HU230198B1 - Módosított Vacciniavírus Ankara-variáns - Google Patents

Módosított Vacciniavírus Ankara-variáns Download PDF

Info

Publication number
HU230198B1
HU230198B1 HU0400685A HUP0400685A HU230198B1 HU 230198 B1 HU230198 B1 HU 230198B1 HU 0400685 A HU0400685 A HU 0400685A HU P0400685 A HUP0400685 A HU P0400685A HU 230198 B1 HU230198 B1 HU 230198B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
mva
virus
vaccine
human
cells
Prior art date
Application number
HU0400685A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul Chaplin
Paul Howley
Christine Meisinger
Original Assignee
Bavarian Nordic A/S
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=8159864&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU230198(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bavarian Nordic A/S filed Critical Bavarian Nordic A/S
Publication of HUP0400685A2 publication Critical patent/HUP0400685A2/hu
Publication of HUP0400685A3 publication Critical patent/HUP0400685A3/hu
Publication of HU230198B1 publication Critical patent/HU230198B1/hu
Priority to HUS1600010C priority Critical patent/HUS1600010I1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
    • C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

vaccunavínss Ankara variáns
A találmány tárgyát artenuált vírus képezi, amely módosított Ankara Vaccmiavirusbói származik, és amely elvesztette reproduktív repltkáclos képességét humáneredetü sejivonaíak5 han. Ugyancsak a találmány tárgyát képezik a virusböi származtatott rekombináns vírusok, valamint a fend vírusok és rekombinánsaik alkalmazása gyógyászati készítményként vagy vakcinaként \ ídlálm<m\ tárgyát \tpertk tovább? chamsok vnnmmaksz fcoáhasara tmmunkompromlttált betegekben, valamint vacciniavírussai szemben mar immunitással rendelkező, vagy aníivirális terápiában részesülő egyénekben.
A Módosított Ankara Vaeeiníavíros (yrftyfkd Vaccím# Ankara ” vaus, M VA -vírus) a vacciniavírussai áll rokonságban, amely a PaevAMm család Orthopox nemzetségének tagja. Az. MVÁ-víras az Ankara vaecíniavirustörzs (CVA-tÖrzs) csirkeembriö fíhroblaszt szöveten 51 d alkalommal történt sorozatos passzázsával jött létre [az erre vonatkozó összefoglalót lásd Mayr és munkatársai közleményében- iníeedon 3, 6 (1975)]. A sorozatos passzázsokkal olyan
MVA-vírust kaptunk, amelyből mintegy 31 kílöbázis genom; szekvencia deletálédoil, ezért azt olyan vírusokként írták fe, amelynek szaporodása madáreredetű gazda,sebekre nagymértékben korlátozott [Meyer, H. és mtsai.: J. Gén. Vírol. 72, 1031 (1991)]. Különböző állatmodebeken kimutatták, hogy az igy kapott MVA lényegében avirülens [Mayr, A. és Danner, K.i Dev. Bioi, Stand. 41, 225 (1978)]. Ezen túlmenően, ezt az MVA-torzset klinikai vizsgálatokban vakeina20 ként is tesztelték emberi íeketehimlö (Aszrm/fpok) elleni immunizálásra [Mayr és mtsai.: Zhl. Baki. Hyg. f, Abt. Org. B lő 7, 379 (1987); Siíekl és mtsai.; Dtseir Med. Wschr. 99, 2386-92 (1974)]. Ezeket a vizsgálatokat 12O0OO egyén, köztük magas kockázati csoportba tartozó betegek bevonásával végezték, és azokkal igazolták, hogy az MVA-virus a vaccínia alapú vakcinákkal szemben csökkent viruleneiájü vagy fertőzőképességü, azonban megtartotta az eredeti vírus jó immnuogenbasát
A következő évtizedekben az MVA-virusí úgy módosították, hogy virusvekiorként alkalmas legyen rekombináns génespresszióra vagy rekombináns vakcinaként történő alkalmazásra [Sníter, G, és mtsai.: Vaccine 12, 1032 (1994)].
Ebből a nézőpontból igen meglepő, hogy bár Mayr és munkatársai a 70-es években kimu30 tárták, hogy az MVA-virus emberben és emlősökben nagymértékben atíermált és avírulens, néhány újabb megfigyelés szerint [Blaochard és mtsai.: 1. Gén. Virol. 79, 1159 (1998); Caroll és Moss: Vtrology 238, 198 (1997); Altenberger. 5 185 146 számú amerikai egyesült államokbeli
«.« *fcX« χ**>
♦ * *»fc fc * v ♦ * » * * * fc *
KX«fc »♦* fc* X* *♦
- V..
szabadalmi leírás; Ambrosini és mtsai.. J 'Neurosci. Kés. 55(5), 569 (1999)1 az MVA-vírus emlős és .tanán· sejtvonalakban nem teljesen attenuált, mivel ezekben a sejtekben kismértékű (rezíduális) replikáéi© előfordulhat. Valószínű, hogy a fenti szakirodalmi helyeken ismertetett eredményeket különböző MVÁ-vItastörzsek alkalmazásával kapták, mivel az alkalmazott viru5 sok tulajdonságaikat tekintve egymástól jelentősen eltérnek, különösen ami a vírusok különböző sejtvönalakban mutatott szaporodási tulajdonságait illeti.
A szaporodási tulajdonságot az attenuáltság mértékére utaló indikátornak tartják. Általánosságban, adott vinsstörzseí attenuáltnak tekintünk, ha annak reproduktív replikácios képessege gazdasgtekben elveszett, vagy esőkként. A fenti megfigyelés, mely szerint az MVA hűli) mán és egyéb emlős sejtekben nem teljesen képtelen repllkációra, felveti azt a kérdési, hogy az MVA teljesen biztonságos-e humán vakcinaként vagy rekombináns vakcinák vektoraként történő alkalmazásra.
Közelebbről, valamely vakcina vagy rekomhináns vakcina estében kiemelt jelentőséggel bír a vektor-vakcinavírss hatékonysága és biztonságossága közötti egyensúly,
Ennek megfelelően, célul tűztük ki fokozottan biztonságos, új vírustörzsek kifejlesztését, amelyek alkalmasak biztonságosabb termékek, például vakcinák vagy gyógyászati készítmények előállítására. A találmány tárgyát képezik továbbá eljárások szokásosan alkalmazott vakeínázásí rendek hatásosságának javítására.
Az,alábbiakPanjfe^fete^n.mmgrtgtjűka.találmányjzérmű^sggoldás.íényégét;,
Fenti célkitűzés elérése érdekében, a találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, új vaeemiavirusokat állítottunk elő, amelyek reproduktív módon képesek replikáiődni nem humán eredetű sejtekben és sejtvonalakban, elsősorban csirkeerabrió fibrobiasm. sejtekben ffeómáen emórtm CEF-sejtekben), valamint szopóshöresög vesesejívonalban (“&?őy
Áournmr ámbekb BHK-sejt vonalban, ECACC 85011433), viszont nem képesek reproduktív módon repfikálödni humáneredetű sejtvonalakban.
Az ismert vacclniatörzsek reproduktív módon replikáíódnak legalábbis néhány humáneredetű sejtvonalfean, különösen a BaCat jelzésű humán keratinomra sejtvonalban ÍBoukamp és mtsai.; 1 Cell Bioi. 106(3), 761 (1988)}. A BaCaí-sdi vonalban megfigyelt replikáeió m vmo replikáoiós képességre, elsősorban emberben történő rá v/w replikáeió.s képességre utal. A csatolt példákban bemutatjuk, hogy valamennyi ismert és vizsgált vaeciniatörzs, amely reziduális reproduktív képességgel rendelkezik a HaCat-sejtvonalban, rá vw is rephkálódik. Ennek megfelelően, a találmány egy előnyős megvalósítási módja szerint, a találmány tárgyát olyan vaceíraavírusok képezik, amelyek nem replikáíódnak reproduktív módon a HaCat elne*» * ** *«♦« ♦ * *·♦ < ♦ « « * * # * β « Κ ♦ * * * *»<* ««χ XX «.* «>« vezésü bumáneredetu sejívonálbm. Legelőnyösebben, a találmány tárgyát olyan vácdhlávirus” törzsek képezik,, amelyek az alábbi humáneredetű sejtvonalak egyikében sem képesek reproduktív módon replikálódni: HeLa jelzésű humán eervix-adenokareinóma szívónál (ATCC nyilvántartási szám: CCL-2), 293 jelzésű humán embrionális vesesejtvonal (BCACC nyilvántartási szám: 85129602), 143B jelzésű humán csont oszteoszarkőma sejtvonal (BCACC nyilvántartási szám: 91 í 12592), valamint HaCat-sejtvonal.
Adott vírus szaporodási/replikáciős jellemzőit szokásosan a fertőzött sejtekből kinyerhető vírusmennyiség (“output’’) és a kiinduláskor a sejtek fertőzésére alkalmazott vírusmennyíség (Anput”) hányadosaként fejezzük ki (“amplitikádös hányados”). Amennyiben a kinyert vírus10 mennyiség (”output”) és bevitt ykusmennyiség (input’') közti hányados értéke 1, a fertőzött sejtekből kinyerhető vírusok mennyisége azonos a sejtek fertőzésére eredetileg alkalmazott vl~ rasnrennyiséggel. Ez azt jelenti, hogy a fertőzött sejtek lehetővé teszik a vírusfertőzés létrejöttét (pennisszivek a vírusra nézve) és a vírasreprodukciőt.
Az. l-nél kisebb amplifikáeiós hányados, azaz az amphíikáció mértékének input” szint alá történő csökkenése a reproduktív replikádé hiányát jelzi, és ezáltal, a vírus attenuáltságára utal. Sikerült olyan törzset azonosítanunk és izolálnunk, amelynek amplifikáeiós hányadosa 1 alatt marad több humáneredető sejtvonalban, elsősorban a 143®, HeLa, 293 és HaCat jelzésű humán sejtvonalakban.
A “reproduktív módon replikálódni nem képes” kifejezést olyan vírusra vonatkoztatva 20 használjuk, amelynek amplifikáeiós hányadosa 1 alatti érték az 1. példában ismertetett, néhány kiválasztott M.VA-törzs esetében is alkalmazott körülmények mellett tenyésztett humán sejtvenalakon, például a 293 (BCACC nyilvántartási szám: 85129602), 143B (ECACÜ nyilvántartási szánr 91112502), HeLa (ATCC nyilvántartási szám: CCL-2) és HaCai [Boukamp és mtsai : I Cell Biok 106(3), 761 (1988)] sejtvonalakon. Előnyösen, a találmány szerinti vírus ampiifikácí25 os hamadosa a fenti humán sepvonalakon - HeLa, HaCat es 143B - 0.S vagy kisebb
Az. 1. példában és az .1. táblázatban részletesen bemutatjuk, hogy a találmány szerinti vírusok a 14 3 B, HeLa és HaCat jelzésű sejtvonalak egyikében sem replikáiödnak reproduktív módon. A példákban ismertetett vizsgálatokban alkalmazott törzset VÖ90S3008 nyilvántartási számon helyeztük letétbe a Ceta® < Ce// Cn/ínm gyűjteményben. Ezt a tör30 zset a leírásban ‘MVA-BN”-törzsként említjük.
Az Ismert MVÁ-tőrzsek a tesztelt humán sejtvonalak legalább egyikében rezíduális szinten repbkálódmk (1. példa, 1. ábra). Valamennyi ismert vaeoiniatőrzs legalább kismértékben repiikáiődott a HaCat-seitvonalban, mig a találmány szerinti MVA-torzsek, közelebbről az MVA»»>Χ Χ*φ
BN-törzs nem feplíkálódtk produktív módon HaCat-sejtekben, Közelebbről, az MVA-BNtörzs amplifikádós hányadosa a 293 jelzésű humán embrionális vesesejtvonalban (ECACC nyilvántartási szánr. 85120602) 0,05-0,2. A MSB jelzésű humán csont oszteoszarkóma sejtvonalban (ECACC nyilvántartási szám: 91112502) a hányados érteke 0,0-0,6 között van. Az amplifikációs hányados a HeLa jelzésű humán., eervix-adeaokardnóma sejívonalhan (ÁTCC nyilvántartási szám: CCE-2) 0,04-0,8 tartományba, a .HaCat jelzésű humán keratinocita séjtvonalhan (Boukamp és mtsaí.: 3, Cell Bioi. 106(3) 761 (1988)1 0,02-0,8 tartományba esik. Az MVA-BN -törzs amplifikációs hányadosa afrikai zöldmajom eredetű CV1-vesesejtekben (ÁTCC nyilvántartási szám: CCE-70) 0,(51-0,06 között, van. Ennek megfelelően, az MVA-BN törzs, amely a találmány szerinti proíofipustörzs, a vizsgált humáneredetű sejívonai&k egyikében sem képes produktív módon replíkálódni.
Az MVA-BN-törzs amplifikációs hányadosa csírkeembriő fibroblaszi sejtekben (CET, primer kuhűták) vagy BHK jelzésű szopőshörcsög vesesejtvonalban (ÁTCC nyilvántartási szám: CRL-1632) egyértelműen 1 fölött van. A fentiekben ismertetettek szerint, az „1” fölötti érlék reproduktív replikáclót jelent, mivel a fertőzött sejtekből kinyerhető vírus mennyisége a sejtek fertőzésére alkalmazott vírus mennyiségéhez viszonyítva emelkedett. Ezért, a vírus könnyen szaporítható és amplifikálható primer CEF-kultúrákban - 500 feletti amplifikációs hányados mellett -, vagy BHK-sejlekben - 50 feletti hányados mellett.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány tárgyát képezik az
ECACC V0083008 nyilvántartási számon letétbe helyezett vírus származékai. Az ECACC V0083008 nyilvántartási szám alatt letétbe helyezeti vírus “származékain” olyan sarusokat értünk, amelyek replikáeiós jellemzői a letétbe helyezett vírussal lényegében azonosak, de a genom egy vagy több részében eltéréseket hordoznak. A letétbe helyezett vírussal azonos ‘‘replikáeiós tulajdonság»” vírusokon olyan a vírusokat értünk, amelyek a letétbe helyezett törzshöz hasonló amplifikációs hányadossal replikálódnak CEF-sejtekben és a BHK-, HeLa-, HaCat- és f43B-sejtvonalakban, és w rtw, az AGR129 transzgenikus egérmodellben (lásd az alábbiakban), ahhoz hasonló mértékben replikálódnak.,
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti vaceiníavírustörzsekre, közelebbről az MVA~BN~tőrzsre és származékaira jellemző, hogy képtelenek in vrio replíkálódni. A leírásban az 0« v/vo replíkálódni képtelen” kifejezést olyan vírusokra vonatkoztatva használjuk, amelyek nem replikálódnak emberben és az alább ismertetett egérmodeilben. Azt, hogy egy virustörzs ,,»? vivő nem képes replíkálódni”,” előnyösen olyan egerekben határozhatjuk meg, amelyek nem képesek érett B- és T-sejíeket termelni. Ilyen például az φ * * ** « ί . »* «««« «χ»« * ♦ t ·«· ♦ * * * *♦ **
-5AGR129 transzgenikus egérmodell (Mark Sútíör,. Virológiái Intézőt, Zürichi Egyetem, Zürich, Svájc). Ebben az egértőrzsben az i-es típusú (ΪΕΝ-α/β) és H-es típusú (ÍFN-y) íFNrecepiorekaí kódoló gén, valamint a ./MG-régró célzottan meg lett szakítva. A fenti megszakítások következtében, az egeteknek nincs IFN-rendszerük, ezért képtelenek érett B-és T5 sejteket képezni, és mini ilyenek, súlyosan immunkentpromittáltak, és repitkáiodó vírusokra nagyon fogékonyak. Az AGIU29-egerek helyett bármely olyan egértörzs alkaimazható, amely nem képes érett B- és T-sejtekeí kepe/m, ezért súlyosan imnnmkompronríttáít, és replikáiddá vírusokra nagyon fogékony A talahnany szerinti vírusok IO7 pfu ^píaque foninng unii. plakk képző egység) vírusmennyiségével történt íntraperiioneális fertőzést követően nem pusztítják el a2 AGR129-egereket legalább 45 napig, előnyösen legalább 60 napig, előnyösebben legalább 90 napig. Előnyösen, az G» Gfoo replikálódm nem képes” vírusokra az is jellemző, hogy IO7 pín virusmennyíség beadását követő 45., előnyösen 60., előnyösebben 98. napot kővetően az xAGRI29-egerek szerveiből és szöveteiből vírus nem nyerhető fossza. Az ÁGIG 29-egerekén végzett fertőzéses vizsgálatokat, valamint azon vizsgálatokat, amelyekkel megállapítottuk, hogy visszanyerhető-e vírus a fertőzött egerek szerveiből és szöveteiből, a csatolt példákban részletesen ismertetjük.
A találmány egyik előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti vacciniavírustörzsek, közelebbről az MVA-BN-förzs és származékai letális fertözéses egérmodellben erősebb innrmnogemtást mutatnak az ismert MVA 575 jelzésű törzsnél. A vizsgálat részleteit az alábbi 2. példában mutatjuk be. Rövidére egy ilyen modellben, a nem vakcínázott egerek replikádéra képes (rephkácíő-kompetens) vaceimatörzsekkel, például az L929 I&+ vagy IHDJ jelzésű Western-Reserve törzsekkel történt fertőzést kővetően elpusztulnak. A letális fertőzéses modell vonatkozásában fertőzésen” replikálódm képes vacciniavírusokkaí történő fertőzést értünk. Tipikusan, az egereket a fertőzést követően négy nappal leüljük, és a petefészkekből, szokásos plakk-eljárással, VERÓ-sejteken meghatározzuk a virustitereket (további részieteket lásd a csatolt példákban). A vírusthert. nem-vakeinázotí, és a találmány szerinti vaeciniavímsokkal vakeinázott egerekben is meghatároztuk. Közelebbről, a fenti vizsgálatban azt találtuk, hogy a találmány szeíinti vírusok 10“ TCIFWmi mennyiségével történt vakcínázást követően, a petefészkekben kimutatható forustiterek legalább 70%-kal, előnyösen le30 galább 80%-kal, előnyösebben legalább 90%-kal csökkentek a nem-vakcinázoti egerekben kimutatott virusííterekhez képest.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti vaceiníaforusok, közelebbről az MVÁ-BN és annak származékai, előnyösen alkalmazhatók a vakcina elsődleges » « ♦ * « :« ** * ♦ ί
** immunválaszt kiváltórtnegérősítő (,^v7me7hoosf’) oltásként történő beadására. Számos megfigyelés utal arra, hegy száHlíóvektorkém MVÁ-vimst alkalmazó, első, majd megerősítő vakcinázáson alapdó vakeinázási rendek gyenge immunválaszt váltanak ki, és hatásosságuk elmarad a DNS-sel történő első, majd MVÁ-vírussal történő megerősítő vakeinázást magában foglaló vakeinázási rendek hatásának (Schneíder és mísai.; N&t Mód. 4, 397 (1998)]. Valamennyi említett vizsgálatban a találmány szerinti vaceíniavírusoktól eltérő MVA-tőrzset alkalmaztak. Áz első, majd megerősítő oltásra MVA-vírust alkalmazó beadási rend alkalmazásával kapott gyenge immunválasz magyarázatául feltételezték, hogy az első beadást, követően az MYÁvírus ellen képződött ellenanyagok neutraiízálják a második, megerősítő immunizáláskor belő adott MVÁ-vírust, ezáltal gátolják áz immunválasz: hatékony megerősítéséi. Ezzel szemben, az első alkalommal DNS-t, majd megerősítésül MV A-vírust alkalmazó beadási rendekről azt írták le, hogy nagyobb hatékonysággal váltanak ki magas avidlíású választ, mível ebben a beadási rendben egyesülnek azok az előnyök, .hogy a DNS hatásosan vált ki elsődleges immunválaszt, és az MVA, az M VA-vírus ellen már fennálló immunitás hiánya esetén, ezt a választ képes foki kozni. Világos, hogy amennyiben MVA-vínts ésA^agy vaechdavírus elleni, már meglévő immunitás megakadályozza az immunválasz további erősítését, az MVA-vírus vakcinaként vagy gyógyhatású készítményként történő alkalmazása korlátozott hatékonyságú lenne, különösen olyan egyénekben., akiket feketehímlö ellen már immunizáltak. A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szedni azonban, a találmány szerinti vaeerníavfrusök, közelebbről az
MVA-BN-vírus és szánnazékzí, valamint a megfelelő, heterolőg szekvenciákat hordozó rekomblnáns vírusok hatékonyan alkalmazhatók az immunválasz elsődleges kiváltására, majd az immunválasz megerősítésére natív állatokban, valamint poxvirusok ellen már fennálló immunitással rendelkező állatokban Ennek megfelelően, a találmány szerinti vaeeiinavítus lényegében legalább olyan színtű immunitást indukál első, majd megerősítő vakcínázásként vaoelníavlrus alkalmazásán alapúiéi beadási rendek alkalmazásával, mint az első alkalommal DNS-t, megerősítő vakemázáskéní vaceiníavirust alkalmazó beadási rendek.
Adott vaeelmavirusről akkor mondjuk, hogy legalább lényegében azonos szintű immunitást vált ki az első, majd megerősítő vakcinázásra vaecimavítust alkalmazó beadási rendben és az első vakcinázásra DNS-t, majd megerősítő oltásra vacdniavírust alkalmazó beadási rer ha a mért CTL-váíaszök az alábbi két viz:
Ί.
