CN104583216A - 苯基氨基嘧啶双环化合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I的苯基氨基嘧啶双环化合物，其是蛋白质激酶类包括JAK激酶类的抑制剂。尤其是，化合物对JAK1，JAK2，JAK3和TYK2激酶类有活性。激酶抑制剂能够用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。

Description

苯基氨基嘧啶双环化合物及其用途
技术领域
本发明涉及苯基氨基嘧啶双环化合物，其是蛋白质激酶类包括JAK激酶类的抑制剂。尤其是，化合物对JAK1，JAK2，JAK3和TYK2激酶类有活性。激酶抑制剂能够用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
背景技术
JAKs是激酶类，其磷酸化称为信号转导和转录激活剂或STATs的蛋白质类。在磷酰化的情况下，STATs二聚体化、转移至核和激活尤其导致细胞增殖的基因的表达。
JAK家族的蛋白质酪氨酸激酶类在数种重要细胞类型的增殖和终止功能的细胞因子依赖性调节中的关键作用指出能够抑制JAK激酶类的所述物质可用于预防和化疗治疗取决于这些酶的疾病状态。目前已知的4种JAK家族成员各自有效和特定性的抑制剂将提供抑制细胞因子作用的手段，所述细胞因子驱动免疫学疾病和炎性疾病和过度增殖疾病比如癌症。
骨髓增生病(MPD)尤其包括真性红细胞增多症(PV)，原发性骨髓纤维化，血小板增多症，原发性血小板增多症(ET)，自发性骨髓纤维化(IMF)，慢性髓性白血病(CML)，全身性肥大细胞增多症(SM)，慢性中性粒细胞白血病(CNL)，骨髓增生异常综合征(MDS)和系统性肥大细胞病(SMCD)。JAK2是JAK家族激酶类的成员，其中特定突变(JAK2V617F)已在99％的真性红细胞增多症(PV)和50％的原发性血小板减少症(ET)和自发性骨髓纤维化(MF)患者中发现。该突变被认为激活JAK2，这支持JAK2抑制剂用于治疗这些类型疾病的建议。
哮喘是特征为局部和全身性变应性炎症和可逆气道阻塞的复杂障碍。哮喘症状特别是呼吸浅促是气道阻塞的结果，并且死亡几乎不变地由窒息导致。气道高应答性(AHR)和杯状细胞的粘液高分泌是导致哮喘患者气道阻塞的重要原因中的两种。有趣地，在哮喘动物实验模型中最近的工作已强调了IL-13作为关键作用无在哮喘病理中的重要性。采用特异性IL-13阻断剂已展示的是，IL-13不依赖IL-4地起作用并且在无IgE诱导的情况下(也即以非特应性方式)能够诱导全部变应性哮喘表型。这种和其它模型已经指向引起哮喘病理生理学的重要第二梯队机理，其不取决于固有B-细胞产生IgE或嗜酸性粒细胞的存在。IL-13对AHR的直接诱导代表重要过程，其可能是新疗法干预的优异靶标。JAK1，JAK2和/或TYK2抑制剂对肺的预期效果会引起IL-13介导的IgE产生的局部释放的抑制，和因此引起肥大细胞和嗜酸性粒细胞组胺释放的减少。缺少IL-13的这些和其它结果指出，哮喘效果中的许多可以通过给予JAK1，JAK2和/或TYK2抑制剂至肺而得以减轻。
慢性阻塞性肺疾病(COPD)是术语，其是指能够干扰正常呼吸的一大类肺疾病。目前的临床指南将COPD定义为特征是不完全可逆的气流受限的疾病状态。气流受限通常是进行性的并同时与肺对有害颗粒和气体特别吸烟和污染的异常炎性反应有关。数个研究已指向IL-13的增加产生和COPD之间的关联，这支持使用JAK2抑制剂的哮喘症状有效减轻也可以在COPD中实现的建议。COPD患者具有包括咳嗽、呼吸浅促和过度产生痰液的各种症状。COPD包括数种临床呼吸系统综合征，包括慢性支气管炎和气肿。
慢性支气管炎是长期支气管炎症，其导致粘液的增加产生和其它变化。患者症状是咳嗽和咳痰。慢性支气管炎能够导致更频繁和严重的呼吸系统感染，支气管的变窄和堵塞，困难呼吸和病废。
气肿是慢性肺病，其影响肺泡和/或最小支气管的终端。肺失去弹性和因此肺的这些区域变得扩大。这些扩大的区域留驻不新鲜的空气并且并不将其与新鲜空气有效交换。这引起困难呼吸和可以引起递送至血液的氧不足。气肿患者中占优势的症状是呼吸浅促。
额外地，恶性肿瘤中存在STAT激活的证据，尤其是肺癌，乳腺癌，结肠癌，卵巢癌，前列腺癌和肝癌，以及霍奇金淋巴瘤，多发性骨髓瘤和肝细胞癌。牵涉JAK2融合至Tel、Bcr和PCM1的染色体易位已描述于许多造血恶性中，包括慢性髓性白血病(CML)，急性髓性白血病(AML)，慢性嗜曙红白血病(CEL)，骨髓增生异常综合征(MDS)，骨髓增殖性疾病(MPD)和急性淋巴细胞白血病(ALL)。这表明JAK抑制剂对过增殖障碍比如癌症的治疗已有指示，包括多发性骨髓瘤；前列腺癌，乳腺癌和肺癌；霍奇金淋巴瘤；CML；AML；CEL；MDS；ALL；B-细胞慢性淋巴细胞白血病；转移性黑色素瘤；神经胶质瘤；和肝瘤。
除了上述之外JAK2的有效抑制剂还用于血管病比如高血压，肥大，心脏缺血，心力衰竭(包括收缩性心力衰竭和舒张性心力衰竭)，偏头痛和有关的脑血管障碍，卒中，雷诺现象，POEMS综合征，Prinzmetal心绞痛，血管炎，比如高安动脉炎和韦格纳内肉芽肿病，外周动脉疾病，心脏病和肺动脉高血压。
肺动脉高血压(PAH)是影响肺小动脉的肺血管病，引起肺动脉压力上升和肺血管阻力但具有普通或仅轻微升高的左侧充盈压。PAH由影响肺血管系统的疾病兴奋丛引起。PAH能够由下述引起或与下述有关：胶原血管障碍比如系统性硬化症(硬皮病)，未纠正的先天性心脏病，肝病，门静脉高压，HIV感染，丙肝，某些毒素，脾切除术，遗传性出血性毛细血管扩张，和原发遗传异常。尤其是，骨形态发生性蛋白质类型2受体(TGF-b受体)的突变已被确认为家族性原发性肺动脉高压(PPH)的原因。据估计，6％的PPH情况是家族性，而其余是″散发的(sporadic)″。PPH的发生率据估计是每1百万人口中大约1例。PAH的次要原因具有显著更高的发生率。PAH的病理签名特征是肺的丛状损伤，其由小前毛细血管肺小动脉中的血管平滑肌细胞肥大和闭塞性内皮细胞增殖组成。PAH是与高死亡率有关的进行性疾病。患PAH的患者可以发展右心室(RV)衰竭。RV衰竭的程度预测结果。JAK/STAT途径最近已牵涉于PAH的病理生理学中。JAKs激酶类，其磷酸化称为信号转导和转录激活剂或STATs的蛋白质类。在磷酰化的情况下，STATs二聚体化、转移至核和激活导致内皮细胞和平滑肌细胞增殖和导致心肌细胞肥大的基因的表达。存在3种不同同种型的JAK：JAK1，JAK2，和JAK3。具有与JAKs高同源性的又一蛋白质名为Tyk2。越来越多的数据显示作为JAK2底物的STAT3的磷酸化在PAH的动物模型中增加。在大鼠野百合碱模型中，存在致原性的(promitogenic)转录因子STAT3的增加的磷酸化。在该相同研究中，用野百合碱处理的肺动脉内皮细胞(PAECs)发展出STAT3的超激活。致原性试剂或蛋白质是诱导或有助于细胞增殖诱导的媒介物或蛋白质。因此，JAK2抑制的一种效果会是降低内皮细胞或其它细胞比如平滑肌细胞的增殖。JAK2抑制剂的预期效果会是降低内皮细胞或阻塞肺微动脉管腔的其它细胞的增殖。通过降低细胞的梗阻性增殖，JAK2抑制剂能有效治疗PAH。
额外地，JAK激酶抑制剂治疗病毒病和代谢病的用途也有指示。
尽管JAK家族的其它成员通过基本上全部组织来表达，JAK3表达显得局限于造血细胞。这与其关键作用相符，所述作用通过将JAK3与这些多链受体均具有的γ链非共价联接经过IL-2、IL4、IL-7、IL-9和IL-15的受体进行信号传导。具有X-连接的严重组合免疫缺乏(XSCID)的男性具有共同细胞因子受体γ链(γc)基因的缺陷，所述基因编码白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15的受体的共有必需组分。已鉴定XSCID综合征，其中患者具有JAK3蛋白质的突变或严重降低水平，这表明免疫抑制应是阻断通过JAK3途径的信号传导所导致的。小鼠中的基因敲除研究已表明，JAK3不仅在B和T淋巴细胞成熟中发挥关键作用，而且构造上需要JAK3来保持T细胞功能。与JAK3牵涉于IL-2和IL-4受体下游的信号传导事件的生化证据一起，这些人类和小鼠突变研究表明通过抑制JAK3的免疫活性调节能用于治疗T-细胞和B-细胞增殖性障碍比如移植排斥和自身免疫性疾病。
尽管抑制各种类型蛋白质激酶类、靶向一系列疾病状态明显是有益的，目前已展示鉴定出对有关蛋白质激酶有选择性且具有良好″类药物″特性比如高口服生物利用度的化合物是充满挑战的目标。此外众所周知的是，在开发激酶抑制剂过程中抑制或选择性的可预见性是非常低的，无论靶向酶之间的序列相似性水平如何。
JAK1与JAK2组合牵涉于尤其是IL-6、IL-11和IFN-γ受体的下游的信号转导中。JAK1与JAK3组合是尤其是IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15受体下游信号转导的关键。JAK1与TYK2组合负责尤其是IL-10、IL-22和IFN-α受体下游的信号转导。TYK2牵涉于尤其是IL-12和IL-23受体下游的信号转导中。由IL-12信号传导介导的T细胞IFNγ产生高度取决于TYK2。这些细胞因子和受体牵涉于与免疫学疾病有关的促炎性反应中。从而，JAK1的抑制有潜力用于治疗疾病比如类风湿性关节炎，多发性硬化，牛皮癣和克罗恩病。
开发治疗上适宜的JAK抑制剂的挑战包括设计具有适当特异性并且具有良好类药物性的化合物，所述抑制剂用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
因此，始终需要设计和/或鉴定特异性抑制JAK家族激酶类的化合物，和特别是对JAK1、JAK2、JAK3和TYK2激酶类有活性的化合物。需要这种化合物用于治疗一系列疾病。
发明概要
在第一方面，提供式I化合物
其中
R1是取代的或未经取代的双环杂环基；
R2选自H，卤素，取代的或未经取代的C1-4烷基，CF3
取代的或未经取代的C1-4烷氧基，CON(R)2，CN和CO2R；
R选自H和取代的或未经取代的C1-4烷基，
或其对映体，其前药或其药学上可接受的盐。
在第二方面，提供制备如前文所定义的式I化合物的方法，其包括将式II化合物
其中
R2如前文所定义和X是离去基团，与式III化合物偶联
其中
R1如前文所定义；和
M是B或金属比如Sn，Zn或Mg；或者
将式IV化合物
其中
R2，X和R如前文所定义，与如前文所定义的式III化合物偶联，以制备式V化合物
其中
R1，R2，X和R如前文所定义；和
将如前文所定义的式V化合物与偶联。
在第三方面，提供如前文所定义的式V化合物。
式I化合物是激酶抑制剂，优选JAK抑制剂，更优选JAK1、JAK2、JAK3和TYK2激酶抑制剂。这些化合物用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
在第四方面，提供包含如前文所定义的式I化合物的药物试剂或其代谢物。
也提供式I化合物用作药物试剂或其代谢物的用途。
还提供如前文所定义的式I化合物，用作药物试剂或其代谢物。
在第五方面，提供包含如前文所定义的式I化合物的激酶抑制剂。
也提供如前文所定义的式I化合物用作激酶抑制剂的用途。
还提供如前文所定义的式I化合物，用作激酶抑制剂。
在第六方面，提供如前文所定义的式1化合物，用作药物试剂或其代谢物，优选激酶抑制剂，更优选JAK激酶抑制剂，最优选JAK1、JAK2、JAK3和TYK2激酶抑制剂。
式I化合物还可以以药物组合物形式与药学上可接受的载体一起给予。
在第七方面，提供药物组合物，包含如前文所定义的式I化合物和药学上可接受的载体。
在一种实施方式中，药物组合物也包含一种或多种额外的治疗剂。
式I化合物可以包含于植入物中或连接至植入物，比如药物洗脱支架。例如，在化合物用于治疗肺动脉高血压(PAH)的情况下，化合物可以包括于或连接至肺动脉支架，其可以局部起效或从支架释放入肺循环，其中化合物在肺血管系统中发挥治疗活性。
在第八方面，提供植入物，其包括如前文所定义的式I化合物。
在第九方面，提供治疗与激酶有关的疾病的方法，包括向有需要的受试者给予有效量的如前文所定义的式I化合物或药物组合物，所述疾病是比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
还提供如前文所定义的式I化合物或药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
还提供如前文所定义式I化合物或药物组合物在治疗与激酶有关的疾病中的用途，比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
还提供如前文所定义的式I化合物或药物组合物，用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
在第十方面，提供抑制细胞中激酶的方法，包括将细胞与如前文所定义的式I化合物接触。
附图说明
图1显示所选JAK激酶类的氨基酸序列排列。显示的序列是j2h＝JAK2(SEQ.ID.NO.1)，jlh＝JAK1(SEQ.ID.NO.2)，j3h＝JAK3(SEQ.ID.NO.3)，和tyk2＝TYK2(SEQ.ID.NO.4)。序列编号如下：位置1开始于JAK2序列(取自Genbank序列NP_004963)的氨基酸833和结束于C-末端氨基酸。显示的序列相应于C-末端激酶区域。
图2是化合物1-10的显示IC50(nM)数据的图。
发明详述
本发明涉及式I化合物，其抑制激酶类，尤其是JAK激酶类比如JAK1、JAK2、JAK3和TYK2，并且用于治疗与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
化合物
本发明涉及式I化合物。
在一种实施方式中，式I化合物具有式Ia：
Ia
其中，
R1和R2如前文所定义，
或其对映体，其前药或其药学上可接受的盐。
在又一实施方式中，式Ia化合物具有式Ib：
其中，
R1和R2如前文所定义，
或其对映体，其前药或其药学上可接受的盐
在一种实施方式中，R1是6至12元饱和的稠合或桥连双环或螺环杂环基，含有至少一个选自N、O和/或S的杂原子，优选N在一个环中而O在另一个环中。双环杂环基的各环可以是4-6元的，其中含N杂环基包括氮杂环丁烷，吡咯烷和哌啶和含O杂环基包括氧杂环丁烷，氧杂环戊烷(四氢呋喃)和二氢吡喃或吡喃。含N杂环基中的N原子优选连接至式I或Ia的苯基环。6-12元含N和O的饱和稠合双环杂环基的实例包括6-氧杂-3-氮杂二环[3.2.0]庚烷，六氢-2H-呋喃并[2，3-c]吡咯和8-氧杂-3-氮杂二环[4.2.0]辛烷。6-12元含N和O的饱和桥连双环杂环基的实例包括6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷，8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷，2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷，3-氧杂-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷和3-氧杂-6-氮杂二环[3.1.1]庚烷。6-12元含N和O的饱和螺环杂环基的实例包括1-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷，2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷，1-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷，1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷，1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷和1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷。
在一种实施方式中，R2是H，甲基，Cl，Br或F，优选H或甲基。
式I或Ia化合物的实例包括但不限于下述：
表1
术语″C1-4烷基″是指直链或支化的链烃基团，具有1至4个碳原子。实例包括乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基和叔丁基。
术语″C1-4烷氧基″是指直链或支化的含氧基基团，具有1至4个碳原子的烷基部分。实例包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，丁氧基和叔丁氧基。
术语″双环杂环基″是指具有含有至少一个杂原子的两个连接的环的化合物。环的连接可以位于两个相邻原子之间的键(稠合双环杂环基)，跨原子序列(桥连双环杂环基)或位于单个原子(螺环的杂环基)。
双环杂环基是非芳族双环，其能够是饱和的或含有一个或多个不饱和单元。双环可以含有6至12个环原子，其中一个或多个环碳用杂原子比如N、S和/或O例如N和/或O替换。
C、N和S原子可以任选地氧化而N原子可以任选地季铵化。
实例包括二环[4-6，4-6]杂环基系统比如二环[4，4]，[4，5]，[5，4]，[5，6]，[6，4]，[6，5]或[6，6]杂环基系统。
适宜的4-6元含N杂环基包括含有一个N原子的那些比如氮杂环丁烷(4-元环)；吡咯烷(四氢吡咯)，吡咯啉(例如，3-吡咯啉，2，5-二氢吡咯)，2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯，异噁唑)(5-元环)；和哌啶，二氢吡啶或四氢吡啶(6-元环)；或含有两个N原子的那些比如咪唑啉，吡唑烷(二氮杂环戊烷(diazolidine))，咪唑啉或吡唑啉(二氢吡唑)(5-元环)和哌嗪(6-元环)。
适宜的4-6元含O杂环基包括含有一个O原子的那些比如氧杂环丁烷(4-元环)；氧杂环戊烷(四氢呋喃)或氧杂环戊烯(二氢呋喃)(5-元环)；和氧杂环己烷(四氢吡喃)，二氢吡喃或吡喃(6-元环)；含有两个O原子的那些比如二氧杂环戊烷(5-元环)和二噁烷(6元环)；或含有三个O原子的那些比如三噁烷(6-元环)。
适宜的4-6元含S杂环基包括含有一个S原子的那些比如硫杂环丁烷(4-元环)；硫杂环戊烷(四氢噻吩)(5-元环)；和硫杂环己烷(四氢噻喃)(6-元环)。
适宜的4-6元含N和O杂环基包括含有一个N和一个O原子的那些比如四氢噁唑，二氢噁唑，四氢异噁唑或二氢异噁唑(5-元环)；和吗啉，四氢噁嗪，二氢噁嗪或噁嗪(6-元环)；或含有两个N和一个O原子的那些比如噁二嗪(6-元环)。
适宜的4-6元含N和S的杂环基包括噻唑啉，噻唑烷(5-元环)；和硫吗啉(6-元环)。
