CZ302152B6 - Nový kmen Bacillus pro kontrolu onemocnení rostlin a napadení brouky rodu Diabrotica - Google Patents
Nový kmen Bacillus pro kontrolu onemocnení rostlin a napadení brouky rodu Diabrotica Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302152B6 CZ302152B6 CZ0375799A CZ375799A CZ302152B6 CZ 302152 B6 CZ302152 B6 CZ 302152B6 CZ 0375799 A CZ0375799 A CZ 0375799A CZ 375799 A CZ375799 A CZ 375799A CZ 302152 B6 CZ302152 B6 CZ 302152B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- strain
- plants
- bacillus subtilis
- glx
- supernatant
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
- A01N37/18—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids containing the group —CO—N<, e.g. carboxylic acid amides or imides; Thio analogues thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- A01N43/54—1,3-Diazines; Hydrogenated 1,3-diazines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
- A01N63/22—Bacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
- C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/832—Bacillus
- Y10S435/839—Bacillus subtilis
Abstract
Kmen Bacillus subtilis, který produkuje antibiotika a metabolity mající insekticidní, antifugální a antibakteriální aktivitu. Supernatant tohoto nového kmene obsahuje úcinná insekticidní, antifugální a antibakteriální agens. Zpusob ochrany nebo lécby rostlin v prípade houbových a bakteriálních infekcí a napadení brouky rodu Diabrotica aplikací prostredku obsahujících produkty získané z kultur samotného nového kmene Bacillus subtilis nebo v jeho kombinaci s chemickými pesticidy a/nebo jinými agens biologické kontroly.
Description
Nový kmen Bacillus pro kontrolu onemocnění rostlin a napadení brouky rodu Diabrotica
Oblast techniky
Tato přihláška vynálezu se týká oblasti biopesticidů. Specifičtěji se tato přihláška týká zjištění, že nový kmen Bacillus subtilis AQ173 inhibuje radu houbových a bakteriálních onemocnění rostlin a rovněž vykazuje aktivitu proti broukům rodu Diabrotica (čeleď - mandelinkovití).
io ’ Přihláška vynálezu se rovněž týká íungicidních, baktericidních a insekticidních prostředků obsahujících tento nový kmen Bacillus subtilis spolu s antibiotiky a metabolity produkovanými tímto kmenem, které jsou použity samotné nebo v kombinaci s jinými chemickými a biologickými pesticidy.
Dosavadní stav techniky
Mnoho let je známo, že různé mikroorganismy vykazují biologickou aktivitu, takže jsou užitečné při potlačování onemocnění rostlin. Ačkoli byl učiněn pokrok v oblasti identifikace a vývoje bio20 logických pesticidů pro kontrolu různých onemocnění rostlin, důležitých z hlediska agronomického i zahradnického, představuje většina dosud používaných pesticidů syntetické látky. Mnoho z těchto chemických fungicidů je klasifikováno EPA jako karcinogeny, které jsou toxické pro organismy v přírodě i jiné druhy. Kromě toho mohou patogenní mikroorganismy vyvinout odolnost k chemickým pesticidům (viz např. Schwinn et al., str. 244, Advances in Plant Pathology.
Phytophtora infestans, the cause of latě blight of potato (Academie Press, San Diego 1991).
Každoročně jsou použity chemické pesticidy v ceně 250 až 300 milionů dolarů k zabránění škod působených brouky rodu Diabrotica. Řada z těchto chemických pesticidů jsou látky, které jsou toxické pro člověka, organismy v přírodě i ostatní druhy. Některé z těchto látek byly objeveny i v povrchových vodách. Vývoj nových chemických insekticidů vyžaduje náklady ve výši 100 milionů dolarů.
Biologická kontrola představuje přitažlivou alternativu k syntetickým chemickým fungicidům. Biopesticidy (živé organismy a látky těmito organismy přirozeně produkované) mohou být bez35 pečnější, lépe biodegradovatelné a méně nákladné z hlediska vývoje a výroby.
Selekční programy identifikovaly některé kmeny Bacillus spp. (Bacillus spp. zahrnuje B. subtilis, B. cereus, B. mycoides, B. thuringiensis), které vykazují antifungální aktivitu. (Viz např. Stabb et al. (1990) Appl. Environ. Microbiol. 60: 4404—4412). Ukázalo se, že tyto kmeny produkují zwit40 termicin-A a/nebo kanosamin (Milner et al. (1996) Appl. Environ. Microbiol. 62: 3061-3066), dvě antibiotika, která jsou účinná proti půdnímu onemocnění projevujícímu se vadnutím rostlin z přebytku vláhy, která je vyvolávána Phytophtora medicaginis, P. nicotianae, P. aphanidermatum nebo Sclerotinia minor (viz výše Stabb et al.) Zwittermicin-A je ve vodě rozpustná lineární aminopolyolová molekula stálá v kyselém prostředí (viz He et al. (1994) Tetra. Lett. 35 (16)
2499-2502).
US Patent 5049379 udělený Handelsmanovi a spolupracovníkům popisuje jak zwittermicin-A vyvolává vadnutí rostlin z přebytku vláhy u vojtěšky a sóji. Jestliže bylo semeno pokryto vrstvou B. cereus ATCC 53522, byla patogenní aktivita houby způsobující hnilobu kořenů potlačena.
Podobně aplikace prostředků založených na sporách určitých kmenů B. cereus na semena sóji nebo na půdu obklopující tato semena se ukázala zlepšovat úrodu sójových bohů na poli. (Viz Osbume et al. (1995) Am. Phytopathol. Soc. 79 (6): 551—556). Metody aplikace biopesticidů jsou v oboru dobře známy a například zahrnují zvlhčovači prášky, přípravky v tekuté formě, účinná agens v podobě raikrokapsulí, a tekuté nebo pevné prostředky antibiotických frakcí vhodných
-1 CZ 302152 B6 kultur. (Viz např. US Patent 5061495 udělený Rossallovi nebo US Patent 5049379 udělený Handelsmanovi).
Smith et al. (1993) Plant Disease 77 (2) 139-142 ukázal, že aktivita vzduchem přenášené houby Pythium aphanidermatům, která vyvolává vatovitou mokrou hnilobu okurek, může být potlačena použitím kmene B. cereus UW85, který produkuje zwittermicin. Leifert et al. (1995) J. Appl. Bacteriol. 78: 97-108 popsali produkci antibiotik působících proti Botrytis a Altemaria dvěma kmeny bacillů, B. subtilis CL27 a B. pumilis CL45. Celé médium a bezbuněěné filtráty byly aktivní proti houbám Botrytis a Altemaria v testech in vitro i proti Botrytis v malých in vivo rostlinných testech používajících Astilbe. Leifert et al. (1997) US Patent 5597565 popisuje B. subtilis, B. pumilis a B. polymyxa, které jsou zvlášť účinné při potlačení hub vyvolávajících posklizňové onemocnění. Tito autoři rovněž popsali přítomnost antibiotik přítomných v bezbuněčném filtrátu kultury a jejich aktivitu při různých hodnotách pH, avšak tyto sloučeniny neidentifikovali.
Rossall (1994) US Patent 5344647 popisuje kmeny B. subtilis s širokou antifungální aktivitou. Sholberg et al. (1995) Can. J, Microbiol. 41: 247-252, Swinbume et al. (1975) Trans. Brit. Mycol. Soc. 65: 211-217, Singh and Deverall (1984) Trans. Br. Mycol. Soc. 83: 487-490 aFerreira et al. (1991) Phytopathology 81: 283-287. Baker et al. (1983) Phytopathology 73: 1148-1152 popisují použití Bacillus spp. a Bacillus subtilis jako agens pro biokontrolu houbových rostlinných patogenů. Baker et al. (1983) Phytopathology 73: 1148-1152 rovněž popisuje kmen B. subtilis s antifungálními účinky ajeho využití proti rostlinným patogenům. Pusey et al. (1988) Plant. Dis. 72: 622-626, Pusey and Robins (US Patent č. 5047239), a McKeen et al. (1986) Phytopathology 76: 136-139 popisují inhibici posklizňové hniloby plodů pomocí B. subtilis. McKeen et al. (viz výše) ukázal, že antibiotika podobná iturinovým cyklickým polypeptidům o nízké molekulové hmotnosti přispívají k této fungicidní aktivitě B. subtilis.
Liu et al. (1995) US Patent 5403583 popisují B. megaterium ATCC 55000 a způsob kontroly houbového rostlinného patogenního organismu Rhizoctonia solani. Islám and Nandi (1985) Journal of Plant Diseases and Protection 92 (3): 241-246 popisují B. megaterium s antagonismem proti Drechslera oryzae způsobujícímu hnědou skvrnitost rýže. Stejní autoři, Islám and Nandi (1985) Journal of Plant Diseases and Protection 92 (3) 233-240 rovněž popisují in vitro antagonismus B. megaterium proti Drechslera oryzae, Alternaria alternata a Fusarium roseum. Diskutují tři složky ve filtrátu kultury. Nejaktivnější antibiotikum bylo vysoce rozpustné ve vodě a v methanolu s UV maximem při vlnové délce 255 nm a vedlejším maximem při 260 nm, a ukázalo se být lipopeptidem polyoxinového typu. Cook (1987) Proceedings Beltwide Cotton Production - Mechanization Research Conference, Cotton Council, Memphis, str. 43—45) popisuje použití suspense B. megaterium ke snížení počtu bavlníkových rostlin zahubených Phymatotrichum omnivorum, které vyvolává hnilobu kořenů bavlníku.
Produkce antibiotik u B. megaterium byla zaznamenána Berdym (CRC Handbook of Antibiotic Compounds, Vols. I-XIV, (CRC Press, lne. Boča Raton, FL 1980-87), který popsal produkci peptidových antibiotik toxických pro nižší savce, jako jsou ansamitocin-PDM-O, bacimethrin, megacin, pentapeptid a homopeptidy.
O bakteriích rodu Bacillus se ví, že produkují sekundární metabolity s antifungálními a antibakteriálními vlastnostmi (Korzybski et al.(1978)). Vědečtí pracovníci z University of Wisconsin aComell University identifikovaly novou fungicidní sloučeninu, zwittermicin A, která je produkována Bacillus sp. (He et al. (1994) Tetra. Lett. 35 (16): 2499-2502). Další metabolit produkovaný stejným kmenem, mající rovněž fungicidní vlastnosti, byl nedávno identifikován jako známý aminocukr kanosamín (Milner et al. (1996) Appl. Environ. Microb. 62: 3061-3065).
Další skupina dříve popsaných metabolitů u rodu Bacillus jsou cyklické lipopeptidy třídy iturinů, z nichž některé jsou účinná fungicidní agens. Tyto látky jsou složeny z cyklického oktapeptidu se sedmi alfa-aminokyselinami a jednou beta-aminokyselinou s alifatickým postranním řetězcem.
Ί _
Existuje několik skupin iturinů, které se liší v pořadí a složení aminokyselinové sekvence. Jsou uvedeny níže v tabulce 1. Obecně je produkována řada příbuzných molekul, rozlišených délkou a větvením alifatického aminokyselinového zbytku. Jestliže byly tyto látky testovány proti Saccharomyces cerevisiae, nejúčinnější z nich se ukázal být mykosubtilin (LC50 = lOmikrogra5 mů/mL), následovaný iturinem A a bacillomycinem L (oba LC50 = 30 mikrogramů/mL) (Beeson et al. (1979) J. Antibiotics 32 (8): 828-833). Bylo zjištěno, že mechanismus působení těchto cyklických lipopeptidů je na úrovni interakce s membránami houbových organismů, a že uvedené látky vytvářejí transmembránové kanály, kterými se uvolňují a unikají životně důležité ionty (Latoud et al. (1986) Biochem. Biophys. Acta 856: 526-535). Iturin C není aktivní proti io houbovým organismům včetně Penicillium chrysogenum (Peypoux et al. (1978) Tetrahedron 34:
1147-1152).
Tabulka 1
Struktura antibiotik skupiny iturinů
Antibiotikum | L-Asz(Xl) | X4 | X5 | X6 | X7 |
Iturin A | L-Asn | L-GIn | L-Pro | D-Asn | L-Ser |
Iturin C | L-Asp | L-Gln | L-Pro | D-Asn | L-Ser |
Bacillomycin D | L-Asn | L-Pro | L-Glu | D-Ser | L-Thr |
Bacillomycin L | L-Asp | L-Ser | L-Gln | D-Ser | L-Thr |
Bacillomycin F | L-Asn | L-Gln | L-Pro | D-Asn | L-Thr |
Mykosubtilin | L-Asn | L-Gln | L-Pro | D-Ser | L-Asn |
R(CH2)<r,2CHCH2CO-Xi-^O-Tyr -*-O-Asn
NH X7* Xgx ^5 * ^4
R = CH3l CH(CH3)2. ch3ch2ch ch3
Výzkumná skupina na USDA zkoumala vztah struktury a aktivity u iturinů tím, že syntetizovali řadu analogů, které se lišily v délce aminokyselinového řetězce. Bylo zjištěno, že aktivita iturinů vzrůstala s délkou postranního řetězce mastných kyselin a s koncovým větvením v poradí iso>normální>anteiso (Bland et al. (1995) Proč. Plant Growth Regulation Soc. Am. 22nd: 10525 107). Autoři na základě své práce s řadou kmenů Bacillus produkujících iturin rovněž uvádějí, že „množství iturinů získaných přirozenou produkcí není dostatečné z komerčního hlediska“.
Další skupina cyklických lipopeptidů izolovaných zB. cereus jsou plipastatiny. Tyto sloučeniny jsou skupinou acylovaných dekapeptidů, jejichž struktura je na obr. 1 (Nishikíori et al. (1986) J.
Antibiotics 39 (6): 755-761). Tyto sloučeniny byly původně izolovány jako inhibitory prasečí pankreatické fosfolipasy A2 (Umezawa et al. (1986) J. Antibiotics 39 (6): 737-744), ale později se zjistilo, že inhibují některé patogenní houby způsobující onemocnění rostlin, například Botrytis, Pyricularia a Álternaria (Yamada et al, (1990) Nippon Noyaku Gakkaishi 15 (1): 95-96). Yamada rovněž popsal synergistický efekt pozorovaný mezi iturinem A a plipastatiny, z nichž oba jsou produkovány stejným kmenem B. subtilis.
Byly provedeny pokusy s cílem zlepšit výtěžky produkce iturinů během fermentace jak v tekutém mediu (Phae and Shoda (1991) J. Ferment. Bioeng. 71: 118-121); Ohno et al. (1993) J. Ferment.
-3CZ 302152 B6
Bioeng. 75: 463-465) tak i na pevném substrátu (Ohno et al. (1992) Biotech. Lett. 14 (9): 817822; Ohno et al. (1995) J. Ferment. Bioeng. 5: 517-519). Byla popsána synergie mezi blízce příbuznými surfaktiny, které jsou samy o sobě inaktivní, a ituriny, které byly produkovány stejným kmenem B. subtilis (Hiraoka et al, (1992) J. Gen. Appl. MicrobioL 38: 635-640). Byla publikována nukleotidové sekvence genu podílejícího se na koregulaci biosyntézy iturinu A asurfaktinu (Huang et al. (1993) J. Ferment. Bioeng. 76 (6): 445^150). Polní pokusy s kmeny produkujícími iturin se soustředily na aplikaci v půdě s cílem potlačit houbu Rhizoctonia (Asaka and Shoda (1996) Appl. Environ. MicrobioL 62: 4081—4085) a aplikace iturinů v polních pokusech na listy rostlin nebyla dosud popsána.
