CZ234097A3 - Inhibitory adhese buněk - Google Patents

Inhibitory adhese buněk Download PDF

Info

Publication number
CZ234097A3
CZ234097A3 CZ972340A CZ234097A CZ234097A3 CZ 234097 A3 CZ234097 A3 CZ 234097A3 CZ 972340 A CZ972340 A CZ 972340A CZ 234097 A CZ234097 A CZ 234097A CZ 234097 A3 CZ234097 A3 CZ 234097A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
phenylmethyl
group
bio
substituted
ureido
Prior art date
Application number
CZ972340A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ291556B6 (cs
Inventor
Steven P. Adams
Ko-Chung Lin
Wen-Cherng Lee
Alfredo C. Castro
Craig N. Zimmerman
Charles E. Hammond
Yu-Sheng Liao
Julio Hernan Cuervo
Juswinder Singh
Original Assignee
Biogen, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogen, Inc. filed Critical Biogen, Inc.
Publication of CZ234097A3 publication Critical patent/CZ234097A3/cs
Publication of CZ291556B6 publication Critical patent/CZ291556B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/22—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C255/00—Carboxylic acid nitriles
    • C07C255/01—Carboxylic acid nitriles having cyano groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C255/19—Carboxylic acid nitriles having cyano groups bound to acyclic carbon atoms containing cyano groups and carboxyl groups, other than cyano groups, bound to the same saturated acyclic carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/38—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by doubly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/42—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/46—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups containing any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom, e.g. acylureas
    • C07C275/48—Y being a hydrogen or a carbon atom
    • C07C275/54—Y being a carbon atom of a six-membered aromatic ring, e.g. benzoylureas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/01—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C311/02—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C07C311/03—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton having the nitrogen atoms of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C311/06—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton having the nitrogen atoms of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to acyclic carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/15—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C311/21—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the sulfonamide groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/48—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C317/50—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/42—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/55—Acids; Esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/48—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/38—Nitrogen atoms
    • C07D277/44—Acylated amino or imino radicals
    • C07D277/48—Acylated amino or imino radicals by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbonylguanidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
    • C07D317/50—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
    • C07D317/60—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/02—Systems containing only non-condensed rings with a three-membered ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

(57) Anotace:
Sloučeniny obecného vzorce I, kde X, Ri, R2, R3, R4, Y a n mají význam, uvedený v patentových nárocích, jsou vhodné pro inhibici a prevenci adhese buněk a patologických stavů, touto adhesí zprostředkovaných. Rovněž jsou popsány farmaceutické přípravky, které obsahují tyto sloučeniny, a metody jejich použití pro inhibici a prevenci adhese buněk a patologických stavů, touto adhesí zprostředkovaných. Uvedené sloučeniny a farmaceutické přípravky mohou být použity pro terapii i prevenci. Jsou zvláště vhodné pro léčbu mnoha zánětlivých a autoimunitních onemocnění.
I
175292/HK
y:;
C't
Inhibitory adhese buněk
Oblast techniky
Vynález se týká nových sloučenin pro inhibicí a prevenci adhese buněk a patologických stavů, touto adhesi zprostředkovaných. Vynález se rovněž týká farmaceutických přípravků, obsahujících tyto látky, a metod jejich použití pro inhibicí a prevenci adhese buněk a patologických stavů, touto adhesi zprostředkovaných. Sloučeniny a farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být použity pro terapii nebo pro profylaxi. Jsou zvláště vhodné pro léčení mnoha zánětlivých a autoimunitních onemocnění.
Dosavadní stav techniky
Adhese buněk je pochod, při kterém se buňky navzájem spojují, migrují ke specifickému cíli, nebo se lokalisují v extracelulární hmotě. Jako taková je adhese buněk jedním ze základních mechanismů, spojených s četnými biologickými jevy. Je možno například uvést adhesi hematopoietických buněk na endotheliální buňky a následnou migraci těchto hematopoietických buněk z cév k místu zranění. Adhese buněk hraje svou roli v patologických stavech jako jsou záněty a imunitní reakce u savců.
Výzkumy adhese buněk na molekulární úrovni zjistily, že různé makromolekuly buněčného povrchu - souhrnně známé jako molekuly nebo receptory buněčné adhese - zprostředkuj í interakce buňka-buňka a buňka-buněčná hmota. Například proteiny superrodiny zvané integriny jsou klíčové mediátory při adhesivních interakcích mezi hematopoietickými buňkami a jejich mikrookolím (M.E. Hemler, VLA Proteins in the Integrin Family: Structures, Functions, and Their Role on Leukocytes. Ann. Rev. Immunol., 8, str. 365 (1990)). Integriny jsou nekovalentní heterodimerní komplexy sestávající ze dvou podjednotek, nazvaných α a β. Existuje nejméně 12 různých α-podjednotek (al - a6, a-L, a-M, a-X, a-IIB, a-V a a-E) a alespoň 9 různých podjednotek β (βΐ - β9). Každá molekula integrinu je kategorisována do podrodin podle typu jeho α a β podjednotek.
Integrin α4β1, známý také jako velmi pozdní antigen-4 (VLA-4), CD49d/CD29, je povrchový receptor leukocytových buněk, který participuje při velmi mnoha adhesivních interakcích buňka-buňka a buňka-buněčná hmota (M.E. Hemler, Ann. Rev. Immunol., 8, str. 365 (1990)). Slouží jako receptor pro cytokinem indukovatelný protein na povrchu endotheliálních buněk, vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1), právě tak jako pro protein extracelulární buněčné struktury fibronektin (FN) (Ruegg a spol., J. Cell. Biol., 177, str. 179 (1991); Wayner a spol., J. Cell. Biol., 105, str. 1873 (1987); Kramer a spol., J. Biol. Chem., 264, str. 4684 (1989); Gehlsen a spol., Science, 24, str. 1228 (1988)). Bylo zjištěno, že anti-VLA-4 monoklonální protilátky (mAb) inhibují VLA-4-depondentní adhesivní interakce in vitro i in vivo (Ferguson a spol., Proč. Nati. Acad. Sci.,
88, str. 8072 (1991); Ferguson a spol., J. Immunol., 150, str. 1172 (1993)). Výsledky pokusů in vivo naznačují, že tato inhibice VLA-4-dependentní buněčné adhese může předejít některým zánětlivým a autoimunitním patologickým stavům, nebo je inhibovat (R.L. Lobb a spol., The Pathophysiologic Role of a-4 Integrins in Vivo, J. Clin. Invest., 94, str.
1722-28 (1994)).
Aby se zjistila minimální aktivní aminokyselinová sekvence, potřebná k vazbě VLA-4, Komoriya a spolupracovníci (The Minimal Essential Sequence for a Major Cell Type-Specific Adhesion Site (CS1) within the Alternatively Sliced Type III Connecting Segment Domain of Fibronectin Is Leucine-Aspartic Acid-Valine, J. Biol. Chem., 266 (23), str. 15075-79 (1991)) syntetizovali mnoho různých překrývajících se peptidů na bázi aminokyselinové sekvence v CS-1 oblasti (VLA-4 vazebná doména) určitého druhu fibronektinu. Identifikovali oktapeptid Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr (SEQ ID NO: 1) a dva kratší překrývající se pentapeptidy,
Glu-Ile-Leu-Asp-Val (SEQ ID NO: 2) a Leu-Asp-Val-Pro-Ser (SEQ ID NO: 3), které vykazovaly inhibiční aktivitu vůči FN-dependentní adhesi buněk. Podle těchto výsledků by tripeptid Leu-Asp-Val měl být minimální sekvencí, aktivní pro adhesi buněk. Později se však ukázalo, že Leu-Asp-Val se váže pouze k lymfocytům, exprimujícím aktivovanou formu VLA-4, čímž byla zpochybněna užitečnost takového peptidu in vivo (E.A. Wayner a spol., Activation-Dependent Recognition by Hematopoietic Cells of the LDV Sequence in the V Region of Fibronectin, J. Cell. Biol., 116 (2), str. 489-497 (1992)). Později však bylo nalezeno, že některé větší peptidy s LDV sekvencí jsou aktivní in vivo (T.A. Ferguson a spol., Two Integrin Binding Peptides Abrogate T-Cell-Mediated Immune Responses In Vivo, Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 88, str. 8072-76 (1991); S.M. Wahl a spol., Synthetic Fibronectin Peptides Suppress Arthritis in Rats by Interrupting Leukocyte Adhesion and Recruitment, J. Clin. Invest., 94, str. 655-62 (1994 ) ) .
Byl rovněž popsán cyklický pentapeptid, Arg-Cys-Asp-Tpro-Cys (kde TPro značí 4-thioprolin), který může inhibovat adhesi VLA-4 i VLA-5 k FN (D.M. Nowlin a spol. A Novel Cyclic Pentapeptide Inhibits α4β1 and a51 Integrin-Mediated Cell Adhesion, J. Biol. Chem. 268 (27), str. 20352-59 (1993); a PCT publikace PCT/US91/04862). Tento peptid je založen na tripeptidové sekvenci Arg-Gly-Asp z FN, známé jako obecná sekvence, která je součástí vazebného místa pro některé extracelulární proteiny.
Navzdory tomuto pokroku stále přetrvává potřeba malých specifických inhibitorů VLA-4-dependentní adhese buněk.
V ideálním případě by měly být takové inhibitory semipeptidické nebo nepeptidické povahy, aby je bylo možno aplikovat perorálně. Takové látky by byly užitečné pro léčení, prevenci nebo potlačení různých patologických stavů zprostředkovaných adhesí buněk a vazbou s VLA-4.
Podstata vynálezu
Tyto nové sloučeniny, léčebné přípravky a metody podle vynálezu jsou s výhodou používány k léčení zánětlivých a imunitních onemocnění. Vynález rovněž zahrnuje metody přípravy sloučenin podle vynálezu a meziprodukty použité při těchto metodách.
Definice
Termín alkyl, použit sám o sobě nebo v kombinaci s jiným slovem, v dalším znamená alkylový radikál s rovným nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 1 až 10 atomů uhlíku, zejména 1 až 6 atomů uhlíku a nejlépe 1 až 4 atomy uhlíku. Aniž by se omezil rozsah vynálezu, příkladem takových radikálů mohou být methylová skupina, ethylová skupina, n-propylová skupina, isopropylová skupina, n-butylová skupina, isobutylová skupina, sec-butylová skupina, t-butylová skupina, pentylová skupina, isoamylová skupina, hexylová skupina, decylová skupina a podobně.
Termín alkenyl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená alkenylový radikál s rovným nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 2 až 10 atomů uhlíku, zejména 2 až 6 atomů uhlíku a nejlépe 2 až 4 atomy uhlíku. Aniž by se omezil rozsah vynálezu, příkladem takových radikálů mohou být ethenylová skupina, E- a Z-propenylová skupina, isopropenylová skupina, E- a Z-butenylová skupina, E- a Z-isobutenylová skupina,
E- a Z-pentenylová skupina, decenylová skupina, a podobně.
Termín alkinyl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená alkinylový radikál s rovným nebo rozvětveným řetězcem, obsahující 2 až 10 atomů uhlíku, zejména 2 až 6 atomů uhlíku a nejlépe 2 až 4 atomy uhlíku. Aniž by se omezil rozsah vynálezu, příkladem takových radikálů mohou být ethinylová (acetylenylová) skupina, propinylová skupina, propargylová skupina, butinylová skupina, hexinylová skupina, decinylová skupina, a podobně.
Termín cykloalkyl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená cyklický alkylový radikál obsahující 3 až 8 atomů uhlíku, zejména 3 až 6 atomů uhlíku. Aniž by se omezil rozsah vynálezu, příkladem takových radikálů mohou být cyklopropylová skupina, cyklobutylová skupina, cyklopentylová skupina, cyklohexylová skupina, a podobně.
Termín cykloalkenyl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená cyklický uhlíkatý kruh obsahující 4 až 8 atomů uhlíku, zejména 5 nebo 6 atomů uhlíku, a jednu nebo více dvojných vazeb. Aniž by se omezil rozsah vynálezu, příkladem takových radikálů mohou být cyklopentenylová skupina, cyklohexenylová skupina, cyklopentadienylová skupina, a jiné.
Termín aryl znamená karbocyklickou aromatickou skupinu ze serie fenylová skupina, naftylová skupina, indenylová skupina, indanylová skupina, azulenylová skupina, fluorenylová skupina nebo anthracenylová skupina; nebo heterocyklickou aromatickou skupinu ze serie furylová skupina, thienylová skupina, pyridylová skupina, pyrrolylová skupina, oxazolylová skupina, thiazolylová skupina, imidazolylová skupina, pyrazolylová skupina,
2-pyrazolinylová skupina, pyrazolidinylová skupina, isoxazolylová skupina, isothiazolylová skupina,
1.2.3- oxadiazolylová skupina, 1,2,3-triazolylová skupina,
1.3.4- thiadiazolylová skupina, pyridazinylová skupina, pyrimidinylová skupina, pyrazinylová skupina,
1.3.5- triazinylová skupina, 1,3,5-trithianylová skupina, indolicinylová skupina, indolylová skupina, isoindolylová skupina, 3H-indolylová skupina, indolinylová skupina, benzo[b]furanylová skupina, 2,3-dihydrobenzofuranylová skupina, benzo[b]thiofenylová skupina, lH-indazolylová skupina, benzimidazolylová skupina, benzthiazolylová skupina, purinylová skupina, 4H-chinolicinylová skupina, chinolylová skupina, isochinolylová skupina, cinnolylová skupina, ftalazinylová skupina, chinazolinylová skupina, chinoxalinylová skupina, 1,8-naftyridinylová skupina, pteridinylová skupina, karbazolylová skupina, akridinylová skupina, fenazinylová skupina, fenothiazinylová skupina a fenoxazinylová skupina.
Arylové skupiny, definované v této přihlášce, mohou nezávisle na sobě obsahovat jeden až čtyři substituenty, které jsou nezávisle na sobě voleny ze skupiny obsahující následující atomy nebo skupiny: atom vodíku, atom halogenu, hydroxylové skupina, aminová skupina, nitroskupina, trifluormethylová skupina, trifluoromethoxylová skupina, alkylová skupina, alkenylové skupina, alkinylová skupina, kyanskupina, karboxylová skupina, karboalkoxylová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkylová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkenylové nebo alkinylová skupina,
1,2-dioxymethylenová skupina, 1,2-dioxyethylenová skupina, alkoxylová skupina, alkenoxylová skupina nebo alkinoxylová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkoxylová skupina,
Ar'-skupinou substituovaná alkenoxylová skupina nebo alkinoxylová skupina, alkylaminová skupina, alkenylaminová skupina nebo alkinylaminová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkylaminová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkenylaminová skupina nebo alkinylaminová skupina, Ar'-skupinou substituovaná karbonyloxylová skupina, alkylkarbonyloxylová skupina, alifatická nebo aromatická acylová skupina, Ar'-skupinou substituovaná acylová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkylkarbonyloxylová skupina,
Ar'-skupinou substituovaná karbonylaminová skupina,
Ar'-skupinou substituovaná aminová skupina,
Ar'-substituovaná oxyskupina, Ar'-substituovaná karbonylové skupina, alkylkarbonylaminoskupina, Ar'-skupinou substituovaná alkylkarbonylaminová skupina, alkoxy-karbonylaminová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkoxykarbonylaminoskupina, Ar'-skupinou substituovaná oxykarbonylaminová skupina, alkylsulfonylaminová skupina, mono- nebo bis-(Ar'-sulfonyl)aminová skupina, Ar'-skupinou substituovaná alkyl-sulfonylaminová skupina, morfolinokarbonylaminová skupina, thiomorfolinokarbonylaminová skupina, N-alkylguanidinová skupina, N-Ar-guanidinová skupina,
N,N-(Ar',alkyl)guanidinová skupina, N,N-(Ar',Ar')guanidinová skupina, Ν,Ν-dialkylguanidinová skupina,
Ν,Ν,Ν-trialkylguanidinová skupina, N-alkylureidová skupina, Ν,Ν-dialkylureidová skupina, N-Ar'-ureidová skupina,
N,N-(Ar',alkyl)ureidová skupina a Ν,Ν-(Ar')2ureidová skupina; acylkarbonylaminová skupina; Ar'-skupinou substituovaná arylová skupina; aromatická nebo alifatická acylová skupina substituovaná aromatickou acylovou skupinou; Ar'-skupinou substituovaná heterocyklylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná cykloalkylová nebo cykloalkenylová skupina; heterocyklylalkoxylová skupina; N,N-(Ar',hydroxyl)ureidová skupina; Ar'-skupinou substituovaná cykloalkylová a cykloalkenylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná biarylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminokarbonylaminová skupina, Ar'-merkaptoskupinou substituovaná alkylová skupina; Ar'-aminoskupinou substituovaná arylová skupina; Ar'-oxyskupinou substituovaná alkylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminocykloalkylová a cykloalkenylová skupina; aralkylaminosulfonylová skupina; aralkoxyalkylová skupina; N-Ar'-skupinou substituovaná thioureidová skupina; N-aralkoxyureidová skupina; N-hydroxyureidová skupina; N-alkenylureidová skupina; N,N-(alkyl,hydroxyl)ureidová skupina; heterocyklylová skupina; thioaryloxylovou skupinou substituovaná arylová skupina;
Ν,Ν-(aryl,alkyl)-substituovaná hydrazinová skupina;
Ar'-skupinou substituovaná sulfonylheterocyklylová skupina;
aralkylovou skupinou substituovaná heterocyklylová skupina; cykloalkylovou nebo cykloalkenylovou skupinou substituovaná heterocyklylová skupina; arylová skupina s přikondenzovaným cykloalkylem; aryloxyskupinou substituovaná alkylová skupina; heterocyklylaminová skupina; Ar'-skupinou substituovaná arylaminosulfonylová skupina; thioarylovou skupinou substituovaná thioxyskupina; Ar'-skupinou substituovaná alkenoylová skupina; alifatická nebo aromatická acylaminokarbonylová skupina; alifatickou nebo aromatickou acylskupinou substituovaná alkenylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminokarbonyloxylová skupina; arylová skupina substituovaná dvěmi Ar'-skupinami; alifatickou nebo aromatickou acylskupinou substituovaná acylová skupina; heterocyklylkarbonylaminová skupina s benzenovým jádrem přikondenzovaným k heterocyklickému kruhu; Ar'-skupinou substituovaná hydrazinová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminosulfonylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná alkyliminová skupina; Ar'-skupinou substituovaná heterocyklylová skupina; acylaminoskupina substituovaná dvěma Ar'-skupinami; Ar'-skupinou substituovaná cykloalkenonylaminová skupina; heterocyklylalkoxylová skupina; N,N-Ar'-hydroxyureidová skupina;
N,N'-Ar'-hydroxyureidová skupina; heterocyklylkarbonylaminová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminokarbonylheterocyklylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminokarbonylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná karbonylaminová skupina; Ar'-skupinou substituovaná aminosulfonylaminová skupina; Ar'-skupinou substituovaná merkaptoalkylová skupina; Ar'-aminovou skupinou substituovaná biarylová skupina; aralkylaminoalkoxylová skupina; alkoxylová skupina substituovaná alkylovou a aryloxylovou skupinou; heterocyklylkarbonylová skupina;
Ar'-skupinou substituovaná sulfonylalkylová skupina;
Ar'-aminoskupinou substituovaná karbocyklylová skupina; aralkylsulfonylová skupina; alkenylová skupina substituovaná arylovou skupinou; heterocyklylalkylaminová skupina;
heterocyklylalkylaminokarbonylová skupina; Ar'-skupinou substituovaná cykloalkylová skupina; thioryloxyalkylová skupina; thioaryloxymerkaptoskupina;
cykloalkylkarbonylalkylová skupina; aminová skupina substituovaná cykloalkylem; Ar'-skupinou substituovaná arylaminová skupina; aryloxykarbonylalkylová skupina; fosfordiamidylová kyselina nebo ester;
aryloxydimethylsiloxylová skupina;
1.3- indandionylkarbonylalkylová skupina;
1.3- indandionylkarbonylová skupina; oxamidylová skupina; heterocyklylalkylidenylová skupina; formamidinylová skupina; benzalizinylová skupina; benzalhydrazinová skupina;
arylsulfonylureidová skupina; benzilaminová skupina;
4-(N-2-karboxyalkyl-l-(1,3-benzodioxol-5-yl)amino-N-leucinylalkylamidylarylureidová) skupina; ureidová skupina substituovaná Ar'-karbamoyloxylovou, alkylovou nebo aryloxylovou skupinou; kde Ar' je karbocyklická nebo heterocyklická arylová skupina jak je definováno výše, která má jeden až tři substituenty ze skupiny obsahující atom vodíku, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, aminovou skupinu, nitroskupinu, trifluormethylovou skupinu, trifluormethoxylovou skupinu, alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, 1,2-dioxymethylenovou skupinu, 1,2-dioxyethylenovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkenoxylovou skupinu, alkinoxylovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkenylaminovou skupinu nebo alkinylaminovou skupinu, alkylkarbonyloxyskupinu, alifatickou nebo aromatickou acylovou skupinu, alkylkarbonylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, N-alkylureidovou skupinu nebo N,N-dialkylureidovou skupinu.
Termín alkoxy, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená alkyletherový radikál, přičemž termín alkyl je definován výše. Příklady vhodných alkyletherových radikálů zahrnují methoxylovou skupinu, ethoxylovou skupinu, n-propoxylovou skupinu, isopropoxylovou skupinu, n-butoxylovou skupinu, isobutoxylovou skupinu, sec-butoxylovou skupinu, t-butoxylovou skupinu a podobně, aniž by tyto příklady omezovaly rozsah vynálezu.
Termín alkenoxy, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkenyl-Ο-, přičemž termín alkenyl je definován výše, ze předpokladu, že radikál není enolether. Jako příklady vhodných alkenoxylových radikálů je možno uvést allyloxylovou skupinu, E- a Z-3-methyl-2-propenoxylovou skupinu a podobně, aniž by tyto příklady omezovaly rozsah vynálezu.
Termín alkinyloxy, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkinyl-0, přičemž termín alkinyl je definován výše, za předpokladu, že tento radikál není inolether. Jako příklady alkinoxylových radikálů můžeme uvést, aniž by se tím omezoval rozsah vynálezu, propargyloxylovu skupinu, 2-butinyloxylovou skupinu a jiné.
Termín thioalkoxy znamená radikál thioetheru vzorce alkyl-S, přičemž alkyl je definován výše.
Termín alkylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená aminovou skupinu, substituovanou jednou nebo dvěma alkylovými skupinami (t.j. radikál vzorce alkyl-NH- nebo (alkyl)2N- ), přičemž termín alkyl je definován výše. Jako příklady vhodných alkylaminových radikálů je možno uvést methylaminovou skupinu, ethylaminovou skupinu, propylaminovou skupinu, isopropylaminovou skupinu, t-butylaminovou skupinu, Ν,Ν-diethylaminovou skupinu a jiné, aniž by se tím omezoval rozsah vynálezu.
Termín alkenylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkenyl-NH- nebo (alkenyl)2N-, přičemž termín alkenyl je definován výše, za předpokladu, že tento radikál není enamin. Jako příklad je možno uvést allylaminovou skupinu.
Termín alkinylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkinyl-NH- nebo (alkinyl)2N-, přičemž termín alkinyl je definován výše, za předpokladu, že tento radikál není inamin. Jako příklad takové alkinylaminové skupiny je možno uvést propargylaminovou skupinu.
Termín aryloxy, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-Ο-, přičemž termín aryl je definován výše. Jako příklady je možno uvést fenoxylovou skupinu, naftoxylovou skupinu, pyridyloxylovou skupinu a pod., aniž by se tím omezoval rozsah vynálezu.
Termín arylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-ΝΗ-, přičemž aryl je definován výše. Jako příklady je možno uvést fenylaminovou (anilidovou) skupinu, naftylaminovou skupinu, 2-,3- a 4-pyridylaminovou skupinu a pod., aniž by se tím omezoval rozsah vynálezu.
Termín biaryl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-aryl-, přičemž termín aryl je definován výše.
Termín thioaryl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-S, přičemž termín aryl je definován výše. Jako příklad thioarylového radikálu je možno uvést thiofenylovou skupinu.
Termín cykloalkyl s přikondenzovaným arylem, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená cykloalkylovou skupinu, která má společné dva uhlíkové atomy s arylovou skupinou, přičemž termíny cykloalkyl a aryl jsou definovány výše. Jako příklad cykloalkylové skupiny s přikondenzovaným arylem je cyklobutylová skupina s přikondenzovaným benzenovým jádrem.
Termín alifatický acyl, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkyl-CO-, alkenyl-CO- a alkinyl-CO, odvozený od alkankarboxylové, alkenkarboxylové nebo alkinkarboxylové kyseliny, přičemž termíny alkyl, alkenyl a alkinyl jsou definovány výše. Jako příklad alifatických acylových radikálů je možno uvést acetylovou skupinu, propionylovou skupinu, butyrylovou skupinu, valerylovou skupinu, 4-methylvalerylovou skupinu, akryloylovou skupinu, krotylovou skupinu, propiolylovou skupinu, methylpropiolylovou skupinu, a podobně, aniž by se tím omezoval rozsah vynálezu.
Termín aromatický acyl, sám nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-CO-, přičemž termín aryl je definován výše. Jako příklad vhodných aromatických acylových radikálů je možno uvést benzoylovou skupinu, 4-halogenbenzoylovou skupinu, 4-karboxybenzoylovou skupinu, naftoylovou skupinu, pyridylkarbonylovou skupinu apod., aniž by se tím omezoval rozsah vynálezu.
Termíny morfolinokarbonyl a thiomorfolinokarbonyl, samy o sobě nebo v kombinaci s jinými termíny, znamenají N-karbonylovaný morfolinový a N-karbonylovaný thiomorfolinový radikál.
Termín alkylkarbonylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkyl-CONH, přičemž termín alkyl je definován výše.
Termín alkoxykarbonylamino, sám nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkyl-OCONH-, přičemž termín alkyl je definován výše.
Termín alkylsulfonylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkyl-SCtyNH-, přičemž termín alkyl je definován výše.
Termín arylsulfonylamino, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-SCtyNH-, přičemž termín aryl je definován výše.
Termín N-alkylureido, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce alkyl-NH-CO-NH-, přičemž termín alkyl je definován výše.
Termín N-arylureido, sám o sobě nebo v kombinaci, znamená radikál vzorce aryl-NH-CO-NH-, přičemž termín aryl je definován výše.
Termín halogen znamená atom fluoru, atom chloru, atom bromu nebo atom jodu.
Termín heterocyklus (a odpovídající radikálová forma heterocyklyl), pokud není definován jinak, znamená stabilní 3 až 7 členný monocyklický heterocyklický kruh nebo 8-11 členný bicyklický heterocyklický systém, který je nenasycený a ke kterému eventuelně může být přikondenzován benzenový kruh. Každý heterocyklus pozůstává z jednoho nebo více uhlíkových atomů a z jednoho až čtyř heteroatomů ze skupiny obsahující atom dusíku, atom kyslíku a atom síry. Termíny heteroatomy dusíku a síry zahrnují jakoukoliv oxidační formu dusíku a síry a rovněž kvartérnízovanou formu jakéhokoliv bazického dusíkového atomu. Navíc, kterýkoliv atom dusíku v kruhu může být eventuelně substituován substituentem R4, jak je definováno pro látky vzorce I. Heterocyklus může být připojen kterýmkoliv endocyklickým atomem uhlíku nebo heteroatomů, když tím vznikne stabilní struktura. Zejména vhodné heterocykly jsou 5-7 členné monocyklické heterocykly a 8 až 10 členné bicyklické heterocykly. Heterocykly mohou mít eventuelně oxo-substituent v polohách 1 - 3 na kruhu a mohou být eventuelně nezávisle substituované jedním až čtyřmi substituenty ze skupiny arylových substituentů popsaných výše.
Termín odcházející skupina znamená obecně skupinu, která je snadno vyměnitelná působením nukleofilních skupin, jako je aminová skupina, hydroxylová skupina nebo thiolová skupina. Takové odcházející skupiny jsou dobře známé a patří k nim karboxylátové skupiny, N-hydroxysukcinimidová skupina, N-hydroxybenzotriazolová skupina, atomy halogenů (halogenidy), triflátová skupina, tosylátová skupina, mesylátová skupina, alkoxylové skupiny, thioalkoxylové skupiny a jiné.
Termíny aktivovaný derivát vhodně chráněné a-aminokyseliny a aktivovaný derivát substituované fenyloctové kyseliny se vztahují na odpovídající acylhalogenidy (např. acylfluorid, acylchlorid nebo acylbromid), odpovídající aktivované estery (např. nitrofenylester, ester 1-hydroxybenzotriazolu, HOBT, nebo ester hydroxysukcinimidu, HOSu) a jiné obvyklé deriváty používané při současném stavu techniky.
Ve světle uvedených definic jsou ostatní chemické termíny, použité v této patentové přihlášce, snadno srozumitelné. Definované termíny mohou být použity samotné nebo v jakékoliv kombinaci. Výhodné a preferované délky řetězce v uvedených skupinách platí pro všechny kombinace.
Vynález se týká sloučenin, schopných inhibovat adhesi buněk, zprostředkovanou VLA-4 tím, že inhibují vazbu ligandů k tomuto receptoru, které mají obecný vzorec I
a jejich farmaceuticky přijatelných derivátů;
kde X je zvoleno ze skupiny substituentů -CO2H, -PO“3H, -SO2R5, -so3h, OPO~3H, -CO2R4 a -C(O)N(R4)2;
ve kterých R5 je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, arylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou a alkenylovou nebo alkinylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou;
Y je substituent ze skupiny obsahující skupiny -CO-, -S02~ a -Ρ02~;
R-^ je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu s přikondenzovaným arylem, cykloalkenylovou skupinu, arylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou (aralkylovou skupinu), alkenylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkinylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou cykloalkylovou skupinou, cykloalkylovou skupinu substituovanou cykloalkenylovou skupinou, biarylovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkenoxylovou skupinu, alkinoxylovou skupinu, alkoxylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou (aralkoxylovou skupinu), alkenoxylovou nebo alkinoxylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkylaminovou skupinu, alkenylaminovou skupinu, alkinylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkenylaminovou nebo alkinylaminovou skupinu substituovanou arylskupinou, aryloxylovou skupinu, aryaminovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou N-alkylureidovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N-arylureidovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylkarbonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aminokarbonylovou skupinou, heterocyklylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou heterocyklylovou skupinou, aminovou skupinu substituovanou heterocyklylovou skupinou, aralkylovou skupinu substituovanou karboxyalkylovou skupinou, arylovou skupinu s přikondenzovaným oxokarbocyklem a heterocyklylalkylovou skupinu;
R2 je substituent ze skupiny obsahující atom vodíku, arylovou skupinu, alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu nebo alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, a skupiny R2 a Rg dohromady s atomy, ke kterým jsou připojeny mohou tvořit heterocyklický kruh;
R2 je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, aralkylovou skupinu, alkenylovou skupinu substituovanou arylskupinou, alkinylovou skupinu substituovanou arylskupinou, alkylovou skupinu substituovanou hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aralkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou aryl-substituovanou alkyloxykarbonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou thiolovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylsulfonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou hydroxy-substituovanou alkylthioskupinou, alkylovou skupinu substituovanou thioalkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou acylaminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylsulfonylaminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou arylsulfonylaminoskupinou, morfolinoalkylovou skupinu, thiomorfolinoalkylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou morfolinkarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou thiomorfolinokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N-(alkyl,aikenyl nebo alkinyl)- nebo N,N-(dialkyl, dialkenyl, dialkinyl nebo (alkyl,aikenyl))-aminokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou karboxylovou skupinou, acylaminoalkylovou skupinu substituovanou dialkylaminoskupinou, a postranní řetězce aminokyselin argininu, asparaginu, glutaminu, S-methylcysteinu, methioninu a jeho odpovídajícího sulfoxidového a sulfonového derivátu, glycinu, leucinu, isoleucinu, allo-isoleucinu, t-leucinu, norleucinu, fenylalaninu, tyrosinu, tryptofanu, prolinu, alaninu, ornithinu, histidinu, glutaminu, valinu, threoninu, šeřinu, asparagové kyseliny, beta-kyanalaninu a allothreoninu, přičemž R2 a R3 dohromady s atomy, ke kterým jsou připojeny, mohou tvořit heterocyklus;
R4 je substituent ze skupiny obsahující arylovou skupinu, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, atom vodíku, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylkarbonylovou skupinu, aminokarbonylovou skupinu, amidovou skupinu, mononebo dialkylaminokarbonylovou skupinu, mono- nebo diarylaminokarbonylovou skupinu, alkylarylaminokarbonylovou skupinu, diarylaminokarbonylovou skupinu, mono- nebo diacylaminokarbonylovou skupinu, aromatickou nebo alifatickou acylskupinu, alkylovou skupinu podmíněně substituovanou substituenty ze skupiny obsahující aminovou skupinu, hydroxylovou skupinu, merkaptoskupinu, mono- nebo dialkylaminovou skupinu, mono- nebo diarylaminovou skupinu, alkylarylaminovou skupinu, diarylaminovou skupinu, mono- nebo diacylaminovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkenoxylovou skupinu, aryloxylovou skupinu, thioalkoxylovou skupinu, thioalkenoxylovou skupinu, thioalkinoxylovou skupinu, thioaryloxylovou skupinu a heterocyklylovou skupinu; a n je 0, 1 nebo 2.
Farmaceuticky přijatelný derivát je jakákoliv farmaceuticky přijatelná sůl, ester nebo sůl takového esteru sloučeniny podle vynálezu. Vynález rovněž zahrnuje jakékoliv jiné látky, které při podání pacientovi jsou schopny generovat (at přímo nebo nepřímo) látky podle vynálezu (například profarmaka). Vynález rovněž zahrnuje metabolity nebo zbytky sloučenin podle vynálezu, charakterizované schopností inhibovat, předcházet nebo potlačovat adhesi buněk a jí zprostředkovaných patologických stavů.
V jiném výhodném provedení tohoto patentu je substituent R^ zvolen ze skupiny obsahující benzyloxylovou skupinu, kyanmethylovou skupinu, cyklohexylmethylovou skupinu, methylovou skupinu, n-hexylovou skupinu, N-fenylaminovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylkarbonylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, t-butoxylovou skupinu, t-butylaminovou skupinu, 1-indanylovou skupinu,
1- naftylmethylovou skupinu, 1-fenylcyklopropylovou skupinu,
2- (4-hydroxyfenyl)ethylovou skupinu,
2-(benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 2-(bis(fenylsulfonyl)amino)fenylmethylovou skupinu, 2-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 2-aminofenylmethylovou skupinu, 2-benzamidofenylmethylovou skupinu,
2-brom-4-hydroxy-5-methoxyfenylmethylovou skupinu,
2-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 2-naftylmethylovou skupinu,
2-fenylethylovou skupinu, 2-pyridylmethylovou skupinu,
2-chinolinylovou skupinu,
2- [4-(Ν'-fenylureido)fenyl]ethylovou skupinu, 3-(benzyloxykarbonylamino)fenyImethylovou skupinu, 3-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 3-(Ν'-fenylureido)propylovou skupinu, 3-(fenylsulfonamido)fenylmethylovou skupinu,
3- acetamidofenylmethylovou skupinu, 3-aminofenylmethylovou skupinu, 3-benzamidofenylmethylovou skupinu, 3-hydroxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 3-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 3-indolylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
3-methyl-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 3-nitrofenylmethylovou skupinu, 3-fenylpropylovou skupinu,
3- pyridylmethylovou skupinu, 4-(2-aminobenzamido)fenylmethylovou skupinu, 4-(benzamido)fenylmethylovou skupinu,
4- (benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 4-(morfo19 linokarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-chlorfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N1-(2-chlorfenyl)ureido)-3-methoxyfenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-ethylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-isopropylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-methoxyfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-methyl-3-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-nitrofenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(Ν'-(2-t-butylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(2-thiazolyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(3-chlorfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(3-methoxyfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(3-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(4-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(3-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(Ν'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-benzylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-cyklohexylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-ethylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-isopropylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-methylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-p-tolylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-fenylureido)fenylovou skupinu,
4-(N'-fenylureido)fenylaminovou skupinu,
4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-t-butylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(fenylaminokarbonylaminomethyl)fenylovou skupinu,
4-(fenylsulfonamido)fenylmethylovou skupinu,
4-(t-butoxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-acetamidofenylmethylovou skupinu, 4-aminofenylaminovou skupinu, 4-aminofenylmethylovou skupinu,
4-benzamidofenylmethylovou skupinu, 4-chlorfenylmethylovou skupinu, 4-hydroxy-3-nitrofenylmethylovou skupinu, 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 4-methoxyfenylmethylovou skupinu, 4-nitrofenylaminovou skupinu,
4-nitrofenylmethylovou skupinu,
4-fenacetamidofenylmethylovou skupinu,
4-fenylfenylmethylovou skupinu, 4-pyridyImethylovou skupinu,
4-trifluormethylfenylmethylovou skupinu,
4-[2-N'-methylureido)benzamido]fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4- (N'-fenyl-N''-methylguanidino)fenylmethylovou skupinu,
5- (N'-fenylureido)pentylovou skupinu,
5- (N'-t-butylureido)pentylovou skupinu,
2,2-dimethylpropylovou skupinu, 2,2-difenylmethylovou skupinu, 2,3-benzocyklobutylovou skupinu,
3.4- dihydroxyfenylmethylovou skupinu,
3.5- dimethoxy-4-hydroxyfenylmethylovou skupinu,
4-(1-indolkarboxyamino)fenylmethylovou skupinu,
6- methoxy-5-(N'-(2-methylfenyl)ureido)-2-pyridylmethylovou skupinu, 4-(1,3-benzoxazol-2-ylamino)fenylmethylovou skupinu a 4-(1,3-imidazol—2-ylamino)fenylmethylovou skupinu,
3-karboxy-l-fenylpropylovou skupinu,
3-hydroxy-4-(2-methylfenyl)ureidofenylmethylovou skupinu,
3- hydroxy-4-(2-chlorfenyl)ureidofenylmethylovou skupinu,
6-(fenylureido)heptylovou skupinu, 4-fenylureido)butylovou skupinu, 2-thienylmethylovou skupinu,
4- (2,6-dimethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-hydroxyfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
3-butoxy-4-(2—methylfenyl)ureidofenylmethylovou skupinu,
3- butoxy-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4- (N-2-pyrazinylureido)fenylmethylovou skupinu,
2- fenylethinylovou skupinu,
5- fenylureido-2-pyridylmethylovou skupinu,
5-(2-methylfenylureido)-2-pyridylmethylovou skupinu,
4-(3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
3- nitro-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
3- acylamino-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4- (Ν,N-fenyl,methylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(3-hydroxyfenylureido)fenylmethylovou skupinu, —(2-acetylaminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-propionylaminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(3-benzyloxy-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
4—(indolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
2- (4-(fenylureido)fenyl)oxiranylovou skupinu,
4—(N, N'-fenyl,methylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-dimethylaminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-benzimidazolylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(benzoxazolylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-benzthiazolylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(tetrahydrochinolinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 1,3-dimethyl-3-(fenylureido)butylovou skupinu, hydroxyethylthiomethylovou skupinu,
4—(fenylureido)fenylethenylovou skupinu,
3- amino-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4- (4-hydroxyfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(aminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-((2-methylureido)fenylureido)fenylovou skupinu,
4-(2-hydroxyfenylureido)-3-methoxyfenylmethylovou skupinu,
4-(2-methylsulfonylmethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(2-methylfenylureido)tetrahydro-2-pyrimidonylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(fenylureido)-2-pyridylmethylovou skupinu, 4-(2-trifluormethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(2, 4(ΙΗ,3H)-chinazolindionyl)fenylmethylovou skupinu, 4-thioureidofenylmethylovou skupinu,
4-(fenylthioureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(pyrrolidinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, —(2-benzoxazolinonylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4—(benzyloxyureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(thiazolidinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 4-benzoylureidofenylmethylovou skupinu, hydroxyureidofenylmethylovou skupinu,
Ν',Ν'-methyl,hydroxyureidofenylmethylovou skupinu,
4-(Ν'-allylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(3-pyrrolidinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(1-pyrrolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-pyrrolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(propylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(methoxyureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(dimethylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-chinazolinylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-furanoylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-hydroxy-6-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-pyridylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, —(3-hydroxy-2-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(3-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(4-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-chinolinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(isochinolinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(2,3-dimethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2,5-dimethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-methyl-4-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2-methyl-3-fluorfenyl)fenylmethylovou skupinu,
3- karboxy-3-fenylpropylovou skupinu,
4- (5-hydroxy-2-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4- (4-hydroxy-2-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(2,4-difluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
3- dibenzofuranylkarbonylovou skupinu,
4- (fenoxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
3- fenylureidopropylovou skupinu, —(fenylaminokarbonyloxy)fenylmethylovou skupinu,
4- cinnamoylfenylmethylovou skupinu, dibenzofuranylmethylovou skupinu, 4-(2-methylfenylaminokarbonyloxy)fenylmethylovou skupinu, (methylfenylureido)fenylaminovou skupinu,
4-(3-indolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
4-(fenylaminokarbonyl)fenylmethylovou skupinu,
4-fenylalkinylfenylmethylovou skupinu,
4- (3-pyrrolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
5- nitrobenzofuran-2-ylovou skupinu,
5-(2-methylfenylureido)benzofuran-2-ylovou skupinu,
3- karboxy-3-fenylpropylovou skupinu,
2—(3-pyridyl)thiazol-4-ylovou skupinu,
2-(4-pyridyl)thiazol-4-ylovou skupinu,
2- oxo-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]furan-3-ylovou skupinu,
4- oxo-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]furan-3-ylovou skupinu,
3- methoxy-4-(fenylkarbamoyloxy)fenylmethylovou skupinu,
5- aminobenzofuran-2-ylovou skupinu, benzilylaminofenylmethylovou skupinu a 4-[N-2-karboxyethyl-l-(1,3-benzodioxolyl-5-yl)amino-N-leu cinylacetamidylfenylureido]fenylmethylovou skupinu.
Substituent je nejvýhodněji volen ze skupiny obsahující
4- hydroxyfenylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-fenylureido ) f enylmethylovou skupinu, 4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
4-(N'-2-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
3- methoxy-4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 6-methoxy-5-(N ’ — (2-methylfenyl)ureido)-2-pyridylmethylovou skupinu,
4- (N'-3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
3-methoxy-4-(N'-3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu a 3-methoxy-4-(N'-(2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu.
V alternativním výhodném provedení podle vynálezu je substituent R^ alkylová skupina s jedním až čtyřmi atomy uhlíku, substituovaná arylovou skupinou. S výhodou R^ je arylalkylová skupina, v para poloze substituovaná N-Ar'-ureidovou skupinou, a nejlépe fenylmethylová skupina, v para poloze substituovaná N-Ar'-ureidovou skupinou.
Podle jiného výhodného provedení podle vynálezu je substituent R2 volen ze skupiny obsahující atom vodíku, methylovou skupinu nebo fenacetylovou skupinu, nejvýhodněji atom vodíku.
Podle jiného výhodného provedení podle vynálezu je substituent R3 volen ze skupiny obsahující
2- (methylsulfonyl)ethylovou skupinu,
3- (hydroxypropylthio)methylovou skupinu,
4- (methylsulfonylamino)butylovou skupinu,
4-acetylaminobutylovou skupinu, aminomethylovou skupinu, benzylovou skupinu, butylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, isobutylovou skupinu, methylovou skupinu, methylthiomethylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, propylovou skupinu, 4-(benzyloxykarbonylamino)butylovou skupinu, Ν,Ν-(methylpropargy1)aminovou skupinu,
2-(methylthio)ethylovou skupinu,
2-(morfolino-N-karbonyl)ethylovou skupinu,
2-(N-morfolino)ethylovou skupinu, —(Ν,N-dimethylamino)ethylovou skupinu, 4-aminobutylovou skupinu, 4-benzyloxyfenylmethylovou skupinu,
2-benzylthiomethylovou skupinu, t-butoxykarbonylaminomethylovou skupinu, sec-butylovou skupinu, t-butylovou skupinu,
Ν,Ν-dimethylaminokarbonylmethylovou skupinu, 1,1-ethanové přemostění (v aminokyselinovém postranním řetězci kyseliny
1-aminocyklopropylkarboxylové), 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, l-hydroxyethylovou skupinu, 1-methoxyethylovou skupinu, 4-methoxyfenylmethylovou skupinu, benzyloxymethylovou skupinu, benzylthiomethylovou skupinu, karbonylmethylovou skupinu, 2-methylsulfinylethylovou skupinu, morfolino-N-karbonylmethylovou skupinu, thiomorfolino-N-karbonylmethylovou skupinu, 2-fenylethylovou skupinu, postranní řetězec asparaginu, postranní řetězec prolinu, 2-thiazolylmethylovou skupinu,
4-(fenylureido)butylovou skupinu, 4-(methylureido)butylovou skupinu, morfolinokarbonylmethylthiomethylovou skupinu, morfolinoethylthiomethylovou skupinu, 3-pyridylmethylovou skupinu, 4-methylsulfonylaminobutylovou skupinu, hydroxymethylthiomethylovou skupinu,
2-methylsulfonylethylovou skupinu, 4-propionylaminobutylovou skupinu, 4-ethoxykarbonylaminobutylovou skupinu, methoxykarbonylaminobutylovou skupinu, karbomethoxymethylthiomethylovou skupinu,
4-t-butylureidobutylovou skupinu, karboxymethylthiomethylovou skupinu, dimethylamidomethylthiomethylovou skupinu, acetylaminopropylovou skupinu, 3-methylureidopropylovou skupinu, 4-biotinoylaminobutylovou skupinu,
2- thienylmethylovou skupinu, 3-pyridylmethylovou skupinu,
4-trifluoracetylaminobutylovou skupinu, dimethylaminomethylthiomethylovou skupinu, dimethylaminoethylthiomethylovou skupinu, 4-(dimethylaminoacetylamino)butylovou skupinu, nebo v kombinaci s R2 tvoří prolinový, azetidinový nebo pipekolinový kruh.
Nejvýhodněji je substituent R3 volen ze skupiny zahrnující isobutylovou skupinu, 2-(methylthio)ethylovou skupinu,
3- (hydroxypropylthio)methylovou skupinu,
2- (methylsulfonyl)ethylovou skupinu, 4-acetylaminobutylovou skupinu, 4-(methylsulfonylamino)butylovou skupinu, a 4-(ethoxykarbonylamino)butylovou skupinu.
