CN1662558A - 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用 - Google Patents

人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1662558A
CN1662558A CN038150433A CN03815043A CN1662558A CN 1662558 A CN1662558 A CN 1662558A CN 038150433 A CN038150433 A CN 038150433A CN 03815043 A CN03815043 A CN 03815043A CN 1662558 A CN1662558 A CN 1662558A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody molecule
cdr
seq
sequence
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN038150433A
Other languages
English (en)
Other versions
CN100384878C (zh
Inventor
A·G·波普勒维尔
S·P·蒂克尔
H·M·拉迪曼
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
UCB Biopharma SRL
Original Assignee
CELLETECH CHIROSCIENCE Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9935990&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN1662558(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by CELLETECH CHIROSCIENCE Ltd filed Critical CELLETECH CHIROSCIENCE Ltd
Priority to CN201310021287.1A priority Critical patent/CN103172742B/zh
Publication of CN1662558A publication Critical patent/CN1662558A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN100384878C publication Critical patent/CN100384878C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
    • C07K16/464—Igs containing CDR-residues from one specie grafted between FR-residues from another
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
    • G01N33/567—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds utilising isolate of tissue or organ as binding agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明公开了含有至少一个CDR的抗体分子，所述CDR源自对人CD22具有特异性的小鼠单克隆抗体。本发明也公开了一种其中所述CDR中至少一个为修饰CDR的CDR移植抗体。本发明还公开了编码所述抗体分子的链的DNA序列、载体、转化宿主细胞以及所述抗体分子在治疗由表达CD22的细胞介导的疾病中的用途。