Další sloučeninou typu cyklického lipopeptidu, která je produkována B. subtilis je surfaktin, který vykazuje výjimečnou surfaktantní aktivitu (Kaninuma et al. (1969) Agric. Bioi. Chem. 33: 973-976). Surfaktin obsahuje beta-hydroxymastnou kyselinu mající v molekule 14 nebo 15 uhlíkových atomů, kteráje laktonovým kruhem vázána kheptapeptidové části molekuly mající sekvenci LLDLLDL (Arima et al. (1968) Biochem. Biophys. Res. Commun. 31: 488-494). Sandrin a spolupracovníci ((1990) Biotechnol. Appl. Biochem. 12: 370-375) nalezli kmeny B. subtilis, které produkovaly surfaktin, iturin A, bacillomyciny F a L a mykosubtilin.
Nový organismus AQ713, který byl objeven autory tohoto vynálezu, byl původně považován za kmen B. megaterium, ale nyní byl identifikován jako kmen B. subtilis. Tento kmen produkuje ituriny A, plipastatiny a surfaktiny. Produkce této kombinace lipopeptidů jedním mikroorganismem dosud nebyla popsána. Kromě toho autoři vynálezu zjistili, že kmen AQ713 rovněž produkuje nově popsanou skupinu látek nazvaných „agrastatiny“ Kombinace všech tří výše zmíněných látek s nově popsanými agrastatiny je rovněž nová.
Jedním z běžně používaných biopesticidních prostředků je grampozitivní bakterie Bacillus thuringiensis. Kmeny B. thuringiensis mající pesticidní vlastnosti, produkující během sporu láce krystalické proteiny, které jsou specificky toxické pro určité řády a druhy hmyzu a nematodů (viz např. US Patenty 4999192 a 5208017). Endotoxiny proteinové povahy, které jsou produkovány B. thuringiensis, rovněž působí jako insekticidní agens proti broukům rodu Diabrotica a jiným broukům (např. US Patent 5187091; Johnson, T. J. et al. (1993), J. Economic Entomology 86: 330-333). Endotoxiny B. thuringiensis jsou účinné v podobě purifi kovaných krystalů, promytých buněčných pelet a exprimovaných proteinů. Warren et al. (WO 96/10083) popisuje neendotoxinové proteiny, které jsou produkovány během vegetativního stadia B. cereus a B. thuringiensis. Tyto vegetativní proteiny nazvané Vipl a Vip2 vykazují vysokou účinnost proti broukům rodu Diabrotica (severnímu i západnímu) (Estruch et al. (1997) Nátuře Biotechnology 15:137-141 a Mullins et al. (1997) Appl. Environ. MicrobioL 63 (v tisku).
Jeden z termostabilních metabolitu B. thuringiensis, který byl nazván beta-exotoxin, má rovněž pesticidní vlastnosti. Burgjeron a Biache ((1979) Entomophaga 11: 279-284) popisují beta-exotoxin, který je aktivní proti mandelince bramborové (Leptinotarsa decemlineata). Kromě toho vykazují známé beta-exotoxiny B. thuringiensis nespecifickou pesticidní aktivitu a zabíjejí nejen nematody, ale rovněž mouchy, vojnice, roztoče a brouky rodu Diabrotica. Sigma exotoxin má strukturu podobnou beta-exotoxin u a je aktivní vůči mandel ince bramborové (Argauer et al. (1991) J. Entomol. Sci. 26: 206-213). Alfa-exotoxin je toxický pro larvy Musea domestica (Cluthy (1980) FEMS MicrobioL Lett. 8: 1.7). Gama-exotoxiny jsou různé proteolytické enzymy, chitinasy a proteasy. Toxický účinek gama-exotoxinů se projeví pouze v kombinaci s betaexotoxinem nebo delta-endotoxinem (Forsberg et al. (1976),(Bacillus thuringiensis: Its Effects in Environmental Quality“ National Research Council of Canada). Stonard a spolupracovníci ((1994) ACS Symposium Series 551: 25) popsali ve vodě rozpustné sekundární metabolity aktivní proti broukům rodu Diabrotica v supematantu kultury kmene B. cereus.
Dosud nebyly popsány kmeny bacilů, které by měly jak fungicidní aktivitu, tak i byly aktivní proti broukům rodu Diabrotica. Nejsou známy žádné metabolity produkované B. subtilis, které
-4CZ 302152 B6 by měly molekulovou hmotnost menší než 10 000 a byly by extrahovatelné nepolárním rozpouštědlem.
Podstata vynálezu
Je popisován nový kmen B. subtilis produkující antibiotika a metabolity, který byl původně identifikován jako B. megaterium, který vykazuje širokou fungícidní a bakteriální aktivitu, a rovněž vykazuje aktivitu proti broukům rodu Diabrotica. Rovněž je popsán nový metabolit nového kmene B. subtilis vykazující aktivitu proti broukům rodu Diabrotica. Je rovněž popsán způsob jak léčit rostliny v případě houbových a bakteriálních infekcí a chránit je proti těmto infekcím, který zahrnuje krok aplikující účinné množství B. subtilis produkujícího antibiotikum. B. subtilis produkující antibiotikum lze používat v podobě kompletní bakteriální suspenze kultury v mediu nebo jako supematant této kultury kmene Bacillus produkujícího antibiotikum, který obsahuje toto antibiotikum. Rovněž je popsán způsob ochrany kořenů rostlin proti napadení brouky rodu Diabrotica nebo léčby v případě tohoto zamoření, který zahrnuje krok, kdy je aplikováno účinné množství kmene Bacillus subtilis produkujícího nový metabolit. Kmen B. subtilis produkující nový metabolit lze aplikovat jako kompletní suspenzi bakteriální kultury v mediu nebo jako supematant této kultury obsahující metabolit nebo jako purifikovaný metabolit připravený z kultury mikroorganismu v tekutém mediu. Rovněž jsou popsány nové sloučeniny, agrastatiny, které jsou produkovány novým kmenem AQ713, a nová kombinace sloučenin zahrnující iturin A, plipastatin, surfaktín a agrastatin.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 ukazuje strukturu plipastatinových antibiotik.
Obr. 2 ukazuje HPLC chromatogram metabolitů kmene AQ713.
Způsoby provedení vynálezu
Tato přihláška vynálezu popisuje nový kmen B. subtilis AQ713, který byl původně identifikován jako B. megaterium, nebo jeho mutanty s širokou antifungální a antimikrobiální aktivitou, a novou kombinaci antifungální aktivity a aktivity proti broukům rodu Diabrotica. Tento nový kmen byl nazván AQ173 a byl uložen vNRRL 7. března 1997 podle ustanovení Budapešťské smlouvy o mezinárodním uznávání sbírek mikroorganismů pro účely patentového postupu jako přírůstek č. B21661 (Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Proceduře under Accession No. B2I661). Tato přihláška vynálezu rovněž zahrnuje způsoby zabraňující vzniku fungálních a bakteriálních onemocnění rostlin a jejich léčby s použitím těchto bakteriálních kmenů nebo supematantu jejich kultur obsahujících uvedená antibiotika nebo čistých antibiotik získaných z těchto bakteriálních kmenů. Přihláška vynálezu rovněž zahrnuje způsoby aplikace na úrovni kořenů rostlin nebo půdy s cílem potlačit larvy brouků rodu Diabrotica pomocí bakteriální suspenze kmene AQ713 nebo pomocí supernatantu kultury kmene AQ713 obsahujícího metabolity nebo pomocí purifíkovaných metabolitů kmene AQ713. Přihláška vynálezu rovněž zahrnuje metabolit, který je extrahovatelný organickým rozpouštědlem, a který vykazuje aktivitu proti broukům rodu Diabrotica a má molekulovou hmotnost nižší než 10 000 daltonů. Přihláška vynálezu dále zahrnuje nové sloučeniny, agrastatiny, které jsou produkovány novým mikroorganismem. Rovněž je zahrnuta nová kombinace představovaná iturinem A typu, plipastatinem, surfaktinem a agrastatinem.
Definice „Biologická kontrola“ používaná v přihlášce patentuje definována jako kontrola patogenu nebo hmyzu pomocí druhého organismu. Známé mechanismy biologické kontroly zahrnují enterobak-5CZ 302152 B6 terie, které působí proti hnilobě kořenů tím, že „vytěsní“ houby s nimiž soupeří o prostor na povrchu kořene. Bakteriální toxiny jako jsou antibiotika jsou používány ke kontrole patogenů. Toxin lze izolovat a přímo aplikovat na rostlinu nebo může být aplikován daný bakteriální druh, aby produkoval toxin in silu.
Termín „houba“ nebo „houby“ zahrnuje velmi různé jaderné sporulující organismy, které neobsahují chlorofyl. Příklady hub zahrnují kvasinky, plísně, sněti, rzi a kloboukaté houby.
Termín „bakterie“ zahrnuje jakýkoli prokaryontní organismus, který nemá buněčné jádro. „Fungicidní“ znamená schopnost látky zvyšovat mortalitu hub nebo inhibovat jejich růst.
„Antibiotikum“ představuje jakoukoli látku, která je schopna zabíjet nebo inhibovat mikroorganismus. Antibiotika mohou být produkována nějakým mikroorganismem nebo připravena pomocí syntetického nebo polosyntetického procesu. Termín proto zahrnuje látku, která inhibuje nebo zabíjí houby, například zwíttermicin A nebo kanosamin.
„Antifungální“ zahrnuje jakoukoli látku, která je schopna zabíjet nebo inhibovat růst hub.
Termín „kultivace“ znamená propagaci organismů v nebo na mediích různého typu. „Kompletní kultivační tekutina“ znamená tekutou kulturu obsahující jak buňky tak i medium. „Supematant“ znamená tekutinu kultury, která zůstane po oddělení buněk rostoucích v této tekutině, pomocí centrifugace, filtrace, sedimentace nebo jiného způsobu, který je v oboru dobře znám.
„Účinné množství“ je množství dostatečné pro navození požadovaného či pozitivního výsledku. Účinné množství lze podat v jedné nebo ve více dávkách. V termínech léčba (ošetření) a ochrana představuje „účinné množství“ takové množství, které je dostatečné pro zlepšení, stabilizaci, zastavení, zpomalení nebo zpoždění progrese stavu houbového nebo bakteriálního onemocnění.
V této přihlášce termín „hmyz“ zahrnuje všechny organismy třídy „Insecta-Hmyz“ „Nedospělý“ hmyz znamená jakoukoli formu organismu před dosažením dospělého stadia, například vajíčka, larvy a nymfy. „Insekticidní“ znamená schopnost látky zvyšovat mortalitu nebo inhibovat růst hmyzu. „N e matic id ní“ znamená schopnost látky zvyšovat mortalitu nebo inhibovat růst nematodů. „Pesticidní“ znamená schopnost látky zvyšovat mortalitu nebo inhibovat růst hmyzu, nematodů a roztočů.
„Pozitivní kontrola“ znamená sloučeninu, o níž se ví, že má pesticidní aktivitu. „Pozitivní kontrola“ zahrnuje komerčně dostupné chemické pesticidy, avšak není na ně omezena. Termín „negativní kontrola“ znamená sloučeninu, o níž je známo, že nemá žádnou pesticidní aktivitu. Příklady negativní kontroly jsou voda a ethylacetát.
Termín „solvent“ zahrnuje jakoukoli kapalinu, která udrží další látku v roztoku. „Solventem extrahovatelný“ znamená jakoukoli sloučeninu, která se rozpouští v solventů, a kterou potom lze ze solventů izolovat. Příklady solventů zahrnují organické solventy jako ethylacetát, avšak nejsou jimi limitovány.
Termín „metabolit“ představuje jakoukoli sloučeninu, látku nebo vedlejší produkt fermentace mikroorganismu, které mají pesticidní aktivitu. Antibiotikum, tak jak je definováno výše, je metabolitem, který vykazuje specifickou aktivitu proti mikroorganismu.
Termín „agrastatiny“ se týká skupiny nových látek, které mají následující strukturu:
-6CZ 302152 B6
RrCH-CHj-CO-Glx-Ora-Ty-Thr-Glx-Ala-Pro-Glx-Tyr-Val OR2 O -1 kde Ri je větvený nebo přímý alifatický postranní řetězec, C8-C20; X je buď Ala nebo Val; R2 je acetát nebo derivát esteru; a Glx je Gin nebo Glu. Tyto sloučeniny mají antibakteriální a antifun5 gální aktivitu i aktivitu proti broukům rodu Diabrotica.
Popisujeme nový metabolit a kmen : subtilis produkující antibiotika, který byl původně identifikován jako B. megaterium, má širokou antifungální a antibakteriální aktivitu, a který rovněž zabíjí nebo brání v růstu larvám brouků rodu Diabrotica. V dalším aspektu tato přihláška vynálezu io popisuje způsob ochrany rostlin před houbovými a bakteriálními infekcemi ajejich léčby pomocí aplikace účinného množství supematantu získaného z kultury B. subtilis AQ713 podle tohoto vynálezu. Supematant lze získat způsobem dobře známým v oboru jako například centrifugací, filtrací, sedimentací a podobně.
V dalším aspektu přihláška vynálezu zahrnuje způsob ochrany rostlin před houbovými a bakteriálními infekcemi ajejich léčby pomocí aplikace účinného množství kompletní kultivační tekutiny kultury nového kmene B. subtilis.
V dalším aspektu přihláška vynálezu zahrnuje způsob ochrany rostlin před houbovými a bakte20 riálními infekcemi ajejich léčby pomocí aplikace účinného množství antibiotika produkovaného novým kmenem B. subtilis.
V dalším aspektu tato přihláška vynálezu popisuje způsob ochrany rostlinných kořenů před napadením brouky rodu Diabrotica a jejich léčby pomocí aplikace účinného množství supematantu získaného z kultury B. subtilis AQ713 podle tohoto vynálezu. Supematant lze získat způsobem dobře známým v oboru jako centrifugací, filtrací, sedimentací a podobně.
V dalším aspektu přihláška vynálezu zahrnuje způsob ochrany rostlin před napadením brouky rodu Diabrotica a jejich léčby pomocí aplikace účinného množství kompletní kultivační tekutiny kultury nového kmene B. subtilis.
V dalším aspektu se přihláška vynálezu týká způsobu ochrany rostlinných kořenů před napadením brouky rodu Diabrotica ajejich léčby pomocí aplikace účinného množství metabolitů produkovaného novým kmenem B. subtilis.
Aby bylo dosaženo dobré disperze a adheze prostředků podle tohoto vynálezu, může být výhodné použít v jednom přípravku kompletní kultivační tekutinu, supematant a/nebo metabolit/antibiotikum spolu se složkami, které napomáhají disperzi a adhezi. Vhodné složení je odborníkům v oboru známo.
Přípravky podle tohoto vynálezu mohou mít podobu smáčivých prášků, granulí a podobně, nebo mohou mít podobu mikrokapsulí, kde je přípravek enkapsulován ve vhodném mediu, apod. Příklady jiných typů přípravků zahrnují rozpustné prášky, smáěivé granule, tekuté formy vodného nebo „suchého“ typu, smáěivé dispergovatelné granule, emulsifikovatelné koncentráty a vod45 né suspenze. Jiné vhodné typy přípravků jsou známy odborníkům v oboru,
V dalším aspektu tohoto vynálezu je popisována nová skupina sloučenin nazvaných „agrastatiny“. Tyto látky vykazují antibakteriální a antifungální aktivitu, kromě aktivity proti broukům rodu Diabrotica.
V dalším aspektu tohoto vynálezu je popsána nová kombinace zahrnující iturin typu A, plipastatin, surfaktin a agrastatin.
- 7 CZ 302152 B6
V dalším aspektu tohoto vynálezu jsou popisovány způsoby ochrany rostlin před houbovými a bakteriálními onemocněními ajejich léčby pomocí aplikace účinného množství nové kombinace látek zahrnujících iturin typu A, plipastatin, surfaktin a agrastatin.