Podle ještě jiného provedení vynálezu, je substituent R4 volen ze skupiny substituentů, obsahující
4- karbomethoxyfenylovou skupinu, 4-karboxyfenylovou skupinu, 4-fluorfenylovou skupinu, 4-methoxyfenylovou skupinu, benzylovou skupinu, methylovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, fenylethylovou skupinu,
4-chlorfenylovou skupinu, 3,4-difluorfenylovou skupinu, 3, 4-dimethoxyfenylovou skupinu, 2-methoxyfenylovou skupinu,
3- methoxyfenylovou skupinu, 4-methoxyfenylovou skupinu,
2- nitrofenylovou skupinu, 3-pyridylovou skupinu,
4-fenoxyfenylovou skupinu, 4-ethoxyfenylovou skupinu,
4-nitrofenylovou skupinu, 4-acetylaminofenylovou skupinu, 4-methylureidofenylovou skupinu, 2-fluorfenylovou skupinu, naftylovou skupinu, 3-fluorfenylovou skupinu,
3- nitrofenylovou skupinu, atom vodíku, 2-nitrofenylovou skupinu, 4-kyanfenylovou skupinu, 3-methoxyfenylovou skupinu,
4- methylsulfonylaminovou skupinu, 3-kyanfenylovou skupinu, 4-propionylaminovou skupinu, 4-aminofenylovou skupinu,
3- aminofenylovou skupinu, 4-trifluormethoxyfenylovou skupinu,
4- methylfenylovou skupinu, 4-amino-3-nitrofenylovou skupinu,
4-hydroxy-3-methoxyfenylovou skupinu, 4-hexyloxyfenylovou skupinu, 4-methoxythiofenylovou skupinu, 3-furanylovou skupinu, 4-dimethylaminofenylovou skupinu,
3- hydroxy-4-nitrofenylovou skupinu, n-pentylovou skupinu, karboxymethylovou skupinu, 2-karboxyethylovou skupinu, ethinylovou skupinu, 2-thienylovou skupinu, 2-propenylovou skupinu, 2-propinylovou skupinu, methylovou skupinu, a propylovou skupinu. S výhodou je R4 voleno ze skupiny obsahující 4-methoxyfenylovou skupinu,
3,4-dimethoxyfenylovou skupinu, 4-fluorfenylovou skupinu,
4- karboxyfenylovou skupinu, 4-karbomethoxyfenylovou skupinu, fenylethylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, allylovou skupinu, ethinylovou skupinu, a 3,4-methylendioxyfenylovou skupinu.
V jiném výhodném provedení podle vynálezu, Y je skupina CO, skupina CH2 nebo skupina SO2, zejména skupina CO.
Podle jiného provedení, X ve vzorci (I) je skupina COOH.
Podle ještě jiného výhodného provedení, n je 1.
Příklady zvláště vhodných sloučenin podle vynálezu, kde X je karboxylová skupina a n je 1, jsou uvedeny v Tabulce 1.
Bio# R1 R2 R3 R4 Y
1002 kyanmethyl H isobutyl fenyl CO
1003 cyklohexylmethyl H isobutyl fenyl CO
1004 2-pyridylmethyl H isobutyl fenyl CO
1005 3-pyridylmethy1 H isobutyl fenyl CO
1006 4-hydroxyfenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1007 4-pyridylmethy1 H isobutyl fenyl CO
1008 fenyl H isobutyl fenyl CO
1009 4-fenylfenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1010 4-chlorfenylmethyl H isobutyl fenyl co
1011 4-trifluormethylfenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1013 fenylmethyl H isobutyl fenyl so2
1014 3-indolyl H isobutyl fenyl CO
1015 4-benzamidofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1016 4-aminofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1017 1-fenylcyklopropyl H isobutyl fenyl CO
1018 3-acetamidofenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1020 3-benzamidofenylmethy1 H isobutyl fenyl CO
1021 1-naftylmethyl H isobutyl fenyl co
1022 2-naftylmethyl H isobutyl fenyl co
1023 4-fenacetamidofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1024 2-aminofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1025 2(bis(fenylsulfonyl)amino)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1026 2-benzamidofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1027 2-(benzyloxykarbonylamino )fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1028 4-(2-aminobenzamido)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1029 4 — [2 —(N’-methylureido) benzamido]fenylmethyl - H isobutyl fenyl co
1030 3-aminofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1031 3-(benzyloxykarbonylamino )fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1032 3-(fenylsulfonamido)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1036 fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1037 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-thiazo- lylmethyl fenyl co
1038 fenylmethyl H propyl fenyl co
1039 fenylmethyl H butyl fenyl co
1040 fenylmethyl H sec-butyl fenyl co
1041 t-butoxy H hydroxy- methyl fenyl co
1042 t-butoxy H fenyl- methyl fenyl co
1043 t-butoxy H 1,1-ethano fenyl co
1044 t-butoxy methyl isobutyl fenyl co
1045 fenylmethyl H hydroxyme thyl fenyl co
1046 fenylmethyl H fenyl- methyl fenyl co
1047 fenylmethyl H prolin (vedlejší řetězec) fenyl co
1048 fenylmethyl H 1,1-ethano fenyl co
1049B fenylmethyl H asparagin (vedlejší řetězec fenyl CO
1050 4-(Ν'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1051 4-(N'-fenylureido)- H isobutyl fenyl co
fenyl
1052 2-[4-(Ν'-fenylureido)fenyl]ethyl H isobutyl fenyl CO
1053 4- (N'-fenylureido)fenylmethyl methyl isobutyl fenyl CO
1054 3-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1055 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl methyl isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1056 3-methoxy-4-(N'-fenylureido )fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1057 3-hydroxy-4-(N'-fenylureido )fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1058 3-methy1-4-(N'-fenylureido )fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1060 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1063 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl benzyl CO
1064 4-(N'-methylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1065 4-(N'-isopropylureido) fenylmethyl - H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1066 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1067 4-(N'-p-tolylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1068 4-(N'-cyklohexylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1069 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 2-methoxy- fenyl co
1070 4-hydroxyfenylmethyl H isobutyl 2-methoxy- fenyl co
1072 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 3-methoxyf enyl co
1073 4-(benzyloxykarbonylamino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1074 4-(fenylsulfonamido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1075 4-(benzamido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1076 4-(N'-t-butylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1077 4-(Ν'-ethylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1078 4-(Ν'-(3-methoxyfenyl) ureido)fenylmethyl - H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1079 4-(N'-(2-methoxyfenyl) ureido)fenylmethyl - H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1080 4-(N'-(3-pyridyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1081 fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1082 3-fenylpropyl H isobutyl fenyl co
1083 methyl H isobutyl fenyl co
1084 2-(4-hydroxyfenyl)ethyl H isobutyl fenyl co
1085 benzyloxy H isobutyl fenyl co
1086 N-fenylamino H isobutyl fenyl co
1087 2-(4-hydroxyfenyl)ethyl methyl isobutyl fenyl co
1088 4-(Ν'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl co
1089 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-(methylthio)ethyl 4-methoxy- fenyl co
1090 4-(N'-fenylureido)- H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1091 4-hydroxyfenylmethyl H isobutyl fenyl co
1092 4-methoxyf enyImethy1 H isobutyl fenyl co
1093 4-nitrofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1094 n-hexyl H isobutyl fenyl co
1096 2-hydroxyfenylmethyl H isobutyl fenyl co
1097 3-hydroxyf enylmethyl H isobutyl fenyl co
1098 3,4-dihydroxyfenylmethyl H isobutyl fenyl co
1099 2,2-difenylethyl H isobutyl fenyl co
1100 2-brom-4-hydroxy-5methoxyfenylmethyl H isobutyl fenyl co
1101 4-(benzyloxykarbonylamino)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1102 2-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1103 4-aminofenylmethyl H isobutyl fenyl co
1104 4-(fenylsulfonamido)fenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1105 4-(benzamido)fenylmethyl H isobutyl fenyl CO
1106 5-(N'-fenylureido)pentyl H isobutyl fenyl CO
1107 5-(N'-t-butylureido)pentyl H isobutyl fenyl CO
1108 4-nitrofenylamino H isobutyl fenyl CO
1109 4-aminofenylamino H isobutyl fenyl
1110 4-(N'-fenylureido)fenylamino H isobutyl fenyl
1111 3,5-dimethoxy-4-hydroxyf enylmethyl H isobutyl fenyl
1112 4-hydroxy-3-nitrofenylmethyl H isobutyl fenyl
1113 3-nitrofenylmethyl H isobutyl fenyl
1114 fenylmethyl methyl isobutyl fenyl CO
1115 fenylmethyl H isobutyl 4-chlor- fenyl CO
1116 fenylmethyl H 1-hydroxy- ethyl fenyl CO
1117 fenylmethyl H 1-methoxy- ethyl fenyl CO
1119 fenylmethyl H methyl fenyl CO
1120 fenylmethyl methyl methyl fenyl co
1122 fenylmethyl H 4-methoxyfenylmethyl fenyl co
1123 fenylmethyl H 2-fenyl- ethyl fenyl co
1124 fenylmethyl H 4-benzyloxyfenylmethyl fenyl co
1125 fenylmethyl H 4-hydroxyfenylmethyl fenyl co
1126 fenylmethyl H benzyloxy- methyl fenyl co
1127 fenylmethyl H benzylthio- methyl fenyl co
1128 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1129 4-(Ν'-fenylureido)fenylmethyl H benzyl 1,3-benzo- dioxol-5-yl CO
1130 4-(Ν'-fenylureido)fenylmethyl H benzyl fenyl CO
1131 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H sec-butyl fenyl CO
1132 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 4-(benzyloxykarbonylamino) butyl fenyl CO
1133 4-(Ν'-fenylureido)fenylmethyl H sec-butyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1134 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H t-butoxy- karbonylamino- methyl fenyl co
1135 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-(methylthio) ethyl fenyl co
1136 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-(benzylthio) methyl fenyl co
1137 fenylmethyl H isobutyl 2-nitro- fenyl co
1138 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H aminomethyl fenyl co
1139 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 4-aminobutyl fenyl co
1140 fenylkarbonyl H isobutyl fenyl CH
1141 fenylkarbonyl f enacyl isobutyl fenyl CH
1142 2,3-benzocyklobutyl H isobutyl fenyl CO
1143 4-hydroxyf enyImethy1 H isobutyl benzyl CO
1144 4-hydroxyf enylmethyl H isobutyl fenyl co
1145 4-(t-butoxykarbonylamino)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1146 4-hydroxyfenylmethyl H isobutyl 3-methoxyf enyl co
1147 4-acetamidofenyImethyl H isobutyl fenyl co
1148 4-hydroxyfenylmethyl H isobutyl 3-pyridyl co
1149 2-chinolinyl H isobutyl fenyl co
1150 2-fenylethyl H isobutyl fenyl co
1152 2,2-dimethylpropyl H isobutyl fenyl co
1153 benzyloxy H isobutyl 3-pyridyl co
1154 t-butylamino H isobutyl fenyl CO
1155 fenylmethyl H t-butyl fenyl CO
1156 methyl H t-butyl fenyl CO
1157 fenylmethyl H isobutyl benzyl CO
1158 fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1159 fenylmethyl H isobutyl 2-methoxyf enyl CO
1160 fenylmethyl H isobutyl 3-methoxyf enyl CO
1162 benzyloxy H isobutyl methyl CO
1163 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-(methylthio )ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1164 fenylmethyl H 2-(methylthio) ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1168 4-(N'-(m-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1169 4-(N'-benzylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1170 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H morfolino-N-karbonyl- methyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1173 4-hydroxyfenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl co
1174 4-hydroxyfenylmethy1 H 2-(methylthio )ethyl 4-methoxyf enyl co
1175 fenylmethyl H 2-(methylthio )ethyl 4-methoxy- fenyl co
1176 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H thiomorfo- lino-N-kar- bonylmethyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1177 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H N,N-(methylpropargyl)- 1,3-benzodioxol-5-yl co
aminokarbonyl-
methyl
1178 fenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl CO
1179 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1180 4—(N’—(2-thiazolyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxy- fenyl CO
1181 4-(Ν'-(3-chlorfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1182 4-(N'-(4-pyridy1)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1185 4-(N'-(2-chlorfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1186 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl isobutyl- amino- karbonyl CO
1187 3-(N'-fenylureido)propyl H isobutyl fenyl CO
1188 1-fenylcyklopropyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1189 1-indanyl H isobutyl fenyl CO
1190 4-(N'-(o-tolyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxy- fenyl co
1191 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-(N-morfolino)ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1192 4-(N'-(2-methoxyfenylureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl co
1193 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl methyl isobutyl 4-methoxyf enyl co
1194 4-(N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl co
1195 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-difluorf enyl co
1196 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-dimethoxyfenyl co
1197 4-(Ν'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl fenyl co
1198 4-(morfolinokarbonylamino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1199 4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-methylsulfinylethyl 4-methoxy- fenyl co
1200 4-(N'-(2-ethylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1201 4-(N'-(2-nitrofenyl) ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1206 4-(N'-(2-isopropyl- H fenyl)ureido)fenylmethyl isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
4-(N'-(2-isopropylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl CO
4-(N'-(2-ethylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxyf enyl CO
4-(N'-(2-t-butylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-dimethoxyfenyl CO
4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H N,N-dimet- hylamino- karbonyl- methyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
4-(N'-fenylureido)- H 2-(N,N-dimet hylamino)ethyl - 1,3-benzo-
fenylmethyl dioxol-5-yl
4-(N'-fenylureido)fenylmethyl H 2-(morfolino-N-karbonyl)ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 4-(benzyloxykarbonylamino ) butyl 3,4-dimethoxyfenyl CO
4-(N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-dimethoxyfenyl co
4-(N'-(3-pyridyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-dimethoxyfenyl co
4-(Ν'-(2-methyl-3-pyridyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-methoxy- fenyl co
3-methoxy-4-(N'-(o-toluyl )ureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
4-(N'-(2-chlorfenyl)ureido)-3-methoxyfenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
4-(fenylaminokarbonylaminomethyl)fenyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 2-(methylthio)ethyl 3,4-dimethoxyfenyl co
4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 4-(benzyloxykarbonylamino ) butyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1227 4-(Ν'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H methylthio- methyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1238 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 2-(methylthio)ethyl 4-methoxy- fenyl CO
1245 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 2-(methylsulfonyl)ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1246 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 3-(hydroxypropylthio)methyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1248 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-fluorfenyl CO
1270 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 4-acetyl- aminobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1272 4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethyl H 4-(methoxykarbonylamino)butyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1282 4-(N'-(o-toluyl)ureido)pyrid-5-ylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1294 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 4-(methylsulfonylamino)butyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1311 4-(N'-(3-methyl-2-pyridyl)ureido)fenylmethyl H 4-(methoxykarbonylamino)butyl 3,4-dimethoxyfenyl co
1319 4-(indolylkarbonylamino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1321 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 4-karboxyf enyl co
1327 4- (1-indolkarboxylamino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1336 6-methoxy-5-(N'-(o-toluyl)ureido)-2-pyridylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1345 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H dimethyl- aminoethyl- thiomethyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1347 4-(Ν'-2-pyridyl)ureido)fenylmethyl H 2-(methylthio)ethyl 3,4-dimethoxyfenyl co
1358 4-(N'-fenylthioureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl co
1360 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 2,3-di- hydrobenzo- furan-5-yl co
1361 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H methyl- thioethyl 4-karbomethoxyf enyl CO
1380 4-(N'-fenyl-N''-methylguanidino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1382 4-(N'-(o-toluyl)ureido)fenylmethyl H 4-(methylsulfonylamino)butyl 4-karbomethoxyf enyl CO
1388 4-(fenylureido)fenylmethyl H isobutyl 4-karbomethoxyf enyl CO
1390 4-(1,3-imidazol-2-y1amino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1393 4-(N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethyl H 2-(methylthio)ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1396 4-(1,3-benzoxazol-2-ylamino)fenylethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1400 4-(N'-(2-methyl- H fenyl)ureido)fenylmethyl isobutyl fenyl- ethyl CO
1429 4-(N'-(3-methyl-2-pyridyl)ureido)fenylmethyl H 2-(methylthio)ethyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1444 4-(2-benzoxazolinonylkarbonylamino)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1474 4-(2-pyrrolylkarbonylamino )fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1475 4-(N'-allylureido)fenylmethyl H isobutyl 1,3-benzodioxol-5-yl CO
1490 4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl ethinyl CO
1515 4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl allyl co
1525 4-(N'-(2-fluorfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-dimethoxyfenyl co
1526 4-(4-fluorfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl 3,4-dimethoxyfenyl co
1536 4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethyl H isobutyl methyl co
1594 4-(N'-(2-methylfenyl)- H isobutyl H co
ureido)fenylmethyl
1648 4-(2—indolylkarbonyl- amino )fenylmethyl H isobutyl H CO
1655 4-(3-indolylkarbonyl- H isobutyl 1,3-benzo- CO
amino)fenylmethyl dioxol-5-yl
1721 4-(N'-(2—methylfenyl)- H isobutyl morfolino- CO
ureido)fenylmethyl methyl
1725 3-methoxy-4-(N'-fenyl- H 2-(methyl- 1,3-benzo- CO
ureido )fenylmethyl thio)ethyl dioxol-5-yl
1726 3-methoxy-4-(N'-fenyl- H isobutyl 3,4-dimeth- CO
ureido )fenylmethyl oxyfenyl
1727 3-methoxy-4-(N'-fenyl- H 2-(methyl- 3,4-dimeth- CO
ureido)fenylmethyl thio)ethyl oxyfenyl
1728 3-methoxy-4-(N'-2- H isobutyl 3,4-dimeth- CO
-pyridylureido)fenylmethyl oxyfenyl
1729 3-methoxy-4-(N'-3- H isobutyl 3,4-dimeth- CO
-methyl-2-pyridyl)ureidofenylmethyl oxyfenyl
1730 3-methoxy-4-(N'-3- H 2-(methyl- 3,4-dimeth- CO
-methyl-2-pyridyl)ureidofenyImethýl thio)ethyl oxyfenyl
1731 3-methoxy-4-(N'-3- H 2-(methyl- 1,3-benzo- CO
-methyl-2-pyridyl)ureidofenylmethyl thio)ethyl dioxol-5-yl
1732 4-(N'-(3-methyl- H 2-(methyl- 3,4-dimeth- co
-2-pyridyl)ureido)fenylmethyl thio)ethyl oxyfenyl
Vhodné sloučeniny vzorce (I) podle vynálezu jsou následující
BIO-1006, BIO-1056, BIO-1089, BIO- 1179, BIO-1194 , BIO-1221,
BIO-1224, BIO-1238, BIO-1245, BIO- 1246, BIO-1248 , BIO-1270,
BIO—1282, BIO—1294, BIO-1321, BIO- 1336, BIO—1382 a BIO-1400.
Ještě vhodnější jsou sloučeniny: BIO-1218, BIO-1272,
BIO-1311, BIO-1319, BIO-1345, BIO- 1347, BIO—1358 , BIO-1361,
BIO-1388, BIO-1390, BIO-1393, BIO- 1396, BIO—1429 , BIO-1444,
BIO-1474, BIO-1475, BIO-1490, BIO- 1515, BIO-1525 , BIO-1526,
BIO-1536, BIO-1594, BIO-1648, BIO- 1655, BIO-1721 , BIO-1725,
BIO-1726, BIO-1727, BIO-1728, BIO- 1729, BIO-1730 , BIO-1731
a BIO-1732. Nejvhodnější sloučeniny jsou: BIO-1218,
BIO-1272, BIO-1311, BIO-1347, BIO-1393, BIO-1429, BIO-1515, BIO-1725, BIO-1726, BIO-1727, BIO-1728, BIO-1729, BIO-1730, BIO-1731 a BIO-1732.
Sloučeniny podle vynálezu je možno syntetizovat běžnými technikami. Výhodně se připravují z dobře přístupných výchozích materiálů jako jsou α-aminokyseliny. Modulární a konvergentní metody syntézy jsou rovněž výhodné. Například při konvergentním přístupu jsou velké části konečného produktu spojovány v konečných stupních syntézy, místo toho, aby se postupně přidávaly malé části k rostoucímu molekulárnímu řetězci.
Podle jednoho z provedení mohou být látky podle vynálezu syntetizovány následujícím způsobem. Chráněný chirální amin se adduje k α., β-nenasycenému esteru za vzniku chráněného esteru β-aminokyseliny. Po vhodném odstranění chránící skupiny se ester β-aminokyseliny kondenzuje s vhodným aktivovaným esterem. Kondenzační produkt, pokud je vhodně substituován, může dále reagovat s jiným aktivovaným esterem Tento materiál může být dále převeden na žádané látky podle vynálezu. V každém stupni uvedené sekvence může být ester hydrolyzován na odpovídající kyselinu a poskytnout tak jinou látku podle vynálezu.
Alternativně mohou být zbytky, obsahující aktivované estery, kondenzovány spolu a teprve vzniklá sloučenina může být připojena k β-aminoesterovému zbytku. Při tom mohou být provedeny i konečné manipulace a/nebo nezbytné deprotekční kroky.
Za vhodných podmínek mohou být žádané funkční skupiny inkorporovány (v chráněné nebo nechráněné formě) do jednoho z aktivovaných esterových zbytků. Ten je pak kondenzován s esterem β-aminokyseliny nebo se zbytkem vzniklým předchozí kondenzací esteru β-aminokyseliny s aktivovaným esterem. Pokud je nutné, výsledný produkt se pak podrobí deprotekčním procedurám a získají se tak látky podle vynálezu.
Alternativně, estery chirálních β-aminokyselin, použité při přípravě sloučenin podle tohoto vynálezu, mohou být syntetizovány známými technikami, jaké jsou například popsány v patentovém spisu US 5 344 957.
Sloučeniny podle vynálezu mohou být rovněž modifikovány připojením vhodných fukčních skupin, aby se zvýšily jejich selektivní biologické vlastnosti. Tyto modifikace jsou při současném stavu znalostí známy a zahrnují takové, které způsobují zvýšení biologického průstupu do daného biologického systému (jako například do krve, lymfatického systému, nebo centrální nervové soustavy), zvýšení orální dostupnosti, zvýšení rozpustnosti pro injekční aplikaci, změnu metabolismu nebo změnu vylučování.
Termín pacient v této patentové přihlášce se vztahuje na savce, včetně člověka, a termín buňka znamená savčí buňky, včetně lidských buněk.
Sloučeniny, získané podle vynálezu, se mohou testovat na aktivitu a specifitu vůči VLA-4 jak in vitro tak in vivo.
Tak například aktivita inhibice buněčné adhese může být u těchto sloučenin měřena určováním koncentrace inhibitoru, nutné k blokování vazby buněk, exprimujících VL-4, k deskám, pokrytým fibronektinem nebo CS-1. V tomto testu jsou mikrotitrační jamky potaženy buď fibronektinem (obsahujícím sekvenci CS-1) nebo CS-1. Pokud je použito CS-1, musí být konjugován s nosným proteinem, jako je hovězí serumalbumin, aby byla zajištěna vazba v jamkách. Jakmile jsou jamky potaženy, nanesou se v různé koncentraci zkoumané sloučeniny spolu s buňkami, exprimujícími VLA-4. V alternativním uspořádání se mohou zkoumané látky nanést jako první a inkubovat v potažených jamkách před přidáním buněk, exprimujících VLA-4. Buňky se pak inkubují v jamkách alespoň 30 minut. Po inkubaci se jamky vyprázdní a promyjí. Inhibice vazby se pro každou z koncentrací měřené látky určuje kvantitativně podle fluorescence nebo radioaktivity, zbylé na desce, v porovnání s kontrolami, neobsahujícími žádnou látku.
Buňky, exprimující VLA-4, které je možno použít v tomto testu, mohou být buňky Ramos, buňky Jurkat, buňky A375 melanomu, nebo periferální lymfocyty lidské krve (PBL). Použité buňky mohou být fluorescenčně nebo radioaktivně značené.
Inhibiční aktivita sloučenin podle vynálezu může být též kvantitativně určena testem přímé vazby. V tomto testu se VCAM-IgG fúzovaný protein, mající prvé dvě imunologické sekvence VCAM (D1D2) připojeny nad pantovou oblastí molekuly IgGl (VCAM 2D-IgG), konjuguje k markerovému enzymu, například alkalické fosfatáze (AP). Syntéza tohoto VCAM-IgG-fúzovaného proteinu je popsána v PCT spisu WO 90/13300 a jeho konjugace s markerovým enzymem se dosáhne pomocí dobře známých metod (cross linking).
Konjugát VCAM-IgG s enzymem se pak umístí do jamky ve vícejamkové filtrační desce, která je například součástí Millipore Multiscreen Assay systému (Millipore Corp., Bedford, MA). Do jamek se pak vnese testovaná látka v různých koncentracích, a pak se přidají buňky, exprimující VLA-4. Buňky, zkoumaná látka a konjugát VCAM-IgG s enzymem se spolu smísí a inkubují se při laboratorní teplotě.
Po inkubaci se kapalina z jamek odsaje ve vakuu a zbudou v nich buňky spolu s vázaným VCAM. Kvantitativní stanovení vázaného VCAM se provede přidáním vhodného kolorimetrického substráru pro enzym, konjugovaný s VCAM-IgG, a určením množství reakčního produktu. Úbytek reakčního produktu znamená zvýšenou inhibici adhese buněk.
Pro vyhodnocení inhibiční specifity látek podle vynálezu vůči VLA-4 se provádějí i testy pro jiné významné skupiny integrinů, t.j. β2 a β3 i jiné βΐ integriny, jako jsou
VLA-5, VLA-6 a α4β7. Tyto testy mohou být podobné testům inhibice adhese a testům přímé vazby, uvedeným výše, ve kterých se použijí příslušné integrin exprimující buňky a odpovídající ligandy. Tak například, polymorfonukleární buňky (PMN) tvoří na svém povrchu β2 integriny a váží se na ICAM. Integriny β3 se účastní při agregaci krevních destiček a inhibice se může měřit standardním testem agregace destiček. VLA-5 se specificky váže na sekvence Arg-Gly-Asp, zatímco VLA-6 na laminin. Integrin α4β7 je nově objevený homolog VLA-4 a rovněž se váže na fibronektin a VCAM. Specifita vůči α4β7 se určí testem vazby, v němž se používá výšeuvedeného konjugátu VCAM-IgG s markerovým enzymem a buněk, exprimujících α4β7, avšak nikoli VLA-4, například buněk RPMI-8866.
Jakmile jsou VLA-4-specifické inhibitory identifikovány, mohou být dále charakterizovány testy in vivo. Jeden takový test stanovuje inhibici kontaktní hypersensitivity u zvířat (popsán v publikacích P.L. Chisholm a spol., Monoclonal Antibodies to the Integrin a-4 Subunit Inhibit the Murine Contact Hypersensitivity Response, Eur. J. Immunol., 23, str. 682-688 (1993) a Current Protocols in Immunology, J.E.Coligan a spol., Eds, John Wiley & Sons, New York, 1, odd. 4.2.1. - 4.2.5. (1991)). Při tomto testu se kůže pokusného zvířete sensibilizuje působením nějakého iritantu, například dinitrofluorbenzenu, a následným mírným mechanickým podrážděním, například lehkým škrábnutím ostrým předmětem. Během hojení se zvíře opět sensibilizuje stejným způsobem. Několik dní po sensibilizaci se jedno ucho zvířete vystaví působení chemického iritantu, zatímco druhé ucho se potře pouze nedráždivým kontrolním roztokem. Krátce potom se zvířeti aplikují různé dávky inhibitoru VLA-4 podkožní injekcí. In vivo inhibice zánětu, spojeného s adhesí buněk, se vyhodnotí změřením otoku na uchu s iritantem a porovnáním s uchem bez iritantu. Otok se měří posuvným měřítkem nebo jiným nástrojem, vhodným pro měření tlouštky ucha. Tímto způsobem je možno nalézt mezi látkami podle vynálezu ty sloučeniny, které se nejlépe hodí pro inhibici zánětů.
Jiný in vivo test, který může být použit ke zkoušení inhibitorů podle tohoto vynálezu, je test ovčího astmatu. Tento test se provádí v podstatě tak, jak je popsán v publikaci W.M. Abraham a spol., α-Integrins Mediate Antigen-induced Latě Bronchial Responses and Prolonged Airway Hyperresponsiveness in Sheep, J. Clin. Invest., 93, str. 776-87 (1994). Tento test měří inhibici pozdní fáze odpovědi dýchacích cest, indukované antigenem Ascaris, u astmatických ovcí.
Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být použity ve formě farmaceuticky přijatelných solí, odvozených of anorganických nebo organických kyselin a bází. Mezi takové soli kyselin patří: acetát, adipát, alginát, aspartát, benzoát, benzensulfonát, bisulfát, butyrát, citrát, kafrát, kafrsulfonát, cyklopentanpropionát, diglukonát, dodecylsulfát, ethansulfonát, fumarát, glukoheptanoát, glycerofosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyethansulfonát, laktát, maleát, methansulfonát, 2-naftalensulfonát, nikotinát, oxalát, pamoát, pektinát, persulfát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, tartrát, thiokyanát, tosylát a undekanoát. Soli s bázemi zahrnují: amoniové soli, soli alkalických kovů, jako sodné soli a draselné soli, soli kovů alkalických zemin, jako vápenaté soli a horečnaté soli, soli s organickými bázemi, jako soli s dicyklohexylaminem, N-methyl-D-glukaminem, a soli s aminokyselinami jako s argininem, lysinem atd. Rovněž je možno kvarternizovat skupiny obsahující dusík působením činidel jako jsou nižší alkylhalogenidy, například methyl- ethyl-, propyla butylchloridy, bromidy nebo jodidy; dialkylsulfáty, například dimethylsulfát, diethylsulfát, dibutylsulfát a diamylsulfát; halogenidy s dlouhým řetězcem, například decyl-, lauryl-, myristyl- a stearylchloridy, bromidy nebo jodidy; aralkylhalogenidy, například benzylbromid nebo fenethylbromid, a jiné. Získané produkty je možno rozpustit nebo dispergovat ve vodě nebo v olejích.
Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být součástí farmaceutických přípravků, které se mohou podávat orálně, parenterálně, ve formě inhalačních sprejů, zevně, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo ve formě implantovaného reservoáru. Termín parenterální zde zahrnuje subkutánní, intravenózní, intramuskulární, intraartikulární, intrasynoviální, intrasternální, intratekální, intrahepatální, intralézní a intrakraniální injekční nebo infúzní techniku.
Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu zahrnují jakoukoliv sloučeninu podle vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, spolu s jakýmkoliv farmaceuticky přijatelným nosičem. Zde použitý termín nosič zahrnuje přijatelné pomocné látky a vehikula. Farmaceuticky přijatelné nosiče, použitelné ve farmaceutických přípravcích podle tohoto vynálezu, zahrnují (aniž by se vynález omezoval jenom na vyjmenované látky): měniče iontů, aluminu, aluminiumstearát, lecithin, serumproteiny jako například lidský serumalbumin, pufry jako například fosfáty, glycin, sorbovou kyselinu, sorbát draselný, směsi parciálních glyceridů nasycených rostlinných mastných kyselin, vodu, soli nebo elektrolyty jako například protaminsulfát, hydrogenfosfát sodný, hydrogenfosfát draselný, chlorid sodný, zinečnaté soli, koloidní silikagel, trisilikát hořečnatý, polyvinylpyrrolidon, látky na bázi celulózy, polyethylenglykol, sodnou sůl karboxymethylcelulózy, polyakryláty, vosky, blokové polymery polyethylen-polyoxypropylen, polyethylenglykol a lanolín. Podle vynálezu mohou být farmaceutické přípravky ve formě sterilních přípravků pro injekce, například jako sterilní injikovatelené vodné nebo olejové suspenze. Tyto suspenze mohou být připraveny známými technikami za použití vhodných dispergentů nebo smáčedel. Sterilní injikovatelný přípravek může být také sterilní injikovatelný roztok nebo suspenze v netoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle, například roztok v 1,3-butandiolu.
K přijatelným vehikulům a rozpouštědlům patří voda, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Jako rozpouštědla nebo suspenzní činidla je rovněž možno běžně použít sterilní netuhnoucí oleje. K tomuto účelu se může užít jakýkoli nedráždivý netuhnoucí olej včetně syntetických monglyceridů a diglyceridů. Pro přípravu injekčních přípravků jsou rovněž vhodné mastné kyseliny, jako například kyselina olejová a její glyceridové deriváty, právě tak jako farmaceuticky přijatelné přírodní oleje, jako například olivový nebo ricinový olej, zvláště v jejich polyoxyethylované formě. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou též jako ředidlo nebo disperzní činidlo obsahovat alkohol s dlouhým řetězcem.
Farmakologické přípravky podle vynálezu mohou být podávány orálně v jakékoli orálně přijatelné lékové formě včetně tobolek, tablet, vodných suspenzí nebo roztoků, přičemž tento výčet nevyčerpává rozsah vynálezu. V případě tablet pro orální aplikaci se jako nosiče obvykle používá laktosa a kukuřičný škrob. Typicky se přidávají lubrikanty jako je magnesiumstearát. Při orální aplikaci v tobolkách se mohou jako vhodná ředidla použít laktosa a sušený kukuřičný škrob. Pokud se pro orální aplikaci užívají vodné suspenze, aktivní složka se smísí s emulgačními a dispersními činidly. Podle potřeby je možno přidat sladidla, chuf upravující látky a barviva.
Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být rovněž podávány ve formě čípků pro rektální aplikaci. Čípky mohou být připravovány smísením účinné látky s vhodným nedráždivým vehikulem, které je tuhé za pokojové teploty, ale tekuté při rektální teplotě, takže v konečníku roztaje a uvolní léčivo. Takovými materiály jsou kakaové máslo, včelí vosk a polyethylenglykoly.
Farmaceutické přípravky podle vynálezu mohou být také podávány zevně, zvláště když aplikačním cílem jsou oblasti nebo orgány dobře dostupné zevní aplikaci, jako je tomu u onemocnění očí, kůže nebo dolní části zažívacího traktu . Pro uvedené oblasti nebo orgány se mohou snadno připravit vhodné přípravky pro zevní použití.
Při topických aplikacích pro dolní zažívací trakt se může použít forma čípků (viz výše) nebo forma vhodných výplachových formulací. Látky se též mohou použít ve formě náplastí.
Při topických aplikacích mohou být farmaceutické přípravky formulovány jako vhodné masti, obsahující aktivní složku suspendovanou nebo rozpuštěnou v jednom nebo více nosičích. Nosiče pro topickou aplikaci látek podle vynálezu zahrnují, aniž by tím byl omezen rozsah vynálezu, minerální oleje, vaselinový olej, bílou vazelínu, propylenglykol, polyoxyethylen, polyoxypropylenovou pastu, emulgační vosk a vodu. Alternativně mohou být farmaceutické přípravky formulovány tak, že se připraví tekutá léková forma k omývání nebo krém, obsahující -aktivní sloučeninu suspendovanou nebo rozpuštěnou v jednom nebo více farmaceuticky přijatelných nosičích. Mezi vhodné nosiče patří minerální olej, sorbitanmonostearát, polysorbát 60, cetylesterový vosk, stearylalkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a voda, přičemž tento výčet nevyčerpává rozsah vynálezu.
Pro využití v očním lékařství mohou být farmaceutické přípravky formulovány jako mikrosuspenze v isotonickém sterilním solném roztoku o definovaném pH nebo, výhodněji, jako roztoky v isotonickém sterilním solném roztoku
- 47 o definovaném pH, bez konzervačních přísad nebo s konzervačními přísadami, jako jsou například benzylalkoniumchloridy. Pro použití v očním lékařství mohou být farmaceutické přípravky formulovány jako masti, například vazelínové masti.
Farmaceutické přípravky podle vynálezu mohou být rovněž aplikovány ve formě nasálních aerosolů nebo mohou být inhalovány s použitím rozprašovače kapalných nebo pevných částic nebo dávkovacího inhalátoru. Takové přípravky se připraví dobře známými technikami a mohou to být roztoky v solném roztoku s použitím benzylalkoholu nebo jiných vhodných konzervačních přísad, promotorů absorpce za účelem větší biologické dostupnosti, fluoruhlovodíků a/nebo jiných konvenčních solubilizačních přísad nebo dispergentů.
Množství aktivní složky, smísené s nosiči v aplikační formě, bude záviset na pacientovi a na formě aplikace. Je nutno si uvědomit, že dávka a léčebný režim pro každého pacienta budou jiné a budou záviset na mnoha faktorech, jako na aktivitě dané látky, na věku pacienta, jeho váze, zdravotním stavu, pohlaví, dietě, délce aplikace léku, rychlosti vylučování, kombinaci léků, na úvaze ošetřujícího lékaře a na tom, jak těžce ja pacient nemocí zasažen. Množství účinné látky může též záviset na terapeutickém nebo profylaktickém činidle, pokud je takové činidlo spolu s účinnou látkou podáváno.
Množství a frekvence podávání sloučenin podle tohoto vynálezu, nutné k prevenci, potlačení nebo inhibici adhese buněk bude záviset na mnoha faktorech, jako je povaha inhibitoru, velikost pacienta, cíl léčení, povaha léčené nemoci, složení farmaceutického přípravku a úvaha ošetřujícího lékaře. Účinné dávky se pohybují mezi cca 0,001 až cca 100 mg/kg tělesné hmotnosti za den, zejména cca 0,1 až cca 10 mg/kg tělesné hmotnosti.
Podle jiného provedení mohou přípravky, obsahující sloučeniny podle vynálezu, zahrnovat další účinné látky, zvolené ze skupiny obsahující kortikosteroidy, bronchodilatanty, antiastmatika (stabilizátory žírných buněk), protizánětové látky, antireumatika, imunosupresanty, antimetabolity, imunomodulátory, antipsoriatika a antidiabetika. Konkrétní sloučeniny z každé z uvedených tříd mohou být zvoleny z látek uvedených pod příslušným nadpisem v Comprehensive Medicinal Chemistry, Pergamon Press, Oxford, England, str. 970-986 (1990). Do této skupiny patří též látky jako theofylin, sulfasalazin a aminosalicyláty (protizánětlivé látky), cyklosporin, FK-506 a rapamycin (imunosupresanty), cyklofosfamid a methotrexát (antimetabolika) a interferony (imunomodulátory).
Podle jiného provedení vynález nabízí metody prevence, inhibice nebo potlačení zánětů, spojených s adhesí buněk a imunitních nebo autoimunitních odpovědí spojených s adhesí buněk. Adhese buněk, spojená s VLA-4, hraje klíčovou roli při mnoha zánětech a nemocích, spojených s imunitou a autoimunitou. Inhibice adhese buněk látkami podle vynálezu může být proto využita při metodách léčby nebo prevence zánětlivých onemocnění a nemocí spojených s poruchami imunity a autoimunity. Takové nemoci, vhodné k léčbě metodami podle vynálezu, jsou zejména asthma, arthritida, psoriáza, odmítání cizích tkání při transplantaci, roztroušená skleróza, cukrovka a zánět střev.
Při těchto metodách se sloučeniny podle vynálezu mohou používat buď samotné nebo v kombinaci s jinými protizánětlivými nebo imunosupresivními látkami. Takové kombinované terapie zahrnují aplikaci léčiv v jediné společné lékové formě nebo v několika lékových formách, podávaných současně nebo každá jindy.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady provedení mají sloužit k ilustraci a plnému pochopení předmětu vynálezu a neomezují v žádném směru jeho rozsah.
Postup A - Syntéza esterů skořicové kyseliny
Metoda A
K 1,0 mmolu kyseliny skořicové nebo substituované kyseliny skořicové v 10 ml dichlormethanu se pomalu přidá 1,5 mmol (COC1)2· Reakční směs se míchá 4 hodiny při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a ke zbylému chloridu kyseliny se přidá 5 ml methanolu nebo t-butylalkoholu. Po odpaření přebytečného alkoholu se získá methylester nebo t-butylester v kvantitativním výtěžku.
Metoda B
K 1,0 mmol odpovídajícího aldehydu v 10 ml tetrahydrofuranu se přidá 1,0 mmol t-butoxykarbonylmethylentrifenylfosforánu (Aldrich) a vzniklá směs se míchá 16 hodin při teplotě místnosti. Pak se zředí 10 ml petroletheru a zfiltruje se přes sloupec Celitu. Filtrát po koncentraci ve vakuu poskytne žádaný produkt.
E-l:
tBu
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 95 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,57 (d, 1H, J = 16 Hz),
7,47 (m, 2H), 7,34 (m, 3H), 6,35 (d, 1H, J = 16 Hz), 1,52 (s, 9H) .
E-2 •CO2 t Bu
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 90 %. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,48 (d, 1H), 7,28 - 7,18 (m, 5H), 5,69 (d, 2H), 3,44 (d, 2H), 1,42 (s, 9H).
E-3: OMe
O2 Μ θ
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 94 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,95 (d, 1H, J = 16 Hz), 7,49 (d, 1H), 7,42 (t, 1H), 6,94 (dd, 2H), 6,51 (d, 2H, J = 16 Hz), 3,86 (s, 3H), 3,76 (s, 3H).
E-4 :
MeOx^rx^<^CO2tBu , * 1 Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 92 %. H NMR spektrum (CDClg, 300 MHz, ppm): 7,52 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 7,28 (t, 1H), 7,09 (d, 1H), 7,02 (br S, 1H), 6,89 (d, 1H), 6,34 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 3,82 (s, 3H), 1,54 (s, 9H).
E-5:
O2Me
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 98 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,64 (d, 1H, J = 16 Hz), 7,29 (t, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,06 (br s, 1H), 6,94 (d, 1H, J = 16 Hz), 3,82 (s, 3H), 3,80 (s, 3H).
E-6 :
'N
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 88 %. NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz, ppm): 8,62 (br s, 1H), 8,51 (m, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,48 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 7,22 (m, 1H),
6,36 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 1,49 (s, 9H).
E-7 :
O2tB i
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 90 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,60 (br s, 1H), 7,66 (t, 1H), 7,55 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 7,36 (d, 1H), 7,21 (m, 1H), 6,78 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 1,52 (s, 9H).
E-8:
f
MeCi5^ %^.CO2tBu
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 90 %.
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 91 %. ^-H NMR spektrum (CDClg, 300 MHz, ppm): 7,52 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,85 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,21 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 3,81 (s, 3H), 1,52 (s, 9H).
E-9:
O2Me l-H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,61 (d, 1H, J - 16 Hz),
7,42 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 6,28 (d, 1H, J = 16 HZ), 3,78 (s, 3H), 3,74 (s, 3H) .
E-10:
θ2Μθ
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 91 %. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,56 (d, 1H, J = 16 Hz),
7,46 (t, 2H), 7,02 (t, 2H), 6,26 (d, 2H, J = 16 Hz), 1,54 (s, 9H) .
E-ll:
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 89 %. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,47 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 7,01 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,98 (br s, 1H), 6,78 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,84 (s, 6H), 1,48 (s, 9H).
E-12:
02Me
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 91 %. 1H NMR spektrum (CDClg, 300 MHz, ppm): 7,61 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 7,07 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,02 (br S, 1H), 6,83 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 6,28 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 3,88 (s, 3H), 3,76 (s, 3H) .
E-13 :
0
Sloučenina se
spektrum (CDCl
6,99 (s, 1H) ,
16,1 Hz), 5,96
E-14:
O-.
ý- u
zCO2Me . 1H NMR
16,1 Hz) , d, 1H, J =
Sloučenina se připraví metodou A ve výtěžku 88 spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,55 (d, 1H, J 6,98 - 6,75 (m, 2H), 6,22 (d, 1H, J = 15,9 Hz), 2H), 3,75 (s, 3H).
. ΤΗ NMR 15,9 Hz),
5,96 (s,
E-15:
,CO2 t Bu
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 89 spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,45 (d, 1H, J 6,99 (s, 1H), 6,98 (d, 1H), 6,80 (d, 1H), 6,18 15,8 Hz), 4,21 (br s, 4H), 1,49 (s, 9H).
. l-H NMR
15,8 Hz ) , d, 1H, J =
E-16:
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 88 %
E-17 :
Bu
MeO2C'^^J
Sloučenina se připraví metodou B ve výtěžku 93 %. 1H NMR spektrum (CDC13) δ: 8,00 (d, 2H, J = 5,5 Hz), 7,53 (d, 2H,
J = 5,5 Hz), 7,58 (d, ÍH, J = 10,7 Hz), 6,42 (d, ÍH, J =
10,7 Hz), 3,90 (s, 3H), 1,51 (s, 9H).
Postup B - Syntéza β-aminokyselin
Do dvoulitrové baňky s kulatým dnem, opatřené magnetickým míchadlem, se vnese 1000 ml methanolu a baňka se i s obsahem vytáruje. Z bomby se uvede 11 g (0,29 mol) suchého chlorovodíku. K tomuto roztoku se přidá 0,29 mol příslušné kyseliny skořicové v jedné porci. Výsledná směs se refluxuje tak dlouho, dokud TLC analýza neukáže, že reakce je skončena. Směs se zchladí na laboratorní teplotu a nechá se přes noc v ledničce. Krystalický produkt se odssaje na středně husté fritě, promyje se studeným methanolem a suší se na filtru. Získá se bílý nebo téměř bílý produkt.
Prekurzor látky β-3
Získán ve výtěžku 94 %. TLC (3 : 1 hexan/ethylacetát; UV): RF = 0,48; teplota tání 134 - 136 °C; 1H NMR spektrum (CDC13,
300 MHz): 7,58 (d, ÍH, J = 15.9 Hz), 7,00 - 6,97 (m, 3H), 6, 79 (d, ÍH, J = 7,9 Hz), 6,24 (d, ÍH, J = 15,9 Hz), 5,98 (s, 2H) , 3,77 (s, 3H). Hmotové spektrum (FAB): 206.
Prekurzor látky β-5
Získán ve výtěžku 94 %. TLC (3 : 1 hexan/ethylacetát; UV): Rf = 0,48; teplota tání 89 - 91 °C; 1H NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz): 7,63 (d, ÍH, J = 15,9 Hz), 7,46 (d, 2H, J = 8,7 Hz),
6, 89 (d, 2H, J = 8,7 Hz), 6,29 (d, ÍH, J = 15,9 Hz), 3,82 (s, 3H), 3,77 (s, 3H). Hmotové spektrum (FAB): 192.
