CN1620303A - 包含竹红天牛蛀屑作为活性成分的外用皮肤制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明意在提供用作来源于天然产物的抗变应性试剂、外用皮肤制剂、皮炎预防剂、用于缓解花粉症的药物以及浴用剂，以及有效抵抗各种皮肤瘙痒的抗痒剂和可用于预防和治疗特异性皮炎和变应性症状的试剂，即抗痒剂，外用皮肤制剂，皮炎预防剂，用于缓解花粉症的药物以及浴用剂，其特征在于其包含竹红天牛蛀屑成分。

Description

包含竹红天牛蛀屑作为活性成分的外用皮肤制剂
技术领域
本发明涉及包含竹红天牛(Purpuricenus temminckii)蛀屑(frass)作为活性成分的药物制剂如外用皮肤乳膏。
背景技术
在人的活动过程中为了维持生命，人体表面皮肤感觉发痒是一种由于对皮肤或粘膜上的疼痛点的微弱刺激而导致的一种感觉、瘙痒。
近几年来，特应性皮炎的发生率随着生活环境的改变而大幅增加。人们认为环境因素大大助长了变应性皮炎的发生。环境因素分为非变应性因素和变应性因素。非变应性因素包括皮肤干燥、出汗、皮肤加压或加重、皮肤搔抓等。变应性因素包括由食物变应原吸入、与螨、家养宠物、花粉、金属等接触。
在非变应性因素的情况下，与一种因素的接触导致痒感觉，人对此的反应是搔抓皮肤，导致破坏皮肤组织，皮肤保护功能破坏和发生皮肤超敏性与病原体导致的感染病症。
变应性病症由源自体内发生的抗原-抗体反应的免疫球蛋白E(IgE)的产生导致，然后它刺激肥大细胞释放活性物质如组胺、白三烯、五羟色胺等。由于它们能够促进血管渗透性和收缩平滑肌，如此释放的这些物质导致白细胞或蛋白质从血管中泄漏和可能导致哮喘的炎性支气管缩小。变应原进入人体敏化T细胞，它在与相同的变应原再次接触时，释放导致反应的称为淋巴因子的炎性因子。已针对这些病症进行研究，以寻找有效预防和改善它的试剂。
在这一点上，已知利用冰片稳定肥大细胞膜的能力的试剂(日本未审专利公开(Kokai)No.6-211713)，利用链霉菌属培养液导致的炎性抑制效果的试剂(日本未审专利公开(Kokai)No.5-25053)等。而且，已知摄入芝麻油可以抑制与变应性反应有关的白三烯的产生(Prostaglandin，Vol.36，No.3，1988)。还已知利用包含二十二碳六烯酸(DHA)或亚麻酸的脂质的抗变应性能的试剂(日本未审专利公开(Kokai)No.2-29081)。实际上这些天然存在的抗变应性试剂具有很少的不良反应，但它们的效果不足以预防和治疗抗变应性病症。
由于来自肥大细胞和嗜碱细胞的以组胺为代表的不同的活性物质的释放与以上的抗变应性状况有关，认为组胺受体抑制剂有效地缓解病症，并已使用抗组胺药如氯苯胺和苯海拉明以及肾上腺皮质激素。但是存在一个问题，即这些试剂的使用伴随着不良反应。
根据前述，正在研制具有较小不良反应的药物试剂，并正在研制来源于天然产物的物质。
作为这些天然产物，正在开发使用菊科向日葵属花瓣提取物(日本未审专利公开(Kokai)No.2000-351723)、金鸡纳树提取物(日本未审专利公开(Kokai)No.2000-26307)、互叶白千层提取物(日本未审专利公开(Kokai)No.11-255661)，生育酚提取物(日本未审专利公开(Kokai)No.2001-163764)，利用壳聚糖的物质(日本未审专利公开(Kokai)No.2001-55335)等。
发明内容
本发明的主题是提供来源于天然产物的用作止痒剂并预防、缓解和治疗各种皮肤感觉发痒的抗变应性试剂、皮肤乳膏、皮炎抑制剂和浴用剂。
在进行用于解决上述问题的集中和广泛的研究之后，本发明者发现当使包含竹红天牛蛀屑成分、即寄生于竹上的竹红天牛的幼虫的排泄物的组合物以及用水或有机溶剂处理竹红天牛蛀屑得到的提取物进行组胺释放抑制效果试验和白三烯分泌抑制效果试验时，它们表现出高活性并有效作用于变应性病症如变应性皮炎和特应性皮炎，而且当它们在实际涉及组胺的变应性皮炎、特应性皮炎、变应性病症、花粉病缓解试剂、昆虫咬伤、源自环境因素的皮肤瘙痒症等的情况下试验，它们即在短期内表现出对广泛的痒症有显著的效果，表明它们作为内用和外用药物制剂有效地预防和缓解不同的发痒，进一步地，它们在用作功能性食品时可有效地用于预防和缓解发痒，且它们在用作浴用剂时有效地预防和缓解发痒，由此本发明者完成本发明。
因此，根据本发明，提供以下的发明：
(1)一种抗变应性试剂，其包含竹红天牛蛀屑成分；
