CN1663607A

CN1663607A - 一种抗衰老的药物

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Publication number: CN1663607A
Application number: CN 200410104432
Authority: CN
Inventors: 赵恒�
Original assignee: Individual
Current assignee: XI'AN HENGTONG GUANGHUE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2003-12-31
Filing date: 2004-12-19
Publication date: 2005-09-07
Anticipated expiration: 2024-12-19
Also published as: CN100360178C

Abstract

本发明是一种药物，特别是关于一种改善睡眠的生物制剂与中药合成的药物，其特征是：它主要包括α－甘露聚糖肽15％－45％、褪黑素0.5％－5％、清除自由基类中药50％－80％。所述的药物包括α－甘露聚糖肽20％－40％、褪黑素0.5％－3％、清除自由基类中药30％－60％、提高机体免疫力的中药5％－30％。所述的药物包括α－甘露聚糖肽20％－50％、褪黑素0.5％－3％、清除自由基类中药10％－50％、提高机体免疫力的中药5％－20％、调节神经内分泌功能的中药10％－30％。这种抗衰老的药物，它由生物制剂与中药复合制成抗衰老药物口服液，这种口服液从衰老的机理出发，针对多方面致衰因素，整体考虑，从多方面、多层次阻遏衰老的进程，效果比较显著。

Description

一种抗衰老的药物

所属技术领域

本发明属于一种药物，特别是关于一种改善睡眠的生物制剂与中药合成的药物。

背景技术

随着世界范围内，特别是我国人口老龄化趋势的迅速增长，抗衰老这一世界性医学课题在我国也日益受到普遍关注。探明衰老的本质及寻找高效的抗衰老药物已成为当前老年医学领域中的研究热点，并已在很多方面取得了长足的进展。衰老是人的生长、成熟和退化3个阶段中的退化期表现。人进入老年期后，人体结构与生理功能发生一系列变化：心功能降低；呼吸功能减弱；中枢神经系统的兴奋性与抑制性减弱，反应迟钝；肌肉力量减弱；关节软骨变性，活动功能受到限制；免疫功能不断衰退，体力及工作能力上也反映出衰退。除了上述老年现象的出现，还时常伴随许多疾病的发生。为了延年益寿，中外医学界对衰老的课题很早就开始了探索。近年生物医学的进展，使衰老机理的研究从细胞水平、亚细胞水平、分子与基因水平的方向快速发展，并逐渐走向微观化。由此产生了一系列衰老理论学说，现总结如下。

一、自由基学说

有学者认为机体受到外环境(物理或化学因素)和内环境(生理性和病理性)的影响，生成过剩的自由基物质，它们极易对构成组织细胞的生物大分子(核酸、蛋白质、多糖和脂类)造成损伤性破坏。损伤反应多属恶性循环，逐层次的延伸，并波及到正常组织器官的形态结构和生理功能的完整性。当损伤程度超过修复或丧失代偿能力时，则出现疾病或衰老征象，这就是目前医学界广泛研究的自由基学说。自由基的生成与生命活动是同步的，自由基是疾病和衰老的重要启动因素，对组织损伤反应是缓慢地、反复地渐进，因而逐渐出现生理性衰老。

二、遗传学说的基因水平研究

资料表明，细胞的生长、分化与衰老以及基因表达，皆可在染色质水平上进行调控。生物衰老时，染色质转录活性明显下降，活性基因减少。两种以上大分子，如蛋白质、酶、核酸之间形成的桥键，可变为不活动的交联化合物，使细胞机能损伤而致衰老。起基因表达调控作用的核内蛋白质(如DNA)甲基化、磷酸化降低而致衰老。细胞的遗传基因突变，可由内在或外在的因素引起，但是终究导致蛋白质不能合成，细胞机能下降。如放射性物质引致细胞突变，使实验动物寿命变短、衰老和早死。再如脂肪的氧化产物、甲醛及不溶抗体等均可产生大分子的交联产物，形成交联的DNA损伤编码向mRNA传递，而合成无效的蛋白质。胶原交联后，阻碍主要代谢产物的运送。而且这种交联在脂褐质形成中起重要作用，影响遗传及非遗传因素。随着增龄，交联程度逐渐增强，胶原纤维变硬，组织失去活性，功能开始衰退，导致衰老。

三、神经、免疫、内分泌调节与机体衰老中枢神经系统及大脑功能减退是衰老的重要原因。衰老反映在神经系统方面是兴奋与抑制过程减弱，大脑工作能力降低，记忆力减退，反应迟钝，这是高级神经在年龄变化时重要病症之一。

随着年龄的增加，机体免疫系统功能下降，如T淋巴细胞功能下降，导致机体对疾病感染的抵抗力减弱，而且免疫系统的可靠性也下降，如老年人自身免疫疾病增多。在正常情况下，机体的免疫系统不会与自身的组织成分发生免疫反应，但机体在许多因素影响下，免疫系统把某些自身组织当作抗原而发生免疫反应的现象。这种现象对正常机体内的细胞、组织和器官产生许多有害的影响，使机体产生自身免疫性疾病，从而加速机体的衰老与死亡。随增龄机体靶组织对某些激素或活性物质的反应性发生改变或明显降低(如受体表达的降低)，激素的分泌失常，均可造成机体内稳定状态严重破坏，导致衰老。神经内分泌与免疫之间存在着一个由多种神经递质、激素和免疫活性物质构成的完整环路，三者相互影响，共同维持机体内环境的恒定，人类的生、老、病、衰都受此网络的支配与调控。传统医学认为，肾虚为主，血瘀为辅是致衰的根本原因。现代研究表明，肾的生理功能涉及面很广，与生长发育、抗病能力、生殖、骨骼、水液代谢、呼吸、循环、消化、神经、内分泌、脑、髓、发、耳、齿均有密切关系，是对下丘脑-垂体-靶腺之神经、内分泌、免疫、生化代谢等生理的概括，故肾虚致衰论可以与现代医学的自由基损伤、神经、内分泌、免疫系统功能障碍等多种衰老理论相呼应。另外，随着年龄的增加，老年人普遍出现血管硬化、血液凝固活性增强、小板聚集力增强的生理性改变，这些表现与瘀血证关系密切。人的衰老和老年性疾病的形成经过漫长、持久而复杂的演变发展过程，它始终包含着多种因素对机体连续性的损伤与修复的交替反应，在对衰老机理予以综述的过程中还应当指出，吸烟、噪声、微量元素摄入量、意外刺激、情绪不稳、过于饱食等对于衰老都有着显著的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗衰老的药物，它由生物制剂与中药复合制成抗衰老药物口服液，这种口服液从衰老的机理出发，针对多方面致衰因素，整体考虑，从多方面、多层次阻遏衰老的进程。

本发明的技术方案是：设计一种抗衰老的药物，其特征是：它主要包括α-甘露聚糖肽15％-45％、褪黑素0.5％-5％、清除自由基类中药50％-80％。

所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-40％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药30％-60％、提高机体免疫力的中药5％-30％。