Všechny patenty a publikace citované v této patentové přihlášce jsou uvedeny jako reference v úplné podobě. Následující příklady ilustrují tento vynález. Vynález však těmito příklady není nijak omezen.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Charakterizace kmene AQ713
Izolát byl identifikován na základě použití metody Biolog (Biolog microp latě panel, Biolog, Inc., Hayward, CA) tak jak je popisována Bochnerem (1989) Nátuře 339: 157-158. Mikrodeska
2o Biolog se skládá z jamek v panelu, které obsahují 95 různých uhlíkových substrátů, které jsou nejprve naneseny a poté vysušeny, a jsou voleny s ohledem na grampozitivní a gram negativní bakterie. Izolát byl kultivován v tekutém mediu při 28 °C, a po 24 hodinách byla promytá buněčná suspenze (0,85 % W/V chlorid sodný) inokulována do každého otvoru v panelu GP Microplate (Biolog, Inc.), Po inkubaci po dobu 24 hodin při teplotě 28 °C byly vyhodnoceny reakce utilizace uhlíku. Profily utilizace substrátů byly porovnány s databází Biolog Gram-Positive Data Base (verze 3,50) a vztaženy k nejbližším podobným druhům. Výsledky metody Biolog poskytly index podobnosti (similarity index) o hodnotě 0,883 pro B. megaterium.
Mnohem důkladnější charakterizace AQ713 byla provedena sbírkou mikroorganismů American
Type Culture Collection v Rockville v Marylandu.
Izolát dodán jako: neznámý; kmen AQ713.
Izolát identifikován jako: s použitím dostupných fyziologických a biochemických dat se tento kmen nejvíce podobá Bacillus subtilis.
Buněčná morfologie: pohyblivé buňky jsou nalézány jako jednotlivé, sjednou endosporou umístěnou v centrální nebo subterminální poloze. Buňky se uniformně barví jako Gram-pozitivní.
4(i Morfologie kolonie: kolonie jsou matné a nepravidelné s konvexním vyvýšením, povrch je hrubý, nebarvený a má nepravidelně zoubkovaný okraj.
Charakterizace dat kmene AQ713:
Tyčinky | + | Hydrolýza kaseinu | + |
45 Rovné tyčinky | + | Ztekucení želatiny | + |
Zahnuté tyčinky | - | Hydrolýza hippurátu | - |
Jednotlivé buňky | + | Lecitinasová degradace | - |
Řetízky buněk | - | Hydrolýza škrobu | + |
Konce zašpičatělé | - | Hydrolýza Tweenu 80 | + |
50 Konce zakulacené | + | Rozklad tyrosinu | - |
Konce hranaté | - | Růst v 2% NaCl | |
Vytvořená endospora | + | Růstv5%NaCl |
-8CZ 302152 B6
„Nabobtnalé“ sporangium | - | Růst v 7 % NaCI | + |
Jedna spora na buňku | + | Růst v 10% NaCI | + |
Spora kulatá | - | Růst v 0,2% azidu | V |
Spora válcovitá | + | Růst při pH 4,5 | + |
Spora oválná | + | Růst pri pH 6,0 | + |
Spora centrální | + | Kyselina z arabinózy | - |
Spora terminální | - | Plyn z arabinózy | - |
Spora subterminální | + | Kyselina z celobiózy | slabá |
Gramovo barvení | + | Kyselina zpožděná>14 dní | slabá |
Gram pozitivní | + | Plyn z celobiózy | - |
Gram negativní | - | Kyselina z fruktózy | + |
Gram variabilní | Kyselina zpožděná>14 dní | - | |
Vakuoly přítomny | - | Plyn z fruktózy | + |
Kolonie průhledná | - | Kyselina z glukózy | + |
Kolonie transparentní | - | Kyselina zpožděná>14 dní | - |
Kolonie matná | + | Plyn z glukózy | - |
Kolonie celistvá | - | Kyselina z laktózy | - |
Kolonie zoubkovaná | + | Plyn z laktózy | - |
Kolonie laločnatá | - | Kyselina z manitolu | - |
Kolonie kruhová | - | Plyn z manitolu | - |
Kolonie nepravidelná | + | Kyselina z manózy | - |
Kolonie rhizoidní | - | Plyn z manózy | - |
Kolonie konvexní nízká | Kyselina ze sacharózy | slabá | |
Kolonie konvexní vysoká | - | Kyselina zpožděná>14 dní | slabá |
Kolonie plochá | - | Plyn ze sacharózy | - |
Kolonie vypouklá | - | Kyselina ze sacharózy | - |
Kolonie lesklá | - | Plyn z trehalózy | - |
Kolonie bezbarvá | + | Kyselina z xylózy | - |
Kolonie suchá | - | Plyn z xylózy | - |
Kolonie hladká | - | Aerob | - |
Kolonie drsná | + | Fakultativní | - |
Hnědý rozpustný pigment | - | Mikroaerofil | + |
Černý rozpustný pigment | - | Anaerob | - |
Žlutý rozpustný pigment | - | Plyn z „uzavřeného“ nitrátu | - |
Hnědý nerozpustný pigment | - | Plyn z „uzavřené“ glukózy | - |
Černý nerozpustný pigment | - | Indol | - |
Žlutý nerozpustný pigment | - | Nitrát na nitrit | + |
Oranžový nerozpustný pigment | - | Nitrát na plyn | - |
Červený nerozpustný pigment | - | Redukce methylenové modři | + |
Buňky pohyblivé | + | Reoxidace methylenové modři | - |
Růst při 15 °C | + | Lakmusové mléko kyselé | - |
Růst při 20 °C | + | Lakmusové mléko koagul. | - |
-9CZ 302152 B6
Růst při 26 °C | + | Lakmusové mléko alkalické | + |
Růst při 30 °C | + | Lakmusové mléko reduk. | + |
Růst při 37 °C | + | Lakmusové mléko pepton. | + |
Růst při 45 °C | + | VP (5198) pozitivní | + |
Růst při 50 °C | slabý | VP (5331) pozitivní | + |
Růst při 55 °C | - | pH VP 5198 6,0 nebo méně | - |
Růst při 60 °C | - | pH VP5198 6,6 až 7,5 | + |
Růst při 65 °C | - | pH VP 5198 8,0 nebo více | - |
Kata lasa | + | Utilizace citrátu | + |
Oxidasa | + | Utilizace propionátu | — |
Poznámka: Jestliže použijeme dostupná fyziologická a biochemická data, tento kmen se nejvíce podobá Baciílus subtilis.
Nej důležitější výsledky charakterizace
Testy charakterizace | Kmen AO713 | Baciílus subtilis |
„Nabobtnalé“ sporangium | - | - |
Anaerobní růst | mikroaerofilní | mikroaerofilní |
VP reakce | + | + |
pH VP reakce | 7,0 | 5,0 až 8,0 |
Maximální růstová teplota | 55 °C | 45 až 55 ŮC |
Růst v 7% NaCI | + | + |
Kyselina z glukózy | + | + |
Kyselina z arabinózy | - | + |
Kyselina z xylózy | - | + |
Kyselina z manitolu | - | + |
Rozklad kase inu | + | + |
Rozklad tyrosinu | - | - |
Utilizace citrátu | + | + |
Utilizace propionátu | — | — |
Citace: Gordon, R. E., W. C. Haynes and C. Η. N. Pang. 1973. The Genus Baciílus. Handbook No. 427. US Department of Agriculture, Washington D.C.
Příklad 2
Aktivita AQ713 proti broukům rodu Diabrotica.
Vzorky bakterie Baciílus byly kultivovány v kultivačním mediu pro Baciílus. Medium 2 obsahovalo 5% pepton, 5 % dextrózu, 3 % kvasničný extrakt, 1,5% proflo extrakt z bavlníkových semen (59% proteinu, 4,26 % tuku, 6,73 % popela, 3,19% vlákna a stopová množství gossypolu; zbytek je voda), 10 % sojové mouky, a 0,5 % MgSO4. 7 H2O. Medium 3 obsahovalo stejné složky s výjimkou 20 % peptonu a 3,4 % KH2PO4 a 4,3 % K2HPO4. Jeden den staré kultury na agaru byly použity k inokulaci 250 mL třepacích buněk opatřených výstupky. Baňky byly třepány při 200 otáčkách za minutu při teplotě 29 °C po dobu 5 dní. K testu insekticidní aktivity byl objem 35 mL kultivační tekutiny centrifugován při rychlosti 5200 otáček za minutu po dobu 20 minut a supematant byl použit v mikrotestu, který je popsán níže.
- 10CZ 302152 B6
Stanovení bylo prováděno na mikrodestičkách majících 96 jamek. Každá jamka obsahovala pevný agarový substrát, testovaný organismus a pozitivní kontrolu nebo negativní kontrolu nebo supematant získaný tak jak je popsáno v Příkladu 1 z nového kmene Bacillus.
Pro testování insekticidní aktivity byl do jamek mikrodestiěky připraven agarový substrát podle Marrone et al. (1985), J. Econ. Entomol. 78: 290-293. Pro stanovení nematicidní aktivity byl v jamkách místo toho použit čistý agar (1,5 %).
Roztok Avid® (avermektin) o koncentraci 1 ppm byl použit jako pozitivní kontrola. Jako negativní kontrola byla použita deíonizovaná voda. Pro každé stanovení byly použity dvě paralely testovaného vzorku nebo kontroly. Do každé jamky bylo vneseno 40 mikrolitrů vzorku supematantu nebo kompletní kultivační tekutiny z kultury rostoucí v mediu 1, 2 nebo 3. Mikrodestiěky byly poté umístěny do laboratorního zařízení s odtahem, aby uschly, což trvalo přibližně 2 až 3 hodiny, než byl agarový roztok doopravdy suchý.
Organismy použité v testu byly buď nedospělí jedinci brouků rodu Diabrotica (Diabrotica undecimpunctatá), nedospělí jedinci švába (Blatella germanica), nedospělí jedinci voj nice (Spodoptera exigua), nedospělí jedinci mouchy octomilky (Drosophila melanogaster) nebo jedinci kmene N2 nematoda Caenorhabditis elegans. Testovací organismy byly „naředěny“ do 0,1 % agaru na finální koncentraci přibližně 5 jedinců na 25 mikrolitrů agaru, který byl vnese do každé jamky. Mikrodesticka byla uzavřena proti přístupu vzduchu pomocí zvláštní látky jako je např. Mylar® a ke každé jamce byl umožněn přístup vzduchu pomocí jehlového rámečku. Destičky byly inkubovány při teplotě 27 °C maximálně 7 dní.
Po inkubaci byly jamky vyhodnoceny zjištěním hodnoty mortality nebo stupně vývoje larev. Jamkám obsahujícím pouze mrtvé nebo zakrnělé larvy byla přiřazena hodnota 1, jamky obsahující některé mrtvé a některé silně zakrnělé larvy obdržely hodnotu 2, jamky obsahující živé, ale zakrnělé larvy byly hodnoceny jako 3 a jamky, v nichž nebyly nalezeny žádné mrtvé larvy obdržely hodnotu 4. Hodnoty paralel jednotlivých vzorků byly zprůměrovány. Výsledky jsou souhrnně uvedeny v tabulkách 2 a 3.
Tabulka 2: Hodnocení aktivity kompletní kultivační tekutiny kultury AQ713 proti hmyzím škůdcům.
C. elegans Rod Vojnice Octomilka Požit. Negat.
Diabrotica kontrola kontrola
Medium 2 NT 1,0 4,0 4,0 1,0 4,0
Medium 3 NT 2,0 4,0 4,0 1,0 4.0
NT = netestováno
- 11 CZ 302152 B6
Tabulka 3: Hodnocení aktivity supematantu kultury AQ713 proti hmyzím škůdcům.
C. elegans | rod | Vojnice Octomilka Šváb | Požit. | Negat. | |
Diabrotica | kontrola | kontrola | |||
Medium 2 | 4,0 | 3,0 | 4,0 4,0 4,0 | 1,0 | 4,0 |
Medium 3 | 4,0 | 4,0 | 4,0 4,0 4,0 | 1,0 | 4,0 |
Tyto testy ukazují, že AQ713 byl aktivní při kultivaci v obou mediích, byl-li aplikován jako kompletní kultivační tekutina, nej lepší aktivita byla pozorována v případě použití media 2. Supernatant byl aktivní pouze jestliže byl AQ713 kultivován v mediu 2.
Příklad 3
Chemické vlastnosti metabolitů kmene AQ713 aktivního proti broukům rodu Diabrotica
Kmen AQ713 byl kultivován v mediu 2 v objemu 50 mL. Ke každé kultuře bylo přidáno 50 mL ethylacetátu a směs byla třepána v děličce po dobu 2 minut. Vodná vrstva byla odstraněna a frakce organického rozpouštědla byla převedena do baňky obsahující síran hořečnatý. Frakce v organickém rozpouštědle byla zfíltrována do baňky s kulatým dnem a organické rozpouštědlo odpařeno na rotační vakuové odparce.
Pro biologické stanovení byl odparek znovu rozpuštěn ve 2,5 mL acetonu. Alikvot o objemu 40 mikrolitrů byl naředěn na objem 800 mikrolítrů směsí aceton/voda (70 %). Tento roztok představuje 10 x koncentrovaný organický extrakt. Byla provedena série ředění, čímž byly získány vzorky, které byly testovány na čerstvě vylíhlých larvách brouků rodu Diabrotica (1 larva na jamku mikrotitrační destičky tak jak je uvedeno výše), a po 7 dnech byla vyhodnocena mortalita v procentech. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.
Tabulka 4: Aktivita ethy lacetáto vých extraktů kultur AQ713 proti broukům rodu Diabrotica.
Vzorek | Mortalita (v %) | |
AQ713 | Organický extrakt 10 x | 89 |
Organický extrakt 5 x | 93 | |
Organický extrakt 1 x | 65 | |
Kompletní kultivační tekutina | 100 | |
70 % směs aceton/voda | 27 | |
Voda | 59 |
Výsledky ukazují, že AQ713 produkuje metabolit, který je extrahovatelný organickým rozpouštědlem, a který usmrcuje brouky rodu Diabrotica.
Abychom stanovili molekulovou hmotnost aktivního metabolitů, byl AQ713 pěstován na mediu 2 v kultuře o objemu 50 mL. Jeden mililitr kultury byl přenesen do centrifugaění zkumavky a centrifugován pri rychlosti 12000 otáček za minutu po dobu 15 minut. Supematant byl oddělen.
-12 CZ 302152 B6
500 mikrolitrů supematantu bylo naneseno na centrikonový filtr (rozhraní molekulové hmotnosti, 10000 daltonů). Po centrifugaci podle instrukcí výrobce (12000 otáček/min, 35 minut) byl odebrán filtrát a vzorek zadržený nad filtrem byl oddělen centrifugaci a promytím filtru. Vzorky supematantu, filtrátu a tekutiny, která zůstala zadržena nad filtrem, byly testovány na čerstvě vylíhlých larvách brouků rodu Diabrotica (destička o 96 jamkách s obsahem jamek podle Mamone et al., viz výše; 40 mikrolitrů vzorku na jamku a 8 jamek pro každý vzorek, 1 larva na jamku). Výsledky testu jsou uvedeny v tabulce 5.
Tabulka 5: Určení molekulové hmotnosti metabolitu kmene AQ713.
Procento mortality proti broukům rodu Diabrotica
AQ713 Supernatant 43
Filtrát 63
Tekutina zadržená na filtru 17
Výsledky ukazují, že supematant a filtrát byly aktivní proti broukům rodu Diabrotica a tedy molekulová hmotnost metabolitu je nižší než 10000 daltonů.
Příklad 4
Chemické vlastnosti metabolitu kmene AQ713 aktivního proti rostlinným patogenům.