(2)一种皮肤乳膏，其包含竹红天牛蛀屑成分。
(3)一种皮炎抑制剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
(4)一种浴用剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
(5)一种花粉症缓解剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
附图的简要说明
图1是一幅表示竹红天牛蛀屑的水提取物的组胺释放-抑制试验结果的图。
图2是一幅表示竹红天牛蛀屑的水提取物的白三烯分泌-抑制试验结果的图。
图3是一幅表示患者的年龄和性别分布的图。
图4是一幅表示缓解发痒的效果出现前的时间图。
图5是一幅表示导致发痒的病症分布图。
图6是一幅表示竹红天牛蛀屑提取物的分馏路线的图。
图7是一幅表示用竹红天牛蛀屑的正己烷提取物进行β-氨基己糖苷酶释放试验的结果图。
图8是一幅图表示用竹红天牛蛀屑的水提取物进行β-氨基己糖苷酶释放试验的结果图。
图9是一幅表示通过24孔多孔筛选竹红天牛蛀屑的水提取物而进行的Giemsa染色剂的结果图。
本发明的最佳实施方式
本发明的受试对象、用作获得竹红天牛蛀屑成分的原料的竹，包括来自毛竹(phyllostachys pubescens)、方竹属(Tetragonocalamus)、刚竹属(phyllostachys)、茶秆竹属(pseudosasa)、华箬竹属(sasamorpha)、业平竹属(Semiarundinaria)、唐竹属(Sinobambusa)等。其中，优选使用刚竹属的毛竹和淡竹(phyllostachys nigra henonis)。当这些竹被切断并使其直立时，竹红天牛Guerin-Meneville 1844产蛋并附在其上，而幼虫吃竹生长。在生长期间，它们在竹中留下分泌物。它们称为竹红天牛蛀屑。收集竹红天牛蛀屑制备本发明的抗变应性试剂等。
在日本，竹红天牛主要分布在本州(山茶花区-较低的山毛榉区)、佐户岛、四国、九州、Iki岛和津岛，并出现在春天至夏天。
来自竹的竹红天牛蛀屑可以作为一种湿的颗粒状浅黄色组合物而得到。
竹红天牛蛀屑含有水，因此通过将其干燥，可以除去水使其成为颗粒状。干燥可以在30-80℃的条件下进行。在超过80℃的高温下处理可以导致分解，因而不是可取的。
它们可以通过用纱布等使颗粒与病变区域发生直接接触而用作药物制剂。竹红天牛蛀屑可以作为一种不经特别除去水的药物制剂使用。下述的实施例表示直接使用的结果，其表明其作为一种药物制剂的有利结果。
为了缓解变应性病症，可以通过以下方法使用用水或有机溶剂提取的液体：如上述使其与病变区域发生接触，并将溶于水中的物质作为花粉症鼻滴液应用于粘膜。
为了从竹红天牛蛀屑中移出水提取物，使过量的(热)水与容器接触。作为水，优选使用热水。
所用的水量通常调节至得到大约0.001-0.007wt％的浓度。对于提取，在回流条件下加热。加热时间可以适宜的设定。加热处理一般持续至少15分钟，通常大约1小时。
结果是，竹红天牛蛀屑的活性成分可以被转移到热水层。重复这种热水处理二次或更多次，一般三次是有利的。
通过第一次处理，可以获得占竹红天牛蛀屑重量的大约0.3-1.0wt％、通常大约0.7wt％的液体。将如此得到的液体在减压下浓缩。最后，得到的竹红天牛蛀屑提取物为褐色粉末。产率为占竹红天牛蛀屑重量的大约1.0-0.2wt％。
也可以使用热水。该处理也可以在有压力下进行。如此得到的粉末的水提取物可以在使用前适宜地用作溶于水的药物制剂。
如以下实施例所示，当用水提取10g竹蛀屑时，得到176.2mg蛀屑提取物。
通过使竹红天牛蛀屑与有机溶剂接触或用有机溶剂处理，含有机溶剂的提取物可以用作药物制剂。
作为有机溶剂，可以使用醇如乙醇、甲醇和异丙醇，多羟基醇及其衍生物如甘油、乙二醇、丙二醇和1，3-丁二醇，酮如丙酮和甲基乙基酮，酯如乙酸乙酯和乙酸异丙酯，醚如乙醚和异丙醚。也可以使用脂族烃如石油醚、正己烷和正戊烷。
其中，使用乙醇、1，3-丁二醇和丙二醇。它们也可以作为含水的混合溶剂使用。
在用有机溶剂提取之后，可以使它与另一种溶剂接触以除去特定的成分，但这种方法不是必需的；可以将适宜浓度的在溶剂如乙醇和1，3-丁二醇中的提取物本身直接用于病变区域或将浸有溶剂的纱布置于该区域而进行应用。