vizsgálat’’ és vízsí előnyösen mindegyikében, az első és megerősítő vakcinázásra vaeciniavirust alkalmazó beadási rend és az első vakeinázasra DNS-t, majd megerősitő oltásra vaccmiavimst alkalmazó beadási rend alkalmazását kővetően legalább lényegében azonosak. Előnyösebben, az első, majd meg30 ♦* X * *♦*
- 7eröslto vatódázásként vaeciníavlrus beadását magában foglaló beadási rend a vizsgálatok legalább egyikében magasabb CTL-választ indukál, mint az első vakcinázásra DNS-t, megerősítő immunizálásra vacciniavírust alkalmazó beadást rend. Még előnyösebben, a CTL-válasz mindkét alább ismertetett vizsgálatban magasabb.
1. .Vizsgálat Az .első alkatommal vaeeiniavrasi, majd megerősítő oltásként ismét vacciniavirust alkalmazó beadási rendben 6-8 hetes BALB/C- (H-2d) egereket immunizáltunk intravénása», első oltásként a találmány szerinti, rágcsáló politópoi (rágcsálók immunrendszere számára felismerhető több eplíőpot) expresszáló vaceíniavírns ló'' TCI&o mennyiségével {Thomson és mtsai.: J. Immunoi. 160, 1717 í .1988}], majd három héttel később, megerősítő immunizálásként, -azonos mennyiségű és azonos úton beadott vaceiniavírussal. Ehhez, a poiiíópot expresszáló rekombináns vaeemíavimst kellett előállítanunk. Az ilyen rekombináns vírusok előállítására .alkalmas eljárások szakember szániára ismertek, és azokat az alábbiakban részletesen ismertetjük. Elsődleges immunválasz kiváltására DNS-t, megerősítő immunizálásra yacciniavirusí alkalmazó beadási rend szerint, az egereket míramuszkulárisan injektáltuk a vaceimavirussal azonos antigént expresszáló DNS 50 μη mennyiségével; a vaeeimayirussal történő megerősítő vakclnázást pedig pontosan az előzőekben ismertetettekkel azonos módon végeztük. A polhőpot expresszáló DNS-pbizmld leírását szintén megtaláljuk Thomson és munkatársai közleményében. Mindkét beadási rendben, két héttel, a megerősítő immunizálást követően meghatároztuk a SYIPSAEK1 RPQASGVYM és/vagy YPHFMPTNL epitópok elleni
CTL-válaszokat. Előnyösen, a CTL-válasz meghatározását ELISPOT-vizsgáiattal végeztük. Schneider és munkatársai [Nat. Med. 4, 397 (1998)] által leírtak szerint, és a csatolt példákban, .egy találmány szerinti vírussal kapcsolatba» ismertetettek szerint. Ebben a vizsgálatban, a IQ6 lépsejtből kimutatható IFN-y-tetmelő sejtek számának meghatározása alapján azt találtuk, hogy a találmány szerinti vírus az elsődleges immunizálásra, majd megerősítő immunizálásra vacemíavírus beadásán alapuló beadási rend alkalmazásával lényegében azonos mértékű, előnyösen legalább azonos mértékű CTE-immunválaszí indukált a fenti epitópok ellen, mint az elsődleges immunválasz kiváltására DNS-t, megerősítő immunizálásra pedig vacciniavírust alkalmaző beadási rend (további részleteket lásd a csatolt példákban).
2. Vizsgálat. Ez a vizsgálat lényegében megfelel az 1. számú vizsgálatnak, azzal az eltérésiig sel, hogy míg az 1. vizsgálatban 107 TCíDje mennyiségű vacciniavírust adtunk be intravénásán, ebben a vizsgálatban a találmány szerinti yacaniavíras 10* TCÍD50 mennyiségét adtuk be szubkután, elsődleges és megerősítő immunizálásra. Ebben a vizsgálatban, a .10'' lépsejtből kimutatható IFN-y-termelő sejtek számának, meghatározása alapján azt találtuk, hogy a találmány ♦ * X * szerinti vírus az első imnambállsfa, majd megerősítő hnmmnzálásra. vaeciniavirus beadásán alapuló beadási rend. alkalmazásával lényegében azonos mértékű, előnyösen legalább azonos mértékű CTL-immunválaszt indukált a férni epűópok ellen, mint az elsődleges immunizálásra DNS-k megerősítő immunizálásra pedig vaceiniavirusí alkalmazó beadási rend (további rész~ leteket lásd a csatolt példákban).
A fenti vizsgálatok bármelyikével meghatározott CTL-válasz erőssége megfelel a védettség szintjének.
Ennek megfelelően, a találmány szerinti vírusok különösen alkalmasak yakeinázásra. összefoglalva, találmány szerinti vaeciniavirus az alábbi tulajdonságok, legalább egyikével (i) csirkeembrió hbroblasztokban („c/ucáen cmöryo/?őroZ?/avA’, CEF) és szopóshörcsög vesesejtvonalban („óaáy hmmder .fcéZvey un// /ú?c”; BÖK.) reproduktív módon képes replikálódni, de a HaCat elnevezésű humán keratinocita sejt vonalban reproduktív módon repilkálódni nem képes;
(il) m övo replikálódni nem képes;
(üi) ietálís fertözéses modellben az. MYÁ575 elnevezésű ismert törzsnél (ÍSC vánfartásí szám: VÖÖ120707) nagyobb tmmunogeniíásü; és/vagy (iv). vaeciniavírussal történő első immunizálást és megerősítő immunizálást talő vakcinázási rendben legalább ugyanolyan szintű immunválaszt vált ki, mint a DNS-sel végzett első immunizálást és vaeciniavírussal végzett megerősítő hnmunizálásí magában foglaló vakcinázási rend.
A találmány szerinti vaeciniavirus a fenti tulajdonságok közül előnyösen legalább kettővel, előnyösebben legalább hárommal rendelkezik, Legelőnyösebben, a találmány szerinti vaceiniavimsokra a fenti tulajdonságok mindegyike jellemző.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány tárgyát képezi vakoinázö készlet, amely a találmány szerinti vírust tartalmaz egy első yakeinázásra („elsődleges immunizálásra”) egy első ampuilában/tmíályban, és egy második vakdnázásra („megérősítő immumzálásra'5) egy második ampníiában/tarfályhan. A vírus lehet nem-rekombináns vírus, azaz heterotóg szekvenciákat nem-tartalmazó yaccbiiavífus. Ilyen vaeciniavirus például az
MVA-BN és származékai. További lehetőség szerint, a vírus lehet rekombináns vaeciniavirus.
amely a vaeciniavírussal heterotóg további nukleoíidszekvendákat tartalmaz Amint azt a leírás más részeiben ismertetjük, a heterológ szekvenciák kódolhatnak az immunrendszer válaszát indukáló epitópokat. Ennek megfelelően, a rekombináns vaccíniavírust alkalmazhatjuk az építő-
Φ ♦
** «
-9pokai tartalmazó proteinek és kórokozók ellem vakeinázásra. A vírusokat az aláíróiakban részletesen ismertetettek szerint formuiázhatjuk. Az egyes esetekben vakemázásra alkalmazható vírusrnennyiséget a fentiekben definiáltuk.
Szakember számára ismert, miként állíthat elő a felsorolt tulajdonságok legalább egyikével 5 rendelkező vaeeihiavirusokat, azaz:
csirkeembrió ílbroblasztokban (;,<.7?h:.áeu c/núzyo /kV<ró/as/.fk CEF) és szopóshöresőg veseseitvonalban (,,á«őy Jrasíer Wnuj ee// öné”; BÜK) reproduktív módon képes replikálódni, de a HaCat elnevezésű humán keratinodra sejtvonalba» reproduktív módon replikálódni nem képes;
m vrao replikálódni nem képes;
letális fertőzéses modellben az MVA. 575 elnevezésű ismert törzsnél nagyobb immunogenitásű; és/vagy vaceiníavirassai történő első Immunizálási és megerositő Immunizálást magában foglaló yriwAöösO vakdnázási rendben legalább ugyanolyan szintű immunválaszt vált kí, mint a
DNS-sel végzett első immunizálást és vaeemiavlrussal végzett megerősítő immunizálást magában foglaló vafccínázásí rend.
Ilyen vírusokat előállíthatunk például az alábbiak szerint.
(i) ismert vaceínia-vímsíomet, előnyösen az MVA 574 vagy MVA 575 jelzésű törzset (BCÁCC V00120707) juttatunk nem-humán sejtekbe, amelyekben a vírus képes reproduktív módon replikálódni, ahol a nem-humán sejtek előnyösen CBF-sejtek vagy BHK-sejt vonalhoz tartozó sejtek;
(ii) a sejtekből vírusrészecskéket izolálunk/dűsitonk.; és (ni) a kapott vírusokat arra nézve vizsgáljuk, hogy mutatják-e a fenti biológiai sajátságok legalább egyikéi;
a fenti lépéseket adott esetben addig ismételjük, amíg a. kívánt repkkáeiós jellemzőkkel bíró vírust nem kapunk.
Szintén a találmány tárgyát képezik a találmány szerinti eljárással kapott vírusok. A kívánt biológiai tulajdonságok meghatározására alkalmas eljárásokat a leírás egyéb részeiben ismertetjük.
A találmány szerinti törzsek egyikét a fenti eljárással, az MVA-ízolátom 575. passzálásáváí kapott vimsíenyészeíbői (MVA 575) kiindulva, több klöntfezíitási ciklus alkalmazásával azonosítottuk és izoláltuk. Az ói törzs, a feni említettek szerint, az BCACC VÖÖOÖÖ8 nyilvántartási számot kapta.
X *· > -f tt ♦ * « » ##>♦ ·* ♦ * * # y «*» * *
«. » < x *. * * ' * xx«# «♦* *·« »» **.
-ΙΟA találmány szerinti vacciniavírusok szaporodási jellemzői közelebbről az MVA-BN szaporodási jellemzői arra utalnak, hogy a találmány szerinti törzsek magasan felülmúlják az eddig jellemzett M VA-izolátumok bármelyikét abban a tekintetben, hogy attenuáltabbak humán sejtvonalakon, és nem képesek ót vivő szaporodni. A találmány szerinti törzsek tehát, az alább is5 mertetettek szerint, ideális jelöltek biztonságosabb termékek, például vakolnák és gyógyászati készítmények kifejlesztésére.
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti vírust, közelebbről az-MVÁ-BN-tőrzset és annak származékait vakcinaként alkalmazzuk humán poavitus által okozott betegségek, például íeketebímiő ellen. A találmány egy további előnyös megvalósítási
1Ö módja szerint, a találmány szerinti vírus lehel, rekombínáns, például expresszálhat heterológ géneket - például a vírus szempontjából heterológ antigéneket vagy epitópokat és alkalmazható leket vakcinaként immunválasz kiváltására heterológ antigének vagy epitópok ellen.
A leírás szerinti értelemben immunválaszon” az immunrendszer reakcióját értjük az organizmusba jutó idegen anyagra vagy mikroorganizmusra, A fogalom meghatározása szempont1.5 jából, az immunválaszon belül megkülönböztetünk specifikus és nem-specifikus reakciót, bár a kétféle reakció szoros kapcsolatban áll egymással A nem-specifikus Immunválasz közvetlen védelmet jelent idegen anyagok és fertőző kórokozók széles skálájával szemben. Amennyiben az organizmus először találkozik egy idegen behatolóval, a specifikus immunválasz egy „lagfázist” követően jelentkező védelmi reakció.
A specifikus immunválasz nagyon hatékony, és felelős azért, hogy egy meghatározott fertőzésből felépülő egyén védett lesz az adott fertőzéssel szemben. Amikor tehát az egyén másodszor fertőződik ugyanazon vagy nagyon hasonló fertőző ágenssel, sokkal enyhébben lesznek a tünetek, vagy egyáltalán nem jelentkeznek tünetek, mivel „már immunitás áll fenn” az adott ágenssel szemben. Az immunitás és az Immunológiai memória tartósan, egyes esetekben akár az egész életen át kimutatható. Ennek megfelelően, immunológiai memóriát válthatunk ki vafccinázással.
A leírás szerinti értelemben immunrendszeren” az organizmus idegen anyagokkal és mikroorganizmusokkal szembeni védettségének létrehozásában résztvevő összetett rendszert értünk. Az immunrendszer magában foglal ceilnláris elemeket, amelyek közé több sejttípust, pél30 dán! limfecitákat és fehérvérsejtekből származő egyéb sejteket sorolunk: valamint fanoráirs részt, amely kisméretű peptidek és komplementíáktorok összességét foglalja magában.
„Vakcmázáson” azt értjük, hogy egy organizmust fertőző ágenssel, például annak áttolnál t vagy ínaktíváit formájával stimulálunk specifikus immunválasz kiváltása céljából A vakéi- 11 ** ♦ *x «ázás kifejezés az organizmus találmány szerinti rekombináns vacemiavmusokkal közelebbről a vírus szempontjából heterológ antigéneket vagy epitópokat expresszáíó rekombináns MVA~ BN~vírussal vagy annak származékaival történő fertőzésére is vonatkozik.
Ilyen epitőpökaí a leírás más részeiben Ismertetőnk, említést érdemelnek például más vám5 sokból, példád Dengué-vtrusból Hepatitis C vírusból HÍV-vírusból származó proteinek epitópjak vagy tumoros vagy kareinózus elváltozások kialakulásával kapcsolatos proteinek epitópjai. Miután a rekombináns vacoiniavirust az organizmusba juttattuk, az epitópok expresszáloduak, az immunrendszer számára prezentálódnak (megjelenítődnek), és specifikus immunválaszt váltanak ki az epnöpokkal szemben, ily módon, az organizmus immumzáiodik a
Ifi rekombináns vacdmavirns által kódolt epitópot tartalmazó ágenssel/protelnuel szemben.
„Immunitáson” egy organizmus részleges vagy teljes védettséget értjük valamely fertőző ágens által okozott betegségekkel szemben, amely a fertőző ágenssel vagy annak jellemző részével történt megelőző fertőzés sikeres leküzdése révén jött léire. Az immunitás az immunrendszer specializálódott sejtjeinek jelenlétén, indukálódásán és aktiválódásán alapul.
A. fent említettek szerint, a találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti rekombináns vírusok, közelebbről a rekombináns MVA-BN és annak származékai, legalább egy heíerológ nnkleínsav-szekveneiát hordoznak. Á. „heterológ” kifejezést a továbbiakban nukldnsav-szekvenciák bármely komblnáeiójára vonatkoztatva használjuk, amelyek normális esetben, a természetben nem fordulnak elő a vírussal szoros asszociációban; az ilyen vi~ rusokat. „rekombináns vírusoknak” is nevezzük.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a heierológ szekvenciák előnyösen anílgénhatású epitópok, amelyek bármely nem-vaee-mla törzsből származhatnak. Legelőnyösebben, a rekombináns vírus egy vagy több, a felsorolt kórokozókból származó antigénhatású epitópot expresszák Pfexmodfem /ö/c/pwm, Myeobaeteőnm influenzavírus; a davivirusok, paramyxovlrusok, hepatítisvirusok vagy humán immnndenciencia vírusok családjából származó vírus; vagy haemorrhagiás lázat okozó vírusok, például haoíavtrusok vagy filovírusok, például Ebola vírus vagy Marburg vírus.
A találmány egy még további előnyös megvalósítási módja szerint, de a felsorolt antlgénhaíású epitópokon felül, a heterológ szekvenciák származhatnak egyéb poxvírus» vagy vaeciníavirus-törzsből Ezek a vírusszékvendák alkalmasak lehetnek a vírus gazdaspékírumának vagy immunogenításánák módosítására.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti vírus kódolhat terápiás hatóanyagot expresszibe heterológ gént/nukleinsavat A vírus által hordozott fi* Λ * * Κ« *«* ·***| ♦** * ν** Λ * « » < ♦ * χ X *·♦« *< α» >*
- 1210 heterolőg nukleíhááv által kódolt „terápiás hatóanyag” lehet például terápiás nukleinsav, például antiszensz nukleínsav, vágy ki vént biológiai aktivitású pepiid vagy protein,
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a heterolőg nukieínsavszekvencia expressziója például, de anélkül, hogy igényünket a felsoroltakra korlátoznánk, poxvirus promóter, előnyösebben vaecíniavirus promóter transzkripciós szabályozása alatt áll,
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a beterológ nukleínsavszekvencia a vírusgénem nem-esszenciális régiójába van ínszertálva. A találmány egy még további előnyös megvalósítási módja szerint, a heterolőg nukleinsav-szekvencia az MVA-genom természetben előforduló deléciós helyére van Ínszertálva (lásd a PCT/BP9Ó/Ö2926 számú PCT közzétételi iratot), Heíeroiőg szekvenciák poxvírusgenomba történő mszertálására alkalmas eljárások szakember számára ismertek.
.A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, szintén a találmány tárgyát képezi a vírus genomja, valamint annak rekombináns vagy funkcionális részei. Ilyen vinssszekvenclák alkalmazhatók a vírus vagy annak rekombináns változatai azonosítására vagy izolálásaid ra, például PER- vagy hibridizációs technológiával, vagy megfelelő ELISA vizsgálati eljárások.
kifejlesztésével.
Az említetteken felül, ilyen virasszekvenciák expressziős vektorról is expresszáltathatók, hogy a szekvencia által kódolt proteint vagy pepiidet termeltessünk, amely ezután szupplementáihatja (kiegészítheti) a vírus expressziós vektorban található vírusszekvendát
2ö nem-tartalmazó deléciós mutánsait.
A virusgenom „funkcionális részén” a teljes genomi szekvencia fizikai entitást (egységet), például proteint, protemdoment vagy prmeinepítopot kodolo részét értjük A virusgenom funkcionális része kifejezés vonatkozik továbbá a teljes genomi szekvencia jói körülírható aktivitású szabályozó elemeket vagy ezek részeit kódoló részeire, például promóter- vagy enhanszerelemekre, vagy „cisz”·· vagy f,íransz”~haíású elemekre.
A találmány szerinti rekombináns varas alkalmazható heterolőg nukieinsav-szekvenciák célsejtekbe történő juttatására, ahol a szekvencia lehet homológ vagy beterológ a célsejthez képest. A heterolőg nukleinsav-szekvencia célsejtekbe történő juttatásával te vino előállíthatunk heterolőg pepíidekeí vagy polipeptideker, éafeagy a szekvencia által kódolt teljes vírusölő kát, A fenti eljárás szerint, gazdAsejíeket fertőzünk a rekombináns MVA-vírttssál, a fertőzött gazdasejteket megfelelő körülmények mellett tenyésztjük, és a gazdasejt által termek pepiidet, proteint és/vagy vírust izoláljuk és/vagy dúsítjuk.
- 13 ** , rt* *· * *
Az említetteken felül, homológ vagy feeterölóg szekvenciákat sejtekbe juttathatunk //? vAro vagy előnyösen m w terápiára, in rtw terápiára, a vírussal előzőleg fe·*- wö) fertőzőit izolált sejteket adunk be élő állati/humán szervezetbe abból a célból, hogy immunválaszt váltsunk ki. in vivő terápiára, a vírust vagy annak rekombínánsait közvetlenül adjuk be az élő álla5 ti/humán szervezetnek, hogy abban immunválaszt váltsunk ki. Ebben az esetben, a beadás helyének közeiében található sejteket közvetlenül, in vivő fertőzzük a találmány szerinti vírussal vagy annak rekornbínansaival.
Mivel a találmány szerinti vírus szaporodása humán és roajomsejtekben igen korlátozott, ezáltal nagymértékben stteunált.. az ideális módon alkalmazható kezelésre emlősök széles kort) rében, például emberben. Ennek megfelelően, ugyancsak a találmány tárgyát képezik gyógyászati készítmények és vakcinák, például immunválasz kiváltására élő állati/humán szervezetben, például emberben. A. találmány szerinti vírus biztonságosan alkalmazható bármely más génterápiás eljárásban is,
Malánösságban, a -gyógyászati készítmény tartalmazhat sgy vagy több gyógyászafilag ellő fogadható és/vagy engedélyezett hordozóanyagot, adalékanyagot, anribiotikumot, tartósítószert, adjuvánst, hígítóanyagot és/vagy stabilizátort. Ilyen járulékos összetevők lehetnek például a felsoroltak: víz, fiziológiás sóoidat, glicerin, etanol, nedvesitőszer vagy emulgeátor, pHbeáíiító puffét vagy hasonló. A készítmény hordozóanyagként tartalmazhat például nagyméretű, lassan meíaboiizálődó molekulákat, például proteineket, pohszacharidokat, poiáejsavakat, poiiglíkolsavakat, annnósav'pólimereket, aroinosav-köpolimerekeí, liptdaggregáturookat és/vagy hasonlókat.
