pp. 249 bis 254⁰C, /§7^² -40,8° (c-0,5; Eisessig).

c) Ac-L-Lys-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-N^ wurde in quantltatier Ausbeute durch Schutzgruppenabspaltung mit HCl/Eisessig aus der in 5 b) dargestellten Verbindung erhalten.
Fp. 225 bis 24f°C, /?7ß² -42,5° (c-0,5J Eisessig)

BAD ORIGINAL .-<>■-

1518343

SCHERING AG * . _$ . KMSjßSL 15.9.1965

Beispiel g ·

a) BOC-L-LyS(Ac)-OKj _ ■ '

2,3 β (12 mMol) ^-L-LyS(Ac)-QH wurden In Dioxan/v/aaeer 1:1 gelöst und in Gegenwart von 1,5 g (3β mMol) Magnesium- ' oxycl mit 3#4 g (14,2 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-p-nitrophenylester umgesetzt. Ausbeute: 1,31 g (38 $>)'$ Pp. 137 bis 133⁰C (aus Essigester/Petroläther); .ßffi -10,1°

(c=0,5j Eisessig). ·

b) BOC-L-LyS(Ac)-OPhNO₂

1,0 g (3,4 mr4ol) BOC-L-Lys(Ao)-OH wurde mit 0,6 g (4,5 mMol) p-Nltrophenol nach der Carbodiimid-Methode verestert. Ausbeute: 1,3 g (92 ίέ)j Fp. 96 bis 98⁰C (au» Essigester/ Petroläther, Z§^² - 24,3° (c-0,5S Äthanol).

c) BOC-L-Lys (Ac i-L-Äia-LrPhe-L-Ileu-Qly-L-Leu-L-Met-NH«!

1,2 g (3 mMol) BOC-L-LyA(Ao)-OPhNO₂ wurden rait 2,0 g ( > mMol) E-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-L#u-L*Met-NH₂ in DMF 3 Tage bei 40°cumgesetzt. Nach der üblichen Aufarbeitung wurden 1,3 S (48 ^) erhalten. Pp. 239 bis 260°C, ßj^ -44,0°(o-0,55 Eisessig).

d) H-L-Lys (Ao )-L-Ala-L-Phe-L-Ilöu-Gly-L-Leu-L-Met-NH₂ wurde aus der geschützten Verbindung durch Schutzgruppenabspaltung mit HCl/Eisessig erhalten. Bp. ca. 2JO⁰C (Zers.); ψ

«o-2T,0⁰ (c»0,5l Eisessig).
JJC₃₉H₆₅N₉O₈S- 1,6 HCl. 3 H₂O (932.45)

U)

e) wAc-L-LysiAcJ-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-Met-NH^;

-»8OO mg (0,9 mI4ol) a-Acetyl-Lysin-Heptapeptldamid Hydrochlorid

^wurden nach dim Freisetzen mit 0,13 ecm Triäthylamin in DMF mit 36Ο mg (2 mMol) Essigsäure-p-nitrophenylester in üblicher

. BAD ORIGINAL

~ ι - Ρ«885 vom 15»9.

Weise umgesetzt. Ausbeute: 640 rag (80 ;5), Fp. 2βΟ bis 2o*6^wC, ^p -44,8° (c«0,5> Eisessig).

Beispiel 7

a) i -EOC-aminocapronsäurefBOC- £ -Acap-OH); Aus der 6 -Aminocapronsäure mit tert.-Butyloxycarbonyl-p-nitrophenylester werden in der Üblichen V/eise 77 % eines kristallisierenden Öls erhalten. Fp* 20 bi· 31⁰C. ' .

D) BOC-έ-Aoap-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-Leu-L-iiet-NHg;

Naoh der Anhydrid-Methode wurden aus 1,4 g (6 niMol) BOC- £ -aminodapronsäure und 3,9 g (6 mMol) H-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Oly-L-Leu-L'^Met-, 4,1 g (78 %) erhalten. Pp. 2*7 bi· 248°; {g?^ - 33,6° (o-0,6 DMF)

ü) H- «f-Acap-L-Ala-L-Phe-L-Ileu-Gly-L-LeurL-Mtt-NI^ · HCl;

Durch Schutzgruppenabspaltung mit HCl/Eiseseig wurde das Hydroehlorid in quantitativer Ausbeute erhalten. Fp. 221 bi« 2>>⁰C, ^§7^² ->5,0° (0-O/5; DMP). ^V . ...

»09133/

Claims

, 1) Verfahren geoSfl HauptPatentanmeldung Sch 32 86Ο IV b/12 qu .sttr Herstellung neuer substituierter Peptide der allgemeinen

; . il-L-Alanyl-i.-phenyltlanyl-L-a-aminoacyl-glycyl-L-leucyl-L-mftthioniniuEid, -

in der R den Ameifcensliarerest oder einen beliebig substituierten ^r ' Saurerest, auegenoouaea den Rest einer natürlichen» nicht aoylierten Aminosäure» bedeutet und L-a-Aminoacyl für den L-Isoleucyl- oder L-Valylrest steht, dadurch gekennzeichnet, dad laan eine beliebig

substituierte Säure, ausgenommen eine natürliche, nicht acylierte Aminosäure, L-Alanin, !,-Phenylalanin, L-Iioleucin b«w. L-VaIIn, Glycin, L-Leucin und L-Hethlonlnaoiid oder deren reaktionsfähig· Derivate nach in der Proteinchemie bekannten Methoden miteinander verknüpft. \
2) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die

; genannten Sturen oder ύ·ν·η r#aktlon»fMhite» Derivate nach in der _.

. Proteinchemie bekannten Methoden zunlohst zu kleineren Einheiten ^ ■■·"-■ : - " - "V .

W verknüpft, die denn Ihrerseits »u den «rf£adUBgCS«Blien tubetttuier-

ten Peptiden zusaiomeiigesetzt werden. . * .
3) Verbindungen der *ll£«a*in»n ftomel ' '

R-L-Älanyi-L-phenyialanarl-L-a-aminoaeyl-glycyl-L-leucyl-L-m·thio- ·

nlnamid,

in der R einen beliebig substituierten Saurere«t, ausgenommen den

Rest einer natürlichen^ nicht acylierten Aminosäure, bedeutet,

und L-a-Amlnoacyl für den L-Isoleucyl- oder L-Valylrect steht.
4) Forrcyl >L-alanyl-L-phe3^rlalanyl>L-i8oleu@yl»g.1 yiyl-L-leucyl*

ß ORIGINAL

SCHERING AG . P.S85 / 15.9.1905
5) Nicotinyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-.isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-rr.ethionInamid,
β) a-Hydroxyisovaleryl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-itoleucylglycyl-L-leucyl-L-methioninamid .
7) Chloracetyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-isoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-methioninamid, ·
8) a-Acetyl-L-lysyl-L-alanyl-L-phenylalmnyl-L-ieoleucyl-glycyl-L-leucyl-L-raethloninamid .
9) £ -Aminocapronyl-L-alanyl-L-phenylalanyl-L-ieoleucyl- " glycyl-L-leucyl-L-methioninamid.

909I3S/U5I BAD ORIGINAL