CZ292993B6

CZ292993B6 - Způsob přípravy taxanu nesoucího oxazolinový postranní řetězec a taxan tímto způsobem připravený

Info

Publication number: CZ292993B6
Application number: CZ19941465A
Authority: CZ
Inventors: Michael A. Poss; David J. Kucera; John K. Thottathil; Ivan D. Trifunovich; Jianmei Wei; Shu-Hui Chen
Original assignee: Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 1992-12-23
Filing date: 1993-12-15
Publication date: 2004-01-14
Also published as: CA2119261C; EP0626953A1; HK1048310B; TW247908B; NO316071B1; IL121539A; HU225294B1; NO973254L; IL108161A; ZA939672B; IL121540A; IL122209A0; CN1235973A; KR100327625B1; IL121539A0; KR100378612B1; KR100356448B1; IL108161A0; CN1089761C; IL122208A0

Abstract

Způsob přípravy taxanu nesoucího oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III, ve kterém R.sup.1.n. je R.sup.5.n. nebo R.sup.7.n.-O-, R.sup.3.n. je fenyl, benzyl nebo furyl, R.sup.5.n. je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenyl se 2 až 10 atomy uhlíku nebo fenyl, R.sup.7.n. je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a T je taxanová skupina, nebo jeho soli, spočívající v reakci oxazolinu obecného vzorce II ve kterém R.sup.1.n. a R.sup.3.n. mají výše definovaný význam, nebo jeho soli s příslušným taxanem, majícím hydroxyskupinu přímo navázanou k jeho C-13, nebo jeho solí, za přítomnosti kondenzačního činidla. Jsou také popsány taxany připravené výše uvedeným způsobem.ŕ

Description

Předložený vynález se týká způsobu přípravy taxanů nesoucích oxazolinový postranní řetězec a nových sloučenin připravených tímto způsobem.

Dosavadní stav techniky

Taxany jsou diterpenové sloučeniny, které nacházejí použití v oblasti farmaceutické. Například taxol, tedy taxan obecného vzorce

o ve kterém

Ph je fenyl,

Ac je acetyl a

Bz je benzoyl, byl shledán účinným protirakovinovým činidlem. Přirozeně se vyskytující taxany, jako je taxol, se mohou nacházet v rostlinných materiálech a byly z nich izolovány. Takové taxany mohou však v rostlinách být přítomny v relativně malých množstvích, takže v případě taxolu by byl například vyžadován velký počet pomalu rostoucích stromů tisu jak zdroj této sloučeniny. V oboru se pokračuje ve výzkumu způsobů syntézy, popřípadě semisyntetických cest pro přípravu taxanů, jak je taxol a jeho analoga, jakož i způsobů pro přípravu meziproduktů používaných při přípravě těchto sloučenin.

Předložený vynález poskytuje novou, obecnou metodu přípravy nových taxanů, nesoucích postranní řetězce, jakož i nové taxany jako takové.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je způsob přípravy taxanu nesoucího oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III

ve kterém (III) ,

-1CZ 292993 B6

R¹ je R⁵ nebo R⁷-O-,

R³ je fenyl, benzyl nebo furyl,

R⁵ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenyl se 2 až 10 atomy uhlíku nebo fenyl,

R⁷ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a

T je taxanová skupina vzorce

kde

R⁸ je vodík, hydroxyskupina, alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části nebo R^l4-O-,

R⁹ je vodík, hydroxyskupina nebo R^I4-O-,

R¹⁰ a R¹¹ jsou nezávisle vodík, alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenyl se 2 až 10 atomy uhlíku, cykloalkyl se 3 až 7 atomy uhlíku nebo fenyl a

R¹⁴ je skupina chránící hydroxyskupinu,

ve kterém

R¹ a R³ mají výše definovaný význam, nebo jeho sůl s příslušným taxanem, majícím hydroxyskupinu přímo navázanou na C-13, nebo jeho solí, za přítomnosti kondenzačního činidla, za vzniku uvedeného taxanu nesoucího postranní řetězec obecného vzorce III nebo jeho soli.

Při způsobu podle tohoto vynálezu se pod kondenzační činidlo zahrnuje sloučenina vybraná ze souboru zahrnujícího dicyklohexylkarbodiimid, 1,3-diisopropylkarbodiimid, hydrochlorid l-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu, chlorid bis-(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosforečné kyseliny, karbonyldiimidazol, pivaloylchlorid a 2,4,6-trichlorbenzoylchlorid, spolu se sloučeninou vybranou ze souboru zahrnujícího 1-hydroxybenzotriazol, N-hydroxysukcinimid, triethylamin, pyridin a pyridin substituovaný v poloze 4 skupinou -N(R¹⁶)(R¹⁷), kde R¹⁶ a R¹⁷ jsou nezávisle vybrány z alkylu s 1 až 10 uhlíku, alkenylu se 2 až 10 atomy uhlíku, alkinylu se 2 až 10 atomy

-2CZ 292993 B6 uhlíku, cykloalkylu se 3 až 7 atomy uhlíku, cykloalkenylu se 3 až 7 atomy uhlíku nebo heterocyklylu, nebo kde R¹⁶ a R¹⁷ dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří heterocykloskupinu.

Při výhodném provedení způsobu podle tohoto vynálezu R¹ je fenyl nebo alkoxyskupina, R⁸ je hydroxyskupina nebo alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, R⁹ je hydroxyskupina nebo chráněná hydroxyskupina, R¹⁰ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a R¹¹ je fenyl.

Při zvláště výhodném provedení takového způsobu podle tohoto vynálezu R¹ je fenyl nebo tercbutoxyskupina, R³ je fenyl nebo furyl, R⁸ je hydroxyskupina nebo acetyloxyskupina, R⁹ je hydroxyskupina nebo trialkylsilyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v každé alkylové části s R¹⁰je methyl.

Při obzvláště výhodném způsobu podle tohoto vynálezu uvedeným oxazolinem obecného vzorce II je (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová kyselina nebo (4S-cis)-4,5dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová kyselina nebo jejich směs a uvedeným taxanem je 7triethylsilylbaccatin III nebo 7-trimethylsilylbaccatin III.

Předmětem tohoto vynálezu také je taxan nesoucí oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III

(III) ,

R¹ je R⁵ nebo R⁷-O-,

R³ je fenyl, benzyl nebo furyl,

R⁷ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a

T je taxanová skupina vzorce

kde

R⁸ je vodík, hydroxyskupina, alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, acetyloxyskupina nebo R^I4-O~,

R⁹ je vodík, hydroxyskupina nebo R^l4-O-,

-3CZ 292993 B6

R^u je skupina chránící hydroxyskupinu, vybraná ze souboru zahrnujícího methoxymethyl, 1ethoxyethyl, 1-methoxy-l-methylethyl, benzyloxymethyl, (p-trimethylsilylethoxy)methyl, tetrahydropyranyl, 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl, /erc.-butyl(difenyl)silyl, trialkylsilyl, trichlormethoxykarbonyl a 2,2,2-trichlorethoxymethyl, nebo jeho sůl.

Výhodnou sloučeninou podle tohoto vynálezu je taxan nesoucí oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III, ve kterém R¹ je fenyl nebo alkoxyskupina, R⁸ je hydroxyskupina nebo alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, R⁹ je hydroxyskupina nebo uvedená chráněná hydroxyskupina, R¹⁰ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a R¹¹ je fenyl.

Jinou výhodnou sloučeninou podle tohoto vynálezu je taxan nesoucí oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III, ve kterém R¹ je fenyl nebo fórc-butoxyskupina, R³ je fenyl nebo furyl, R⁸ je hydroxyskupina nebo acetyloxyskupina, R⁹ je hydroxyskupina nebo trialkylsilyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v každé alkylové části a R¹⁰ je methyl.

Zvláště výhodnými konkrétními sloučeninami podle tohoto vynálezu jsou 7—triethyIsiIyl—13— [[(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl]karbonyl]baccatin III a 7-trimethylsilyl-13[[(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl]karbonyl]baccatin III.

Předložený vynález je dále podrobněji popsán.

Výraz „alkyl“, jak je zde používán, zahrnuje přímé nebo rozvětvené nasycené uhlovodíkové skupin,y výhodně mající 1 až 10 atomů uhlíku v normálním řetězci, nejvýhodněji nižší alkylové skupiny. Příklady takových skupin zahrnují methyl, ethyl, propyl, izopropyl, n-butyl, /erc.-butyl, izobutyl, pentyl, hexyl, izohexyl, heptyl, 4,4-dimethylpentyl, oktyl, 2,2,4-tri-methylpentyl, nonyl, decyl a podobně.

Výraz „alkenyl“ jak je zde používán, označuje přímé nebo rozvětvené uhlovodíkové skupiny, obsahující alespoň jednu dvojnou vazbu uhlík—uhlík v řetězci a mající 2 až 10 atomů uhlíků v normálním řetězci. Příklady takových nesubstituovaných skupin zahrnují ethenyl, propenyl, izobutenyl, butenyl, pentenyl, hexenyl, heptenyl, oktenyl, nonenyl, decenyl a podobně.

Výraz „cykloalkyl“, jak je zde používán, označuje cyklické uhlovodíkové kruhové systémy obsahující 3 až 7 atomů uhlíku na kruh. Příklady takových skupin zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl a cykloheptyl.

Výraz „taxanová skupina“, jak je zde používán, označuje skupiny obsahující strukturní jádro, kde struktura jádra může být substituována a obsahuje ve svém kruhovém systému ethylenické nenasycení.

Výraz „taxan“, jak je zde používán, označuje sloučeniny obsahující taxanovou skupinu, jak je výše popsána.

Výraz „sůl“ zahrnuje kyselé a/nebo bazické soli, vzniklé s anorganickými a/nebo organickými kyselinami a bázemi. Příklady kyselých solí zahrnují soli tvořené s minerálními kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová nebo kyselina dusičná, nebo karboxylovými kyselinami, jako je kyselina trifluoroctová nebo kyselina octová. Příklady bazických soli zahrnují soli vytvořené s aminy, jako je triethylamin, diizopropylethylamin nebo pyridin nebo aminokyselinami, jako je arginin nebo guanidin. Soli hydroxyskupin, jako jsou alkoxidy kovů (např. alkalic

-4CZ 292993 B6 kých nebo kovů alkalických zemin), jsou zde také považovány za „soli“. Soli alkoxidů kovů mohou například vznikat kontaktem hydroxyskupiny s metylačním činidlem.

Uváděné sloučeniny použití nebo připravené způsobem podle tohoto vynálezu zahrnují i jejich soli, pokud není uvedeno jinak.

Příprava oxazolinových sloučenin vzorce I a jejich solí

Způsob podle tohoto vynálezu lze použít jako součást nové, obecné metody přípravy nových taxanů, nesoucích postranních řetězce, která zahrnuje následující stupně a) až e):

a) Příprava oxazolinové sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli

ve kterém

R¹ je R⁵, R⁷-O-, R⁷-S- nebo (R⁵)(R⁶)N-,

R² je R⁷-O-, R⁷-S- nebo (R⁵)(R⁶)NR³ a R⁴ jsou nezávisle R⁵, R⁵-O-C(O)- nebo (R⁵)(R⁶)N-C(O)~,

R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocykloskupina a

R⁷ je alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocykloskupina,

b) převedení oxazolinu obecného vzorce I nebo jeho soli na oxazolin obecného vzorce ΙΓ nebo jeho sůl.

ve kterém

R¹, R³ a R⁴ mají výše definovaný význam,

c) kondenzace oxazolinu obecného vzorce II' nebo jeho soli s taxanem, obsahujícím hydroxyskupinu přímo navázanou na svůj C-13, nebo jeho solí, za vzniku taxanu obecného vzorce III' nesoucího oxazolinový postranní řetězec nebo jeho soli

-5CZ 292993 B6

ve kterém

R¹, R³ a R⁴ mají výše definovaný význam a

T je taxanová skupina, výhodně sloučeniny navázané přímo přes C-13 uvedené skupiny,

d) kontakt taxanu, nesoucího oxazolinový postranní řetězec, obecného vzorce III' nebo jeho soli svodnou kyselinou schopnou otevření oxazolinového kruhu uvedené sloučeniny obecného vzorce ΙΙΓ nebo její soli za vzniku taxanu nesoucího postranní řetězec obecného vzorce X nebo jeho soli

ve kterém

R¹, R³, R⁴ a T mají výše definovaný význam, a sůl kyseliny při aminové skupině v uvedeném obecném vzorci X je vytvořena kontaktem s uvedenou kyselinou otevírající kruh a

e) kontakt taxanu nesoucího postranní řetězec obecného vzorce X nebo jeho soli s bází, za vzniku taxanu nesoucího postranní řetězec obecného vzorce IV nebo jeho soli r^cco-nh o

ve kterém

R¹, R³, R⁴ a T mají výše definovaný význam.

Předložený vynález také poskytuje nové oxazolinové sloučeniny obecného vzorce III a jejich soli, včetně všech jejich stereoisomerů, buď v podstatě prosté jiných stereoisomerů, nebo ve směsi s jinými vybranými nebo všemi jinými stereoisomery.

Dehydratační metoda

Oxazolinové sloučeniny obecného vzorce I nebo jejich soli mohou být připraveny dehydratační metodou, zahrnující stupně kontaktu sloučeniny obecného vzorce V nebo její soli

-6CZ 292993 B6

ve kterém

R¹, R², R³ a R⁴ mají výše definovaný význam, s kyselinou schopnou způsobit dehydrataci sloučeniny obecného vzorce V nebo její soli za 5 vzniku sloučeniny vzorce I nebo její soli.

Výchozí sloučeniny obecného vzorce V a jejich soli mohou být připraveny postupy, jako jsou popsány v patentu US 5 420 337 Patelem a spol., jako popisuje Ojima a spol., J. Org. Chem. 56, 1681 až 1683 (1991); Georg a spol, Tetrahedron Lett. 32, 3151 až 3154 (1991); Denis a spol, J. ío Org. Chem. 51, 46 až 50 (1986); Corey a spol., Tetrahedron Lett. 32, 2857 až 2860 (1991); Deng a spol, J. Org. Chem. 57, 4320 až 4323 (1992); Ojima a spol., Tetrahedron 48, 6985 až 7012 (1992); Commercon a spol., Tett. Lett. 33, 5185 až 5188 (1992); Denis a spol., J. Org. Chem. 56 (24), 6939 až 6942 (1991) (například s následující esterifikací a zpracování s kyselinou) a Denis a spol., J. Org. Chem. 55, 1957 až 1959 (1990). Tyto dokumenty jsou zde zahrnuté jako reference.

V dehydratační metodě může být použita jakákoliv kyselina schopná provedení dehydratace. Příklady kyselin zahrnují sulfonové kyseliny, jako kyselinu pyridinium-para-toluensulfonovou, kyselinu p-toluensulfonovou, kyselinu karfsulfonovou a kyselinu methansulfonovou, karboxylové kyseliny, jako kyselinu trifluoroctovou nebo kyselinu octovou, nebo minerální kyseliny, jako 20 je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová nebo kyselina dusičná. Molámí poměry kyselina.sloučenina obecného vzorce V jsou výhodně od asi 1:100 do asi 1:1.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od asi 0 °C do asi 200 °C a při tlaku od asi 100 do asi 500 kPa. Reakce se výhodně provádí pod atmosférou inertního plynu, jako je argon.

Výhodně se používají rozpouštědla, kterými jsou inertní, organická rozpouštědla, jako je toluen, tetrahydrofuran, acetonitril, benzen nebo xylen. Výhodně se používá takové množství rozpouštědla, které poskytuje koncentraci výchozích sloučenin obecného vzorce V asi 2,5 % hmotn., vztaženo na celkovou hmotnost rozpouštědla a sloučeniny obecného vzorce V.

Oxazolinový kruh sloučeniny vzorce I je číslován následovně:

S ohledem na atomy uhlíku v poloze 4- a 5- mohou oxazolinové sloučeniny vzorce I existovat jako čtyři stereoizomery Ia, Ib, Ic a Id:

R^l

-7CL 292993 B6

(Ib)

C(O)-R²

Sloučeniny vzorce V mohou také existovat jako čtyři stereoisomery vzhledem k uhlíkovým atomům v odpovídajících polohách. Tyto stereoisomery jsou následující sloučeniny vzorců Va, Vb, Vc a Vd:

(Va)

(Vb)

(Vc)

(Vd)

-8CZ 292993 B6

Požadovaný stereoisomer sloučeniny vzorce I může být, například, připraven předloženou dehydratační metodou použitím vhodného stereoisomeru výchozí sloučeniny vzorce V. Použití sloučeniny Va tak poskytne sloučeninu la, použití sloučeniny Vb poskytne sloučeninu Id, použití sloučeniny Vb poskytne sloučeninu Id, použití sloučeniny Vc poskytne sloučeninu lc a použití sloučeniny Vd poskytne sloučeninu lb. Je výhodné použít jediný stereoisomer výchozí sloučeniny V v předložené dehydratační metodě, i když je také možno použít stereoisomemí směsi. Použití sloučeniny Va pro přípravu sloučeniny la, zejména pro přípravu sloučeniny la, mající substituenty uvedené dále v části nazvané „Preferované sloučeniny“, je zvláště výhodné.

Metoda přeskupení

Oxazolinové sloučeniny vzorce I a jejich soli mohou být také připraveny metodou přeskupení, zahrnující stupeň kontaktu sloučeniny vzorce V nebo její soli, za přítomnosti báze, s aktivačním činidlem schopným aktivace hydroxylové skupiny sloučeniny vzorce V nebo její soli za intramolekulámího přeskupení a tvorby sloučeniny vzorce I nebo její soli, stou podmínkou, že je-li R¹fenyl a jeden z R³ nebo R⁴ je vodík, i) R² není ethoxy když druhý z R³ nebo R⁴ je ethoxykarbonyl, nebo ii) R² není methoxy, je-li druhý z R³ nebo R⁴ benzyl.

V metodě přeskupení podle předloženého vynálezu může být jako činidlo aktivační použita jakákoliv sloučenina schopná aktivace hydroxylové skupiny sloučeniny vzorce V a uskutečnění intramolekulámího přeskupené. Příklady aktivačních činidel zahrnují sulfonylhalogenidy jako jsou alkylsulfonylhalogenidy (např. methylsulfonylchlorid) nebo arylsulfonylhalogenidy (např. benzensulfonylchlorid nebo p-toluensulfonylchlorid), oxychlorid fosforečný (POC1₃), chlorid fosforečný (PC1₅) nebo thionylchlorid (SOC1₂). Molámí poměry aktivační činidlo: sloučenina vzorce V jsou výhodně od asi 1:1 do asi 2:1.

Aktivace hydroxylové skupiny sloučeniny vzorce V nebo její soli může produkovat nové meziproduktové sloučeniny vzorce VI nebo její soli:

R>-C(O)-NH

(VI) kde R', R², R³ a R⁴ mají výše definovaný význam a L je odštěpitelná skupin jako je alkylsulfonyloxy (např. methylsulfonyloxy), arylsulfonyloxy (např. benzensulfonyloxy nebo p-toluensulfonyloxy), chlor nebo fosforoxyskupina (PO₂- nebo PO-). Předložený vynález poskytuje výše uvedené nové sloučeniny vzorce VI a jejich soli, včetně všech jejich stereoisomerů, buď v podstatě prostých jiných stereoisomerů, nebo ve směsi s dalším zvoleným nebo všemi dalšími stereoisomery, s tou podmínkou, že když R¹ je fenyl, R² je methoxy a jeden z R³ nebo R⁴ je vodík a druhý benzyl, L neznamená chlor.

Báze, které mohou být použity, zahrnují organické báze jako jsou aminy (např. pyridin, triethylamin, diizopropylethylamin, lutidin nebo l,8-diazabicyklo/5.4./undec-7-en), nebo lithiumhexamethyldisilazid nebo anorganické báze jako jsou uhličitany alkalických kovů (např. uhličitan draselný). Molámí poměry báze:sloučenina vzorce V jsou výhodně větší než asi 2:1.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od asi -20 °C do asi 100 °C, výhodně 0 °C a při tlaku asi 1 atm. Reakce se výhodně provádí pod atmosférou inertního plynu jako je argon.

Výhodně se používají rozpouštědla, kterými jsou inertní organická rozpouštědla jako je chloroform, methylenchlorid, toluen, tetrahydrofuran, acetonitril nebo nejvýhodněji ta, která je bazickými organickými rozpouštědly schopnými fungovat jako je rozpouštědlo, tak jako báze pro předloženou metodu, jako je pyridin, triethylamin nebo lutidin. Výhodně se použije takové

-9CZ 292993 B6 množství rozpouštědla, které poskytne koncentraci sloučeniny vzorce Vaši 10% hmotn. vztaženo na spojenou hmotnost rozpouštědla a sloučeniny vzorce V.

Požadovaný stereoisomer sloučeniny vzorce I může například být připraven podle předložené metody přeskupení použitím vhodného stereoisomeru výchozí sloučeniny vzorce V. Použití sloučeniny vzorce Va tak poskytne sloučeninu vzorce Ic, použití sloučeniny Vb poskytne sloučeninu Ib, použití sloučeniny Vc poskytne sloučeninu Ia a použití sloučeniny Vd poskytne sloučeninu Id. Je výhodné použít jediný stereoisomer výchozí sloučeniny V v předložené metodě přeskupení i když je také možno použít stereoisomemí směsi. Použití sloučeniny Vc za vzniku sloučeniny Ia, zejména pro přípravu sloučeniny Ia, mající substituenty, které jsou uvedeny dále v části „Preferované sloučeniny, je zvláště preferováno.

