CN1237180A

CN1237180A - 噻吩并－三唑并二氮杂䓬化合物及其医药用途

Info

Publication number: CN1237180A
Application number: CN97199667A
Authority: CN
Inventors: 末冈广幸; 小松弘嗣; 小林治仁; 江原秀二
Original assignee: Welfide Corp
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp; Tanabe Seiyaku Co Ltd
Priority date: 1996-09-13
Filing date: 1997-08-11
Publication date: 1999-12-01
Anticipated expiration: 2017-08-11
Also published as: EP0989131A1; AU716490B2; DE69717160D1; DK0989131T3; CA2265645A1; JP3094453B2; NO323892B1; CN1109037C; ATE227727T1; EP0989131B1; NO991191L; ES2182108T3; CA2265645C; KR20000036057A; WO1998011111A1; NO991191D0; EA001732B1; DE69717160T2; EA199900287A1; PT989131E

Abstract

通式(1)所示的噻吩并－三唑并二氮杂䓬化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物,和含有同样物质的药物。式中X表示卤素;R1表示C1－4烷基;R2表示C1－4烷基;a表示1－4的整数;且R3表示C1－4烷基、C1－4羟烷基、C1－4烷氧基、也可以有取代基的苯基、或也可以有取代基的杂芳基。含有上述化合物的医药可以用来作为溃疡性肠炎和节段性回肠炎等与细胞粘连有关的炎症性肠道疾病的治疗药、预防药或旧病复发抑制药。此外,这些化合物也可用于预防或治疗静脉机能不全或维持两者的宽解。由于已被动物实验证明是低毒性的,因而这些医药可用作高度安全的药物。

Description

噻吩并－三唑并二氮杂䓬化合物及其医药用途

技术领域

本发明涉及有强细胞粘连抑制作用、可用作溃疡性大肠炎、节段性回肠炎等炎症性肠道疾病的治疗药的噻吩并-三唑并二氮杂化合物及其医药用途。

背景技术

国际专利申请公开WO89/05812号公报和特开平3-223290号公报中公开了有CCK拮抗作用和促胃液素拮抗作用的噻吩并二氮杂化合物。国际专利申请公开WO93/07129号公报中公开了可用作骨质疏松症治疗药的噻吩并-三唑并二氮杂化合物。此外，国际专利申请公开WO93/12177号公报、WO94/06082号公报和WO94/22872号公报中也公开了有细胞粘连抑制作用的噻吩并-三唑并二氮杂化合物。

特开平2-243691号公报中公开了有血小板活化因子(PAF)抑制活性的噻吩并-三唑并二氮杂化合物。其实施例化合物都是在噻吩的2位上有取代基、或2位与3位结合形成环烷烃、且4位是邻位(2位)上有氯的苯基即2-氯苯基的化合物。此外，其6位有甲基、羟基、羧烷基、羟烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、吗啉代羰乙基等基团取代。这些化合物中，已知有下式(A)结构的实施例8化合物是6位上有酰胺基的化合物。

在各种炎症、过敏性疾病中，多形核白血球、巨噬细胞和淋巴细胞等所谓炎症性细胞(广义白血球)的浸润与其病态有密切关系。近年来分子生物学的进步，使得能相继鉴定出与粘连有关的分子，和查明其机能性意义，即通过在血管内皮细胞上表达的某些特定粘连分子以及与其特异结合的白血球上的粘连分子引起白血球粘连，继而引起白血球向炎症组织中浸润这样的现象。

在与疾病的关系方面，除报告了炎症性皮肤疾病(接触性过敏症、光线过敏症等)和慢性类风湿性关节炎等自体免疫疾病中炎症部位上ICAM-1(细胞间粘连分子-1)和E-selectin表达亢进外，还提出了哮喘病中VCAM-1(血管细胞粘连分子-1)、ICAM-1、Mac-1等的参与。此外，还报告了在脏器移植后的排异反应中经由ICAM-1等发生的细胞粘连发挥重要作用。进而，也显示了在癌转移中与粘连分子有关。而且，近年来，已日益增多地揭示出，在溃疡性大肠炎、节段性回肠炎、肾炎等的发作和进展中也与Mac-1、E-selectin、VCAM-1等细胞粘连分子有密切关系。进而，还知道了细胞粘连分子也与动脉粥样硬化的形成与进展、局部缺血性再灌注障碍、败血症等有很深的关系。

人们期待着在这样的情况下有细胞粘连抑制作用的化合物能成为优异的抗炎药或抗过敏药。例如，美国国家科学院文集(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)第88卷(1991年)355-359页记载了N-(芴基-9-甲氧羰基)氨基酸类通过妨碍白血球粘连而抑制了各种动物炎症模型中的反应，而美国临床研究联合会年会(American Federation forClinical Research Annual Meeting,1991年5月6日)的一篇摘要记载了同系列化合物通过抑制白血球上的粘连分子(CD18等)表达而妨碍白血球粘连到血管内皮细胞上。这样，有细胞粘连抑制作用的化合物就可望成为上述疾病和障碍的预防或治疗药。

然而，包括先有技术栏所列举的文献在内的各种已知文献中记载的化合物还不能获得令人满意的细胞粘连抑制作用，希望进一步开发出有强力细胞粘连抑制作用的化合物。

溃疡性大肠炎或节段性回肠炎是难治性疾病，还没有建立起根治疗法。作为对溃疡性大肠炎或节段性回肠炎的治疗药，可以使用泼尼松龙等甾类药剂、5-氨基水杨酸(5-ASA)、水杨酸偶氮磺胺吡啶(SASP)等，但这些药剂中，甾类药剂常常引起严重的副作用(月样圆面容、高血糖、尿量增加、肾上腺皮质机能抑制等)，而其它药剂又未必能达到令人满意的治疗效果，及其它问题。因此，强烈希望有能替代这些药剂的治疗药。

