TWI324161B - Antibodies specific for human cd22 and their therapeutic and diagnostic uses - Google Patents

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TWI324161B
TWI324161B TW092112182A TW92112182A TWI324161B TW I324161 B TWI324161 B TW I324161B TW 092112182 A TW092112182 A TW 092112182A TW 92112182 A TW92112182 A TW 92112182A TW I324161 B TWI324161 B TW I324161B
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Description

1324161 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種對B淋巴球抗原一CD22之抗原決定基 具專一性之抗體分子。本發明亦關於該抗體分子之治療用 途及生產該抗體分子之方法。 【先前技術】
在天然抗體分子中有兩條重鏈和兩條輕鏈。每條重鏈與 每條輕鏈之N端均有一變異區。各變異區係為四個各由三 個互補決定區（CDRs)交替之骨架區（FRs)所組成。變異區 中之殘基係慣常根據Kabat等人設計之系統加以編號。此 系統係提出於 Kabat 等人，1987，Sequences of Protein of Immunological Interest，美國國立衛生研究院，NIH，美國 (下文中稱"Kabat等（前述）"）。本發明文中使用此編號系 統，除非另有指明。
Kabat殘基命名並非總是直接對應於胺基酸殘基之線性 編號。實際之胺基酸線性序列可包含較對應於基本變異區 構造之構造元件，無論為框架或CDR，之縮短或插入之嚴 格Kabat編號更少或額外之胺基酸殘基。殘基之正確Kabat 編號可藉由以"標準"Kabat編號序列校對抗體序列之殘基 同源性來測定所給予之抗‘體。 根據Kabat編號，重鏈變異區之CDRs係位於殘基31-35 (CDR-H1)、殘基 50-65 (CDR-H2)和殘基 95-102 (CDR-H3) 處0 根據Kabat編號，輕鏈變異區之CDRs係位於殘基24-34 85070-980508.doc -6- 1324161 (CDR-L1)、殘基 50-56 (CDR-L2)和殘基 89-97 (CDR-L3)處。 CDR接枝性抗體之構築係說明於歐洲專利申請案EP-A-0239400，其揭示一種方法，其藉由使用長核苷酸之定位 突變將老鼠單株抗體之CDRs接枝於人類免疫球蛋白之變 異區之框架區上。CDRs決定抗原之抗體結合專一性且為 變異區之框架上所攜之相對短胜肽序列。
早期藉由CDR接枝對於人類化單株抗體之研究係於可辨 識人工抗原之單株抗體上進行，例如NP。然而，藉由CDR 接枝將一種可辨識溶菌酶之老鼠單株抗體及一種可辨識人 類T細胞上之抗原之大白鼠單株抗體人類化之實例已分別 由 Verhoeyen 等人（Science, 239, 1534-1536，1988)和 Riechmann 等人（Nature，332, 323-324, 1988)說明。
Riechmann等人發現單獨轉移CDRs (如Kabat (Kabat等人 (前述）和 Wu等人，J. Exp. Med” 132. 211-250，1970)定義） 並不足以提供CDR接枝產物足夠之抗原結合活性。已知一 些框架殘基必需改變使其可對應於供體框架區。篩選何框 架殘基必需改變之建議準則係說明於國際專利申請案W0 90/07861中 ° 一些討論CDR接枝抗體之回顧已被發表，包括Vaughan 等人（Nature Biotechnology，1_6, 535-539，1998)。 惡性淋巴瘤係為不同群之癌。主要案例發生於老年人。 非何杰金淋巴瘤（Non-Hodgkins Lymphoma, NHL)係一種疾 病，其現今於美國影響200,000至250,000人。其在美國為 第二快速升高之癌症，升高速率約為每年55,000個新病 [S] 85070-980508.doc 1324161 例。其發生率之升高速率係高過單純藉由人口年齡提高及 暴露於已知風險因子所能計數者。 淋巴瘤之分類複雜，且於近十年來逐漸發展。於丨994 年’經修訂之歐洲人-美國人淋巴瘤（REAL)分類法問世。 此分類法將B細胞（最常被驗出者）、τ細胞及無法分類之來 源之淋巴瘤編列成議定之亞s(subtype)。在每日實施中， 依據其一般組織學外觀之基礎將NHLs分成低、中和高度 組，大體上可反映其臨床行為。 NHL主要係影響淋巴结，但於個別患纟中，腫瘤可能涉 及其他解剖學上之位置，例如：肝、脾、骨趙、肺、腸及 皮膚H病普遍以淋巴結之無痛增生物存在。結節外淋 巴瘤最常影響腸道’雖然機乎各器官之原發性淋巴瘤均已 有文件證明。系統性徵狀包括發燒、出汗、疲倦及體重減 輕。 至目前為止，完全依據疾病之解剖學程度之安亞伯分期 系統（Arm Arbor staging system)，係為NHL治療之主要決定 因素。此資訊可藉由合併其他預後指標，包括：年齡、、企 $乳酸去氫酶濃度及行為能力來使其更完善。縱然如此， 女亞伯分期系統，連同腫瘤之組織學及免疫學亞型仍為治 療之主要決定因素。 低度NHL具有緩慢進展之病程’患者平均可存活8至1〇 年。現有之療法對存活率少有影響，雖然局部疾病之放射 治療與系統性徵狀之化療可改善患者之生活品質。複人化 療可保留給復發之疾病。中度疾病及，特： 85070-980508.doc 係極具侵略性並有散播傾向者。此程度之疾病需要緊急治 療放射療法可為具有極巨大腫塊患者之治療之有用構 許多不同之化療法已被使用，且半數以上患者可獲得 長期無疾病之存活。以幹細胞支撐之高劑量治療最初係用 於具有復發性或頑抗疾病之患者，㈣前更發現其可用 於具有低風險疾病之患者之第一線治療。近年來於提高侵 略性之治療法之傾向必需與具有NHL之許多患者之普遍高 齡及相對性衰弱相抗衡，且需使治療之毒性相 配於各個患 者疾病之個別預後。 頃需要更有效且耐受性較佳之改良性治療。最近問世之 藥劑包括新穎細胞毒性藥物'漸進式合併至組合内，及導 入抗體基礎之療法。 非何杰金淋巴瘤涵括B細胞淋巴瘤之範圍。B細胞抗原 因而成為抗體療法之適當標的物。 CD22係一種135 kDa之膜糖蛋白，其隸屬唾液酸結合蛋 白質（稱為唾液酸附著素sial〇a(jhesin)之家族。其可於b細 胞發展之早期偵測到，與IgD同時出現於該細胞表面且可 發現於最成熟之B細胞上《其隨b細胞活化而增加表現。 CD22於終端分化時消失且通常被指出於漿細胞上缺乏。 因此此等内化抗原存在於前B細胞和成熟B細胞之表面 上’但不存在於幹細胞或漿細胞之表面上。 人類具有兩種CD22之同分異構物（isoform)。主要型式 (CD22p)於胞外區内含有7個類免疫球蛋白（類Ig)功能區 域。CD22a變體缺乏類lg功能區域4且可能具有—個被截斷 85070-980508.doc -9· m 之細胞質内區域。可阻斷CD22附著於單核球、嗜中性白 血球、淋巴球及紅血球上之抗體已知其係結合於第一或第 二類Ig功能區域内。 CD22之細胞質内區域在與B細胞抗原受體接合時經酪胺 酸磷酸酯化並與Lyk，Syk和磷脂酸肌醇3-激酶連接。CD22 之功能係為下降調節B細胞活化閾值。其亦可透過與細胞 交互作用產生適當唾液酸糖結合來調節細胞附著。 CD22係表現於大部分B細胞白血病及淋巴瘤，包括 NHL、急性淋巴細胞白血病（B-ALL)、慢性淋巴細胞白血 病（B-CLL)及特別是非淋巴細胞白血病（ANLL)。 抗CD22單株抗體已說明於先前技藝中。W0 98/41641說 明於VH44及VLl〇〇處具半胱胺酸殘基之重組抗-CD22抗體。 WO 96/04925 說明抗-CD22 抗體 LL2 之 VH 和 VL 區。US 5,686,072說明抗-CD22與抗-CD19免疫毒素之組合。WO 98/42378說明應用裸抗-CD22抗體以治療B細胞惡性腫瘤。 一些抗體基礎性療法最近已被認可，例如：利透生 (Rituxan)(—種專一於CD20之未標示欲合人類γΐ (+πιγ1 V-區）），或正針對此疾病作臨床試驗。其依賴補體-或ADCC-調節性B細胞殺滅或使用放射性核素，例如：mI或90Y，其 對於醫師和患者均有相關之製備與使用問題。頃需要一種 可重覆使用且簡易並有效率生產之抗體分子以治療NHL。 亦需要一種對於CD22具有高親和力及對人類有低免疫原 性之抗體分子。 【發明内容】 85070-980508.doc -10- 第一方面，本發明提供一種抗體分子，其對人類CD22 具有專一性，其包含一重鏈，其中之變異區包含一個CDR (如Kabat (前述）所定義），CDR-H1具有圖1之H1序列（SEQ ID NO ： 1) ，CDR-H2具有圖1之H2序列（SEQ ID NO : 2)或潛在糖甞化 位置已移除之H2序列，或位置60處之離胺酸殘基（根據 Kabat編號）已被替代性胺基酸取代之H2序列，或糖甞化位 置與位置60處之反應性離胺酸均被移除之H2序列或CDR-H3具有圖1之H3序列（SEQ ID NO : 3)。 本發明之第一方面之抗體分子之重鏈變異區包含至少一 個選自 HI、H2和 H3(SEQ ID NO : 1、SEQ ID NO : 2和 SEQ ID NO : 3)之CDR。較佳者，該抗體分子之重鏈變異區内 包含至少兩個且更佳為所有三個CDRs。 本發明之第二方面係提供一種對人類CD22具專一性之 抗體分子，其包含一輕鏈，其中之變異區包含一個CDR (如Kabat (前述）所定義），CDR-L1具有圖1之L1序列（SEQ ID NO : 4)，CDR-L2 具有圖 1之 L2序列（SEQ ID NO : 5)或 CDR-L3 具有圖 1之 L3序列（SEQ ID NO : 6)。 本發明之第二方面之抗體分子之輕鏈變異區包含至少一 個選自 LI、L2和 L3(SEQ ID NO : 4、SEQ ID NO : 5和 SEQ ID NO : 6)之CDR。較佳者，該抗體分子之重鏈變異區内 包含至少兩個且更佳為所有三個CDRs。 本發明之第一和第二方面之抗體分子較佳係分別具有一 互補輕鍵或一互補重鍵。 85070-980508.doc -11 - 1324161
較佳者，本發明之第一和第二方面之抗體分子包含一重 鏈，其中之變異區包含一個CDR(如Kabat (前述）所定義）， CDR-H1具有圖 1之 H1序列（SEQ ID NO : 1)，CDR-H2具有 圖1之H2序列（SEQ ID NO : 2)或潛在糖苷化位置已移除之 H2序列，或位置60處之離胺酸殘基（根據Kabat編號）已被 替代性胺基酸取代之H2序列，或糖苷化位置與位置60處之 反應性離胺酸均被移除之H2序列或CDR-H3具有圖1之H3 序列（SEQ ID NO : 3)及一輕鏈，其中之變異區包含一個 CDR (如Kabat (前述）所定義），CDR-L1具有圖1之L1序列 (SEQ ID NO : 4)，CDR-L2具有圖 1之 L2序列（SEQ ID NO : 5)或 CDR-L3 具有圖 1 之L3 序列（SEQ ID NO : 6)。 上述SEQ ID NO : 1至6及圖1中所提供之CDRs係衍生自 老鼠單株抗體5/44。