Vakcinák előállítására, a vírust vagy annak rekombínánsait fiziológiásán elfogadható formában kell kiszerelnünk. Ezt megtehetjük a feketehimlő elleni poxvirusvakcínák előállítása terén szerzett tapasztalatok felhasználásával (például Stickl R és mtsai. eljárásával: Dtsoh. Med
Wschr. 99, 238ő (1974)]. Például, a tisztított vírust tárolhatjuk -8Ö®C-on, 5x10'°' TCIDjfonl ikerben, nagyjából az alábbi összetételű pufferberi íormulázva; lO mmol/1 Trls, 140mmol/l (pH—7,4), A vafceinaadagok kiszerelésénél, például 102- icó yirusrészecskét líofűízáihatunk lOö ml foszfát-pufferes fiziológiás söoldaiban (PBS-ben), ampullában - amely előnyösen üvegampulla, 2% pepton és 1% humán albumín jel erdei ében. További lehetőség szerint, a
3B vakeinaadagokat kiszerelhetjük úgy, hogy a vírust lépcsőzetes fegyasztva-száritásnak vetjük alá a készítményben. Az ilyen készítmény tartalmazhat további adalékanyagokat, például mamutot dextránt, szacharózt, glicíní, lakózí vagy polívinil-plrrolidont; vagy egyéb in vivő beadásra alkalmas adalékanyagot, példáni antioxidánsokai, inért gázt, stabilizátort, vagy rekombi** Λ <:,· ./ ** χ <· * * * X Λ ν X £ **<* .**·>. ** *.W ** nans proteinekéi (például humán szerumalbumint), Ezután, az üvegampullát lezárjuk, és több hónapig, 4°C-on, szobahőmérsékleten tárolhatjuk, Amennyiben azonban az ampulla várhatóan nem kerül hamarosan felhasználásra, azt előnyösen -20°C alatti hőmérsékleten tároljuk.
A liofilizátumot - vahcinázásra vagy terápiás célra - (1,1-0,5 ml vizes oldatban, előnyösen fiziológiás séoldatban vagy Tris-pufrérben oldjuk fel, és szisztémásán vagy lokálisan adjuk be, például parenteráüsan, ínframuszkulártsan, vagy bármely egyéb, szakember számára ismeri úton. A beadás módját, dózisát és az adagolások számát szakember ismert módon optimalizál-
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a találmány szerinti vírus 10 különösen alkalmas immunválasz kiváltására immunkopromittált állatokban/egyénekhen, például SlV-fertőzótt majmokban (ha a CD4 sejtek száma a vérben kisebb, mint 4Ö0/gl, vagy immunkompromittált humán betegekben, A leírás szerinti értelemben “immunkopromittált” kifejezést egy egyed immunrendszerének állapotára vonatkoztatva használjuk, amely nem teljes immunválaszra, vagy csak csökkent hatékonyságú védelmet fejt ki fertőző ágé szemben. Említésre méltóan, és a találmány egy további előnyös megvalósitási módja szerint, a találmány szerinti vírus alkalmas immunválasz megerősítésére ímmunkompromíttáit állatokban vagy emberekben még akkor Is, ha ezek az állatokban vagy emberekben már immunválasz jött létre pöxvirusökkai szemben. Még figyelemre méltóbb, hogy a találmány szerinti vírus, alkalmas immunválasz megerősítésére an Inkái is, például teírovirus elleni terápiában részesülő állatok20 bán vagy emberekben. “Aíihvíraüs terápia” kifejezést vírusfertőzések legyőzésére vagy szupresszálására irányuló terápiás megközelítési módokra vonatkoztatva használjuk, amelyek alapulhatnak például: (í) nukieotldanaiógok; (h) vitális enzimaktivifást vagy virusösszeépülést gátló szerek; vagy (ül) a gazdaszervezet immunválaszát befolyásoló cítokínek alkalmazásán,
A találmány egy még további előnyős megvalósitási módja szerint, a vakcina például, de 25 anélkül, hogy igényünket a felsoroltakra korlátoznánk, alkalmazható állatorvosi gyakorlatban, például immunizálásra állati poxviraslértözések ellen, Rlsáilatokban, az immunizáló oltási előnyösen parenteráiis vagy nazális úton végezzük, míg nagyobb állatokban vagy emberben a vakeinázást előnyösen szubkután, mtramuszkuláris, vagy orális úton végezzük.
Azt találtuk, hogy már a találmány szerinti vírus csupán IO2 TC1D5O o-öw /nfevtdrw dóm 50?4”, a szövetfenyészet 50%-ában fertőzést előidéző dózis) dózisát tartalmazó yakelnázás elegendő teljes immunitás kiváltására egerekben a vad-típusú vacciniavírussal történő fertőzéssel szemben. Ez különösen meglepő annak tükrében, hogy a találmány szerimi vírus ***· ♦ ♦ ** nagyfókú aftenuíkságot mutat, amelytől azt várnánk, hogy negatív irányban befolyásolja, ezáltal csökkentse a vírus intmunogetníásáí. Ez a várakozás azon a meggyőződésen alapul, hogy immunválasz kiváltásához az antigénhaíású epitópnak megfelelő mennyiségben kell prezenfálódnia az immunrendszer számára. Bgy nagymértékben attenuálí, és ezért, nem repllkálŐdő vírus csak igen kisszámú antigénhatású epitőpot képes megjeleníteni, annyit, amennyi magába a vírusba beépül. Ezt, a virusrészecskék által hordozott antigénmennyiséget nem gondoltuk elegendőnek hatásos Immunválasz kiváltására A találmány szerinti vírus azonban Igen alacsony, csupán 10 TCÍD50 virusrészecskét tartalmazó hatásos dózisban hatásos és protektív immunválaszt vált ki az általunk alkalmazott egér/vaccinia fértőzeses modellben.
A találmány szerinti vírus tehát meglepő és fokozott immunogenítást mutat egyéb, eddig jellemzett MVA-tőrzsekhez képest. Ez a magas fokú immunogenitás a találmány szerinti vírust és az abból származó vakcinákat különösen alkalmassá teszi immuakompromíttált állatokban és emberekben történő alkalmazásra.
A találmány egy további előnyös megvalósítási módja szerint, a vírust adjuvánsként mázzuk, A leírás szerinti értelemben ,,adjnvánson” a specifikus immunválaszt erősítő vakcinakomponenst értünk. Akkor mondjuk, hogy „a vírust adjuvánsként alkalmazzuk’, ha a vírust egy már létező vakcinában alkalmazzuk a vakcinázotí beteg immunrendszerének további stímulálására. Az antígénhatású epitöp immunizáló hatását a legtöbb vakcinában úgy nevezett adjuvánsok hozzáadásával fokozzuk. Az adjuváns ko-stimulálja az immunrendszert erősebb specifikus immunreakciót váltva ki a vakcina antigénhatású epifőpja ellen. Ez a stimuláló hatás a nem-specifikus immunrendszer faktorai, például interferonok és ínterleukínek szabályozó hatásán alapulhat
A találmány egy további előnyős megvalósítási módja szerint, a vírust emlősökben, ezen belül emberben alkalmazzuk az immunrendszer aktiválására, támogatására vagy'' szupresszálá25 sara. és előnyösen, az immunrendszer aktiválására valamely aráigeudetermináos ellen. Az emhtetteken félül, a vírus alkalmazható az immunrendszer támogatására fertőzésekkel szemben mutatott fokozott érzékenység esetén, például stresszhatás alatt.
Az adjuvánsként alkalmazott vírus lehel nem-rekombtnáns vírus, azaz genornjában heteroiőg DNS-szekveneíát nem tartalmazó vírus. Ilyen típusú vífüs például az MYA-BN. További lehetőség szerint, az adjuvánsként. alkalmazott vírus genornjában - a vírusgenomban természetben jelen nem lévő - heterolőg szekvenciákat tartalmazó rekombináns vírus. Adjuvánsként történő alkalmazásra, a vírus rekombináns vims-DNS előnyösen ímmunstimulátor hatású pepíideket vagy·' proteineket, példáid mferienkíneket kódoló géneket tartalmaz: és expresszál.
« » . « χ » » »» ♦ , ... *♦·« *♦#
A. lalálmátry egy további előnyös megvalósítási módja szerint, az adjuvánsként alkalmazott vagy más vakcinához adott vírus ínaktivált. A vírust inaktivál hatjuk például hővel vagy kémiai anyagokkal, a technika adása szerint ismert módon. Előnyösen, a vírust propíolakíonmd ínaktlváljuk. A találmány fenti előnyös megvalósítási módja szerint, az inaktivált vmust számos fertőző vagy proliferativ betegség elleni vakcinához hozzáadhatjuk, hogy a beteg immunválaszát fokozzuk a betegséggel szemben.
Áz alábbiakban összefoglaljuk a találmány szerinti megoldás lényegét.
A találmány tárgyát többek között az alább felsoroltak képezik, egymagákban vagy valamilyen kombinációban;
A találmány tárgyát képezi vacdnla vírus. amely a felsorolt tulajdonságok legalább egyikével rendelkezik.
esirkeembriö fibroblasztokban ó/AmAm eeforeo A/muAlómÁ'. CEfo és sz vesesejívonalban (Jxtfy Mm.smr .Azőmy ceti ΙήκΡ) BHK) reproduktív módon replikáiődni képes, de a HaCat elnevezésű humán keratínocita sejtvonalban reproduktív módon replikáiődni nem képes, ín vivő replikáiődni nem képes;
Íetális fertőzése» modellben az MVA 575 elnevezésű ismert törzsnél nagyobb immunogemtású; és/vagy vacciniavirussal történő első immunizálást és vacciniavirussal történő megerősítő immúnist} zálást magában foglaló vakcínázási rendben legalább ugyanolyan szintű immunitást vált ki, mint a DNS-sel végzett első immunizálást és vacciniavirussal végzett megerősítő immunizálást magában foglald vakcínázási rend.
A -találmány tárgyát képezi a fenti vírus, amely nem képes replikáiődni a kővetkező humán sejtvonalakban; 293-as humán embrióvese sejtvonal, 143 B jelzésű humán csont oszteoszarkó25 n sejtvcmal, és a HeEa elnevezésű humán cervíx adenokardnóma sejtvonal.
A találmány tárgyát képezi továbbá a fenti vírus, amely VÖÖÖK3ÖÖ8 nyilvántartási számon letétbe lett helyezve az ,Jforopean Gollection of Cell Culíures” (ECACC) gyűjteményében (Salishuty, UK), és annak származékai,
A találmány tárgyát képezi továbbá a fenti vírus, amely legalább egy beterolőg nuklemsáv30 szekvenciát tartalmaz.
Szintén a találmány tárgyát képezi a fenti vírus, amely heíerológ nukleinsav-székvendaként legalább egy antigént, antigenhatásű epitópot és/vagy terápiás hatóanyagot kódoló szekvenciát tartalmaz, * ♦ X* „** **♦* ΧΧΜ ♦* * ♦* «Χ*« *χ* * * * *« 9Λ #φ
Ugyancsak. a találmány tárgyát képezi a vírus genomja valamint annak ftmkeíonáiis részei.
Ezen felöl, a találmány tárgyát képezik a találmány szerinti vírust, és/vagy annak genomját és/vagy funkcionális részét, valamint gyógyászatíiag elfogadható hordozóanyagöt, higiíőartyagot és/vagy adalékanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények.
Szintén a találmány tárgyát képezi a találmány szerinti vírust és/vagy annak genomját és/vagy funkcionális részét. tartalmazó vakéba,
A találmány tárgyát képezi továbbá a fenti vírus, annak genomja és/vagy fimkeionális része, vagy a találmány szerinti készítmény vagy vakcina alkalmazása aktív hatóanyagként Immunválasz befolyásolására, előnyösen kiváltására élő állati vagy humán organizmusban, például emberben.
.A találmány szerinti vírus, gyógyászati készítmény, vakcina vagy vírus, ahol a vírust. készítményt vagy vakcinát terápiásán hatásos mennyiségben adjuk be egy első oltással („immunválaszt első alkalommal kiválté oltással’') és egy második oltással („megerősítő oltással”).
Szintén a találmány tárgyát képezi a találmány szerinti vírus és/vagy genom alkalmazása gyógyszer vagy vakcina. előállítására.
A felsoroltakon felül, a találmány tárgyát képezi eljárás homológ ésNagy heterológ nuklemsav^szekvencíák bejuttatására célsejtekbe, amely eljárás szerint, a gazdasejteket a heterológ szekveneiákat tartalmazó vírussal fertőzzük; vagy a célsejtet a találmány szerinti genommal
Ezen felül, a tál tárgyát kepesa egárás protein es/vagy vírus elő:
amely eljárás szerint:
a gazdasejteket a heterológ szekveneiákat tartalmazó vírussal fertőzzük; a fertőzött gazdasejteket megfelelő körülmények mellett tenyésztjük; és a gazdasejt által termelt pepddeí, proteint és/vagy vírust izoláljuk és/vagy dúsítjuk,
Szintén a találmány tárgyát képezi eljárás immunválasz befolyásolására, előnyösen kiváltására élő állati vagy humán organizmusban, például emberben, amely szerint; a találmány szedő rinti vírust, genomot es/vagy annak funkcionális részét, vagy a találmány szerinti készítményt vagy vakcinát a kezelendő állatnak vagy embernek adjuk be.
Az említetteken télül, a találmány tárgyát képezi a fenti eljárás, ahol legalább ÍO3 TCH>sö („ffew rm&re infecitoits <$te® 5Ö%'\ a szövetíenyészet sejtjeinek 50%-ában fertőzést előidéző dózis) vírusrészecskét adunk be.
·*’· »ϊ ,** **♦* ♦♦♦» „· ϊ »·· .· ,*
-18 Ugyancsak a találmány tárgyát képezi a fenti eljárás, ahol a vírust, készítményt vagy vakcinát terápiásán hatásos mennyiségben adjuk he egy első oltással („immunválaszt első alkalommal kiváltó oltással”) és egy második oltással („megerősítő oltással”).
Szintén a találmány tárgyát képezi a fenti eljárás, ahol az állat/ember írumuúfcompromittált. 5 A találmány tárgyát képezi a fenő eljárás,, ahol állat/ember mar immunitással rendelkezik.
poxvirusokkal szemben.
A találmány tárgyát képezi a fend eljárás, almi az állat/ember antivírális terápiában részesül.
Továbbá, a találmány tárgyát képezi eljárás, ahol az állat/ember anüviráiis terápiában, fcő10 zelebbrol retrovírus elleni (aníi-retrovlrális) terápiában részesül.
Szintén a találmány tárgyát képezi a találmány szerinti vírus, genom és/vagy a genom fenkcíonáks részének alkalmazása adjovánsként.
Ugyancsak a találmány tárgyát képezi eljárás specifikus immunválasz kiváltására a vakcinában található antigén és/vagy antígénhatású epitóp ellen, amely szerint a vírust vagy genomot adjuvánsként. adjuk be a vakcinával kezelendő élő állaíi/humán szervezetnek, ezen belül embernek.
Ugyancsak a találmány tárgyát képezi a fenti vírus vagy genom adjuvánsként történő alkalmazásra.
Szintén a találmány tárgyát képezi a találmány szerinti vírust, genomot vagy annak fenkcí20 onális részét tartalmazó sejt, előnyösen, humán sejt.
Ezen felül, a találmány tárgyát képezi eljárás a találmány szerinti vaccbuavírus előállítására. amely eljárás szerint: egy rendelkezésre álló vaeciniavirus-tőrzset, előnyösen az MVA. 575törzset olyan nem-humán sejtekbe juttatjuk, amelyekben a vírus reproduktív módon képes szaporodni - ahol a nem-humán sejtek előnyösen CBF-sejtek vagy SHK-sejtvonalhoz tartozó sej25 íek a sejtekből vírustészecskéket izolálunk/dusltunk; és a kapott vírusokat arra nézve vizsgáljuk, hogy mutatják-e a fenti biológiai sajátságok legalább egyikét; és a fenti lépéseket adott esetben addig ismételjük, amíg a kívánt repiikáeiós jellemzőkkel bíró vírust nem kapunk.
Szintén a találmány tárgyát képezi reagenskészlet első/megerösitő immunizálásra, amely a találmány szerinti vírust, vakcinát vagy hatóanyagként alkalmazott vírust tartalmaz egy első oltásra („első immunizáló oltásra’) egy első ampnlláhan/tartáíyban, és egy második oltásra („megerősítő oltásra”) egy második ampuLlában/tartálvban.
* X ♦♦ *
♦ Χχ
- 19 A találmány szerinti vírus, készítmény és/vagy vakcina alkalmazása vakcina előállítására, ahol a vírust, készítményt vagy vakcinát egy első immunizáló oltás során adjuk be, és ugyanezt a vírust vagy vakcinát adjuk be egy megerősítő oltás során Is.
Az alábbiakban röviden ismertet jük a leíráshoz csatolt ábrákat.
Áz 1, ábrán különböző MVA-törzsek szaporodási kinetikáját szemléltetjük különböző sejtvonalakban. Eredményeinket az A) ábrarészen a tesztelt MVA-törzsek szerint csoportosítottuk, míg a B) ábrarészen a tesztelt sejtvonalak szerint csoportosítottuk. Az adott sejtvonalból «égy napos tenyésztést kővetően kinyert vírus mennyiségét (D4) plakk vizsgáló eljárással határoztuk meg, és a négy nap után kinyert vírusmennyiség és a kiinduló inokulum (Dl) aráid nyaként adtak meg.
A 2. ábrán a vaeeíniavhussal történő letális fertőzés elleni védettséget szemléltetjük MVABN- vagy MVA 575-íörzzsei történt vakeínázást követően.
A 3. ábrán CTL-válasz kiváltását és influenzavírussal történő fertőzés elleni védettség létrehozását szemléltetjük különböző elsö/megerősúö immunizálási rendek alkalmazását követő15 en.
A 3. A ábrán rágesálőeredetu pokpeptideí kódoló DNS- vagy MYA-RN~vakcinák különböző kombinációjával végzett vakeínázást követően tapasztalt CTL-választ ábrázoltunk 4 különböző H-2D-korlátozott epitoppal szentben. BALB/c-egereket (5 állat/esoport) vakeínázíunk DNS-sel (iníramuszkülárisan) vagy MVÁ-BN-törzzsel (szubkután), és megerősítő oltás20 bán részesítettünk három héttel később. A megerősítő oltást követően két héttel. Isi JSFÖTanalízíssel meghatároztuk a vakcinák által kódolt 4 különböző epitöpra (LY()P.T1<ALV, influenza; SY1PSÁEKL F. Bergheí; YFHFMPTNL, Cytomegalovirus; RPQASGVYM, LCV} adott CTL-választ
A 3,B ábrán rágcsáióeredetü polipepfldet kódoló DNS- vagy MVA-BN-vakcínák különböző kombinációjával végzett vakeínázást követően tapasztalt CTL-választ ábrázoltunk 4 különböző epitoppal szemben. BALB/c-egereket (5 állat/esoport) vakcináztnnk DNS-sel (íntramuszkulárisan) vagy MVÁ-BN-törzzsel (intravénásán), és megerősítő oltásban részesítettünk három héttel később. Á megerősítő oltást kővetően két héttel, RLÍSPOT vizsgáló eljárással meghatároztuk a vakcinák által kódolt 4 különböző epitópra í rYQRJRALV, Influenza; SYIPSAEKI, P. Bernnel; YFHFMPTNL, Cytomegalovirus; RPQASGVYM, LCV) adott
CTL-választ.
A 3.C ábrán pepiid- és MVA-speciílkus T-sejíek gyakoriságát ábrázoltuk rekotnbináns MVA-BN optimális dózisának (TclOs TC1D5Ö) első és megerősítő oltás céljából történő
- 20 szubkután beadását kővetően. Csoportonként nyolc-nyolc egeret vafceináztunk két alkalommal, az ábrán jelölt kombinációkkal. Az utolsó vakeinázást követően két héttel, a pepfidspeclfikus lépsejíék számát lEN-gamma BLISPOT vizsgáló eljárással mértük. Az oszlopok specifikus foltok számának átlagértékeit képviselik (+/- az átlagtól váló standard eltérés).
A 4. ábrán MVÁ-BM-nef- vagy MVA-törzzsel vakcinázoft majmok SIV-terbeléséf ábrázoltuk.
♦ ** ***♦ **♦*
Az 5. ábrán vakcinázoií majmok túlélését mutatjuk be SlV-fértözést követően.
A ó. ábrán a majmok SiV elleni szérun?~eilenanyagtiterét ábrázoltuk. Az egyes állatok ellenanyagtíterét különböző formák képviselik, az állagú tereket sötét négyszögekkel jelöltük.
1.0 Á 7. ábrán SiV szintjét ábrázoltuk immurtkorapFomittáh majmokban (CD4<4ÖÖ/gl vér) tat-kódoló MVA-BN-virussal történő vakeinázást követően. A majmokat korábban három alkatommal MVA-BN- vagy MVA-BN-nefivírusokkal vakcináztuk (a Cl., 8. és ló. héten), és SIV patogén ixolátumával fertőztük (a 22, héten). A 1ŐŐ., 102, és 106. héten (az ábrán nyilakkal jelölve) a majmokat MVA-BN-fat-virusokkal vakcináztuk.
A 8. ábrán SíV-szinteket ábrázoltuk retrovirus ellenes terápiában részesülő majmokban MVA-BN-virussal történő terápiás vakeinázást követően. Három majomcsoportot (n:::ó) fertőztünk SIV-vírussal, és kezeltünk naponta PMPA-val (az ábrán fekete vonallal jelölve). A 1.0. és 16, héten az állatokat rekomhináns MVA-vírusok elegyével vagy fiziológiás sóoldattal vakemáztuk (az ábrán nyilakkal jelölve).