所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-50％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％。

所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-50％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％、调节机体代谢的中药5％-30％。

所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-40％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％、调节机体代谢的中药5％-30％、延长细胞寿命的中药5％-20％。

所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-40％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％、调节机体代谢的中药5％-30％、延长细胞寿命的中药5％-20％、抗基因突变的中药10％-20％。

所述的具有清除自由基作用的中药是五味子、当归、冬虫夏草、绿茶、银杏、丹参、厚朴、大枣、太子参、酸枣仁、地黄；具有提高机体免疫力的中药是人参、黄芪、紫河车、南五加皮、淫羊藿、鱼腥草、桑枝；具有调节神经内分泌功能的中药是刺五加、黄精、熟地、枸杞、桑椹、雄蚕蛾、党参、半夏、陈皮、茯苓、泽泻、山药、砂仁、肉桂；具有调节机体代谢的中药是苦丁、灵芝、人参、茶叶、麻黄、蜈蚣、牛蒡子、当归、山楂、胡桃、杏仁、冬虫夏草、茶叶、三七、刺五加、蜂蜜、黄芪、地黄、枸杞、黄精、女贞子；具有延长细胞寿命的中药：黄精、首乌、珍珠粉、绞股蓝、黄芪、人参、枸杞、党参、蜂花粉、当归、酸枣仁、仙灵脾、茯苓；具有抗基因突变的中药是枸杞、人参、首乌、绞股蓝、白术、天冬、刺五加、灵芝。

所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽300g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草50g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴50g、大枣80g、太子参100g、酸枣仁100g、地黄50g。

所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽300g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草50g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴50g、大枣80g、太子参50g、酸枣仁60g、地黄50g、人参10g、黄芪10g、紫河车20g、南五加皮15g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g。

所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽250g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草30g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴30g、大枣30g、太子参50g、酸枣仁30g、地黄30g、人参10g、黄芪10g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g刺五加20g、黄精20g、熟地20g、枸杞10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏15g、陈皮10g、茯苓10g、泽泻10g、山药15g、砂仁15g、肉桂15g。

所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽250g、褪黑素15g、五味子30g、冬虫夏草30g、绿茶40g、银杏40g、丹参30g、厚朴20g、大枣30g、太子参30g、酸枣仁30g、地黄30g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g。刺五加10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏5g、陈皮10g、茯苓10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、灵芝10g、人参10g、茶叶15g、麻黄10g、蜈蚣5g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄10g、枸杞10g、黄精10g、女贞子10g。

所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽200g、褪黑素15g、五味子30g、冬虫夏草30g、绿茶30g、银杏20g、丹参30g、厚朴20g、大枣30g、太子参30g、酸枣仁30g、地黄30g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g、刺五加10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏5g、陈皮10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、灵芝10g、人参10g、茶叶15g、麻黄10g、蜈蚣5g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄10g、枸杞10g、女贞子10g、黄精5g、首乌5g、珍珠粉10g、绞股蓝10g、黄芪5g、人参5g、枸杞10g、党参5g、蜂花粉5g、当归5g、酸枣仁10g、仙灵脾10g、茯苓15g。

所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽200g、褪黑素15g、五味子20g、冬虫夏草20g、绿茶10g、银杏10g、丹参20g、厚朴20g、大枣20g、太子参20g、酸枣仁15g、地黄15g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏15g、陈皮10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、茶叶25g、麻黄10g、蜈蚣15g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄15g、女贞子15g、黄精5g、首乌5g、珍珠粉10g、绞股蓝10g、黄芪5g、党参5g、蜂花粉5g、当归5g、酸枣仁10g、仙灵脾10g、茯苓15g、枸杞25g、人参20g、首乌10g、绞股蓝10g、白术10g、天冬10g、刺五加20g、灵芝20g。

本发明特点是：由于五味子、当归等中药可有效的清除体内自由基，激活自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)；黄精、首乌等药物能有效的延长脑细胞寿命，防止神经细胞数量的减少，改善听力和视力，提高智力和记忆力，从而达到抗衰老的目的；淫羊藿等、α-甘露聚糖肽具有调节机体免疫力的作用；肉桂等中药对下丘脑-垂体-靶腺轴有调节作用；灵芝等中药具有提高代谢，调节血糖、降低血脂等作用；枸杞、人参等中药具有促进DNA损伤的修复能力或合成能力，还有抗基因突变的作用；褪黑素具有清除自由基、增强免疫功能、调节神经内分泌的作用。另外，这些天然药物中还含有丰富的维生素和微量元素，它们为机体正常的生理活动不可缺少，同样对衰老的发生有防御作用。

具体实施方式

由于本发明将α-溶血链球菌菌种搭载返回式太空飞行器(宇宙飞船或返回式卫星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射线、交变磁场、高真空、高热深冷等因素的综合作用，使菌株的DNA双链结构断裂，基因组发生重排，从而产生新的菌株。返回地面后，对经过太空搭载的菌株进行培养和筛选，通过研究其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、遗传稳定性、中试生产指标等内容，优选出其中的正变异、遗传特性稳定的菌种，经培养发酵后得到治疗溃疡性结肠炎的药物。该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。

特别是α-溶血链球菌D33菌株经太空搭载诱变，地面上的筛选、分离和纯化后，选育出发酵单位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高产、优质菌株T33株。通过中国科学院微生物研究所对T33菌株及D33菌株的全细胞蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析和菌株的基因组DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比较，可以证明空间诱变及地面筛选出的T33菌株其基因有变异。该突变菌株在遗传上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比国家标准(80％)提高3至5倍，西安市药品检验所送样测定达到271.6％，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上。该菌种经过神舟系列飞船航天搭载太空诱变，由北京中科院微生物所和西北大学生物系对菌种进一步筛选培养育种形成遗传性质稳定，变异特征明显的高产高效菌种。该菌种每发酵单位中α-太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽含量提高了几倍以上。(见附件材料1：陕西省科学技术厅陕西省科学技术成果鉴定证书材料

附件材料2：太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株经“神舟三号”飞船搭载公证书。

附件材料3：太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株经“神舟三号”飞船搭载返回地面筛选报告

附件材料4：中国科学院微生物所关于“神舟三号”飞船搭载太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株与地面对照菌的形态生理生化鉴

定报告书

附件材料5：中国科学院微生物所关于“神舟三号”飞船搭载太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽生产菌株与地面对照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鉴定报告书

附件材料6：陕西省药品检验所“神舟三号”太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽口服液检测报告

附件材料7：科技查新报告复印件

附件材料8：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏菌种保藏受理通知书)