老鼠5/44抗體之變異區之完整序列顯示於圖2(輕鏈）（SEQ ID NO : 7)和圖3(重鏈）（SEQ ID NO : 8)。此等老鼠抗體於 下文中亦稱"供體抗體"或"鼠科單株抗體”。 本發明之第一或第二方面之第一個可替代性之較佳具體 實施例係為具有分別顯示於圖2(SEQ ID NO :7)和圖3(SEQ ID NO : 8)之輕鏈和重鏈變異區序列之老鼠單株抗體5/44。 5/44之輕鏈丨亙定區係為κ且重鏈怪定區係為IgG 1。 在第二個可替代性之較佳具體實施例中，根據本發明之 第一及第二方面之抗體係為嵌合老鼠/人類抗體分子，本 文中稱之為嵌合5/44抗體分子。嵌合抗體分子包含老鼠單 株抗體5/44之變異區（SEQ ID NO : 7和8)和人類恆定區。較 85070-980508.doc -12-
1324161 佳者，嵌合5/44抗體分子包含人類Ck區（Hieter等人，Cell， U，197-207，1980; Genebank 編號 J00241)於輕鏈中及人類 γ4 區（Flanagan 等人，Nature，300. 709-713，1982)於重鏈 中，視需要於位置241處由脯胺酸殘基取代絲胺酸殘基。 較佳者，本發明之抗體包含一重鏈，其中之變異區之
CDR-H2(如Kabat等人（前述）之定義）包含H2…其中之潛在 糖荅化位置已被移除且其出乎意外地提高嵌合5/44抗體對 CD22抗原之親和力且其較佳為CDR-H2具H2’（SEQ ID NO : 13)之序列。 另外，本發明之抗體可包含一重鏈，其中之變異區之 CDR-H2(如Kabat等人（前述）之定義）包含H2"，其中位置60 處之離胺酸殘基，其位於CDR-H2中之暴露位置且其被認 為具有與結合劑反應而導致抗原結合親和力降低之潛力， 係被替代性胺基酸保守性取代。較佳者，CDR-H2具H2" (SEQ ID NO : 15)之序列。
另外，本發明之抗體可包含一重鏈，其中之變異區之 CDR-H2(如Kabat等人（前述）之定義）包含H2"'，其中潛在糖 苷化位置和位置60處之離胺酸殘基，係被替代性胺基酸取 代。較佳者，CDR-H2具 H2"· (SEQ ID NO : 16)之序列。 在第三個可替代性之較佳具體實施例中，根據本發明之 第一及第二方面之抗體係為一種CDR接枝性抗體分子。本 文所使用之"CDR-接枝性抗體分子"係指一種抗體分子，其 中來自供體抗體之包含一或多個CDRs(視需要包括一個經 修飾CDR)(例如：鼠科單株抗體）之重鏈及/或輕鏈接枝於 85070-980508.doc •13·
1324161 受體抗體（例如：人類抗體）之重及/或輕鏈變異區框架内。 較佳者，此等CDR-接枝性抗體具有一變異區，其包含 人類受體框架區及一或多個上述供體CDRs。 CDRs接枝時，任何適當受體變異區框架序列可視CDRs 來源之供體抗體之種類/型式來使用，包括老鼠、靈長類 及人類框架區。可使用於本發明之人類框架之實例為
KOL，NEWM，REI，EU，TUR，TEI，LAY和 POM (Kabat 等人（前述））。舉例言之，KOL和NEWM可用於重鏈，REI 可用於輕鏈且EU，LAY和POM可用於重鏈和輕鏈。此外， 可使用人類種細胞（germline)序列。輕鏈之較佳框架區係 為顯示於圖5 (SEQ ID NO : 17)之人類種細胞亞群序列 (DPK9+JK1)。重鏈之較佳框架區係為顯示於圖6 (SEQ ID NO : 21)之人類種細胞亞群序列（DP7+JH4)。
在本發明之CDR-接枝性抗體中，較佳為使用具有於供 體抗體鏈同源之鏈之受體抗體。受體重和輕鏈不必衍生自 相同抗體且可視需要包含具有衍生自不同鏈之框架區之組 合鏈。 在本發明之CDR-接枝性抗體中，框架區域亦不需具有 與受體抗體完全相同之序列。例如：該受體鏈種類或型式 之非尋常殘基可改變成較常發生之殘基。或者，可改變受 體框架區之選定殘基，使其對應於供體抗體之相同位置上 所發現之殘基。應維持此等改變以使供體受體親和力回復 之需要降低最低。篩選受體框架區中可能需要改變之殘基 之流程說明於WO 91/09967中》 85070-980508.doc -14-
1324161 較佳者，根據本發明之CDR接枝性抗體分子中，倘若受 體輕鏈具有人類亞群DPK9+JK1序列（顯示於圖5)(SEQ ID NO : 17 (DPK9)+SEQ ID NO : 18 (JK1))，則輕鏈之受體框 架區於位置2, 4, 37, 38, 45和60處包含供體殘基且可額外於 位置3處包含一個供體殘基（根據Kabat等人（前述））。
較佳者，本發明之CDR接枝性抗體分子中，倘若受體重 鏈具有人類亞群DP7+JH4序列（顯示於圖6)(SEQ ID NO : 21 (DP7)+SEQ ID NO : 22 (JH4))，貝丨J重鏈之受體框架區除了 一或多個供體CDRs之外，尚於位置1,28,48,71和93處包含 供體殘基且可額外於位置67和69處包含供體殘基（根據 Kabat等人（前述））。 供體殘基係為來自供體抗體之殘基，即：CDRs衍生源 頭之抗體。 較佳者，本發明之抗體包含一條重鏈，其中變異區之 CDR-H2 (如Kabat等人（前述）之定義）包含H2,，其中之潛在 糖苷化位置序列已被移除以便提高嵌合5/44抗體對CD22抗 原之親和力且其CDR-H2較佳具有H2·之序列（SEQ ID NO: 13)。 另外，本發明之抗體可包含一重鏈，其中之CDR-H2(如 Kabat等人（前述）之定義）包含H2"，其内離胺酸殘基在位置 60，其位於CDR-H2中之暴露位置且其被認為具有與結合 劑反應而導致抗原結合親和力降低之潛力，係被替代性胺 基酸保守性取代。較佳者，CDR-H2具H2" (SEQ ID NO : 15)之序列。 85070-980508.doc -15·
另外’本發明之抗體可包含一重鏈，其中之變異區之 CDR-H2(如Kabat等人（前述）之定義）包含H2"'，其中潛在糖 嘗化位置和位置60處之離胺酸殘基，係被替代性胺基酸取 代。較佳者，CDR-H2具 H2"1 (SEQ ID NO : 16)之序列。 本發明之抗體分子可包含：一個完整抗體分子，其具有 全長重和輕鍵，其片段’例如Fab、經修飾Fab、Fab1、 F(ab')2或Fv片段；一條輕鏈單體或雙體；一個單鏈抗體， 例如：一個單鏈Fv，其中之重鏈和輕鏈變異區係藉由胜肽 連結。同樣地，重和輕鏈變異區可與其他適當抗體功能區 域互相組合。 本發明之抗體分子可有一效應子或一受體與之相連。例 如：其可具有一個巨環，其用以螯合重金屬原子，或毒 素’例如：蓖麻毒蛋白（Ricin)，藉由共價鍵結構與之相連 接。或者’可使用重組DNA技術之步驟生產一種抗體分 子’其中之Fc片段（CH2，CH3和樞紐區）、CH2和CH3功能 區域或完整免疫球蛋白分子之CH3功能區域已取代成，或 由胜肽鍵結連接至一種功能性非免疫球蛋白蛋白質，例 如：一種酵素或毒素分子。 本發明之抗體較佳為具有至少〇 85χ1〇-ιο Μ之結合親和 力，更佳為至少〇.75χ1〇·10μ且最佳為至少〇.5χ1〇-10Μ。 較佳者’本發明之抗體包含輕鏈變異區5/44 gL1(SEQID NO · 19)和重鍵變異區5/44_gH7(SEQ ID N〇 : 27)。此等輕 和重鏈之變異區序列分別顯示於圖5和6中。 本發明亦關於對CD22之親和力有改善之本發明抗體分 85070-980508.doc -16· 1324161
子之變體。此等變體之獲得可藉由一些親和性熟成流程， 包括：將 CDRs 突變（Yang等人，J. Mol. Biol.，254, 392-403, 1995)，鏈重排（Marks 等人，Bio/Technology，j_0, 779-783, 1992)，使用大腸桿菌（E. coli)之突變株（Low等人，J. Mol. Biol., 250_, 359-368, 1996)，DNA 重排（Patten 等人，Curr. Opin. Biotechnol.，及，724-733，1997)，嗤菌體展示 (Thompson 等人，J. Mol. Biol.，256. 77-88，1996)和性 PCR (Crameri等人，Nature, 391. 288-291，1998)。Vaughan等人 (前述）討論此等親和性熟成之方法。 本發明亦提供一種編碼本發明之抗體分子之重及/或輕 鏈之DNA序列。 較佳者，該DNA序列編碼本發明之抗體分子之重或輕 鍵。 本發明之DNA序列可包含合成例如：藉由化學加工性之 DNA、cDNA、基因組DNA或其任意組合者。
本發明亦關於一種選殖或表現載體，其包含一或多個本 發明之DNA序列。較佳者，該選殖或表現載體包含兩個 DNA序列，其分別編碼本發明抗體分子之輕鏈和重鏈。 可構築載體之通用方法、轉染方法和培養方法為熟習此 項技藝者所熟知。在此方面之參考文獻有"Current Protocols in Molecular Biology", 1999，F. M. Ausubel(編 著），Wiley Interscience, New York and the Maniatis Manual produced by Cold Spring Harbor Publishing o 編碼本發明抗體分子之DNA序列可藉由彼等熟習此項技 85070-980508.doc -17-
1324161 藝者熟知之方法獲得。例如：編碼部分或全部之抗體重和 輕鏈之DNA序列可如需要自已決定之DNA序列或根據相對 胺基酸序列加以合成。 編碼受體框架序列之DNA係彼等熟習此項技藝者可廣泛 取知且可根據其已知之胺基酸序列合成者。 刀子生物學之標準技術可用以製備編碼本發明抗體分子 之DNA序列。所欲DNA序列之合成可完全或部分使用寡核 苷酸合成技術。定位突變和聚合酶鏈鎖反應（pcR)技術可 適時使用。 任何適當之宿主細胞/载體系統均可用以表現編碼本發. 明抗體分子之DNA序列。細菌，例如：大腸桿菌，和其他 微生物系統可部分使用，以表現抗體片段，例如：Fab和 F(ab·)2片段，且特別是以片段和單鏈抗體片段例如：單 鏈Fvs»真核生物’例如：哺乳類’帛主細胞表現系統可 用以生產較大抗體分子，包括完整抗體分子。適當之哺乳 類宿主細胞包括CHO，骨髓癌或融合瘤細胞。 本發明亦提供-種用以生產根據本發明之抗體分子之彳 · 法’其包含將含本發明之載體之宿主細胞培養於適於自編 碼本發明抗體分子之DNA表現出蛋白質之條件下，並分離 抗體分子。 抗體分子可僅包含一重或輕鏈多狀，於此狀況下，僅需 使用一重鏈或輕鏈多肽編碼序列來轉染宿主細胞。要生產 包含重和輕鏈之產物時，該細胞株可經兩種載體轉染，第 一種載體編碼-輕鏈多肽且第二種載體編碼一重鏈多肽。 85070-980508.doc [S] •18· 或者可使用單—載體，該載體包括編碼輕鏈和重鍵多 之序列。 本發明亦提供-種治療性或珍斷性組合物，其包含本發 明之抗體分子併同醫藥上可接受之賦形劑、稀釋劑或載 體。 本發明亦提供-種用以製備包含本發明之抗體分子與醫 藥上可接又之賦形劑、稀釋劑或載體—S混合之治療性或 診斷性組合物方法。 