Kmen AQ713 byl pěstován na mediu 2 v kultuře o objemu 50 mL. Ke každé kultuře bylo přidáno 50 mL ethylacetátu a směs byla třepána v děličce po dobu 2 minut. Vodná vrstva byla odstraněna a vrstva organického rozpouštědla byla převedena do baňky obsahující síran hořečnatý. Frakce v organickém rozpouštědle byla přefiltrována do baňky s kulatým dnem a rozpouštědlo bylo odpařeno na vakuové odparce.
Pro biologické stanovení byl odparek rozpuštěn ve 2,5 mL acetonu. Byl odebrán alikvot o objemu 40 mikrolitrů a naředěn na celkový objem 800 mikrolitrů směsí aceton/voda (70%). Tento roztok je označován jako 10 x koncentrovaný organický extrakt. Byla provedeno stanovení aktivity organického extraktu proti rostlinným patogenů Pythium ultimum a Botrytis cinerea na mikrodestičce o 96 jamkách (viz níže). Vzorek celé kultury (kompletní kultivační tekutina) měl hodnotu 100% (hodnota = 1), avšak 10 x koncentrovaný organický extrakt nevykázal žádnou aktivitu proti oběma rostlinným patogenům (hodnota = 4). To znamená, že aktivní antibiotika produkovaná AQ713, na rozdíl od aktivních metabolitů působících proti broukům rodu Diabrotica, nejsou extrahovatelná organickým rozpouštědlem jako je ethylacetát.
Další testování zahrnulo izolaci nové sloučeniny, agrastatinu A. Z fermentační tekutiny byl připraven butanolový extrakt, nejprve dvojitou extrakcí s jedním objemem ethylacetátu. a vrstvy byly ponechány, aby se oddělily. Poté byla vodná frakce extrahována dvakrát jedním objemem butanolu. Butanolové extrakty byly spojeny a rozpouštědlo odstraněno odpařením na rotační odparce. Lyofilizací výsledného odparku byl připraven práškový produkt.
Prášek byl rozpuštěn ve směsi acetonitril/voda (80 %) a sonikován. Roztok byl extrahován pomocí extrakce na C-l8 pevné fázi (SPE extraction), která byla aktivována methanolem a ekvilibrována směsí aceton itril/voda (80 %). Náplň SPE byla eluována směsí ACN/voda (80 %) a eluát byl posléze odpařen. Eluované látky byly dále purifikovány pomocí HPLC, Byla použita kolona
- 13CZ 302152 B6
C—18 (1 cm x 25 cm) pro HPLC chromatografii (UV detekce pří 210 nm) s gradientem rozpouštědel acetonitril + 0,05 % směs TFA/voda + 0,05 % TFA v následujícím režimu: 0 až 20 minut, 33 % ACN; 20 až 30 minut, 40 % ACN; 30 až 45 minut 45 až 55 % ACN; a 45 až 63 minut, 55 % ACN.
HPLC chromatogram AQ713 ukazuje přítomnost iturinů, sloučenin iturinu podobných (plipastatiny a agrastatiny) a surfaktinů, viz obr. 1. lturiny A2, A3, A4, A7 a A6 byly identifikovány pomocí kombinace dat z NMR, kapalinové chromatografie-hmotnostní spektrometrie a porovnáním s údaji v literatuře. Surfaktiny byly identifikovány porovnáním s koupenými surfaktinovými to standardy pomocí HPLC a kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií.
Pomocí aminokyselinové analýzy a kapalinové chromatografie spojené s hmotnostní spektrometrií bylo zjištěno, že iturinům podobné látky jsou směsí plipastatinů a nových agrastatinů. Pro jednu z nových sloučenin byl rovněž shromážděn rozsáhlý soubor dat NMR (HPLC, peak 20);
tato látka byla pojmenována agrastatin A. Bylo zjištěno, že agrastatin A obsahuje tyto aminokyseliny: Thr; 3 Glu; Pro; Ala; Val; 2 Tyr; a Om. To značí rozdíl proti plipastatinů A daný přítomností Val a ztrátou Ile. Molekulová hmotnost agrastatinů A byla stanovena 1448, což odpovídá následující struktuře:
CH3(CH2)i2-CH-CH2’CO-Glu-Om-Tyr-Thr-Glu-Ala-Pro-GIn-Tyr-Val
Povaha přímého řetězce části obsahující mastnou kyselinu byla potvrzena ’HNMR. Poloha aminokyselin v cyklickém peptidu byla určena podrobnou analýzou pomocí souborů dat TOCSY a ROESY.
Hmotnostní spektrometrie a aminokyselinová analýza agrastatinů B (HPLC, peak 26) ukazují, že jeho struktura je podobná plipastatinů B2 s náhradou zbytku Ala Val. Struktura je uvedena níže:
C H,C HzCH (CH2)10-CH-CH2CO-Glu-Om-Tyr-Thr-Ghj-Va)-Pro-Gln-Tyr-VaJ CH, OH O-1
Příklad 5
Aktivita kmene AQ713 proti rostlinným patogenům v kultuře in vitro (mikrodestička o 96jam35 kách).
S cílem určit, zda AQ713 je účinný proti houbám Phytophtkora infestans, Pythium ultimum, Botrytis cinerea, Rhizoctonia solani a Alternaria solemi, byly provedeny následující experimenty. Mikrodestičky o 96 jamkách (s plochým dnem, 400 mikrolitrů na jamku, Nunc) byly naplněny agarovým mediem (bramborový dextrózový agar, PDA, Difco). Kultury P. infestans byly kultivovány po dobu 3 dnů v tekutém mediu YPG-1 (0,4 % kvasinkový extrakt, 0,1 % KH2PO4, 0,5 % MgSO4 . 7H2O, 1,5 % glukóza). V případě ostatních druhů hub byly spory seškrábnuty z povrchu agarových ploten a alikvoty o objemu 0,1 až 0,2 mL deíonizované vody a sporové suspenze (o koncentraci přibližně 2 x 106 spor/mL) patogenní houby byly naneseny na agar.
Kmen AQ713 byl kultivován po dobu 72 hodin v mediu 2 nebo 3 tak jak je popsáno v Příkladu 2. Supematanty byly získány centrifúgací kompletní kultivační tekutiny kultury při rychlosti 5200 otáček za minutu po dobu 20 minut. Houbové organismy patogenní pro rostliny byly napipetovány na destičky o 96 jamkách (8 jamek pro 1 patogenní organismus). Přítomnost a nepří- 14 CZ 302152 B6 tomnost růstu houby byla zaznamenávána pro všech 8 jamek. Do každé jamky bylo přidáno přibližně 40 mikrolitrů supematantu kultury AQ713 nebo 20 mikrolitrů kompletní kultivační tekutiny. Hodnota 1 znamená úplnou inhibici růstu houbového organismu. Hodnota 4 znamená nulovou inhibici růstu houby. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 6.
Tabulka 6: Inhibice růstu houbových organismů in vitro (destička s 96 jamkami)
Supematant AQ713 | Medium 2 Hodnoty | Medium 3 Hodnoty |
Phytophthora infestans | 1 | l |
Pythium ultimum | 1 | 1 |
Botrytis cinerea | l | 1 |
Rhizoctonia solani | 4 | l |
Alternaria solani | 1 | 1 |
Kompletní kultivační tekutina kultury AQ713
Colletotrichum cocodes | 1 | NT |
Alternaria brassicicola | 1 | NT |
Botrytis cinerea | 1 | NT |
Cladosporium cucumerinum | 1 | NT |
Monilia fructicola | 1 | NT |
Venturia pyrina | l | NT |
Rhizoctonia solani | 1 | NT |
Alternaria solani | 1 | NT |
NT = netestováno.
Výsledky ukazují, že kmen AQ713 má široké fungicidní spektrum in vitro, a že jak kompletní kultivační tekutina tak i supematant jsou vysoce aktivní. Supematant byl aktivní proti houbě Rhizoctonia solani, jestliže byla bakterie AQ713 pěstována na mediu 3, ale ne jestliže byla pěstována na mediu 2,
Příklad 6
Aktivita kmene AQ713 proti rostlinným patogenům v kultuře in vitro (zónové stanovení)
Pro stanovení aktivity kmene AQ713 metodou difúze v agaru (zónová metoda), byly spory rostlinných patogenů naočkovány na povrch bramborového dextrózového agaru v Petriho miskách o průměru 10 cm. Do agaru byly udělány jamky o velikosti 7 mm a do těchto jamek byly vneseny 100 mikrolitrové vzorky supematantu kultury AQ713 narostlé v mediu 2. Supematant byl připra25 ven centrifugací při rychlosti 4200 otáček za minutu po dobu 40 minut. Supematant byl poté ještě jednou zcentrifugován za stejných podmínek (4200 ot./min, 40 minut). Typické výsledky zahrnovaly vznik zóny bez jakéhokoli růstu patogenního organismu okolo jamky a/nebo s redukovaným růstem tohoto patogenního organismu. Velikost zóny vyjádřená v milimetrech byla změřena a zaznamenána. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 7.
- 15CZ 302152 B6
Tabulka 7: Inhibice růstu houbových rostlinných patogenů in vitro (zónový test)
Velikost zóny (mm) | |||
Alternaria brassicicola | Botrytis cinerea | Monilia fructicola | |
Supematant AQ713 | 16 | 23 | 14 |
Kompletní kultivační tekutina | |||
kultury AQ713 | 22 | 15 | 18 |
Příklad 7
Aktivita kmene AQ713 proti bakteriálním rostlinným patogenům
Standardní stanovení pomocí difúze v agaru bylo založeno jako v Příkladu 6. Povrch Petriho misky byl zaoČkován bakteriálním patogenním mikroorganismem tak, aby mohl vytvořit souvislý nárůst. Do každé jamky bylo napipetováno 100 mikrolitrů kompletní kultivační tekutiny kultury kmene AQ713 rostoucího na mediu 2. Velikost zóny byla vyjádřena v milimetrech.
Tabulka 8: Inhibice bakteriálních rostlinných patogenů in vitro (zónový test)
Kompletní kultivační tekutina kultury AQ713
Inhibiční zóna (mm)
Acidovorax avenae subsp. citrulli 18
Pseudomonos syringae pv. tomato 11
Xanthomonas campestris pv. campestris 18
Erwinia carotovora subsp. carotovora 11
Clavibacter michiganense subsp. michiganense 22
AQ713 byl aktivní proti všem druhům bakteriálních rostlinných patogenů testovaným in vitro.
Příklad 8
Aktivita kmene AQ713 proti rostlinným patogenům v rostlinných testech
Aktivita kmene AQ713 byla testována proti šedé plísni Botrytis cinerea na fazolích a na listech pelargonie, proti Alternaria solani na semenáčcích rajčete, a proti plísni salátové Bremia lactucae na salátu.
V případě A. solani byly semenáčky rajčete ve stadiu 2 až 3 listů vysazeny ve skupinách po šesti rostlinách a byly postříkány, až přebytečná tekutina začala odtékat, kompletní kultivační tekutinou kultury kmene AQ713 rostoucí na mediu 2. Po postřiku byly semenáčky ponechány aby oschly (asi 1,5 hodiny). Semenáčky byly poté postříkány suspenzí obsahující 5,0 x 104 spor/mL. Semenáčky byly zakryty plastikovým krytem a inkubovány při teplotě 28 °C v Percivalově inkubátoru. Voda bez AQ713, sa bez spor patogenního organismu, byla použita jako negativní kontrola a pozitivní patogenní kontrola. O čtyři dny později byl test vyhodnocen. Ve vodné kont- 16CZ 302152 B6 role A. solani byly zjištěny uniformní leze na všech listech a dělohy byly odděleny a silně infikovány (hodnota 5 = úplná infekce, žádná inhibice). Rostliny ošetřené kmenem AQ713 měly několik lehkých lézí rozptýlených na skutečných listech. Dělohy byly neoddělené, ale měly na sobě několik malých lézí (hodnota 1). Negativní kontrola nebyla infikována.
Druhý test byl proveden s oddělenými rajčatovými semenáčky (stonky ulomené na úrovni půdy) umístěnými do kameninových nádob naplněných vodou, které byly zakryty plastikovými kryty a uchovávány jak je uvedeno výše. Rostliny byly postříkány tak jak je uvedeno výše a příznaky infekce A. solani byly zaznamenány po čtyřech dnech. U negativních kontrol nebyly žádné io příznaky. U pozitivních kontrol byly na semenáčcích nalezeny uniformní léze. Ošetření pomocí kmene AQ713 bylo hodnoceno jako 1 (málo nebo žádné léze). O dva dny později byly rostliny pozitivní kontroly zničeny, avšak semenáčky ošetřené kmenem AQ713 byly naprosto čisté a vypadaly stejně jako negativní kontroly (vodou postříkané rostliny).
ís V případě testu sBotrytis cinerea byly první skutečné listy rostliny fazole poraněny přitlačením ústí kultivační zkumavky o rozměru 13 x 100 mm na každý list. Na každém listě byla takto vytvořena dvě poranění. Listy byly postříkány kompletní kultivační tekutinou kultury kmene AQ713 rostoucího na mediu 2 nebo samotnou vodou nebo samotným patogenním organismem. Po usušení byly listy opět postříkány sporami B. cinerea (0,8 χ 106 spor/mL). Listy byly umístě20 ny v sadbovačích překrytých plastickými kryty a uchovávány při teplotě 18 až 20 °C v Pere i valově inkubátoru. Po pěti dnech byla pozitivní kontrola (samotný patogen) postižena hnilobou v oblasti mající průměr asi 25 mm. Negativní kontrola (samotná voda) nevykazovala žádné známky hniloby. V případě aplikace AQ713 nebyla zjištěna žádná infekce na 7 z 8 kruhů, kde listy byly poraněny. Jediný kruh, který vykazoval infekci, měl známky lehké infekce na dvou místech okolo kruhu.
V případě testu s houbou Bremia byla semena salátu umístěna do vrstvy sterilizované směsi užívané v květináčích, která obsahovala rašelinu, perlit a vermikulit v malých rostlinných kondominiích z čiré plastické hmoty, která byla asi 8 centimetrů vysoká a široká. Po vyklíčení semen (1 týden) byly semenáčky salátu postříkány kompletní kultivační tekutinou kultury AQ713 nebo vzorkem supematantu. Rostliny byly ponechány, aby oschly, a poté byla na semenáčky nastříkána suspenze spor salátové plísně z infikovaných semenáčků salátu. Přes rostliny byly umístěny kryty z plastické hmoty a rostliny byly inkubovány při teplotě 18 až 20 °C v Percivalově inkubátoru. Po jednom týdnu byl test vyhodnocen. Kmen AQ713 nezabránil rozvinutí salátové plísně
Bremia na semenáčcích salátu.
Příklad 9
4tí Účinnost kmene AQ713 proti rostlinným onemocněním (skleníkový test)
Nepravé padlí hroznů (grape downy mildew)
Kmen AQ713 byl kultivován v mediu obsahujícím sóju ve 400 litrovém fermentoru po dobu 45 48 hodin. Rostliny vinné révy (kultivar Chardonnay) byly postříkány kompletní kultivační tekutinou kultury zředěnou 2 x a 4 x sterilní vodou pomocí ruční stříkačky až do stupně kdy tekutina začala stékat po povrchu. Po oschnutí byly rostliny postříkány podruhé. Po osušení byly rostliny inokulovány patogenním organismem vyvolávajícím nepravé padlí hroznů, Plasmopara viticola.