Description

人CD22特异性抗体及其治疗和诊断应用
本发明涉及一种对B淋巴细胞抗原(CD22)的抗原决定簇具有特异性的抗体分子。本发明也涉及所述抗体分子的治疗用途和制备所述抗体分子的方法。
在天然抗体分子中，有两条重链和两条轻链。每条重链和每条轻链在其N-末端有一个可变区。每个可变区由4个构架区(FR)和交互的3个互补性决定区(CDR)组成。通常可变区的残基按照Kabat等发明的系统编号。该系统是美国健康与人类服务部NIH USA的Kabat等于1987年在“Sequence of Proteins of Immunological Interest”中提出(在下文简称为“Kabat等(参见上文)”)。除非另有说明，否则在本说明书中使用该编号系统。
Kabat残基命名经常与氨基酸残基的线性编号不一致。无论是构架区还是CDR，实际的线性氨基酸序列可能比严格的Kabat编号含有较少或额外的氨基酸，这些较少或额外的氨基酸对应于基本可变区结构中截短的或插入的结构组分。对于给定的抗体，通过与具有“标准”Kabat编号序列的抗体序列中的同源残基比对，可确定残基的正确Kabat编号。
根据Kabat编号，重链可变区的CDR位于残基31-35(CDR-H1)、残基50-65(CDR-H2)和残基95-102(CDR-H3)中。
根据Kabat编号，轻链可变区的CDR位于残基24-34(CDR-L1)、残基50-56(CDR-L2)和残基89-97(CDR-L3)中。
欧洲专利申请EP-A-0239400描述了CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)的构建，该申请公开了一种其中使用长的寡核苷酸通过定点诱变将小鼠单克隆抗体的CDR移植到人免疫球蛋白可变区的构架区的方法。CDR决定抗体的抗原结合特异性并且是可变区的构架区上携带的相对短的肽序列。
最早有关通过CDR移植的人源化(humanising)单克隆抗体的工作，是在识别合成抗原例如NP的单克隆抗体上进行。然而，Verhoeyen等(Science， 239，1534-1536，1988)和Riechmann等(Nature， 332，323-324，1988)分别描述了其中通过CDR移植使识别溶菌酶的小鼠单克隆抗体和识别人T细胞上的抗原的大鼠单克隆抗体人源化的实例。
Riechmann等发现在CDR移植物中，单独CDR的转移(如Kabat等定义(Kabat等(参见上文)和Wu等，J.Exp.Med.， 132，211-250，1970)不足以提供令人满意的抗原结合活性。已发现许多构架残基必须改变以便使它们与供体构架区的那些残基相对应。国际专利申请号WO90/07861描述了用于选择需要改变的构架残基的建议标准。
已公开了许多讨论CDR移植抗体的综述，包括Vaughan等(NatureBiotechnology， 16，535-539，1998)。
恶性淋巴瘤是一类变化较多的肿瘤。大多数情况发生在老年人中。目前在美国有200,000位至250,000位患者患有非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkins Lymphoma)(NHL)。在美国该病是增长第二快的癌症，以每年新增约55,000例的速度增加。该病的发生率增长已不能简单地通过老龄人口增长和暴露在已知危险因素中来解释。
淋巴瘤的分类比较复杂，近十年已有进展。在1994年采用了修订的欧洲-美国淋巴瘤(REAL)分类法。该分类法将B细胞淋巴瘤(最常认定的)、T细胞淋巴瘤和不能分类的原发性淋巴瘤归入公认的亚型。在平常的实践中，依据它们的一般组织学外观而将NHL分为低度、中度和高度的分类法充分反映了它们的临床特征。
NHL主要影响淋巴结，但在个别患者中，肿瘤可累及其它解剖学部位，例如肝、脾、骨髓、肺、肠和皮肤。该疾病通常表现为无痛的淋巴结肿大。结外淋巴瘤(extranodal lymphoma)最常见影响肠，尽管实际上每种器官的原发性淋巴瘤已有记载。全身症状包括发热、盗汗、乏力和体重减轻。
直到最近，完全根据疾病解剖学范围的Anm Arbor分类系统成为NHL治疗的主要决定因素。通过结合另外的预后指征，包括年龄、血清乳酸脱氢酶水平和表现情况，可提炼这些信息。即便如此，Ann.Arbor分类系统的知识与肿瘤的组织学和免疫学亚型一起仍然是治疗的主要决定因素。
低度NHL具有无痛的病程，患者平均存活8-10年。目前可采用的治疗对存活几乎没有影响，尽管局部疾病的放疗和全身症状的化疗改善了患者的生活质量。组合化疗可预备用于复发的疾病。中度疾病和尤其高度疾病非常具有攻击性并易于扩散。该级别的疾病需要紧急治疗。在患有非常严重疾病的患者中，放射治疗可为治疗的有效组成。已采用许多不同的化疗方案，并且可在超过一半的患者中获得长期无病的幸存者。对于患有复发性或顽固性疾病的患者，最初采用干细胞支持的大剂量治疗，但是现在在一线治疗中逐渐发现一个空间用于患有低危险性疾病的患者。在近年，采用渐趋攻击性治疗方法的趋势，必须平衡许多NHL患者中一般老年患者和相对体弱的患者，并且需要使治疗毒性与每位患者疾病的个体预后相配。
需要更有效并且更易耐受的改进的治疗。最新采用的药物包括逐渐加至组合中的新细胞毒性药物，并采用基于抗体的治疗。
非霍奇金淋巴瘤包括各种各样的B细胞淋巴瘤。因此，B细胞抗原是抗体治疗的合适靶。
CD22为135kDa膜糖蛋白，并且属于称为唾液酸粘附素的唾液酸结合蛋白家族。其在B细胞发育早期的细胞质中检测到，与IgD同时出现在细胞表面，并且存在于大多数成熟B细胞上。表达随B细胞活化而增加。CD22随终末分化而丧失，一般报道在浆细胞上并不存在。因此，该内化抗原存在于前B细胞和成熟B细胞的表面，而在干细胞或浆细胞上不存在。
在人类中存在两种CD22同种型。其主要形式(CD22β)在胞外区含有7个免疫球蛋白样(Ig样)结构域。CD22α变异体缺乏Ig样结构域4并可具有截短的胞质结构域。已表明阻断CD22粘着至单核细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞和红细胞上的抗体在第1或第2Ig样结构域内结合。
一旦连接B细胞抗原受体并与Lyk、Syk和磷脂酰肌醇3-激酶缔合，CD22的胞质结构域则酪氨酸被磷酸化。CD22的功能是负调节B细胞活化的阈值。它通过与带有适当唾液酸糖缀合物(sialoglycoconjugates)的细胞相互作用也可介导细胞粘着。
CD22在包括NHL、急性成淋巴细胞性白血病(B-ALL)、慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)和尤其是急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)在内的大多数B细胞白血病和淋巴瘤中表达。
现有技术已描述了抗CD22的单克隆抗体。WO 98/41641描述了在VH44和VL100上具有半胱氨酸残基的重组抗CD22抗体。WO96/04925描述了抗CD22抗体LL2的VH区和VL区。US 5686072描述了抗CD22和抗CD19免疫毒素的组合。WO 98/42378描述了裸抗CD22抗体在治疗B细胞恶性肿瘤中的用途。
最近，许多基于抗体的疗法或者被许可，例如Rituxan(一种未标记的CD20特异性嵌合人γ1(+mγ1V区))，或者对该疾病正在进行临床试验。对临床医师和患者来说，这些依赖或者补体介导或者ADCC介导的B细胞的杀伤或放射性核素(例如131I或90Y)的使用，已涉及到制备和使用的难题。需要治疗NHL并且能反复使用并可容易而有效制备的抗体分子。也需要对CD22有高亲和力而对人体有低免疫原性的抗体分子。
发明概述
第一方面，本发明提供一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含其中可变区包含CDR(如Kabat等定义(参见上文))的重链，所述CDR具有如下给出的序列：对于CDR-H1在图1中的H1(SEQ ID NO：1)；对于CDR-H2在图1中的H2(SEQ ID NO：2)，或已去除潜在糖基化位点的H2，或其中位置60(根据Kabat编号系统)的赖氨酸残基已被其它氨基酸取代的H2，或其中已去除糖基化位点和位置60的活性赖氨酸的H2；或对于CDR-H3在图1中的H3(SEQ IDNO：3)。
本发明第一方面的抗体分子包含至少一个选自重链可变区的H1、H2和H3(SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3)的CDR。优选所述抗体分子在重链可变区包含至少两个且更优选所有这三个CDR。
本发明的第二方面，提供一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含其中可变区包含CDR(如Kabat等定义(参见上文))的轻链，所述CDR具有如下给出的序列：对于CDR-L1在图1中的L1(SEQ ID NO：4)、对于CDR-L2在图1中的L2(SEQ ID NO：5)或对于CDR-L3在图1中的L3(SEQ ID NO：6)。
本发明第二方面的抗体分子包含至少一个选自轻链可变区的L1、L2和L3(SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)的CDR。优选所述抗体分子在轻链可变区包含至少两个且更优选所有这三个CDR。
优选本发明的第一和第二方面的抗体分子分别具有互补轻链或互补重链。
优选本发明的第一或第二方面的抗体分子包含其中可变区包含CDR(如Kabat等定义(参见上文))的重链，所述CDR具有如下给出的序列：对于CDR-H1在图1中的H1(SEQ ID NO：1)，对于CDR-H2在图1中的H2(SEQ ID NO：2)、或已去除潜在糖基化位点的H2、或其中位置60(根据Kabat编号系统)的赖氨酸残基已被其它氨基酸取代的H2、或其中已去除糖基化位点和位置60的活性赖氨酸的H2，或对于CDR-H3在图1中的H3(SEQ ID NO：3)；和其中可变区包含CDR(如Kabat等定义(参见上文))的轻链，所述CDR具有如下给出的序列：对于CDR-L1在图1中的L1(SEQ ID NO：4)、对于CDR-L2在图1中的L2(SEQ ID NO：5)或对于CDR-L3在图1中的L3(SEQ ID NO：6)。
上述SEQ ID NO：1-6和图1中给出的CDR源自小鼠单克隆抗体5/44。
小鼠5/44抗体可变区的全序列示于图2(轻链)(SEQ ID NO：7)和图3(重链)(SEQ ID NO：8)。该小鼠抗体在下面也被称为“供体抗体”或“鼠单克隆抗体”。
本发明的第一或第二方面的第一个可供选择的优选实施方案为具有分别如图2(SEQ ID NO：7)和图3(SEQ ID NO：8)所示的轻链可变区序列和重链可变区序列的小鼠单克隆抗体5/44。5/44的轻链恒定区为κ，而重链恒定区为IgG1。
在第二个可供选择的优选实施方案中，根据本发明第一和第二方面中任一方面的抗体为嵌合小鼠/人抗体分子，在本文称为嵌合5/44抗体分子。该嵌合抗体分子包含小鼠单克隆抗体5/44的可变区(SEQ IDNO：7和8)和人恒定区。优选嵌合5/44抗体分子在轻链中包含人Cκ结构域(Hieter等，Cell， 22，197-207，1980；Genebank登记号J00241)并且在重链中包含人γ4结构域(Flanagan等，Nature， 300，709-713，1982)，任选位置241的丝氨酸残基被脯氨酸残基取代。
优选本发明的抗体包含其中可变区包含作为CDR-H2(如Kabat等定义(参见上文))的H2’的重链，其中已去除潜在的糖基化位点序列并且意想不到地提高了嵌合5/44抗体对CD22抗原的亲和力，并且优选其作为CDR-H2具有如H2’(SEQ ID NO：13)给出的序列。
另外，本发明的抗体可包含其中可变区包含作为CDR-H2(如Kabat等定义(参见上文))的H2”的重链，其中位置60的赖氨酸残基被导致保守取代的其它氨基酸取代，所述赖氨酸残基在CDR-H2中处于暴露的位置并被认为有可能与缀合剂(conjugation agents)反应导致抗原的结合亲和力降低。优选CDR-H2具有如H2”(SEQ ID NO：15)给出的序列。
另外，本发明的抗体可包含其中可变区包含作为CDR-H2(如Kabat等定义(参见上文))的H2的重链，其中潜在的糖基化位点序列和位置60的赖氨酸残基被其它氨基酸所取代。优选CDR-H2具有如H2(SEQ ID NO：16)给出的序列。
在第三个可供选择的优选实施方案中，根据本发明第一和第二方面的任一方面的抗体为CDR移植抗体分子。本文所用的术语“CDR移植抗体分子”是指其中重链和/或轻链含有一个或多个CDR(如果需要，可包括修饰CDR)的抗体分子，CDR来自移植到受体抗体(例如人抗体)的重链和/或轻链可变区构架的供体抗体(例如鼠单克隆抗体)。
优选该类CDR移植抗体具有包含人受体构架区以及一个或多个上述供体CDR的可变区。
当移植CDR时，可以使用任何合适的与CDR所来源的供体抗体类别/类型有关的受体可变区构架序列，包括鼠构架区、灵长类构架区和人构架区。可用于本发明的人构架的实例有KOL、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY和POM(Kabat等(参见上文))。例如KOL和NEWM可用于重链，REI可用于轻链，EU、LAY和POM既可用于重链也可用于轻链。或者，可以使用人种系序列。优选的轻链的构架区为如图5(SEQ ID NO：17)所示的人种系亚型序列(DPK9+JK1)。优选的重链的构架区为如图6(SEQ ID NO：21)所示的人亚型序列(DP7+JH4)。
在本发明的CDR移植抗体中，优选作为受体供体使用具有与供体抗体的链同源的链的抗体。受体重链和轻链不必源自同一抗体，并且如果需要可包含具有源自不同链的构架区的混合链。
另外，在本发明的CDR移植抗体中，构架区不必具有与受体抗体的那些序列完全相同的序列。例如，罕见残基可变为更经常出现的该受体链类别或类型的残基。或者，可改变在受体构架区所选的残基以便它们对应于在供体抗体的相同位置存在的残基或对应于在供体抗体的相同位置存在的残基的保守取代的残基。应最小限度的保持这些使供体抗体的亲和力恢复必需的改变。在WO 91/09967中提出可能需要改变在受体构架区选择残基的方案。
优选在本发明的CDR移植抗体分子中，如果受体轻链具有人亚型DPK9+JK1序列(如图2所示)(SEQ ID NO：17)，那么轻链的受体构架区在位置2、4、37、38、45和60包含供体残基并可另外在位置3包含供体残基(根据Kabat等(参见上文))。
优选在本发明的CDR移植抗体分子中，如果受体重链具有人DP7+JK4序列(如图3所示)(SEQ ID NO：21)，那么重链的受体构架区在位置1、28、48、71和93包含除一个或多个供体CDR外的供体残基，并可另外在位置67和69包含供体残基(根据Kabat等(参见上文))。
供体残基是来自供体抗体的残基，即CDR最初来源的抗体。
优选本发明的抗体包含其中可变区包含作为CDR-H2(如Kabat等定义(参见上文))的H2’的重链，其中为提高嵌合5/44抗体对CD22抗原的亲和力而去除潜在的糖基化位点序列，并优选其作为CDR-H2具有如H2’(SEQ ID NO：13)给出的序列。
另外，本发明的抗体可包含其中可变区包含作为CDR-H2(如Kabat等定义，(参见上文))的H2”的重链，其中位置60的赖氨酸残基被其它氨基酸所取代，所述赖氨酸残基位于CDR-H2内暴露的位置并认为其有可能与缀合剂反应，从而导致抗原结合亲和力下降。优选CDR-H2具有如H2”(SEQ ID NO：15)给出的序列。
另外，本发明的抗体可包含其中可变区包含作为CDR-H2(如Kabat等定义，(参见上文))的H2的重链，其中潜在的糖基化位点序列和位置60的赖氨酸残基被其它氨基酸所取代。优选CDR-H2具有如H2(SEQ ID NO：16)给出的序列。
本发明的抗体分子可包含：具有全长重链和轻链的完全抗体分子；其片段，例如Fab、修饰的Fab、Fab’、F(ab’)2或Fv片段；轻链或重链单体或二聚体；单链抗体，例如其中重链可变区和轻链可变区通过肽接头连接的单链Fv。同样，重链可变区和轻链可变区可与其它抗体结构域适当组合。
本发明的抗体分子可具有连接其上的效应分子或报道分子。例如，用于螯合其可具有通过共价桥连结构连接其上的重金属原子或毒素(例如蓖麻毒蛋白)的大环。或者，可采用重组DNA技术方法，制备其中完全免疫球蛋白分子的Fc片段(CH2区、CH3区和铰链区)、CH2区和CH3区或CH3区已被功能性非免疫球蛋白(例如酶或毒素分子)置换或者通过肽键与其连接的抗体分子。
本发明抗体分子的结合亲和力优选至少0.85×10-10M、更优选至少0.75×10-10M、最优选至少0.5×10-10M。
优选本发明的抗体分子包含轻链可变区5/44-gL1(SEQ ID NO：19)和重链可变区5/44-gH7(SEQ ID NO：27)。这些轻链可变区序列和重链可变区序列分别示于图5和图6。
本发明也涉及对CD22具有改进的亲和力的本发明抗体分子的变异体。这些变异体可通过包括以下的许多亲和力成熟方案获得：CDR突变(Yang等，J.Mol.Biol.， 254，392-403，1995)、链改组(Marks等，Bio/Technology， 10，779-783，1992)、大肠杆菌(E.coli)增变株的应用(Low等，J.Mol.Biol.， 250，359-368，1996)、DNA改组(Patten等，Curr.Opin.Biotechnol， 8，724-733，1997)、噬菌体展示(Thompson等，J.Mol.Biol.， 256，77-88，1996)和性PCR(Crameri等，Nature， 391，288-291，1998)。Vaughan等(参见上文)讨论了这些亲和力成熟的方法。
本发明也提供编码本发明抗体分子的重链和/或轻链的DNA序列。
优选所述DNA序列编码本发明抗体分子的重链或轻链。
本发明的DNA序列也可包含合成DNA(例如通过化学方法制备的合成DNA)、cDNA、基因组DNA或它们的任何组合。
本发明也涉及包含一个或多个本发明DNA序列的克隆载体或表达载体。优选所述克隆载体或表达载体包含两种分别编码本发明抗体分子的轻链和重链的DNA序列。
可以构建载体的常规方法、转染方法和培养方法是本领域技术人员熟知的。在这一方面，可以参考“Current Protocol in MolecularBiology”，1999，F.M.Ausubel(编著)，Wiley Interscience，纽约以及ColdSpring Harbor Publishing出版的Maniatis Manual。
通过本领域技术人员熟知的方法，可获得编码本发明抗体分子的DNA序列。例如，根据确定的DNA序列或根据相应的氨基酸序列，可按需要合成编码部分或全部抗体重链和轻链的DNA序列。
编码受体构架序列的DNA是本领域技术人员十分容易获得的并可根据它们的已知氨基酸序列容易地合成。
可以用标准分子生物学技术来制备编码本发明抗体分子的DNA序列。采用寡核苷酸合成技术，可以完全或部分合成所需要的DNA序列。适当时，也可以使用定点诱变和聚合酶链式反应(PCR)技术。
可以使用任何合适的宿主细胞/载体系统来表达编码本发明抗体分子的DNA序列。细菌(例如大肠杆菌)和其它微生物系统可部分用来表达Fab和F(ab’)2片段、尤其是Fv片段和单链抗体片段(例如单链Fv)等抗体片段。真核宿主细胞(例如哺乳动物宿主细胞)表达系统可用于制备包括完全抗体分子在内的较大抗体分子。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO细胞、骨髓瘤细胞或杂交瘤细胞。
本发明也提供一种制备本发明抗体分子的方法，所述方法包括：在适合导致由编码本发明抗体分子的DNA表达蛋白质的条件下，培养含有本发明载体的宿主细胞，然后分离所述抗体分子。
所述抗体分子可以仅包含重链多肽或轻链多肽，在这种情况下，只需用重链多肽或轻链多肽编码序列转染宿主细胞。为制备既包含重链又包含轻链的产物，可以用两种载体转染细胞系，第一种载体编码轻链多肽，而第二种载体编码重链多肽。或者，可以使用一种载体，该载体包括编码轻链多肽和重链多肽的序列。
本发明也提供一种治疗或诊断组合物，所述组合物包含本发明的抗体分子以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
本发明也提供一种制备治疗或诊断组合物的方法，所述方法包括将本发明的抗体分子与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体混合在一起。
在所述治疗或诊断组合物中，所述抗体分子可以是唯一的活性成分，或者可以同时包含其它活性成分，包括其它抗体成分(例如抗T细胞、抗IFNγ或抗LPS抗体)或者非抗体成分(例如黄嘌呤)。
优选所述药用组合物包含治疗有效量的本发明的抗体。本文所用的术语“治疗有效量”是指治疗、改善或预防目标疾病或病症或者表现出可检测的治疗或预防效果需要的治疗药物的量。就任何抗体而言，开始在细胞培养测定或在动物模型(通常用啮齿动物、兔、狗、猪或灵长类动物)阶段可估算出治疗有效剂量。也可以使用动物模型确定合适的浓度范围和给药途径。然后可利用这些资料确定用于人的有效剂量和给药途径。
用于人患者的准确的有效量将取决于疾病状态的严重程度、患者的一般健康情况、年龄、体重和性别、饮食、给药时间和频率、联合用药、反应灵敏度和耐受性/对治疗的反应。该有效量可通过常规实验方法确定并且在临床医师的判断范围之内。一般而言，有效剂量为0.01mg/kg至50mg/kg，优选0.1mg/kg至20mg/kg，更优选约15mg/kg。
组合物可单独给予患者或与其它药剂、药物或激素联合给药。
本发明的抗体分子给予的剂量取决于待治疗病症的性质、恶性淋巴瘤或白血病的分级以及抗体分子是用于预防还是用于治疗现有的病症。
给药频率将取决于抗体分子的半寿期及其作用持续时间。如果抗体分子的半寿期短(例如2-10小时)，则可能需要每天给予1个或多个剂量。另一方面，如果抗体分子的半寿期长(例如2-15天)，则可能只需要每天、每周、甚至每1或2个月给予1个剂量。