此外，通过上述文献，也已经知道了基于PAF拮抗作用的抗过敏药或抗炎药，基于CCK拮抗作用、促胃液素拮抗作用的胰腺炎治疗药或胃酸分泌抑制药，以及借助于细胞粘连抑制作用的炎症性疾病治疗药、过敏性疾病治疗药或自体免疫性疾病治疗药等，但还不知道有基于细胞粘连抑制作用的溃疡性大肠炎或节段性回肠炎的治疗药。

发明公开

本发明者等人，在以开发溃疡性大肠炎或节段性回肠炎等炎症性肠道疾病的治疗药为目的而探索有强细胞粘连抑制作用的物质时，发现旋光性通式(1)化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物强烈抑制与炎症性疾病的病态有关的粘连分子Mac-1(CD11b)、VCAM-1和E-selectin的表达，而且在用肠炎模型动物进行的实验中有意义地抑制了肠炎发病引起的肠重量增加，终于完成了本发明。

即，本发明如下：

①通式(1)所示的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物

(式中，X表示卤素，R¹表示1～4个碳的烷基，R²表示1～4个碳的烷基，a表示1～4的整数，R³表示1～4个碳的烷基、1～4个碳的羟烷基、1～4个碳的烷氧基、也可以有取代基的苯基、或也可以有取代基的杂芳基)；

②上述①记载的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物，其中通式(1)中X是氯，R¹、R²都是甲基；

③上述①或②记载的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物，其中通式(1)中a是1；

④上述①记载的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物，其中通式(1)的化合物是(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基] N-(4-羟基苯基)乙酰胺；

⑤(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4羟基苯基)乙酰胺·二水合物；

⑥一种药物，其中含有通式(1)所示的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物

⑦上述⑥记载的药物，其中含有通式(1)中X为氯、R¹、R²均为甲基的噻吩并三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物；

⑧上述⑥或⑦记载的药物，其中含有通式(1)中a为1的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物；

⑨上述⑥记载的药物，其中通式(1)的化合物是(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺；

⑩上述⑥记载的药物，所述药物是炎症性肠道疾病治疗药；

上述⑥记载的药物，所述药物是溃疡性大肠炎治疗药；

上述⑥记载的药物，所述药物是节段性回肠炎治疗药；

一种药物，其中含有(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺·二水合物；

上述记载的药物，所述药物是炎症性肠道疾病治疗药；

上述记载的药物，所述药物是溃疡性大肠炎治疗药；

上述记载的药物，所述药物是节段性回肠炎治疗药。

本发明化合物是以象通式(1)那样在6位上有下式所示的有酰胺键的取代基

-(CH₂)aCONH-R³且该取代基有特定立体构型(S构型)为特征者，但重要的是，除此之外，还要在2位、3位和9位上均为甲基等烷基，且4位上为对位有卤素的4-卤代苯基的组合。本发明的目标首先是由2、3、4、6、9位上有这种组合的噻吩并-三唑并二氮杂化合物达到的。

通式(1)中各基团的具体例子如下。

X所示的卤素系指氯、溴、氟、碘、较好的是氯。R¹、R²、R³所示的1～4个碳的烷基系指甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、较好的是甲基。R³所示的1～4个碳的羟烷基系指羟甲基、2-羟基乙基、1-羟基乙基、3-羟基丙基、4-羟基丁基等。R³所示的1～4个碳的烷氧基系指甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基等。R³所示的也可以有取代的苯基，系指也可以有1～2个卤素(氯、溴、氟等)、1～4个碳的烷基(甲基、乙基等)、羟基、1～4个碳的羟烷基(羟甲基、羟乙基等)、氨基、硝基作为取代基的苯基，例如4-羟基苯基、4-氨基苯基、3-氯苯基等。R³所示的也可以有取代基的杂芳基，系指也可以有1～2个卤素(氯、溴、氟等)、1～4个碳的烷基(甲基、乙基等)、羟基、氨基、硝基、1～4个碳的烷氧基(甲氧基、乙氧基等)作为取代基的吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基等，例如，3-吡啶基、2-甲氧基-3-吡啶基、4-甲氧基-3-吡啶基、1,2,3,4-四氢-2-氧代喹啉-6-基等。

本化合物的医药上可接受的盐，可以列举与无机酸(盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)或有机酸(乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、抗坏血酸等)的酸加成盐，以及与无机碱(氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化锌、氢氧化铵等)、有机碱(甲胺、二乙胺、三乙胺、二环己基胺、三乙醇胺、乙二胺、三(羟甲基)氨基甲烷、喹宁、胍、辛可宁等)或氨基酸(赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、丙氨酸等)的盐，从本发明的目的来看，这些盐是较好的无毒性的盐。而且，也包含水合物(一水合物、二水合物等)或其它溶剂合物。

通式(1)的化合物较好的是下式所示的(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺，尤其从稳定性的观点来看，最好的是其二水合物。

本发明的通式(1)化合物可以象下列反应式那样，通过通式(2)化合物与通式(3)化合物反应获得：

(式中，各符号的含义同上)

反应是在不妨碍本反应的适当溶剂例如四氢呋喃、二乙醚、二异丙醚、二噁烷、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯、苯、甲苯、二甲苯、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜等有机溶剂中，必要时在碱、亚硫酰二卤、有机酰卤或脱水缩合剂的存在下，在-60℃～溶剂沸点的温度进行的。

作为必要时可以使用的碱，可以列举碱金属氢氧化物(氢氧化钠、氢氧化钾等)、碱金属碳酸盐(碳酸钠、碳酸钾等)、碱金属碳酸氢盐(碳酸氢钠、碳酸氢钾等)、碱金属氢化物(氢化钠等)、碱金属醇盐(甲醇钠、叔丁醇钾等)、或有机碱(三乙胺、吡啶、甲基吡啶、N-甲基吗啉等)。而且，必要时使用溴化四丁铵、碘化苄基三乙胺等相转移催化剂，还可以在上述有机溶剂和水的两相体系中使用碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐等。作为亚硫酰二卤，可以列举诸如亚硫酰二氯、亚硫酰二溴等。作为有机酰卤，较好的是能生成通式(2)的羧酸和混合酐者，例如，可以列举氯甲酸乙酯、氯甲酸异丁酯、新戊酰氯等。作为脱水缩合剂，较好的是可用于酰胺合成者，例如，可以列举二环己基碳化二亚胺(DCC)、N-乙基-N′-(二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(WSC)、二苯基磷酰叠氮(DPPA)、N-甲基-2-氯吡啶鎓碘化物、苯并三唑-1基氧-三(二甲胺基)鳞·六氟磷酸盐(Bop试剂)、2-氯-1,3-二甲基咪唑鎓氯化物(DMC)、分子筛等。