适宜的4-6元含O和S的杂环基包括氧硫杂环戊二烯(5-元环)；和氧杂硫杂环己烷(噻噁烷)(6-元环)。
适宜的4-6元含N、O和S的杂环基包括氧杂噻嗪(6-元环)。
在一种实施方式中，双环杂环基在一个环中含有N和在另一个环中含有O。
含N环系可以是4-6元和优选是饱和的并且适宜地经由N原子直接连接至苯基环。4-6元饱和含N杂环基的实例包括氮杂环丁烷，吡咯烷和哌啶。
含O环系可以是4-6元的和优选饱和的，并且，通过两个碳原子之间的键连接至含N环形成6-12元饱和的双环含N和O的稠合双环杂环基；通过任选用一个或多个O原子替换的3-4或3-5个碳原子的序列(包括环连接原子)形成6-12元饱和的含N和O的桥连双环杂环基；或于单个碳原子形成6-12元饱和的含N和O的螺环杂环基。4-6元饱和的含O杂环基的实例包括氧杂环丁烷，氧杂环戊烷(四氢呋喃)和二氢吡喃或吡喃。
适宜的6-12元饱和的含N和O的稠合双环杂环基包括含有上述4-6元饱和的含N和O杂环基的那些，比如二环[5，4]系统，例如6-氧杂-3-氮杂二环[3.2.0]庚烷；二环[5，5]系统，例如六氢-2H-呋喃并[2.3-c]吡咯；和二环[6，4]系统，例如8-氧杂-3-氮杂二环[4.2-0]辛烷。
适宜的6-12元饱和的含N和O的桥连双环杂环基包括二环[6，4]系统例如6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.1]庚烷；二环[6，5]系统例如8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷；二环[5，5]系统例如2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷；和二环[5，6]系统例如3-氧杂-8-氮杂二环[3.2.1]辛烷。
适宜的6-12元饱和的含N和O的螺环双环杂环基包括二环[4，4]系统例如1-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷，2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷和1-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷；二环[5，4]系统例如1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷；和二环[6，4]系统例如1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷和1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷。
术语″卤素″是指氟，氯，溴和碘。
术语″取代的″是指基团用一个或多个选自下述的基团取代：C1-6烷基，C3-6环烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6烷基芳基，芳基，杂环基，卤代，卤代C1-6烷基，卤代C3-6环烷基，卤代C2-6烯基，
卤代C2-6炔基，卤代芳基，卤代杂环基，羟基，C1-6烷氧基，C2-6烯氧基，C2-6炔氧基，芳氧基，杂环基氧基，羧基，卤代C1-6烷氧基，
卤代C2-6烯氧基，卤代C2-6炔氧基，卤代芳氧基，氧代，硝基，硝基C1-6，烷基，硝基C2-6烯基，硝基芳基，硝基杂环基，叠氮基，氨基，C1-6烷基氨基，
C2-6烯基氨基，C2-6炔基氨基，芳基氨基，杂环氨基酰基，C1-6烷基酰基，C2-6烯基酰基，C2-6炔基酰基，芳基酰基，杂环基酰基，酰基氨基，酰氧基，醛基，C1-6烷基磺酰基，芳基磺酰基，C1-6烷基磺酰基氨基，芳基磺酰基氨基，
C1-6烷基磺酰氧基，芳基磺酰基氧基，C1-6烷基次磺酰基(sulphenyl)，C2-6烷基次磺酰基，芳基次磺酰基，羰烷氧基，羰芳氧基，巯基，C1-6烷硫基，芳硫基，酰基硫基，氰基等。优选的取代基选自C1-4烷基，C3-6环烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，C1-6烷基芳基，芳基，杂环基，卤代，氧代，卤代芳基，卤代杂环基，羟基，C1-4烷氧基，芳氧基，羧基，氨基，
C1-6烷基酰基，芳基酰基，杂环基酰基，酰基氨基，酰氧基，C1-6烷基次磺酰基，芳基磺酰基和氰基。
本发明化合物还可以制备为药学上可接受的盐，但应认识到非药学上可接受的盐也落入本发明范围，原因是它们可用作制备药学上可接受的盐的中间体。药学上可接受的盐的实例包括药学上可接受的阳离子比如钠，钾，锂，钙，镁，铵和烷基铵的盐；药学上可接受的无机酸比如盐酸，邻位磷酸，硫酸，磷酸，硝酸，碳酸，硼酸，氨基磺酸和氢溴酸的酸加成盐；或药学上可接受的有机酸比如乙酸，丙酸，丁酸，酒石酸，马来酸，羟基马来酸，富马酸，柠檬酸，乳酸，粘酸，葡糖酸，苯甲酸，琥珀酸，草酸，苯基乙酸，甲磺酸，三卤代甲磺酸，甲苯磺酸，苯磺酸，羟乙基磺酸，水杨酸，对氨基苯磺酸，天冬氨酸，谷氨酸，乙二胺四乙酸，硬脂酸，棕榈酸，油酸，月桂酸，泛酸，单宁酸，抗坏血酸，戊酸和乳清酸的盐。胺基团的盐还可以包含季铵盐，其中氨基氮原子携带适宜的有机基团比如烷基、烯基、炔基或芳烷基部分。
盐可以通过常规手段形成，比如通过在盐不溶的溶剂或介质中或在溶剂比如水中将化合物的游离碱形式与一个或多个当量的适当酸反应，减压除去或冻干溶剂，或者在适宜的离子交换树脂上将现有盐的阴离子交换为另一阴离子。
在化合物具有手性中心的情况下，化合物能够用作纯对映体或非对映体，或作为任意比率立体异构体的混合物。然而优选的是，混合物包含至少70％，80％，90％，95％，97.5％或99％的优选异构体，其中优选异构体提供所希望水平的效能和选择性。
本发明也涵盖式I化合物的前药。本发明也涵盖治疗能够通过抑制蛋白质激酶类比如JAK而治疗的障碍的方法，包括给药本发明化合物的药物或前药。例如，式I化合物具有能够转化为前药的游离氨基，酰胺基，羟基或羧酸基团。前药包括化合物，其中氨基酸残余物或两个或更多个(例如二、三或四个)氨基酸残余物的多肽链经过肽键共价连接至本发明化合物的游离氨基、羟基和羧酸基团。氨基酸残余物包括一般通过三个字母符号指定的20种天然氨基酸以及包括，4-羟脯氨酸，羟基赖氨酸，锁链赖氨素(demosine)，异锁链赖氨素(isodemosine)，3-甲基组氨酸，norvlin，β-丙氨酸，γ-氨基丁酸，瓜氨酸，高半胱氨酸，高丝氨酸，鸟氨酸和甲硫氨酸砜。前药也包括化合物，其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通过羰基碳前药侧链共价键合至本发明化合物的上述取代基。前药也包括通过磷-氧键连接至式I化合物的游离羟基的化合物的磷酸衍生物(比如酸、酸的盐或酯)。前药还可以包括式I中适当氮和硫原子的N-氧化物，和S-氧化物。
方法
通式I化合物制备如下：将式II或IV化合物与式III化合物偶联。在使用式IV化合物的情况下，制得式V化合物，然后将其与偶联以制备式I化合物。
式II或IV化合物一般地可以提供2，4二氯嘧啶和适宜官能化的偶联伴侣之间的交联反应制备。替代地，可以将二氯嘧啶转化为二碘嘧啶，然后将其与适宜官能化的偶联伴侣偶联。典型的偶联伴侣是有机取代硼酸或酯(Suzuki偶联：参见例如Miyaura，N.and Suzuki，Chem Rev.1995，95 2457)，有机锡烷(Stille偶联：参见例如Stille，J.K.，Angew.Chem.，Int.Ed.Engl.，1986，25，508)，格氏试剂(Kumada偶联：Kumada，M.；Tamao，K.；Sumitani，K.Org.Synth.1988，Coll.Vol.6，407.)或有机锌种类(Negishi偶联：Negishi，E.；J.Organomet.Chem.2002，653，34)。Suzuki偶联是优选偶联方法和一般在碱比如碳酸钠或碳酸钾，氢氧化锂，碳酸铯，氢氧化钠，氟化钾或磷酸钾存在下，在溶剂比如DME，THF，DMF，乙醇，丙醇，甲苯，乙腈或1，4-二噁烷中进行，加或不加水。反应可以在升高的温度进行和所用钯催化剂可以选自Pd(PPh3)4，Pd(OAc)2，[PdCl2(dppf)]，Pd2(dba)3/P(叔-Bu)3。
方法的第二步骤牵涉式II或IV化合物与适宜取代的苯胺的亲核芳族取代反应。亲核芳族取代一般进行如下：在溶剂比如乙醇，正丙醇，异丙醇，叔丁醇，二噁烷，THF，DMF，甲苯或二甲苯中，将苯胺加至得自第一反应的一卤代杂环中间体。反应一般在升高的温度，在酸比如HCI或对甲苯磺酸存在下或在碱比如非亲核碱比如三乙胺或二异丙基乙胺、或无机碱比如碳酸钾或碳酸钠存在下进行。
另选地，苯胺取代基可以通过过渡金属催化的胺化反应引入。所述转化的典型催化剂包括Pd(OAc)2/P(叔-Bu)3，Pd2(dba)3/BINAP和Pd(OAc)2/BINAP。这些反应一般在溶剂比如甲苯或二噁烷中，在碱比如碳酸铯或叔丁醇钠或叔丁醇钾存在下，于室温至回流的温度进行(例如Hartwig，J.F.，Angew.Chem.Int.Ed.1998，37，2046)。
合成这些化合物的第一步骤中所用的苯胺可以合成如下；将环状(cicyclic)氨基加至1-氟-4硝基-苯胺和随后用本领域技术人员熟知的方法还原硝基基团。
从两种反应步骤形成的产品可以用本领域技术人员已知的技术进一步衍生化。另选地，一卤代中间体的衍生化可以在替代卤代取代基之前进行。本领域技术人员理解上述合成描述的反应顺序可以在某些环境中改变，并且在上述反应的某些情况下某些官能团可以需要衍生化(也即保护)以获得合理的收率和效率。保护官能团的类型是本领域技术人员熟知的并且描述例如在Greene(Greene，T.，Wuts，P.(1999)ProtectiveGroups in Organic Synthesis.Wiley-Interscience；3rd edition.)中。
用于本发明方法中的中间体式II或IV化合物中的离去基团可以是任意适宜的已知类型比如公开于J.March，″Advanced OrganicChemistry：Reactions，Mechanisms and Structure″4th Edition，pp352-357，John Wiley&Sons，New York，1992中的那些，通过援引将其并入本文。优选，离去基团是卤素，更优选氯或碘。
JAK抑制
式I化合物具有对蛋白质激酶类、特别是JAK激酶类的活性和最特别对JAK1、JAK2、JAK3和TYK2的活性。JAK2抑制剂是选择性地抑制JAK2活性的任何化合物。JAK2的一种活性是磷酸化STAT蛋白质。因此JAK2抑制剂的效果实例是减少一种或多种STAT蛋白质的磷酸化。抑制剂可以抑制JAK2的磷酰化形式或JAK2的非磷酰化形式。
本发明也提供式I化合物作为激酶抑制剂比如JAK激酶抑制剂，尤其是JAK1、JAK2、JAK3和TYK2抑制剂的用途。
药物组合物
本发明提供药物组合物，包含至少一种式I化合物和药学上可接受的载体。载体必须是″药学上可接受的″意指其与组合物的其它成分相容和对受试者无害。本发明组合物可以含有描述如下的其它治疗剂，和可以根据技术比如药物配制剂领域熟知的那些(参见例如Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，21st Ed.，2005，Lippincott Williams&Wilkins)采用常规固体或液体媒介物或稀释剂，以及适于希望给药模式的类型的药物添加剂(例如赋形剂，粘合剂，防腐剂，稳定剂，调味剂等)来配制。
本发明化合物可以通过任何适宜手段给予，例如经口，比如以片剂、胶囊、颗粒剂或粉末形式；舌下；颊部；经肠胃外，比如皮下、静脉内、肌内、经皮(透皮)或池内注射或输注技术(例如作为无菌可注射液或水溶液或非水溶液或悬浮液)；鼻部，比如吸入喷雾或吹入法；局部，比如以霜剂或软膏剂形式；眼部，比如以溶液或悬浮液形式；阴道，比如以子宫托、棉塞或霜剂形式；或直肠，比如以栓剂形式；在含有非毒性、药学上可接受的媒介物或稀释剂的剂量单元配制剂中。化合物可以例如以适于立即释放或延长释放的形式给予。立即释放或延长释放可以通过使用包含本发明化合物的适宜药物组合物实现；或者特别是在延长释放的情况下，通过使用装置比如皮下植入物或渗透泵实现。
用于给予本发明化合物的药物组合物可以方便地以剂量单元形式存在和可以通过药剂学领域熟知的任何方法制备。这些方法一般地包括将式I化合物与构造一种或多种附加成分的载体结合的步骤。通常，药物组合物制备如下：均匀和密切地将式I化合物与液体载体或细分固体载体或两者结合，然后视需要使产品成型为所希望的配制剂。在药物组合物中，以足以对疾病过程或状况产生所希望效果的量包括活性目标化合物。如本文所用，术语″组合物″期望涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及从指定量的指定成分的组合直接或间接获得的任何产品。
含有式I化合物的药物组合物可以呈适于口服使用的形式，例如作为片剂，含锭，糖锭，含水或含油悬浮液，可分散粉剂或颗粒剂，乳液，硬或软胶囊，或者糖浆剂或酏剂。期望口服使用的组合物可以根据药物组合物制备领域已知的任何方法制备和这种组合物可以含有一种或多种试剂比如甜味剂，矫味剂，着色剂和防腐剂，例如提供药学上稳定的和好吃的制剂。片剂含有式I化合物和与之混合的适于制备片剂的非毒性药学上可接受的赋形剂。这些赋形剂可以例如是惰性稀释剂，比如碳酸钙，碳酸钠，乳糖，磷酸钙或磷酸钠；造粒和崩解剂，例如玉米淀粉，或藻酸；粘合剂，例如淀粉，明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石。片剂可以是未经包覆的或它们可以通过已知技术包覆以延缓胃肠道中的崩解和吸收，并由此提供更长时间段的持续的作用。例如，可以使用时间延缓物质比如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。它们还可以被包覆以形成渗透性治疗片剂，用于控制释放。
用于口服使用的配制剂还可以呈硬凝胶胶囊，其中式I化合物与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或白陶土混合，或者呈软凝胶胶囊，其中式I化合物与水或油介质例如花生油状物、液状石蜡或橄榄油混合。
含水悬浮液含有活性物质和与之混合的适于制备含水悬浮液的赋形剂。所述赋形剂是助悬剂，例如羧甲纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，藻酸钠，聚乙烯-吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂可以是天然磷脂，例如卵磷脂，或氧化烯烃与脂肪酸的缩合产品例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产品例如十七乙烯氧基鲸蜡醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产品比如聚氧乙烯山梨醇一油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐混合物的偏酯的缩合产品例如聚乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。含水悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂，例如对-羟基苯甲酸乙基酯或正丙基酯，一种或多种着色剂，一种或多种矫味剂，和一种或多种甜味剂，比如蔗糖或糖精。
含油悬浮液可以配制如下：将式I化合物悬浮在植物油，例如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油中，或在矿物油比如液状石蜡中。含油悬浮液可以含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入甜味剂比如上述那和矫味剂以提供好吃的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂比如维生素C来防腐。
适于通过加水制备含水悬浮液的可分散粉剂和颗粒剂提供式I化合物和与之混合的分散剂或润湿剂，助悬剂和一种或多种防腐剂。适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂是诸如上述已经提及的那些。额外的赋形剂，例如甜味剂，矫味剂和着色剂也可以存在。
本发明的药物组合物还可以是水包油乳液形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液状石蜡或这些的混合物。适宜的乳化剂可以是自然存在的，例如阿拉伯胶或黄蓍胶，天然磷脂，例如大豆磷脂、卵磷脂，和衍生自脂肪酸和己糖醇酐混合物的酯或偏酯，例如去水山梨糖醇单油酸酯，和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产品，例如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。乳液还可以含有甜味剂和矫味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂例如甘油，丙二醇，山梨醇或蔗糖配制。所述配制剂还可以含有缓和剂，防腐剂和矫味剂和着色剂。
药物组合物可以是无菌可注射的含水或含油悬浮液形式。这种悬浮液可以根据已知技术用上文已提及的那些适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂来配制。无菌可注射制剂还可以是无菌可注射的溶液或悬浮液，其在非毒性经肠胃外-可接受的稀释剂或溶剂中，例如是1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂尤其是水，林格溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，无菌、非挥发油常规地用作溶剂或悬浮媒介。出于该意图可以使用任何温和非挥发油包括合成的甘油一酯或甘油二酯。此外，脂肪酸比如油酸可用于制备可注射的配制剂。
为了给药至呼吸道、包括鼻内给药，活性化合物可以通过给药至呼吸道领域所用的任何方法和配制剂来给予。
从而，通常活性化合物可以以溶液或悬浮液或作为无水粉末形式给予。
溶液和悬浮液一般含水，例如制备自单独的水(例如无菌或无热原水)或水和生理学上可接受的共溶剂(例如乙醇，丙二醇或聚乙二醇比如PEG 400)。
这种溶液或悬浮液可以额外地含有其它赋形剂例如防腐剂(比如苯扎氯铵)，溶剂化剂/表面活性剂比如聚山梨酸酯(例如吐温80，Span 80，苯扎氯铵)，缓冲剂，等渗调节剂(例如氯化钠)，吸收增强剂和粘度增强剂。悬浮液可以额外地含有助悬剂(例如微晶纤维素和羧甲基纤维素钠)。