Výměnná metoda

Oxazolinové sloučeniny vzorce I, kde R¹ je R¹, jak je definováno dále nebo jejich soli se také mohou připravit výměnnou metodou, zahrnují stupeň kontaktu sloučeniny následujícího obecného vzorce Vil nebo její soli:

(vn) , kde R², R³ a R⁴ mají výše definovaný význam, se sloučeninou následujícího vzorce VIII nebo její soli:

^HV^E (vm) ,

R¹* kde R¹ a E jsou nezávisle na sobě alkyl, alkenyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocyklo, s tou podmínkou, že je-li E ethyl, jeden z R³ nebo R⁴ je vodík a i) R¹ je fenyl, R² není methoxy je-li druhý z R³ nebo R⁴ ethoxykarbonyl, a ii) R¹ je methyl, R² není 8-fenylmethyloxy, je-li druhý z R³ nebo R⁴ 2-methylpropyl.

Jestliže se obě výchozí sloučeniny VII a VIII současně používají jako soli kyselin se skupinami NH₂ a HN, může být použita aminová báze jako je amoniak nebo organická aminová báze, pro tvorbu volné NH₂ a/nebo HN skupiny, aby reakce proběhla účinně. Jakákoliv aminová báze schopná tvorby volné NH₂ a/nebo HN skupiny(skupin). Terciární aminové báze jako je triethylamin, diizopropylethylamin, lutidin, pyridin nebo l,8-diazabicyklo/5.4./undec-7-en jsou preferovány. Molámí poměry aminové báze:sloučeniny vzorce VII jsou výhodně od asi 1:1 do asi 10:1.

Výchozí sloučeniny vzorce VII a jejich soli mohou být připraveny metodami takovými jako jsou popsány v patentu US 5 420 337, podané 12. listopadu 1992 Patelem a spol.; Commercon a spol., Tetrahedron Lett., 33(36), 5185-5188 (1992); Corey a spol.; Tetrahedron Lett., 32, 2857-2860 (1991); Ojima a spol., Tetrahedron, 48, 6985-7012 (1992) a Ojima a spol, Tetrahedron Lett., 33, 5737-5740 (1992), přičemž tyto práce jsou zde všechny zahrnuty jako reference. Výchozí sloučeniny vzorce VIII a jejich soli mohou být připraveny metodami, jako jsou metody popsané Kimballem a spol, Org. Synth. Coll, Vol. II, str. 284 (1943). Použití solí kyselin se sloučeninami vzorce VIII, například solí vytvořených s karboxylovými, sulfonovými nebo minerálními kyselinami, jako výchozích látek je preferováno, protože takové sloučeniny jsou relativně stabilní a snadno se s nimi manipuluje. Výše uvedené soli mohou být neutralizovány kontaktem s bází jak

-10CZ 292993 B6 byla diskutována již dříve. Molámí poměry sloučeniny vzorce VIII: sloučenina vzorce VII jsou výhodně od asi 1:1 do asi 2:1.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od asi 0 °C do asi 100 °C a při tlaku asi 1 atm. Reakce se výhodně provádí pod inertní atmosférou jako je argon nebo dusík.

Preferovanými používanými rozpouštědly jsou inertní organická rozpouštědla jako je toluen, tetrahydrofuran, dichlormethan, 1,2-dichlormethan nebo chloroform. Množství použitého rozpouštědla výhodně poskytuje koncentraci vý chozí sloučeniny vzorce VII asi 6 % hmotn. vztaženo na celkovou hmotnost rozpouštědla a sloučeniny vzorce VII.

Sloučeniny vzorce VII mohou, stejně jako sloučeniny vzorce V existovat jako čtyři stereoisomery s ohledem na uhlíkové atomy v odpovídajících polohách. Tyto stereoisomery jsou sloučeniny Vila, Vllb, Vile a Vild:

(Vila)

(Vllb)

(VHc)

(Vild)

Požadovaný stereoisomer sloučeniny vzorce I může například být připraven podle předložené výměnné metody použitím vhodného stereoisomeru výchozí sloučeniny vzorce VIII. Použití sloučeniny Vila poskytne sloučeninu Ia, použití sloučeniny Vllb poskytne sloučeninu Id, použití sloučeniny Vile poskytne sloučeninu Ic a použití sloučeniny Vild poskytne sloučeninu Ib. Je výhodné použít jediný stereoisomer výchozí sloučeniny VII v předložené výměnné metodě, i když je také možno použít stereoisomemí směsi.

-11CZ 292993 B6

Použití sloučeniny Vila pro přípravu sloučeniny la, zejména pro přípravu sloučeniny la, mající substituenty uvedené dále v části nazvané „Preferované sloučeniny“, je výhodné.

Příprava oxazolinových sloučenin vzorce II a jejich solí

Oxazolinové sloučeniny vzorce II a jejich soli mohou být připraveny z oxazolinových sloučenin vzorce I a jejich solí konverzí skupiny -C(O)-R² na skupinu -C(O)-OH.

Může být použito jakékoliv činidlo schopné výše uváděné konverze. Například, je-li R² alkoxy jako je methoxy nebo ethoxy, může být sloučeniny vzorce I nebo její sůl dealkylována za vzniku sloučeniny vzorce II použitím vhodného nukleofilního činidla, jako je sůl alkalického kovu nebo kovů alkalických zemin methanthiolu. Alternativně může být použita hydrogenace, například pro převedení skupin jako je benzyloxykarbonyl nebo karboxyl, použitím hydrogenačního činidla, například, vodíku a hydrogenačního katalyzátoru jako je palladium.

Výhodně se konverze skupiny -C(O)-R² na karboxylovou skupinu provádí hydrolýzou. Jako hydrolyzační činidlo může být použita jakákoliv sloučenina schopná účinné hydrolýzy. Příklady hydrolyzačních činidel zahrnují vodné báze jako jsou hydroxidy (např. hydroxidy kovů jako je hydroxid bamatý, nebo výhodně hydroxidy alkalických kovů jako je hydroxid sodný, lithný nebo draselný). Molámí poměry báze: sloučenina vzorce I jsou výhodně od asi 1:1 do asi 3:1. Molámí poměry voda: sloučenina vzorce I jsou výhodně od asi 1:1 do asi 100:1.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od asi -20 °C do asi 100 °C a při tlaku od asi 1 atm. Hydroxidové zmýdelnění sloučeniny vzorce I nebo její solí, kde R² je -N(R⁵)(R⁶) se výhodně provádí při vyšších teplotách výše uvedeného teplotního rozsahu, nebo při teplotách výše uvedeného teplotního rozsahu, nebo při teplotách výše uvedeného teplotního rozsahu, nebo při teplotách přibližujících se nebo při teplotě refluxu použitého kapalného média. Reakce se výhodně provádí pod atmosférou dusíku, argonu nebo vzduchu.

Rozpouštědla mohou být zvolena z organických a anorganických kapalin jako je voda, alkoholy, toluen, tetrahydrofuran, dioxan, acetonitril nebo dimethylformamid nebo její směsi. Směs vody a organické kapaliny jako je tetrahydrofuran se výhodně používá jako rozpouštědlo. Množství použitého rozpouštědla výhodně poskytuje koncentraci výchozí sloučeniny vzorce I asi 7 % hmotn. vztaženo na spojenou hmotnost rozpouštědla a sloučeniny vzorce I.

Předložený vynález také poskytuje nové sloučeniny vzorce II a jejich soli, zahrnující všechny její stereoisomery, buď v podstatě prosté jiných stereoizomerů, nebo ve směsi s jiným vybraným nebo všemi dalšími stereoisomery s tou podmínku, že R¹ je fenyl a jeden z R³ nebo R⁴ je vodík, druhý z R³ nebo R⁴ není COOH. Jako oxazoliny vzorce I, oxazoliny vzorce II mohou existovat jako čtyři stereoisomery vzhledem k atomům uhlíku v poloze 4- a 5-. Tyto stereoisomery jsou následující sloučeniny Ha, lib, líc a lid:

-12CZ 292993 B6

R^l

Oxazoliny vzorce Ha a jejich soli jsou preferovány, zejména ty sloučeniny vzorce Ha, které mají substituenty uvedené dále v části nazvané „Preferované sloučeniny“.

Stereokonfigurace výchozí sloučeniny vzorce I nebo její soli může být uchována a/nebo změněna v předložené metodě. Tak například hydrolýza sloučeniny vzorce I, mající substituenty, které jsou v poloze cis vzhledem ke každému jinému v polohách 4 a 5, může probíhat za vzniku sloučeniny vzorce II, mající odpovídající ciskonfiguraci, sloučeniny vzorce II, mající odpovídající trans konfiguraci, kde karboxylový substituent v poloze 5 je invertován vzhledem k výchozí sloučenině, nebo směs výše uvedených cis a trans sloučenin. Báze, které, jsou-li použity pro hydrolýzu, deprotonují atom uhlíku, přes který je skupina -C(O)-R² navázána a které následně reprotonují výše uvedený uhlík z opačné strany kruhového systému, vedou k inverzi stereokonfigurace. Příklady takových bází zahrnují ty, které jsou popsány výše nebo sloučeniny alkalických kovů jako je uhličitan draselný, aminové báze nebo kov jako je alkalický kov nebo kov alkalické zeminy, alkoxidy, kde tyto mohou být vytvořeny před jejich přídavkem nebo in šitu (například přídavkem metalačního činidla jako je n-butyllithium spolu s alkanolem jako je ethanol).

Jestliže se stereokonfigurace během předloženého způsobu invertuje, sloučenina vzorce I, mající invertovanou stereokonfíguraci vzhledem k výchozí sloučenině vzorce I může být vytvořena jako meziprodukt (tj. epimerizací). Například, jestliže výchozí sloučenina vzorce I má substituenty v polohách 4 a 5, které jsou v cis poloze jeden ke druhému, odpovídající trans sloučenina vzorce I kde substituent -C(O)-R² v poloze 5 se invertuje vzhledem k výchozí sloučenině, může být vytvořena jako meziprodukt během hydrolýzy. Výše uvedená inverzní metoda je také zahrnuta do rozsahu předloženého vynálezu.

-13CZ 292993 B6

Kopulace pro přípravu taxanů nesoucích postranní oxazolinový řetězec vzorce III a jejich solí

Taxany nesoucí postranní řetězec vzorce III nebo jejich soli mohou být připraveny metodou, zahrnující stupeň kontaktu oxazolinové sloučeniny vzorce II nebo její soli, staxanem, majícím hydroxylovou skupinu přímo navázanou k C-13, nebo její soli, za přítomnosti kopulačního činidla. Výhodné je použít oxazoliny vzorce Ha nebo jejich soli k předložené metodě, zejména sloučeniny vzorce Ha, mající ty substituenty, které jsou uvedeny v části nazvané „Preferované sloučeniny“, uvedené dále.

kde tato jaderná struktura může být substituována a může obsahovat ethylenické nenasycení ve svém kruhovém systému jako je popsáno výše. V předložené metodě může být použit jakýkoliv taxan, obsahující hydroxylovou skupinu přímo navázanou k C-13 sloučeniny, nebo jeho sůl (jako je alkoxidová sůl kovu sC-13 hydroxylovou skupinou). Taxanový výchozí materiál použitý v této metodě podle předloženého vynálezu může být sloučenina jak je popsána v evropské patentové publikaci EP 400971, zahrnuté zde jako odkaz, nebo její může být sloučenina, obsahující taxanovou skupinu popsanou výše a připravená postupy popsanými v nebo analogickými k patentu US 5 254 580, nebo v patentu US 52 72 171 Ueda a spol., které jsou zde obě zahrnuty jako reference. Příklady takových taxanů jsou sloučeniny následujícího vzorce IX:

kde

R⁸ je vodík, hydroxyl, R¹⁴-O-, R¹⁵-C(O}-O- nebo R^,5-O-C(O)-O-,

R⁹ je vodík, hydroxyl, fluor, R^I4-O-, R^1S-C(O)-O- nebo R¹⁵-O-C(0)-0-,

R¹⁰ a R¹¹ jsou nezávisle vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, R¹⁶-O-, aryl nebo heterocyklo,

R¹⁴ je hydroxyl chránící skupina a

R¹⁵ je vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocyklo,

R¹⁶ je alkyl, nebo jejich soli.

Všechny stereokonfígurace nespecifikovaných chirálních center sloučeniny vzorce IX jsou uvažovány pro použití v kopulační metodě podle předloženého vynálezu. Použití jediného stereoisomeru je preferováno i když je možno použít jejich směsi. 7-Trialkylsilyl-baccatinové sloučeniny III jsou jedněmi ze sloučenin výhodně používaných jako výchozí materiál vzorce IX, nejvýhodněji se používají 7-trimethylsilylbaccatin III nebo 7-triethylsilylbaccatin III.

-14CZ 292993 B6

Další sérií sloučenin, které jsou výhodnými výchozími materiály vzorce IX jsou sloučeniny, kde R⁸ je OC(O)CH₃, R⁹ je hydroxyl nebo hydroxyl chránící skupina, např. O—trimethylsilyl nebo 0triethylsilyl; R¹⁰ má výše uvedený význam mimo methylu a R¹¹ je aryl např. benzyl. Poslední z uvedených sloučenin jsou považovány za nové spolu s metodami jejich příprav,y které jsou uvedeny dále. Zvláště preferované jsou ty výše uvedené sloučeniny, kde R¹⁰ je cykloalkyl nebo OR¹⁶.

Výše uvedené sloučeniny se připraví podle následujícího reakčního schéma:

baccatin III

kde R^u má výše uvedený význam aX

R¹⁴má výše uvedený význam trimethylsilan ¹ nebo ditaethylsilan

kde R²⁰ ge vodík nebo R¹⁴ a R má výše uvedený význam kde RjeC(O)R¹⁰a

R¹⁴a X mají výše uvedený význam

Stupeň F

Baccatin III je chráněn v místech C-7 a C-13 reakcí se vhodným činidlem jako je halogenalkylsilan, např. trimethyl nebo triethyl, 2,2,2-trichlorethylchlorformiát nebo karbobenzyloxy. Může být použito jakékoliv rozpouštědlo- inertní, organické-, ve kterém je baccatin III rozpustný jako je THF, DMF, MeCl₂ a dioxan. Reakce se provádí za přítomnosti terciární aminové báze jako je pyridin nebo imidazol. Reakční teplota se může měnit od -30 °C do teploty místnosti s C-7 substitucí probíhající výhodně při -30 °C až 0 °C a C-13 při 0 °C až teplotě místnosti. Koncentrace reaktantů chránící skupiny je výhodně v molámím přebytku (1-10) pro uskutečnění jak C-7, tak C-13 substituce.

Stupeň C

Meziprodukt XI se potom chrání na hydroxy v poloze C-l reakcí s trimethylsilanem nebo výhodně dimethylsilanem, např. chlortrimethylsilanem nebo výhodně chlordimethylsilanem, v např. DMF, THF, dioxanu nebo různých etherech. Ve stupni F se reakce výhodně provádí za přítomnosti terciární báze aminové jako je imidazol nebo pyridin. Teplota se může měnit od -30 °C do teploty místnosti a výhodně činí 0 °C (přibližně).

Stupeň H

A) Meziprodukt XII se potom redukuje na C-4 na hydroxy reakcí se vhodným redukčním činidlem jako je Red-Al nebo lithiumaluminiumhydrid. Redukční činidlo je obvykle přítomno v molámím přebytku (1-5 ekvivalentů). Reakčním rozpouštědlem může být THF, dioxan nebo

-15CZ 292993 B6 různé vhodné ethery a reakční teplota se pohybuje mezi -30 °C a 0 °C, kdy preferovaná je teplota

0°C.

B) Meziprodukt vzorce XIII z (A), kde C-4 je hydroxy, se konvertuje na vhodný C-4 substituent reakcí se vhodným acylchloridem, anhydridem kyseliny nebo směsným anhydridem, např. akryloylchloridem, benzoylchloridem, cykloalkylkarbonylchloridem, alkylchlorformiátem, za přítomnosti aniontu alkalického kovu (Li, Na nebo K) sekundární aminové báze. Reakční rozpouštědla zahrnují TRF, dioxan atd. Teplota může být v rozmezí od -30 °C do teploty místnosti a výhodně asi 0 °C.

Stupeň I

A) Meziprodukt XIII ze stupně H(B) se potom zbaví chránících skupin reakcí s pyridiniumfluoridem (vodný fluorovodík v pyridinu) v acetonitrilu s následujícím zpracováním tetrabutylamoniumfluoridem v THF nebo fluoridem česným v THF. Potom se směs zředí v alkoholu, promyje mírnou organickou nebo anorganickou kyselinou a izoluje.

B) Potom může být zaveden do XIV C-7 chránící hydroxyskupina jako ve stupni F s reakčními parametry uváděnými jako výhodné pro C-7 substituci.

Potom může být vhodný postranní řetězec zaveden na C-13 novým postupem zde popsaným nebo alternativně via Holtonova metoda, jak je popsáno v patentech UA 5 227 400, 5 175 315 a 5 229 526, které jsou zde zahrnuty jako reference.

Novými konečnými produkty podle předloženého vynálezu tak jsou sloučeniny vzorce IV

R*-C(O)-NH O

R (IV) , kde

R¹ je R⁵, R⁷-O-, R-S-nebo (R⁵)(R⁶)NR³ a R⁴ jsou nezávisle R⁵, R⁵-O-C(O)- nebo (R⁵)(R⁶)N-C(O)-,

R⁵ a R⁶ jsou nezávisle na sobě vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocyklo, a T je skupina vzorce IX'

(IX)’

Hřv°

O-C(O)R¹⁰

O-C(O)R¹¹ kde

R⁸ je vodík, hydroxyl, R^l4-O-, R¹⁵-C(O)-O- nebo R^l5-O-C(0)-0-,

R⁹ je vodík, hydroxyl, fluor, R¹⁴-O-, R^1S-C(O)- nebo R^I5-Q-C(O}-O-,

-16CZ 292993 B6

R¹⁰ a R¹¹ jsou nezávisle vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, R^l6-O-aryl nebo heterocyklo,

R¹⁴ je hydroxyl chránící skupina a

R¹⁶ je alkyl s podmínkou, že R¹⁰ není methyl, nebo jejich soli nebo hydráty.

Preferované sloučeniny

Zvláště jsou z nových sloučenin vzorce IV preferovány ty sloučeniny, kde R¹⁰ je cykloalkyl nebo OR¹⁶. Nejpreferovanější z nových sloučenin vzorce IV jsou ty sloučeniny, kde R¹⁰ je cykloalkyl, R¹ je aryl, výhodně fenyl, nebo alkoxy, výhodně /erc.butyloxy, R³ je aryl, výhodně fenyl, heterocyklo - výhodně 2- nebo 3-furanyl nebo thienyl, izobutenyl, 2-propenyl, izopropyl nebo (CH₃)₂CH-, R⁴ je vodík, R⁸ je výhodně hydroxyl nebo alkylkarbonyloxy např. acetyloxy, R⁹ je hydroxy a R¹¹ je aryl, výhodně fenyl.

Jako kopulační činidlo v předložené metodě může být použita jakákoliv sloučenina schopná provedení esterifikace C-13 hydroxyskupiny, nebo její sůl, výchozí taxanu přes karboxylovou skupinu oxazolinu vzorce II nebo jeho soli. Příklady kopulačních činidel zahrnují sloučeniny tvořící aktivovaný oxazolinový ester (například 1-hydroxybenzotriazol nebo N-hydroxysukcinimid) nebo anhydrid (například chlorid kyseliny jako je pivaloylchlorid nebo bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)-fosfochlorid), při kontaktu s oxazolinem vzorce II, zejména kopulační činidla zahrnují sloučeninu jako je karbodiimid (např. dicyklohexylkarbodiimid (CDD), 1,3-diisopropylkarbodiimid (DIC) nebo l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethyl-karbodiimid-hydrochlorid), bis(2-oxo-3-oxazo!idinyl)fosfochlorid), karbonyldimidazol (CDI), pivaloylchlorid nebo 2,4,6trichlorbenzoylchlorid. Výše uvedené sloučeniny se výhodně používají spolu se sloučeninou jako je 1-hydoxybenzotriazol (HOBt) nebo N-hydroxysukcinimid (HO-Su) nebo amin jako je triethylamin, pyridin nebo pyridin substituovaný v poloze 4-N(R¹⁶)(R¹⁷), kde R¹⁶ a R¹⁷ jsou nezávisle vybrány ze skupiny, zahrnující alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl nebo heterocyklo (za vzniku sloučeniny jako je 4-dimethylaminopyridin (DMAP)), nebo kde R¹⁶ a R¹⁷spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří heterocykloskupinu (za vzniku sloučeniny jako je 4-morfolinopyridin nebo 4-pyrrolidino pyridin). Molámí poměry kopulační činidlo: výchozí taxan jsou výhodně od asi 1:1 do asi 2:1 - Molámí poměry oxazoli vzorce II: výchozí taxan, jsou výhodně od asi 1:1 do asi 2:1.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od asi 0 °C do asi 140 °C a tlaku asi 1 atm. Reakce se výhodně provádí pod atmosférou inertního plynu jako je argon.

Výhodnými používanými rozpouštědly jsou inertní organické kapaliny jako je toluen, acetonitril, 1,2-dichlorethan, chloroform, tetrahydrofuran, pyridin, methylenchlorid nebo dimethylformamid. Množství použitého rozpouštědla výhodně poskytuje koncentrace výchozí taxanu asi 20% hmotn. vztaženo na celkovou hmotnost rozpouštědla a taxanové sloučeniny.

