CZ20031366A3 - Varianta modifikovaného viru vakcinie typu Ankara - Google Patents
Varianta modifikovaného viru vakcinie typu Ankara Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20031366A3 CZ20031366A3 CZ20031366A CZ20031366A CZ20031366A3 CZ 20031366 A3 CZ20031366 A3 CZ 20031366A3 CZ 20031366 A CZ20031366 A CZ 20031366A CZ 20031366 A CZ20031366 A CZ 20031366A CZ 20031366 A3 CZ20031366 A3 CZ 20031366A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- virus
- mva
- vaccine
- vaccination
- human
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 208
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 94
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 26
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 137
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 75
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 68
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 52
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 51
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 49
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 46
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 35
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 23
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 17
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 17
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 15
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 14
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 claims description 11
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 10
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 9
- 239000003708 ampul Substances 0.000 claims description 9
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 claims description 9
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 claims description 9
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 9
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 206010001197 Adenocarcinoma of the cervix Diseases 0.000 claims description 5
- 208000034246 Adenocarcinoma of the cervix uteri Diseases 0.000 claims description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 5
- 201000006662 cervical adenocarcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 abstract description 15
- 241001183012 Modified Vaccinia Ankara virus Species 0.000 abstract description 2
- 206010072219 Mevalonic aciduria Diseases 0.000 description 56
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 48
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 38
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 36
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 26
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 22
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 21
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 13
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 7
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 7
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 6
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 6
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 4
- 241000224017 Plasmodium berghei Species 0.000 description 4
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 4
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 4
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 3
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 201000008873 bone osteosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 108010027225 gag-pol Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000867610 Chlorocebus pygerythrus Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241000725619 Dengue virus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 241000701029 Murid betaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000004665 defense response Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100001160 nonlethal Toxicity 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000009452 underexpressoin Effects 0.000 description 1
- 125000002348 vinylic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
- A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/24011—Poxviridae
- C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
- C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
- C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Varianta modifikovaného virus vakcinie typu Ankara
Vrt
Oblast vynálezu
Předložený vynález se týká oslabeného viru, který je odvozený od modifikovaného viru vakcinie typu Ankara (MVA) a který je charakterizovaný ztrátou schopnosti reproduktivní replikace na lidských buněčných liniích. Dále popisuje rekombinantní viry odvozené od tohoto viru a použití viru nebo jeho rekombinatů jako léčiva nebo vakcíny. Dále je poskytnutý způsob indukce imunitní odpovědi také u pacientů s porušenou imunitou, pacientů s již existující imunitou vůči viru vakcinie nebo pacientů u nichž probíhá protivirová terapie.
Dosavadní stav techniky
Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara (MVA) je příbuzný viru vakcinie, člena z rodu orthopoxvirů z čeledi poxviridae. MVA byl generován z kmene viru vakcinie typu Ankara (CVA) sérií 516 pasáží na fibroblastech kuřecích embryí (přehled viz Mayr, A., et al. Infection 3, 6-14, (1975)). Důsledkem těchto dlouhodobých pasáží výsledný MVA virus deletoval kolem 31 kilobas své genomické sekvence a proto byl popsán jako vysoce omezen co do hostitelských buněk na ptačí buňky (Meyer, H. et al., J. Gen. Vir. 72, 1031-1038 (1991)). V různých zvířecích modelech bylo ukázáno, že výsledný MVA byl významně nevirulentní (Mayr, A. & Danner, K. 1978 Dev. Biol. Stand. 41: 225-34). Navíc byly tyto kmeny MVA testované v klinických pokusech jako vakcíny na imunizaci proti lidským neštovicím (Mayr, A. et al., Zbl. Bakt. Hyg. I, Abt. Org. B 167, 375-390 (1987), Stickl et al., Dtsch. Med. Wschr. 99, 2386-2392 (1974). Tyto studie zahrnovaly 120 000 lidi, včetně vysoko rizikových pacientů a prokázaly, že v porovnání s vakcínami na bázi viru vakcinie, měl MVA zmenšenou virulenci nebo nakažlivost při zachování dobré imunogenicity.
V dalších desetiletích byl MVA genovým inženýrstvím upravený pro použití jako virový vektor pro expresi rekombinantního genu nebo jako rekombinantní vakcína (Sutter, G. et al. (1994), Vaccine 12: 1032-40.
Vzhledem k tomu je překvapující, že přestože Mayr et al. demonstrovali v 70. letech, že MVA je silně oslabený a v lidech a savcích nevirulentní, některá nedávno uvedená pozorování (Blanchard et al., 1998, J. Gen Virol. 79, 1159-1167; Carroll & Moss, 1997,
Virology 238, 198-211; Altenberger, US patent 5,185,146; Ambrosini et al., 1999, J.
• 4 4 · 9
e ·
Neurosci. Res. 55(5), 569) ukázala, že MVA není úplně oslabený v savčích a lidských buněčných liniích, protože může dojít k reziduální replikaci v těchto buňkách. Předpokládá se, že výsledky uváděné v těchto publikacích byly získány s různými kmeny MVA, protože použité viry se podstatně liší ve svých vlastnostech, zejména v růstovém chování v různých buněčných liniích.
Růstové chování je uznáváno jako indikátor pro oslabení viru. Obecně je kmen viru považovaný za oslabený, když ztratil schopnost nebo má jen sníženou schopnost reproduktivní replikace v hostitelských buňkách. Výše uvedená pozorování, že MVA není schopný úplné replikace v lidských a savčích buňkách, zpochybňuje absolutní bezpečnost MVA jako vakcíny pro lidi nebo jako vektor pro rekombinantní vakcíny.
Zejména pro vakcínu, jako i pro rekombinantní vakcínu je mimořádně důležitá rovnováha mezi účinnosti a bezpečností.
Předmět vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je poskytnutí nových kmenů virů se zvýšenou bezpečností pro vývoj bezpečnějších produktů jako jsou vakcíny a farmaceutické přípravky. Dalším předmětem předloženého vynálezu je poskytnutí prostředků pro zlepšení dosavadního vakcinačního režimu.
Podrobný popis vynálezu
K dosažení výše uvedených předmětů jsou podle výhodného provedení podle vynálezu poskytnuté nové viry vakcinie, které jsou schopné reproduktivní replikaci v jiných než lidských buňkách a buněčných liniích, zejména ve fibroblastech kuřecích embryí (CEF) a ledvinných buněčných liniích křečcích mláďat BHK (ECACC 85011433), ale nejsou schopné reproduktivní replikace v lidských buněčných liniích.
Známé kmeny vakcinie se reproduktivně replikují alespoň v některých lidských buněčných liniích, zejména v lidských keratinocytových buněčných liniích HaCat (Boukamp et al., 1988, J. Cell Biol. 106 (3):761-71). Replikace v buněčné linii HaCat je prediktivní pro replikaci in vivo, zejména pro in vivo replikaci v lidech. V příkladové části je ukázáno, že všechny známé testované kmeny vakcinie, které vykazují reziduální produktivní replikaci v HaCat se skutečně replikují in vivo. Vynález se přednostně týká virů vakcinie, které se nereplikují produktivně v lidských buněčných liniích HaCat. Zejména se týká kmenů viru vakcinie, které nejsou schopné reproduktivní replikace v žádné s následujících lidských buněčných linií: lidské buněčné linie cervikálního adenokarcinomu HeLa (ATCC č. CCL-2), lidské embryonální ledvinné buněčné linie 293 (ECACC č. 85120802), lidské kostní osteosarkomální buněčné linie 143B (ECACC č. 91112502) a v buněčných liniích HaCat.
Růstové chování nebo amplifikace/replikace viru je normálně vyjádřeno poměrem množství viru produkovaného infikovanou buňkou (výstup) k množství viru původně použitého pro infikování buněk na začátku (vstup) (amplifikační poměr). Poměr 1 mezi výstupem a vstupem definuje stav amplifikace, kdy množství viru produkovaného infikovanými buňkami je stejné jako množství viru použitého na počátku pro infikování buněk. Tento stav poukazuje na skutečnost, že infikované buňky jsou permisivní pro virové infekce a reprodukci viru.
Amplifikační poměr menší jako 1 tj. pokles amplifikace pod hladinu vstupu je ukazatel nedostatku reproduktivní replikace a tudíž ukazatel pro oslabení viru. Proto bylo v zájmu vynálezců identifikovat a nakonec izolovat kmen, který vykazuje amplifikační poměr menší jako 1 ve vícero lidských buněčných liniích, zejména ve všech buněčných liniích 143B, HeLa, 293 a HaCat.
Termín neschopný reproduktivní replikace tudíž znamená, že virus podle předloženého vynálezu vykazuje amplifikační poměr menší než 1 v lidských buněčných liniích, jako jsou buněčné linie 293 (ECACC č. 85120602), 143B (ECACC č. 91112502), HeLa (ATCC č. CCL-2) a HaCat (Boukamp et al., 1988, J. Cell. Biol. 106 (3):761-71), za podmínek uvedených v příkladu 1 předloženého popisu pro některé specifické kmeny MVA. S výhodou je amplifikační poměr viru podle předloženého vynálezu v každé z buněčných linii HeLa, HaCat a 143B 0,8 nebo menší.
V příkladu 1 a tabulce 1 je podrobně ukázáno, že viry podle předloženého vynálezu se nereplikují reproduktivně ani v jedné z buněčných linii 143B, HeLa a HaCat. Konkrétní kmen podle předloženého vynálezu, který byl použit v příkladech, byl uložen v Evropské sbírce mikroorganizmů pod číslem V00083008. Tento kmen je v celém popisu označován jako
MVA-BN.
• 9 ·
Známé kmeny MVA vykazují zbytkovou replikaci alespoň v jedné z testovaných lidských buněčných linií (obr. 1, příklad 1). Všechny známé kmeny vakcinie vykazují alespoň nějakou replikaci v buněčných liniích HaCat, zatímco kmeny MVA podle předloženého vynálezu, zejména MVA-BN, se nereplikují reproduktivně v HaCat buňkách. Podrobněji, MVA-BN vykazuje amplifikační poměr 0,05 až 0,2 v lidské embryonální ledvinné buněčné linii 293 (ECACC č. 85120602). V lidské osteosarkomální buněčné linii 143B (ECACC č. 91112502) je poměr v rozmezí 0,0 až 0,6. V lidské buněčné linii cervikálního adenokarcinomu HeLa (ATCC č. CCL-2) a lidské keratinocytové buněčné linii HaCat (Boukamp et al., 1988, J. Cell Biol. 106(3): 761-71) je amplifikační poměr v rozmezí 0,04 až 0,8, případně 0,02 až 0,8. MVA-BN má amplifikační poměr v ledvinných buňkách afrických zelených opic (kočkodan) (CV1: ATCC č. CCL-70) 0,01 až 0,06. Tudíž se MVA-BN, který je prototypový kmen podle předloženého vynálezu nereplikuje reproduktivně ani v jedné z testovaných buněčných liniích.
Amplifikační poměr MVA-BN je jasně nad 1 ve fibroblastech kuřecích embryí (CEF; primární kultury) nebo v ledvinné buněčné linii křečcích mláďat BHK (ATCC č. CRL-1632). Jak uvedeno výše, poměr vyšší než 1 ukazuje reproduktivní replikaci, protože množství viru produkovaného infikovanými buňkami se zvýšilo v porovnání s množstvím viru, které bylo použito k infekci buněk. Proto může být virus snadno rozšiřován a amplifikován v CEF primárních kulturách s poměrem nad 500 nebo v BHK buňkách s poměrem nad 50.
Další provedení podle předmětného vynálezu se týká derivátů viru uloženého pod číslem ECACC V0083008. „Deriváty“ virů uložené pod číslem ECACC V00083008 se týkají virů, které mají v podstatě stejné replikační charakteristiky jako uložený kmen, ale vykazují rozdíly v jedné nebo více částech jeho genomu. Viry, které mají stejné „replikační vlastnosti“ jako viry uložené, jsou viry jež se replikují ve stejných amplifikaěních poměrech jako uložené kmeny v CEF buňkách a v buněčných liniích BHK, HeLa, HaCat a 143B a vykazují podobnou replikaci in vivo jak bylo stanoveno v AGR129 transgenním myším modelu (viz dále).
Podle výhodného provedení jsou kmeny viru vakcinie podle předloženého vynálezu, obzvláště MVA-BN a jeho deriváty, charakterizované chybějící replikací in vivo. V souvislosti s předloženým vynálezem se „chybějící replikace in vivo“ týká virů, které se nereplikují v lidech a myším modelu popsaném níže. Chybějící replikace in vivo se s výhodou φφ • ΦΦΦ · · · · · · · · ······ · · · · · < ····· ♦ · · · · · φ φ φ φ φφφφφ φ · * · stanovuje u myší, které nejsou schopné tvorby zralých B a T buněk. Příkladem takové myši je transgenní myší model AGR129 (získaný od Marka Suttera, Institute of Virology, University of Zurich, Zurich, Švýcarsko). Tento myší kmen má geneticky cílené disrupce v IFN receptoru typu I (IFN-α β) a typu II (IFN γ) genů a v RAG. V důsledku těchto disrupcí nemají myši žádný IFN systém a nejsou schopny tvorby zralých B a T buněk a jako takové jsou silně imunokompromitované (mají silně porušenou imunitu) a jsou silně vnímavé vůči replikujícímu se viru. Namísto AGR129 myši lze použít jiný kmen myší, který není schopný tvorby zralých B a T buněk a jako takový je silně imunokompromitovaný a je vysoce vnímavý vůči replikujícímu se viru. Konkrétně viry podle předloženého vynálezu nezabíjejí AGR129 myši v době nejméně 45 dnů, s výhodou do 60 dnů, nebo až 90 dnů po infekci myší s 107 pfu viru podaného intraperitoneálně. S výhodou jsou viry vykazující defekt v replikaci in vivo dále charakterizované tím, že žádný virus nemůže být znovu získán z orgánů nebo tkání AGR129 myší po 45 ti dnech, s výhodou 60 dnech a nejlépe 90 ti dnech po infekci myší s 107pfu viru aplikovaného intraperitoneálně. Podrobné informace týkající se infekčních testů s AGR129 myším a testy použité na stanovení zda virus může být opětně získán z orgánů a tkání jsou k nalezení v příkladové části.
Podle výhodného provedení jsou kmeny viru vakcinie podle předloženého vynálezu, zejména MVA-BN a jeho deriváty, vyznačené vyšší imunogenicitou v porovnání se známým kmenem MVA 575 jak bylo stanoveno při vyvolání smrtící odezvy v myším modelu. Podrobnosti tohoto pokusu jsou popsané v příkladu 2. Ve stručnosti, v takovém modelu nevakcinované myši umírají po infekci replikačně kompetentním kmenem viru vakcinie jako například s Western Reserve kmenem L929 TK+ nebo IHD-J. Infekce s replikačně kompetentním virem vakcinie se v kontextu s popisem modelu vyvolání smrtící odezvy uvádí jako expozice (výzva). Čtyři dny po expozici jsou myši obyčejně usmrceny a je stanovený virový titr ve vaječní cích standardním plakovým testem za použití Věro buněk (více podrobností je v příkladové části). Virové titry byly stanoveny pro nevakcinované myši a pro myši vakcinované s viry vakcinie podle předloženého vynálezu. Podrobněji, viry podle předloženého vynálezu jsou charakterizované tím, že v tomto testu po vakcinaci s 102 TCIDso/ml viru podle vynálezu titry viru ve vaječnících jsou zredukované o nejméně 70%, s výhodou nejméně 80%, nejlépe 90% v porovnání s nevakcinovanými myšemi.
Podle výhodného provedení jsou viry vakcinie podle předloženého vynálezu, zejména
MVA-BN a jeho deriváty užitečné pro imunizaci podáváním vakcíny jako primámí/posilující očkování. Byla řada zpráv předpokládajících, že očkovací režimy primámí/posilující za použití MVA jako transportního vektoru indukuje jen slabé imunitní odpovědi a jsou horší než režimy DNA primární a MVA posilující (Schneider et al., 1998, Nat. Med. 4; 397-402). Ve všech těchto studiích byly použity MVA kmeny, které se liší od virů vakcinie podle předloženého vynálezu. Na vysvětlení slabé imunitní odpovědi, když MVA byl použit pro primární a posilující očkování byla přijata hypotéza, že protilátky vytvářené proti MVA během primárního podávání neutralizují MVA podaný při druhé imunizací, bráníce tak účinnému posílení imunitní odpovědi. Na rozdíl od toho bylo referováno, že očkovací režimy DNA primární/MVA posilující lépe generují odpovědi vysoké avidity, protože tento režim spojuje schopnost DNA účinně senzibilizovat imunitní odpověď s vlastnostmi MVA posílit tuto odpověď při absenci již dříve existující imunity vůči MVA. Je jasné, že když již dříve existující imunita vůči MVA a/nebo vakcinii brání posílení imunitní odpovědi, potom použití MVA jako vakcíny nebo terapeutického prostředku by mělo jen omezenou účinnost, zejména u jedinců, kteří byli očkováni proti pravým neštovicím. Avšak podle dalšího provedení virus vakcinie podle předloženého vynálezu, zejména MVA-BN a jeho deriváty, jakož i odpovídající rekombinantní viry obsahující heterologní sekvence, lze použít pro účinné vyvolání imunitních odpovědí prvním očkováním a potom jejich posílení jak u novorozených zvířat tak u zvířat s již dříve existující imunitou proti poxvirům. Tudíž virus vakcinie podle předloženého vynálezu indukuje alespoň v podstatě stejnou hladinu imunity v očkovacím režimu virus vakcinie primámí/virus vakcinie posilující ve srovnání s očkovacími režimy DNA primámí/virus vakcinie posilující.