抗體分子可為治療性或診斷性組合物中之唯一活性成份 或可連同其它活性成份，包括其它抗體成份，例如：抗_丁 細胞、抗IFNy或抗-LPS抗體’或非抗體成份’例如：黃嘌 Ο 醫藥組合物較佳係包含一種治療有效量之本發明抗體。 本文所使用之”治療有效量"一辭係指治療、緩和或預防目 標疾病或病症，或展現可測得之治療或預防效果所需之治 療劑用量。對於任何抗體，治療有效劑量可初步以細胞培 養分析或於動物模型，通常於齧齒類動物、兔、狗、豬或 靈長類中估算。動物模型可用以決定適當之濃度範圍和投 予途徑。此等資訊可再用以決定施用於人類之有效劑量和 途徑。 對於人類個體之精確有效量係取決於疾病狀態之嚴重 性、膳食、投予時間和頻率、藥物組合、反應敏感度和對 治療之耐性/反應。此用量可藉由例行實驗決定且在醫師 可判斷之範圍内。大體上，有效劑量可自0.01毫克/公斤至 85070-980508.doc •19- 1324161 50毫克/公斤，較佳為〇.丨毫克/公斤至2〇毫克/公斤，更佳為 約15毫克/公斤。 組合物可個別投予患者或可與其它試劑、藥物或荷爾蒙 併同投予。 本發明抗體分子之投予劑量係取決於所欲治療之病症、 惡性淋巴瘤或血癌之級別及該抗體分子是否為預防性使用 或用以治療已存在之病症。 供劑頻率係取決於抗體分子之半生期與其有效期◊倘若 一抗體分子具有短半期（例如：2至1〇小時），則一天可能需·β 要給予一或多劑。或者，倘若抗體分子具有長半生期（例· 如2至15天），則可能僅需每天、每週或甚至每丨或2個月給 予一劑。 醫藥組合物亦可包含一種用於抗體投予之醫藥上可接受 之載體。載體本身應無法誘導有害於接受該組合物之個體 之抗體生產且應為無毒者。適當之載體可為大的，緩和代 謝的巨分子，例如：蛋白質、多肽、微脂體、多聽、聚乳 酸、聚甘醇酸、聚合胺基酸、胺基酸共聚物和失活病毒肖馨 粒。 可使用之醫藥上可接受之鹽類，例如：礦酸鹽類，例 如：鹽酸鹽、溴酸鹽、磷酸鹽和硫酸鹽，或有胺基酸之鹽 類，例如.醋酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽和苯甲酸鹽。 治療性組合物中之醫藥上可接受之載體可額外包含液 體’例如：水、生理鹽水、甘油和乙醇。此外辅助物 質，例如：溼潤或乳化劑或pH緩衝性物質，可存在於此等 85070-980508.doc Γ S3 -20- 組合物中。此等載體使醫藥組 之藥錠、藥片、糖衣錠、膠囊 和懸浮液。 合物可被調配成由患者攝食 、液體、膠體、糖漿、藥漿 車乂佳之才又予型式包括適於非經腸投予之型式，例如：藉 由注射或滴注，例如藉由彈丸式注射或連續滴注。若產品 係用於庄射或滴庄，則其型式可為溶於油性或水性載劑中 :懸浮液、溶液或乳化液，且其可包含調配劑，例如懸 浮防腐安定及/或分散劑。或者，抗體分子可呈乾燥 型式，於使用前再以適當之無菌液體復水。 本發明之組合物一經調配後即可直接施用於個體。受治 療個體可為動物。然而，該組合物較佳為適於投予人類個 體。 本發明之醫藥組合物之投予可藉由任何途徑其包括但 不限於：口服、靜脈内、肌内、動脈内、脊髓内、椎管 内、腦室内、穿透皮膚、經皮（例如參見：WO98/20734)、 皮下、腹腔内、鼻内、腸内、局部、舌下、陰道内或直腸 途徑。亦可使用弱喷劑來投予本發明之醫藥組合物。典型 地，治療組合物可製成可注射之液體溶液或懸浮液。亦可 製成適合於注射前溶解或懸浮於液態載劑内之固體型式。 組合物之直接傳送通常係藉由皮下、腹膜内、靜脈内或 肌内注射’或傳送至組織之胞間隙内。組合物亦可投予至 損害内。劑量療法可為單劑法或多劑法。 組合物内之活性成份較佳為抗體分子。如此，其可能在 腸胃道中被分解。因此，倘若組合物係藉由使用腸胃道之 85070-980508.doc -21 - 1324161 途徑投予，則該組合物必需包含可保護抗體免受分解但可 於經腸胃道吸收後馬上釋放出抗體之試劑。 醫藥可接受性載體之完整討論可得於Remington's
Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, N. J. 1991)〇
亦假設本發明之抗體之投與可藉由基因療法之應用。為 達此目的，將編碼抗體分子之重和輕鏈之DNA序列於適當 之DNA組成調控下導入患者體内，使該抗體鏈可自該 DNASEQ ID NO現出來並於原處組合。 本發明亦提供用以治療由細胞表現性CD22調節之疾病 之本發明抗體分子。 本發明進一步提供使用根據本發明之抗體分子以製造用 以治療由細胞表現性CD22調節之疾病之藥物。
本發明之抗體分子使用於任何欲降低存在於人類或動物 體之細胞表現性CD22之量之療法中。此等CD22-表現性細 胞可於體内循環或以不希望之高量局部存在於體内之特定 位置。例如：細胞表現性CD22之量升高可能發生於B細胞 淋巴瘤及血癌。本發明之抗體分子可應用於由細胞表現性 CD22調節之疾病之療法中。 本發明之抗體分子較佳係用以治療惡性淋巴瘤和血癌， 最佳為NHL。 本發明亦提供一種用以治療罹患或具由細胞表現性 CD22調節之病症之風險之人類或動物個體之方法，該方 法包含對個體投予有效量之本發明抗體分子。 85070-980508.doc -22- C S3 1324161 本發明之抗體分子亦可用於診斷中，例如於生體内診斷 及映像出涉及表現CD22之細胞之疾病狀態。 【實施方式】 實例1 :候選抗體之產生 利用下列篩選準則自融合瘤篩選一群可抗CD22之抗 體：對Daudi細胞之結合，在Daudi細胞上之内化，對周邊 血液單核細胞（PBMC)之結合，在PBMC上之内化，親和力 (大於1(Γ9Μ)，老鼠γΐ和生產速率。5/44係為選出之較佳抗
體。
實例2 :嵌合5/44抗體分子之基因選殖和表現 5/44融合瘤細胞之製備及從其中製備RNA 融合瘤5/44係藉由傳統融合瘤技術以人類CD22蛋白質免 疫小鼠後產生。利用RNEasy套組（Qiagen，Crawley, UK ; Catalogue No. 74106)自5/44融合瘤細胞製備RNA。如下述 將所得之RNA逆轉錄成cDNA。 CD22在NHL腫瘤上之分佈 進行免疫組織化學研究，使用5/44抗-CD22單株抗體以 評估色斑之發生率及分佈。對照抗CD20和抗-CD79a抗體 可包含於研究中以確認腫瘤之B細胞區。 總共研究50個腫瘤並將其藉由工作分類及REAL分類系 統歸類： • 7個B淋巴細胞性血癌/淋巴瘤（高/1) • 4個B-CLL/小淋巴細胞性淋巴瘤（低/A) • 3個淋巴漿細胞淋巴瘤/免疫細胞瘤（低/A) 85070-980508.doc -23-
1324161 • 1 個被套細胞（mantle cell)(Int/F) • 14個濾泡中心淋巴瘤（低至Int/D) • 13個擴散之大細胞淋巴瘤（Int至高/G，H) • 6個無法歸類者（K) • 2個T細胞淋巴瘤
40個B細胞淋巴瘤對於具有0.1微克/毫升5/44抗體之 CD22抗原為陽性且又有6個於提高至0.5微克/毫升時變成 陽性。剩下2個B細胞腫瘤於0.1微克/毫升時為陰性，並未 剩下足夠之組織可於較高濃度下測試。然而，另一種 Celltech抗-CD22抗體6/13之平行試驗，其可有較5/44更強 之成斑性，結果為48個B細胞淋巴瘤對於CD22染色均為陽 性。 因此，可推斷CD22抗原係廣泛表現於B細胞淋巴瘤上並 因而在NHL之免疫治療中可供作適當之標的。 5/44 VH和VL之PCR選殖 用於5/44重和輕鏈變異區之選殖之cDNA序列之合成係 利用逆轉錄酶生產存在於總RNA中之mRNA之單股cDNA拷 貝。再將其作為使用專一性寡核苷酸引子之聚合酶鏈鎖反 應（PCR)之鼠類V-區序列增幅用之模板。 a) cDNA合成 cDNA之合成係於20微升反應體積中，其包含下列試 劑：50 mM Tris-HCl pH 8.3，75 mM KC1，10 mM二硫秀克 糖醇（dithiothreitol)，3 mM MgCh，〇·5 mM各種去氧核糖 核苷三磷酸鹽，20單位RNAsin，75奈克隨機六核甞酸引 85070-980508.doc -24- 1324161 子，2微克5/44 RNA和200單位馬洛尼鼠（Moloney Murine) 血癌病毒逆轉錄酶。於42°C下培養60分鐘後，將之於95°C 下加熱5分鐘以終止反應。
b) PCR
使用專一於重和輕鏈之引子組合物將cDNA進行PCR。 使用經設計可與信號胜肽之保守序列鏈合之退化引子庫作 為前置引子。此等序列均依序包含：一個自其5'端開始7個 核甞酸之限制酶切割位置（VL Sful ; VH Hindlll)，序列 GCCGCCACC(SEQ ID NO:50)，以使產生之mRNAs達最 適之轉譯，一個起始密碼組和立基於已知老鼠抗體之引導 胜肤序列之20-30個核誓酸（Kabat等人，Sequences of proteins of proteins of immunological interest，第五版， 1991，美國衛生與人類服務部，公共健康服務，國立衛生 研究院）。
3’引子係經設計以跨越抗體之框架4 J-C連接點並包含 BsiWI酵素之限制位置以促進VL PCR片段之選殖。重鏈3' 引子係為經設計可跨越抗體之J-C連接點之混合物。3'引子 包含一個可促進選殖之Apal限制位置。引子之3’區包含一 段混合序列，其係立基於彼等發現於已知老鼠抗體中者 (Kabat等人，1991，前述）。 上述引子之組合可使VH和乂丨之PCR產物直接選殖至適當 表現載體内（見下文）以生產嵌合（老鼠-人類）重和輕鏈且使 此等基因於哺乳類細胞中表現以生產所欲異構型之嵌合抗 體。 85070-980508.doc -25- 1324161 PCR之準備（100微升）係如下建立。各反應均包含10 mM Tris-HCl pH 8_3，1.5 mM MgCl2，50 mM Κα，0.〇l〇/o w/v 明膠，0.25 mM之各種去氧核糖核甞三磷酸鹽，l〇皮莫耳 (pmole) 5'引子混合物，10皮莫耳3'引子，1微升cDNA和1 單位Taq聚合酶。將反應於95°C下置5分鐘，並開始循環 94°C-1分鐘，55°C-1分鐘及72。〇1分鐘。30回合後’取各 反應之部分於洋菜膠上進行電泳分析。 針對重鏈V-區，僅於當框架I之起始處内鏈合之引子庫 取代信號胜肽引子時可獲得增幅之DNA產物。將該片刻選 殖入DNA定序載體。測定DNA序列並將之轉譯成推論之胺 基酸序列。參考實驗測得之N端蛋白質序列以確認此推論 序列。圖2和3分別顯示老鼠單株5/44之成熟輕和重鏈V-區 之DNA/蛋白質序列。 c) PCR片段之分子選殖 再將鼠類V-區序列轉殖至表現載體pMRRIO.l和pMRR14 (圖7)。此等分別用以表現輕和重鏈之載體包含編碼人類κ 輕鏈和人類γ4重鏈之恆定區之DNA。將VL區藉由限制性分 解和接合，利用Sful和Bsi WI限制位置次選殖入表現載 體，產生pMRRIO (544cL)質體。重鏈DNA之增幅係藉由 PCR，使用5·引子以導入信號胜肽，因其無法於選殖策略 中取得，故使用來自不同自行設計之融合瘤（稱為162)之老 鼠重鏈抗體引導子。5’引子具有下列序列： 5gcgcgcaagcttgccgccaccatggacttcggattctc
TCTCGTGTTCCTGGCACTCATTCTCAAGGGAGTGCAGTG 85070-980508.doc -26- [S] 1324161