Michaelova adice (R)-(+)-N-benzyl-l-fenylethylaminu na methyl-4-methoxycinnamát
Do jednolitrové tříhrdlé baňky s kulatým dnem, opatřené zátkou, teploměrem a 250 ml kapací nálevkou s přívodem argonu, se vnese 32,6 g (0,132 mol, 1,1 ekvivalentu vztaženo na cinnamát) (R)-(+)-N-benzyl-l-fenylethylaminhydrochloridu a aparatura se proplachuje argonem 30 minut. Sůl se suspenduje ve 200 ml suchého tetrahydrofuranu a směs se ochladí na vnitřní teplotu -70 ’C v lázni s acetonem a suchým ledem. K suspenzi se kapací nálevkou přikape 103 ml 2,5 M roztoku n-butyllithia v hexanu (0,257 mol, 1,95 ekvivalentu vztaženo na hydrochlorid aminu) tak rychle, aby vnitřní teplota nepřesáhla -65 ”C. Přidávání trvá 90 minut. Po skončení přidávání se směs míchá ještě 1 hodinu při -70 ’C. Pak se přikape z kapací nálevky roztok 23 g (0,120 mol, 1 ekvivalent) methyl-4-methoxycinnamátu ve 125 ml tetrahydrofuranu během 90 minut tak, aby vnitřní teplota nepřestoupila -65 °C. Po přikapání se směs míchá ještě 2 hodiny při -70 °C. Podle TLC analýzy je po této době reakce ukončena. Studená reakční směs se rozloží přidáním 250 ml 5% roztoku kyseliny citrónové a míchá se přes noc při laboratorní teplotě. Vrstvy se oddělí ve dvoulitrové dělicí nálevce a organická fáze se promyje 5% kyselinou citrónovou (1 x 125 ml). Spojené vodné vrstvy se extrahují ethylacetátem (1 x 200 ml). Spojené organické vrstvy se pak promyjí 5% NaHCO3 (1 x 150 ml) a solankou (1 x 150 ml) a vysuší se nad MgSO4. Po filtraci a odpaření do konstantní váhy se získá 50,04 g (103 % teorie) surového produktu ve formě viskozního oleje, který stáním ztuhne. Čistý materiál se získá rozetřením a mícháním surového produktu s heptanem (1,5 - 2 ml/g, celkový objem 75 - 100 ml) při laboratorní teplotě přes noc. Pevná látka se odsaje na středně husté fritě a filtrační koláč se promyje studeným heptanem (2 x 50 ml). Vysušení na filtru poskytne 28,93 g (60 %) čistého produktu ve formě bílého prášku. TLC (4:1 hexan/ethylacetát): RF 0.50 (I2'
UV); teplota tání 87 - 88 °C; 1H NMR spektrum (CDC13, 300
MHz): 1,20 (d, 3H, J = 6,9 Hz), 2,51 (dd, 1H, J = 9,4 Hz
a 14,8 Hz), 2,66 (dd, 1H, J = 5, 7Hz a 14,8 Hz), 3,45 (s,
3H), 3, 67 (ABq, 2H, J = 14,7 Hz ), 3,79 (s, 3H) , 3,98 (q,
1H, J = 6,8 Hz), 4,37 (dd, 1H, J = 5,7 Hz a 9,3 Hz), 6,86 (d,
2H, J = 8,6 Hz), 7,16 - 7,33 (m, 10H), 7,40 (d, 2H, J = 7, 3
Hz). Hmotové spektrum (FAB): 404 •
Hydrogenolyza benzylových skupin
Addukt, získaný v předchozím pokuse (28 g, 0,071 mol), se suspenduje v 300 ml methanolu a k suspenzi se za míchání přilije 8,25 g (6,8 ml, 0,179 mol, 2,5 ekvivalentu) 96% kyseliny mravenčí. Dále se přidá 3,81 g 10% Pd/C (Degussa E101 NE/W, 50 % vlhkosti, 0,00179 mol, 0,025 ekvivalentu) v jedné dávce. Směs se refluxuje 1-2 hodiny, až je podle TLC reakce skončena. Směs se zchladí na laboratorní teplotu a filtruje přes Celit. Baňka i Celit se promyjí 150 ml methanolu. Spojené filtráty se odpaří a získá se 15,42 g (102 %) surového produktu ve formě oleje. Ten se rozpustí ve 250 ml isopropylalkoholu a zahřeje se k mírnému varu.
Přidá se 10,76 g (0,071 mol, 1 ekvivalent) pevné kyseliny D-vinné v jedné dávce. V zahřívání se pokračuje 15 minut, během nichž se vyloučí sůl ve formě jemné bílé látky. Směs se ochladí na laboratorní teplotu a nechá se stát přes noc v lednici. Krystalická sůl se odsaje na fritě střední hustoty, promyje se 50 - 75 ml studeného isopropylalkoholu a vysuší se na filtru. Výtěžek produktu je 23 g (79 %). Ze získané soli se uvolní volná báze rozpuštěním v minimálním množství vody (125 ml) a přidáním pevného NaHCO3 do nasycení vodného roztoku. Báze se extrahuje do ethylacetátu (3 x 100 ml), spojené organické vrstvy se promyjí solankou (1 x 100 ml) a suší se nad MgSO4. Po filtraci a odpaření rozpouštědla
- 57 se získá 11,75 g (78 %) čistého produktu ve bezbarvého oleje, který ochlazením tuhne.
formě téměř
TLC (9:1 CHCl3/MeOH): Rp = 0,30 (I2, UV); HPLC (reverzní fáze; gradient MeCN/^O/TFA) : čistota 96 %, R^. = 17,9 min. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz): 1,87 (br s, 2H), 2,62 (d, 2H, J = 6,9 Hz), 3,64 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 4,35 (t, 1H,
J = 6,9 Hz), 6,84 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 7,25 (d, 2H, J = 8,6 Hz). Hmotové spektrum (FAB): 210.
β-1:
C02 t Bu ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm) 4,18 (q, 2H), 2,65 (d, 2H), 2,12 (br,
7,41 - 7,28 2H), 1,16 (t, (m, 5H), 3H) .
l-H NMR spektrum (CDC13 , 300 MHz, ppm): 6,81 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 6,72 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 6,66 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,85 (s, 2H), 4,22 (dd, 1H, J = 7,5 Hz a 7,3 Hz), 2,47 (dd, 2H, J = 7,5 Hz a 5,6 Hz), 2,21 (s, 2H), 1,35 (s, 9H).
β-3: ^COjMe 'H NMR spektrum (CDCl3, 300 MHz Hz), 6,76 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 5,89 (s, 2H), 4,29 (dd, 1H, J = 3H), 2,57 (d, 2H, J = 6,9 Hz), , ppm): 6,82 (d, 6,73 (d, 1H, J = 6,9 Hz a 6,8 Hz) 1,75 (s, 2H).
1H, J = 1,6 7,9 Hz), , 3,63 (s,
ΧΗ NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 6,79 - 6,78 (m, 3H) , 4,32 (t, IH, J = 6,7 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 2.52 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 1,82 (br, 2H), 1,42 (s, 9H).
β-5:
1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,20 (d, J = 8,6 Hz), 6,80 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 4,30 (t, IH, 6,8 Hz), 3,71 (s,
3H), 3,60 (s, 3H), 2,57 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 1,91 (s, 2H).
1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,24 (d, J = 8,4 Hz), 6,82 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 4,26 (t, IH, J = 6,8 Hz), 3,66 (s, 3H), 2,47 (d, 2H, J = 6,6 Hz), 1,41 (s, 9H).
β-7:
CO2 t Bu
OMe 1H NMR spektrum (CDCl3, 300 MHz, ppm): 7,21 (dd, Hz a 8,1 Hz), 6,95 - 6,93 (m, 2H), 6,78 (d, IH, 4,34 (t, IH, J = 6,7 Hz), 3,79 (s, 3H), 2,54 (d, Hz), 1,74 (s, 2H), 1,40 (s, 9H).
IH, J = 8,2 J = 6,8 Hz),
2H, J = 6,9
1H NMR spektrum (CDCl3, 300 MHz, ppm): 7,34 - 7,08 (m, 2H), 6,82 - 6,68 (m, 2H), 4,45 (m, IH), 3,65 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 2,58 (d, 2H), 1,68 (br Ξ, 2H).
β-9:
·*·Η NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz, ppm): 7,28 - 7,25 (m, 2H) , 7,01 (d, IH), 4,31 (t, IH), 2,50 (d, 2H), 2,01 (br, 2H), 1,41 (s, 9H).
- 6,76 (m, IH), 4,24 - 4,19 2H), 1,63 (br, 2H), 1,41 (s
MHz, ppm): 6,84 (s, IH), 6,79 (m, IH), 4,19 (S, 4H), 2,50 (d,
9H) .
β-11:
CO2 t Bu
H2N l-H NMR spektrum (CDClg, 300 MHz, ppm): 3,34 - 3,05 (m, IH) , 2,65 - 2,58 (m, 2H), 1,65 (d, 2H).
ΣΗ NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,34 - 7,28 (m, 3H), 7,26 - 7,15 (m, 3H), 3,42 - 3,15 (m, ÍH), 2,71 (dd, ÍH, J = 5,5 Hz a 13,3 Hz), 2,54 (dd, ÍH, J = 8,1 Hz a 13,3 Hz), 2,36 (dd, ÍH, J = 4,2 Hz a 15,7 Hz), 2,20 (dd, J = 8,6 Hz a 15,7 Hz), 1,42 (s, 9H).
Sloučenina β-13 se připraví následujícím způsobem:
Ke směsi 3,4 g (28 mmol) (R)-a-methylbenzylaminu, 4 g (40 mmol) triethylaminu a 10 ml tetrahydrofuranu se přidá 33 ml (33 mmol) 1 M roztoku TMSC1 v dichlormethanu a směs se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě. Pevné podíly se odfiltrují a filtrát se zahustí. Takto získaný kapalný silylamin (2,4 g, 12,5 mmol) se rozpustí ve 35 ml tetrahydrofuranu a roztok se ochladí na -78 ’C. K roztoku se při této teplotě pomalu přidá 7,8 ml (12,5 mmol) 1,6 M roztoku n-butyllithia v hexanu. Směs se míchá 0,5 hodiny při této teplotě a pak se k ní přidá roztok 2,56 g (12,4 mmol) t-butyl-trans-3-(3-pyridyl)akrylátu v 10 ml tetrahydrofuranu. V míchání se pokračuje další 0,5 hodiny a směs se pak rozloží 20 ml nasyceného roztoku NH^Cl, nechá se ohřát na teplotu místnosti a extrahuje se etherem. Spojené etherické extrakty se vysuší nad K2CO3 a rozpouštědlo se odpaří. Získaný olej (500 mg) se rozpustí ve směsi 1,5 ml ethanolu, 15 ml t-butylalkoholu a 1,5 g mravenčanu amonného. Přidá se 1,2 g 10% Pd/C a směs se refluxuje 3 hodiny. Obvyklé kyselé a bazické zpracování poskytuje 300 mg aminu β-13. Hmotové spektrum (FAB): 223.
1H NMR spektrum (CDC13) 5: 7,97 (d, 2H, J = 5,4 Hz), 7,41 (d, 2H, J = 5,4 Hz), 4,40 (t, IH, J = 4,5 Hz), 3,88 (s, 3H),
2,55 (d, 2H, J = 4,5 Hz), 1,71 (br, 2H), 1,39 (s, 9H).
Obecný postup syntézy sloučenin M-l, M-2 a M-3
K roztoku 1,5 mmol komerčně přístupné aminokyseliny ve 4 ml dichlormethanu a 1 ml methanolu se při 0 °C přidá 0,125 ml (1,65 mmol) thionylchloridu. Směs se 2 hodiny zahřívá na 40 ’C a pak se odpaří k suchu ve vakuu. Zbytek je žádaný hydrochlorid aminoesteru.
Získá se ve výtěžku 89 %. NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 9,00 - 8,75 (bm, 3H), 7,71 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 7,58 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 4,71 (bs, IH), 3,64 (s, 3H), 3,40 - 3,06 (m, 2H).
Získá se ve výtěžku 85 % jako světlehnědá pevná látka.
XH NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,55 - 7,05 (bm, 6H), 3,66 (s, 3H), 3,65 - 3,45 (bm, 2H), 3,10 - 2,77 (bm, 5H), 2,17 - 1,95 (bm, 2H).
Získá se ve výtěžku 84 % jako nahnědlá pevná látka. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,1 - 7,8 (bm, 4H), 7,65 - 7,45 (bm, 3H), 5,45 (br, 1H), 3,80 - 3,30 (bm, 2H), 3,55 (s, 3H).
Postup C - Syntéza kondenzovaných aminokyselin
K roztoku 0,50 g (5,25 mmol) ethyl-3-amino-3-fenyl1-propanoátu (nebo jiného esteru β-aminokyseliny, připraveného podle postupu B) v 5 ml dichlormethanu se přidá za chlazení 1,5 g (4,67 mmol) BocLeuOSu (pro přípravu Cbz-chráněného analogu se použije CbzLeuOSu) a 5 kapek triethyiaminu. Směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pak se zředí 10 ml dichlormethanu a roztok se promyje 5% roztokem citrónové kyseliny (2 x 5 ml), 5% roztokem NaHCCty (5 ml) a nasyceným roztokem NaCl (5 ml). Organická vrstva se vysuší nad Na2SO4 a rozpouštědlo se odpaří. Výtěžek bílého pevného produktu je 1,26 g (66 %).
Postup D - Syntéza volných aminokyselin
K míchanému roztoku 41,5 mg (0,102 mmol) produktu, získaného postupem C, (esteru Boc-Leu^-aminokyseliny) ve 2 ml dichlormethanu se při 0 - 5 ’C přidají 4 ml TFA. Směs se za stálého míchání nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se jednu hodinu. Pak se odpaří ve vakuu rozpouštědlo a zbytek se znovu rozpustí v dichlormethanu a rozpouštědlo se odpaří. Tento cyklus se opakuje ještě dvakrát a nakonec se ve vysokém vakuu odstraní poslední stopy TFA. HPLC ukazuje úplnou přeměnu na nové dva píky o kratším retenčním čase. Odparek se může rozpustit v DMF, přidat za míchání triethylamin, až je směs bázická na lakmus a produkt použít pro další reakci. Skupina Cbz se odstraní následovně:
Methanolický roztok 110 mg (0,23 mmol) produktu, získaného postupem C (při použití t-butyl-3-amino-3-fenyl1-propanoátu a CbzLeuOSu) se hydrogenuje na katalytickém množství 10% Pd/C přes noc při 40 psi. Filtrace přes CelitR a koncentrace ve vakuu poskytne 87 mg (kvantitativní výtěžek) volné báze Leu Boc β-aminokyseliny jako čirý olej. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,30 (m, 5H), 5,33 (dd, IH,
J = 6 Hz a 8,82 Hz), 4,00 (m, IH), 2,77 (dd, IH, J = 9 Hz a 15 Hz), 2,90 (dd, IH, J = 6 a 15 Hz), 1,69 (m, 2H), 1,45 (m, IH), 1,29 (s, 9H), 0,90 (d, 6H, J = 6 Hz).
Příklad 1
Syntéza BIO-1002
A. Roztok 13 mg (0,15 mmol) kyseliny kyanoctové, 30 mg (0,16 mmol) EDC a 30 mg (0,20 mmol) HOBt v 0,5 ml DMF se za míchání při teplotě místnosti podrobí reakci s roztokem 52 mg (0,105 mmol) aminu, připraveného postupem D, a 0,30 ml (1,7 mmol) diisopropylethylaminu v 1,0 ml DMF. Reakční směs se míchá 18 hodin a pak se roztřepe mezi 15 ml ethylacetátu a 10 ml 60% nasyc. vodného roztoku NaHC03. Organická fáze se promyje 60% nasyc. vodným roztokem NaHC03 (2 x 10 ml), vodou (5 ml), 5% roztokem citrónové kyseliny (3 x 10 ml), vodou (5 ml) a nasyceným vodným roztokem NaCl (10 ml). Organická fáze se vysuší nad MgSO4 a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Získá se 27 mg (69 %) BIO1002-OEt ve formě pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,58 (d, IH), 7,45 (d, IH), 7,40 - 7,20 (m, 5H), 5,28 (m, IH), 4,46 (m, IH), 4,05 (m, 2H),
3,23 (m, 2H), 2,79 (m, 2H), 1,78 - 1,53 (m, 3H), 1,23 (m,
3H), 0,90 (m, 6H).
B. Roztok 27 mg (0,072 mmol) BIO1002-0Et ve 3 ml methanolu se smísí s 0,25 ml (0,25 mmol) 1,0 M vodného LiOH a míchá se 22 hodiny při laboratorní teplotě. Po okyselení trifluoroctovou kyselinou se směs koncentruje ve vakuu. Surové produkty se přečistí HPLC, která poskytne 2,5 mg (10 %) BIO-1002A a 4,4 mg (18 %) BIO-1002B jako bílé tuhé látky.
BIO-1002A: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,08 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,30 - 7,16 (m, 5H), 5,25 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 3,36 (s, 2H), 2,75 (m, 2H), 1,70 - 1,45 (m, 3H),
0,90 (m, 6H). HPLC (gradient A): 16,7 min. Hmotové spektrum, m/z 346.
BIO-1002B: NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,00
- 7,70 (m, 2H), 7,40 - 7,20 (m, 5H), 5,28 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 3,45 (s, 2H), 2,78 (m, 2H), 1,65 - 1,40 (m, 3H), 0,90 (m, 6H). HPLC (gradient A): 20,6 min. Hmotové spektrum, m/z 346.
Příklad 2
Syntéza BIO-1003
A. Postupem, popsaným v příkladu IA, se nechá zreagovat 22 mg (0,15 mmol) cyklohexyloctové kyseliny, 30 mg (0,16 mmol) EDC a 30 mg (0,20 mmol) HOBt s 52 mg (0,105 mmol) aminu, připraveného postupem D, a 0,30 ml (1,7 mmol) diisopropylethylaminu v 1 ml DMF. Získá se 32 mg (71 %) BIO1003-OEt ve formě pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,42 - 7,18 (m, 6H), 6,08 (m, 1H), 5,36 (m, 1H), 4,50 (m, 1H), 4,05 (m, 2H), 2,81 (m, 2H), 2,11 - 0,80 (m, 25H).
B. Podle postupu, popsaného v příkladu 1B, se z 32 mg (0,074 mmol) BIO1003-OEt a 0,25 ml (0,25 mmol) 1,0 vodného LiOH v 3,0 ml methanolu připraví 3,5 mg (11 %) BIO-1003A a 5,3 mg (18 %) BIO-1003B ve formě bílých pevných látek.
BIO-1003A: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,35
- 7,16 (m, 5H), 5,23 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 2,28 (d, 2H),
2,03 (m, 2H), 1,75 - 0,80 (m, 22H). HPLC (gradient A): 34,1 min a 35,3 min (4 : 1). Hmotové spektrum, m/z: 403.
BIO-1003B: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,35 - 7,16 (m, 5H), 5,23 (m, 1H), 4,38 (m, 1H) , 2,28 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,75 - 0,80 (m, 22H). HPLC (gradient A): 34,1 min a 35,3 min (1 : 10). Hmotové spektrum, m/z 403.
Příklad 3
Syntéza BIO-1014
A. Methyl-3-amino-3-fenyl-l-propanoát se nechá zreagovat s BocLeuOSu podle metody popsané v postupu C. Získaný materiál se převede na žádanou TFA-aminovou sůl podle postupu Dl.
B. Postupem, popsaným v příkladu IA, se nechá zreagovat 19 mg (0,12 mmol) indol-3-karboxylové kyseliny, 26 mg (0,14 mmol) EDC a 26 mg (0,17 mmol) HOBt s 44 mg (0,11 mmol) aminu, připraveného podle příkladu 3A, a 0,10 ml (0,56 mmol) diisopropylethylaminu v 5,0 ml C^C^. Získá se 25 mg (52 %) BIO1014-OMe ve formě pěny.
C. Podle stejného postupu, jaký je popsán v příkladu 1B, se zreaguje 25 mg (0,057 mmol) BI01014-OMe s 0,115 ml (0,115 mmol) vodného 1,0 M LiOH v 5 ml methanolu. Získá se 5,1 mg (21 %) BIO-1014A a 4,7 mg (20 %) BIO-1014B ve formě bílých pevných látek.
BIO-1014A: ΤΗ NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,52 (d, 1H), 8,13 (d, 1H), 8,10 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 7,46 - 7,03 (m, 9H), 5,20 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 2,69 (m, 2H), 1,75
- 1,45 (m, 3H), 0,90 (m, 6H). HPLC (gradient A): 28,1 min. Hmotové spektrum, m/z: 422.
BIO-1014B: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,55 (d,
1H), 8,18 (d, 1H), 8,13 (d, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,46 - 7,03 (m, 9H), 5,20 (m, 1H), 4,58 (m, 1H), 2,70 (m, 2H), 1,55
- 1,40 (m, 3H), 0,90 (m, 6H). HPLC (gradient A): 29,5 min. Hmotové spektrum, m/z: 422.
Příklad 4
Syntéza BIO-1017
A. Postupem, popsaným v příkladu IA, se nechá zreagovat 21 mg (0,13 mmol) 1-fenyl-l-cyklopropankarboxylové kyseliny, 26 mg (0,14 mmol) EDC a 26 mg (0,17 mmol) HOBt s 44 mg (0,11 mmol) aminu, připraveného podle příkladu 3A, a 0,10 ml (0,56 mmol) diisopropylethylaminu v 5,0 ml Cř^C^· Získá se 39 mg (68 %) BIO1017-OMe ve formě pěny.
B. Podle stejného postupu, jaký je popsán v příkladu 1B, se zreaguje 39 mg (0,089 mmol) BIO1017-OMe s 0,27 ml (0,27 mmol) vodného 1,0 M LiOH v 2 ml methanolu. Získá se 10,3 mg (27 %) BIO-1017A a 12,2 mg (32 %) BIO-1017B ve formě bílých pevných látek.
BIO-1017A: 1H NMR spektrum (CD3SOCD3, 300 MHz, ppm): 8,46 (d, IH), 7,40 - 7,20 (m, 10H), 6,30 (d, IH), 5,09 (m, IH), 4,33 (m, IH), 2,62 (m, 2H), 1,50 - 1,20 (m, 5H), 0,98 (m, 2H),
0,82 (m, 6H). HPLC (gradient A): 33,9 min. Hmotové spektrum, m/z: 423.
BIO-1017B: 1H NMR spektrum (CD3SOCD3, 300 MHz, ppm): 8,55 (d, IH), 7,48 - 7,15 (m, 10H), 6,30 (d, IH), 5,08 (m, IH), 4,35 (m, IH), 2,63 (m, 2H) , 1,48 - 1,15 (m, 5H), 1,10 - 0,88 (m, 2H), 0,85 - 0,64 (m, 6H). HPLC (gradient A): 33,9 min a 34,5 min (1 : 9). Hmotové spektrum, m/z: 423.
Příklad 5
Syntéza BIO-1022
A. Postupem popsaným v příkladu IA se nechá zreagovat 20 mg (0,11 mmol) 2-naftyloctové kyseliny, 25 mg (0,13 mmol) EDC a 25 mg (0,16 mmol) HOBt s 42 mg (0,10 mmol) aminu, připraveného podle příkladu 3A, a 0,10 ml (0,56 mmol) diisopropylethylaminu v 2,0 ml DMF. Získá se 36 mg (70 %) BIO1022-OMe ve formě pěny.
B. Podle stejného postupu, jaký je popsán v příkladu 1B, se
- 67 zreaguje 36 mg (0,078 mmol) BIO1022-OMe s 0,50 ml (0,50 mmol) vodného 1,0 M LiOH v 3 ml methanolu. Získá se 1,7 mg (4,8 %) BIO-1022A a 6,8 mg (19 %) BIO-1022B ve formě bílých pevných látek.
B10-1022A:1H NMR spektrum (CDClg, 300 MHz, ppm): 7,90 - 7,17 (m, 12H), 5,30 (t, ÍH), 4,45 (m, ÍH), 2,79 (m, 2H), 1,68
- 1,33 (m, 3H), 0.87 (d, 6H). HPLC (gradient A): 25,7 min. Hmotové spektrum, m/z: 447.
BIO-1022B: 1H NMR spektrum (CDCl3, 300 MHz, ppm): 7,90
- 7,17 (m, 12H), 5,35 (t, ÍH), 4,49 (m, ÍH), 2,79 (d, 2H), 1,58 - 1,33 (m, 3H), 0,82 (m, 6H). HPLC (gradient A): 25,7 min a 26,4 min (1 : 9). Hmotové spektrum, m/z: 447.
Příklad 6 Syntéza BIO-1029
A. t-Butyl-3-amino-3-fenyl-l-propanoát se nechá zreagovat s BocLeuOSu podle metody popsané v postupu C. Získaný materiál se převede na žádanou aminovou sůl podle postupu D2.
B. Metodou, popsanou v příkladu IA, se nechá zreagovat 18 mg (0,067 mmol) 4-(2-aminobenzamido)fenyloctové kyseliny, 13 mg (0,067 mmol) EDC a 13 mg (0,085 mmol) HOBt s 18 mg (0,054 mmol) aminu, připraveného podle příkladu 6A, a 0,048 ml (0,27 mmol) diisopropylethylaminu v 0,5 ml DMF. Získá se 32 mg (100 %) NH2-BIO1029-OtBu ve formě oleje. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,65 - 7,43 (m, 4H), 7,40 - 7,10 (m, 9H), 6,72 (m, 2H), 6,49 (d, ÍH), 5,28 (m, ÍH), 4,45 (m, ÍH), 3,52 (s, 2H), 2,68 (m, 2H), 2,00 (bs, 2H), 1,65 - 1,15 (m, 13H), 0,85 (m, 6H).
C. Roztok 16 mg , mmol) NH2~BIO1029-OtBu v 1 ml trifluoroctové kyseliny se míchá 45 minut při laboratorní teplotě a pak se koncentruje. Přečištění získaného surového produktu HPLC poskytne 3,4 mg (26 %) NH2~BI01029 ve formě pevné bílé látky. Hmotové spektrum, m/z: 531.
D. Směs 3,4 mg (0,0064 mmol) NH2-BI01029, 3 kapek methylisokyanátu a 1 kapky diisopropylethylaminu v 0,30 ml CH2C12 se míchá při laboratorní teplotě 18 hodin a pak se zahustí ve vakuu. Přečištění surového produktu HPLC poskytne 2,6 mg (69 %) BIO-1029 jako bílou pevnou látku. 1H NMR spektrum (CD3SOCD3, 300 MHz, ppm): v souladu se strukturou. HPLC (gradient A): 28,2 min. Hmotové spektrum, m/z: 588.
Příklad 7
Syntéza BIO-1032
A. Metodou, popsanou v příkladu IA, se nechá zreagovat 29 mg (0,19 mmol) 3-aminofenyloctové kyseliny, 44 mg (0,23 mmol)
EDC a 44 mg (0,29 mmol) HOBt s 49 mg (0,15 mmol) aminu, připraveného podle příkladu 6A, a 0,17 ml (0,95 mmol) diisopropylethylaminu v 1,0 ml DMF. Po flash chromatografií (SiO2, 60% ethylacetát-hexan) se získá 22 mg (31 %)
NH2~BI01032-0tBu ve formě pěny. ^Η NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,45 - 7,05 (m, 7H), 6,75 - 6,50 (m, 3H), 5,97 (d, IH), 5,30 (m, IH), 4,46 (m, IH), 3,50 (s, 2H), 2,71 (m, 2H), 1,70 - 1,39 (m, 3H), 1,33 (s, 9H), 0,84 (m, 6H).
B. Směs 7,0 rng (0,015 mmol) NH2-BIO1032-OtBu, 1,7 μ.1 (0,014 mmol) fenylsulfonylchloridu a 5,4 μ.1 (0,030 mmol) diisopropylethylaminu v CH2C12 se míchá 18 hodin při laboratorní teplotě. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se zředí ethylacetátem. Roztok se promyje dvakrát 60% nasyc. vodným roztokem NaHCO3, vodou, třikrát 5% roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyc. vodným roztokem NaCl, vysuší se (MgSO4) a rozpouštědlo se odpaří. Odparek (9 mg) se míchá 30 minut s 1 ml trifluoroctové kyseliny při laboratorní teplotě. Po odpaření ve vakuu se odparek přečistí HPLC a získá se 3,9 mg (47 %) BIO-1032 jako bílá pevná látka. ^H NMR spektrum (CD3SOCD3, 300 MHz, ppm): 8,52 (d, IH), 8,17 (d, IH), 7,75 (d, 2H), 7,61 - 7,45 (m, 3H), 7,35 - 6,85 (m, 9H), 5,13 (m, IH), 4,28 (m, IH), 3,40 (m, 2H), 2,65 (bs, 2H), 1,50 - 1,12 (m, 3H), 0,79 (d, 3H), 0,71 (d, 3H). HPLC (gradient B): 18,7 min. Hmotové spektrum, m/z 552.
Příklad 8
Syntéza BIO-1093
K roztoku 41,5 mg (0,102 mmol) Boc-chráněného aminového produktu, připraveného postupem C, ve 2 ml dichlormethanu se při 0 - 5 °C přidají 4 ml trifluoroctové kyseliny. Směs se nechá ohřát na laboratorní teplotu a míchá se 1 hodinu. Po odpaření se odparek znovu rozpustí v dichlormethanu, dvakrát za sebou odpaří a vysuší se ve vysokém vakuu, aby se odstranily stopy trifluoroctové kyseliny. HPLC analýza ukazuje úplnou konverzi a produkt se projevuje jako dva nové píky o kratším retenčním čase.
B. Materiál z příkladu 8A se znovu rozpustí v 0,75 ml dimethylformamidu, roztok se ochladí na 0 - 5 °C, přidá se DIEA až do alkalické reakce směsi na lakmus, a ledová lázeň se odstraní. Reakcí tohoto materiálu s 16,5 mg (0,091 mmol) 4-nitrofenyloctové kyseliny, 20,4 mg (0,151 mmol) HOBt a 19,4 mg (0,101 mmol) EDC za podmínek, uvedených v příkladu IA, poskytne 21,4 mg (50 %) BIO1093-OEt ve formě čirého oleje.
C. Roztok 21,4 mg (0,053 mmol) BIO1093-OEt v 1 ml methanolu se míchá přes noc při laboratorní teplotě se 130 μΐ (0,13 mmol) 1 N LiOH. Směs se okyselí na lakmus trifluoroctovou kyselinou a odpaří ve vakuu. Čisté isomery se získají preparativní HPLC a následnou lyofilizací. Opakované rozpuštění v 50/50 MeOH/CH2Cl2, následné odpaření ve vakuu a konečné sušení 24 hodin ve vysokém vakuu poskytne po 3 mg (13 %) každého z isomerů BIO-1093 ve formě bílé amorfní pevné látky.
Isomer A: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,09 (d,
2H, J = 8,2 Hz), 7,38 (d, 2H, J = 8,21 Hz), 7,15 (s, 5H),
5,21 (m, 1H), 4,32 (m, 1H), 3,28 (s, 1H), 2,67 (m, 2H), 1,40 (m, 3H), 0,75 (dd, 6H, J = 6,9 Hz a 7,6 Hz). Hmotové spektrum (FAB): 442 (M+H)+, 464 (M+Na)+; mol. hmotnost 441,43. HPLC (gradient 1): jediný pík >99 %, 19,5 min. TLC, 10%
MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,25; EtOAc + 1 % HOAc: Rp = 0,35.
Isomer B: NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,0 (d, 2H,
J = 9,7 Hz), 7,56 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,73 (d, 2H, J = 9,7 Hz), 7,07 (s, 5H), 5,15 (t, 1H, J = 5,5 Hz), 4,29 (m, 1H), 3,45 (s, 2H), 2,65 (m, 2H), 1,45 (m, 3H), 0,78 (dd, 6H, J = 6,9 Hz a 4,8 Hz). Hmotové spektrum (FAB): 442 (M+H)+, 464 (M+Na)+; mol. hmotnost 441,43. HPLC: jediný pík >99 %, 19,3 min. TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,29; EtOAc + 1 % HOAc: Rp = 0,55.
Příklad 9
Syntéza BIO-1099
A. Amin z příkladu 3A (50,0 mg, 0,127 mmol) se nechá reagovat za podmínek, popsaných v příkladu 8B, s 25,6 mg (0,121 mmol) difenyloctové kyseliny, 26 mg (0,19 mmol) HOBt a 27 mg (0,14 mmol) EDC v dimethylformamidu. Získá se 49,2 mg (83 %) BIO1099-OMe ve formě čirého viskozního oleje.
B. BIO1099-OMe (49 mg, 0,1 mmol) se zmýdelní a přečistí jak je popsáno v příkladu 8C. Získá se 7 mg (15 %) BIO-1099A a 5 mg (11 %) BIO-1099B ve formě bílých amorfních tuhých látek.
Isomer A: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,95 (d,
1H, J = 8 Hz), 7,19 (m, 15H), 6,95 (d, IH, J = 8 Hz), 5,25 (t, 1H, J = 3,2 Hz), 4,84 (s, 1H), 4,41 (m, 1H), 2,70 (dd,
2H, J = 2,5 Hz a 1,3 Hz), 1,41 (m, 3H), 0,79 (dd, 6H, J = 6
Hz). Hmotové spektrum (FAB): 474 (M+H)+, 496 (M+Na)+, mol.
hmotnost 472,54. HPLC: 1 pík, čistota 100 %, 30,074 min. TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,33, 50/50 EtOAc/Hex + 1 % HOAc: Rp = 0,45.
Ί1
Isomer Β: 1Η NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,72 (d,
ÍH, J = 8 Hz), 7,22 (m, 15H), 5,31 (t, ÍH, J = 1,2 Hz), 6,70 (d, ÍH, J = 8 Hz), 4,93 (s, ÍH), 4,60 (m, ÍH), 2,68 (s, ÍH), 2,65 (m, 2H), 1,35 (m, 3H), 0,61 (dd, 6H, J = 2,5 Hz a 1,3 Hz). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 473, (M+Na)+ 495, mol.
hmotnost 472,54. HPLC: 1 pík, čistota 100 %, 30,38 min. TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,33, 50/50 EtOAc/Hex + 1 % HOAc Rp = 0,38.
Příklad 10
Syntéza BIO-1100
A. Sůl aminu, popsaná v příkladu 6A (připravená ze 40,5 mg, 0,093 mmol, Boc-chráněného materiálu) se rozpustí v 1,0 ml DMF a přidá se za míchání triethylamin do basické reakce na lakmus.
B. Metodou, popsanou v příkladu IA, se nechá zreagovat 23,1 mg (0,089 mmol) 2-brom-5-methoxy-4-hydroxyfenyloctové kyseliny, 18,9 mg (0,14 mmol) HOBt a 19,6 mg (0,10 mmol) EDC v 1,0 ml DMF s volným aminem, připraveným v příkladu 10A. Získá se 49 mg (kvantitativní výtěžek) bílé pevné látky. Vyčištění alikvotu preparativní HPLC na reverzní fázi (gradient 2), lyofilizace a vysušení opakovaným rozpouštěním v 50/50 MeOH/CH2Cl2 a odpařováním za sníženého tlaku se získá BIO-1100 (1,8 mg) ve formě bílé amorfní pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,25 (s, 5H), 7,05 (s, ÍH), 6,30 (s, ÍH), 5,28 (m, ÍH), 3,81 (s, 3H), 3,59 (s, 2H), 2,77 (m, 2H), 1,45 (m, 3H), 0,82 (dd, 6H, J = 2,5 Hz a 1,2 Hz). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 521, 523, (M+Na)+ 543, 545; mol. hmotnost 521,44. HPLC: Hlavní pík 29,1 min, čistota >97 %. TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,16; 50/50 EtOAc/Hex + 1 % HOAc: Rp = 0,28.
Příklad ll
Syntéza BIO-1106
A. K roztoku 1,0 g (7,6 mmol) 6-aminohexanové kyseliny v 6 ml dioxanu a 6 ml vody, obsahujícímu 1,7 ml (11,25 mmol) triethylaminu, se přidá 2,1 g (8,4 mmol) Boc-ON (Aldrich). Směs se míchá 3 hodiny při laboratorní teplotě a pak se zředí 20 ml vody a promyje se ethylacetátem (2 x 10 ml). Vodná vrstva se okyselí 1 N HCl na pH 1-2 a extrahuje se pětkrát ethylacetátem. Po vysušení nad Na2SO4 a odpaření rozpouštědla se získá 842 mg (51 %) produktu 1106-1. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 4,61 (bs, IH), 3,15 - 2,95 (bm, 4H),
2,55 - 2,23 (m, 4H), 1,65 - 1,50 (4H), 1,46 (9H), 1,45
- 1,30 (m, 2H).
B. t-Butyl-3-amino-3-fenyl-l-propanoát se kondenzuje s CbzLeuOSu jak je popsáno v postupu C. Z tohoto materiálu se připraví žádaný volný amin, jak je popsáno v postupu D2.
C.17,3 mg (0,075 mmol) N-Boc-6-aminohexanové kyseliny (připravené v příkladu 11A), 15,2 mg (0,11 mmol) HOBt a 17,3 mg (0,09 mmol) EDC v 0,5 ml dimethylformamidu se míchá při laboratorní teplotě 1,5 hodiny. K míchanému roztoku aktivovaného esteru se přidá 25 mg (0,075 mmol) volného aminu z příkladu 11B, rozpuštěného v 0,5 ml dimethylformamidu, a dbě kapky triethylaminu tak, aby směs byla alkalická na lakmus. Po několika hodinách není reakce podle HPLC stále dokončena. Pro její dokončení se přidají malá množství N-Boc-6-aminohexanové kyseliny, HOBt a EDC. Produkt se čistí, jak je popsáno v příkladu 8C. Získá se 26 mg (63 %) t-butylesteru BI01106Boc ve formě čirého viskozního oleje.
1H NMR spektrum (CDC13 , 300 MHz, ppm): 7,40 (d, IH, J = 8 Hz), 7,32 - 7,25 (m, 5H), 6,30 (d, IH, J = 8 Hz), 5,30 (q,
IH, J = 7 Hz), 4,49 (m, IH), 3,09 (bs, 2H), 2,79 (dd, IH,
J = 8 Hz a 15 Hz), 2,69 (dd, IH, J - 7 Hz a 15 Hz), 2,20 (t, 2H, J = 8 Hz), 1,69 - 1,39 (m, 9H), 1,42 (s, 9H), 1,29 (s, 9H), 0,88 (m, 6H). HPLC: 1 pík 28,3 min, čistota 100 * 'O ·
Obě t-butylové chránící skupiny v t-butylesteru BI01106Boc se odstraní jak je popsáno v příkladu 10A. Výsledný odparek se míchá s 0,5 ml dimethylformamidu, roztok se zalkalizuje na lakmus přidáním dvou kapek triethylaminu, přidá se 13,6 mg (0,3 mmol) fenylisokyanátu a reakční směs se míchá přes noc. Po zpracování,popsaném v příkladu 10B, se získá 3,5 (29 %) BIO-1106 ve formě béžové amorfní pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,97 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,22 (m,
11H), 6,91 (t, 1H, J = 8 Hz), 5,30 (m, 1H), 4,33 (m, 1H),
3,12 (m, 6H), 2,63 (m, 2H), 2,13 (t, 2H, J = 6 Hz), 1,41 (bm, 9H), 0,80 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 511, (M+Na)+ 533; mol. hmotnost 510,59. HPLC: 1 pík 19,4 min, čistota 100 %. TLC, 15% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,32; 10%
MeOH/EtOAc + 1 % HOAc: Rp = 0,31.
Příklad 12
Syntéza BIO-1142
Směs 16,3 mg (0,11 mmol) (+/-)-1-benzocyklobutenkarboxylové kyseliny, 22,4 mg (0,165 mmol) HOBt, 23,7 mg (0,121 mmol) EDC a 0,5 ml dimethylformamidu se míchá 45 minut při laboratorní teplotě, čímž se připraví aktivovaný ester. K němu se přidá 15,3 mg (0,055 mmol) produktu, připraveného v příkladu 10A, a směs se míchá dvě hodiny. Po filtraci a čištění preparativní HPLC, jak je popsáno v příkladu 10B, se získá 4,4 mg (70 %) A-isomeru BIO-1142 a 4,9 mg (22 %) B-isomeru BIO-1142 ve formě bílých amorfních tuhých látek.
BIO-1142, isomer A: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,79 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,31 - 7,05 (m, 9H), 6,81 (d, 1H,
J = 8 Hz), 5,24 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 4,15 (m, 1H), 3,00 - 3,50 (bm, 11H), 2,70 (m, 2H), 1,43 (m, 3H), 0,70 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 409, (M+Na)+ 431; mol. hmotnost 408,46. HPLC: hlavní pík při 20,2 min; čistota >99 %. TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,46; EtOAc + 1 % HOAc: Rp = 0,53.
BIO—1142, isomer B: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm):
7,92 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,31 - 7,05 (m, 9H), 6,91 (d, 1H,
J = 8 Hz), 5,25 (m, 1H), 4,38 (m, 1H), 4,14 (m, 1H), 3,28 (m, 2H), 2,72 (m, 2H), 1,42 (m, 3H), 0,77 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 409, (M+Na)+ 431; mol. hmotnost 408,46. HPLC: hlavní pík při 20,62 min; čistota >96 %. TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,52; EtOAc + 1 % HOAc: Rp = 0,54.
Příklad 13
Syntéza BIO-1189
Směs 6,2 mg (0,038 mmol) kyseliny (+/-)-1-indankarboxylové, 7,7 mg (0,057 mmol) HOBt, 8,0 mg (0,042 mmol) EDC a 0,5 ml dimethyiformamidu se míchá dvě hodiny při laboratorní teplotě. Volný amin, připravený v příkladu 11B se nechá reagovat s TFA a 10 mg (0,038 mmol) tohoto materiálu se přidá k výšeuvedené směsi a míchá se přes noc. Reakční směs se zfiltruje a produkt se přečistí preparativní HPLC jak je popsáno v příkladu 10B. Získá se isomer A látky BIO-1189 (méně než 1 mg) a 2 mg isomerů B (12 %) ve formě bílých amorfních tuhých látek.
BIO-1189, isomer A: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm):
7,3 - 7,1 (m, 12H), 5,32 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 3,91 (t, 1H,
J = 6,6 Hz), 3,1 - 2,7 (m, 3H), 2,5 - 2,2 (m, 1H), 1,6 - 1,4 (m, 3H), 0,85 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 423, (M+Na)+ 445; mol. hmotnost 422,5. HPLC: hlavní pík při 21,2 min; čistota >97 %. TLC, 5% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,19; EtOAc + % HOAc: Rp = 0,73.
BIO-1189, isomer B: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm):
7,7 (d, J = 8 Hz), 7,45 - 7,1 (m, 9H), 6,65 (d, 1H, J = 8
Hz), 5,33 (m, 1H), 4,48 (m, 1H) , 3,90 (t, 1H, J = 6,6 Hz),
3,1 - 2,8 (m, 3H), 2,45 - 2,3 (m, 2H), 1,48 (m, 3H), 0,80 (m,
6H). Hmotové spektrum (FAB): (M+H)+ 423, (M+Na)+ 445; mol. hmotnost 422,5. HPLC: hlavní pík 21,5 min; čistota >94 %.
TLC, 5% MeOH/CH2Cl2: Rp = 0,12; EtOAc + 1 % HOAc: Rf = 0,60.
- 75 Příklad 14
Syntéza BIO-1006
A. Amin β-3 se kondenzuje s BocLeuOSu podle postupu
C (produkt se překrystaluje z diethyletheru) a zbaví se chránících skupin podle postupu D. Získá se sůl žádaného aminu s TFA.
1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm) pro Boc-amin: 0,90 (m, 6H), 1,42 (9H), 1,55 - 1,75 (m, 3H), 2,8 (m, 2H), 3,61 (s, 3H), 4,05 (m, 1H), 4,83 (m, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,92 (s, 2H), 6,68 - 6,78 (m, 3H), 7,06 (d, 1H).
1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm) pro TFA-amin: 0,83 (d, 3H), 0,87 (d, 3H), 1,50 (m, 1H), 1,63 (bt, 2H), 2,73 - 2,92 (m, 2H), 3,63 (s, 3H), 4,27 (bs, 1H), 5,26 (m, 1H), 5,95 (s, 2H), 6,66 - 6,78 (m, 3H), 7,58 (bs, 3H), 8,02 (d, 1H).
B. Roztok 24 mg soli aminu s TFA, připravené v příkladu 14A, v dichlormethanu se přidá ke 14 mg (1,1 ekvivalentu) sukcinimidylového esteru 4-hydroxyfenyloctové kyseliny a míchá se asi dvě hodiny při laboratorní teplotě. Reakční směs se pak promyje 5 % roztokem kyseliny citrónové (2 x), nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (2 x) a solankou (1 x), vysuší se nad Na2SO4> zfiltruje se a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 28 mg surového methylesteru BIO-1006. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 0,82 (6H), 1,35 - 1,58 (3H), 2,62 - 2,82 (2H), 3,48 (2H), 3,57 (3H), 4,41 (1H), 5,70 (1H), 5,89 (2H), 6,08 (1H), 6,65 - 6,75 (5H), 7,04 (2H),
7,22 (1H).
C. Roztok surového methylesteru BIO-1006 v methanolu se přidá k 1 N LiOH a míchá se asi 1 hodinu při laboratorní teplotě. Reakční směs se neutralizuje trifluoroctovou kyselinou a přečistí HPLC. Frakce s čistým produktem po odpaření poskytne látku BIO-1006. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 0,73 (d, 3H, J = 6 Hz), 0,80 (d, 3H, J = 6 Hz), 1,35
- 76 (bt, 2H), 1,45 (m, 1H), 2,40 (m, 2H), 3,22 - 3,38 (m, 2H), 4,23 (bq, 1H), 5,02 (m, 1H), 5,93 (s, 2H), 6,65 (d, 2H, J =
Hz), 6,68 - 6,80 (m, 2H), 6,83 (s, 1H), 7,03 (d, 2H), 8,11 (bd, 1H). Hmotové spektrum, m/z: 457.
Příklad 15
Syntéza BIO-1050
A. K suspenzi 9 g (60 mmol) 4-aminofenyloctové kyseliny a 15 g (60 mmol) N-(benzyloxykarbonyloxy)sukcinimidu v dichlormethanu se přidá takové množství triethylaminu, aby vznikl homogenní roztok. Směs se míchá 30 minut při laboratorní teplotě a pak se dichlormethan odpaří na rotační odparce. Odparek se rozpustí ve vodě a okyselí se 5% HCI. Vyloučená pevná látka se odfiltruje a promyje 5% HCI, vodou a diethyletherem. Získá se 12 g (70 %) Cbz-aminofenyloctové kyseliny ve formě nahnedleho prasku. H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 3,48 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 7,14 (d, 2H), 7, 29 - 7,45 (m, 7H), 9,73 (s, 1H).
B. Podle metody popsané v příkladu IA se nechá reagovat 342 mg (1,2 mmol) Cbz-aminofenyloctové kyseliny v dimethylformamidu (připravené v příkladu 15A), 275 mg (1,8 mmol) HOBt a 276 mg (1,44 mmol) EDC, s 432 mg (0,94 mmol) volného aminu, připraveného v příkladu 14A, v dimethylformamidu a získaný kondenzační produkt se použije bez čištění v další reakci.
C. Produkt z příkladu 15B se hydrogenuje na 10% Pd/C ve vodném methanolu při tlaku 50 psi přes noc. Reakční směs se filtruje pres Celit11 a po odpařeni rozpouštědla se získá 0, g (90 %) volného aminu ve formě hnědého prášku. 1H NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz, ppm) pro látku F: 0,82 (m, 6H), 1, 30 - 1,62 (m, 3H), 2,62 - 2,82 (m, 2H), 3,45 (s, 2H), 3,57 (s, 3H), 4,37 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 5,91 (s, 2H), 6,65 - 6, 80 (m, 5H), 7,02 (d, 2H).
