WO1998011111A1

WO1998011111A1 - Composes de thienotriazolodiazepine et leurs utilisations a des fins medicinales

Info

Publication number: WO1998011111A1
Application number: PCT/JP1997/002817
Authority: WO
Inventors: Hiroyuki Sueoka; Hiruhito Kobayashi; Syuji Ehara; Hirotsugu Komatsu
Original assignee: Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd.
Priority date: 1996-09-13
Filing date: 1997-08-11
Publication date: 1998-03-19
Also published as: CA2265645A1; CA2265645C; ES2182108T3; AU716490B2; CN1237180A; EP0989131A1; EA199900287A1; NO991191D0; DE69717160D1; KR20000036057A; CN1109037C; HK1023571A1; EP0989131A4; AU3786097A; ATE227727T1; NO323892B1; NO991191L; JP3094453B2; PT989131E; EP0989131B1

Description

明細書

チエノトリァゾロジァゼピン化合物およびその医薬用途

技術分野

本発明は強い細胞接着阻害作用を有し、潰癌性大腸炎、ク α—ン病などの炎症性腸疾患の治療薬として有用なチエノトリアゾロジァゼピン化合物およびその医薬用途に関する。

背景技術

国際出願公開 W O 8 9 / 0 5 8 1 2号公報および特開平 3— 2 2 3 2 9 0号公報には C C K拮抗作用またはガストリン拮抗作用を有するチエノジァゼピン化合物が開示されている。国際出願公開 W O 9 3 / 0 7 1 2 9号公報には骨粗鬆症治療薬として用いられるチエノトリアゾロジァゼピン化合物が開示されている。また、国際出願公開 W O 9 3 / 1 2 1 7 7号公報、 W O 9 4 0 6 0 8 2号公報および W O 9 4 / 2 2 8 7 2号公報には細胞接着阻害作用を有するチエノトリアゾ口ジァゼピン化合物が開示されている。

特開平 2— 2 4 3 6 9 1号公報には血小板活性化因子（P A F ) 阻害活性を有するチェノトリァゾロジァゼピン化合物が開示されている。その実施例化合物はいずれもチオフンの 2位に置換基を有するか、または 2位と 3位が結合してシクロアルカンを形成し、かつ 4位がオルト位（2位）に塩素を有するフエ二ル基、すなわち 2 —クロロフヱニル基である化合物が開示されている。またその 6位はメチル基、ヒドロキシル基、カルボキンアルキル基、ヒドロキシアルキル、アルコキシカルボニル基、アルコキシカルボニルアルキル基、モルホリノカルボニルェチル基等が置換している。これらのうち、 6位にアミド基を有する化合物としては次式（Α ) の構造を有する実施例 8の化合物が公知である。

種々の炎症 'アレルギー性疾患においては、多形核白血球、マクロファージぉよびリンパ球などのいわゆる炎症性細胞（広義の白血球）の浸潤がその病態に深く関与している。近年の分子生物学の進歩により、接着に関与する分子が次々に同定され、それらの機能的意義、すなわち、血管内皮細胞上に発現したある特定の接着分子と、それに特異的に結合する白血球上の接着分子を介して白血球接着が起こり、それに引き続いて炎症組織への白血球浸潤が起こるという現象が明らかにされた。

疾患との関連では、炎症性皮膚疾患（接触性過敏症、光線過敏症など）および慢性関節リウマチなどの自己免疫疾患において、炎症部位での I CAM— 1 ( i n t e r c e l l u l a r a a h e s i on mo l e c u l e— 1) ならびに E— s e 1 e c t i n発現の亢進が報告されている他、喘息においても VC A M- 1 (va s c u l a r c e l l a dh e s i on mo l e c u l e-

1 ) 、 I CAM— 1、 Ma c - 1などの関与が示唆されている。また、臓器移植後の拒絶反応においても I CAM— 1などを介した細胞接着が重要な役割を果たしていることが報告されている。さらに、癌転移においても接着分子が関与していることが示されている。また、近年になって、潰瘍性大腸炎、クローン病、肾炎などの発症 ·進行においても Ma c- E-s e l e c t i n. VC AM—

1などの紬胞接着分子が深く関与していることが明らかとなってきている。さらに、細胞接着分子は動脈硬化巣の形成と進展、虚血再漼流障害、敗血症等にも深く関わっていることが知られている。