Stereokonfigurace substituentů v polohách 4 a 5 výchozího oxazolinu mohou být zachovány a/nebo invertovány na kopulovaném produktu vzorce III, například epimerizací z cis na trans, kdy byl substituent v poloze 5 invertován vzhledem k výchozímu materiálu.

Předložený vynález také poskytuje nové taxany, nesoucí oxazolinový postranní řetězec vzorce III a jejich soli, včetně všech jejich stereoisomerů, buď v podstatě prosté jiných stereoisomerů, nebo ve směsi s jiným zvoleným nebo všemi stereoisomery.

Otevření kruhu za vzniku taxanů vzorce X a jejich solí

-17CZ 292993 B6

Taxany vzorce X nesoucí postranní řetězec nebo jejich soli mohou být připraveny ztaxanů nesoucích oxazolinový postranní řetězec vzorce III nebo jejich solí, metodou zahrnující stupeň kontaktu taxanu vzorce III nebo jeho soli s vodnou kyselinou schopnou otevření kruhu oxazolinové skupiny navázané přes C-13 taxanové skupiny uvedené taxanové sloučeniny ve vzniku odpovídající sloučeniny vzorce X nebo její soli.

Jakákoliv vodná kyselina schopná výše uvedeného otevření kruhu může být použití v metodě podle předloženého vynálezu. Příklady kyselin, otevírajících kruh zahrnují karboxylové kyseliny jako je kyselina octová nebo trifluoroctová. nebo výhodně minerální kyseliny jako je kyselina chlorovodíková, kyselina fluorovodíková nebo kyselina sírová ve vodě. Molámí poměry kyseliny otevírající kruh: sloučeniny vzorce III jsou výhodně do asi 1:1 do asi 10:1. Molámí poměry voda:sloučenina vzorce III jsou výhodně od asi 1:1 do asi 100:1.

Reakce otevření kruhu se výhodně provádí při teplotě od asi -20 °C do asi 40 °C a při tlaku asi 1 atm. Reakce se výhodně provádí pod atmosférou dusíku, argonu nebo vzduchu.

Výhodnými použitými rozpouštědly jsou inertní organické kapaliny samotné nebo ve směsi s vodou mako je tetrahydrofuran, alkoholy (výhodně nižší alkoholy jako je methanol), dioxan, toluen, acetonitril nebo jejich směsi. Množství použitého rozpouštědla výhodně poskytuje koncentraci výchozí sloučeniny vzorce III asi 5 % hmotn., vztaženo na celkovou hmotnost rozpouštědla a sloučeniny vzorce III.

Preferované provedení předloženého vynálezu dále zahrnuje stupeň deprotekce jedné nebo více skupin, zejména pro volné hydroxylové skupiny, na taxanové skupině pro přípravu taxanů vzorce X. Deprotekce může být například provedena před nebo následně po, nebo současně s, výše uvedenou metodou otevírající kruh použitím deprotekčního činidla. Jako deprotekční činidlo může být použita jakákoliv sloučenina schopna deprotekce. Například kyseliny jako je kyselina fluorovodíková nebo vodné protické kyseliny nebo tetra-alkylamoniumfluoridy jako je tetra-nbutylamoniumfluorid, mohou být použity pro odstranění silyl chránících skupin, benzylové chránící skupiny mohou být odstraněny hydrogenací, trichlorethoxykarbonylové skupiny mohou být odstraněny kontaktem se zinkem a acetalové nebo ketalové chránící skupiny mohou být odstraněny použitím protických kyselin nebo Lewisových kyselin.

Výhodné provedení předloženého vynálezu zahrnuje současné otevření kruhu a deprotekce jedné nebo více hydroxylových skupin na struktuře taxanového kruhu, zejména na C-7. Zvláště výhodné provedení zahrnuje stupeň současného otevření kruhu a deprotekce použitím kyseliny (např. minerální kyseliny jako je kyselina chlorovodíková) schopné provedení obou reakcí. Například použití kyseliny za výše popsaných reakčních podmínek popsaných výše pro otevření kruhu, může uvolnit současné otevření kruhu a deprotekci kyselinou odštěpitelných hydroxyl chránících skupin na C-7 jako je trialkylsily (např. trimethylsilyl nebo triethylsilyl).

Předložený vynález také poskytuje nové meziprodukty vzorce X a soli těchto sloučenin vytvořené během otevření kruhu a, popřípadě deprotekce, včetně všech jejich stereoisomerů, buď v podstatě prostých jiných stereizomerů, nebo ve směsi s jiným vybraným nebo všemi ostatními substituenty.

Kontakt s bází za vzniku taxanů vzorce IV a jejich solí

Zpracování sloučeniny vzorce X nebo její soli s bází poskytne sloučeninu vzorce IV nebo její sůl. V metodě podle předloženého vynálezu může být poskytnuta jakákoliv báze, umožňující migrací acylové skupin y-CIOj-R¹ na aminoskupinu -NH₂, čímž dojde ke tvorbě sloučeniny vzorce IV nebo její soli.

-18CZ 292993 B6

Příklady bází zahrnují hydrogenuhličitany alkalických kovů jako je hydrogenuhličitan sodný nebo hydrogenuhličitan draselný. Molámí poměry báze: sloučenina vzorce X jsou výhodně od asi

1:1 do asi 5:1.

Reakce se výhodně provádí při teplotě od asi -20 °C do asi 80 °C a při tlaku 1 atm. Reakce se výhodně provádí pod atmosférou argonu, dusíku nebo vzduchu.

Výhodně se používají rozpouštědla, kterými jsou organické inertní kapaliny samotné nebo ve směsi s vodou jako je tetrahydrofuran, alkoholy (výhodně nižší alkanoly jako je methanol), toluen, acetonitril, dioxan nebo jejich směsi. Množství použitého rozpouštědla výhodně poskytuje koncentraci sloučeniny vzorce X od asi 1 do asi 5 % hmotnostních, vztaženo na celkovou hmotnost rozpouštědla a sloučeniny vzorce X.

Deprotekce chráněných skupin může být provedena současně s, nebo následně po použití báze, i když deprotekce před kontaktem s bází, zejména současně s otevřením kruhu, se používá výhodně, jak je popsáno výše.

Separace

Produkty metod podle předloženého vynálezu mohou být izolovány a čištěny, například, metodami jako je extrakce, destilace, krystalizace a sloupcová chromatografie.

Taxanové produkty nesoucí postranní řetězec

Taxany vzorce IV nesoucí postranní řetězec a jejich soli připravené metodami podle předloženého vynálezu jsou samy o sobě farmakologicky aktivní nebo to jsou sloučeniny, které mohou být převedeny na farmakologicky aktivní produkty. Farmakologicky aktivní taxany jako je taxol, mohou být použity jako protinádorová činidla pro léčení pacientů postižených rakovinou jako je rakovina prsu, vaječníků nebo plic, melanom nebo leukemie. Použitelnost takových taxonů, nesoucích postranní řetězec byla popsána například v evropské patentové publikaci č. 400971, patentu US 4 876 399, patentu US 4 857 653, patentu US 4 814 470, patentu US 4 924 012, patentu US 4 924 011, patentu US 5 272 171, Chem a spol., a patentu US 5 272 171 podané 24. listopadu 1992, Ueda a spol., které jsou zde citovány jako odkazy.

Taxotery, mající strukturu vedenou dále, nebo zejména taxol, mající strukturu uvedenou výše, se výhodně připraví jako taxany, nesoucí postranní řetězec, vzorce IV:

Ph

HO (t-butyloxy)

O

Solváty jako hydráty, reaktantů nebo produktů mohou být použity nebo připraveny podle potřeby v jakékoliv z metod podle předloženého vynálezu. Do rozsahu předloženého vynálezu také spadají ve vodě rozpustné formy proléčiv sloučenin vzorce IV. Takové formy proléčiv sloučenin vzorce IV jsou produkovány zavedením v poloze C-7 nebo C-10 a/nebo v poloze 2' postranního řetězce, fosfonoxyskupiny obecného vzorce

-OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂,

-19·

kde m je 0 nebo celé číslo od 1 do 6 včetně.

Nová proléčiva mají vzorec IV'

kde

R¹ je R⁵, R⁷-O-, R⁷-S- nebo (R⁵)(R⁶)NR³ a R⁴ jsou nezávisle R⁵, R⁵-O-C(O)~ nebo (R⁵)(R⁶)N-C(O)-,

R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocyklo a

R⁷ je alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, aryl nebo heterocyklo a

T je skupina vzorce IX

(IX)·· , kde

R⁸ je vodík, hydroxyl, R¹⁴-O-, R¹⁵-C(O)-O-, R^,5-O-C(0)-O- nebo -OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂,

R¹⁰ a R¹¹ jsou nezávisle vodík, alkyl, alkenyl, alkinyl, cykloalkyl, cykloalkenyl, R^l6-O-, aryl nebo heterocyklo,

R²⁰ je vodík, -OCH2(OCH2)m OP(O)(OH)2, -OC(O)R²¹ nebo -OC(O)OR²¹, kde R²¹ je C!-C6alkyl popřípadě substituovaný jedním až šesti atomy halogenu, C3-C6-cykloalkyl, C2-C6-alkenyl nebo radikál vzorce

b kde D je vazba nebo C]-C₆alkyl a R^a, R^b a R^c jsou nezávisle vodík, amino, C]-C₆ mono- nebo di-alkyiamino, halogen, Ci-C₆alkyl nebo Ci-C₆alkoxy,

R^l4je hydroxychránicí skupina,

R^I6je alkyl,

R³⁰ je vodík, hydroxy, fluor, -OCH₂(OCH₂)mOP(O)(OH)₂ nebo -OC(O)OR²¹, kde R²¹ má výše uvedený význam.

-20CZ 292993 B6 m je O nebo celé číslo od 1 do 6 včetně s tou podmínkou, že alespoň jeden z R⁸, R²⁰ a R³⁰ je OCH₂(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ a R¹⁰ není methyl, a jejich soli báze s fosfonoxyskupinou.

Preferované sloučeniny vzorce IV' zahrnují ty, kde R¹⁰ je cykloalkyl nebo OME nebo OEt, R¹ je alkyl, výhodně fenyl nebo heterocyklo, výhodně furyl nebo thienyl nebo alkenyl výhodně propenyl nebo izobutenyl, R⁴ je vodík, R⁸ je hydroxy nebo alkylkarbonyloxy, výhodně acetyloxy, R je aryl výhodně fenyl, R²⁰ je -OCH2(OCH2)mOP(O)(OH)2 nebo -OC(O)OR²¹, kde R²¹ je ethyl nebo N-propyl, R³⁰ je -OCH2(OCH₂)_mOP(O)(OH)₂ a m je 0 nebo 1.

Fosfonoxyskupina se normálně zavádí po syntéze konečného produktu vzorce IV dalším postupem popsaným v USSN 08/108015, podáno 17. srpna 1993, zahrnutým zde jako odkaz.

Při přípravě výše uvedených nových proléčiv se vytvářejí za reakčních podmínek obecně 15 uvedených v USSN 08/008015 různé nové meziprodukty. Sloučeniny vzorce IV jsou používány jako výchozí materiály, jestliže není žádoucí, aby byly hydroxyskupiny blokovány. Vhodně chráněné sloučenina vzorce VI, kde jsou přítomny reaktivní hydroxyskupiny buď v poloze 2', nebo 7 nebo 10 nebo ve více polohách, se nejprve připojí k odpovídajícímu methylthiomethyletheru /-OCH₂(OCH₂)_mSCH₃/. Potom v závislosti na hodnotě m, může být ether připojen ke chráněné20 mu fosfonooxymethyletheru různými kroky uvedenými ve zmíněném U.S.S.N. Fosfono-chránicí skupina(y) a hydroxy-chránicí skupiny mohou být potom odstraněny obvyklými technikami.

Volná kyselina může pak být převedena na požadovanou sůl s bází obvyklými technikami, zahrnujícími kontakt volné kyseliny s kovovou bází nebo s aminem. Vhodné kovové báze 25 zahrnují hydroxy, uhličitany a hydrogenuhličitany sodné, draselné, lithné, vápenaté, bamaté, hořečnaté a zinečnaté a hlinité, a vhodné aminy zahrnují triethylamin, amoniak, lysin, arginin, N-methylglukamin, ethanolamin, prokain, benzathíne, dibenzylamin, tromethamin (TRIS), chlorprokain, cholin, diethanolamin, triethanolemin a podobně. Sole s bázemi mohou být dále čištěny chromatografii s následující lyofílizací nebo krystalizací.

Produkty mohou být podávány buď orálně, nebo parenterálně podle poznatků uvedených ve výše zmíněné patentové přihlášce (08/108015). Sloučeniny vzorce IV a IV' jsou nová protinádorová činidla vykazující in vitro cytotoxicitu vůči buněčných liniím karcinomu lidského kolonu HCT116 a HCT-116/VM46 a plicního karcinomu Ml09.

Předložený vynález je dále popsán blíže následujícími příklady, které jsou míněny jako ilustrativní a v žádném případě jej nikterak neomezují, rozsah vynálezu je stanoven připojenými nároky.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava ethylesteru kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové

-21CZ 292993 B6

Ethylester (2R,3S)-N-benzoyl-3-fenylizoserinu (0,104 g, 0,332 mmol) se vloží do lOml lahvičky sušené v sušírně, profouknuté argonem a suspenduje se v toluenu (5,0 ml). Přidá se kyselina pyridinium-p-toluensulfonová (PPTS) (42 mg, 0,167 mmol). Po míchání při teplotě místnosti po asi 1 hodinu se směs zahřeje na teplotu refluxu. Při zahřívání se získá čirý homogenní roztok. Po 1 hodině zahřívání se reakční směs zakalí. TLC po 16,5 hodinách zahřívání ukazuje, že reakce proběhla úplně (1:1 ethylacetát (EtOAc): hexan, PMA (kyselina fosfomolybdenová)/ethanol, ultrafialové záření (UV)).

Reakční směs se zředí 10 ml chloroformu, promyje se 5 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, suší nad síranem sodným, filtruje a zahuštěním se získá 97,8 mg nažloutlého oleje (výtěžek = 100%). *H NMR ukazuje, že byl získán trans-oxazolinový titulní produkt s pouze malým množstvím nečistot («5 %), z nichž žádná neodpovídá odpovídajícímu cis-oxazolinu.

CO2C2H5

Ethylester (2S,3S)-N-benzoyl-3-fenylizoserinu (0,100 g, 0,319 mmol) se vloží do plamenem sušené, argonem profouknuté 5ml baňky, rozpustí se v pyridinu (1,0 ml) a ochladí na 0 °C. Po kapkách se přidá methylsulfonylchlorid (38 mg, 0,335 mmol) a nažloutlý roztok se míchá pří 0 °C 1 3/4 hodiny a potom se ohřeje na teplotu místnosti. Chromatografie na tenké vrstvě (TLC) po 1 1/2 hodině při teplotě místnosti ukazuje, že reakce proběhla úplně (1:1 ethylacetát:hexan, PMA/ethanol, UV).

Heterogenní směs se zředí 5 ml ethylacetátu a promyje 1/3 nasyceného vodného CuSO₄ (10 ml). Vodná frakce se extrahuje 2 x 5 ml ethylacetátu. Spojené organické frakce se promyjí 5 ml nasyceného vodného NaCl, suší nad Na₂SO₄, filtrují a zahuštěním se získá 0,12 g nažloutlého oleje.

Titulní produkt se čistí chromatografií na silikagelu(kolona: 20 mm šířky, 50 mm délky) 1:1 ethylacetátem:hexanem a získá se 92,6 mg nažloutlého oleje (výtěžek = 98,3 %). 'H NMR a hmotn. spektr, ukazují, že byl získán trans-oxazolinový titulní produkt. Specifická otáčivost (c = 0,1, CHCh), /a/_D= + 15,6°, /a/_57g = +16,3°, /a/₅₄₆= +18,7°, /a/₄₃₆ = +33,1°.

Výchozí sloučenina - ethylester (2S,3S)-N-benzoyl-3-feny)isoserinu- byla připravena v odděleném experimentu následovně:

Do 500ml baňky, obsahující roztok ethylesteru kyseliny (4S-cis)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5oxazolkarboxylové (0,79 g, 2,67 mmol) v methanolu (MeOH) (57 ml) při 0 °C se přidá IN HC1 (57 ml) za míchání během 10 minut. Sraženina, která se vytvoří během přidávání HC1 se rozpustí během přídavku tetrahydrofuranu (THF). THF (57 ml) se pak přidává až do vyčeření roztoku a výsledná směs se míchá při 0 °C 2 hodiny a 15 minut. pH roztoku se upraví na 9,0 nasyceným NaHCO₂ (120 ml) a potom se směs míchá při teplotě místnosti 18 hodin. (Reakce se sleduje pomocí TLC (silikagel) za použití 4:6 EtOAc:hexan jako elučního činidla, R_f výchozího materiálu = 0,71, Rf produktu = 0,42, UV vizualizace).

-22CZ 292993 B6

Reakční směs se zředí EtOAc (200 ml) a vodná vrstva se oddělí a extrahuje pomocí EtOAc (100 ml x 1). Spojené EtOAc roztoky se pak promyjí solankou (150 ml x 1), suší nad síranem sodným, odfiltrují a zahuštěním se získá surový ethylester (2S,3S)-N-benzoyl-3-fenylisoserinu jako pevná látka (0,810 g). Tato se rozpustí v horkém MeOH (15 ml) a ponechá stranou při teplotě místnosti 30 minut a potom 1 hodinu při 4 °C. Pevná látka se filtruje, promyje studeným MeOH (2 ml) a suší ve vakuu, získá se 0,43 g ethylesteru (2S,3S)-N-benzoyl-3-fenylizoserinu jako první výtěžek. Druhý výtěžek (0,24 g) se také získá stejně jak je uvedeno výše a celkem se získá 0,67 g (80 %) ethylesteru (2S,3S)-N-benzoyl-3-fenylisoserinu.

(bílá pevná látka, t.t. = 160-161 °C, /a/_D = -40,3° (c = 1, CHC1₃).

Elementární analýza pro C₁₈H_I9N0₄.0,03H₂0 vypočteno 68,86 % C, 6,12 % H, 4,46 % N, 0,20 % H₂O nalezeno 68,99 % C, 6,07 % H, 4,60 % N, 0,20 % H₂O

Příklad 3

Příprava ethylesterů (4S-trans)- a (4S-cis)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové kyseliny

Ethylester (2S,3S)-N-benzoyl-3-fenylizoserinu (66,8 mg, 0,213 mmol) se vloží do lOml baňky sušené v sušárně, profouknuté argonem a suspenduje se v toluenu (4 ml). Přidá se kyselina pyridinium-p-toluensulfonová (49 mg, 0,195 mmol). Baňka se opatří Dean-Starkovým odlučovačem (naplněným molekulovými síty 4 angstrom). Reakční směs se zahřeje k refluxu (většina pevných látek se rozpustí za zahřívání). TLC po 5 hodinách ukazuje, že reakce byla téměř kompletní (1:1 EtOAc:hexan, PMA/EtOH, UV).

Reflux pokračuje přes noc. Po 22 hodinách zahřívání se reakční směs ochladí na teplotu místnosti. Z roztoku se vyloučí něco olejovité substance. Tato olejovitá látka tuhne během dalšího ochlazení na teplotu místnosti. Pevná látka se nerozpouští po přídavku asi 5 ml EtOAc. Asi 3 ml CHCI3 se přidají pro rozpuštění všeho pevného materiálu. TLC nevykazuje žádný výchozí materiál.

Roztok se potom promyje 5 ml nasyceného vodného NaHCO₃, suší se nad Na₂SO4, filtruje a zahuštěním se získá 64,3 mg částečně krystalického žlutého oleje. *H a ¹³C NMR ukazuje cisoxazolinový titulní produkt: trans-oxazolinový titulní podukt:nečistoty v poměru asi 5:stopy:l. Trans-oxazolinový titulní produkt byl přisouzen stopovému množství ethylesteru (2R,3S)-Nbenzoyl-3-fenylisoserinu přítomnému ve výchozím materiálu. Produkt byl chromatografován na silikagelu 1:1 EtOAc/hexan 2:1, EtOAc/hexan (Rf=0,57 (1:1 EtOAc:hexany) a získá se tak

49,3 mg olejovité nažloutlé pevné látky, výtěžek = 78,4 %, 'H NMR ukazuje cis a trans oxazolinové titulní produkty v asi 10:1 poměru (cis:trans).

-23CZ 292993 B6

Příklad 4

Příprava methylesteru kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové

a) Hydrochlorid ethylesteru kyseliny benzenkarboximidové

Benzonitril (30,3 g, 294 mmol) a ethanol (14,2 g, 308 mmol) se vloží do plamenem sušené, argonem propláchnuté lOOml baňky a ochladí se na 0°C. HCL se probublává 20 minut míchaným roztokem, potom ukazuje tára, že bylo přidáno 17,5 g HC1. Přídavek HC1 se přeruší a 10 čirý roztok se míchá při 0 °C. Po asi 1 hodině se začne tvořit sraženina.