这样得到的通式(1)化合物可以通过重结晶、柱色谱法等本身已知的方法，与反应混合物分离、精制。

通式(1)的化合物可以通过常法，与无机酸(盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)、有机酸(乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、抗坏血酸等)、无机碱(氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化锌、氢氧化铵等)、有机碱(甲胺、二乙胺、三乙胺、二环己基胺、三乙醇胺、乙二胺、三(羟甲基)氨基甲烷、喹宁、胍、辛可宁等)或氨基酸(赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸、丙氨酸等)一起处理，制成盐。

通式(2)的化合物可按如下方法得到。

通式(4)化合物

(式中，各符号的含义同前)在乙醇钠、甲醇钠、氢化钠、叔丁醇钾、二异丙基氨化锂、丁基锂等碱的存在下，与碳酸二乙酯、碳酸二甲酯等碳酸二烷酯反应，在6位引入乙氧羰基、甲氧羰基等烷氧羰基，然后与通式(5)所示的卤代酯反应

Q-(CH₂)aCOOR⁴ (5)(式中，Q表示氯、溴等卤素，R⁴表示甲基、乙基等烷基)，得到通式(6)所示的化合物

(式中，R⁵表示甲基、乙基等烷基，其它符号的含义同上)。

通式(6)化合物在氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钡等碱的存在下，在水或水与适当溶剂(甲醇、乙醇、四氢呋喃、二噁烷等)的混合溶剂中，在0℃～所用溶剂沸点的温度，进行水解反应，然后用盐酸、硫酸、乙酸、氢溴酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等酸调成酸性进行脱羧反应，得到通式(7)的化合物(式中，各符号的含义同前)。

此外，通式(6)化合物，因水解条件而异，也可以以通式(7)的中间体即通式(8)所示化合物的形式得到(式中，各符号的含义同前)。

通式(7)的化合物，也可以通过使通式(4)的化合物在四氢呋喃、二噁烷、二乙醚、苯、甲苯、二甲基甲酰胺等惰性溶剂中，在碱(氢化钠、叔丁醇钾、二异丙基氨化锂、丁基锂等)的存在下，在-50℃～0℃的温度，与通式(5)的化合物反应，然后使所得到的化合物水解来直接得到。

进而，通式(7)的旋光化合物可以通过诸如以下方法得到。

方法(A)：把通式(7)或通式(8)的化合物制成与旋光胺的非对映体盐，通过结晶或重结晶进行拆开的方法。

作为形成盐的旋光胺，可以列举(1R,2S)-(-)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇、(1S,2R)-(+)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇、D-(-)-精氨酸、L-(+)-精氨酸、番木鳖碱、辛可宁、辛可尼定、(+)-脱氢枞胺、L-(+)-赖氨酸、(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺、(S)-(-)1-(1-萘基)乙胺、(R)-(+)-1-苯乙胺、(S)-(-)-1-苯乙胺、喹宁、马钱子碱等，可以在甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈等溶剂中进行结晶。所得到的旋光性通式(8)化合物可以在氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钡等碱的存在下，在水或水与适当溶剂(甲醇、乙醇、四氢呋喃、二噁烷等)的混合溶剂中，在0℃～所用溶剂沸点的温度进行水解，进而用酸(盐酸、硫酸、氢溴酸、柠檬酸、乙酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等)进行脱羧反应，导致旋光性通式(7)化合物。

方法(B)：把通式(7)或通式(8)化合物制成与旋光性醇的非对映酯、再拆开的方法。

作为旋光性醇，可以用R-(-)-2-丁醇、S-(+)-2-丁醇、(+)-薄荷醇、(-)-薄荷醇、R-(+)-1-苯基乙醇、S-(-)-1-苯基乙醇等，按常法进行酯化，用柱色谱法、重结晶等拆开后，在氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钡等碱的存在下，在水或水与适当溶剂(甲醇、乙醇、四氢呋喃、二噁烷等)的混合溶剂中，在0℃～所用溶剂沸点的温度进行水解。在式(8)化合物的情况下，进一步用酸(盐酸、硫酸、氢溴酸、柠檬酸、乙酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等)进行脱羧反应，就能导致旋光性通式(7)化合物。

方法(C)：把通式(6)、(7)或(8)的化合物制成与旋光性磺酸的非对映体盐，再用结晶或重结晶拆开的方法。

作为形成盐的旋光性磺酸，可以列举(+)-10-樟脑磺酸、(-)-10-樟脑磺酸、(+)-3-溴樟脑-8-磺酸、(-)-3-溴樟脑-8-磺酸等，在甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈等溶剂中进行结晶。所得到的旋光性通式(6)或(8)的化合物在氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钡等碱的存在下，在水或水与适当溶剂(甲醇、乙醇、四氢呋喃、二噁烷等)的混合溶剂中，在0℃～所用溶剂沸点的温度进行水解，进而用酸(盐酸、硫酸、氢溴酸、柠檬酸、乙酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸等)进行脱羧反应，就能导致旋光性通式(7)的化合物。

上述通式(4)化合物的合成方法如下。

用通式(9)化合物(式中，各符号的含义同前)按照特开平1-79185号、特开平1-156982号等公报中记载的方法得到的通式(10)化合物(式中，各符号的含义同前)与式(11)化合物反应，