溶液或悬浮液通过常规手段例如滴管、移液管或喷雾直接施用至鼻腔。配制剂可以以单或多剂量形式提供。在后者情况中，希望地提供计量给药的手段。在滴管或移液管的情况下，这可以通过给予受试者适当的、预先确定的体积的溶液或悬浮液来实现。在喷雾的情况下，这可以例如通过用雾化喷雾泵计量来实现。
给药至呼吸道还可以通过气雾配制剂实现，其中在加压包装中提供化合物，所述包装含适宜的推进剂，比如氯氟碳化物(CFC)，例如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷或克立氟烷，二氧化碳或其它适宜的气体。气雾剂可以方便地也含有表面活性剂比如卵磷脂。活性化合物的剂量可以通过提供计量阀来控制。
另选地，活性化合物可以以无水粉末形式提供，例如化合物在适宜粉末基底比如乳糖、淀粉、淀粉衍生物比如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷(PVP)中的粉状混合物。方便地，粉末载体会在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可以以单元剂量形式存在，例如在例如明胶的胶囊或药筒；或以泡罩包装形式存在，粉末可以自其通过吸入器给予。
在期望用于给药至呼吸道的配制剂、包括鼻内配制剂中，活性化合物一般地具有小颗粒尺寸，例如5微米或小的数量级。上述颗粒尺寸可以通过本领域已知的手段例如微粒化获得。
在希望时，可以使用提供活性化合物的持续释放的配制剂。
活性化合物可以通过口服吸入作为自由流动的粉末经由″Diskhaler″(Glaxo Group Ltd的商标)或计量气雾剂吸入器给予。
本发明化合物还可以以栓剂形式给予，用于药物的直肠给药。这些组合物能够通过将药物与适宜的无刺激性赋形剂混合制备，所述赋形剂在普通温度是固体但在直肠温度是液体并因此在直肠中熔化以释放药物。上述物质是可可油和聚乙二醇。
适于阴道给药的组合物可以是子宫托，棉塞，霜剂，凝胶，糊剂，泡沫或喷雾剂，其除活性成分外还含有比如本领域已知的适宜载体。
对于局部用途，采用含有本发明化合物的霜剂，软膏剂，胶冻，溶液或悬浮液等。(出于该施用意图，局部施用将包括漱口剂和含漱剂。)
对于施用至眼部，活性化合物可以是适宜的无菌含水或非水媒介物中的溶液或悬浮液形式。还可以包括添加剂，例如缓冲液，防腐剂包括杀细菌剂和杀真菌剂比如苯基汞乙酸盐或硝酸盐、苯扎氯铵或氯己定，和增稠剂比如羟丙甲纤维素。
本发明化合物还能够以脂质体形式给予。如本领域已知，脂质体一般衍生自磷脂或其它脂质物质。通过分散在含水媒介中的单层或多层的水化液晶形成脂质体。能够使用能够形成脂质体的任何非毒性、生理学上可接受的和可代谢的脂质。脂质体形式的本发明组合物能够除了本发明化合物之外还含有稳定剂，防腐剂，赋形剂等。优选的脂质是天然和合成的磷脂和磷脂酰胆碱。形成脂质体的方法是本领域已知的。
该类化合物的效力可以应用于药物洗脱支架。含这些化合物的药物洗脱支架的有效应用包括肺动脉狭窄，肺静脉狭窄，以及冠状动脉狭窄。药物洗脱支架还可以用于隐静脉移植物或动脉移植物或导管。释放该类化合物的药物洗脱支架还可以用于治疗主动脉或外周动脉比如髂骨动脉、股骨动脉或腘动脉的狭窄。化合物可以通过本领域已知的任何各种方法结合至药物洗脱支架。所述方法的实例包括聚合物，磷酰基胆碱，和陶瓷。化合物还可以浸渍入生物可吸收的支架当中。
活性化合物还可以以兽医学组合物形式存在，其可以通过例如本领域常规的方法制备。所述兽医学组合物的实例包括适用于下述的那些：
(a)口服给予，外部施用，例如灌服药(例如水溶液或非水溶液或悬浮液)；片剂或药丸；与饲料混合的粉末，颗粒剂或丸剂；施用至舌的糊剂；
(b)肠胃外给药，例如通过皮下、肌内或静脉内注射，例如作为无菌溶液或悬浮液；或(在适当时)通过乳房内注射，其中悬浮液或溶液经由乳头引入乳房；
(c)局部施用，例如作为霜剂、软膏剂或喷雾施用至皮肤；或
(d)直肠地或阴道内施用，例如作为子宫托，霜剂或泡沫。
本发明的药物组合物和方法可以还包含如本文所述的其它治疗上活性化合物，其通常用于治疗上述病理学病症。本领域普通技术人员可以根据常规的药物原理选择适当试剂用于联合疗法中。治疗剂的组合可以增效地进行上述各种障碍的治疗或预防。用这种途径，能够用较低剂量的各试剂实现疗效，从而降低不利的副作用的影响。
其它治疗剂的实例包括下述：内皮素受体拮抗剂(例如安立生坦(ambrisentan)，波生坦，西他生坦)，PDE-V抑制剂(例如sildenafil，他达拉非，伐地那非)，钙通道阻断剂(例如氨氯地平，非洛地平，维拉帕米，，薄荷脑)，前列环素，曲罗尼尔，伊洛前列素，贝前列素，氧化氮，氧，肝素，华法林，利尿药，地高辛，环孢菌素类(例如，环孢素A)，CTLA4-Ig，抗体比如ICAM-3，抗-IL-2受体(抗-Tac)，抗-CD45RB，抗-CD2，抗-CD3(OKT-3)，抗-CD4，抗-CD80，抗-CD86，阻断CD40和gp39之间相互作用的试剂，比如对CD40和/或gp39特异性的抗体(也即CD154)，由CD40和gp39构建的融合蛋白质(CD401g和CD8gp39)，NF-kappa B功能的抑制剂比如核转位抑制剂，比如脱氧精胍菌素(DSG)，胆固醇生物合成抑制剂比如HMG CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀和辛伐他汀)，非甾族抗炎性药物(NSAIDs)比如布洛芬，阿司匹林，对乙酰氨基酚，来氟米特，脱氧精胍菌素，环加氧酶抑制剂比如塞来考昔，类固醇比如泼尼松龙或地塞米松，金化合物，β-激动剂比如沙丁胺醇，LABA试剂比如沙美特罗，白三烯拮抗药比如孟鲁司特，抗增生剂比如甲氨蝶呤，FK506(他克莫司，Prograf)，麦考酚酸莫酯，细胞毒素药物比如硫唑嘌呤，VP-16，依托泊苷，氟达拉滨，多柔比星，阿霉素，安吖啶，喜树碱，阿糖胞苷，吉西他滨，氟脱氧尿苷，美法仑和环磷酰胺，抗代谢药比如甲氨蝶呤，拓扑异构酶抑制剂比如喜树碱，DNA烷基化剂比如顺铂，激酶抑制剂比如索拉非尼，微管毒物比如紫杉醇，TNF-α抑制剂比如替尼达普，抗-TNF抗体或可溶的TNF受体，羟基尿素和雷帕霉素(西罗莫司或Rapamune)或其衍生物。
在其它治疗剂与本发明化合物组合使用的情况下，它们可以例如以Physician Desk Reference(PDR)标注的量使用或由本领域普通技术人员确定。
治疗方法
式I化合物可以用于治疗与激酶有关的疾病包括JAK与激酶有关的疾病比如免疫学疾病和炎性疾病包括器官移植；过增殖疾病包括癌症和骨髓增殖性疾病；病毒病；代谢病；和血管病。
一般地，术语″治疗″意指影响受试者、组织或细胞，获得希望的药理学和/或生理学效果和包括：(a)预防疾病在可以易患病的但还未诊断为患病的受试者中发生；(b)抑制疾病也即中止其发展；或(c)缓解或改善疾病的效果也即导致疾病效果消退。
术语″受试者″是指患有需要用式I化合物治疗的疾病的任何动物。
除了灵长类比如人类之外，各种其它哺乳动物也能够用本发明化合物、组合物和方法处理。例如，能够治疗哺乳动物包括但不限于牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、豚鼠、大鼠或其它牛、羊、马、犬、猫、啮齿动物或鼠类种类。然而，本发明还能够用于其它种类比如鸟类(例如鸡)。
术语″给予″应理解为意指将本发明化合物提供给需要治疗的受试者。
术语″与激酶有关的疾病″是指通过异常激酶活性尤其是JAK活性直接或间接导致或恶化的一种或多种障碍和/或通过抑制这些激酶中的一种或多种而减轻的一种或多种障碍。
在优选的实施方式中，与激酶有关的疾病状态牵涉JAK激酶类JAK1，JAK2，JAK3或TYK2中的一种或多种。在特别优选的实施方式中，疾病牵涉JAK2激酶。所述疾病包括但不限于列于下表的那些。
在各种病理学状况中JAK/STAT途径的激活
术语″免疫学疾病和炎性疾病″是指免疫学、炎性或自身免疫性疾病，包括但不限于类风湿性关节炎，多关节炎，风湿样的脊柱炎，骨关节炎，痛风，哮喘，支气管炎，变应性鼻炎，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，肺纤维化，囊性纤维化，炎性肠病，肠易激综合征，粘液性结肠炎，溃疡性结肠炎，溃破性结肠炎，克罗恩病，自身免疫甲状腺障碍，胃炎，食管炎，肝炎，胰腺炎，肾炎，牛皮癣，湿疹，寻常痤疮，皮炎，荨麻疹，多发性硬化，阿尔茨海默病，运动神经元疾病(Lou Gehrig病)，佩吉特病，脓毒症，结膜炎，鼻粘膜炎，慢性关节风湿病，全身性炎性反应综合征(SIRS)，多肌炎，皮肤肌炎(DM)，Polaritis nodoa(PN)，风湿性多肌痛，混合结缔组织障碍(MCTD)，Sjoegren综合征，Crouzon综合征，软骨发育不全，系统性红斑狼疮，硬皮病，血管炎，致死性发育不良，胰岛素抗性，I型糖尿病和糖尿病并发症和代谢性综合征。
术语″过增殖疾病″包括癌症和骨髓增殖性疾病状态比如细胞增殖性疾病状态，包括但不限于：心脏：肉瘤(血管肉瘤，纤维肉瘤，横纹肌肉瘤，脂肪肉瘤)，粘液瘤，横纹肌瘤，纤维瘤，脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管原癌(鳞状细胞，未分化的小细胞，未分化的大细胞，腺癌)，肺泡(细支气管)癌，支气管腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，软骨瘤性错构瘤，间皮瘤；胃肠道：食管(鳞状细胞癌，腺癌，平滑肌肉瘤，淋巴瘤)，胃(癌，淋巴瘤，平滑肌肉瘤)，胰(导管腺癌，胰岛素瘤，胰高血糖素瘤，胃泌素瘤，类癌瘤，血管活性肠肽瘤)，小肠(腺癌，淋巴瘤，类癌瘤，Karposi肉瘤，平滑肌瘤，血管瘤，脂肪瘤，神经纤维瘤，纤维瘤)，大肠(腺癌，管状腺瘤，绒毛状腺瘤，错构瘤，平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌，维尔姆斯肿瘤[肾母细胞瘤]，淋巴瘤，白血病)，膀胱和尿道(鳞状细胞癌，移行细胞癌，腺癌)，前列腺(腺癌，肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤，畸胎瘤，胚胎癌，畸胎癌，绒毛膜癌，肉瘤，间质细胞癌，纤维瘤，纤维腺瘤，腺瘤样，类腺瘤肿瘤，脂肪瘤)；肝：肝瘤(肝细胞癌)，胆管上皮癌，肝胚细胞瘤，血管肉瘤，肝细胞腺瘤，血管瘤；骨骼：骨原肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，软骨肉瘤，尤因肉瘤，恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)，多发性骨髓瘤，恶性巨细胞瘤脊索瘤，骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)，良性软骨瘤，软骨母细胞瘤，软骨粘液纤维瘤，骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅骨(骨瘤，血管瘤，肉芽肿，黄瘤，变形性骨炎)，脑膜(脑膜瘤，脑膜肉瘤，神经胶质瘤病)，脑(星形细胞瘤，成神经管细胞瘤，神经胶质瘤，室管膜瘤，生殖细胞瘤[松果体瘤]，成胶质细胞瘤多形，少突神经胶质瘤，许旺细胞瘤，成视网膜细胞瘤，先天肿瘤)，脊髓神经纤维瘤，脑膜瘤，神经胶质瘤，肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)，宫颈(宫颈癌，前肿瘤宫颈发育不良)，卵巢(卵巢癌[浆液囊腺癌，粘液囊腺癌，未经分类的癌]，粒膜-膜细胞肿瘤，SertoliLeydig细胞肿瘤，无性细胞瘤，恶性畸胎瘤)，外阴(鳞状细胞癌，上皮内癌，腺癌，纤维肉瘤，黑色素瘤)，阴道(透明细胞癌，鳞状细胞癌，葡萄状肉瘤[胚胎横纹肌肉瘤])，输卵管(癌)；血液学：血液(髓性白血病[急性和慢性]，急性成淋巴细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤，骨髓增生异常综合征)，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤[恶性淋巴瘤；皮肤：恶性黑色素瘤，基底细胞癌，鳞状细胞癌，Karposi肉瘤，色素痣发育异常的痣，脂肪瘤，血管瘤，皮肤纤维瘤，瘢痕疙瘩，牛皮癣；肾上腺：成神经细胞瘤；和骨髓增生疾病比如真性红细胞增多(PV)，原发性骨髓纤维化，血小板增多症，原发性血小板增多症(ET)，原因不明的髓样化生(AMM)，也称为自发性骨髓纤维化(IMF)，慢性髓性白血病(CML)，全身性肥大细胞增多症(SM)，慢性中性粒细胞白血病(CNL)，慢性髓单核细胞性白血病(CMML)，骨髓增生异常综合征(MDS)和系统性肥大细胞病(SMCD)。
术语″血管病″是指疾病包括但不限于心血管疾病，高血压，肥大，高胆固醇血症，高脂血症，血栓形成障碍，卒中，雷诺现象，POEMS综合征，心绞痛，缺血，偏头痛，外周动脉疾病，心力衰竭，再狭窄，动脉粥样硬化，左心室肥大，心肌梗死，心脏、肾、肝和脑的缺血疾病，和肺动脉高血压。
适于JAK2抑制剂的优选疾病包括免疫学疾病和炎性疾病比如自免疫疾病例如特应性皮炎，哮喘，类风湿性关节炎，克罗恩病，牛皮癣，Crouzon综合征，软骨发育不全，系统性红斑狼疮，硬皮病，混合结缔组织疾病，血管炎，致死性发育不良和糖尿病；过增殖障碍比如癌症例如前列腺癌，结肠癌，乳腺癌，肝癌比如肝瘤，肺癌，头颈癌比如神经胶质瘤，皮肤癌比如转移的黑色素瘤，白血病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤和骨髓增生疾病比如真性红细胞增多症(PV)，骨髓纤维化，血小板增多症，原发性血小板增多症(ET)，原因不明的髓样化生(AMM)，也称为自发性骨髓纤维化(IMF)和慢性髓性白血病(CML)；和血管病比如高血压，肥大，卒中，雷诺现象，POEMS综合征，心绞痛，缺血，偏头痛，外周动脉疾病，心力衰竭，再狭窄，动脉粥样硬化和肺动脉高血压。
适于JAK1和TYK2抑制剂的优选疾病包括免疫学疾病和炎性疾病比如自身免疫性疾病例如风湿性关节炎，多发性硬化，银屑病，克罗恩病和炎性肠病。JAK1抑制剂还能够用来治疗过增殖障碍比如癌症例如前列腺癌，结肠癌，乳腺癌，肝癌比如肝瘤，肺癌，头颈癌比如神经胶质瘤，皮肤癌比如转移的黑色素瘤，白血病，淋巴瘤，多发性骨髓瘤和骨髓增生疾病比如真性红细胞增多症(PV)，骨髓纤维化，血小板增多症，原发性血小板增多症(ET)，原因不明的髓样化生(AMM)，也称为自发性骨髓纤维化(IMF)和慢性髓性白血病(CML)。
适于JAK3抑制剂的优选疾病是免疫学疾病和炎性疾病包括自身免疫性疾病比如系统性红斑狼疮，混合结缔组织疾病，硬皮病，多发性硬化，自身免疫神经炎，类风湿性关节炎，牛皮癣，胰岛素抗性，I型糖尿病和糖尿病并发症，代谢性综合征，哮喘，特应性皮炎，自免疫甲状腺障碍，溃疡性结肠炎，克罗恩病，阿尔茨海默病，和免疫抑制可以希望的其它适应症比如器官移植和移植物抗宿主疾病。JAK3的其它特异性抑制剂可以用于治疗其中JAK3超激活的过增殖疾病比如白血病和淋巴瘤。
剂量
术语″治疗有效量″是指式I和II化合物的量，其引起研究者、兽医、医生或其它临床医师希望的组织、系统、动物或人的生物学或医学应答。
在治疗或预防需要激酶抑制的病况中，适当的剂量水平一般是约0.01至500mg每kg患者体重每天，其能够以单或多剂量给予。优选，剂量水平是约0.1至约250mg/kg每天；更优选约0.5至约100mg/kg每天。适宜的剂量水平可以是约0.01至250mg/kg每天，约0.05至100mg/kg每天，或约0.1至50mg/kg每天。在该范围内，剂量可以是0.05至0.5，0.5至5或5至50mg/kg每天。对于口服给药，组合物优选以片剂形式提供，其含有1.0至1000毫克活性成分，特别是1.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，50.0，75.0，100.0，150.0，200.0，250.0，300.0，400.0，500.0，600.0，750.0，800.0，900.0，和1000.0毫克活性成分。可以选择剂量，例如这些范围中任何中的任何剂量，用于待治疗患者的剂量的疗效和/或症状性调节。化合物优选以1至4次每天，优选1次或2次每天的方案给予。
应理解，对于任何特别的患者的特定剂量水平和剂量频率可以变化和取决于各种因素，包括所用特定化合物的活性，化合物的代谢稳定性和作用长度，年龄，体重，一般健康，性别，膳食，给药模式和时间，分泌速率，药物组成，特定病况的严重性，和进行治疗的宿主。
在实施方式中，给予本发明化合物用于治疗″骨髓增殖性疾病″和″骨髓增殖性瘤(MPN)″尤其是真性红细胞增多症(PV)，原发性血小板增多症(ET)和原发性骨髓纤维化(PMF)。已建立骨髓增殖性瘤研究和治疗(IWG-MRT)的国际工作组来描述和定义这些病况(参见例如Vannucchiet al， CA Cancer J.Clin.，2009，59：171-191)，和那些疾病定义适用于本发明意图。有特定形式MPN″风险″的受试者是具有疾病的早期阶段形式的受试者，和可以是例如包括具有其基因标记物的受试者，所述基因是比如与PV(＞95％)、与ET(60％)和与PMF(60％)有关的JAK2V617F等位基因。受试者也视为有MFN形式的″风险″，如果他们已展现更早阶段形式的症状。从而，表现MFN的受试者有在MPN之后发展的后-PV和后-ET的风险。为了治疗所述受试者，本发明化合物能够以片剂形式以50mg至500mg，特别包括150mg或300mg单元剂量，和以1至4次每日，比如1次或2次每日的剂量给药频率给予。所述受试者还能够与其它药物组合用于治疗特定病况，包括药物比如沙利度胺，来那度胺，其它JAK2或JAK1/2激酶抑制剂，羟基脲或阿那格雷，或与双磷酸盐类组合以降低骨髓纤维化。同样，所述患者还能够进行放疗或异基因骨髓移植作为总体治疗的一部分，其包括剂量给药本发明化合物。
在又一实施方式中，给予本发明化合物用于特别治疗骨髓增生异常综合征(MDS)。骨髓增生异常综合征(MDS)是术语用来描述一类疾病，其特征是导致血液细胞减少和细胞过多的骨髓的无效血细胞生成。MDS传统地视为与′前白血病′同义，原因在于增加的转化为急性髓性白血病(AML)的风险。转化为AML和细胞减少的临床结果是MDS发病和死亡的主要原因。MDS的致衰弱症状包括疲劳，苍白，感染，和出血。贫血，中性粒细胞减少症，和血小板减少症也是MDS的一般临床表现。为了治疗所述受试者，本发明化合物能够以片剂形式以50mg至500mg，包括特别150mg或300mg的单元剂量，和以1至4次每日，比如1次或2次每日的剂量给药频率给予。