Virus vakcinie je považován za vir indukující alespoň v podstatě stejnou hladinu imunity v očkovacím režimu virus vakcinie primární/ virus vakcinie posilující ve srovnání s očkovacími režimy DNA primámí/virus vakcinie posilující, jestliže CTL odpověď tak jak byla měřená v jednom z následujících testů (test 1 a test 2), s výhodou v obou testech, je nejméně v podstatě stejná v režimech virus vakcinie primámí/virus vakcinie posilující v porovnání s režimy DNA-primámí/virus vakcinie posilující. S výhodou je CTL odpověď po podávání virus vakcinie primámí/virus vakcinie posilující vyšší v alespoň jednom testu v porovnání s režimy DNA-primární/virus vakcinie posilující. Nejvýhodnější je je-li CTL odpověď vyšší v obou následujících testech.
Test 1 • ·
999 • 9 · ·
Pro podávání virus vakcinie primámí/virus vakcinie posilující, byly 6-8-týdnů staré BALB/c (H-2d) myši primárně imunizované (základní imunizace) intravenózní aplikaci 107 TCID50 viru vakcinie podle předmětného vynálezu exprimující myší polytop popsaný Thomsonem et al, 1988, J. Immunolog. 160,1717, a posilující imunizace byla provedena stejným množstvím stejného viru, podaného tím samým způsobem o tři týdny později. Závěrem je nezbytné vytvořit rekombinantní virus vakcinie exprimující tento polytop. Způsoby vytváření takových rekombinantních virů jsou odborníkům v oboru známé a jsou dále podrobněji popsané. V režimech DNA primární/virus vakcinie viru posilující je primární vakcinace myší provedena nitrosvalovou injekcí s 50 pg DNA exprimující stejný antigen jako virus vakcinie; posilující podávaní viru vakcinie se provádí přesně stejným způsobem jako při aplikaci virus vakcinie primámí/virus vakcinie posilující. Plazmid DNA exprimující polytop je rovněž popsaný ve výše uvedené publikaci Thomson et at. V obou režimech byla CTL odpověď vůči epitopům SYIPSAEKI, RPQASGVYM a/nebo YPHFMPTNL stanovena dva týdny po podávání posilující dávky. Stanovení CTL odpovědi se s výhodou provádí za použití ELISPOT analýzy jak je popsáno v Schneider et al., 1998, Nat. Med. 4, 397-402 a jak je dále popsáno v příkladech pro jeden specifický virus podle předloženého vynálezu. Virus podle předloženého vynálezu je charakterizovaný v tomto experimentu tak, že CTL imunitní odpověď vůči výše uvedeným epitopům, která je indukovaná podáváním virus vakcinie primámí/virus vakcinie posilující je v podstatě stejná, s výhodou alespoň stejná jako imunitní odpověď indukovaná při podávání DNA-primámí/virus vakcinie posilující jak bylo stanoveno počtem IFN-γ produkujících buněk/106 spleen buněk (viz experimentální část).
Test 2
Tento test v zásadě odpovídá testu 1. Avšak namísto 107 TCID50 viru vakcinie podaného intravenózně jako v testu 1, se v tomto testu 108 TCID50 viru vakcinie podle předloženého vynálezu aplikuje podkožně, jak při primární imunizaci, tak při posilující imunizaci. Virus podle předloženého vynálezu je charakterizovaný v tomto experimentu tím, že CTL imunitní odpověď vůči epitopům výše uvedeným, indukovaná podáváním virus vakcinie primární/virus vakcinie posilující je v podstatě stejná, s výhodou alespoň stejná jako imunitní odpověď indukovaná při podávání DNA-primární/virus vakcinie posilující, jak bylo stanoveno počtem IFN-γ produkujících buněk/106 spleen buněk (viz experimentální část).
Síla CTL odpovědi změřená v jednom z uvedených testů odpovídá hladině ochrany.
Viry podle předloženého vynálezu jsou tedy obzvlášť vhodné pro vakcinační účely.
Souhrnně je virus vakcinie podle předloženého vynálezu charakterizovaný tím, že má alespoň jednu z následujících vlastností:
(i) schopnost reproduktivní replikace ve fibroblastech kuřecích embryí (CEF) a buněčných liniích BHK, ale nemá schopnost reproduktivní replikace v lidských buněčných liniích HaCat, (ii) selhání replikace in vivo, (iii) indukce vyšší imunogenicity v srovnání se známým kmenem MVA 575 (ECACC V00120707) v modelu smrtící expozice a/nebo (iv) indukce alespoň v podstatě stejné hladiny imunity v režimech virus vakcinie primární/ virus vakcinie posilující ve srovnání s režimy DNA-primární/virus vakcini posilující.
S výhodou má virus vakcinie podle předloženého vynálezu alespoň dvě z výše uvedených vlastností, výhodněji alespoň tři z uvedených vlastností. Nej výhodnější jsou viry vakcinie mající všechny z výše uvedených vlastností.
Dalším provedením vynálezu je souprava pro vakcinaci, která obsahuje virus podle předloženého vynálezu pro první vakcinaci v první ampulce/obal a pro druhou posilující vakcinaci v druhé ampulce/obal. Virus může být nerekombinantní virus vakcinie např. virus vakcinie, který neobsahuje heterologní nukleotidové sekvence. Příkladem takového virus vakcinie je MVA-BN a jeho deriváty. Alternativně může být virus rekombinantním virem vakcinie, který obsahuje další nukleotidové sekvence, které jsou heterologní k viru vakcinie. Jak je uvedeno v jiných částech popisu heterologní sekvence mohou kódovat epitopy, které indukuji odpověď imunitního systému. Takže je možné použít rekombinantní virus vakcinie pro vakcinaci proti proteinům nebo činidlům obsahujícím řečený epitop. Viry mohou být upravené do aplikovatelné formy jak je uvedeno níže podrobněji. Množství viru, které má být použito pro každou vakcinaci bylo definován výše.
Pro osobu znalou oboru je jasné, jak získat virus vakcinie mající alespoň jednu z následujících vlastností:
- schopnost reproduktivní replikace ve fibroblastech kuřecích embryí (CEF) a ledvinných buněčných liniích křečcích mláďat BHK, ale neschopné reproduktivní replikace v lidských keratincytových buněčných liniích HaCat,
- selhání replikace in vivo, • · · ·
- indukce vyšší imunogenicity v porovnání se známý kmenem MVA 575 v modelu smrtící expozice a/nebo
- indukce alespoň v podstatě stejné hladiny imunity v režimech virus vakcinie primární/ virus vakcinie posilující v porovnání s režimy DNA-primámí/virus vakcinie posilující.
Způsob k získání takového viru zahrnuje následující kroky:
(i) zavedení známého kmene viru vakcinie s výhodou MVA 574 nebo MVA 575 (ECACC V00120707) do jiných než lidských buněk, ve kterých je virus schopný reproduktivní replikace, kde jiné než lidské buňky jsou s výhodou vybrané z buněk CEF a buněčných linií BHK, (ii) isolaci/obohacení virových částic z těchto buněk a (iii) analýzu, zda získaný virus má alespoň jednu z dříve definovaných biologických vlastností, přičemž výše uvedené kroky mohou být libovolně opakovány do té doby než se získá virus s požadovanými replikačními charakteristikami. Vynález se dále týká virů získaných způsobem podle předloženého vynálezu. Způsoby jakými mohou být požadované biologické vlastnosti stanoveny jsou vysvětleny v jiných částech popisu.
Při použití tohoto způsobu vynálezci identifikovali a isolovali několikanásobným čištěním klonu kmen podle předloženého vynálezu vycházejíce z MVA izolátu pasáže 575 (MVA 575). Tento nový kmen odpovídá kmeni s přístupovým číslem ECACC V0083008, který je uvedený výše.
Růstové chování virů vakcinie podle předloženého vynálezu, zejména růstové chování MVA-BN ukazuje, že kmeny podle předloženého vynálezu převyšují jakýkoliv dosud charakterizovaný MVA izolát pokud se týče oslabení v lidských buněčných liniích a neschopnosti in vivo replikace. Kmeny podle vynálezu jsou proto ideálními kandidáty pro vývoj bezpečnějších produktů jako vakcín nebo farmaceutických přípravků jak jsou dále popsané.
V jednom provedení je virus podle předloženého vynálezu, zejména MVA-BN a jeho deriváty, použitý jako vakcína proti lidským neštovicovým nemocím, jako jsou pravé neštovice. Podle dalšího provedení může být virus podle předloženého vynálezu rekombinantní, tj. může exprimovat heterologní geny jako například antigeny nebo epitopy
« ·« φ φ φφφφ «· · · · ♦ • φφφ φ ΦΦΦ· ···♦·· · 1Α »φ·ΦΦ·
ΦΦΦ Φ· ·» ··· heterologní k viru a může tak být užitečný jako vakcína k indukci imunitní odpovědi vůči heterologním antigenům nebo epitopům.
Termín“ imunitní odpověď“ znamená reakci imunitního systému při vstupu cizorodé látky nebo mikroorganizmu do organizmu. Podle definice je imunitní odpověď rozdělená na specifickou a nespecifickou, přestože jsou obe úzce spojené. Nespecifická imunitní odpověď je okamžitá obranná reakce na široký okruh cizorodých látek a infekčních činidel. Specifická imunitní odpověď je obrana vyvolaná se zpožděním, když organismus je napaden látkou poprvé. Specifická imunitní odpověď je vysoce účinná a odpovídá za skutečnost, že jedinec, který se vyléčil ze specifické infekce je chráněný proti této specifické infekci. Tudíž druhá infekce tím samým nebo velice podobným infekčním činidlem způsobuje o mnoho mírnější příznaky nebo vůbec žádné příznaky, protože již existuje imunita na toto činidlo. Tudíž se indukce imunitní paměti může použít pro vakcinaci.
„Imunitní systém“ představuje komplex orgánů zapojených do obrany organizmu proti cizorodým látkám a mikroorganizmům. Imunitní systém sestává z části buněčné zahrnující různé typy buněk jako například lymfocyty a jiné buňky odvozené od buněk bílých krvinek, a části humorální zahrnující malé peptidy a komplementární faktory.
„Vakcinace“ znamená, že organizmus je vystavený účinku infekčního činidla například oslabené nebo inaktivované formě tohoto infekčního činidla, aby se vyvolala specifická imunita. Termín vakcinace pokrývá také vystavení organizmu účinku rekombinantního viru vakcinie podle přeloženého vynálezu, zejména rekombinantního viru MVA-BN a jeho derivátů, exprimujicích antigeny a epitopy, které jsou heterologní k viru. Příklady takových epitopů jsou uvedeny v jiných částech popisu a zahrnují například epitopy z proteinů odvozených od jiných virů jako virus Dengue, virus Hepatitis C, HIV nebo epitopy odvozené od proteinů, které jsou spojovány s vývojem nádorů a rakoviny. Po podání rekombinantího viru vakcinie do organizmu jsou epitopy exprimované a prezentované do imunitního systému a je indukovaná specifická imunitní odpověď vůči těmto epitopům. Organizmus je tak imunizovaný vůči činidlu/proteinu obsahujícímu epitop, který je kódovaný rekombinantním virem vakcinie.
Imunita“ znamená částečnou nebo úplnou ochranu organizmu proti nemocím způsobeným infekčním činidlem v důsledku úspěšné eliminace předchozí infekce uvedeným
infekčním činidlem nebo jeho charakteristickou části. Imunita je založena na existenci, indukci a aktivaci specializovaných buněk imunitního systému.
Jak je výše uvedeno v jednom provedení vynálezu, rekombinantní virus podle předloženého vynálezu, zejména rekombinantní MVA-BN a jeho deriváty, obsahují alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny. Termín „heterologní“ je dále používán pro každou kombinaci sekvencí nukleových kyselin, které nejsou normálně úzce spojované s přírodním virem, takový virus se rovněž nazývá „rekombinantní virus“.
Podle dalšího provedení předmětného vynálezu jsou heterologní sekvence s výhodou antigenní epitopy, vybrané z jiného zdroje než vakcinie. Výhodněji tento rekombinantní virus exprimuje jeden nebo více antigenní ch epitopů z Plasmodium falsiparum, Mycobacteria, virus Influenza, z virů vybraných z čeledi Flaviviry, Paramyxoviry, viry hepatitídy, virus imunitní nedostatečností (HIV) nebo virů způsobujících hemoragickou horečku jako Hantaviry nebo Filoviry jako například Ebola nebo virus Marburg.
Podle dalšího provedení vynálezu a návdavkem k výše uvedenému výběru antigenních epitopů mohou být heterologní sekvence vybrány z jiného zdroje poxviru nebo viru vakcinie. Tyto virové sekvence lze použít za účelem modifikace spektra hostitele nebo imunogenicity viru.
Podle dalšího provedení může virus podle předloženého vynálezu kódovat heterologní gen/nukleovou kyselinu exprimující terapeutickou sloučeninu. „Terapeutická sloučenina“ kódovaná heterologní nukleovou kyselinou ve viru může být například buď terapeutická nukleová kyselina jako protismyslná nukleová kyselina nebo peptid nebo protein s požadovanými biologickým účinkem.
Podle dalšího výhodného provedení je exprese heterologní sekvence nukleové kyseliny s výhodou, ale ne výlučně, pod transkripční kontrolou poxvirového promotoru, s výhodou promotoru viru vakcinie.
Dalším výhodným provedením je, že heterologní sekvence nukleové kyseliny je s výhodou začleněna do nepodstatné oblasti virového genomu. Podle jiného výhodného provedení, je heterologní sekvence nukleové kyseliny začleněna v přirozeně se vyskytujícím • ·· ·· 00 0 0 00 0 000 «· · · · · ·· · • · · · · · · 0 · · · 0 • · 0 · 0 * · 0 · · 0 lz ··· ·· ·· ··· ·» ·· místě delece MVA genomu (popsaná v PCT/EP96/02926). Způsoby inserce heterologních sekvencí do genomu poxviru jsou odborníkům v oboru známé.
Podle dalšího výhodného provedení, vynález dále zahrnuje genom viru, jeho rekombinanty nebo jejich funkční části. Takové virové sekvence mohou být použity k identifikaci nebo izolaci viru nebo jeho rekombinant, například použitím polymerázové řetězové reakce (PCR), hybridizačními technologiemi nebo provedením ELISA testů. Navíc mohou být takové virové sekvence exprimované z expresního vektoru, aby produkovaly kódovaný protein nebo peptid, který potom může doplnit deleční mutanty viru, kterým chybí virová sekvence obsažená v expresním vektoru.
„Funkční část“ virového genomu značí část kompletní genomové sekvence, která kóduje fyzickou entitu jako protein, proteinovou doménu, epitop proteinu. Funkční část virového genomu také popisuje části kompletní genomové sekvence, která kóduji regulační elementy nebo části takových elementů s individualizovatelnou aktivitou, jako promotor, zesilovač, cis- nebo trans-působící elementy.
Rekombinantní virus podle předloženého vynálezu může být použitý k zavedení heterologní sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky, přičemž tato sekvence je buď homologická nebo heterologní k cílové buňce. Zavedení heterologní sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky lze použít k přípravě in vitro heterologních peptidů nebo polypeptidů a/nebo kompletních virů kódovaných uvedenou sekvenci. Tento způsob zahrnuje infekci hostitelské buňky rekombinantní MVA, kultivaci infikované hostitelské buňky za vhodných podmínek, a izolaci a/nebo obohacení peptidu, proteinu a/nebo viru produkovaného uvedenou hostitelskou buňkou.
Navíc, způsob zavedení homologní nebo heterologní sekvence do buněk může být použitý pro in vitro a s výhodou in vivo terapii. Pro in vitro terapii se izolované buňky, které byly předtím (ex vivo) infikované virem podávají živému zvířecímu organizmu, aby se indukovala imunitní odpověď. Pro in vivo terapii se virus nebo jeho rekombinanty podávají přímo živému zvířecímu organizmu pro indukci imunitní odpovědi. V tomto případě, jsou buňky kolem místa očkování přímo infikovaná in vivo virem nebo jejich rekombinantami podle vynálezu.
• »0 000000 00 00 • 0 0 000 00 0
0000 t 0000 0 « ·
Protože virus podle předloženého vynálezu je velice růstově omezený v lidských a opičích buňkách, a tudíž silně oslabený, je ideální pro léčení velkého okruhu savců včetně lidí. Předložený vynález rovněž poskytuje farmaceutickou kompozici a vakcínu např. pro indukování imunitní odpovědi v živých zvířecích organizmech, včetně lidí. Virus podle vynálezu je dále bezpečný v kterýkoliv jiných protokolech genové terapie.