在用有机溶剂提取竹红天牛蛀屑成分时，可以用己烷等进行提取以获得己烷提取物和残留物。用甲醇提取残留物得到甲醇提取物和残留物。可以将甲醇提取物分成乙酸乙酯可溶成分和丁醇可溶成分。通过用水等提取残留物，可以移出每一种成分。
含有竹红天牛蛀屑成分的组合物可以用作抗变应性试剂。作为抗变应性试剂，它可以用作经口试剂，用于静脉内注射的试剂和外用制剂。它们还可以加到食物如功能性食物和甜料及各种饮料性的花粉症缓解试剂中以预防或缓解发痒。还将它们混合成皮肤乳膏、皮肤保护试剂、皮肤炎症抑制剂、洗液和乳膏及肥皂等，并还可以用作预防或缓解发痒的化妆品。而且，它们可以用于具有预防或缓解发痒的头发再生剂，或者它们可以加到浴用剂，从而使浴用剂可以具有预防或缓解发痒的能力。任选地，可以将它们浸渗至衣服如内衣裤和袜子中，以使它们具有预防或缓解发痒的能力。
一般地，竹红天牛蛀屑可以水提取物、有机溶剂提取物或干燥产物使用，其浓度为大约0.001-20wt％。
它们还可以与抗炎剂或抗变应性试剂，例如甘菊环、盐酸苯海拉明、d1-α-生育酚及其衍生物联合使用。
而且，可以使用天然存在的聚合物，例如多糖、淀粉、水溶性聚合物、表面活性剂如阴离子、阳离子和非离子表面活性剂等。
当作为浴用剂使用时，可以将粉状竹红天牛蛀屑、碳酸氢钠、无水硫酸钠、硼砂、香料、稳定剂等混合，然后溶解的提取物可以合适地溶于水等，并用作药物制剂。作为可替代的选择，可以将液体竹红天牛蛀屑与加州希蒙得木油、芳香油、染料、湿润剂和表面活性剂混合，然后用作液体药物制剂。
现在将参考以下的实施例解释本发明。
作为一种制备本发明的竹红天牛蛀屑提取物的方法，对用有机溶剂制备提取物的方法和用水制备提取物的方法进行解释。
关于用作药物制剂的本发明的竹红天牛蛀屑的效果，可以通过组胺释放-抑制试验和白三烯分泌-抑制试验以及β-氨基己糖苷酶释放-抑制试验来证明对发痒的效果。
作为用于各种皮肤病的本发明的竹红天牛蛀屑的一种毒性试验，可以使用成纤维细胞完成“24-孔多孔筛选方法”，根据其结果可以证明毒性的存在或不存在。以下详细描述了实验的内容和结果。
实施例
现在参照实施例解释本发明。
(实施例1-1)
(用有机溶剂制备竹红天牛蛀屑的提取物)
用己烷提取591g得自竹的竹红天牛蛀屑，并分成己烷提取物(332mg)和残留物。用甲醇提取残留物，并分成甲醇提取物(14.6g)和残留物。将甲醇提取物分成乙酸乙酯可溶部分(3.685g)和水溶性部分。用正丁醇溶剂处理水溶性部分，并分成丁醇可溶性部分(1.931g)和水部分。用(热)水提取甲醇提取的残留物得到12.132g水提取物。
(实施例1-2)
(用有机溶剂制备竹红天牛蛀屑的提取物)
用己烷提取1037g得自竹的竹红天牛蛀屑，并分成己烷提取物(509.9mg)和残留物。用甲醇提取残留物，并分成甲醇提取物和残留物。将甲醇提取物分成乙酸乙酯可溶性部分(5.41g)和水溶性部分。用正丁醇处理水溶性部分，并分成丁醇可溶性部分(2.53g)和水溶性部分(3.65g)。用(热)水提取甲醇提取的残留物得到27.132g水提取物(图6)。
(实施例1-3)
(从正己烷提取物中分离成分)
用正己烷(3L)将竹红天牛蛀屑(1037g)作三次3小时的加热回流，并用硅胶柱色谱法分馏所得的提取物(461mg)。将所得的3-氧代类固醇馏分作薄层色谱处理和反相制备HPLC处理以分离三种化合物。
三种化合物鉴定为豆甾-4-烯-3，6-二酮(2.9mg)、豆甾-4，2 2-二烯-3-酮(1.0mg)和豆甾-4-烯-3-酮(5.9mg)。这三种3-氧代类固醇用作β-氨基己糖苷酶释放试验的样品。
                      豆甾-4-烯-3-酮
Figure A0380240600102
                    豆甾-4-烯-3，6-二酮
                   豆甾-4，22-二烯-3-酮
(实施例2-1)
(制备竹红天牛蛀屑的水提取物)
将10g从竹中收集的竹红天牛蛀屑溶于500ml水，加热，并在回流条件下加热。加热处理进行5小时。
对于如此得到的含有竹红天牛蛀屑提取物的成分，重复类似的过程二次。结果得到176.2mg竹红天牛蛀屑的水提取物。在以下的实施例中，将其溶于需要量的水中并使用。
(实施例2-2)
(制备用于β-氨基己糖苷酶释放试验的竹红天牛蛀屑的水提取物)