在其它实施方式中，给予本发明化合物用于治疗贫血，包括与骨髓增殖性疾病有关的贫血，以实现有效的贫血应答。″贫血应答″意指患者血红蛋白水平增加或依赖输注的患者变得不依赖输注。合意地，实现2.0g/dL的血红蛋白最小增加持续至少8周，其是国际工作组(IWG)一般意见标准指定的改善水平。然而，较小但医学上仍显著的血红蛋白增加也视为属于本发明范围。会得益于用本发明化合物治疗的贫血受试者包括已发生或正在发生化疗或放疗的受试者，比如癌症患者。各式各样的化疗药剂已知具有降低有效红血细胞水平的结果。同样，作为治疗人的受试者是导致红血细胞计数减少或与红血细胞计数减少有关的患血液障碍包括血癌的那些。在实施方式中，待治疗受试者是患有与所述血液病况如骨髓增生异常综合征有关或所述血液病况如骨髓增生异常综合征导致的贫血的受试者。在其它实施方式中，待治疗受试者是患与其它血液病况有关或其它血液病况导致的贫血的受试者，所述其它血液病况是如与影响红血细胞的其它血液学恶性、再生障碍性贫血，慢性病贫血等有关的贫血。慢性病贫血与下述疾病有关：比如某些癌症包括淋巴瘤和霍奇金病；自身免疫性疾病比如类风湿性关节炎，全身性红斑狼疮，炎性肠病和风湿性多肌痛；长期感染比如尿路感染，HIV和骨髓炎；心力衰竭；和慢性肾脏疾病。此外，与增加的破坏、缩短的红血细胞存活和脾螯合有关的病况导致的贫血患者也能得益于用本发明化合物治疗。在某些实施方式中，待治疗受试者是经历地中海贫血的贫血受试者。在其它实施方式中，待治疗受试者是经历地中海贫血的受试者以外的受试者。从而，患这些病况的患者能够得到治疗以改善它们的血红蛋白下降或缺乏状态。为了治疗所述受试者，本发明化合物能够以片剂形式以50mg至500mg，包括特别150mg或300mg的单元剂量，和以1至4次每日，比如1次或2次每日的剂量给药频率给予。为了治疗贫血受试者，本发明化合物可以与选自输血、补铁、红细胞生成素或达依泊汀治疗等的贫血治疗药物、化合物或用药方式组合给予。
在又一实施方式中，给予本发明化合物用于治疗多发性骨髓瘤(MM)，特别包括具有CD45阴性(CD45-)表型的MM细胞，和/或视为IL-6无响应的MM细胞。MM细胞是疾病细胞，其形成标志多发性骨髓瘤的浆细胞瘤。″CD45-表型″是指在称为CD45的蛋白质标记物的表面表达中测试为阴性或暗淡的MM细胞，其区别于中等至明亮，所述标志物是全部造血细胞的熟知标记物。CD45-表型在本文中也指MM细胞群体，其中CD45-细胞在群体中的优势超过所述群体的至少约10％，比如所述群体的至少约15％，或20％，或25％，或30％，或35％，或40％，或45％或至少约50％。在细胞表面检测CD45容易地实现如下：采用荧光-标记的CD45单克隆抗体和建立荧光-激活细胞排序(FACS)技术或鉴定结合CD45抗体的细胞的任何有关手段。可以参考例如公开的文献Moreau et al，Haematologica，2004，89(5)：547，和Kumar et al，Leukemia，2005，19：1466，通过援引将其内容并入本文。
″IL-6无响应的″MM细胞被确认为不依赖白细胞介素-6(IL-6)存在而生存的细胞。从而，在与其它情况下刺激量的IL-6温育时，在比如IL-6受体刺激或下游信号传导事件阶段，IL-6无响应的MM细胞显示无实质的应答。所述MM细胞能够特别包括骨髓环境中固有和从而其在与骨髓基质细胞相同的环境中生长的那些MM细胞，但它们也包括并未暴露于骨髓环境的循环中的MM细胞。
在MM及其进展和发展领域，CD45代表疾病MM细胞的早期标记物。随疾病进行那些细胞的CD45表型发生变化，其中CD45+细胞的优势减少，和疾病血浆细胞群体优势地变为CD45-(参见Kumar等人，Leukemia，2005，19(8)：1466)。在大量IL-6无响应细胞中也发生变化，其中在疾病后期阶段这种细胞形式变得占优势。
在本发明方法中，建议用本发明化合物来治疗MM细胞和由此产生的浆细胞瘤，其已获得CD45-和/或IL-6无响应表型。为了治疗所述受试者，本发明化合物能够以片剂形式以50mg至500mg，包括特别150mg或300mg的单元剂量，和以1至4次每日比如1次或2次每日的剂量给药频率给予。为了治疗MM受试者，本发明化合物可以与又一MM治疗药物、化合物或用药方法比如美法仑和硼替佐米等组合给予。
为了举例说明本发明的性质使其可以得到更清楚的理解，提供下述非限制性实施例。
实施例
化合物合成
本发明化合物可以通过本领域技术人员熟知的方法制备，其描述于如下为所选化合物所示的合成程序和实验程序。
定义：
实施例1-合成化合物1
合成1-1
向搅拌的中间体A(10.00g，91mmol)的H2O和THF(200mL)溶液加入Na2CO3(19.5g 0.18mol)，随后Cbz-Cl(18.40g，0.11moL)。所得混合物在室温下搅拌1h。反应混合物通过加入1M aq HCl猝灭。水层用CH2Cl2萃取两次和经合并的有机层用盐水洗涤和干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。粗制产品通过柱色谱法(EtOAc/石油醚1∶4)纯化，获得化合物1-1(13.60g，72％)，是白色固体。结构由LC-MS谱确认。TLC：Rf＝0.3(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)LC-MS：[M+1]+＝208；[M+Na]＝230。
合成1-2
在0℃向搅拌的中间体1-1(13.60g，66mmol)的DCM(100mL)溶液滴加DIPEA(57.5mL 0.33mol)，随后DMSO(70mL)中的吡啶三氧化硫(24.20g，0.15mol)。所得混合物于0℃搅拌1h。然后将混合物倾至冰-水中和水层用DCM萃取两次。经合并的有机层用盐水洗涤和干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。粗制产品通过柱色谱法(EtOAc/石油醚1∶2)纯化，获得化合物1-2(6.50g 48％)，是黄色固体。结构由H-NMR谱确认。TLC：Rf＝0.7(硅胶，EA∶PE＝1∶1，v/v)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.38(m，5H)，5.17(s，2H)，4.76(s，4H)。
合成1-3
向搅拌的三甲基氧化锍碘化物(4.20g，20.5mmol)的叔-BuOH(100mL)溶液加入KOtBu(11.00g 50.0mmol)和反应于50℃加热1h。加入1-2(4.80g，42.8mmol)，所得混合物于50℃搅拌额外48h，然后加入饱和的NH4Cl和EA猝灭。水层用EA萃取两次，然后经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩。粗制产品通过快速色谱法(EA/PE，1∶2)纯化，获得化合物D(530mg，11％)，是黄色油状物。
TLC：Rf＝0.36(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝234；[M+Na]＝256
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.36-7.32(m，5H)，5.08(s，2H)，4.51(t，J＝7.5Hz，2H)，4.23-4.14(m，4H)，2.83(t，J＝7.5Hz，2H)。
合成1-4
搅拌的中间体1-3(860mg，3.7mmol)的MeOH(40mL)溶液向加入10％Pd/C(100mg)和反应在H2(50psi)下于60℃搅拌3天。反应过滤通过C盐垫和用MeOH洗涤。减压浓缩滤液，获得化合物1-4(360mg，98％)，是油状物。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。结构由LC-MS谱确认。
TLC：Rf＝0.04(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝100
合成1-5
向搅拌的中间体1-4(430mg，4.34mmol)的THF(50mL)溶液加入K2CO3(720mg 5.21mmol)，随后1-氟-4-硝基苯(612mg，34.34mmol)。所得混合物在80℃搅拌5h。反应冷却至室温和倾至水中。水层用EtOAc萃取两次和经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。粗制产品通过快速色谱法(EtOAc/石油醚＝1∶2)纯化，提供1-5(226mg28％)，是黄色固体。结构由LC-MS谱确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝221，[M+Na]＝243
合成1-6
向搅拌的中间体F(226mg，1.0mmoL，1.0当量)的MeOH(20mL)溶液加入10％ Pd/C(20mg)和反应在1atm H2下在50℃搅拌3天。反应混合物过滤通过C盐垫和用MeOH洗涤。减压蒸发滤液，提供1-6(192mg，98％)，是红色固体。结构由LC-MS谱确认和用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.25(硅胶，EA∶PE＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝191
合成化合物1
向搅拌的中间体1-6(192mg，1.0mmol)的二噁烷(40mL)溶液加入Cs2CO3(658mg 2.0mmol)和X-phos(48mg 0.1mmol)，随后Pd2(dba)3(92mg 0.1mmol)。所得混合物在N2下在100℃加热6h。反应混合物冷却至室温和过滤通过C盐垫和用EtOAc洗涤。滤液倾至水中和水层用EtOAc萃取两次。然后经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和蒸发。粗制产品通过快速色谱法(MeOH/DCM＝1∶50)纯化，提供类似物1(41mg 10％)，是黄色固体。结构由LC-MS和1H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶，MeOH/DCM＝1∶20，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝427
1H-NMR(400MHz，MeOD)δ(ppm)：8.42(d，J＝5.2 Hz，1H)，8.25(d，J＝8.5 Hz，2H)，7.98(d，J＝8.5 Hz，2H)，7.52(d，J＝8.8 Hz，2H)，7.28(d，J＝5.2 Hz，1H)，6.55(t，J＝5.9 Hz，2H)，4.59(t，J＝7.6Hz，2H)，4.36(s，2H)，4.12(d，J＝9.5 Hz，2H)，3.90(d，J＝9.6 Hz，2H)，2.96(t，J＝7.6 Hz，2H)。
实施例2-合成化合物2
合成2-2和2-3
向2-1(5.00g，25.1mmol)的EtOAc(10mL)溶液加入4MHCl-EtOAc(20mL)和混合物在室温搅拌2h。过滤收集固体沉淀和用EtOAc洗涤。减压干燥滤饼，提供白色固体(3.40g，100％)。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
向2-2(3.40g，25mmol)的THF/H2O(50mL/50mL)溶液加入1-氟-4-硝基苯(3.54g，25mmol)和K2CO3(7.60g，55mmol)和混合物加热至回流过夜。让混合物冷却至室温和用EtOAc(200mLx3)萃取。合并有机层和用盐水洗涤(150mL)，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。获得的粗制残余物用EtOAc(10mL)洗涤，提供黄色固体(4.6g，83％)。结构由LC-MS谱确认。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.20(硅胶，EtOAc/石油醚＝1/1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝221
合成2-4
向三甲基氧化锍碘化物(11.50g，52mmol)的叔-BuOH(100mL)溶液加入叔-BuOK(5.00g，52mmol)和反应在50℃搅拌1.5小时。加入2-3(4.60g，21mmol)和反应混合物在50℃搅拌额外48h。将混合物倾至H2O(300mL)中和用EtOAc(200mLx3)萃取。合并有机层和用盐水洗涤(200mL)，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。获得的残余物用EtOAc(20mL)洗涤，减压干燥获得的黄色固体，提供产品(2.30g，44％)。结构由LC-MS谱确认。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.20(硅胶，EtOAc/石油醚＝1/1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝249
合成2-5
向2-4(2.30g，9.3mmol)的CH3OH(30ml)溶液加入10％Pd/C(230mg)和反应在氢气氛下搅拌过夜。过滤C盐垫除去催化剂，用MeOH洗涤。浓缩滤液，残余物通过硅胶柱色谱法用(CH2Cl2/CH3OH＝80/1-20/1)纯化，提供2-5(320mg，16％)，是红色固体。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.3(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝219
合成化合物2
在N2下，向2-5(160mg，0.73mmol)和关键中间体A(200mg，0.73mmol)的二噁烷(30mL)溶液加入Pd(PPh3)4(84mg，0.073mmol)，Cs2CO3(587mg，1.46mmol)和Xphos(35mg，0.073mmol)。将混合物加热至回流3h。允许反应冷却至室温和倾至H2O(50mL)中。含水层用EtOAc(50mLx2)萃取，经合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。获得的粗制残余物通过硅胶柱色谱法用(CH2Cl2/CH3OH＝40/1-40/3)纯化，提供类似物2(80mg，24％)，是淡黄色固体。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.32(硅胶，MeOH/CH2Cl2＝1/40，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝455
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)：9.49(s，1H)，9.37(d，J＝4.9 Hz，1H)，8.53(d，J＝5.0 Hz，1H)，8.27(d，J＝8.2 Hz，2H)，8.02(d，J＝8.2 Hz，2H)，7.63(d，J＝8.6 Hz，2H)，7.40(d，J＝5.1 Hz，1H)，6.93(d，J＝8.7 Hz，2H)，4.46-4.31(m，4H)，3.19(dd，J＝8.5，3.8 Hz，2H)，2.98(dd，J＝4.8，2.5 Hz，2H)，2.37(t，J＝7.6 Hz，2H)，1.87(dd，J＝13.7，6.9 Hz，4H)。
实施例3-合成化合物3
合成1-氯-3-(4-甲氧基-苄基氨基)-丙-2-醇
A(50g，364.5mmol)和B(34g，367.5mmol)在己烷(80mL)中的混合物在RT下搅拌过夜。过滤混合物，滤饼用己烷和MTBE洗涤，提供希望产品(40g，48％)，是白色固体。LC-MS：229.9([M+1]+)。
合成6-氯甲基-4-(4-甲氧基-苄基)-吗啉-3-酮
向C(18g，78.4mmol)的DCM(200mL)溶液加入1.0M含水NaOH(85mL)，将溶液冷却至0℃。滴加ClCH2COCl(8.5mL，112.9mmol)的DCM(50mL)溶液，反应在0℃搅拌1h。将反应温热至RT和加入10.0M aq NaOH(60mL)，再搅拌混合物4小时，然后用水稀释，分层。水层用DCM萃取，经合并的有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品，将其在硅胶上用石油醚/EtOAc(10∶1至4∶1)纯化，提供希望产品(11g，52％)，是浅黄色油状物。LC-MS：291.8([M+Na]+)。
合成3-(4-甲氧基-苄基)-6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷-2-酮
在0℃向搅拌的D(8g，29.7mmol)的THF(140mL)和甲苯(140mL)溶液滴加KHMDS(1.0M的THF 50mL)的溶液，搅拌反应1小时。反应通过加入aq NH4Cl(150mL)猝灭，在0℃持续20分钟。过滤混合物，滤饼用EtOAc洗涤。分层，水层用EtOAc萃取，经合并的有机层用水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品(7.5g，100％)将其直接用于后续步骤，不加进一步纯化。LC-MS：255.8([M+Na]+)。
合成3-(4-甲氧基-苄基)-6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷
在0℃向E(5.6g，24mmol)的THF(130mL)溶液逐滴加入Me2S(30.9mL)中的2.0M BH3。然后温热反应至RT和搅拌过夜。反应通过加入MeOH猝灭，在RT搅拌30分钟。加入含水K2CO3，混合物在60℃加热30分钟。将混合物冷却至RT，混合物用EtOAc萃取，干燥经合并的有机层(Na2SO4)，过滤和蒸发，提供粗制产品，将其在硅胶上用石油醚/EtOAc(8∶1至1∶1)纯化，提供F(2.5g，47％)，是无色油状物。LC-MS：220.0([M+1]+)。
合成6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷-3-羧酸叔丁基酯
向F(1.0g，4.6mmol)的MeOH(60mL)溶液加入Boc2O(2.0g，9.3mmol)和活性碳负载的Pd(OH)2(1.0g，10％)，混合物在50℃在H2气氛下(50psi)搅拌过夜。LCMS显示反应完成。过滤混合物，滤饼用MeOH洗涤。浓缩滤液，提供粗制产品(1.1g，100％)，是无色油状物，不加任何纯化。LC-MS：222.0([M+Na]+)。