Každou dávkou byly ošetřeny 3 rostliny. Každá rostlina byla hodnocena z hlediska procenta inhi50 biče onemocnění, které mělo hodnotu od 0 do 100 % kontroly. 100 % kontrola je rostlina, která nemá viditelné léze. Chemický fungicid metalaxyl byl použit pro srovnání. Získané výsledky byly následující:
AQ713 2 x zředěná kompletní kultivační tekutina 97,7 % kontroly 55 AQ713 4 x zředěná kompletní kultivační tekutina 100 % kontroly
- 17 CZ 302152 B6
Metalaxyl 30 ppm Metalaxyl Í0 ppm Metalaxyl 1 ppm
100 % kontroly 98,3 % kontroly % kontroly
Výsledky ukazují, že kmen AQ713 inhiboval nepravé padlí hroznů stejně jako chemický fungicid.
Příklad 10 io
Účinnost kmene AQ713 proti padlí tykve (squash powdery mildew)
Kmen AQ713 byl kultivován na sójovém mediu ve 400 litrovém fermentoru po dobu 48 hodin. Rostliny tykve (Crookneck a Acom) byly postříkány kompletní kultivační tekutinou z fermentace ve 400 litrovém fermentoru (viz výše) a touto tekutinou 2 x zředěnou sterilní vodou pomocí ruční stříkačky do stadia, kdy tekutina začala stékat. Po oschnutí byly rostliny inokulovány patogenem Sphaerotheca fuliginea působícím padlí tykve. Každou dávkou byly ošetřeny 2 rostliny. Rovněž byl testován prášek kompletní kultivační tekutiny kultury získaný sušením v sprej ové sušárně. Kompletní tekutina kultury z kultivace ve 400 litrovém fermentoru byla sušena ve sprejové sušárně. 10 % a 2,5 % roztoky tohoto prášku byly použity pro postřik rostlin až do stadia, kdy tekutina začala stékat (viz výše). Výskyt onemocnění padlí byl hodnocen v rozmezí 0 až 5. Hodnota 5 znamená 100 % onemocnění, zatímco 0 znamená žádné onemocnění. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 9.
Tabulka 9
Testovaná Tykev Acom Tykev Acom Tykev Crookneck Tykev Crookneck suspenze rostlina 1 rostlina 2 rostlina 1 rostlina 2
AQ713 kompletní kultivační tekutina
AQ713 2 x zředěná kompletní kultivační tekutina
AQ713 sprejové
10% sušený prášek
AQ713 2,5 % sprejové sušený prášek
0 0
0 0
0 0
0 0,5
- 18CZ 302152 B6
Kompletní tekutina z kultivace kmene AQ713 a sprejově sušený prášek téměř úplně inhibovaly padlí tykve.
Příklad 11
Účinnost kmene AQ713 při použití ve skleníku proti plísni bramborové (latě blight), plísni šedé (gray mold), padlí révovému (grape powdery mildew), obilnému padlí (cereal powdery mildew), sněti pochvy působené korenomorkou bramborovou (sheath blight) a onemocnění rýže zvané „rice blast“.
Kmen AQ713 byl kultivován v sójovém mediu po dobu 72 hodin ve 250 ml třepacích bankách. Onemocnění, patogenní mikroorganismus vyvolávající toto onemocnění a hostitel jsou uvedeni níže v tabulce 10. Kompletní kultivační tekutina kultury kmene AQ713 byla testována na rostlinách tak, jak je uvedeno níže v tabulce 11.
Tabulka 10
Onemocnění Rostlinný patogen Hostitel
Plíseň bramborová (latě blight) Phytophthora infestans rajče
Plíseň šedá (gray mold) Botrytis cinerea paprika
Sněť pochvy (sheath blight) Rhizoctonia solani rýže
Rice blasť* Pyricularia oryzae rýže
Padlí révové (powdery mildew) Uncinula necator vinná réva
Padlí (powdery mildew) Drysiphe graminis f. sp. pšenice graminis
Kompletní kultivační tekutina kultury v neředěném stavu byla nanesena pomocí ruční stříkačky na testované rostliny až začala stékat z jejich povrchu. Po oschnutí byl postřik proveden podruhé. Tři rostliny byly ošetřeny pro každé onemocnění a léčbu. Po oschnutí byly rostliny inokulovány patogenními organismy. Každá rostlina byla hodnocena z hlediska procentuální inhibice onemocnění v rozsahu 0 až 100 % kontroly. 100 % kontrola znamená, že na rostlině nebyly viditelné léze. Chemické fungicidy byly použity pro srovnání. Index onemocnění znamená závažnost onemocnění na neošetrené kontrole.
- 19CZ 302152 B6
Tabulka 11
P. infestans | B. cinerea E. graminis CZ necatc | tr P. oryzae R. solani | ||
AQ713 70 | 100 84 | 100 | 100 | 100 |
Metalaxyl 100 30 ppm | ||||
Metalaxyl 77 10 ppm | ||||
Propiconazol 10 ppm | 87 | |||
Propiconazol 5 ppm | 57 | |||
Propiconazol 0,5 ppm | 100 | |||
Propiconazol 0,2 ppm | 54 | |||
Myclobutanil 30 ppm | 100 | |||
Myclobutanil 10 ppm | 100 | |||
Pencycuron 50 ppm | 100 | |||
Pencycuron 10 ppm | 100 | |||
Benomyl 100 ppm | 100 | |||
Benomyl 40 ppm | 77 | |||
Index onemocnění (%) 80 | 95 70 | 50 | 60 | 80 |
Kmen AQ713 vykazoval aktivitu, která byla ekvivalentní chemickým fungicidům na všech testovaných patogenních mikroorganismech.
-20CZ 302152 B6
Příklad 12
Účinnost kmene AQ713 proti plísni Peronospora parasitica postihující rostliny rodu Brassica (Brassica downy mildew)
Bakterie Bacillus kmen AQ713 byla kultivována v 10 litrovém fermentoru na sójovém mediu po dobu 48 hodin. Kompletní naředěná kultivační tekutina byla nastříkána na třítýdenní rostliny květáku a růžičkové kapusty ve stadiu s plně vyvinutými dělohami pomocí kompresorové stříkací pistole. Při každém ošetření byly nastříkány tři paralely zahrnující 15 až 25 semenáčků v jednom květináči. Azoxystrobinový fungicid Quadris™ od firmy Zeneca byl rovněž nastříkán na rostliny (tři najedno ošetření) v koncentraci 250 a 125 ppm. Sporová suspenze houby Peronospora parasitica, způsobující plíseň, v koncentraci l až 5 x 104 spor/mL byla nastříkána na rostliny Brassica poté, kdy oschly postřiky AQ713 a Quadris. Rostliny byly inkubovány při teplotě 15 až 17 °C po dobu 24 hodin z důvodů infikování. Poté byly semenáčky inkubovány při teplotě 20 až 24 °C po dobu šesti dnů. Květináče byly vráceny do teploty 15 až 17 °C na jednu noc, aby patogenní organismus vysporuloval před vyhodnocením testu. Každá rostlina byla hodnocena určením hodnoty procentní inhibice onemocnění v rozsahu 0 až 100 % kontroly. 100 % kontrola je rostlina, která nemá žádné sporulační léze. Průměrné výsledky ze tří paralel jsou uvedeny níže v tabulce
12.
Tabulka 12
Hodnocení 23. prosince | Hodnocení 30. prosince | Hodnocení 6. ledna | |
Kompletní kultivační tekutina AQ713 | 100 | 90 | 75 |
Quadris 250 ppm | 100 | NT | NT |
Quadris 125 ppm | NT | 100 | 100 |
Kontrola voda | 0 | 0 | 0 |
NT = netestováno
AQ713 účinně inhiboval plíseň Peronospora parasitica po dobu 3 týdnů.
Příklad 13
Synergísmus kmene AQ713 a komerčního fungicidu
Kmen AQ713 byl kultivován v 10 litrovém fermentoru na sójovém mediu po dobu 72 hodin. Bakteriální kultura byla zředěna 2 x a 4 x sterilní vodou. Naředěná kultura, 2 x ředěná kultura a 4 x ředěná kultura byly nastříkány na třítýdenní rostliny papriky kompresorovou stříkací pistolí. Tri rostliny byly nastříkány na jedno ošetření. Azoxystrobinový fungicid Quadris™ od firmy Zeneca byl rovněž nastříkán na rostliny (tri na jedno ošetření) v koncentracích 500, 250 a 125 ppm. Kromě toho byla na rostliny papriky nastříkána kombinace Quadris a kompletní kultivační tekutiny AQ713 v poměru 1:1 (tři rostliny najedno ošetření). Ošetření s a bez Quadris jsou uvedeny v tabulce 13. Sporová suspenze šedé plísně Botrytis cinerea v koncentraci lx 10^ spor/mL byla nastříkána na rostliny papriky po oschnutí postřiků AQ13 a Quadris. Rostliny
-21 CZ 302152 B6 byly inkubovány při teplotě 20 až 22 °C po dobu 3 dnů do vyhodnocení testu. Byl hodnocen výskyt onemocnění šedou plísní v rozsahu hodnot 0 až 5. Hodnota 5 znamená 100 % výskyt onemocnění, zatímco hodnota 0 znamená nepřítomnost onemocnění. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 13.
Tabulka 13
Ošetření Hodnocení Paralela 1 | Hodnocení Paralela 2 | Hodnocení Paralela 3 | Hodnocení Průměr | |
AQ713 neředěná | 0.5 | 0,5 | 1,5 | 0,8 |
AQ713 2 x ředěná | 2,0 | 2,5 | 2,0 | 2,2 |
AQ713 4 x ředěná | 3,0 | 3,0 | 2,0 | 2,7 |
Quadris 500 ppm | 4,0 | 3,5 | 4,0 | 3,8 |
Quadris 250 ppm | 2,5 | 3,5 | 3,0 | 3,0 |
AQ713 neředěná* Quadris 500 ppm | 0,5 | 1,0 | 1,0 | 0,8 |
AQ713 neředěná* Quadris 250 ppm | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 0,8 |
AQ713 2 x ředěná* Quadris 250 ppm | 0,5 | 1,0 | 1,0 | 0,8 |
AQ713 4 x ředěná* Quadris 250 ppm | 0,5 | 1,0 | 2,5 | 1,3 |
Kontrola voda | 4,0 | 5,0 | 5,0 | 4,7 |
Kontrola voda 2 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
Výsledky jasně ukazují, že kombinace Quadris a kmene AQ713 inhibují onemocnění plísní šedou lépe než samotný Quadris nebo kmen AQ713.
Průmyslová využitelnost
Přihláška vynálezu se týká oblasti biopesticidů. Nový kmen Bacillus subtilis AQ713 inhibuje řadu houbových a bakteriálních onemocnění rostlin a rovněž vykazuje aktivitu proti broukům rodu Diabrotica. Přihláška vynálezu se rovněž týká fungicidních, bakterie i dn ích a insekticidních prostředků obsahujících tento nový kmen Bacillus subtilis spolu s antibiotiky a metabolity produkovanými tímto kmenem, které jsou použity samotné nebo v kombinaci s jinými chemickými a biologickými pesticidy.
Claims (18)
- PATENTOVÉ NÁROKY5 1, Kmen Bacillus subtilis AQ713, uložený vNRRL pod přírůstkovým číslem B-21661 nebo mutant tohoto kmene, přičemž mutant vykazuje antifungální a antibakteriální aktivitu a aktivitu proti broukům rodu Diabrotica.
- 2. Kmen Bacillus subtilis AQ7I3 podle nároku 1, uložený v NRRL pod přírůstkovým číslem io B-21661.
- 3. Kompletní kultivační tekutina kmene podle nároku 1 nebo 2.
- 4. Supematant získaný z kultury kmene Bacillus subtilis AQ713 podle nároku 1, vyznai5 č u j í c í se t í m , že vykazuje antifungální a antibakteriální aktivitu a aktivitu proti broukům rodu Diabrotica.
- 5. Prostředek pro ošetření a ochranu rostlin proti fungální a bakteriální infekci, vyznačující se t í m, že obsahuje buďi) kmen podle nároku 1 nebo 2, nebo i i) kompletní kultivační tekutinu podle nároku 3, nebo iii) supematant podle nároku 4,25 a chemický fungicid nebo biologický pesticid nebo chemický pesticid.
- 6. Prostředek podle nároku 5, vyznačující se tím, že obsahuje chemický fungicid.
- 7. Způsob ochrany nebo léčení rostlin a plodů před houbovými a bakteriálními infekcemi nebo30 napadením brouky rodu Diabrotica, vyznačující se tím, že zahrnuje aplikaci účinného množství kmene Bacillus subtilis podle nároku 1 nebo 2, kompletní kultivační tekutiny podle nároku 3, supematantu podle nároku 4 nebo prostředku podle nároku 5 nebo 6.
- 8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že infekce jsou vyvolány alespoň35 jedním mikroorganismem vybraným ze skupiny zahrnující Phytophthora infestans, Rhizoctonia solani, Pythium ultimum, Botrytis cinerea, Alternaria solani, Colletotrichum cocodes, Altemaria brassicicolia, Cladosporium cucumerinum, Monilia fructicola, Ven tur ia pyrina, Acidovorax avenae, Pseudomonas syringae, Xanthomonas campestris, Erwinia carotovora, Clavibacter michiganense, Plasmopara viticola, Sphaerotheca fuliginea, Uncinula necator a Peronospora40 parasitica.
- 9. Způsob podle nároku 7 nebo 8, vyznačující se tím, že kmen Bacillus subtilis podle nároku 1 nebo 2, kompletní kultivační tekutina podle nároku 3, supematant podle nároku 4 nebo prostředek podle nároku 5 nebo 6 je ve formě zvlhčitelných prášků, granulí, v tekuté formě45 nebo ve formě mikrokapsulí.
- 10. Způsob podle nároků 7až9, vyznačující se tím, že kmen Bacillus subtilis podle nároku 1 nebo 2, kompletní kultivační tekutina podle nároku 3, supematant podle nároku 4 nebo prostředek podle nároku 5 nebo 6 je aplikován na kořeny rostlin nebo půdu okolo kořenů.
- 11. Prostředek pro ošetření a ochranu rostlin proti fungální a bakteriální infekci, vyznačující se tím, že obsahuje iturin typu A, plipastatin a surfactin získatelné z kmene Bacillus subtilis AQ713 podle nároku 1 nebo 2.-23CZ 302152 B6
- 12. Prostředek pro ošetření a ochranu rostlin proti fungální a bakteriální infekci podle nároku 11, vyznačující se tím, že dále obsahuje agrastatin získatelný z kmene Bacillus subtilis AQ713 podle nároku I nebo 2.
- 13. Způsob ochrany nebo léčení rostlin a plodů proti fungální a bakteriální infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje aplikaci účinného množství sloučeniny:R,-CH-CH2-CO-Glx-Om-Ty-Thr-Glx-X-Pro-Glx-Tyr-Val or2 o---1 kde Rt je rozvětvený nebo přímý alifatický postranní řetězec mající 8 až 20 atomů uhlíku; R2 je acetát nebo derivát esteru; X je Ala; a Glx je Gin nebo Glu.
- 14. Způsob ochrany nebo léčení rostlin a plodů proti fungální a bakteriální infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje aplikaci účinného množství sloučeniny:CH3(CH2)u-CH-CHj-CO-Glu-Om-Tyr-Thr-Glu-Ala-Pro-Gln-Tyr-ValOH O---1
- 15. Způsob ochrany nebo léčení rostlin a plodů proti fungální a bakteriální infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje aplikaci účinného množství prostředku podle nároku 11.
- 16. Způsob ochrany nebo léčení rostlin a plodů proti fungální a bakteriální infekci, vyznačující se tím, že zahrnuje aplikaci účinného množství prostředku podle nároku 12.
- 17. Sloučenina obecného vzorceRi-CH-CH2-CO-Glx-Om-T)jr-Thr-Glx-X-Pro-Glx-Tyr-Val or2 o--kde R| je větvený nebo přímý alifatický postranní řetězec mající 8 až 20 atomů uhlíku; R2 je acetát nebo derivát esteru a Glx je Gin nebo Glu.