药用组合物也可含有用于抗体给药的药学上可接受的载体。所述载体自身不应该诱导对接受组合物的个体有害的抗体产生并且不应该有毒。合适的载体可以为大的代谢慢的大分子，例如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和失活的病毒颗粒。
可以使用药学上可接受的盐，例如无机酸盐(如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐)或有机酸盐(如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯甲酸盐)。
治疗组合物中的药学上可接受的载体可另外含水、盐水、甘油和乙醇等液体。另外，在这些组合物中可以含有润湿剂、乳化剂或pH缓冲物质等辅料。这些载体能使药用组合物配制成供患者摄取的片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、液体制剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂和混悬剂。
优选的给药形式包括例如经注射或输注等适合肠胃外给药的形式，例如经快速浓注或连续输注。其中当产品用于注射或输注时，可采用混悬剂、溶液剂或在油性或水性介质中的乳剂形式并且可含配方剂，例如悬浮剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。或者，抗体分子可为临用前用合适的无菌液体重建的干品形式。
一旦配成，本发明的组合物可直接给予患者。待治疗的患者可以为动物。然而，优选组合物适合给予人患者。
可经以下的任何途径给予本发明的药用组合物，包括但不限于口、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、透皮、经皮(例如参见WO98/20734)、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、阴道内或直肠途径。也可以使用Hypospray给予本发明的药用组合物。这些治疗组合物一般可配制成为液体溶液剂或混悬剂的可注射形式。适用于液体溶媒中的溶液剂或混悬剂的固体形式，也可在注射前配制。
组合物的直接给药一般通过注射、皮下、腹膜内、静脉内或肌内、或给予组织细胞间隙来实现。也可将组合物给至损伤部位。给药治疗可为单剂量方案或多剂量方案。
可理解为所述组合物中的活性成分为抗体分子。这样，它在胃肠道内容易降解。因此，如果组合物通过采用胃肠道的途径给药，该组合物将需要含有保护抗体免受降解的试剂，但是一旦被胃肠道吸收，它会释放抗体。
在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company，NJ，1991)中详细讨论了药学上可接受的载体。
也设想可通过采用基因治疗来给予本发明的抗体。为实现这一点，将编码所述抗体分子的重链和轻链且处于合适的DNA组分控制之下的DNA序列引入患者体内，以便抗体链由所述DNA序列表达并且在原位装配。
本发明也提供用于治疗由表达CD22的细胞介导的疾病的本发明抗体分子。
本发明还提供本发明抗体分子在制备用于治疗由表达CD22的细胞介导的疾病的药物中的用途。
本发明的抗体分子可用于其中需要降低表达存在于人或动物体内的CD22的细胞水平的任何疗法。这些表达CD22的细胞可在体内循环或以不需要的高水平集中位于体内特殊部位。例如，在B细胞淋巴瘤和白血病中，表达CD22的细胞水平升高。本发明的抗体分子可用于治疗由表达CD22的细胞介导的疾病。
优选本发明的抗体分子用于恶性淋巴瘤和白血病、最优选用于治疗NHL。
本发明也提供一种治疗患有表达CD22的细胞介导的疾病或处于这些疾病危险之中的人或动物患者的方法，所述方法包括将有效量的本发明的抗体分子给予所述患者。
本发明的抗体分子也可用于诊断，例如用于涉及表达CD22的细胞的疾病状态的体内诊断和成象。
仅通过以下实施例并参考以下的附图说明进一步描述本发明，其中：
图1表示小鼠单克隆抗体5/44的CDR的氨基酸序列(SEQ ID NO：1-6)；
图2表示小鼠单克隆抗体5/44轻链可变区的全序列；
图3表示小鼠单克隆抗体5/44重链可变区的全序列；
图4表示CDR-H2中的糖基化位点和活性赖氨酸的去除策略；
图5表示5/44轻链序列的移植设计；
图6表示5/44重链序列的移植设计；
图7表示载体pMRR14和pMRR10.1；
图8表示嵌合5/44突变体的Biacore测定结果；
图9表示用于5/44 gH1和gL1基因装配的寡核苷酸；
图10表示中间载体pCR2.1(544gH1)和pCR2.1(544gL1)；
图11表示用于制备其它移植物的寡核苷酸盒；
图12表示荧光标记的小鼠5/44抗体和移植变异体之间的竞争测定；和
图13表示移植重链和移植轻链的全部DNA序列和蛋白质序列。
发明详述 
实施例1：各代候选抗体
一系列的抗CD22抗体是采用以下的选择标准从杂交瘤中选出的：与Daudi细胞结合，在Daudi细胞上内化，与外周血单核细胞(PBMC)结合，在PBMC上内化，亲和力(大于10-9M)，小鼠γ1和产率。5/44是作为优选的抗体而被选出的。
实施例2：嵌合5/44抗体分子的基因克隆和表达
5/44杂交瘤细胞的制备及其RNA制备
杂交瘤5/44是用人CD22蛋白免疫小鼠后通过常规杂交瘤技术产生的。RNA是采用RNEasy试剂盒(Qiagen，Crawley，UK；目录号74106)从5/44杂交瘤细胞制备的。如下所述，将所获得的RNA逆转录成cDNA。
CD22在NHL肿瘤上的分布
使用5/44抗CD22单克隆抗体进行免疫组织化学研究，来检查染色的发生率和分布。在该项研究中包括对照抗CD20抗体和抗CD79a抗体，以确定肿瘤的B细胞区。
共研究了50个肿瘤，并且采用Working Formulation和REAL分类系统将这些肿瘤如下分类：
·7个B成淋巴细胞性白血病/淋巴瘤(高/I)
·4个B-CLL/小淋巴细胞性淋巴瘤(低/A)
·3个淋巴浆细胞样瘤(lymphoplasmacytoid)/免疫细胞瘤(低/A)
·1个外套细胞淋巴瘤(中/F)
·14个滤泡性中心细胞淋巴瘤(低至中/D)
·13个弥散性大细胞淋巴瘤(中至高/G，H)
·6个不能分类的淋巴瘤(K)
·2个T细胞淋巴瘤
用0.1μg/ml的5/44抗体，有40个B细胞淋巴瘤对CD22抗原呈阳性，并且当将浓度提高至0.5μg/ml时，又有6个呈阳性。对于剩下的2个B细胞瘤来说，在0.1μg/ml时呈阴性，剩余的组织不足以用较高浓度测试。然而，用另一种Celltech抗CD22抗体6/13进行的平行试验给出比5/44更强的染色，结果所有48个B细胞淋巴瘤对CD22的染色呈阳性。
因此，可以推断CD22抗原在B细胞淋巴瘤上广泛表达并因此为NHL的免疫疗法提供了一个合适的靶。
5/44 VH和VL的PCR克隆
使用逆转录酶合成编码5/44重链可变区和轻链可变区的cDNA序列，产生存在于总RNA中的mRNA的单链cDNA拷贝。然后采用特定的寡核苷酸引物，通过聚合酶链式反应(PCR)，使用cDNA为模板用于扩增鼠V区序列。
a)cDNA合成
在含有以下试剂的20μl反应体积中合成cDNA：50mM Tris-HCl(pH8.3)、75mM KCl、10mM二硫苏糖醇、3mM MgCl2、脱氧核糖核苷三磷酸各0.5mM、20单位RNAsin、75ng随机六核苷酸引物、2μg 5/44RNA和200单位莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶。42℃保温60分钟后，通过95℃加热5分钟终止该反应。
b)PCR
使用对重链和轻链具有特异性的引物组合，将cDNA的等分样品进行PCR。将设计成与信号肽的保守序列一起退火的简并引物库用作正向引物。所有这些序列都依次含有一个自其5’端7个核苷酸开始的限制位点(VL SfuI；VH HindIII)、使所获得的mRNA最佳翻译的序列GCCGCCACC(SEQ ID NO：50)、一个起始密码子和基于已知小鼠抗体的前导肽序列的20-30个核苷酸(Kabat等，Sequence of proteins ofimmunological interest，第5版，1991，U.S.Department of Health andHuman Services，Public Health Service，National Institutes of Health(美国健康与人类服务部，公共健康服务，国家健康协会))。
将3’引物设计成跨越该抗体的构架4 J-C接点并含有酶BsiWI的限制位点，以使VL PCR片段的克隆容易进行。重链3’引物为设计成跨越该抗体J-C接点的混合物。该3’引物包括ApaI限制位点，以使克隆容易进行。该引物的3’区含有基于在已知的小鼠抗体中发现的那些序列的混合序列(Kabat等，1991，参见上文)
上述引物组合能使VH和VL的PCR产物直接克隆到合适的表达载体中(参见下文)，从而制备嵌合(小鼠-人)重链和轻链，并用于这些在哺乳动物细胞中表达的基因制备所需同种型的嵌合抗体。
按以下方法进行用于PCR的保温(100μl)：每份反应物含有10mMTris-HCl(pH8.3)、1.5mM MgCl2、50mM KCl、0.01％w/v明胶、脱氧核糖核苷三磷酸各0.25mM、10pmole 5’引物混合物、10pmole 3’引物、1μl cDNA和1单位Taq聚合酶。将反应物在95℃保温5分钟然后经过以下循环：94℃1分钟、55℃1分钟和72℃1分钟。30个循环后，通过琼脂糖凝胶电泳分析每份反应物的等分样品。
对于重链V区来讲，扩增的DNA产物只有当在构架I的起始位点内退火的引物库取代信号肽引物库时才能获得。将片段克隆到DNA测序载体中。测定DNA序列并翻译以给出推导出的氨基酸序列。该推导出的序列可通过参照通过实验确定的N端蛋白质序列来证实。图2和图3分别表示小鼠单克隆抗体5/44的成熟轻链V区和重链V区的DNA/蛋白质序列。
c)PCR片段的分子克隆
然后将鼠V区序列克隆到表达载体pMRR10.1和pMRR14(图7)中。这些是用于分别含有编码人κ轻链和人γ-4重链恒定区的DNA的轻链和重链表达的载体。使用SfuI和BsiWI限制位点，通过限制性消化并与测序载体连接，将所述VL区亚克隆到表达载体中，产生质粒pMRR10(544cL)。使用5’引物通过PCR扩增重链DNA引入信号肽，由于这在所述克隆策略—使用来自不同的近交(in-house)杂交瘤(称为162)的小鼠重链抗体前导序列并没有获得。该5’引物具有以下的序列                                           ：5’GCGCGCAAGCTTGCCGCCACCATGGACTTCGGATTCTCTCTCGTGTTCCTGGCACTCATTCTCAAGGGAGTGCAGTGTGAGGTGCAGCTCGTCGAGTCTGG3’(SEQ ID NO：51)。
反向引物与用于最初的VH基因克隆的引物相同。将所得PCR产物用酶HindIII和ApaI消化，然后将其亚克隆，并确证其DNA序列，产生质粒pMRR14(544cH)。将这两种表达载体瞬时共转染到CHO细胞中，产生嵌合c5/44抗体。按照生产商的方案(In Vitrogen：LifeTechnology，Groningen，The Netherlands.目录号11668-027)，使用Lipofectamine试剂，完成这一步。
糖基化位点和活性赖氨酸的去除
在CDR-H2中观察到一个潜在的N-联糖基化位点序列，该序列具有氨基酸序列N-Y-T(图3)。对5/44及其片段(包括Fab)进行的SDS-PAGE、蛋白质印迹法和凝胶糖染色法表明该位点的确糖基化(未显示)。另外，在CDR-H2内暴露的位置观察到赖氨酸残基，其通过提供与可以缀合抗体的试剂缀合的额外位点，有可能降低所述抗体的结合亲和力。
一个PCR策略是用于在CDR-H2序列中引入氨基酸取代，以去除糖基化位点和/或活性赖氨酸，如图4所示。使用编码突变N55Q、T57A或T57V的正向引物来去除所述糖基化位点(图4)，并产生含有取代K60R的第4个正向引物，以去除所述活性赖氨酸残基(图4)。在这些PCR扩增的每一个中都使用构架4反向引物。PCR产物用酶XbaI和ApaI消化并插入到pMRR14(544cH)(也用XbaI和ApaI切割)中，产生编码这些突变体的表达质粒。N55Q、T57A和T57V突变通过远离共有序列N-X-T/S处改变氨基酸序列可去除所述糖基化位点，同时K60R突变导致潜在的活性赖氨酸被带同样正电荷的残基精氨酸取代。将所得cH变异质粒与cL质粒一起共转染，产生已表达嵌合抗体变异体。
嵌合基因活性的评价
瞬时转染到CHO细胞后，对所得嵌合基因的活性进行评价。
c)通过BiaCore分析测定亲和力常数
采用BIA技术，对嵌合5/44或其变异体与CD22-mFc构建体结合的亲和力进行研究，其中所述嵌合5/44或其变异体的糖基化位点或活性赖氨酸已被去除。结果示于图8。所有结合测定都在BIAcoreTM 2000仪器(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，瑞典)中进行。通过固定化抗小鼠Fc捕获CD22mFc，进行该项测定。该抗体存在于可溶相中。将样品、标准品和对照(50μl)注射到固定化抗小鼠Fc上，然后注射到可溶相中的抗体上。每个循环之后，所述表面用50μl的40mM HCl以30μl/min再生。运用BIAevaluation 3.1软件(Pharmacia)，进行动力学分析。
与嵌合5/44相比，构建体T57A中糖基化位点的去除导致缔合速率(on-rate)稍微加快而解离速率(off-rate)显著减慢，得到的亲和力改进约为5倍。N55Q突变对亲和力没有影响。该结果是意想不到的，因为这表明糖本身的去除对结合没有明显的影响(如同N55Q改变一样)。仅在T57A改中中观察到改进的亲和力。一种可能的解释是，无论是否存在糖，位置57的苏氨酸对结合都产生负面影响，所述结合在苏氨酸转变成丙氨酸时去除。丙氨酸较小是重要的并且苏氨酸的负面影响与其大小有关的假设，可以从使用T57V突变得到的结果得到支持：57位被缬氨酸取代并不好(结果未显示)。
通过K60R突变去除赖氨酸对亲和力无影响，即引入精氨酸消除了潜在的活性位点而不影响亲和力。
因此，用于去除糖基化位点和用于去除活性赖氨酸的突变均包括在人源化设计中。
实施例2：5/44的CDR移植
上面已经描述了5/44抗体重链可变区和轻链可变区基因的分子克隆及其制备嵌合(小鼠/人)5/44抗体的用途。小鼠5/44 VL区和VH区的核苷酸序列和氨基酸序列分别示于图2和图3(SEQ ID NO：7和SEQID NO：8)。按照Adair等(WO 91/09967)的方法，本实施例描述了将5/44抗体CDR移植到人构架上，以降低人体内的可能免疫原性。
5/44轻链的CDR移植
蛋白质序列与来自人亚型Iκ轻链V区的共有序列比对表明有64％序列同一性。因此，为构建CDR移植轻链，所选的受体构架区对应于人VK亚型I种系O12，DPK9序列的那些序列。构架4受体序列来源于人J区种系序列JK1。
鼠5/44构架区的氨基酸序列与受体序列的比较在图5给出，并显示在供体链和受体链之间有27处不同。在每个位置，对鼠源残基通过对堆积(packing)或在VH/VL界面产生影响而直接或间接对抗原结合产生贡献的可能性进行分析。如果认为一个鼠源残基重要并且与人源残基在大小、极性或电荷方面明显不同，那么就该保留鼠源残基。基于此分析，构建了两种具有SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20(图5)给出的序列的CDR移植轻链。
5/44重链的CDR移植
采用与用于轻链描述的方案相同的策略，完成5/44重链的CDR移植。发现5/44重链的V区与属于亚型I的人重链同源(70％序列同一性)，因此用人亚型I种系构架VH1-3，DP7的序列作为受体构架。构架4受体序列来源于人J区种系序列JH4。
5/44重链与构架区的比较示于图6，其中可以发现5/44重链与受体序列在位置22不同。分析这些序列中的任何序列可能对抗原结合的贡献，从而构建了5种具有以下给定序列的CDR移植重链：SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26和SEQ ID NO：27(图6)。
用于移植序列的基因的构建
将基因设计成编码移植序列gH1和gL1，并设计和构建系列重叠寡核苷酸(图9)。采用PCR装配技术来构建CDR移植V区基因。配制100μl含有以下组分的反应体积：10mM Tris-HCl(pH8.3)、1.5mMMgCl2、50mMKCl、0.001％明胶、脱氧核糖核苷三磷酸各0.25mM、“内部”引物(T1、T2、T3、B1、B2、B3)各1pmole、“外部”引物(F1、R1)各10pmole和1单位Taq聚合酶(AmpliTaq，AppliedBioSystems，目录号N808-0171)。PCR循环参数为94℃1分钟、55℃1分钟和72℃1分钟，30个循环。然后将反应产物在1.5％琼脂糖凝胶上电泳，切下电泳条带，使用QIAGEN离心柱(QIAquick凝胶提取试剂盒，目录号28706)进行回收。用30μl体积洗脱DNA。然后按照生产商的说明，将gH1和gL1 DNA的等分样品(1μl)克隆到InVitrogen TOPOTA克隆载体pCR2.1 TOPO(目录号K4500-01)中。该非表达载体用作克隆中间体，以便于对大量克隆进行测序。使用载体特异性引物，通过DNA测序来鉴定含有gH1和gL1的正确克隆，产生质粒pCR2.1(544gH1)和pCR2.1(544gL1)(图10)。
使用寡核苷酸盒置换法来产生人源化移植物gH4、gH5、gH6和gH7以及gL2。图11表示寡核苷酸盒的设计。为构建每种变异体，用所示的限制性酶(对于重链而言为XmaI/SacII，对于轻链而言为XmaI/BstEII)切下载体(pCR2.1(544gH1)或pCR2.1(544gL1))。将大载体片段用琼脂糖凝胶电泳纯化并用于与寡核苷酸盒连接。这些盒由2种互补寡核苷酸(如图11所示)组成，在200μl体积(12.5mM Tris-HCl(pH7.5)、2.5mM MgCl2、25mM NaCl、0.25mM二硫赤藓糖醇)中以0.5pmole/μl的浓度混合。通过在水浴(500ml体积)中加热至95℃达3分钟，然后让反应物慢慢冷却至室温，完成退火。将已退火的寡核苷酸盒用水稀释10倍，然后将其连接到合适的切割载体中。用DNA测序来证实正确的序列，产生质粒pCR2.1(5/44-gH4-7)和pCR2.1(5/44-gL2)。然后将这些经证实的移植序列亚克隆到表达载体pMRR14(重链)和pMR10.1(轻链)中。
CDR移植序列的CD22结合活性
在各种组合中，将编码移植变异体的载体与原始嵌合抗体链一起共转染到CHO细胞中。在竞争测定中，比较原始小鼠5/44抗体的结合对与Ramos细胞(得自ATCC，一种表达表面CD22的伯基特淋巴瘤成淋巴细胞性人细胞系)结合的竞争的结合活性。该测定被认为是比较移植物与细胞表面CD22结合的能力的最佳方法。结果示于图8。正如所见到的，在任何移植物之间存在非常小的差异，在竞争抗鼠亲代方面所有都表现出比嵌合体更有效。在CDR-H3(gH5和gH7)末端引入3个额外的人源残基并不会明显影响结合。
选择与最少数量的鼠源残基结合的移植物即gL1gH7。轻链移植物gL1有6个供体残基。残基V2、V4、L37和Q45是潜在的重要堆积残基。残基H38位于VH/VL界面。残基D60为靠近CDR-L2的表面残基并且可直接对抗原结合作出贡献。这些残基中，V2、L37、Q45和D60存在于来自其它亚型的人κ基因的种系序列。重链移植物gH7有4个供体构架残基(根据CDR移植中使用的结构定义(参见Adair等(1991，WO 91/09967)，残基R28被认为是CDR-H1的一部分)。残基E1和A71为靠近CDR的表面残基。残基I48为潜在的堆积残基。残基T93存在于VH/VL界面。这些残基中，E1和A71存在于人亚型I的其它种系基因中。残基I48存在于人种系亚型4中，而T73存在于人种系亚型3中。
轻链和重链两者的全部DNA序列和蛋白质序列，包括由载体提供的恒定区基因内的内含子的大致位置，如图13所示，并分别在SEQID NO：29和SEQ ID NO：28中给出(对于轻链)以及分别在SEQ IDNO：31和SEQ ID NO：30中给出(对于重链)。
从这些载体中切下编码这些轻链和重链基因的DNA。重链DNA在5’HindIII位点消化，然后用大肠杆菌DNA聚合酶I的克列诺片段处理，产生5’平端。在3’EcoRI位点切割，产生重链片段，然后通过琼脂糖凝胶纯化。同样，产生轻链片段，在5’SfuI位点平端化并用3’EcoRI位点。将这两个片段克隆到基于DHFR的表达载体中并用来在CHO细胞中产生稳定的细胞系。
                     序列表
<110>细胞技术研究及开发有限公司(Celltech R&D Limited)
<120>生物制品
<160>51
<170>SeqWin99，version 1.02
<210>1
<211>5
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 CDR-H1
<400>1
Asn Tyr Trp Ile His
1               5
<210>2
<211>17
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 CDR-H2
<400>2
Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>3
<211>12
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 CDR-H3
<400>3
Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr
1               5                   10
<210>4
<211>16
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 CDR-L1
<400>4
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser
1               5                   10                  15
<210>5
<211>7
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 CDR-L2
<400>5
Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser
1               5
<210>6
<211>9
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 CDR-L3
<400>6
Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr
1               5
<210>7
<211>113
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>鼠单克隆抗体5/44 VL区
<400>7
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly
1               5                   10                  15
Asp Gln Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
            20                  25                  30
Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Thr Ile Lys Pro Glu Asp Leu Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
                85                  90                  95
Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Arg
<210>8
<211>121
<212>PRT
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 VH区
<400>8
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>9
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>cH
<400>9
Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly
1               5                   10
<210>10
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>N55Q
<400>10
Gly Asn Gln Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly
1               5                   10
<210>11
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>T57A
<400>11
Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly
1               5                   10
<210>12
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>T57V
<400>12
Gly Asn Asn Tyr Val Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly
1               5                   10
<210>13
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>CDR-H2(T57A)H’
<400>13
Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>14
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>K60R
<400>14
Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Arg Arg Asn Leu Lys Gly
1               5                   10
<210>15
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>CDR-H2(K60R)H”
<400>15
Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Arg Arg Asn Leu Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>16
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>CDR-H2(T57A K60R)H
<400>16
Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Asn Leu Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210>17
<211>70
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>DPK9
<400>17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
            20                  25                  30
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
        35                  40                  45
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
    50                  55                  60
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
65                  70
<210>18
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>JK1
<400>18
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
1               5                   10
<210>19
<211>113
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gL1
<400>19
Asp Val Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
            20                  25                  30
Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Lys Ala
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
                85                  90                  95
Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Arg
<210>20
<211>113
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gL2
<400>20
Asp Val Val Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ala Asn Ser
            20                  25                  30
Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Lys Ala
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Gly
                85                  90                  95
Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105                 110
Arg
<210>21
<211>80
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>DP7
<400>21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Trp Val
            20                  25                  30
Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Lys Phe Gln Gly
        35                  40                  45
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
65                  70                  75                  80
<210>22
<211>11
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<223>JH4
<400>22
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1               5                   10
<210>23
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gH1
<400>23
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Gln Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>24
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gH4
<400>24
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Asn Leu
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>25
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gH5
<400>25
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Asn Leu
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>26
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gH6
<400>26
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>27
<211>121
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>gH7
<400>27
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly
            100                 105                 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
<210>28
<211>239
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>移植轻链的全序列
<400>28
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Leu Leu Phe Trp Ile Pro
1               5                   10                  15
Ala Ser Arg Gly Asp Val Gln Val Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
            20                  25                  30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser
        35                  40                  45
Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Ser Asn Arg Phe
65                  70                  75                  80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Leu Gln Gly Thr His Gln Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
        115                 120                 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
    130                 135                 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145                 150                 155                 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
                165                 170                 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
            180                 185                 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
        195                 200                 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
    210                 215                 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225                 230                 235
<210>29
<211>781
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>移植轻链的全部DAN序列
<400>29
ttcgaagccg ccaccatgaa gttgcctgtt aggctgttgg tgcttctgtt gttctggatt    60
cctgcttccc ggggtgacgt tcaagtgacc cagagcccat ccagcctgag cgcatctgta    120
ggagaccggg tcaccatcac ttgtagatcc agtcagagtc ttgcaaacag ttatgggaac    180
acctttttgt cttggtatct gcacaaacca ggtaaagccc cacaattgct catctacgga    240
atctctaaca gatttagtgg tgtaccagac aggttcagcg gttccggaag tggtactgat    300
ttcaccctca cgatctcgtc tctccagcca gaagatttcg ccacttatta ctgtttacaa    360
ggtacacatc agccgtacac attcggtcag ggtactaaag tagaaatcaa acgtacggta    420
gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc    480
tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg    540
gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac    600
agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa    660
gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac    720
aggggagagt gttagaggga gaagtgcccc cacctgctcc tcagttccag cctgggaatt    780
c                                                                    781
<210>30
<211>467
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>移植重链的全序列
<400>30
Met Asp Phe Gly Phe Ser Leu Val Phe Leu Ala Leu Ile Leu Lys Gly
1               5                   10                  15
Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
            20                  25                  30
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe
        35                  40                  45
Thr Asn Tyr Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
    50                  55                  60
Glu Trp Ile Gly Gly Ile Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg
65                  70                  75                  80
Arg Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser
                85                  90                  95
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
            100                 105                 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
    130                 135                 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
145                 150                 155                 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
                165                 170                 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