Po míchání při 0 °C po asi 2,5 hodiny se heterogenní směs přenese do prostoru o teplotě 4 °C. Po 3,5 dnech při 4 °C se pevná hmota rozdrtí a trituruje se 150 ml 4 °C chladného diethyletheru. Směs se nechá stát při 4 °C 6 hodin. Směs se vakuově filtruje a rychle promyje 2 x 100 ml 15 studeného diethyletheru a suší se za vakua (vysoké vakuum 0,5 mg Hg 17 hodin) a získá se

51,6 g (94,5 %) bílého volně tekoucího prášku titulního produktu.

b) Methylester kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazokarboxylové

Hydrochloridová sůl methylester (2R,3S)-3-fenylisoserinu (5,76 g, 24,9 mmol) se rozpustí v 1,2-dichlorethanu (75 ml). Přidá se triethylamin (2,77 g, 27,3 mmol) a výsledná směs se míchá 15 minut před přídavkem benzimidátu připraveného ve stupni a) výše (4,62 g, 24,9 mmol) najednou. Směs se míchá 10 minut, potom se zahřeje krefluxu. TLC po 4,5 hodinách refluxu ukazuje, že reakce je kompletní (1:1 ethylacetát/hexan, PMA/ethanol, UV).

Reakční směs se zředí 150 ml dichlormethanu a 150 ml 10% K₂CO₃ a třepe se. Vrstvy se oddělí a vodná frakce se extrahuje 3 x 50 ml CH₂C1₂. Spojené organické frakce se promyjí 50 ml nasyceného vodného NaCl, suší se nad Na₂SO₄, filtrují a zahuštěním se získá žlutý olej, který se čistí na koloně silikagelu (suchý objem asi 750 ml, plněná kolona: 100 ml šířka x 110 mm délka) 1:2 30 ethylacetátem/hexanem a získá se 6,05 g titulního produktu jako velmi slabě zbarveného oleje, který stáním při teplotě místnosti tuhne. Výtěžek = 86,4 %.

Příklad 5

Příprava ethylesteru kyseliny (4S-cis)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové

-24CZ 292993 B6

Do lOOml baňky, obsahující roztok ethylesteru (2R,3S)-N-benzoyl-3-fenylisoserinu (2,00 g, 6,38 mmol) v pyridinu (20 ml, 6,70 mmol) po kapkách během 2 minut. Roztok se míchá při 0 °C až 4 °C 90 minut a potom při 65 až 70 °C 18 hodin. (Reakce se sleduje pomocí TLC za použití 1:2 EtOAc:toluenu jako elučního činidla, R_f výchozího materiálu = 0,42, R_f mesylátu = 0,48 a R_fcis-oxazolinového produktu = 0,78, UV vizualizace).

Reakce se ochladí na teplotu místnosti a zředí se EtOAc (80 ml) a 1/3 nasyceným CuSO₄ roztokem (80 ml) (1/3 nasycený CuSO₄ roztok se připraví zředěním nasyceného CuSO₄ roztoku na 1/3 jeho původní koncentrace). Vodná vrstva se oddělí a extrahuje se pomocí EtOAc (40 ml x 1). Spojený EtOAc roztok se potom promyje solankou (80 ml x 1), suší nad síranem sodným, filtruje, zahustí a azeotropně destiluje s heptanem (20 ml x 2) a získá se surový cis-oxazolinový titulní produkt jako pevná látka (1,88 g). Tento se rozpustí v horkém EtOAc (8 ml) a potom se přidá hexan (4 ml). Krystalizující směs se ponechá při teplotě místnosti 20 minut a potom při 4°C 30 minut. Pevná látka se odfiltruje, promyje se studeným 10% EtOAc v hexanu a suší vzduchem a získá se 1,34 g (71,3 %) cis-oxazolinového titulního produktu, majícího teplotu tání 135 °C, /o/_D = -9,25° (c-1,0, CHC1₃).

Příklad 6

Příprava kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové

Ethylester kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové (92 mg, 0,311 mmol) se přenese do 1 dramové violky a rozpustí se v tetrahydrofuranu (THF) (0,8 ml). Přikape se LiOH (vod., IN, 0,343 mmol) a výsledná dvojfázová směs se intenzivně míchá při teplotě místnosti. Během 5 minut se získá homogenní roztok. TLC po 45 minutách ukazuje, že není přítomen žádný výchozí materiál (1:1 ethylacetát (EtOAc)/hexan, PMA/ethanol (EtOH), UV).

Roztok se ochladí na 0 °C a dále se ředí 2,0 ml THF. Reakce se přeruší 0,34 ml IN HC1 (1,1 ekv.) Po ohřátí na teplotu místnosti se roztok zředí 5 ml EtOAc a 5 ml vody a třepe se. Vrstvy se oddělí. Vodná frakce se extrahuje 3 x 5 ml EtOAc. (Po extrakcích, pH vodné frakce asi

-25CZ 292993 B6

6). Spojené organické frakce se suší nad síranem sodným, filtrují a zahuštěním se získá 72,1 mg bílé pevné látky. Výtěžek = 87 %. *H a ^l3NMR a hmotn. spektroskopie ukazují na titulní produkt, mající teplotu tání 201 až 203 °C. /a/_D = +25,6° /a/₃₇8 = +26,9°, /a/₅₄₆ = +30,7°, /a/₄₃₆ = +53,8° (c= 1,0, CHC1₃:CH₃OH (1:1)).

Příklad 7

Příprava kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové

Methylester kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazokarboxylové (0,509 mg, 1,81 mmol) se vloží do lml baňky a rozpustí se v tetrahydrofuranu (THF) (0,47 ml). Po kapkách se přidá hydroxid lithný (IN ve vodě, 2,0 ml) (1,99 mmol). Dvoufázová směs se intenzivně míchá. Během 2 minut po ukončení přídavku hydroxidu lithného se získá čirý roztok. TLC po 15 minutách ukazuje, že reakce je kompletní (1:1 ethylacetát:hexan, PMA/ethanol).

Reakční směs se dále ředí 10 ml THF a výsledný kalný roztok se ochladí na 0 °C. Reakce se přeruší přikapáním 2,0 ml IN vodného HCI. Roztok se dále ředí 20 ml ethylacetátu a 15 ml vody a třepe. Vrstva se oddělí a vodná frakce se extrahuje 3 x 10 ml ethylacetátu (pH vodné vrstvy po extrakcích je přibližně 6). Spojené organické frakce se suší nad síranem sodným, filtrují a zahustí. Získaný koncentrát je rozpustný ve směsi benzenu a methanolu a méně rozpustný v methanolu, CHC1₃, ethylacetátu nebo v jejích směsi. Koncentrát se suší za vysokého vakua přes noc a získá se 0,448 g titulního produktu jako bílé pevné látky. (Výtěžek = 93 %). t.t. = 201 až 203 °C. /o/_D = +25,6°, /a/₅₇₈= +26,9°, /a/₅₄₆ = +30,7°, /o/₄₃₆= +53,8°, (c=l,0, CHC1₃:CH₃OH (1:1)).

Příklad 8

Příprava kyseliny (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové

Ethanol (0,1 ml) se smísí s tetrahydrofuranem (1,0 ml) a směs se ochladí na -78 °C. Přikape se n-butyllithium (n-BuLi) (2,12M, 0,050 ml) a směs se ohřeje na 0 °C. Přidá se pevný ethylester kyseliny (4S-cis)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylové vzorce

-26CZ 292993 B6 (20 mg, 0,0678 mmol) se přidá a reakční směs se míchá 1 hodinu (bylo přítomno malé množství vody). Podle TLC byla pozorována směs cis ethylesterového oxazolinového výchozího materiálu a odpovídajícího trans ethylesterového oxazolinového materiálu (inverze v poloze 5) (v tomto bodě bylo zaznamenáno velmi malé hydrolýza). Reakční směs byla míchána další hodinu a pak ponechána na ledové lázni přes noc (0 °C až teplota místnosti). Po 18 hodinách TLC vykazuje většinu titulní trans kyseliny jako produkt a stopové množství cis esterového výchozího materiálu (rozpouštědlový systém hexan:EtOAc 2:1 (stopy cis esteru) a EtOAc.acetomřLChMeOH 7:1:1:1 (titulní produkt).

Reakce se přeruší fosfátovým (pH = 4,3) pufrem a extrahuje se ethylacetátem (5 x 10 ml). Organická vrstva se suší a odstraněním rozpouštědla se získá asi 17 mg (93 %) titulního produktu. (NMR vykazuje trans kyselinový titulní produkt). T.t. = 135 °C /cc/d = -92,5° (c = 1,0, CHClj).

Příklad 9

Příprava (4S-trans)- a (4S-cis)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylových kyselin

Ethylester kyseliny (4S-cis)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazokarboxylové (202 mg, 0,6890 mmol) se rozpustí v tetrahydrofuranu (1,5 ml) a po kapkách se přidá hydroxid lithný (IN vod., 0,718 ml). Je pozorován heterogenní roztok. Reakční směs se míchá přes noc při teplotě místnosti a během této doby se roztok vyčeří (TLC (ethylacetát:hexan, 1:1) vykazuje malé množství výchozího materiálu. TLC (ethylacetát:methanol:voda:aceton 7:1:1:1) vykazuje cis a trans oxazolinové titulní produkty.

Přidá se IN HC1 (0,718 ml) a potom nasycený NaCl (přibližně 10 ml) a ethylacetát (přibližně 10 ml). Vodná vrstva se pětkrát promyje ethylacetátem (přibližně 10 ml) a vodná vrstva, která má pH přibližně 5,5 a dále okyselí na pH 3,4 a extrahuje se přibližně 10 ml EtOAc. Spojené organické vrstvy se suší nad síranem hořečnatým a filtrují. Ethylacetát se odpaří za sníženého tlaku a získá se 183 mg (100 %) směsi cis a trans titulních produktů (3:1, cis:trans podle *H NMR).

-27CZ 292993 B6

Příklad 10

Příprava 7-triethylsilyI-13-//(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl/-karbonyl/baccatinu III

a) 7-Triethylsilyl-baccatin III

i) /2aR-(2aa,4p,4aP,6p,9a,l lfi,12aa,12ba)/benzoová kyselina, 12b-acetyloxy2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a, 12b-dodekahydro-6,9,11 -trihydroxy-4a,8,13,13-tetramethyl-5oxo-4-/(třiethylsilyloxy/-7,l l-methano-lH-cyklodeka/3,4/benz/l,2-b/oxet-12-yl-ester

10-Desacetylbaccatin III (27,4 g, 50,3 mmol, obsahující H₂O: 1,57%, CH₃OH:1,6 %, ethylacetát: 0,09 % a hexan, 0,03 %) a 4-dimethylaminopyridin (2,62 g, 21,4 mmol, hmotn. % H₂O (Karl Fisher (K.F). = 0,09) se vloží do plamenné sušené, argonem profouknuté 1 litrové 3hrdlé baňky (opatřené mechanickým míchadlem a digitálním teploměrem) a rozpustí se v suchém dimethylformamidu (122 ml, hmotn.% H₂O (K.F.) = < 0,01). Přidá se methylenchlorid (256 ml, hmotn.% H₂O (K.F.) = < 0,01) (teplota reakční směsi stoupne ze 23 °C na 25 °C během přidávání methylenchloridu) a výsledná homogenní směs se ochladí na -50 °C.

Během 3 minut se přikape triethylamin (16 ml, 120 mmol, hmotn. % H₂O (K.F.) = 0,08) a výsledný roztok se míchá při -50 °C 5 minut před přikapáním nezředěného triethylsilylchloridu (18,6 ml, 111 mmol). Přídavek triethylsilylchloridu se přivádí během 10 minut, přičemž teplota reakční směsi nepřestoupí -50 °C. Reakce se během přidávání triethylsilylchloridu silně zakalí.

Výsledná směs se míchá při asi -50 °C 1 hodinu a potom se nechá stát (bez míchání) v mrazničce při asi -48 °C 22 hodin. (Oddělený experiment ukazuje, že míchání reakční směsi při asi -48 °C po 8 hodin vede k asi 60% konverzi). Směs se pak odstraní z mrazáku a nechá ohřát na asi -10 °C. TLC analýza směsi (rozpouštědlo: ethylacetát, vybarvení: kyselina fosfomolybdenová/ethanol) potvrzují nepřítomnosti výchozího materiálu a ukazují jedinou skvrnu produktu (R_f = 0,60). Studená směs se spojí s EtOAc (1 1) a promyje se vodou (890 ml).

Výsledná vodná vrstva se oddělí a extrahuje pomocí EtOAc (250 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí 5,7% vodným NaH₂PO₄ (2 x 250 ml, měřené pH 5,7% vodného NaH₂ PO4 = 4,30 + 0,05, naměřené pH spojených NaH₂PO₄ promývacích roztoků = 5,75 ± 0,05), polonasyceným vodným NaCl (250 ml), nasyceným vodným NaCl (250 ml), suší se nad síranem sodným, filtruje a zahustí na rotační odparce. (Všechna zahuštění na rotační odparce v tomto příkladu byla provedena při teplotě vodní lázně 35 °C).

Výsledná polopevná látka se dále suší vystavením vysokého vakuu (asi 1 mm Hg po 20 minut) a získá se 41,5 g bílé pevné látky. Surový produkt se potom rozpustí v CH₂CI₂ (400 ml) (zahřívání na vodní lázni pro rozpuštění pevné látky) a objem výsledného roztoku se sníží na asi 150 ml na rotační odparce. Ihned započne krystalizace a směs se nechá stát při teplotě místnosti 1 hodinu. Přidají se hexany (100 ml) a směs se opatrně promísí. Směs se nechá stát v prostoru o teplotě 4 °C po 16,5 hodiny. Pevná látka se odfiltruje, promyje se 1:9 CH₂CI₂/hexany (3 x 250 ml) na odsávaném filtru a suší se za vysokého vakua (asi 0,2 mm H₂ 42 hodin) a získá se 26,1 g (79 %)

-28CZ 292993 B6 titulního produktu jako bílého prášku. Matečný louh se zahustí na rotační odparce a zbytek se krystaluje z CH₂C1₂ a získá se 4,5 g (14 %) titulního produktu jako bílých krystalů. Rekrystalizace se provede stejným způsobem jako při prvním zpracování, pevná látka se rozpustí v CH₂C1₂(100 ml) bez zahřívání a objem výsledného roztoku se sníží na asi 7 ml na rotační odparce. Krystalizace započne během 5 minut. Směs se nechá stát při teplotě místnosti 1 hodinu, potom v prostoru o teplotě 4 °C 42 hodin. Krystaly se odfiltrují, promyjí 1:9 CH₂Cl₂/hexany (3 x 50 ml) na odsávaném filtru a suší se za vysokého vakua (asi 0,2 mm Hg po 18 hodin), ’H NMR tohoto produktu je identické s ’HNMR prvního získaného produktu. Spojený výtěžek činil 93% (nekorigováno).

Elementární analýza pro C₃₅H₅oOioSi vypočteno 63,80 % C, 7,65 % H, 0,00 % KF(H₂O) nalezeno 63,42 % C, 7,66 % H, 0,00 % KF (H₂O) t.t. 239-242 °C (rozkl.) /a/_D ²² :-53,6° (c 1,0, CHC1₃)

TLC: R_f = 0,60 (silikagel, EtOAc), vizualizováno fosfomolybdenovou kyselinou/ethanolem.

ii) /2aR(2aa,4p,4ap,6p,9a, 11 β, 12α, 12aa, 12ba)/6,12b-bis(acetyloxy)-12-(benzoyloxy)2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a, 12b-dodekahydro-9,1 l-dihydroxy-4a,8,13,13-tetramethyM/(triethylsilyl)oxy/—7,1 l-methano-lH-cyklodeka/3,4/benz/l,2-b/oxet-5-on-(7-triethylsilylbaccatin III)

Titulní produkt ze stupně i) výše (21,4 g, 32,4 mmol) se přidá do plamenem sušené, argonem profouknuté 1 litrové tříhrdlé baňky (opatřené mechanickým míchadlem a digitálním teploměrem) a rozpustí se v THF (350 ml, čerstvě destilovaný ze sodíku/benzofenonu). Výsledný roztok se ochladí na -70 °C. Během 23 minut se přikape roztok n-butyllithia (n-BuLi) (14,6 ml, 2,56M roztok v hexanech, 37,3 mmol, titrovaný trojnásobně kyselinou difenyloctovou v THF při 0 °C). Teplota reakční směsi nesmí během přidávání přestoupit -68 °C. Během přidávání n-BuLi se vytvoří pevná látka a nerozpouští se při -70 °C. Výsledná směs se míchá při -70 °C 20 minut a potom se ohřeje na -48 °C. Po ohřátí na -48 °C se získá čirý homogenní roztok.

Po půl hodině míchání při -48 °C se během 7 minut přikape acetanhydrid (4,6 ml, 49 mmol, destilovaný (137 až 138 °C 1 atm) pod atmosférou argonu před použitím). Teplota reakční směsi nepřestoupí -45 °C během přidávání. Výsledný roztok se míchá při -48 °C 20 minut a potom při 0 °C 1 hodinu. Roztok se zředí ethylacetátem (350 ml), promyje se nasyceným vodným NH4CI (250 ml) a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (200 ml). Spojené organické vrstvy se promyje nasyceným vodným NaCl, suší se nad síranem sodným, filtrují a zahustí na rotační odparce. (Všechna zahuštění na rotační odparce v tomto příkladu se provádějí při teplotě vodní lázně 35 °C). Vystavení polopevné látky vysokého vakuu (asi 1,5 mm Hg po půl hodiny) poskytne 24,7 g bílé pevné látky.

Surový produkt se rozpustí v CH₂C1₂ (300 ml) a objem výsledného roztoku se sníží na asi 70 ml rotační odparce. Během jedné minuty začne krystalizace. Směs se nechá stát při teplotě místnosti 45 minut a potom při 4 °C. Krystaly se odfiltrují, promyjí 1:9 CH₂Cl₂/hexany (3 x 100 ml na odsávaném filtru a suší se za vysokého vakua (asi 0,2 mm Hg po 19 hodin), získá se 20,9 g (94,0 %) titulního produktu jako jemných bílých jehlic. Matečný louh se zahustí na rotační

-29CZ 292993 B6 odparce a zbytek se krystaluje z CFLCh/hexanů a získá se 0,82 g (3,6 %) titulního produktu jako malých bílých krystalů.

Krystalizace matečného louhu se provede následovně: Zbytek se rozpustí vCILCl· (10 ml) a objem výsledné směsi se sníží na asi 5 ml na rotační odparce. Po stání při teplotě místnosti po 0,5 hodiny se nevytvoří žádné krystaly. Přidají se hexany (5 ml) v 1 ml podílech a roztok se promíchá. V této době je přítomno malé množství krystalů. Směs se nechá stát při teplotě místnosti půl hodiny (tvoří se více krystalů) a potom v prostoru s teplotou 4 °C 18 hodin. Krystaly se odfiltrují, promyjí 1:9 CFLCb/hexanv na odsávaném filtru a suší se za vaku (vysoké, asi 0,15 mm Hg po 21 hodin). Spojený výtěžek dvou zpracování činí 95,6 %. t.t. = 218 až 219 °C (rozkl.), /a/_D ²² = -78,4° (c 1,0, CHC1₃), TLC Rf = 0,37 (silikagel, 1:9 aceton, CH2CI2, vizualizováno kyselinou fosfomolybdenovou/ethanolem).

b) 7—Triethylsilyl—13-//(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl/-karbonyl/baccatin III

7-Triethylsilylbaccatin III připravený ve stupni a) výše (0,209 g, 0,298 mmol), oxazolin připravený jako titulní produkt v příkladu 6 (80,2 mg, 0,300 mmol), dicyklohexylkarbodiimid (DCC) (84 mg, 0,407 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (DMAP) (25 mg, 0,205 mmol) se přidá do 1 gramové violky (sušená v sušárně), probublané argonem a suspenduje se v toluenu (1,0 ml). Po 1 hodině míchání při teplotě místnosti se rozpustí něco pevné látky a směs se zbarví nažloutle. Heterogenní směs se zahřívá na 85 °C. TLC po 2,5 hodině vykazuje přítomnost výchozího materiálu (1:1 ethylacetát:hexan, PMA/ethanol, UV). V zahřívání na 85 °C se pokračuje. TLC po 5 hodinách je v podstatě stejná. Reakční směs se nechá míchat při teplotě místnosti přes noc. Po 14 hodinách při teplotě místnosti je TLC stejná. Heterogenní směs se zředí 1,0 ml ethylacetátu (pozorováno určité množství sraženiny) a směs se filtruje přes sloupeček Celitu. Celíte se promyje 3 x 1 ml ethylacetátu a filtrát se zahustí. Získá se 0,349 g žlutavé pevné látky. ’H MR ukazuje, že titulní produkt a 7-triethylsilylbaccatin III jsou přítomny v přibližně poměru 8:1, bylo také zjištěno malé množství 1,3-dicyklohexylmočoviny (DCU) a stopy výchozího oxazolinu nebo nečistoty.

Směs se částečně rozdělí na silikagelu (kolona 20 mm průměr x 90 mm délka) pomocí 1:2 ethylacetátu/hexanu až 1:1 ethylacetátu/hexanu. Během chromatografie ukazuje TLC analýzou malou skvrnu s o něco menším Rf než má kopulovaný titulní produkt. Spojí se směsné frakce, obsahující tuto nečistotu a kopulovaný produkt. První skvrna: kopulovaný titulní produkt (0,267 g špinavě bílé pevné látky, výtěžek = 94 %). (^]H NMR vykazuje přibližně 18:1 poměr požadovaného kopulovaného produktu a výše uvedené nečistoty), první skvrna a výše uvedené směsné frakce: 11,5 mg oleje ('H NMR ukazuje přibližně 2:1 poměr požadovaného kopulovaného produktu a odlišné nečistoty). T.t. = 139 až 142 °C //a/_D - -49,5°, /a/₅₇8 - -52,6°, /α/₅₄6 - -63,5°, /α/₄₃6 = -157,0° (c = 1,0, CHCI3).