このような状況のなかで細胞接着阻害作用を有する化合物が優れた抗炎症薬または抗アレルギー薬となり得ることが期待されている。たとえば、プロシ一ディングズ ·ォブ · ナショナル ·ァカデミ一 ·ォブ■サイエンス ·ユー ·エス ·エー

(P r o c. Na t l. Ac a d. S c i. U. S. A. ) 第 88巻（ 1 99 1 年） 355〜35 9頁には、 N— （フルォレニルー 9ーメトキシカルボニル）ァミノ酸類が白血球接着を阻害することにより種々の動物炎症モデルにおける反応を抑制すること力、'、また、アメリカン ' フェデレーション ' フォー ' クリニカル ' リサーチ ·ァニュアル · ミーティング（Ame r i c a n Fe d e r a t i on f o r C l i n i c a l Re s e a r c h Annu a 1 Me e t i n , 1 99 1年 5月 6曰）の抄録には同系化合物が白血球上の接着分子（CD 1 8など）発現を抑制することにより血管内皮細胞への白血球接着を阻害することなどが記載されている。このように、細胞接着阻害作用を有する化合物は、前述の疾患および障害の予防または治療薬として期待できる。

しかし、従来の技術攔に举げた文献を含む種々の公知文献に記載された化合物では未だに十分な細胞接着阻害作用を得ることができず、さらに強力な細胞接着阻害作用を有する化合物の開発が望まれている。

潰瘍性大腸炎やクローン病は慢性の難治性疾患であり根治療法はいまだ確立されていない。潰瘍性大腸炎やクローン病に対する治療薬としては、プレドノゾロンなどのステロイド剤、 5—ァミノサリチル酸（ 5— AS A) 、サラゾスルファピリジン（S AS P) などが使用されているが、これらの薬剤のうち、ステロイド剤ではしばしば重篤な副作用（ムーンフエース、高血糖、尿量増加、副腎皮質機能の抑制など）が発現すること、また他の薬剤においては必ずしも十分な治療効果が得られないことなどが問題となっている。従って、これら薬剤に代わる治療薬が強く望まれている。

また、前記文献によって P A F拮抗作用に基づく抗アレルギー薬あるいは抗炎症薬、 CCK拮抗作用、ガストリン拮抗作用に基づく眸炎治療薬あるいは胃酸分泌抑制薬、および細胞接着阻害作用による炎症性疾患治療薬、アレルギー性疾患治療薬あるいは自己免疫性疾患治療薬などが知られているが、紬胞接着阻害作用に基づく潰瘍性大腸炎あるいはクローン病の治療薬は未だ知られていない。

発明の開示

本発明者らは、潰瘪性大腸炎やクローン病などの炎症性腸疾患の治療薬を開発することを目的に強い細胞接着阻害作用を有する物質を探索したところ、光学活性な一般式（ 1 ) の化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物が炎症性腸疾患の病態に関連する接着分子である Ma c— 1 (CD 1 1 b) 、 VC A M— 1および E— s e l e c t i nの発現を強く阻害し、かつ陽炎モデル動物を用いた実験で腸炎発症による腸重量の増加を有意に抑制することを見出して、本発明を完成させるに至った。

即ち、本発明は以下の通りである。

①一般式（ 1 )

(式中、 Xはハロゲンを示す。 R¹ は炭素数 1〜4のアルキルを示す。 R² は炭素数 1〜4のアルキルを示す。 aは 1〜4の整数を示す。 R³ は炭素数 1〜4のアルキル、炭素数 1〜4のヒドロキシアルキル、炭素数 1〜4のアルコキシ、置換基を有していてもよいフヱニル、または置換基を有していてもよいへテロァリールを示す。）

により表されるチエノトリアゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

②一般式（ 1 ) において、 Xが塩素であり、 R¹ 、 R² が共にメチル基である上記①に記載のチエノトリァゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

③一般式（ 1 ) において、 aが 1である上記①または②に記載のチエノトリァゾ口ジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

④一般式（ 1 ) の化合物が（S) - 2 - 〔4一 (4 -クロロフヱニル） — 2, 3， 9一トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2 - f ) 〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4,