Farmaceutická kompozice může obecně obsahovat jeden nebo více farmaceuticky přijatelných a/nebo schválených nosičů, přísad, antibiotik, konzervačních přísad, pomocných látek, rozpouštědel a/nebo stabilizátorů. Takové pomocné látky mohou být voda, fyziologický roztok, glycerin, ethanol, zvlhčovadla nebo emulgátory, pH pufry a podobně. Vhodnými nosiči jsou typické velké, pomaly metabolizované molekuly jako proteiny, polysacharidy, kyseliny poly-mléčné, kyseliny polyglykolové, polymerní aminokyseliny, kopolymery aminokyselin, agregáty lipidů nebo podobně.
Pro přípravu vakcíny je virus nebo jeho rekombinanty převeden na fysiologicky přijatelnou formu. To se provádí na základě zkušeností s přípravou poxvirových vakcín používaných na vakcinaci proti pravým neštovicím (popsáno Stickl, H. etal. 1974 Dtsch. med. Wschr. 99, 2386-2392). Například, vyčištěný virus se skladuje při -80 °C s titrem 5xl08 TCID5o/ml upravený v asi 10 mmol Tris, 140 mmol NaCI pH 7.4. Pro přípravu injekčních vakcín se např. 102-108 virových částic lyofilizuje v 100 ml fyziologického roztoku pufrovaného fosfátem (PBS) v přítomnosti 2% peptonu a 1% lidského albuminu v ampuli, s výhodou skleněné ampuli. Alternativně mohou být injekce připravené postupným vymrazováním viru ve formulaci. Tato formulace muže obsahovat další přísady jako mannitol, dextran, cukr, glycin, laktózu nebo póly viny lpyrrolidon nebo jiné přísady jako antioxidanty nebo inertní plyn, stabilizátory, nebo rekombinantní proteiny (např. lidský sérový albumin) vhodné pro in vivo podávání. Skleněná ampule se uzavře a může se skladovat při teplotách v rozmezí od 4 °C až po teplotu místnosti po dobu několik měsíců. Avšak pokud není potřebná, skladuje se s výhodou při teplotách pod -20 °C.
Pro vakcinaci nebo terapii se lyofilizát může rozpustit v 0,1 až 0,5 ml vodného roztoku, s výhodou fyziologického roztoku nebo Tris pufru a podávat buď systemicky nebo lokálně například parenterálně, intramuskulámě nebo jakoukoliv jinou cestou podávání známou odborníkovi. Způsob aplikace, dávka a počet podání mohou být optimalizované odborníky v oboru známými způsoby.
Podle dalšího provedení je virus podle předloženého vynálezu zejména užitečný pro indukci imunitní odpovědi ve zvířatech s porušenou imunitou např. opicích (CD4<400/pl krve) infikovaných SIV nebo imunokompromitovaných lidech. Termín imunokompromitovaný znamená stav imunitního systému jedince, který vykazuje jen neúplné imunitní odpovědi nebo má sníženou schopnost obrany proti infekčnímu činidlu. Ještě zajímavější je, že podle dalšího provedení může virus podle předloženého vynálezu zesílit imunitní odpověď v imunokompromitovaných zvířatech nebo lidech, i v přítomnosti již existující imunity těchto zvířat nebo lidi proti poxvirům. Obzvlášť zajímavé bylo, že virus podle předloženého vynálezu může posílit imunitní odpovědi také ve zvířatech a lidech procházejících antivirovou případně antiretrovirovou terapií. Antivirová terapie zahrnuje terapeutické koncepty k eliminaci nebo potlačení virových infekcí například (i) aplikaci analogů nukleotidů, (ii) aplikaci inhibitorů enzymatické aktivity virů nebo sestavy virů, nebo (iii) aplikaci cytokinů na ovlivnění imunitní odpovědi hostitele.
Podle dalšího provedení vynálezu je vakcína obzvláště, ale ne výlučně použitelná v oblasti veterinární například pro imunizaci zvířat proti neštovicové infekci. U malých zvířat se očkování k imunizaci provádí s výhodou parenterálně nebo nasálně, u větších zvířat nebo lidí je upřednostňováno očkování podkožní, intramuskulární nebo orální.
Zjistilo se, že již injekce vakcíny obsahující účinnou dávku jen 10 TCID50 (infekční dávka tkáňové kultury) viru podle předloženého vynálezu je dostačující pro indukci úplné imunity proti divokému viru vakcinie při vyvolání odezvy u myší. Toto je obzvlášť překvapující, protože při tak silném stupni oslabení viru podle předloženého vynálezu by se očekával negativní vliv, a tím snížení imunogenicity. Takovéto očekávání je založené na názoru, že pro indukcí imunitní odpovědi musí být imunitnímu systému prezentováno dostatečné množství antigenních epitopů. Virus, který je silně oslabený a tudíž se nereplikuje, může presentovat jen malé množství antigenních epitopů, tj. jen tolik kolik jich sám inkorporuje. Toto množství antigenu, neseného virovými částicemi, nebylo považováno za dostatečné pro indukci silné imunitní odpovědi. Nicméně virus podle předloženého vynálezu stimuluje již při velice nízké účinné dávce 102 TCID50 silnou a ochrannou imunitní odpověď při testech na vyvolání odezvy proti vakcinii u myší. Virus podle předloženého vynálezu tak vykazuje neočekávanou a ještě zvětšenou imunogenicitu ve srovnání s dosud charakterizovanými MVA kmeny. Tato vysoká imunogenicita činí virus podle předloženého ·· · · ♦ ·· vynálezu a každou od něho odvozenou vakcínu zvláště vhodnou pro aplikaci u imunokompromitovaných zvířat a lidí.
Podle dalšího provedení podle předloženého vynálezu je virus použitý jako adjuvans. Adjuvans v kontextu s předloženým popisem se týká zesilovače specifické imunitní odpovědi ve vakcínách. Použití viru jako adjuvans znamená vložení viru do předem existující vakcíny pro dodatečnou stimulaci imunitního systému pacienta, který vakcínu obdrží. Imunizační účinek antigenního epitopu je ve většině vakcín často zesílen přidáním tzv. adjuvantu. Adjuvant ko-stimuluje imunitní systém tím, že způsobí silnější imunitní reakci proti antigennímu epitopu vakcíny. Tato stimulace může být regulovaná faktory nespecifického imunitního systému, jako interferon a interleukin.
Podle dalšího provedení podle předloženého vynálezu se virus používá u savců včetně lidí k aktivaci, podpoře nebo potlačení imunitního systému a s výhodou k aktivaci imunitní odpovědi proti jakékoliv antigenní determinantě. Virus lze také použít na podporu imunitního systému v situaci zvýšené náchylnosti k infekcím jako v případě stresu.
Virus použitý jako adjuvans může být ne-rekombinantní virus například virus, který neobsahuje heterologní DNA v genomu. Příkladem tohoto typu viru je MVA-BN. Alternativně je virem použitým jako adjuvans, virus rekombinantní obsahující ve svém genomu heterologní DNA sekvence, které nejsou přirozeně přítomné ve virovém genomu. Pro použití jako adjuvans rekombinantní virová DNA viru s výhodou obsahuje a exprimuje geny kódující imunitu stimulující peptidy nebo proteiny jako interleukiny.
Podle dalšího provedení je výhodné, že virus pro použití jako adjuvans nebo pro přidání k jiné vakcíně je inaktivovaný. Inaktivace viru se může provést například teplem nebo chemikáliemi, známými v oboru. S výhodou se virus inaktivuje β-propiolaktonem. Podle tohoto provedení vynálezu, se inaktivovaný virus může přidat k vakcínám proti řadě infekčních nemocí nebo proliferačních nemocí na zvýšení imunitní odpovědi pacienta vůči této nemoci.
Souhrn vynálezu
Vynález zahrnuje jednotlivě nebo v kombinaci:
··«
9 99 9 9 99 9 99 9
9 9 9 9 9
9999 Β · 9
9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9
9 9 99 9 9 9 9
Virus vakcinie mající alespoň jednu z následujících vlastností:
- schopnost reproduktivní replikace ve fibroblastech kuřecích embryí (CEF) a v ledvinných buněčných liniích křeččích mláďat BHK, ale neschopnost reproduktivní replikace v lidských keratincytových buněčných liniích HaCat,
- selhání replikace in vivo,
- indukce vyšší imunogenicity v porovnání se známým kmenem MVA 575 ve smrtícím modelu a/nebo
- indukce alespoň v podstatě stejné hladiny imunity v režimech virus vakcinie primární imunizace/virus vakcinie posilující imunizace v porovnání s režimy DNA-primámí imunizace/virus vakcinie posilující imunizace.
Virus uvedený výše vyznačující se tím, že není schopný reproduktivní replikace v žádné z následujících lidských buněčných linií: lidská embryonální ledvinná buněčná linie 293, buněčná linie 143B lidského osteosarkomu a lidská buněčná linie cervikálního adenokarcinomu HeLa.
Virus uvedený výše, uložený v Evropské sbírce mikroorganizmů (ECACC), Salisbury (UK) pod číslem V00083008 a jeho deriváty.
Shora uvedený virus, obsahující alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny.
Shora uvedený virus, kde heterologní sekvence nukleové kyseliny je vybraná ze sekvence kódující alespoň jeden antigen, antigenní epitop a/nebo terapeutickou sloučeninu.
Genom nebo jeho funkční části odvozené od shora definovaného viru.
Farmaceutická kompozice obsahující shora uvedený virus a/nebo genom a/nebo jeho funkční části jak shora definované a farmaceuticky přijatelný nosič, rozpouštědlo a/nebo přísada.
Vakcína obsahující shora uvedený virus a/nebo genom a/nebo jeho funkční část jak shora definované.
• · ··φ · * · • ···
Shora uvedený virus, genom a/nebo jeho funkční části jak shora definováno, kompozice jak definováno výše nebo vakcína jako léčivo pro ovlivnění, s výhodou vyvolání imunologické odpovědi v živých zvířatech, včetně lidí.
Výše uvedený virus, výše definovaná farmaceutická kompozice, výše definovaná vakcína nebo virus, přičemž jsou virus, kompozice nebo vakcína podávány v terapeuticky účinných množstvích při prvním očkování (primární očkování) a v druhém očkování (posilující očkování).
Použití výše definovaného viru a/nebo genomu pro přípravu medikamentu nebo vakcíny.
Způsob zavedení homologní a/nebo heterologní sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky zahrnující infikování cílových buněk virem obsahujícím heterologní sekvence jak výše definováno nebo transfekcí cílové buňky výše definovaným genomem.
Způsob produkce peptidu, proteinu a/nebo viru zahrnující
- infikování hostitelské buňky výše uvedeným virem,
- kultivaci infikované hostitelské buňky za vhodných podmínek, a
- isolaci a/nebo obohacení peptidu a/nebo proteinu a/nebo viru produkovaného hostitelskou buňkou.
Způsob ovlivnění, s výhodou vyvolání imunologické odpovědi v živém organizmu včetně člověka zahrnující podání výše uvedeného viru, genomu a/nebo jeho funkční části výše definované, kompozice výše definované nebo vakcíny výše definované zvířeti nebo člověku, který má jí být ošetřen.
Výše uvedený způsob, spočívající v podání alespoň 10 TCID50 viru.
Způsob výše uvedený, kde virus, kompozice nebo vakcína se podávají v terapeuticky účinném množství při prvním očkování a druhém očkování.
Způsob výše uvedený, kde zvíře je zdravotně imunokompromitované.
•4 ·» 444· ·· 4«·· • * · · >4 4 ··· 444·· 44 4
44449 444 9 4
4 4949 • 44 94 444 44 44
Způsob výše uvedený, kde zvíře má již existující imunitu vůči poxvirům.
Způsob výše uvedený, kde zvíře prochází antivirovou terapii.
Způsob výše uvedený, kde zvíře prochází antivirovou terapii, kterážto antivirová terapie je antiretrovirová terapie.
Použití viru výše uvedeného, genomu a/nebo jeho funkční části výše definovaných jako adjuvans.
Způsob zesílení specifické imunitní odpovědi proti antigenu a/nebo antigennímu epitopu obsaženému ve vakcíně zahrnující podávání výše uvedeného viru nebo genomu výše uvedeného jako adjuvans živému zvířecímu organizmu včetně člověka, který má být ošetřen touto vakcínou.
Virus uvedený výše nebo genom definovaný výše jako adjuvans.
Buňka, s výhodou lidská buňka, obsahující virus výše definovaný nebo genom nebo jeho funkční část výše definovanou.
Způsob k získání výše uvedeného viru vakcinie zahrnující následující kroky:
- zavedení známého kmene viru vakcinie s výhodou MVA 575 do jiných než lidských buněk, ve kterých je virus schopný reproduktivní replikace, přičemž jiné než lidské buňky jsou s výhodou vybrané z buněk CEF a buněčných linií BHK,
- isolaci/obohacení virových částic z těchto buněk a
- analýzu zda získaný virus má alespoň jednu z dříve definovaných biologických vlastností, přičemž výše uvedené kroky mohou být libovolně opakovány do té doby, než se získá virus s požadovanými replikačními vlastnostmi.
Souprava pro primární/posilující imunizaci obsahující výše uvedený virus, vakcínu výše definovanou nebo virus jako léčivo výše definované pro první očkování (primární očkování) v první ampuli/nádobce a pro druhé očkování (posilující očkování) v druhé ampuli/nádobce.
«· 4449
·· ··«
4444
Použití výše uvedeného viru, výše definované kompozice a/nebo výše definované vakcíny pro přípravu vakcíny, přičemž virus, kompozice nebo vakcína je podáván při prvním očkování a přičemž stejný virus nebo vakcína je podáván při druhém očkování.
Stručný popis obrázků
Obr. 1: Kinetika růstu různých kmenů MVA v různých buněčných liniích. V části A) jsou výsledky seskupené podle testovaných kmenů MVA, a v části B) jsou výsledky seskupené podle testovaných buněčných linií. B) Množství viru regenerovaného z buněčné linie po čtyřech dnech (D4) kultivace bylo stanoveno plakovým testem a vyjádřeno jako poměr viru regenerovaného po čtyřech dnech k původně naočkovanému viru ve dni 1 (Dl).
Obr. 2: Ochrana poskytnutá proti smrtící dávce po vakcinaci s MVA-BN nebo MVA 575. Ochrana se měří redukcí v titrech vaječníků stanovených čtyři dny po vyvolání odezvy standardním plakovým testem.
Obr. 3: Indukce CTL a ochrana poskytnutá proti vyvolání odezvy s influenza virem za použití různých režimů očkování primámí/posilující.
3A: Indukce CTL odpovědí vůči 4 různým H-2d restringovaným epitopům po vakcinaci s různými kombinacemi DNA nebo MVA-BN vakcín kódujícími myší epitop. BALB/c myši (5 ve skupině) byly očkovány buď s DNA (nitrosvalově) nebo MVA-BN (podkožně) a obdržely zesilující imunizaci o tři týdny později. CTL odpovědi vůči 4 různým epitopům kódovaným vakcínami (TYQRTRALV, Influenza), SYIPSAEKI, P. Berghei, YPHFMPTNL, Cytomegalovirus, RPQASGVYM, LCV) byly stanoveny použitím ELISPOT testu 2 týdny po posilujících imunizacích.
3B: Indukce CTL odpovědí vůči 4 různým epitopům po vakcinaci různými kombinacemi DNA nebo MVA-BN vakcín kódujícími myší polytop. BALB/c myši (5 ve skupině) byly vakcinovány buď s DNA (nitrosvalově) nebo MVA-BN (intravenózně) a obdržely posilující imunizaci po třech týdnech. CTL odpovědi vůči 4 různým epitopům kódovaným vakcínami (TYQRTRALV, Influenza, SYIPSAEKI, P. Berghei, YPHFMPTNL, cytomegalovirus, RPQASGVYM, LCV) byly stanoveny za použití ELISPOT testu 2 týdny po posilujících imunizacích.
·· ·· ♦ ··· 99 ···· • 9 9 9 9 9 9
99 9 9 999 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 ti 999 99 99
3C: Frekvence peptidů a MVA specifických T buněk po homologní primámí/posilující vakcinaci za použití optimální dávky (1 χ 108 TCID50) rekombinantního MVA-BN podaného subkutánně. Skupiny 8 myší byly vakcinovány dvěma injekcemi kombinací uvedených na obrázku. Dva týdny po konečné vakcinaci byly změřeny počty specifických splenocytů peptidů za použití IFN-γ ELISPOT testu. Sloupce představují střední počet specifických skvrn terčíků plus/minus standardní odchylka od průměru.
Obr. 4: SIV zátěž opic vakcinovaných s MVA-BN nef nebo MVA-BN.
Obr. 5: Přežití vakcinovaných opic po infekci s SIV (opičí virus imunitní nedostatečnosti).