CH₃CONHNH² (11)可以制备通式(4)化合物。或者，让肼水合物与通式(10)化合物反应得到的通式(12)化合物

(式中，各符号的含义同前)再与式(13)所示的乙酸或其反应性衍生物

CH₃COOH (13)或者与通式(14)所示的化合物反应

CH₃C(OR⁶)₃ (14)(式中，R⁶表示甲基、乙基等烷基)，也可以制备通式(4)化合物。

通式(10)化合物与式(11)化合物的反应，通常是在对反应惰性的溶剂(苯、甲苯、二甲苯、四氢呋喃、二噁烷等，或其混合溶剂)中，在有机酸(乙酸、丙酸等)、无机酸(盐酸、硫酸等)或硅胶的存在下，在室温～所用溶剂的回流温度进行30分钟～5小时。通式(10)化合物与肼水合物的反应，通常是在对反应惰性的溶剂(甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇等)中、在0～40℃进行5分钟～3小时左右。

通式(12)化合物与式(13)化合物或其反应性衍生物或通式(14)化合物的反应，是在对反应惰性的溶剂(苯、甲苯、二甲苯、四氢呋喃、二噁烷等，或其混合溶剂)中，在有机酸(乙酸、丙酸等)、无机酸(盐酸、硫酸等)或硅胶的存在下，在室温～所用溶剂的回流温度，视情况而定使用迪安-斯达克水分离器，进行30分钟～6小时。

以上这样得到的通式(1)的本发明化合物和含有该化合物的药物，对于在以人为主的猴、牛、马、狗、猫、兔、大鼠等哺乳动物中与细胞粘连有关的溃疡性大肠炎或节段性回肠炎等炎症性肠道疾病，可以用来作为治疗药、预防药或防止复发用药物。此外，本发明化合物还可以用于静脉机能不全和静脉溃疡的预防·治疗或使两者保持缓解。

在用本化合物作为药物的情况下，可以以本化合物与药物上可接受的载体(赋形剂、粘结剂、崩解剂、矫味剂、矫臭剂、乳化剂、稀释剂、增溶剂等)混合得到的医药组合物或制剂(片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂、乳液剂、酏剂、悬浮液剂、溶液剂、注射剂、点滴剂或栓剂等)的形态，经口或非经口地对患者给药。

药物组合物可以按照通常方法制成制剂。本说明书中，所谓非经口，系指包括皮下注射、静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射或点滴法等在内的给药途径。注射用制剂例如无菌注射用水基悬浮液或油基悬浮液，可以用适当分散剂或润湿剂和悬浮剂按各该领域中已知的方法配制。其无菌注射用制剂，也可以是诸如水溶液等可非经口给药的无毒稀释剂或溶剂中的可注射无菌溶液或悬浮液。作为可以使用的可接受载体或溶剂，可以列举水、生理食盐水、等渗食盐溶液等。此外，作为溶剂或悬浮溶剂，通常还可以使用无菌的非挥发性油。为此，任何一种非挥发性油或脂肪酸都可以使用，其中包括天然的或者合成的或半合成的脂肪性油或脂肪酸，以及天然的或者合成的半合成的甘油一酯、二酯或三酯。

经直肠给药用栓剂，可以使其药物与适当的非刺激性赋形剂例如可可脂或聚乙二醇类这样一些常温下为固体但在肠管温度下为液体、能在直肠内融化而释放出药物者混合、制造。

作为经口给药用的固态给药剂型，可以列举如上所述的粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、胶囊剂等。在这样的剂型中，有效成分化合物可以与至少一种添加剂例如蔗糖、乳糖、纤维素糖、甘露糖醇、麦芽糖醇、葡聚糖、淀粉类、琼脂、藻酸盐、几丁质类、脱乙酰几丁质类、果胶类、西黄蓍胶类、阿拉伯类、明胶类、胶原类、酪蛋白、白蛋白、合成或半合成的聚合物类或甘油类混合。这样的剂型物还可以象通常那样进一步含有各种添加剂，例如，可以列举惰性稀释剂，硬脂酸镁等润滑剂，对羟基苯甲酸钠类、山梨糖类等防腐剂，抗坏血酸、α-生育酚、半胱氨酸等抗氧剂、崩解剂、粘结剂，增粘剂、缓冲剂，增甜剂，矫味矫臭剂，香料等。片剂和丸剂还可以进一步制成肠溶性包衣。

经口给药用的液剂，可以列举医药上可接受的乳液剂、糖浆剂、酏剂、悬浮液剂、溶液剂等，这些还可以含有各该领域中普通使用的惰性稀释剂，例如水。

给药量因年龄、体重、一般健康状态、性别、食谱、给药时间、给药方法、排泄速度、药物组合、患者当时进行治疗的病状程度而异，可在考虑这些因素及其它因素后确定。本化合物或其医药上可接受的盐或这些的水合物，可以以低毒性安全使用，其1日给药量因患者的状态或体重、化合物种类、给药途径等而异，例如，非经口的皮下、静脉内、肌肉内或直肠内给药为0.1～500mg/人/日，而经口给药为0.5～1000mg/人/日。

以下用原料制备例、实施例、制剂处方例和实验例具体地说明本发明，但本发明不受这些例子的任何限制。

原料制备例1

4-氯苯基·氰基甲基酮、吗啉和甲乙酮溶解在乙醇中，使硫磺悬浮，加热回流10小时。反应结束后，减压蒸出溶剂，残渣溶解于氯仿中、水洗。用无水硫酸镁干燥，滴加氯乙酰氯，加热回流1小时。反应后，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤、用无水硫酸镁干燥，减压下蒸出溶剂。向残渣中加入甲醇，结晶，得到N-(2-(3-(4-氯苯甲酰)-4,5二甲基)噻吩基)氯乙酰胺。此物溶解在四氢呋喃中，使碘化钠悬浮，加热回流2小时。反应液用干冰-丙酮冷却到-50℃，加液体氨，搅拌。反应结束后，减压蒸出溶剂，残渣中加入乙酸乙酯以使之溶解，水洗后用无水硫酸镁干燥，减压下蒸出溶剂。使残渣溶解于异丙醇中，加入乙酸，加热回流5小时。减压下蒸出溶剂，溶解于氯仿中，用饱和碳酸钠水溶液洗涤后用无水硫酸镁干燥。减压蒸出溶剂后，用乙酸乙酯结晶，得到5-(4-氯苯基)-6,7-二甲基-1,2-二氢-3H-噻吩并[2,3-e][1,4]二氮杂-2-酮。