A 9. ábrán a SIV-vírus által kiváltott immorális választ szemléltetjük SlV-fértözést és rekomhináns MVA-vírussal történő vakeinázást kővetően. Három majomcsoportot <n~6) fertőztünk patogén SIY-izoiátummal (a Ő. héten), majd az állatokat ret.rovírus ellenes terápiában részesítettük (PMPA: az ábrán vastag vonallal jelölve). A majmokat a 10, és 16. héten rekomhináns MVA-vimsok elegyével vagy fiziológiás sóoldattal vakcináztuk. z\ SIV elleni el25 lenanyagokat antigénként fertőzött T-sejtek lizáturnának alkalmazásával· határoztuk meg szokásos módon végzett ELfSA-eijárássaL
A 10. ábrán retrovsrus ellenes terápiában részesülő SíV-fertözötf majmokban MVA ellen létrejött huntorális választ ábrázoltuk. Három .majomesoportot (n^6) fertőztünk patogén SIVizolátummal (a Ö. héten), majd az állatokat retrovirus ellenes terápiában részesítettük (PMPA:
az ábrán vastag vonallal jelölve). A 1.0. és 16 bélen a majmokat rekombináns MVA-vimsok elegyével vagy fiziológiás sóoldattal vakcináztuk. Az MVA elleni ellenanyag szintjét szokásos befogó („otfáwre”) EU SA.-eljárással határoztuk meg.
*♦ ♦
♦ **♦
-21 A H, ábrán MVA. elleni ellenanyagok termelődésének kiváltását ábrázoltuk különböző hinilővafccínákkal vakcinázoíí egerekben. Az MVA elleni. MVÁ-BN-törzzsei (a 0. és 4. héten) végzett vakeinázással kiváltott ellenanyag szinteket a hagyományos vakcinatörzsek, az Eístreeés Wyeth-tórzsek - amelyeket a farok bőrének karcolásával adtunk he (a 0. héten) az
MVÁ 572-íerzs (amelyet a 0 és 4. héten adtunk be). és az Eisíree-törzzsei végzett vakeinázást megelőzően az MVA-BN- és MVA 572-törzsek beadásával kiváltott, eilenanyagszltttekkel hasonlítottuk össze. Az MVA 572-íörzs BCACC V940Í270? nyilvántartási számon letétbe lett helyezve az ,;B.uropean C’ollectíon of Cell Cuítures (ECACC) gyűjteményében. A titereket befogó („copmru) EtlSA-eljárással határoztuk meg, lineáris regresszióval számítottuk ki a grafikon lineáris része alapján, és a 0,3,as optikai denzitásí eredményező hígítással adtuk rneg.
* Az MVA-BN:MVA-ÖN értekek jelentősen etetek az MVA 572:MVA 572 értekektől.
A találmány szerinti megoldást a továbbiakban a pontosabb értelmezhetőség céljából konkrét megvalósítási példákon keresztül kívánjuk szemléltetni. Szakember számára világos, hogy a csatolt' példák nem értelmezhetők úgy, hogy azok a példákban ismertetett technológia alkalmazását. bármilyen módon korlátozzák.
/. péMa
Az új MVA-tőrzs szaporodási kinetikája különböző sejívöoalakoo, és a törzs /« rnvo replíkádója fi) Növekedési kinetika különböző sejtvonalakon.·
Az találmány szerte, újonnan izolált törzs (a továbbiakban M.VA-BN) jellemzésére, annak.
szaporodási kinetikáját egyéb, más jellemzett MVA-törzsek szaporodási kinetikájával hasonlítottuk össze.
A kísérletben a következő vírusok szaporodási kinetikáját hasonlítottuk össze a felsorolt i5 elsődleges sejteken és seitvonalakon:
MYfÁ-BN (vmustorzslenyészet a2i uvets ienyeszet 1SÚ2 9A tittalás után 2.0x10' TClDjc/ml), az Alíenhurger által jefiemzett MVA-tőrzs (5 185 146 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), amelyet MVA-HLR néven is említenek;
-0 az Anion Mayr által jellemzett MVA-íörzs (575. passzálás) {Mayr· Infection 3, ö (1975)), amelyet MVÁ 575 néven b említenek (BCACC ¥00120707); valamint az MVA-Vető-törzs (PC'f/BPO 1/02703 (WO 01/68820) vírnstörzstenyészet, 49. passzálás, d20, nyers tenyészet: 22.03.99; titralás után 4,2x10' TCIIWml).
* * »
*x *
·**:♦ *
*<* mx > ** ♦ *< ** ♦♦
A vlrustorzseket .az alábbi elsődleges sejteken és sejtvonalakon tenyésztettük:
CEF jelzésű esirkeembrio flbroblasztok (SPF-tojásokból frissen készítve);
HéLa jelzésű humán cervix adenokareiuőma (építbelíálís sejtvonal), ÁTCC nyilvántartási szám: CCL-2;
143B jelzésű humán csont oszteoszarfcóma TK~, BCACC nyilvántartási szám: 91112502;
HaCaT jelzésű humán fceralinoeíía sejtvonal pásd Boukamp és mtsai.: J. Cell Bioi. 106(3),
ÍG
BHK elnevezésű szopóshörcsög vese sejtvonal, BCACC nyilvántartási szám: 85011433; Verő afrikai zöldmajom vese űhrobíaszfok, BCACC nyilvántartási szám: 85020299;
CV1 jelzésű afrikai zöldmajom vese Shróblasztok, ECÁCC nyilvántartási szám:
87032605.
A fertőzéshez, a különböző sejteket 6 lyukú lemezekre oltottuk 5x1 Ös sejtdyuk koncentrációban, és egy éjszakán ál, 37?C-on,. 5% CO?-t tartalmazó atmoszférában, 2% FCS-t tartalmazó UMEM-tápközegben inkubáltuk (Gibco, katalógusszám: 61965-026).
A sejttenyésztő tápkozegei eltávoHtottuk, és a sejteket egy órán át, 37*C~on, 5% CO2-t tartalmazó atmoszférában körülbelül 0,05 moi. (w«íötó/7/m/(y o//«/honon”, fertőzési többszörös) vírussal fertőztük (feltételezve, hogy a sejtszám egy éjszaka alatt megkétszereződik). A különböző sejttípusokat 5x.lö4 TOD$« mennyiségű vírussal fertőztük, és ezt a vlrusmerntyúségel Mvrusbevítelnek” ( neveztük. Ezután, a sejteket DMEM-tápközeggel háromszor mostuk, végül, I üti térfogatú 2% FCS-t tartalmazó DMBM-et adtunk hozzájuk, és a lemezeket 96 órán át (4 napig), 37°C~om 5% COj-t tartalmazó atmoszférában inkubálódni hagytuk. A fertőzést oly módon állítottuk le, hogy a lemezeket a titrálásos analízishez -80QC-ra lefagyasztofruk,
Titrálásos analízis (immunfestés vacciníavírus-speelűkus ellenanyaggal):
A vírusmennyiség titrálásához, tesztsejíeket (CEF) oltottunk 96 íyuku lemezekre lx.104 sejt/lyuk mennyiségben, 7% FCS-t, 1% autibioiikumoí/antlmikotíkumot (Cibeo katalógusszám: 15240-062) tartalmazó RPMf-tápközegbea (Gibco, katalógusszám; 61870-010), és a lemezeket egy éjszakán át, 37°C-on, 5% Cö?.-t tartalmazó atmoszférában inkubáltuk, A 6 lyukú lemezeket, amelyeken a fertőzéses kísérletet végeztük, háromszor lefagyasztottuk és felöl30 vasztottuk, majd azokból 10A—i 0i2 hígításokat késztettünk REMI tenyésztő tápközegben. A virushiglíásokat a tesztsejtekre mértük, és azokat öt napig, 37'5C-on. 5% C()rt tartalmazó atmoszférában inkubáltuk, hogy időt hagyjunk a CPE (citopátlás hatás) kialakulására. A teszt-
X '*·*♦ sejteket 1.0 percig (aeetou és metanol 1:1 arányú elegyével) fixáltuk, PBS-sel mostuk, és egy órán át, szobahőmérsékleten, inkubációs puífefben, 1; 1000 hígításban poli hiénába, vacciniavíras-specíhkus ellenanyagokkal inkubáltuk (Quartett Berlin; katalógusszám: 9503-2057). Miután a sejteket PBS-sel kétszer mostuk.. (Gibeo, katalógusszám: 20012-019), egy órás időtar5 tamra, szobahőmérséklet en, Fi.PR-konjugált anti-nyúl-ellenanyagokat (Promega Mannám, kaíalőgasszám; W4Ö1I) adtunk hozzájuk, az ellenanyagokat 1:1000 arányban hígítva az inkubációs pudérben (3% FCS-t tartalmazó PBS-ben). A sejteket PBS-sel kétszer ismét mostuk; majd íestékoídattal (10 ml PBS + 200 μΐ telíted o-dianizidin oldat 100%-os efanolban + 15 μΐ FfeCh, frissen készítve) inkubáltuk, amíg barna foltok váltak láthatóvá (2 óráig). A tesfékolda10 tót eltávolítottuk; és a sejtekhez PBS-t adtunk a festési reakció leállítására. CPE-elváltozásra nézve pozitívnak tekintettük minden lyukat, amelyben barna foltot figyeltünk meg, és vírustitereket határoztunk meg Kaerber képletével (egy TCIDjn alapú eljárással) [lásd Kaerber és mtsai,: Arch. Exp. Pathol, Pharmakol, 162, 480 (1931».
A virusokkat egyrészt, CEE- és BHK-sejteket - MVA-vímsímőzésre várhatóan permisszív sejteket másrészt, CV1-, Verő-, HeLa-, MSB- és HaCat-sejteket - MYA-íertözésre várhatóan nem-permissziv sejteket - fertőztünk dupiikátumokban,. alacsony fertőzési többszörös, azaz 0,05 fertőző egység / sejt (5xlíF TCíLEo) alkalmazása mellett. Ezután, a vhusmokulumot eltávolítottuk; és a sejteket a visszamaradó nem-adszorbeálódott vírusok eltávolítására háromszor mostuk. .A fertőzést összesen négy napig végeztük, majd virnsextrakíu20 mókát készítettünk és íitráltunk CEF-sejfeken. Az 1. táblázatban és az 1, ábráit a bírálások eredményeit foglaltuk össze, ahol az értékek a 4 napos fertőzést kővetően meghatározott tel;
ví msszámot képviselik.
Azt találtuk, hogy a várakozásnak megfelelően, valamennyi virus jól ampliőkálódoít CEFsejteken (csírkeembriö fibrobiaszt sejteken), mivel ez permisszív sejtvonal MVA-íertözésekre.
Kimutattuk továbbá, hogy valamennyi vírus jól szaporodott BHK-sejteken (hörcsögvese sejtvonalon), Az ΜΥΑ-Vero esetében kaptuk a legjobb eredményeket, mivel a BEK permíssztv sejtvonal
A Verő-sejtekben (majömvese-ssjtekhen) történő repkkáeíö vonatkozásában a következőket figyeltük meg:
Az MVA-Verő jól, a virusbevitel 1000-szeresére ampliískálödoít.
Az MVÁ-HLR és MVA-575 szintén jól, a bevitel 33-szorosára illetve 10-szeresére szaporodott. Csak az MVA-BN nem ampilfikálődott a többiekhez képest: megfelelően ezekben a sejtekben, amely csupán a bevitel kétszeresére szaporodott fel. A CV-i -sejteken (majomvese*·» ·*>
* *'*♦:· * * * * *** ♦*
- 24 sejtvonalon) megfigyelhető replikáciöt tekintve azt találtuk, hogy az MVÁ-BN nagymértékben attenuált ezen a seitvonalon. Ennek mennyisége 200-ad részére csökkent a virusbevltelhez képest, Az .MVA-575 sem ért el a bevitel feletti értéket; a vírusrészecskék száma szintén kissé negatív irányban változott, közelebbről, a bevitel 16-od részére csökkent. Áz MVA-HLR amplifikálódott a legjobban, amely a bevitel 3Ö-szöfósafá szaporodott fel, ezt követte az MVA-Vero, amely esetében & bevitt vírusszám ötszörösére nőtt.
A legérdekesebb eredményeket a különböző vírusok humán sejtvonalakon megfigyelt szaporodási kinetikájának összehasonlításával kaptuk. A 143B-sejteken (humán csontkaroinóma sejtvonalon) megfigyelhető reproduktív szaporodás vonatkozásában azt találtuk, hogy az
MVA-Vero volt az egyetlen törzs, amely a bevitel feletti értéken (a bevitt vírusmennyiség 3szorosára) amplifikálódott. A többi vírus nem amplifikálódott a bevitel fölé, de nagy különbségeket tapasztaltunk az MVA-HL.R-, MYA-RN-, valamint MVA-575-törzsek között. Az MVA-HLR “határértéket” ért el (a bevitel egyszeresét), míg az MVA-BN mutatta a legnagyobb fokú attenuálíságot (a vírasrészeeskék szánta a bevitelt 3bO-ad részér© csökkent), est követte az MVA-575 (amelynek száma a bevitel 59-ed részére csökkent). Összefoglalva, humán 143-B-sejteken attenuáltságát tekintve az MVA-BN bizonyult a legelőnyösebbnek.
A repilkációt HeLa-sejteken (humán eervbíkarcinöma sejteken) vizsgálva azt találtuk, hogy az MVA-HLR-töos ezen a sejtvonalon jól arnpli.fi kálódik, még jobban, mint a permi sszív BH.K-sejteken (Héta :::: 125-szőrös növekedés a bevitelhez képest; 88-szoros növeke2Ö des a bevitelhez képest). Az Mi VA-Verő-törzs is szaporodott ezen a sejtvonalon (a bevitt vírusmennyiség 27-szeresete).
Az MVA-BN, es kisebb mértékben az MVA-575 attenuáitnak bizonyult ezeken a sejtvonalakon (MVA-BN:::: 29-szeres csökkenés a bevitelhez képest; MVA-575- 6-szoros csökkenés a bevitelhez képest)
Amikor a replikádét HaCat- (humán keratinodra) sejtvonalon vizsgáltuk; azt találtuk, hogy az MVA-HLR jól immidíkalodon ezen a sejtvonalon (55-szörős növekedés a bevitelhez képest). Mindkét MVA-Vero adaptálódott, és az MVA-575 amplifikálódott a fenti sejtvonalon (1,2-szeres és 1,1-szeres növekedés a bevitelhez képest). Csak az MVA-BN bizonyult attenuáitnak (5-szörös csökkenés a bevitelhez képest).
Összefoglalva, kijelenthetjük, hogy az MVA-BN a leginkább attenuált vírustörzs ebben a vimsesoporiban: az MVA-BN-törzset kivételesen attenuáitnak találtuk humán sejívonalakon. mivel az 0,05-0,2-szeresére amplifikálódott humán embrionális vesesejívonalon (293; ECACC nyilvántartási szám: 85120602) (erre vonatkozó adatainkat az 1. táblázatban nem tüntettük **♦ « »ί rt* **** * «*» rt .* ♦ί, * *· * fel); körülbelül Ö„Ö-szeresére ampiífikálódott 143B-sejteken; körülbelül 0,04-szeresére ampfifikálódott HeLa-sejteken; és körülbelül 0,22-szeresére HaCat-sejteken. Ezen felül, az MVA-BN amplifikáeiós aránya körülbelül 0,0 volt CY1-sejteken Ampiifikació csak Verő-sejteken volt megfigyelhető (2,33-szoros amphfikaciós aránnyal), de nem ugyanolyan mértékben, mint a
S permisszív BlíK- és CEF -sejtvonalakon (vesd össze az 1. táblázat adatait). Az MYA-BN tehát az egyetlen Ismert MYA-torzs, amelyet valamennyi tesztelt humán sejtvonalon ~ 143B, HeLa. HaCat és 293 - 1 alatti amplifikáeiós arány jellemez.
Az MVA-575-íörzset hasonló amplifikáeiós profil jellemezte, mint az M'VA-BN-t, de as nem bizonyult oly mértékben attenuáltnak, mint az MVA-BN, Az. MVA-HLR jói amplifikálő10 doh valamennyi tesztelt sejtvonalon (kivéve a 143.8-sejíeken), az tehát - a HSB-sejtvonaíat kivéve - replikáeióra képesnek kell tekintenünk valamennyi tesztelt sejivonalon. Egy esetben, a fenti törzs még jobban is mnphfikalódott humán sejtvonalon (HeLa), mint. permisszív sejtvonalon (BHK)
Az MVA-Vető-törzs szaporodott valamennyi sejívenalön, de kisebb mértékben, mint az
MVA-HLR) (figyelmen kisül hagyva a 143B-sejtek esetében kapott eredményeket). Mindazonáltal. az attenuálíság szempontjából nem sorolható azonos “osztályba” az MYA-BN- vagy Μ V A-5 75-törzsek kel
2, fi? vrvo replikáeíó
Tekintve, hogy egyes MVA-tőrzsek m Afro nyilvánvalóan képesek szaporodni, a külön20 böző MVÁ-tőrzseket út vivő replikációs képességre teszteltük ÁG&129 íranszgenikús egérmodellben. Ebben az egértörzsben, az 1-es [lFN--(a/p)1 és Il-es (ÍFN-γ) típusú IFN'-receptorí kódoló gének és a RAG-gén célzottan meg lettek szakítva. A fenti megszakítások következtében, az egerekben hiányzik az IFN-rendszer, és azok nem képesek érett B- és T-sejteket termelni, ezáltal súlyos mértékben ímmoukompromittáltak, és nagymértékben fogékonyak replíká25 lódó vírusokra. Hat-hat egérből álló állatcsoportokat immunizáltunk (intraperítoneálísan; i.p.) 10? pfu (plakk-képző egység) MVA-BN-, MVA-HLR- vagy MVÁ-572-vírussal (mely utóbbit 120 000 emberben alkalmaztak Németországban), és az egereket klinikai tünetek megjelenésére naponta megfigyeltük, valamennyi MYA.-H1.R~ vagy MVA-572-törzzsel vakeínázott egér 28-60 napon belül elpusztult. A boncolásnál súlyos vírusfertőzés általános jeleit észleltük a legtöbb szervben, és szokásos módon végzett plakk vizsgáló eljárással MVA-vírnsökat (ÍÖ* pfia) nyertünk vissza a petefészkekből. Ezzel szemben, az azonos dózisú MVA-BN-vírussal (az ECACC gyűjteményében VÖ0083008 nyilvántartási számon letétbe helyezett törzsnek megfelelő virusíorzzsel) vakemázotí egerek több mint 90 napig túléltek, és MVA nem volt vissza- 26 nyerhető a szervekből vagy szövetekből
Összefoglalva, az ő? vrtfo és in v/w vizsgálatok eredményei egyértelműen azt mutatták, hogy az MVA-SN sokkal nagyobb fokban aifenuált, mint a szülői és kereskedelmi forgalomban lévő MVA~HLR~tőrzs.
2. /.foáfo
Immunológiai és m wvo vizsgálatok eredményeinek összefoglalása
Az alábbi kísérleteket a különböző dózisok és vakeiü&zási rendek alkalmazásának összehasonlítására terveztük.
2.1
A különböző MVÁ-törzsek immunválaszt stimuláló képessege eltérő.
A vacciniavíms replikációra képes (replikácíő-kompetens) törzsei hatásos immunválaszt váltanak ki egerekben, és magas dózisban letális hatásúak. Bár az MVA nagymértékben attenuált, és annak replikáelós képessége csökkent emiőseretletű sejtekben, a különböző MVÁ-íörzsek attenuáltsági szintje eltérő, valójában, az MVA-BN sokkal attenuálíabhuak tűnik az egyéb .MVA-íÖrzseknél, még a szülői MVA-575-törzsnél is. Annak megállapítására, begy az attenuálfságbaa megfigyelhető fenti eltérések befolyásolják-e az MVA-tőrzsek protektlv immunválaszt kiváltó képességét, letális vaeciniavíms-tertözéses modellben ősszebaaoninottuk az MVA-BN és MVA-575 különböző dózisainak hatását. A védettség mértékét a fertőzést kővetően 4 nappal a petefészekben kimutatható vaeeíniatíter csökkenése alapján mértük, mivel ez a különböző dózisok és törzsek hatására vonat kozó kvantitatív értékelést tett lehetővé.
Letális fertözéses modell
Hat-nyolc (6-8) hetes, specifikus patogénmentes, nőstény BALB/c- (H-2d) egereket (n~:5) immunizáltunk (i.p,) az MVA-BN- vagy MVA-575-törzsek különböző dózisaival (töy löt 10* TÜIDso). Az MVA--BN- és MVA-575-törzseket CLB-sejíeken szaporítottuk, szacharózzá gradiensen tisztítottuk, és Tris-putferben formuláztuk (pH™7,4) Három héttel később, az egereket megerősítő oltásban részesítettük a fentivel megegyező dózisok és MVÁ-íörzsek alkalmazásával, majd újabb két bét múlva replikáció-kompetens vaeemiavírustőrzs letális dózisával fertőztük (i.p.). Repíikádó-kompetens vaeciniavirusförzskéní (a továbbiakban „fVV”) WR1,929 (TK-t·)- vagy ÍHD-J-törzset alkalmaztunk. Kontroll egereket placebo vakcinával öltöt30 fűnk, A védettség mértékét a fertőzést követően 4 nappal a petefészekben szokásos plakk vizsgáló eljárással kimutatható vacdniafíter csökkenése alapján mértük. Ehhez, az egereket a fertőzést követő 4. napon leöltük, petefészküket eltávohtottuk, PBS-ben (1 ml) homogenizáltuk, és a vírust! tért szokásos plakk vizsgáló eljárással, Vero-sejleken meghatároztuk
**** ,: »** j »»« »»
-27[Thompson és misat: I, Immunoi. 160, 1737 (1998)],
A 10'! vagy 10* TCID50/ml MVA-BN- vagy MVA-575-vírussal két alkalommal végzett, vakeinázással immunizált egerek tejesen védettnek bizonyultak, mivel a fertőzést követően 4 nappal azok petefészkében a rVV-tiíer 100%-kal csökkent (2. ábra). A fertőzésre használt vt5 rus teljesen kiürült Alacsonyabb dózisoknál azonban, a védettség szintjében eltéréseket tapasztaltunk az MVA-BN- és MVA-575-törzsek között. A IO2 TCIDv/ml MVA-575-virussal két alkalommal immunizált egerek nem bizonyultak védetteknek, hiszen azok petefészkében magas rVV-íitereket mértünk (átlag; 3,7x10' pfu +/-2,11x10'). Ezzel szemben, ugyanilyen dósásé MVA-BN-törzzsei végzett vakelnázás jelentősen (9ő%-kal) csökkentette a rW-títereket az egetek petefészkében (átlag; 0,21 xKA pfu +/~0287x ICL). A plac-ebo vakcinával oltott kontroll egerek átlagos yírösritere' 5,1ixl0' pfu volt (+7-3,59x107) (2. ábra).
Mindkét MVA-törzs protektiv immunválaszt váltott ki egerekben a letális rVV-fértőzés ellen. Bár magasabb dózisok alkalmazása esetén mindkét MVA-törzs egyformán hatásos volt, optimálisnál alacsonyabb dózisok beadását követően azok hatásosságában egyértelmű különb15 ség volt megfigyelhető. Az MVÁ-BN a letális rW-fertőzés elleni protektiv immunválasz kiváltását tekintve sokkal hatásosabb volt, mint a szülői MVÁ-575-törzs, and az MVA-BN nafokú attenuáltságával magyarázható az MVA-575-tömhö:
2.2 MVA-BN alkalmazása első immunizálást és megerősítő imtmmizáíásf magában fog vakeinázási rendben