Obr. 6: Titry protilátek v séru opic vůči MVA-BN. Titry protilátek pro každé zvíře vykazovaly různé tvary, zatímco střední titr je znázorněn jako solidní pravoúhelník.
Obr. 7: Hladiny SIV v imunokompromito váných opicích (CD4 < 400 ml krvi) po vakcinaci ch s MVA-BN kódující tat. Opice nejdříve dostaly tři vakcinace s MVA-BN nebo MVA-BN nef (týden 0, 8, 16) a potom byly infikovány patogenním izolátem z SIV (22. týden). V 100., 102. a 106. týdnu (ukázané Šipkami) byly opice vakcinovány s MVA-BN tat.
Obr.8: SIV hladiny v opicích procházejících antiretrovirovou terapii a terapeutickou vakcinaci za použití MVA-BN. Tři skupiny opic (n=6) byly infikovány s SIV a denně ošetřeny s PMPA (ukázané černou čarou). V 10. a 16. týdnu byla zvířata vakcinovaná (ukázané šipkami) buď směsí rekombinantní MVA nebo fysiologickým roztokem.
Obr. 9: Humorální odpověď vyvolaná proti SIV po infekci a vakcinacích s rekombinantním MVA. Tři skupiny (n=6) opic byly infikovány patogenním izolátem z SIV (0. týden) a pak ošetřeny antiretrovirální terapii (PMPA, ukázáno tlustou čárou). Opice byly v 10. a 16. týdnu vakcinovány směsmi rekombinantní MVA nebo fyziologického roztoku. Protilátky proti SIV byly stanoveny za použití lyzátů infikovaných T buněk jako antigenu v standardním ELIS A testu.
Obr. 10: Humorální odpověď vyvolaná vůči MVA v SIV infikovaných myších podstupujících antiretrovirovou terapii. Tři skupiny (n=6) opic byly infikované patogenním izolátem SIV (týden 0) a ošetřeny antiretrovirovou terapii (PMPA; ukázáno tlustou čárou). Opice byly • ·· *· 4«·· 44 ···« • •9 · 4 t té β • ··· 4 4 444 4 » 4 • ••444 < Λ 4 · 4
4 4 44 4 40 4 4 ·** ·' *· *·* *’ “ vakcinované v 10. a 16. týdnu směsmi rekombinantního MVA nebo fyziologického roztoku. Protilátky proti MVA byly stanoveny za použití standardního ELISA testu pro MVA.
Obr. 11: Indukce protilátek proti MVA po vakcinaci myší různými vakcínami pravých neštovic. Hladiny protilátek vytvářené proti MVA po vakcinacích s MVA-BN (týden 0 a 4) byly porovnány s konvenčními kmeny vakcinie, Elstree a Wyeth, získanými skarifikací ocasu (týden 0), MVA 572 (týden 0 a 4) a MVA-BN a MVA 572 jako pre-Elstree vakcína. MVA 572 byl uložen v Evropské sbírce mikroorganizmů jako ECACC V94012707. Titry byly stanoveny za použití ELISA testu a spočítané lineární regresi za použití lineární části grafu a definované jako zředění jehož výsledkem je optická hustota 0,3. * MVA-BN : MVA-BN je podstatně (p > 0,05) odlišná od MVA 572 : MVA 572.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady ilustrují předložený vynález. Odborníkům znalým oboru bude jasné, že předložené příklady v žádném případě nelze chápat jako omezení technologie podle vynálezu jen na tyto příklady.
Příklad 1
Kinetika růstu nového kmene MVA ve vybraných buněčných liniích a replikace in vivo.
(i) Kinetika růstu v buněčných liniích
K charakterizaci nově izolovaného kmene podle předloženého vynálezu (dále označovaného jako MVA-BN) byla kinetika růstu tohoto kmene porovnána s těmi kmeny MVA, které již byly charakterizované.
Pokus byl proveden porovnáním kinetiky růstu následujících virů v dále uvedených primárních buňkách a buněčných liniích:
MVA-BN (virus šarže #23, 18. 02.99 surový, titrovaný 2,0 x 107 TCID 50/ml),
MVA charakterizovaný Altenburgerem (US patent 5,185,146) a dále označovaný jako
MVA-HLR,
MVA (pasáž 575) charakterizovaný Antonem Mayrem (Mayr, A. et al (1975) Infection 3, 614) a dále označován jako MVA 575 (ECACC V00120707); a MVA-Vero charakterizovaný v mezinárodní patentové přihlášce PCT/EP01/02703 (WO 01/68820) (virus šarže, pasáž 49, #20, 22.03 99 surový, titrovaný4,2 x 107TCID 50/ml).
Použité primární buňky a buněčné linie byly:
CEF fibroblasty kuřecích embryí (čerstvě připravené z SPF vajíček),
HeLa lidský cervikální adenokarcinom (epiteliální), ATCC č. CCL-2,
143B lidský kostní osteosarkom TK-, ECACC č. 91112502,
HaCat lidská keratinocytová buněčná linie, Boukamp etal. 1988, J. Cell Biol 106 (3): 761771,
BHK ledvinné buněčné linie křečcích mláďat, ECACC 85011433,
Věro ledvinné fibroblasty afrických zelených opic, ECACC 85020299,
CV1 ledvinné fibroblasty afrických zelených opic, ECACC 87032605.
Pro provedení infekce byly různé buňky naočkovány do 6 jamkových destiček v koncentracích 5 x 105 buněk/jamku a inkubovány přes noc při 37 °C, 5 % CO2 v DMEM (Gibco, Cat. č. 61965-026) plus 2% FCS. Kultivační medium bylo odstraněno a buňky byly infikovány při 37 °C přibližně 0,05 moi (multiplicita infekce) za hodinu, 5% CO2 (u infekce se předpokládá, že počet buněk se přes noc zdvojnásobí). Množství viru použitého pro každou infekci různých typů buněk bylo 5 x 104 TCID50 a to bude uváděné jako Vstup. Buňky byly promyty 3krát s DMEM a nakonec 1 ml DMEM, byly přidány 2% FCS a destičky se nechaly inkubovat 96 hodin (4 dny) při 37 °C, 5% CO2. Tyto infekce byly ukončené zmrazením destiček při -80 °C a hotové pro titrační analýzu.
Titrační analýza (kontrastní zbarvení s pro virem vakcinie specifickou protilátkou)
Pro titraci množství viru byly testovací buňky (CEF) naočkovány na 96 ti jamkových destičkách v RPMI (Gibco, kat. č. 61870-010), 7% FCS, 1% antibiotikum/antimykotikum (Gibco, kat. č. 15240-062) v koncentraci 1 x 10 4 buněk/jamku a inkubovány přes noc při 37 °C, 5% CO2. 6ti jamkové destičky obsahující infikované pokusné vzorky byly 3krát zamrazeny/rozmraženy a byla připravena zředění 10’1 až 1012 za použití RPMI růstového media. Virové roztoky byly naneseny na testované buňky a inkubovány pět dní při 37 °C, 5% CO2, aby došlo k vývoji cytopatického efektu (CPE = cytopathic effect). Pokusné buňky byly fixovány (aceton/methanol 1:1) 10 minut, promyty s PBS a inkubovány polyklonální protilátkou specifickou proti viru vakcinie (Quartett Berlin, Cat. 4. 9503-2057) při zředění 1:1000 v inkubačním pufru po dobu jedné hodiny při teplotě místnosti. Po promytí dvakrát s PBS (Gibco, Kat. č. 20012-019) byla přidaná HPR-spražená králičí protilátka ve zředění 1:1000 v inkubačním pufru (PBS obsahující 3% FCS) jednu hodinu při teplotě místnosti. Buňky byly opět promyty dvakrát s PBS a inkubovány barvícím roztokem (lOml PBS + 20 μΐ nasyceného roztoku o-dianisidinu v 100% ethanolu + 15 μΐ H2O2 čerstvě připraveného) do doby než byly viditelné hnědé skvrny (dvě hodiny). Barvící roztok byl odstraněn a byl přidán PBS k zastavení barvící reakce. Každá jamka vykazující hnědou skvrnu byla označena jako pozitivní pro CPE a titr byl vypočten podle rovnice Karbera (test založený na TCID50) (Karber, G. 1931, Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 162,480).
Viry byly použity k infikování duplicitních pokusných sad, na jedné straně CEF a BHK, u nichž se očekávalo, že jsou vhodné pro MVA, a na druhé straně CV-1, Věro, Hela, 143B a HaCat u nichž se očekávalo, že nejsou vhodné pro MVA, pň nízké multiplicitě infekce t.j., např. 0,05 infekčních jednotek na buňku (5 χ 104 TCID50). Potom bylo virové inokulum odstraněno a buňky třikrát promyty, aby se odstranily všechny zbývající neabsorbované viry. Infekce trvaly celkově 4 dny, kdy byly připravené virové extrakty a titrované na buňkách CEF. Tab. 1 a Obr. 1 ukazují výsledky titračních testů, kde jsou hodnoty dané jako celkové množství viru produkovaného po 4 denní infekci.
Bylo ukázáno, že všechny viry se dobře amplifikovaly v CEP buňkách (fibroblastech kuřecích embryí) jak bylo očekáváno, protože toto je vhodná buněčná linie pro všechny kmeny MVA. Navíc se ukázalo, že všechny viry se dobře amplifikovaly v BHK (ledvinné buněčné linie křeččích mláďat). MVA-Vero se ukázal nejlepší, přičemž BHK je vhodná buněčná linie.
Pokud se týče replikace ve Věro buňkách (opičí ledvinné buněčné linie) MVA-Vero se amplifikoval tak dobře jak bylo očekáváno jmenovitě 1000 násobně nad Vstup. MVA-HLR a také MVA-575 se amplifikovaly dobře, a to s 33 násobným a 10 násobným zvětšením proti Vstupu. Jen u MVA-BN se zjistilo, že se v těchto buňkách neamplifikoval tak dobře v porovnání s ostatními, jmenovitě byl jen 2 násobný nárůst proti vstupu.
Také při replikaci v CV1 buňkách (opičí ledvinné buněčné linie) se zjistilo, že MVABN je silně oslabený v této buněčné linii. Vykazoval 200 násobné snížení pod Vstup. Také MVA-575 se neamplifikoval nad hladinu vstupu a vykazoval slabě negativní amplifikaci, jmenovitě 16 násobný pokles pod Vstup. MVA-HLR se amplifikoval nejlépe s 30 násobným vzrůstem nad Vstup, následovaný MVA-Vero s 5násobným vzrůstem proti Vstupu.
Nejzajímavější je porovnání růstové kinetiky různých virů v lidských buněčných liniích. Pokud se týče reproduktivní replikace v 143B buňkách (buněčné linie lidské rakoviny kostí) se ukázalo, že MVA-Vero byl jediný, který vykazoval amplifikaci nad Vstup (3 násobný vzrůst). Všechny ostatní viry se neamplifikovaly nad Vstup, ale byl velký rozdíl mezi MVA-HLR a oběma MVA-BN a MVA-575. MVA-HLR byl na hranici (1 násobný pokles pod Vstup), zatímco MVA-BN vykazuje největší zeslabení (300 násobní pokles pod Vstup), následovaný MVA-575 (59 násobní pokles pod Vstup). Souhrnem lze říct, že MVABN je nejlepší co se týče oslabení v lidských 143B buňkách. Navíc, pokud s týče replikace v HeLa buňkách (buňky lidského cervikálního karcinomu) se ukázalo, že MVA-HLR se dobře amplifikoval v těchto buněčných liniích, a to ještě lépe než ve vhodných BHK buňkách (HeLa = 125 násobný vzrůst nad Vstup; BHK = 88 násobný vzrůst nad Vstup), MVA-Vero se také amplifikoval v této buněčné linii (27 násobný vzrůst nad Vstup). Avšak MVA-BN a také v menší míře MVA-575, byly oslabené v těchto buněčných liniích (MVA-BN = 29 ti násobný pokles pod Vstup a MVA-575 = 6 ti násobný pokles pod vstup).
Co se týče replikace v HaCat buňkách (lidské keratinocytové buněčné linie) se ukázalo, že MVA-HLR se v těchto buněčných liniích amplifikoval dobře (55 ti násobný nárůst nad Vstup). Oba, jak MVA-Vero adaptovaný, tak MVA-575 vykazovaly amplifikaci v této buněčné linii (1,2, případně 1,1 násobný nárůst nad Vstup). Avšak MVA-BN byl jediný, který vykazoval oslabení (5 ti násobný pokles pod Vstup).
Závěrem lze konstatovat, že MVA-BN je nejvíce oslabeným virovým kmenem z této skupiny virů: MVA-BN se prokázal být mimořádně oslabený v lidských buněčných liniích tím, že vykazoval amplifikační poměr 0,05 až 0,2 v lidských embryonálních ledvinných buňkách (293: ECACC č. 85120602) (data nejsou zahrnutá do tab. 1), dále vykazoval amplifikační poměr 0,0 v buňkách 143B, amplifikační poměr 0,04 v HeLa buňkách, amplifikační poměr 0,22 v HaCat buňkách. Navíc MVA-BN vykazuje amplifikační poměr 0,0 v CV1 buňkách. Jenom ve Věro buňkách lze pozorovat amplifikaci (poměr 2,33) i když ne v takovém rozsahu jak je to ve vhodných buněčných liniích jako BHK a CEP (porovnej s tab. 1). Tudíž MVA-BN je jediný známý kmen MVA vykazující amplifikační poměr menší jako 1 ve všech lidských buněčných liniích 143B, HeLa, HaCat a 293.
MVA-575 vykazuje podobný profil jako MVA-BN ale není tak oslabený jako MVABN.
MVA-HLR se dobře amplifikoval ve všech testovaných buněčných liniích (kromě 143B buněk), tudíž ho lze považovat za replikace schopný ve všech buněčných liniích kromě 143B buněk. V jednom případě se dokonce amplifikoval lépe v lidské buněčné linii (HeLa) než ve vhodné buněčné linii (BHK).
MVA-Vero vykazuje amplifikaci ve všech buněčných liniích ale v menším rozsahu než byl prokázán u MVA-HLR (neberouc v úvahu výsledky 143B). Nicméně nemůže být považován, co se týče oslabení, za patřící do stejné třídy jako MVA-BN nebo MVA-575.
2. Replikace in vivo
Vycházeje ze skutečnosti, že některé MVA kmeny se jasně replikují in vitro byla zkoumaná schopnost replikace různých kmenů MVA in vivo za použití transgenního myšího kmene AGR129. Tento kmen myší má geneticky cílené disrupce v IFN receptoru typu I (IFNα/β) a typu II (IFN-γ) genů a v RAG. Vzhledem k těmto disrupcím nemají myši žádný IFN systém a nejsou schopné produkce zralých B a T buněk a jako takové jsou vážně imunokompromitované a vnímavé vůči replikujícímu se viru. Skupiny po šesti myších byly imunizovány (i. p.) intraperitoneálně s 107 přu, buď s MVA-BN, MVA-HLR nebo MVA 572 (použitým na 120 000 lidech v Německu) a denně byly monitorovány klinické příznaky. Všechny myši vakcinované s MVA-HLR nebo MVA-572 uhynuly do 28 dnů respektive 60 • · ·
dnů. Při pitvě byly nalezeny celkové známky silné virové infekce ve většině orgánů a standardním plakovým testem byl MVA (108 píů) znovu získán z vaječníků. Naproti tomu, myši vakcinované stejnou dávkou MVA-BN (odpovídající uloženému kmenu ECACC V00083008) přežily více než 90 dnů a žáden MVA nemohl být znovu získán z orgánů nebo tkání.
Souhrnně tedy údaje z in vitro a in vivo studií jasně dokazují, že MVA-BN je o mnoho silněji oslabený než výchozí rodičovský nebo komerční kmen MVA-HLR.
Příklad 2
Imunologická a in vivo data
Tyto pokusy byly provedeny za účelem porovnání různých dávek a vakcinačních režimů MVA-BN v porovnání s jinými kmeny MVA.
2.1 Různé kmeny MVA mají různou schopnost stimulace imunitní odpovědi
Replikací kompetentních kmenů vakcinie se indukují v myších silné imunitní odpovědi a při vyšších dávkách způsobují smrt. Přestože kmeny MVA jsou silně oslabené a mají sníženou schopnost replikace v savčích buňkách, jsou rozdíly v oslabení mezi různými kmeny MVA. Ovšem, MVA-BN se ukazuje být více oslabený než jiné kmeny MVA, dokonce i rodičovský kmen MVA 575. Ke stanovení zda tento rozdíl v oslabení ovlivňuje účinnost MVA při indukci ochranných imunitních odpovědí, byly různé dávky MVA-BN a MVA-575 porovnány v testu vyvolání smrtící odezvy. Hladiny ochrany byly měřeny redukcí titru vakcinie ve vaječní cích 4 dny po vyvolání odezvy, protože to umožnilo kvantitativní určení různých dávek a kmenů MVA.