本发明菌种选育：在α-溶血链球菌生长规律的基础上，选定较合适生长时期的菌种，采用平皿生长的菌落、浸入其它物质中的菌悬液、带菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭载“神舟三号”宇宙飞船。在太空轨道(近地点高度200公里、远地点高度350公里)进行了6天零18小时的在轨飞行。太空的特殊条件主要体现为微重力、高真空、高辐射、交变磁场等特殊环境。在外层空间飞行的菌种被置于一个与地球上的生态环境完全不同的环境中，主要包括来自磁场俘获的电子、质子及低能重粒子；来自银河系的宇宙射线如质子、粒子及更重的高能重粒子；来自太阳磁暴的质子及重粒子等。这些粒子作用于微生物细胞核中的DNA双链结构，可导致双链断裂。微重力、高真空环境可使DNA的碱基序列发生重组，即基因组的重组和变异。变异后产生的新菌株，其形态特征、培养特征、生理生化反应、代谢产物、遗传性状及蛋白表达、中试生产指标等均会发生不同程度的变化。在宇宙飞船返回地面后，经过进一步筛选，仅优选出其中0.2％的正变异且遗传特性稳定的菌株，经培育制成生产菌种。这种经航天搭载诱变后选育出的菌种已经在在2003年12月29日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCCNo.1082。

实验及中试生产结果表明，经空间诱变后的新型太空菌种在遗传特性上稳定，有较强的生产适应性，由其发酵产生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比国家标准(80％)提高3至5倍，西安市药品检验所送样测定达到271.6％，发酵含量比对照组产物含量平均高出三倍以上，发酵周期大大缩短。

制备方法：

太空诱变菌种生产甘露聚糖肽的制备过程：

本发明所述的太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽是由以下方法制备：太空菌种制备---一级发酵---二级发酵-----发酵液提纯，最终生产出甘露聚糖肽。

□太空菌种制备：

以经过空间诱变育种精心选育的α-溶血链球菌作为生产菌种。

A.斜面种子培养基：牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％，琼脂3％，绵羊血8％；pH7.4。

斜面种子培养基灭菌温度121□，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。

启封菌种冷冻管，用无菌肉汤培养基稀释，在无菌条件下接入血斜面，接种后置38□恒温培养30小时。

B.肉汤种子培养基：牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％；pH7.4。

肉汤种子培养基灭菌温度121□，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。

将培养好的斜面菌种在无菌条件下按9％接种量，接入肉汤种子培养基内，38□恒温培养30小时。

□发酵过程：

发酵培养基：牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化钠0.5％。

发酵培养基灭菌温度121□，时间30分钟，蒸汽压力0.12Mpa。

A.一级发酵罐：将优良的肉汤菌种在无菌条件下按10％接种量，接入一级种子罐，在29□恒温培养30小时，罐压不超过0.02Mpa，通气量以能翻动培养液为宜，连续充分搅拌。

B.二级发酵罐：将一级发酵培养液在无菌条件下按20％接种量，接入发酵罐，在29□恒温培养70小时，罐压不0.02Mpa，灭活放罐。灭活采用加温使发酵液温度达到100□，保温60分钟，冷却静置。

□提取过程：

a、发酵液进行浓缩，使浓缩液体积与发酵液体积比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。

b、发酵液的浓缩液加入80-99％乙醇，体积量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分搅拌静置后，离心去除上清液，沉淀用蒸馏水溶解，调pH5.0，得到溶解液并将溶解液静置。

c、再将溶解液离心去除杂质得到上清液，准确量取清液体积，按上清液体积计算出所需乙醇量，调pH值，将乙醇缓慢加入到上清液中，并充分搅拌，静置后离心去除上清液得到沉淀物。

d、沉淀物再用蒸馏水溶解，调pH，离心，上清液再加乙醇沉淀。这样的工艺反复操作至中间检测合格为止，得到的沉淀物为太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽粗品。真空干燥3-8小时，即得到太空诱变菌种生产的甘露聚糖肽产品。

上述方法得到的产品的检验：

[性状]本品为白色或微黄色无定形粉末；无臭、无味。

本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。

比旋度：取本品，精密称定，加水溶解并稀释成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录vIE)，比旋度为+70□至+80□。

[鉴别]1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，摇匀，沿管壁缓缓加硫酸0.5ml，数分钟后，界面呈紫红色。

2、取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，取约10ul点于滤纸上，晾干，用无水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解后.加0.2mol/L醋酸钠溶液1.5ml与乙醇100ml，混匀即得。置暗处保存，可使用数月)中浸泡5分钟，取出，用70％乙醇溶液冲洗，置还原液(取碘化钾5g，硫代硫酸钠5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L盐酸液2.5ml，随加随搅拌，临用时配)中浸泡5分钟，取出，用70％乙醇溶液冲洗，置品红业硫酸试液中浸泡约30分钟，取出，用焦亚硫酸钠溶液(取焦亚硫酸钠0.4g，加盐酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，冲洗，晾干，在滤纸片点样处应呈紫红色。

3、取供试品和对照品适量，分别加氯化钠注射液制成每1ml中含1mg的溶液作为供试品溶液和对照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性测定法试验，供试品和对照品管应均无溶血发生。

[检查]1、酸度：取本品，加水制成每1ml中含10mg的溶液，依法测定(中国药典2000年版二部附录□H)，pH值应为3.0-5.0。

2、吸收度：取本品，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录□A)，在260nm的波长处，其吸收度不得大于0.25，在280nm的波长处，其吸收度不得大于0.20。

3、总氮量：取本品，照氮测定法(中国药典2000年版二部附录□D第二法)测定.按干燥品计算，含总氮量应为0.8-2.0％。

4、免疫原性：取供试品和对照品适量，分别加氯化钠注射液制成每1ml中含10mg的溶液，再分别用磷酸盐缓冲液制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀释液作为供试品溶液和对照品溶液，依法检查(附甘露聚糖肽免疫原性测定法)，供试品不溶血管的最低浓度应不得高于对照品相应浓度的一倍以上。

5、干燥失重取本品，在105□干燥至恒重，减失重量不得过5.0％(中国药典2000年版二部附录□L)。

6、重金属取本品，在1.0g，依法检查(中国药典2000年版□H)含重金属不得过百万分之二十。

7、异常毒性取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含0.5mg的溶液，依法检查(中国药典2000年版附录□C)。按静脉注射法给药，应符合规定(供注射用)。

[含量测定]

1.对照品溶液的制备

精密称取经105□干燥至恒重的D-甘露糖对照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。摇匀；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，摇匀。每1ml中含甘露糖50ug。

2.供试品溶液备

取本品适量，精密称定，加水溶解制成每1ml中含40ug的溶液。

3.标准曲线的制备

精密称取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，摇匀，冲入硫酸4.5ml，摇匀，放置于室温，以0管为空白。照分光光度法(中国药典2000年版二部附录□A)在490nm的波长处测定吸收度。以甘露糖ug数对相应的吸收度，计算回归方程。

4.测定法

精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线制备项下自“再加3％苯酚溶液1.0ml”起，依法操作，测定吸收度，由回归方程计算甘露糖的含量。

甘露聚糖肽免疫原性测定法(补体结合法)；

1、试液

A.酸盐缓冲液(pH7.2)