3 - a ) U , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— ( 4—ヒド αキシフエニル）ァセトアミドである上記①に記載のチエノトリァゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

⑤ （S) — 2— 〔4一（4一クロ口フエ二ル）一 2, 3, 9— トリメチルー 6 Η ーチエノ〔3, 2— f 〕 U , 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3 - a) 〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （ 4ーヒドロキシフヱニル）ァセトアミド . 2水和物。

⑥一般式（ 1 )

(CH₂)aCONH-R^: (1)

により表されるチエノトリァゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有してなる医薬。

⑦一般式（ 1 ) において、 Xが塩素であり、 R¹ 、 R² が共にメチル基であるチエノトリアブ口ジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有してなる上記⑥に記載の医薬。

⑧一般式（ 1 ) において、 aが 1であるチェノトリアゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有してなる上記⑥または⑦に記載の医薬。

⑨一般式（ 1 ) の化合物が（S) - 2 - 〔4一 ( 一クロロフ Xニル）一 2， 3, 9一トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2— f 〕〔し 2, 4〕トリァゾロ〔4,

3— a〕（ 1， 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （ 4ーヒドロキシフエニル）ァセトアミドである上記⑥に記載の医薬。

⑩炎症性腸疾患治療薬である上記⑥に記載の医薬。

⑪潰瘪性大腸炎治療薬である上記⑥に記載の医薬。

⑫クローン病治療薬である上記⑥に記載の医薬。

⑬ （S) — 2— 〔4— (4一クロ口フエ二ル）一 2， 3, 9— トリメチル一 6 H ーチエノ〔3, 2— f 〕〔 1 , 2, 4〕トリアブ口〔4, 3 - a) 〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— ( 4—ヒドロキシフエニル）ァセトアミド · 2水和物を含有してなる医薬。

⑭炎症性腸疾患治療薬である上記⑬に記載の医薬。

⑩滑瘪性大腸炎治療薬である上記⑬に記載の医薬。

⑩クローン病治療薬である上記⑬に記載の医薬。

本発明化合物は一般式（ 1 ) の如く、 6位に式

一 (CH₂ ) a CONH-R³

により表されるァミド結合を有する置換基を有することおよびその置換基が特定の立体配置（S配置）を有することを特徵とするが、それ以外に 2位、 3位および 9位が共にメチル基等のアルキルであること、 4位がパラ位にハロゲンを有する 4ーハロゲノフヱニル基である組み合わせが重要である。 2、 3、 4、 6、 9 位におけるこの組み合わせを有するチエノトリアゾロジァゼピン化合物によって始めて本発明の目標が達成された。

一般式（ 1 ) における各基の具体例は以下の通りである。

Xにおけるハロゲンとは塩素、臭素、フッ素、ヨウ素を示し、塩素が好ましい。 R ¹ , R ² , R ³ における炭素数 1〜4のアルキルとは、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、プチル、イソプチル、第 2級プチル、第 3級ブチルを示し、メチルが好ましい。 R ³ における炭素数 1〜4のヒドロキシアルキルとは、ヒド口キシメチル、 2 —ヒドロキシェチル、 1 ーヒドロキシェチル、 3 —ヒドロキンプロピル、 4 —ヒドロキシブチル等を示す。 R ³ における炭素数 1〜4のアルコキンとは、メトキシ、エトキン、 n —プロボキシ、イソプロポキシ、 n—ブトキシ、イッブトキシ等を示す。 R ³ における置換基を有してもよいフヱニルとは、置換基としてハロゲン（塩素、臭素、フッ素など）、炭素数 1〜4のアルキル（メチル、ェチルなど）、ヒドロキシ、炭素数 1〜4のヒドロキシアルキル（ヒド口キシメチル、ヒドロキンェチルなど）、ァミノ、ニトロを 1〜2個有してもよいフエニルを示し、 4ーヒドロキシフエニル、 4—ァミノフエ二ル、 3—クロ口フエニルなどが例示される。 R ³ における置換基を有してもよいへテロアリールとは、置換基としてハロゲン（塩素、臭素、フッ素など）、炭素数 1〜4のアルキル（メチル、ェチルなど）、ヒドロキシ、ァミノ、ニトロ、炭素数 1〜4のァルコキシ（メトキシ、エトキシなど）を 1〜2個有してもよいピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、チェニル、フリル等を示し、 3 —ピリジル、 2 —メトキシ一 3 —ピリジル、 4 —メトキシ一 3 —ピリジル、し 2 , 3 , 4—テトラヒドロ - 2—ォキソキノリンー 6—ィルなどが例示される。