Model vyvolání smrtící odezvy
Specifických patogenů prosté, 6-8 týdnů staré samice BALB/c (H-2d) myši (n=5) byly imunizovány (i.p.) různými dávkami (ΙΟ2, 104 nebo 106 TCIDso/ml) bud’ MVA-BN nebo MVA-575. MVA-BN a MVA-575 byly rozmnožované na CEP buňkách, čištěny na sacharóze a upraveny v Tris pH 7,4. Po třech týdnech myši obdržely posilující dávku stejné velikosti a kmene MVA, která byla následovaná po dvou týdnech smrtící dávkou (i. p.) replikačně kompetentního kmene vakcinie. Jako replikačně kompetentní kmen viru vakcinie (zkratka rVV) byly použity buď kmen WR-L929 TK+ nebo kmen IHD-J. Kontrolní myši dostali ·
• ·· ·· ···· • · · · · · • ··· · · ··· *··*·· · • · · · · ·
9 9 9 9 9 9 9 9 placebo vakcínu. Ochrana byla měřena stanovením snížení titrů ve vaječnících 4 dny po injekci k vyvolání odezvy standardním plakovým testem. K tomu byly myši 4. den po injekci k vyvolání odezvy usmrceny a vaječníky byly odstraněny, homogenizovány v PBS (lml) a virální titry stanoveny standardním plakovým testem za použití Věro buněk (Thomson et al., 1998, J. Immunol. 160: 1717).
Myši vakcinované dvěma imunizacemi s buď 104 nebo lO6TCID5o/ml MVA-BN nebo MVA-575 byly úplně chráněné soudě ze 100% snížení rVV v titrech vaječníků 4 dny po vyvolání odezvy (obr. 2). Virus pro vyvolání smrtící odezvy vymizel. Avšak rozdíly v hladinách ochrany poskytnuté s MVA-BN nebo MVA-575 byly pozorované při nižších dávkách. Myši, které obdržely dvě imunizace 102 TCIDso/ml MVA-575 nebyly chráněny soudě podle vysokých rVV titrů vaječníků (střední hodnota 3,7 x 107 pfu +/- 2,11 x 107). Naproti tomu, myši vakcinované stejnou dávkou MVA-BN indukovaly významné snížení (96%) rVV titrů vaječníků (střední hodnota 0,21 x 107 pfu +/- 0,287 x 107). Kontrolní myši, které dostaly placebo vakcínu měly střední hodnotu virového titru 5,11 x 107 pfu (+/- 3,59 x 107) (obr. 2).
Oba kmeny MVA indukují ochranné imunitní odpovědi v myších proti smrtelné dávce rVV. Přestože oba kmeny MVA jsou stejně účinné při vyšších dávkách, rozdíly v jejich účinnosti jsou evidentní při sub-optimálních dávkách. MVA-BN je o mnoho silnější než rodičovský kmen MVA-575 při indukci ochranné imunitní odpovědi proti smrtící dávce rVV, což může být spojené se zvýšeným oslabením MVA-BN v porovnání s MVA-575.
2.2 MVA-BN ve vakcinačních režimech primámí/posilující
2.2.1.: Indukce protilátek proti MVA po vakcinaci myší různými vakcínami pravých neštovic Účinnost MVA-BN byla porovnávaná s jinými kmeny MVA a kmeny vakcinie dříve používanými k vymýcení neštovic. Tyto zahrnovaly jednorázovou imunizaci za použití kmenů vakcinie Elstree a Wyeth produkovaných v CEF buňkách a získaných skarifikací ocásků a imunizace za použití MVA 572, který byl dříve používán v programu vymýcení pravých neštovic v Německu. Navíc byly oba kmeny a to MVA-BN a MVA-572 porovnány jako pre-vakcína po níž následovala vakcinace s kmenem Elstree, získaným skarifikací. Pro každou skupinu bylo použito osm BALB/c myší a všechny MVA vakcinace (1 x 107 TCID50) byly provedeny podkožně v nultém a 3. týdnu. Dva týdny po posilující vakcinaci byly myši
• ··· · · ··· • · · 9 9 9 vystaveny smrtící odezvě s vakcinii (IHD-J) a titry ve vaječnících byly stanoveny 4 dny po vyvolání odezvy. Všechny vakcíny a režimy indukovaly 100% ochranu.
Všechny indukované imunitní odpovědi za použití různých vakcín nebo režimů byly ve zvířatech měřeny před vyvoláním odezvy. Byly použity testy měření hladiny neutralizace protilátek, proliferace T buněk, produkce cytokinů (IFN-γ vs IL-4) a produkce IFN-γ T buňkami. Hladina odpovědí T buněk indukovaná MVA-BN, změřena ELISPOT analýzou, byla celkově ekvivalentní s jinými MVA a viry vakcinie, vykazujíce bio-ekvivalenci. Analýzy titrů protilátek vůči MVA provedené každý týden po různých vakcinačních režimech ukázaly, že vakcinace s MVA-BN výrazně posílily rychlost a velikost protilátkové odpovědi v porovnání s jinými vakcinačními režimy (obr. 1). Ve skutečnosti byly titry protilátek proti MVA podstatně vyšší (p >0,05) v 2., 4. a 5. (1 týden po posilující vakcinaci v 4. týdnu) při vakcinaci s MVA-BN v porovnání s myšemi vakcinovanými s MVA 572. Po posilující vakcinaci ve 4. týdnu byly titry protilátek podstatně vyšší v MVA-BN skupině v porovnání s myšemi, které obdržely jen jednorázovou vakcinaci buď s kmenem vakcinie Estree nebo Wyeth. Tyto výsledky jasně demonstrují, že dvě vakcinace s MVA-BN indukovaly vyšší protilátko vou odpověď v porovnaní klasickou jednorázovou vakcinaci s tradičními kmeny vakcinie (Elstree nebo Wyeth) a potvrzují poznatky z části 1.5, že MVA-BN je více imunogenetický než ostatní kmeny MVA.
2.2.2.: MVA režimy primární a posilující vytvářejí stejnou hladinu ochrany jako režimy DNA-primární MVA-posilující v modelu expozice viru Influenza
Byla stanovena účinnost MVA režimů primámí/posilující k vyvolání vysoké avidity CTL odpovědí a porovnána s režimy DNA-primámí/MVA-posilující, o kterých bylo uvedeno, že jsou vynikající. Byly stanoveny různé režimy za použití konstruktu myšího polytopu kódovaného buď DNA vektorem nebo MVA-BN a hladiny indukce CTL byly porovnány pomocí EISPOT testu, zatím co avidita odpovědi byla měřena jako stupeň ochrany poskytnutý po expozici viru Influenza.
Konstrukty
DNA plazmid kódující myší polytop (10 CTL epitopy včetně influenza, vaječný albumin) byl už dříve popsán (Thomson et al., 1998, J. Immunol. 160: 1717). Tento myší polytop byl inzertován do místa delece II MVA-BN, rozmnožován na CEP buňkách, čištěn na sacharóze a upraven v Tris pH 7,4.
Vakcinační protokoly
Při tomto pokusu byly použité specifické patogeny prosté 6-8 týdnů staré samičí BALB/c (H-2d) myši. Skupina pěti myší byla použita pro ELISPOT analýzu, zatímco skupina 6 myší byla použita pro pokusy expozicí viru influenza. Myši byly vakcinované podle různých režimů primámí/posilující za použití MVA nebo DNA kódující myší polytop jak je podrobně uvedeno ve výsledcích. Pro imunizace s DNA byly myši anestetikované a potom jim bylo v narkóze injikováno 50 pg endotoxinu prostého plazmidu DNA (v 50 pl PBS) do čtyřhlavého svalu. Primární imunizace za použití MVA byly provedeny buď intravenózní aplikací 197 pfu MVA-BN/myš nebo podkožní aplikací 107 pfu nebo 108 pfu MVA-BN/myš. Posilující imunizace byly provedeny tři týdny po primárních imunizacích. Posílení s DNA plazmidem bylo provedeno stejným způsobem jako primární imunizace s DNA (viz výše). Ke stanovení CTL odpovědí byly provedeny standardní ELISPOT testy (Schneider et al., 1998, Nat. Med.4, 397-402) na splenocyty 2 týdny po poslední posilující imunizaci za použití influenza CTL epitopu peptidů (TYQRTRALV), P. Berghei epitopu peptidů (SYIPSAEKI), epitopu peptidů cytomegaloviru (YPHFMPTNL) a/nebo LCV epitopu peptidů (RPQASGVYM). Pro experimenty k vyvolávaní odezvy byly myši anestetikovány a infikovány i.n. nesmrtící dávkou influenza viru Mem71 (4,5 χ 105 pfu v 50 ml PBS). Pátý den po infekci byly odstraněny plíce a virové titry byly stanoveny duplicitně na Madin-Darby psích ledvinných buněčných liniích za použití standardního influenza plakového testu.
Výsledky
Při použití samotné DNA vakcíny byla indukce CTL vůči 4 H-2d epitopům kódovaným myším polytopem slabá a byly zaznamenány jen slabé odpovědi vůči epitopům pro P. Berghei (SYIPSAEKI) a viru lymfocytámí choriomeningitídy (RPQASGVYM). Naproti tomu při použití režimu DNA primární MVA posilující (podáno 107 pfu MVA-BN podkožně) byly podstatně více CTL indukované vůči SLY (8 násobný vzrůst) a RPQ (3 násobný vrůst) a byly pozorovány odpovědi také vůči třetímu epitopu pro myší cytomegalovirus (YPHFMPTNL) (obr. 3). Avšak použití 107 pfu MVA-BN aplikováno podkožně v homologním primárním a posilujícím režimu indukovalo stejnou hladinu odpovědí jako DNA následovaná MVA-BN (obr. 3A). Je překvapující, že nebyly významnější rozdíly v počtu CTL indukovaných vůči třem epitopům, když byla použita jedna imunizace s MVA-BN (107 TCID50), což ukazuje, že druhá imunizace s MVA-BN neposílila významně CTL odpovědi. Podkožní aplikace 107 pfu MVA se dříve ukázala jako nejméně • · ··· ·
účinná cesta a koncentrace viru pro vakcinaci při použití jiných kmenů MVA, zejména ve srovnání s imunizacemi intravenózními (Schneider et al, 1998). Za účelem optimalizace režimů imunizace byl výše uvedený pokus opakován tak, že bylo změněno buď množství viru nebo způsob podávání. V jednom pokusu byly vakcinace s 107 pfu MVA-BN aplikovány o
intravenózně (obr. 3B). V dalším pokusu bylo 10 píu MVA-BN aplikováno podkožně (obr. 3 C). V těchto pokusech MVA-BN primární- posilující imunizace indukovaly vyšší střední hodnotu počtu CTL vůči všem třem CTL epitopům ve srovnání s režimy DNA primární MVA posilující. Také na rozdíl od 107 pfu MVA-BN aplikovaných podkožně, imunizace s 107 pfu MVA-BN aplikovaných intravenózně a imunizace s 108 pfu MVA-BN aplikovaných podkožně podstatně posílilo CTL odpovědi, jasně ukazujíce, že MVA-BN lze použít na posílení CTL odpovědí v přítomnosti již existující imunity vůči vektoru.
2.2.3.: Účinnost MVA-BN nef vakcíny v SIV infikovaných opicích z rodu Macacus
Ke stanovení účinnosti MVA-BN nef vakcíny byly určeny virové zátěže a opoždění nemoci po jejím vyvolání virulentním primárním izolátem SIV. Navíc studie určí zda MVABN může být použitý pro bezpečné posílení imunitních odpovědí u imunokompromitovaných opic s již existující imunitou vůči MVA.
Vakcinační protokoly
Dvě skupiny (n=6) opic makaka (Macaca mulalta) byly vakcinované bolusovou dávkou intramuskulámí injekce buď s MVA-BN samotným nebo rekombinantním MVA-BN nef v nultém, 8. a 16. týdnu. Ve 22. týdnu byla u všech opic vyvolaná odezva intravenózní aplikací 50 MIDso patogenního buněčně asociovaného SIV (lxC) z primárních, nekultivovaných opičích PBMC. Klinický stav opic byl průběžně monitorován a pravidelně byly odebírány vzorky krve pro měření virémie, imunitních parametrů a celého spektra hematologických a krevních klinických chemických parametrů. Zvířata u nichž se rozvinula nemoc podobná AIDS byla utracena a přeživší opice byly monitorovány 99 týdnů po vakcinaci. Ve 100. týdnu byly všechny přeživší opice imunizovány i.m. s MVA-BN tat a byly opět imunizovány se stejným MVA-BN tat v 102. a 106. týdnu.
Po žádné z vakcinaci s MVA-BN nebo MVA-BN nef nebyly pozorovány žádné nepříznivé účinky. Po infekci opic s SIV hladiny virémie ostře vzrostly a dosáhly vrcholu dva týdny po infekci (obr. 4). V důsledku velkých odchylek od standardu uvnitř skupin nebyl 9 ·· ·· ···· ·· · ·· a • · · 9 9 9 9 9 9 •999 9 9999 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 · 9 · « ··· ·♦ 99 999 99 99 žádný výrazný rozdíl ve středních hladinách SIV mezi skupinami vakcinovánými s MVA-BN nef nebo MVA-BN. Avšak byla 10 ti násobně nižší SIV zátěž ve skupině vakcinované s MVA-BN nef v porovnání s kontrolní skupinou (MVA-BN). Navíc po 35ti týdnech po infekci (počáteční pozorovací perioda) jen jedna ze šesti opic vakcinovaných s MVA-BN nef musela být utracena v důsledku vážnosti nemoci, ve srovnání se 4 ze 6 zvířat v kontrolní skupině (obr. 5). Rozvoj nemoci jasně korespondoval s vyšší zátěží viru a jako taková byla zvířata pozorována dalších 29 týdnů po infekci. MVA-BN nef vakcína se zdála opožďovat progresi nemoci ve srovnání s kontrolní skupinou a ještě v 46. týdnu po infekci 5 ze 6ti zvířat vakcinovaných s MVA-BN nef přežívalo (obr. 5). Avšak v 59. týdnu po infekci byla dvě další zvířata ze skupiny vakcinované s nef usmrcena, čímž zbylo pět přeživších zvířat (tři ze skupiny vakcinované s MVA-BN nef a dvě vakcinované s MVA-BN). Zkouška titru protilátek vyvolaných s MVA-BN v těchto 12 opicích jasně demonstrovala, že MVA-BN posiloval imunitní odpověď také v přítomnosti již existující imunity vůči MVA (obr. 6). Po primární imunizaci s MVA-BN nebo MVA-BN nef si všechny opice vytvořily protilátkovou odpověď vůči MVA se středním titrem 1000. Tato protilátková odpověď byla významně posílena po druhé imunizaci, což jasně demonstruje, že MVA lze použít pro primámí/posilující imunitní odpověď ve zdravých opicích. Tyto protilátkové titry postupně klesaly, i když se titry ve 49. týdnu po imunizaci srovnaly tak, že v 99. týdnu byly střední hodnoty titrů vůči MVA 2000.
Přeživších pět opic bylo infikováno s SIV a imunokompromitováno s CD4 v množství menším než 400/μ1 krvi. Na zjištění dopadu použití MVA-BN v imunokompromitovaných opicích bylo pět přeživších zvířat vakcinováno třikrát s MVA-BN tat v 100., 102. a 106. týdnu po první vakcinaci. První imunizace s MVA-BN tat významně posílila protilátkovou odpověď těchto imunokompromitovaných opic, která byla dále posílena třetí imunizací po šesti týdnech (obr. 6). Tyto výsledky ukazují, že MVA-BN může posílit imunitní odpovědi v přítomnosti významné preexistující imunity vůči MVA i v imunokompromitovaných opicích. Přestože imunitní odpověď byla po imunizacích s MVA-BN tat posílená, hladiny SIV zůstaly stabilní což ukazuje, že imunizace s MVA-BN jsou bezpečné a neovlivňují hladiny SIV v imunokompromitovabých opicích (obr. 7).
Tyto studie ukázaly, že MVA-BN může primárně posílit imunitní odpovědi v imunokompromitovaných opicích a že imunizace s MVA-BN jsou bezpečné a neovlivňují hladiny virémie ve zvířatech infikovaných SIV. Opoždění progrese nemocí podobných AIDS
··· φ φ φφφφ • ♦ · φ · · • * ··· φ · φ φφφ φφφφ · • · φ φφφφ ·· φφφ φφ φφ φφ φφφφ ve zvířatech vakcinovaných s MVA-BN nef vakcínou ukazuje, že byla úspěšně vytvořena imunita vůči nef.
2.2.4.: Terapeutická vakcinace opic infikovaných s SIV podstupujících antiretrovirovou léčbu
V jedincích podstupujících antiretrovirovou terapii je vhodné použití terapeutické HIV vakcíny na MVA-BN. Proto byla v této studii zkoumaná bezpečnost (účinek na SIV hladiny) a účinnost rekombinantních MVA kódujících různé SIV antigeny (gag, pol, env, rev, tat a nef) v SIV infikovaných opicích léčených s PMPA. PMPA je nukleosidový analog a je účinný proti HIV a SIV (Rosenwirth, B. et al, 2000, J. Virol. 74,1704-11).