5-(4-氯苯基)-6,7-二甲基-1,2-二氢-3H-噻吩并[2,3-e][1,4]二氮杂-2-酮溶解在氯仿中，搅拌下加五硫化二磷，加热回流3小时。反应后，反应液用饱和碳酸氢钠水溶液中和、水洗后、用无水硫酸镁干燥。减压下蒸出溶剂，将残渣悬浮在甲醇中，冷却下加100％肼·水合物，在室温搅拌2小时。反应后，滤取析出的结晶，得到熔点226℃(分解)的5-(4-氯苯基)-6,7-二甲基-1,2-二氢-3H-噻吩并[2,3-e][1,4]二氮杂-2-腙。此化合物悬浮在甲苯中，添加原乙酸三乙酯，在80℃搅拌4小时。反应后减压蒸出溶剂，然后，所得到粗结晶用乙酸乙酯重结晶，得到4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂，熔点250℃以上。¹H-NMR(CDCl₃,ppm)δ:1.64(s,3H),2.39(s,3H),2.63(s,3H),4.06(d,1H,J=12Hz),5.06(d,1H,J=12Hz),7.22-7.44(m,4H)。

原料制备例2

在氮气流下，使4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂50g溶解在碳酸二乙酯500ml中，在室温搅拌下，添加60％氢氧化钠。混合液加热回流2小时后，用冰水冷却，添加溴乙酸乙酯20ml。在室温搅拌4小时后，反应液倾入冷的5％乙酸水溶液中，用氯仿萃取。水洗后，用无水硫酸镁干燥，过滤，进一步进行减压浓缩，把残渣装进硅胶柱色谱仪后，使目标级分减压浓缩，所得到的结晶95g悬浮在乙醇910ml中。在冰冷下于5℃搅拌，添加1当量氢氧化钠水溶液570ml，在室温搅拌7小时后，加乙酸90ml中和，减压浓缩。得到的粗结晶用乙醇400ml-水250ml混合溶剂重结晶，得到(±)-[4-(4-氯苯基)-6-乙氧羰基-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸71g，熔点198～202℃。

原料制备例3

向(±)-[4-(4-氯苯基)-6-乙氧羰基-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸43g中加乙醇500ml，在室温下边搅拌边添加2当量氢氧化钠182ml，在50℃搅拌过夜。反应结束后蒸出乙醇，然后添加乙酸，调至pH4～5。然后，此物在60℃搅拌30分钟。然后，等温度下降到室温后用氯仿萃取。有机层用饱和食盐水洗涤、用无水硫酸镁干燥后，减压浓缩。得到的结晶用氯仿-甲醇重结晶，得到(±)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸20g，熔点287～290℃。原料制备例4

把(±)-[4-(4-氯苯基)-6-乙氧羰基-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸82g和辛可尼丁50g加到甲醇1升中，使之完全溶解。将其溶剂蒸出，成为非晶形后，加乙酸乙酯980ml，同样使之溶解。室温下放置过夜，用抽滤法除去析出的盐。滤液(76％ee)在减压下蒸出溶剂，向残渣中加氯仿500ml，用10％盐酸洗涤2次，用硫酸镁干燥后，减压下浓缩。向残渣62g中加乙酸乙酯3720ml，使之完全溶解。此物在室温下放置过夜，用抽滤法除去析出的外消旋体。滤液在减压下蒸出溶剂，向残渣43g(94％ee)中加乙醇500ml，在室温下边搅拌边添加2当量氢氧化钠水溶液182ml，在50搅拌过夜。反应结束后，蒸出乙醇，然后加乙酸调整至pH4，在60℃搅拌30分钟。反应液用氯仿萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压下浓缩。向残渣32g(92％ee)中加乙醇1920ml，搅拌，用抽滤法除去不溶物外消旋体。滤液在减压下蒸出溶剂，残渣用氯仿结晶，得到熔点167～169℃的S体[(S)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸]20g白色粉末状结晶(＞99％ee)。要说明的是，R体[(R)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸，熔点166～167℃]是通过对以辛可尼丁盐形式析出的结晶同样进行反应处理得到的。

光学纯度(ee)的检测是用HLPC按以下条件进行的。检测条件：

使用的柱 Ultron ES-OVM(分析用柱)

移动相 1/15磷酸二氢钾水溶液∶1/15磷酸氢二钠水溶

液∶乙腈=333∶500∶120

流速 1ml/分钟

保留时间约4.5分钟(S体)

约5.5分钟(R体)

实施例1

向二甲基甲酰胺30ml、四氢呋喃15ml的混合溶剂中添加(S)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸3.0g、三乙胺1.2ml。冷却至-10℃，在同温度滴加新戊酰氯1.0ml。30分钟后，在同温度滴加4-氨基苯酚0.99g的二甲基甲酰胺20ml混合溶液，在室温搅拌7.5小时。反应结束后，蒸出四氢呋喃，加饱和食盐水200ml，用乙酸乙酯萃取。有机层用饱和食盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥后，减压下浓缩。残渣用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯∶乙醇=10∶1)精制，用异丙醇结晶，得到(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺620mg，淡桃色粉末状结晶，熔点215～220℃。

实施例2

(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺5g溶解于乙醇25ml中，加温至50℃，徐徐加水25ml。滤取析出的结晶，得到(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺·二水合物4.8g,熔点231.4℃。