            180                 185                 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
        195                 200                 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
    210                 215                 220
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
225                 230                 235                 240
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
                245                 250                 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
            260                 265                 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
        275                 280                 285
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
    290                 295                 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
305                 310                 315                 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
                325                 330                 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
            340                 345                 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
        355                 360                365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
    370                 375                 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385                 390                 395                 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
                405                 410                 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
            420                 425                 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
        435                 440                 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
    450                 455                 460
Leu Gly Lys
465
<210>31
<211>2160
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>移植重链的全部DNA序列
<400>31
aagcttgccg ccaccatgga cttcggattc tctctcgtgt tcctggcact cattctcaag      60
ggagtgcagt gtgaggtgca attggtccag tcaggagcag aggttaagaa gcctggtgct     120
tccgtcaaag tttcgtgtaa ggctagcggc tacaggttca caaattattg gattcattgg     180
gtcaggcagg ctccgggaca aggcctggaa tggatcggtg gcattaatcc cgggaataac     240
tacgctacat ataggagaaa attccagggc agagttacga tgaccgcgga cacctccaca     300
agcactgtct acatggagct gtcatctctg agatccgagg acaccgcagt gtactattgt     360
actagagaag gctacggtaa ttacggagcc tggttcgcct actggggcca gggtacccta     420
gtcacagtct cctcagcttc tacaaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc     480
aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa     540
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct     600
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc     660
ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac     720
aagagagttg gtgagaggcc agcacaggga gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag     780
ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc agccccagcc cagggcagca aggcatgccc     840
catctgtctc ctcacccgga ggcctctgac caccccactc atgcccaggg agagggtctt     900
ctggattttt ccaccaggct ccgggcagcc acaggctgga tgcccctacc ccaggccctg     960
cgcatacagg ggcaggtgct gcgctcagac ctgccaagag ccatatccgg gaggaccctg    1020
cccctgacct aagcccaccc caaaggccaa actctccact ccctcagctc agacaccttc    1080
tctcctccca gatctgagta actcccaatc ttctctctgc agagtccaaa tatggtcccc    1140
catgcccacc atgcccaggt aagccaaccc aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca    1200
ggtgccctag agtagcctgc atccagggac aggccccagc cgggtgctga cgcatccacc    1260
tccatctctt cctcagcacc tgagttcctg gggggaccat cagtcttcct gttcccccca    1320
aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac    1380
gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat    1440
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc    1500
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac    1560
aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaaggtgg gacccacggg    1620
gtgcgagggc cacatggaca gaggtcagct cggcccaccc tctgccctgg gagtgaccgc    1680
tgtgccaacc tctgtcccta cagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc    1740
atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta    1800
ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac    1860
cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga    1920
caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca    1980
caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt aaatgagtgc cagggccggc    2040
aagcccccgc tccccgggct ctcggggtcg cgcgaggatg cttggcacgt accccgtcta    2100
catacttccc aggcacccag catggaaata aagcacccac cactgccctg gctcgaattc    2160
<210>32
<211>94
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 T1
<400>32
agtgtgaggt gcaattggtc cagtcaggag cagaggttaa gaagcctggt gcttccgtca    60
aagtttcgtg taaggctagc ggctacaggt tcac                                94
<210>33
<211>96
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 T2
<400>33
gtggcattaa tcccgggaat cagtacacta catataaaag aaatctaaagggcagagcaa    60
cgctgaccgc ggacacctcc acaagcactg tctaca                             96
<210>34
<211>95
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 T3
<400>34
agagaaggct acggtaatta cggagcctgg ttcgcctact ggggccaggg taccctagtc    60
acagtctcct cagcttctac aaagggccca agaaa                               95
<210>35
<211>94
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544 gH1 B1
<400>35
ggaccaattg cacctcacac tgcactccct tgagaatgag tgccaggaac acgagagaga    60
atccgaagtc catggtggcg gcaagctttt attc                                94
<210>36
<211>97
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 B2
<400>36
gattcccggg attaatgcca ccgatccatt ccaggccttg tcccggagcc tgcctgaccc    60
aatgaatcca ataatttgtg aacctgtagc cgctagc                             97
<210>37
<211>93
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 B3
<400>37
cgtaattacc gtagccttct ctagtacaat agtacactgc ggtgtcctcg gatctcagag    60
atgacagctc catgtagaca gtgcttgtgg agg                                 93
<210>38
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 F1
<400>38
gaataaaagc ttgccgccac c                                              21
<210>39
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gH1 R1
<400>39
tttcttgggc cctttgtaga ag                                             22
<210>40
<211>87
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544 gL1 T1
<400>40
gcttcccggg gtgacgttca agtgacccag agcccatcca gcctgagcgc atctgtagga    60
gaccgggtca ccatcacttg tagatcc                                        87
<210>41
<211>90
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544 gL1 T2
<400>41
tatctgcaca aaccaggtaa agccccacaa ttgctcatct acggaatctc taacagattt    60
agtggtgtac cagacaggtt cagcggttcc                                     90
<210>42
<211>91
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gL1 T3
<400>42
agatttcgcc acttattact gtttacaagg tacacatcag ccgtacacat tcggtcaggg    60
tactaaagta gaaatcaaac gtacggcgtg c                                   91
<210>43
<211>88
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gL1 B1
<400>43
gaacgtcacc ccgggaagca ggaatccaga acaacagaag caccaacagc ctaacaggca    60
acttcatggt ggcggcttcg aatcatcc                                       88
<210>44
<211>88
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gL1 B2
<400>44
ctttacctgg tttgtgcaga taccaagaca aaaaggtgtt cccataactg tttgcaagac    60
tctgactgga tctacaagtg atggtgac                                       88
<210>45
<211>90
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gL1 B3
<400>45
aacagtaata agtggcgaaa tcttctggct ggagagacga gatcgtgagg gtgaaatcag    60
taccacttcc ggaaccgctg aacctgtctg                                     90
<210>46
<211>20
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gL1 F1
<400>46
ggatgattcg aagccgccac                                                20
<210>47
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>544gL1 R1
<400>47
gcacgccgta cgtttgattt c                                              21
<210>48
<211>339
<212>DNA
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 VL的DNA序列
<400>48
gatgttgtgg tgactcaaac tccactctcc ctgcctgtca gctttggaga tcaagtttct     60
atctcttgca ggtctagtca gagtcttgca aacagttatg ggaacacctt tttgtcttgg    120
tacctgcaca agcctggcca gtctccacag ctcctcatct atgggatttc caacagattt    180
tctggggtgc cagacaggtt cactggcagt ggttcaggga cagatttcac actcaagatc    240
agcacaataa agcctgagga cttgggaatg tattactgct tacaaggtac acatcagccg    300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgt                           339
<210>49
<211>363
<212>DNA
<213>小家鼠(Mus.musculus)
<220>
<223>小鼠单克隆抗体5/44 VH的DNA序列
<400>49
gaggtccaac tgcagcagtc tgggactgta ctggcaaggc ctggggcttc cgtgaagatg     60
tcctgcaagg cttctggcta caggtttacc aactactgga ttcactgggt aaaacagagg    120
cctgggcagg gtctagaatg gattggtggt attaatcctg gaaataatta tactacgtat    180
aagaggaact tgaagggcaa ggccacactg actgcagtca catccgccag cactgcctac    240
atggacctca gcagcctgac aagtgaggac tctgcggtct attactgtac aagagagggc    300
tatggtaact acggggcctg gtttgcttac tggggccagg ggactctggt caccgtctcc    360
tca                                                                  363
<210>50
<211>9
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>寡核苷酸引物内的序列
<400>50
gccgccacc                                                            9
<210>51
<211>101
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>5’寡核苷酸引物
<400>51
gcgcgcaagc ttgccgccac catggacttc ggattctctc tcgtgttcct ggcactcatt     60
ctcaagggag tgcagtgtga ggtgcagctc gtcgagtctg g                        101