Konstrukty
Všechny rekombinantní MVA konstrukty byly rozšiřovány na CEF buňkách, čištěny na sacharóze a upraveny v Tris pH 7,4.
Vakcinační protokol
Tři skupiny (n=6) opic (Macaca mulatta) byly infikovány s 50 MID50 patogenního primárního SIV izolátu (lxC) a potom jim byl denně podáván PMPA (60 mg/kg s.c. podkožně) po dobu 19 týdnů. V 10. týdnu byla zvířata vakcinována rekombinantním MVABN (i.m.) nebo fysiologickým roztokem a po 6ti týdnech byly opět vakcinovány identicky. Skupina 1 dostala směs MVA gag-pol a MVA-env, skupina 2 dostala MVA-tat, MVA-rev a MVA-nef, zatímco třetí skupina dostala fysiologický roztok. Klinický stav zvířat byl průběžně monitorován a pravidelně byly odebírány vzorky krve pro měření virémie, imunitních parametrů a celého rozsahu hematologických a klinických chemických parametrů krve.
Všechna zvířata vykazovala vysokou SIV zátěž, která vrcholila 2 týdny po infekci (obr. 8). Po každodenním podávání PMPA se hladiny SIV snížily a v 9tém týdnu stabilizovaly na nízkých hladinách. Tak jako v předchozích studiích, vakcinace s MVA v 10. a 16. týdnu neměly žáden účinek na hladiny SIV, což ukazuje, že MVA-BN je bezpečný vektor vakcíny pro imunokompromitovaná zvířata. Jakmile bylo zvířatům přerušeno podávání PMPA (21. týden), hladiny SIV se zvýšily. Přestože tři zvířata ze skupiny 1 měla snížené hladiny SIV ve srovnání s 3., kontrolní skupinou, nebyl významný rozdíl ve střední hodnotě SIV zátěže mezi jednotlivými skupinami po ukončení podávání PMPA (obr. 8). Za použití ELISA na lyzáty SIV infikovaných T-buněk, zvířata ve všech skupinách vytvářela ·· 44 4 · • ·· ·· 4 4 4·
4 4 444 44 · • 444 4 4444 4 4 4
444 4 4*4 4 4
OO 44444 94944
X 444 44 44 ·«· 44 44 protilátkovou odpověď vůči SIV ve 4. týdnu po infekci (obr. 9). Titr SIV protilátek v kontrolní skupině (fyziologický roztok) poklesl během podávání PMPA a rapidně se zvýšil po přerušení podávání PMPA, projevujíce pokles a následný nárůst SIV hladin během antiretrovirové terapie (obr. 9). Podobný obraz v titru SIV protilátek byl pozorován v druhé skupině, která dostala MVA-tat, MVA-rev a MVA-nef, pravděpodobně odrážející pod-expresi těchto regulačních proteinů v lyzátech SIV infikovaných T buněk použitých v ELISA. Naproti tomu však se ve skupině 1 titry SIV protilátek zvýšily po vakcinacích s MAV gag-pol a MVA-env v 10. týdnu, ukazujíce, že rekombinantní MVA-BN může posílit imunitní odpověď vůči SIV ve SIV infikovaných zvířatech, které procházejí antiretrovirovou terapii. Důležité je, že titry protilátek proti SIV byly posílené po druhé imunizaci v 16. týdnu což ukazuje, že MVA může posílit imunitní odpověď v imunokompromitovaných zvířatech také v přítomnosti již existující imunity vůči MVA (obr. 8). Titry protilátek proti MVA v 1. skupině také zobrazovalo toto schéma s vývojem protilátkové odpovědi po první imunizaci, které bylo silně posílené po druhé vakcinaci (obr. 10).
Odkazy
Schneider, J., Gilbert, SC., Blanchard, TJ., Hanke, T., Robson, KJ., Hannan, CM., Becker, M., Sinden, R., Smith, GL., and Hil, AVS, 1998 - Enhancened immunogenicity for CD8+ T cell induction and complete efficacy of malaria DNA vaccination by boosting with modified vaccinia virus Ankara, Nat. Med. 4, 397-402.
Thomson, SA., Sherritt, MA., Medveczky, J., Elliott, SL., Mos, DJ., Femando, GJP., Brown, LE., and Suhrbier, A. 1998. Delivery of multiple CD8 cytotoxic T cell epitopes by DNA vaccination. J. Immunol. 160: 1717.
9999
99
99··
9 • 999
999
Tabulka 1
| CEF | HeLa | HaCat | 143B | BHK | Věro | CV-1 | |
| MVA-BN | 579,73 | 0,04 | 0,22 | 0,00 | 65,88 | 2.33 | 0.00 |
| MVA-575 | 796,53 | 0,15 | 1,17 | 0,02 | 131,2 | 10,66 | 0,06 |
| MVA- HLR | 86,68 | 124,97 | 59,09 | 0,83 | 87,86 | 34,97 | 29,7 |
| MVA- Vero | 251,89 | 27,41 | 1,28 | 2,91 | 702,77 | 1416,46 | 4,48 |
Amplifikace viru nad hladinu vstupu po 4 denní infekci Amplifikační poměr = výstup TCID50 - vstup TCID50. Hodnoty jsou v TCID50.
Claims (27)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara, vyznačující se tím, že má alespoň jednu z následujících vlastností:(i) schopnost reproduktivní replikace ve fibroblastech kuřecích embryí (CEF) a v ledvinných buněčných liniích křečcích mláďat BHK, ale neschopnost reproduktivní replikace v lidských keratincytových buněčných liniích HaCat, (ii) selhání replikace in vivo, (iii) indukce vyšší imunogenicity v porovnání se známým kmenem MVA 575 v modelu vyvolání smrtící odezvy a/nebo (iv) indukce alespoň stejné hladiny imunity v režimech virus vakcinie primární imunizace/virus vakcinie posilující imunizace v porovnání s režimy DNA-primámí imunizace/virus vakcinie posilující imunizace.
- 2. Virus podle nároku 1, vyznačující se tím, že není schopný reproduktivní replikace v žádné z následujících lidských buněčných linií: lidské embryonální ledvinné buněčné linii 293, buněčné linii lidského osteosarkomu 143B a buněčné linie lidského cervikálního adenokarcinomu HeLa.
- 3. Virus podle nároků 1 nebo 2, uložený v Evropské sbírce mikroorganizmů (ECACC), Salisbury (UK) pod číslem V00083008 a jeho deriváty.
- 4. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu heterologní sekvenci nukleové kyseliny.
- 5. Virus podle nároku 4, vyznačující se tím, že heterologní sekvence nukleové kyseliny je vybraná ze sekvence kódující alespoň jeden antigen, antigenní epitop a/nebo terapeutickou sloučeninu.
- 6. Genom nebo jeho funkční části odvozené od viru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5.·· •· ···· ·· BBBB • · < · · Β β ·♦· βββββ ββ βΒ Β * · Β Β Β Β Β Β «QZ Β Β Β ΒΒ Β Β Β Β Β □ Ο ΒΒΒ ΒΒ ΒΒ ΒΒΒ ΒΒ ΒΒ
- 7. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo genom a/nebo jejich funkční část podle nároku 6 a farmaceuticky přijatelný nosič, rozpouštědlo a/nebo přísady.
- 8. Vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 a/nebo genom a/nebo jeho funkční část podle nároku 6.
- 9. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, genom a/nebo jejich funkční část podle nároku 6, kompozice podle nároku 7 nebo vakcína podle nároku 8 jako léčivo pro ovlivnění, s výhodou indukci imunologické odpovědi v živých zvířatech, včetně lidi.
- 10. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, farmaceutická kompozice podle nároku 7, vakcína podle nároku 8 nebo virus podle nároku 9, kde virus, kompozice nebo vakcína jsou podávány v terapeuticky účinných množstvích při prvním primárním očkování a v druhém posilujícím očkování.
- 11. Použití viru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, a/nebo genom podle nároku 6 pro přípravu léčiva nebo vakcíny.
- 12. Způsob zavedení homologní a/nebo heterologní sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky, vyznačující se tím, že zahrnuje infikování cílových buněk virem podle nároku 4 nebo 5 nebo transfekci cílové buňky genomem podle nároku 6.
- 13. Způsob produkce peptidu, proteinu a/nebo viru, vyznačující se tím, že zahrnujea) infikování hostitelské buňky virem podle nároků 1 nebo 5,b) kultivaci infikované hostitelské buňky za vhodných podmínek, ac) isolaci a/nebo obohacení peptidu a/nebo proteinu a/nebo viru produkovaného hostitelskou buňkou.
- 14. Způsob ovlivnění, s výhodou indukování imunologické odpovědi v živém zvířecím organizmu včetně lidském, zahrnující podávání viru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, genomu a/nebo jeho funkční části podle nároku 6, kompozice podle nároku 7 nebo vakcíny podle nároku 8 zvířeti nebo člověku, který má být ošetřen.• · *·<· ·« ··» *· β·#Μ • · • · ··
- 15. Způsob podle nároku 14, zahrnující podání nejméně 102 TCID50 viru.
- 16. Způsob podle nároků 14 nebo 15, vyznačující se tím, že virus, kompozice nebo vakcína se podávají v terapeuticky účinném množství při prvním očkování a druhém posilujícím očkování.
- 17. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až 16, kde zvíře je imunokompromitované.
- 18. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až 17, kde zvíře má již existující imunitu vůči poxvirům.
- 19. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 14 až 18, kde zvíře prochází antivirovou terapii.
- 20. Způsob podle nároku 19, kde antivirová terapie je antiretrovirovou terapií.
- 21. Použití viru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, genomu a/nebo jeho funkční části podle nároku 6 jako adjuvans.
- 22. Způsob zesílení specifické imunitní odpovědi proti antigenu a/nebo antigennímu epitopů obsaženému ve vakcíně, zahrnující podávání viru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 nebo genomu podle nároku 6 jako adjuvans živému zvířecímu organizmu včetně člověka, který má být vakcínou ošetřen.
- 23. Virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 nebo genom podle nároku 6 jako adjuvans.
- 24. Buňka, s výhodou lidská buňka obsahující virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 nebo genom nebo jeho funkční část podle nároku 6.
- 25. Způsob získání viru vakcinie podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:- zavedení obecně dostupného kmene viru vakcinie, s výhodou MVA 575 do jiných než lidských buněk, ve kterých je virus schopný reproduktivní replikace, přičemž jiné než lidské buňky jsou s výhodou vybrané z CEF buněk a BHK buněčných linií, ·· ··<· * ·· ·· «··« <*·« · » · 9 9 9 • ··· · · 494 9 4 94 4 9 4 4 4 9 4 9 4 · ΏΟ 4 9 4 9 4 9 9 4 4 43© ♦·* ·· 44 449 44 44- isolaci/obohacení virových částic z těchto buněk a- analýzu zda získaný virus má alespoň jednu z biologických vlastností definovaných v nároku 1, přičemž výše uvedené kroky mohou být libovolně opakovány do té doby než se získá virus s požadovanými replikačními vlastnostmi.
- 26. Souprava pro primámí/posilující imunizaci, vyznačující se tím, že obsahuje virus podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kompozici podle nároku 7, vakcínu podle nároku 8 nebo virus podle nároku 9 pro první očkování v první ampuli/nádobce a pro druhé posilující očkování v druhé ampuli/nádobce.
- 27. Použití viru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5, kompozice podle nároku 7, vakcíny podle nároku 8 nebo viru podle nároku 9 pro přípravu vakcíny, přičemž virus, kompozice nebo vakcína se podávají v terapeuticky účinném množství při prvním očkování a druhém očkování.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DKPA200001764 | 2000-11-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20031366A3 true CZ20031366A3 (cs) | 2003-08-13 |
| CZ295808B6 CZ295808B6 (cs) | 2005-11-16 |
Family
ID=8159864
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20031366A CZ295808B6 (cs) | 2000-11-23 | 2001-11-22 | Modifikovaný virus vakcinie typu Ankara |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| US (11) | US6761893B2 (cs) |
| EP (4) | EP1598425A1 (cs) |
| JP (1) | JP4421188B2 (cs) |
| KR (3) | KR20090057335A (cs) |
| CN (2) | CN101676389A (cs) |
| AT (1) | ATE314483T2 (cs) |
| AU (2) | AU2002231639B2 (cs) |
| BE (1) | BE2013C065I2 (cs) |
| BR (1) | BRPI0115533B8 (cs) |
| CA (1) | CA2421151C (cs) |
| CY (2) | CY1105594T1 (cs) |
| CZ (1) | CZ295808B6 (cs) |
| DE (2) | DE60116371T3 (cs) |
| DK (1) | DK1335987T4 (cs) |
| EE (1) | EE05680B1 (cs) |
| ES (1) | ES2256323T5 (cs) |
| FR (1) | FR13C0070I2 (cs) |
| HK (1) | HK1059453A1 (cs) |
| HU (2) | HU230198B1 (cs) |
| IL (2) | IL154712A0 (cs) |
| LU (1) | LU92311I2 (cs) |
| MX (1) | MXPA03002513A (cs) |
| NO (1) | NO337867B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ524661A (cs) |
| PL (1) | PL212047B1 (cs) |
| PT (1) | PT1335987E (cs) |
| RU (1) | RU2290438C2 (cs) |
| SI (1) | SI1335987T2 (cs) |
| UA (1) | UA76731C2 (cs) |
| WO (1) | WO2002042480A2 (cs) |
Families Citing this family (151)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EE05680B1 (et) * | 2000-11-23 | 2013-10-15 | Bavarian Nordic A/S | Muundatud vaktsiiniaviirus, selle valmistamine ja kasutamine, seda sisaldav farmatseutiline kompositsioon ning vaktsiin |
| US7628980B2 (en) | 2000-11-23 | 2009-12-08 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| US7097842B2 (en) * | 2000-11-23 | 2006-08-29 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| WO2004022729A1 (en) | 2002-09-05 | 2004-03-18 | Bavarian Nordic A/S | Method for the cultivation of primary cells and for the amplification of viruses under serum free conditions |
| US7445924B2 (en) | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| UA82466C2 (uk) * | 2001-07-18 | 2008-04-25 | Бавариан Нордика А/С | Спосіб посилення ампліфікації хордопоксвірусу |
| EP1456230A2 (en) * | 2001-12-04 | 2004-09-15 | Bavarian Nordic A/S | Flavivirus ns1 subunit vaccine |
| AU2003239805B2 (en) * | 2002-04-19 | 2009-09-10 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| US7501127B2 (en) | 2002-05-16 | 2009-03-10 | Bavarian Nordic A/S | Intergenic regions as novel sites for insertion of HIV DNA sequences in the genome of Modified Vaccinia virus Ankara |
| JP4895505B2 (ja) * | 2002-05-16 | 2012-03-14 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 変異ワクシニアウイルスアンカラ（ｍｖａ）ゲノム中の挿入部位としての遺伝子間領域 |
| BR0310020A (pt) * | 2002-05-16 | 2005-02-15 | Bavarian Nordic As | Expressão de genes no vìrus da vacìnia modificado ancara por uso do promotor de ati de vacìnia |
| DE602004009743T2 (de) * | 2003-11-24 | 2008-08-28 | Bavarian Nordic A/S | Promotoren zur Expression in modifiziertem Vaccinia Virus Ankara |
| ATE495760T1 (de) * | 2004-06-14 | 2011-02-15 | Ishihara Sangyo Kaisha | Gefriergetrocknete zusammensetzung aus einer inaktivierten virushülle mit membranfusionsaktivität |
| CN1295339C (zh) * | 2005-01-11 | 2007-01-17 | 武汉大学 | 减毒痘苗病毒天坛株载体及制备方法和应用 |
| AU2006218115B2 (en) * | 2005-02-23 | 2012-08-02 | Bavarian Nordic A/S | Use of a modified poxvirus for the rapid induction of immunity against a poxvirus or other infectious agents |
| WO2006113927A2 (en) * | 2005-04-20 | 2006-10-26 | University Of Washington | Immunogenic vaccinia peptides and methods of using same |
| KR100717279B1 (ko) * | 2005-08-08 | 2007-05-15 | 삼성전자주식회사 | 마스크롬 소자 및 그 형성 방법 |
| US7913477B2 (en) * | 2006-01-27 | 2011-03-29 | William Anthony Harper | Insert registration in packets |
| EP1826264A1 (en) * | 2006-02-24 | 2007-08-29 | Deutsches Primatenzentrum GmbH | Primate model for orthopox virus infections |
| EP1835031A1 (en) | 2006-03-14 | 2007-09-19 | Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe | Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans |
| RU2551982C2 (ru) * | 2006-06-20 | 2015-06-10 | Трансжене С.А. | Способ получения поксвирусов и композиции поксвирусов |
| AU2007263281B2 (en) | 2006-06-20 | 2012-12-06 | Transgene S.A. | Recombinant viral vaccine |
| US20100011451A1 (en) * | 2006-09-08 | 2010-01-14 | Paul Chaplin | Phenotypic and genotypic differences of mva strains |
| AU2007307080B2 (en) * | 2006-10-06 | 2014-01-09 | Bavarian Nordic A/S | Methods for treating cancer with MVA |
| US8268327B2 (en) * | 2007-04-27 | 2012-09-18 | Bavarian Nordic A/S | Immediate protection against pathogens via MVA |
| US8003364B2 (en) * | 2007-05-14 | 2011-08-23 | Bavarian Nordic A/S | Purification of vaccinia viruses using hydrophobic interaction chromatography |
| WO2008138533A1 (en) | 2007-05-14 | 2008-11-20 | Bavarian Nordic A/S | Purification of vaccinia virus- and recombinant vaccinia virus-based vaccines |
| NZ601827A (en) * | 2007-10-18 | 2014-01-31 | Bavarian Nordic Inc | Use of mva to treat prostate cancer |
| KR100970449B1 (ko) * | 2007-12-21 | 2010-07-16 | (주)이지아이 | 안전성을 갖는 어린이 놀이터용 고무 바닥재 및 설치방법 |
| EP2303322A1 (en) * | 2008-06-20 | 2011-04-06 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus measles vaccine |