2,2.1 Büenanyagtermelés kiváltása MVÁ. ellen egerek különböző lámlővakcinák.kal történő vakeinázásával
Az MVA-BN hatékonyságát a feketehimlő eradikációja során korábban alkalmazott egyéb MVA-vakeinatörzsekével hasonlítottuk össze. Ezek a következők voltak, egyetlen immunizálás - á. farofchőr karcolásával - CEF-sejtekben termeit Elstree és Wyeth yacciníatörzsekkei, és immunizálás a. himlő eradíkácíós program során korábban Németországban alkalmazott .MV.A572-törzzsel,
Ezen felül, mind az MVA-BN-, mind az MVA-572-törzs hatását eló vakcinaként is összehasonlitottuh Elstree-törzzsel végzett szkariftkáciős vakcinázást megelőzően alkalmazva. Mindegyik csoportba nyolc BALBA egeret soroltunk, és az MVA-vakcinázást (IxiO7 TC1X)5O) sztsbkufán végeztük a 0. és 3. héten. Két héttel a megerősítő oltást követően, az egereket vaccitdavirussal (ÍHD-J) fertőztük, és négy nappal a fertőzést követően a virusütert a petefészekben meghatároztuk Valamennyi vakcina és vakeinázási rend 100%-os védettséget eredményezett.
*
-28 A különböző vakcinák és vakcínázási rendek által kiváltott immunválaszt a fertőzést megelőzően meghatároztuk az állatokban. A neutralízálő ellenanyagok mérésére 'f-sejtproliferációs vizsgálatot és T-sejtek ciíökin- (IFN-y ver.ws· .11.-4) és iENy-termelésének kimutatásán alapuló vizsgáló eljárásokat alkalmaztunk. Az MVA által kiváltott és Bldspof vizsgáló eljárással mért
T-sejtes válasz szintje általában megegyezett az egyéb MVA- és vaccíniavimsok által kiváltott immunválasz szintjével, ami a törzsek biológiai egyenértékűségét jelenti. A különböző vakefoázási rendek alkalmazását követően, az MVA elleni elfonanyagtíterek hetenként végzett analízise azt mutatta, hogy az MVA-BN szignifikánsan fokozta az ellenanyagválasz kialakulásának sebességét és mértekét az egyéb vakcínázási rendek alkalmazásához képest (I1. ábra). Valójá10 bán, az MVA elleni ellenanyagéterek MVA-BNttörzzsel végzett vakcínázási követően szignifikánsan (p>0,ö5) nagyobbak voltak a 2.s 4. es 5, héten (a megerősítő immunizálást követő 1 hét megfelel a 4. hétnek), mint az MVA-575-törzzsel végzett vakelnázást követően. Az MVABN-esoportban mért elfenasyagtiterek a 4. héten végzett megerősitó vakelnázást követően is szignifikánsan meghaladták akár az Elsfree, akár a Wyeth vakeínatörzsekkel végzett vakciná15 zást kővetően mérhető elienanyagtiterekef Ezek az eredmények egyértelműen arra utalnak, hogy az MVA~BH~törzzsef két alkalommal végzett vakcinázás jobb immunválaszt vált ki, mint a hagyományos vakeínatörzsekkel (Blstree és 'Wyeth) szokásos módon végzett egyszeri vakeínázás, és alátámasztják az 1.5. pontban ismertetett megfigyeléseinket, amelyek szerint az MVA-BN nagyobb fokban immunogén, mint az egyéb MVA-törzsek.
2.2.2 MVA-tőrzzsei végzett, első immunizálást és megerősítő immunizálást magában foglaló ó/vvmu/őíwő’) vakcínázási rendek influenza fertozéses modellben ugyanolyan szintű védettséget váltanak ki, mint. a DHS-sél végzett első vakelnázást és MVA-íörzzsel végzett megerősítő immunizálást magában foglaló vakcinázási rendek
Értékeltük az MYA-törzzsel végzett, első immunizálást és megerősítő immunizálást ma25 gáhan foglaló vakcínázási rend hatékonyságát nagy aviditású C/fL-válasz kiváltására, és azt a kitűnőnek tartott, DNS-seí végzett első immunizálást / MVÁ-virussal végzett megerősitó immunizálást magában foglaló vakcínázási rend hatásával hasonlítottuk össze,
A különböző vakcínázási rendeket DNS-vekíor vagy MVA-BN által ködölt rágcsáló polifóp konstrukció alkalmazásával értékeltük, es a CTL-indukciós szinteket EL1SPOT30 analízissel hasonlítottuk össze, míg a válasz avíditását az influenzavírussal történő fertőzést követően elért védettség szintje alapján haíásoztufc meg.
* Η »
- »ί, *
Konstrukciók.
A rágcsáló pohtópot (10 CTL epitópot, .ezen belül influenza ovalbumínt) kódoló DNSplazmid a korábbiakban ismertettük [Thomson és mtsai.. J. immunoi. 160, 1737 (1998)]. Ezt a rágcsáló pohtópot az MVA-BN 11-es delécíos helyére inszertálíuk, a vírust CEF-sejteken sza5 poritoltuk, szacharózon tisztítottuk, és Tris-puíferhen íormuláztuk (pH™?,4).
Vakeinázási rendek:
Ebben a kísérletben, 6-8 hetes, specifikus patogéntnentes, nőstény B ALB/c - (H-2d) egereket alkalmaztunk. Az ELlSPOT-anallzísben csoportonként 5 egeret alkalmaztunk <n~5), mig az infiuenzavirus-fertőzéses vizsgálatokban csoportonként 6 egeret fertőztünk. Az egereket, az eredmények összefoglalásánál részletesen ismertetettek szerint, különböző első/megerósitó vakeinázásl rendek szerint vakcmázíuk a rágcsáló pohtópot kódoló NIVA vagy DNS alkalmazásával. A DNS-sel történő ímmunizácíőhoz az egereket elaltattuk, és anesztetizált állapotban, egyetlen alkalommal 50 pg endotoxlnmentes plazmid-DNS-sel injektáltuk. (50 μΙ PBS-ben), a négyfejn izomba. Az M'VA-vlrusí első immunizálásra intravénásán adtuk be egerenként ί 07 pfu
MVA-BN dózisban, vagy szubkután adtuk be egerenként ló7 vagy W* pfu MVA-BN dózisban. Megerősítő ímnrunlzálást az első immunizálást követően három: héttel végeztünk. Amennyiben a megerősítési plazmíd-DNS-sel végeztük, az első DNS-immunizálásnál ismertetett módon jártunk, el (lásd fent). A CTL-válasz meghatározására, 2 héttel az utolsó megerősítő oltást kővetően ELÍSPOT-analtzísekei végeztünk [Scbnelder és mtsai.: Nat. Med. 4, 397 (1998)] íépsejteken az Influenza CTL-epitópnak megfelelő pepiid (TYQRTRALV), a P.
Berghel epttópnak megfelelő pepiid (SY3PSAEK.il. a Cytomegalovirus pepiid epítóp (YPMFMPTNL), és/vagy az LCV-peptid epítóp (RPQASGVYM) alkalmazásával.
A fériőzéses kísérlethez, az egereket aneszletlzáltuk, és i.n. szubletálís dózísú Mem?r~ Influenzavírussal fertőztük (4,5x1Ö5 pfí.i 50 ml PBS-ben). A fertőzést követően 5 nappal, a in25 döket eltávolítottuk, és a vlrusdtereket szokásos módon, Madín-Darby kutya vesesejívonalon, duplikáinmokban végzett plakkszámlalással meghatároztuk.
Az alábbiakban összefoglaljuk eredményeinket:
Csupán a DNS-vakcína alkalmazásával gyenge CTL-választ váltottunk ki a rágcsáló polifőp állal kódolt 4 H-2d-ep.itőp ellen, és igen gyenge immunválaszt mutatunk ki két epítóp, a P. Berghel epttópnak megfelelő pepiid (SYIPSAER1) és a hmlbciíás choriorneníngitis vírus epitópja (RPQASGVYM) ellen. Ezzel szemben, a DNS-sel végzett első immunizálást és MV A-vírussal végzett megerősítő immunizálási (107 pfu MVA-BN szubkután) magában foglaló vakeinázásl rend alkalmazásával szignifikánsan több CTL-t indukáltunk SLY (8-szoros ·>”'» »' ''**»***« » ί ?** χ* <Ζ «»» 4„ .·.«’ ·Λ- ·χ/ emelkedés) és R PQ (3-szoros emelkedés) ellen, és választ észleltünk egy harmadik epitóp, a Cytomegalovírus pepöd epitóp (YPlIFMP'fNL) ellen (3.A ábra). Amikor azonban homológ első/megerősííő ímmtmizálásos rend keretében iG7 pfu MVA-RN~virust adtunk he szubkután, ugyanolyan szintű választ értünk el, mint a DNS, majd MVA-BN alkalmazásával (3. A ábra).
Meglepő módon, nem volt szignifikáns eltérés a három epitóp által kiváltott €TL-ek számát tekintve akkor, amikor egyetlen alkalommal immunizáltunk MVA-BN-törzzsel (10' TClBjö), ami azt jelenti, hogy az MVA-BN-törzzsel végzett második immunizálás nem erősíti szignifikáns mértékben a CTL-választ. A korábbiakban, más MVÁ.-törzsek esetében kimutattuk. hogy 107 pfu MVA szubkután alkalmazása a legkevésbé hatékony beadási út és vi10 ruskoneenlráeio vakeinázásra, különösen az intravénás immunlzádóböz viszonyítva [Sehneiáer és mtsai.· (1998)], Az optimális immunizálási rendek meghatározásához, a fenti kísérletet megismételtük a YÍrusraennyiseg vagy beadási út megváltoztatásával Az egyik kísérletben, lö7 píu MVA-BN-vírust adtunk be intravénásán (3.B ábra). Bgy további kísérletben, lő8 pfu MVA-BN-vírust adtunk be szubkután (3 € ábra). Ezekben a kísérletekben, az MVA-BN-vírussál végzett első/megerosítő immunizálás magasabb átlagos CTL-számol indukált mindhárom
CTL-epitóp ellen, mint a DNS-sel végzett első és MVA-virussal végzett megerősítő immunizálás. Hasonlóképp, szemben a szubkután beadott lö7 pftj MVA-BN-vírus hatásával, í G7 pfu MVA-BN intravénás beadása és lö* p& szubkután beadása szignifikáns mértékben felerősítette a CTL-választ, egyértelműen arra utalva, hogy az MVA-BN - amennyiben a vektorral szemben már fennáll immunitás alkalmas CTL-váíaszok felerősítésére.
2.2.3 MWBNneÉyakcmQatloty^aSW-fertő^
Az alábbi kísérletet annak értékelésére terveztük, hogy az MVA-BN nefi-vakcina miként befolyásolja a vírosterheiést, és késlelteti a betegség kialakulását virulens, elsődleges SÍVízoiátummai történő fertőzést követen. Arra kerestünk továbbá választ, hogy az MVA-BN biztonságosan aíkahnazhatö-e megerősítő immunválasz kiváltására MVA-élien már immunitással rendelkező íntmunkompronöttált majmokban.
Kísérleteiükben az alábbi vakdnázási rendeket alkalmaztuk:
Csoportonként hat (n=?6) Rhesus-majmot vakeináztunk a 0,, 8. és ló, héten MVA-BNvímsokkal vagy .MVA-BN nef-vírusokkal mttamuszkulárisan, bolusinjekíálással. A 22. héten, valamennyi majmot 50MíD<<i elsődleges, tovább nem tenyésztett rhesus-majom PBMCsejtekből (perifériás vér eredetű mononukleáris sejtekből) származó patogén, sejtasszoetált SíV-törzzse! fertőztük (1XC) intravénás ötön. Az állatok klinikai státuszát nagy gyakorisággal vizsgáltuk, és az állatoktól szabályos időközönként vérmintákat vettünk a virémía, nnmunoíó*» rt».'
-31 giai paraméterek, valamint hematológiai és klinikai vérkémlaí paraméterek teljes skálájának meghatározására. Az AlDS-szerű betegségben megbetegedő állatokat Ieöitük, és a túlélő majmokat a vakcinázást követően 99 hétig megfigyeltük. A 100. héten a túlélő majmokat Lm. úton MVA-BN mt-virusokkal nnmumzáltuk, és a 102 é.s 10b héten ugyanezzel az MVzVBN tattörzzsel ismét immunizáltuk.
Káros mellékhatását nem figyeltünk meg sem az MVA-E3N-, sem az MVA-BN neftörzzsel végzett vakcinázást kővetően. Miután a majmokat SlV-virusökkal fertőztük, a virémla szintje meredeken emelkedett, és a fertőzést követően két héttel csúcsértéket ért el (4. ábra). Az egyes csoportokon hetei megfigyelt nagy standard eltérésekkel magyarázható, hogy az MVÁ-BN- és MVzVBN néptörzzsé! vakcinázott csoportok közt nem sikerült szignifikáns eltérést kimutatnunk az átlagos SÍV-szuitek tekintetében. Általánosságban azonban, 10-szer alacsonyahb vinisterhelést mértünk az MVA-BN nef-törzzsel vakcinázott csoportban, minta az MVÁ-BN-vírussal vakcinázott kontrollcsoportban. Bzen felül, 35 héttel a fertőzést követően (a kezdeti megfigyelési periódust kővetően), az MVÁ-BN net-törzzsel vakcinázott hat majom közül csupán egyet kellett eutanáziával elpusztítanunk a kialakult betegség súlyosságának következtében, míg a kontrollcsoportban 6 állatból négyet kellett a fenti okokból elpusztítanunk (5. ábra), A betegség kialakulása egyértelmű összefüggést mutatott a magasabb vlmsterhelésd, és ezért, az állatokat, a fertőzést követően *>ü
MVA-BN nef-vakcma a kontrollcsoporthoz képest úgy tűnik késlelteti a betegség progresszió óját, és az MVA-BN-nef-Nrusokkal vakcinázott ő állat közül 5 még a fertőzést követő 4ö, héfen is életben volt (5, ábra). A fertőzést kővető 59. hétre azonban, az MVA-BN nefvakcinázott csoportban további két állatot kellett eutanizálnunk, tehát öt túlélő állatunk maradt (három az MVÁ-BN-nefevirusokkal vakcinázott csoportban, kettő az MVÁ-BN-vtmsokkal vakcinázott csoportban). Amikor az MVA-BN által kiváltott ellenanvagtítereket vizsgáltuk a
12 majomban, azt találtuk, hogy az MVÁ-BN egyértelműen képes az Immunválasz felerősítésére még akkor is, ha már előzőleg immunitás állt fenn MVA-val szemben (6, ábra). Az MVABN- és MVA-BN nef-torzzsel végzett első inununizálást követően egyaránt, valamennyi majomban ellenanyagválasz jött létre MVA ellen, melynek átlagos titere 1000 volt. Az ellenanyagválasz a második Immunizálást követően szignifikáns módón felerősödött, egyértelműen arra mutatva, hogy az MVA alkalmas egészséges majmok első/megerősttő immunizálására. Az ellenanyagtiterek fokozatosan csökkentek, bár az immunizálást követő 49, héten a títerek állandósultak (platót értek el), és a 99. héten az MVA elleni átlagos filter 2000 volt.
*» fc fc «·«:« ·**♦ fcfcfcχ
Az öt túlélő majom SlV-fertőzöd és immunkomprtmntíáh volt, azok vérében a CD4sejtek száma 400/μΙ alatt maradt. Ahhoz, hogy értékelhessük a MVA-BN immunkompromittáit majmokban történő hatását, az öt állatot az első vakeinázást követően, három alkalommal a 100., 102 és 106. héten - MVÁ-BN-íat-vírusokkal vakcináztuk, Az MVA-BNMat-vírusokkal végzett első immunizálás az hnrnuukompromittált majmokban szignifikáns mértékben erősítette az MVA elleni eílenanyagválaszt, amely hat héttel később, a harmadik immunizálást kővetően tovább erősödött (6. ábra)
A fenti eredmények szerint, az .MVA-BN képes az immunválasz léleröstíésére akkor, amikor az MVA ellen már előzőleg is szignifikáns mértékű immunitás állt fenn, és a hatás még ímmunkompromiffált majmokban is érvénysül. Bár a majmokban létrejött immunválaszt az
MVA-BN-íat-virusokkal végzett immunízácíó tovább fokozta, a. SÍV-virusok szintje állandó maradt ami azt jelenti, hogy az MYÁ-BNMőrzzsel végzett immunizálás biztonságos, és nem befolyásolja a SIV-szinteket az immunkompronúitált majmokban (7. ábra).
A vizsgálatokkal kimutattuk, hogy az MVA-BN immrmkompromittált Rhesus-majmokban 15 képes immunválasz kiváltására és megerősítésére, az MVA~BN~íörzzseí végzett immunizálás biztonságos, és nem befolyásolja a vitémia. szintjét SÍV-íettőzöít állatokban. Az. AlDS-szerű betegség progressziójának késleltetése az MVA-BN nef-vakeinával vakcinázott állatokban arra utal, hogy sikerült immunválaszt kiváltain nef-protein ellen,
2.2.4 AnnyvtroyimiyjerapkbuvreszesyV W-fertőMBdfiOgk,íerápiás
Egy MVA-BN alapú terápiás HÍV-vakcina feltehetően előnyösen alkalmazható antireiroviráhs terápiában részesülő egyéneknél. Ezért, PMPA-val kezelt SíV-íertözöíi majmokban megvizsgáltuk különböző SlV-anfigénekel (gag, pol, env, rév, tat és nef) kódoló rekombináns MVA-vakcinák biztonságosságát. (SIV~szlntekre kifejtett hatását) és hatékonyságát. A PMPA. egy nukleoz.idanalőg, amely hatásos HÍV- és SÍV-tértőzes ellen [Rosenwírth B. és mtsai.; J.
Virol. 74, 1704 (2000)].
Konstrukciók;
Valamennyi rekombináns MVA-konstrukdót CEF-sejeten szaporítottuk, szacharózon tisztítottuk, és Tris-pulTe?ben íbrmuláztuk (pH=^:,4).
Kísérleteinkben a következőkben ismertetett vakcinázási rendeket alkalmaztuk:
Három csoport (n::::6) Rhesus-majntof (áte» rmVmm) fertőztünk 50 VffDgo patogén elsődleges SlV-ízoíátummal (IX€), és az állatokat 19 héten át, naponta PMPA-vai kezeltük (óőmg/kg, szubkuíán). A 10, héten, az állatokat, rekombináns MVA-BN-törzzsél vagy fiziológiás sóoldattal vakcináztuk (i nt), és azokat a fentivel azonos módon vakcináztuk 6 héttel ké«** * KK ♦ * : *.·· ♦ ** KK« ♦ * ♦ * ♦ » * ** ««
- 33 sőbb. Az. 1. csoport tagjait MVA-gag-poí és MVA-env elegyével; a 2. csoport, tagjait MVAt.at, MVA-rev és MVA-nef elegyével; míg a 3. csoport tagjait fiziológiás sóokiattal oltottuk. Az állatok klinikai státuszát nagv gxakonsaggal vizsgáltuk, cs az állatuktól szabalvos időközönként vérmintákat vettünk a virémta, immunológiai paraméterek, valamint hematológiai és klinikai vérkémiai paraméterek teljes skálájának meghatározására.
Valamennyi állatban magas virusterhelés volt kimutatható, amely csúcsát a fertőzést kővetően két héttel érte el (8, ábra). Miután a napi PMPA-kezelést folytattuk, a SíV~szlntek csökkentek, és a 9. hétre alacsony szinten stabilizálódtak. Az előző vizsgálatban azt találtuk, hogy a lő. és ló. héten végzett vakcinázás MVA-vírussal nem befolyásolta a SlV-szinteket, ló ami azt jelenti, hogy az MYA-BN biztonságosan alkalmazható vakcinavektor ímnnmkompromittált állatok számára. Miután a PMPA-kezelést abbahagytuk (a 21. hétén), a SÍV-szintek emelkedtek. Bár az 1. csoportban három állatnál alacsonyabb SlV-színteket mértünk; mint a 3. kontrollcsoportban, a PMPA-kezelést követően egyik csoport esetében sem volt szignifikáns eltérés megfigyelhető a kontrollokhoz képest az átlagos SlV~t.erhelés vonatkozásában (8. áb15 ra), S IV-fertőzött T-sejtek lizátumának alkalmazásán alapuló -BÚS A- vizsgálat szerint, a fertőzést követő 4. hétre az állatok valamennyi csoportban ellenanyag-termeléssel reagáltak? a SÍV* fertőzésre (9, ábra). A kontrollcsoportban (fiziológiás sóoldatíai oltott állatokban), a. SÍVefaanyagfiterek csökkentek a PMPA-kezelés során, és gyorsan növekedtek a PMPA-kezelés megszakítását kővetően, tükrözve a STV-virusszint anti-retrovirális terápia során bekövetkező csökkenését és azt követő növekedését (9. ábra). A. SlV-ellenanvagrifer hasonló alakulását figyeltük meg a 2. csoportban- amelynek tagjait MVA-taí-, MVA-rev- és MVA-nefivakcInával oltottuk ~, ami feltehetően azzal magyarázható, hogy a fenti szabályozó proteinek az optimálisnál alacsonyabb szinten expresszálódtak az ELíSA-eljárásban alkalmazott SIV-feríÖzőtt Tsejtek lizátumában. Ezzel szemben, a Iö. hétre az antl-SlV-ellenanyagok titere az I. csoport25 bán, az MVA-gag-poí- és MVÁ-env-vakchiákkal történő vakcinázást követően emelkedett, igazolva, hogy a rekombináns MVA-BH képes a SIV elleni immunválasz felerősítésére anfirelrovirálís kezelésben részesülő SÍV-fertőzőtt állatokban. Kiemelendő, hogy az anti-SIVellenanyagok titere a 16. végzett második imninnizáciőt kővetően emelkedett, ismét arra utalva, hogy az MVA képes immunválasz felerősítésére immunkompromiítáit állatokban még ak~ kor is. ha már előzőleg is immunitás állt fenn MVA ellen (8. ábra) Az 1. csoportban mért anfiMVA-ellenanyag-fiterek b ezt a mintázatot mutatták, azaz ellenanyagválasz jött létre az első immunizálást követően, amely szignifikáns mértékben felerősödött a második vakcinázást követően (lő. ábra).
-34Ltáblázat
Virusamplltlkáclő különböző sejtekben 4 nappal a fertőzést követően
CEF HeEa HaCat I43B BEIK Verő | CV-1
MVA-BN 579,73 0,04 0,22 0,00 65,88 2,33 j 0,00 ;
MVA-575 796,53 0,15 1,17 0,02 131.22 10,66 1 0,06 ί
MVA-BLR 86,68 124,97 59,09 0,83 87,86 34,97 | 29,70 |
MVA-Verő 251,89 27,41 1..,28 2,91 702,77 1416,46 | 4,48 1
Ap ínkációs hányados, kinyert TCiDLbeviü TCíD5,5. 5 Az értékeket TCÍDsofertéfcekként adtuk meg.