Claims (45)

1.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含其中可变区包含CDR的重链，所述CDR具有如下给出的序列中的至少一种：对于CDR-H1在图1中的H1(SEQ ID NO：1)；对于CDR-H2在图1中的H2(SEQ ID NO：2)，或H2’(SEQ ID NO：13)或H2”(SEQ IDNO：15)或H2(SEQ ID NO：16)；或对于CDR-H3在图1中的H3(SEQID NO：3)。
2.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含其中可变区包含CDR的轻链，所述CDR具有如下给出的序列中的至少一种：对于CDR-L1在图1中的L1(SEQ ID NO：4)、对于CDR-L2在图1中的L2(SEQ ID NO：5)或对于CDR-L3在图1中的L3(SEQ IDNO：6)。
3.权利要求1或2的抗体分子，所述抗体分子包含其中可变区包含CDR的重链，所述CDR具有以下给出的序列中的至少一种：CDR-H1的SEQ ID NO：1，CDR-H2的SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16，或CDR-H3的SEQ ID NO：3；和其中可变区包含CDR的轻链，所述CDR具有以下给出的序列中的至少一种：CDR-L1的SEQ ID NO：4、CDR-L2的SEQ ID NO：5或CDR-L3的SEQ ID NO：6。
4.权利要求3的抗体分子，所述抗体分子包含CDR-H1的SEQ IDNO：1；CDR-H2的SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16；CDR-H3的SEQ ID NO：3；CDR-L1的SEQ ID NO：4；CDR-L2的SEQ ID NO：5；和CDR-L3的SEQ ID NO：6。
5.权利要求1-4中任一项的抗体分子，所述抗体分子是CDR移植抗体分子。
6.权利要求5的抗体分子，其中所述可变区包含人受体构架区和非人类供体CDR。
7.权利要求6的抗体分子，其中所述重链可变区的人受体构架区基于人亚型I共有序列并且在位置1、28、48、71和93包含供体残基，所述供体残基对应于SEQ ID NO：8中这些位置的残基。
8.权利要求7的抗体分子，所述抗体分子还在位置67和69包含供体残基，所述供体残基对应于SEQ ID NO：8中这些位置的残基。
9.权利要求6-8中任一项的抗体分子，其中所述轻链可变区的人受体构架区基于人亚型I共有序列并且在位置2、4、37、38、45和60包含供体残基，所述供体残基对应于SEQ ID NO：7中这些位置的残基。
10.权利要求9的抗体分子，所述抗体分子还在位置3包含供体残基，所述供体残基对应于SEQ ID NO：7中该位置的残基。
11.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含权利要求7或权利要求8中任一项的重链和权利要求9或权利要求10中任一项的轻链。
12.权利要求1-11中任一项的抗体分子，所述抗体分子包含轻链可变区5/44-gL1(SEQ ID NO：19)和重链可变区5/44-gH7(SEQ IDNO：27)。
13.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含轻链，其中所述轻链的序列包含SEQ ID NO：28中给出的序列。
14.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含轻链，其中所述轻链的序列由SEQ ID NO：28中给出的序列组成。
15.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含重链，其中所述重链的序列包含SEQ ID NO：30中给出的序列。
16.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子包含重链，其中所述重链的序列由SEQ ID NO：30中给出的序列组成。
17.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子具有轻链和重链，所述轻链包含SEQ ID NO：28中给出的序列，而所述重链包含SEQ ID NO：30中给出的序列。
18.一种对人CD22具有特异性的抗体分子，所述抗体分子具有轻链和重链，所述轻链由SEQ ID NO：28中给出的序列组成，而所述重链由SEQ ID NO：30中给出的序列组成。
19.一种权利要求1-18中任一项的抗体分子的变异体，所述变异体对CD22具有改进的亲和力。
20.权利要求19的变异体，所述变异体通过亲和力成熟方案获得。
21.权利要求1-4中任一项的抗体分子，所述抗体分子是鼠抗CD22单克隆抗体5/44，其中所述轻链的可变区具有SEQ ID NO：7中给出的序列，而所述重链的可变区具有SEQ ID NO：8中给出的序列。
22.权利要求1-4中任一项的抗体分子，所述抗体分子是包含权利要求21的单克隆抗体的轻链可变区序列和重链可变区序列的嵌合抗体分子，所述序列分别在SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中给出。
23.一种包含杂种CDR的抗体分子，所述CDR包含截短的供体CDR序列，其中所述供体CDR的缺失部分被不同的序列取代并且形成功能性CDR。
24.权利要求23的抗体分子，其中所述CDR序列的缺失部分源自所述抗体分子的构架区所来源的抗体。
25.权利要求24的抗体分子，其中所述CDR序列的缺失部分源自具有共有构架区的种系抗体。
26.权利要求23-25中任一项的抗体分子，其中在所述抗体分子中所述重链的CDR-H2是杂种。
27.权利要求23-26中任一项的抗体分子，其中所述供体CDR的截短是去除1-8个氨基酸。
28.权利要求27的抗体分子，其中所述截短是去除4-6个氨基酸。
29.权利要求23-28中任一项的抗体分子，其中在所述CDR的C末端进行所述截短。
30.一种DNA序列，所述DNA序列编码权利要求1-29中任一项的抗体分子的重链和/或轻链。
31.一种克隆载体或表达载体，所述载体包含权利要求30的DNA序列。
32.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求31的克隆载体或表达载体。
33.权利要求1-29中任一项的抗体分子或权利要求30的DNA序列，所述抗体分子或所述DNA序列用于治疗中。
34.权利要求1-29或权利要求33中任一项的对人CD22具有特异性的抗体分子或者权利要求30的DNA序列，所述抗体分子或所述DNA序列用于治疗由表达CD22的细胞介导的疾病。
35.权利要求33或权利要求34的抗体分子或者权利要求33或权利要求34的DNA序列，所述抗体分子或所述DNA序列用于治疗恶性淋巴瘤。
36.权利要求35的抗体分子或DNA序列，其中所述恶性淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤。
37.权利要求1-29中任一项的对人CD22具有特异性的抗体分子或权利要求30的DNA序列在制备用于治疗由表达CD22的细胞介导的疾病的药物中的用途。
38.权利要求37的用途，其中所述疾病是恶性淋巴瘤。
39.权利要求38的用途，其中所述恶性淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤。
40.一种治疗或诊断组合物，所述组合物包含权利要求1-29中任一项的抗体分子或权利要求30的DNA序列。
41.权利要求40的治疗或诊断组合物，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
42.权利要求40或权利要求41的治疗或诊断组合物，所述组合物还包含抗T细胞、抗IFNγ或抗LPS抗体，或者非抗体成分例如黄嘌呤。
43.一种制备权利要求1-29中任一项的抗体分子的方法，所述方法包括：在适合导致由编码所述抗体分子的DNA表达蛋白质的条件下，培养权利要求32的宿主细胞，然后分离所述抗体分子。
44.一种制备权利要求40-42中任一项的治疗或诊断组合物的方法，所述方法包括将权利要求1-29中任一项的抗体分子与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体混合在一起。
45.一种多肽，所述多肽具有SEQ ID NO：1-28中任一个或SEQ IDNO：30中给出的氨基酸序列。
CNB038150433A 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用 Expired - Lifetime CN100384878C (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310021287.1A CN103172742B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0210121.0A GB0210121D0 (en) 2002-05-02 2002-05-02 Biological products
GB0210121.0 2002-05-02