合成6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷
在0℃向G(900mg，4.5mmol)的DCM(20mL)溶液逐滴加入CF3COOH(6.0g)的DCM(10mL)溶液。反应在室温下搅拌3小时。LCMS显示反应完成。减压除去溶剂，提供粗制产品(1.3g，100％)，是无色油状物，将其直接用于后续步骤。LC-MS：99.8([M+1]+)。
合成(1S，5R)-3-(4-硝基苯基)-6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷
向搅拌的H(720mg，3.41mmol)在DMSO(20mL)中的混合物加入1-氟-4-硝基苯(481mg，3.41mmol)和K2CO3(1.89g，13.64mmol)。将混合物加热至90℃，搅拌4小时。TLC显示反应完成。将混合物倾至水中(50mL)和用EtOAc萃取。经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。在溶剂蒸发期间形成沉淀，将其收集，获得130mg产品。浓缩滤液，通过硅胶柱(石油醚/EtOAc＝5/1)纯化，获得额外50mg希望产品(总收率180mg 24％)。LC-MS：220.9([M+1]+)。
合成4-((1S，5R)-6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷-3-基)苯胺
向I(180mg，0.82mmol)的CH3OH(30mL)溶液加入Pd/C(10％，18mg)，混合物在H2气氛下在RT搅拌3小时。过滤混合物通过C盐垫，滤饼用CH3OH洗涤。浓缩滤液，提供希望产品(140mg，90％)，是褐色固体。LC-MS：191.0([M+1]+)。
合成4-(6-(4-((1S，5R)-6-氧杂-3-氮杂-二环[3.1.1]庚烷-3-基)苯基氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺
在RT在N2下向J(140mg，0.74mmol)和K(202mg，0.74mmol)的二噁烷(20mL)溶液加入Pd2(dba)3(64mg，0.07mmol)，X-phos(33mg，0.07mmol)和Cs2CO3(531mg，1.63mmol)。将混合物加热至100℃，搅拌5小时。将混合物冷却至RT和过滤；向滤液加入H2O(50mL)。产品用EtOAc萃取，干燥经合并的有机层(Na2SO4)，过滤和蒸发，提供粗制产品，将其通过硅胶色谱法(PE/EA＝1/1-----CH2Cl2/CH3OH＝50/1)纯化，获得希望产品(100mg，32％)。LC-MS：426.2([M+1]+)，1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.38(s，1H)，9.34(t，J＝5.6 Hz，1H)，8.50(d，J＝5.2 Hz，1H)，8.26(d，J＝8.4 Hz，2H)，8.01(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.63(d，J＝8.8 Hz，2H)，7.36(d，J＝5.2 Hz，1H)，6.72(d，J＝8.8 Hz，2H)，4.70(d，J＝6.4 Hz，2H)，4.34(d，J＝5.6 Hz，2H)，3.54(d，J＝11.2 Hz，2H)，3.34(d，J＝11.2 Hz，2H)，3.10(q，J＝6.8 Hz，1H)，1.94(d，J＝8.4 Hz，1H)。
实施例4-合成化合物4
合成3-(4-硝基苯基)-8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷
向A(200mg，1.34mmol)和B(226mg，1.60mmol)的DMSO(20mL)溶液加入K2CO3(221mg，1.60mmol)，混合物在80℃搅拌过夜。向混合物加入H2O(50mL)，产品用EtOAc(50mL)萃取。有机相用盐水洗涤(50mL)，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品，将其用2-甲氧基-2-甲基丙烷(15mL)洗涤，提供产品(240mg，76％)，是黄色固体。LC-MS：[M+1]+234.9。
合成4-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)苯胺
向C(550mg，2.2mmol)的CH3OH(30mL)溶液加入Pd/C(10％，55mg)，在H2气氛下在室温下搅拌混合物3小时。通过C盐垫过滤混合物，浓缩滤液，提供粗制产品(480mg)，是褐色固体，将其用于后续步骤而不加纯化。LC-MS：205.1([M+1]+)。
合成4-(2-((4-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺
在N2下向D(220mg，1.08mmol)和E(294mg，1.08mmol)的二噁烷(30mL)溶液加入Pd2(dba)3(100mg，0.11mmol)，X-phos(52.4mg，0.11mmol)和Cs2CO3(870mg，2.16mmol)。混合物于80℃搅拌8小时。向混合物加入H2O(50mL)，产品用CH2Cl2(50mLx3)萃取。有机层用盐水洗涤(100mL)，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩，获得粗制产品，将其通过柱色谱法(硅胶，CH2Cl2/CH3OH＝50/1-30/1)纯化，提供产品(72mg，15％)，是黄色固体。LC-MS：441.2([M+1]+)，1H-NMR：8.46(d，J＝5.2 Hz，1H)，8.14(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.89(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.51(d，J＝8.8 Hz，2H)，7.11(d，J＝5.2 Hz，2H)，7.07(s，1H)，6.84(d，J＝9.2 Hz，2H)，6.60(t，J＝5.6 Hz，1H)，4.50(s，2H)，4.42(d，J＝6.0 Hz，2H)，3.31(d，J＝11.2 Hz，2H)，3.01(dd，J1＝2.4 Hz，J2＝11.6H，2H)，1.97(s，4H)
实施例5-合成化合物5
合成5-B
向5-A(10.00g，73mmol)的THF/H2O(50mL/50mL)溶液加入Na2CO3(23.10g，218mmol)。滴加CbzCl(14.90g，87mmol)，在室温搅拌反应5h。混合物用EtOAc(100mLx3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。获得的残余物通过硅胶柱色谱法用EtOAc/石油醚＝1/100～1/4纯化，提供5-B(16.50g 96％)，是无色油状物。TLC：Rf＝0.65硅胶EtOAc/石油醚＝1/1v/v
合成5-C
将搅拌的5-B(16.50g，70mmol)在CH2Cl2(90mL)中的混合物冷却至0℃，加入DIPEA(45.30g，0.35mol)。在此温度滴加DMSO(100mL)中的吡啶三氧化硫(25.70g，0.16mol)，反应混合物于0℃搅拌2h。将混合物倾至4M HCl中，用CH2Cl2(100mLx3)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。获得的残余物通过硅胶柱色谱法用EtOAc/石油醚＝1/100～1/6纯化，提供(14.90g。90％)，是灰白固体。结构由LC-MS谱确认。LC-MS：[M+1]+＝234
合成5-D
于50℃向三甲基氧化锍碘化物(35.20g，0.16mol)的叔-BuOH(150mL)悬浮液加入叔-BuOK(17.95g，0.16mol)，使混合物形成混浊悬浮液。在相同温度搅拌混合物1.5h。然后在此温度将化合物5-C(14.90g，64mmol)加入，混合物在50℃搅拌额外48h。反应混合物冷却至室温，在饱和水溶液NH4Cl和EtOAc间分配。分离有机相，干燥(MgSO4)，过滤和在降低的压力下浓缩。获得的残余物通过硅胶柱色谱法(EtOAc/石油醚＝1/6)纯化，提供(2.0g，11％)，是无色油状物。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.52硅胶EtOAc/石油醚＝1/1
LC-MS：262([M+1]+)，
H-NMR：7.33(m，5H)，5.14(s，2H)，4.66-4.43(m，2H)，3.82(d，J＝13.0 Hz，1H)，3.67-3.07(m，3H)，2.37(m，2H)，1.99-1.35(m，4H)。
用手性HPLC分离
将外消旋的1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷-6-羧酸苄基酯加至制备型色谱法，以进行对映体分离，其采用CHIRALPAK ADH柱(0.46cm I.D.×15cm L)和100％EtOH作为洗脱液(流速：0.5mL/min)。减压浓缩，提供峰1(0.90g)，是油状物，以及峰2(0.76g)，是油状物。
合成5-2
向5-1(900mg，3.44mmol)的CH3OH(15mL)溶液加入10％Pd/C(180mg)，反应在氢气氛下(45psi)在80℃搅拌5小时。反应混合物过滤通过C盐垫，用EtOAc洗涤。浓缩滤液，提供5-2(438mg，100％)，将其用于后续步骤而不加进一步纯化。结构由LC-MS谱确认。LC-MS：[M+1]+＝128，[2M+1]+＝255。
合成5-3
向5-2(438mg，3.05mmol)的DMSO(15mL)溶液加入1-氟-4-硝基苯(430mg，3.05mmol)和K2CO3(506mg，3.66mmol)。混合物于80℃搅拌5小时。让反应混合物冷却至室温。加水，水层用EtOAc萃取。合并有机层，用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩。粗制残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc，6∶1-4∶1)纯化，提供5-3(469mg，62％)。
TLC：Rf＝0.37(硅胶，石油醚∶EtOAc＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝249，[M+Na]＝271。
合成5-4
向5-3(360mg，1.45mmol)的THF(20mL)溶液加入10％Pd/C(53mg)，反应在氢气氛下搅拌过夜。过滤通过C盐垫除去催化剂，用EtOAc洗涤。在降低的压力下浓缩滤液，提供5-4(317mg，100％)，将其用于后续步骤而不加进一步纯化。结构由LC-MS谱确认。
TLC：Rf＝0.30(硅胶，石油醚：EtOAc＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝219。
合成化合物5
向5-4(250mg，1.14mmol)、关键中间体A(312mg，1.14mmol)和Cs2CO3(750mg，2.28mmol)的二噁烷(15mL)溶液加入Xphos(55mg。0.114mmol)和Pd2(dba)3(105mg，0.114mmol)。在氮气氛下于100℃搅拌反应混合物7小时。让反应冷却至室温，过滤通过C盐垫和用EtOAc洗涤。混合物在EtOAc与H2O之间分配，水层用EtOAc萃取。经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在降低的压力下浓缩。获得的残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5∶1～1∶1然后CH2Cl2∶CH3OH＝50∶1)纯化，提供淡黄色固体。获得的固体悬浮于甲醇(5mL)和搅拌30分钟，过滤，用MTBE洗涤，在降低的压力下干燥，提供类似物5(65mg，8％)，是淡黄色固体。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.13(硅胶，石油醚：EtOAc＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝455
1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm)：8.47(d，J＝5.1 Hz，1H)，8.13(d，J＝8.3 Hz，2H)，7.89(d，J＝8.3 Hz，2H)，7.53(d，J＝8.9 Hz，2H)，7.18-7.05(m，2H)，7.00(d，J＝8.8 Hz，2H)，6.66(t，J＝5.3 Hz，1H)，4.61(d，J＝3.3 Hz，2H)，4.42(d，J＝5.7 Hz，2H)，3.44(d，J＝11.6 Hz，1H)，3.21-3.12(m，1H)，3.07(d，J＝11.5 Hz，1H)，2.89(m，1H)，2.48(m，2H)，2.03-1.62(m，4H)。
实施例6-合成化合物6
合成6-2
向6-1(766mg，2.93mmol)的CH3OH(15mL)溶液加入10％Pd/C(180mg)，反应于80℃在氢气氛下搅拌5小时。让反应混合物冷却至室温和过滤通过C盐垫除去催化剂。浓缩滤液，提供粗制产品6-2(372mg，100％)，将其用于后续步骤而不加进一步纯化。结构由LC-MS谱确认。LC-MS：[M+1]＝128
合成6-3
将6-2(330mg，2.59mmol)的DMSO(15mL)溶液加入1-氟-4-硝基苯(370mg，2.59mmol)和K2CO3(429mg，3.11mmol)。混合物于80℃搅拌5小时，然后冷却至室温。加水，水层用EtOAc萃取。合并有机层和用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和在降低的压力下浓缩。获得的残余物通过柱色谱法(石油醚：EtOAc＝6∶1～4∶1)纯化，提供6-2(318mg，49％)。结构由LC-MS谱确认。TLC：Rf＝0.37(硅胶，石油醚：EtOAc＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]＝249。
合成6-4
向6-3(318mg，1.28mmol)的THF(20mL)溶液加入10％Pd/C(32mg)，在室温在氢气氛下反应搅拌过夜。过滤通过C盐垫除去催化剂，过滤垫用EtOAc洗涤。在降低的压力下浓缩滤液，提供粗制产品6-4(280mg，100％)，将其用于后续步骤而不加进一步纯化。结构由LC-MS谱确认。TLC：Rf＝0.30(硅胶，石油醚：EtOAc＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝219
合成化合物6
向6-4(150mg，0.69mmol)、关键中间体A(188mg，0.69mmol)和Cs2CO3(448mg，1.38mmol)的二噁烷(15mL)溶液加入Xphos(33mg，0.069mmol)和Pd2(dba)3(63mg，0.069mmol)。反应在氮气氛下于100℃搅拌7小时。让反应冷却至室温，过滤通过C盐垫，用EtOAc洗涤。加水，水层用EtOAc萃取。合并有机层和用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和减压浓缩。获得的残余物通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝5∶1～1∶1然后CH2Cl2∶CH3OH＝80∶1)纯化，提供淡黄色固体。固体悬浮于甲醇(2mL)和搅拌30分钟，过滤收集，用MTBE洗涤。减压干燥固体，提供类似物5(83mg，26％)，是淡黄色固体。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。TLC：Rf＝0.13(硅胶，石油醚：EtOAc＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝455
1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm)：8.44(d，J＝5.1 Hz，1H)，8.08(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.86(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.51(d，J＝8.8 Hz，2H)，7.16(s，1H)，7.08(d，J＝5.2 Hz，1H)，6.96(m，2H)，4.67-4.53(m，2H)，4.40(d，J＝5.7 Hz，2H)，3.39(d，J＝11.6 Hz，1H)，3.11(m，2H)，2.93(m，1H)，2.57-2.38(m，2H)，2.01-1.66(m，4H)。
实施例7-合成化合物7
合成B
向搅拌的中间体A(10.00g，81mmol)的H2O/THF＝1/1(200mL)溶液加入Na2CO3(24.30g 0.23mol)和Cbz-Cl(23.50g，0.14mol)。所得混合物在室温搅拌1h。反应通过加入1M HCl猝灭，水层用DCM萃取两次。然后经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。粗制产品通过快速色谱法(EtOAc/石油醚＝1∶4)纯化，提供B(15.50g87％)，是白色固体。结构由LC-MS谱确认。TLC：Rf＝0.3(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝222；[M+23]＝244。
合成C
于0℃向搅拌的中间体B(15.50g，0.07mol)的DCM(100mL)溶液加入DIPEA(35.2mL 0.21mol)。滴加吡啶三氧化硫(25.2g，0.16mol)的DMSO(70mL)溶液，所得混合物于0℃搅拌1h。反应通过加入H2O猝灭，水层用DCM萃取两次。经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。获得的粗制产品通过快速色谱法(EtOAc/石油醚＝1∶2)纯化，提供化合物C(13.80g，90％)，是黄色固体。其结构由LC-MS谱确认。TLC：Rf＝0.7(硅胶，EA∶PE＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+23]＝242。