取氯化钠8.5g、磷酸氢二钠0.565g及磷酸二氢钾0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸镁溶液1ml，摇匀。

B.1％羊红细胞悬液

羊血红细胞的制备：由绵羊颈静脉无菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸钠8.0g、氯化钠4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000ml使溶解，100□灭菌30分钟)的无菌容器中，4□保存。

1％羊血红细胞悬液的制备：取上述羊血红细胞适量，用氯化钠注射液洗涤三次，每次离心5分钟(2000转/分)，取压积羊血红细胞，用氯化钠注射液制成1％羊血红细胞悬液。取悬液，用氯化钠注射液稀释20倍制成供试品溶液，另取等量悬液加水稀释20倍作为空白溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录□A)，在541nm的波长处测定，其吸收度应为0.65-0.70，如超出限度应调节1％羊红细胞悬液的浓度。

C.溶血素及致敏羊血红细胞

溶血素的制备：取上述压积羊血红细胞，用氯化钠注射液制成25％羊血红细胞悬液。取家兔1只，静脉注射上述羊血红细胞悬液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分离血清，56□.30分钟灭活，分装，0□以下保存。

溶血素单位的测定：取溶血素适量，加磷酸盐缓冲液分别制成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀释液，各取0.1ml置试管中，加1％羊血细胞悬液0.1ml，摇匀，加稀释度为1∶30的豚鼠血清(补体)0.2ml及磷酸盐缓冲液0.2ml，摇匀，37□保温30分钟，完全溶血管的最高稀释度为1单位溶血素。

致敏羊血红细胞的制备：临用前，将2％的羊血红细胞悬液与2单位溶血索等体积混合，37□保温15分钟即得。

补体：取三只以上的豚鼠，心脏采血，离心分离血清，0□以下保存。

补体单位的测定：取补体适量，加磷酸盐缓冲液，分别制成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀释液，各取0.2ml置试管中，加0.2ml磷酸盐缓冲液，摇匀，37□保温30分钟后，分别加致敏羊血红细胞0.2ml，摇匀，37□再保温30分钟.完全溶血管的最高稀释度为1单位的补体。

抗体：取甘露聚糖肽对照品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含10mg的对照品溶液免疫家兔，隔日采用耳静脉注射对照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射后三日采血，离心分离血清，56□下30分钟灭活，分装，0□以下保存(临用前，需56□30分钟再次灭活)。

抗体单位的测定：取抗体适量，加磷酸盐缓冲液分别制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32.1∶64、1∶128的稀释液，各取0.1ml置试管中，加甘露聚糖肽对照品溶液0.1ml及2单位补体0.2ml，摇匀，于4-8□放置4小时以上，置37□保温30分钟，不溶血管的最高稀释度为1单位抗体。同时设抗原(不加抗体，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、抗体(不加抗原，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、补体(不加抗原，抗体，以0.2ml磷酸盐缓冲液代替)对照管，以上三种对照管应全溶血；另设的致敏羊血红细胞(不加抗原、抗体和补体，以0.4ml磷酸盐缓冲液代替)对照管应不溶血。

2、免疫原性测定法

取甘露骤糖肽对照品与供试品适量，照药品项下的规定制成不同浓度的对照品溶液和供试品溶液，各取0.1ml置试管中，加入2单位抗体0.1ml及2单位补体0.2ml.摇匀，于4-8□放置4小时以上，置37□保温30分钟，加入致敏羊血红细胞0.2ml，摇匀，37□再保温30分钟。观察各管的溶血情况，不溶血管的最低浓度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同时设抗原(不加抗体，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、抗体(不加抗原，以0.1ml磷酸盐缓冲液代替)、补体(不加抗原、抗体、以0.2ml磷酸盐缓冲液代替)对照管，以上三种对照管应全溶血：另设的致敏羊血红细胞(不加抗原、抗体和补体，以0.4ml磷酸盐缓冲液代替)对照管应不溶血。

实施例1取上述α-甘露聚糖肽300g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草50g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴50g、大枣80g、太子参100g、酸枣仁100g、地黄50g，共1000g制成10支，每支10ml。

制备时将上述中药浓煎三次→合并煎液→过滤去渣→与α-甘露聚糖肽和褪黑素混匀→过滤→浓缩→灌装→封口→灭菌→灯检→包装。

具体生产过程及设备按中华人民共和国药典2000版一部口服液的制备工艺生产(国家药典委员会编，化学工业出版社出版)。

其它实施例与实施例1只是用药成分不同，其它生产过程相同。

实施例2的药物1000g中含α-甘露聚糖肽300g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草50g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴50g、大枣80g、太子参50g、酸枣仁60g、地黄50g、人参10g、黄芪10g、紫河车20g、南五加皮15g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g。

实施例3的药物1000g中含α-甘露聚糖肽250g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草30g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴30g、大枣30g、太子参50g、酸枣仁30g、地黄30g、人参10g、黄芪10g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g刺五加20g、黄精20g、熟地20g、枸杞10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏15g、陈皮10g、茯苓10g、泽泻10g、山药15g、砂仁15g、肉桂15g。

实施例4的药物1000g中含α-甘露聚糖肽250g、褪黑素15g、五味予30g、冬虫夏草30g、绿茶40g、银杏40g、丹参30g、厚朴20g、大枣30g、太子参30g、酸枣仁30g、地黄30g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g。刺五加10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏5g、陈皮10g、茯苓10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、灵芝10g、人参10g、茶叶15g、麻黄10g、蜈蚣5g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄10g、枸杞10g、黄精10g、女贞子10g。

实施例5的药物1000g中含α-甘露聚糖肽200g、褪黑素15g、五味子30g、冬虫夏草30g、绿茶30g、银杏20g、丹参30g、厚朴20g、大枣30g、太子参30g、酸枣仁30g、地黄30g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g、刺五加10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏5g、陈皮10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、灵芝10g、人参10g、茶叶15g、麻黄10g、蜈蚣5g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄10g、枸杞10g、女贞子10g、黄精5g、首乌5g、珍珠粉10g、绞股蓝10g、黄芪5g、人参5g、枸杞10g、党参5g、蜂花粉5g、当归5g、酸枣仁10g、仙灵脾10g、茯苓15g。

实施例6的药物1000g中含α-甘露聚糖肽200g、褪黑素15g、五味子20g、冬虫夏草20g、绿茶10g、银杏10g、丹参20g、厚朴20g、大枣20g、太子参20g、酸枣仁15g、地黄15g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏15g、陈皮10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、茶叶25g、麻黄10g、蜈蚣15g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄15g、女贞子15g、黄精5g、首乌5g、珍珠粉10g、绞股蓝10g、黄芪5g、党参5g、蜂花粉5g、当归5g、酸枣仁10g、仙灵脾10g、茯苓15g、枸杞25g、人参20g、首乌10g、绞股蓝10g、白术10g、天冬10g、刺五加20g、灵芝20g。