Related Child Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310021287.1A Division CN103172742B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用
CN2007100852904A Division CN101134779B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1662558A true CN1662558A (zh) 2005-08-31
CN100384878C CN100384878C (zh) 2008-04-30

Family

ID=9935990

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB038150433A Expired - Lifetime CN100384878C (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用
CN201310021287.1A Expired - Lifetime CN103172742B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用
CN2007100852904A Expired - Lifetime CN101134779B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310021287.1A Expired - Lifetime CN103172742B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用
CN2007100852904A Expired - Lifetime CN101134779B (zh) 2002-05-02 2003-05-02 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用

Country Status (35)

Country Link
US (8) US7355011B2 (zh)
EP (1) EP1504035B9 (zh)
JP (3) JP4486494B2 (zh)
KR (3) KR101238970B1 (zh)
CN (3) CN100384878C (zh)
AT (1) ATE462729T3 (zh)
AU (1) AU2003223007C1 (zh)
BE (1) BE2017C068I2 (zh)
CA (1) CA2484420C (zh)
CO (1) CO5631451A2 (zh)
CY (3) CY1110134T1 (zh)
DE (1) DE60331910D1 (zh)
DK (1) DK1504035T6 (zh)
EC (1) ECSP045470A (zh)
ES (1) ES2341708T7 (zh)
FR (1) FR17C1062I2 (zh)
GB (1) GB0210121D0 (zh)
HK (2) HK1071762A1 (zh)
HU (2) HUS1700055I1 (zh)
IL (1) IL164923A (zh)
LT (2) LTC1504035I2 (zh)
LU (2) LUC00057I2 (zh)
MX (1) MXPA04010787A (zh)
NL (1) NL300920I2 (zh)
NO (3) NO336201B3 (zh)
NZ (1) NZ536757A (zh)
PL (1) PL218433B1 (zh)
PT (1) PT1504035E (zh)
RU (1) RU2342401C2 (zh)
SG (1) SG161744A1 (zh)
SI (1) SI1504035T1 (zh)
TW (1) TWI324161B (zh)
UA (1) UA92580C2 (zh)
WO (1) WO2003093320A2 (zh)
ZA (1) ZA200408851B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101626782B (zh) * 2006-12-01 2013-03-27 梅达雷克斯公司 结合cd22的人抗体及其用途
CN103214578A (zh) * 2013-05-10 2013-07-24 北京东方百泰生物科技有限公司 一种新型的人源化抗cd22抗体
WO2021197483A1 (zh) * 2020-04-02 2021-10-07 南京驯鹿医疗技术有限公司 全人源抗人cd22的嵌合抗原受体及其应用
CN114106177A (zh) * 2020-08-27 2022-03-01 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 Cd22抗体及其应用
WO2022262783A1 (zh) * 2021-06-16 2022-12-22 西安宇繁生物科技有限责任公司 抗cd22的全人源抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7355012B2 (en) 2001-09-26 2008-04-08 United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Mutated anti-CD22 antibodies with increased affinity to CD22-expressing leukemia cells
US20110045005A1 (en) 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
WO2003072036A2 (en) 2002-02-21 2003-09-04 Duke University Treatment methods using anti-cd22 antibodies
EP2371392B1 (en) 2002-05-02 2015-07-08 Wyeth Holdings LLC Calicheamicin derivative-carrier conjugates
GB0210121D0 (en) * 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
AR052774A1 (es) * 2004-10-08 2007-04-04 Wyeth Corp Inmunoterapia para trastornos autoinmunes
EP1909831A4 (en) 2005-06-14 2013-02-20 Amgen Inc PREPARATIONS OF SPONTANEOUS TAMPING PROTEINS
MY149159A (en) 2005-11-15 2013-07-31 Hoffmann La Roche Method for treating joint damage
JP2009532336A (ja) * 2006-03-06 2009-09-10 メディミューン，エルエルシー ヒト化抗ｃｄ２２抗体、並びに腫瘍、移植及び自己免疫疾患の治療におけるこれらの使用
EP2540741A1 (en) * 2006-03-06 2013-01-02 Aeres Biomedical Limited Humanized anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease
WO2007140371A2 (en) * 2006-05-30 2007-12-06 Genentech, Inc. Antibodies and immunoconjugates and uses therefor
WO2009124109A1 (en) * 2008-04-04 2009-10-08 The Government Of The U.S. A. As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health &Human Services Human monoclonal antibodies specific for cd22
WO2010075249A2 (en) 2008-12-22 2010-07-01 Genentech, Inc. A method for treating rheumatoid arthritis with b-cell antagonists
WO2010096394A2 (en) * 2009-02-17 2010-08-26 Redwood Biosciences, Inc. Aldehyde-tagged protein-based drug carriers and methods of use
BR112012004777A2 (pt) 2009-09-03 2019-09-24 Genentech Inc métodos para tratar diagnósticar e monitorar artrite reumatoide
JP6162606B2 (ja) 2011-01-14 2017-07-12 レッドウッド バイオサイエンス， インコーポレイテッド アルデヒド−タグ付き免疫グロブリンポリペプチド及びその使用方法
CN103502472B (zh) 2011-02-28 2017-06-06 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 生物标记物和用于预测对b‑细胞拮抗剂的响应的方法
MX361533B (es) * 2012-04-26 2018-12-07 Bioatla Llc Anticuerpos anti-cd22.
SG11201408626YA (en) 2012-07-03 2015-03-30 Univ Washington Antibodies to tau
EP3539563A1 (en) 2012-07-19 2019-09-18 Redwood Bioscience, Inc. Antibody specific for cd22 and methods of use thereof
RU2658485C2 (ru) 2012-10-24 2018-06-21 Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретари, Департмент Оф Хелс Энд Хьюман Сёрвисез Химерные антигенные рецепторы м971
AU2014342610A1 (en) 2013-11-04 2016-06-02 Abbvie Stemcentrx Llc Anti-EFNA4 antibody-drug conjugates
GB201409558D0 (en) 2014-05-29 2014-07-16 Ucb Biopharma Sprl Method
TWI734975B (zh) 2014-06-27 2021-08-01 美商Ｃ２Ｎ醫療診斷有限責任公司 人類化抗-tau抗體
GB201412659D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
DK3280729T3 (da) * 2015-04-08 2022-07-25 Novartis Ag Cd20-behandlinger, cd22-behandlinger og kombinationsbehandlinger med en cd19-kimær antigenreceptor (car)-udtrykkende celle
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
AU2016354009B2 (en) 2015-11-09 2021-05-20 R.P. Scherer Technologies, Llc Anti-CD22 antibody-maytansine conjugates and methods of use thereof
GB201521383D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl And Ucb Celltech Method
GB201521391D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521382D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521393D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201521389D0 (en) 2015-12-03 2016-01-20 Ucb Biopharma Sprl Method
WO2017189432A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
GB201610512D0 (en) * 2016-06-16 2016-08-03 Autolus Ltd Chimeric antigen receptor
JP6884858B2 (ja) 2016-10-21 2021-06-09 アムジエン・インコーポレーテツド 医薬製剤及びその製造方法
MX2020010227A (es) 2018-03-30 2021-02-17 Eureka Therapeutics Inc Construcciones dirigidas a cd22 y usos de las mismas.
WO2023027534A1 (ko) * 2021-08-27 2023-03-02 주식회사 펩트론 신규 항 muc1항체 및 이의 용도
WO2024102693A2 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Xencor, Inc. Il-18-fc fusion proteins