合成D
向搅拌的三甲基氧化锍碘化物(32.70g，0.15mol)的叔-BuOH(100mL)溶液加入叔-BuOK(14.30g 0.13)，反应于50℃搅拌1h。然后加入中间体C(13.00g 60mmol)，所得混合物于50℃搅拌额外48小时。反应混合物通过加入饱和的NH4Cl溶液猝灭，并对EtOAc分配。水层用EtOAc萃取两次，然后经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。粗制产品通过快速色谱法(EtOAc/石油醚＝1∶2)纯化，提供D(2.70g18％)，是黄色油状物。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.36(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝248；[M+Na]＝270
H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)：7.37(m，5H)，5.14(d，2H)，4.53(m，2H)，3.85-3.47(m，4H)，2.67(m，2H)，2.38-1.98(m，2H)。
用手性HPLC分离
将外消旋1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-羧酸苄基酯加至制备型色谱法，其采用CHIRALPAK AYH柱(0.46cm I.D.×15cm L)。己烷/EtOH＝50/50用作洗脱液(流速：1mL/min)。真空浓缩，提供峰1(1.12g)，是油状物，和峰2(1.33g)，是油状物。
合成7-2
向搅拌的中间体7-1(1.10g，4.5mmol)的MeOH(20mL)溶液加入10％Pd/C(110mg)，反应在回流下在氢气氛下加热2天。让反应冷却至室温，然后过滤通过C盐垫。过滤垫用MeOH洗涤，减压浓缩滤液，提供7-2(490mg，97％)，是油状物。结构由LC-MS确认。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.04(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝114。
合成7-3
向搅拌的7-2(490mg，4.3mmol)的THF(50mL)溶液加入K2CO3(718mg，5.2mmol)，随后1-氟-4-硝基苯(612mg，4.3mmol)。所得混合物在80℃搅拌5h。让反应冷却至室温，倾至水中。水层用EtOAc萃取，经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。获得的粗制产品通过快速色谱法(EtOAc/石油醚＝1∶2)纯化，提供7-3(560mg55％)，是黄色固体。结构由LC-MS确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝235；[M+Na]＝257
合成7-4
向搅拌的7-3(560mg，2.4mmol)的MeOH(20mL)溶液加入10％Pd/C(50mg)，反应在氢气氛下搅拌过夜。过滤通过C盐除去催化剂，减压浓缩滤液，提供7-4(486mg，99％)，是红色固体。结构由LC-MS确认。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.25(硅胶，EA∶PE＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝205。
合成化合物7
向搅拌的7-4(243mg，1.19mmol)的二噁烷(40mL)溶液加入Cs2CO3(775mg 2.38mmol)和X-phos(57mg 0.119mmol)，随后Pd2(dba)3(109mg，0.119mmol)。所得混合物在100℃在N2下加热6h。反应过滤通过C盐垫，过滤垫用EtOAc洗涤。滤液对水分配，水层用EtOAc萃取两次。经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩。获得的粗制产品通过快速色谱法(MeOH/DCM＝1∶50)纯化，提供类似物7(165mg，31％)，是黄色固体。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶，MeOH/DCM＝1∶20，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝441
H-NMR(400MHz，d4-DMSO)δ(ppm)：9.36(s，2H)，8.51(d，J＝4.2Hz，1H)，8.26(d，J＝7.8 Hz，2H)，8.01-7.98(m，2H)，7.66-7.52(m，2H)，7.37(d，J＝4.4 Hz，1H)，6.60-6.48(m，2H)，4.50-4.31(m，4H)，3.58-3.52(m，1H)，3.29-3.22(m，2H)，2.81-2.62(m，2H)，2.39-2.11(m，2H)。
实施例8-合成化合物8
合成8-2
向搅拌的8-1(1.33g，5.4mmol)的MeOH(20mL)溶液加入10％Pd/C(130mg)，反应在80℃在氢气氛下加热2天。过滤通过C盐垫除去催化剂，过滤垫用MeOH洗涤。减压蒸发滤液，提供8-2(608mg 100％)，是油状物。结构由LC-MS谱确认。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.04(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝114。
合成8-3
向搅拌的8-2(623mg，5.5mmol)的THF(50mL)溶液加入K2CO3(914mg 6.6mmol)，随后1-氟-4-硝基苯(777mg，5.5mmol)。所得混合物在80℃搅拌5h。让反应混合物冷却至室温，倾至水中。水层用EtOAc萃取两次，然后经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和蒸发，提供粗制产品，将其通过快速色谱法(EtOAc/石油醚＝1∶2)纯化，提供8-3(677mg，52％)，是黄色固体。结构由LC-MS谱确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶，EA∶PE＝1∶2，v/v)
LC-MS：[M+H]+＝235，[M+Na]＝257。
合成8-4
向搅拌的8-3(677mg，2.9mmol)的MeOH(50mL)溶液加入10％Pd/C(60mg)，反应在氢气氛下搅拌过夜。过滤通过C盐垫除去催化剂，过滤垫用MeOH洗涤。减压浓缩滤液，提供8-4(554mg，93％)，是红色固体。
结构由LC-MS谱确认。TLC：Rf＝0.25(硅胶，EA∶PE＝1∶1，v/v)
LC-MS：[M+1]+＝205。
合成化合物8
向搅拌的8-4(286mg，1.4mmol)的二噁烷(40mL)溶液加入Cs2CO3(912mg 2.8mmol)和X-phos(67mg 0.14mmol)，随后Pd2(dba)3(128mg，0.14mmol)。所得混合物在100℃在氮气氛下加热6h。过滤通过C盐垫除去催化剂，过滤垫用EtOAc洗涤。滤液对水分配，用EtOAc萃取两次。然后经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和减压浓缩。粗制产品通过快速色谱法(MeOH/DCM＝1∶50)纯化，提供类似物8(167mg，27％)，是黄色固体。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶，MeOH/DCM＝1∶20，v/v)。
LC-MS：441([M+1]+)。
H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)：9.36(s，2H)，8.51(d，J＝4.2Hz，1H)，8.26(d，J＝7.8 Hz，2H)，8.09-7.98(m，2H)，7.66-7.52(m，2H)，7.37(d，J＝4.4 Hz，1H)，6.60-6.48(m，2H)，4.50-4.31(m，4H)，3.58-3.52(m，2H)，3.29-3.22(m，2H)，2.81-2.62(m，2H)，2.39-2.11(m，2H)。
实施例9-合成化合物9
合成(2S，4R)-1-苄基2-甲基4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸酯
在室温下向A(50g，381.6mmol)的MeOH(350mL)溶液加入SOCl2(30mL)。搅拌反应混合物1小时，然后加热至65℃过夜。蒸发溶剂，将残余物溶于CH2Cl2(800mL)。将混合物冷却至0℃，滴加TEA(130mL)，然后加入CbzCl(62.2mL)。在于0℃搅拌30分钟之后，通过倾入柠檬酸水溶液(10％，800mL)猝灭反应，产品用CH2Cl2萃取。干燥经合并的有机层(Na2SO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品(64g，60％)，是浅黄色油状物，将其用于后续步骤而不加进一步纯化。LC-MS：301.8([M+Na]+)。
合成(2S，4R)-1-苄基2-甲基4-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯
于0℃向B(50g，179mmol)的DCM(1500mL)溶液逐滴加入TEA(29mL)，随后MsCl(18.8mL)。加入催化量的DMAP(6.8g)，混合物于0℃搅拌1小时，然后在室温下进行2小时。反应混合物倾至冰水中，产品用EtOAc萃取。经合并的有机层用10％aq HCl、5％aq NaHCO3和水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品(65g，100％)，是无色油状物。LC-MS：379.8([M+Na]+)。
合成(2S，4S)-1-苄基2-甲基4-(苯甲酰基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯
在室温下向C(60.00g，0.16mol)的DMSO(600mL)溶液加入BzONa(49.00g，0.34mol)，反应混合物于90℃加热过夜。反应混合物倾至水和EtOAc中。分离有机相，水层用EtOAc萃取。干燥经合并的有机层(Na2SO4)，过滤，浓缩，通过柱色谱法(石油醚/EtOAc＝10∶1至5∶1)纯化，提供产品(28g，46％)，是白色固体。LC-MS：383.9([M+1]+)。
合成(2S，4S)-1-苄基2-甲基4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸酯
于0℃向D(23g，65.8mmol)的MeOH(100mL)溶液加入K2CO3(9.1g，65.8mmol)，混合物在室温下搅拌1小时。TLC显示反应完成。过滤混合物，真空浓缩滤液除去MeOH，残余物溶于EtOAc，用水洗涤，盐水，干燥(MgSO4)过滤和浓缩，提供粗制产品，将其通过色谱法(石油醚/EtOAc＝4/1-1/1)在硅胶上纯化，获得希望产品(12.6g，70％)，是浅黄色油状物。
合成(2S，4S)-1-苄基2-甲基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯
向E(11.50g，41mmol)的CH2Cl2(170mL)溶液加入咪唑(5.60g，82mmol)和TBSCl(11.2g，74mmol)。在室温下搅拌反应混合物1.5小时。反应混合物倾至水和EtOAc中，分离有机层，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，提供希望的产品(15.9g，99％)，是无色油状物。
合成(2S，4S)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)-吡咯烷-1-羧酸酯
于0℃向F(15.0g，38mmol)的THF(50mL)溶液加入LiBH4(1.9g，87mmol)，将混合物温热至RT，在室温下搅拌4小时，TLC显示反应完成，加水。产品用EtOAc萃取，有机层用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品(13.2g，95％)，是无色油状物，将其直接用于后续步骤。
合成(2S，4S)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((甲磺酰基氧基)-甲基)吡咯烷-1-羧酸酯
于0℃将G(13.0g，35.6mmol)和DIPEA(12.5mL)的CH2Cl2(150mL)溶液用MsCl(4.2mL)处理。于0℃搅拌反应混合物15分钟，然后在室温下进行额外30分钟。反应用CH2Cl2稀释，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品(16.5g，100％)，是浅黄色油状物，将其用于后续步骤而不加任何纯化。LC-MS：465.7([M+Na]+)。
合成(1S，4S)-苄基2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸酯
将H(15.6g，35.2mmol)的THF(400mL)溶液用TBAF(30.0g，114.7mmol)处理。在室温下搅拌反应混合物30分钟，然后冷却至0℃，加入NaH(1.5g，62.5mmol)。在室温下继续搅拌24小时。通过将混合物倾入水而猝灭反应，产品用EtOAc萃取。干燥有机层(Na2SO4)，过滤和真空蒸发，提供粗制产品，提供快速色谱法(硅胶，石油醚/EtOAc＝10∶1～3∶1)纯化，提供希望产品(6.2g，76％)，是浅黄色油状物。LC-MS：255.8([M+Na]+)。
合成(1S，4S)-2-氧杂-5-氮杂-二环[2.2.1]庚烷
在Pd/C(10％，0.9g)存在下，在H2气氛下在50℃，将G(1.80g，7.7mmol)的MeOH(50mL)溶液氢化。搅拌反应混合物过夜。通过C盐垫过滤混合物，减压除去溶剂，提供粗制产品(1.3g，100％)，是油状物，将其直接用于后续步骤而不加任何纯化。LC-MS：99.9([M+1]+)。
合成(1S，4S)-2-(4-硝基苯基)-5-氧杂-2-氮杂-二环[2.2.1]庚烷
于80℃将K(1.3g，13.1mmol)，1-氟-4-硝基苯(2.2g，15.7mmol)和K2CO3(2.16g，15.7mmol)在DMSO(40mL)中的混合物加热4小时。反应混合物冷却至RT，加水和搅拌10分钟。产品用EtOAc萃取，有机层用水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和蒸发，提供粗制产品，用MTBE洗涤，提供希望产品(1.2g，42％)，是黄色固体。LC-MS：221([M+1]+)。
合成4-((1S，4S)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基)苯胺
向L(600mg，2.7mmol)的CH3OH(50mL)溶液加入Pd/C(60mg)，在H2气氛下在室温下搅拌混合物4小时。通过C盐过滤混合物，除去催化剂，浓缩滤液，提供希望产品(500mg，96％)，是红色固体。LC-MS：191.0([M+1]+)。
合成4-(6-((4-((1S，4S)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基)苯基)氨基)-嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺
在室温下在N2下，向M(315mg，1.66mmol)和N(450mg，1.66mmol)的二噁烷(50mL)溶液加入Pd2(dba)3(150mg，0.17mmol)，X-phos(78mg，0.16mmol)和Cs2CO3(1.21g，3.7mmol)。将混合物加热至回流和搅拌5h。混合物冷却至室温，过滤通过滤纸；滤液对水(50mL)分配。水层用EtOAc萃取，干燥经合并的有机层(Na2SO4)，过滤和蒸发，提供粗制产品，将其通过硅胶(PE/EA＝1/1然后CH2Cl2/CH3OH＝50/1)纯化，获得希望产品(70mg，10％)，是黄色固体。LC-MS：441.2([M+1]+)，1H NMR(400 MHz，DMSO)δ9.39(s，1H)，9.36(t，J＝6.0 Hz)，8.51(d，J＝5.1 Hz，1H)，8.27(d，J＝8.5 Hz，2H)，8.03(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.59(d，J＝9.0 Hz，2H)，7.38(d，J＝5.2 Hz，1H)，6.62(d，J＝8.9 Hz，2H)，4.60(s，1H)，4.51(s，1H)，4.36(d，J＝5.3 Hz，2H)，3.72(ABq，J＝7.0 Hz，Δv＝21.2 Hz，2H)，3.51(d，J＝7.9 Hz，1H)，2.94(d，J＝9.4 Hz，1H)，1.95-1.82(m，1H)。
实施例10-合成化合物10
合成(1R，4R)-5-乙酰基-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-3-酮
在N2下将搅拌的A(50g，381.6mmol)和Ac2O(305mL)的混合物加热至90℃持续16小时，减压蒸发溶剂，将残余物溶于EtOAc，用水洗涤。水层进一步用CHCl3萃取，干燥经合并的有机层(Na2SO4)，过滤和蒸发。获得的残余物重结晶自EtOAc，获得产品(24g，40％)，是白色固体。
合成(2R，4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸盐酸盐
于100℃将B(14g，90.3mmol)在2N HCl(160mL)中的混合物搅拌过夜，LCMS显示反应完成，减压除去溶剂，残余物在EtOAc中结晶，提供希望产品，是白色固体。LC-MS：205.1([M+1]+)。
合成(2R，4R)-甲基4-羟基吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐
在室温下向A(16.56g，98.8mmol)的CH3OH(150mL)溶液加入SOCl2(35.26g，296.4mmol)，将混合物加热至回流3小时。减压除去溶剂，获得的灰白固体用于后续步骤而不加进一步纯化。
合成(2R，4R)-1-苄基2-甲基4-羟基吡咯烷-1，2-二羧酸酯
在0℃向D(17.94g，98.8mmol)和Na2CO3(10.5g，98.8mmol)的THF/H2O(150mL/50mL)溶液加入CbzCl(20.2g，118.56mmol)，混合物在室温下搅拌2小时。通过滤纸过滤混合物，浓缩滤液。加水(200mL)，产品用EtOAc(100mlx3)萃取。经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，和浓缩。残余物通过柱色谱法(硅胶，石油醚/EtOAc＝5/1-2/1)纯化，获得希望产品(7.4g，27％)，是浅黄色油状物。LC-MS：279.9([M+1]+)。
合成(2R，4R)-1-苄基2-甲基4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯
向E(7.4g，26.5mmol)的二氯甲烷(70mL)溶液加入咪唑(3.6g，53mmol)。在0℃将CH2Cl2(30mL)中的TBSCl加至溶液，反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用水(200mL)、盐水(200mL)洗涤，干燥有机层(MgSO4)，过滤和浓缩，获得粗制产品(10.4g)，是浅黄色油状物，将其用于后续步骤而不加纯化。LC-MS：415.9([M+23]+)。
合成(2R，4R)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-(羟基甲基)吡咯烷-1-羧酸酯
在0℃向F(10.4g，26.5mmol)的无水THF(150mL)溶液加入LiBH4(0.92g，42.4mmol)，混合物在室温下搅拌3小时。反应对H2O(100mL)分配，产品用EtOAc(100mLx3)萃取。经合并的有机层用盐水洗涤(100mL)，干燥(MgSO4)，浓缩，获得的残余物通过硅胶柱(石油醚/EtOAc＝100/0-60/10)纯化，获得希望的产品(8.84g，91％)，是浅黄色油状物。LC-MS：365.9([M+1]+)。
合成(2R，4R)-苄基4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-2-((甲磺酰基氧基)-甲基)吡咯烷-1-羧酸酯
在0℃向G(8.32g，22.8mmol)的CH2Cl2(200mL)溶液和Et3N(4.6g，45.6mmol)加入MsCl(3.13g，27.3mmol)，混合物在室温下搅拌2h。然后，反应对H2O(200mL)分配，用CH2Cl2(100mLx3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤(100mL)，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩，提供粗制产品(10.11g，100％)，将其直接后于后续步骤。LC-MS：443.8([M+1]+)。
合成(1R，4R)-苄基2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-羧酸酯
向H(10.11g，22.8mmol)的THF(200mL)溶液加入TBAF(23.8g，91.2mmol)，混合物在50℃加热3小时。加入NaH(1.37g，34.2mmol)，混合物在室温下搅拌2小时。浓缩混合物除去THF，然后用EtOAc稀释，对水分配。水层用EA(100mLx3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤(100mL)，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，提供硅胶柱(石油醚/EtOAc＝10∶1至5∶1)纯化，获得产品(4.3g，81％)，是浅黄色油状物。LC-MS：233.9([M+1]+)。
合成(1R，4R)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷
向J(2g，8.6mmol)的CH3OH(20mL)溶液加入Pd/C(0.2g)，混合物在H2气球下在50℃搅拌4小时。通过C盐垫除去催化剂过滤，浓缩滤液，获得粗制产品(1.1g，100％)，是无色油状物，将其用于后续步骤而不加纯化。LC-MS：100.5([M+1]+)。
合成(1R，4R)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷
向K(0.85g，8.6mmol)的DMSO(30mL)溶液加入1-氟-4-硝基苯(1.46g，10.32mmol)和碳酸钾(1.43g，10.32mmol)，混合物加热至80℃，搅拌4小时。混合物冷却至室温，加入H2O(50mL)，混合物用EA(50mLx3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩，获得黄色固体，将其用2-甲氧基-2-甲基丙烷(10mL)洗涤，获得产品(1.4g，74％，自J)，是黄色固体。LC-MS：221([M+1]+)。
合成4-((1R，4R)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基)苯胺
向L(1.31g，6.0mmol)的CH3OH(30mL)溶液加入Pd/C(10％，0.13g)，混合物在H2气氛下搅拌4小时。过滤通过C盐垫除去催化剂，浓缩滤液，获得粗制产品(1.01g，88.6％)，是褐色固体，将其用于后续步骤而不加纯化。LC-MS：191.0([M+1]+)。
合成4-(6-((4-((1R，4R)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺
在N2下向M(293mg，2.2mmol)和N(420mg，2.2mmol)的二噁烷(60mL)溶液加入Pd2(dba)3(200mg，0.22mmol)，X-phos(104mg，0.22mmol)和Cs2CO3(1.61g，4.4mmol)，混合物加热至100℃，搅拌6小时。将反应冷却至室温，加入EA(50mL)。所得混合物过滤通过滤纸以除去固体，滤液对水H2O(100mL)分配。水层用EA(50mLx3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤和浓缩和通过硅胶柱(石油醚/EtOAc＝1/1-----CH2Cl2/CH3OH＝50/1)纯化，获得希望产品(123mg，13.1％)，是黄色固体。LC-MS：441.2([M+1]+)
1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δ9.37(s，1H)，9.34(t，J＝5.2 Hz，1H)，8.50(d，J＝5.2 Hz，1H)，8.25(d，J＝8.4 Hz，2H)，8.01(d，J＝8.4 Hz，2H)，7.57(d，J＝8.8 Hz，1H)，7.36(d，J＝5.2 Hz，2H)，6.61(d，J＝8.8 Hz，2H)，4.58(s，1H)，4.49(s，1H)，4.35(d，J＝5.2 Hz，2H)，3.70(Abq，J＝7.2 Hz，Δv＝22 Hz，2H)，3.49(dd，J1＝1.2 Hz，J2＝9.2 Hz，1H)，2.92(d，J＝9.6 Hz，1H)，1.93-1.80(m，2H)。
实施例11-合成化合物11
合成B
将Mg(4.84g，0.20mol)加至化合物A(7.3g，28.8mmol)在MeOH(500mL)中的混合物，超声1小时。在降低的压力下从灰色反应混合物除去几乎全部溶剂，提供粘稠的灰色残余物，将其用乙醚(500mL)稀释，搅拌1小时。加入硫酸钠十水合物(15.00g)，将所得浅灰色混合物激烈地搅拌30分钟。过滤除去固体，滤饼用乙醚洗涤，浓缩滤液，提供油状物(1.50g，53％)。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.02(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1，v/v)
合成C
将B(1.5g，15.1mmol)，1-氟-4-硝基苯(2.10g，15.1mmol)和K2CO3(2.50g，18mmol)的无水THF(30mL)溶液加热至回流2小时。TLC显示1-氟-4-硝基苯完全消耗。让反应混合物冷却至rt，在降低的压力下浓缩。将残余物倾至水中，用DCM(3*50mL)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤和浓缩。获得的残余物通过快速柱色谱法(石油醚/EtOAc，50/1至10/1，v/v)纯化，提供黄色固体(1.15g，36％)。结构由H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.2(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶5，v/v)
1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm)：8.11(d，J＝9.2 Hz，2H)，6.32(d，J＝9.2 Hz，2H)，4.89(s，4H)，4.22(s，4H)。
合成D
将C(1.50g，6.8mmol)和10％Pd/C(90mg)在MeOH(20mL)和THF(20mL)混合物中的溶液置于在H2气氛下，在室温下搅拌过夜。TLC显示化合物C完全消耗。过滤通过C盐除去催化剂，滤饼用MeOH洗涤。在降低的压力下浓缩滤液，获得的残余物通过色谱法纯化，提供黄色固体(1.05g，81％)。结构由H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.2(硅胶，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2，v/v)
1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm)：6.65(d，J＝8.4 Hz，2H)，6.36(d，J＝8.4 Hz，2H)，4.83(s，4H)，3.93(s，4H)。
合成G
向E(1.00g，5.55mmol)和F(1.65g，11.11mmol)在甲苯(20mL)、正-PrOH(6.5mL)和2M Na2CO3(5mL)的混合物中的混合物加入Pd(PPh3)4(0.65g，0.056mmol)。在氮下搅拌反应，加热至回流24小时。TLC显示化合物E完全消耗。反应冷却至rt，倾至H2O和EtOAc的混合物中。该混合物过滤通过C盐，用EtOAc洗涤。水层用EtOAc(50mL*3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤和浓缩。获得的残余物通过柱色谱法(DCM/MeOH，100∶0至98∶2，v/v)纯化，提供产品，是白色固体(800mg，61％)。结构由LC-MS谱确认。
TLC：Rr＝0.5(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1，v/v)
LC-MS：[M+1]+：249.1/251.1＝3/1
合成H
向搅拌的G(800mg，3.23mmol)、D(675mg，3.23mmol)和Cs2CO3(2.09g，6.42mmol)在二噁烷(30mL)中的混合物加入Xantphos(186mg，0.32mmol)和Pd(PPh3)4(372mg，0.32mmol)。反应加热至回流16hs。TLC显示化合物E完全消耗。反应冷却至rt，倾至H2O和EtOAc的混合物中。该混合物过滤通过C盐，用EtOAc洗涤。水层用EtOAc(50mL*3)萃取，经合并的有机层用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤和浓缩。获得的残余物通过柱色谱法(DCM∶MeOH＝100∶1/50∶1)纯化，提供粘稠的化合物(680mg，52％)，结构由LC-MS谱确认，LC-MS显示其含有少许杂质。将其用于后续步骤而不加进一步纯化。
TLC：Rf＝0.5(硅胶，石油醚∶/乙酸乙酯＝1/1，v/v)
LC-MS：[M+1]+：403.0
合成H
在70℃将H(650g，1.61mmol)的MeOH(8mL)和3 M NaOH(8mL)溶液加热2小时。TLC显示化合物H完全消耗。减压除去有机溶剂，将剩余水溶液倾至水中，用EtOAc萃取。弃去有机层，用2N HCl(aq)将剩余水溶液的pH调节至PH＝5。混合物在室温下搅拌30分钟。过滤收集形成的沉淀，用水洗涤，在真空中干燥，提供灰色固体(230mg，37％)。结构由LC-MS谱确认。
TLC：Rf＝0.4(硅胶＝DCM/MeOH＝15/1，v/v)
LC-MS：[M+1]+：389.0
合成化合物11
向I(220mg，0.57mmol)和2-氨基乙腈盐酸盐(104mg，1.13mmol)的DMF(5mL)溶液加入TEA(434mg，3.39mmol)HOBT(91mg，0.68mmol)和EDC.HCl(239mg，1.24mmol)。搅拌反应混合物，加热至100℃持续2小时。TLC显示大多数I消耗，将反应冷却至rt。反应混合物倾至水中(10mL)，用DCM(3*20mL)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥，过滤和浓缩。获得的残余物通过柱色谱法(DCM∶MeOH＝100∶1/50∶1)纯化，提供黄色固体(123mg，51％收率)。结构由LC-MS和H-NMR谱确认。
TLC：Rf＝0.5(硅胶，MeOH/CH2Cl2＝1/15 v/v)
LC-MS：[M+1]+：427
1H-NMR(400 MHz，d6-DMSO)δ(ppm)：9.41(s，1H)，9.35(t，J＝5.2 Hz，1H)，8.51(d，J＝5.2 Hz，1H)，8.26(d，J＝8.4 Hz，2H)，8.02(d，J＝8.8 Hz，2H)，7.58(d，J＝8.8 Hz，2H)，7.38(d，J＝4.8 Hz，1H)6.44(d，J＝8.8 Hz，2H)，4.73(s，4H)，4.36(d，J＝5.2 Hz，2H)，3.94(s，4H)。
化合物分析
1H和13C NMR数据在Brucker AV-300 AVANCE NMR光谱仪上获得。
LC-EI-MS和EI-MS
一般参数：
LC-EI-MS和EI-MS数据在联用Waters 2996光电二极管阵列检测器和集成TMD电子撞击质谱的Waters 2795 Alliance HPLC上获得，其在Waters Millenium32软件版本4.0的控制下运行，软件设置如下。
质谱参数：
氦流大约0.36L/min；采集模式为扫描；采样率为1幅谱图/秒；来源温度为200℃；雾化器温度为80℃；扩展区域温度为75℃；质量范围视需要为m/z 100-550，m/z 100-650或m/z 100-700。
HPLC参数
各方法的LC-MS参数描述如下。注射EI-MS样品，在不存在柱的情况下进行分析，溶剂流速为0.25mL/min。
方法A1(LC-EI-MS)
溶剂梯度：
流速：0.25mL/min。
柱：下述之一
●Alltima HP C182.1x150mm，5微米
●XTerra MS C18，3.0x100mm，3.5微米
●XBridge C18，3.0x100mm，3.5微米
方法A2(LC-EI-MS)
溶剂梯度：
流速：0.25mL/min
柱：下述之一
●Alltima HP C182.1x150mm，5微米
●XTerra MS C18，3.0x100mm，3.5微米
●XBridge C18，3.0x100mm，3.5微米
LC-ESI-MS
一般参数：
LC-ESI-MS数据在联用Waters 2996光电二极管阵列检测器和Waters ZQ质谱的Waters 2695Xe HPLC上获得，其在电喷雾离子化条件下运行，采用设置如下的Masslynx软件版本4.1。
质谱参数：
质量范围： m/z 100-650
扫描时间： 0.5
扫描间延迟： 0.1
去溶剂化气体： 500L/h N2
锥气体： 100L/h N2
去溶剂化温度： 400℃
来源温度： 120℃
锥电压： +30V，ESI正模式，或
-45V，ESI负模式
HPLC参数：
下述的条件组之一。
方法B
溶剂梯度：
流速：0.25mL/min。
柱：XTerra MS C18，2.1x50mm，3.5微米
方法C
溶剂梯度：
流速：0.25mL/min。
柱：XTerra MS C18，2.1x50mm，3.5微米
方法D
溶剂梯度：
流速：0.25mL/min。
柱：XTerra MS C18，3.0x100mm，3.5微米
实施例12-酶筛选
测试方案
激酶测试基于Anastassiadis，T；et al Nature Biotechnology(2011)；29(11)；p1039-p1045(doi：10.1038/nbt.2017)报告的方法进行。
结果
IC50数据示于表2。
表2
最有意义的化合物是化合物5、6和9。
实施例13-细胞筛选
细胞测试原则基于Daley&Baltimore(Daley and Baltimore；Proc.Natl.Acad.Sci.USA.1988；85(23)：9312-6)报告的方法。在该基于细胞的测试中，IL3-依赖性Ba/F3细胞通过转染人类重组激酶基因进行转化，而经修饰的细胞的生存和增殖又取决于重组激酶的活性。试验化合物对增殖的效果用常规读数器比如代谢性翻转的Alamar Blue和MTT测试进行评价。
实施例14-荧光激活的细胞分类读数器(FACS)
STAT 5磷酸化的多参数细胞内流细胞计数分析。