向1037g从竹中收集的竹红天牛蛀屑中加入3L水，然后加热回流3小时，随后进行提取。对一部分所得提取物(41.2mg)作Shodex柱(GS-320HQ)处理，以分馏成7种馏分。这7种馏分[Fr.1(3.2mg)、Fr2(3.2mg)、Fr3(8.2mg)、Fr4(6.8mg)、Er5(6.2mg)、Fr6(5.0mg)、Fr.7(5.0mg)]制成用于β-氨基己糖苷酶释放试验的竹红天牛蛀屑的水提取物。
(实施例3)
(组胺释放-抑制试验)
用抗变应性效果试验方法评价实施例2-1得到的竹红天牛蛀屑的水提取物的抑制效果，该方法将由大鼠嗜碱细胞(RBL-2H3)中释放的组胺作为指标。
将RBL-2H3细胞以2.5×105细胞/孔平铺于24孔平板。在培养24小时(5％二氧化碳，37℃)之后，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞一次，并通过向其中加入180μl各种浓度的竹尖提取物/20mMHepes-DMEM，在5％二氧化碳和37℃下将细胞培养30分钟。然后，在加入20μl刺激物A23187(钙离子载体)并培养30分钟之后，移出200μl上清液。将通过以类似于以上的方式使用20mM Hepes-DMEM(培养基)和表面活性剂0.5％ Triton X-100(细胞中所含组胺的总量通过细胞壁溶解来测定)刺激得到的每一种上清液用作阴性对照和阳性对照。
使用组胺酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(由ICNPharmaceuticals制造)测定如此移出的上清液中组胺的数量。用式1和式2计算组胺释放比率和相对于对照物的组胺释放比率。在每种浓度下相对于对照物的组胺释放比率如图1所示。
    组胺释放比率(％)＝((A-B)/(C-B))×100......(式1)
其中，
A代表在用竹红天牛蛀屑的水提取物处理和用A23187刺激的细胞的上清液中组胺的数量，
B代表阴性对照物上清液中所含组胺的数量，和
C代表在阳性对照物的上清液中所含组胺的数量。
相对于对照物的组胺释放比率(％)＝(C/E)×100......(式2)
其中，
D代表各种浓度的竹红天牛蛀屑的水提取物的组胺释放比率(％)，
E代表关于单独用A23817刺激(不用竹红天牛蛀屑的水提取物处理)的组胺释放比率(％)，和
对照物代表单独用A23817刺激(不用竹红天牛蛀屑的水提取物处理)的上清液的组胺释放比率(％)。
(结果)
A23187是空白结果。
在0.625mg/mL，显示数值显著减小，然后表现为在1.25mg/mL时和1.25mg/mL之后的缓慢降低。可以清楚地看出存在抑制组胺释放的效果。
(实施例4)
(白三烯分泌-抑制试验)
使用抗变应性效果试验方法评价实施例2-1所得的竹红天牛蛀屑的水提取物抑制白三烯分泌的效果，该方法将由大鼠的嗜碱细胞(RBL-2H3)分泌的白三烯作为指标。
将RBL-2H3细胞以2.5×105细胞/孔平铺于24孔平板。在培养24小时(5％二氧化碳，37℃)之后，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞一次，并通过往其中加入180μl各种浓度的竹尖提取物/20mMHepes-DMEM，在5％二氧化碳和37℃下将细胞培养30分钟。然后，在加入20μl抗原并培养30分钟之后，移出200μl上清液。
使用白三烯C4酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(CaymanChemical，Ann Arbor，MI)测定如此移出的上清液中白三烯分泌量。采用由白三烯标准溶液(0-1000μg/mL)得到的标准曲线计算白三烯的分泌量。各种浓度下白三烯分泌抑制效果如图2所示。
(结果)
DNP-BSA是空白的结果。从0.625mg/mL起缓慢降低，并在5.0mg时得到小的数值45pg/mL。这清楚地证明了竹红天牛蛀屑的水提取物抑制白三烯分泌的效果。
(β-氨基己糖苷酶释放试验)
β-氨基己糖苷酶释放试验的试验原理如下：
β-氨基己糖苷酶是一种糖酵解酶，并且是一种在肥大细胞颗粒中大量存在的溶酶体酶。
在β-氨基己糖苷酶释放试验中，由于酶的存在导致对硝基苯基磷酸酯分离。通过光度测定法(405nm)测定分离的对硝基苯基磷酸酯，并将结果描述β-氨基己糖苷酶活性。
(结果)
当用DPI，一种NADPH氧化酶抑制剂研究β-氨基己糖苷酶抑制效果时，DPI以浓度依赖方式抑制由抗原刺激产生的β-氨基己糖苷酶。
β-氨基己糖苷酶抑制效果可以用类似于组胺抑制效果的方式进行评价。
(β-氨基己糖苷酶释放抑制试验)