TGAGGTGCAGCTCGTCGAGTCTGG3’（SEQ ID NO : 51)。 反置引子相同於原始VH基因選殖所使用者。產生之PCR 產物經設計具有Hindlll和Apal，將之次選殖，則確認其 DNA序列，產生pMRR14 (544cH)質體。將二表現載體過渡 性共同轉染至CHO細胞内，產生嵌合C5/44抗體。此係根 據廠商之規範使用脂染胺（Lipofectamine)試劑完成 (InVitrogen : Life Technology，Groningen，荷蘭，目錄號 碼：11668-027)。
糖苷化位置反應性離胺酸之移除 CDR-H2中所觀察到之潛在N·連糖甞化位置序列具有胺 基酸序列N-Y-T(圖3)。SDS-PAGE，西方墨潰和5/44和其 片段（包括Fab)之膠體之碳水化合物染色指出此位置確實經 糖苷化（未顯示）。此外，CDR-H2内之暴露位置處觀察到一 離胺酸殘基，其係藉由提供額外可與抗體可結合之試劑相 結合之位置而具有降低抗體之結合親和力之潛力。 使用PCR策略以將胺基酸取代導入CDR-H2序列内以嘗 試移除糖苷化位置及/或反應性離胺酸，如圖4之顯示。使 用編碼突變N55Q、T57A或T57V之前置引子以移除糖苷化 位置（圖4)並製造第四個包含K60R取代之前置引子以移除 反應性離胺酸殘基（圖4)。於此等PCR增幅中均使用框架4 反置引子。將經設計可被Xbal和Apal酵素分解之PCR產物 敌入pMRR14 (544cH)質體（亦已Xbal和Apal切割）中以產生 編碼此參種突變之表現質體。N55Q、T57A或T57V藉由將 胺基酸序列改變成非共同N-X-T/S而消除糖苷化位置，且 85070-980508.doc -27· 1324161 K60R突變將具潛力之反應性離胺酸取代成同樣具有正電 荷之精胺酸殘基。將所產生之cH變體質體與cL質體共同轉 染以產生表現之嵌合抗體變體。 嵌合基因之活性評估 嵌合基因之活性係於過渡性轉染至CHO細胞後評估。 c)藉由BiaCore分析測定親和常數
糖苷化位置或其反應性離胺酸已移除之嵌合5/44或其變 體之親和力係利用BIA技術調查對CD22-mFc構築體之結 合。結果顯示於圖8。所有結合測定係於BIAcore™ 2000設 備（Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden)中進行。該分 析之進行係藉由以固定化抗老鼠Fc補捉CD22mFc。抗體係 呈溶解相。將樣品、標準品，和對照品（50微升）注於固定 化抗-老鼠Fc上，再注入呈溶解相之抗體。各回合之後， 以50微升之40 mM HC1於30微升/分鐘之下將表面再生。動 力學分析之進行係使用BIAevaluation 3.1版軟體 (Pharmacia) ° 移除T57A構築體中之糖苷化位置造成與嵌合5/44相較之 結合速率（on-rate)務較快而脫離速率（off-rate)顯著較慢， 使親和力改善約5倍。N55Q突變對親和力無影響。此結果 係出乎預料，因其表示移除碳水化合物本身明顯對於結合 無影響（如具有N55Q變化）。改善之親和力僅可見於具 T57A改變者。一個可能之解釋為：無關於碳水化合物之存 在，位置57處之羥丁胺酸對結合具有負面影響，其經羥丁 胺酸轉換成丙胺酸而被移除。此假說指丙胺酸之小尺寸是 85070-980508.doc -28- [ 1324161 重要的，羥丁胺酸之負面影響係因其尺寸，其可由使用 T57V突變所得之結果所支持：以纈胺酸於位置57處取代 並無利益（結果未顯示）。 藉由K60R突變移除離胺酸對親和力有中性影響，即： 導入精胺酸以移除潛在反應位置並不影響親和力。 用以移除糖苷化位置和用以移除反應性離胺酸之突變因 此均包含於人類化設計中。 實例2 : 5/44之CDR-接枝
5/44抗體之重鏈和輕鏈變異區之基因之分子選殖及其於 生產嵌合（老鼠/人類）5/44抗體之應用已說明於上文。老鼠 5/44 VL和VH功能區域之核苷酸和胺基酸序列分別顯示於圖 2和3(SEQ ID NO : 7和8)中。本實例說明根據Adair等人之 方法（WO 91/09967)將5/44抗體之CDR-接枝於人類框架上 以降低於人體内之潛在致免疫性。 5/44輕鏈之CDR-接枝
蛋白質序列排列與來自人類第I分組κ輕鏈V區之一致性 序列有64%之相同度。因此，構築CDR-接枝性輕鏈時，可 對應於彼等人類VK第I分組種細胞012，DPK9序列選擇受體 框架。框架4受體序列係衍生自人類J-區種細胞序文JK1。 鼠類5/44之框架區與受體序列之胺基酸序列比較提供於 圖5且顯示供體與受體鏈間有27個差異。於各個位置，透 過對襯墊或在VH/VL介面處之影響分析可能直接或間接對 抗原結合有貢獻之鼠類殘基。倘若一鼠類殘基被認為重要 且與人類殘基之大小、極性或電荷有足夠之差異，則保留 85070-980508.doc -29- 該鼠類殘基。根據此分析構築兩種CDR-接枝性輕鏈，其 具有提供於SEQ ID NO : 19和SEQ ID NO : 20(圖5)中之序 列。 5/44重鏈之CDR-接枝 5/44重鏈之CDR-接枝之使用與上述用於輕鏈者相同之策 略來完成。5/44重鏈之V-功能區域已知同源於歸屬於第I分 組之人類重鏈（70%序列相同度）且因此使用人類第I分組種 細胞框架VH1-3，DP7作為受體框架。框架4受體序列係衍生 自人類J-區種細胞序列JH4。 5/44重鏈與框架區之比較顯示於圖6，其中可見5/44重鏈 與受體序列有22個位置有差異。分析其中任一個對於抗原 結合之貢獻可構築出5種CDR-接枝性重鏈，其具有提供於 SEQ ID NO ： 23 > SEQ ID NO ： 24 ' SEQ ID NO ： 25 ' SEQ ID NO : 26和 SEQ ID NO : 27(圖 6)諸序列。 接枝序列之基因之構築 將基因設計成編碼gHl和gLl，並設計及構築一系列之 重疊寡核苷酸（圖9)。使用PCR組合技術以構築CDR-接枝 性V區基因。反應體積設定為100微升，其中包含10 mM Tris-HCl pH 8.3，1.5 mM MgCl2, 50 mM KC1，0.001%明 膠，0.25 mM各種去氧核糖核苷三磷酸鹽，1皮莫耳之各種 •'内部"引子（ΤΙ，T2，T3，Bl，B2，B3)，10皮莫耳之各種" 外部"引子（FI，R1)，和1單位之Taq聚合酶（AmpliTaq， Applied BioSystems，目錄編號：N808-0171)。PCR循環參數 為94°C-1分鐘，55°C-1分鐘和72°C-1分鐘，進行30回合。 85070-980508.doc -30- [ 1324161 再將反應產物於1.5%洋菜膠體上分離，切下並使用 QIAGEN分離管（spin column) (QIAquick膠體萃取套組，目錄編號：28706)回收。將 DNA溶離成體積30微升。再根據廠商之說明將gHl和gLl DNA(1 微升）選殖至 InVitrogen ΤΟΡΟ ΤΑ選殖載體 pCR2.1
TOPO(目錄編號：K4500-01) 〇使用此非表現載體作為選殖 中間體以辅助大數量品系（clones)之定序。利用載體專一 性之DNA定序係用以鑑定正確之含gHl和gL ί之品系，製 造質體pCR 2.1(544gHl)和 pCR 2.1(544gLl)(圖 10)。 使用核苷酸匣取代法以製造人類化接枝gH4，5，6和7， 和gL2。圖11顯示寡核甞酸E之設計。構築各變體時，係 以所顯示之限制酶（Xmal/SacII用於重鏈，Xmal/BstEII用於 輕鏈）切割載體（pCR2.1 (544gHl)或 pCR2.1 (544gLl))。將大 載體片段以洋菜膠純化並用以與寡核誓酸匣接合。此等匣 係由兩互補性核甞酸所組成（顯示於圖11)，以0.5皮莫耳/ 微升之濃度混合於體積為200微升之12.5 mM Tris-HCl pH 7.5，2.5 mM MgCl2，25 mM NaCl，0.25 mM二硫赤蘚糖 醇。鏈合之達成係藉由於95°C水浴中（體積500毫升）加熱3 分鐘，再使反應緩慢冷卻至室溫。於接合至經適當切割之 載體内之前，再將鏈合之核钵酸匣於水中稀釋十倍。利用 DNA定序以確認正確序列，製造質體pCR2.1 (5M4-gH4-7) 和pCR2.1 (5/44-gL2)。經確認之接枝序列再次選殖至表現 載體pMRR14(重鏈）和pMRIO.l(輕鏈）中。 CDR-接枝性序列之CD22結合活性 85070-980508.doc •31 · ί S3 1324161
將編碼接枝變體之載體以不同組合與原始嵌合抗體鏈共 同轉染至CHO細胞内。於競爭分析中比較結合活性，以與 Ramos細胞（得自ATCC，為一種可表現表面CD22之 Burkitt's淋巴瘤淋巴母細胞人類細胞株）之結合競爭原始老 鼠5/44抗體之結合。此分析被認為係比較接枝物結合至細 胞表面CD22之能力之最佳方法。其結果顯示於圖8。如所 見者，任何接枝物間之差異均很小，其於與鼠類親代之競 爭上均較嵌合者更有效。於CDR-H3端（gH5和gH7)導入3個 額外人類殘基並未顯示對結合有影響。
篩選具有鼠類之最後數目殘基之接枝組合物，gLlgH7。 輕鏈接枝物gLl具有6個供體殘基。殘基V2，V4，L37和 Q45係為潛在之重要襯墊殘基。殘基H98係位於VH/VL介面 處。殘基D60係為靠近CDR-L2之表面殘基且可能直接對抗 原結合有貢獻。此等殘基中，V2，L37，Q45和D60均發現 於其他分組之人類κ基因之種細胞序列。重鏈接枝物gH7具 有4個供體框架殘基（殘基R28於使用於CDR-接枝之構造定 義（參見Adair等人（1991 WO 91/09967)之下被認為是CDR-H1之一部分）。殘基E1和A71係為靠近CDR’s之表面殘基。 殘基148係為潛在襯墊殘基。殘基T93係存在於VH/VL介面 處。此等殘基中，E1和A71係發現於人類第I分組之其他種 細胞基因中。殘基148係發現於人類種細胞第4分組中，且 T73係發現於人類種細胞第3分組中。 輕鏈和重鏈之完整DNA和蛋白質序列，包含載體所提供 之恆定區基因内之插入序列附近位置均顯示於圖13中且輕 85070-980508.doc -32-
1324161 鏈分別提供於SEQ ID NO : 29和SEQ ID NO : 28且重鏈分別 提供於 SEQ ID NO : 31和 SEQ ID NO : 30。
將編碼此等輕和重鏈基因之DNA從此等載體切下。將重 鏈DNA於5, Hindlll位置水解，再以大腸桿菌DNA聚合酶之 克列諾片段（Klenow fragment)以產生5'鈍端。於3' EcoRI位 置切割產生重鏈片段，將之由洋菜膠中純化出來。以同樣 方法，產生輕鏈片段，其具5' Sful鈍端和3，EcoRI位置。 將二片段均轉殖至DHFR基底之表現載體内並用以於CHO 細胞内產生安定細胞株。 【圖式簡單說明】 本發明進一步以純萃說明之方式以下列實例說明，其關 連附圖之說明如下： 圖1顯示老鼠單株抗體5/44之CDRs之胺基酸序列（SEQ ID NO : 1至 6); 圖2顯示老鼠單株抗體5/44之輕鏈變異區之完整序列； 圖3顯示老鼠單株抗體5/44之重鏈變異區之完整序列；