- 18. Sloučenina obecného vzorceCH3(CH2)i2-CH-CH2-CO-Glu-OmOH <yr-Thr-Giu-Ala-Pro-Gln-Tyr-Val2 výkresy-24CZ 302152 B6R-(pH-CH2-CO-Glu-Om-Tyr-Thr-Glu-X-Pro-Gln-Tyr-lle OH 0Plipastatin Al, X - Ala, R = CH3(CH2)i2Plipastatin A2, X = Ala, R = CH3CH2CHCH3(CH2)ioPlipastatin Bl, X = Val, R = CH3<CH2)i2Plipastatin B2, X = Val, R = CH3CH2CHCH3(CH2ho-
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US85375397A | 1997-05-09 | 1997-05-09 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ9903757A3 CZ9903757A3 (cs) | 2000-11-15 |
CZ302152B6 true CZ302152B6 (cs) | 2010-11-18 |
Family
ID=25316803
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ0375799A CZ302152B6 (cs) | 1997-05-09 | 1998-05-08 | Nový kmen Bacillus pro kontrolu onemocnení rostlin a napadení brouky rodu Diabrotica |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6060051A (cs) |
EP (1) | EP0981540B1 (cs) |
JP (2) | JP3471815B2 (cs) |
KR (1) | KR100616372B1 (cs) |
CN (1) | CN1255143A (cs) |
AT (1) | ATE332915T1 (cs) |
AU (1) | AU732724B2 (cs) |
BG (1) | BG103855A (cs) |
BR (1) | BR9809282A (cs) |
CA (2) | CA2289916C (cs) |
CZ (1) | CZ302152B6 (cs) |
DE (1) | DE69835206T2 (cs) |
DK (1) | DK0981540T3 (cs) |
ES (1) | ES2268774T3 (cs) |
HU (1) | HUP0004555A3 (cs) |
ID (1) | ID23681A (cs) |
IL (3) | IL132533A0 (cs) |
MX (2) | MX214455B (cs) |
NO (1) | NO995462L (cs) |
NZ (1) | NZ500506A (cs) |
PL (1) | PL198772B1 (cs) |
PT (1) | PT981540E (cs) |
SK (1) | SK283036B6 (cs) |
TR (1) | TR199902765T2 (cs) |
TW (1) | TW592639B (cs) |
WO (1) | WO1998050422A1 (cs) |
Families Citing this family (265)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK0981540T3 (da) * | 1997-05-09 | 2006-11-06 | Agraquest Inc | Ny Bacillus-stamme til bekæmpelse af plantesygdomme og af majsrodgnaver |
US6103228A (en) * | 1997-05-09 | 2000-08-15 | Agraquest, Inc. | Compositions and methods for controlling plant pests |
JP3789303B2 (ja) * | 1999-01-14 | 2006-06-21 | ゴールド興産株式会社 | 新種の微生物およびその利用法 |
CN1351652A (zh) * | 1999-03-30 | 2002-05-29 | 阿格拉奎斯特公司 | 用于控制植物疾病的短小芽孢杆菌菌株 |
JP4536856B2 (ja) * | 2000-01-25 | 2010-09-01 | カゴメ株式会社 | 植物疫病の防除剤および防除方法 |
US6660263B2 (en) * | 2000-05-18 | 2003-12-09 | Hmv Corporation | Oocydin and methods of use for protection of plants from Oomyocyte pathogens |
US6926892B2 (en) * | 2000-05-18 | 2005-08-09 | Hmv Corporation | Protecting plants from oomycete pathogens by treatment with compositions containing serratamolide and oocydin a from Serratia marcescens |
KR100407074B1 (ko) * | 2000-08-18 | 2003-11-28 | 대한민국 | 한국 전통 젓갈 유래 항균 펩타이드 생산 미생물 균주 |
ATE441707T1 (de) * | 2000-09-29 | 2009-09-15 | Showa Denko Kk | Verfahren zur surfactin herstellung |
AU2002257272A1 (en) * | 2001-05-17 | 2002-11-25 | Hmv Corporation | Method to protect plants from oomycete pathogens with serratia marcescens |
US7097830B2 (en) * | 2001-09-04 | 2006-08-29 | Council Of Scientific And Industrial Research | Synergistic bioinoculant composition comprising bacterial strains of accession Nos. NRRL B-30486, NRRL B-30487, and NRRL B-30488 and a method of producing said composition thereof |
JP4071036B2 (ja) * | 2001-11-26 | 2008-04-02 | クミアイ化学工業株式会社 | バシルスsp.D747菌株およびそれを用いた植物病害防除剤および害虫防除剤 |
US6995007B2 (en) * | 2001-12-21 | 2006-02-07 | University Of Massachusetts | Antifungal bacterium ATCC PTA-4838 |
US6589524B1 (en) * | 2002-02-07 | 2003-07-08 | Ecomicrobials, Llc | Strains of Bacillus for biological control of pathogenic fungi |
KR101043938B1 (ko) * | 2002-09-24 | 2011-06-29 | 쇼와 덴코 가부시키가이샤 | 이투린에이 및 동족체의 제조법 |
AU2003273521A1 (en) * | 2002-09-24 | 2004-04-19 | Showa Denko K. K. | Production method of iturin a and its homologues |
US7092692B2 (en) * | 2003-03-31 | 2006-08-15 | Agency For Science, Technology And Research | Threshold voltage (Vth), power supply (VDD), and temperature compensation bias circuit for CMOS passive mixer |
US20040241250A1 (en) * | 2003-05-30 | 2004-12-02 | Rajamannan A. Harry J. | Composition and method for banana peel strengthening |
KR100587447B1 (ko) * | 2004-03-24 | 2006-06-12 | 한국화학연구원 | 바실러스 서브틸리스 eb120 균주, 이를 포함하는 식물병 방제용 미생물 제제 및 이를 이용하여 식물병을 방제하는방법 |
US7211428B1 (en) * | 2004-05-18 | 2007-05-01 | Council Of Scientific And Industrial Research | Strain of Bacillus as a bioinoculant |
US7994138B2 (en) | 2004-06-01 | 2011-08-09 | Agscitech Inc. | Microbial biosurfactants as agents for controlling pests |
KR100767437B1 (ko) * | 2005-10-07 | 2007-10-17 | 염규진 | 바실러스 서브틸리스 kccm 10639 또는 kccm10640을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이들을 이용한식물병 방제 방법 |
KR101131563B1 (ko) * | 2006-11-17 | 2012-04-04 | 조선대학교산학협력단 | 신균주인 바실러스 서브틸리스 에스원, 이로부터 정제한 신규 펩타이드 및 이의 용도 |
US8211828B2 (en) | 2007-01-19 | 2012-07-03 | Basf Se | Fungicidal mixtures of 1-methylpyrazol-4-ylcarboxanilides and azolopyrimidinylamines |
US7981685B2 (en) | 2007-04-16 | 2011-07-19 | Modular Genetics, Inc. | Generation of acyl amino acids |
WO2009031874A1 (es) * | 2007-09-04 | 2009-03-12 | Jorge Olmos Soto | Cepa de bacillus subtilis para uso agrícola |
EP3510869A1 (en) * | 2007-09-20 | 2019-07-17 | Bayer Cropscience LP | Combinations comprising a fungicidal strain and an active compound |
AU2014203689B2 (en) * | 2007-09-20 | 2016-02-04 | Bayer Cropscience Lp | Combinations comprising a fungicidal strain and an active compound |
KR100954297B1 (ko) * | 2007-10-05 | 2010-04-20 | 김달수 | 표면 미생물의 밀도증진 조성물과 그 용도 |
CL2008000602A1 (es) * | 2008-02-27 | 2008-06-27 | Univ Austral De Chile | Cepa de bacillus subtilis con deposito pta-8805 con actividad antagonista sobre rhizoctonia solani; formulacion de bioproductos encapsulado y liquido concentrado que comprende dicha bacteria; uso de los bioproductos para reducir y controlar biologica |
AU2009269456B2 (en) * | 2008-07-11 | 2012-07-12 | University Of Yamanashi | Novel microorganism and plant disease control agent using the microorganism |
RU2544952C2 (ru) | 2008-09-17 | 2015-03-20 | БАЙЕР КРОПСАЙЕНС ЭлПи | СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ ШТАММА BacilluS subtilis QST713 ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ РОСТА ЖИВОТНОГО |
CN101831481B (zh) * | 2009-03-10 | 2012-08-08 | 中国科学院成都生物研究所 | 一种新的伊枯草菌素a及其同系物的制备方法 |
CN102361551B (zh) * | 2009-03-26 | 2015-09-16 | 拜尔作物科学有限公司 | 合成的杀真菌剂和生物杀真菌剂组合用于控制有害真菌的用途 |
PE20120347A1 (es) * | 2009-05-06 | 2012-04-12 | Basf Se | Composicion que comprende una cepa de bacillus subtilis con numero de acceso nrrl n° b-21661 y piraclostrobina |
CL2009001395A1 (es) * | 2009-06-11 | 2009-09-11 | Bio Insumos Nativa Spa | Composición fungicida y bactericida biológica, libre de antibioticos que comprende brevibacillus parabrevis nrrl b50390, bacillus subtilis nrrl b50391, bacillus cereus nrrl b50392 y bacillus cereus nrrl b50393; método de tratamiento antifúngico y/o bactericida de plantas; y mezcla bactericida y fungicida. |
CN101864377B (zh) * | 2010-03-16 | 2011-10-12 | 南京农业大学 | 防治梨枯梢病害的生防菌株sm16 |
JP5830084B2 (ja) * | 2010-03-17 | 2015-12-09 | バイエル クロップサイエンス エルピーBayer Cropscience Lp | 胃腸状態の予防及び処置にバチルス・ズブチリス菌株を使用する方法 |
CN101935628B (zh) * | 2010-06-13 | 2011-12-28 | 浙江大学 | 一种枯草芽孢杆菌及其用途 |
RU2013133873A (ru) | 2010-12-21 | 2015-01-27 | БАЙЕР КРОПСАЙЕНС ЭлПи | ШЕРОХОВАТЫЕ МУТАНТЫ Bacillus И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ УСКОРЕНИЯ РОСТА РАСТЕНИЙ, УЛУЧШЕНИЯ ЗДОРОВЬЯ РАСТЕНИЙ И БОРЬБЫ С БОЛЕЗНЯМИ И ВРЕДИТЕЛЯМИ |
KR101242098B1 (ko) * | 2011-05-23 | 2013-03-11 | 한국국제대학교 산학협력단 | 시금치의 친환경 노균병 방제제 및 이를 이용한 시금치의 친환경 재배방법 |
RU2013157207A (ru) | 2011-05-24 | 2015-06-27 | БАЙЕР КРОПСАЙЕНС ЭлПи | Синергетические комбинации полиеновых фунгицидов и нерибосомальных пептидов и связанные с ними способы применения |
US9504257B2 (en) | 2011-05-26 | 2016-11-29 | Sds Biotek K.K. | Strain belonging to Bacillus genus, microbiological agent, and plant cultivation method |
MX361288B (es) | 2011-07-25 | 2018-12-03 | Bayer Cropscience Lp | Biocontrol de nematodos. |
KR101293640B1 (ko) | 2011-08-04 | 2013-08-07 | 대한민국 | 바실러스 서브틸리스 r2-1 균주를 포함하는 흰가루병 방제용 미생물 제제 |
ES2402726B1 (es) * | 2011-10-28 | 2014-03-13 | Investigaciones Y Aplicaciones Biotecnologicas, S.L. | Nueva cepa de bacillus subtilis destinada a luchar contra las enfermedades de las plantas. |
EP2773214B1 (en) | 2011-11-04 | 2018-05-02 | Bayer Cropscience LP | Biocontrol of nematodes |
CN102524911B (zh) * | 2011-12-21 | 2013-07-17 | 浙江万里学院 | 一种生物防腐剂及将该生物防腐剂用于食品防腐保鲜的方法 |
EP2817424A2 (en) * | 2012-02-21 | 2014-12-31 | Dupont Nutrition Biosciences ApS | Composition comprising fermentation products from bacillus subtilis |
WO2013152353A1 (en) | 2012-04-06 | 2013-10-10 | Bayer Cropscience Lp | Biocontrol of nematodes |
US9017442B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-04-28 | Novozymes Bioag A/S | Use of synergistic microorganisms and nutrients to produce signals that facilitate the germination and plant root colonization of mycorrhizal fungi in phosphorus rich environments |
EP3205210A1 (en) | 2012-05-30 | 2017-08-16 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the succinate dehydrogenase |
PT2854549T (pt) * | 2012-05-30 | 2018-11-28 | Bayer Cropscience Ag | Composição que compreende um agente de controlo biológico e fluopicolida |
TR201808095T4 (tr) | 2012-05-30 | 2018-06-21 | Bayer Cropscience Ag | Bir biyolojik kontrol ajanı ve bir insektisit içeren bileşimler. |
EP2854542B1 (en) | 2012-05-30 | 2018-08-01 | Bayer Cropscience AG | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
AR091200A1 (es) | 2012-05-30 | 2015-01-21 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida |
BR112014029123A2 (pt) | 2012-05-30 | 2017-06-27 | Bayer Cropscience Ag | composições compreendendo um agente de controle biológico e um inseticida |
AU2013269663B2 (en) * | 2012-05-30 | 2016-12-01 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
US9364006B2 (en) | 2012-05-30 | 2016-06-14 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide |
US9700056B2 (en) | 2012-05-30 | 2017-07-11 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of the ergosterol biosynthesis |
KR20150021502A (ko) | 2012-05-30 | 2015-03-02 | 바이엘 크롭사이언스 아게 | 생물학적 방제제 및 살곤충제를 포함하는 조성물 |
EP2854552B1 (en) | 2012-05-30 | 2019-05-08 | Bayer Cropscience AG | Composition comprising a biological control agent and a fungicide selected from inhibitors of amino acid or protein biosynthesis, inhibitors of atp production and inhibitors of the cell wall synthesis |
AR091197A1 (es) | 2012-05-30 | 2015-01-21 | Bayer Cropscience Ag | Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida |
MX355540B (es) * | 2012-05-30 | 2018-04-20 | Bayer Cropscience Ag | Composiciones que comprenden un agente de control biologico y un insecticida. |
WO2013178660A1 (en) * | 2012-05-30 | 2013-12-05 | Bayer Cropscience Ag | Compositions comprising a biological control agent and an insecticide |
MX2015005322A (es) * | 2012-11-15 | 2015-07-14 | Basf Corp | Composiciones de acolchado y tierra para macetas que contienen microorganismos y metodos relacionados. |
ES2785070T3 (es) | 2012-11-22 | 2020-10-05 | Basf Corp | Mezclas de pesticidas |
US20140148336A1 (en) | 2012-11-29 | 2014-05-29 | Magalie Guilhabert-Goya | Methods of controlling fungal pathogens using polyene fungicides |
WO2014124368A1 (en) | 2013-02-11 | 2014-08-14 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising gougerotin and a fungicide |
JP2016511244A (ja) | 2013-02-11 | 2016-04-14 | バイエル クロップサイエンス エルピーBayer Cropscience Lp | ストレプトミセス(Streptomyces)属に基づく生物的防除剤及び別の生物的防除剤を含んでいる組成物 |
WO2014151837A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Bayer Cropscience Lp | A bacillus subtilis strain for use in maintaining or improving the paw health of poultry |
CN105357970A (zh) | 2013-05-03 | 2016-02-24 | 麦德林行政、金融和技术大学 | 芽孢杆菌种的生物质和代谢物的生产方法及其用于生物害虫防治的组合物 |
AU2014274487A1 (en) * | 2013-05-31 | 2015-11-26 | Cornell University | Compositions and methods for enhancing germination |
JP6568059B2 (ja) * | 2013-07-11 | 2019-08-28 | バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト | 有用な植物における細菌性有害微生物を防除するための宿主防御誘発物質と生物的防除剤を含んでいる組合せの使用 |
EP3024329A1 (en) * | 2013-07-24 | 2016-06-01 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Binary fungicidal composition |
WO2015056666A1 (ja) | 2013-10-17 | 2015-04-23 | 出光興産株式会社 | 新規微生物およびその利用 |
US9485994B2 (en) | 2013-11-08 | 2016-11-08 | The Regents Of The University Of California | Synergy-based biocontrol of plant pathogens |
CN103805533A (zh) * | 2013-11-25 | 2014-05-21 | 豆食代(大连)农业科技有限公司 | 一种蜡状芽孢杆菌及其应用 |
US9877486B2 (en) | 2014-01-31 | 2018-01-30 | AgBiome, Inc. | Methods of growing plants using modified biological control agents |
KR102232252B1 (ko) | 2014-01-31 | 2021-03-26 | 아그바이오메, 인크. | 변형된 생물학적 방제제 및 그의 용도 |
EP2865265A1 (en) | 2014-02-13 | 2015-04-29 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations comprising phenylamidine compounds and biological control agents |
EP2865267A1 (en) | 2014-02-13 | 2015-04-29 | Bayer CropScience AG | Active compound combinations comprising phenylamidine compounds and biological control agents |
US9253988B2 (en) | 2014-03-13 | 2016-02-09 | Osprey Biotechnics, Inc. | Process for inhibiting Clostridium microorganisms |
US10716310B2 (en) | 2014-03-13 | 2020-07-21 | Phibro Animal Health Corporation | Strains of bacillus for inhibiting foodborne pathogens |
WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
US10251400B2 (en) | 2014-05-23 | 2019-04-09 | Basf Se | Mixtures comprising a Bacillus strain and a pesticide |
CN106793781B (zh) | 2014-05-28 | 2020-07-28 | 拜耳作物科学有限合伙公司 | 用于防治植物中的真菌性病害和细菌性病害的组合物和方法 |