D. K roztoku 22 mg volného aminu z příkladu 15C v dichlormethanu se přidá 8 mg (1,5 ekvivalentu) fenylisokyanátu a jedna kapka triethylaminu a roztok se pak míchá 2 hodiny při laboratorní teplotě. Směs se zředí 15 ml ethylacetátu a promyje se 5% kyselinou citrónovou (2 x) , nasyc. vodným roztokem NaHCO3 (2 x) a solankou (1 x). Po vysušení nad Na2SO4, filtraci a odpaření rozpouštědla se získá surový methylester fenylureidokyseliny.
E. Surový methylester fenylureidokyseliny se rozpustí v methanolu, přidá se 1 N LiOH při 0 °C a směs se míchá 2 hodiny při laboratorní teplotě. Po neutralizaci trifluořoctovou kyselinou se reakční směs přečistí HPLC.
Čisté frakce po vysušení poskytnou BIO-1050. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,76 (d, 3H), 0,80 (d, 3H), 1,30 - 1,50 (m, 3H), 2,52 - 2,72 (m, 2H), 3,28 - 3,50 komplex., 2H), 4,30 (m, 1H), 5,06 (m, 1H), 5,97 (s, 2H), 6,70 (d, 1H), 6,79 - 6,87 (m, 2H), 6,95 (t, 1H), 7,13 (d, 2H), 7,25 (t,
2H), 7,85 (d, 2H), 7,43 (d, 2H), 8,12 (d, 1H), 8,40 (d, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,66 (s, 1H). Hmotové spektrum, m/z: 575.
Příklad 16
Syntéza BIO-1068
Provede se reakce, popsaná v příkladu 15D, s tím rozdílem, že se místo fenylisokyanátu použije cyklohexylisokyanát. Získaný produkt se hydrolysuje postupem, popsaným v příkladu 15E, a produkt se čistí HPLC. Čisté frakce poskytnou BIO-1068. -^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,73 (d, 3H, J = 6 Hz), 0,80 (d, 3H, J = 6 Hy), 1,05 - 1,85 (m, 13H), 2,50 - 2,75 (m, 2H), 3,23 - 3,50 (m, 3H), 4,28 (bq, 1H), 5, 05 (bq, 1H),
5,95 (bs, 2H), 6,02 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,72 (bd, 1H), 6,71 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,84 (bs, 1H), 7,08 (d, 2H, J = 8 Hz),
7,25 (d, 2H, J = 8 Hz), 8,07 (d, 1H, J = 8 Hz), 8, 20 (s,
1H), 8,40 (d, 1H, J = 8 Hz). Hmotové spektrum, m/z: 581.
Příklad 17
Syntéza BIO-1079
Provede se reakce, popsaná v příkladu 15D, s tím rozdílem, že se místo fenylisokyanátu použije 2-methoxyfenylisokyanát. Získaný produkt se hydrolyzuje postupem, popsaným v příkladu 15E a produkt se čistí HPLC. Čisté frakce po vysušení poskytnou BIO-1079. ^Η NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,75 (d, 3H), 0,80 (d, 3H), 1,30 - 1,50 (m, 3H), 2,50 - 2,72 (m, 2H), 3,30 - 3,45 (m, 2H), 3,85 (s, 3H), 4,28 (m, ÍH),
5,06 (m, ÍH), 5,96 (bs, 2H), 6,69 - 7,02 (m, 8H), 7,13 (d, 2H), 7, 34 (d, 2H), 8,05 - 8,15 (m, 3H), 8,42 (bd, ÍH), 8,87 (s, ÍH), 9,13 (s, ÍH). Hmotové spektrum, m/z: 605.
Příklad 18
Syntéza BIO-1082
A. K dichlormethanovému roztoku 43 mg trifluoracetátu aminu, připraveného postupem D, se při 0 °C přidává triethylamin, až se dosáhne hodnoty pH 9,0. Pak se přidá 26 mg 4-fenylbutyryl chloridu. Směs se míchá 2 hodiny při laboratorní teplotě, zředí se 20 ml ethylacetátu a promyje se 5% roztokem kyseliny citrónové (2 x), nasyc. vodným roztokem NaHCO^ (2 x) a solankou (1 x). Po vysušení nad Na2SO4, filtraci a odpaření rozpouštědla se získá žádaný produkt jako ethylester.
B. Surový ethylester se rozpustí v methanolu, přidá se při 0 °C 1 N LiOH a směs se míchá 2 hodiny při laboratorní teplotě. Po neutralizaci trifluoroctovou kyselinou se reakční směs podrobí HPLC. Příslušné frakce poskytnou dva diastereoisomery, BIO-1082-A a BIO-1082-B.
BIO-1082-B: ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,79 (d, 3H), 0,83 (d, 3H), 1,29 - 1,37 (m, 2H), 1,47 (m, ÍH), 1,70 - 1,83 (m, 2H), 2,08 - 2,17 (m, 2H), 2,48 - 2,58 (m, 2H),
2,67 (bt, 2H), 4,31 (m, ÍH), 5,03 (m, ÍH), 7,12 - 7,32 (m, 10H), 7,90 (d, ÍH), 8,45 (d, ÍH). Hmotové spektrum, m/z: 425.
Příklad 19
Syntéza BIO-1148
A. Amin β-13 se kondenzuje s BocLeuOSu metodou popsanou v postupu C. Získaný materiál se převede na sůl aminu 1148-1 za podmínek, popsaných v postupu Dl.
Β. K roztoku 3,0 g (20 mmol) 4-hydroxyfenyloctové kyseliny v dimethylformamidu se přidá 3,7 g (24 mmol) HOBt a pak 4, g (22 mmol) EDC a směs se míchá 30 minut při laboratorní teplotě. Přidá se 2,3 g (20 mmol) N-hydroxysukcinimidu a v míchání se pokračuje přes noc. Směs se pak zředí 150 ml ethylacetátu, roztok se extrahuje 5% roztokem kyseliny citrónové (2 x), nasyc. roztokem NaHCOg (2 x) a solankou (1 x) a suší se nad bezvodým Na2SO4. Po odpaření rozpouštědla ve vakuu se produkt rozpustí v dichlormethanu a srazí se hexanem. Získá se 3,9 g (78 %) sukcinimidylesteru
4-hydroxyfenyloctové kyseliny. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 2,79 (s, 4H), 3,93 (s, 2H), 6,72 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,12 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 9,41 (s, 1H).
C. Aminová sůl 1148-1 se hydrolyzuje LiOH ve vodném methanolu na kyselinu. Roztok této kyseliny, triethylaminu a sukcinimidylesteru 4-hydroxyfenyloctové kyseliny (připraveného v příkladu 19B) v dichlormethanu se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě. Reakční směs se pak přečistí HPLC. Získá se BIO-1148 jako směs dvou diastereoisomerů. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,70 - 0,90 (m, 6H), 1,29 - 1,63 (m, 3H), 2,73 - 2,85 (m, 2H), 3,17 - 3,40 (m, 2H), 4,15 - 4,30 (m, 1H), 5,12 - 5,28 (m, 1H), 6,58 - 6,68 (m, 2H), 6,94 - 7, 06 (m, 2H), 7,54 - 7,67 (m, 1H), 7,93 - 8,16 (m, 2H), 8,53 - 8,75 (m, 3H). Hmotové spektrum, m/z: 414.
Příklad 20
Syntéza BIO-1168
Provede se reakce, popsaná v příkladu 15D, s tím rozdílem, že se místo fenylisokyanátu použije 3-methylfenylisokyanát. Získaný produkt se hydrolysuje postupem, popsaným v příkladu 15E a produkt se čistí HPLC. Frakce, obsahující čistý produkt, po vysušení poskytnou BIO-1168. 1H NMR spektrum (DMS0-d6, 300 MHz, ppm): 0,76 (d, 3H), 0,82 (d, 3H), 1,30
- 1,52 (m, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,54 - 2,70 (m, 2H), 3,35 - 3, 48 (m, 2H), 4,28 (m, IH), 5,07 (m, IH), 5,96 (m, 2H), 6,68
- 6,86 (m, 4H), 7,10 - 7,25 (m, 4H), 7,30 (s, IH), 7,35 (d, 2H), 8,11 (d, IH), 8,44 (d, IH), 8,63 (s, IH), 8,67 (s, IH). Hmotové spektrum, m/z: 589.
Příklad 21
Syntéza BIO-1179
Provede se reakce, popsaná v příkladu 15D, s tím rozdílem, že se místo fenylisokyanátu použije 2-methylfenylisokyanát. Získaný produkt se hydrolysuje postupem, popsaným v příkladu 15E a produkt se čistí HPLC. Frakce s čistým produktem po vysušení poskytnou sloučeninu BIO-1179. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,75 (d, 3H), 0,80 (d, 3H), 1,27
- 1,51 (m, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,62 (m, 2H), 3,40 (m, 2H), 4, 28 (m, IH), 5,06 (m, IH), 5,98 (bs, 2H), 6,71 (bd, IH), 6,80 (d, IH), 6,83 (bs, IH), 6,92 (bt, IH), 7,05 - 7,20 (m, 4H), 7,38 (d, 2H), 7,82 (d, IH), 7,87 (s, IH), 8,10 (d, IH), 8, (d, IH), 8,93 (s, IH). Hmotové spektrum, m/z: 589.
Příklad 22
Syntéza BIO-1195
A. Amin β-9 se kondenzuje s BocLeuOSu metodou popsanou v postupu C. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 0,90 (m, 6H), 1,32 (s, 9H), 1,42 (s, 9H), 1,58 - 1,90 (m, 3H), 2,61
- 2,80 (m, 2H), 4,08 (m, IH), 4,89 (bd, IH), 5,37 (bq, IH),
6,95 - 7,15 (m, 3H), 7,45 (bd, IH).
B. Produkt, připravený v příkladu 22A, se převede kyselinou trifluoroctovou na odpovídající trifluoroctovou sůl 1195-2, jak je popsáno v postupu D.
C. Směs 10,0 g (66,1 mmol) 4-aminofenyloctové kyseliny, 8, g (68,0 mmol) 98% fenylisokyanátu a 100 ml ethylacetátu se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě a pak se 1 1/2 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Po zchladnutí na laboratorní teplotu se produkt odfiltruje, promyje ethylacetátem, methanolem a etherem. Získá se 17,5 g (98 %) fenylureidofenyloctové kyseliny 1195-3 ve formě bílého prásku. -*-H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,72 - 8,64 (m, 2H), 7,44 (d, 2H), 7,36 (d, 2H), 7,28 (d, 2H), 7,16 (d, 2H), 6,69 (t, 1H), 3,52 (s, 2H). Hmotové spektrum (FAB): 272.
D. Roztok fenylureidofenyloctové kyseliny 1195-3, HOBt a EDC v dimethylformamidu se míchá 30 minut při laboratorní teplotě. Pak se přidá volný amin, uvolněný triethylaminem z produktu, připraveného v příkladu 22B. Směs se míchá přes noc při laboratorní teplotě a produkt se čistí HPLC. Frakce, obsahující čistý produkt, po odpaření poskytnou sloučeninu BIO-1195. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,71 (d, 3H), 0,78 (d, 3H), 1,25 - 1,46 (m, 3H), 2,56 - 2,72 (m, 2H), 3,26 - 3,41 (m, 2H), 4,21 (bq, 1H), 5,07 (bq, 1H), 6,90 (bt, 1H), 7,02 - 7, 14 (m, 3H), 7,17 - 7,42 (m, 8H), 8,10 (d,
1H), 8,47 (d, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,63 (s, 1H). Hmotové spektrum, m/z: 567.
Příklad 23
Syntéza BIO-1198
A. K roztoku fosgenu v dichlormethanu se při 0 °C přikape roztok morfolinu a triethylaminu v dichlormethanu. Směs se míchá při laboratorní teplotě 30 minut a pak se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Bílý pevný odparek se rozpustí v dichlormethanu a přidá se t-butylester 4-aminofenyloctové kyseliny. Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc, zředí se 20 ml ethylacetátu, promyje se 5% roztokem kyseliny citrónové (2 x), nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (2 x) a solankou (1 x). Po vysušení nad Na2SO4, filtraci a odpaření rozpouštědla se získá morfolinoureidový t-butylester 1198-1. 1H NMR spektrum (CDClg, 300 MHz, ppm) pro t-butylester: 1,40 (s, 9H), 3, 38 - 3,46 (m, 4H), 3,60 - 3,70 (m, 6H), 6,67 (s, 1H), 7,13 (d, 2H), 7,27 (d, 2H).
B. Morfolidoureidový t-butylester 1198-1 se rozpustí v dichlormethanu, přidá se trifluoroctová kyselina a roztok se míchá 3 hodiny při teplotě místnosti. Získá se 26 mg odpovídající karboxylové kyseliny 1198-2.
C. Podle metody, popsané v příkladu IA, se 26 mg karboxylové kyseliny 1198-2 nechá reagovat v dimethylformamidu s HOBt,
EDC a aminem, připraveným v příkladu 14A. Získá se 27 mg surového methylesteru 1198-3.
D. Roztok surového methylesteru 1198-3 se převede na sloučeninu BIO-1198 jak je popsáno v příkladu 14C. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 0,75 (d, 3H), 0,82 (d,
3H), 1,27 - 1,50 (m, 3H), 2,53 - 2,70 (m, 2H), 3,28 - 3,45 (m, 6H), 3, 55 - 3,60 (m, 4H), 4,27 (m, 1H), 5,07 (bq, 1H),
5,96 (bs, 2H), 6,72 (bd, 1H), 6,82 (d, 1H), 6,85 (bs, 1H), 7,09 (d, 2H), 7,35 (d, 2H), 8,08 (d, 1H), 8,42 (d, 1H), 8,47 (s, 1H). Hmotové spektrum, m/z: 569.
Příklad 24
Syntéza BIO-1190
A. Amin β-5 se kondenzuje s BocLeuOSu jak je popsáno v postupu C. Získaný materiál se převede na žádanou aminovou sůl podle postupu Dl.
B. Podle metody, popsané v příkladu IA, se nechá reagovat 135 mg (0,47 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny ve 2,5 ml dimethylformamidu, 135 mg (0,88 mmol) HOBt a 0,71 mmol EDC s 200 mg (0,46 mmol) aminové soli z příkladu 29A (ke které byl přidán triethylamin do pH 10). Získá se 235 mg (89 %) sloučeniny 1190-1 ve formě bílé pevné látky.
C. K míchanému roztoku 20 mg (0,034 mmol) sloučeniny 1190-1 ve 3 ml methanolu se přidají 3 ml vodného 2 N LiOH. Směs se míchá při laboratorní teplotě přes noc, ochladí se na 0 °C a okyselí se přidáním trifluoroctové kyseliny na pH 3 - 4 (měřeno pH papírkem). Přečištění produktu kapalinovou chromatografií (kolona Vydac C18, gradient 8) poskytne 10 mg (0,017 mmol; 50 %) produktu BIO-1190 ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,95 (s, IH, NH), 8,39 (d, IH, J = 9 Hz, NH), 8,11 (d, IH, J = 9 Hz, NH),
7,88 (s, IH, NH), 7,83 (d, IH, J = 8 Hz, Ar), 7,36 (d, 2H,
J = 8,4 Hz, Ar), 7,2 - 7,1 (komp., 6H, Ar), 6,92 (m, IH, Ar), 6,83 (d, 2H, J = 9 Hz, Ar), 5,08 (m, IH), 4,28 (m, IH), 3,70 (s, 3H, OMe), 3,39 (d, IH, J = 8 Hz), 3,31 (d, IH, J = 7 Hz), 2,63 (m, IH), 2,23 (s, 3H, Me), 1,50 - 1,25 (komp, 3H), 0,81 (d, 3H, J = 6 Hz), 0,75 (d, 3H, J = 6 Hz). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 575 (pro C32H3gN40g (M+1) vypočteno 575).
Příklad 25
Syntéza BIO-1197
A. 0,884 g (4,0 mmol) aminu β-l se kondenzuje s 1,32 g (4,0 mmol) BocLeuOSu, jak je popsáno v postupu C. Získaný materiál se převede na žádanou sůl aminu (1,42 g, 85 %), jak je popsáno v postupu Dl. Produkt je bílá pevná látka. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,31 - 7,22 (m, 5H), 7,14 (d, IH), 5,37 - 5,30 (m, IH), 4,84 (m, IH), 4,10 (m, IH), 2,85
- 2,66 (m, 2H), 1,72 - 1,58 (m, 2H), 1,51 - 1,49 (m, IH),
1,48 (S, 9H), 1,29 (s, 9H), 0,91 (m, 9H).
B. Podle metody, popsané v příkladu IA, se nechá reagovat 34 mg (0,12 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny, 20 mg (0,14 mmol) HOBt a 26 mg (0.134 mmol) EDC s 30 mg (0,079 mmol) aminové soli z příkladu 25A v přítomnosti triethylaminu. Získá se 15 mg (0,028 mmol; 35 %) sloučeniny BIO-1197 ve formě bílé pěny. Hmotové spektrum (FAB), m/z:
545 (pro C3iH36N4°5 (M+1) vypočteno 545).
Příklad 26
Syntéza BIO-1201
A. 40 mg (0,086 mmol) volného aminu připraveného v příkladu 15C se podle procedury, popsané v příkladu 15D nechá zreagovat s 28 mg (0,172 mmol) 2-nitrofenylisokyanátu. Získá se 50 mg (92 %) sloučeniny 1201-1 ve formě světležlutého oleje. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,55 (d, IH, NH), 8,50 (d, IH, NH) , 8,15 (d, IH, NH), 8,05 (d, IH, NH),
7,6 - 6,7 (11H, Ar), 5,85 (bs, 2H), 5,25 (m, IH), 4, 6 (m, IH), 3,8 - 3,55 (komp.), 3,5 (s, 3H, OMe), 2,75 (m, 2H), 1,7 - 1,4 (komp., 3H), 0,85 (m, 6H).
B. Podle procedury, popsané v příkladu 24C se 50 mg (0,079 mmol) sloučeniny 1201-1 převede na 17 mg (0,027 mmol; 35 %) produktu BIO-1201 , který se získá jako světležlutá pevná látka. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 620 (pro c3iH35N5O9 (M+l) vypočteno 620).
Příklad 27
Syntéza BIO-1217
A. 30 mg (0,1 mmol) aminu β-4 se kondenzuje s 50 mg (0,1 mmol) Na-t-Boc-Ne-CBZ-L-Lysin-N-hydroxysukcinimidu podle postupu, popsaného v příkladu 25A. Získá se 60 mg (93 %) produktu 1217-1 ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,35 - 7,25 (komp., 5H, Ar), 6,8 - 6,7 (komp., 3H, Ar), 5,3 - 5,1 (komp., 2H), 4,95 (m, IH), 4,05 (m, IH), 3,8 (s, 3H, OMe), 3,78 (s, 3H, OMe), 3,1 (m, 2H), 2,7 (m,
2H), 1, 9 - 1,4 (komp.), 1,35 (s, 9H, t-Bu), 1,3 (s, 9H, t-Bu) .
B. Sloučenina 1217-1 (60 mg, 0,09 mmol) v 5 ml dichlormethanu se deblokuje působením 0,5 ml trifluoroctové kyseliny, jak je popsáno v postupu Dl. Získá se 56 mg (100 %) sloučeniny 1217-2 ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,75 (bs), 7,35 - 7,15 (komp., Ar), 6,85 - 6,65 (komp.,
Ar), 5,4 (m), 5,2 - 4,9 (bs, Bn), 4,15 (m) , 3,75 (bs), 3,15
-2,6 (komp.), 1,8 (m) , 1,4 - 1,0 (komp.).
C. Podle procedury, popsané v příkladu IA, se nechá reagovat 40 mg (0, 14 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny, mg (0, 167 mmol) HOBt a 30 mg (0,158 mmol) EDC s 56 mg (0,093 mmol) aminu 1217-2 v přítomnosti triethylaminu. Získá se 21 mg (30 %) sloučeniny BIO-1217 ve formě bílé pěny. -^H NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz, ppm): 9,05 (m, 1H, NH), 8,4 (m, 1H, NH), 8,1 (m, 1H, NH), 8,0 (m, 1H, NH), 7,4 - 6,7 (komp., Ar), 5,1 (m, 1H), 5,0 (bs, 2H), 4,2 (m, 1H), 3,7 (bs, 6H, OMe), 2,9 - 2,6 (komp.), 2,2 (s, 3H, Me), 1,6 - 1,1 (komp.). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 754 (pro C41H47N50g (M+l) vypočteno 754).
Příklad 28
Syntéza BIO-1225
A. 90 mg (0,4 mmol) aminu β-3 se kondenzuje se 193 mg (0,4 mmol) Na-t-Boc-Ne-CBZ-L-Lysin-N-hydroxysukcinimidu podle metody, popsané v příkladu 25A. Získá se 220 mg (94 %) produktu 1225-1 ve formě bílé pěny. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,4 - 7,25 (5H, Ar), 7,1 (m, 1H, NH), 6,8
- 6,65 (3H, Ar), 5,9 (s, 2H), 5,25 (m, 1H), 5,15 (m, NH),
5,05 (s, 2H), 4,85 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,6 (s, 3H, OMe), 3,15 (m, 2H), 2,80 (m, 2H), 1,90 - 1,20 (6H), 1,4 (s, 9H).
B. Chránící skupina BOC v látce 1225-1 (170 mg, 0,29 mmol) se odstraní způsobem, popsaným v postupu Dl. Získá se 100 mg (71 %) volného aminu 1225-2 ve formě bílé pěny. -*-Η NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,07 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,4
- 7,2 (komp., 5H), 6,80 - 6,65 (komp., 3H), 5,90 (s, 2H),
5,25 (m, 1H), 5, 05 (s, 2H), 4,98 (bs, 1H), 3,58 (s, 3H, OMe),
3,32 (m, 1H), 3, 16 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 1,90 - 1,70 (komp.,
3H) , 1,6 - 1,25 (komp., 5H) •
C. Podle metody, popsané v příkladu IA, se nechá reagovat 44
mg (0,155 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny, 36 mg (0,264 mmol) HOBt a 47 mg (0,248 mmol) EDC s 50 mg (0,103 mmol) volného aminu 1225-2. Získá se 46 mg (80 %) látky BIO-1225-3 ve formě bílé pěny. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 9,0 - 6,7 (21H, Ar a NH), 5,96 (s, 2H), 5,1 (m, 2H), 4,98 (s, 2H), 4,2 (m, IH), 3,50 (s, 3H, OMe), 3,48
- 3,4 (komp., 2H), 2,88 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,24 (s, 3H, Me), 1,6 - 1,0 (komp., 6H). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 752 (pro C40H45N5Og (M+l) vypočteno 752).
D. 25 mg (0,033 mmol) látky BIO-1225-3 se zpracuje, jak je popsáno v příkladu 24C, a poskytne 15 mg (62 %) látky BIO-1225 ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 738 (pro c4oH43N5°9 (M+D vypočteno 738).
Příklad 29
Syntéza BIO-1036
A. Metodou, popsanou v postupu C, se 85 mg (0,33 mmol) methyl-3-amino-5-indanyl-l-propanoátu (ester M-l; jeho příprava je popsána v postupu B) převede na sloučeninu 1036-1 (96 mg, 0,22 mmol, 67 %), která se získá jako žlutá pěna. Produkt se bez dalšího čištění použije v dalším reakčním stupni. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,15 (3H), 6,95 (IH), 5,30 (IH), 4,95 (IH), 4,15 (IH), 3,55 (3H), 2,90
- 2,80 (6H), 2,05 (3H), 1,70 (2H), 1,35 (9H), 0,85 (6H).
B. 98 mg (0,22 mmol) sloučeniny 1036-1 se převede na odpovídající aminovou sůl, jak je popsáno v postupu D. Pak se podle příkladu IA tato aminová sůl nechá reagovat v přítomnosti triethylaminu s fenyloctovou kyselinou za vzniku 75 mg (0,17 mmol, 77 %) sloučeniny 1036-2 ve formě nažloutlé pevné látky. Tento produkt se použije bez čištění v dalším reakčním stupni. ^H NMR spektrum (CDC13): δ 7,35
- 6,8 (9H), 6,25 (IH), 5,25 (IH), 4,45 (IH), 3,6 (1,5H), 3,5 (1,5H), 2,80 - 2,60 (6H), 2,00 (2H), 1,70 - 1,30 (5H), 0,85 (6H) .
C. Malé množství sloučeniny 1036-2, získané v předchozí preparaci, bylo hydrolyzováno tak jak je popsáno v příkladu IB. Produkt byl přečištěn a rozdělen HPLC na BIO-1036A (asi 2 mg), m/z 437, čistota podle HPLC 98 %, a BIO-1036B (asi 2 mg), m/z 437, čistota podle HPLC 98 %, obě ve formě bílých pevných látek.
BIO-1036A: 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz): δ 8,45 (d, ÍH, J = 7,3 Hz), 8,21 (d, ÍH, J = 7,3 Hz), 7,37 - 7,05 (m, 8H), 5,20 (m, ÍH), 4,37 (m, ÍH), 3,57 - 3,43 (m, 2H), 2,86 (m, 4H), 2,69 (m, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,60 (m, ÍH), 1,49 (m, 2H), 0,91 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 0,84 (d, 3H, J = 6,3 Hz).
BIO-1036B: 1H NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz): δ 8,45 (d, ÍH, J = 8,4 Hz), 8,22 (d, ÍH, J = 8,4 Hz), 7,40 - 7,00 (m,
8H) , 5,18 (m, ÍH) , 4,35 (m, ÍH), 3,55 (m, 2H) , 2,85 (m, 4H),
2,57 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 1,55 (m, ÍH), 1,40 (m, 2H), 0,90
(d, 3H, J = 6, ,3 Hz) , o, 75 (d, 3H, , J = 6,3 Hz) .
Příklad 30
Syntéza BIO-1137
A. Metodou popsanou v postupu C se 58 mg (0,22 mmol) methyl-3-amino-3-(2-nitrofenyl)-l-propanoátu (ester M-3; jeho příprava je popsána v postupu B) převede na sloučeninu 1137-1 (106 mg, 0,22 mmol, 100 %), která se získá jako nažloutlý hustý olej. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,95 (ÍH), 7,85 - 7,35 (5H), 5,85 (1 Η), 4,95 (ÍH), 4,15 (ÍH), 3,55 (1,5H), 3,50 (1,5H), 2,90 (2H), 1,70 - 1,60 (2H), 1,45 (9H), 0,90 (6H).
B. 106 mg (0,22 mmol) sloučeniny 1137-1 bylo převedeno na 69 mg (0,16 mmol, 73 %) derivátu 1137-2 postupem, popsaným v příkladu 29B. Produkt je žlutá polotuhá látka. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,90 - 7,15 (10H), 6,35 (0,5H), 6,20 (0,5H), 5,75 (ÍH), 4,45 (ÍH), 3,55 (1,5H), 3,50 (1,5H), 2,85 (4H), 1,70 - 1,30 (3H), 0,70 (6H).
C. Malé množství sloučeniny 1137-1 se hydrolyzuje, jak je popsáno v příkladu IB, produkt se přečistí HPLC a z odpovídajících frakcí se získají isomery BIO-1037A (cca 1 mg), m/z 442 (čistota 97 % dle HPLC) a BIO-1037B (cca 2 mg), m/z 442 (čistota 100 % dle HPLC).
Příklad 31
Syntéza BIO-1043
A. Komerční N-BOC-l-aminocyklopropankarboxylová kyselina (80 mg, 0,4 mmol) v 3 ml dimethylformamidu se aktivuje při laboratorní teplotě působením 221 mg (0,5 mmol) BOP. Po 15 minutách se přidá 86 mg (0,4 mmol) hydrochloridu methyl-3-amino-3-fenyl-l-propanoátu (neutralizovaného přebytkem (0,15 ml, 0,8 mmol) Hunigovy báze) v 1 ml dimethylformamidu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Po zředění ethylacetátem (10 ml) se směs promyje 60% nasyc. roztokem bikarbonátu (2 x 10 ml), 5% roztokem kyseliny citrónové (2 x 5 ml) a solankou (10 ml) a vysuší se nad síranem sodným. Odpařením rozpouštědla se získá 143 mg (0,4 mmol, 100 %) derivátu 1043-1 jako bílé pěny. ΧΗ NMR spektrum (CDC13): δ 7,6 (IH), 7,2 (5H), 5,4
- 5,3 (2H), 3,55 (3H), 2,85 - 2,70 (2H), 1,55 (2H), 1,40 (9H), 0,9 (2H).
B. Malé množství sloučeniny 1043-1 se hydrolyzuje, jak je popsáno v příkladu IB a produkt se přečistí HPLC. Získají se cca 3 mg produktu BIO-1043, m/z 349 (podle HPLC čistota 100 %), ve formě bílé pevné látky, která byla použita v biologických testech. 1H NMR spektrum (DMSO-d6): δ 8,55
- 8,05 (bm, 2H), 7,5 - 7,15 (m, 5H), 5,40 (bm, 2H), 3,0
- 2,65 (m, 2H), 1,45 (s, 9H), 1,43 - 1,10 (m, 2H), 0,97 (bm, IH), 0,85 (bm, IH).
Příklad 32
Syntéza BIO-1115
A. Metodou, popsanou v postupu C, se 68 mg (0,27 mmol) hydrochloridu methyl-3-amino-3-(4-chlorfenyl)-1-propanoátu (ester M-l; jeho příprava je popsána v postupu B) převede na 94 mg (0,22 mmol, 82 %) sloučeniny 1115-1, která se získá jako bílá pěna. ^H NMR spektrum (CDC13): δ 7,35 (ÍH), 7, 25
- 7,10 (4H), 5,35 (ÍH), 4,95 (ÍH), 4,05 (ÍH), 3,60 (1, 5H),
3,55 (1,5H), 2,80 - 2,65 (2H), 1,65 (2H), 1,40 (10H), 0, 80 (6H) .
B. Metodou, popsanou v příkladu 29B, se 68 mg (0,27 mmol) sloučeniny 1115-1 převede na 67 mg (0,15 mmol, 68 %) surového produktu 1115-2, který se získá ve formě slabě žluté pevné látky. ΣΗ NMR spektrum: δ 7,50 (ÍH), 7,40 - 7,00 (9H), 6,20 (ÍH), 5,25 (ÍH), 4,45 (ÍH), 3,60 (1,5H), 3,55 (1,5H), 2,7
- 2,55 (4H), 1,65 - 1,40 (3H), 0,80 (6H).
C. Malé množství surové sloučeniny 1115-1 se hydrolyzuje, produkt se přečistí kapalinovou chromatografií a z odpovídajících čistých frakcí se získají isomery
BIO-1115A (cca 1 mg), m/z 431 (čistota 100 % dle HPLC) a BIO-1115B (cca 2 mg), m/z 431 (čistota 100 % dle HPLC) ve formě bílých pevných látek.
BIO-1115A: ^-H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz): δ 8,46 (d,
ÍH, J = 8,2 Hz), 8,27 (d, ÍH, J = 8,2 Hz), 7,46 - 7,18 (m, 9H), 5,20 (m, ÍH), 4,35 (m, ÍH), 3,60 - 3,45 (m, 2H), 2,71 (d, 2H, J = 7,3 Hz), 1,63 (m, ÍH), 1,48 (m, 2H), 0,91 (d,
3H, J = 6,4 Hz), 0,84 (d, 3H, J = 6,4 Hz).
BIO-1115B: ΤΗ NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz): δ 8,60 (d,
ÍH, J = 8 Hz), 8,26 (d, ÍH, J = 8 Hz), 7,45 - 7,15 (m, 9H), 5,18 (m, ÍH), 4,35 (m, ÍH), 3,50 (m, 2H), 2,70 (d, 2H), 1,50 (m, ÍH), 1,42 (m, 2H), 0,85 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 0,75 (d,
3H, J = 6,3 Hz).
Příklad 33
Syntéza BIO-1129
A. K roztoku 540 mg (2,0 mmol) 4-(fenylureido)fenyloctové kyseliny (připravené v příkladu 22C) v 5 ml dimethylformamidu se přidá 460 mg (2,4 mmol) EDC. Po 15 minutách stání při laboratorní teplotě se přidá 515 mg (2,0 mmol) hydrochloridu t-butylesteru fenylalaninu (neutralizovaného přebytkem (0,7 ml, 4,0 mmol) Hunigovy báze) v 3 ml dimethylformamidu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Po zředění 20 ml ethylacetátu se směs promyje 60% nasyc. roztokem bikarbonátu (2 x 10 ml), roztokem kyseliny citrónové (2 x 10 ml) a solankou (2 x 10 ml) a vysuší se nad síranem sodným. Odpařením rozpouštědla se získá 662 mg (1,4 mmol, 70 %) surového derivátu 1129-1 ve formě viskozního nažloutlého oleje. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,45 - 6,90 (16H), 6,45 (1H), 4,70 (1H), 3,4 (2H), 3,15 - 2,90 (2H), 1,35 (9H).
Β. K 662 mg (1,40 mmol) surového produktu 1129-1 se přidá 5 ml methylenchloridu a 1 ml trifluoroctové kyseliny. Reakční směs se míchá přes noc, pak se odpaří rozpouštědlo a odparek se vysuší ve vakuu. Malá část (21 mg, 0,05 mmol) se rozpustí v 1 ml dimethylformamidu, přidá se 11 mg (0,07 mmol) HOBt a 14 mg (0,06 mmol) EDC a reakční směs se míchá 15 minut při laboratorní teplotě. Pak se přidá roztok 13 mg (0,05 mmol) aminu β-3 v 0,5 ml dimethylformamidu. Směs se míchá přes noc, zředí se 20 ml ethylacetátu a promyje se nasyceným roztokem bikarbonátu (2 x 10 ml), roztokem kyseliny citrónové (10 ml) a solankou (10 ml), vysuší se nad síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 26 mg (0,04 mmol, 80 %) surového produktu 1129-2 jako nahnědlé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 8,4 (1H), 7,4 - 6,5 (19H), 5,95 (2H),
5,7 (1H), 5,25 (1H), 4,70 (1H), 3,65 - 3,50 (5H), 3,10 - 2, (4H).
C. Malý alikvot surové sloučeniny 1129-2 se hydrolyzuje postupem, popsaným v příkladu 1B a produkt se přečistí HPLC.
Získá se: BIO-1129A (cca 1,5 mg), m/z 609 (80 : 20 ds), čistota dle HPLC 100 %, a BIO-1129B (cca 2 mg), m/z 609 (9 : 91 ds), čistota dle HPLC 100 %. Oba produkty jsou bílé pevné látky.
BIO 1129A, 1H NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz): S 8,18 (s,
1H), 8,14 (S, 1H), 8,50 (bd, 1H), 8,23 (bd, 1H), 7,50 (d,
2H, J = 8,1 Hz), 7,40 - 7,10 (m, 9H), 7,08 - 6,72 (m, 6H), 6,04 (s, 2H), 5,15 (m, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,38 (m, 2H), 3,05
- 2,70 (m, 2H), 2,62 (s, 2H).
Příklad 34
Syntéza BIO-1131
A. Metodou, popsanou v příkladu 1A, se kondenzuje fenylureidofenyloctová kyselina (připravená v příkladu 22C) s hydrochloridem methylesteru isoleucinu (362 mg, 2,0 mmol) (po předchozím smíšení s triethylaminem) za vzniku surového produktu 1131-1 (344 mg, 1,0 mmol, 51 %) ve formě čirého viskozního oleje. 1H NMR spektrum (CDClg): S 7,7 (1H), 7,35
- 6,95 (10H), 6,60 (1H), 4,55 (1H), 3,65 (3H), 3,45 (2H),
1,90 (1H), 1,45 - 1,20 (3H), 0,85 (5H).
Β. K roztoku 344 mg (0,95 mmol) surové sloučeniny 1131-1 v 5 ml methanolu se přidají 2 ml 2 N LiOH. Směs se míchá přes noc, methanol se odpaří, přidá se 5 ml vody a pH směsi se nastaví na hodnotu 1-2. Vodná vrstva se extrahuje ethylacetátem (5 x 20 ml), organický extrakt se vysuší nad síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 365 mg (0,95 mmol, 100 %) produktu 1131-2 ve formě nahnědlé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13): S 8,70 (2H), 8,30 (1H), 7,60
- 7,20 (8H), 7,00 (1H), 4,25 (1H), 3,55 (2H), 1,90 (1H),
1,55 (1H), 1,30 (2H), 0,85 (5H).
C. Ze 27 mg (0,07 mmol) sloučeniny 1131-2 a 11 mg (0,07 mmol) aminu β-3 se podle předpisu v příkladu 1A připraví 34 mg (89 %) surového produktu 1131-3, který se získá jako nahnědlá pevná látka. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 8,03 (2H), 7,45
- 6,65 (16H), 5,45 (1H), 4,45 - 4,30 (1H), 3,55 (2H), 3,2
- 2,90 (2H), 2,00 - 0,70 (9H).
D. Malý alikvot surové sloučeniny 1131-3 se hydrolyzuje postupem, popsaným v příkladu 1B a produkt se přečistí HPLC. Získá se sloučenina BIO-1131A (cca 2 mg), m/z 531 (100 : 0 ds), čistota dle HPLC 100 %, a BIO-1131B (cca 3 mg), m/z 531 (0 : 100 ds), čistota dle HPLC 100 %. Oba produkty jsou bílé pevné látky.
BIO 1131A, 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz): δ 8,69 (s,
1H) , 8,63 (s, 1H), 8,50 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,50 (d, 2H,
J = 7.8 Hz), 7 ,44 - 7,22 (m , 8H), 7, 19 (d, 2H, J = 8,4 t Hz),
7,00 (m, 1H), 5,27 (m, 1H), 4, 36 (m , 1H), 3,52 (m, 2H),
3,00 (bm, 2H), 2,71 (d, 2H, J = 7, 3 Hz), 1,70 (bm, 1H),
1,44 - 1,26 (m ι, 1H) , 1,22 - 1,00 (m, 3H), 0,95 - 0,78 (m,
5H) .
BIO 1131B, 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz): δ 8,73 (s,
1H) , 8,68 (S, 1H), 8,60 (d, 1H, J = 8 Hz), 8,15 (d, 1H, J =
Hz), 7,50 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 8,4 Hz),
7, 37 - 7,23 (m, 5H), 7,20 (d, 2H, J = 8,4 Hz), 7,00 (m,
1H), 5, 35 (m, 1H), 4,23 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,05 (bm, 2H), 2,71 (m, 2H), 1,72 (bm, 1H), 1,20 (m, 3H), 0,72 - 0,60 (m, 5H).
Příklad 35
Syntéza BIO-1136
A. Podle metody, popsané v příkladu ÍA, se provede reakce 25 mg (0,08 mmol) komerčního N-BOC-S-benzylcysteinu se 17 mg (0,09 mmol) methyl-3-amino-3-fenyl-l-propanoátu. Získá se 42 mg (0,08 mmol, 100 %) surového chráněného aminu 1136-1.
NMR spektrum (CDC13): δ 7,35 (10H), 5,40 - 5,20 (2H), 4,20 (1H), 3,65 (1,5H), 3,55 (1,5H), 3,54 (1,5H), 3,25 - 2,65 (6H), 1,45 - 1,30 (9H).
B. Chráněný amin 1136-1 se převede na trifluoroacetát 1136-2 metodou, popsanou v postupu D.
C. Metoda, popsaná v příkladu 22D, se provede s 42 mg (0,08 mmol) volného aminu 1136-2 (po předchozím uvolnění působením triethylaminu). Získá se tak surový produkt 1136-3, který se bez čistění použije v následujícím hydrolytickém kroku.
D. Malý alikvot surové sloučeniny 1136-3 se hydrolyzuje metodou, popsanou v příkladu 1B, a produkt se přečistí HPLC. Získá se cca 4 mg BIO-1136, m/z 611 (podle HPLC čistota 100 %) ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz): δ 9,05 (bm, 2H), 8,90 (br, 1H), 8,37 (br, 1H), 7,50 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,45 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,4 - 7,2 (m,
9H), 7,00 (m, 1H), 5,25 (br, 1H), 4,65 (br, 1H), 3,5 - 3,2 (m, 4H), 2,70 (bm, 2H).
Příklad 36
Syntéza BIO-1176
A. K roztoku 500 mg (1,55 mmol) komerčního a-benzylesteru N-BOC-asparagové kyseliny v 5 ml dimethylformamidu se přidá 283 mg (2,10 mmol) HOBt a pak 343 mg (1,80 mmol) EDC. Směs se míchá při laboratorní teplotě 15 minut a pak se přidá 500 mg (1,54 mmol) thiomorfolinu, následovaného 0,7 ml (92 mmol) Hunigovy base. Reakční směs se míchá při laboratorní teplotě přes noc a zředí se 25 ml ethylacetátu. Organický extrakt se promyje 5 ml 60% nasyc. bikarbonátu, 5 ml 5% kyseliny citrónové a 5 ml solanky, vysuší se nad síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 421 mg (1,03 mmol, 69 %) esteru 1176-1 ve formě hustého oranžového oleje. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,13 (m, 5H), 5,69 (bd, 1H, J = 9,4 Hz), 5,03 (d, 1H, J = 12,6 Hz), 4,42 (m, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,60 - 3,40 (m, 4H), 2,96 (bm, 1H), 2,58 (bm, 1H), 2,35 (m, 4H), 1,22 (s, 9H).
B. Reakce 100 mg (0,25 mmol) esteru 1176-1, provedená podle příkladu 1B, poskytne 76 mg (0,24 mmol, 96 %) kyseliny
1176-2 ve formě čirého hustého oleje. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,39 - 7,28 (m, 5H), 7,15 - 6,70 (br, 1H), 5,70 (bs, 1H, J = 6, 3 Hz), 4,55 (br, 1H), 4,40 - 3,40 (m, 4H),
3,15 (m, 1H), 2, 80 - 2,52 (m, 5H), 1,43 (s, 9H).
C. Podle metody, popsané v příkladu IA, se nechá zreagovat mg (0,10 mmol) kyseliny 1176-2 v dimethylformamidu s HOBt, EDC a aminem β-3. Získá se 36 mg (0,07 mmol, 70 %) sloučeniny 1176-3. Produkt je hustý slabě žlutý olej. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,71 (br, 1H), 6,61 (m, 3H), 6,00 (br, 0,5H),
5.90 (S, 1H), 5,77 (br, 0,5H), 5,21 (m, 1H), 4,51 (bm, 1H),
3.90 - 3,40 (m, 4H), 3,39 (s, 3H), 3,12 - 3,00 (m, 1H), 2,85 - 2,65 (m, 3H), 2,63 - 2,45 (m, 4H), 1,43 (s, 4,5H), 1,43 (s, 4,5H).
D. Metodou, popsanou v postupu D, se z 36 mg (0,07 mmol) chráněného aminu 1176-3 připraví 51 mg (0,07 mmol, 100 %) trifluoracetátu 1176-4 ve formě nažloutlé pevné látky.
E. Metodou, popsanou v příkladu 22D, se ze 42 mg (0,08 mmol) volného aminu 1176-4 (po reakci s triethyiaminem) připraví surový produkt 1176-5, který se bez dalšího čištění použije v následujícím hydrolytickém kroku. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,95 - 6,9 (m, 13H), 6,61 (s, 3H), 5,85 (s, 2H), 5,23 (m, 1H), 4,88 (m, 1H), 3,89 - 3,60 (s, 4H), 3,55 (s, 3H), 3,43 (br, 2H), 3,11 - 2,96 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 2,46 (m, 4H).
F. Surová sloučenina 1176-5 se hydrolyzuje postupem, popsaným v příkladu 1B. Přečištění malého vzorku HPLC poskytne 4 mg BIO-1176, m/z 662 (podle HPLC čistota >99 %), ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (DMSO-dg): δ 8,69 (d, 2H, J =
9,8 Hz), 8,33 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 8,26 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,61 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,34 (m, 2H), 7,21 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,10 - 6,95 (m, 4H), 6,11 (s, 2H), 5,13 (m, 1H), 4,68 (m, 1H), 3,71 (br, 4H), 3,56 - 3,18 (m, 2H), 2,73 - 2,46 (m, 8H).
Příklad 37
Syntéza BIO-1177
A. Postup, popsaný v příkladu 36A, se provede s tím rozdílem, že se použije methylpropargylamin místo thiomorfolinu. Získá se 374 mg (0,99 mmol, 66 %) surového produktu 1177-1 ve formě bílé pěny. NMR spektrum (CDClg): δ 7,20 (5H), 5,25 (1H), 5,10 (2H), 4,45 (1H), 4,15 - 3,8 (2H), 3,15 - 2, 65 (5H),
2,2 - 2,15 (1H), 1,30 (9H).
B. Surová sloučenina 1177-1 se nechá reagovat jak je popsáno v příkladu IB. Získaná kyselina 1177-2 (76 mg, 0,26 mmol, 96 %) je čirý olej. ^H NMR spektrum (CDClg): δ 5,35 (1H), 4,55 (1H), 4,35 - 3,8 (2H), 3,30 - 2,65 (5H), 2,4 - 2, 25 (1H), 1,45 (9H).
C. 76 mg (0,26 mmol) kyseliny 1177-2 se nechá reagovat v dimethylformamidu s HOBt, EDC a aminem β-3 metodou, popsanou v příkladu 1A. Získá se 78 mg (0,15 mmol) surového produktu 1177-3 ve formě bílé pěny. ^-H NMR spektrum (CDClg):
δ 7,70 (1H), 7,35 (3H) , 6,65 (2H), 5,80 (1H), 5,30 - 5,00
(2H), 4,60 (1H), 4 ,45 - 3,80 (2H), 3,60 (3H), 3,30 - 2,70
(5H), 2,30 (1H), 1 ,45 (4,5H) , 1,40 (4,5H).
D. Podle postupu D se 78 mg (0,15 mmol) chráněného aminu
1177-3 převede na sůl s kyselinou trifluoroctovou 1177-4.
E. Metoda, popsaná v příkladu 22D, se provede s použitím volného aminu 1177-4. Získá se 52 mg (0,08 mmol, 77 %) produktu 1177-5 ve formě nahnědlé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDClg): δ 7,5 - 6,9 (14H), 6,65 (3H), 5,85 (2H), 5,25 - 5,00 (2H), 4,85 (1H), 4,25 - 3,70 (2H), 3,60 (3H),
3,55 (2H), 3,30 - 2,65 (5H), 2,22 (1H).
F. Malé množství sloučeniny 1177-5 se hydrolyzuje metodou, popsanou v příkladu IB. Získá se BIO-1177 (cca 2 mg) ve formě bílé pevné látky, m/z 628 (podle HPLC čistota 100 %). NMR spektrum (DMSO-d6): δ 8,64 (bd, 2H), 8,27 (bm, 2H), 7,55
- 7,13 (m, 7H), 7,11 - 6,75 (m, 3H), 6,15 (s, 2H), 5,12 (bm, 1H), 4,65 (bm, 1H), 4,25 (bm, 2H), 3,25 (m, 2H), 3,05 (br, 2H), 2,88 (bm, 1H), 2,62 (m, 2H).