-30CZ 292993 B6

Příklad 11

Příprava 7-triethylsilyl-13-//(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl/karbonyl/baccatinu III

Kyselina (4S-trans)—4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová (96,0 mg, 0,359 mmol), 7-triethylsilylbaccatin III (0,252 g, 0,359 mmol) a 4-dimethylaminopyridin (DMAP) (30 mg, 0,246 mmol) se vloží do pramenem sušené 1 gramové lahvičky, vyfoukané argonem a suspenduje se v toluenu (1,2 ml). Ihned se přidá diisopropylkarbodiimid (DIC) (63 mg) 0,503 mmol) a slabě nažloutlá heterogenní směs se míchá při teplotě místnosti. S postupem doby vznikne velmi kalný žlutý roztok. V tomto momentě se lahvičky uzavře a ponoří do olejové lázně o teplotě 80 °C. Po 3 hodinách při asi 80 °C se získá tmavooranžový roztok. Reakční směs se přímo zahustí. ’H NMR ukazuje asi 6:1 poměr požadovaného kopulovaného produktu a 7-triethylsilylbaccatinu

III. Produkt se částečně čistí chromatografii na silikagelu pomocí 1:3 EtOAc/hexanu a získá se 0,300 g špiněné bílé pevné látky. TLC ukazuje na izolovaný produkt a diisopropylmočovinový vedlejší produkt.

’H NMR ukazuje pouze kopulovaný produkt a nečistotu v poměru asi 25:1 a diizopropylmočovinový vedlejší produkt. Poměr požadovaného kopulovaného produktu k diizopropylmočovinovému vedlejšímu produktu byl asi 12:1.

Z těchto výsledků byl výtěžek požadovaného kopulované produktu asi 85 %. t.t. = 139 až 142 °C. /o/_D = -49,5 °C, /a/₅₇₈ = -52,6°, /a/₅₄₆ = -63,5°, /a/₄₃₆ = -157°, (c= 1,0, CHC1₃).

Příklad 12

Příprava 7-triethylsilyl-13-//(4S-trans)-4,5-dihydro-2,5-difenyl-5-oxazolyl/karbonyl/baccatinu III

7-Triethylsilylbaccatin III (zkráceno jako „A“ v tomto příkladě) a kyselina (4S-trans)-4,5dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová (zkráceno jako „B“ v tomto příkladě) se uvedou do kontaktu za podmínek uvedených v následující tabulce 1 pro přípravu titulní sloučeniny.

t.t. = 139 až 142 °C. /a/_D = -49,5°, /a/₅₇₈ = -52,6°, /o/₅₄₆ = -63,5°, /a/₄₃₆= -157,0° (c=l,0, CHC1₃).

-31CZ 292993 B6

Tabulka 1

Příklad č.	B (eq·)*	činidla (eq·)*	rozpouštědlo	koncentrace B(M)	doba(h)	teplota (°C)
12a	1,2	DCC (1,4)	PhCH₃	0,29	1	23
		DMAP (0,7)			2,5	85
12b	1,0	DCC (1,4)	PhCH₃	0,30	5,5	85
		DMAP (0,7)
12c	1,0	R₂POC1(1,04)	1,2-DCE	0,28	6	23
		DMAP (1,01)			15	55
		NEt₃(l,04)
12d	1,0	R₂POCI(1,01)	1,2-DCE	0,23	5	23
		NEt₃ (2,0)			16	65
					44	75
12e	1,0	CDI(1,2)	THF	0,39	21	70
		DMAp (1,0)
12f	1,0	ArCOCl(l,5)	CH₂CI₂	0,23	23	23
		DMAP (2,0)
		NEt₃(l,5)
12g	1,0	ArCOCi(l,5)	PhCH₃	0,29	5,5	23
		DMAp (2,0)
		NEt₃(l,5)
12h	1,0	ArCOCl(l,05)	CH₂C1₂	0,30	3,5	-78
		DMAP (2,0)			19	-60
		NEt₃(l,0)			1	0
					20	23
12i	1,0	t-BuCOCI (1,1)	1,2-DCE	0,28	4,5	23
		DMAP (2,0)
		NEt₃(l,2)
12j	2,1	t-BuCOCI (2,1)	1,2-DCE	0,23	21	23
		DMAP (4,2)
		NEt₃ (2,3)
12k	1,0	t-BuCOCI (1,0)	CH₂C1₂	0,24	19	23
		DMAP (0,07)
		NEt₃ (2,0)
121	1,0	t-BuCOCI (1,0)	pyridin	0,23	4,5	23
		DMAp (0,05)			16	55
					23	23

* eq. = ekvivalenty, vztaženo na 7-triethyl-silylbaccatin III (množství 7-triethylsilylbaccatinu III zvýše uvedených příkl.) 12a= 0,061 g; 12b = 0,533 g; 12c = 0,200 g; 12d = 0,161 g; 12e = 0,057 g; 12f = 0,200 g; 12g= 0,203 g; 12h = 0,208 g; 12i = 0,196 g; 12j = 0,165 g; 12k = 0,165 g; 121 = 0,164 g).

Vysvětlivky k tabulce 1 io R₂POC1 =

= bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)-fosforečný chlorid

-32CZ 292993 B6

DCC = dicyklohexylkarbodiimid

DMAP = 4-dimethylaminopyridin

D1C = diisopropylkarbodiimid

ArCOCl = 2,4,6-trichlorobenzoyl chlorid =

CDI = karbonyl diimidazol t-BuCOCl = pivaloyl chlorid 1,2-DCE= 1,2-dichloroethan NEt₃ = triethylamin THF = tetrahydrofuran PhCH₃ = toluen.

Příklad 12a

Všechny reaktanty se před přídavkem rozpouštědla vzájemně smísí. 108 % (90 mg) titulního produktu bylo izolováno chromatograficky (obsahuje asi 10% nečistot). Výchozí sloučenina A nebyla viditelná podle NMR. (Koncentrace B v tomto příkladu je 0,29M). Oddělený pokus, kde se použije DCC (2,0 ekv.), DMAP (3,0 ekv.), DMAP.HC1 (2,0 ekv.) v CHC1₃ a 1 ekv. B se použije pro demonstraci, že molámí koncentrace 0,07M B neposkytuje rychlejší průběh reakce, tvorba titulního produktu byla pozorována podle NMR za 27 hodin).

Příklad 12b

Všechny reaktanty se vzájemně smísí před přídavkem rozpouštědla. Titulní produkt se získá v asi 9:1 poměru výchozí sloučeniny A (podle NMR), 87 % (0,63 g) titulního produktu bylo izolováno chromatograficky.

Příklad 12c

Všechny reaktanty se vzájemně smísí před přídavkem rozpouštědla. Titulní produkt se získá v poměru asi 1:1 výchozí sloučeniny A (podle NMR). Po 1 hodině nebyl pozorován žádný progres.

Příklad 12d

Aktivovaný oxazolin B byl ponechán tvořit 1 hodinu (přídavkem R2POCI k výchozí sloučenině B) před přídavkem výchozí sloučeniny A. Titulní produkt byl získán v poměru asi 1:6 k výchozí sloučenině A (podle NMR). Malý postup reakce byl zaznamenán po 5 hodinách.

Příklad 12e

CDI a výchozí sloučenina B byly uvedeny do kontaktu 1 hodinu před přídavkem výchozí sloučeniny A. DMAP byl přidán v t=4 hodiny. Byl získán poměr asi 1:1 titulní sloučeniny k výchozímu

-33CZ 292993 B6 materiálu A a byla získána nečistota (podle NMR). Je třeba poznamenat, že reakce neprobíhala před přídavkem DMAP a že nadbytečné zahřívání způsobilo určitý rozklad.

Příklad 12f

ArCOCl byl přidán jako poslední. Asi 1:1 poměr titulní sloučeniny k výchozí sloučenině A byl získán (podle NMR). K. žádnému dalšímu postupu reakce nedošlo po 1,5 hodině.

Příklad 12g

Naposledy se přidá ArCOCl. Získá se poměr asi 1:1 titulního produktu k výchozí sloučenině A (podle NMR). Nebyl pozorován žádný progres reakce po 1 hodině.

Příklad 12h

Naposledy se přidá ArCOCl. Získá se poměr asi 1:1 titulního produktu k výchozí sloučenině A (podle NMR). Po 3,5 hodinách nebyl pozorován žádný progres reakce.

Příklad 12j

1 hodinu před přídavkem výchozí sloučenina A se připraví směs anhydrid (přídavkem

Zerc.-BuCOCI k výchozí sloučenině A. Získá se poměr titulního produktu k výchozí sloučenině A asi 1:2 (podle NMR). Žádný další progres reakce nebyl pozorován po 2 hodinách.

Příklad 12j

Směsný anhydrid se připraví 1 hodinu (přídavkem /erc.-BuCOCl k výchozí sloučenině B) před přídavkem výchozí sloučeniny A. Získá se asi 3:1 poměr titulního produktu k výchozí sloučenině A (podle NMR). Žádný další progres reakce nebyl pozorován po 1 hodině.

Příklad 12k

Směsný anhydrid byl připraven 1 hodinu (přídavkem /erc-BuCOCl k výchozí sloučenině B) před přídavkem výchozí sloučenina A. DMAP se přidá 1 hodinu po výchozí sloučenině A. Získá se poměr asi 1:4 titulní sloučeniny k výchozí sloučenině A (podle NMR). Nebyla pozorována žádná reakce bez DMAP, žádná další reakce nebyla pozorována po 2 hodinách po přídavku DMAP.

Příklad 121

Směsný anhydrid se připraví 1 hodinu (přídavkem Zerc-BuCOCI k výchozí sloučenině B) před přídavkem výchozí sloučeniny A. DMAp byl přidán po 16 hodinách při 55 °C. Získá se asi 1:6 poměr titulní sloučeniny k výchozí sloučenině A (podle NMR). Před přídavkem DMAP nebyla 50 pozorována žádná nebo jen velmi malá reakce.

Příklad 13

Příprava 7-triethylsilyl-13-//(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl/karbonyl/55 baccatinu III

-34CZ 292993 B6

Kyselina (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová (65,0 mg, 0,243 mmol), 7—triethylsilyl—baccatin III (0,142 g, 0,203 mmol), DCC (75 mg, 256 mmol) a pyrolidinopyridin (38 mg, 256 mmol) se vloží do plamenem sušené lgramové baňky profouknuté argonem a částečně se rozpustí v toluenu (1,0 ml). Výsledná žlutavá heterogenní směs se míchá při teplotě místnosti. TLC po 3 hodinách ukazuje přítomnost titulního produktu (1:1 EtOAc:hexany, PMA/EtOH, UV) (TLC po 7 hodinách a 23 hodinách po míchání při teplotě místnosti nevykazuje žádnou další změnu).

Reakční směs se zředí ethylacetátem (1 ml), filtruje se přes sloupeček celitu a zahuštěním se získá 0,275 g olejovité žlutavé pevné látky. 'H NMR vykazuje požadovaný kopulovaný titulní produkt a 7—triethylsilyl baccatin III v poměru asi 8:1. N-Acylmočoviny vedlejší produkt kopulačního činidla byl také přítomen ve stejném množství jako 7-triethylsilylbaccatin III.

Pevná látka se chromatografuje na silikagelu pomocí 1:2 EtOAc/hexanu a získá se 0,176 g špinavě bílé pevné látky. Výtěžek asi 91 %. ’HNMR ukazuje pouze požadovaný kopulovaný produkt a N-acylmočovinu v poměru asi 11:1.

Příklad 14

Kyselina (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová (66,7 mg, 0,250 mmol), 7-triethylsilylbaccatnrHt(tí7H6 g, 0,208 mmol), DCC (79 mg, 0,383 mmol) a 4-morfolinopyridin (41 mg, 0,250 mmol) se přidá do plamenem sušené ldramové lahvičky, profouknuté argonem a částečně se rozpustí v toluenu (1 ml). Výsledná žlutá heterogenní směs se míchá při teplotě místnosti. TLC po 3 hodinách vykazuje přítomnost titulního produktu (1:1 EtOAc:hexan, PMA/EtOH, Uv). (TLC po 7 a 23 hodinách po míchání při teplotě místnosti nevykazuje žádnou další změnu).

Reakční směs se zředí ethylacetátem (1 ml), filtruje se přes sloupeček Celitu a zahuštěním se získá 0,280 g nažloutlé pevné látky. 'H NMR vykazuje požadovaný kopulovaný produkt a žádný 7-triethylsilylbaccatin III (i když skvrna byla viditelná při TLC). N-Acylmočovinový vedlejší produkt z kopulačního činidla byl přítomen v poměru k titulnímu produktu asi 9:1.

Pevná látka se chromatografuje na silikagelu pomocí 1:2 EtOAc:hexany a získá se 0,196 g bílé pevné látky. *H NMR ukazuje pouze kopulovaný titulní produkt a N-acylmočovinu v poměru asi 15:1. Výtěžek vyšší než 90 %. t.t. = 139 až 142 °C. /a/_D = -49,5°, /a/₅₇₈ =-52,6°, /α/₅₄₆ = -63,5^ο, /a/₄₃₆ = -157,0° (c = 1,0, CHCI₃).

Příklad 15

Příprava 7-triethylsilyl-13-//(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl/karbonyl/baccatinu III a 7—triethylsilyl—13—//(4S—cis)—4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolyl/karbonyl/baccatinu III

-35CZ 292993 B6

Směs cis a trans oxazolinových titulních produktů z příkladu 9 v poměru 3:1 cis:trans (100 mg), 7-triethylbaccatinu III (219 mg, 0,3121 mmol), DCC (97 mg) a DMAP (23 mg) v toluenu (0,9 ml) se připraví. Po jedné hodině zahřívání na 80 °C bylo nezreagováno významné množství 7-triethylsilylbaccatinu III. Další podíl DMAP (97 mg) a DCC (23 mg) se přidá a směs se zahřívá na 80 °C přes noc. Podle TLC jsou zjištěna malá množství výchozího materiálu (hexan:EtOAc 2:1).

Získaný reakční směs byla zředěna methylenchloridem (20 ml), nasycený hydrogenuhličitan sodný (10 ml, vod.) se přidá a vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem (2x10 ml) a spojené organické vrstvy se suší nad bezvodým MgSO₄. Po zahuštění ve vakuu se produkt čistí pomocí HPLC (hexan: ethylacetát 4:1) a získá se směs titulních produktů, obsahující dicyklohexylmočovinu (DCU). Produkt má hmotnost 260 mg po resuspendování v ethylacetátu a odstranění určitého množství DCU filtrací. Další HPLC čištění poskytne 117 mg čistého trans-titulního produktu (40 %) a 45 mg směsi (asi 2:1 trans titulní produkt: cis titulní produkt (15 %)). Směs se čistí preparativní TLC (hexany:ethylacetát, 1:1) a získá se 11 mg cis titulního produktu.

Příklad 16 Příprava taxolu

Kopulovaný titulní produkt získaný v příkladu 10 výše (0,102 g, 0,107 mmol) se odváží do 10 ml baňky a rozpustí se v tetrahydrofuranu (1,2 ml). Potom se přidá methanol (1,2 ml) a homogenní roztok se ochladí na 0 °C. Přikape se HC1 (vod., IN, 0,59 ml, 0,59 mmol) a čirý homogenní roztok se míchá při 0°C. Po 3 hodinách při 0 °C, TLC (1:1 ethylacetát:hexan, PMA/ethanol) (UV), indikuje, že výchozí materiál zbývá a čirý roztok, který je homogenní, se převede do prostoru o teplotě 4 °C. Po 18 h při 4 °C TLC analýza ukazuje, že reakce je v podstatě úplná (1:1 ethylacetát:hexan, PMA/ethanol, UV). Získá se následující sloučenina:

Čirý homogenní roztok se ohřeje na teplotu místnosti, přidá se 3,5 ml nasyceného vodného NaHCCh (zaznamenána tvorba bublinek) za vzniku heterogenní směsi. Přídavek 5 ml tetrahydrofuranu a 2 ml vody neposkytl významné zvýšení rozpustnosti. Heterogenní směs se intenzivně míchá při teplotě místnosti. Po míchání při teplotě místnosti po 1 hodinu je ještě přítomna heterogenní směs. Směs se dále ředí 7 ml vody a 4 ml tetrahydrofuranu. Výsledný čirý homogenní roztok se míchá při teplotě místnosti.

-36CZ 292993 B6

TLC po 2,5 hodinách po přídavku NaHCO₃ ukazuje pouze přítomnost taxolu (2:1 ethylacetát/hexan, PMA/Ethanol. UV). Reakční směs se zředí 25 ml ethylacetátu a 25 ml vody a třepe se. Vrstvy se oddělí a vodná frakce se extrahuje 3x25 ml ethylacetátu. Spojené organické frakce se suší nad síranem sodným, filtrují a zahuštěním se získá 104 mg slabě špinavě bílé pevné látky. 'Η NMR ukazuje na taxol. Získaná pevná látka se čistí chromatografíí na silikagelu (kolona: 20 mm průměr x 70 mm délky) pomoci 2:1 ethylacetátu/hexanu až 4:1 ethylacetátu/hexanu a získá se 79,0 mg titulního produktu jako bílé pevné látky. Výtěžek = 86,4 %.

Příklad 17

Baccatin III (3,102 g. 5,290 mmol) se rozpustí v suchém DMF (21 ml). K. tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (1,80 g, 26,5 mmol) a dále TESC1 (4,45 ml, 26,5 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a zředí se pomocí EtOAc (350 ml) a promyje se vodou (4 x 20 ml) a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu, zbytek se chromatografuje (20 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 4,00 g (89,1 %) požadovaného produktu.

Příklad 18

Příprava 1 -DMS-7,13-TES-baccatinu

7,13-TES-baccatin (2,877 g, 3,543 mmol) se rozpustí v suchém DMF (17,7 ml). K. tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (720,9 mg, 10,60 mmol) a potom dimethylchlorsilan (91,18 ml, 10,60 mmol). Reakční směs se míchá při této teplotě 45 minut a potom se zředí pomocí EtOAc (300 ml) a promyje se vodou (4 x 20 ml). Organická fáze se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10% ethylacetátu v hexanech) a získá se 2,632 g (85,4%) požadovaného produktu.

Příklad 19

Příprava 4-hydroxy-7,13-bisTES-l-DMS-baccatinu

Silylovaný baccatinový derivát z příkladu 18 (815 mg, 0,935 mmol) se rozpustí v THF (15,6 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá Red-Al (0,910 ml, 60% hmotn., 4,675 mmol). Po 40 minutách se reakce přeruší nasyceným roztokem tartrátu sodného (7 ml). Po 5 minutách se

-37CZ 292993 B6 reakční směs zředí pomocí EtOAc (250 ml). Organická fáze se promyje vodou a solankou a suší.

Organická vrstva se pak zahustí ve vakuu, zbytek se chromatografuje (10 až 20 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 590 mg (76,0 %) požadovaného C4-hydroxy-baccatinového analogu.

Příklad 20

Příprava C4-cyklopropylesteru-7,13-bisTES-l-DMS-baccatinu

C4-Hydroxylový baccatinový derivát z příkladu 19 (196 mg, 0,236 mmol) se rozpustí v suchém THF (4,7 ml). Tento roztok se při 0 °C zpracuje sLHMDS (0,283 ml, 1M, 0,283 mmol), po 30 minutých se při téže teplotě přidá cyklopropankarbonylchlorid (0,032 ml, 0,354 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom sed přeruší nasyceným NH₄C1 (3 ml). Reakční směs se extrahuje pomocí EtOAc (100 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Výsledný zbytek se chromatografuje (10 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 137 mg (65 %) požadovaného produktu.

Příklad 21

Příprava C4-cyklopropanového esteru baccatinu

7,13-TES-l-DMS-4-cyklopropan-baccatin z příkladu 20 (673 mg, 0,749 mmol) se rozpustí v suchém acetonitrilu (6 ml) a THF (2 ml). K. tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (2,25 ml) a pak 48% roztok HF (6,74 ml). Po 30 minutách při 0 °C se přidá TBAF (2,25 ml, 1M,

2,25 mmol). Přidá se další dávka TBAF až do spotřebování výchozího materiálu podle TLC. Reakční směs se zahustí na sirup a potom se zředí pomocí EtOAc (350 ml) a promyje se IN HC1, nasyceným roztokem NaHCO₃, solankou a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 366 mg (80 %) požadovaného produktu.

Příklad 22

Příprava 7-TES—4-cyklopropan-baccatinu

-38CZ 292993 B6

4-Cyklopropan-baccatin z příkladu 21 (46,6 mg, 0,076 mmol) se rozpustí v suchém DMF (1 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (20,7 mg, 0,305 mmol) a potom TESC1 (0,0512 ml, 0,305 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 30 minut a zředí se EtOAc (50 ml). Reakční směs se promyje vodou a solankou, suší a potom se zahustí ve vaku. Zbytek se chromatografuje (30 až 50% ethylacetát v hexanech) a získá se 36 mg (65,1 %) požadovaného produktu.