Claims (3)

1. A “Enropean Collectíon of Cell Cullures” |P c ACC) gy űjteménybeo ÍSabsbnry, OK), V&8Ö&3Öíkl nyilvántartást számon letétbe helyezett, MY A~BN jelzésű módosítón Ankara vaeuiniávfeus-torzs és szánnatíékal, ahol az MYA-öK Ankara törzsre és származékára jellemző, hogy (t) képes reproduktív módost rephkálődní esstkeembríö-flbroblaszi (CÉb) es újszülőtthőrcsőg-vese <SHK) sejívonaiakhsm, de nem képes reproduktív módon repiikálódni a Iá33 jelű humán csont oszteosz&rkóma, a NaCaí: jefóbusnán keratínocita és a HeLajelö humán méhnyitk-sőcnoknresnóma sejtwm'fetöw,. és (n) nem képes ó? v/vo rephkálódni olyan súlyosan immunkömprostúíták egerekben, melyek nem képesek érett B~ és T~se)tekst termelni.
2, Az 1. igénypont szerbit MVÁ-Sbivagy MVA-BN-kzártúazék, amely ktöntisztítoít.
.3. Az I. vagy 2. igényperé ssermts MYA-ÖN vagy MVA-SN-szátsttszék, amely tartalmaz legalább egy heternlóg nukleínsav-szek vencíát,
4- A 3, igénypont szerinti. MYA-BN vagy HYA-BY^származék, ahol a heterológ, nukieinsav-szekvettcia. olyan szekvenciák közül van: kiválasztva.; melyek legalább egy antigént, antígénhatásó ep kúpot és/vagy terápiás hatóanyagot kódolnak.
5. A 4. igénypont szerinti MYA-BN vagy MVÁ-BM-szAtmazéfe, nhöl sz sntigénhatású epitöp a kővetkezők közöl választott vlmból származik: influenzavírus,: ílavivírus, pararaixoviras, hegatítíszvirns, barnán hnsmmilefleiep.csa-virus és flemorrttagíás lázat okozó vírusok,
6. A 3 -5. igénypontok bármelyike szerinti MVA-BN, ahol a heterológ sruklemsuv-szekvencia a nef gén,
7. Gyógyászati készítmény, amely l-ő. igénypontok bármelyike szerinti MVA-BN-t vagy AÍYA-BNszártnazékot és gyogyászatiiag. elfogadható hordozót, kigitőszert és/vagy segédanyagot tartalmaz.
8. Vakcina, amely t-ő. igénypontok bármelyike szerinti MVA-Bbi-r vagy YtVA-BN-származékot tartalmaz,
9. A. ?. igénypont szerinti gyógyászati készítmény vagy a: 8. igénypont szerinti vakcina, amely legalább tik TCID» mennyiségű MVA-BN-t vagy MY A-3N-származékot tartalmaz, sík Az l-ó. .igénypontok bármelyike szerinti MYA-BN vagy MVA-SN-származék, .a 7, vagy 9, igénypont szerinti készítmény vagy a B vagy 9. igénypont szerbül vakolna, élő áílaibtm vagy emberben íormtntválasz befolyásolásában, előnyösen índskálásában történő alkalmazásra, ti. Az l-ő, Igénypontok bármelyike szerinti MVA.45N vagy YiVA-BN-szárraazék, a 7. vagy 9, igénypont szerinti készítmény vagy & 8. vagy 9. igénypont szerinti vakcina, élő állat vagy ember humán/hiralövirtís elleni vakoinálásában történő alkalmazásra.
12. A it. igénypont szerinti SVÍVA-ÖN vagy MVA-BN-származék. készítmény vagy vakolna, attól a humán hírnlövrrus által kiválásit betegség íékeíehimiő.
13. A 1Ő-32. igénypratlok bármelyike szerinti MVA-W vagy MVA-Bbi-számtazéfe, készítmény vagy vakolna, aböl az állat vagy ember immunkompromirtáit.
14. A 1Ö-13. igénypontok bármelyike szennti MVA-BN vagy MVA-BN-szárraazék, készítmény vagy vakcina, ahol az állal vagy ember himtetntsok ellen korábbról származó immunitással rendelkezik.
98543-9441-PÁ ~ 36
15. A 10-14. igénypontok bármelyike szerinti MVA-Bhl vagy MVA-SN-szársnazék, készítmény vágj' vákclna, ahol az állat vagy ember antivlrális terápiának van alávetve,
16. A 15. igénypont szerinti MVA-BN vagy MVA-SN-szánnazék, készlituárty vagy vakcina, alsói az anrivlrábs terápia amí-teirövirálís: terájha.
17. A 5-6, igénypontok bármelyike szerinti MVA-líbí vagy MVA-BN-származék, homológ és/vagy keteralőg nnkiemsav-szekveneia célsejtekbe történő bejuttatásában történő alkalmazásra.
18. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti MYA-BM vagy MVArB^-saaromAalkalnsazása - élő állatban vagy emberben kiváltandó:.- mrmtntváíasz: indakálására szolgáló gyógyszer vagy vakcina előállítására.
19. A 18. igénypont szerinti alkalmazás, aböi ;a gyógyszer vagy vakcina barnán bimlóvirus által kiváltott betegség ellőni alkalmazásra szolgál.
20. A 19. igénypont szerinti alkalmazás, iától a barnán hmdövlrus által kiváltéit betegség tekeiehimlő.
21. A 1&-20. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer vagy vakcina legalább líri TCtD;,; mennyiségü MVA-BN-t vagy MVA-öN-származékot tartalmaz.
22. A. 18-2:1:.. igénypísntok: bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az MVA-Blk-í vagy MVA-Bhl-származékot terápiásán hatásos mennyiségekben kell beadni, egy első oltásban ('primer*’ oltási és egy második oltásban (“emlékeztető” oltás)..
22. A 18-22. igénypontok bármelyike: szerinti alkabuazás, ahol az állat vagy ember Immonkomprömitiált.
24. A 18-23. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az állat vagy ember htislóvirosok ellen korábbról származó immunitással rendelkezik,
25. A 18-24. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az állat vagy ember araivi-ábs terápiának van alávetve,
2b. A 25. Igénypont szetitni alkalmazás, ahol az aníiviráiis terápia arhi-retrovirális terápia.
27. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti IWA-W vagy WA-üN-számmzék, adjuvánsként történő alkalmazásra.
28. fa vitrc eljárás homológ és/vagy heterölÖg nuklelnsav-szekvencía célsejtekbe történő bejuttatására, amely' eljárás magában foglalja a célsejtek megfertőzését a 3-&. igénypontok bármelyike szerinti MVA-Wmd vagy MVA-BN-származ.ékkal
29. Eljárás pepiid: vagy protein előállítására, amely eljárás tartalmazza a következő lépéseket:
a) gazdasejt megfertőzése: az 1-6, igénypontok bármelyike szerinti MVA-BH-:oel vagy MVA-Ehlszármazékkal;
b) a fertőzött gazdssejt tenyésztése alkalmas: körülmények közös; és
e) a gazdasejt által termelt: pepiid és/ vagy protein izolálása és/vagy beíöményiiése:.
3Ö, Eljárás MV.A-BN vagy MVA-BN-származék előálhtására, amely eljárás tartalmazza a következő lépésekét:
a) gazdasejt megfertőzése az l-ő. igénypontok bármelyike szerinti MVA-EN-nel vagy MVA~BM~ szártpazékkái;
b) a fertőzött gazöasejt Wyészíése alkalmas körtíhnétryek között; és
e): a gazáaseji által termelt MVA-BN vagy MVA-BNAszártsazék izolálása és/vagy betötnőrsyítése.
.- 37 31 izolált.sejt, Bőnyüssa htanáa sejt.. amely 1-6, igénypontok bármelyike szerinti MVA-BiN-t vagy MVABK-származékot tartalmaz.
32.. Kit. primer/meger&stó immunizáláshoz, amely tartalmazza a következüket: az I -6. igénypontok bármelyike szerinti MVArBN-t vagy MVA-BN-szártnazékot, a 7. vagy 9. igénypont szerinti készítményt vagy a &. vagy 9. igénypont szerinti vakcinát, egy első tiltás (“prnner oltás) céljára egy első edényben, tartályban és egy második oltás ('‘emlékeztető” oltás) eéljára egy második edéfivben/íartályban.
HU0400685A 2000-11-23 2001-11-22 Módosított Vacciniavírus Ankara-variáns HU230198B1 (hu)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HUS1600010C HUS1600010I1 (hu) 2000-11-23 2016-02-29 Módosított Vacciniavírus Ankara variáns