β-氨基己糖苷酶释放抑制效果用抗变应性效果试验来评价，该试验将由大鼠的嗜碱细胞(RBL-2H3)释放的β-氨基己糖苷酶作为指标。
在含有10％牛胎儿血清(FCS)、100单位/mL青霉素和100μg/mL链霉素的Eagle极限必需培养基中培养RBL-2H3细胞(5％二氧化碳，37℃)。然后将细胞平铺于24孔平底微板，以2.5×105细胞/孔(500mL培养基/孔)进行细胞培养。通过培养24小时(5％二氧化碳，37℃)，使细胞致敏。然后用500μl PBF和160μl含有5.6mM葡萄糖、1mM氯化钙的siraganian缓冲液将致敏细胞洗涤一次，并加入0.1％BSA。加入各种浓度的样品溶液和20μl试验物质溶液(DMSO：0.1％)，10分钟后加入抗原(DNP-BSA：10μg/mL)，并培养10分钟以刺激细胞。通过用冰冷却10分钟来终止反应后，将50μl上清液转入96孔平底微板，向其中加入100μl酶反应物并混合。在用微板读数器确定混合物的吸光率之后，通过以下方程确定释放比率(测定波长：405nm，参比波长：655nm)
β-氨基己糖苷酶释放比率(％)＝[通过刺激释放的β-氨基己糖苷酶的数量/细胞内β-氨基己糖苷酶总量]×100
使用采用超声破裂仪器破裂的细胞离心所得的上清液测定全部细胞内β-氨基己糖苷酶。
(测定己烷提取物的β-氨基己糖苷酶释放的方法)
对于得自实施例1-2的己烷提取物的三种3-氧代类固醇，豆甾-4-烯-3，6-二酮、豆甾-4，22-二烯-3-酮和豆甾-4-烯-3-酮，测定β-氨基己糖苷酶释放抑制效果。对于这些，初步证明了β-氨基己糖苷酶释放抑制效果。结果如图7所示。
(实施例5)
(测定水提取物的β-氨基己糖苷酶释放的方法)
对于实施例2-2得到的竹红天牛蛀屑的水提取物(向1037g从竹中收集的竹红天牛蛀屑加入3升水，并加热回流3小时进行提取，用Shodex柱(GS-320HQ)将所得的一部分提取物(41.2mg)分馏成7个馏分(Fr.1 to Fr.7))，进行β-氨基己糖苷酶释放分析试验。
结果如图8所示。
其中，观察到一定程度的活性。发现Fr.1和2具有高活性。
(实施例6)
(24孔多孔筛选方法(毒性试验))
根据24孔多孔筛选方法(Satoko Takaoka″Introduction toTissue Culture″，Gakkai Shuppan Center发行，第68页)，进行本发明的竹红天牛蛀屑药物制剂的毒性试验。
在此方法中，由每种ABCD行和列1-6制备孔(总共24孔)，对于A行，制备包含0.1ml储备药物制剂(A1)的孔，连续二倍稀释并具有不同浓度的孔(A2-A5)以及不含药物制剂(A6)的孔。然后制备细胞悬浮液。细胞数量为大约5×104/mL。向每孔中加入0.9mL细胞悬浮液。保持平板水平，同时轻微来回振荡，并在CO2恒温箱中培养。在培养3-7天后，弃去培养基，并往其中缓慢加入甲醇以固定10分钟。在用流水洗涤之后，将其Giema染色以观察是否存在任何表明毒性的染色体异常。
毒性试验的细节如下：
(1)制备药物提取
向竹红天牛蛀屑的水提取物(3.9g竹红天牛蛀屑)加入20mL纯水并搅拌。将其加热至稍低于100℃(稍低于沸点)，然后在煮沸状态下保持此温度1小时，随后冷却至室温，并用离心机离心(1200rpm，10分钟)。将澄清的上清液滤过除菌以制备储备药物溶液。
(2)作为一种毒性试验，进行以上24孔多孔筛选试验。
(3)如下使用细胞：
NHDF-NEO CRYOPRESERVED(人皮肤成纤维细胞，新生)。BIOWHITTAKER(ACAMBREX COMPANY于1999年5月10日制造，批号：9F0889，附证明)
(4)如下使用细胞培养基：
FBM(加入改变的MCDB202)
(5)加入条件如下：
向多孔中加入的储备溶液为0.1mL/孔。
用磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行稀释得到4个最终浓度水平，0％、12.5％、25％、50％。
(6)培养条件
将0.9mL在FBM中的细胞悬浮液加到各24孔。将其于36℃下加热4天。
(7)评价
(a)弃去孔中的培养基(细胞附着于孔)，并立即用甲醇固定，然后进行Giemsa染色。在显微镜下检查之后，拍取照片记录(图9)。
(b)在25cm2塑料瓶中加入50％储备溶液，并观察8天。培养后进行Giemsa染色。
(8)评价结果