本化合物の医薬上許容される塩としては無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）または有機酸（酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クェン酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p— トルエンスルホン酸、ァスコルビン酸など）との酸付加塩、および無機塩基（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛、水酸化アンモニゥ厶など）、有機塩基（メチルァミン、ジェチルァミン、トリェチルァミン、ジシクロへキシルァミン、トリエタノールァミン、エチレンジァミン、トリスヒドロキシメチルァミノメタン、キニーネ、グァニジン、シンコニンなど）またはアミノ酸（リジン、オル二チン、アルギニン、ァラニンなど）との塩があげられ、本発明の目的からするとそれら塩は無毒性のものが好ましい。また、水和物（ 1水和物、 2水和物など）やその他の溶媒和物も含まれる。

一般式（ 1 ) の化合物は下記式で表される（S) - 2 - 〔4一 ( ークロロフェニル）一 2, 3, 9—トリメチル一 6 H—チエノ〔3, 2 - f ) 〔 1 , 2, 4〕卜リアゾロ（4, 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （4ーヒド σキンフニル）ァセトアミドが好ましく、特に安定性の点からその 2水和物が最も好ましい。

本発明の一般式（ 1 ) の化合物は下記反応式のように、一般式（2) の化合物と一般式（ 3) の化合物を反応させることによって得ることができる。 (CH₂)aCOOH (2)

H 2 N- R³ (3)

(CH₂)aC0NH-R³ (1 )

H₃C z N

(式中、各記号は前記と同義である。）

反応は、本反応を阻害しない適当な溶媒、たとえばテトラヒドロフラン、ジェチルェ一テル、ジイソプロピルエーテル、ジォキサン、ジクロロメタン、クロ口ホルム、四塩化炭素、ジクロ口ェタン、齚酸ェチル、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジメチルホルムアミド、ジメチルァセトアミド、ジメチルスルホキシドなどの有機溶媒中、必要により塩基、ハロゲン化チォニル、有機酸ハロゲン化物または脱水縮合剤の存在下に一 6 0 °Cから溶媒の沸点までの温度で行う。

必要により用いられる塩基としては、アルカリ金属水酸化物（水酸化ナトリウム、水酸化力リウムなど）、アル力リ金属炭酸塩（炭酸ナトリウ厶、炭酸力リゥ厶など）、アル力リ金厲炭酸水素塩（炭酸水素ナトリウム、炭酸水素力リゥ厶など）、アルカリ金属水素化物（水素化ナトリウムなど）、アルカリ金属アルコキシド（ナトリウムメトキシド、カリウム第 3級ブトキシドなど）、または有機塩基（トリェチルァミン、ピリジン、ピコリン、 N—メチルモルホリンなど）が挙げられる。また、必要によりテトラプチルアンモニゥムブロマイド、ベンジルトリエチルアンモニゥムアイオダィドなどの相関移動触媒を用い、上記の有機溶媒と水との 2相系にてアルカリ金属水酸化物、アルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩などを使用することもできる。ハロゲン化チォニルとしては、例えばチォニルクロライド、チォニルブロマイドなどが举げられる。有機酸ハロゲン化物としては一般式（ 2 ) のカルボン酸と混合酸無水物を形成するものが望ましく、例えばェチルクロロフオルメート、イッブチルクロロフオルメート、ビバロイルクロライドなどが举げられる。脱水縮合剤としてはアミド合成に用いられるものがよく、例えばジシクロへキシルカルボジィミド（D C C ) 、 N—ェチル一 N' - (ジメチルァミノプロピル）カルボジィミドハイドロクロライド（W S C ) 、ジフヱニルホスホリルアジド（D P P A ) 、 N—メチル一 2—クロ口ピリジニゥムアイオダィド、ベンゾトリアゾールー 1 ーィルーォキシ一トリス（ジメチルァミノ）ホスホニゥ厶へキサフルォロホスフェート（B 0 p試薬）、 2—クロ口 - 1 , 3 —ジメチルイミダゾリゥムクロライド（D M C ) 、分子篩などが挙げられる。