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200001764 2000-11-23
DKPA200001764 2000-11-23
PCT/EP2001/013628 WO2002042480A2 (en) 2000-11-23 2001-11-22 Modified vaccinia ankara virus variant

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0400685A2 HUP0400685A2 (hu) 2004-07-28
HUP0400685A3 HUP0400685A3 (en) 2004-10-28
HU230198B1 true HU230198B1 (hu) 2015-10-28

Family

ID=8159864

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0400685A HU230198B1 (hu) 2000-11-23 2001-11-22 Módosított Vacciniavírus Ankara-variáns
HUS1600010C HUS1600010I1 (hu) 2000-11-23 2016-02-29 Módosított Vacciniavírus Ankara variáns

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUS1600010C HUS1600010I1 (hu) 2000-11-23 2016-02-29 Módosított Vacciniavírus Ankara variáns

Country Status (30)

Country Link
US (11) US6761893B2 (hu)
EP (4) EP2204452A1 (hu)
JP (1) JP4421188B2 (hu)
KR (3) KR20090057335A (hu)
CN (2) CN101676389A (hu)
AT (1) ATE314483T2 (hu)
AU (2) AU3163902A (hu)
BE (1) BE2013C065I2 (hu)
BR (1) BRPI0115533B8 (hu)
CA (1) CA2421151C (hu)
CY (2) CY1105594T1 (hu)
CZ (1) CZ295808B6 (hu)
DE (2) DE20122302U1 (hu)
DK (1) DK1335987T4 (hu)
EE (1) EE05680B1 (hu)
ES (1) ES2256323T5 (hu)
FR (1) FR13C0070I2 (hu)
HK (1) HK1059453A1 (hu)
HU (2) HU230198B1 (hu)
IL (2) IL154712A0 (hu)
LU (1) LU92311I2 (hu)
MX (1) MXPA03002513A (hu)
NO (1) NO337867B1 (hu)
NZ (1) NZ524661A (hu)
PL (1) PL212047B1 (hu)
PT (1) PT1335987E (hu)
RU (1) RU2290438C2 (hu)
SI (1) SI1335987T2 (hu)
UA (1) UA76731C2 (hu)
WO (1) WO2002042480A2 (hu)

Families Citing this family (154)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7097842B2 (en) * 2000-11-23 2006-08-29 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US7628980B2 (en) 2000-11-23 2009-12-08 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
CN101676389A (zh) 2000-11-23 2010-03-24 巴法里安诺迪克有限公司 改良安卡拉痘苗病毒变体
US7445924B2 (en) 2000-11-23 2008-11-04 Bavarian Nordic A/S Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method
UA82466C2 (uk) * 2001-07-18 2008-04-25 Бавариан Нордика А/С Спосіб посилення ампліфікації хордопоксвірусу
EP2345665A3 (en) * 2001-12-04 2012-02-15 Bavarian Nordic A/S Flavivirus NS1 subunit vaccine
DE60314823T3 (de) * 2002-04-19 2017-11-16 Bavarian Nordic A/S Modifizierte variante des vaccinia ankara virus als impfstoff für neugeborene
PL372091A1 (en) * 2002-05-16 2005-07-11 Bavarian Nordic A/S Expression of genes in modified vaccinia virus ankara by using the cowpox ati promoter
US7501127B2 (en) 2002-05-16 2009-03-10 Bavarian Nordic A/S Intergenic regions as novel sites for insertion of HIV DNA sequences in the genome of Modified Vaccinia virus Ankara
AU2003236646B2 (en) 2002-05-16 2009-01-15 Bavarian Nordic A/S Recombinant poxvirus expressing homologous genes inserted into the poxviral genome
DK1434858T4 (en) 2002-09-05 2019-04-01 Bavarian Nordic As PROCEDURE FOR AMPLIFICATION OF A POXVIRUS UNDER SERUM-FREE CONDITIONS
DE602004027767D1 (de) 2003-11-24 2010-07-29 Bavarian Nordic As Promotoren zur Expression in modifiziertem Vaccinia Virus Ankara
WO2005120579A1 (ja) * 2004-06-14 2005-12-22 Ishihara Sangyo Kaisha, Ltd. 膜融合活性のある不活性化ウイルスエンベロープの凍結乾燥組成物
CN1295339C (zh) * 2005-01-11 2007-01-17 武汉大学 减毒痘苗病毒天坛株载体及制备方法和应用
EP1855720B2 (en) * 2005-02-23 2023-04-26 Bavarian Nordic A/S Use of a modified proxvirus for the rapid induction of immunity against a poxvirus or other infectious agents
US20090269365A1 (en) * 2005-04-20 2009-10-29 University Of Washington Immunogenic vaccinia peptides and methods of using same
KR100717279B1 (ko) * 2005-08-08 2007-05-15 삼성전자주식회사 마스크롬 소자 및 그 형성 방법
US7913477B2 (en) * 2006-01-27 2011-03-29 William Anthony Harper Insert registration in packets
EP1826264A1 (en) * 2006-02-24 2007-08-29 Deutsches Primatenzentrum GmbH Primate model for orthopox virus infections
EP1835031A1 (en) 2006-03-14 2007-09-19 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans
AU2007263281B2 (en) 2006-06-20 2012-12-06 Transgene S.A. Recombinant viral vaccine
RU2489486C2 (ru) * 2006-06-20 2013-08-10 Трансжене С.А. Процесс получения поксвирусов и композиции поксвирусов
WO2008028665A1 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Bavarian Nordic A/S Phenotypic and genotypic differences of mva strains
EP2073837B1 (en) * 2006-10-06 2014-06-25 Bavarian Nordic Inc. Recombinant modified vaccinia ankara virus encoding a her-2 antigen in combination with a taxane for use in treating cancer
US8268327B2 (en) 2007-04-27 2012-09-18 Bavarian Nordic A/S Immediate protection against pathogens via MVA
US8003364B2 (en) 2007-05-14 2011-08-23 Bavarian Nordic A/S Purification of vaccinia viruses using hydrophobic interaction chromatography
JP2010526546A (ja) 2007-05-14 2010-08-05 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ ワクシニアウイルス系及び組換えワクシニアウイルス系ワクチンの精製
DK2207564T3 (en) * 2007-10-18 2017-01-16 Bavarian Nordic As USE OF VAT FOR TREATMENT OF PROSTATACANCES
KR100970449B1 (ko) * 2007-12-21 2010-07-16 (주)이지아이 안전성을 갖는 어린이 놀이터용 고무 바닥재 및 설치방법
EP2303322A1 (en) * 2008-06-20 2011-04-06 Bavarian Nordic A/S Recombinant modified vaccinia virus measles vaccine
EP2382474B1 (en) 2009-01-20 2015-03-04 Transgene SA Soluble icam-1 as biomarker for prediction of therapeutic response
US8394385B2 (en) 2009-03-13 2013-03-12 Bavarian Nordic A/S Optimized early-late promoter combined with repeated vaccination favors cytotoxic T cell response against recombinant antigen in MVA vaccines
US8613936B2 (en) 2009-03-13 2013-12-24 Bavarian Nordic A/S Replication deficient recombinant viruses expressing antigens regulated by transcriptional control elements comprising multiple elements
WO2010108908A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Transgene Sa Biomarker for monitoring patients
NZ594896A (en) 2009-04-17 2013-07-26 Transgene Sa Biomarker for monitoring patients
RU2552292C2 (ru) 2009-07-10 2015-06-10 Трансжене Са Биомаркер для отбора пациентов и связанные с ним способы
AU2010305030A1 (en) * 2009-10-08 2012-05-10 Bavarian Nordic A/S Generation of a broad T-cell response in humans against HIV
WO2011063359A1 (en) * 2009-11-20 2011-05-26 Inviragen, Inc. Compositions, methods and uses for poxvirus elements in vaccine constructs
DK2529010T3 (en) 2010-01-28 2017-07-24 Bavarian Nordic As MUTANTS OF VACCINIAVIRUS CONTAINING THE MAIN GENOMIC DELETIONS OF VAT
WO2011119920A2 (en) 2010-03-25 2011-09-29 Oregon Health & Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
US10087423B2 (en) 2010-07-20 2018-10-02 Bavarian Nordic A/S Method for harvesting expression products
WO2012018856A2 (en) * 2010-08-02 2012-02-09 Virxsys Corporation Hiv vaccine therapy with concomitant antiviral monotherapy
EP2627774B1 (en) 2010-10-15 2018-11-21 Bavarian Nordic A/S Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) influenza vaccine
HUE037408T2 (hu) 2011-06-10 2018-08-28 Univ Oregon Health & Science CMV glikoproteinek és rekombináns vektorok
DK2739293T3 (da) * 2011-08-05 2020-08-24 Sillajen Biotherapeutics Inc Fremgangsmåder og sammensætninger til frembringelse af vaccinavirus
US20130189754A1 (en) 2011-09-12 2013-07-25 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
EP2586461A1 (en) 2011-10-27 2013-05-01 Christopher L. Parks Viral particles derived from an enveloped virus
DK2788021T3 (en) 2011-12-09 2017-04-10 Bavarian Nordic As POXVIRUS VECTOR FOR EXPRESSION OF BACTERIAL ANTIGENES CONNECTED TO TETANANOX INFRAGMENT C
EP2620446A1 (en) 2012-01-27 2013-07-31 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Immunogens for HIV vaccination
US10111946B2 (en) 2012-06-22 2018-10-30 Bavarian Nordic A/S Poxviral vectors for low antibody response after a first priming immunization
ES2631608T3 (es) 2012-06-27 2017-09-01 International Aids Vaccine Initiative Variante de la glicoproteína Env del VIH-1
SG11201500171YA (en) 2012-07-10 2015-02-27 Transgene Sa Mycobacterial antigen vaccine
WO2014009433A1 (en) 2012-07-10 2014-01-16 Transgene Sa Mycobacterium resuscitation promoting factor for use as adjuvant
JP6523955B2 (ja) 2012-08-01 2019-06-05 バヴァリアン・ノルディック・アクティーゼルスカブ 組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ（ｍｖａ）ｒｓウイルス（ｒｓｖ）ワクチン
EP2892549A1 (en) 2012-09-04 2015-07-15 Bavarian Nordic A/S Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses
WO2014043535A1 (en) 2012-09-14 2014-03-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Compositions for the treatment of cancer
CA2888367A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Bavarian Nordic, Inc. Methods and compositions for the treatment of cancer
SG11201503200PA (en) 2012-10-28 2015-05-28 Bavarian Nordic As Pr13.5 promoter for robust t-cell and antibody responses
US9707291B2 (en) * 2013-03-15 2017-07-18 Bavarian Nordic A/S Single high dose of MVA induces a protective immune response in neonates and infants
EP2848937A1 (en) 2013-09-05 2015-03-18 International Aids Vaccine Initiative Methods of identifying novel HIV-1 immunogens
US10058604B2 (en) 2013-10-07 2018-08-28 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
CA2928140C (en) 2013-10-23 2023-09-26 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hla-a24 agonist epitopes of muc1-c oncoprotein and compositions and methods of use
WO2015077717A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status
PT3074517T (pt) 2013-11-28 2021-11-03 Bavarian Nordic As Composições e métodos para indução de uma resposta imunitária intensificada usando vetores de poxvírus
US11725237B2 (en) 2013-12-05 2023-08-15 The Broad Institute Inc. Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data
AU2014368898B2 (en) 2013-12-20 2020-06-11 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Combination therapy with neoantigen vaccine
WO2015175340A1 (en) 2014-05-13 2015-11-19 Bavarian Nordic, Inc. Combination therapy for treating cancer with a poxvirus expressing a tumor antigen and a monoclonal antibody against tim-3
CA2936131A1 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Transgene Sa Fusion of heterooligomeric mycobacterial antigens
US11571472B2 (en) 2014-06-13 2023-02-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic combinations
JP6462861B2 (ja) 2014-09-03 2019-01-30 バヴァリアン ノルディック エー／エス フィロウイルス感染に対する防御免疫の誘導を目的とする方法及び組成物
EP3188754A1 (en) 2014-09-03 2017-07-12 Bavarian Nordic A/S Methods and compositions for enhancing immune responses
KR102159626B1 (ko) 2014-09-26 2020-09-25 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 인크 인간 면역 결핍 바이러스 감염에 대한 방어 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물
KR101645642B1 (ko) 2014-10-16 2016-08-11 대한민국 Kvac１０３ 유래의 재조합 백시니아 바이러스
KR101623498B1 (ko) 2014-10-16 2016-05-24 대한민국 약독화 백시니아 바이러스주 kvac１０３
RS58080B1 (sr) 2014-11-04 2019-02-28 Janssen Vaccines & Prevention Bv Terapeutske vakcine protiv hpv16
WO2016100975A1 (en) 2014-12-19 2016-06-23 Massachsetts Institute Ot Technology Molecular biomarkers for cancer immunotherapy
US10993997B2 (en) 2014-12-19 2021-05-04 The Broad Institute, Inc. Methods for profiling the t cell repertoire
CN107735103B (zh) 2015-02-25 2022-05-27 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 使用灭活的非复制型的修饰的痘苗病毒安卡拉(mva)作为实体肿瘤的单一免疫疗法或与免疫检查点阻断剂的组合
US10174292B2 (en) 2015-03-20 2019-01-08 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
US9931394B2 (en) 2015-03-23 2018-04-03 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
CN116173193A (zh) 2015-04-17 2023-05-30 纪念斯隆凯特琳癌症中心 Mva或mvaδe3l作为抗实体瘤的免疫治疗剂的应用
EP3297660A2 (en) 2015-05-20 2018-03-28 The Broad Institute Inc. Shared neoantigens
TWI750122B (zh) 2015-06-09 2021-12-21 美商博德研究所有限公司 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法
CA2987159A1 (en) * 2015-06-15 2016-12-22 Bavarian Nordic A/S Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) foot and mouth disease virus (fmdv) vaccine
US9925258B2 (en) 2015-10-02 2018-03-27 International Aids Vaccine Initiative Replication-competent VSV-HIV Env vaccines
FR3042121A1 (fr) 2015-10-08 2017-04-14 Jean-Marc Limacher Composition anti-tumorale
CN106591361A (zh) * 2015-10-20 2017-04-26 钱文斌 一种重组痘溶瘤病毒及其构建方法和应用
DK3390430T3 (da) 2015-12-15 2019-11-18 Janssen Vaccines & Prevention Bv Human immundefektvirus-antigener, vektorer, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
WO2017129765A1 (en) 2016-01-29 2017-08-03 Bavarian Nordic A/S Recombinant modified vaccinia virus ankara (mva) equine encephalitis virus vaccine
JP7034080B2 (ja) 2016-02-25 2022-03-11 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター ヒトｆｌｔ３ｌを発現する組換えｍｖａまたはｍｖａδｅ３ｌおよび固形腫瘍に対する免疫療法薬としてのそれらの使用
WO2017147553A2 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Replication competent attenuated vaccinia viruses with deletion of thymidine kinase with and without the expression of human flt3l or gm-csf for cancer immunotherapy
EP3443107A1 (en) 2016-04-13 2019-02-20 Synthetic Genomics, Inc. Recombinant arterivirus replicon systems and uses thereof
WO2017184590A1 (en) 2016-04-18 2017-10-26 The Broad Institute Inc. Improved hla epitope prediction
WO2017192418A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Janssen Vaccine & Prevention B.V. Therapeutic hpv vaccine combinations
AU2017286375B2 (en) 2016-06-16 2019-04-18 Janssen Vaccines & Prevention B.V. HIV vaccine formulation
WO2018011768A1 (en) 2016-07-15 2018-01-18 Janssen Vaccines And Prevention B.V. Methods and compositions for inducing protective immunity against a marburg virus infection
AU2017318689A1 (en) 2016-09-02 2019-04-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
IL265186B (en) 2016-09-15 2022-09-01 Janssen Vaccines Prevention B V HIV envelope proteins with trimer-stabilizing mutations
CA3036799A1 (en) 2016-09-28 2018-04-05 Bavarian Nordic A/S Compositions and methods for enhancing the stability of transgenes in poxviruses
WO2018075235A1 (en) 2016-10-17 2018-04-26 Synthetic Genomics, Inc. Recombinant virus replicon systems and uses thereof
US11311613B2 (en) 2016-11-07 2022-04-26 The United States of Americans represented by the Secretary, Department of Health and Human Services Development of agonist epitopes of the human papillomavirus
EP3548625B1 (en) 2016-12-05 2024-06-26 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhancing gene expression
US11549149B2 (en) 2017-01-24 2023-01-10 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide
WO2018185732A1 (en) 2017-04-06 2018-10-11 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Mva-bn and ad26.zebov or ad26.filo prime-boost regimen
WO2018209315A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Vaccinia virus mutants useful for cancer immunotherapy
JP2020519666A (ja) 2017-05-15 2020-07-02 ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． 安定性のウイルス含有組成物
CA3062549A1 (en) 2017-05-15 2018-11-22 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Stable virus-containing composition
CN110958887B (zh) 2017-06-15 2023-10-31 扬森疫苗与预防公司 编码hiv抗原的痘病毒载体及其使用方法
CN110891601A (zh) 2017-07-19 2020-03-17 扬森疫苗与预防公司 三聚体稳定性hiv包膜蛋白突变
US20190022212A1 (en) 2017-07-21 2019-01-24 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for safe induction of cross-clade immunity against human immunodeficiency virus infection in human
EP3691675A1 (en) 2017-08-24 2020-08-12 Bavarian Nordic A/S Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an antibody
US20190083620A1 (en) 2017-09-18 2019-03-21 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
US11389531B2 (en) 2017-12-19 2022-07-19 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Methods and apparatus for the delivery of hepatitis B virus (HBV) vaccines
US11021692B2 (en) 2017-12-19 2021-06-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Hepatitis B virus (HBV) vaccines and uses thereof
EA202091516A1 (ru) 2017-12-19 2020-11-03 Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани Способы и композиции для индукции иммунного ответа против вируса гепатита b (hbv)
KR20200100745A (ko) 2017-12-19 2020-08-26 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니 B형 간염 바이러스(hbv)에 대한 면역 반응 유도를 위한 방법 및 조성물
MX2020006225A (es) 2017-12-20 2020-12-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Constructos antigenicos del virus de epstein-barr.
CN111902163B (zh) 2018-01-19 2024-02-13 杨森制药公司 使用重组复制子系统诱导和增强免疫应答
US20220001001A1 (en) * 2018-07-13 2022-01-06 University Of Georgia Research Foundation Broadly reactive immunogens of dengue virus, compositions, and methods of use thereof
EP3847246A1 (en) 2018-09-06 2021-07-14 Bavarian Nordic A/S Storage improved poxvirus compositions
US20210382068A1 (en) 2018-10-02 2021-12-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hla single allele lines
CA3113818A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Bavarian Nordic A/S Combination therapy for treating cancer with an intravenous administration of a recombinant mva and an immune checkpoint antagonist or agonist
WO2020102404A1 (en) 2018-11-14 2020-05-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Tp5, a peptide inhibitor of aberrant and hyperactive cdk5/p25 as treatment for cancer
BR112021009856A8 (pt) 2018-11-20 2021-09-08 Bavarian Nordic As Terapia para tratamento do câncer com uma administração intratumoral e / ou intravenosa de um mva recombinante que codifica 4-1bbl (cd137l) e / ou cd40l
WO2020131586A2 (en) 2018-12-17 2020-06-25 The Broad Institute, Inc. Methods for identifying neoantigens
JOP20210186A1 (ar) 2019-01-10 2023-01-30 Janssen Biotech Inc مستضدات البروستاتا المستحدثة واستخداماتها
WO2020237052A1 (en) 2019-05-22 2020-11-26 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
JP2022536137A (ja) 2019-06-11 2022-08-12 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 粘膜ワクチン製剤
EP4058058A1 (en) 2019-11-14 2022-09-21 Aelix Therapeutics S.L. Dosage regimens for vaccines
US12018289B2 (en) 2019-11-18 2024-06-25 Janssen Biotech, Inc. Vaccines based on mutant CALR and JAK2 and their uses
IL293012A (en) 2019-11-20 2022-07-01 Bavarian Nordic As Medicinal uses of 4-1bbl modified ankara virus vaccinia ((recombinant mva
US20230190922A1 (en) 2019-11-20 2023-06-22 Bavarian Nordic A/S Recombinant MVA Viruses for Intratumoral and/or Intravenous Administration for Treating Cancer
WO2021150713A2 (en) 2020-01-21 2021-07-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human immunogenic epitopes of h, k, and e human endogenous retroviruses (hervs)
WO2021150694A1 (en) 2020-01-21 2021-07-29 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Human immunogenic epitopes of hemo and hhla2 human endogenous retroviruses (hervs)
AU2021233167A1 (en) 2020-03-12 2022-09-22 Bavarian Nordic A/S Compositions improving poxvirus stability
MX2022015489A (es) 2020-06-10 2023-03-22 Bavarian Nordic As Vacuna de virus vaccinia modificado de ankara (mva) recombinante contra la enfermedad del coronavirus.
WO2021260065A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Mva-based vaccine against covid-19 expressing sars-cov-2 antigens
EP3928789A1 (en) 2020-06-24 2021-12-29 Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) Mva-based vaccine against covid-19 expressing sars-cov-2 antigens
JP2023533528A (ja) 2020-07-08 2023-08-03 ヤンセン・サイエンシズ・アイルランド・アンリミテッド・カンパニー Ｈｂｖに対するｒｎａレプリコンワクチン
US20220118081A1 (en) 2020-10-20 2022-04-21 Janssen Vaccines & Prevention B.V. HIV vaccine regimens
WO2022269003A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas MVA-BASED VACCINE EXPRESSING A PREFUSION-STABILIZED SARS-CoV-2 S PROTEIN
EP4108257A1 (en) 2021-06-23 2022-12-28 Consejo Superior De Investigaciones Científicas Mva-based vaccine against covid-19 expressing a prefusion-stabilized sars-cov-2 s protein
IL311078A (en) 2021-09-03 2024-04-01 Bavarian Nordic As Use of microRNA to downregulate expression of cytotoxic transgenes by modified vicinia ankara virus (mva)
WO2023118508A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Bavarian Nordic A/S Recombinant mva viruses for intraperitoneal administration for treating cancer
WO2023118563A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Bavarian Nordic A/S Therapy for modulating immune response with recombinant mva encoding il-12
WO2023198815A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Sequential administration of adenoviruses
WO2024003238A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Bavarian Nordic A/S Epstein-barr-virus vaccine
WO2024003239A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Bavarian Nordic A/S RECOMBINANT MODIFIED saRNA (VRP) AND VACCINIA VIRUS ANKARA (MVA) PRIME-BOOST REGIMEN
WO2024003346A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Bavarian Nordic A/S Mammalian cell line for the production of modified vaccinia virus ankara (mva)
WO2024015892A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 The Broad Institute, Inc. Hla-ii immunopeptidome methods and systems for antigen discovery
EP4316514A1 (en) 2022-08-03 2024-02-07 Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) Mva-based vectors and their use as vaccine against sars-cov-2
WO2024188801A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Bavarian Nordic A/S Use of quail cell lines for poxvirus production
WO2024188802A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Bavarian Nordic A/S Methods of isolating poxviruses from avian cell cultures
WO2024188803A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Bavarian Nordic A/S Production of poxviruses from quail cell cultures