圖4顯示CDR-H2中之糖苷化位置和反應性離胺酸之移除 策略； 圖5顯示針對5/44輕鏈序列之接枝設計；DPK-9係為人類 種細胞受體框架序列、垂直線指出老鼠和人類殘基之差 異、序列底線指出已保留於接枝物中之供體殘基、CDRs 以粗體表示（DPK-9未顯示）、接枝gLl具有6個供體框架， gL2具有7個； 圖6顯示針對5/44重鏈序列之接枝設計；DP7係為人類種 細胞受體框架序列 '垂直線指出老鼠和人類殘基之差異、
85070-980508.doc -33 - I 1324161 序列底線指出已保留於接枝物中之供體殘基、CDRs以粗 體表示（DP7未顯示）、接枝gH4和gH6具有6個供體框架， gH5和gH7具有4個； 圖7顯示載體pMRR14和pMRRIO.l ; 圖8顯示嵌合5/44突變體之Biacore分析結果； 圖9顯示用於5/44 gHl和gLl基因組合之寡核苷酸； 圖 10顯示中間載體 pCR2.1 (544gHl)和 pCR2.1 (544gLl); 圖11顯示用以製造進一步接枝之寡核甞酸匣；
圖12顯示經螢光標示之老鼠5/44抗體和經接枝之變體間 之競爭分析；及 圖13顯示經接枝重和輕鏈之全DNA及蛋白質序列。
85070-980508.doc 34- ί S] 1324161 序列表 <110〉 Celltech RSD 有BL公fl <120> .生物旒品 <140> 092112182 <141> 2003-05-02 <150> 0210121.0 <151> 2002-05-02 <160> 51 <170> SeqWin99/ version 1.02 <210> <211> <212> <213> <220> <221> 老蓼單株 5/44 CDR-H1 <400〉 1 Asn Tyr Trp lie His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> 老A <220> <221> 老1 單株 5/44 CDR-H2 <400> 2 Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr 1 5 10 Gly <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> 老鼠 <220> <221> 考基早株 5/44 CDR-H3 <400> 3 Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe 1 5 •10 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> 老* <220> <221> 老氟早株 5/44 CDR-L1 15 85070-980508.doc 1324161 <400> 4
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser 1 5 20 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 老鼠 <220> <221> 老A單株 .5/44 CDR-L2 <400> 5
Gly lie Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> 老鼠 <220> <221> 老鼠單株 5/44 CDR-L3 <400> 6 Leu Gin Gly Thr His Gin Pro Tyr Thr 1 5 <210> 7 <211> 113 <212> PRT <213> 老鼠 <220> <221> 老鼠單株 5/44 VL 區 <400> 7
Asp Val Val Val Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Phe Gly 1 5 10 15
Asp Gin Val Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Ala Asn Ser 20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Gly lie Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Thr lie Lys Pro Glu Asp Leu Gly Met Tyr Tyr Cys Leu Gin Gly 85 90 95
Thr His Gin Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110
Arg <210〉 8 <211> 121 2- 85070-980508.doc 1324161 <212> <213> PRT 老鼠 <220> <221> 老鼠單株 5/44 VH 6 <400> Glu Val 1 8 Gin Leu Gin Gin Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr 20 25 30
Trp lie His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 9 13 PRT 人工序列 <220> <221> cH <400> 9
Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly 1 5 10 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 10 13 PRT 人工序列 <220> <221> N55Q <400> 10 Gly Asn Gin Tyr Thr Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly 1 5 10 85070-980508.doc 1324161 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 11 13 PRT 人工序列 <220> <221> T57A <400> 11 Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly 1 5 10 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 12 13 PRT 人工序列 <220> <221> T57V <400> 12 Gly Asn Asn Tyr Val Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys Gly 15 10 <210> <211> <212> <213> 13 17 PRT <220> <221> CDR-H2 (T57A) H， <400> 13
Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Lys Arg Asn Leu Lys 1 Gly 5 10 15 <210> <211> <212> <213> <220> <223> 14 13 PRT 人工序列 <220> <221> K60R <400> 14
Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Arg Arg Asn Leu Lys Gly 1 5 10 <210> 15 85070-980508.doc i08.doc -4- [ SI 4 1324161 <211> <212> <213> <220> <221> <400> Gly He
Gly 17
PRT CDR-H2 (K60R) Hf' 15
Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Thr Thr Tyr Arg Arg Asn Leu Lys 5 10 15 <210> <211> <212> <213> <220> <221> <400> Gly He 1 Gly <210> <211> <212> <213> <220> <221> <400> Asp lie 1 Asp Arg
Pro Lys
Ser Gly 50 Phe Ala 65 <210> <211> <212> <213> <220> <221> 16 17
PRT CDR-H2 (T57A K60H) H*" 16
Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Asn Leu Lys 5 10 15 17 70
PRT 人顧 DPK9 17
Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 5 10 15
Val Thr lie Thr Cys Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala 20 25 30
Leu Leu lie Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly 35 40 45
Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp 55 60
Thr Tyr Tyr Cys 70
18 11 PRT 人類 JK1 85070-980508.doc 1324161 <400> 18
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Asp Val Gin Val Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly X 5 10 . 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Ala Asn Ser 20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Gly lie Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80
Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Gly 85 90 95
Thr His Gin Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 110
Arg <210> 20 <211〉 113 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> <220> <22l> gL2 <400> 20
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Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Ala Asn Ser 20 25 30
Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys Pro Gly Lys Ala 35 40 45 6- 85070-980508.doc 1324161