(a)根据通过24孔多孔筛选方法而得到的对照结果(图9)，将对照结果(0％)和以上最终浓度0％、12.5％、25％和50％进行比较表明，在任何最终浓度0％、12.5％、25％和50％中没有观察到生长或形态和毒性的变化。
(b)在25cm2塑料瓶中加入50％储备溶液，并观察8天。结果没有观察到生长和形态的变化。
培养后，进行Giemsa染色，没有发现异常。
(9)结论
可以推断，竹红天牛蛀屑的水提取物不影响来源于人的成纤维细胞，并且在作为药用时是安全的。
(实施例7)
将竹红天牛蛀屑的水提取物溶于纯水，当感觉发痒时任选以0.005％的浓度应用于病变区域，得到关于痒症改善状况的表1所示的结果。在使用药物期间，暂停使用抗变应性试剂如其它抗组胺药。
情形1-11的结果(皮肤瘙痒症、特应性皮炎、足癣、痱子、荨麻疹、昆虫咬伤、血液透析、皮疹、纹身(tatoo)、冻疮、脓疱病)，其中本发明的皮肤乳膏的应用表明本发明药物对所有这些病症非常有效，且不存在无抗瘙痒效果和该应用将使病症(发痒和皮炎)加重的情况。
结果如表1总结。
表1应用皮肤乳膏导致的抗瘙痒效果
情形  瘙痒情形         受试者数  显著效果  轻微效果  无效果    加重
1     皮肤瘙痒症       12        8         4         0         0
2     特应性皮炎       8         7         1         0         0
3     足癣             5         5         0         0         0
4     痱子             3         3         0         0         0
5     荨麻疹           2         1         1         0         0
6     昆虫咬伤         2         2         0         0
7     血液透析         1         1         0         0         0
8     皮疹             1         1         0         0         0
9     纹身             1         1         0         0         0
10    冻疮             1         1         0         0         0
11    脓疱病           1         1         0         0         0
从上表可以看出，在多种情形下观察到显著的效果，在某些情形下观察到效果，总之可以说观察到显著效果。不存在“无效果”或“加重”的情形。其可以理解为，药物对多种原因导致的发痒有效。
通过汇编关于研究结果的数据，可以看出以下：
男人和女人的各百分率相同为50％。患者年龄和性别的分布如图3所示。所用的竹红天牛蛀屑是水提取物(90％)、粉末(3％)和二者的组合(7％)。
效果出现前的时间大部分是1-5分钟，表明对发痒的快速作用性能(图4)。发痒病因的分布如图5所示。结果表明，药物对许多病症有效。
(实施例8)
将100g竹红天牛蛀屑加到1升水中，加热，然后在煮沸状态下保持3小时。将所得的提取物冷却得到水提取物。用滴鼻注射器将其注射至20名花粉症患者，每天3次，持续10天。
在14名患者上看到花粉症缓解，并在其中的5名患者中观察到显著的效果。
例举性的制剂如下所示。应注意本发明不受它们的任何限制。
洗液型瘙痒预防和缓解试剂
乙醇                              15.0(wt％)
羟乙基纤维素                      0.1
对氧基苯甲酸甲酯                  0.1
竹红天牛蛀屑水提取物              0.2
纯净水                            84.6
乳剂型瘙痒预防和缓解试剂
硬脂酸                            0.2(wt％)
鲸蜡醇                            1.5
凡士林                            3.0