このようにして得られた一般式（ 1 ) の化合物は再結晶、カラムクロマトグラフィ一などのそれ自体公知の方法により、反応混合物から分離、精製することができる。

一般式（ 1 ) の化合物は常法により無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）、有機酸（酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クェン酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸、ァスコルビン酸など）、無機塩基（水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛、水酸化アンモニゥムなど）、有機塩基（メチルァミン、ジェチルアミン、トリェチルァミン、ジシクロへキシルァミン、トリエタノールァミン、ェチレンジァミン、トリスヒドロキシメチルァミノメタン、キニーネ、グァニジン、シンコニンなど）またはアミノ酸（リジン、オル二チン、アルギニン、ァラニンなど）と処理することにより塩とすることができる。

一般式（2) の化合物はつぎのようにして得られる。

一般式（ 4 )

(式中、各記号は前記と同義である。）

の化合物をナトリウムェチラート、ナトリウムメチラート、水素化ナトリウム、カリウム第 3鈒ブトキシド、リチウムジイソプロピルアミド、ブチルリチウムなどの塩基の存在下に、炭酸ジェチル、炭酸ジメチルなどの炭酸ジアルキルと反応させて 6位にエトキシカルボニル基、メトキシカルボニル基などのアルコキシ力ルポ二ル基を導入し、次いで一般式（5)

Q- (CH₂ ) aCOOR⁴ ( 5)

(式中、 Qは塩素、臭素などのハロゲンを示し、 R⁴ はメチル、ェチルなどのァルキルを示す。）

により表されるハロエステルを反応させることによって一般式（ 6)

(式中、 R ⁵ はメチル、ェチルなどのアルキルを示し、他の記号は前記と同義である。）

により表される化合物が得られる。

一般式（ 6 ) の化合物を水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化バリウムなどの塩基の存在下に水または水と適当な溶媒（メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど）との混合溶媒中、 0 °Cから用いた溶媒の沸点までの温度で加水分解反応を行い、次いで、塩酸、硫酸、酢酸、臭化水素酸、トリフルォ口酢酸、トリフルォロメタンスルホン酸などの酸を用いて酸性にして脱炭酸反応を行うことによって、一般式（7 )

(式中、各記号は前記と同義である。）の化合物が得られる。

また一般式（ 6) の化合物は加水分解の条件によって一般式（7) の中間体である一般式（ 8)

(式中、各記号は前記と同義である）

により表される化合物として得ることもできる。

一般式（7) の化合物は、一般式（4) の化合物をテトラヒドロフラン、ジォキサン、ジェチルエーテル、ベンゼン、トルエン、ジメチルホルムアミドなどの不活性溶媒中、塩基（水素化ナトリウム、カリウム第 3級ブトキシド、リチウムジイソプロピルアミド、ブチルリチウムなど）の存在下、 0°C以下— 5 0°Cまでの温度で一般式（ 5) の化合物と反応させ、次いで得られた化合物を加水分解することによって直接的に得ることもできる。

さらに、一般式（7) の光学活性な化合物は例えば以下の方法により得られる。方法（ A) ：一般式（ 7 ) もしくは一般式（ 8 ) の化合物を光学活性なァミンとのジァステレオマー塩とし、結晶化あるいは再結晶化により分割する方法。

塩を形成する光学活性なァミンとしては（ 1 R, 2 S) — （一） — 2—ァミノ — 1 , 2—ジフエニルエタノール、（ I S, 2 R) — （ + ) — 2—アミノー 1， 2—ジフエニルエタノール、 D— （一）一アルギニン、 L— ( + ) —アルギニン、ブルシン、シンコニン、シンコニジン、（+ ) —デヒドロアビエチルァミン、 L — (+ ) —リジン、（R) — ( + ) — 1— （ 1—ナフチル）ェチルァミン、（S) - (-) 一 1一（ 1 一ナフチル）ェチルァミン、（R) — （ + ) — 1一フエネチルァミン、（S) — （一） — 1 —フエネチルァミン、キニーネ、ス卜リキニーネなどが挙げられ、メタノール、エタノール、 1一プロパノール、 2—プロパノール、アセトン、酢酸ェチル、ァセトニトリルなどの溶媒中で結晶化を行う。得られた光学活性な一般式（8) の化合物は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化バリウムなどの塩基の存在下に水または水と適当な溶媒（メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど）との混合溶媒中、 0°Cから用いた溶媒の沸点までの温度で加水分解を行い、さらに酸（塩酸、硫酸、臭化水素酸、クェン酸、酢酸、トリフルォロ酢酸、トリフルォロメタンスルホン酸など）を用いて脱炭酸反応を行うことによって、光学活性な一般式（7) の化合物に導くことができる。