[α]_D ²⁵=-19.2°(1％，甲醇)。

实施例3

向二甲基甲酰胺70ml、四氢呋喃30ml的混合溶剂中添加(S)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸7.0g、三乙胺2.73ml。冷却至-5℃，在同温度滴加新戊酰氯2.38ml。10分钟后，在同温度滴加甲胺0.69g的二甲基甲酰胺5ml溶液，在室温搅拌2小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取，水洗后用无水硫酸镁干燥。蒸出溶剂，残渣用水/甲醇重结晶，得到(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-甲基乙酰胺·1/4水合物2.29g，熔点143～145℃,[α]_D ²⁶=+18.4°(C=1，甲醇)。

实施例4

向二甲基甲酰胺70ml、四氢呋喃30ml的混合溶剂中添加(S)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸7.0g、三乙胺2.73ml。冷却至-5℃，在同温度滴加新戊酰氯2.38ml。10分钟后，在同温度滴加乙醇胺1.17g的四氢呋喃10ml溶液，在室温搅拌2小时。向反应混合物中加水，用乙酸乙酯萃取，水洗后用无水硫酸镁干燥。蒸出溶剂，残渣用柱色谱法(氯仿∶甲醇=50∶1)精制，用乙酸乙酯重结晶，得到(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(2羟基乙基)乙酰胺·1/4水合物2.29g，熔点254～255℃,[α]_D ²⁶=+24.9°(C=1，甲醇)。

实施例5

在二甲基甲酰胺30ml中，溶解(S)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸3.0g、三乙胺1.56ml和对苯二胺0.97g。加六氟磷酸苯并三唑-1-基氧-三(二甲胺盐)鏻3.6g，室温下搅拌12小时。反应结束后加水200ml，用乙酸乙酯萃取，用饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸镁干燥，减压下蒸出溶剂。残渣用硅胶柱色谱法精制，所得到的结晶用甲苯重结晶，得到(S)-N-(4-氨基苯基)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酰胺0.56g，熔点169～173℃。

实施例6

把(S)-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]乙酸2.64g溶解在二甲基甲酰胺30ml中。在冰冷却下，向其中依次添加1-羟基苯并三唑1.08g、N-二甲胺基丙基-N′-乙基碳化二亚胺·盐酸盐1.51g、三乙胺1.08ml。5分钟后，向此反应混合物中添加3-氨基吡啶0.66g，在室温搅拌过夜。把反应混合物倾入水中，得到的结晶用柱色谱法(氯仿∶甲醇=50∶1)精制。在乙酸乙酯中用乙醇/盐酸制成盐酸盐，用乙醇/乙酸乙酯重结晶，得到(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(3-吡啶基)乙酰胺·盐酸盐0.88g，熔点198-201℃,[α]_D ²⁵=-22.6°(C=1，甲醇)。

按照与上述实施例同样的方法，得到如下化合物。

实施例7

(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(2-甲氧基-3-吡啶基)乙酰胺¹H-NMR 270MHz(CDCl₃):1.69(s.3H),2.41(s,3H),2.68(s,3H).3.66(m,2H),4.00(s,1H),4.65(t,H),6.88(dd,1H),7.39(dd,4H),7.85(dd,1H),8.60(dd,1H),8.67(br.s,1H)

实施例8

(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-甲氧基-3-吡啶基)乙酰胺，熔点281-283℃。

实施例9

(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-甲氧基乙酰胺·1/4水合物，熔点230-231℃,[α]_D ²⁶=+13.7°(C=1.0，甲醇)。

制剂处方例1

本发明化合物0.5份、乳糖25份、结晶纤维素35份和玉米淀粉3份充分混合后，与用玉米淀粉2份制成的粘结剂充分混炼。此混炼物过16目筛，在50℃烘箱中干燥后，再过24目筛。这样得到的混炼粉末与玉米淀粉8份、结晶纤维素11份及滑石9份充分混合后，压片，得到每1片含有有效成分0.5mg的片剂。此外，所得到的片剂上施用肠溶性包衣剂，可制成肠溶片；进而还可以制成糖衣片。

制剂处方例2

本发明化合物1份和乳糖90份充分混合，再与用适量甲基纤维素制成的粘结剂充分混炼。此物过16目筛，在50℃烘箱中干燥。干燥颗粒状粉末再压迫通过32目筛，与适量二氧化硅充分混合，得到1％散剂。

以下显示本发明化合物的药理作用。要说明的是，试验中用(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]N-(4-羟基苯基)乙酰胺(以下称化合物1)和(S)-2-[4-(4-氯苯基)2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺·二水合物(以下称化合物2)作为试验化合物。此外，作为实验例1、实验例2中的比较对照化合物，使用的是上述式(A)所示的特开平2-243691号公报的实施例8[5-(2-氯苯基)-7-(吗啉代羰乙基)-10-甲基-3,4-二氢-2H,7H-环戊并[4,5]噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂，以下称为比较化合物1。

实验例1：对人体组织细胞白血病细胞株U937的CD11b表达的作用

探讨了对构成白血球类细胞表面上表达的粘连分子之一Mac-1的α链的CD11b抗原表达的作用。把U937细胞悬浮在含有20％胎牛血清的RPMI1640培养基中之后，与大戟二萜醇-12,13-二丁酸酯(PDB,10ng/ml)和试验化合物一起添加到96孔过滤用平皿上(30000细胞/孔)。在37℃、5％二氧化碳存在下培养3日后，用RPMI1640培养基洗涤1次，添加大鼠抗人体CD11b单克隆抗体(2μg/ml)。在冰冷却下放置1小时后，洗涤2次，添加过氧化物酶标识抗大鼠免疫球蛋白抗体(1μg/ml)。在冰冷却下放置1小时后，洗涤3次，添加过氧化物酶用发色基质(邻苯二胺)。在室温放置5分钟后，用96孔平皿用吸光光度计测定490nm的吸光度，作为CD11b抗原表达指标。

以PDB添加时的吸光度为100％，不添加时的吸光度为0％，从这样算出的抑制率(％)得到的IC₅₀值(μM)列于第1表中。

第1表化合物 CD11b表达抑制作用

(IC₅₀、μM)化合物2 ＜0.03比较化合物＞3

如以上第1表中所示，化合物2抑制了U937细胞的CD11b表达。另一方面，比较化合物的活性仅为化合物2的1％以下。

实验例2：人体脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)上的VCAM-1和E-selectin表达抑制作用