液体石蜡                          7.0
聚氧乙烯(10E.O)一油酸酯           1.5
生育酚乙酸酯                      0.2
甘油                              5.0
对氧基苯甲酸甲酯                  0.1
三乙醇胺                          0.1
竹红天牛蛀屑水提取物                 0.4
纯净水                               81.0
凝胶型瘙痒预防和缓解试剂
一缩二丙二醇                         10.0(wt％)
羧基乙烯基聚合物                     0.5
氢氧化钾                             0.1
对氧基苯甲酸甲酯                     0.1
竹红天牛蛀屑水提取物                 0.5
纯净水                               88.8
乳膏型瘙痒预防和缓解试剂
蜂蜡                                 6.0(wt％)
鲸蜡醇                               5.0
还原羊毛脂                           8.0
角鲨烯                               27.5
甘油脂肪酸酯                         4.0
亲脂甘油一硬脂酸酯                   2.0
聚氧乙烯(20E.O)脱水山梨醇一月桂酸酯  5.0
丙二醇                               5.0
对氧基苯甲酸甲酯                     0.1
竹红天牛蛀屑水提取物                 0.5
纯净水                               36.9
粉末型瘙痒预防和缓解试剂
硅铝酸镁                             95.3(wt％)
羧甲基纤维素钙                       4.5
竹红天牛蛀屑干粉                     0.2
浴用剂
碳酸氢钠                      63.0(wt％)
无水硫酸钠                    30.0
硼砂                          2.0
竹红天牛蛀屑干粉              5.0
浴用剂
纯化西蒙得木油                5.0(wt％)
聚氧乙烯脱水山梨醇一月桂酸酯  20.0
甘油一月桂酸酯                5.0
液体石蜡                      2.0
二乙醇酰胺月桂酸酯            2.0
竹红天牛蛀屑水提取物          3.0
纯净水                        67.0
工业实用性
包含竹红天牛蛀屑成分的本发明的外用皮肤乳膏、皮炎抑制剂和浴用剂有效地可作为用于各种皮肤感觉发痒、变应性病症如变应性皮炎和特应性皮炎、昆虫咬伤和皮肤瘙痒的预防和治疗剂。

Claims (5)

1.一种抗变应性试剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
2.一种皮肤乳膏，其包含竹红天牛蛀屑成分。
3.一种皮炎抑制剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
4.一种浴用剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
5.一种花粉症缓解剂，其包含竹红天牛蛀屑成分。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108452294A (zh) * 2018-02-07 2018-08-28 嘉善县圣康生物科技有限公司 一种治疗皮肤过敏的外用药

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITMI20030210A1 (it) * 2003-02-07 2004-08-08 Res & Innovation Soc Coop A R L Composti endocannabinoido-simili e loro impiego