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4072565A (en) 1974-11-04 1978-02-07 The Dow Chemical Company Production of viruses in tissue culture without use of serum
US3914408A (en) 1973-10-12 1975-10-21 Univ Nebraska Vaccine for neonatal calf diarrhea
DE2714665A1 (de) 1977-04-01 1978-10-05 Mayr Anton Praeparat zur behandlung von herpes zoster und anderen herpes-infektionen, sowie verfahren zu seiner herstellung
US5155020A (en) * 1989-03-08 1992-10-13 Health Research Inc. Recombinant poxvirus host range selection system
US5338683A (en) 1981-12-24 1994-08-16 Health Research Incorporated Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins
GB8322414D0 (en) * 1983-08-19 1983-09-21 Szelke M Renin inhibitors
FR2603040B1 (fr) 1986-08-22 1990-01-26 Transgene Sa Proteine, sequence d'adn, poxvirus, cellules et leur procede de culture, ainsi que les compositions pharmaceutiques les contenant, utiles dans la prevention de la schistosomose
AU613583B2 (en) 1986-08-22 1991-08-08 Transgene S.A. Proteins and the method for preparing them, DNA sequences, antibodies and their application, poxviruses, transformed or infected cells, pharmaceutical compositions which are useful in the prevention of schistosomiasis and application by way of an agent possessing glutathione s-transferase activity
DE3743298A1 (de) 1987-12-19 1989-06-29 Wilkinson Sword Gmbh Rasierapparat und verfahren zur herstellung einer flaeche geringen reibungswiderstands an einem rasierapparat
CA1341245C (en) 1988-01-12 2001-06-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Recombinant vaccinia virus mva
US6248333B1 (en) * 1990-04-04 2001-06-19 Health Research Inc. Isolated nucleic acid sequence of equine herpesvirus type 1 glycoprotein D (EHV-1 gD)
EP0550638A4 (en) 1990-09-25 1993-12-08 Smithkline Beecham Corporation Medium for culture of mammalian cells
KR100242671B1 (ko) * 1991-03-07 2000-03-02 고돈 에릭 유전학적으로 처리한 백신 균주
US5843456A (en) * 1991-03-07 1998-12-01 Virogenetics Corporation Alvac poxvirus-rabies compositions and combination compositions and uses
US5403582A (en) 1993-01-21 1995-04-04 Nippon Zeon Co., Ltd. Vaccine comprising fowlpox virus recombinants expressing the envelope glycoprotein of an avian reticuloendotheliosis retrovirus
US5405772A (en) 1993-06-18 1995-04-11 Amgen Inc. Medium for long-term proliferation and development of cells
US6015686A (en) * 1993-09-15 2000-01-18 Chiron Viagene, Inc. Eukaryotic layered vector initiation systems
US5490794A (en) * 1993-11-05 1996-02-13 Sumitomo Wiring Systems, Ltd. Branch joint box
US6190655B1 (en) 1993-12-03 2001-02-20 Immunex Corporation Methods of using Flt-3 ligand for exogenous gene transfer
DE4405841C1 (de) † 1994-02-23 1995-01-05 Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
CA2188447C (en) * 1994-04-29 2002-10-22 Falko-Gunter Falkner Recombinant poxviruses with foreign polynucleotides in essential regions
JPH10506004A (ja) * 1994-07-27 1998-06-16 ザ カウンシル オブ ザ クィーンズランド インスティテュート オブ メディカル リサーチ ポリエピトープワクチン
US5676950A (en) * 1994-10-28 1997-10-14 University Of Florida Enterically administered recombinant poxvirus vaccines
US5753489A (en) 1994-11-10 1998-05-19 Immuno Ag Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture
US5756341A (en) 1994-11-10 1998-05-26 Immuno Ag Method for controlling the infectivity of viruses
US5566011A (en) * 1994-12-08 1996-10-15 Luncent Technologies Inc. Antiflector black matrix having successively a chromium oxide layer, a molybdenum layer and a second chromium oxide layer
UA68327C2 (en) * 1995-07-04 2004-08-16 Gsf Forschungszentrum Fur Unwe A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals
AP964A (en) 1996-02-21 2001-05-11 Julianna Lisziewicz Methods and compositions for protective and therapeutic genetic immunisation.
WO1998004680A1 (en) 1996-07-26 1998-02-05 University Of Manitoba Serum-free medium for growth of anchorage-dependant mammalian cells
EP0951555A2 (en) 1996-09-24 1999-10-27 Bavarian Nordic Research Institute A/S Recombinant mva virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines
AU5091898A (en) 1996-10-25 1998-05-15 Wistar Institute Of Anatomy And Biology, The Method of vaccinating infants against infections
US6204250B1 (en) 1996-11-22 2001-03-20 The Mount Sinai Medical Center Of The City Of New York Immunization of infants
GB9711957D0 (en) 1997-06-09 1997-08-06 Isis Innovation Methods and reagents for vaccination
GB0023203D0 (en) 2000-09-21 2000-11-01 Isis Innovation Vaccination method
US20030138454A1 (en) 1997-06-09 2003-07-24 Oxxon Pharmaccines, Ltd. Vaccination method
DE19729279A1 (de) † 1997-07-09 1999-01-14 Peter Hildebrandt Urologisches Implantat, insbesondere Gefäßwandstütze für den Urinaltrakt
WO1999007869A1 (en) * 1997-08-05 1999-02-18 University Of Florida Live recombinant vaccine comprising inefficiently or non-replicating virus
US6667176B1 (en) 2000-01-11 2003-12-23 Geron Corporation cDNA libraries reflecting gene expression during growth and differentiation of human pluripotent stem cells
WO2000028016A1 (en) 1998-11-10 2000-05-18 University Of Rochester T cells specific for target antigens and methods and vaccines based thereon
GB2370573A (en) 1998-11-18 2002-07-03 Oxford Biomedica Ltd Poxviral vectors
GB2347932B (en) 1998-11-18 2003-05-07 Oxford Biomedica Ltd Vectors for the delivery of 5T4 antigen
US6173813B1 (en) 1998-12-23 2001-01-16 Otis Elevator Company Electronic control for an elevator braking system
US6497883B1 (en) 1999-06-10 2002-12-24 Merial Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine
CA2401974C (en) * 2000-03-02 2013-07-02 Emory University Dna expression vectors and methods of use
SI1263936T1 (sl) 2000-03-14 2006-06-30 Bavarian Nordic As Spremenjen sev modificiranega virusa vakcinacije Ankara (MVA)
KR100341030B1 (ko) 2000-03-16 2002-06-20 유태욱 캡션 데이터와 음성 데이터의 재생방법 및 이를 이용한 디스플레이장치
CA2409874A1 (en) 2000-05-24 2001-11-29 Merial Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (prrsv) recombinant avipoxvirus vaccine
DE50109630D1 (de) 2000-07-11 2006-06-01 Bayer Healthcare Ag Verwendung von stämmen des parapoxvirus ovis zur herstellung von antiviralen arzneimitteln und arzneimitteln gegen krebs
US6733993B2 (en) * 2000-09-15 2004-05-11 Merck & Co., Inc. Enhanced first generation adenovirus vaccines expressing codon optimized HIV1-gag, pol, nef and modifications
CN101676389A (zh) † 2000-11-23 2010-03-24 巴法里安诺迪克有限公司 改良安卡拉痘苗病毒变体
US7628980B2 (en) * 2000-11-23 2009-12-08 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US7445924B2 (en) * 2000-11-23 2008-11-04 Bavarian Nordic A/S Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method
US7097842B2 (en) * 2000-11-23 2006-08-29 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
UA82466C2 (uk) * 2001-07-18 2008-04-25 Бавариан Нордика А/С Спосіб посилення ампліфікації хордопоксвірусу
EP2345665A3 (en) * 2001-12-04 2012-02-15 Bavarian Nordic A/S Flavivirus NS1 subunit vaccine
CN1289663C (zh) 2001-12-20 2006-12-13 巴法里安诺迪克有限公司 从感染细胞中回收和纯化痘病毒的方法
US7025970B2 (en) 2002-03-15 2006-04-11 Baxter International Inc. Modified poxviruses, including modified smallpox virus vaccine based on recombinant drug-sensitive vaccinia virus, and new selection methods
DE60314823T3 (de) * 2002-04-19 2017-11-16 Bavarian Nordic A/S Modifizierte variante des vaccinia ankara virus als impfstoff für neugeborene
AU2003236646B2 (en) * 2002-05-16 2009-01-15 Bavarian Nordic A/S Recombinant poxvirus expressing homologous genes inserted into the poxviral genome
PL372091A1 (en) * 2002-05-16 2005-07-11 Bavarian Nordic A/S Expression of genes in modified vaccinia virus ankara by using the cowpox ati promoter
DK1434858T4 (en) * 2002-09-05 2019-04-01 Bavarian Nordic As PROCEDURE FOR AMPLIFICATION OF A POXVIRUS UNDER SERUM-FREE CONDITIONS
CN1717488A (zh) * 2002-11-25 2006-01-04 巴法里安诺迪克有限公司 包含至少两个牛痘ati启动子的重组痘病毒
US6976752B2 (en) * 2003-10-28 2005-12-20 Lexmark International, Inc. Ink jet printer with resistance compensation circuit
DE602004027767D1 (de) * 2003-11-24 2010-07-29 Bavarian Nordic As Promotoren zur Expression in modifiziertem Vaccinia Virus Ankara
EP1586330A1 (en) * 2004-04-16 2005-10-19 Georg-August-Universität Göttingen Vaccination against malignant melanoma
WO2006044716A2 (en) * 2004-10-15 2006-04-27 Washington University In St.Louis CELL PERMEABLE NANOCONJUGATES OF SHELL-CROSSLINKED KNEDEL (SCK) AND PEPTIDE NUCLEIC ACIDS ('PNAs') WITH UNIQUELY EXPRESSED OR OVER-EXPRESSED mRNA TARGETING SEQUENCES FOR EARLY DIAGNOSIS AND THERAPY OF CANCER
EP1835031A1 (en) 2006-03-14 2007-09-19 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans
EP2073837B1 (en) * 2006-10-06 2014-06-25 Bavarian Nordic Inc. Recombinant modified vaccinia ankara virus encoding a her-2 antigen in combination with a taxane for use in treating cancer
EP1925318A1 (en) 2006-11-20 2008-05-28 Paul-Ehrlich-Institut Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu
US8268327B2 (en) * 2007-04-27 2012-09-18 Bavarian Nordic A/S Immediate protection against pathogens via MVA
DK2207564T3 (en) * 2007-10-18 2017-01-16 Bavarian Nordic As USE OF VAT FOR TREATMENT OF PROSTATACANCES

Also Published As

Publication number Publication date
SI1335987T2 (sl) 2016-10-28
US20090169579A1 (en) 2009-07-02
WO2002042480A2 (en) 2002-05-30
CN100537773C (zh) 2009-09-09
CN101676389A (zh) 2010-03-24
US20030215466A1 (en) 2003-11-20
US7459270B2 (en) 2008-12-02
JP4421188B2 (ja) 2010-02-24
NO337867B1 (no) 2016-07-04
US7384644B2 (en) 2008-06-10
EE05680B1 (et) 2013-10-15
EP1335987A2 (en) 2003-08-20
PL361459A1 (en) 2004-10-04
DE60116371D1 (de) 2006-02-02
HK1059453A1 (en) 2004-07-02
KR100910297B1 (ko) 2009-08-03
ES2256323T5 (es) 2016-11-21
CN1476483A (zh) 2004-02-18
US20050271688A1 (en) 2005-12-08
CY2013048I1 (el) 2015-12-09
DE60116371T3 (de) 2016-11-17
IL154712A0 (en) 2003-10-31
US20030206926A1 (en) 2003-11-06
NO20032309L (no) 2003-05-21
WO2002042480A3 (en) 2002-08-01
BRPI0115533B8 (pt) 2021-05-25
UA76731C2 (uk) 2006-09-15
CA2421151C (en) 2013-07-02
ATE314483T2 (de) 2006-01-15
BE2013C065I2 (hu) 2021-01-29
US6913752B2 (en) 2005-07-05
DE60116371T2 (de) 2006-09-07
US6761893B2 (en) 2004-07-13
RU2290438C2 (ru) 2006-12-27
FR13C0070I1 (hu) 2014-01-17
US7189536B2 (en) 2007-03-13
KR100830295B1 (ko) 2008-05-16
JP2004514436A (ja) 2004-05-20
SI1335987T1 (sl) 2006-06-30
DE20122302U1 (de) 2005-02-24
CZ20031366A3 (cs) 2003-08-13
BR0115533B1 (pt) 2017-11-14
KR20030081333A (ko) 2003-10-17
MXPA03002513A (es) 2004-09-10
US20030202988A1 (en) 2003-10-30
US20100119545A1 (en) 2010-05-13
CY2013048I2 (el) 2015-12-09
US8268325B2 (en) 2012-09-18
US20080089907A1 (en) 2008-04-17
EP2202315A1 (en) 2010-06-30
EP1598425A1 (en) 2005-11-23
IL154712A (en) 2010-05-31
ES2256323T3 (es) 2006-07-16
CZ295808B6 (cs) 2005-11-16
US7939086B2 (en) 2011-05-10
US20120328650A1 (en) 2012-12-27
US8268329B2 (en) 2012-09-18
US7335364B2 (en) 2008-02-26
US7923017B2 (en) 2011-04-12
FR13C0070I2 (fr) 2019-06-21
US20110182932A1 (en) 2011-07-28
CA2421151A1 (en) 2002-05-30
HUP0400685A3 (en) 2004-10-28
HUS1600010I1 (hu) 2020-01-28
LU92311I2 (fr) 2014-01-20
CY1105594T1 (el) 2010-07-28
EE200300173A (et) 2003-06-16
AU2002231639B2 (en) 2007-01-04
EP1335987B1 (en) 2005-12-28
DK1335987T4 (en) 2016-09-19
EP2204452A1 (en) 2010-07-07
PL212047B1 (pl) 2012-08-31
KR20090057335A (ko) 2009-06-04
BR0115533A (pt) 2004-02-03
NO20032309D0 (no) 2003-05-21
DK1335987T3 (da) 2006-04-24
KR20080032016A (ko) 2008-04-11
US20110182933A1 (en) 2011-07-28
EP1335987B2 (en) 2016-06-15
HUP0400685A2 (hu) 2004-07-28
AU3163902A (en) 2002-06-03
US20060280758A1 (en) 2006-12-14
PT1335987E (pt) 2006-05-31
NZ524661A (en) 2005-03-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230198B1 (hu) Módosított Vacciniavírus Ankara-variáns
US7767209B2 (en) Modified vaccinia virus Ankara (MVA) mutant and use thereof
US8470598B2 (en) Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method
EP2488649B1 (en) Recombinant modified vaccinia ankara (mva) vaccinia virus containing restructured insertion sites
US20110177114A1 (en) Immediate protection against pathogens via mva

Legal Events

Date Code Title Description
AA1S Information on application for a supplementary protection certificate

Free format text: PRODUCT NAME: LIVE MODIFIED VACCINIA VIRUS ANKARA; REGISTRATION NO/DATE: EU/1/13/855 20130805

Spc suppl protection certif: S1600010

Filing date: 20160229

Expiry date: 20211122

FG4S Grant of supplementary protection certificate

Spc suppl protection certif: S1600010

Filing date: 20160229

Expiry date: 20211122

Extension date: 20261122