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Gly lie Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie 65 70 75 80
Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin Gly 85 90 95
Thr His Gin Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110
Arg <210> 21 <211> 80 <212> PRT <213> 人類 <220> <221> DP7 <400> 21 <210> 23 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> <220>
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Trp Val 20 25 30 Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met Gly Lys Phe Gin Gly 35 40 45 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 50 55 60 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 65 70 75 80 <210> 22 <211> 11 <212> PRT <213> 人類 <220> <221> JH4 <400> 22 Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 15 10 85070-980508.doc 1324161 <221> gHl <400> 23 Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly 1 5 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20 Trp lie His Trp Val Arg Gin Ala 35 40 Gly Gly lie Asn Pro Gly Asn Gin 50 55 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala 65 70 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85 Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr 100 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 115 120 <210> 24 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> gH4 <400> 24 Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly 1 5 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20 Trp He His Trp Val Arg Gin Ala 35 40 Gly Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn 50 55 Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala 65 70 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser 85 Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr 100 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 15
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Ser
Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 15
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Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 45
Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Asn Leu 60
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Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 105 110
Ser 85070-980508.doc 1324161 115 120 <210> 25
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Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp He His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 Gly Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Asn Leu 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 26 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> gH6 <400> 26 Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Arg Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 Gly Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Lys Phe 50 55 60 85070-980508.doc -9- { S3 1324161
Gin Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
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Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 27 <211> 121 <212〉 PRT <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> gH7 <400> 27
Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
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Trp lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Gly lie Asn Pro Gly Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Arg Arg Lys Phe 50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly 100 105 110
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 28 <211> 239 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 接枝性輕鏈之完整序列 <400> 28 -10· 85070-980508.doc 1324161
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Leu Leu Phe Trp lie Pro 15 10 15
Ala Ser Arg Gly Asp Val Gin Val Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45
Leu Ala Asn Ser Tyr Gly Asn Thr Phe Leu Ser Trp Tyr Leu His Lys 50 55 60
Pro Gly Lys Ala Pro Gin Leu Leu lie Tyr Gly lie Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95
Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 100 105 110
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<212> PRT <213> 人工房列 <220> <223> <220> <221> 接枝性重鏈之完螫办列
<400> 30
Met Asp Phe Gly Phe Ser Leu Val Phe Leu Ala Leu lie Leu Lys Gly 15 10 15
Val Gin Cys Glu Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30
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Arg Lys Phe Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser 85 90 95
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Thr Arg Glu Gly Tyr Gly Asn Tyr Gly Ala Trp Phe Ala 115 120 125
Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
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Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175
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Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220 85070-980508.doc -12-