| ES2536747T3 (es) | 2009-01-20 | 2015-05-28 | Transgene Sa | ICAM 1 soluble como biomarcador para predicción de respuesta terapéutica |
| US8613936B2 (en) | 2009-03-13 | 2013-12-24 | Bavarian Nordic A/S | Replication deficient recombinant viruses expressing antigens regulated by transcriptional control elements comprising multiple elements |
| US8394385B2 (en) * | 2009-03-13 | 2013-03-12 | Bavarian Nordic A/S | Optimized early-late promoter combined with repeated vaccination favors cytotoxic T cell response against recombinant antigen in MVA vaccines |
| NZ595290A (en) | 2009-03-24 | 2012-09-28 | Transgene Sa | Biomarker for monitoring patients |
| RU2555340C2 (ru) | 2009-04-17 | 2015-07-10 | Трансжене Са | Биомаркер для мониторинга пациентов |
| JP5650212B2 (ja) | 2009-07-10 | 2015-01-07 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニムＴｒａｎｓｇｅｎｅ Ｓ．Ａ． | 患者を選択するためのバイオマーカーおよび関連方法 |
| AU2010305030A1 (en) * | 2009-10-08 | 2012-05-10 | Bavarian Nordic A/S | Generation of a broad T-cell response in humans against HIV |
| US9011874B2 (en) * | 2009-11-20 | 2015-04-21 | Takeda Vaccines, Inc. | Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs |
| NZ600629A (en) | 2010-01-28 | 2014-12-24 | Bavarian Nordic As | Vaccinia virus mutants containing the major genomic deletions of mva |
| EP3187585A1 (en) | 2010-03-25 | 2017-07-05 | Oregon Health&Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
| CA2802430C (en) | 2010-07-20 | 2021-07-20 | Bavarian Nordic A/S | Method for harvesting poxvirus |
| WO2012018856A2 (en) * | 2010-08-02 | 2012-02-09 | Virxsys Corporation | Hiv vaccine therapy with concomitant antiviral monotherapy |
| JP5933565B2 (ja) | 2010-10-15 | 2016-06-15 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 組み換え改変ワクシニアウイルスアンカラインフルエンザワクチン |
| DK2691530T3 (en) | 2011-06-10 | 2018-05-22 | Univ Oregon Health & Science | CMV GLYCOPROTEIN AND RECOMBINANT VECTORS |
| PL2739293T3 (pl) * | 2011-08-05 | 2020-11-16 | Sillajen Biotherapeutics, Inc. | Sposoby i kompozycje wytwarzania wirusa krowianki |
| EP2568289A3 (en) | 2011-09-12 | 2013-04-03 | International AIDS Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| EP2586461A1 (en) | 2011-10-27 | 2013-05-01 | Christopher L. Parks | Viral particles derived from an enveloped virus |
| WO2013083254A1 (en) | 2011-12-09 | 2013-06-13 | Bavarian Nordic A/S | Poxvirus vector for the expression of bacterial antigens linked to tetanus toxin fragment c |
| EP2620446A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-07-31 | Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. | Immunogens for HIV vaccination |
| US10111946B2 (en) | 2012-06-22 | 2018-10-30 | Bavarian Nordic A/S | Poxviral vectors for low antibody response after a first priming immunization |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| WO2014009433A1 (en) | 2012-07-10 | 2014-01-16 | Transgene Sa | Mycobacterium resuscitation promoting factor for use as adjuvant |
| JP6333814B2 (ja) | 2012-07-10 | 2018-05-30 | トランジェーヌ、ソシエテ、アノニムＴｒａｎｓｇｅｎｅ Ｓ．Ａ． | マイコバクテリア抗原ワクチン |
| EP3656396A1 (en) | 2012-08-01 | 2020-05-27 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) respiratory syncytial virus (rsv) vaccine |
| US10973892B2 (en) | 2012-09-04 | 2021-04-13 | Bavarian Nordic A/S | Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses |
| WO2014043535A1 (en) | 2012-09-14 | 2014-03-20 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Compositions for the treatment of cancer |
| CA2888367A1 (en) | 2012-10-19 | 2014-04-24 | Bavarian Nordic, Inc. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
| PT2912183T (pt) | 2012-10-28 | 2020-06-05 | Bavarian Nordic As | Promotor pr13.5 para respostas robustas de células t e anticorpos |
| JP6480875B2 (ja) * | 2013-03-15 | 2019-03-13 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 単一高用量のｍｖａは、新生児及び幼児において防御免疫応答を引き起こす |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| EP2873423B1 (en) | 2013-10-07 | 2017-05-31 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| AU2014340201B2 (en) | 2013-10-23 | 2019-02-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | HLA-A24 agonist epitopes of MUC1-C oncoprotein and compositions and methods of use |
| WO2015077717A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status |
| MY188100A (en) | 2013-11-28 | 2021-11-18 | Bavarian Nordic As | Compositions and methods vectors for inducing an enhanced immune response using poxvirus vectors |
| WO2015085147A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
| KR20230076867A (ko) | 2013-12-20 | 2023-05-31 | 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 | 신생항원 백신과의 병용 요법 |
| JP6605480B2 (ja) | 2014-01-09 | 2019-11-13 | トランスジェン・ソシエテ・アノニム | ヘテロオリゴマーマイコバクテリア抗原の融合物 |
| AU2015259516B2 (en) | 2014-05-13 | 2020-05-28 | Bavarian Nordic A/S | Combination therapy for treating cancer with a poxvirus expressing a tumor antigen and a monoclonal antibody against TIM-3 |
| JP6664338B2 (ja) | 2014-06-13 | 2020-03-13 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 免疫原性組合せ物 |
| HRP20240163T1 (hr) | 2014-09-03 | 2024-04-12 | Bavarian Nordic A/S | Metode i pripravci za izazivanje zaštitnog imuniteta protiv infekcije filovirusom |
| MX2017002890A (es) | 2014-09-03 | 2017-11-13 | Bavarian Nordic As | Métodos y composiciones para potenciar respuestas inmunitarias. |
| PT3197489T (pt) | 2014-09-26 | 2021-04-30 | Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc | Métodos e composições para induzir a imunidade protetora contra a infeção pelo vírus da imunodeficiência humana |
| KR101645642B1 (ko) | 2014-10-16 | 2016-08-11 | 대한민국 | Kvac１０３ 유래의 재조합 백시니아 바이러스 |
| KR101623498B1 (ko) | 2014-10-16 | 2016-05-24 | 대한민국 | 약독화 백시니아 바이러스주 kvac１０３ |
| CN107075521B (zh) | 2014-11-04 | 2021-06-08 | 扬森疫苗与预防公司 | 治疗性hpv16疫苗 |
| US10975442B2 (en) | 2014-12-19 | 2021-04-13 | Massachusetts Institute Of Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
| WO2016100977A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | The Broad Institute Inc. | Methods for profiling the t-cel- receptor repertoire |
| EP3261669B1 (en) | 2015-02-25 | 2022-08-03 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Use of inactivated nonreplicating modified vaccinia virus ankara (mva)as monoimmunotherapy or in combination with immune checkpoint blocking agents for solid tumors |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| EP3072901A1 (en) | 2015-03-23 | 2016-09-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| US10548930B2 (en) | 2015-04-17 | 2020-02-04 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Use of MVA or MVAΔE3L as immunotherapeutic agents against solid tumors |
| MX2017014700A (es) | 2015-05-20 | 2018-08-15 | Broad Inst Inc | Neoantigenos compartidos. |
| TWI750122B (zh) | 2015-06-09 | 2021-12-21 | 美商博德研究所有限公司 | 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法 |
| AU2016278806A1 (en) * | 2015-06-15 | 2017-12-14 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) foot and mouth disease virus (FMDV) vaccine |
| US9925258B2 (en) | 2015-10-02 | 2018-03-27 | International Aids Vaccine Initiative | Replication-competent VSV-HIV Env vaccines |
| FR3042121A1 (fr) | 2015-10-08 | 2017-04-14 | Jean-Marc Limacher | Composition anti-tumorale |
| CN106591361A (zh) * | 2015-10-20 | 2017-04-26 | 钱文斌 | 一种重组痘溶瘤病毒及其构建方法和应用 |
| CN108368157B (zh) | 2015-12-15 | 2022-04-15 | 扬森疫苗与预防公司 | 人类免疫缺陷病毒抗原、载体、组合物、及其使用方法 |
| WO2017129765A1 (en) | 2016-01-29 | 2017-08-03 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) equine encephalitis virus vaccine |
| CN109152827B (zh) | 2016-02-25 | 2023-07-21 | 纪念斯隆凯特琳癌症中心 | 重组mva或表达人flt3l的mvaδe3l及其作为抗固体肿瘤的免疫治疗剂的用途 |
| SG11201807051VA (en) | 2016-02-25 | 2018-09-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Replication competent attenuated vaccinia viruses with deletion of thymidine kinase with and without the expression of human flt3l or gm-csf for cancer immunotherapy |
| JP7250520B2 (ja) | 2016-04-13 | 2023-04-03 | ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド | 組換えアルテリウイルスレプリコン系およびその使用 |
| WO2017184590A1 (en) | 2016-04-18 | 2017-10-26 | The Broad Institute Inc. | Improved hla epitope prediction |
| AU2017259259B2 (en) | 2016-05-02 | 2020-11-19 | Bavarian Nordic A/S | Therapeutic HPV vaccine combinations |
| JP6595132B2 (ja) | 2016-06-16 | 2019-10-23 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | Ｈｉｖワクチン製剤 |
| WO2018011768A1 (en) | 2016-07-15 | 2018-01-18 | Janssen Vaccines And Prevention B.V. | Methods and compositions for inducing protective immunity against a marburg virus infection |
| WO2018045267A1 (en) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| CA3036959A1 (en) | 2016-09-15 | 2018-03-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Trimer stabilizing hiv envelope protein mutations |
| KR102605505B1 (ko) | 2016-09-28 | 2023-11-22 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 폭스바이러스에서 이식유전자의 안정성을 강화시키는 조성물 및 방법 |
| WO2018075235A1 (en) | 2016-10-17 | 2018-04-26 | Synthetic Genomics, Inc. | Recombinant virus replicon systems and uses thereof |
| US11311613B2 (en) | 2016-11-07 | 2022-04-26 | The United States of Americans represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Development of agonist epitopes of the human papillomavirus |
| US11845939B2 (en) | 2016-12-05 | 2023-12-19 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for enhancing gene expression |
| WO2018140391A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide |
| WO2018185732A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Mva-bn and ad26.zebov or ad26.filo prime-boost regimen |
| US11242509B2 (en) | 2017-05-12 | 2022-02-08 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Vaccinia virus mutants useful for cancer immunotherapy |
| EP3624851A1 (en) | 2017-05-15 | 2020-03-25 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
| WO2018211419A1 (en) | 2017-05-15 | 2018-11-22 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Stable virus-containing composition |
| JP7272965B2 (ja) | 2017-06-15 | 2023-05-12 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェー | Ｈｉｖ抗原をコードするポックスウイルスベクターおよびその使用方法 |
| CN110891601A (zh) | 2017-07-19 | 2020-03-17 | 扬森疫苗与预防公司 | 三聚体稳定性hiv包膜蛋白突变 |
| US20190022212A1 (en) | 2017-07-21 | 2019-01-24 | Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. | Methods for safe induction of cross-clade immunity against human immunodeficiency virus infection in human |
| CA3073310A1 (en) | 2017-08-24 | 2019-02-28 | Bavarian Nordic A/S | Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an antibody |
| WO2019055888A1 (en) | 2017-09-18 | 2019-03-21 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | METHODS OF INDUCING AN IMMUNE RESPONSE AGAINST HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS INFECTION IN SUBJECTS UNDER ANTIRETROVIRAL TREATMENT |
| EA202091516A1 (ru) | 2017-12-19 | 2020-11-03 | Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани | Способы и композиции для индукции иммунного ответа против вируса гепатита b (hbv) |
| KR20200100745A (ko) | 2017-12-19 | 2020-08-26 | 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니 | B형 간염 바이러스(hbv)에 대한 면역 반응 유도를 위한 방법 및 조성물 |
| EA202091513A1 (ru) | 2017-12-19 | 2020-09-09 | Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани | Вакцины против вируса гепатита b (hbv) и их применение |
| EA202091517A1 (ru) | 2017-12-19 | 2020-11-03 | Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани | Способы и устройство для доставки вакцин против вируса гепатита b (hbv) |
| KR20200101394A (ko) | 2017-12-20 | 2020-08-27 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 엡스타인-바 바이러스 항원 구축물 |
| US11083786B2 (en) | 2018-01-19 | 2021-08-10 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Induce and enhance immune responses using recombinant replicon systems |
| US20220001001A1 (en) * | 2018-07-13 | 2022-01-06 | University Of Georgia Research Foundation | Broadly reactive immunogens of dengue virus, compositions, and methods of use thereof |
| US20210187100A1 (en) | 2018-09-06 | 2021-06-24 | Bavarian Nordic A/S | Storage Improved Poxvirus Compositions |
| WO2020072700A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Hla single allele lines |
| AU2019354101A1 (en) | 2018-10-05 | 2021-04-15 | Bavarian Nordic A/S | Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an immune checkpoint antagonist or agonist |
| EP3880694A1 (en) | 2018-11-14 | 2021-09-22 | The United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services | Tp5, a peptide inhibitor of aberrant and hyperactive cdk5/p25 as treatment for cancer |
| WO2020104531A1 (en) | 2018-11-20 | 2020-05-28 | Bavarian Nordic A/S | Therapy for treating cancer with an intratumoral and/or intravenous administration of a recombinant mva encoding 4-1bbl (cd137l) and/or cd40l |
| WO2020131586A2 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-25 | The Broad Institute, Inc. | Methods for identifying neoantigens |
| TW202043256A (zh) | 2019-01-10 | 2020-12-01 | 美商健生生物科技公司 | 前列腺新抗原及其用途 |
| WO2020237052A1 (en) | 2019-05-22 | 2020-11-26 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment |
| MX2021014936A (es) | 2019-06-11 | 2022-01-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Formulaciones de vacunas a traves de la mucosa. |
| AU2020384323A1 (en) | 2019-11-14 | 2022-06-02 | Aelix Therapeutics, S.L. | Dosage regimens for vaccines |
| AU2020385683A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-06-30 | Janssen Biotech, Inc. | Vaccines based on mutant CALR and JAK2 and their uses |
| AU2020388973A1 (en) | 2019-11-20 | 2022-05-26 | Bavarian Nordic A/S | Medical uses of 4-1BBL adjuvanted recombinant modified vaccinia virus ankara (MVA) |
| KR20220106775A (ko) | 2019-11-20 | 2022-07-29 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 암 치료를 위한 종양내 및/또는 정맥내 투여를 위한 재조합 mva 바이러스 |
| CA3165251A1 (en) | 2020-01-21 | 2021-07-29 | Jeffrey Schlom | Human immunogenic epitopes of hemo and hhla2 human endogenous retroviruses (hervs) |
| WO2021150713A2 (en) | 2020-01-21 | 2021-07-29 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Human immunogenic epitopes of h, k, and e human endogenous retroviruses (hervs) |
| KR20220153587A (ko) | 2020-03-12 | 2022-11-18 | 버베리안 노딕 에이/에스 | 폭스바이러스 안정성을 개선하는 조성물 |
| EP4164682A1 (en) | 2020-06-10 | 2023-04-19 | Bavarian Nordic A/S | A recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) vaccine against coronavirus disease |
| EP3928789A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-29 | Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) | Mva-based vaccine against covid-19 expressing sars-cov-2 antigens |
| WO2021260065A1 (en) | 2020-06-24 | 2021-12-30 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) | Mva-based vaccine against covid-19 expressing sars-cov-2 antigens |
| WO2022008613A1 (en) | 2020-07-08 | 2022-01-13 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Rna replicon vaccines against hbv |
| WO2022084333A1 (en) | 2020-10-20 | 2022-04-28 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Hiv vaccine regimens |
| EP4108257A1 (en) | 2021-06-23 | 2022-12-28 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Mva-based vaccine against covid-19 expressing a prefusion-stabilized sars-cov-2 s protein |
| EP4358999A1 (en) | 2021-06-23 | 2024-05-01 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Mva-based vaccine expressing a prefusion-stabilized sars-cov-2 s protein |
| AU2022338199A1 (en) | 2021-09-03 | 2024-03-14 | Bavarian Nordic A/S | Utilization of micro-rna for downregulation of cytotoxic transgene expression by modified vaccinia virus ankara (mva) |