CN100528069C (zh) 2003-04-29 2009-08-19 航空医学有限公司 具有照相机附装件的喉镜
JP2009274957A (ja) * 2006-08-28 2009-11-26 Univ Nihon ベニカミキリフラスを有効成分とする歯周病原菌殺菌薬
US20190365784A1 (en) * 2015-12-30 2019-12-05 Raúl Enrique MASSONE Use of brassinosteroid analogs for the treatment of dermal disorders by selectively modulating liver x receptors (lxr) and dermal disease treatment by brassinosteroid analogs acting as selective liver x receptor (lxr) modulators

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS4823916B1 (zh) 1966-06-17 1973-07-17
JPS59118702A (ja) * 1982-12-25 1984-07-09 Shiseido Co Ltd 抗アクネまたは抗フケ剤
JPS6119A (ja) * 1983-08-10 1986-01-06 リチヤ−ドソン−ヴイツクス　インコ−ポレ−テツド 皮膚の炎症障害の局所的治療剤
JPS60146820A (ja) * 1983-12-30 1985-08-02 Eiju Kurihara 蜂の巣を主成分とする入浴剤の製法
IL77224A (en) * 1984-12-12 1989-09-10 Euro Celtique Sa Antibacterial cream
JPH0525053A (ja) 1990-12-21 1993-02-02 Sekisui Chem Co Ltd アレルギー性炎症抑制剤用組成物
JP2534010B2 (ja) * 1992-09-22 1996-09-11 ポーラ化成工業株式会社 発毛・育毛料
JPH06211713A (ja) 1993-01-18 1994-08-02 Sansei Seiyaku Kk 抗アレルギー剤
JP2671912B2 (ja) * 1995-04-13 1997-11-05 農林水産省蚕糸・昆虫農業技術研究所長 新規抗菌性蛋白、その製造法および用途
JP2671911B2 (ja) * 1995-04-13 1997-11-05 農林水産省蚕糸・昆虫農業技術研究所長 抗菌性蛋白、その製造法および用途
JPH11255661A (ja) 1998-03-10 1999-09-21 Sansho Seiyaku Co Ltd アトピー性皮膚炎用外用剤
JP2000026307A (ja) 1998-07-03 2000-01-25 Noevir Co Ltd ヒスタミンｈ１受容体遮断剤
JP2000333619A (ja) * 1999-05-28 2000-12-05 Nobuyuki Izena 抗菌効果物質の製造方法並びに抗菌効果物質を用いた養蜂方法
JP2000351723A (ja) 1999-06-09 2000-12-19 Naris Cosmetics Co Ltd 皮膚外用剤
JP2001055335A (ja) 1999-08-18 2001-02-27 Toshio Sato アレルギー性皮膚疾患治療剤
JP2001163764A (ja) 1999-09-27 2001-06-19 Tama Seikagaku Kk 植物ステロールワックス、その製造法およびそれを用いた皮膚外用剤

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108452294A (zh) * 2018-02-07 2018-08-28 嘉善县圣康生物科技有限公司 一种治疗皮肤过敏的外用药

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