Příklad 23

Příprava 2',7-bisTES-4-cyklopropan-paclitaxelu

THF (1 ml) roztok sloučeniny z příkladu 22 (30,0 mg, 0,0413 mmol) se ochladí na -40 °C a zpracuje se s LHMDS (0,062 ml, 0,062 mmol). Po 5 minutách se přidá THF roztok (0,5 ml) [3-laktamu^x (23,6 mg, 0,062 mmol). Reakce se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom se přeruší nasyceným roztokem NH₄C1 (1 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc (40 ml) a promyje se vodou a solankou. Organické fáze se suší a zahustí ve vakuu, zbytek se chromatografuje (20-3060 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 24,5 mg (53,6 %) požadovaného produktu spolu s 5,1 mg (17 %) výchozího materiálu.

^xZpůsoby přípravy těchto beta-laktamů jsou popsány v patentu US 5 175 315

Příklad 24

Příprava 4-cyklopropanesteru paclitaxelu

Acetonitrilový roztok (0,5 ml) produktu z příkladu 23 (22,0 mg, 0,0220 mmol) se zpracuje při 0 °C s pyridinem (0,60 ml) a potom se 48% HF roztokem (0,180 ml). Reakční směs se udržuje při 5 °C přes noc a potom se zředí EtOAc (30 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 10,0 mg (57,2 %) požadovaného produktu.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): 5 8,10-8,06 (m, 2H), 7,76-7,26 (m, 13H), 7,04 (d, >9,1 Hz, IH), 6,27 (s, IH), 6,14 (m, IH), 5,5 (d, >6,9 Hz, IH), 4,85 (m, 2H), 4,39 (m, IH), 4,19 (AB, q, >8,4 Hz, 2H), 3,80 (d, >6,9 Hz, IH), 3,59 (d, >4,8 Hz, IH), 2,60-1,13 (m, 24H, včetně singletů při 2,23,1,77, 1,66, 1,23,1,14, 3H každý).

HRMS vypočteno pro C₄₉H₅₄NOi₄ MH⁺): 880, 3544, nalezeno: 880,3523.

-39CZ 292993 B6

Příklad 25

Příprava 7,13-TES-l-DMS-4-cyklobutylesteru baccatinu

THF roztok (2,6 ml) produktu z příkladu 19 (113,6 mg, 0,137 mmol) se zpracuje při 0 °C sLHMDS (0,178 ml, 1M, 0,178 mmol). Po 30 minutách při 0°C se přidá cyklobutylkarbonylchlorid (24,4 mg, 0,206 mmol). Reakce se míchá při 0 °C 1 hodinu a přeruší nasyceným roztokem NH₄C1 (2 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc (75 ml), promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 80 mg (64,1 %) požadovaného produktu.

Příklad 26

K acetonitrilovému roztoku (3 ml) sloučeniny z příkladu 25 při 0 °C se přidá suchý pyridin (0,61 ml), potom 48% HF (1,83 ml). Po 1 hodině při 0 °C se přidá TBAF (0,61 ml), potom 48% HF (1,83 ml). Po 1 hodině při 0 °C se přidá TBAF (0,61 ml, 1M, 0,61 mmol). Přidává se další TBAF až do úplné spotřeby všeho výchozího materiálu. Potom se rozpouštědlo částečně odstraní a zbytek se zředí EtOAc (150 ml) a promyje se IN HCI a nasyceným roztokem NaHCOj. Organická vrstva se suší a zahustí se v vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 95,6 mg (75 %) požadovaného produktu.

Příklad 27

Příprava 7-TES-4-cyklobutylesteru-baccatinu

4-Cyklobutyl-baccatin z příkladu 26 (85 mg, 0,136 mmol) se rozpustí v suchém DMF (1,4 ml). K tomuto roztoku se při 0°C přidá imidazol (36,9 mg, 0,543 mmol) a TESCI (91,2 μΐ, 0,543 mmol). Reakční směs se zředí EtOAc (75 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % ethylacetátu v hexanech) a získá se mg (73,6 %) požadovaného produktu.

Příklad 28

Příprava 2',7-TES^4-cyklobutyl-paclitaxelu

7-TES-4-cyklobutyl-baccatin z příkladu 27 (41 mg, 0,055 mmol) ser rozpustí v THF (1 ml). Tento roztok se ochladí na -40 °C a zpracuje se s LHMDS (0,083 ml, 1M, 0,083 mmol) a potom sTHF roztokem (0,5 ml) β-laktamu z příkladu 23 (31,7 mg, 0,083 mmol). Reakční směs se udržuje na 0 °C 1 hodinu a přeruší se NH₄C1 (2 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc (50 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se potom suší a zahustí ve vakuu, zbytek se chromatografuje (20 až 30 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 56 mg (90,2 %) požadovaného produktu.

Příklad 29

Příprava 4-cyklobutyl-paclitaxelu

2',7-TES^-cyklobutyl-taxol z příkladu 28 (47 mg, 0,042 mmol) se rozpustí v acetnitrilu (1 ml), k tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,125 ml), potom 48% HF (0,375 ml). Reakční směs se udržuje při 5 °C přes noc. Reakce se pak zředí EtOAc (50 ml), promyje se IN HC1, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60% ethylacetátu v hexanech) a získá se 31,8 g (84,9%) požadovaného produktu.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,15-8,12 (m, 2H), 7,73-7,26 (m, 13H), 6,96 (d, J=9,0, Hz, IH),

6,26 (s, IH), 6,17 (m, IH), 5,80 (d, J=9,0 Hz, IH), 5,66 (d, J=7,l Hz, IH), 4,83 (m, 2H), 4,41 (m, IH), 4,27 (AB q, J=8,4 Hz, 2H), 3,78 (d, J=7,0 Hz, IH), 3,57 (d, J=5,2 Hz, IH), 3,42 (m, IH), 2,61-1,14 (m, 25H, vč. singletů při 2,23, 1,76, 1,68, 1,23, 1,14, 3H každý).

HRMS vypočt. pro C₅oH₅₆NOi4 (MH⁴): 894,3701, nalezeno 894,3669.

Příklad 30

Příprava 7,13-TES-l-DMS-4-cyklopentylesteru baccatinu

41CZ 292993 B6

THF roztok (3,5 ml) sloučeniny z příkladu 19 (147 mg, 0,177 mmol) se zpracuje při 0 °C sLHMDS (0,230 ml, 1M, 0,230 mmol). Po 30 minutách se přidá cyklopentylkarbonylchlorid (32.3 μΐ, 0,266 mmol). Reakce se míchá 1 hodinu při téže teplotě a potom se přeruší nasyceným roztokem NH₄C1. Reakční směs se extrahuje a promyje a suší a zahustí se za vakua. Zbytek se chromatografuje (10% ethylacetátu v hexanech) a získá se 90 mg (55%) požadovaného produktu.

Příklad 31

Acetonitrilový roztok (1,6 ml) produktu z příkladu 30 (75 mg, 0,081 mmol) se zpracuje při 0 °C s pyridinem (0,24 ml) a potom se 48% HF (0,72 ml). Reakce se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom se přidá TBAF (0,405 ml, 1M, 0,405 mmol). Po 1 hodině se přidá dalších pět ekvivalentů činidla. Reakční směs se zředí EtOAc (100 ml) a promyje se IN HC1 a nasyceným roztokem NaHCO₃ a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (50 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 44 mg (85 %) požadovaného produktu.

Příklad 32

Příprava 7-TES-4-cyklopentylesteru baccatinu

4-Cyklopentylbaccatin (35 mg, 0,055 mmol) se rozpustí v suchém DMF (1 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (14,9 mg, 0,219 mmol) a potom TESCI (36,8 μΐ, 0,219 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 30 minut a zředí se pomocí EtOAc (50 ml). Organická vrstva se promyje a suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 31 mg (75 %) požadovaného produktu.

-42CZ 292993 B6

Příklad 33

Příprava 2',7-TES-4-cyklopentylesteru baccatinu

THF roztok (0,6 ml) produktu z příkladu 32 (24,5 mg, 0,0324 mmol) se zpracuje při -40 °C s LHDMS (0,049 ml, 1M, 0,049 mmol) a potom s THF roztokem (0,3 ml) β-laktamu z příkladu 23 (18,6 mg, 0,49 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom se reakce přeruší nasyceným roztokem NH4CI. Reakční směs se extrahuje EtOAc (35 ml) a promyje se a suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (20 až 30 až 50 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 15,5 mg (42 %) požadovaného produktu spolu se 7,8 mg (31,8 %) nezreagovaného výchozího materiálu.

Příklad 34

Příprava 4-cyklopentylesteru paclitaxelu

Acetonitrilový roztok (0,3 ml) produktu z příkladu 33 (13 mg, 0,0115 mmol) se zpracuje při 0 °C s pyridinem (0,035 ml) a potom se 48% HF (0,103 ml). Reakce se udržuje přes noc při 5 °C. Reakční směs se potom zředí EtOAc (30 ml) a promyje se IN HC1, NaHCO₃ a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (50 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 7,3 mg (70,3 %) požadovaného produktu.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,17-8,14 (m, 2H), 7,74-7,26 (m, 13H), 6,90 (d, J=8,9 Hz, IH),

6,27 (s, IH), 6,20 (m, IH), 5,75 (d, >8,9 Hz, IH), 5,69 (d, >7,0 Hz, IH), 4,79 (m, 2H), 4,44 (m, IH), 4,24 (AB q, J=8,4 Hz, 2H), 3,81 (d, >7,0 Hz, IH), 3,46 (d, >4,7 Hz, IH), 3,06 (m, IH), 2,56-1,15 (m, 27H), včet, singletů při 2,24, 1,82,1,68, 1,33,1,15, 3H každý)

HRMS vypočteno pro Cji^NOuNa (MNa⁺): 930,3677, nalezeno 930,3714.

Příklad 35

Příprava 2',7-silylovaného-4—cyklopropan-taxanu s furylovým postranním řetězcem.

43CZ 292993 B6

THF roztok (2 ml) produktu z příkladu 22 (75,8 mg, 0,104 mmol) se zpracuje při -40 °C a LHMDS (0,136 ml, 1M, 0,136 mmol) a |3-laktamem^x (57,3 mg, 0,156 mmol). Reakce se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom se přeruší nasyceným roztokem NH₄C1 (1 ml). Reakční směs se 5 extrahuje EtOAc, promyje a suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (20 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 113 mg (100 %) požadovaného produktu.

A = benzoyloxykarbonyl

B = 2-furyl

D = silylchránicí skupina

Způsoby přípravy výše uvedeného beta-laktamu jsou popsány v patentu US 5 227 400.

Příklad 36

Příprava 4-cyklopropanového esteru taxanu s furylovým postranním řetězcem

Acetonitrilový roztok produktu z příkladu 35 (2 ml) se zpracuje při 0°Cs pyridinem (0,27 ml), potom se 48% HF (0,81 ml). Reakce se udržuje při 5 °C 3 hodiny, zředí se EtOAc (75 ml), 20 promyje IN HC1, nasyceným roztokem NaHCO₃, solankou a suší se a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (50 až 60 % ethylacetátu v hexanech) získá se 68 mg (88,2 %) požadovaného produktu.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,09-8,06 (m, 2H), 7,62-7,37 (m, 3H), 7,26 (s, IH), 6,37-6,30 (m, 3H), 6,19 (m, IH), 5,65 (d, J = 7,0 Hz, IH), 5,37 (d, J = 9,9 Hz, IH), 5,23 (d, J = 9,9 Hz, IH), 25 4,82 (d, J = 8,3 Hz, IH), 4,76 (d, J = 4,1 Hz, IH), 4,42 (m, IH), 4,18 (AB q, J = 8,4 Hz, 2H), 3,85 (d, J = 6,9 HZ, IH), 3,37 (d, J = 5,4 Hz, IH), 2,55-1,01 (m, 33H, včet, singletů při 2,23, 1,90, 1,66, 1,26,1,14, 3H každý, 1,33, 9H).

HRMS vypočteno pro C₄₅H₅₆NO₁₆(MH') 866,3599 nalezeno 866,3569.

Příklad 37

Příprava 2',7-silylovaného-4-cyklobutylesteru taxanu s furylovým postranním řetězcem

44CZ 292993 B6

THF roztok (0,8 ml produktu z příkladu 22 se zpracuje při -40 °C s LHMDS (0,050 ml, 1M, 0,050 mmol). Po 2 minutách se přidá β-laktam z příkladu 35 (18,2 mg, 0,050 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a přeruší se nasyceným roztokem NH₄C1. Reakční směs se extrahuje a promyje, suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (20 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 33,0 mg (89,4 %) požadovaného produktu.

Příklad 38

Příprava 4-cyklobutylesteru taxanu s furylovým postranním řetězcem

Acetonitrilový roztok (1 ml) produktu z příkladu 37 (30,0 mg, 0,027 mmol) se zpracuje při 0 °C s pyridinem (0,081 ml) a potom se 48% HF (0,243 ml). Reakce se udržuje při 5 °C přes noc a zředí se pak EtOAc (50 ml), promyje IN HC1, nasyceným roztokem NaHCO₃ a solankou. Organická vrstva se potom suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 22 mg (92,4 %) požadovaného produktu.

'H NMR (300 Mhz, CDC1₃): δ 8,13-8,10 (m, 2H), 7,62-7,45 (m, 3H), 6,42-6,38 (m, 2H), 6,30 (s, 1H), 6,19 (m, 1H), 5,65 (d, J=7,l Hz, 1H), 5,34 (d, J=9,6 Hz, 1H), 5,18 (d, J=9,8 Hz, 1H), 4,90 (d, J=7,7 Hz, 1H), 4,73 (dd, J=2,0 Hz, J'=5,7 Hz, 1H), 4,45 (m, 1H), 4,25 (AB q, J = 8,4 Hz, 2H), 3,80 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,27 (d, J = 5,8 Hz, 1H),2,61-1,15 (m, 34H, včet, singletů při 2,24, 1,86, 1,68, 1,26, 1,15, 3H každý, 1,33, 9H).

Příklad 39

Příprava 7,13-TES-l-DMS-4-butyrátu baccatinu

Derivát C4-hydroxyl-baccatinu z příkladu 19 (181 mg, 0,218 mmol) se rozpustí v suchém THF (4,4 ml). Tento roztok se při 0 °C zpracuje s LHMDS (0,262 ml, 1M, 0,262 mmol), a po 30 minutách při této teplotě se přidá butyrylchloridu (0,034 ml, 0,33 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom se přeruší nasyceným NH|CI (3 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc

45CZ 292993 B6 (100 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 138 mg (70,3 %) požadovaného produktu.

Příklad 40

Příprava C4-butyrylesteru baccatinu

7,13-TEST-l-DMS-4-butyrát baccatinu z příkladu 39 (527 mg, 0,586 mmol) se rozpustí v suchém acetonitrilu (19,5 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (1,95 ml) a potom 48% HF roztok (5,86 ml). Po 30 minutách při 0 °C se reakční směs udržuje na 5 °C přes noc. Potom se zředí EtOAc (400 ml) a promyje se IN HC1, nasyceným roztokem NaHCO₃, solankou a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 286 mg (80 %) požadovaného produktu.

Příklad 41

Příprava 7-TES-4-butyrátu baccatinu

4-Butyrát baccatinu z příkladu 40 (286 mg, 0,466 mmol) se rozpustí v suchém DMF (2,3 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (127 mg, 1,86 mmol) a potom TESC1 (0,313 ml, 1,86 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 30 minut a potom se zředí EtOAc (100 ml). Reakční směs se promyje vodou a solankou a suší, potom se zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (30 až 50 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 283,3 mg (83,5 %) požadovaného produktu.

Příklad 42

Příprava 2',7-bisTES-C4-butyrátu paclitaxelu

ch₃ch₂ch₂

THF (8,3 ml) roztok produktu z příkladu 41 (300,6 mg, 0,413 mmol) se ochladí na -40 °C a zpracuje se sLHMDS (0,619 ml, 0,619 mmol). Po 5 minutách se přidá THF roztok 4,1 ml) β-laktamu z příkladu 23 (236 mg, 0,619 mmol). Reakce se míchá při 0 °C 1 hodinu a potom se

46CZ 292993 B6 přeruší nasyceným NH₄C1 roztokem (3 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc 150 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická fáze se suší a zahustí ve vakuu, zbytek se chromatografuje (20 až až 60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 377 mg (82,3 %) požadovaného produktu.

Příklad 43

Příprava C4-butyrátu paclitaxelu

CH₃CH₂CH₂

Acetonitrilový roztok (15,3 ml) produktu z příkladu 42 (366 mg, 0,334 mmol) se zpracuje při 0 °C s pyridinem (0,926 ml) a potom se 48% HF roztokem (2,78 ml). Reakční směs se udržuje při 5 °C přes noc a potom se zředí pomocí EtOAc (200 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 274 mg (94,5 %) požadovaného produktu.

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,12-8,09 (m, 2H), 7,71-7,32 (m, 13H), 7,00 (d, J=8,9 Hz, IH), 6,25 (s, IH), 6,16 (m, IH), 5,73 (d, J=8,8 Hz, IH), 5,64 (d, J=7,0 Hz, IH), 4,85 (d, KJ=9,4 Hz, IH), 4,76 (m, IH), 4,38 (m, IH), 4,20 (AB a, J=8,4 Hz, 2H), 3,77 (d, J=6,9 Hz, IH), 3,70 (d, J=4,3 Hz, IH), 2,66-0,85 (m, 26H, včetn. singletů při 2,20, 1,76, 1,65, 1,21, 1,11, 3H každý, triplet při 0,88 3H).

Příklad 44

Příprava 7,13-TES-l-DMS-4-ethylkarbonátu baccatinu

THF roztok (5 ml) produktu z příkladu 19 (205 mg, 0,247 mmol) se zpracuje při 0 °C s LHMDS (0,296 ml, 1M, 0,296 mmol). Po 30 minutách se při 0 °C přidá ethylchlormravenčan (0,0354 ml, 0,370 mmol). Reakce se míchá při 0 °C 1 hodinu a přeruší se nasyceným roztokem NH₄C1 (3 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc (100 ml), promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 155 ml (69,6 %) požadovaného produktu.

Příklad 45

Příprava C4-ethylkarbonátu baccatinu

47CZ 292993 B6

K acetonitrilovému roztoku (5,6 ml) produktu z příkladu 44 (152 mg, 0,160 mmol) při 0 °C se přidá suchý pyridin (0,56 ml), potom 48% HF (1,69 ml). Po 30 minutách při 0 °C se reakční směs udržuje přes noc při 5 °C. Potom se zbytek zředí EtOAc (150 ml) a promyje se IN HC1 a nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se pak suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 99 mg (95,4 %) požadovaného produktu.

Příklad 46

Příprava 7-TES-C4-ethylkarbonátu baccatinu

CH₃CH₂O

4-Ethylkarbonát baccatinu z příkladu 45 (95 mg, 0,154 mmol) se rozpustí v suchém DNF (0,771 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (42 mg, 0,617 mmol) a TESC1 (104 μΙ, 0,617 mmol). Reakční směs se zředí EtOAc (100 ml) a promyje vodou a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 95 mg (84,4 %) požadovaného produktu.

Příklad 47

Příprava 2',7-TES-C4-ethylkarbonátu paclitaxelu ^Bz'nh o

Ph'^X^Y^X^'O*

OTEŠ

7-TES-4-ethylkarbonát baccatinu z příkladu 46 (93,4 mg, 0,128 mmol) se rozpustí v THF (2,6 ml). Tento roztok se ochladí na—40 °C a zpracuje se s LHMDS (0,192 ml, 1 M, 0,192 mmol) a potom s THF roztokem (1,3 ml) beta-laktamu z příkladu 23 (73,1 mg, 0,192 mmol). Reakce se udržuje na 0 °C 1 hodinu a přeruší se pomocí NH4CI (3 ml). Reakční směs se extrahuje EtOAc (100 ml) a promyje se vodou a solankou. Organická vrstva se pak suší a zahustí ve vakuu, zbytek se chromatografuje (20 až 30 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 118 mg (83,0 %) požadovaného produktu.

Příklad 48

Příprava C4-ethylkarbonátu paclitaxelu

48CZ 292993 B6

CH₃CH₂O

2',7-TES-4-ethylkarbonát taxolu z příkladu 47 (114 mg, 0,103 mmol) se rozpustí v acetonitrilu (5,1 ml), k tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,285 ml) a pak 48% HF (0,855 ml). Reakce se udržuje při 5 °C přes noc. Reakce se potom zředí EtOAc (100 ml), promyje se IN HC1, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60% ethylacetátu v hexanech) a získá se 75 mg (82,8 %) požadovaného produktu.

‘HNMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,09-8,06 (m, 2H), 7,75-7,24 (m, 13H), 7,14 (d, J=9,0 Hz, IH), 6,24 (s, IH), 6,10 (m, IH), 5,79 (d, J=7,l Hz, IH), 5,66 (d, J=6,9 Hz, IH), 3,89 (d, J=4,3 Hz, IH), 3,81 (d, J=6,9 Hz, IH), 2,56-1,11 (m, 23H, včet, singletů při 2,21, 1,75, 1,65, 1,18, 1,11, 3H každý, triplet při 1,22, 3H).

Příklad 49

Příprava 2',7-silylatovaného-C4-butyrátu taxanu s furylovým postranním řetězcem

THF roztok (7,3 ml) 7-silyl—4-butyrátu baccatinu z příkladu 41 (266 mg, 0,365 mmol) se zpracuje při -40 °C s LHMDS (0,548 ml, 1M, 0,548 mmol). Po 2 minutách se přidá THF (3,6 ml) beta-laktamu z příkladu 35 (201 mg, 0,548 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a přeruší se nasyceným roztokem NH4CI. Reakční směs se extrahuje a promyje, suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (20 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 399,0 mg (99 %) požadovaného produktu.