1324161
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gin 275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300
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1324161 aagcttgccg ccaccatgga cttcggattc tctctcgtgt tcctggcact cattctcaag 60 ggagtgcagt gtgaggtgca attggtccag tcaggagcag aggttaagaa gcctggtgct 120 tccgtcaaag tttcgtgtaa ggctagcggc tacaggttca caaattattg gattcattgg 180 gtcaggcagg ctccgggaca aggcctggaa tggatcggtg gcattaatcc cgggaataac 240 tacgctacat ataggagaaa attccagggc agagttacga tgaccgcgga cacctccaca 300 agcactgtct acatggagct gtcatctctg agatccgagg acaccgcagt gtactattgt 360 actagagaag gctacggtaa ttacggagcc tggttcgcct actggggcca gggtacccta 420 gtcacagtct cctcagcttc tacaaagggc ccatccgtct tccccctggc gccctgctcc 480 aggagcacct ccgagagcac agccgccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa 540 ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct 600 gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc 660 ttgggcacga agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac 720 aagagagttg gtgagaggcc agcacaggga gggagggtgt ctgctggaag ccaggctcag 780 ccctcctgcc tggacgcacc ccggctgtgc agccccagcc cagggcagca aggcatgccc 840 catctgtctc ctcacccgga ggcctctgac caccccactc atgcccaggg agagggtctt 900 ctggattttt ccaccaggct ccgggcagcc acaggctgga tgcccctacc ccaggccctg 960 cgcatacagg ggcaggtgct gcgctcagac ctgccaagag ccatatccgg gaggaccctg 1020 cccctgacct aagcccaccc caaaggccaa actctccact ccctcagctc agacaccttc 1080 tctcctccca gatctgagta actcccaatc ttctctctgc agagtccaaa tatggtcccc 1140
catgcccacc atgcccaggt aagccaaccc aggcctcgcc ctccagctca aggcgggaca 1200 ggtgccctag agtagcctgc atccagggac aggccccagc cgggtgctga cgcatccacc 1260 tccatctctt cctcagcacc tgagttcctg gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 1320 aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 1380 gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 1440 aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 1500 ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 1560 aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaaggtgg gacccacggg 1620 gtgcgagggc cacatggaca gaggtcagct cggcccaccc tctgccctgg gagtgaccgc 1680 tgtgccaacc tctgtcccta cagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc 1740 atcccaggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta 1800 ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac 1860 cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga 1920 caagagcagg tggcaggagg ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca 1980 caaccactac acacagaaga gcctctccct gtctctgggt aaatgagtgc cagggccggc 2040 aagcccccgc tccccgggct ctcggggtcg cgcgaggatg cttggcacgt accccgtcta 2100 catacttccc aggcacccag catggaaata aagcacccac cactgccctg gctcgaattc 2160 <210> 32 <211> 94 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gHl T1 <400> 32 agtgtgaggt gcaattggtc cagtcaggag cagaggttaa gaagcctggt gcttccgtca 60 aagtttcgtg taaggctagc ggctacaggt tcac 94 <210> 33 <211> 96
<212> DMA <213> 人工序列 <22Q> <223> <220> 85070-980508.doc -14- [s] 1324161 <221> 544gHl T2 <400> 33 gtggcattaa tcccgggaat cagtacacta catataaaag aaatctaaag ggcagagcaa cgctgaccgc ggacacctcc acaagcactg tctaca <210> 34 <211> 95 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gHl T3 <400> 34 agagaaggct acggtaatta cggagcctgg ttcgcctact ggggccaggg taccctagtc acagtctcct cagcttctac aaagggccca agaaa <210> 35 <211〉 94 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544 gHl B1 <400> 35 ggaccaattg cacctcacac tgcactccct tgagaatgag tgccaggaac acgagagaga atccgaagtc catggtggcg gcaagctttt attc <210> 36 <211> 97 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gHl B2 <400> 36 gattcccggg attaatgcca ccgatccatt ccaggccttg tcccggagcc tgcctgaccc aatgaatcca ataatttgtg aacctgtagc cgctagc <210> 37 <211> 93 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gHl B3 -15- 85070-980508.doc 1324161 <400> 37 cgtaattacc gtagccttct ctagtacaat agtacactgc ggtgtcctcg gatctcagag atgacagctc catgtagaca gtgcttgtgg agg <210> 38 <211> 21 <212> DMA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gHl FI <400> 38 gaataaaagc ttgccgccac c <210> 39 <211> 22 <212> DKA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gHl R1 <400> 39 tttcttgggc cctttgtaga ag <210> 40 <211> 87 <212> DMA <213> 人工專列 <220> <223> <220> <221> 544 gLl T1 <400> 40 gcttcccggg gtgacgttca agtgacccag agcccatcca gcctgagcgc atctgtagga gaccgggtca ccatcacttg tagatcc <210> . 41 <211> 90