Příklad 38
Syntéza BIO-1214
A. 1,60 g (4,9 mmol) α-benzylesteru N-BOC-asparagové kyseliny se nechá zreagovat podle procedury popsané v příkladu 36A, s tím rozdílem, že se použije dimethylamin místo thiomorfolinu. Získá se ester 1214-1 (1,43 g, 4,1 mmol, 83 %) jako hustý bezbarvý olej. NMR spektrum (CDCl-j): S 7,3 2 (m, 5H), 5, 85 (br, 1H), 5,15 (m, 2H), 4,55 (br, 1H), 3,12 (m, 1H), 2,94 (s, 3H), 2,88 (s, 3H), 2,73 (m, 1H), 1,40 (s, 9H) .
B. Ester 1214-1 (124 mg, 0,33 mmol) se rozpustí v 2 ml ethylacetátu a přidá se cca 50 mg 10% Pd/C. Směs se hydrogenuje 2 hodiny při tlaku 40 psi. Reakční směs se zfiltruje přes CelitR. Odpaření rozpouštědla poskytne 95 mg (0,33 mmol, 100 %) kyseliny 1214-2 ve formě bezbarvého oleje. 1H NMR spektrum (CDClg): δ 5,81 (bm, 1H), 4,48 (bs, 1H),
3,15 (m, 1H), 3, 00 (s, 3H), 2,93 (s, 3H), 2,59 (m, 1H),
1,39 (s, 9H).
C. Reakce 28 mg (0,10 mmol) kyseliny 1214-2 a 17 mg (0,80 mmol) aminu β-3 se provede podle metody, popsané v příkladu IA. Získá se 55 mg (0,10 mmol, 100 %) chráněného aminu 1214-3 ve formě bílé pěny. NMR spektrum (CDC13): δ 7,77 (bd, 1H), 6,71 (m, 3H), 6,11 (bd, 1H), 5,91 (s, 2H), 5,25 (m, 1H), 4,51 (br, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,12 (m, 1H), 2,94 (s,
3H), 2,90 (s, 3H), 2,88 - 2,68 (m, 2H), 2,48 (m, 1H), 1,43 (S, 9H).
D. 55 mg (0,10 mmol) chráněného aminu 1214-3 se převede na trifluoracetátovou sůl 1214-4 metodou, popsanou v postupu D.
E. Metodou, popsanou v příkladu 22D, se volný amin 1214-4
- 97 převede na produkt 1214-5 (31 mg, 0,05 mmol, 50 %). Produkt je nahnědlá pevná látka. ^-H NMR spektrum (CDCl3): δ 7,45 - 6,90 (m, 13H), 6,61 (m, 3H), 5,85 (s, 2H), 5,24 (m, ÍH), 4,82 (m, ÍH), 3,55 (s, 3H), 3,47 (m, 2H), 3,08 - 2,94 (m,
ÍH), 2,92 (s, 3H), 2,84 (s, 3H), 2,77 - 2,50 (m, 2H), 2,45 (m, ÍH).
F. Malé množství sloučeniny 1214-5 se hydrolyzuje jak je popsáno v příkladu 1B. Získá se BIO-1214 (cca 2 mg) jako bílá pevná látka, m/z 604 (dle HPLC čistota 100 %).
Příklad 39
Syntéza BIO-1215
A. K roztoku 671 mg (1,9 mmol) amidu 1214-1 (připraveného v příkladu 38A) v 5 ml suchého tetrahydrofuranu, ochlazeného na 0 °C, se přikape 4,1 ml (3,8 mmol) 1 N roztoku BHg/THF. Reakční směs se míchá 2 hodiny při laboratorní teplotě, pak se rozloží 2 ml methanolu a odpaří se k suchu. Přidá se 5 ml methanolu a třikrát se odpaří, aby se odstranil všechen vzniklý (MeO)3B. Sušení ve vysokém vakuu poskytne 623 mg (1,7 mmol, 90 %) aminu 1215-1 ve formě hustého bezbarvého oleje. 1H NMR spektrum (CDCl-j): δ 7,38 (m, 5H) , 5,48 (bm,
ÍH), 2,65 - 2,35 (m, 8H), 1,95 (m, 2H), 1,42 (s, 9H).
B. 124 mg (0,34 mmol) aminu 1215-1 se katalyticky hydrogenuje ve směsi methanolu, ethylacetátu a kyseliny octové na cca 50 mg 10% Pd/C. Po dvou hodinách se reakční směs zfiltruje a rozpouštědla se odpaří. Získá se 90 mg (0,33 mmol, 97 %) kyseliny 1215-2 ve formě hustého bezbarvého oleje. ^H NMR spektrum (CDC13): δ 5,91 (br, ÍH), 3,95 (br, ÍH), 3,54 (bm, ÍH), 2,71 - 2,42 (m, 8H), 2,15 (br, 2H), 1,33 (s, 9H).
C. Reakce 55 mg (0,12 mmol) kyseliny 1215-2 s 22 mg (0,10 mmol) aminu β-3 se provede podle metody popsané v příkladu 1A. Získá se 44 mg (0,09 mmol, 90 %) chráněného aminu 1215-3 ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 6,75 (m, 3H),
6,51 (bd, 1H), 5,91 (s, 2H), 5,30 (m, 1H), 4,37 - 4,12 (m,
2H), 3,61 (s, 3H), 2,90 - 2,65 (m, 2H), 2,55 - 2,00 (m,
10H), 1,42 (s, 9H).
D. Chráněný amin 1215-3 (44 mg, 0,09 mmol) se nechá reagovat jak je popsáno v postupu D, čímž se získá sůl aminu 1215-4 s kyselinou trifluoroctovou.
E. Volný amin 1215-4 se nechá reagovat podle metody, popsané v příkladu 22D, čímž se získá 38 mg (0,06 mmol, 70 %) produktu 1215-5 ve formě bílé pevné látky. ‘^H NMR spektrum (CDC13): δ 7,41 - 6,90 (m, 13H), 6,71 (m, 3H), 5,91 (s, 2H), 5,29 (m, 1H), 4,21 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,45 (m, 2H), 2,90 - 2,70 (m, 2H), 2,40 - 1,95 (m, 10H).
F. Malá část sloučeniny 1214-5 se hydrolyzuje metodou, popsanou v příkladu IB, čímž se získá produkt BIO-1215 (cca 3 mg) ve formě bílé pevné látky, m/z 590 (podle HPLC čistota 100 %).
Příklad 40
Syntéza BIO-1227
A. Podle metody, popsané v příkladu IB, se 28 mg (0,12 mmol) komerčního BOC-S-methylcysteinu nechá reagovat s 21 mg (0,10 mmol) aminu β-3, čímž se získá 32 mg (0,07 mmol, 70 %) chráněného aminu 12 27-1 ve formě bílé pěny. -’-Η NMR spektrum (CDC13): δ 7,38 (bd, 1H), 6,81 - 6,67 (m, 3H), 5,90 (s, 2H), 5,40 (bd, 1H), 5,37 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,59 (s, 3H),
2,95 - 2,68 (m, 4H), 2,10 (s, 3H), 1,43 (s, 9H).
B. Podle metody, popsané v postupu D, se 32 mg (0,07 mmol) chráněného aminu 1227-1 převede na sůl aminu 1227-2 s kyselinou trifluoroctovou.
C. Volný amin 1227-2 se nechá reagovat s 28 mg (0,10 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny metodou, popsanou v příkladu 22D. Získá se 29 mg (0,047 mmol, 67 %) surového esteru 1227-3 ve formě světle hnědé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,62 (bd, IH), 7,4 - 6,9 (m, 12H), 6,80 (m, 3H), 5,90 (s, 2H), 5,15 (m, IH), 4,45 (m, IH), 3,63 - 3,45 (m, 5H), 3,15 - 2,61 (m, 4H), 2,21 (s, 3H), 2,10 (s, 3H) .
D. Malý alikvot surového esteru 1227-3 se hydrolyzuje jak je popsáno v příkladu 1B. Získá se cca 4 mg produktu BIO-1227 ve formě bílé pevné látky, m/z 593 (podle HPLC čistota >99 %).
1H NMR spektrum (DMSO-dg): δ 9,01 (s, IH), 8,67 (d, IH, J = 7,9 Hz), 8,31 (d, IH, J = 8,3 Hz), 7,97 (s, IH), 7,90 (d,
IH, J = 8 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 7,23 (m, 4H), 6,99 (m, 2H), 6,85 (m, 2H), 6,03 (s, 2H), 5,16 (m, IH), 4,54 (m, IH), 3,39 (m, 2H), 2,81 - 2,58 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 2,05 (S, 3H).
Příklad 41
Syntéza BIO-1149
A. K roztoku 272 mg (0,67 mmol) produktu, připraveného postupem C, v 2,5 ml diehlormethanu se pomalu přidá 2,5 ml trifluoroctové kyseliny a směs se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě. Po odpaření rozpouštědla se olejovitý odparek rozpustí v 2,5 ml diehlormethanu. K tomuto roztoku se přidá triethylamin do pH 9 a pak 170 mg (0,63 mmol) sukcinimidyl- -2-chinolinkarboxylové kyseliny. Směs se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě a pak se obvyklým způsobem zpracuje (5% citrónová kyselina, 5% NaHCO3 a nasyc. NaCl). Získá se 200 mg (76 %) esteru 1149-1 ve formě bílé pevné látky.
B. 200 mg (0,43 mmol) kyseliny 1149-1 se rozpustí v 1,5 ml methanolu a k roztoku se přidá 0,5 ml 1 M vodného LiOH. Směs se míchá 3 hodiny při laboratorní teplotě, neutralizuje se 5% kyselinou citrónovou na pH 3 a extrahuje se ethylacetátem (3 x 5 ml). Spojené extrakty se suší nad Na2SO4 a odpařením rozpouštědla se získá 155 mg (82,5 %) surové sloučeniny 1149. Malé množství surového produktu (30 mg) se přečistí
100
HPLC, čímž se též oddělí diastereomery sloučeniny BIO-1149. HPLC (při laboratorní teplotě), isomer A: 36 min, isomer B:
min. Hmotové spektrum (FAB): 434. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,72 (m, 1H), 8,30 - 7,98 (m, 3H), 7,82 - 7,64 (m, 2H), 7,60 - 7,51 (m, 1H), 7,30 - 7,09 (m, 5H),
5,46 - 5,38 (m, 1H), 4,86 - 4,72 (m, 1H), 2,92 - 2,74 (m,
2H), 1,88 - 1,61 (m, 3H), 0,96 - 0,83 (m, 6H).
Příklad 42
Syntéza BIO-1152
A. K roztoku 33 mg (0,1 mmol) produktu, připraveného podle postupu D2, v 0,5 ml dichlormethanu se přidá 14 mg (0,1 mmol) chloridu kyseliny 2,2-dimethylmáselné a 50 μΐ triethylaminu. Reakční směs se míchá 16 hodin při laboratorní teplotě a pak se zpracuje obvyklým způsobem (5% NaHCOg, 5% kyselina citrónová a nasyc. roztok NaCl). Získá se 37 mg (76 %) produktu 1152-2 ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,32 - 7,19 (m, 5H), 6,08 (s, 1H),
5,36 - 5,27 (m, 1H), 4,53 - 4,44 (m, 1H), 2,86 - 2,61 (m,
2H), 2,05 (S, 2H), 1,26 (s, 9H), 1,01 (s, 9H), 0,99 - 0,84 (s, 9H).
B. Ester 1152-2 se rozpustí v 2,5 ml dichlormethanu a 2,5 ml trifluoroctové kyseliny a směs se míchá 3 hodiny při laboratorní teplotě. Získaný olej se přečistí HPLC a obdrží se tak čistý produkt BIO-1152. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,29 (d, 1H), 7,44 (d, 1H), 7,34 - 7,18 (m, 5H), 5,44 - 5,32 (m, 1H), 4,78 - 4,69 (m, 1H), 3,21 - 3,14 (m,
2H), 2,98 - 2,77 (dd, 2H), 1,59 - 1,38 (m, 3H), 0,96 (s,
9H), 0,84 (d, 3H), 0,73 (d, 3H).
Příklad 43
Syntéza BIO-1089
A. K roztoku 2,2 g (8,76 mmol) aminu -6 ve 25 ml dichlormethanu se přidá 2,77 g (8,0 mmol) sukcinimidylesteru
101
N-BOC-methioninu a 5 kapek triethylaminu a směs se míchá 1,5 hodiny při laboratorní teplotě. Pak se směs promyje 5% kyselinou citrónovou (2 x 10 ml), 5% NaHCO^ (2 x 10 ml) a nasyc. NaCl (15 ml), vysuší se nad Na2SO4 a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 3,2 g (83 %) produktu 1089-1 ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,27 (d, 2H), 6,81 (d, 2H), 5,31 - 5,20 (m, 2H), 4,38 - 4,28 (m, IH), 3,72 (s, 3H), 2,82 - 2,64 (m, 2H), 2,12 (s, 3H), 1,44 (s,
9H), 1,30 (s, 9H).
Β. K roztoku 3,2 g (6,64 mmol) sloučeniny 1089-1 v 15 ml ethylacetátu se přidá 40 ml 1 M HCl v ethylacetátu a směs se míchá 4,5 hodiny při laboratorní teplotě. Reakční směs se rozloží 60 ml vody a dále se zpracovává vodná vrstva. Neutralizuje se pevným NaHC03 na pH 8 a produkt se extrahuje do ethylacetátu (2 x 45 ml). Spojené ethylacetátové extrakty se promyjí 20 ml nasyc. roztoku NaCl, vysuší se nad Na2SO4 a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 1,7 g (67 %) produktu 1089-2 ve formě oleje. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm):
7,98 (d, IH), 7,19 (d, 2H, J = 8,3 Hz) , 6,81 (d, 2H, J = 8,3
HZ) , 5,32 - 5,18 (m , IH), 3,74 (s, 3H) , 3,48 - 3,44 (m, IH),
2,82 - 2,62 (m, 2H) , 2,53 (t, 2H) , 2,18 - 2,06 (m, IH), 2,04
(s, 3H), 1,8 - 1,66 (IH) , 1,31 (s, 9H) .
C. Podle metody, popsané v příkladu 22D, se 1,7 g (4,45 mmol) sloučeniny 1089-2 převede na 2,3 g (81,6 %) sloučeniny 1089-3, získané jako pevná látka. Tento materiál se použije bez dalšího čištění v následujícím reakčním kroku. NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz, ppm): 8,60 (d, 2H), 8,41 (d,
IH), 8,24 (d, IH), 7,44 (d, 2H), 7,31 (d, 2H), 7,26 (t, 2H), 7,13 (t, 2H), 6,91 (t, IH), 6,79 (d, 2H), 5,10 - 5,01 (m,
IH), 4,36 - 4,33 (m, IH), 3,68 (s, 3H), 3,29 (s, 2H), 2,61
- 2,58 (m, 2H), 1,89 (s, 3H), 1,26 (s, 9H).
D. 2,3 g (3,63 mmol) sloučeniny 1089-3 se rozpustí v 8 ml 4 N HCl/dioxan a roztok se míchá 16 hodin při laboratorní
102 teplotě. Dioxan se odpaří, přidá se 15 ml etheru a směs se míchá 10 minut. Vyloučená sraženina se odsaje a překrystaluje z methanolu. Získá se čistý produkt BIO-1089 jako světle hnědá pevná látka. Hmotové spektrum (FAB): 579. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,76 (d, 2H), 8,52 (d,
1H), 7,54 (d, 2H), 7,46 (d, 2H), 7,36 (t, 1H), 7,34 - 7,26 (m, 4H), 7,04 (t, 1H), 6,95 (d, 2H), 5,22 - 5,20 (m, 1H),
4,46 - 4,35 (m, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,50 (s, 2H), 3,20 (m,
2H), 2,79 - 2,73 (m, 2H), 2,35 (t, 2H), 2,03 (s, 3H), 1,87 -1,80 (m, 2H).
Příklad 44
Syntéza BIO-1090
A. Metoda, popsaná v postupu C, se provede s 28 mg (1,0 mmol) aminu β-10, čímž se získá 38 mg (84 %) produktu 1090-1 ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,08 (m, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,74 - 6,70 (m, 2H), 5,24
- 5,15 (m, 1H), 4,98 - 4,93 (m, 1H), 4,16 - 4,13 (m, 4H),
2,74 - 2,53 (m, 2H), 1,62 - 1,42 (m, 3H), 1,44 (s, 9H), 1,40 (s, 9H), 0,89 (m, 6H).
B. 38 mg (0,77 mmol) bílé pevné látky 1090-1 se nechá reagovat podle metody,popsané v postupu Dl. Získá se olejovitý produkt 1090-2, který se bez dalšího čištění použije v následujícím kroku. 1H NMR spektrum (CDCl^, 300
MHz, ppm): 7,24 - 7,15 (m, 2H), 6,84 - 6,61 (m, 3H), 5,81
- 5,78 (m, 1H), 4,23 (s, 4H), 4,19 - 4,08 (m, 1H), 2,88
- 2,62 (m, 2H), 1,70 - 1,46 (m, 3H), 0,90 - 0,81 (m, 6H).
C. Amin 1090-2 se převede na 27 mg (59 %) surového produktu 1090 metodou, popsanou v příkladu 22D. Přečištění HPLC poskytne čistý produkt BIO-1090 ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum (FAB): 603.
103
Příklad 45
Syntéza BIO-1194
A. K dobře míchanému studenému roztoku 9,8 g ( 59,4 mmol) methyl-p-aminofenylacetátu ve 200 ml dichlormethanu a 25 ml (18 g, 178,2 mmol) triethylaminu se přidá kapací nálevkou během 1 hodiny 96 ml 1,9 M roztoku COC12 v toluenu. Reakční směs se míchá při 0 °C další 1 hodinu. Pak se směs zahustí a přidá se 125 ml směsi ether-petrolether (3:1). Vyloučená pevná látka se odfiltruje a filtrát odpařením poskytne surový produkt 1194-1 jako hnědou kapalinu. Přečištění destilací při 118 - 120 °C/10 mm poskytne 8,5 g (75 %) čisté sloučeniny 1194-1 ve formě bezbarvého oleje. 1H NMR spektrum (CDClg,
300 MHz, ppm): 7,20 (d, J = 8,4 Hz), 7,02 (d, J = 8,4 Hz), 3,69 (s, 3H), 3,48 (s, 2H).
Β. K roztoku 5,73 g (30,0 mmol) sloučeniny 1194-1 v 60 ml dichlormethanu se po částech přidá 2,82 g (30 mmol) 2-aminopyridinu. Reakční směs se míchá 0,5 hodiny při laboratorní teplotě a pak 0,5 hodiny při 35 °C. Vzniklá směs se zředí 60 ml petroletheru a vypadlá bílá pevná látka se odsaje. Získá se tak 8,35 g (98 %) čistého produktu 1194-2 ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz, ppm): 8,20 (s, 2H), 7,62 - 7,51 (m, 3H), 7,33 (d, 2H), 7,01 (d, 2H), 6,89 - 6,85 (m, 1H), 3,70 (s, 3H), 3,59 (s, 2H).
C. 5,7 g (20,0 mmol) sloučeniny 1194-2 se rozpustí ve 20 ml methanolu a k tomuto roztoku se přidá 40 ml 1 N NaOH. Směs se zahřívá tak dlouho, až se utvoří čirý roztok a pak se míchá při laboratorní teplotě 16 hodin. Po této době se pečlivě zneutralizuje 1 N HC1 na pH 7 a pak kyselinou octovou na pH 3. Vyloučená bílá pevná látka se odfiltruje a promyje methanolem (15 ml) a etherem (2 x 30 ml). Získá se 4,7 g (87 %) produktu 1194-3 ve formě bílého prášku. -^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 10,62 (br s, 1H), 9,53 (br s, 1H), 8,39 (d, 1H), 7,82 (t, 1H), 7,63 - 7,55 (m, 1H), 7,33 - 7,27 (d, 2H), 7,14 - 7,08 (m, 1H), 3,62 (s, 3H).
104
D. Podle metody, popsané v postupu C, se připraví sloučenina 1194-4 standardní kondenzací 2,65 g ( 10,56 mmol) aminu β-6 s 3,28 g (10 mmol) BocLeuOSu ve 25 ml dichlormethanu s přidáním 5 kapek triethylaminu a následnou deprotekcí trifluoroctovou kyselinou v dichlormethanu. Ve dvou krocích se tak získá 4,5 g (83,6 %) sloučeniny 1194-4.
1194-4-Boc: 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,18 (d,
2H), 6,36 (d, 2H), 5,13 - 5,10 (m, 1H) , 4,12 - 4,01 (m, 1H) ,
3,72 (S, 3H), 2,79 - 2,60 (m, 2H), 1,62 - 1,40 (3H), 1, 38 (s,
9H), 1,26 (s, 9H), 0,85 - 0,80 (m, 6H) .
1194-4: 1H NMR . spektrum (CDC13, 300 MHZ , ppm): 7,10 (d, 2H) ,
6,78 (d, 2H), 5,43 - 5,27 (m, 1H), 4,21 - 4,06 (m, 1H), 3,71
(s, 3H), 2,95 - 2,76 (m, 1H), 2,75 “ 2, 56 (m, 1H), 1,62
- 1,32 (m, 6H).
E. Podle metody, popsané v příkladu IA, se nechá zreagovat
1,36 g (5,0 mmol) kyseliny 1194-3 s aminem 1194-4, čímž se získá 2,1 g (78 %) surového produktu BIO-1194 ve formě bílé pevné látky. Čistá látka (čistota >97,5 %) se získá překrystalováním z methanolu. •’-Η NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,03 - 7,97 (m, 2H), 7,59 (m, 1H), 7,51 (d, 2H), 7,18 - 7,07 (m, 4H), 6,27 (d, 2H), 5,24 (m, 1H), 4,39 - 4,36 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,43 (s, 2H), 2,69 - 2,66 (m, 2H), 1,54 - 1,33 (m, 2H), 0,86 - 0,75 (m, 6H).
Příklad 46
Syntéza BIO-1180
A. Metodou, popsanou v příkladu 45A, se z t-butyl-p-aminofenylacetátu připraví sloučenina 1180-1 ve výtěžku 94 %. Hmotové spektrum (FAB): 234. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,18 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 6,98 (d, 2H, 8,2 Hz), 3,49 (S, 3H), 1,45 (s, 9H).
Β. K roztoku 233 mg (1,0 mmol) isokyanátu 1180-1 v 5 ml
105 dichlormethanu se přidá 100 mg (1,0 mmol) 2-aminothiazolu, směs se zahřívá, až se vytvoří čirý roztok a pak se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě. Odpařením rozpouštědla se získá 335 mg produktu 1180-2 ve formě hnědožluté pevné látky. Ta se rozpustí ve 2,5 ml dichlormethanu a k roztoku se přidá 2,5 ml trifluoroctové kyseliny. Směs se míchá 1,5 hodiny při laboratorní teplotě a po odpaření rozpouštědla poskytne 300 mg produktu 1180-3 ve formě žluté pevné látky. Hmotové spektrum (FAB): 278.
C. K roztoku 28 mg (0,1 mmol) sloučeniny 1180-3 v 0,25 ml dimethylformamidu se přidá 60 mg (0,31 mmol) EDC a 55 mg DMAP a směs se míchá 10 minut při laboratorní teplotě. K této směsi se přidá 23 mg (0,051 mmol) soli aminu β-3 s kyselinou trifluoroctovou. Výsledná reakční směs se míchá 16 hodin při laboratorní teplotě a pak se zpracuje obvyklým způsobem (5% kyselina citrónová, 5% NaHCO3, nasyc. NaCl, sušení nad Na2SO4, odpaření). Získá se 22 mg (72 %) surové sloučeniny 1180-4. Hmotové spektrum (FAB): 596.
D. Surová sloučenina 1180-4 se hydrolyzuje na surovou sloučeninu BIO-1180 metodou, popsanou v příkladu IB.
Přečištěním HPLC se získá čistá sloučenina BIO-1180. HPLC (laboratorní teplota): 26,3 min, čistota >99 %. Hmotové spektrum (FAB): 582. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 9,00 (br s, IH), 8,52 (d, 2H, J = 8,3 Hz), 8,24 (d, 2H, J =
8.3 Hz), 7,50 - 7,47 (m, 3H), 7,28 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 7,20 (d, IH, J = 3,5 Hz), 6,95 - 6,81 (m, 3H), 6,08 (d, IH, J =
1.4 Hz), 5,19 - 5,16 (m, IH), 4,4 - 4,2 (m, IH), 3,51 (dd,
J = 14,1 Hz a 23,8 Hz), 2,76 - 2,65 (m, 2H), 1,57 - 1,50 (m, IH), 1,50 - 1,44 (m, 2H), 0,92 (d, 2H, J = 6,3 Hz), 0,86 (d,
J = 6,3 Hz).
Příklad 47
Syntéza BIO-1199
K roztoku 15 mg sloučeniny BIO-1089 ve směsi 1,0 ml
106 dimethylsulfoxidu a 2 ml vody se přidá 20 mg Oxonu^ a reakční směs se míchá při laboratorní teplotě. Sledování reakce HPLC ukazuje, že výchozí sloučenina BIO-1089 (retenční čas při laboratorní teplotě 20 min) postupně mizí a objevuje se nový pík (retenční čas 16,9 min). Po šestnáctihodinovém míchání výchozí sloučenina BIO-1089 téměř úplně vymizí a produkt BIO-1199 (retenční čas 16,9 min při laboratorní teplotě) se isoluje HPLC v čistotě vyšší než 99 %. Hmotové spektrum (FAB): 595.
Příklad 48
Syntéza BIO-1207
A. Amin β-5 (220 mg, 1,053 mmol) se nechá reagovat metodou popsanou v postupu C a další reakce získaného produktu se provede jak je popsáno v postupu Dl. Výtěžek činí 383 mg sloučeniny 1207-1 (88 % pro dva stupně).
B. Podle metody, popsané v příkladu IA, se provede reakce 260 mg (0,91 mmol) p-Cbz-aminofenyloctové kyseliny s 375 mg (0,86 mmol) aminu 1207-1 (před reakcí vystavenému účinku triethylaminu). Získá se 415 mg (82 %) produktu 1207-2 ve formě světle hnědé pevné látky.
C. 390 mg (0,66 mmol) sloučeniny 1207-2 se zbaví chránících skupin jak je popsáno v postupu D2, čímž se získá 140 mg (47 %) produktu 1207-3 ve formě světle hnědé pevné látky.
D. K roztoku 135 mg (1,0 mmol) 2-isopropylanilinu ve 2 ml dichlormethanu a 0,5 ml triethylaminu se při 0 °C pomalu přidá 1,6 ml 1,9 M (3 mmol) roztoku fosgenu v toluenu.
Reakční směs se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě a pak se zředí 15 ml etheru. Vytvořená sraženina se odstraní a odpaření rozpouštědla poskytne 165 mg sloučeniny 1207-4 ve formě hnědé kapaliny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,87 - 7,64 (m, 4H), 3,83 - 3,74 (m, IH), 1,81 (d, 6H).
Ε. K roztoku 12 mg (0,074 mmol) sloučeniny 1207-4 v 0,12 ml
107 dimethylformamidu se přidá 1 kapka triethyiaminu a 28 mg (0,062 mmol) sloučeniny 1207-3. Reakční směs se míchá 1 hodinu (hmotové spektrum (FAB) vykazuje ion 617) a pak se přidá ke směsi 2 ml methanolu a 0,25 ml 2 M LiOH. Směs se míchá 16 hodin při laboratorní teplotě a pak se čistí HPLC. Frakce, obsahující čistý produkt, se spojí a rozpouštědlo se odpaří. Získá se BIO-1207 ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum (FAB): 603. HPLC (laboratorní teplota): retenční čas 31,2 min, čistota >98,5 %.
Příklad 49
Syntéza BIO-1210
Podle metody, popsané v příkladu 22D, se nechá reagovat 2-methylfenylureidofenyloctová kyselina s volným aminem, uvolněným z trifluoracetátové soli, připravené v příkladu 44B (65 mg), a produkt se vyčistí HPLC. Frakce čistého produktu se spojí a po odpaření rozpouštědla poskytnou produkt BIO-1210 ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum (FAB): 603. HPLC (laboratorní teplota): retenční čas 28,6 min, čistota >99 %.
Příklad 50
Syntéza BIO-1224
A. Ze 48 mg (0,2 mmol) aminu β-4 se metodou, popsanou v postupu C, připraví 82 mg (91 %) sloučeniny 1224-1 ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm):
7,49 - 7,39 (1H), 6,73 - 6,62 (m, 3H), 5,35 - 5,28 (m, 1H), 5,19 - 5,06 (m, 1H), 4,16 - 4,08 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 2,72 - 2,51 (m, 2H), 2,40 - 2,36 (m, 2H), 1,98
- 1,75 (m, 2H), 1,90 (s, 3H), 1,28 (s, 9H), 1,19 (s, 9H).
B. 60 mg (0,13 mmol) sloučeniny 1224-1 se rozpustí v 1,5 ml dichlormethanu a přidá se 1,5 ml kyseliny trifluoroctové.
Směs se míchá 5 hodin při laboratorní teplotě a rozpouštědlo se odpaří. Získá se sloučenina 1224-2 ve formě soli
108 s trifluoroctovou kyselinou, která se bez dalšího čištění použije v následujícím stupni. NMR spektrum (CDC13, 300
MHz, ppm): 7,92 (br, IH), 6,82 - 6,78 (m, 3H), 5,44 - 5,26 (m, IH), 4,40 - 4,28 (m, IH), 3,84 - 3,72 (m, 6H), 2,92
- 2,70 (m, 4H), 2,60 - 2,25 (m, 2H), 1,92 (s, 3H).
C. Metodou, popsanou v příkladu 22D, se provede reakce 37 mg (0,13 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny a 60 mg (0,13 mmol) aminu 1224-2. Výsledný produkt se podrobí HPLC. Frakce s čistým produktem se spojí a odpaří a získá se tak 22 mg (22 %) produktu BIO-1224 ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum (FAB): 623. HPLC (laboratorní teplota): retenční čas 23,8 min, čistota >99 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,38 (d, IH), 6,98 (d, 2H), 6,74 (d, 2H), 6,72 (m, 2H), 6,51 (t, IH), 6,43 - 6,40 (m, IH), 6,35
- 6,31 (m, IH), 4,84 - 4,76 (m, IH), 4,04 - 3,97 (m, IH),
3,39 (s, 6H), 3,33 (s, 2H), 2,36 - 2,18 (m, 2H), 1,91 - 1,75 (m, 2H), 1,72 (s, 3H), 1,19 - 0,99 (m, 2H), 0,46 - 0,37 (m,
6H) .
Příklad 51
Syntéza sloučeniny BIO-1056
A. Směs 2,01 g (10,2 mmol) 3-methoxy-4-nitrobenzoové kyseliny a 2,3 ml (31,5 mmol) thionylchloridu se míchá 1,5 hodiny při 80 - 90 °C. Po odpaření se odparek zředí etherem a organický roztok se promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO3 (2 χ), vodou, nasyceným vodným roztokem NaCl a vysuší se nad MgSO4. Po odpaření se získá 1,92 g (87 %) 3-methoxy-4-nitrobenzoylchloridu ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,95 - 7,70 (m, 3H), 4,06 (s, 3H).
B. Ke studenému (0 °C) 2 M roztoku TMSCHN2 (1,5 ml, 3,0 mmol) v hexanu se přidá 420 μΐ (3,0 mmol) triethylaminu a pak roztok 0,52 g (2,4 mmol) 3-methoxy-4-nitrobenzoylchloridu v 8,5 ml acetonitrilu. Reakční směs se míchá 24 hodin při 0 “C a potom se oddestiluje rozpouštědlo. Odparek se suspenduje
109 v nasyceném vodném roztoku NaHCO3 a směs se třikrát extrahuj etherem. Spojené etherické extrakty se promyji vodou, nasyceným vodným roztokem NaCl, vysuší se nad MgSO4 a odpaří se rozpouštědlo. Získá se 0,53 g (100 %) omega-diazo-3-methoxy-4-nitroacetofenonu ve formě žluté pěny ^H NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz, ppm): 7,88 (d, 1H, J = 10 Hz), 7,61 (s, 1H), 7,27 (d, 1H, J = 10 Hz), 5,97 (s, 1H), 4,02 (s, 3H).
C. K refluxujícímu roztoku 7,95 g (35,9 mmol) omega-diazo-3-methoxy-4-nitroacetofenonu ve 100 ml t-butylalkoholu se během 1 hodiny přikape zfiltrovaný roztok 2,50 g (10,9 mmol) benzoátu stříbrného v 15 ml triethylaminu Směs se refluxuje 45 minut, odbarví se přídavkem aktivního uhlí a zahorka se zfiltruje přes Celit. Filtrát se zahustí a zbytek se zředí ethylacetátem. Organický roztok se promyje 5% vodným roztokem NaHCO3 (2 x), vodou, 5% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným roztokem NaCl. Po vysušení nad MgSO4 a odpaření rozpouštědla se získá 8,92 g (93 %) t-butyl-3-methoxy-4-nitrofenylacetátu ve formě hnědého oleje. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,83 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,03 (s, 1H), 6,93 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 3,97 (s, 3H), 3,58 (s, 2H), 1,45 (s, 9H).
D. Směs 0,144 g, (0,539 mmol) t-butyl-3-methoxy-4-nitrofenylacetátu a 0,155 g 10% Pd na uhlí v 8 ml ethylacetátu a 2 ml methanolu se hydrogenuje 2 hodiny při tlaku 40 - 60 psi. Reakční směs se zfiltruje přes Celit a filtrát se odpaří. Získá se 0,123 g (96 %) t-butyl-4-amino- -3-methoxyfenylacetátu ve formě světležlutého oleje. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 6,70 (m, 3H), 4,04 (bs, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,42 (s, 2H),
1,43 (s, 9H).
Ε. K roztoku 0,123 g (0,52 mmol) t-butyl-4-amino-3-methoxyfenylacetátu ve 2,0 ml methylenchloridu se přidá 60 μ.1 (0,55 mmol) fenylisokyanátu. Reakční směs se míchá 45
110 minut a pak se odpaří rozpouštědlo. Získá se tak 0,190 g (100 %) t-butyl-3-methoxy-4-fenylureidofenylacetátu ve formě světležluté pěny. 1H NMR spektrum (CDCl-j, 300 MHz, ppm): 8,00 (d, 1H, J = 11 Hz), 7,65 - 6,94 (m, 7H), 6,80 (d, 1H, J = 9 Hz), 6,74 (s, 1H), 3,68 (s, 3H), 3,45 (ε, 2H),
1,44 (s, 9H).
F. Roztok 0,108 g (0,303 mmol) t-butyl-3-methoxy-4-fenylureidofenylacetátu v 5,0 ml trifluoroctové kyseliny se míchá 30 minut. Z reakční směsi se odpaří rozpouštědlo a odparek se dvakrát odpaří s methylenchloridem a pak s etherem. Získá se 0,090 g (99 %)
3-methoxy-4-fenylureidofenyl- octové kyseliny ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 9,28 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 8,02 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 7,58 - 7,15 (m, 5H), 6,91 (bm, 2H), 6,77 (d, 1H, J = 7, 5 Hz), 3,85 (s, 3H), 3,49 (s, 2H).
G. Roztok 0,33 g (0,88 mmol) 3-methoxy-4-fenylureidofenyloctové kyseliny, 0,27 g (0,90 mmol) sloučeniny Leu-p-2, připravené postupy C a D, 0,39 g (0,90 mmol) BOP a 0,77 ml (4,4 mmol) DIPEA v 5 ml dimethylformamidu se míchá 18 hodin. Reakční směs se zředí ethylacetátem a roztok se promyje 60% nasyc. vodným NaHCO3 (3 x), vodou, 5% vodným roztokem kyseliny citrónové (3 x), vodou a nasyc. vodným roztokem NaCl. Vysušení (MgSO^) a odpaření rozpouštědla poskytne 0,49 g surového produktu, který se přečistí flash chromatografií na silikagelu ve směsi (1 : 4) hexan - ethylacetát. Získá se 0,35 g (60 %) t-butylesteru BIO1056 ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDCl^, 300 MHz, ppm): 8,00 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7, 55 - 7,20 (m, 8H), 7,05 (m, 1H), 6,70 (m, 5H), 5,89 (s, 2H), 5,18 (m, 1H), 4,50 (s, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,47 (s, 2H), 2,67 (m, 2H), 1,68 - 1,40 (bm, 3H), 1,33 (s, 9H).
Η. K chladnému (0 °C) roztoku 0,35 g (0,53 mmol) t-butylesteru BI01056 v 5,0 ml methylenchloridu se přidá 5,0 ml trifluoroctové kyseliny. Reakční směs se nechá ohřát na
111 laboratorní teplotu a míchá se 1 hodinu. Odpaření poskytne 0,315 g surového produktu BIO-1056, který se ve dvou porcích přečistí HPLC. Získá se tak 0,16 g (50 %) produktu BIO-1056 ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 9,25 (s, 1H), 8,43 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 8,15 (m, 2H), 8,01 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,50 - 6,55 (m, 10H), 5,97 (s,
2H), 5,08 (m, 1H), 4,31 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,41 (m, 2H), 2,64 (m, 2H), 1,55 - 1,22 (bm, 3H), 0,80 (m, 6H). HPLC, gradient A: 35,2 min, gradient B: 19,4 min. Hmotové spektrum, m/z: 605.
Příklad 52
Syntéza sloučeniny BIO-1221
A. K roztoku 0,024 g (0,10 mmol) t-butyl-4-amino-3-methoxyfenylacetátu v 2,0 ml methylenchloridu se přidá 15 μΐ (0,12 mmol) o-tolylisokyanátu. Reakční směs se míchá 2 hodiny a pak se odpaří rozpouštědlo. Získá se 0,036 g (97 %) t-butyl-3-methoxy-4-o-tolylureidofenylacetátu ve formě světle hnědé pěny. -^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8, 05 (d, 1H, J = 7,9 HZ), 7,55 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,45 - 7, 05 (m, 5H), 6,78 (m, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,48 (s, 2H), 2,23 (s, 3H),
1,44 (s, 9H).
B. Roztok 0,016 g (0,043 mmol) t-butyl-3-methoxy-4-o-tolylureidofenylacetátu v 1,0 ml trifluoroctové kyseliny se míchá 1 hodinu. Reakční směs se odpaří a zbytek se dvakrát odpaří s methylenchloridem a potom s etherem. Získá se 0,0135 g (100 %) 3-methoxy-4-o-tolylureidofenyloctové kyseliny ve formě bílé látky.
C. Metodou, popsanou v příkladu 51G, se nechá reagovat 3-methoxy-4-o-tolylureidofenyloctová kyselina (0,0135 g,
0,43 mmol) s aminovou solí (0,0185 g, 0,041 mmol), připravenou ze sloučeniny β-3 postupy C a D. Získá se 0,016 g (60 %) methylesteru sloučeniny BIO-1221 ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,10 (d, 1H) , 7,61 (d,
112
ÍH), 7,45 - 7,00 (m, 7H), 6,85 - 6,65 (m, 5H), 5,93 (s, 2H), 5,20 (m, ÍH), 4,37 (m, ÍH), 3,85 (s, 3H), 3,61 (s, 3H) , 3,52 (s, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 1,65 - 1,10 (bm, 3H), 0,86 (m, 6H).
D. 0,016 g (0,025 mmol) methylesteru sloučeniny BIO-1221 se hydrolyzuje metodou, popsanou v příkladu 1B. Získá se 0,0087 g (56 %) sloučeniny BIO-1221 ve formě bílého prášku. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,93 (d, ÍH), 7,70 (d, ÍH), 7,49 (d, ÍH), 7,37 - 6,92 (m, 6H), 6,78 - 6,55 (m, 5H), 5,81 (s, 2H), 5,09 (m, ÍH), 4,27 (m, ÍH), 3,73 (s, 3H), 3,40 (s, 2H), 2,58 (m, 2H), 2,19 (s, 3H), 1,48 - 1,25 (bm, 3H), 0,76 (m, 6H). HPLC (gradient A): 35,2 min. Hmotové spektrum, m/z: 619 .
Příklad 53
Syntéza sloučeniny BIO-1238
A. Podle procedury, popsané v příkladu 43A, se převede amin β-5 na sloučeninu 1238-1 ve výtěžku 92 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,19 (d, 2H, J = 8,6 Hz), 6,82 (d,
2H, J = 8, 6 Hz), 5,36 - 5,28 (m, 2H), 4,25 - 4,22 (m, ÍH), 3,72 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 2,72 - 2,66 (m, 2H), 2,49 - 2,41 (m, 2H), 2,1 (s, 3H), 1,92 - 1,78 (m, ÍH), 1,48 (s, 9H). Skupina Boc se odstraní působením trifluoroctové kyseliny v dichlormethanu a získá se tak trifluoracetát sloučeniny 1238-1. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,12 (d, 2H,
J = 8,5 Hz), 6,74 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 5,32 (m, ÍH), 4,38 (m, ÍH), 3,68 (s, 3H), 3, 51 (s, 3H), 2,77 - 2,69 (m, 2H), 2,55 - 2,38 (m, ÍH), 2,36 - 2,31 (m, ÍH), 2,16 - 2,02 (m, 2H),
1,91 (S, 3H).
B. Postupem, popsaným v příkladu 1A, se reakcí 20 mg (0,7 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny a 30 mg (0,7 mmol) trifluoracetátu sloučeniny 1238-1 připraví 35 mg (83
%) produktu 1238-2 ve formě bílé pevné látky. -^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 7,91 (d, ÍH), 7,52 (d, 2H, J = 8,5
113
Hz) , 7,35 - 7,30 (m, 4H) , 7,02 (d, ÍH), 6,80 (d, 2H, J = 8,5
Hz) , 5,79 - 5,68 (m, 1H) , 4,40 “ 4, ,28 (m, ÍH), 3,71 (s, 3H),
3,63 (s, 3H), 3,35 - 3,38 (m, 2H) , 2,49 (br s, 2H), 2,00 (s,
3H) .
C. Roztok 20 mg (0,033 mmol) sloučeniny 1238-2 ve 3 ml methanolu a 3 ml 2 N vodného roztoku LiOH se míchá přes noc při laboratorní teplotě, reakční směs se ochladí na 0 °C a okyselí se trifluoroctovou kyselinou na pH 3 - 4 (měřeno indikátorovým papírkem). Žádaný produkt se izoluje a přečistí kapalinovou chromatografií (kolona Vydac C18, gradient 8). Výtěžek 12 mg (0,017 mmol, 61 %) produktu BIO-1238 ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum (FAB): 595.
Příklad 54
Syntéza sloučeniny BIO-1245
A. Metodou, popsanou v příkladu IA, se z 562 mg (2,0 mmol) komerčního N-BOC-methioninsulfonu a 470 mg (2,10 mmol) aminu β-3 připraví 962 mg (1,90 mmol) surové sloučeniny 1245-1 ve formě bílé pěny, která se bez čištění použije v další reakci. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 7,31 (d, ÍH, J = 8,3 Hz), 6,77
- 6,7 (m, 3H), 5,91 (s, 2H), 5,04 (d, ÍH, J = 7,6 Hz), 5,27 (m, ÍH), 4,30 (br, ÍH), 3,61 (s, 3H), 3,15 (m, ÍH), 2,93 (m, ÍH), 2,89 (s, 3H), 2,85 (m, 2H), 2,22 (m, 2H), 1,42 (s, 9H).
B. Na 962 mg (1,90 mmol) sloučeniny 1245-1 se působí 4 N HC1 v dioxanu. Odpaření rozpouštědla poskytne 800 mg (1,89 mmol, 99 %) hydrochloridu 1245-2 jako bílé pevné látky, která byla bez čištění použita v další reakci. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 8,75 (br, ÍH), 8,20 (br, 2H), 6,91 - 6,55 (m, 3H), 5,90 (bs, 2H), 5,42 (br, ÍH), 4,55 (br, ÍH), 3,60 (s, 3H), 3,45
- 3,0 (bm, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,85 - 2,40 (bm, 4H).
C. Reakce 800 mg (1,89 mmol) sloučeniny 1245-2 s 543 mg (1,89 mmol) kyseliny o-methylfenylureidofenyloctové se provede metodou popsanou v příkladu 22D a poskytne 1,15
114 g (1,76 mmol, 93 %) surového produktu 1245-3 ve formě bílé pevné látky, která se bez čištění použije v dalším reakčním kroku. 1H NMR spektrum (DMSO-d6): δ 7,95 (s, 1H), 7,89 (d,
1H, J = 7,9 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 7,9 Hz), 7,20 (m, 4H),
7,00 - 6,78 (m, 4H), 6,03 (s, 2H), 5,18 (m, 1H), 4,40 (m,
1H), 3,58 (s, 3H), 3,49 (s, 3H), 3,39 (br, 2H), 2,90 - 2,49 (m, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,00 (m, 2H).
D. 1,1 g (1,7 mmol) sloučeniny 1245-3 se hydrolyzuje metodou, popsanou v příkladu IB, a poskytne 490 mg (0,77 mmol, 45 %) surového produktu BIO-1245 ve formě bílé pevné látky (dle HPLC čistota >90 %). Malé množství (cca 150 mg) produktu se přečistí HPLC, čímž se získá čistý produkt BIO-1245 (81 mg, regenerace 54 %) ve formě bílé pevné látky (HPLC čistota 100 %). Hmotové spektrum, m/z: 639. ^H NMR spektrum (DMSO-dg): δ 8,60 (bs, 0,5H), 8,57 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,37 (d, 1H,
J = 8,1 Hz), 8 ,18 (s, 1H) , 8,05 (s, 0,5H), 7,89 (d, 1H, J =
8,0 Hz), 7,43 (d, 2H, J = 8 ,0 Hz), 7,21 (m, 4H), 6, 97 - 6,81
(m, 4H), 6,03 (s, 2H) , 5,13 (m, 1H) , 4,43 (m, 1H), 3,80 (br,
1H) , 3,49 (S, 3H) , 2, 93 (m, 2H), 2, 45 (m, 2H), 2,30 (s, 3H) ,
2,01 (m, 2H).