组方原理：组方中的五味子、当归可有效的清除体内自由基，激活自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)；黄精、首乌能有效的延长脑细胞寿命，防止神经细胞数量的减少，改善听力和视力，提高智力和记忆力，从而达到抗衰老的目的；淫羊藿、α-甘露聚糖肽具有调节机体免疫力的作用；肉桂对下丘脑-垂体-靶腺轴有调节作用；灵芝具有提高代谢，调节血糖、降低血脂等作用；枸杞、人参具有促进DNA损伤的修复能力或合成能力，还有抗基因突变的作用；褪黑素具有清除自由基、增强免疫功能、调节神经内分泌的作用。另外，这些天然药物中还含有丰富的维生素和微量元素，它们为机体正常的生理活动不可缺少，同样对衰老的发生有防御作用。

本发明所述抗衰老口服液的毒理研究：①急性毒性试验：狗一次性灌胃300ml，未见死亡及任何不良反应发生；②亚急性毒性试验：狗每次口服50ml，每日三次，连用一个月，检查肝肾功能、血象及各脏器组织均无异常变化；③豚鼠过敏试验为阴性；④致畸致死试验均为阴性。

动物药效学研究

1试验材料

1.1试验动物：Km小鼠，Wistar大鼠，均为一级合格，由第四军医大学实验动物中心提供。黑腹果蝇(Drosophila malanogaster)，由西安交通大学医学院生物工程系提供。

1.2药物：α-甘露聚糖肽口服液、本发明所述的七种口服液均由本公司提供，首乌片，0.25g/片，由重庆桐君阁药厂生产。

1.3试剂：印度墨汁，25ml/瓶，上海长江日用粘合材料厂。无水碳酸钠，AR，500g/瓶，北京化工厂产品。乙酰苯肼，CP，规格100g/瓶，上海试剂三厂。D-半乳糖，生化试剂，25g/瓶，上海试剂二厂。硫代巴比妥酸(TBA)，生化试剂，上海试剂二厂。四乙氧基丙烷(TEP)，标准品，10nmol/L，由第三军医大学外研所提供。三氯醋酸，AR，上海化学试剂总厂。正丁醇，AR，重庆东方红试剂厂。邻苯三酚，AR，贵州遵义市第二化工厂。三氯甲烷，AR，天津天泰精细化学品有限公司。氰化高铁血红蛋白转化液(Drabkin液)、血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总蛋白、白蛋白、血糖、尿素氮和肌苷测定试剂盒均由重庆医学试剂研究所提供。

1.4仪器：日本岛津EB-3200D-AW电子天平(感量10mg)，上海第二天平厂JN-B精密型扭力天平(分度值0.5mg)，日本岛津UV-730自动生化比色仪，重庆光学仪器厂普通光学显微镜，小鼠跳台仪，秒表，恒温水箱。

2统计学处理

计量资料用X±SD表示，并用t检验进行组间两两对比。计数资料用x²(2×2)检验或确切概率法进行组间两两对比。等级型资料用秩和检验进行组间两两对比。检验水准a＝0.05。所有统计学处理均用Sigmastat统计软件在计算机上进行。

3方法与结果

3.1对小鼠免疫器官重量的影响

Km小鼠，体重11-15g，雌雄各半，按体重随机分成10组，即空白对照组、本发明所述七种口服液形成七组、α-甘露聚糖肽口服液组、首乌片组。分别用0.5ml蒸馏水、0.5m1本发明所述七种口服液、0.5mlα-甘露聚糖肽口服液、0.5g首乌片制成溶液灌胃，每天一次，连续10天。末次给药24小时后，用颈椎移位法处死动物，称体重及胸腺、脾脏的重量，以胸腺或脾脏重量(mg)与体重(g)之比作为胸腺或脾脏系数(结果见表1)。

表1各种药物对小鼠免疫器官重量的影响

组别动物数胸腺系数(mg/g) 脾脏系数(mg/g)

空白对照组 10 3.0±0.9 3.0±0.4

本发明所述第一种口服液组 10 4.8±0.6** 5.2±0.8**

本发明所述第二种口服液组 10 5.0±1.0** 5.3±0.7**

本发明所述第三种口服液组 10 5.2±0.6** 5.5±0.4**

本发明所述第四种口服液组 10 5.4±1.0** 5.6±0.3**

本发明所述第五种口服液组 10 5.6±0.5** 5.8±0.7**

本发明所述第六种口服液组 10 6.0±0.9** 6.2±0.8**

本发明所述第七种口服液组 10 6.5±0.8** 6.3±1.1**

α-甘露聚糖肽口服液组 10 4.0±0.3* 4.3±0.5*

首乌片组 10 3.9±0.5 3.8±0.7

注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

从表1的实验数据可以看出：本发明所述的七种口服液能明显的增加幼年小鼠胸腺、脾脏的重量，且随着口服液配方不断加强，胸腺和脾脏的增重也越来越明显，与空白对照组比较有极显著差异；单用α-甘露聚糖肽口服液对胸腺和脾脏也有明显的增重作用，但效果低于本发明所述的七种口服液；首乌片对胸腺和脾脏也有轻度的增重作用，增重效果明显低于本发明所述的七种口服液和α-甘露聚糖肽口服液。

3.2对小鼠碳粒廓清作用的影响

Km小鼠，体重18-22g，雌雄各半，按体重随机分成10组，即空白对照组、本发明所述七种口服液形成七组、α-甘露聚糖肽口服液组、首乌片组。分别用0.5ml蒸馏水、0.5ml本发明所述七种口服液、0.5mlα-甘露聚糖肽口服液、0.5g首乌片制成溶液灌胃，每天一次，连续7天。末次给药1小时后，尾静脉注射1∶2稀释印度墨汁0.1ml/10gBW，于注后1分钟(t1)、5分钟(t5)，分别用吸管经眼眶后静脉丛取血20μl，测定每只动物的碳粒吞噬指数K及校正吞噬指数α(结果见表2)。

表2各种药物对小鼠碳粒廓清作用的影响

组别动物数吞噬指数K(×10^-2) 校正吞噬指数α

空白对照组 10 7.33±1.87 7.06±1.14

本发明所述第一种口服液组 10 10.07±1.01** 9.52±0.84**

本发明所述第二种口服液组 10 10.27±0.94** 9.73±1.13**

本发明所述第三种口服液组 10 10.86±0.73** 10.01±0.43**

本发明所述第四种口服液组 10 11.25±1.05** 10.25±0.62**

本发明所述第五种口服液组 10 12.86±1.16** 10.89±0.75**

本发明所述第六种口服液组 10 13.07±0.97** 11.34±0.89**

本发明所述第七种口服液组 10 13.63±0.88** 11.58±0.68**

α-甘露聚糖肽口服液组 10 9.25±0.73* 9.01±0.51*

首乌片组 10 7.47±1.52 7.12±0.89

注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

从表2的实验数据可以看出：本发明所述的七种口服液能明显的增加网状内皮系统对血液中惰性碳粒的吞噬廓清能力，且随着口服液配方不断加强，网状内皮系统对血液中惰性碳粒的吞噬廓清能力也越来越强，与空白对照组比较有极显著差异(P＜0.01)；单用α-甘露聚糖肽口服液后网状内皮系统对血液中惰性碳粒的吞噬廓清能力也有明显的增加，但效果低于本发明所述的七种口服液；首乌片组小鼠的网状内皮系统对血液中惰性碳粒的吞噬廓清能力无明显改变。表明本发明所述的七种口服液具有增强机体非特异性免疫机能，α-甘露聚糖肽口服液也具有增强机体非特异性免疫机能，但效果显著低于前者。