EP2960249A1 (en) * | 2014-06-24 | 2015-12-30 | Symborg, S.L. | A bacillus licheniformis strain deposited under deposit number CECT 8307, isolated compounds and method for protecting or treating plants |
JP6598086B2 (ja) * | 2014-08-16 | 2019-10-30 | ディーシーエム シュリラム リミテッド | バチルス属の新規細菌およびその使用 |
AU2015317711B2 (en) | 2014-09-17 | 2019-11-21 | Basf Corporation | Compositions comprising recombinant Bacillus cells and another biological control agent |
WO2016044548A1 (en) | 2014-09-17 | 2016-03-24 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising recombinant bacillus cells and another biological control agent |
UA120628C2 (uk) | 2014-11-07 | 2020-01-10 | Басф Се | Пестицидні суміші |
WO2016106063A1 (en) | 2014-12-22 | 2016-06-30 | Bayer Corpscience Lp | Method for using a bacillus subtilis or bacillus pumilus strain to treat or prevent pineapple disease |
AR103287A1 (es) | 2014-12-29 | 2017-04-26 | Fmc Corp | Composiciones microbianas y métodos para usar para beneficiar el crecimiento de las plantas y tratar la enfermedad de las plantas |
CN104642390A (zh) * | 2015-01-28 | 2015-05-27 | 中国水稻研究所 | 一种生防细菌和嘧菌酯的组合物 |
WO2017011592A1 (en) | 2015-07-13 | 2017-01-19 | Modular Genetics, Inc. | Generation of acyl alcohols |
US10986842B2 (en) | 2015-11-10 | 2021-04-27 | Chr. Hansen A/S | Microbial pesticidal composition and production thereof |
CN105754917B (zh) * | 2016-01-07 | 2019-07-30 | 南京农业大学 | 一种Plipastatin衍生环五脂肽及其产生菌和应用 |
EP3205208A1 (en) | 2016-02-09 | 2017-08-16 | Basf Se | Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or fusaricidins and chemical pesticides |
EP3205209A1 (en) | 2016-02-09 | 2017-08-16 | Basf Se | Mixtures and compositions comprising paenibacillus strains or metabolites thereof and other biopesticides |
ES2897886T3 (es) | 2016-03-03 | 2022-03-03 | Bayer Cropscience Lp | Procedimiento de purificación de compuestos antifúngicos y exopolisacáridos a partir de un cultivo de células microbianas |
US10905122B2 (en) | 2016-03-16 | 2021-02-02 | Basf Se | Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on cereals |
EP3429358A1 (en) | 2016-03-16 | 2019-01-23 | Basf Se | Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on fruits |
US11241012B2 (en) | 2016-03-16 | 2022-02-08 | Basf Se | Use of tetrazolinones for combating resistant phytopathogenic fungi on soybean |
CN109068649A (zh) | 2016-04-24 | 2018-12-21 | 拜耳农作物科学股份公司 | 氟吡菌酰胺和/或枯草芽孢杆菌用于防治芭蕉科植物的枯萎病的用途 |
US11173184B2 (en) | 2016-05-31 | 2021-11-16 | Evonik Operations Gmbh | Bacillus subtilis strain with probiotic activity |
US20210228653A1 (en) | 2016-05-31 | 2021-07-29 | Evonik Degussa Gmbh | Bacillus licheniformis strain with probiotic activity |
AR109598A1 (es) | 2016-09-09 | 2018-12-26 | Koch Biological Solutions Llc | Mejora del rasgo fotosintético y de estrés por calor mediante el contacto de una planta con un bioestimulante que comprende pseudomonas psychrotolerans |
KR101849378B1 (ko) | 2016-10-27 | 2018-04-16 | 전남대학교산학협력단 | 바실러스 서브틸리스 y9 균주 및 이를 이용한 해충 방제용 조성물 |
EP3400801A1 (en) | 2017-05-10 | 2018-11-14 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Plant health effect of purpureocillium lilacinum |
AU2018211904A1 (en) | 2017-01-26 | 2019-08-08 | Bayer Cropscience Lp | Method of promoting bacillus spore germination |
US11464227B2 (en) | 2017-03-30 | 2022-10-11 | Advanced Biological Marketing, Inc. | Enhanced microbial and biorational control of nematode pests of plants |
TWI782983B (zh) | 2017-04-27 | 2022-11-11 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 雜芳基苯基胺基喹啉及類似物 |
US20200079801A1 (en) | 2017-05-03 | 2020-03-12 | Bayer Aktiengesellschaft | Trisubstitutedsilylbenzylbenzimidazoles and analogues |
WO2018202712A1 (en) | 2017-05-03 | 2018-11-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Trisubstitutedsilylmethylphenoxyquinolines and analogues |
EP3618632A1 (en) | 2017-05-03 | 2020-03-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Trisubstitutedsilylheteroaryloxyquinolines and analogues |
EP3645750A1 (en) | 2017-06-30 | 2020-05-06 | Evonik Operations GmbH | Bacillus pumilus |
US20200113952A1 (en) | 2017-06-30 | 2020-04-16 | Evonik Operations Gmbh | Bacillus subtilis strain with probiotic activity |
FR3069155B1 (fr) * | 2017-07-21 | 2020-07-10 | Lipofabrik | Composition comprenant une concentration elevee en lipopeptides ituriniques |
EP3447122A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-27 | Evonik Degussa GmbH | Bacillus subtilis strain with probiotic activity |
WO2019038153A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Evonik Degussa Gmbh | DEBACILLUS SUBTILIS STRAIN HAVING PROBIOTIC ACTIVITY |
CN107881128B (zh) * | 2017-10-27 | 2020-08-25 | 湖北省农业科学院中药材研究所 | 一株防治白术根腐病的菌株bzjn1及其制备方法和应用 |
WO2019092086A1 (en) | 2017-11-13 | 2019-05-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Tetrazolylpropyl derivatives and their use as fungicides |
TW201927768A (zh) | 2017-12-21 | 2019-07-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 三取代矽基甲基雜芳氧基喹啉及類似物 |
CN111836802A (zh) | 2018-02-12 | 2020-10-27 | 拜耳公司 | 杀真菌的*二唑 |
WO2019162228A1 (en) | 2018-02-21 | 2019-08-29 | Bayer Aktiengesellschaft | 1-(5-substituted imidazol-1-yl)but-3-en derivatives and their use as fungicides |
WO2019197371A1 (en) | 2018-04-10 | 2019-10-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Oxadiazoline derivatives |
MX2021000033A (es) | 2018-07-05 | 2021-03-25 | Bayer Ag | Tiofenocarboxamidas sustituidas y analogos como agentes antibacterianos. |
EP3823447A1 (en) | 2018-07-17 | 2021-05-26 | Bayer S.A.S. | Biological methods for controlling phytopathogenic fungi |
WO2020020813A1 (en) | 2018-07-25 | 2020-01-30 | Bayer Aktiengesellschaft | Fungicidal active compound combinations |
WO2020020816A1 (en) | 2018-07-26 | 2020-01-30 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel triazole derivatives |
JP2022500459A (ja) | 2018-09-17 | 2022-01-04 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 穀物中の麦角病菌の制御と菌核の低減のための殺菌剤イソフクシプラムの使用 |
WO2020070050A1 (en) | 2018-10-01 | 2020-04-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Fungicidal 5-substituted imidazol-1-yl carbinol derivatives |
WO2020079173A1 (en) | 2018-10-18 | 2020-04-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Pyridylphenylaminoquinolines and analogues |
US20210387964A1 (en) | 2018-10-18 | 2021-12-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Heteroarylaminoquinolines and analogues |
TW202028193A (zh) | 2018-10-20 | 2020-08-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 氧雜環丁基苯氧基喹啉及類似物 |
AR117169A1 (es) | 2018-11-28 | 2021-07-14 | Bayer Ag | (tio)amidas de piridazina como compuestos fungicidas |
EP3620052A1 (en) | 2018-12-12 | 2020-03-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of phenoxypyridinyl-substituted (1h-1,2,4-triazol-1-yl)alcohols for controlling fungicidal diseases in maize |
CA3124013A1 (en) | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterocyclyl pyridazine as fungicidal compounds |
CN109609402A (zh) * | 2018-12-21 | 2019-04-12 | 湖北工程学院 | 特基拉芽胞杆菌Bacillus tequilensis XG18和应用 |
EP3669652A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-24 | Bayer AG | Active compound combination |
WO2020127974A1 (en) | 2018-12-21 | 2020-06-25 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as new antifungal agents |
EP3679790A1 (en) | 2019-01-08 | 2020-07-15 | Bayer AG | Active compound combinations |
EP3679789A1 (en) | 2019-01-08 | 2020-07-15 | Bayer AG | Active compound combinations |
EP3679792A1 (en) | 2019-01-08 | 2020-07-15 | Bayer AG | Active compound combinations |
EP3679791A1 (en) | 2019-01-08 | 2020-07-15 | Bayer AG | Active compound combinations |
EP3679793A1 (en) | 2019-01-08 | 2020-07-15 | Bayer AG | Active compound combinations |
US20220117264A1 (en) | 2019-01-10 | 2022-04-21 | Evonik Operations Gmbh | Fermentation broths and their use |
US11807862B2 (en) | 2019-01-15 | 2023-11-07 | Seminis Vegetable Seeds, Inc. | Green bean plants with improved disease resistance |
WO2020165057A1 (en) | 2019-02-11 | 2020-08-20 | Evonik Operations Gmbh | Compositions containing bacillaene producing bacteria or preparations thereof |
AR118247A1 (es) | 2019-03-05 | 2021-09-22 | Bayer Ag | Combinación de compuestos activos |
WO2020182929A1 (en) | 2019-03-13 | 2020-09-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
WO2020200959A1 (en) | 2019-03-29 | 2020-10-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Method for controlling ganoderma disease in oil palm |
CN113840533A (zh) | 2019-05-08 | 2021-12-24 | 拜耳公司 | 活性化合物结合物 |
WO2020231751A1 (en) | 2019-05-10 | 2020-11-19 | Bayer Cropscience Lp | Active compound combinations |
WO2020232103A1 (en) | 2019-05-13 | 2020-11-19 | AgBiome, Inc. | Dried biological control agents and their uses |
CN110172428B (zh) * | 2019-06-11 | 2021-03-12 | 山东碧蓝生物科技有限公司 | 一种具有抗病及提高果实品质的枯草芽孢杆菌及其应用 |
EP3986889A1 (en) | 2019-06-21 | 2022-04-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Fungicidal oxadiazoles |
WO2020254488A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Hydroxyisoxazolines and use thereof as fungicides |
WO2020254487A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Hydroxyisoxazolines and derivatives thereof |
EP3986876A1 (en) | 2019-06-21 | 2022-04-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Hydroxyisoxazolines and derivatives thereof |
WO2020254490A1 (en) | 2019-06-21 | 2020-12-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenoxyphenyl hydroxyisoxazolines and analogues as new antifungal agents |
EP3986888A1 (en) | 2019-06-21 | 2022-04-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Thienylhydroxyisoxazolines and derivatives thereof |
BR112021025242A2 (pt) | 2019-06-21 | 2022-01-25 | Bayer Ag | Hidróxi-isoxazolinas e derivados das mesmas |
BR112021025333A2 (pt) | 2019-06-21 | 2022-05-24 | Bayer Ag | Benzilfenil hidróxi-isoxazolinas e análogos como novos agentes antifúngicos |
MX2022000218A (es) | 2019-06-24 | 2022-02-03 | Univ Auburn | Una cepa de bacilo y metodos para su utilizacion en la promocion del crecimiento de las plantas. |
EP3994130A1 (en) | 2019-07-03 | 2022-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted thiophene carboxamides and derivatives thereof as microbicides |
CA3149206A1 (en) | 2019-08-01 | 2021-02-04 | Bayer Cropscience Lp | Method of improving cold stress tolerance and crop safety |
EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
CA3156302A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Bayer Aktiengesellschaft | COMBINATIONS OF ACTIVE COMPOUNDS INCLUDING FATTY ACIDS |
CN112625934B (zh) * | 2019-10-08 | 2023-08-01 | 石河子大学 | 一种枯草芽孢杆菌y2菌株及使用该菌株制备拮抗库尔勒香梨黑头病抑制剂的制备方法 |
WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
MX2022007663A (es) | 2019-12-20 | 2022-07-19 | Bayer Ag | Tieniloxazolonas y analogos. |
MX2022007665A (es) | 2019-12-20 | 2022-07-19 | Bayer Ag | Tiofenocarboxamidas sustituidas y sus derivados. |
MX2022008631A (es) | 2020-01-14 | 2022-08-08 | Evonik Operations Gmbh | Cepas de bacillus con capacidad de degradar compuestos de nitrogeno inorganico. |
EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
US20230133087A1 (en) | 2020-04-16 | 2023-05-04 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
EP4135523A1 (en) | 2020-04-16 | 2023-02-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
WO2021209368A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
AU2021257572A1 (en) | 2020-04-16 | 2022-11-10 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
UY39170A (es) | 2020-04-16 | 2021-11-30 | Bayer Ag | Combinaciones de compuestos activos, composiciones fungicidas que los comprenden, uso de las mismas, método para controlar microorganismos y semilla tratada |
BR112022022595A2 (pt) | 2020-05-06 | 2022-12-20 | Bayer Ag | Piridina (tio)amidas como compostos fungicidas |
BR112022023012A2 (pt) | 2020-05-12 | 2022-12-20 | Bayer Ag | (tio)amidas de triazina e pirimidina como compostos fungicidas |
EP4153566A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-03-29 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds |
EP4156936A1 (en) | 2020-05-27 | 2023-04-05 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations |
BR112022024394A2 (pt) | 2020-06-04 | 2023-01-31 | Bayer Ag | Heterociclil pirimidinas e triazinas como novos fungicidas |
CA3186659A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides |
WO2021255070A1 (en) | 2020-06-18 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations |
JP2023532224A (ja) | 2020-06-18 | 2023-07-27 | バイエル、アクチエンゲゼルシャフト | 新規殺菌剤としてのオキサジアジニルピリダジン |
UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
WO2021255089A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides |
UY39277A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Combinación de compuestos activos, método y uso de las mismas para controlar microorganismos dañinos y semilla tratada |
WO2021255091A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazoles and their derivatives as fungicides |
AU2021204717A1 (en) | 2020-07-15 | 2022-02-03 | Seminis Vegetable Seeds, Inc. | Green Bean Plants with Improved Disease Resistance |
AU2021328578A1 (en) | 2020-08-18 | 2023-03-16 | Bayer Cropscience Lp | Compositions and methods for controlling fungal diseases in plants |
WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
EP3915371A1 (en) | 2020-11-04 | 2021-12-01 | Bayer AG | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
KR20230120135A (ko) | 2020-12-17 | 2023-08-16 | 바스프 에스이 | 포자 조성물, 그의 생산 및 용도 |
WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
EP4281450A1 (en) | 2021-01-21 | 2023-11-29 | Syngenta Crop Protection AG | Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents |
WO2022207494A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
WO2022207496A1 (en) | 2021-03-30 | 2022-10-06 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
BR112023019828A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-11-07 | Syngenta Crop Protection Ag | Compostos de amina cíclica pesticidamente ativos |
AR125342A1 (es) | 2021-04-16 | 2023-07-05 | Syngenta Crop Protection Ag | Compuestos de amina cíclica activos como plaguicidas |
WO2022225926A1 (en) | 2021-04-19 | 2022-10-27 | AgBiome, Inc. | Compositions and methods for improving plant health and controlling plant disease |
CN113142213B (zh) * | 2021-04-25 | 2022-02-18 | 河北省科学院生物研究所 | 表面活性素家族脂肽在防治害虫中的应用 |
CN113100237B (zh) | 2021-04-25 | 2021-11-12 | 河北省科学院生物研究所 | 丰原素家族脂肽在害虫防治中的应用 |
CN113115777B (zh) * | 2021-04-25 | 2022-02-11 | 河北省科学院生物研究所 | 伊枯草素家族脂肽在防治害虫中的应用 |
WO2022245786A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | AgBiome, Inc. | Compositions and methods for improving plant health and controlling plant disease |
IL309024A (en) | 2021-06-02 | 2024-02-01 | Syngenta Crop Protection Ag | Heterocyclic derivatives are active using pesticides with sulfoximine-containing substituents |
EP4352050A1 (en) | 2021-06-09 | 2024-04-17 | Syngenta Crop Protection AG | Pesticidally active diazine-amide compounds |
CA3221180A1 (en) | 2021-06-24 | 2022-12-29 | Syngenta Crop Protection Ag | 2-[3-[1 [(quinazolin-4-yl)amino]ethyl]pyrazin-2-yl]thiazole-5-carbonitrile derivatives and similar compounds as pesticides |
WO2023006634A1 (en) | 2021-07-27 | 2023-02-02 | Syngenta Crop Protection Ag | Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor |
WO2023006789A1 (en) | 2021-07-29 | 2023-02-02 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active fused bicyclic heteroaromatic compounds |
EP4130258A1 (en) | 2021-08-02 | 2023-02-08 | Evonik Operations GmbH | Microorganisms displaying viral decoy receptors |
WO2023012081A1 (en) | 2021-08-05 | 2023-02-09 | Syngenta Crop Protection Ag | Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor |
CN117836301A (zh) | 2021-08-10 | 2024-04-05 | 先正达农作物保护股份公司 | 作为杀有害生物剂的2,2-二氟-5h-[1,3]间二氧杂环戊烯并[4,5-f]异吲哚-7-酮衍生物 |
AR126729A1 (es) | 2021-08-10 | 2023-11-08 | Syngenta Crop Protection Ag | Mezcla fungicida |
WO2023017120A1 (en) | 2021-08-13 | 2023-02-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
AU2022331725A1 (en) | 2021-08-19 | 2024-03-07 | Syngenta Crop Protection Ag | Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor |
KR20240052850A (ko) | 2021-09-10 | 2024-04-23 | 바스프 에스이 | 세포외다당류 생산 미생물 및 그의 용도 |
CN113652382B (zh) * | 2021-09-30 | 2023-06-09 | 北京世纪阿姆斯生物工程有限公司 | 一种用于防治花生白绢病的贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂、微生物肥料及其应用 |
WO2023061838A1 (en) | 2021-10-14 | 2023-04-20 | Syngenta Crop Protection Ag | Imidazo[1,2-a]pyridine derivatives |
WO2023072945A1 (en) | 2021-10-25 | 2023-05-04 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents |
WO2023072849A1 (en) | 2021-10-27 | 2023-05-04 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active pyridazinone compounds |
AR127478A1 (es) | 2021-10-28 | 2024-01-31 | Upl Corporation Ltd | Métodos y composición para controlar plagas |
WO2023078915A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
CN114088624B (zh) * | 2021-11-09 | 2022-08-26 | 北京中检葆泰生物技术有限公司 | 用于谷物颗粒表面规则度检测设备 |
CN114107096A (zh) * | 2021-11-10 | 2022-03-01 | 甘肃省科学院生物研究所 | 玉米种植地生物法改善连作障碍微生物菌剂及其制备方法 |
WO2023092050A1 (en) | 2021-11-20 | 2023-05-25 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with recombinant bacillus cells expressing a serine protease |
WO2023099445A1 (en) | 2021-11-30 | 2023-06-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds |
WO2023104714A1 (en) | 2021-12-10 | 2023-06-15 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active pyridazinone compounds |
WO2023110710A1 (en) | 2021-12-13 | 2023-06-22 | Syngenta Crop Protection Ag | Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor |
EP4197333A1 (en) | 2021-12-15 | 2023-06-21 | Syngenta Crop Protection AG | Method for controlling diamide resistant pests & compounds therefor |
WO2023144351A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Acies Bio D.O.O. | Control of plant pests by microbial agents |
WO2023148369A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-08-10 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents |
WO2023148368A1 (en) | 2022-02-07 | 2023-08-10 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents |
WO2023187191A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents |
WO2023213626A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms |
WO2023213670A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine |
WO2023217989A1 (en) | 2022-05-12 | 2023-11-16 | Syngenta Crop Protection Ag | Alkoxy heteroaryl- carboxamide or thioamide compounds |
WO2023247360A1 (en) | 2022-06-21 | 2023-12-28 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active fused bicyclic heteroaromatic compounds |
WO2024018434A1 (en) | 2022-07-21 | 2024-01-25 | Innovplantprotect – Associação | Biological plant protection agent, methods and uses thereof |
WO2024017788A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Syngenta Crop Protection Ag | Solid form of a heterocyclic amide derivative |
WO2024022910A1 (en) | 2022-07-26 | 2024-02-01 | Syngenta Crop Protection Ag | 1-[1-[2-(pyrimidin-4-yl)-1,2,4-triazol-3-yl]ethyl]-3-[2,4-dichloro-5-phenyl]urea derivatives and similar compounds as pesticides |
WO2024026305A1 (en) | 2022-07-26 | 2024-02-01 | AgBiome, Inc. | Compositions and methods based on pseudomonas chlororaphis for improving plant health and controlling plant disease |
WO2024033374A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | Syngenta Crop Protection Ag | Novel arylcarboxamide or arylthioamide compounds |
WO2024056732A1 (en) | 2022-09-16 | 2024-03-21 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active cyclic amine compounds |
WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
GB202214203D0 (en) | 2022-09-28 | 2022-11-09 | Syngenta Crop Protection Ag | Fungicidal compositions |
GB202214202D0 (en) | 2022-09-28 | 2022-11-09 | Syngenta Crop Protection Ag | Agricultural methods |
EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
WO2024074556A1 (en) | 2022-10-07 | 2024-04-11 | Evonik Operations Gmbh | Bacillus subtilis strain with positive influence on neurodegenerative diseases such as alzheimer's disease |
WO2024089023A1 (en) | 2022-10-25 | 2024-05-02 | Syngenta Crop Protection Ag | Pesticidally active heterocyclic derivatives with sulfur containing substituents |
WO2024088886A1 (en) | 2022-10-26 | 2024-05-02 | Bayer Aktiengesellschaft | Use for delaying greening and/or formation of solanine in potatoes |
WO2024089216A1 (en) | 2022-10-27 | 2024-05-02 | Syngenta Crop Protection Ag | Novel sulfur-containing heteroaryl carboxamide compounds |
CN116341947B (zh) * | 2023-02-06 | 2023-10-13 | 广东省农业科学院植物保护研究所 | 一种评估荔枝霜疫霉病侵染源丰富度、预测其流行程度的方法及防控方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4742155A (en) * | 1984-12-06 | 1988-05-03 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Plipastatin and method for preparation thereof |
EP0981540A1 (en) * | 1997-05-09 | 2000-03-01 | Agraquest, Inc. | A NOVEL STRAIN OF $i(BACILLUS) FOR CONTROLLING PLANT DISEASES AND CORN ROOTWORM |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR7981M (cs) | 1967-10-21 | 1970-06-08 | ||
US5047239A (en) * | 1984-05-01 | 1991-09-10 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Biological control of fruit rot |
JPS6151504A (ja) * | 1984-08-21 | 1986-03-14 | Yasushi Ishii | ねじり角計 |
US4743689A (en) * | 1984-11-20 | 1988-05-10 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Antibiotic derivative of adenine |
JPS62210996A (ja) | 1986-03-11 | 1987-09-17 | Nippon Kayaku Co Ltd | 抗生物質エミマイシンの製造法 |
US5049379A (en) * | 1987-07-27 | 1991-09-17 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Fungicidal toxin and method and inoculum for controlling root rot and damping off |
GB8701234D0 (en) * | 1987-01-21 | 1987-02-25 | Agricultural Genetics Co | Strain of microorganism |
US4999192A (en) * | 1988-02-12 | 1991-03-12 | Mycogen Corporation | Novel coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate |
GB8805394D0 (en) * | 1988-03-07 | 1988-04-07 | Agricultural Genetics Co | Antibiotic |
US5055293A (en) * | 1988-03-09 | 1991-10-08 | Purdue Research Foundation | Biological pesticide |
US5045314A (en) * | 1989-11-14 | 1991-09-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Control of parasitic nematode ova/larvae with a bacillus laterosporus |
CA2035738C (en) * | 1990-02-07 | 2001-04-24 | Zongling Liu | Biological agent for control of crop fungal disease |
US5187091A (en) * | 1990-03-20 | 1993-02-16 | Ecogen Inc. | Bacillus thuringiensis cryiiic gene encoding toxic to coleopteran insects |
US5208017A (en) * | 1991-02-21 | 1993-05-04 | Mycogen Corporation | Biologically active Bacillus thuringiensis isolates |
JP2948936B2 (ja) | 1991-03-14 | 1999-09-13 | 森永製菓株式会社 | フザリウム属に属するカビが産生するカビ毒の防除方法 |
GB9206645D0 (en) * | 1992-03-26 | 1992-05-06 | Mini Agriculture & Fisheries | Biological control of post harvest pests |
JP3237240B2 (ja) | 1992-10-27 | 2001-12-10 | 昭和電工株式会社 | 植物病害防除剤 |
US5849870A (en) * | 1993-03-25 | 1998-12-15 | Novartis Finance Corporation | Pesticidal proteins and strains |
US5733355A (en) | 1994-09-29 | 1998-03-31 | Susumu Hibino | Bacterial Preparation for agricultural use |
US5552138A (en) | 1995-06-06 | 1996-09-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Bacillus cereus strain AS4-12 |
US5645831A (en) * | 1996-03-22 | 1997-07-08 | Biodiscovery New Zealand Ltd. | Bacillus thuringiensis strain and metabolite which are active against corn rootworm |
US5733544A (en) * | 1996-11-18 | 1998-03-31 | University Of Saskatchewan | Nematicidal bacillus strain and metabolite and methods of use thereof |
US5753222A (en) * | 1996-11-18 | 1998-05-19 | Agritope, Inc. | Antibiotic-producing strain of bacillus and methods for controlling plant diseases |
-
1998
- 1998-05-08 DK DK98922162T patent/DK0981540T3/da active
- 1998-05-08 CA CA2289916A patent/CA2289916C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 AT AT98922162T patent/ATE332915T1/de active
- 1998-05-08 AU AU74767/98A patent/AU732724B2/en not_active Expired
- 1998-05-08 BR BR9809282-0A patent/BR9809282A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-05-08 ES ES98922162T patent/ES2268774T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 PL PL336716A patent/PL198772B1/pl unknown
- 1998-05-08 US US09/074,870 patent/US6060051A/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 NZ NZ500506A patent/NZ500506A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-05-08 IL IL13253398A patent/IL132533A0/xx unknown
- 1998-05-08 ID IDW991352A patent/ID23681A/id unknown
- 1998-05-08 JP JP54855398A patent/JP3471815B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 CZ CZ0375799A patent/CZ302152B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-08 KR KR19997010345A patent/KR100616372B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-05-08 CN CN98804953A patent/CN1255143A/zh active Pending
- 1998-05-08 WO PCT/US1998/009471 patent/WO1998050422A1/en active IP Right Grant
- 1998-05-08 CA CA2702750A patent/CA2702750C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 TR TR1999/02765T patent/TR199902765T2/xx unknown
- 1998-05-08 HU HU0004555A patent/HUP0004555A3/hu unknown
- 1998-05-08 PT PT98922162T patent/PT981540E/pt unknown
- 1998-05-08 MX MX9910078A patent/MX214455B/es unknown
- 1998-05-08 DE DE69835206T patent/DE69835206T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-08 SK SK1490-99A patent/SK283036B6/sk unknown
- 1998-05-08 EP EP98922162A patent/EP0981540B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-07-31 TW TW087112641A patent/TW592639B/zh not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-05-14 US US09/312,314 patent/US6291426B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-10-22 IL IL132533A patent/IL132533A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-11-01 MX MX2012374A patent/MX244069B/es unknown
- 1999-11-04 BG BG103855A patent/BG103855A/xx unknown
- 1999-11-08 NO NO995462A patent/NO995462L/no not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-01-31 JP JP2003025287A patent/JP2003199558A/ja not_active Withdrawn
-
2006
- 2006-01-09 IL IL173027A patent/IL173027A/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4742155A (en) * | 1984-12-06 | 1988-05-03 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Plipastatin and method for preparation thereof |
EP0981540A1 (en) * | 1997-05-09 | 2000-03-01 | Agraquest, Inc. | A NOVEL STRAIN OF $i(BACILLUS) FOR CONTROLLING PLANT DISEASES AND CORN ROOTWORM |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
KIMURA ET AL. (06.1997) J. ANTIBIOT. 50, 529-531 * |
TSUGE ET AL. (1996) J. GEN. APPL. MICROBIOL. 41, 541-545 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2289916C (en) | A novel strain of bacillus for controlling plant diseases and corn rootworm | |
US6417163B1 (en) | Compositions and methods for controlling plant pests | |
CA2367775C (en) | A strain of bacillus pumilus for controlling plant diseases | |
MXPA99010078A (es) | Cepa novedosa de bacillus para controlar enfermedades de plantas y gusano de raiz de maiz | |
ZA200107386B (en) | A strain of Bacillus pumilus for controlling plant diseases. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MK4A | Patent expired |
Effective date: 20180508 |