Příklad 55
Syntéza BIO-1246
A. K suspenzi 1,5 g (12,4 mmol) L-cysteinu v 8 ml methanolu se přiá přebytek methoxidu sodného (2,0 g, 37,2 mmol) a pak katalytické množství (cca 100 mg) jodidu sodného. Směs se míchá 30 minut při laboratorní teplotě. Pak se přidá 1,7 g (12,4 mmol) l-brom-2-propanolu a v míchání se pokračuje přes noc. Reakční směs se zneutralizuje na pH cca 7, zředí se 20 ml vody a odpaří se methanol. Zbylý roztok se zředí 20 ml dioxanu a přidá se 7,0 ml (50 mmol) triethylaminu. Dále se přidá 3,1 g (12,4 mmol) BOCON a reakční směs se míchá 3 hodiny při laboratorní teplotě. Pak se zředí vodou (20 ml) a extrahuje se ethylacetátem (3 x 25 ml). Organické extrakty
115 se zlikvidují a vodný roztok se okyselí na pH 1 přidáním 1 N HCI. Produkt se extrahuje do ethylacetátu (4 x 30 ml), extrakt se vysuší síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 2,87 g (10,4 mmol, 83 %, počítáno na dva stupně) produktu 1246-1 ve formě hustého nažloutlého syrupu. 1H NMR spektrum (CDC13): δ 5,60 - 5,50 (br, IH), 4,60 - 4,50 (br, IH), 4,44 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 3,02 (bm, 2H), 2,65 (br, 2H), 2,03 (m, 2H), 1,45 (s, 9H).
B. Metodou, popsanou v příkladu IA, se provede reakce 33 mg (0,11 mmol) sloučeniny 1246-1 s 22 mg (0,10 mmol) aminu β-3, čímž se získá 39 mg (0,08 mmol, 80 %) produktu 1246-2 ve formě nažloutlé pěny, která se bez čištění použije v následujícím reakčním stupni. -^H NMR spektrum (CDC13): δ 6,80 - 6,60 (m, 3H), 5,91 (s, 2H), 5,50 (bm, IH), 4,35 (bm, IH), 3,71 (bt, 2H), 3,61 (s, 3H), 3,15 - 2,65 (m, 6H), 1,85 (m, 2H), 1,46 (s, 9H).
C. Reakcí s trifluoroctovou kyselinou se 39 mg (0,08 mmol) sloučeniny 1246-2 převede na odpovídající trifluoracetátovou sůl, která se podrobí reakčním podmínkám, popsaným v příkladu 54C. Získaná bílá pevná látka se přímo hydrolyzuje na volnou kyselinu metodou, popsanou v příkladu 1B. Malý alikvot se přečistí HPLC, frakce s čistým produktem se spojí a získá se tak sloučenina BIO-1246 (cca 3 mg) ve formě bílé pevné látky. Hmotové spektrum, m/z: 637. Čistota (podle HPLC) 100 %. 1H NMR spektrum (DMSO-dg): δ 9,01 (s, IH), 8,66 (d, IH, J = 5,3 Hz), 8,30 (d, IH, J = 5,5 Hz), 7, 94 (s, IH), 7,88 (d, IH,
J = 5,3 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 5,5 Hz), 7,20 - 7,15 (m, 4H), 7,00 - 6,94 (m, 2H), 6,88 - 6,79 (m, 2H), 6,02 (s, 2H), 5,12 (m, IH), 4,48 (m, IH), 3,65 (m, 2H), 2,90 - 2,45 (m, 6H),
2,28 (s, 3H), 1,65 (m, 2H).
Příklad 56
Syntéza BIO-1248
A. Směs 2,48 g (20 mmol) 4-fluorbenzaldehydu, 2,5 g (24 mmol)
116 kyseliny malonové, 2,16 g (28 mmol) octanu amonného a 100 ml ethanolu se refluxuje v argonové atmosféře přes noc. Po ochlazení na teplotu místnosti se vyloučená sraženina odfiltruje a promyje se třemi 30 ml porcemi ethanolu.
Vysušení ve vakuu poskytne 1,0 g (27 %) bílé pevné látky, která se bez dalšího čištění použije v následujícím reakčním kroku.
K suspenzi 1,0 g (9,4 mmol) tohoto produktu v methanolu se přidá 5,2 ml 2 M roztoku (6,01 mmol) thionylchloridu v dichlormethanu. Výsledný roztok se míchá přes noc při laboratorní teplotě. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se nasyceným roztokem NaHCO3 a vysuší se síranem sodným. Odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku poskytne 900 mg (84 %) aminu 1248-1 ve formě světle žlutého oleje. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,28 (m, 2H, Ar), 6,96 (m, 2H, Ar), 4,46 (t, 1H, J = 6,8 Hz), 3,62 (s, 3H, OMe), 2,58 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 1,69 (s, 2H,
NH). TLC (10% MeOH/CH2Cl2): Rf = 0,5.
B. 300 mg (1,52 mmol) aminu 1248-1 se kondenzuje s 300 mg (1,52 mmol) Na-t-Boc-Ne-Leu-N-hydroxysukcinimidu s použitím metody, popsané v postupu C. Vzniklý addukt se zbaví chránících skupin reakcí s trifluoroctovou kyselinou a pak se alkalizuje triethylaminem, jak je popsáno v postupu Dl. Získá se amin 1248-2 ve výtěžku 84 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,20 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 7,24 (m, 2H, Ar), 6,97 (m, 2H, Ar), 5,33 (m, 1H), 3,58 (s, 3H, OMe), 3,38 (m, 1H), 2,82 (m, 2H), 1,66 (m, 2H), 1,30 (m, 1H), 1,22 (s, 2H), 0,91 (m, 6H). TLC (10% MeOH/CH2Cl2): Rf = 0,47 a 0,38.
C. Kondenzace 77 mg (0,27 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny se 70 mg (0,23 mmol) aminu 1248-2 se provede metodou popsanou v příkladu 22D. Získá se produkt 1248-3 ve výtěžku 61 %. 1H NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz, ppm): 9,15 (d, 1H, J = 5,9 Hz), 8,53 (t, 1H, J = 7,5 Hz), 8,17 (d, 1H,
J = 8,2 Hz), 8,0 (s, 1H), 7,84 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,35 (m,
117
4H), 7, 13 (m, 6H), 6,92 (t, 1H, J = 8,2 Hz), 5,20 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 3,52 (s, dva píky, 3H, OMe), 3,45 - 3,24 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,24 (s, 3H, Me), 1,57 - 1,33 (m, 3H), 0,82 (m, 6H). HPLC (gradient 1**): 21,2 min a 21,5 min (1 : 24). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 577 (pro C33H37N4O5F vypočteno M+l: 577).
D. Roztok 22 mg (0,038 mmol) sloučeniny 1248-3 v 1 ml dimethylsulfoxidu a 2 ml methanolu se hydrolyzuje vodným roztokem LiOH metodou, popsanou v příkladu IB. Produkt se přečistí na koloně Vydac s reverzní fází C18 (22 mm x 25 cm) s použitím lineárního gradientu od 15% CH3CN/H2O (0,1 % TFA) do 40% CH3CN/H2O (0,1 % TFA); průtok 10 ml/min. Sloučenina BIO-1248 se isoluje ve výtěžku 29 %. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,93 (s, 1H), 8,46 (d, 1H, J = 8,3
Hz), 8,25 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 7,87 (s, 1H), 7,82 (d, 1H,
J = 8,0 Hz), 7,33 (m, 5H), 7,12 (m, 5H), 6,93 (m, 1H), 5,15
(m, 1H), 4,28 (m, 1H), 3,35 (m, 2H) , 2,65 (d, 2H, J = 7,2
Hz), 2,22 (s, 3H, Me), 1,55 (m, 1H) , 1,43 (m, 2H) , 0,83 (m,
6H). HPLC (gradient 1): 18,7 min a 19,3 min (1 : 24). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 563 (pro C3iH35N4O^F vypočteno M+l:
563 ) .
Příklad 57
Syntéza BIO-1270
A. Kondenzece 500 mg (2,24 mmol) aminu β-3 s 1,0 g (2,1 mmol) Na-Cbz-Ne-t-Boc-L-Lys-N-hydroxysukcinimidu se provede metodou, popsanou v postupu C. Získá se 1,1 g (82 %) kondenzačního produktu 1270-1. Tento produkt se zbaví chránících skupin působením trifluoroctové kyseliny a alkalizuje se triethylaminem jak je to popsáno v postupu D, čímž se získá sloučenina 1270-2 ve výtěžku 54 %. LH NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,31 (m, 6H), 6,72 (m, 3H),
5,90 (s, 2H), 5,58 (d, 1H, J = 9 Hz), 5,26 (m, 1H), 5,07 (s, 2H), 4,15 (m, 1H), 3,58 (s, 3H, OMe), 2,77 (m, 2H), 2,61 (m,
118
2H), 1,79 (m, ÍH), 1,59 (m, ÍH), 1,41 - 1,30 (m, 6H). TLC (10% MeOH/CH2Cl2): Rf = 0,11.
Β. K míchanému roztoku 15,5 mg (0,032 mmol) sloučeniny 1270-2 a 10,1 mg (0,128 mmol) pyridinu v dichlormethanu se při laboratorní teplotě přidá 7,5 mg (0,96 mmol) acetylchloridu. Směs se míchá 3 hodiny a pak se rozpouštědlo odpaří a zbytek se chromátografuje na reverzní fázi. Získá se 16,3 mg (95 %) sloučeniny 1270-3 ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 Hz, ppm): 7,32 (s, 5H), 6,70 (m, 3H),
5,91 (s, 2H), 5,82 (m, ÍH), 5,55 (m, ÍH), 5,25 (m, ÍH), 5,09 (s, ÍH), 4,13 (m, ÍH), 3,60 (s, 3H), 3,28 (m, 2H), 2,9 - 2,4 (m, 3H), 1,94 (s, 3H), 1,9 - 1,76 (m, ÍH), 1,70 - 1,58 (m, ÍH), 1,52 - 1,42 (m, 2H), 1,36 - 1,22 (m, 2H) .
C. Látka 1270-3 se nechá reagovat jak je popsáno v postupu D2 (postup reakce je monitorován HPLC), čímž se získá v kvantitativním výtěžku (14,1 mg) sloučenina 1270-4 jako čirý olej, který se použije bez čištění dále.
D. Surová sloučenina 1270-4 (14,1 mg, 0,036 mmol) z předchozí preparace se nechá reagovat způsobem, popsaným v příkladu 54C. Produkt se přečistí preparativní HPLC a získá se tak BIO-1270-OMe (9,1 mg, 38 %) ve formě bílé pevné látky. -’-Η NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,13 (d, ÍH, J = 10,35 Hz), 8,03 (s, ÍH), 7,93 (d, 1H, J = 10,35 Hz), 7,83 (m, ÍH), 7,49 (d, 2H, J = 10,35 Hz), 7,28 (m, 5H), 7,10 - 6,81 (m, 5H), 6, 08 (s, 2H), 5,20 (dd, ÍH, J = 9,66 Hz a 17,25 Hz), 4,33 (dd, ÍH, J = 8,87 Hz a 15,18 Hz), 3,63 (s, 3H), 3,5 (s, 2H), 3,1
- 2,95 (m, 2H), 2,85 - 2,74 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,86 (s, 3H), 1,72 - 1,49 (m, 2H), 1,5 - 1,32 (Μ, 3H), 1,31 - 1,09 (m, 2H) .
Ε. K 9,1 mg (0,016 mmol) sloučeniny BIO-1270-OMe v 1 ml DMSO-dg (vzorek pro NMR) se přidá 20 μ.1 2 N LiOH (0,041 mmol) a reakční směs se míchá přes noc při laboratorní teplotě. Pak se okyselí na lakmus (do červené barvy) třemi kapkami
119 trifluoroctové kyseliny a produkt se přečistí preparativní HPLC. Získá se 6,2 mg (60 %) BIO-1270 ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz, ppm): 8,5 (d, 12H, J = 10, 35 Hz), 8,19 (d, 1H, J = 10,35 Hz), 7,99 (s, 1H),
7,93 (d, 1H, J = 10,35 Hz) , 7,82 (m, 1H), 7,45 (d, 2H, J =
10,35 > Hz), 7,28 (m, 4H) , 7, 05 (m, 1H), 6, 98 - 6,89 (m, 2H),
6,86 (m, 1H), 6,09 (s, 2H) , 5,66 (dd, 1H, J = 8,28 Hz
a 16, 56 Hz), 4, 32 (dd, 1H, J = 7,59 Hz a 13,8 Hz), 3,27 (s,
2H) , 2,98 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 1,87 (s, 3H),
1,69 - 1,48 (m, 2H), 1, 46 - 1,32 (m, 3H), 1,28 - 1, 12 (m,
2H) . Hmotové spektrum, m/z: 646. HPLC (gradient 1): 19,73
min; čistota 100 %.
Gradient 3: 15 % B - 65 % B , 50 min, gradient 1: 20 % B - 70
% B, 50 min.
Příklad 58
Syntéza BIO-1282
A. Roztok 1,65 g (9,90 mmol) ethyl-3-pyridylacetátu v 10 ml 32% peroctové kyseliny se míchá 2 hodiny při 80 - 90 °C. Reakční směs se zahustí a zbytek se dvakrát odpaří s methanolem a pak s methylenchloridem. Získá se 1,80 g (100 %) N-oxidu ethyl-3-pyridylacetátu ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,38 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 7,39 (d, 1H), 4,20 (q, 2H), 3,62 (s, 2H), 1,26 (t, 3H).
B. Roztok 4,14 g (30,2 mmol) salicylamidu a tří kapek konc. kyseliny sírové ve 40 ml acetonu se refluxuje 5 hodin. Rozpouštědlo se pak odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Organický roztok se promyje 1 N NaOH (2 x).
N HCl (2 x), vodou, nasyceným vodným roztokem NaCl, vysuší se MgSO4 a rozpouštědlo se odpaří. Získá se 2,50 g (47 %)
2,2-dimethyl-4-keto-l,3-benzoxazinu ve formě bílé pevné látky. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,92 (d, 1H) , 7,60 (bs, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,92 (d, 1H),
1,65 (s, 6H).
120
C. Roztok 1,77 (10,0 mmol) 2,2-dimethyl-4-keto-l,3-benzoxazinu a 2,09 g (10,0 mmol) PC15 ve 3 ml POC13 se míchá 1 hodinu při laboratorní teplotě a pak 2 hodiny při 50 - 60 °C. Reakční směs se zahustí a produkt se předestiluje při 90 - 95 °C/2-3 mm Hg, čímž se získá 0,496 g (25 %)
4-chlor-2,2-dimethyl-3H-l,3-benzoxazinu ve formě čirého oleje. NMR spektrum (CDC13, 300 Hz, ppm): 7,58 (d, IH) , 7,48 (m, IH), 6,97 (m, IH), 6,94 (d, IH), 1,63 (s, 6H).
D. Směs 0,145 g (0,741 mmol) 4-chlor-2,2-dimethyl-3H-1,3-benzoxazinu, 0,270 g (1,49 mmol) N-oxidu ethyl-3-pyridylacetátu a 5 ml methylenchloridu se refluxuje 20 hodin. Po odpaření rozpouštědla se zbytek rozpustí v ethylacetátu, organický roztok se promyje 60% nasyc. vodným roztokem NaHCO3 (2 x), vodou, nasyc. vodným roztokem NaCl a vysuší se nad MgSO4. Odpaření rozpouštědla poskytne 0,148 g olejovitého odparku.
Tento surový olejovitý odparek (0,148 g) se refluxuje v 10 ml konc. HC1 18 hodin. Reakční směs se zahustí a odparek se roztřepe mezi vodu a methylenchlorid. Vodná vrstva se promyje dvakrát methylenchloridem a pak se odpaří. Získá se 0,105 g bílé pevné látky.
Tato bílá látka (0,105 g) se rozpustí v 5,0 ml methanolu a k roztoku se přikape během 30 minut 0,5 ml (7 mmol) thionylchloridu. Reakční směs se míchá 2 hodiny a pak se odpaří rozpouštědlo. Odparek se rozpustí v 5% vodném NH4OH a extrahuje se methylenchloridem (3 x). Spojené organické extrakty se vysuší nad MgSO4 a odpařením rozpouštědla se získá 0,012 g (10 % počítáno na tři kroky) methyl-5-( 2-aminopyridyl )acetátu ve formě bílé pevné látky. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,93 (s, IH), 7,40 (d, IH), 6,50 (d, IH), 4,52 (bs, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,49 (s, 2H). Hmotové spektrum, m/z: 167.
Ε. K roztoku 0,012 g (0,072 mmol) methyl-5-(2-amino121 pyridyl)acetátu v 1 ml methylenchloridu se přidá 10 μΐ (0,081 mmol) o-tolylisokyanátu. Reakční směs se míchá 1 hodinu a pak se odpaří rozpouštědlo. Bílý odparek (0,020 g) obsahuje methyl-5-(2-o-tolylureido)pyridylacetát.
F. K roztoku 0,020 g surového methyl-5-(2-o-tolylureido)pyridylacetátu v 1,0 ml methanolu se přidá 100 μΐ (0,20 mmol) 2 M LiOH. Reakční směs se míchá 18 hodin, rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se přečistí HPLC. Získá se 0,013 g (65 %) 5-(2-o-tolylureido)pyridyloctové kyseliny ve formě bílého prášku. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,10 (s, 1H), 7,87 (bd, 1H), 7,75 (bd, 1H), 7,21 (mn, 1H), 7,08 (m, 1H), 3,62 (s, 2H), 2,38 (s, 3H). Hmotové spektrum, m/z: 286 .
G. Podle metody, popsané v příkladu ÍA, se 0, 013 g (0,049 mmol) 5-(2-o-tolylureido)pyridyloctové kyseliny nechá zreagovat s 0,022 g (0,049 mmol) aminu, připraveného v příkladu 14A. Získá se 0,020 g (60 %) methylesteru
BIO1282. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,18 - 7,73 (m, 4H), 7,55 (d, 1H), 7,35 - 6,65 (m, 10H), 5,93 (s, 1H), 5,28 (m, 1H), 4,45 (m, 1H), 3,69 - 3,45 (m, 5H), 2,81 (bm, 2H), 2,20 (s, 3H), 1,54 (bm, 3H), 0,92 (m, 6H).
H. Ke směsi 0,020 g (0,033 mmol) methylesteru BIO1282 ve 2,0 ml methanolu se přidá 200 μΐ (0,40 mmol) 2,0 M LiOH. Reakční směs se míchá 20 hodin a pak se odpaří rozpouštědlo. Odparek, obsahující směs BIO-1282 a výchozího esteru (4 : 5), se rozpustí ve směsi 0,5 ml dimethylformamidu a 0,5 ml methanolu a míchá se dalších 28 hodin. Reakční směs se okyselí trifluořoctovou kyselinou a zahustí se. Surový odparek se přečistí HPLC a poskytne 0,0056 g (24 %) produktu BIO-1282 ve formě bílého prásku. NMR spektrum (CDC13, 300 Hz, ppm): 8,44 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,26 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,15 (s, 1H), 8,04 (d, 1H, 8,0 Hz), 7,66 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,32 - 7,13 (m, 3H), 7,05 - 6,94 (m, 1H), 6,85 - 6,65 (m, 3H),
5,96 (s, 2H), 5,06 (m, 1H), 4,29 (m, 1H), 3,45 (m, 2H), 2,63
122 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,57 - 1,20 (m, 3H), 0,78 (m, 6H).
HPLC (gradient A): 27,0 min. Hmotové spektrum, m/z: 590.
Příklad 59
Syntéza BIO-1294
A. K míchanému roztoku 102 mg (0,21 mmol) aminu, připraveného v příkladu 57A, ve 20 ml dichlormethanu se přidá 48 mg (32μ1, 0,42 mmol) CH-jSCtyCl a 50 μΐ triethyiaminu. Výsledná směs se míchá 18 hodin za laboratorní teploty, pak se zředí 40 ml dichlormethanu, promyje se 20 ml 5% roztoku kyseliny citrónové, 10 ml vody, 20 ml nasyceného roztoku NaHCCty, 20 ml nasyceného roztoku NaCl a vysuší se síranem sodným. Odpařením rozpouštědla za sníženého tlaku se získá 110 mg (92 %) produktu 1294-1 ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum
(CDC1 3, 300 MHz, ppm): 7,30 (m, 6H), 6,74 (m, 3H), 5,90 (s,
2H) , 5,70 (m, 1H), 5,25 (m, 1H) , 5,07 (s, 3H), 4,16 (m, 1H) ,
3,58 (s, 3H, OMe), 3,02 (m, 2H) , 2,88 (s f 3H), 2,75 (m, 2H) ,
1,76 (m, 1H), 1,60 (m, 1H) , 1,50 (m, 2H), 1,32 (m, 2H). TLC,
10% MeOH/CH2Cl2: Rf = 0,67.
Β. K roztoku 110 mg (0,195 mmol) sloučeniny 1294-1 v 10 ml methanolu se přidá 0,2 ml kyseliny octové a 110 mg Pd(OH)2· Směs se hydrogenuje 48 hodin při laboratorní teplotě a při tlaku vodíku 50 psi. Standardní zpracování poskytne 35 mg (42 %) produktu 1294-2 ve formě bezbarvého oleje. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,06 (m, 1H), 6,75 (m, 3H),
5,92 (s, 2H), 5,25 (m, 1H), 5,02 (m, 1H), 3,61 (s, 3H), 3,35 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 2,94 (s, 3H), 2,80 (m, 2H), 1,87 - 1,30 (m, 8H). HPLC (gradient 8): 12 min.
C. Kondenzace 35 mg (0,12 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny s 35 mg (0,08 mmol) aminu 1294-2 se provede způsobem popsaným v příkladu 1A. Získá se sloučenina 1294-3
ve výtěžku 88 %. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,50
(m, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,16 (m, 1H), 7,82 (m, 1H), 7,40 (m,
2H), 7,22 - 7, 05 (m, 5H), 7,00 - 6,70 (m, 5H), 5,98 (s, 2H) ,
123
5,11 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,52 (s, 3H), 3,36 (m, 2H), 2,91 - 2, 62 (m, 7H), 2,25 (s, 3H), 1,60 - 1,05 (m, 6H). HPLC (gradient 8): 31 min. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 696 (pro C34H41N5°9S (m+1) vypočteno 696).
D. Roztok 50 mg (0,07 mmol) sloučeniny 1294-3 v 3 ml methanolu se hydrolyzuje vodným LiOH jak bylo popsáno výše. Produkt se přečistí na koloně s reverzní fází C18 (Vydac, 22 mm x 25 cm), lineární gradient od 15 % CH3CN/H2O (0,1 % TFA) do 40 % CH3CN/H2O (0,1 % TFA), průtok 10 ml/min. Izoluje se sloučenina BIO-1294 ve výtěžku 41 %. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,95 (m, 1H), 8,42 (d, 1H, J = 8,2 Hz), 8,08 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,88 (s, 1H), 7,83 (d, 2H, J = 8,0 Hz),
7,36 (d, 2H, J = 8,2 Hz), 7,15 (m, 4H), 7,10 - 6,71 (m, 5H), 5,97 (s, 2H), 5,04 (m, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,41 - 3,25 (m,
2H), 2,83 - 2,80 (m, 6H), 2,23 (s, 3H), 1,70 - 1,04 (m, 6H). HPLC (gradient 8): 27 min. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 682 (pro C33H3gN50gS (M+l) vypočteno 682).
Příklad 60
Syntéza BIO-1321
A. Směs 3,48 g (20 mmol) methyl-4-formylbenzoátu, 2,5 g (24 mmol) kyseliny malonové, 2,16 g (28 mmol) octanu amonného a 100 ml ethanolu se refluxuje přes noc v atmosféře argonu.
Po zchlazení na laboratorní teplotu se tuhá sraženina odsaje, promyje ethanolem (3 x 30 ml) a vysuší ve vakuu přes noc. Získá se 2,8 g (63 %) sloučeniny 1321-1.
Β. K suspenzi 1,0 g (4,48 mmol) sloučeniny 1321-1 v 50 ml methanolu se přidá 2,7 ml (5,4 mmol) 2 M roztoku thionylchloridu v dichlormethanu. Výsledný roztok se míchá při laboratorní teplotě přes noc. Po odpaření rozpouštědla se zbytek rozpustí v ethylacetátu, alkalizuje se nasyc. roztokem NaHCO3 a vysuší se Na2SO4. Organické rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku, čímž se získá 780 mg (53 %) aminu 1321-2 ve formě světle žlutého oleje. 1H NMR spektrum (CDC13, 300
124
MHz, ppm): 7,99 (m, 2H, Ar), 7,56 (d, 1H, J = 8,1 Hz, Ar), 7,42 (d, 1H, J = 8,0 Hz, Ar), 4,46 (t, 1H, J = 6,7 Hz), 3,85 (s, 3H, OMe), 3,65 (s, 3H, OMe), 2,65 (d, 2H, J = 6,8 Hz),
1,88 (s, 2H, NH).
C. Kondenzace 500 mg (1,11 mmol) aminu 1321-2 s 380 mg (1,0 mmol) Na-t-Boc-Ne-Leucin-N-hydroxysukcinimidu se provede metodou, popsanou v postupu C. Získaný materiál se zbaví chránících skupin působením trifluoroctové kyseliny a produkt se pak alkalizuje triethylaminem, jak je popsáno v postupu Dl. Získá se v 70% výtěžku amin 1321-3. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,32 (t, 1H, J = 9,1 Hz), 8,20 (d,
2H, J = 8,3 Hz), 7, 34 (m, 2H, Ar), 5,40 (m, 1H), 3,86 (s,
3H, OMe), 3,58 (s, 3H, OMe), 3,41 (m, 1H), 2,85 (m, 2H),
1,67 (m, 2H), 1,53 (s, 2H), 1,30 (m, 1H), 0,90 (m, 6H).
D. Metodou, popsanou v příkladu 22D, se kondenzuje 54 mg (0,19 mmol) 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny se 70 mg (0,23 mmol) aminu 1321-3. Získá se sloučenina 1321-4 ve výtěžku 87 %. -’-Η NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,62 (m, 1H, 8,18 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,10 (m, 1H), 7,94 - 7,82 (m, 4H), 7,48 - 7,34 (m, 4H), 7,17 - 7,13 (m, 4H), 6,91 (t, 1H, J = 7,3 Hz), 5,24 (m, 1H), 4,30 (m, 1H), 3,53 (s, dva píky, 3H, OMe), 3,39 - 3,34 (m, 2H), 3,05 (m, 2H), 2,24 (s, 3H, Me), 1,60 - 1,36 (m, 3H), 0,83 (m, 6H). HPLC (gradient 8): 40 min (1 : 1). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 617 (pro C33H40N4°7 vypočteno 617).
E. Roztok 70 mg (0,11 mmol) sloučeniny 1321-4 v 1 ml dimethylsulfoxidu a 2 ml methanolu se hydrolyzuje vodným roztokem LiOH metodou, popsanou v příkladu 1B. Produkt se přečistí na koloně s reverzní fází C18 (Vydac, 22 mm x 25 cm), lineární gradient od 15 % CH3CN/H2O (0,1 % TFA) do 40 % CH3CN/H2O (0, 1 % TFA), průtok 10 ml/min. Izoluje se 22 mg (34 %) sloučeniny BIO-1321. ^H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,95 (d, 1H, J = 4,6 Hz), 8,57 (m, 1H), 8,13 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,88 - 7,81 (m, 4H), 7,44 - 7,32 (m, 4H),
125
7,17 - 7,10 (m, 4H), 6,92 (t, IH, J = 7,4 Hz), 5,20 (m, IH), 4,31 (m, IH), 3,46 - 3,27 (m, 2H), 2,70 (m, 2H), 2,22 (s,
3H, Me), 1,59 - 1,32 (m, 3H), 0,81 (m, 6H). HPLC (gradient 8): 27,8 min a 28,1 min (1 : 1). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 589 (pro C31H36N4O7 (M+l) vypočteno 589).
Příklad 61
Syntéza sloučeniny BIO-1336
A. Suspenze 9,9 g (92%, 47 mmol) 2,6-dichlor-š-nitropyridinu a 6,5 g (47 mmol) práškového uhličitanu draselného ve 100 ml methanolu se míchá týden při laboratorní teplotě. Reakční směs se zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Odparek se roztřepe mezi ethylacetát a 60% nasyc. vodný roztok NaHCO3. Organická vrstva se promyje 60% nasyc. vodným roztokem NaHCO3 (2 x) , vodou a nasyc. vodným roztokem NaCl a vysuší se síranem hořečnatým. Odpaření rozpouštědla poskytne 8,9 g (100 %) směsi 2-chlor-6-methoxy-5-nitropyridinu a 2-chlor-6-methoxy- -3-nitropyridinu ve formě světležluté pevné látky. 'H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,31 (d, IH, J = 8,3 Hz), 8,28 (d, IH, J = 8,9 Hz), 7,10 (d, IH, J = 8,3 Hz), 6,82 (d, IH, J = 8,9 Hz), 4,15 (s, 3H), 4,06 (s,
3H) .
B. 8,9 g (47 mmol) směsi 2-chlor-6-methoxy-5-nitropyridinu a 2-chlor-6-methoxy-3-nitropyridinu, 10 ml (60 mmol) t-butylmethylmalonátu a 3,1 g (95%, 120 mmol) NaH ve 250 ml tetrahydrofuranu se míchá 24 hodiny při laboratorní teplotě. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se nechá stát s trifluoroctovou kyselinou 2 hodiny. Po odpaření se produkt oddělí flash chromatografií na silikagelu ve směsi hexan - ethylacetát (95 : 5). Získá se 3,3 g (62 %) methyl-6-(2-methoxy-3-nitro)pyridylacetátu ve formě žlutého oleje. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,27 (d, IH,
J = 8,0 Hz), 7,04 (d, IH, J = 8,0 Hz), 4,09 (s, 3H), 3,85 (s, 2Η), 3,75 (s, 3Η).
126
C. Směs 0,047 g (0,21 mmol) methyl-6-(2-methoxy-3-nitro)pyridylacetátu, 2 ml ethylacetátu, 1 ml ethanolu a 0,063 g 10% Pd na uhlí se míchá 6 hodin pod vodíkem (při 40 - 50 psi). Směs se pak zfiltruje přes Celit a filtrát se odpaří. Získá se 0,041 g (100 %) methyl-6-(3-amino-2-methoxy)pyridylacetátu ve formě světležlutého oleje. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 6,82 (d, IH, J = 7,6 Hz), 6,65 (d,
IH, J = 7,6 Hz), 3,94 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 3,65 (s, 2H).
D. K roztoku 0,078 g (0,33 mmol) methyl-6-(3-amino2-methoxy)pyridylacetátu a 50 μΐ (0,36 mmol) triethylaminu v 1 ml methylenchloridu se přidá 41 μΐ (0,36 mmol) o-tolylisokyanátu a reakční směs se míchá 4 hodiny. Po odpaření rozpouštědla se surový produkt přečistí flash chromatografií na silikagelu ve směsi hexan - ethylacetát (3 : 2). Získá se 0,060 g (55 %) methyl-6-(2-methoxy-3-o-tolylureido)pyridylacetátu ve formě bílého prášku. 1H NMR spektrum
(CDC13, 300 MHZ, ppm): 8,33 (d, IH, J = 7,9 Hz), 7,51 (d,
IH, J = 7,8 Hz), 7,41 (s, IH), 7,17 (m, 2H), 7,08 (m, 2H) ,
6,77 (d, IH, J = 7,9 Hz), 3,81 (s, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,67
(s, 2H), 2,20 (s, 3H).
E. K roztoku 0,023 g (0,070 mmol) methyl-6-(2-methoxy-3-o-tolylureido)pyridylacetátu v 1,0 ml methanolu se přidá 90 μΐ (0,18 mmol) 2 M LiOH a reakční směs se míchá 18 hodin. Pak se směs zředí 5,0 ml vody, dvakrát se promyje etherem a vodná vrstva se okyselí 5% vodným roztokem kyseliny citrónové. Produkt se odfiltruje a promyje vodou a pak etherem. Získá se tak 0,014 g (64 %) 6-(2-methoxy-3-o-tolylureido)pyridyl- octové kyseliny ve formě bílé pevné látky.
1H NMR spektrum (CD3OD, 300 MHz, ppm): 8,50 - 8,25 (m, 3H), 7,60 (bd, IH), 7,28 - 7,00 (m, 3H), 4,01 (s, 3H), 3,69 (s, 2H) , 2,30 (s, 3H). Hmotové spektrum, m/z: 316.
F. Amin β-2 byl zpracován metodou, popsanou v postupu C. Výsledný produkt byl dále zpracován podle postupu Dl a poskytl TFA-sůl aminu 1336-1.
127
G. Podle postupu, popsaného v příkladu IA, se nechá reagovat 0,014 g (0,044 mmol) 6-(2-methoxy-3-o-tolylureido)pyridyloctové kyseliny s 0,017 g (0,045 mmol) TFA-sole aminu 1336-1, připravené v předchozí preparaci. Získá se 0,024 g (79 %) BIO1336-t-butylesteru ve formě bílé pěny. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,40 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,63 (d, 1H, 8,3 Hz), 7,50 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,43 - 7,06 (m, 6H), 6,80 - 6,67 (m, 4H), 5,92 (s, 2H), 5,19 (m, 1H), 4,47 (m, 1H), 3,91 (s, 3H), 3,61 (s, 3H), 2,65 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 1,58 (m, 3H), 1,31 (s, 9H).
Η. K roztoku 0,024 g (0,035 mmol) BIO1336-t-butylesteru ve 3,0 ml methylenchloridu se přidá 3,0 ml trifluorooctové kyseliny. Reakční směs se míchá 2 hodiny a pak se odpaří. Surový produkt se přečistí HPLC a získá se tak 0,011 g (50 %) sloučeniny BIO-1336 ve formě bílého prásku. NMR spektrum (DMSO-d6, 300 MHz, ppm): 8,73 (s, 1H), 8,52 (s,
1H), 8,47 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,31 (d, 1H, J = 7,9 Hz),
8,11 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,81 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,21 - 7,09 (m, 2H), 7,00 - 6,70 (m, 5H), 5,98 (s, 2H), 5,08 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,52 (m, 2H), 2,64 (m, 2H),
2,25 (s, 3H), 1,55 - 1,25 (m, 3H), 0,81 (m, 6H). HPLC (gradient B): 20,0 min. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 620.
Příklad 62
Syntéza BIO-1382
A. Ke směsi 200 mg (0,60 mmol) hydrochloridu methyl-6-amino-2(S)-N-BOC-aminohexanoátu a triethylaminu (přidán, až směs má alkalickou reakci na lakmus) v 5 ml dichlormethanu se přikape během 2 minut při laboratorní teplotě 76,2 mg (0,67 mmol) methansulfonylchloridu. Směs se míchá 1 hodinu, zředí se 10 ml dichlormethanu a roztok se promyje 5% roztokem kyseliny citrónové (3 x 0,5 ml), vodou (1 x 1 ml), solankou (1 x 1 ml) a vysuší se síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a získá se 230 mg (100 %) sloučeniny 1382-1
128 ve formě čirého oleje. NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm):
7,26 (s, 5H), 5,58 (d, IH, J = 8 Hz), 5,02 (s, 2H), 4,27 (m, IH), 3,64 (s, 3H), 3,02 (m, 2H), 2,78 (s, 3H), 1,85 - 1,20 (m, 6H). HPLC (gradient 3): 24,26 min. Čistota 98 %. Hmotové spektrum, m/z: 373.
Β. K roztoku 225 mg (0,60 mmol) sloučeniny 1382-1 v 10 ml methanolu se za míchámí při laboratorní teplotě přikape během 2 minut 0,91 ml (1,8 mmol) 2 N LiOH a v míchání se pokračuje přes noc. Reakční směs se okyselí kyselinou trifluoroctovou na lakmus (červená barva) a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Čirý gumovitý odparek se rozpustí ve 20 ml ethylacetátu a zpracuje se podle metody, popsané v příkladu 62A. Získá se 122 mg (57 %) produktu 1382-2 ve formě čiré gumovité hmoty.
^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,33 (s, 4H), 5,54 (d, IH, J = 7,89 Hz), 4,39 (m, IH), 3,47 (s, 3H), 3,09 (m, 2H), 1,92 - 1,28 (m, 6H). HPLC (gradient 3): 19,23 min. Čistota 100 %. Hmotové spektrum, m/z: 359.
C. Reakce 48 mg (0,13 mmol) sloučeniny 1382-2 a 25 mg (0,09 mmol) aminu β-14 se provede podle metody, popsané v příkladu IA a poskytne 51 mg (62 %) produktu 1382-3. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,97 (d, 2H, J = 7,38 Hz), 7,35 (m,
7H) , 5,51 (m, IH) , 5,35 (dd, IH, J = 5,77 Hz a 13,50 Hz),
5,09 (S, 2H), 4,75 (π, IH), 4,14 (m, IH) , 3, 88 (s, 3H), 3,62
(s, 3H), 3,09 (m, 2H), 2,73 (m, 2H) , 1,92 - 1, 77 (m, IH),
1,70 - 1,55 (m IH ), 1,55 - 1,49 (m, 2H) , 1, 49 - 1,15 (m,
13H) .
D. Chránící skupina CBZ ve sloučenině 1382-3 se odstraní katalytickou hydrogenací za podmínek, popsaných v postupu D2 a získá se tak 13,2 mg (35 %) produktu 1382-4. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,23 - 8,12 (m, 2H), 8,02 - 7,82 (m, 2H), 7,49 - 7,38 (m, 2H), 5,50 - 5,31 (m, IH),
3,86 (s, 3H), 3,57 (s, 3H), 3,20 - 2,65 (m, 4H), 1,89 - 1,72 (m, IH), 1,50 - 1,10 (m, 14H).
129
E. Podle metody, popsané v příkladu 49, se z 15,5 mg (0,05 mmol) sloučeniny 1382-4 připraví 22,6 mg (111 %) > - 1
BIO1382-t-butylesteru ve formě bílé pevne látky. H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,02 (d, 1H, J = 8,1 Hz),
7,87 (d, 2H, J = 8,0 Hz), 7,59 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,29
- 7,19 (m, 5H), 7,11 - 7,02 (m, 4H), 6,92 (t, 1H, J = 7,19 Hz), 5,25 - 5,16 (m, 1H), 4,20 - 4,30 (m, 1H), 3,8 (s, 3H),
3,39 (s, 2H), 2,86 - 2,73 (m, 5H), 2,68 - 2,58 (m, 2H), 2,17 (s, 3H), 1,65 - 1,18 (m, 15H). Hmotové spektrum, m/z: 752.
F. 27,6 mg (0,027 mmol) BIO1382-t-butylesteru se míchá v 1 ml dichlormethanu při 5 °C. Pak se přidá 1,0 ml kyseliny trifluoroctové v jedné dávce, odstraní se ledová chladící lázeň a v míchání se pokračuje 2 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se čistí preparativní HPLC, čímž se získá 14 mg (75 %) produktu BIO-1382 ve formě bílé pevné látky. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): 8,71 (d, 1H,
J = 7,82 Hz), 8,21 (d, 1H, J = 8,01 Hz), 8,04 - 7,91 (m,
3H), 7,59 - 7,44 (m, 3H), 7,32 - 7,20 (m, 3H), 7,01 - 6,98 (m, 2H), 5,30 (dd, 1H, J = 7,50 Hz a 14,93 Hz), 4,35 (m,
1H), 3,93 (s, 3H), 3,84 - 3,62 (m, 2H), 3,09 - 3,45 (m, 2H), 2,99 - 2,78 (m, 6H), 2,32 (s, 3H), 1,75 - 1,15 (m, 6H). HPLC (gradient 3): 27,8 min. Čistota 95 %. Hmotové spektrum, m/z: 696.
Příklad 63
Syntéza BIO-1400
A. Ke 3,47 g (3,94 ml, 26 mmol) 4-fenyl-l-butenu se při laboratorní teplotě v atmosféře argonu přidá 3,54 g (2,17 ml, 25 mmol) chlorsulfonylisokyanátu. Výsledná směs se míchá přes noc a pak se přikape při 0 °C k intenzivně míchané směsi NaHCO3 (5 g), NaHSO3 (1,5 g), vody (15 ml) a dichlormethanu (10 ml). Po jedné hodině se roztok zahustí za sníženého tlaku a odparek se extrahuje ethylacetátem (2 x 50 ml). Organická vrstva se oddělí a promyje nasyc. roztokem NaCl (30 ml),
130 vysuší Na2SO4 a zahustí za sníženého tlaku. Získá se 600 mg (14 %) beta-laktamu 1400-1 ve formě nažloutlého oleje, •’ή NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): δ 7,30 - 7,13 (m, 5H, Ar), 6,45 (s, ÍH, NH), 3,0 (ddd, ÍH, J = 14,8 Hz, 4,7 Hz a 1,7 Hz), 2,64 (t, 2H, J = 7,6 Hz), 2,52 (d, ÍH, J = 14,8 Hz),
1,92 (m, 2H). TLC, 50% Hex/EtOAc: Rf = 0,27.
B. Roztok 500 mg (2,86 mmol) beta-laktamu 1400-1 ve 25 ml methanolu se míchá s 1 ml 33% HC1 18 hodin při laboratorní teplotě. Reakční směs se zředí 100 ml ethylacetátu a alkalizuje triethylaminem na pH 9 - 10 (měřeno pH papírkem). Výsledný roztok se promyje 10 ml vody, 30 ml nasyc. roztoku NaHCOg, 30 ml nasyc. roztoku NaCl, vysuší se Na2SO4 a zahustí za sníženého tlaku. Získá se 270 mg (52 %) aminu 1400-2 ve formě žlutého oleje. -^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): δ 7,28 - 7,15 (m, 5H, Ar), 3,66 (s, 3H, OMe), 2,66 (m, 2H), 2,48 (dd, ÍH, J = 15,7 Hz a 4,0 Hz), 2,29 (dd, ÍH, J = 15,7 Hz a 8,8 Hz), 1,70 (m, 2H), 1,54 (s, 2H, NH). TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: R^ = 0,35. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 207 (pro ci2H17NO2 (M+ + 1) vypočteno 207).
C. 100 mg (0,55 mmol) volného aminu 1400-2 se kondenzuje se 163 mg (1,52 mmol) Na-t-Boc-Ne-Leu-N-hydroxysukcinimidu metodou, popsanou v postupu C. Produkt se deblokuje působením 0,5 ml trifluoroctové kyseliny a pak se alkalizuje triethylaminem způsobem popsaným v postupu Dl. Získá se amin 1400-3 ve výtěžku 95 %. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): δ 9,02 (d, ÍH, J = 9,0 Hz), 7,27 - 7,14 (m, 5H, Ar),
4,26 (m, ÍH), 3,64 (s, 2 píky, 3H, OMe), 3,44 (m, ÍH), 2,79 (s, 2H), 2,62 (t, ÍH, J = 7,8 Hz), 2,54 (d, ÍH, J = 4,9 Hz),
1,87 (m, 2H), 1,68 (m, 2H), 1,36 (m, ÍH), 0,92 (m, 6H). TLC, 10% MeOH/CH2Cl2: Rf = 0,47 a 0,18. HPLC (gradient 1): 12,2 min a 13,6 min (1 : 1). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 321 (pro C18H28N2°3 (M+ + vypočteno 321).
D. 2-Methylfenylureidofenyloctové kyselina (64 mg, 0,24 mmol) se kondenzuje s volným aminem 1400-3 (64 mg, 0,20 mmol)
131 metodou, popsanou v příkladu 49, čímž se získá sloučenina 1400-4 ve výtěžku 60 %. NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): δ 9,50 (d, ÍH, J = 6,8 Hz), 8,26 - 8,17 (m, 2H), 7,97 (d, ÍH, J = 6,1 Hz), 7,84 (d, ÍH, J = 8,0 Hz), 7,38 (m, 4H),
7,27 - 7,09 (m, 9H), 6,91 (t, ÍH, J = 7,3 Hz), 4,26 (m, ÍH), 4,03 (m, ÍH), 3,52 (s, 2 píky, 3H, OMe), 3,38 (m, 2H), 2,57
- 2,40 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 1,70 - 1,41 (m, 5H), 0,86 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 587 (pro C34H42N4°5 (M++
1) vypočteno 587).
E. 70 mg (0,119 mmol) sloučeniny 1400-4 v 1 ml dimethylsulfoxidu a 2 ml methanolu se hydrolyzuje vodným LiOH podle metody, popsané v příkladu 1B. Produkt se čistí na koloně s reverzní fází C18 (Vydac, 22 mm x 25 cm) s použitím lineárního gradientu od 20% CH3CN/H2O (0,1 % TFA) do 50% CH3CN/H2O (0,1 % TFA), s průtokem 10 ml/min. Isoluje se sloučenina BIO-1400 ve výtěžku 22 %. 1H NMR spektrum (DMSO-dg, 300 MHz, ppm): δ 8,93 (m, ÍH), 8,14 (m, ÍH), 7,91
- 7,81 (m, 3H), 7,34 (m, 2H), 7,27 - 7,09 (m, 9H), 6,92 (t, ÍH, J = 7,4 Hz), 4,27 (m, ÍH), 4,00 (m, ÍH), 3,43 (d, ÍH,
J = 14,2 Hz), 3,36 (d, ÍH, J = 14,2 Hz), 2,60 - 2,30 (m,
4H), 2,22 (s, 3H), 1,68 - 1,55 (m, 3H), 1,45 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 0,86 (m, 6H). HPLC (gradient 1): 20 min a 20,5 min (1 : 2,45). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 573 (pro C33h40N4O5 (M+ + 1) vypočteno 573).
Podmínky analytické HPLC:
Gradient 1: Lineární gradient od 20% CH3CN/H2O (0,1 % TFA) do 70% CH3CN/H2O (0,1 % TFA). Gradient 8: Lineární gradient od 15% CH3CN/H2O (0,1 % TFA) do 40% CH3CN/H2O (0,1 % TFA).
Příklad 64
Syntéza BIO-1051
A. K roztoku 420 mg (3,1 mmol) kyseliny 4-aminobenzoové v dichlormethanu se přidá 340 μΐ (3,1 mmol) fenylisokyanátu při laboratorní teplotě. Reakční směs se míchá 20 minut a pak
132 se zahustí. Zbytek se promyje 1 N HCl a pak velkým množstvím etheru. Získá se 98 mg (12 %) produktu ve formě bílého prášku. NMR spektrum (CDClj, 300 MHz, ppm): δ 9,08 (s,
1H), 8,80 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,30 (m, 2H), 7,00 (m, 1H). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 257 (M+H)+, molekulární hmotnost 256,26.
B. Roztok 15 mg (0,045 mmol) aminu, připraveného v příkladu 6A, a 12 mg (0,047 mmol) produktu, připraveného v příkladu 64A, v dimethylformamidu se podrobí reakci se 40 μΐ (0,22 mmol) DIPEA a 20 mg (0,045 mmol) BOP při laboratorní teplotě. Reakční směs se míchá přes noc a pak se zpracuje způsobem, uvedeným v příkladu IA. Získá se 18 mg (69 %) sloučeniny BIO-1051-OtBu ve formě pěny.
C. Na 19 mg (0,031 mmol) sloučeniny BIO-1051-OtBu se působí 2 ml trifluoroctové kyseliny při laboratorní teplotě 30 minut. Pak se reakční směs zahustí a surový produkt se přečistí HPLC. Získá se 6,3 mg (39 %) sloučeniny BIO-1051 ve formě bílého prášku. HPLC (gradient A): 19,2 min. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 517 (M+H)+, molekulární hmotnost 516,3.