方法（B) ：—般式（7) もしくは一股式（8) の化合物を光学活性なアルコ一ルとのジァステレオなエステルとし、分割する方法。

光学活性なアルコールとして R— （一）一 2—ブ夕ノール、 S— ( + ) - 2— ブタノール、（+ ) —メントール、（一）一メントール、 R— （ + ) — 1 —フエニルエタノール、 S— (-) — 1一フエニルエタノールなどを用い、常法に従つてエステル化を行い、カラムクロマトグラフィー、再結晶などにより分割後、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリゥム、炭酸水素ナトリウム、水酸化バリウムなどの塩基の存在下に水または水と適当な溶媒（メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど）との混合溶媒中、 0°Cから用いた溶媒の沸点までの温度で加水分解を行う。式（ 8) の化合物の場合には、さらに酸（塩酸、硫酸、臭化水素酸、クェン酸、酢酸、トリフルォロ酢酸、トリフルォロメ夕ンスルホン酸など）を用いて脱炭酸反応を行うことによって、光学活性な一般式（7) の化合物に導くことができる。

方法（C) ：一般式（6) 、（ 7) もしくは（8) の化合物を光学活性なスルホン酸とのジァステレオマー塩とし、結晶化あるいは再結晶化により分割する方法塩を形成する光学活性なスルホン酸としては（+ ) — 1 0—カンファースルホン酸、（一）一 1 0—カンファースルホン酸、（+ ) - 3—ブロモカンファー一 8—スルホン酸、（―）一 3—ブロモカンファー— 8—スルホン酸などが挙げられ、メタノール、エタノール、 1 一ブロパノール、 2—プロパノール、アセトン、酢酸ェチル、ァセトニ卜リルなどの溶媒中で結晶化を行う。得られた光学活性な一般式（ 6 ) または（ 8 ) の化合物は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化力リウム、炭酸ナトリウム、炭酸力リウ厶、炭酸水素ナトリウム、水酸化バリウムなどの塩基の存在下に水または水と適当な溶媒（メタノール、エタノール、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど）との混合溶媒中、 0 °Cから用いた溶媒の沸点までの温度で加水分解を行い、さらに酸（塩酸、硫酸、臭化水素酸、クェン酸、酢酸、トリフルォロ舴酸、トリフルォロメ夕ンスルホン酸など）を用いて脱炭酸反応を行うことによって、光学活性な一般式（7 ) の化合物に導くことができる。

前記における一般式（4 ) の化合物の合成方法は次の通りである。

一般式（ 9 )

(式中、各記号は前記と同義である）

の化合物を用いて特開平 1 一 7 9 1 8 5号、特開平 1 — 1 5 6 9 8 2号などの公報に記載の方法により得られる一般式（ 1 0 )

(式中、各記号は前記と同義である）

の化合物と式（ 1 1 )

CH₃ CONHNH2 ( 1 1 )

の化合物を反応させることによって一般式（ 4 ) の化合物が製造される。あるいは、一般式（ 1 0) の化合物にヒドラジン水和物を反応させて得られる一般式（ 1 2)

(式中、各記号は前記と同義である）

の化合物に式（ 1 3)

CH₃ COOH ( 1 3)

により表される酢酸もしくはその反応性誘導体、または一般式（ 1 4)

CH₃ C (OR⁶ ) 3 ( 1 4)

(式中、 R^e はメチル、ェチルなどのアルキルを示す。）

により表される化合物を反応させることによつても一般式（4) の化合物が製造される。

一般式（ 1 0 ) の化合物と式（ 1 1 ) の化合物との反応は、通常、反応に不活性な溶媒（ベンゼン、トルエン、キンレン、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど、またはその混合溶媒）中、有機酸（酢酸、プロピオン酸など）、無機酸（塩酸、硫酸など）またはシリカゲルの存在下に室温から用いた溶媒の還流温度で 3 0分から 5時問で進行する。一般式（】 0 ) の化合物とヒドラジン水和物との反応は、通常、反応に不活性な溶媒（メタノール、エタノール、プロパノール、ィソプロピルアルコール、ブタノールなど）中、 0〜4 0 °C、 5分から 3時間程度で進行する。