Příklad 50

Příprava C4-butyrátu taxanu s furylovým postranním řetězcem

Acetonitrilový roztok (18,2 ml) produktu z příkladu 49 (399,0 mg, 0,364 mmol) se zpracuje při 0 °C s pyridinem (1,01 ml) a potom se 48% HF (3,03 ml). Reakce se udržuje na 5 °C přes noc a zředí se EtOAc (200 ml), promyje se IN HC1, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného

-49CZ 292993 B6 a solankou. Organická vrstva se pak suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 305 mg (96,5 %) požadovaného produktu.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,05-8,02 (m, 2H), 7,56-7,35 (m, 4H), 6,33-6,26 (m, 3H), 6,15 (m, IH), 5,59 (d, J=7,0 Hz, IH), 5,40 (d, J=9,7 Hz, IH), 5,26 (d, J=9,7 Hz, IH), 4,85 (d, J=9,5 Hz, IH), 4,66 (m, IH), 4,39 (m, IH), 4,17 (AB q, J=8,4 Hz, 2H), 3,76 (d, J=6,9 HZ, IH), 3,64 (J=6,0 HZ, IH), 2,65-0,91 (m, 35H, včet, singletů při 2,18, 1,82, 1,62,1,21, 1,09, 3H každý, 1,28, 9H, triplet při 0,94, 3H).

Příklad 51

Příprava 7,13-bis-TES-l-DMS-C4-methylkarbonátu baccatinu

Sloučenina z příkladu 19 (118 mg, 0,150 mmol) se rozpustí v THF (3 ml). K. tomuto roztoku se při 0 °C přidá LHMDS (0,180 ml, 1M, 0,180 mmol). Po 30 minutách se přidá methylchlorformiát (0,174 ml, 0,225 mmol). Po dalších 30 minutách se reakce přeruší NH₄C1. Reakční směs se extrahuje EtOAc (100 ml). Organická vrstva se promyje vodou (10 ml x 2) a solankou (10 ml). Organická fáze se pak suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (5 až 10% EtOAc/hexany) a získá se 104 mg (82,1 %) požadovaného produktu.

Příklad 52

Příprava C-4-methylkarbonátu baccatinu

Sloučenina z příkladu 51 (89,0 mg, 0,105 mmol) se rozpustí v CH₃CN (3,5 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,30 ml) a potom 48% HF (1,05 ml). Reakce se míchá při 0 °C 6 hodin, potom se zředí EtOAc (100 ml). Reakční směs se promyje IN HC1 (10 ml), nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml x 3). Organická fáze se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (50% EtOAc/hexany) a získá se 70 mg (100%) požadovaného produktu.

Příklad 53

Příprava 7-TES-C4-methylkarbonátu baccatinu

-50CZ 292993 B6

Sloučenina z příkladu 52 (115.5 mg, 0,192 mmol) se rozpustí v DMF (0,960 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (52,2 mg, 0,767 mmol). Po 30 minutách se reakční směs zředí EtOAc (100 ml). Organická vrstva se promyje vodou (10 ml x 2) a solankou (10 ml). Organická fáze se pak suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % EtOAc/hexany) a získá se 113 mg (96,8 %) požadovaného produktu.

Příklad 54

Příprava 2',7-silylatovaného C4-methylkarbonátu taxanu s furylovým postranním řetězcem

THF roztok (6,4 ml) 7-silyl-4-methylkarbonátu baccatinu z příkladu 53 (227,8 mg, 0,318 mmol) se zpracuje při -40 °C sLHMDS (0,350 ml, 1 M, 0,350 mmol). Po 2 hodinách se přidá THF roztok (3,6 ml) beta-laktamu z příkladu 35 (140 mg, 0,382 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1 hodinu a přeruší se NH4CI nasyceným roztokem. Reakční směs se extrahuje a promyje, suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (20 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 332,0 mg (96,3 %) požadovaného produktu.

Příklad 55

Příprava C4-methylkarbonátu taxanu s furylovým postranním řetězcem

CH₃0

Acetonitrilový roztok (15,3 ml) z příkladu 54 (332,0 mg, 0,307 mmol) se zpracuje při 0 °C pyridinem (1,7 ml) potom 48% HF (5,1 ml). Reakce se udržuje při 5 °C přes noc a zředí se EtOAc (200 ml), promyje se IN HC1, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a solankou. Organická vrstva se pak suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 260 mg (99,0 %) požadovaného produktu.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,05-8,02 (m, 2H), 7,53-7,37 (m, 4H), 6,29-6,15 (m, 4H), 5,62 (d, J=6,9 Hz, IH), 5,40 (d, J=9,6 Hz, IH), 5,30 (d, J=9,6 Hz, IH), 4,91 (d, J=9,3 Hz, IH), 4,68 (m, IH), 4,34 (m, IH), 4,16 (AB q, J=8,5 Hz, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,80 (d, J=8,9 Hz, IH), 3,69 (dd,

-51CZ 292993 B6

J=5,5 Hz, IH), 2,63-1,08 (m, 28H, včet, singletů při 2,18, 1.85. 1,60, 1,20, 1,08, 3H každý, 1,26, 9H).

Příklad 56

Příprava 2',7-silylatovaného C4-methylkarbonátu paclitaxelu

CH₃O

Sloučenina z příkladu 53 (113,3 mg, 0,158 mmol) se rozpustí v THF (3,16 ml). K. tomuto roztoku se při -40 °C přidá KHMDS (0,237 ml, 1M, 0,237 mmol) a potom beta-lak- z příkladu 23 (90,43 mg, 0,237 mmol). Postupuje se stejně jak bylo uvedeno výše a získá se 159 mg, (91,6 %) požadovaného produktu.

Příklad 57

Příprava C4-methylkarbonátu paclitaxelu

Sloučenina z příkladu 56 (149 mg, 0,136 mmol) se rozpustí v CH₃CN (6,8 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,377 ml) a potom 48% HF (1,132 ml). Postupem uvedeným výše se získá 103,4 mg (87,6 %) požadovaného produktu.

Příklad 58

Příprava C4-cyklopropylesteru 7-TES-13-oxazol-baccatinu

K suspenzi produktu z příkladu 22 (72 mg, 0,099 mmol) a produktu z příkladu 6 (29,4 mg, 0,110 mmol) v toluenu (2 ml) při teplotě místnosti se přidá DMAP (13,4 mg, 0,110). Po 10 minutách se přidá DCC (22,6 mg, 0,110). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Reakční směs se pak odfiltruje přes Celit, promyje se EtOAc. Organická vrstva se zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (30% EtOAc/hexany) a získá se požadovaný produkt.

’HNMR (CDCI₃): δ 8,27-8,24 (m, 2H), 8,03-7,26 (m, 13H), 6,42 (s, IH), 6,08 (m, IH), 5,67 (d, J=7,0 Hz), IH), 5,69 (d, J=6,0, Hz, IH), 4,92 (d, J=6,1 Hz, IH), 4,87 (d, J=8,3 Hz, IH), 4,50 (dd,

-52CZ 292993 B6

J=6,6 Hz, J'=10,3 Hz, IH), 4,16 (AB q, J=8,3 Hz, 2H), 3,85 (d, J=6,9 Hz, IH), 2,56-0,52 (m,

39H, včet, singletů při 2,15, 2,02, 1,68, 1,20, 1,18, 3H každý, triplet při 0,92, 9H).

Příklad 59

Příprava C4-cyklopropylesteru paclitaxelu

K roztoku produktu z příkladu 58 (83,4 mg, 0,084 mmol) v THF (0,8 ml) a methanolu (0,8 ml) při 0 °C se přidá IN HC1 (0,42 ml). Reakce se udržuje na 4 °C 14 hodin. Reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a přidá se nasycený hydrogenuhličitanový roztok (2,1 ml). Reakce se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny a potom se nalije do vody, reakční směs se extrahuje EtOAc (4 x 20 ml). Spojená organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % EtOAc/hexany) a získá se požadovaný produkt (45 mg) v 60% výtěžku.

Příklad 60

BMS-189892-01

OCH₃

V sušárně sušené, argonem profouknuté 25ml baňce se BMS-189892-01 (485 mg, 3,0 mmol) rozpustí v suchém methanolu (5,0 ml). Do této baňky se přidá trimethylsilylchlorid (326 mg, 3,0 mmol) po kapkách pomocí stříkačky při 0 °C. Reakční směs se míchá při 0 °C 5 minut a potom se odstraní lázeň led-voda. Reakční směs se dále míchá 14 hodin při teplotě místnosti. Reakční směs se potom zahustí ve vakuu a sušením z vysokého vakua se získá 1 kvantitativně (691 mg, 100 %) jako bílá pěna.

Chem Abs.: 34408-064-33.

Příklad 61

OCH₃

och₃

Ve 25ml baňce (691 mg, 3,0 mmol) se rozpustí 1 zvýše uvedeného příkladu v nasyceném roztoku hydrogenuhličitanu sodného (10 ml). K tomuto roztoku se přidá benzoylchlorformiát (512 mg, 3,0 mmol) při teplot místnosti. Reakční směs se míchá 14 hodin při teplotě místnosti a během této doby se vytvoří bílá sraženina. Bílá sraženina se odfiltruje a promyje se vodou (2 x

-53CZ 292993 B6 ml) a hexanem (2x5 ml). Pevná látka se suší za vysokého vakua a získá se 2 jako špinavě bílá pevná látka (745 mg, 86 %).

3

V sušárně sušené, argonem profouknuté 25ml baňce opatřené Dean-Starkovým nástavcem, se (745 mg, 2,58 mmol) rozpustí v toluenu (12 ml) a DMF (2,5 ml). Reakční směs se zahřívá k refluxu za míchání 28 hodin. Směs se zředí ethylacetátem (50 ml) a promyje se vodou (20 ml). Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (50 ml). Spojené organické frakce se suší nad mgSQf filtrují a zahuštěním ve vakuu se získá surový produkt 3 (630 mg, 77 %) jako tmavý olej. Surový se čistí sloupcovou chromatografií (silikagel, 2 x 12 cm, 10 % ethylacetátu/hexan jako eluční činidlo) a získá se 3 jako lepivý bezbarvý olej (540 mg, 66 %).

Příklad 63

Ve 25ml baňce se 3 (540 ml, 2,1 mmol) rozpustí v THF (6 ml) a vodě (3 ml). K tomuto roztoku se přidá pevný LiOH (82 mg, 2,0 mmol) najednou při teplotě místnosti. Výsledná směs se míchá 0,5 hodiny při teplotě místnosti. Reakce se přeruší přídavkem HC1 (2,4 ml, l,0N roztok) po kapkách při teplot místnosti. Potom se směs nalije do vody (10 ml), extrahuje CH2CI2 (4 x 15 ml), suší se nad síranem hořečnatým, filtruje a zahuštěním ve vakuu se získá surový 4 (420 mg, 82 %) jako žlutý olej, který se použije přímo v následujícím stupni bez dalšího čištění.

Příklad 64

BMS-184260-01

Ve 25ml v sušárně sušené, argonem profouknuté baňce se 4 (140 mg, 0,54 mmol) BMS-18426001 (346 mg, 0,495 mmol) a N,N-dimethylaminopyridin (66 mg, 0,54 mmol) suspenduje v toluenu (10 ml) při teplotě místnosti. Po míchání suspenze po 20 minut se přidá 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (DCC) (111 mg, 0,54 mmol) v jedné dávce a směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Potom se k reakční směsi přidá N,N-dimethylaminopyridin (66 mg, 0,54 mmol) a 1,3— dicyklohexylkarbodiimid (DCC) (111 mg, 0,54 mmol). Reakční směs se míchá 14 hodin. Směs se nalije do nasyceného NH₄C1 (20 ml) a extrahuje se ethylacetátem (100 ml). Organický extrakt

-54CZ 292993 B6 se filtruje přes Celíte a Celitový sloupeček se pak promyje ethylacetátem (4 x 50 ml). Spojené organické vrstvy se suší nad mgSO₄, filtrují a zahustí se ve vakuu a získá se surový produkt 5 (582 mg, 125 %). Surový produkt se čistí sloupcovou chromatografii (silikagel, 2x12 cm, 5 % ethylacetátu/hexan jako eluční činidlo) a získá se 5 (413 mg. 89 %) jako bezbarvý olej.

Ve 25ml baňce vysušené v sušárně, profouknuté argonem se rozpustí 5 (92 mg, 0,094 mmol) v THF (2,0 ml) a methanolu (2,0 ml). Do této baňky se přidá vodná HC1 (0,5 ml 2,ON roztok) při 0 °C. Roztok se pak umístí na 14 hodin do lázně o teplotě 6°C. Reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a do této baňky se přidá nasycený NaHCO₃ (5,0 ml). Reakční směs se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Směs se nalije do vody (10 ml) a extrahuje CH2CI2 (4 x 20 ml). Spojené organické frakce se suší nad síranem hořečnatým, filtrují a zahuštěním ve vakuu se získá surový produkt (70 mg) jako bílá pevná látka. K horkému roztoku surového produktu rozpuštěného v CH3OH (3,0 ml) se přidá voda (asi 1,0 ml) až do zákalu roztoku. Roztok se přes noc chladí v mrazničce. Bílá pevná látka se zfiltruje za použití středního skleněného fritového filtru a suší se za vysokého vakua. Získá se konečný produkt (51 mg, 64 %) jako bílá pevná látka.

Příklad 66

Příprava C4-cyklopropylesteru 7-TES-baccatinu s C13-(oxayolyl-furyl) postranním řetězcem

K toluenové suspenzi (2,5 ml) produktu z příkladu 22 (92,3 mg, 0,127 mmol) a produktu z příkladu 63 (36,0 mg, 0,140 mmol) při teplotě místnosti se přidá DMAP (17,1 mg, 0,140 mmol). Po 10 minutách se také přidá DCC (28,8 mg, 0,140 mmol). Po 2 hodinách při teplotě místnosti se přidá druhá dávka činidel. Reakce se míchá přes noc při teplotě místnosti. Potom se reakční směs odfiltruje a promyje EtOAc. Organická vrstvy se zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (30 % EtOAc/hexany) a získá se požadovaný produkt (125 mg), 100% výtěžek.

-55CZ 292993 B6 'H NMR (CDC1₃): δ 8,20-7,80 (m, 4H), 7,62-7,39 (m, 7H), 6,38 (m, 3H), 6,08 (m, IH), 5,67 (m, 2H), 5,20 (d, J=5,9 Hz, IH), 5,20 (d, J=5,9 Hz, IH), 4,88 (d, J=9,2 Hz, IH), 4,49 (dd. J=6,6 Hz, J-10,2 Hz, IH), 4,16 (AB q, J=8,4 Hz, 2H), 3,86 (d, J=6,8 Hz, IH), 2,54-0,52 (m. 39H, včet, singletů při 2,14, 2,03, 1,67, 1,21, 1,15, 3H každý, triplet při 0,91, 9H).

HRMS vypočt. pro C₅₃H₆₄NOi4Si(MH⁺): 966,4096, nalezeno: 966,4134.

Příklad 67

Příprava C4-cyklopropylesteru taxanu s furylovým postranním řetězcem

Sloučenina z příkladu 66 (69 mg, 0,0715 mmol) se rozpustí vTHF (1,4 ml) a MeOH (1,4 ml). Tento roztok se pak zpracuje při 0 °C s IN HC1 (0,716 ml). Po 17 hodinách při 4 ^CC se reakční směs ohřeje na teplotu místnosti a zpracuje se s NaHCO₃ nasyceným roztokem (6.5 ml). Po 6 hodinách při teplotě místnosti se reakční směs extrahuje EtOAc (4 x 20 ml). Spojená organická vrstva se zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60 % EtOAc/hexany) a získá se požadovaný produkt (37,4 mg) v 60% výtěžku.

*H NMR (CDCI3): δ 8,12-8,09 (m, 2H), 7,74-7,26 (m, 7H), 6,85 (d, J=9,3 Hz, 1H), 6,39 (s, 2H), 6,30 (s, IH), 6,20 (s, IH), 5,93 (d, J=9,3 HZ, IH), 5,67 (d, J=7,0 Hz, IH), 4,88 (s, IH), 4,82 (d, 1=1,1 Hz, IH), 4,42 (m, IH), 4,20 (AB q, J=8,5 Hz, 2H), 3,85 (d, J-6,8 Hz, IH), 2.54-0,88 (m, 24H, včet, singletů při 2,23, 1,88, 1,67, 1,24, 1,14, 3H každý).

HRMS vypočteno pro C₄7H₅₂NOi₅ (MFF): 870,3337, nalezeno 870,3307.

Příklad 68

Příprava C4-cyklopropylesteru 2'-ethylkarbonátu

Dichlormethanový roztok (22,8 ml) produktu z příkladu 24 (1,333 g, 1,52 mmol) při 0 °C se přidá k EtPr₂N (1,586 ml, 9,10 mmol) a potom EtOCOCl (0,87 ml, 9,10 mmol). Reakce se míchá při 0 °C 6 hodin. Potom se reakční směs zředí EtOAc (200 ml), promyje se vodou (20 ml x 3) a solankou. Organická vrstva se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (50 % EtOAc/hexany) a získá se požadovaný produkt (1,281 g) v 88,8% výtěžku spolu s 86 mg výchozího materiálu (6,5 %).

*H NMR (CDCI3): δ 8,12-8.10 (m, 2H), 7,76-7,26 (m, 13H), 6,90 (d, J=9,4 Hz, IH), 6,27 (m, 2H), 6,01 (dd, J=2,1 Hz, J'=9,3Hz, IH), 5,68 (d, J=7,0 Hz, m IH), 5,55 (d, J=2,4 Hz, IH), 4,83

-56CZ 292993 B6 (d, J=8,2 Hz, 1H), 4,44 (m, 1H), 4,23 (m, 4H), 3,83 (d. J=7,0 Hz, 1H), 2,53-0,87 (m, 27H, včet, singletů při 2,22, 1,95, 1,87, 1,67, 1,26, 3H každý, triplet při 1,32, 3H).

HMRS vypočteno pro C₅₂H₅₈NOi₆ MH^-): 952,3756, nalezeno 532,3726.

Příklad 69

Příprava C4-cyklopropan-2'-ethylkarbonát-7-substituovaného prekurzoru

2'-Ethylkarbonát z příkladu 68 (53 mg, 0,056 mmol) se rozpustí v DMSO (0,5 ml), potom se přidá Ac₂O (0,5 ml). Reakce se míchá při teplotě místnosti 14 hodin. Reakční směs se zředí EtOAc (50 ml), promyje se vodou (5 ml x 3), nasyceným roztokem NaHCO₃ a solankou. Organická vrstva se potom suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % EtOAc/hexany) a získá se 56,3 mg požadovaného produktu ve 100% výtěžku.

‘H NMR (CDC!₃: δ 8,10-8,07 (m, 2H), 7,76-7,26 (m. 13H), 6,90 (d, J=9,4 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 6,23 (m, 1H), 6,03 (d, >9,5 Hz, 1H), 5,70 (d, >6,9 Hz, 1H), 5,58 (d, >2,1 Hz, 1H), 4,84 (d, J=8,9 Hz, 1H), 4,66 (s, 2H), 4,21 (m, 5H), 3,91 (d, >6,8 Hz, 1H), 1H), 2,80-0,87 (m, 30H, včet, singletů při 2,17, 2,12, 2,11, 1,75, 1,22,1,20, 3H každý, triplet při 1,32, 3H).

Příklad 70

Příprava C4-cyklopropan-2'-ethylkarbonát-7-fosfát prekurzoru

K dichlormethanovému roztoku (25,7 ml) produktu z příkladu 69 (1,30 g, 1,286 mmol) se přidá 4A síto (1,30 g) a potom THF roztok (25,7 ml) NIS (434 mg, 1,929 mmol) a dibenzylfosfát (537 mg, 1,929 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti 5 hodin. Potom se reakční směs filtruje přes Celíte a promyje se EtOAc. Rozpouštědlo se odstraní a zbytek se rozpustí v EtOAc (200), promyje se 1% NaHSO₃, solankou a suší se nad síranem hořečnatý. Organická fáze se zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (50 % EtOAc/hexany) a získá se 1,278 g produktu v 80,1% výtěžku.

*H NMR (CDC1₃): δ 8,10-8,07 (m, 2H), 7,76-7,26 (m, 23H), 6,90 (d, J=9,4 Hz, 1H), 6,35 (s, 1H), 6,23 (m, 1H), 6,02 (d, J=9,5 Hz, 1H), 5,68 (d, >6,8 Hz, 1H), 5,56 (s, 1H), 5,40 (m, 1H), 5,04 (m, 4H), 4,75 (d, J=9,0 Hz, 1H), 4,20 (m, 5H), 3,89 (d, J=6,8 Hz, 1H), 2,78-0,86 (m, 27H, včet, singletů při 2,18, 1,99, 1,67, 1,18,1,09, 3H každý, triplet při 1,31, 3H).

-57CZ 292993 B6

Příklad 71

Příprava C4-cyklopropan-2'-ethylkarbonát-7-fosfátu

Sloučeniny z příkladu 70 (1,278 g, 1,03 mmol) se rozpustí v suchém EtOAc (41,2 ml). K tomuto roztoku se přidá katalyzátor Pd/C (438 mg, 10%, 0,412 mmol). Reakční směs se hydrogenuje pod tlakem 350 kPa 12 hodin. Reakční směs se pak filtruje a zahustí se ve vakuu a získá se 1,08 g surového produktu ve 100% výtěžku.