人类红白血病细胞系HEL 92.1.7(ATCC，TIB-180)生长在补充有1mM丙酮酸钠的含有10％FCS的RPMI 1640中。为了磷-STAT 5测定，在37℃将HEL细胞生长在RPMI 1640+1％FCS中18小时，将2X105细胞每测试点于37℃暴露于DMSO/试验化合物2小时。于1300rpm离心细胞3分钟，在37℃固定在低聚甲醛(2％最终浓度)中15分钟。在离心之后，细胞在90％甲醇中在4℃进行可渗透化30分钟。在PBS-2％FCS中3次洗涤之后，用BD PharMingen藻红蛋白-缀合的小鼠免疫球蛋白同种型对照(Cat.No.551436和STAT 5(Y694)的藻红蛋白-缀合的小鼠IgGt抗体(Cat.No.612567)进行染色如下。在室温下避光进行染色1小时，随后在PBS-2％FCS中3次洗涤。随后，将细胞再悬浮于800μLPBS-FCS，用于FACS分析。用Beckman Cell Lab Quanta SC系统采用3种颜色和侧向散射能力进行流式细胞术。数据分析用CXP分析软件(版本2.2)进行。平均(median)荧光强度(MFI)用来确定特定抑制剂化合物处理细胞的倍数变化，计算为磷特异性抗体荧光通道(FL2)的MFI刺激的/MFI未刺激的比率。
实施例15-蛋白质印迹法
实验1
方法
常规地，将鼠类祖-B细胞系BaF3保持在含有10％FCS的RPMI1640培养基中。在实验这天，细胞在PBS中洗涤两次，和再悬浮于含有0.1％FCS的RPMI 1640培养基。在2小时血清剥夺之后，细胞用所希望浓度的化合物3、对照化合物，或单独的媒介物(DMSO)处理额外2小时。然后，以5ng/ml最终浓度将小鼠IL-3加至细胞，持续15分钟。然后，将细胞置于冰上，在冰冷的PBS中洗涤两次。洗涤的细胞团在液氮中快速冷冻，于-80℃储存。
细胞团在冰上与RIPA缓冲剂中溶解，溶解产物通过离心澄清(20,000xg，4℃，5分钟)。溶解产物的蛋白质浓度通过Bradford方法测量，和通过SDS-PAGE分离相等量的蛋白质(60μg/道)。然后将蛋白质转移至PVDF，用特异识别在酪氨酸694磷酰化的STAT5的抗体进行蛋白质印迹。然后反萃取膜，用识别总STAT5蛋白质的抗体重新探测。
实验2
方法
常规地，将人类红白血病细胞系HEL 92.1.7保持在含有10％FCS的RPMI 1640培养基中。在实验之前这天，将细胞在PBS中洗涤两次，再悬浮于含有1％FCS的RPMI 1640培养基，培养过夜。
在随后这天，细胞用所希望浓度的化合物3、对照化合物或单独的媒介物(DMSO)处理2小时。然后，将细胞置于冰上，在冰冷PBS中洗涤两次。洗涤的细胞团在液氮中快速冷冻，在-80℃储存。
细胞团在冰上于RIPA缓冲剂中溶解，溶解产物通过离心澄清(20,000xg，4℃，5分钟)。溶解产物的蛋白质浓度通过Bradford方法确定，和通过SDS-PAGE分离相等量的蛋白质(60μg/道)。然后将蛋白质转移至PVDF，用特异识别在酪氨酸694磷酰化的STAT5的抗体进行蛋白质印迹。然后反萃取膜，用识别总STAT5蛋白质的抗体重新探测。
实施例16-额外的化合物评价
化合物还能够在JAK2V617F-阳性骨髓增殖性疾病(MPD)的鼠类模型中测试
JAK2V617F-阳性MPD的建立
来自经5-氟尿嘧啶处理的雄性Balb/c小鼠的骨髓可以用JAK2-V617F-GFP反转录病毒感染，并且眼后注射入已致命辐射的雌性接受者。从第21天开始，小鼠可以监测如下：每日检查和每周两次GFP-阳性细胞的血液计数+FACS。期望的是，可以在大约第28天发生血细胞比容的升高以及在大约第40天发生白血细胞计数的升高。
用化合物处理
早期干预组：从第21天开始，用口服灌胃给予的化合物或载体处理(各组12只小鼠)。小鼠可以监测如下：每日检查和每周两次GFP-阳性细胞的血液计数+FACS。在第60天最终药物剂量之后8-12小时处死动物。濒死小鼠或白细胞计数超过200,000/nl或重量损失＞20％的小鼠可以更早地处死。
后期干预组：3只小鼠的组可以在第29、36、43、50和57天处死，分析骨髓和脾的网硬蛋白纤维化。一旦在3/3小鼠中记录到纤维化，则处理可以用口服灌胃给予的化合物或载体开始。小鼠可以监测如下：每日检查和每周两次GFP-阳性细胞的血液计数+FACS。可以在治疗30天之后，在最终药物剂量8-12小时之后处死动物。濒死小鼠或白色细胞计数超过200,000/nl或重量损失＞20％的小鼠可以更早地处死。可以对动物进行尸体解剖。
组织和存活的分析
可以确定肝和脾重量。来自骨髓、肝和脾的组织切片能通过HE染色分析。骨髓和脾脏也可以进行银染色以评价网硬蛋白纤维化。脾和骨髓细胞能通过GFP、谱系标记物、JAK2和STAT5磷酸化的FACS来分析。血液能通过心脏穿刺收集，分离血浆，冷冻用于药物浓度测量。组间的存活可以用Kaplan-Meyer方法来比较。
评价JAK2抑制剂在人类造血细胞群落形成测试中的活性
患有和没有JAK2V617F突变(各自N＝10)的MPD(主要是骨髓纤维化)的患者的外周血液单核细胞和5份正常对照(商业供应商)可以通过密度梯度离心(Ficoll)分离。CD34+细胞能够用商业试剂盒来选择，以富集祖细胞。CD34+细胞能够在补充胎牛血清和细胞因子(+/-EPO)的甲基纤维素中铺板，重复三次。在温育板2周之后，红细胞系统和髓性群落形成能在倒置显微镜下进行评价。
癌症
化合物对肿瘤引发、进展和转移的效果能够在有关的体内动物效力模型中评价。模型可以是在免疫缺乏小鼠中的人类肿瘤异种移植物模型，所述模型来自人类肿瘤细胞系或优选来自原发或转移的人类肿瘤。其它模型可能是正位场所中生长的人类肿瘤异种移植物，散布性疾病的模型和转基因或标记的肿瘤模型。模型也可以包括原发肿瘤的外科切除和转移性疾病的评价。
可以选择模型以确保靶向分子药物的表达。显示JAK/STAT途径的脱调节(deregulation)的肿瘤实例包括前列腺癌，乳腺癌，结肠癌，包括白血病，淋巴瘤，骨髓瘤，卵巢肿瘤，黑色素瘤，肺癌，神经胶质瘤，肾细胞肿瘤。
通过各种结果借助各种途径包括标记细胞或试剂、存活、血管生成、组织病理学可以测量这些模型中的效力，所述结果取决于肿瘤类型(实体、白血病或转移)，并且可以包括测量肿瘤开始、肿瘤生长速率、肿瘤负担、肿瘤生长延迟、肿瘤细胞灭除、转移的发生率、肿瘤成像和侵入性/转移。
体内动物效力模型也可能用于确定化合物与其它药物组合的效果的加合或增效。
哮喘仅限于人类，但是动物模型常常用来研究该人类疾病的特定方面。来自哮喘患者的支气管活体检查和支气管肺泡灌洗(BAL)流体已显示含有增加数量的激活的T细胞，B细胞，嗜酸性粒细胞和肥大细胞。许多哮喘患者是敏化的并且对一种或多种吸入的变应原具有特异性免疫球蛋白E(IgE)抗体。特应性被视为是哮喘的主要原因。在特应性个体中，吸入变应原优先地诱导T辅助细胞2细胞(Th2)应答。在多数目前模型中，小鼠敏化如下：腹膜内(ip)注射卵清蛋白(OVA)，常常与Th2偏向的佐剂比如明矶(alum)一起。在经典哮喘小鼠模型中，C57/BL6小鼠在第0天通过腹膜内注射吸收在1mg明矾上的10μg OVA进行主动敏化。第14-21天，每日将小鼠暴露至雾化的OVA 30分钟时间段。在第22天，气道炎症变得明显。从这些动物回收的BAL流体展示外周细支气管空间的增加，其由单核细胞和嗜酸性粒细胞混合的细胞渗入物组成。OVA-特异性IgE抗体能够展示于敏化动物的血清中。单核细胞群体主要由分泌细胞因子IL-4和IL-5的Th2表型细胞组成。IL-4促进B细胞的同种型交换朝向IgE合成而IL-5影响嗜酸性粒细胞的产生、成熟和激活。
类风湿性关节炎(RA)是慢性、破坏性炎性多关节疾病，其特征是被动的滑膜增生和炎性细胞的内膜下浸润。尽管病原学有待阐明，一般承认RA是自身免疫性疾病和关节炎是对软骨特异性自身抗原的耐受损失的结果。在这种情况下，已建立从自身抗原诱导RA演变的动物模型，比如1.II型胶原诱导性关节炎(CIA)和2.来自革兰氏-ve细菌(LPS)的抗原与4种单克隆抗体(mAb)群的组合。关节炎的第三种模型是佐剂诱导的关节炎(AIA)，其主要在大鼠中进行。AIA的机理仍有争议。然而，65kD分支杆菌热休克蛋白质显示共享蛋白多糖的核心蛋白质分子中的九肽序列，并且表明AIA也是自身抗原可诱导的疾病。
在AIA中，向八周龄的路易斯大鼠提供制备如下的弗氏完全佐剂(CFA)：悬浮成为热杀灭的乳酪分支杆菌(Mycobacterium butyricum)在液体石蜡中的12mg/ml乳液。CFA诱导的关节炎能够刺激如下：将50μlCFA乳液皮内注射入爪垫或尾根部。从第7天(关节炎发作)，每日检查大鼠的临床关节炎性得分，分0-4等级：0，普通；1，轻微肿胀；2，中等肿胀；3，严重肿胀；和4，严重且不能负重。对于四肢、前爪中部、腕部、指关节、足中段、踝关节和趾关节为每大鼠打出最大48的临床得分。在第17天处死动物，截取后爪，固定在7.4％福尔马林中。在脱钙和嵌入石蜡之后，在矢状面中部截断四肢，用曙红和苏木精染色，显微镜检查血管翳形成(软骨和骨的侵蚀和破坏)，多血管(通过CD31染色的血管形成)和单核细胞浸润(T、B和巨噬细胞)。
在CIA中，使用携带H-2q MHC单倍型的DBA/1小鼠的原因是它们更易感CIA。通常，使用异源胶原的原因是它们比同源的II型胶原更具免疫原性/致关节炎性。用乳液准备小鼠，所述乳液由1∶1比率的牛II型胶原和弗氏完全佐剂(最终浓度＝2mg/ml)组成。将乳液(0.1ml)注射入各小鼠的尾部，大约距离尾根1-2cm。应可看到真皮下的发白的药丸。在第21天，于PBS中经腹膜内提供II型胶原激发剂(200μg每小鼠)。高CIA-易感性小鼠(DBA/1)一般在初始致敏之后4-5周发展出关节炎。在发作之后3-5天能够观察到包括红色和肿胀爪的完全发展的关节炎，并且活性的炎性关节炎持续超过3-4周。尽管炎症最终平息，表现为关节强直的关节损害是永久的。CIA症状的评价基本上类似AIA模型，其中基于疾病严重性为临床征兆进行临床得分(0-4)。组织学测量还能够在福尔马林-固定的关节上进行，以评价腐蚀、细胞渗入物和增生。
在组合的LPS-mAB诱导的关节炎中，能够在小鼠中通过LPS和mAB混合物的组合诱导严重且持续的关节炎，所述组合识别定位在II型胶原的CB11区域中的83个氨基酸的肽片段中集簇的单独表位。该模型基于下述假设发展：通过胃肠道吸收的细菌毒素发挥增效和病理的作用，其具有触发RA的II型胶原的亚致关节炎水平的自身抗体。该模型的优势是：1.在7天内快速诱导同步的关节炎(100％)，2.能够使用各种小鼠品系，原因在于抗-II型胶原mAB混合物的给予绕过宿主产生II型胶原自身抗体的需要，从而能够在不具有CIA-易感性MHC单倍型的小鼠中诱导关节炎，和3.通过静脉内和腹膜内途径的容易的mAB和LPS给药。
炎性肠病(IBD)，包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)，代表特征是胃肠道炎症的一类慢性障碍。CD能够影响消化道的任何部分，而UC仅影响结肠和直肠。UC导致炎症和溃疡，通常在乙状结肠和直肠中。细胞渗入物是在CD和Uc中明显的复杂且促炎性的细胞因子。
在Balb/C小鼠中建立UC实验模型如下：将分离自明串珠菌属(Leuconostoc spp.)的右旋糖酐硫酸钠(3％DSS)给予饮用水。实验具有相对短的时间-过程(8天)，并且评价结肠炎的参数包括体重损失，大便稠度，直肠出血，结肠长度缩短，隐窝损害和结肠环的细胞因子分析。
在CD中，Balb/C小鼠在第0天用2x50μl的5mg/ml二硝基氟苯(DNFB)对修剃的腹部和足部进行表皮敏化，持续2天。DNFB一般溶剂化在丙酮：橄榄油(4∶1)中。在第5天，结肠内地用50μl的6mg/ml二硝基苯磺酸(DNS)的10％乙醇溶液挑战小鼠。在第8天处死小鼠。待测量参数包括总血液细胞数的抑制和细胞类型，血清中的粘膜肥大细胞蛋白酶1(MMCP-1)，结肠匀化物中的TNFα水平，大便稠度，血管渗透性和结肠斑的数量。指示结肠损害和细胞内流的中性粒细胞和肥大细胞数量也通过组织学和显微镜检查进行评价。
实施例17-来自JAK2V617F阳性患者的细胞的离体分析
为了评价JAK2小分子抑制剂的活性，已开发测试，其通过测量下游蛋白质STAT5的磷酸化状态来定量JAK-STAT途径的活性。在配体结合之后，造血细胞因子受体发生构象变化，激活有关的JAK2蛋白质。然后激活的JAK2磷酸化受体形成结合位点的细胞内部分，以募集细胞内信号转导蛋白质。STAT5是募集至激活的细胞因子受体复合物的一种蛋白质，在此其磷酰化、然后转移至核以调节介导细胞生长和分化的一组基因的表达。
细胞内流式细胞术能够通过门限谱系特异性的造血表面标记物来测量特定细胞群体中的酪氨酸磷酰化的STAT5(pYSTAT5)。这对JAK2V617F阳性骨髓增殖性疾病特别重要，原因在于含有突变的克隆仅形成骨髓内全部造血细胞的可变级分。在该研究中已选择红细胞系统细胞用于检查，原因是该谱系在PV中是增生的。
方法
从JAK2 V617F阳性骨髓增殖性疾病患者的回肠嵴收集骨髓。在活组织检查程序当天对新鲜骨髓样品进行流式细胞术测试。通过密度梯度离心收集骨髓单核细胞，然后在不含指示剂的RPMI中在37℃将0.75-1.0x106细胞与各种浓度的试验化合物温育一小时。细胞用红细胞生成素最多刺激10分钟，然后将4％甲醛直接加入培养基来固定。然后通过冷甲醇进行细胞可渗透化，然后加入最佳浓度的荧光标记抗体。选择红细胞系统细胞用于测量pYSTAT5，基于细胞表面蛋白质表达(CD45lo，CD71hi群体)。
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在下述权利要求中和在本发明的前述说明中，除了内容因措辞语言或必需含义有相反的需要，则词汇″包含″或变化比如″包括″或″含有″以涵盖方式使用，也即在本发明各种实施方式中指定所描述特征的存在但并不排除其它特征的存在或加入。

Claims (18)

1.式I化合物
其中
R1是取代的或未经取代的双环杂环基；
R2选自H，卤素，取代的或未经取代的C1-4烷基，CF3取代的或未经取代的C1-4烷氧基，CON(R)2，CN和CO2R；
R选自H和取代的或未经取代的C1-4烷基，
或其对映体，其前药或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1的化合物，其中式I化合物具有式Ia：
Ia
其中，
R1和R2如权利要求1中所定义，
或其对映体，其前药或其药学上可接受的盐。
3.根据权利要求1的化合物，其中式I化合物具有式Ib
其中R1和R2如权利要求1中所定义，
或其对映体，其前药或其药学上可接受的盐。
4.化合物，选自
4-(2-((4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
4-(2-((4-(2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
(S)-4-(2-((4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
(R)-4-(2-((4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
(R)-4-(2-((4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷-6-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
(S)-4-(2-((4-(1-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷-6-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
4-(2-((4-(1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
4-(2-((4-(6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.1]庚烷-3-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
4-(2-((4-(8-氧杂-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷-3-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；
4-(2-((4-((1S，4S)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺；和
4-(2-((4-((1R，4R)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-N-(氰基甲基)苯甲酰胺。
5.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中所述化合物是激酶抑制剂。
6.根据权利要求5的化合物，其中所述激酶抑制剂是JAK1，JAK2，JAK3和/或TYK2抑制剂。
7.制备根据权利要求1至6中任一项的式I化合物的方法，其包括下述步骤：将式II化合物
其中
R2如权利要求1中所定义和X是离去基团，与式III化合物偶联
其中
R1如权利要求1中所定义；和
M是B或金属；或
将式IV化合物
其中
R2、X和R如前文所定义与如前文所定义的式III化合物偶联，以制备式V化合物
其中
R1，R2，X和R如权利要求1中所定义；和
将如前文所定义的式V化合物与偶联。
8.根据权利要求7的方法，其中式II化合物中的X是氯，然后在与式III化合物偶联之前将其转化为碘。
9.药物组合物，包含根据权利要求1至6中任一项的化合物和药学上可接受的载体。
10.植入物，其包含根据权利要求1至6中任一项的化合物。
11.治疗与激酶有关的疾病的方法，其包括向有需要的受试者给予有效量的根据权利要求1至6中任一项的化合物或根据权利要求9的药物组合物。
12.根据权利要求1至6中任一项的化合物或根据权利要求9的药物组合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗与激酶有关的疾病。
13.根据权利要求1至6中任一项的化合物或根据权利要求9的药物组合物用于治疗与激酶有关的疾病的用途。
14.根据权利要求11的方法或根据权利要求12或13的用途，其中与激酶有关的疾病是免疫学疾病或炎性疾病；过增殖疾病；病毒病；代谢病；或血管病。
15.根据权利要求14的方法或根据权利要求12或13的用途，其中所述免疫学疾病或炎性疾病是类风湿性关节炎，全身性红斑狼疮，炎性肠病，风湿性多肌痛，哮喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD)或肺纤维化。
16.根据权利要求15的方法或用途，其中所述过增殖疾病是癌症或骨髓增殖性疾病。
17.抑制细胞中的激酶的方法，包括将细胞与根据权利要求1至6中任一项的化合物接触。
18.如权利要求7中所定义的式V化合物。
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