| CA3240596A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Cigdem ATAY LANGBEIN | Therapy for modulating immune response with recombinant mva encoding il-12 |
| WO2023118508A1 (en) | 2021-12-23 | 2023-06-29 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant mva viruses for intraperitoneal administration for treating cancer |
| WO2023198815A1 (en) | 2022-04-14 | 2023-10-19 | Janssen Vaccines & Prevention B.V. | Sequential administration of adenoviruses |
| WO2024003239A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN |
| WO2024003238A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | Epstein-barr-virus vaccine |
| WO2024003346A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Bavarian Nordic A/S | Mammalian cell line for the production of modified vaccinia virus ankara (mva) |
| WO2024015892A1 (en) | 2022-07-13 | 2024-01-18 | The Broad Institute, Inc. | Hla-ii immunopeptidome methods and systems for antigen discovery |
| EP4316514A1 (en) | 2022-08-03 | 2024-02-07 | Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) | Mva-based vectors and their use as vaccine against sars-cov-2 |
Family Cites Families (71)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4072565A (en) * | 1974-11-04 | 1978-02-07 | The Dow Chemical Company | Production of viruses in tissue culture without use of serum |
| US3914408A (en) * | 1973-10-12 | 1975-10-21 | Univ Nebraska | Vaccine for neonatal calf diarrhea |
| DE2714665A1 (de) * | 1977-04-01 | 1978-10-05 | Mayr Anton | Praeparat zur behandlung von herpes zoster und anderen herpes-infektionen, sowie verfahren zu seiner herstellung |
| US5155020A (en) * | 1989-03-08 | 1992-10-13 | Health Research Inc. | Recombinant poxvirus host range selection system |
| US5338683A (en) * | 1981-12-24 | 1994-08-16 | Health Research Incorporated | Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins |
| GB8322414D0 (en) * | 1983-08-19 | 1983-09-21 | Szelke M | Renin inhibitors |
| FR2603040B1 (fr) | 1986-08-22 | 1990-01-26 | Transgene Sa | Proteine, sequence d'adn, poxvirus, cellules et leur procede de culture, ainsi que les compositions pharmaceutiques les contenant, utiles dans la prevention de la schistosomose |
| AU613583B2 (en) | 1986-08-22 | 1991-08-08 | Transgene S.A. | Proteins and the method for preparing them, DNA sequences, antibodies and their application, poxviruses, transformed or infected cells, pharmaceutical compositions which are useful in the prevention of schistosomiasis and application by way of an agent possessing glutathione s-transferase activity |
| DE3743298A1 (de) | 1987-12-19 | 1989-06-29 | Wilkinson Sword Gmbh | Rasierapparat und verfahren zur herstellung einer flaeche geringen reibungswiderstands an einem rasierapparat |
| CA1341245C (en) | 1988-01-12 | 2001-06-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Recombinant vaccinia virus mva |
| US6248333B1 (en) * | 1990-04-04 | 2001-06-19 | Health Research Inc. | Isolated nucleic acid sequence of equine herpesvirus type 1 glycoprotein D (EHV-1 gD) |
| EP0550638A4 (en) | 1990-09-25 | 1993-12-08 | Smithkline Beecham Corporation | Medium for culture of mammalian cells |
| KR100242671B1 (ko) * | 1991-03-07 | 2000-03-02 | 고돈 에릭 | 유전학적으로 처리한 백신 균주 |
| US5843456A (en) * | 1991-03-07 | 1998-12-01 | Virogenetics Corporation | Alvac poxvirus-rabies compositions and combination compositions and uses |
| US5403582A (en) | 1993-01-21 | 1995-04-04 | Nippon Zeon Co., Ltd. | Vaccine comprising fowlpox virus recombinants expressing the envelope glycoprotein of an avian reticuloendotheliosis retrovirus |
| US5405772A (en) | 1993-06-18 | 1995-04-11 | Amgen Inc. | Medium for long-term proliferation and development of cells |
| US6015686A (en) * | 1993-09-15 | 2000-01-18 | Chiron Viagene, Inc. | Eukaryotic layered vector initiation systems |
| US5490794A (en) * | 1993-11-05 | 1996-02-13 | Sumitomo Wiring Systems, Ltd. | Branch joint box |
| US6190655B1 (en) | 1993-12-03 | 2001-02-20 | Immunex Corporation | Methods of using Flt-3 ligand for exogenous gene transfer |
| DE4405841C1 (de) † | 1994-02-23 | 1995-01-05 | Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr | Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel |
| DK0758397T3 (da) * | 1994-04-29 | 2005-10-10 | Baxter Healthcare Sa | Rekombinante poxvira med fremmede polynucleotider i essentielle regioner |
| EP0769963A4 (en) * | 1994-07-27 | 1999-07-28 | Commw Scient Ind Res Org | POLYEPITOPE VACCINES |
| US5676950A (en) * | 1994-10-28 | 1997-10-14 | University Of Florida | Enterically administered recombinant poxvirus vaccines |
| US5756341A (en) | 1994-11-10 | 1998-05-26 | Immuno Ag | Method for controlling the infectivity of viruses |
| US5753489A (en) | 1994-11-10 | 1998-05-19 | Immuno Ag | Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture |
| US5566011A (en) * | 1994-12-08 | 1996-10-15 | Luncent Technologies Inc. | Antiflector black matrix having successively a chromium oxide layer, a molybdenum layer and a second chromium oxide layer |
| UA68327C2 (en) † | 1995-07-04 | 2004-08-16 | Gsf Forschungszentrum Fur Unwe | A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals |
| AU726623B2 (en) | 1996-02-21 | 2000-11-16 | Julianna Lisziewicz | Methods and compositions for protective and therapeutic genetic immunization |
| WO1998004680A1 (en) | 1996-07-26 | 1998-02-05 | University Of Manitoba | Serum-free medium for growth of anchorage-dependant mammalian cells |
| US6869793B2 (en) * | 1996-09-24 | 2005-03-22 | Bavarian Nordic Research Institute | Recombinant MVA virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines |
| WO1998017283A1 (en) | 1996-10-25 | 1998-04-30 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Method of vaccinating infants against infections |
| US6204250B1 (en) * | 1996-11-22 | 2001-03-20 | The Mount Sinai Medical Center Of The City Of New York | Immunization of infants |
| US20030138454A1 (en) * | 1997-06-09 | 2003-07-24 | Oxxon Pharmaccines, Ltd. | Vaccination method |
| GB0023203D0 (en) | 2000-09-21 | 2000-11-01 | Isis Innovation | Vaccination method |
| GB9711957D0 (en) * | 1997-06-09 | 1997-08-06 | Isis Innovation | Methods and reagents for vaccination |
| DE19729279A1 (de) † | 1997-07-09 | 1999-01-14 | Peter Hildebrandt | Urologisches Implantat, insbesondere Gefäßwandstütze für den Urinaltrakt |
| WO1999007869A1 (en) * | 1997-08-05 | 1999-02-18 | University Of Florida | Live recombinant vaccine comprising inefficiently or non-replicating virus |
| US6667176B1 (en) * | 2000-01-11 | 2003-12-23 | Geron Corporation | cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells |
| CA2350207C (en) | 1998-11-10 | 2011-02-08 | University Of Rochester | T cells specific for target antigens and methods and vaccines based thereon |
| GB2370573A (en) | 1998-11-18 | 2002-07-03 | Oxford Biomedica Ltd | Poxviral vectors |
| EP2042598A1 (en) | 1998-11-18 | 2009-04-01 | Oxford Biomedica (UK) Limited | 5T4 tumour-associated antigen for use in tumour immunotherapy |
| US6173813B1 (en) | 1998-12-23 | 2001-01-16 | Otis Elevator Company | Electronic control for an elevator braking system |
| US6497883B1 (en) | 1999-06-10 | 2002-12-24 | Merial | Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine |
| AU1194802A (en) * | 2000-03-02 | 2001-12-11 | Univ Emory | DNA expression vectors and methods of use |
| US6682743B2 (en) | 2000-03-14 | 2004-01-27 | Bavarian Nordic A/S | Altered strain of the modified vaccinia virus ankara (MVA) |
| KR100341030B1 (ko) | 2000-03-16 | 2002-06-20 | 유태욱 | 캡션 데이터와 음성 데이터의 재생방법 및 이를 이용한 디스플레이장치 |
| KR20030036194A (ko) | 2000-05-24 | 2003-05-09 | 메리알 | 돼지 생식기 호흡기 증후군 바이러스(ｐｒｒｓｖ) 재조합아비폭스바이러스 백신 |
| EP1303286B1 (de) * | 2000-07-11 | 2006-04-26 | Bayer HealthCare AG | Verwendung von stämmen des parapoxvirus ovis zur herstellung von antiviralen arzneimitteln und arzneimitteln gegen krebs |
| US6733993B2 (en) * | 2000-09-15 | 2004-05-11 | Merck & Co., Inc. | Enhanced first generation adenovirus vaccines expressing codon optimized HIV1-gag, pol, nef and modifications |
| EE05680B1 (et) * | 2000-11-23 | 2013-10-15 | Bavarian Nordic A/S | Muundatud vaktsiiniaviirus, selle valmistamine ja kasutamine, seda sisaldav farmatseutiline kompositsioon ning vaktsiin |
| US7445924B2 (en) * | 2000-11-23 | 2008-11-04 | Bavarian Nordic A/S | Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method |
| US7628980B2 (en) * | 2000-11-23 | 2009-12-08 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| US7097842B2 (en) * | 2000-11-23 | 2006-08-29 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| WO2004022729A1 (en) * | 2002-09-05 | 2004-03-18 | Bavarian Nordic A/S | Method for the cultivation of primary cells and for the amplification of viruses under serum free conditions |
| UA82466C2 (uk) * | 2001-07-18 | 2008-04-25 | Бавариан Нордика А/С | Спосіб посилення ампліфікації хордопоксвірусу |
| EP1456230A2 (en) * | 2001-12-04 | 2004-09-15 | Bavarian Nordic A/S | Flavivirus ns1 subunit vaccine |
| SI1407006T1 (sl) | 2001-12-20 | 2006-04-30 | Bavarian Nordic As | Postopek za ponovno pridobivanje in ciscenje poksvirusov iz inficiranih celic |
| AU2003219057A1 (en) | 2002-03-15 | 2003-09-29 | Baxter Healthcare S.A. | Recombinant drug-sensitive vaccinia virus as smallpox vaccine |
| AU2003239805B2 (en) * | 2002-04-19 | 2009-09-10 | Bavarian Nordic A/S | Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates |
| BR0310020A (pt) * | 2002-05-16 | 2005-02-15 | Bavarian Nordic As | Expressão de genes no vìrus da vacìnia modificado ancara por uso do promotor de ati de vacìnia |
| JP4895505B2 (ja) * | 2002-05-16 | 2012-03-14 | バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ | 変異ワクシニアウイルスアンカラ（ｍｖａ）ゲノム中の挿入部位としての遺伝子間領域 |
| ES2288634T3 (es) * | 2002-11-25 | 2008-01-16 | Bavarian Nordic A/S | Poxvirus recombinante que comprende al menos dos promotores ati de la viruela de las vacas. |
| US6976752B2 (en) * | 2003-10-28 | 2005-12-20 | Lexmark International, Inc. | Ink jet printer with resistance compensation circuit |
| DE602004009743T2 (de) * | 2003-11-24 | 2008-08-28 | Bavarian Nordic A/S | Promotoren zur Expression in modifiziertem Vaccinia Virus Ankara |
| EP1586330A1 (en) * | 2004-04-16 | 2005-10-19 | Georg-August-Universität Göttingen | Vaccination against malignant melanoma |
| US8354093B2 (en) * | 2004-10-15 | 2013-01-15 | Washington University | Cell permeable nanoconjugates of shell-crosslinked knedel (SCK) and peptide nucleic acids (“PNAs”) with uniquely expressed or over-expressed mRNA targeting sequences for early diagnosis and therapy of cancer |
| EP1835031A1 (en) | 2006-03-14 | 2007-09-19 | Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe | Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans |
| AU2007307080B2 (en) * | 2006-10-06 | 2014-01-09 | Bavarian Nordic A/S | Methods for treating cancer with MVA |
| EP1925318A1 (en) | 2006-11-20 | 2008-05-28 | Paul-Ehrlich-Institut | Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu |
| US8268327B2 (en) * | 2007-04-27 | 2012-09-18 | Bavarian Nordic A/S | Immediate protection against pathogens via MVA |
| NZ601827A (en) * | 2007-10-18 | 2014-01-31 | Bavarian Nordic Inc | Use of mva to treat prostate cancer |
-
2001
- 2001-11-22 EE EEP200300173A patent/EE05680B1/xx unknown
- 2001-11-22 ES ES01991753.3T patent/ES2256323T5/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 PL PL361459A patent/PL212047B1/pl unknown
- 2001-11-22 HU HU0400685A patent/HU230198B1/hu active Protection Beyond IP Right Term
- 2001-11-22 AT AT01991753T patent/ATE314483T2/de active
- 2001-11-22 CN CN200910151102A patent/CN101676389A/zh active Pending
- 2001-11-22 CN CNB018194109A patent/CN100537773C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 CA CA2421151A patent/CA2421151C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 EP EP05017694A patent/EP1598425A1/en not_active Withdrawn
- 2001-11-22 DK DK01991753.3T patent/DK1335987T4/en active
- 2001-11-22 KR KR1020097010451A patent/KR20090057335A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-11-22 DE DE60116371.0T patent/DE60116371T3/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 PT PT01991753T patent/PT1335987E/pt unknown
- 2001-11-22 BR BRPI0115533A patent/BRPI0115533B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-11-22 KR KR1020087007423A patent/KR100910297B1/ko active IP Right Grant
- 2001-11-22 AU AU2002231639A patent/AU2002231639B2/en not_active Expired
- 2001-11-22 KR KR1020037006970A patent/KR100830295B1/ko active IP Right Grant
- 2001-11-22 EP EP01991753.3A patent/EP1335987B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 IL IL15471201A patent/IL154712A0/xx unknown
- 2001-11-22 RU RU2003118436/13A patent/RU2290438C2/ru active
- 2001-11-22 UA UA2003054618A patent/UA76731C2/uk unknown
- 2001-11-22 EP EP10158051A patent/EP2202315A1/en not_active Withdrawn
- 2001-11-22 CZ CZ20031366A patent/CZ295808B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-11-22 NZ NZ524661A patent/NZ524661A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-11-22 JP JP2002545184A patent/JP4421188B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 SI SI200130512T patent/SI1335987T2/sl unknown
- 2001-11-22 EP EP10158053A patent/EP2204452A1/en not_active Withdrawn
- 2001-11-22 AU AU3163902A patent/AU3163902A/xx active Pending
- 2001-11-22 WO PCT/EP2001/013628 patent/WO2002042480A2/en active Application Filing
- 2001-11-22 DE DE20122302U patent/DE20122302U1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-22 MX MXPA03002513A patent/MXPA03002513A/es active IP Right Grant
-
2003
- 2003-03-03 IL IL154712A patent/IL154712A/en active IP Right Grant
- 2003-05-16 US US10/439,953 patent/US6761893B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-16 US US10/439,439 patent/US6913752B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-16 US US10/440,073 patent/US7189536B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-05-21 NO NO20032309A patent/NO337867B1/no not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-03-31 HK HK04102348.1A patent/HK1059453A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-08-05 US US11/198,557 patent/US7384644B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-03-27 CY CY20061100421T patent/CY1105594T1/el unknown
- 2006-08-23 US US11/508,797 patent/US7335364B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-10-26 US US11/977,808 patent/US7923017B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-12-04 US US11/999,127 patent/US7459270B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-05-22 US US12/471,144 patent/US7939086B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2011
- 2011-03-22 US US13/053,361 patent/US8268325B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2011-03-22 US US13/053,450 patent/US8268329B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-08-17 US US13/588,217 patent/US20120328650A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-11-20 LU LU92311C patent/LU92311I2/fr unknown
- 2013-11-21 BE BE2013C065C patent/BE2013C065I2/fr unknown
- 2013-12-13 FR FR13C0070C patent/FR13C0070I2/fr active Active
- 2013-12-23 CY CY2013048C patent/CY2013048I2/el unknown
-
2016
- 2016-02-29 HU HUS1600010C patent/HUS1600010I1/hu unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100910297B1 (ko) | 변형된 백시니아 앙카라 바이러스 변형체 | |
| AU2002231639A1 (en) | Modified vaccinia ankara virus variant |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20211122 |