<212> DNA <213> 人工房列 <220> <223> <220> <221> 544 gLl T2 <400> 41 tatctgcaca aaccaggtaa agccccacaa ttgctcatct acggaatctc taacagattt 16- 85070-980508.doc 1324161 agtggtgtac cagacaggtt cagcggttcc <210> 42 <211> 91 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gLl T3 <400> 42 agatttcgcc acttattact gtttacaagg tacacatcag ccgtacacat tcggtcaggg tactaaagta gaaatcaaac gtacggcgtg c <210> 43 <211> 88 <212> <213> DNA <220> <221> 544gLl B1 <400> 43 gaacgtcacc ccgggaagca ggaatccaga acaacagaag caccaacagc ctaacaggca acttcatggt ggcggcttcg aatcatcc <210> 44 <211> 88 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223〉 <220> <221> 544gLl B2 <400> 44 ctttacctgg tttgtgcaga taccaagaca aaaaggtgtt cccataactg tttgcaagac tctgactgga tctacaagtg atggtgac <210> 45 <211> 90 <212> DNA <213〉 人工序列 <220> <223> <220> <221> 544gLl B3 <400> 45 aacagtaata agtggcgaaa tcttctggct ggagagacga gatcgtgagg gtgaaatcag taccacttcc ggaaccgctg aacctgtctg <210> 46 <211> 20 17 85070-980508.doc 1324161 <212> DMA <213>人工岸列 <220> <223> <220> <221> 544gLl F1 <400> 46 ggatgattcg aagccgccac <210> 47 <211> 21 <212> DNA <213> <220> <221> 544gLl R1 <400> 47 gcacgccgta cgtttgattt c <210> 48 <211> 339 <212> DNA <213> 老鼠 <220> <221> 老氟單株5/44VL之DNA序列 <400> 48 gatgttgtgg tgactcaaac tccactctcc ctgcctgtca gctttggaga tcaagtttct atctcttgca ggtctagtca gagtcttgca aacagttatg ggaacacctt tttgtcttgg tacctgcaca agcctggcca gtctccacag ctcctcatct atgggatttc caacagattt tctggggtgc cagacaggtt cactggcagt ggttcaggga cagatttcac actcaagatc agcacaataa agcctgagga cttgggaatg tattactgct tacaaggtac acatcagccg tacacgttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgt <210> 49 <211> 363 <212> DNA <213> 老 ft <220> <221〉 老氣翠株5/44 VH之DNA序列 <400> 49 gaggtccaac tgcagcagtc tgggactgta ctggcaaggc ctggggcttc cgtgaagatg tcctgcaagg cttctggcta caggtttacc aactactgga ttcactgggt aaaacagagg cctgggcagg gtctagaatg gattggtggt attaatcctg gaaataatta tactacgtat aagaggaact tgaagggcaa ggccacactg actgcagtca catccgccag cactgcctac atggacctca gcagcctgac aagtgaggac tctgcggtct attactgtac aagagagggc tatggtaact acggggcctg gtttgcttac tggggccagg ggactctggt caccgtctcc tea <210> 50 <211> 9 <212> DNA <213> 人工序列 20 21
60 120 180 240 300 339 60 120 180 240 300 360 363
85070-980508.doc
[SI 1324161 <220> <223> 募核钵酸引子内之序列 <400> 50 gccgccacc <210> 51
<211> 10X <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 5'募核芬酸引子 <400> 51 gcgcgcaagc ttgccgccac catggacttc ggattctctc tcgtgttcct ggcactcatt ctcaagggag tgcagtgtga ggtgcagctc gtcgagtctg g 85070-980508.doc 19-

Claims (1)

1324161 — 第 092112182 號專利申請案 ~1 中文申請專利範圍替換本(98年11月） 月4!:;.炎更)土4 1·一…一，.讲·. · 一 j 拾、申請專利範圍： 1. 一種對於人類CD22具有專一性之抗體分子，其包含 a) —重鏈，其中之變異區包含如下序列： i) CDR-H1 為SEQ ID NO : 1 所示序列， ii) CDR-H2 為 SEQ ID NO : 2、SEQ ID NO : 13、SEQ ID NO : 15、16所示序列或為序列GINPGNNYATYRRKFQG， 及 iii) CDR-H3 為SEQ ID NO : 3，且包含 b) —輕鏈，其中之變異區具有如下序列： i) CDR-L1 為SEQ ID NO : 4， ii) CDR-L2為SEQ ID NO : 5，及 iii) CDR-L3&SEQIDNO:6。 2. 如申請專利範圍第1項之抗體分子，其包含CDR-H2為序 列 GINPGNNYATYRRKFQG。 3 .如申請專利範圍第1或2項之抗體分子，其係為CDR-接枝 性抗體分子。 4. 如申請專利範圍第3項之抗體分子，其中之變異區包含 人類受體框架區和非人類供體CDRs。 5. 如申請專利範圍第4項之抗體分子，其中該重鏈變異區 之人類受體框架區係立基於SEQ ID NO : 21及22，並於 根據Kabat編號之位置1，28，48，71和93殘基處（對應於 SEQ ID NO : 8之位置1、28、48、72及97殘基處）包含供 體殘基。 6. 如申請專利範圍第5項之抗體分子，其額外於根據Kabat 85070-981126.doc 1324161 編號之位置67和69殘基處（對應於SEQ ID NO : 8之位置 68及70殘基處）包含供體殘基。 7. 如申請專利範圍第4項之抗體分子，其中該輕鏈變異區 之人類受體框架區係立基於SEQ ID NO : 17及18，並於 根據Kabat編號之位置2，4，37，38，45和60殘基處（對應於 SEQ ID NO : 7之位置2、4 ' 42、43、50及65殘基處）包 含供體殘基。 8. 如申請專利範圍第7項之抗體分子，其額外於根據Kabat 編號之位置3殘基處（對應於SEQ ID NO : 7之該位置）包 含供體殘基。 9. 一種對人類CD22具專一性之抗體分子，其包含一根據申 請專利範圍第5或6項之重鏈，及一根據申請專利範圍第 7或8項之輕鏈。 10. 如申請專利範圍第1或2項之抗體分子，其包含輕鏈變異 區 5/44-gLl(SEQ ID NO : 19)和重鏈變異區 5/44-gH7(SEQ ID NO : 27)。 11 · 一種對人類CD22具專一性之抗體分子，其具有一包含 SEQ ID NO : 28之序列之輕鏈和一包含SEQ ID NO : 30 之序列之重鏈。 12. —種對人類CD22具專一性之抗體分子，其具有一由SEQ ID NO : 28之序列所組成之輕鏈和一由SEQ ID NO : 30 之序列所組成之重鏈。 13. 如申請專利範圍第1或2項之抗體分子，其係為鼠類抗-CD22單株抗體5/44，其中該輕鏈之變異區具有SEQ ID 85070-981126.doc -2- 1324161 N〇 7之序列’且重·鏈之變異區具有SEQ ID NO : 8之序 列。 14·如申％專利範圍第1或2項之抗體分子，其係為一種嵌合 杬體分子，其包含申請專利範圍第13項之單株抗體之輕 和重鍵麦異區’分別列舉於SEQ ID NO : 7和SEQ ID NO : 8 〇 15.種DNA，其編碼如申請專利範圍第}至14項中任—項 之抗體分子之重鏈及/或輕鏈。 16_種選殖或表現載體，其包含如申請專利範圍第15項之 DNA。 ' 17_種伯主細胞，其包含如申請專利範圍第16項之選殖或 表現載體。 18.如申請專利範图笛 号列軏圍第1、2、9、"及12項中任一項之抗體 分子，其係用於醫療。 19·如申請專利範圍第15項之驗序列，其係用於醫療。 20.:申請專利範圍第卜2、9、"及Η項中任—項之抗體 分子’其具有對人類CD22之專一性’係應用於 現^^22細胞調節之病變。 ’、宙表 21 _根據申§青專利銘图货 乾圍第15項iDNA，係應用於治 CD22細胞調節之病變。 ’、甶表現 22. 根據申請專利範圍第卜2、9、項中任 體分子，係應用於治療惡㈣㈡。 、几 23. 根據申請專利範圍 軏圍第15項之DNA序列，係應 性淋巴瘤。 /D療惡 85070-981126.doc 24. 25.26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 如申凊專利範圍第22項之抗體分子，其中該惡性淋巴瘤 係為非何杰金淋巴瘤。 如申請專利範圍第23項之DNA，其中該惡性淋巴瘤係為 非何杰金淋巴瘤。 一種如申請專利旄圍第1至1 4項中任一項之抗體分子之 用途，其對人類CD22具專一性，其係用於製造用以治療 由表現CD22細胞調節之病變之藥物。 一種如申請專利範圍第丨5項之DNA之用途，其係用於製 造用以治療由表現CD22細胞調節之病變之藥物。 如申請專利範圍第26頊之用 ^項之用逆，其中該病變係為惡性淋 巴瘤。 如申請專利範圍第2 8項之用途 非何杰金淋巴瘤。 如申請專利範圍第27項之用途 巴瘤。 如申請專利範圍第30項之用途 非何杰金淋巴瘤。 一種治療或診斷性組合物， 至14項中任一項之抗體分子 一種治療或診斷性組合物， 項之DNA。 其中該惡性淋巴瘤係為 其中該病變係為惡性淋 其中該惡性淋巴瘤係為 其包含如申請專利範圍第1 〇 其包含如申請專利範圍第1 5 根據申請專利範圍第32或33項 其包含醫藥上可接受之賦形劑 根據申凊專利範圍第3 2或3 3項 之治療或診斷性組合物 、稀釋劑或载體。 之治療或診斷性組合物 85070-9S1126.doc -4- 36.1324161 其額外包含抗-T細胞、抗·ΙΡΝγ或抗_LpS抗體，或非抗體 成份，例如：黃嘌呤。 種用以生產根據申請專利範圍第1至1 4項中任一項之 抗肢刀子之方法，其包含：將根據申請專利範圍第17項 之宿主細t培養於適於自編碼該抗體分子之dna表現出 蛋白質之條件下，並分離該抗體分子。 37. 一種用以製備根據巾請專利範圍第 物:=包含*根據”專利= 、 項之抗般分子與醫藥上可接受之 釋劑或載體混合在一起。 ”形劑、禾 85070-981126.doc
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