HUVEC悬浮于含有胎牛血清(20％)、牛脑血管内皮细胞增殖因子(20μg/ml)和肝素(100μg/ml)的199培养基中，添加到涂布了胶原的96孔细胞培养用平皿中之后，在37℃、5％二氧化碳存在下培养。细胞达到汇合时添加肿瘤坏死因子α(诱发VCAM-1表达时20U/ml,诱发E-selectin表达时100U/ml)和试验化合物，进一步培养5小时。用199培养基洗涤1次，添加小鼠抗人体VCAM-1单克隆抗体(2μg/ml)或大鼠抗人体E-selectin单克隆抗体(2μg/ml)。在室温放置1小时后，洗涤2次，添加过氧化物酶标识抗小鼠免疫球蛋白抗体或抗大鼠免疫球蛋白抗体。在室温放置1小时后，洗涤3次，添加2,2′-连氮基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)作为过氧化物酶用基质。在室温放置15分钟后，96孔平皿用吸光光度计测定405nm/490nm的吸光度，作为VCAM-1和E-selectin表达的指标。

肿瘤坏死因子α添加时的吸光度为100％、不添加时的吸光度为0％，从这样算出的抑制率(％)得到的IC₅₀值(μM)列于第2表中。第2表化合物表达抑制作用(IC₅₀、μM)

VCAM-1表达 E-selectin表达化合物2 0.11 0.073比较化合物＞10 ＞10

如以上第2表中所示，化合物2能抑制HUVEC上的VCAM-1和E-selectin表达。另一方面，比较化合物对VCAM-1表达的抑制活性为化合物2的1/90以下，而对E-selectin表达的抑制活性为化合物2的1/130以下。

实验例3：对巯基乙酸盐(TG)培养基诱发白血球浸润的作用

向BALB/c小鼠腹腔内注射1ml TG培养基后，第4天用含有EDTA(0.02％)的磷酸缓冲生理食盐水3ml回收腹腔内浸润的白血球，用自动血球计数器测定白血球浓度(细胞/ml)。假设浸润的白血球均匀地悬浮于回收液中，则浸润白血球总数X可按照下式从白血球浓度(A细胞/ml)算出：

X=3A

试验化合物悬浮于0.5％羟丙基甲基纤维素(Metolose)中，在注射TG培养基后第0～3日经口给药(0.1ml/体重10g)。

本化合物对TG培养基诱发白血球浸润的抑制取决于其用量，而且即使在活体中也能通过妨碍细胞粘连来抑制白血球对炎症部位的浸润。

实验例4：对脂多糖(LPS)诱发白血球粘连的作用

通过对小鼠给药LPS诱发经由粘连分子Mac-1发生的白血球粘连，从而引起白血球对肺、肝脏等的浸润，结果，有人报告末梢白血球数目减少(Morisaki等人，Clin.Immunol.Immunopathol.,61,365-375,1991)。这里，以末梢白血球数目的减少作为指标，探讨了对LPS诱发白血球粘连的作用。

向BALB/c小鼠的腹腔内注射0.5ml的LPS溶液(生理食盐水溶液中50ng/ml)。LPS注射6小时后，用自动血球计数器测定末梢白血球数。试验化合物悬浮于0.5％羟丙基甲基纤维素(Metolose)中，从LPS注射4日前直至LPS注射日经口给药(0.1ml/体重10g)。

本化合物对LPS诱发白血球粘连引起的白血球减少的抑制取决于用量，且即使在活体中也能阻碍细胞粘连。

实验例5：对TNBS(三硝基苯磺酸)诱发大鼠肠炎模型的作用

向SD大鼠的肠内注射TNBS溶液(50％乙醇中60mg/ml)50μl，以诱发肠炎。到第7日解剖，切除从肛门侧起8cm长的大肠，测定重量。而且，测定肠组织中的髓过氧化物酶(MPO)活性，作为浸润的白血球数的指标。即，将肠均化，冷冻-融化重复3次后，用过氧化物酶用基质(邻苯二胺)测定离心分离得到的上清液中的MPO活性。以市售MPO作为标准品，计算上清液中MPO的单位。以这样测定的大肠重量增加和MPO活性增加作为肠炎发作的指标。试验化合物悬浮在0.5％羟丙基甲基纤维素(Metolose)溶液中，从TNBS注射当日起5日间经口给药(0.4ml/100mg)或经肠内给药(0.2ml/大鼠)。肠重量的结果和MPO活性的结果列出如下。

(1)化合物1经肠内给药的作用

第3表A处置化合物用量肠重量(mg) 显著性^*(TNBS) (mg/site) (平均±S.D.)未敏化 0 431.3±47.2敏化 0 2304.2±1375.0 对照组敏化化合物1 0.01 501.5±78.3 P＜0.01敏化 ″ 0.1 472.0±43.4 P＜0.01敏化 ″ 1 460.8±52.3 P＜0.01^*：用Dunnett多重比较法检验第3表B处置化合物用量 MPO活性(U/ml) 显著性^*(TNBS) (mg/site) (平均±S.D.)未敏化 0 0.457±0.079敏化 0 6.211±5.106 对照组敏化化合物1 0.01 0.716±0.158 P＜0.05敏化 ″ 0.1 0.654±0.109 P＜0.05敏化 ″ 1 0.676±0.172 P＜0.05^*：用Mann-Whitney的U检验法检验。(2)化合物2经肠内给药的作用

第4表A处置化合物用量肠重量(mg) 显著性^*(TNBS) (mg/site) (平均±S.D.)未敏化 0 439.9±37.0敏化 0 704.9±211.1 对照组敏化化合物2 0.01 499.6±71.7 P＜0.01敏化 ″ 0.1 502.0±51.5 P＜0.01敏化 ″ 1 536.0±62.2 P＜0.05^*：用Dunnett多重比较法检验