一般式（ 1 2 ) の化合物と、式（ 1 3 ) の化合物もしくはその反応性誘導体または一般式（ 1 4 ) の化合物との反応は、反応に不活性な溶媒（ベンゼン、トルェン、キシレン、テトラヒドロフラン、ジォキサンなど、またはその混合溶媒）中、有機酸（酢酸、プロピオン酸など）、無機酸（塩酸、硫酸など）またはシリ力ゲルの存在下に室温から用いた溶媒の還流温度で場合によってはディ一ンスターク水分離器を使用し、 3 0分から 6時間で進行する。

以上のようにして得られる一般式（ 1 ) の本発明化合物およびそれを含有する医薬は、ヒ卜をはじめとするサル、ゥシ、ゥマ、ィヌ、ネコ、ゥサギ、ラットなどの哺乳類における、細胞接着が関与する澳瘍性大腸炎やクローン病の炎症性腸疾患に対する治療薬、予防薬または再燃防止薬として有用である。また、本発明化合物は静脈不全および静脈潰瘪の予防 ·治療または両者の寛解の維持に使用することができる。

本化合物を医薬として用いる場合、本化合物を製薬上許容しうる担体（賦形剤、結合剤、崩壤剤、矯味剤、矯臭剤、乳化剤、希釈剤、溶解補助剤など）と混合して得られる医薬組成物あるいは製剤（錠剤、ピル剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、ェマルジヨン剤、エリキシル剤、懸濁剤、溶液剤、注射剤、点滴剤あるいは坐剤など）の形態で経口的または非経口的に患者に投与することができる o 医薬組成物は通常の方法にしたがって製剤化することができる。本明細書において、非経口とは、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔內注射あるいは点滴法などを含むものである。注射用調剤、たとえば無菌注射用水性懸濁物あるいは油性懸濁物は、適当な分散化剤または湿化剤および懸濁化剤を用いて当該分野で知られた方法で調製することができる。その無菌注射用調剤は、また、たとえば水溶液などの非毒性の非経口投与することのできる希釈剤あるいは溶剤中の無菌の注射のできる溶液または懸濁液であってもよい。使用することのできるベーヒクルあるいは溶剤として許されるものとしては、水、リンゲル液、等張食塩液などがあげられる。さらに、通常溶剤または懸濁化溶媒として無菌の不揮発性油も用いることができる。このためには、いかなる不揮発性油も脂肪酸も使用でき、天然あるいは合成あるいは半合成の脂肪性油または脂肪酸、そして天然あるいは合成あるいは半合成のモノあるいはジあるいはトリグリセリド類も含められる。直腸投与用の坐剤は、その薬物と適当な非刺激性の補形剤、たとえば、ココアバターやボリエチレングリコール類といった常温では固体であるが、腸管の温度では液体で、直腸內で融解し、薬物を放出するものなどと混合して製造することができる。

経口投与用の固形投与剤型としては、粉剤、顆粒剤、錠剤、ピル剤、カプセル剤などの上記したものがあげられる。そのような剤型において、活性成分化合物は少なくとも一^ 3の添加物、たとえばショ糖、乳糖、セルロース糖、マ二トール、マルチトール、デキストラン、デンプン類、寒天、アルギネート類、キチン類、キトサン類、ぺクチン類、トラガントガム類、アラビアゴム類、ゼラチン類、コラーゲン類、カゼイン、アルブミン、合成または半合成のボリマー類またはグリセリド類と混合することができる。そのような剤型物は、また、通常の如く、さらなる添加物を含むことができ、たとえば不活性希釈剤、マグネシウムステアレートなどの滑沢剤、パラベン類、ソルビン類などの保存剤、ァスコルビン酸、 α — トコフロール、システィンなどの抗酸化剤、崩壤剤、結合剤、増拈剤、緩衝剤、甘味付与剤、フレーバー付与剤、パーフューム剤などがあげられる。錠剤およびピル剤はさらにェンテリックコーティングされて製造されることもできる。経口投与用の液剤は、医薬として許容されるェマルジヨン剤、シロップ剤、ェリキシル剤、懸濁剤、溶液剤などがあげられ、それらは当該分野で普通用いられる不活性希釈剤、たとえば水を含んでいてもよい。