Příklad 65
Syntéza BIO-1110
A. K dichlormethanovému roztoku 49 mg (0,15 mmol) aminu, připraveného v příkladu 6A, se při laboratorní teplotě přidá 10 ml trifluoroctové kyseliny. Reakční směs se míchá 3 hodiny a pak se zahustí. Zbytek se rozpustí v dimethylformamidu a neutralizuje se při laboratorní teplotě triethylaminem. Pak se přidá 26,5 mg (0,16 mmol) 4-nitrofenylfenylisokyanátu a směs se míchá při laboratorní teplotě 1 hodinu. Přečištění HPLC poskytne 6 2 mg béžové pevné látky. ^H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 8,05 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 5,35 (m, 1H), 4,34 (m, 1H), 2,22 (m, 2H), 1,59 (m, 3H), 0,84 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 442,9 (M+H)+, molekulární hmotnost 442,41. HPLC (gradient A): 21,05 min.
133
Β. 55 mg (0,12 mmol) produktu, získaného v příkladu 65A, se za míchání hydrogenuje na 10% Pd/C v methanolu při tlaku vodíku 40 psi. Reakční směs se zfiltruje přes Celit 545 a zahuštěním poskytne 49 mg béžové pevné látky. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,19 (m, 5H), 7,03 (d, 2H), 6,94 (d, 2H), 5,27 (m, IH), 4,23 (m, 2H), 2,72 (m, 2H), 1,52 (m, 3H), 0,78 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 413,3 (M+H)+, molekulární hmotnost 412,45. HPLC (gradient A):
11,93 min.
C. Ke směsi 5 mg (0,012 mmol) produktu, připraveného v příkladu 65B, dimethylformamidu a triethylaminu se přidá 1,4 mg (0,12 mmol) fenylisokyanátu. Směs se míchá přes noc a produkt se přečistí HPLC. 1H NMR spektrum (CDC13, 300 MHz, ppm): 7,55 (d, 2H), 7,36 (m, 12H), 7,04 (m, IH), 6,34 (d, IH), 5,36 (m, IH), 4,41 (m, IH), 2,78 (m, 2H), 1,39 (m, 3H), 0,91 (m, 6H). Hmotové spektrum (FAB), m/z: 532 (M+H)+, molekulární hmotnost 531,36. HPLC (gradient A): 20,31 min.
Příklad 66
Syntéza BIO-1527
A. K roztoku aminu β-3 (1 ekvivalent) v diehlormethanu se přidá BOC-Pro-OSu (1 ekvivalent). Reakční směs se míchá přes noc při laboratorní teplotě a pak se zředí ethylacetátem. Tento roztok se promyje 5% kyselinou citrónovou (2 x), nasyc vodným roztokem NaHC03 (2 x) a solankou (1 x), vysuší se Na2SO4 a zfiltruje. Odpaření rozpouštědla poskytne surový produkt ve formě bílé pěny. Tento surový produkt se rozpustí v diehlormethanu a přidá se při 0 ’C trifluoroctová kyselina Směs se míchá při laboratorní teplotě 1 hodinu a zahuštěním poskytne amin ve formě jeho trifluoracetátu.
Β. K roztoku 2-methylfenylureidofenyloctové kyseliny v dimethylformamidu se přidá HOBt (1,5 ekvivalentu) a EDC (1,2 ekvivalentu). Pak se přidá volný amin, připravený v příkladu 66A, a směs se míchá přes noc při laboratorní
134 teplotě. Výsledná směs se zředí ethylacetátem a promyje se 5% roztokem kyseliny citrónové (2 x), nasyc. vodným roztokem NaHCO3 (2 x) a solankou (1 x). Po vysušení Na2SO4, filtraci a odpaření rozpouštědla se získá methylester. Ten se rozpustí v methanolu a podrobí se reakci s vodným 1 N LiOH. Konečným produktem je karboxylová kyselina, která se vyčistí HPLC. Frakce, obsahující čistý produkt, poskytnou sloučeninu BIO-1527. Hmotové spektrum (FAB), m/z: 573 (M+H), 595 (M+Na).
Příklad 67
Inhibice adhese k BSA-CS1, závislé na VLA-4
Tento test se používá pro určení inhibiční účinnosti sloučenin podle tohoto vynálezu vůči adhesi, závislé na VLA-4.
1. Konjugace CS1 s BSA
BSA-SMCC (Pierce Chemical, Rockford, II, č. kat. 77115) se rozpustí ve vodě na koncentraci 10 mg/ml. Peptid [SEQ ID No: 4]: Cys-Tyr-Asp-Glu-Leu-Pro-Gln-Leu-Val-Thr-Leu-Pro-His-ProAsn-Leu-His-Gly-Pro-Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr (peptid Cys-Tyr-CSl), který byl syntetizován konvenčním postupem na pevné fázi a přečištěn HPLC, se rozpustí v 10 mM HEPES, pH 5, 50 mM NaCl a 0,1 mM EDTA, rovněž na koncentraci 10 mg/ml. Pak se smíchá 500 μΐ BSA-SMCC, 250 μΐ peptidu Cys-Tyr-CSl a 75 μΐ 1 mM HEPES, pH 7,5 a konjugační reakce se nechá běžet 30 minut. Reakce se zastaví přídavkem 1 μΐ β-merkaptoethanolu a vzorky se analyzují. Konjugace se určuje pomocí SDS-PAGE. Tato reakce poskytuje konjugát několika molekul peptidu Cys-Tyr-CSl s jednou molekulou BSA.
2. Příprava desek pro adhesní test
Použije se polystyrénová deska Linbro titertek s 96 jamkami s plochým dnem (Flow Laboratories, Maclean, VA, č. kat.
135
76-231-05). Jamky se pokryjí 100 μΐ výšepopsaného roztoku BSA-CS1, zředěného na koncentraci 1 μ9/πι1 v 0,05 M NaHC03 (15 mM NaHC03, 35 mM Na2CO3), pH 9,2. Některé jamky se nepokryjí CSl, aby se určila nespecifická vazba buněk (NSB). Deska se pak inkubuje při 4 “C přes noc.
Po této inkubaci se obsah jamek odstraní tak, že se deska obrátí a blotuje se. Všechny jamky se pak blokují 100 μΐ 1% BSA v PBS, 0,02% NaN3, alespoň jednu hodinu při laboratorní teplotě.
3. Příprava fluorescenčně značených buněk Ramos
Buňky Ramos se kultivují, přechovávají a značí v živném prostředí RPMI 1640, obsahujícím 1 % BSA. Těsně před testem se ke kultuře buněk Ramos (4 χ 106 buněk/ml) přidá acetoxymethylester 2',7'-bis-(2-karboxyethyl)-5- (a -6-) -karboxyfluoresceinu (BCECF-AM; Molecular Probes lne., Eugene, Oregon, č. kat. B-1150) aby jeho konečná koncentrace byla 2 μΜ. Buňky se pak inkubují 20 minut při 37 °C.
Po značení se buňky promyjí dvakrát pufrem, ve kterém se test provádí (24 mM TRIS, 137 mM NaCl, 2,7 mM KC1, pH 7,4, obsahující 0,1 % BSA a 2 mM glukosu), aby se odstranily kationty, eventuelně přítomné v živném prostředí. Buňky se pak znovu suspendují v uvedeném testačním pufru na koncentraci 4 χ 106 buněk/ml a přidá se 2 mM MnCl2, aby se zvýšila koncentrace VLA-4 na povrchu buněk.
4. Vlastní provedení testu
Těsně před začátkem testu se odstraní blokační roztok BSA z 96jamkové desky a jamky se promyjí 100 μΐ testačního pufru. Pak se přidá do každé jamky 25 μΐ roztoku testované sloučeniny v dvojnásobné koncentraci, než je žádaná konečná koncentrace, a 25 μΐ značených buněk Ramos. Konečná koncentrace sloučeniny se volí v rozsahu předpokládaných
136 hodnot IC50, obvykle mezi 0,01 nM a 10 μΜ. Pro každou koncentraci sloučeniny se provede test třikrát. Sloučenina a buňky se inkubují 30 minut při laboratorní teplotě.
Pak se obsah jamek vyprázdní a jamky se čtyřikrát promyjí testačním pufrem. Světelným mikroskopem se pak prohlédnou jamky pro určení NSB. Pokud je v nich vázáno více než několik buněk, deska se ještě jednou promyje, aby se odstranily přebytečné nespecificky vázané buňky.
Vazba buněk Ramos k jamkách, potaženým peptidem CS1, se měří přidáním 100 μΐ testačního pufru do každé jamky a vyhodnocením fluorescence v přístroji Millipore Cytofluor 2300 System Platereader Set při 485 nm excitace a 530 nm emise. Vazba se vyjadřuje jako IC5Qt.j. koncentrace inhibitoru, při které se vazba zmenší na 50 % kontrolního pokusu. Procenta vazby se vypočtou podle vzorce:
[(ϊ^ΤΒ ~ FNS^ ~ Fj “ FNS^ / C (Ftb - Fjq-g) x 100 = % vazby, kde FTB je celková fluorescence v jamkách obsahujících CS1 bez přidání inhibitoru, fNS fluorescence v jamkách bez CS1 a Fj je fluorescence v jamkách, obsahujích inhibitor podle vynálezu.
Výšeuvedeným způsobem byly testovány sloučeniny podle vynálezu. Hodnoty IC50 pro každou z těchto sloučenin jsou uvedeny v následující tabulce.
Tabulka
BIO # ic50 BIO # o O BIO # icM BIO * ic,0
1002 nd 1064 B 1122 C 1185 A
1003 nd 1065 B 1123 c 1186 B
137
BIO 9 ICM BIO 9 •cM BIO 9 icM BIO 9 ICM
1004 C 1066 nd 1124 nd 1187 C
1005 C 1067 8 1125 nd 1188 C
1006 B 1068 8 1126 c 1189 c
1007 C 1069 A 1127 B 1190 A
1008 C 1070 B 1128 B 1191 B
1009 C 1072 A 1129 B 1192 A
1010 B 1073 B 1130 B 1193 B
1011 C 1074 B 1131 B 1194 A
1013 nd 1075 B 1132 B 1195 A
1014 c 1076 B 1133 B 1196 A
1015 B 1077 B 1134 B 1197 A
1016 C 1078 B 1135 A 1198 C
1017 C 1079 A 1136 B 1199 B
1018 C 1080 B 1137 nd 1200 B
1020 C 1081 B 1138 B 1201 B
1021 B 1082 C 1139 B 1206 A
1022 C 1083 nd 1140 nd 1207 C
1023 B 1084 nd 1141 nd 1208 B
1024 C 1085 c 1142 nd 1209 C
1025 nd 1086 B 1143 c 1210 A
1026 c 1087 C 1144 B 1212 A
1027 c 1088 A 1145 B 1214 B
1028 B 1089 A 1146 B 1215 C
1029 C 1090 A 1147 B 1216 B
1030 C 1091 B 1148 C 1217 A
1031 C 1092 C 1149 C 1218 8
1032 C 1093 C 1150 C 1219 B
1036 B 1094 C 1152 nd 1220 B
1037 B 1096 C 1153 c 1221 A
1038 C 1097 B 1154 nd 1222 A
1039 B 1098 C 1 1 55 nd 1223 nd
138
BIO » ICM BIO f ICW BIO » ICM BIO » icM
1040 B 1099 C 1156 nd 1224 A
1041 nd 1100 B 1157 c 1225 nd
1042 nd 1101 C 1158 B 1227 nd
1043 nd 1102 nd 1159 C 1238 A
1044 nd 1103 c 1160 B 1245 A
1045 nd 1104 B 1162 nd 1246 A
1046 C 1105 B 1163 B 1248 A
1047 nd 1106 C 1164 B 1270 A
1048 nd 1107 C 1168 B 1282 A
1049 B nd 1108 C 1169 B 1294 A
I 1050 A 1109 C 1170 B 1321 A
1051 nd 1110 B 1173 B 1327 B
1052 B 1111 C 1174 B 1336 A
1053 B 1112 C 1175 B 1360 A
1054 B 1113 c 1176 B 1380 B
1055 A 1114 c 1177 B 1382 A
1056 A 1115 B 1178 B 1390 B
1057 nd 1116 nd 1179 A 1396 B
1058 nd 1117 c 1180 B 1400 A
1060 B 1119 nd 1181 B 1272 A
1063 B 1120 nd 1182 B 1311 B
1319 B 1345 A 1347 A 1358 6
1361 A 1388 A 1393 A 1429 B
1444 B 1474 B 1475 B 1490 A
1515 A 1525 B 1526 B 1536 A
1594 B 1648 B 1655 B 1721 B
1725 nd 1726 nd 1727 nd 1728 nd
1729 nd 1730 nd 1731 nd 1732 nd
Použité zkratky: A - < 50 nM, B - 50 nm - 10 μΜ, C - > 10 μΜ, nd - neurčeno. Všechny testované sloučeniny v této tabulce mají IC5Q < 1 mM.
139
Příklad 68
Přímá vazba buněk, nesoucích VLA-4, na VCAM-IgG
Dále se testuje schopnost sloučenin podle vynálezu inhibovat vazbu mezi VCAM a VLA-4 za použití konjugátu VCAM-IgG s alkalickou fosfatázou (AP). V testu se používá Millipore Multiscreen Assay System (Millipore Corp., Bedford, MA), aby se dosáhlo důkladného promytí buněk.
1. Příprava konjugátů VCAM-IgG-AP
Sestavení expresního vektoru VCAM 2D-IgG, transfekce CHO buněk s těmito konstrukty a čištění výsledných produktů exprese je popsáno v PCT publikaci WO 90/13300.
Na 1,2 ml čištěného VCAM 2D-IgG (5 mg/ml v 10 mM HEPES, pH 7,5) se působí 44 μΐ Trautova činidla (2-iminothiolan, 20 mg/ml ve vodě, Pierce Chemical, Rockford, IL.) 30 minut za laboratorní teploty. Vzorek se odsolí na koloně Sephadexu G-25 (15 ml), ekvilibrovaného 100 mM NaCl a 10 mM MES, pH 5,0. Jímají se jednomililitrové frakce a měří se jejich absorbance při 280 nm. Dvě frakce s nejvyšší absorbancí se spoj i.
ml roztoku alkalické fosfatázy z telecích střev (19 mg/ml, Pierce Chemical, Rockford, IL) se nechá reagovat 35 minut při laboratorní teplotě se 100 μΐ sulfo-SMCC (30 mg/ml ve vodě) a 100 μΐ 1 M HEPES, pH 7,5. Reakční směs se odsolí na koloně Sephadexu G-25 (12 ml), ekvilibrovaného 150 mM NaCl a 10 mM HEPES, pH 6,0. Jímají se 1 ml frakce a měří se jejich absorbance při 280 nm. Dvě frakce s nejvyšší absorbancí se spojí a uchovávají v ledu.
Adukt alkalická fosfatáza-SMCC a adukt VCAM 2D-IgG-iminothiolan se spojí v molárním poměru 2 : 1 v Tris-HCl, pH 7,5, inkubací 30 minut při laboratorní teplotě. Rozsah této konjugace se určí pomocí SDS-PAGE. Konjugáty se stabilizují přídavkem 2 mM MgCl2 a 0,25 nM ZnCl2 a uchovávají se při 4 ’C.
140
2. Vlastní test
Filtrační deska s 96 jamkami se nejprve blokuje přidáním 275 μΐ PBS, obsahujícího 0,1 % Tweenu 20 a 2 % BSA (blokační pufr) do každé jamky a následnou inkubací 1 hodinu při laboratorní teplotě. Deska se pak připojí ke zdroji vakua a blokační pufr se odsaje spodem porézních jamek do odpadu. Jamky se pak třikrát promyjí 200 - 250 μΐ pufrovaného (Tris) solného roztoku, obsahujícího 0,1 % BSA, 2 mM glukosu a 1 mM HEPES, pH 7,5 (testační pufr), aby se vymyl veškerý zbývající blokační pufr. Znovu se vše odsaje a deska se zespodu vysuší papírovým ubrouskem, aby se odstranil pufr ze spodní strany desky.
Pak se připraví zásobní roztok VCAM-IgG-AP (4 μΐ/ml v testovém pufru) a zfiltruje se přes 0,2 μ filtr s malou zádrží proteinů, spojený s injekční stříkačkou (Gelman Sciences, Ann Arbor, MI, č. 4454). Roztok se zředí testačním pufrem v poměru 1 : 10 a 25 μΐ takto připraveného roztoku se přidá do každé jamky na promyté desce.
Sloučenina, testovaná na ihibici adhese, se rozpustí v testovém pufru na roztok o dvojnásobné koncentraci než je koncentrace žádaná a 25 μΐ tohoto roztoku se přidá do jamky. Pro každou zvolenou koncentraci sloučeniny se test provádí souběžně ve třech jamkách. Konečné koncentrace se pohybují od 0,01 nM do 10 μΜ. Do kontrolních jamek pro určení celkové vazby a nespecifické vazby se nakape 25 μΐ testačního pufru bez testovaného inhibitoru. Jamky pro určení celkové vazby obsahují buňky VCAM-IgG-AP v testačním pufru, jamky pro nespecifickou vazbu obsahují pouze VCAM-IgG-AP v testačním pufru.
Buňky Jurkat se promyjí jednou v testačním pufru, aby se odstranilo živné prostředí a znovu se suspendují na koncentraci 8 x 10°/ml v testačním pufru, který obsahuje 2 mM MnCl2· 50 μΐ této suspenze buněk Jurkat se přidá do všech
141 jamek, kromě jamek pro určení nespecifické vazby, do kterých se přidá 50 μΐ testačního pufru, aby konečný objem byl 100 μΐ ve všech jamkách. Obsah jamek se jemně promíchá poklepáním na strany desky. Deska se pak nechá v klidu inkubovat 60 minut při laboratorní teplotě.
Po této době se deska připojí ke zdroji vakua a obsah jamek se odsaje. Do každé jamky se opatrně přidá 100 μΐ testačníhé pufru, obsahujícího 1 mM MnCl2 (promývací pufr) tak, aby se nerozvířily buňky na dně. Pufr se odsaje a jamky se znovu promyjí 150 μΐ promývacího pufru. Ten se znovu odsaje a spodek desky se vysuší papírovým ubrouskem.
Dále se připraví roztok 4-nitrofenylfosfátu (10 mg/ml) v 0,1 M glycinu a 1 mM ZnCl2, pH 10,5 (substrátový pufr) a 100 μΐ tohoto roztoku se okamžitě přidá do každé jamky. Deska se inkubuje 30 minut při laboratorní teplotě, aby proběhla kolorimetrická reakce. Pak se reakce zastaví přidáním 100 μΐ 3 N NaOH do každé jamky.
Obsah 96jamkové filtrační desky se pak odsaje přímo do 96jamkové desky, jejíž jamky mají ploché dno. Množství VCAM-konjugátu vázaného na buňky v jednotlivých jamkách se pak určí čtením absorbancí při 405 nm. Procenta vazby se vypočtou podle vzorce:
[(Arpg ~ ^NS) — (Al — ANS)J Z C(— ANS100 = % vazby, kde Atb je absorbance při 405 nm v jamkách obsahujících CSl bez přidání inhibitoru, ANS je absorbance při 405 nm v jamkách bez CSl a Aj je absorbance při 405 nm v jamkách, obsahujích inhibitor podle vynálezu.
Výšeuvedeným způsobem byly testovány sloučeniny podle vynálezu. Hodnoty ICg0 jsou srovnatelné s hodnotami, získanými v testu vazby CSl, popsaném v předchozím příkladu, i když některé sloučeniny vykazovaly až lOkrát vyšší vazbu než v předešlém testu.
142
Příklad 69
Inhibice kontaktní hypersenzitivity u myší
Myší samice Balb/c (váha 20 g, Jackson Laboratories, Bar Harbour, ME) se anestetizují pentobarbitalem sodným (90 mg/kg, i.p.). Na břiše se hladce vyholí pruh o velikosti 3 cm2 a do kůže se vetře 70% ethanol. Pak se aplikuje 25 μΐ 0,5% DNFB ve 4 : 1 (objemové díly) směsi acetonu a olivového oleje na holou břišní kůži. Kůže se lehce poškrabe špičkou aplikační pipety, aby se vyvolal mírný zánět. Dvacet čtyři hodiny po této počáteční sensitizaci se provede nová sensitizace aplikací 25 μΐ 0,5% DNFB na totéž místo na břiše, které se opět lehce poškrabe špičkou pipety. Tato druhá sensitizace se provede na znehybněné neanestetizované myši.
Pátý den (120 hodin po počáteční sensitizaci) se myš anestetizuje i.p. podáním směsi 90 : 10 mg/kg ketamin : xylazin a aplikuje se subiritantní dávka (10 μΐ) 0,2% DNFB na dorsální povrch levého ucha. Na pravé ucho se aplikuje podobným způsobem směs 4 : 1 (objemové díly) acetonu a olivového oleje.
Čtyři hodiny po tomto zásahu, vyvolávajícím imunitní reakci, se subkutánní injekcí aplikují v různých koncentracích testované inhibitory podle vynálezu, a to v 100 μΐ 0,5% natriumfosfátového pufru, pH 8,8, se 3 objemovými procenty DMSO. Při nejvyšších testovaných koncentracích některé méně rozpustné inhibitory vyžadují někdy přídavek až 30 % DMSO.
Pro každý test se použije 8 myší. Jako součást testů sloučenin podle vynálezu se pro srovnání testují skupiny positivních kontrol (PS2 protilátky proti myšímu VLA-4, 8 mg/kg, i.v.) a negativních kontrol (fysiologický roztok s fosfítovým pufrem, PBS, 100 μΐ i.v.; DMSO v PBS, 100 μΐ s.c.).
Dvacet čtyři hodiny po zásahu se myši znovu anestetizují směsí ketaminu a xylazinu a mikrometrem se změří tlouštka
143 obou uší s přesností na 10-4 inche. Pro každou myš se jako velikost odpovědi bere rozdíl mezi tlouštkou kontrolního ucha a ucha, na které byl aplikován DNFB. Typické odpovědi jsou 65 - 75 χ 10-4 inchů. Velikost inhibice odpovědi se vyhodnotí porovnáním skupin, kterým byla aplikována testovaná sloučenina, s jejich negativními kontrolními skupinami. Procenta inhibice se vypočtou podle vzorce:
(průměrný otok ucha - (průměrný otok ucha v negat. kontr.skupině) v testované skupině) x 100 průměrný otok ucha v negativní kontrolní skupině
Statistická významnost rozdílu mezi testovanými skupinami se vyhodnotí s použitím jednostranné analyzy rozptylu a následným výpočtem Tukey-Kramer Honestly Significant Difference (JMP, SAS Institute) s použitím p < 0,05.
Inhibitory podle tohoto vynálezu způsobují statisticky významné zmenšení otoku ucha u myší, kterým byl aplikován DNFB, ve srovnání s kontrolními zvířaty.
Příklad 70
Inhibice pozdní fáze citlivosti dýchacích cest, vyvolané antigenem Ascaris u alergických ovcí
V těchto studiích se používá ovcí, u kterých se dříve pozorovala raná nebo pozdní bronchiální odpověď na antigen Ascaris suum. Experimentální provedení je popsáno v práci W.M. Abrahama a spol., J. Clin. Invest., 93, str. 776 - 87 (1994), s tím rozdílem, že VLA-4-inhibitory podle tohoto vynálezu se podávají zvířatům rozpuštěné ve 3 - 4 ml 50% vodného ethanolu a aplikují se ve formě aerosolového spreje.
Výsledky ukazují, že všechny VLA-4-inhibitory podle tohoto vynálezu inhibují odpověď dýchacích cest spojené s podáním
144 antigenu Ascaris suum.
V této patentové přihlášce je ukázáno mnoho příkladů provedení tohoto vynálezu a je zřejmé, že uvedené základní schéma může být měněno tak, aby poskytlo další sloučeniny a metody, které využívají sloučeniny podle vynálezu. Rozsah tohoto vynálezu je proto definován nížeuvedenými nároky a nikoliv jenom specielními případy, uvedenými zde jako příklady.
145
Charakteristika sekvencí
(2) Informace pro SEQ ID No:l:
(i) Sekvenční charakteristiky: A. Délka: 8 aminokyselin B. Typ: aminokyselina C. Počet řetězců: jeden D. Topologie: lineární
(ii) Typ molekuly: peptid
(iii) Hypotetický: ne
(iv) Retro: ne
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO:1 Glu Ile Leu Asp Val Pro Ser 1 5
(2) Informace pro SEQ ID NO:2:
(i) Sekvenční charakteristiky: A. Délka: 5 aminokyselin B. Typ: aminokyselina C. Počet řetězců: jeden D. Topologie: lineární
(ii) Typ molekuly: peptid
(iii) Hypotetický: ne
(iv) Retro: ne
(xi) Popis sekvence: SEQ ID NO Glu Ile Leu Asp Val 1 5
146

Claims (33)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    147
    1. Inhibitory adhese buněk obecného vzorce I (I) kde
    X je zvoleno ze skupiny substituentů -CO2H, -PO~3H, -SO2R5, -so3h, -opo3h, -co2r4 a -c(o)n(r4)2, ve kterých R5 je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, arylovou skupinu, alkylovou skupinu, substituovanou arylovou skupinou a alkenylovou nebo alkinylovou skupinu, substituovanou arylovou skupinou;
    Y je zvoleno ze skupiny obsahující skupiny -C0-, -S02~ a —PO2-;
    R3 je substituent ze skupiny, obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu s přikondenzovaným arylem, cykloalkenylovou skupinu, arylovou skupinu, aralkylovou skupinu, alkenylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkinylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou cykloalkylovou skupinou, cykloalkylovou skupinu substituovanou
    148 cykloalkenylovou skupinou, biarylovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkenoxylovou skupinu, alkinoxylovou skupinu, aralkoxylovou skupinu, alkenoxylovou nebo alkinoxylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkylaminovou skupinu, alkenylaminovou skupinu, alkinylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkenylaminovou nebo alkinylaminovou skupinu substituovanou arylskupinou, aryloxylovou skupinu, arylaminovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou N-alkylureidovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N-arylureidovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylkarbonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aminokarbonylovou skupinou, heterocyklylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou heterocyklylovou skupinou, aminovou skupinu substituovanou heterocyklylovou skupinou, aralkylovou skupinu substituovanou karboxyalkylovou skupinou, arylovou skupinu s přikondenzovaným oxokarbocyklem a heterocyklylalkylovou skupinu;
    R2 je substituent ze skupiny obsahující atom vodíku, arylovou skupinu, alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, a skupiny R2 a R3 spolu s atomy, ke kterým jsou připojeny, mohou tvořit heterocyklický kruh;
    R3 je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, aralkylovou skupinu, alkenylovou skupinu substituovanou arylskupinou, alkinylovou skupinu substituovanou arylskupinou, alkylovou skupinu substituovanou hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aralkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou aryl-substituovanou alkyloxykarbonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou thiolovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylsulfonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou hydroxy-substituovanou alkylthioskupinou, alkylovou skupinu substituovanou thioalkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou acylaminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylsulfonylaminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou arylsulfonylaminoskupinou, morfolinoalkylovou skupinu, thiomorfolinoalkylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou morfolinokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou thiomorfolinokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N-(alkyl, alkenyl nebo alkinyl)aminokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N,N-(dialkyl, dialkenyl, dialkinyl nebo alkyl,alkenyl)aminokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou karboxylovou skupinou, acylaminoalkylovou skupinu substituovanou dialkylaminoskupinou, a postranní řetězce aminokyselin argininu, asparaginu, glutaminu,
    S-methylcysteinu, methioninu a jeho odpovídajícího sulfoxidového a sulfonového derivátu, glycinu, leucinu, isoleucinu, allo-isoleucinu, t-leucinu, norleucinu, fenylalaninu, tyrosinu, tryptofanu, prolinu, alaninu, ornithinu, histidinu, glutaminu, valinu, threoninu, šeřinu, kyseliny asparagové, beta-kyanalaninu a allothreoninu; přičemž R2 a R3 spolu s atomy, ke kterým jsou připojeny, mohou tvořit heterocyklus;
    R4 je substituent ze skupiny obsahující arylovou skupinu, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, atom vodíku, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylkarbonylovou skupinu, aminokarbonylovou skupinu, amidovou skupinu, mono- nebo dialkylaminokarbonylovou skupinu, mono- nebo
    150 diarylaminokarbonylovou skupinu, alkylarylaminokarbonylovou skupinu, diarylaminokarbonylovou skupinu, mono- nebo diacylaminokarbonylovou skupinu, aromatickou nebo alifatickou acylskupinu, alkylovou skupinu podmíněně substituovanou substituenty ze skupiny obsahující aminovou skupinu, karboxylovou skupinu, hydroxylovou skupinu, merkaptoskupinu, mono- nebo dialkylaminovou skupinu, mono- nebo diarylaminovou skupinu, alkylarylaminovou skupinu, diarylaminovou skupinu, mono- nebo diacylaminovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkenoxylovou skupinu, aryloxylovou skupinu, thioalkoxylovou skupinu, thioalkenoxylovou skupinu, thioalkinoxylovou skupinu, thioaryloxylovou skupinu a heterocyklylovou skupinu; a n j e 0, 1 nebo 2;
    a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty.
  2. 2. Sloučeniny podle nároku 1 obecného vzorce I .X *2 0 (Xn
    H
    R3 kde
    X je zvoleno ze skupiny substituentů -CO2H, -PO-3H, -SO2R5, -so3h a opo“3h, ve kterých R5 je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, arylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou a alkenylovou nebo alkinylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou;
    151
    Y je zvoleno ze skupiny obsahující skupiny -CO-, -SO2~ a -PO2-;
    je substituent ze skupiny, obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu s přikondenzovaným arylem, cykloalkenylovou skupinu, arylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou (aralkylovou skupinu), alkenylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkinylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou cykloalkylovou skupinou, cykloalkylovou skupinu substituovanou cykloalkenylovou skupinou, biarylovou skupinu, alkoxylovou skupinu, alkenoxylovou skupinu, alkinoxylovou skupinu, alkoxylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou (aralkoxylovou skupinu), alkenoxylovou nebo alkinoxylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkylaminovou skupinu, alkenylaminovou skupinu, alkinylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu substituovanou arylovou skupinou, alkenylaminovou nebo alkinylaminovou skupinu substituovanou arylskupinou, aryloxylovou skupinu, arylaminovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou N-alkylureidovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N-arylureidovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylkarbonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aminokarbonylovou skupinou;
    R2 je substituent ze skupiny obsahující atom vodíku, arylovou skupinu, alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu nebo alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou;
    R3 je substituent ze skupiny obsahující alkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, aralkylovou skupinu, alkenylovou skupinu substituovanou arylskupinou, alkinylovou skupinu substituovanou arylskupinou, alkylovou skupinu
    152 substituovanou hydroxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aralkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou aminoskupinou, alkylovou skupinu substituovanou aryl-substituovanou alkyloxykarbonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou thiolovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylsulfonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou hydroxy-substituovanou alkylthioskupinou, alkylovou skupinu substituovanou thioalkoxylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou acylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou alkylsulfonylaminovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou arylsulfonylaminovou skupinou, morfolinoalkylovou skupinu, thiomorfolinoalkylovou skupinu, alkylovou skupinu substituovanou morfolinokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou thiomorfolinokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N-(alkyl, aikenyl nebo alkinyl)aminokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou N,N-(dialkyl, dialkenyl, dialkinyl nebo alkyl,aikenyl)aminokarbonylovou skupinou, alkylovou skupinu substituovanou karboxylovou skupinou, a postranní řetězce aminokyselin argininu, asparaginu, glutaminu,
    S-methylcysteinu, methioninu a jeho odpovídajícího sulfoxidového a sulfonového derivátu, glycinu, leucinu, isoleucinu, allo-isoleucinu, t-leucinu, norleucinu, fenylalaninu, tyrosinu, tryptofanu, prolinu, alaninu, ornithinu, histidinu, glutaminu, valinu, threoninu, šeřinu, kyseliny asparagové, beta-kyanalaninu a allothreoninu;
    R4 je substituent ze skupiny obsahující arylovou skupinu, alkylovou skupinu, cykloalkylovou skupinu, alkenylovou skupinu, cykloalkenylovou skupinu, alkinylovou skupinu a alkylovou skupinu substituovanou arylovou skupinou; a n j e 0, 1 nebo 2;
    153 a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty.
  3. 3. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde X je
    -co2h.
  4. 4. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde Rj je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku substituovaná arylovou skupinou.
  5. 5. Inhibitory adhese buněk podle nároku 4, kde R-^ je arylalkylová skupina para-substituovaná N-Ar'-ureidovou skupinou.
  6. 6. Inhibitory adhese buněk podle nároku 5, kde Rj je fenylmethylová skupina para-substituovaná N-Ar'-ureidovou skupinou.
  7. 7. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde Rj je substituent ze skupiny obsahující benzyloxylovou skupinu, kyanmethylovou skupinu, cyklohexylmethylovou skupinu, methylovou skupinu, n-hexylovou skupinu, N-fenylaminovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylkarbonylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, t-butoxylovou skupinu, t-butylaminovou skupinu, 1-indanylovou skupinu,
    1- naftylmethylovou skupinu, 1-fenylcyklopropylovou skupinu,
    2- (4-hydroxyfenyl)ethylovou skupinu,
    2-(benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    2- (bis(fenylsulfonyl)amino)fenylmethylovou skupinu,
    2-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    2-aminofenylmethylovou skupinu, 2-benzamidofenylmethylovou skupinu, 2-brom-4-hydroxy-5-methoxyfenylmethylovou skupinu,
    2-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 2-naftylmethylovou skupinu,
    2-fenylethylovou skupinu, 2-pyridylmethylovou skupinu,
    2-chinolinylovou skupinu,
    154
    2- [4-(Ν'-fenylureido)fenyl]ethylovou skupinu,
    3- (benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    3-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- (N'-fenylureido)propylovou skupinu,
    3-(fenylsulfonamido)fenylmethylovou skupinu,
    3-acetamidofenylmethylovou skupinu, 3-aminofenylmethylovou skupinu, 3-benzamidofenylmethylovou skupinu,
    3-hydroxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 3-indolylovou skupinu,
    3-methoxy-4-(N1-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3-methoxy-4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 3-methyl-4-(Ν'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 3-nitrofenylmethylovou skupinu, 3-fenylpropylovou skupinu,
    3- pyridylmethylovou skupinu,
    4- (2-aminobenzamido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(benzamido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(morfolinokarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-chlorfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-(2-chlorfenyl)ureido)-3-methoxyfenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-ethylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-isopropylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methoxyfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methyl-3-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-nitrofenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-t-butylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-(2-thiazolyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-(3-chlorfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-(3-methoxyfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(3-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(4-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-(3-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-benzylureido)fenylmethylovou skupinu,
    155
    4-(Ν'-cyklohexylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-ethylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-isopropylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-methylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-p-toluylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-fenylureido)fenylovou skupinu,
    4-(N'-fenylureido)fenylaminovou skupinu,
    4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-t-butylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(fenylaminokarbonylaminomethyl)fenylovou skupinu,
    4-(fenylsulfonamido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(t-butoxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-acetamidofenylmethylovou skupinu, 4-aminofenylaminovou skupinu, 4-aminofenylmethylovou skupinu,
    4-benzamidofenylmethylovou skupinu, 4-chlorfenylmethylovou skupinu, 4-hydroxy-3-nitrofenylmethylovou skupinu,
    4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 4-methoxyfenylmethylovou skupinu, 4-nitrofenylaminovou skupinu,
    4-nitrofenylmethylovou skupinu,
    4-fenacetamidofenylmethylovou skupinu,
    4-fenylfenylmethylovou skupinu, 4-pyridylmethylovou skupinu, 4-trifluormethylfenylmethylovou skupinu,
    4-[2-(N'-methylureido)benzamido]fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (N'-fenyl-N''-methylguanidino)fenylmethylovou skupinu,
    5- (N'-fenylureido)pentylovou skupinu,
    5- (N'-t-butylureido)pentylovou skupinu,
    2,2-dimethylpropylovou skupinu, 2,2-difenylmethylovou skupinu, 2,3-benzocyklobutylovou skupinu,
    3.4- dihydroxyfenylmethylovou skupinu,
    3.5- dimethoxy-4-hydroxyfenylmethylovou skupinu,
    4-(1-indolkarboxylamino)fenylmethylovou skupinu,
    6- methoxy-5-(N'-(2-methylfenyl)ureido)-2-pyridylmethylovou skupinu, 4-(1,3-benzoxazol-2-ylamino)fenylmethylovou skupinu 4-(1,3-imidazol-2-ylamino)fenylmethylovou skupinu,
    156
    3-karboxy-l-fenylpropylovou skupinu,
    3-hydroxy-4-(2-methylfenyl)ureidofenylmethylovou skupinu,
    3- hydroxy-4-(2-chlorfenyl)ureidofenylmethylovou skupinu,
    6-(fenylureido)heptylovou skupinu, 4-(fenylureido)butylovou skupinu, 2-thienylmethylovou skupinu,
    4- (2,6-dimethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-hydroxyfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3-butoxy-4-(2-methylfenyl)ureidofenylmethylovou skupinu,
    3- butoxy-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (N-2-pyrazinylureido)fenylmethylovou skupinu,
    2- fenylethinylovou skupinu,
    5- fenylureido-2-pyridylmethylovou skupinu,
    5-(2-methylfenylureido)-2-pyridylmethylovou skupinu,
    4-(3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- nitro-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- acylamino-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (Ν,N-fenyl,methylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(3-hydroxyfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-acetylaminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-propionylaminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(3-benzyloxy-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(indolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    2- (4-(fenylureido)fenyl)oxiranylovou skupinu,
    4-(N,N'-fenyl,methylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-dimethylaminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-benzimidazolylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4—(2-benzoxazolylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-benzthiazolylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(tetrahydrochinolinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 1,3-dimethyl-3-(fenylureido)butylovou skupinu, hydroxyethylthiomethylovou skupinu,
    4-(fenylureido)fenylethenylovou skupinu,
    3- amino-4-(fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (4-hydroxyfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    157
    4-(2-aminofenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4 —((2-methylureido)fenylureido)fenylovou skupinu,
    4-(2-hydroxyfenylureido)-3-methoxyfenylmethylovou skupinu,
    4-(2-methylsulfonylmethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(2-methylfenylureido)tetrahydro-2-pyrimidonylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(fenylureido)-2-pyridylmethylovou skupinu, 4-(2-trifluormethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(2,4(1H,3H)-chinazolindionyl)fenylmethylovou skupinu, 4-thioureidofenylmethylovou skupinu,
    4-(fenylthioureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(pyrrolidinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-benzoxazolinonylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(benzyloxyureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(thiazolidinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 4-benzoylureidofenylmethylovou skupinu, hydroxyureidofenylmethylovou skupinu,
    Ν',Ν'-methyl,hydroxyureidofenylmethylovou skupinu,
    4-(N1-allylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(3-pyrrolidinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(1-pyrrolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-pyrrolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(propylureido)fenyImethylovou skupinu,
    4-(methoxyureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(dimethylureido)fenyImethylovou skupinu,
    4-(2-chinazolinylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-furanoylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-hydroxy-6-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-pyridylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(3-hydroxy-2-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(3-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(4-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-chinolinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(isochinolinylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    158
    4-(2,3-dimethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2,5-dimethylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-methyl-4-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2-methyl-3-fluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- karboxy-3-fenylpropylovou skupinu,
    4- (5-hydroxy-2-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(4-hydroxy-2-methylfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(2,4-difluorfenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- dibenzofuranylkarbonylovou skupinu,
    4- (fenoxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    3- fenylureidopropylovou skupinu,
    4- (fenylaminokarbonyloxy)fenylmethylovou skupinu,
    4-cinnamoylfenylmethylovou skupinu, dibenzofuranylmethylovou skupinu, 4-(2-methylfenylaminokarbonyloxy)fenylmethylovou skupinu, (methylfenylureido)fenylaminovou skupinu,
    4-(3-indolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(fenylaminokarbonyl)fenylmethylovou skupinu,
    4-fenylalkinylfenylmethylovou skupinu,
    4- (3-pyrrolylkarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    5- nitrobenzofuran-2-ylovou skupinu,
    5-(2-methylfenylureido)benzofuran-2-ylovou skupinu,
    3- karboxy-3-fenylpropylovou skupinu,
    2-(3-pyridyl)thiazol-4-ylovou skupinu,
    2-(4-pyridyl)thiazol-4-ylovou skupinu,
    2- oxo-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]furan-3-ylovou skupinu,
    4- oxo-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]furan-3-ylovou skupinu,
    3- methoxy-4—(fenylkarbamoyloxy)fenylmethylovou skupinu,
    5- aminobenzofuran-2-ylovou skupinu, benzilylaminofenylmethylovou skupinu a 4-[N-2-karboxyethyl-l-(1,3-benzodioxolyl-5-yl)amino-N-leucinylacetamidylfenylureido]fenylmethylovou skupinu.
  8. 8. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde R-^ je substituent ze skupiny obsahující benzyloxylovou skupinu,
    159 kyanmethylovou skupinu, cyklohexylmethylovou skupinu, methylovou skupinu, n-hexylovou skupinu, N-fenylaminovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylkarbonylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, t-butoxylovou skupinu, t-butylaminovou skupinu, 1-indanylovou skupinu,
    1- naftylmethylovou skupinu, 1-fenylcyklopropylovou skupinu,
    2- (4-hydroxyfenyl)ethylovou skupinu,
    2-(benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    2-(bis(fenylsulfonyl)amino)fenylmethylovou skupinu,
    2-(N1-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    2-aminofenylmethylovou skupinu, 2-benzamidofenylmethylovou skupinu, 2-brom-4-hydroxy-5-methoxyfenylmethylovou skupinu,
    2-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 2-naftylmethylovou skupinu,
    2-fenylethylovou skupinu, 2-pyridylmethylovou skupinu,
    2-chinolinylovou skupinu,
    2— [4—(N’-fenylureido)fenyl]ethylovou skupinu,
    3- (benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    3-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- (N'-fenylureido)propylovou skupinu,
    3-(fenylsulfonamido)fenylmethylovou skupinu,
    3-acetamidofenylmethylovou skupinu, 3-aminofenylmethylovou skupinu, 3-benzamidofenylmethylovou skupinu,
    3-hydroxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 3-indolylovou skupinu,
    3-methoxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3-methoxy-4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 3-methyl-4-(Ν'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    3-nitrofenylmethylovou skupinu, 3-fenylpropylovou skupinu,
    3- pyridylmethylovou skupinu,
    4- (2-aminobenzamido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(benzamido)fenylmethylovou skupinu,
    4—(benzyloxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(morfolinokarbonylamino)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-chlorfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-chlorfenyl)ureido)-3-methoxyfenylmethylovou skupinu,
    160
    4-(Ν'-(2-ethylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-isopropylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methoxyfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methyl-3-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-nitrofenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-t-butylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-thiazolyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(3-chlorfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(3-methoxyfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(3-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(4-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(3-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-benzylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(Ν'-cyklohexylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-ethylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-isopropylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-methylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-p-toluylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-fenylureido)fenylovou skupinu,
    4-(N'-fenylureido)fenylaminovou skupinu,
    4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-t-butylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(fenylaminokarbonylaminomethyl)fenylovou skupinu,
    4-(fenylsulfonamido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(t-butoxykarbonylamino)fenylmethylovou skupinu, 4-acetamidofenylmethylovou skupinu, 4-aminofenylaminovou skupinu, 4-aminofenylmethylovou skupinu,
    4-benzamidofenylmethylovou skupinu, 4-chlorfenylmethylovou skupinu, 4-hydroxy-3-nitrofenylmethylovou skupinu, 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 4-methoxyfenylmethylovou skupinu, 4-nitrofenylaminovou skupinu,
    4-nitrofenylmethylovou skupinu, 4-fenacetamidofenylmethylovou skupinu, 4-fenylfenylmethylovou skupinu,
    161
    4-pyridylmethylovou skupinu, 4-trifluormethylfenylmethylovou skupinu, 4-[2-(N'-methylureido)benzamido]fenylmethylovou skupinu, 4-(Ν'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (N'-fenyl-N''-methylguanidino)fenylmethylovou skupinu,
    5- (N'-fenylureido)pentylovou skupinu,
    5- (N'-t-butylureido)pentylovou skupinu,
    2,2-dimethylpropylovou skupinu, 2,2-difenylmethylovou skupinu, 2,3-benzocyklobutylovou skupinu,
    3.4- dihydroxyfenylmethylovou skupinu,
    3.5- dimethoxy-4-hydroxyfenylmethylovou skupinu,
    4-(1-indolkarboxylamino)fenylmethylovou skupinu,
    6- methoxy-5-(N'-(2-methylfenyl)ureido)-2-pyridylmethylovou skupinu, 4-(1,3-benzoxazol-2-ylamino)fenylmethylovou skupinu a 4-(1,3-imidazol-2-ylamino)fenylmethylovou skupinu.
  9. 9. Inhibitory adhese buněk podle nároku 7, kde R^ je substituent ze skupiny obsahující 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (N'-(2-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu,
    3- methoxy-4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 6-methoxy-5-(N'-(2-methylfenyl)ureido)-2-pyridylmethylovou skupinu, 4-(N'-3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-3-methyl-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu a 3-methoxy-4-(N'-2-pyridylureido)fenylmethylovou skupinu.
  10. 10. Inhibitory adhese buněk podle nároku 9, kde Rj je substituent ze skupiny obsahující 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu,
    4- (N'-fenylureido)fenylmethylovou skupinu, 4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 4—(N1-(2-pyridyl)ureido)fenylmethylovou skupinu, 3-methoxy-4-(N'-(2-methylfenyl)ureido)fenylmethylovou skupinu a 6-methoxy-5-(N'162
    -(2-methylfenyl)ureido)-2-pyridylmethylovou skupinu.
  11. 11. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde Y je karbonylová skupina.
  12. 12. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde R2 je atom vodíku, methylová skupina nebo fenacylová skupina.
  13. 13. Inhibitory adhese buněk podle nároku 12, kde R2 je atom vodíku.