第4表B处置化合物用量 MPO活性(U/ml) 显著性^*(TNBS) (mg/site) (平均±S.D.)未敏化 0 0.428±0.100敏化 0 0.796±0.557 对照组敏化化合物2 0.01 0.354±0.081 P＜0.01敏化 ″ 0.1 0.334±0.069 P＜0.01敏化 ″ 1 0.345±0.097 P＜0.01^*：用Mann-Whitney的U检验法检验。

(3)化合物2经口给药的作用

第5表A处置化合物用量肠重量(mg) 显著性^*(TNBS) (mg/kg) (平均±S.D.)未敏化 0 402.3±30.6敏化 0 804.3±381.9 对照组敏化化合物2 0.03 699.3±163.7 不显著敏化 ″ 1 468.5±47.6 P＜0.01敏化 ″ 3 458.0±34.7 P＜0.01^*：用Dunnett多重比较法检验

第5表B处置化合物用量 MPO活性(U/ml) 显著性^*(TNBS) (mg/kg) (平均±S.p.)未敏化 0 0.434±0.065敏化 0 1.434±0.651 对照组敏化化合物2 0.3 1.568±0.538 不显著敏化 ″ 1 0.769±0.222 P＜0.05敏化 ″ 3 0.740±0.142 P＜0.05^*：用Mann-Whitney的U检验法检验。

如上表所示，化合物1和化合物2对大鼠肠炎发作引起的肠重量增加和白血球浸润两者均能显著抑制。这表明，本发明化合物即使对人体，也可用来作为炎症性肠道疾病(溃疡性大肠炎和节段性回肠炎)的治疗药或预防药。

实验例6：对角叉藻多糖诱发兔肠炎模型的作用

给兔子皮下注射1％λ-降解角叉藻多糖与弗洛因德全佐剂的乳化混合液，使之敏化。敏化第7日(第0天)起8周间，每只兔子都强制经口给药λ-降解角叉藻多糖250～1000mg/日，以诱发肠炎。λ-降解角叉藻多糖摄取结束次日(第56天)进行解剖，以大肠组织标本的粘膜上皮异常所见、炎症细胞浸润的程度等为指标，给大肠粘膜障碍打分。试验化合物从敏化第7日起连续给药8周(10mg/kg)。结果列于以下。

第6表化合物分数平均值±SE 显著性^*对照 10.9±2.0化合物2 5.3±0.6 P＜0.05^*：用Mann-Whitney的U检验法检验。

实验例7：毒性试验

化合物2对雌性大鼠反复经口给药10天，以300mg/kg的给药量时未观察到死亡例。而且，一般状态、体重、摄饵量、血液学检查、血液生化检查、尿检、脏器重量和剖检，均未发现任何异常。

从以上实验例可以看出，本发明化合物有(1)通过抑制白血球上的CD11b表达而妨碍白血球粘连到血管内皮细胞(HUVEC)上的作用，(2)抑制血管内皮细胞(HUVEC)上的VCAM-1、E-selectin表达的作用，和(3)抑制活体中白血球浸润的作用等。这种作用表明，本发明化合物对于细胞粘连与其发作、进展有关的各种疾病可用来作为预防、治疗药。而且，用肠炎模型动物进行的实验中，证实了对炎症的显著抑制。以上那样得到的通式(1)的本发明化合物和含有该化合物的医药，在以人为首的猴、牛、马、狗、猫、兔、大鼠等哺乳动物中，对于与细胞粘连有关的溃疡性大肠炎或节段性回肠炎的炎症性肠道疾病，可以用来作为治疗药、预防药或复发预防药。此外，本发明化合物也可以用来进行静脉机能不全和静脉溃疡的预防·治疗或维持两者的宽解。

而且，本发明化合物在用动物进行的实验中已经证明是低毒性的，因而可用作安全性高的药品。

本专利申请是以在日本申请的平成8年专利申请第233793号为基础的，其中记载的内容全部包含在本说明书中。

Claims

1．通式(1)所示的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物(式中，X表示卤素，R¹表示1～4个碳的烷基，R²表示1～4个碳的烷基，a表示1～4的整数，R³表示1～4个碳的烷基、1～4个碳的羟烷基、1～4个碳的烷氧基、也可以有取代基的苯基、或也可以有取代基的杂芳基)。

2．权利要求1记载的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物，其中通式(1)中X是氯，R¹、R²都是甲基。

3．权利要求1或2记载的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物，其中通式(1)中a是1。

4．权利要求1记载的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物，其中通式(1)的化合物是(S)-2-[4(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺。

5．(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺·二水合物。

6．一种药物，其中含有通式(1)所示的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物(式中，X表示卤素，R¹表示1～4个碳的烷基，R²表示1～4个碳的烷基，a表示1～4的整数，R³表示1～4个碳的烷基、1～4个碳的羟烷基、1～4个碳的烷氧基、也可以有取代基的苯基、或也可以有取代基的杂芳基)。

7．权利要求6记载的药物，其中含有通式(1)中X为氯、R¹、R²均为甲基的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物。

8．权利要求6或7记载的药物，其中含有通式(1)中a为1的噻吩并-三唑并二氮杂化合物、其医药上可接受的盐或这些的水合物。

9．权利要求6记载的药物，其中通式(1)的化合物是(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]N-(4-羟基苯基)乙酰胺。

10．权利要求6记载的药物，所述药物是炎症性肠道疾病治疗药。

11．权利要求6记载的药物，所述药物是溃疡性大肠炎治疗药。

12．权利要求6记载的药物，所述药物是节段性回肠炎治疗药。

13．一种药物，其中含有(S)-2-[4-(4-氯苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]二氮杂-6-基]-N-(4-羟基苯基)乙酰胺·二水合物。

14．权利要求13记载的药物，所述药物是炎症性肠道疾病治疗药。

15．权利要求13记载的药物，所述药物是溃疡性大肠炎治疗药。

16．权利要求13记载的药物，所述药物是节段性回肠炎治疗药。