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3957362A (en) * 1972-10-02 1976-05-18 Corneal Sciences, Inc. Hydrogels and articles made therefrom
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5134075A (en) * 1989-02-17 1992-07-28 Oncogen Limited Partnership Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
JP3179481B2 (ja) * 1990-06-27 2001-06-25 プリンストン ユニバーシティ 突然変異体ｐ５３検出用プローブ
CZ282603B6 (cs) * 1991-03-06 1997-08-13 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschränkter Haftun G Humanizované a chimerické monoklonální protilátky
US5714350A (en) * 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5686072A (en) 1992-06-17 1997-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas Epitope-specific monoclonal antibodies and immunotoxins and uses thereof
US5714340A (en) * 1992-12-22 1998-02-03 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Immunoassay elements having a receptor zone
US6180377B1 (en) * 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US5474995A (en) 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5436265A (en) * 1993-11-12 1995-07-25 Merck Frosst Canada, Inc. 1-aroyl-3-indolyl alkanoic acids and derivatives thereof useful as anti-inflammatory agents
CN1211123C (zh) * 1994-01-25 2005-07-20 雅典娜神经科学公司 抗白细胞粘附分子vla－4的人源化抗体
DE69534530T2 (de) * 1994-08-12 2006-07-06 Immunomedics, Inc. Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
MX9701075A (es) 1994-08-12 1998-03-31 Myriad Genetics Inc Mutaciones en vivo y polimorfismos en el gen de susceptibilidad al cancer de pecho y ovario enlazado con 17q.
US5712374A (en) * 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) * 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US7147851B1 (en) * 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
CA2270288A1 (en) * 1996-11-01 1998-05-14 Smithkline Beecham Corporation Human monoclonal antibodies
US20020141990A1 (en) * 1996-11-01 2002-10-03 Smithkline Beecham Corporation Anti-RSV human monoclonal antibodies
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
CA2284665C (en) 1997-03-20 2010-08-17 David Fitzgerald Recombinant antibodies and immunoconjugates targeted to cd-22 bearing cells and tumors
US6183744B1 (en) 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
DK0999853T3 (da) 1997-06-13 2003-04-22 Genentech Inc Stabiliseret antostofformulering
AT408613B (de) * 1998-06-17 2002-01-25 Immuno Ag Pharmazeutisches faktor vii-präparat
KR100345463B1 (ko) * 1998-11-19 2003-01-08 주)녹십자 B형간염바이러스의표면항원프리-s1에대한인간화항체및이의제조방법
EP1194167B1 (en) * 1999-06-09 2009-08-19 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target b-cells
AU7787100A (en) * 1999-10-12 2001-04-23 Connex Gesellschaft Zur Optimierung Von Forschung Und Entwicklung Mbh Improved method for the detection of acid resistant microorganisms in a stool
US20010046496A1 (en) * 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
GB0013810D0 (en) * 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
JP2004502742A (ja) * 2000-07-12 2004-01-29 アイデック　ファーマスーティカルズ　コーポレイション Ｂ細胞を消滅させる抗体及び免疫調節抗体を併用するｂ細胞悪性疾患の治療関連出願
CN1205479C (zh) * 2000-10-31 2005-06-08 杨梦甦 免疫学诊断蛋白芯片制备方法
GB0210121D0 (en) * 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
EP2371392B1 (en) 2002-05-02 2015-07-08 Wyeth Holdings LLC Calicheamicin derivative-carrier conjugates
EP2540741A1 (en) * 2006-03-06 2013-01-02 Aeres Biomedical Limited Humanized anti-CD22 antibodies and their use in treatment of oncology, transplantation and autoimmune disease

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101626782B (zh) * 2006-12-01 2013-03-27 梅达雷克斯公司 结合cd22的人抗体及其用途
CN103214578A (zh) * 2013-05-10 2013-07-24 北京东方百泰生物科技有限公司 一种新型的人源化抗cd22抗体
WO2021197483A1 (zh) * 2020-04-02 2021-10-07 南京驯鹿医疗技术有限公司 全人源抗人cd22的嵌合抗原受体及其应用
CN114106177A (zh) * 2020-08-27 2022-03-01 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 Cd22抗体及其应用
WO2022042494A1 (zh) * 2020-08-27 2022-03-03 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 Cd22抗体及其应用
CN114106177B (zh) * 2020-08-27 2024-04-09 深圳市菲鹏生物治疗股份有限公司 Cd22抗体及其应用
WO2022262783A1 (zh) * 2021-06-16 2022-12-22 西安宇繁生物科技有限责任公司 抗cd22的全人源抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
UA92580C2 (ru) 2010-11-25
BE2017C068I2 (zh) 2022-08-09
US7355011B2 (en) 2008-04-08
CA2484420C (en) 2014-09-16
AU2003223007C1 (en) 2019-08-08
RU2342401C2 (ru) 2008-12-27
US20120302739A1 (en) 2012-11-29
CY2017045I1 (el) 2019-11-27
ES2341708T3 (es) 2010-06-25
CN101134779B (zh) 2013-03-13
AU2003223007B2 (en) 2009-07-16
KR101386376B1 (ko) 2014-04-16
IL164923A0 (en) 2005-12-18
WO2003093320A2 (en) 2003-11-13
HUS1700055I1 (hu) 2018-07-30
EP1504035B9 (en) 2018-10-17
CY1110134T1 (el) 2015-01-14
US20070059307A1 (en) 2007-03-15
JP4486494B2 (ja) 2010-06-23
US7919606B2 (en) 2011-04-05
JP5377173B2 (ja) 2013-12-25
US8895714B2 (en) 2014-11-25
NO336201B1 (no) 2015-06-15
EP1504035B8 (en) 2018-02-28
US20170145114A1 (en) 2017-05-25
US20030235869A1 (en) 2003-12-25
JP5920934B2 (ja) 2016-05-18
KR101238970B1 (ko) 2013-03-04
HK1186479A1 (zh) 2014-03-14
PL373277A1 (en) 2005-08-22
US20210371547A1 (en) 2021-12-02
JP2010022372A (ja) 2010-02-04
SI1504035T1 (sl) 2010-07-30
JP2013230158A (ja) 2013-11-14
AU2003223007A1 (en) 2003-11-17
HUS1700056I1 (hu) 2018-07-30
CY2017045I2 (el) 2019-11-27
IL164923A (en) 2012-03-29
LTC1504035I2 (lt) 2022-04-11
FR17C1062I2 (fr) 2020-05-29
CN103172742B (zh) 2016-05-11
CN101134779A (zh) 2008-03-05
CA2484420A1 (en) 2003-11-13
FR17C1062I1 (zh) 2018-02-16
NO20044742L (no) 2004-12-22
CN100384878C (zh) 2008-04-30
CO5631451A2 (es) 2006-04-28
PL218433B1 (pl) 2014-12-31
MXPA04010787A (es) 2005-03-07
US20110165659A1 (en) 2011-07-07
KR20120127513A (ko) 2012-11-21
NO336201B3 (no) 2015-06-15
NO2017069I1 (no) 2017-12-21
WO2003093320A3 (en) 2004-02-05
RU2004135103A (ru) 2005-10-27
LUC00057I1 (zh) 2017-12-27
CY2017046I2 (el) 2018-12-12
DK1504035T6 (en) 2018-03-12
TW200307690A (en) 2003-12-16
KR20050025167A (ko) 2005-03-11
LTPA2017043I1 (lt) 2018-01-10
EP1504035B1 (en) 2010-03-31
ZA200408851B (en) 2006-01-25
EP1504035B3 (en) 2017-12-20
CY2017046I1 (el) 2018-12-12
DK1504035T3 (da) 2010-06-07
PT1504035E (pt) 2010-06-07
NL300920I2 (nl) 2021-04-15
US20160326247A1 (en) 2016-11-10
CN103172742A (zh) 2013-06-26
DE60331910D1 (de) 2010-05-12
LUC00057I2 (zh) 2018-02-26
LUC00058I2 (zh) 2018-02-26
TWI324161B (en) 2010-05-01
ATE462729T3 (de) 2010-04-15
ES2341708T7 (es) 2018-04-11
SG161744A1 (en) 2010-06-29
NZ536757A (en) 2006-06-30
NL300920I1 (zh) 2018-01-03
EP1504035A2 (en) 2005-02-09
NO2017068I1 (no) 2017-12-21
LTPA2017044I1 (lt) 2018-01-10
LUC00058I1 (zh) 2017-12-27
GB0210121D0 (en) 2002-06-12
KR20110004463A (ko) 2011-01-13
HK1071762A1 (en) 2005-07-29
JP2006506955A (ja) 2006-03-02
ECSP045470A (es) 2005-01-28
KR101156796B1 (ko) 2012-06-21
US20100021995A1 (en) 2010-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1662558A (zh) 人cd22特异性抗体及其治疗和诊断应用
CN1289671C (zh) 对人肿瘤坏死因子α具有特异性的抗体分子及其用途
CN1665532A (zh) 加利车霉素衍生物－载体缀合物
CN1922199A (zh) Ca6抗原特异性细胞毒性偶联物及其应用方法
CN1871259A (zh) 具有改变的效应物功能的经改进的抗体和制备它的方法
CN1308448C (zh) 低分子化的tpo激动剂抗体
CN1547590A (zh) 人源化抗-LT-β-R抗体
CN1798766A (zh) 识别β－淀粉样肽的人源化抗体
CN1620468A (zh) 新的抗igf－ir抗体及其应用
CN1958615A (zh) 功能人源化抗人cd20抗体及其应用
CN1898264A (zh) 用新的抗il13单克隆抗体治疗癌症
CN1678634A (zh) 免疫球蛋白单个变体抗原结合区及其特异性构建体
CN101076542A (zh) 特异性针对肝细胞癌和其他癌的抗体及其用途
CN1753911A (zh) 调节血管生成的α5β1整合素的嵌合的和人源化的抗体
CN1678633A (zh) 抗igf－i受体抗体
CN1745103A (zh) 对人IL－1β具有特异性的抗体分子
JP6251682B2 (ja) メラノーマ治療の治療の組み合わせ及び方法
CN1678625A (zh) 人源化抗淋巴毒素β受体的抗体
CN1272345C (zh) 沉默型抗cd－28抗体及其应用
JP2023504187A (ja) 抗αｖβ６抗体及び抗体薬物コンジュゲート
CN1310947C (zh) γ－1和γ－3抗人CD23单克隆抗体及其作为治疗剂的用途
CN1878792A (zh) Nogo－a结合分子及其药物用途
CN101031588A (zh) 药物组合物，融合物和结合物
CN1886424A (zh) 抗igf－i受体抗体
CN1842538A (zh) 包含连接肽的修饰的结合分子

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: UCB PHARMACY CO.,LTD.

Free format text: FORMER OWNER: CELLTECH R. + D. LTD.

Effective date: 20091218

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20091218

Address after: Brussels

Patentee after: UCB BIOPHARMA SPRL

Address before: Burke County, England

Patentee before: CELLTECH R&D LTD.

CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20080430

CX01 Expiry of patent term