  14. 14. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde R3 je substituent ze skupiny obsahující
    2- (methylsulfonyl)ethylovou skupinu,
    3- (hydroxypropylthio)methylovou skupinu,
    4- (methylsulfonylamino)butylovou skupinu,
    4-acetylaminobutylovou skupinu, aminomethylovou skupinu, benzylovou skupinu, butylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, isobutylovou skupinu, methylovou skupinu, methylthiomethylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, propylovou skupinu, 4-(benzyloxykarbonylamino)butylovou skupinu, N,N-(methylpropargyl)aminovou skupinu,
    2-(methylthio)ethylovou skupinu,
    2-(morfolino-N-karbonyl)ethylovou skupinu,
    2-(N-morfolino)ethylovou skupinu,
    2-(Ν,Ν-dimethylamino)ethylovou skupinu, 4-aminobutylovou skupinu, 4-benzyloxyfenylmethylovou skupinu,
    2-benzylthiomethylovou skupinu, t-butoxykarbonylaminomethylovou skupinu, sec-butylovou skupinu, t-butylovou skupinu,
    N,N-dimethylaminokarbonylmethylovou skupinu,
    1,1-ethanoskupinu, 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu, 1-hydroxyethylovou skupinu, 1-methoxyethylovou skupinu, 4-methoxyfenylmethylovou skupinu, benzyloxymethylovou skupinu, benzylthiomethylovou skupinu, karbonylmethylovou skupinu, 2-methylsulfinylethylovou skupinu,
    163 morfolino-N-karbonylmethylovou skupinu, thiomorfolino-N-karbonylmethylovou skupinu, 2-fenylethylovou skupinu, postranní řetězec asparaginu, postranní řetězec prolinu,
    2-thiazolylmethylovou skupinu, 4-(fenylureido)butylovou skupinu, 4-(methylureido)butylovou skupinu, morfolinokarbonylmethylthiomethylovou skupinu, morfolinoethylthiomethylovou skupinu, 3-pyridylmethylovou skupinu, 4-methylsulfonylaminobutylovou skupinu, hydroxymethylthiomethylovou skupinu,
    2-methylsulfonylethylovou skupinu, 4-propionylaminobutylovou skupinu, 4-ethoxykarbonylaminobutylovou skupinu, methoxykarbonylaminobutylovou skupinu, karbomethoxymethylthiomethylovou skupinu,
    4-t-butylureidobutylovou skupinu, karboxymethylthiomethylovou skupinu, dimethylamidomethylthiomethylovou skupinu, acetylaminopropylovou skupinu, 3-methylureidopropylovou skupinu, 4-biotinoylaminobutylovou skupinu, 2-thienylmethylovou skupinu, 3-pyridylmethylovou skupinu, 4-trifluoracetylaminobutylovou skupinu, dimethylaminomethylthiomethylovou skupinu, dimethylaminoethylthiomethylovou skupinu,
    4-(dimethylaminoacetylamino)butylovou skupinu, nebo v kombinaci s R2 tvoří prolinový, azetidinový nebo pipekolinový kruh.
  15. 15. Inhibitory adhese buněk podle nároku 14, kde R3 je substituent ze skupiny obsahující
    2-(methylsulfonyl)ethylovou skupinu, 3-(hydroxypropylthio)methylovou skupinu, 4-(methylsulfonylamino)butylovou skupinu, 4-acetylaminobutylovou skupinu, aminomethylovou skupinu, benzylovou skupinu, butylovou skupinu, hydroxymethylovou skupinu, isobutylovou skupinu, methylovou skupinu, methylthiomethylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, propylovou skupinu, 4-(benzyloxykarbonylamino)butylovou skupinu, N,N-(methylpropargyl)aminovou skupinu,
    164
    2-(methylthio)ethylovou skupinu, 2-(morfolino-N-karbonyl)ethylovou skupinu, 2-(N-morfolino)ethylovou skupinu,
    2-(N,N-dimethylamino)ethylovou skupinu, 4-aminobutylovou skupinu, 4-benzyloxyfenylmethylovou skupinu, 2-benzylthiomethylovou skupinu, t-butoxykarbonylaminomethylovou skupinu, sec-butylovou skupinu, t-butylovou skupinu,
    Ν,N-dimethylaminokarbonylmethylovou skupinu,
    1,1-ethanoskupinu, 4-hydroxyfenylmethylovou skupinu,
    1- hydroxyethylovou skupinu, 1-methoxyethylovou skupinu, 4-methoxyfenylmethylovou skupinu, benzyloxymethylovou skupinu, benzylthiomethylovou skupinu, karbonylmethylovou skupinu, 2-methylsulfinylethylovou skupinu, morfolino-N-karbonylmethylovou skupinu, thiomorfolino-N-karbonylmethylovou skupinu, 2-fenylethylovou skupinu, postranní řetězec asparaginu, postranní řetězec prolinu a 2-thiazolylmethylovou skupinu.
  16. 16. Inhibitory adhese buněk podle nároku 14, kde R3 je substituent ze skupiny obsahující isobutylovou skupinu,
    2- (methylthio)ethylovou skupinu, 3-(hydroxypropylthio)methylovou skupinu, 2-(methylsulfonyl)ethylovou skupinu, 4-acetylaminobutylovou skupinu, 4-(methylsulfonylamino)butylovou skupinu a 4-(ethoxykarbonylamino)butylovou skupinu.
  17. 17. Inhibitory adhese buněk podle nároku 16, kde R3 je substituent ze skupiny obsahující isobutylovou skupinu,
    2-(methylthio)ethylovou skupinu, 3-(hydroxypropylthio)methylovou skupinu, 2-(methylsulfonyl)ethylovou skupinu, 4-acetylaminobutylovou skupinu a 4-(methylsulfonylamino)butylovou skupinu.
  18. 18. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde R4 je substituent ze skupiny obsahující 4-karbomethoxyfenylovou skupinu, 4-karboxyfenylovou skupinu, 4-fluorfenylovou skupinu, 4-methoxyfenylovou skupinu, benzylovou skupinu,
    165 methylovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, fenylethylovou skupinu, 4-chlorfenylovou skupinu,
    3,4-difluorfenylovou skupinu, 3,4-dimethoxyfenylovou skupinu,
    2- methoxyfenylovou skupinu, 3-methoxyfenylovou skupinu,
    4-methoxyfenylovou skupinu, 2-nitrofenylovou skupinu,
    3- pyridylovou skupinu, 4-fenoxyfenylovou skupinu,
    4- ethoxyfenylovou skupinu, 4-nitrofenylovou skupinu,
    4-acetylaminofenylovou skupinu, 4-methylureidofenylovou skupinu, 2-fluorfenylovou skupinu, naftylovou skupinu,
    3-fluorfenylovou skupinu, 3-nitrofenylovou skupinu, atom vodíku, 2-nitrofenylovou skupinu, 4-kyanfenylovou skupinu,
    3-methoxyfenylovou skupinu, 4-methylsulfonylaminovou skupinu,
    3- kyanfenylovou skupinu, 4-propionylaminovou skupinu,
    4- aminofenylovou skupinu, 3-aminofenylovou skupinu,
    4-trifluormethoxyfenylovou skupinu, 4-methylfenylovou skupinu, 4-amino-3-nitrofenylovou skupinu,
    4-hydroxy-3-methoxyfenylovou skupinu, 4-hexyloxyfenylovou skupinu, 4-methylthiofenylovou skupinu, 3-furanylovou skupinu, 4-dimethylaminofenylovou skupinu,
    3- hydroxy-4-nitrofenylovou skupinu, n-pentylovou skupinu, karboxymethylovou skupinu, 2-karboxyethylovou skupinu, ethinylovou skupinu, 2-thienylovou skupinu, 2-propenylovou skupinu, 2-propinylovou skupinu, methylovou skupinu, a propylovou skupinu.
  19. 19. Inhibitory adhese buněk podle nároku 18, kde R4 je substituent ze skupiny obsahující 4-karbomethoxyfenylovou skupinu, 4-karboxyfenylovou skupinu, 4-fluorfenylovou skupinu, 4-methoxyfenylovou skupinu, benzylovou skupinu, methylovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, fenylethylovou skupinu, 4-chlorfenylovou skupinu,
    3,4-difluorfenylovou skupinu, 3,4-dimethoxyfenylovou skupinu, 2-methoxyfenylovou skupinu, 3-methoxyfenylovou skupinu,
    4- methoxyfenylovou skupinu, 2-nitrofenylovou skupinu a 3-pyridylovou skupinu.
    166
  20. 20. Inhibitory adhese buněk podle nároku 18, kde R4 je substituent ze skupiny obsahující 4-methoxyfenylovou skupinu,
    3,4-dimethoxyfenylovou skupinu, 4-fluorfenylovou skupinu, 4-karboxyfenylovou skupinu, 4-karbomethoxyfenylovou skupinu, fenylethylovou skupinu, fenylmethylovou skupinu, allylovou skupinu, ethinylovou skupinu a 3,4-methylendioxyfenylovou skupinu.
  21. 21. Inhibitory adhese buněk podle nároku 20, kde R4 je substituent ze skupiny obsahující 4-methoxyfenylovou skupinu,
    3,4-dimethoxyfenylovou skupinu, 4-fluorfenylovou skupinu, 4-karboxyfenylovou skupinu, 4-karbomethoxyfenylovou skupinu, fenylethylovou skupinu a fenylmethylovou skupinu.
  22. 22. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde Y je skupina CO, skupina CH2 nebo skupina SO2.
  23. 23. Inhibitory adhese buněk podle nároku 22, kde Y je skupina CO.
  24. 24. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1 nebo 2, kde n je
    1.
  25. 25. Inhibitory adhese buněk podle nároku 2, volené ze skupiny obsahující sloučeniny BIO-1006, BIO-1056, BIO-1089,
    BIO-1179, BIO-1194, BIO-1221, BIO-1224, BIO-1238, BIO-1245, BIO-1246, BIO-1248, BIO-1270, BIO-1282, BIO-1294, BIO-1321, BIO-1336, BIO-1382 a BIO-1400.
  26. 26. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1, volené ze skupiny obsahuj ící
    BIO-1319, BIO-1390, BIO-1475, sloučeniny BIO-1218, BIO-1272 BIO-1345, BIO-1347, BIO-1358, BIO-1393, BIO-1396, BIO-1429, BIO-1490, BIO-1515, BIO-1525, , BIO-1311 BIO-1361, BIO-1444, BIO-1526,
    BIO-1388
    BIO-1474
    BIO-1536 • · · · • · • · ♦
    - 167
    BIO-1594, BIO—1648, BIO-1655, BIO-1721, BIO-1725, BIO-1726, BIO-1727, BIO-1728, BIO-1729, BIO-1730, BIO-1731 a BIO-1732.
  27. 27. Inhibitory adhese buněk podle nároku 1, volené ze skupiny obsahující sloučeniny BIO-1218, BIO-1272, BIO-1311,
    BIO-1347, BIO-1393, BIO-1429, BIO-1515, BIO-1725, BIO-1726,
    BIO-1727, BIO-1728, BIO-1729, BIO-1730, BIO-1731 a BIO-1732.
  28. 28. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků
    1 až 27 v množství, které je účinné pro prevenci, inhibici nebo potlačení adhese buněk, a farmaceuticky přijatelný nosič.
  29. 29. Farmaceutický přípravek podle nároku 28, vyznačující se tím, že navíc obsahuje účinnou látku ze skupiny obsahující kortikosteroidy, bronchodilatanty, antiastmatika, protizánětové sloučeniny, antirevmatika, imunosupresanty, antimetabolity, imunomodulátory, antipsoriatika a antidiabetika.
  30. 30. Způsob prevence, inhibice nebo potlačení adhese buněk u savců, vyznačující se tím, že se savci podává farmaceutický přípravek podle nároku 28 nebo 29.
  31. 31. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že se používá pro prevenci, inhibici nebo potlačení zánětů, spojených s adhesí buněk.
  32. 32. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že se používá pro prevenci, inhibici nebo potlačení imunitní nebo autoimunitní odpovědi, spojené s adhesí buněk.
  33. 33. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že se používá pro léčení nebo prevenci onemocnění ze
    168 skupiny obsahující asthma, arthritidu, psoriázu, odmítání cizích tkání při transplantaci, roztroušenou sklerózu, cukrovku a střevní záněty.
CZ19972340A 1995-01-23 1996-01-18 Inhibitory adheze buněk a farmaceutické prostředky, které je obsahují CZ291556B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/376,372 US6306840B1 (en) 1995-01-23 1995-01-23 Cell adhesion inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ234097A3 true CZ234097A3 (cs) 1998-03-18
CZ291556B6 CZ291556B6 (cs) 2003-04-16

Family

ID=23484763

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19972340A CZ291556B6 (cs) 1995-01-23 1996-01-18 Inhibitory adheze buněk a farmaceutické prostředky, které je obsahují

Country Status (29)

Country Link
US (5) US6306840B1 (cs)
EP (2) EP0805796B1 (cs)
JP (2) JP4129293B2 (cs)
KR (1) KR100413328B1 (cs)
CN (1) CN1192015C (cs)
AT (1) ATE229498T1 (cs)
AU (1) AU718926B2 (cs)
BG (1) BG63383B1 (cs)
BR (1) BR9606778A (cs)
CA (1) CA2211181A1 (cs)
CZ (1) CZ291556B6 (cs)
DE (1) DE69625332T2 (cs)
DK (1) DK0805796T3 (cs)
EA (2) EA003320B1 (cs)
EE (1) EE04111B1 (cs)
ES (1) ES2183937T3 (cs)
FI (1) FI973087A (cs)
HK (2) HK1005241A1 (cs)
HU (1) HU223350B1 (cs)
IL (1) IL116846A (cs)
MX (1) MX9705569A (cs)
NO (1) NO320914B1 (cs)
NZ (1) NZ336104A (cs)
PL (1) PL187313B1 (cs)
PT (1) PT805796E (cs)
RO (1) RO119885B1 (cs)
SK (1) SK283724B6 (cs)
TW (1) TW500714B (cs)
WO (1) WO1996022966A1 (cs)

Families Citing this family (196)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6306840B1 (en) * 1995-01-23 2001-10-23 Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
US5849711A (en) * 1995-06-06 1998-12-15 Athena Neurosciences, Inc. Cathepsin and methods and compositions for inhibition thereof
JPH11506923A (ja) * 1995-06-06 1999-06-22 アセナ ニューロサイエンシーズ，インコーポレイテッド 新しいカテプシンならびにその阻害のための方法および組成物
US6312893B1 (en) 1996-01-23 2001-11-06 Qiagen Genomics, Inc. Methods and compositions for determining the sequence of nucleic acid molecules
US6027890A (en) 1996-01-23 2000-02-22 Rapigene, Inc. Methods and compositions for enhancing sensitivity in the analysis of biological-based assays
US6613508B1 (en) 1996-01-23 2003-09-02 Qiagen Genomics, Inc. Methods and compositions for analyzing nucleic acid molecules utilizing sizing techniques
DK0914605T3 (da) 1996-07-25 2007-09-10 Biogen Idec Inc Molekylemodel for VLA-4-inhibitorer
US6686350B1 (en) 1996-07-25 2004-02-03 Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
DE19647380A1 (de) * 1996-11-15 1998-05-20 Hoechst Ag 5-Ring-Heterocyclen als Inhibitoren der Leukozytenadhäsion und VLA-4-Antagonisten
DE19647382A1 (de) * 1996-11-15 1998-05-20 Hoechst Ag Heterocyclen als Inhibitoren der Leukozytenadhäsion und VLA-4-Antagonisten
DE19647381A1 (de) * 1996-11-15 1998-05-20 Hoechst Ag Neue Heterocyclen als Inhibitoren der Leukozytenadhäsion und VLA-4-Antagonisten
US6117901A (en) 1996-11-22 2000-09-12 Athena Neurosciences, Inc. N-(aryl/heteroarylacetyl) amino acid esters, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for use
US6642261B2 (en) 1997-11-21 2003-11-04 Athena Neurosciences, Inc. N-(aryl/heteroarylacety) amino acid esters, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6211235B1 (en) 1996-11-22 2001-04-03 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis
US6096782A (en) * 1996-11-22 2000-08-01 Athena Neurosciences, Inc. N-(aryl/heteroaryl) amino acid derivatives pharmaceutical compositions comprising same and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6191166B1 (en) 1997-11-21 2001-02-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods and compounds for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis
US6207710B1 (en) 1996-11-22 2001-03-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis
US6635632B1 (en) 1996-12-23 2003-10-21 Athena Neurosciences, Inc. Cycloalkyl, lactam, lactone and related compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6683075B1 (en) 1996-12-23 2004-01-27 Athena Neurosciences, Inc. Cycloalkyl, lactam, lactone and related compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use
US6291511B1 (en) 1997-05-29 2001-09-18 Merck & Co., Inc. Biarylalkanoic acids as cell adhesion inhibitors
WO1998053817A1 (en) * 1997-05-29 1998-12-03 Merck & Co., Inc. Biarylalkanoic acids as cell adhesion inhibitors
CA2291708A1 (en) * 1997-05-29 1998-12-03 Merck & Co., Inc. Sulfonamides as cell adhesion inhibitors
US6903075B1 (en) 1997-05-29 2005-06-07 Merck & Co., Inc. Heterocyclic amide compounds as cell adhesion inhibitors
US6221888B1 (en) 1997-05-29 2001-04-24 Merck & Co., Inc. Sulfonamides as cell adhesion inhibitors
JP2002501518A (ja) * 1997-05-30 2002-01-15 セルテック セラピューティックス リミテッド 抗炎症性チロシン誘導体
ES2206953T3 (es) 1997-06-23 2004-05-16 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Inhibidores de la adherencia celular mediada por alfa 4-beta 1.
CN1265669A (zh) * 1997-07-31 2000-09-06 伊兰药品公司 抑制由vla－4介导的白细胞粘着的化合物
US6291453B1 (en) 1997-07-31 2001-09-18 Athena Neurosciences, Inc. 4-amino-phenylalanine type compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6939855B2 (en) * 1997-07-31 2005-09-06 Elan Pharmaceuticals, Inc. Anti-inflammatory compositions and method
US6559127B1 (en) 1997-07-31 2003-05-06 Athena Neurosciences, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
WO1999006436A1 (en) * 1997-07-31 1999-02-11 Elan Pharmaceuticals, Inc. Benzyl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
PL338413A1 (en) * 1997-07-31 2000-11-06 Elan Pharm Inc Compound of 4-amino phenylalanine type inhibiting adhesion of leucocytes through the meditation of vla-4
US6362341B1 (en) 1997-07-31 2002-03-26 Athena Neurosciences, Inc. Benzyl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US7030114B1 (en) 1997-07-31 2006-04-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6423688B1 (en) 1997-07-31 2002-07-23 Athena Neurosciences, Inc. Dipeptide and related compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
US6489300B1 (en) 1997-07-31 2002-12-03 Eugene D. Thorsett Carbamyloxy compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
CN1265672A (zh) * 1997-07-31 2000-09-06 伊兰药品公司 能抑制由vla－4介导的白细胞粘连的磺酰化二肽化合物
US6583139B1 (en) 1997-07-31 2003-06-24 Eugene D. Thorsett Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
CN1265670A (zh) * 1997-07-31 2000-09-06 伊兰药品公司 抑制vla－4介导的白细胞粘附的二肽和相关的化合物
EP0994895A1 (en) * 1997-07-31 2000-04-26 Elan Pharmaceuticals, Inc. Dipeptide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
CN1133648C (zh) * 1997-07-31 2004-01-07 伊兰药品公司 抑制vla-4介导的白细胞粘附的取代的苯丙氨酸型化合物
US6492421B1 (en) 1997-07-31 2002-12-10 Athena Neurosciences, Inc. Substituted phenylalanine type compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
NZ502813A (en) * 1997-08-22 2002-10-25 F N-aroylphenylalanine derivatives as inhibitors of the interaction between a4 containing integrins and VCAM-1
US6229011B1 (en) 1997-08-22 2001-05-08 Hoffman-La Roche Inc. N-aroylphenylalanine derivative VCAM-1 inhibitors
US6455550B1 (en) 1997-08-22 2002-09-24 Hoffmann-La Roche Inc. N-alkanoylphenylalanine derivatives
EP1403247A1 (en) * 1997-08-22 2004-03-31 F.Hoffmann-La Roche Ag N-Alkanoylphenylalanine derivatives
DE19741235A1 (de) 1997-09-18 1999-03-25 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Neue Imidazolidinderivate, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
DE19741873A1 (de) * 1997-09-23 1999-03-25 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Neue 5-Ring-Heterocyclen, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
US6069163A (en) * 1997-10-21 2000-05-30 Merck & Co., Inc. Azapeptide acids as cell adhesion inhibitors
CA2303848C (en) * 1997-10-31 2008-09-30 Rhone-Poulenc Rorer Limited Substituted anilides
GB9723789D0 (en) * 1997-11-12 1998-01-07 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6020347A (en) * 1997-11-18 2000-02-01 Merck & Co., Inc. 4-substituted-4-piperidine carboxamide derivatives
DE19751251A1 (de) 1997-11-19 1999-05-20 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Substituierte Imidazolidinderivate, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmezeutische Präparate
US6191171B1 (en) 1997-11-20 2001-02-20 Merck & Co., Inc. Para-aminomethylaryl carboxamide derivatives
US6090841A (en) * 1997-11-21 2000-07-18 Merck & Co., Inc. Substituted pyrrole derivatives as cell adhesion inhibitors
US6645939B1 (en) 1997-11-24 2003-11-11 Merck & Co., Inc. Substituted β-alanine derivatives as cell adhesion inhibitors
DE69824037T2 (de) * 1997-11-24 2005-06-02 Merck & Co., Inc. Beta-alanin-derivate als zell-adhäsions-inhibitoren
US6423689B1 (en) 1997-12-22 2002-07-23 Warner-Lambert Company Peptidyl calcium channel blockers
WO1999033789A1 (en) * 1997-12-23 1999-07-08 Aventis Pharma Limited SUBSTITUTED β-ALANINES
SI0928790T1 (en) * 1998-01-02 2003-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Thiazole derivatives
US6100282A (en) * 1998-01-02 2000-08-08 Hoffman-La Roche Inc. Thiazole derivatives
US6197794B1 (en) * 1998-01-08 2001-03-06 Celltech Therapeutics Limited Phenylalanine derivatives
MY153569A (en) * 1998-01-20 2015-02-27 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Inhibitors of ?4 mediated cell adhesion
US6407065B1 (en) 1998-01-23 2002-06-18 Novartis Ag VLA-4 antagonists
IL137329A0 (en) * 1998-01-23 2001-07-24 Novartis Ag Vla-4 antagonists
US6329372B1 (en) 1998-01-27 2001-12-11 Celltech Therapeutics Limited Phenylalanine derivatives
GB9805655D0 (en) * 1998-03-16 1998-05-13 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US6521626B1 (en) 1998-03-24 2003-02-18 Celltech R&D Limited Thiocarboxamide derivatives
AU3563799A (en) * 1998-04-16 1999-11-01 Texas Biotechnology Corporation Compounds that inhibit the binding of integrins to their receptors
DE19821483A1 (de) 1998-05-14 1999-11-18 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Imidazolidinderivate, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
GB9811159D0 (en) 1998-05-22 1998-07-22 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
DE69913687T2 (de) 1998-05-28 2004-10-07 Biogen Inc Ein VLA-4-Inhibitor: oMePUPA-V
GB9811969D0 (en) * 1998-06-03 1998-07-29 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US6958330B1 (en) 1998-06-22 2005-10-25 Elan Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic α-amino-ε-caprolactams and related compounds
US6774125B2 (en) 1998-06-22 2004-08-10 Elan Pharmaceuticals, Inc. Deoxyamino acid compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6569851B1 (en) 1998-06-22 2003-05-27 Elan Pharmaceutials, Inc. Cycloalkyl, lactam, lactone and related compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6552013B1 (en) 1998-06-22 2003-04-22 Elan Pharmaceuticals, Inc. Deoxyamino acid compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6509331B1 (en) 1998-06-22 2003-01-21 Elan Pharmaceuticals, Inc. Deoxyamino acid compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6528505B1 (en) 1998-06-22 2003-03-04 Elan Pharmaceuticals, Inc. Cyclic amino acid compounds pharmaceutical compositions comprising same and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
TW591026B (en) * 1998-06-23 2004-06-11 Upjohn Co Inhibitors of alpha4beta1 mediated cell adhesion
US6685617B1 (en) 1998-06-23 2004-02-03 Pharmacia & Upjohn Company Inhibitors of α4β1 mediated cell adhesion
SK20052000A3 (sk) * 1998-06-30 2002-08-06 Pfizer Products Inc. Nepeptidové inhibítory VLA-4 dependentnej bunkovej väzby použiteľné pri liečení zápalových, autoimunitných a respiračných chorôb
GB9814414D0 (en) 1998-07-03 1998-09-02 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
US6352977B1 (en) 1998-07-13 2002-03-05 Aventis Pharma Limited Substituted β-alanines
GB9916374D0 (en) 1998-07-23 1999-09-15 Zeneca Ltd Chemical compounds
EP1133484A2 (en) * 1998-07-23 2001-09-19 AstraZeneca AB Heterocyclic derivatives and their use as integrin inhibitors
GB9821061D0 (en) 1998-09-28 1998-11-18 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9821222D0 (en) 1998-09-30 1998-11-25 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
CN1211375C (zh) * 1998-10-22 2005-07-20 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 噻唑衍生物
GB9825652D0 (en) 1998-11-23 1999-01-13 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
GB9826174D0 (en) 1998-11-30 1999-01-20 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
EP1144365B1 (en) * 1998-12-22 2004-03-17 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Inhibitors of alpha-4 beta-1 mediated cell adhesion
JP2002535314A (ja) 1999-01-22 2002-10-22 エラン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド Ｖｌａ−４により媒介される白血球接着を阻害する化合物
CA2359112A1 (en) 1999-01-22 2000-07-27 Elan Pharmaceuticals, Inc. Fused ring heteroaryl and heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
US6436904B1 (en) 1999-01-25 2002-08-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
MXPA01007394A (es) * 1999-01-25 2002-04-09 Wyeth Corp Compuestos que inhiben la adhesion de leucocitos mediada mediante alfa4 beta1 integrina y cd49d/cd29 (vla-4).
US6407066B1 (en) 1999-01-26 2002-06-18 Elan Pharmaceuticals, Inc. Pyroglutamic acid derivatives and related compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
DE60027700T2 (de) 1999-02-16 2007-05-03 Aventis Pharma Ltd., West Malling Bicyclische verbindungen und ihre verwendung als integrinrezeptorliganden
ID30057A (id) 1999-02-18 2001-11-01 Hoffmann La Roche Turunan fenilalaninol
HUP0200155A3 (en) 1999-02-18 2005-04-28 Hoffmann La Roche Thioamide derivatives, pharmaceutical compositions containing them and their use
DE60023853T2 (de) * 1999-03-12 2006-05-24 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield Aromatische heterozyklische verbindungen als antientzündungwirkstoffe
GB9909409D0 (en) * 1999-04-24 1999-06-23 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6972296B2 (en) 1999-05-07 2005-12-06 Encysive Pharmaceuticals Inc. Carboxylic acid derivatives that inhibit the binding of integrins to their receptors
US6723711B2 (en) 1999-05-07 2004-04-20 Texas Biotechnology Corporation Propanoic acid derivatives that inhibit the binding of integrins to their receptors
DK1176956T3 (da) * 1999-05-07 2008-05-26 Encysive Pharmaceuticals Inc Carboxylsyrederivater, som inhiberer bindingen af integriner til deres receptorer
US6518283B1 (en) 1999-05-28 2003-02-11 Celltech R&D Limited Squaric acid derivatives
US6756378B2 (en) 1999-06-30 2004-06-29 Pharmacopeia Drug Discovery, Inc. VLA-4 inhibitor compounds
BR0012068A (pt) * 1999-06-30 2002-05-14 Daiichi Seiyaku Co Compostos inibidores de vla-4
CN1376143A (zh) * 1999-07-26 2002-10-23 东丽株式会社 羧酸衍生物及以其作为有效成分的粘连分子抑制剂
PL354063A1 (en) 1999-08-13 2003-12-15 Biogen, Inc.Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
US6534513B1 (en) 1999-09-29 2003-03-18 Celltech R&D Limited Phenylalkanoic acid derivatives
US6849639B2 (en) * 1999-12-14 2005-02-01 Amgen Inc. Integrin inhibitors and their methods of use
DE60043308D1 (de) 1999-12-16 2009-12-24 Biogen Idec Inc Verfahren zur behandlung der schädigung des zentralnervensystems durch ischämie oder durch hämorrhagie mit antagonisten von alpha4 integrin
US6455539B2 (en) 1999-12-23 2002-09-24 Celltech R&D Limited Squaric acid derivates
DE60018213T2 (de) * 1999-12-27 2005-12-29 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Substituierte aminoalkylamid-derivate als antagonisten des follikel-stimulierenden hormons
KR20020067050A (ko) * 1999-12-28 2002-08-21 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 염증성, 자기면역 및 호흡기 질환의 치료에 유용한브이엘에이-4 의존성 세포 결합의 비펩티드계 억제제
WO2001079173A2 (en) 2000-04-17 2001-10-25 Celltech R & D Limited Enamine derivatives as cell adhesion molecules
DE10019755A1 (de) * 2000-04-20 2001-11-08 Bayer Ag Neue Aminoaryl/cycloalkylcarbonsäuren als Integrinantagonisten
CA2781858C (en) * 2000-05-12 2015-03-31 Genzyme Corporation Modulators of tnf-.alpha. signaling
US6545013B2 (en) 2000-05-30 2003-04-08 Celltech R&D Limited 2,7-naphthyridine derivatives
US6403608B1 (en) 2000-05-30 2002-06-11 Celltech R&D, Ltd. 3-Substituted isoquinolin-1-yl derivatives
EP1301488A1 (en) 2000-07-07 2003-04-16 Celltech R&amp;D Limited Squaric acid derivatives containing a bicyclic heteroaromatic ring as integrin antagonists
CA2417059A1 (en) 2000-08-02 2002-02-07 Celltech R&D Limited 3-substituted isoquinolin-1-yl derivatives
BRPI0113331B8 (pt) 2000-08-18 2021-05-25 Ajinomoto Kk derivados de fenilalanina ou seus sais parmaceuticamente aceitáveis, antagonista de integrina alfa 4, agente terapêutico ou agente preventivo para doenças inflamatórias, e, composição farmacêutica
MY129000A (en) 2000-08-31 2007-03-30 Tanabe Seiyaku Co INHIBITORS OF a4 MEDIATED CELL ADHESION
DE10063173A1 (de) * 2000-12-18 2002-06-20 Merck Patent Gmbh Harnstoff- und Urethanderivate
EP1343751A2 (en) 2000-12-20 2003-09-17 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic derivatives as modulators of chemokine receptor activity
JP2005506949A (ja) 2000-12-20 2005-03-10 ブリストル−マイヤーズ・スクイブ・ファーマ・カンパニー ケモカイン受容体の調節剤としてのジアミン
IL156064A0 (en) 2000-12-28 2003-12-23 Daiichi Seiyaku Co Vla-4 inhibitors
DE10105077A1 (de) * 2001-02-05 2002-08-08 Febit Ferrarius Biotech Gmbh Hybrid-Schutzgruppe
DE10111877A1 (de) 2001-03-10 2002-09-12 Aventis Pharma Gmbh Neue Imidazolidinderivate, ihre Herstellung, ihre Verwendung und sie enthaltende pharmazeutische Präparate
DE10112771A1 (de) * 2001-03-16 2002-09-26 Merck Patent Gmbh Inhibitoren des Integrins alpha¶v¶beta¶6¶
DE10127041A1 (de) * 2001-06-02 2002-12-05 Merck Patent Gmbh Integrinantagonisten
US6844028B2 (en) 2001-06-26 2005-01-18 Accelr8 Technology Corporation Functional surface coating
US7501157B2 (en) 2001-06-26 2009-03-10 Accelr8 Technology Corporation Hydroxyl functional surface coating
GB2377933A (en) 2001-07-06 2003-01-29 Bayer Ag Succinic acid derivatives useful as integrin antagonists
DE10137595A1 (de) 2001-08-01 2003-02-13 Aventis Pharma Gmbh Neue Imidazolidinderivate, ihre Herstellung und ihre Verwendung
CA2494870A1 (en) * 2001-08-06 2003-03-06 The Regents Of The University Of California Methods for inhibiting angiogenesis
US20040191926A1 (en) * 2001-09-26 2004-09-30 Zhong-Yin Zhang Ptp1b inhibitors and ligands
EP1297830A1 (en) * 2001-09-28 2003-04-02 Flamma Fabbrica Lombarda Ammino Acidi S.p.a. Use of alpha- or beta-amino acids, of the corresponding esters or of dipeptides of these amino acids with histidine derivatives in the prevention or treatment of tissue damage caused by a atmospheric ozone
DE10154280A1 (de) * 2001-11-05 2003-05-15 Wilex Ag Antagonisten für alpha¶4¶-Integrine
AR038136A1 (es) 2002-01-24 2004-12-29 Merck Frosst Canada Inc Cicloalcanindoles con sustitucion con fluor composiciones que contienen estos compuestos y metodos de tratamiento
DE10204789A1 (de) * 2002-02-06 2003-08-14 Merck Patent Gmbh Inhibitoren des Integrins alpha¶v¶beta6
MY140707A (en) * 2002-02-28 2010-01-15 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp Process for preparing a phenylalanine derivative and intermediates thereof
TW200307671A (en) 2002-05-24 2003-12-16 Elan Pharm Inc Heteroaryl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by α 4 integrins
TWI281470B (en) 2002-05-24 2007-05-21 Elan Pharm Inc Heterocyclic compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by alpha4 integrins
AU2003265398A1 (en) * 2002-08-09 2004-02-25 Transtech Pharma, Inc. Aryl and heteroaryl compounds and methods to modulate coagulation
AU2003284984B2 (en) 2002-10-30 2008-10-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Gamma-aminoamide modulators of chemokine receptor activity
DK1562571T3 (da) * 2002-11-21 2011-12-05 Genzyme Corp Kombination af et diamidderivat og immunsuppressive midler til hæmning af transplantatafstødning
WO2004047825A1 (en) * 2002-11-21 2004-06-10 Genzyme Corporation Use of diamide derivatives for inhibiting chronic tissue transplant rejection
AU2004251750A1 (en) * 2003-06-25 2005-01-06 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating rheumatoid arthritis
US7626985B2 (en) * 2003-06-27 2009-12-01 Broadcom Corporation Datagram replication in internet protocol multicast switching in a network device
WO2005009992A1 (ja) 2003-07-24 2005-02-03 Daiichi Pharmaceutical Co., Ltd. シクロヘキサンカルボン酸類
US7208601B2 (en) * 2003-08-08 2007-04-24 Mjalli Adnan M M Aryl and heteroaryl compounds, compositions, and methods of use
US7501538B2 (en) * 2003-08-08 2009-03-10 Transtech Pharma, Inc. Aryl and heteroaryl compounds, compositions and methods of use
AU2004278748B2 (en) 2003-09-29 2008-09-11 The Regents Of The University Of California Methods for altering hematopoietic progenitor cell adhesion, differentiation, and migration
MXPA06009099A (es) * 2004-02-10 2007-02-02 Johnson & Johnson Piridazinona ureas como antagonistas de las integrinas alfa-4.
CA2555594A1 (en) * 2004-02-10 2005-08-25 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridazinones as antagonists of a4 integrins
US7419666B1 (en) 2004-02-23 2008-09-02 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Treatment of ocular disorders
US20050234261A1 (en) * 2004-04-14 2005-10-20 Honeywell International Inc. Process for preparing cinnamic acids and alkyl esters thereof
WO2005114197A2 (en) * 2004-04-15 2005-12-01 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Activity-based probes for protein tyrosine phosphatases
US7196112B2 (en) 2004-07-16 2007-03-27 Biogen Idec Ma Inc. Cell adhesion inhibitors
PE20070505A1 (es) * 2005-07-11 2007-05-15 Wyeth Corp Inhibidores de glutamato de metaloproteinasas de matriz y agrecanasas
NZ567270A (en) 2005-09-29 2011-06-30 Elan Pharm Inc Pyrimidinyl amide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4
CN101273035A (zh) 2005-09-29 2008-09-24 伊兰制药公司 抑制由vla-4介导的白细胞粘附的氨基甲酸酯化合物
GT200600305A (es) * 2005-10-13 2007-02-26 Métodos para preparar derivados de acido glutamico
WO2007092471A2 (en) 2006-02-03 2007-08-16 The Regents Of The University Of California Methods for inhibition of lymphangiogenesis and tumor metastasis
EA017110B1 (ru) 2006-02-27 2012-09-28 Элан Фамэсьютикэлс, Инк. ПИРИМИДИНИЛСУЛЬФОНАМИДНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПИРИМИДИНИЛСУЛЬФОНАМИДНЫХ СОЕДИНЕНИЙ (ВАРИАНТЫ), ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ, ОПОСРЕДОВАННОГО ИНТЕГРИНОМ α4, СПОСОБ СНИЖЕНИЯ И/ИЛИ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО КОМПОНЕНТА ЗАБОЛЕВАНИЯ ИЛИ АУТОИММУННОГО ОТВЕТА
AU2008219007A1 (en) 2007-02-20 2008-08-28 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating multiple sclerosis by administration of alpha-fetoprotein in combination with an integrin antagonist
US20090180951A1 (en) * 2007-12-12 2009-07-16 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of integrin vla-4
PL2288715T3 (pl) 2008-04-11 2015-03-31 Merrimack Pharmaceuticals Inc Łączniki będące albuminą surowicy ludzkiej i ich koniugaty
JP2012502927A (ja) 2008-09-22 2012-02-02 メルク カナダ インコーポレイテッド Ｃｒｔｈ２受容体拮抗薬としてのインドール誘導体
KR20110112301A (ko) 2008-11-18 2011-10-12 메리맥 파마슈티컬즈, 인크. 인간 혈청 알부민 링커 및 그 콘쥬게이트
SI2370442T1 (sl) 2008-11-26 2013-06-28 Pfizer Inc. 3-aminociklopentankarboksiamidi kot modulatorji kemokinskega receptorja
US20100204221A1 (en) 2009-02-09 2010-08-12 Hariprasad Vankayalapati Pyrrolopyrimidinyl axl kinase inhibitors
EP2401269B1 (en) 2009-02-24 2014-01-29 Merck Sharp & Dohme Corp. Indole derivatives as crth2 receptor antagonists
MX2011011326A (es) 2009-04-27 2012-02-13 Elan Pharm Inc Antagonistas de piridinona de las integrinas alfa-4.
WO2011020874A1 (en) 2009-08-20 2011-02-24 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Vla-4 as a biomarker for prognosis and target for therapy in duchenne muscular dystrophy
KR20120115262A (ko) * 2009-11-11 2012-10-17 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 캄파니 중합체 조성물 및 그의 제조 방법 및 물품
GB0922014D0 (en) * 2009-12-17 2010-02-03 Ge Healthcare Ltd Novel integrin binders
EP2627178B1 (en) 2010-10-11 2018-05-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Quinazolinone-type compounds as crth2 antagonists
KR20130133219A (ko) 2010-12-23 2013-12-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Crth₂ 수용체 조절제로서의 퀴녹살린 및 아자-퀴녹살린
CN103619170B (zh) 2011-05-04 2016-07-06 默沙东公司 含有氨基-吡啶的脾酪氨酸激酶(syk)抑制剂
AR086931A1 (es) 2011-06-17 2014-01-29 Merck Sharp & Dohme Tetrahidroquinolinas condensadas con cicloalquilo como moduladores de receptores de crth
EP2763975B1 (en) 2011-10-05 2016-04-06 Merck Sharp & Dohme Corp. 3-pyridyl carboxamide-containing spleen tyrosine kinase (syk) inhibitors
MX2014004025A (es) 2011-10-17 2014-08-01 Univ Muenster Wilhelms Metodos de valoracion de riesgo de lmp y aparatos relacionados.
CN104302630A (zh) 2012-04-16 2015-01-21 阿勒根公司 作为甲酰肽受体2调节剂的(2-脲基乙酰氨基)烷基衍生物
WO2014036520A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Combination therapies comprising anti-erbb3 agents
WO2015136468A1 (en) 2014-03-13 2015-09-17 Prothena Biosciences Limited Combination treatment for multiple sclerosis
WO2018140510A1 (en) 2017-01-25 2018-08-02 Biogen Ma Inc. Compositions and methods for treatment of stroke and other cns disorders
US10875875B2 (en) 2017-04-26 2020-12-29 Aviara Pharmaceuticals, Inc. Propionic acid derivatives and methods of use thereof
EP3681882A1 (en) 2017-09-13 2020-07-22 Amgen Inc. Bisamide sarcomere activating compounds and uses thereof
US20190330141A1 (en) * 2018-04-30 2019-10-31 The Procter & Gamble Company Compositions With A Cooling Effect
EP3877085A1 (en) * 2018-11-08 2021-09-15 Katholieke Universiteit Leuven Screening and sorting of single cells
CN113330013B (zh) 2019-01-10 2022-12-27 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 杂环化合物盐及其应用
EP4284947A1 (en) 2021-01-29 2023-12-06 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) Methods of assessing the risk of developing progressive multifocal leukoencephalopathy in patients treated with vla-4 antagonists

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4725583A (en) * 1985-01-23 1988-02-16 Abbott Laboratories Functionalized peptidylaminoalcohols
US4826815A (en) * 1985-05-17 1989-05-02 Abbott Laboratories Renin inhibiting compounds
CA2043741C (en) 1990-06-07 2003-04-01 Kiyofumi Ishikawa Endothelin antagonistic peptide derivatives
US5192746A (en) 1990-07-09 1993-03-09 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Cyclic cell adhesion modulation compounds
US5260277A (en) 1990-09-10 1993-11-09 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Guanidinyl and related cell adhesion modulation compounds
WO1992008464A1 (en) 1990-11-15 1992-05-29 Tanabe Seiyaku Co. Ltd. Substituted urea and related cell adhesion modulation compounds
DE69226820T2 (de) 1991-06-21 1999-05-12 Merck & Co., Inc., Rahway, N.J. Peptidylderivate als Inhibitoren von Interleukin-1B-konvertierenden Enzymen
WO1993008823A1 (en) 1991-11-06 1993-05-13 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Guanidinyl and related cell adhesion modulation compounds
AU3141693A (en) 1991-11-22 1993-06-15 Friedman, Mark M. Non-peptidic surrogates of the arg-gly-asp sequence and pharmaceutical compositions comprising them
WO1993012809A1 (en) * 1991-12-24 1993-07-08 Fred Hutchinson Cancer Research Center Competitive inhibition of high-avidity alpha4-beta1 receptor using tripeptide ldv
DE4212304A1 (de) 1992-04-13 1993-10-14 Cassella Ag Asparaginsäurederivate, ihre Herstellung und Verwendung
IL102646A (en) 1992-07-26 1996-05-14 Yeda Res & Dev Non-peptidic surrogates of the ldv sequence and pharmaceutical compositions comprising them
WO1994015958A2 (en) 1993-01-08 1994-07-21 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Peptide inhibitors of cell adhesion
US5314902A (en) * 1993-01-27 1994-05-24 Monsanto Company Urea derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
US6268380B1 (en) * 1993-02-19 2001-07-31 G. D. Searle & Co. Urea derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
KR960701633A (ko) 1993-04-09 1996-03-28 가쯔히꼬 나까노 면역조절제, 세포 접착 억제제, 및 자기면역 질병의 치료 및 예방제(immunomo-dulator, cell adhesion inhibitor, and agent for treating and preventing autoimmune diseases)
IT1270882B (it) * 1993-10-05 1997-05-13 Isagro Srl Oligopeptidi ad attivita' fungicida
WO1995015973A1 (en) 1993-12-06 1995-06-15 Cytel Corporation Cs-1 peptidomimetics, compositions and methods of using the same
US5434188A (en) 1994-03-07 1995-07-18 Warner-Lambert Company 1-ether and 1-thioether-naphthalene-2-carboxamides as inhibitors of cell adhesion and as inhibitors of the activation of HIV
IT1271026B (it) * 1994-10-21 1997-05-26 Isagro Ricerca Srl Derivati dell'acido b-amminopropionico ad attivita' fungicida
US6306840B1 (en) * 1995-01-23 2001-10-23 Biogen, Inc. Cell adhesion inhibitors
US7001921B1 (en) * 1995-01-23 2006-02-21 Biogen Idec Ma Inc. Cell adhesion inhibitors
DK0914605T3 (da) * 1996-07-25 2007-09-10 Biogen Idec Inc Molekylemodel for VLA-4-inhibitorer

Also Published As

Publication number Publication date
TW500714B (en) 2002-09-01
EP0805796B1 (en) 2002-12-11
DE69625332T2 (de) 2003-10-16
JP4129293B2 (ja) 2008-08-06
AU718926B2 (en) 2000-05-04
KR19980701672A (ko) 1998-06-25
IL116846A0 (en) 1996-07-23
CA2211181A1 (en) 1996-08-01
HU223350B1 (hu) 2004-06-28
NO973384L (no) 1997-09-19
EA003320B1 (ru) 2003-04-24
US20060166866A1 (en) 2006-07-27
EA200200844A1 (ru) 2002-12-26
US6376538B1 (en) 2002-04-23
DK0805796T3 (da) 2003-03-31
EP0805796A1 (en) 1997-11-12
EA199700135A1 (ru) 1997-12-30
PL321848A1 (en) 1997-12-22
US20030018016A1 (en) 2003-01-23
CN1192015C (zh) 2005-03-09
EP1142867A2 (en) 2001-10-10
CN1177343A (zh) 1998-03-25
AU4911596A (en) 1996-08-14
IL116846A (en) 2002-11-10
CZ291556B6 (cs) 2003-04-16
NO320914B1 (no) 2006-02-13
SK283724B6 (sk) 2003-12-02
EE04111B1 (et) 2003-08-15
RO119885B1 (ro) 2005-05-30
FI973087A (fi) 1997-09-22
EE9700172A (et) 1998-02-16
HUP9702461A3 (en) 1999-08-30
NO973384D0 (no) 1997-07-22
PL187313B1 (pl) 2004-06-30
FI973087A0 (fi) 1997-07-22
US6624152B2 (en) 2003-09-23
JPH10513160A (ja) 1998-12-15
PT805796E (pt) 2003-04-30
DE69625332D1 (de) 2003-01-23
BR9606778A (pt) 1998-01-06
US6306840B1 (en) 2001-10-23
BG63383B1 (bg) 2001-12-29
HUP9702461A2 (hu) 1998-04-28
US6630512B2 (en) 2003-10-07
ES2183937T3 (es) 2003-04-01
ATE229498T1 (de) 2002-12-15
HK1041477A1 (zh) 2002-07-12
NZ336104A (en) 2001-01-26
US20030083267A1 (en) 2003-05-01
JP2008013574A (ja) 2008-01-24
MX9705569A (es) 1997-11-29
SK98797A3 (en) 1998-02-04
WO1996022966A1 (en) 1996-08-01
HK1005241A1 (en) 1998-12-31
BG101841A (en) 1998-04-30
KR100413328B1 (ko) 2004-06-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ234097A3 (cs) Inhibitory adhese buněk
DE69736669T2 (de) Zelladhäsionsinhibitoren
KR100531586B1 (ko) 세포부착억제제
US6949534B2 (en) Cell adhesion inhibitors
KR20010034317A (ko) Ｖｌａ-4 길항제
US7001921B1 (en) Cell adhesion inhibitors
AU766538B2 (en) Cell adhesion inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20090118