3.3对小鼠血清溶血素抗体生成的影响

Km小鼠，体重18-22g，雌雄各半，按体重随机分成11组，即空白对照组、免疫对照组、本发明所述七种口服液形成七组、α-甘露聚糖肽口服液组、首乌片组。除空白对照组外，其余动物均腹腔注射2％RBC 0.2ml/只进行免疫，在免疫当日开始分别用0.5ml蒸馏水、0.5ml蒸馏水、0.5ml本发明所述七种口服液、0.5mlα-甘露聚糖肽口服液、0.5g首乌片制成溶液灌胃，每天一次，连续6天。末次给药后1小时眼眶采血20μl，测定每只小鼠样品半数溶血值HC₅₀(结果见表3)。

表3各种药物对小鼠溶血素抗体生成的影响

组别动物数 HC₅₀

空白对照组 10 4.59±1.32

免疫对照组 10 14.67±5.89##

本发明所述第一种口服液组 10 19.54±3.92*

本发明所述第二种口服液组 10 22.25±8.86*

本发明所述第三种口服液组 10 26.96±9.98**

本发明所述第四种口服液组 10 28.57±7.23**

本发明所述第五种口服液组 10 35.47±6.89**

本发明所述第六种口服液组 10 40.97±7.68**

本发明所述第七种口服液组 10 43.03±10.23**

α-甘露聚糖肽口服液组 10 20.14±5.13*

首乌片组 10 13.05±6.47

注：与空白对照组比较##P＜0.01，与免疫对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

从表3的实验数据可以看出：用2％RBC对小鼠进行免疫后，其HC₅₀较空白对照组显著升高。应用本发明所述的七种口服液后，可见HC₅₀均较免疫对照组高，且随着口服液配方的加强，对HC₅₀的升高作用更加显著，表明本发明所述的七种口服液具有提高机体体液免疫功能的作用。单用α-甘露聚糖肽口服液同样对HC₅₀有一定程度的升高作用，但效果次于本发明所述的七种口服液，表明本发明所述的七种口服液对机体体液免疫功能的提高作用优于单用α-甘露聚糖肽口服液。首乌片对机体体液免疫功能无明显的升高作用。

3.4对乙酰苯肼致小鼠血虚模型的影响

Km小鼠，体重18-22g，雌雄各半，按体重随机分成11组，即空白对照组、模型对照组、本发明所述七种口服液形成七组、α-甘露聚糖肽口服液组、首乌片组。试验第1、4、7天，给小鼠分别皮下注射2％乙酰苯肼0.1、0.05、0.05ml/10g，(正常对照注射等容积生理盐水)。从试验第1天开始灌胃给药，正常组及模型组给蒸馏水0.5ml，其余各组分别给0.5ml本发明所述七种口服液、0.5mlα-甘露聚糖肽口服液、0.5g首乌片制成0.5ml溶液，每天一次，连续8天，第9天眼眶采血，用氰化高铁分光光度法测定血红蛋白(Hb)，用比浊法测定红细胞(RBC)数(结果见表4)。

表4各种药物对血虚小鼠外周血Hb、RBC的影响

组别动物数 Hb(g/L) RBC(/L)

空白对照组 10 161.8±4.1 6.19±1.98

模型对照组 10 89.0±14.4## 1.70±0.72##

本发明所述第一种口服液组 10 106.07±12.5* 2.21±0.54*

本发明所述第二种口服液组 10 110.9±21.8* 2.40±0.13*

本发明所述第三种口服液组 10 112.8±17.8** 2.69±0.58**

本发明所述第四种口服液组 10 115.78±15.07** 2.74±0.62**

本发明所述第五种口服液组 10 120.34±11.16** 3.89±0.75**

本发明所述第六种口服液组 10 133.47±10.97** 4.99±0.89**

本发明所述第七种口服液组 10 160.63±11.36** 6.04±0.38**

α-甘露聚糖肽口服液组 10 90.57±10.73 1.81±0.51

首乌片组 10 91.49±11.52 1.69±0.89

注：与空白对照组比较##P＜0.01，与模型对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

从表4的实验数据可以看出：模型对照组小鼠Hb和RBC均显著低于正常对照组，表明血虚模型制作成功。应用本发明所述七种口服液对血虚动物进行治疗后，动物血中Hb和RBC均显著提高，且随着口服液配方的加强，疗效更加显著，部分动物血中Hb和RBC已恢复到正常水平。α-甘露聚糖肽口服液组和首乌片组血虚动物血中的Hb和RBC无明显改善。表明本发明所述七种口服液有较好的补血作用，其疗效显著优于单用α-甘露聚糖肽口服液和首乌片。

3.5对生化乏源致气虚小鼠模型的影响

Km小鼠，体重18-22g，雌雄各半，按体重随机分成11组，即空白对照组、模型对照组、本发明所述七种口服液形成七组、α-甘露聚糖肽口服液组、首乌片组。除正常对照组给足量饲料(2.5g/10g/d)外，其余动物限制食量(饲料量1g/10g/d)。限食第5天开始分别用0.5ml蒸馏水、0.5ml蒸馏水、0.5ml本发明所述七种口服液、0.5mlα-甘露聚糖肽口服液、0.5g首乌片制成溶液灌胃，每天一次，连续7天，末次给药1小时后，按小鼠体重10％附加负荷，然后将小鼠放入恒温水箱内(水深30cm，水温14-16℃)，观察小鼠头部沉入水中10秒钟不能浮出水面者为体力耗竭，即为小鼠游泳时间(结果见表5)。

表5各种药物对气虚小鼠低温负荷游泳时间的影响

组别动物数低温负荷游泳时间

空白对照组 10 169.0±54.1

模型对照组 10 119.0±30.9#

本发明所述第一种口服液组 10 145.0±38.7*

本发明所述第二种口服液组 10 146.0±36.8*

本发明所述第三种口服液组 10 148.0±39.3*

本发明所述第四种口服液组 10 150.0±37.2*

本发明所述第五种口服液组 10 152.0±36.6*

本发明所述第六种口服液组 10 155.0±35.6**

本发明所述第七种口服液组 10 156.0±36.8**

α-甘露聚糖肽口服液组 10 120.0±35.1

首乌片组 10 123.0±36.4

注：与空白对照组比较#P＜0.05，与免疫对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

从表5所示的实验数据可以看出：模型对照组动物低温负荷游泳时间显著缩短，表明动物明显气虚。应用本发明所述七种口服液对气虚动物进行治疗后，动物低温负荷游泳时间均显著延长，且随着口服液配方的加强，疗效更加显著，部分动物低温负荷游泳时间恢复到正常水平。α-甘露聚糖肽口服液组和首乌片组气虚动物低温负荷游泳时间无明显改善。表明本发明所述七种口服液有较好的补气作用，其疗效显著优于单用α-甘露聚糖肽口服液和首乌片。