Surový produkt se použije v dalším stupni bez bližší charakterizace.

Příklad 72

Příprava C4-cyklopropan-2'-ethylkarbonát-7-fosfát-triethanolaminové soli

K EtOAc roztoku (6,8 ml) produktu z příkladu 71 (1,08 g, 1,02 mmol) se přidá 0,100M roztok triethanolaminu (6,8 ml, 0,15M) a EtOAc. Výsledná směs se umístí do -20 °C. Směs se pak filtruje, pevná látka se promyje studeným 10% EtOAc/hexanem a suší se za vaku 12 hodin a získá se požadovaný produkt (1,00 g) v 81,2% výtěžku. Čistota konečného produktu byla stanovena (HPLC) jako vyšší než 97 %.

‘H NMR (CD₃OD): δ 8,10-8,07 (m, 2H), 7,80-7,26 (m, 14H), 6,38 (s, 1H), 6,07 (m, 1H), 5,89 (d, J=5,2 Hz, 1H), 5,63 (d, J=7,0 Hz, 1H), 5,55 (d, J=5,2 Hz, 1H), 5,22 (m, 1H), 4,87 (m, 2H), 4,23 (m, 5H), 3,88 (d, J=7,0 Hz, 1H), 3,80 (m, 6H), 3,30 (m, 1H), 3,18 (m, 6H), 2,97-0,86 (m, 26H, singletů při 2,15, 1,94, 1,69, 1,57, 1,13, 3H každý, triplet při 1,30, 3H).

HRMS vypočt. pro C₅₃H₆₁NO₂₀P (MH⁺, M=kyselina): 1062, 3525, nalezeno: 1062,3550.

Příklad 73

Příprava 7-TES-13-TMS-baccatinu

-58CZ 292993 B6

7-TES-baccatin z příkladu 10 (1,895 g, 2,707 mmol) se rozpustí v suchém DMF (10,8 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (736,4 mg, 10,83 mmol), potom TMSC1 (1,37 ml, 10,83 mmol). Reakční směs se míchá při 0 °C 1,5 hodiny. Reakční směs se pak zředí EtOAc (400 ml) a promyje se vodou (20 ml x 3), solankou (15 ml). Organická vrstva se pak suší a zahustí se ve vaku. Zbytek se chromatografuje (20 % EtOAc/hexany) a získá se 1,881 g (90 %) požadovaného produktu.

Příklad 74

Příprava 7-TES-l3-TMS-l-DMS-baccatinu

7-TES-13-TMS-baccatin z příkladu 73 (305 mg, 0,430 mmol) se rozpustí v suchém DMF (2 ml). K. tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (87,6 mg, 1,289 mmol) a potom chlordimethylsilan (122 mg, 1,289 mmol). Po 1 hodině se reakční směs zředí EtOAc (150 ml), promyje se vodou (10 ml x 3) a solankou (10 ml). Výsledná organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10% EtOAc/hexany) a získá se 305 mg (92,4 %) požadovaného produktu.

Příklad 75

Příprava 7-TES-l 3-TMS-l-DMS-C4-hydroxy-baccatinu

l-DMS-7-TES-baccatin z příkladu 74 se rozpustí v suchém THF (8 ml). K. tomuto roztoku se přidá 0 °C přidá Red-Al (0,314 ml, 60%, 1,61 mmol). Směs se míchá při 0 °C 40 minut, reakce se pak přeruší nasyceným roztokem vínanu sodného (1 ml) po 2 minuty. Reakční směs se extrahuje EtOAc (150 ml), promyje se vodou (15 ml x 2) a solankou (15 ml). Organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10 až 20% EtOAc/hexany) a získá se

143,8 mg (45,3 %) požadovaného produktu.

NMR (300 MHz, CDC1₃): δ 8,10-8,06 (m, 2H), 7,55-7,39 (m, 3H), 6,39 (s, IH), 5,59 (d, >5,5 Hz, IH), 4,68 (dd, >3,9 Hz, J2=9,6 Hz, IH), 4,61 (m, IH), 4,53 (m, IH), 4,21 (AB q, >7,8 Hz, 2H), 4,03 (dd, Jl=6,1 Hz, J2=l 1,6 Hz, IH), 3,74 (s, IH), 3,48 (d, J=5,7 Hz, IH), 2,74-0,48 (m, 34H, včet, singletů při 2,15, 2,06, 1,54, 1,16, 0,92, 3H každý), 0,28 (s, 9H), -0,015 až -0,32 (dublety, 3H každý).

Příklad 76

Příprava 7-TES-l 3-TMS-l-DMS-C4-/OC(O)CH=CH₂/baccatinu

-59CZ 292993 B6

Sloučenina z příkladu 75 (99 mg, 0,125 mmol) se rozpustí v suchém THF (2,5 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá LHMDS (0,150 ml, 1M, 0,150 mmol). Po 30 minutách se přidá akryloylchlorid (0,0153 ml, 0,188 mmol). Po dalších 30 minutách se reakce přeruší nasyceným roztokem NH4CI. Reakční směs se extrahuje EtOAc (100 ml) a promyje se vodou (10 ml x 2) a solankou (10 ml). Organická fáze se suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (5 až 10 % EtOAc/hexany) a získá se 57,5 mg (54,6 %) požadovaného produktu.

Příklad 77

Příprava C4/OC(O)CH=CH₂/baccatinu

Sloučenina z příkladu 76 (105 mg, 0,125 mmol) se rozpustí v CH₃CN (2,5 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,374 ml), Potom 48% HF (1,12 ml). Reakce se udržuje při 4 °C přes noc. Reakce se zředí pak EtOAc (75 ml). Organická vrstva se promyje IN HC1 (5 ml), nasyceným roztokem NaHCO₃ (5 ml x 3) a solankou. Organická fáze se pak suší a zahustí se ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (60% EtOAc/hexany) a získá se 60,6 mg (81,3 %) požadovaného produktu.

Příklad 78

Příprava 7-TES-C4/OC(O)CH=CH₂/baccatinu

Triol z příkladu 77 (60,0 mg, 0,100 mmol) se rozpustí v suchém DMF (0,66 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá imidazol (27,2 mg, 0,400 mmol) a potom TESC1 (0,0672 ml, 0,400 mmol). Po 30 minutách se reakce zředí EtOAc (75 ml), promyje se vodou (5 ml x 3) a solankou. Organická vrstva se pak suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % EtOAc/hexany) a získá se 56,0 mg (78,4 %) požadovaného produktu.

Příklad 79

Příprava 2',7-bis-TES-4-/OC(O)CH=CH₂/paclitaxelu

-60CZ 292993 B6

CHjxCH

Baccatin z příkladu 78 (50 mg, 0,0702 mmol) se rozpustí v THF (1,4 ml). K tomuto roztoku se při -40 °C přidá LHMDS (0,0843 ml, 1M, 0,0843 mmol) a ihned potom THF (0,7 ml) roztok beta-laktamu z příkladu 23 (40,1 mg, 0,105 mmol). Po 2 minutách při -40 °C se reakce míchá při 0 °C 1 hodinu. Reakce se pak přeruší nasyceným roztokem NH₄C1. Reakční směs se extrahuje EtOAc a promyje se vodou. Organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (20 až 30 % EtOAc/hexany) a získá se 66 mg 86 % požadovaného produktu.

Příklad 80

Příprava C4/OC(O)CH=CH₂/paclitaxelu

CHjxCH

Sloučenina z příkladu 79 (46 mg, 0,0421 mmol) se rozpustí vCH₃CN (0,85 ml). K tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,125 ml) a potom 48% HF (0,375 ml). Reakce se udržuje na 4 °C přes noc. Reakční směs se pak zředí EtOAc (40 ml), promyje se IN HC1 (3 ml), nasyceným roztokem NaHCO₃ (3 ml x 3). Organická vrstva se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (70 % EtOAc/hexany) a získá se 28 mg (76,9 %) požadovaného produktu.

Příklad 81

Příprava 7,13-bis-TES-DMS-C4-/C(O)C₆H₅/baccatinu

Sloučenina z příkladu 19 (279 mg, 0,336 mmol) se rozpustí v suchém THF (7 ml). K tomuto roztoku se při 0°C přidá LHMDS (0,403 ml, lm, 0,403 mmol). Po 30 minutách se přidá benzoylchlorid (0,0585 ml, 0,504 mmol). Po 30 minutách se reakce přeruší nasyceným roztokem NH₄C1. Reakční směs se extrahuje EtOAc (150 ml). Organická vrstva se promyje vodou a solankou a suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (10 % EtOAc/hexany) a získá se 215,5 mg (68,6 %) požadovaného produktu.

Příklad 82

Příprava C4-benzoyl-baccatinu

-61CZ 292993 B6

Sloučenina z příkladu 81 (161 mg, 0,172 mmol) se rozpustí v CH₃CN. K. tomuto roztoku se při 0 °C přidá pyridin (0,57 ml) a potom 48% HF (1,80 ml). Po 5 hodinách při 4 °C se přidá další dávka reaktantu. Reakce se udržuje při 4 °C přes noc. Reakční směs se potom zředí EtOAc (100 ml) a promyje se IN HC1 (5 ml), NaHCO₃ (5 ml x 3). Organická fáze se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek takto získaný se chromatografuje (30 až 50 % EtOAc/hexany) a získá se 48 mg (43,0 %) požadovaného konečného produktu.

Příklad 83

Příprava 7-TES-C4-benzoyl-baccatinu

Triol z příkladu 82 (48,0 mg, 0,074 mmol) se rozpustí v DMF (0,40 ml). K. tomuto roztoku se při 0°C přidá imidazol (20,1 mg, 0,296 mmol) a potom TESC1 (0,0496 ml, 0,296 mmol). Po 30 minutách se reakční směs zředí EtOAc (45 ml) a promyje vodou (1 ml x 3) a solankou. Organická fáze se suší a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 % EtOAc/hexany) a získá se 48 mg (85,0 %) požadovaného konečného produktu.

Příklad 84

Příprava C4-benzoyl-paclitaxelu

Sloučenina z příkladu 83 (364,6 mg, 0,478 mmol) se rozpustí v THF (9,6 ml). K tomuto roztoku se při -40 °C přidá LHMDS (0,718 ml, 1M, 0,718 mmol) a potom beta-laktam z příkladu 23 (273,5 mg, 0,718 mmol). Stejným postupem jako v předcházejících příkladech se získá 415 mg (75,9 %) sloučeniny. Tato se potom zbaví chránících skupin rozpuštěním výše uvedené sloučeniny v CH₃CN (16,5 ml) a přidáním pyridinu (0,36 ml) při 0 °C s následujícím přídavkem 48% HF (3,0 ml). Postupem podle stupňů z příkladu 80 se získá paclitaxelový analog - 315 mg (94,8 % výtěžek).

Příklad 85

Příprava 4-cyklobutan-taxanu s furylovým postranním řetězcem

62CZ 292993 B6 (A)

7-TES-4-cyklobutyl-baccatin z příkladu 27 (154 mg, 0,208 mmol) se rozpustí v suchém toluenu (4 ml). K tomuto roztoku se při teplotě místnosti přidá volná kyselina z příkladu 63 (64,2 mg, 0,250 mmol) a DMAP (30,5 mg, 0,250 mmol). Po 10 minutách se přidá DCC (51,4 mg, 0,250 mmol). Reakce se míchá 2 hodiny a pak se přidá další dávka DCC/DMAP. Reakce se dále míchá 12 hodin. Reakční směs se pak zfiltruje přes Celita a „koláč“ se promyje EtOAc. Spojená organická vrstva se zahustí ve vakuu a zbytek se chromatografuje (30 až 40 % ethylacetátu v hexanech) a získá se 222 mg (100 %) požadovaného produktu.

(B)

THF (2 ml) a MeOH (2 ml) roztok (A)(182 mg, 0,186 mmol) se zpracuje při 0 °C s IN HCI (1,86 ml). Po 1 hodině při 0 °C se reakce udržuje na 4 °C přes noc. Reakční směs se pak zpracuje s nasyceným NaHCO₃ (9,6 ml). Po 5 hodinách při teplotě místnosti se reakční směs zředí EtOAc (120 ml) a promyje se vodou (4 x 10 ml). Organická vrstvy se pak suší mgSO₄ a zahustí ve vakuu. Zbytek se chromatografuje (40 až 60 % ethylacetátu) v hexanech) a získá se 77 mg (47 %) požadovaného produktu.

'HNMR (CDC1₃): 8,15-8,12 (m, 2H), 7,73-7,35 (m, 9H), 6,87 (d, J=9,2 Hz, IH), 6,44 (m, 2H), 6,28 (s, IH), 6,20 (m, IH), 5,89 (d, J=9,2 Hz, 5,66 (d, J=7,l Hz, IH), 4,90 (d, J=8,l Hz, IH), 4,85 (s, IH), 4,44 (m, IH), 4,27 (AB q, J=8,4 Hz, 2H), 3,80 (d, J=7,0 Hz, IH), 3,56 (m, IH), 2,610,92 (m, 25H, včet, singletů při 2,22, 1,83, 1,69, 1,23, 1,13 3H každý). ^,3C NMR (CDC1₃): 203,6, 174,4, 172,4, 171,2, 166,9, 166,8, 150,9, 142,5, 142,0, 133,5, 133,3, 132,9, 131,9, 130,1, 130,0, 129,7, 128,5, 127,0, 110,8, 108,0, 84,6, 80,8, 78,9, 76,4, 75,4, 75,0, 72,5, 72,0, 71,3, 58,5, 50,1, 45,6,43,1, 38,8, 35,6, 35,5,26,7, 25,3, 25,1, 21,9, 20,7, 18,2, 14,6, 9.5

HRMS vypočt. pro C48H54NO15 (MH⁺): 884, 3493, nalezeno 884,3472.

Příklad 86

Příprava paclitaxelu

Sloučenina z příkladu 10b se vloží do 5ml baňky a rozpustí se v THF. Přidá se methanol a slabě nažloutlý homogenní roztok se ochladí na 0 °C. Přidá se HCI a výsledný homogenní roztok se míchá při 0 °C 0,5 hodiny a pak se přenese do prostoru o teplotě 4 °C. Po 19,5 hodinách od přídavku HCI TLC nevykazuje žádný výchozí materiál. Reakční roztok se přidá do baňky obsahující 20 ml 0,5 nasyceného roztoku NaCl. Výsledná heterogenní směs se míchá při teplotě místnosti 45 minut. Směs se filtruje a pevná látka se promyje 15 ml vody a suší vzduchem

63CZ 292993 B6 v nálevce s fritou. Pevná bílá látka se pak promyje na fritě pomocí disoluce v THF do další baňka a zahuštěním se získá 0,169 g sklovité pevné látky. Materiál se přenese do lahvičky a rozpustí v 1,0 ml THF. Přidá se NEt₃ (4 ekv., 0,63 mmol, 88 ml) a vytvoří se sraženina. Heterogenní směs se míchá při teplotě místnosti. TLC vykazuje, že reakce je v podstatě úplná po 4,25 h po přídavku NEt₃. Směs se zředí 5 ml EtOAc a 5 ml vody a třepe se. Vrstvy se oddělí. Vodná frakce se extrahuje dvakrát 5 ml EtOAc. Spojené organické frakce se promyjí 5 ml HC1 (v), 5 ml nasyceného vodného NaCl a suší nad Na₂SO₄, filtrují a zahuštěním se získá 0,127 g bílé pevné látky (paclitaxelu) ve výtěžku 93,9 %.

V popisu jsou používány zkratky, které mají význam vysvětlený v připojeném seznamu.

Seznam zkratek

Me methyl

Et ethyl

Ac acyl

Bz benzoyl

Bn benzyl

Ph fenyl

DMF dimethylformamid

PMA fosfomolybdenová kyselina

LHMDS lithium-hexamethyldisilan

TBAF tetrabutylamoniumfluorid

TES triethylsilan

DMS dimethylsilan

DMSO dimethylsulfoxid (v případě použití jako rozpouštědlo)

DMSO dimethylsilanová chránící skupina na kyslíku (pokud je znázorněna jako část chemické struktury)

TMS trimethylsilan

TMSO trimethylsilanová chránící skupina na kyslíku

PPTS pyridinium-p-toluensulfonová kyselina

TMSC1 trimethylsilylchlorid.

Claims

1. Způsob přípravy taxanu nesoucího oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III (III) , ve kterém

R¹ je R⁵ nebo R⁷-O-,

R³ je fenyl, benzyl nebo furyl,

R⁷ je alky] s 1 až 10 atomy uhlíku a

-64CZ 292993 B6

T je taxanová skupina vzorce

H i O-C(O>R¹⁰O-C(O)Rⁿ kde

R^s je vodík, hydroxyskupina, alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části nebo R^I4-O-,

R⁹ je vodík, hydroxyskupina nebo R^l4-O-,

R¹⁴ je skupina chránící hydroxyskupinu, nebo jeho soli, vyznačující se tím, že se nechá reagovat oxazolin obecného vzorce II ve kterém

R* a R^{3 * * *} mají výše definovaný význam, nebo jeho sůl s příslušným taxanem, majícím hydroxyskupinu přímo navázanou na C-13, nebo jeho solí, za přítomnosti kondenzačního činidla, za vzniku uvedeného taxanu nesoucího postranní řetězec obecného vzorce III nebo jeho soli.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že kondenzační činidlo zahrnuje sloučeninu vybranou ze souboru zahrnujícího dicyklohexylkarbodiimid, 1,3-diizopropylkarbodiimid, hydrochlorid l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu, chlorid bis—(2— oxo-3-oxazolidinyl)fosforečné kyseliny, karbonyldiimidazol, pivaloylchlorid a 2,4,6-trichlorbenzoylchlorid, spolu se sloučeninou vybranou ze souboru zahrnujícího 1-hydroxybenzotriazol, N-hydroxysukcinimid, triethylamin, pyridin a pyridin substituovaný v poloze 4 skupinou N(R¹⁶)(R¹⁷), kde R¹⁶ a R¹⁷ jsou nezávisle vybrány z alkylu s 1 až 10 atomu uhlíku, alkenylu se 2 až 10 atomy uhlíku, alkinylu se 2 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylu se 3 až 7 atomy uhlíku, cykloalkenylu se 3 až 7 atomy uhlíku nebo heterocyklylu, nebo kde R¹⁶ a R¹⁷ dohromady s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří heterocyklylovou skupinu.

3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že R¹ je fenyl nebo alkoxyskupina,

R⁸ je hydroxyskupina nebo alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, R⁹ je hydroxyskupina nebo chráněná hydroxyskupina, R¹⁰ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a R¹¹ je fenyl.

-65CZ 292993 B6

4. Způsob podle nároku 3, vy zn a č uj í c í se tím, že R¹ je fenyl nebo/erc-butoxyskupina, R³ je fenyl nebo furyl, R⁸ je hydroxyskupina nebo acetyloxyskupina, R⁹ je hydroxyskupina nebo trialkylsilyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v každé alkylové části a R'° je methyl.

5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že uvedeným oxazolinem obecného vzorce II je (4S-trans)-4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová kyselina nebo (4S-cis)4,5-dihydro-2,4-difenyl-5-oxazolkarboxylová kyselina nebo jejich směs a uvedeným taxanem je 7-triethylsilylbaccatin III nebo 7-trimethylsilylbaccatin III.

6. Taxan nesoucí oxazolinový postranní řetězec obecného vzorce III (III) , ve kterém

R¹ je R⁵ nebo R⁷-O-,

R³ je fenyl, benzyl nebo furyl,

R⁷ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a

T je taxanová skupina vzorce kde

R⁸ je vodík, hydroxyskupina, alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, acetyloxyskupina nebo R^I4-O-,

R⁹ je vodík, hydroxyskupina nebo R¹⁴-O-,

R¹⁴ je skupina chránící hydroxyskupinu, vybraná ze souboru zahrnujícího methoxymethyl, 1ethoxyethyl, 1-methoxy-l-methylethyl, benzyloxymethyl, (fMrimethylsilylethoxy)methyl, tetrahydropyranyl, 2,2,2-trichlorethoxykarbonyl, terc.-butyl(difenyl)silyl, trialkylsilyl, trichlormethoxykarbonyl a 2,2,2-trichlorethoxymethyl, nebo jeho sůl.

7. Sloučenina podle nároku 6, obecného vzorce III, kde R¹ je fenyl nebo alkoxyskupina, R⁸ je hydroxyskupina nebo alkylkarbonyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, R⁹ je

-66CZ 292993 B6 hydroxyskupina nebo uvedená chráněná hydroxyskupina, R¹⁰ je alkyl s 1 až 10 atomy uhlíku a

R¹¹ je fenyl.

8. Sloučenina podle nároku 7, obecného vzorce III, kde R¹ je fenyl nebo /erc-butoxyskupina, 5 R³ je fenyl nebo furyl, R⁸ je hydroxyskupina nebo acetyloxyskupina, R⁹ je hydroxyskupina nebo trialkylsilyloxyskupina s 1 až 10 atomy uhlíku v každé alkylové části a R ⁰ je methyl.

9. Sloučenina podle nároku 8, kterou je 7-triethylsilyl-13-[[(4S-trans)-4,5-dihydro-2,4difenyl-5-oxazolyl]karbonyl]baccatin III a 7-trimethylsilyl-13-[[(4S-trans}-4,5-dihydro-2,4- ío difenyl-5-oxazolyl]karbonyl]baccatin III.