3.6对果蝇寿命的影响

配制果蝇基础培养基，果蝇的卵、幼虫、蛹、成虫均培养在25±1℃和相对湿度60％-70％的柱形玻璃小室中，每室容积约60cm²。按不同性别、组别分室饲养，每室饲养25-30只。收集10小时内羽化的成虫，在基础培养基中饲养一个月，使之成为老化果蝇，在随机分组继续饲养，设空白对照组(0.5ml蒸馏水)、本发明所述七种口服液形成七组(0.5ml各口服液)、α-甘露聚糖肽口服液组(0.5ml)、首乌片组(0.5g)。以上药物浓度均为每100g培养基所含本发明所述七种口服液、α-甘露聚糖肽口服液及首乌片的量。每4天更换一次培养基，每天定时记录死亡数，直至全部死亡。以平均寿命和最高寿命(每组最后死亡5只果蝇的平均寿命)为指标，评价所试药物的延寿作用(结果见表6)。

表6各种药物对果蝇寿命的影响

组别果蝇数平均寿命(天) 延寿率(％) 最高寿命(天)

空白对照组 232 70.4±20.7 —— 112.6

本发明所述第一种口服液组 217 87.4±27.6** 24.1 133.6

本发明所述第二种口服液组 218 88.1±25.1** 25.2 139.4

本发明所述第三种口服液组 231 88.86±20.7** 26.2 142.3

本发明所述第四种口服液组 213 89.25±21.5** 26.8 144.6

本发明所述第五种口服液组 210 90.01±21.6** 27.9 147.5

本发明所述第六种口服液组 211 90.77±20.9** 28.9 148.9

本发明所述第七种口服液组 227 91.63±20.8** 30.2 150.1

α-甘露聚糖肽口服液组 223 79.25±20.3* 12.6 120.7

首乌片组 231 80.47±21.5* 14.3 122.3

注：与空白对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

从表6的实验数据可以看出：培养基中加入本发明所述的七种口服液培养出的果蝇，平均寿命及最高寿命均较空白对照组显著延长，且随着口服液配方的更加全面，延长寿命的作用体现的更加明显。α-甘露聚糖肽口服液和首乌片对果蝇的寿命也有一定程度的延长，但效果显著低于本发明所述的七种口服液。

3.7对D-半乳糖致小鼠亚衰老模型的影响

Km小鼠，体重22-25g，雌雄各半，按体重随机分成11组，即空白对照组、模型对照组、本发明所述七种口服液形成七组、α-甘露聚糖肽口服液组、首乌片组。模型组和各给药组小鼠每天颈部皮下注射5％D-半乳糖0.5ml/只，连续4周，对照组皮下注射等体积生理盐水。在注射D-半乳糖当日开始灌胃给药(分别为0.5ml蒸馏水、0.5ml蒸馏水、0.5ml本发明所述七种口服液、0.5mlα-甘露聚糖肽口服液、0.5g首乌片制成溶液)，每天1次，共4周。每日笼旁观察小鼠外观、活动情况。实验结束时用跳台法测定学习记忆情况，然后眼眶采血，用硫代巴比妥酸法测定血清脂质过氧化物(LPO)含量，用邻苯三酚法测定血液超氧化物歧化酶(SOD)活性。取动物肝、脑组织按常规制作5μm石蜡包埋切片，用Schmor’s反应显示组织内脂褐素含量，光镜观察，结果用半定量计分方式分5级表达(0分，未见蓝黑色脂褐素颗粒；1分，偶见散在的细微颗粒；2分，易见的细微颗粒；3分，较广泛分布的细颗粒；4分，广泛分布的细颗粒，部分粗大深染)(结果见表7、表8)。

表7各种药物对D-半乳糖致小鼠记忆获得障碍的影响

组别动物数训练5min内测试触电训练5min内

触电次数潜伏期(S) 错误次数

空白对照组 12 2.1±2.1 152.3±81.6 2.0±1.5

模型对照组 12 5.3±2.8## 81.5±65.6## 4.8±2.7##

本发明所述第一种口服液组 12 2.7±1.2** 180.4±69.3* 2.0±1.7*

本发明所述第二种口服液组 12 2.6±1.8** 186.7±70.1* 1.9±1.3**

本发明所述第三种口服液组 12 2.5±1.4** 200.8±157.5* 1.9±0.8**

本发明所述第四种口服液组 12 2.4±1.5** 209.2±68.5** 1.8±1.3**

本发明所述第五种口服液组 12 2.2±1.1** 211.7±78.6** 1.7±1.1**

本发明所述第六种口服液组 12 2.1±1.3** 224.5±89.5** 1.7±1.3**

本发明所述第七种口服液组 12 2.0±1.0** 230.3±96.4** 1.7±0.8**

α-甘露聚糖肽口服液组 12 4.0±1.5* 120.3±58.6 3.5±1.3

首乌片组 12 3.9±1.6* 124.2±88.4 3.5±1.5

实验结果发现：D-半乳糖造模4周后，小鼠活动减少，行为迟缓，皮毛蓬松，用跳台法测定其获得性记忆有明显障碍，触电潜伏期缩短，测试错误次数增加，血液SOD活性减弱，血清LPO含量增加，脑组织内老化代谢产物脂褐素的生成显著增加，表明用D-半乳糖成功制成动物衰老模型。应用本发明所述的七种口服液治疗后，发现衰老小鼠的获得性记忆障碍有明显改善，触电潜伏期延长，测试错误次数减少，血液SOD活性增强，血清LPO含量下降，脑组织内老化代谢产物脂褐素的生成显著减少，且随着口服液配方的全面，上述治疗效果更加显著。α-甘露聚糖肽口服液和首乌片可在一定程度上改善衰老小鼠的获得性记忆障碍、延长的触电潜伏期、增加的测试错误次数、降低的SOD活性、升高的血清LPO含量、及增多的脑组织内老化代谢产物脂褐素，但疗效显著低于本发明所述的七种口服液。

表8各种药物对D-半乳糖致小鼠亚衰老模型SOD、LPO、脂褐素的影响

组别动物数红细胞SOD 血清LPO 脑内脂褐素

(U/ml) MDAnmol/L 记分值

空白对照组 12 34.0±5.0 35.2±32.9 0.5±0.4

模型对照组 12 14.9±8.7## 71.2±31.7## 2.6±0.7##

本发明所述第一种口服液组 12 20.7±6.2* 47.5±20.3* 1.5±0.7*

本发明所述第二种口服液组 12 21.6±7.8* 45.3±21.3* 1.4±0.5*

本发明所述第三种口服液组 12 23.5±9.4* 37.6±17.5** 1.3±0.8*

本发明所述第四种口服液组 12 26.4±9.5** 36.5±18.4** 1.2±0.9*

本发明所述第五种口服液组 12 26.9±9.1** 34.3±17.2** 1.1±0.6**

本发明所述第六种口服液组 12 27.3±8.3** 32.5±14.6** 1.1±0.4**

本发明所述第七种口服液组 12 28.0±5.9** 30.3±16.4** 1.0±0.8**

α-甘露聚糖肽口服液组 12 16.8±11.5 60.3±18.6 2.0±1.3

首乌片组 12 17.8±8.6 59.2±14.5 2.1±1.5

4讨论

药效学研究发现，本发明所述七种口服液灌胃给药可明显增加小鼠碳粒廓清速度和幼年小鼠免疫器官(胸腺、脾脏)重量，促进小鼠溶血素抗体生成，明显延长果蝇平均寿命和最高寿命，对D-半乳糖所致小鼠亚衰老模型、乙酰苯肼致血虚模型和生化乏源致气虚模型有显著治疗作用，表明本品有明显的扶正补虚、益寿抗衰药理作用，且疗效显著优于单用α-甘露聚糖肽口服液和首乌片。

本发明所述抗衰老口服液的临床疗效验证：李某，女，55岁，某机关干部，自述近一年来常感疲乏无力，肢体协调性差，视力下降并花眼，记忆力减退，耳鸣频繁，睡眠质量差，自感身体抵抗力下降，经常感冒，面部出现黄褐色老年斑，血压和血脂偏高。去医院进行对症治疗，效果不佳。服用本发明所述抗衰老口服液10天后，晚间睡眠时间从原来的4-5小时延长到现在的7-8小时，睡眠状况明显改善；血压从原来的160/90mmHg下降到现在的110/70mmHg，已基本恢复正常；精神状况明显好转，继续服用两个月，身体的各种不适均改善，手脚轻便，活动自如，眼睛明亮，记忆力改善，耳鸣消失，自服药起未感冒过一次，身体抵抗力增强，血压和血脂恢复正常水平，面部老年斑逐渐淡去，皮肤光滑红润。可见本发明所述抗衰老口服液对老年性身体机能下降有全面确切的改善作用。

本发明所述抗衰老口服液临床疗效的统计：收集349位老年人的资料，其中男200例，女149例，年龄55-65岁，每位加入的老年人服用本发明所述抗衰老口服液，每日两次，每次10ml。用药两个月后进行统计：246位有失眠症的患者，用药前夜间平均睡眠时间为4-5小时，用药后夜间平均睡眠时间恢复到7-8小时，睡眠质量明显改善；198位高血压患者，用药前平均血压值为150/80mmHg，用药后平均血压值为100/70mmHg，血压基本恢复到正常水平；5位癌症患者的平均存活期超过三年半，比一般未服此药的癌症患者平均存活期明显延长，生活质量提高；除2位老人用药后自感身体状况变化不明显外，其余老人从各个方面都有所改善，如精神状态好，营养状况佳，体格强健，抵御疾病的能力增强，皮肤表面老年斑淡化，听力、视力及记忆力均得到改善，自身原有的一些疾病也都得到改善或恢复，身体各系统生理机能恢复正常，统计总有效率达到99.4％。

Claims

1、一种抗衰老的药物，其特征是：它主要包括α-甘露聚糖肽15％-45％、褪黑素0.5％-5％、清除自由基类中药50％-80％。

2、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-40％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药30％-60％、提高机体免疫力的中药5％-30％。

3、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-50％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％。

4、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-50％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％、调节机体代谢的中药5％-30％。

5、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-40％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％、调节机体代谢的中药5％-30％、延长细胞寿命的中药5％-20％。

6、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物包括α-甘露聚糖肽20％-40％、褪黑素0.5％-3％、清除自由基类中药10％-50％、提高机体免疫力的中药5％-20％、调节神经内分泌功能的中药10％-30％、调节机体代谢的中药5％-30％、延长细胞寿命的中药5％-20％、抗基因突变的中药10％-20％。

7、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的具有清除自由基作用的中药是五味子、当归、冬虫夏草、绿茶、银杏、丹参、厚朴、大枣、太子参、酸枣仁、地黄；具有提高机体免疫力的中药是人参、黄芪、紫河车、南五加皮、淫羊藿、鱼腥草、桑枝；具有调节神经内分泌功能的中药是刺五加、黄精、熟地、枸杞、桑椹、雄蚕蛾、党参、半夏、陈皮、茯苓、泽泻、山药、砂仁、肉桂；具有调节机体代谢的中药是苦丁、灵芝、人参、茶叶、麻黄、蜈蚣、牛蒡子、当归、山楂、胡桃、杏仁、冬虫夏草、茶叶、三七、刺五加、蜂蜜、黄芪、地黄、枸杞、黄精、女贞子；具有延长细胞寿命的中药：黄精、首乌、珍珠粉、绞股蓝、黄芪、人参、枸杞、党参、蜂花粉、当归、酸枣仁、仙灵脾、茯苓；具有抗基因突变的中药是枸杞、人参、首乌、绞股蓝、白术、天冬、刺五加、灵芝。

8、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽300g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草50g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴50g、大枣80g、太子参100g、酸枣仁100g、地黄50g。

9、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽300g、褪黑素20g、五味子50g、当归50g、冬虫夏草50g、绿茶50g、银杏50g、丹参50g、厚朴50g、大枣80g、太子参50g、酸枣仁60g、地黄50g、人参10g、黄芪10g、紫河车20g、南五加皮15g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g。

10、根据权利要求1所述的一种抗衰老的药物，其特征是：所述的药物1000g中含α-甘露聚糖肽200g、褪黑素15g、五味子20g、冬虫夏草20g、绿茶10g、银杏10g、丹参20g、厚朴20g、大枣20g、太子参20g、酸枣仁15g、地黄15g、紫河车20g、南五加皮10g、淫羊藿15g、鱼腥草10g、桑枝10g、黄精10g、熟地10g、桑椹10g、雄蚕蛾15g、党参10g、半夏15g、陈皮10g、泽泻10g、山药15g、砂仁5g、肉桂5g、苦丁20g、茶叶25g、麻黄10g、蜈蚣15g、牛蒡子10g、当归10g、山楂20g、胡桃10g、杏仁10g、冬虫夏草5g、茶叶10g、三七20g、刺五加10g、蜂蜜10g、黄芪10g、地黄15g、女贞子15g、黄精5g、首乌5g、珍珠粉10g、绞股蓝10g、黄芪5g、党参5g、蜂花粉5g、当归5g、酸枣仁10g、仙灵脾10g、茯苓15g、枸杞25g、人参20g、首乌10g、绞股蓝10g、白术10g、天冬10g、刺五加20g、灵芝20g。