投与量は、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、投与方法、排泄速度、薬物の組み合わせ、患者のその時に治療を行っている病状の程度に応じ、それらあるいはその他の要因を考慮して決められる。本化合物もしくはその医薬上許容しうる塩またはそれらの水和物は、低毒性で安全に使用することができ、その 1 日の投与量は、患者の状態や体重、化合物の種類、投与経路などによつて異なるが、たとえば非経口的には皮下、静脈内、筋肉内または直腸内に、 0 . 1〜5 0 0 m 人 Z日程度投与され、また経口的には 0 . 5〜 1 O O O m g Z 人/日程度投与される。

以下、原料調製例、実施例、製剤処方例および実験例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。

原料調製例 1

4—クロ口フヱニルシアノメチルケトンとモルホリンおよびェチルメチルケトンをエタノールに溶解し、硫黄を懸濁させ、 1 0時間加熱遛流した。反応終了後、溶媒を減圧下留去して、残渣をクロ口ホルムに溶解して、水洗した。無水硫酸マグネシゥムで乾燥し、クロロアセチルクロライドを滴下して、 1時間加熱還流した。反応後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下溶媒を留去した。残渣にメタノールを加え、結晶化させることにより、 N— （2— （ 3— (4—クロ口べンゾィル）一 4, 5—ジメチル）チェ二ル）クロロアセトアミドを得た。これをテトラヒドロフランに溶解し、ヨウ化ナトリウムを懸濁させ、 2時間加熱還流した。反応液をドライアイス一アセトンにて— 5 0°Cに冷却し、液体アンモニアを加え攪拌した。反応終了後、減圧下溶媒を留去し、残渣に酢酸ェチルに溶解し、水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥して、減圧下溶媒を留去した。残澄をイソプロピルアルコールに溶解し、酢酸を加え、 5時間加熱還流した。減圧下溶媒を留去し、クロ口ホルムに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。减圧下溶媒を留去した後、酢酸ェチルから結晶化させることにより、 5— （ 4ークロロフェニル）一 6, 7—ジメチルー 1 , 2—ジヒドロ一 3 H—チエノ〔2, 3— e〕

C 1 , 4〕ジァゼピン一 2—オンを得た。

5— （ 4—クロ口フエニル）一 6, 7—ジメチルーし 2—ジヒドロー 3 H— チエノ〔2, 3 - e) C 1 , 4〕ジァゼピン一 2—オンをクロ口ホルムに溶解し、五硫化二リンを攪拌下加え、 3時間加熱還流した。反応後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウム水で中和し、水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下、溶媒を留去し、残渣をメタノールに懸濁させ、冷却下、 1 0 0 %ヒドラジン · ヒドラートを加え、室温にて 2時間攪拌した。反応後、析出した結晶を濾取し、融点 2 2 6で（分解）の 5— （4一クロ口フエニル）一 6， 7—ジメチルーし 2 —ジヒドロ一 3H—チエノ〔2, 3— e〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 2—ヒドラゾンを得た。この化合物をトルエンに懸濁し、オルト酢酸トリェチルを加え、 8 0 °Cで 4時間攬拌した。反応後、減圧下溶媒を留去した後、得られた粗結晶を酢酸ェチルにより再結晶して、 4— (4—クロ口フエ二ル） — 2, 3, 9一トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2 - f D 〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3— a〕〔し 4〕ジァゼピンを得た。融点 2 5 0 °C以上

'H-NMR (CDC 13 , p pm) 6 1. 6 4 (s, 3 H) , 2. 3 9 ( s, 3 H) , 2. 6 3 ( s, 3 H) , 4. 0 6 (d, 1 H, J= 1 2 Hz) , 5. 0 6 (d. 1 H, J= 1 2Hz) , 7. 2 2 - 7. 4 4 (m, 4 H)

原料調製例 2

窒素気流下、 4 — (4一クロ口フエ二ル） — 2, 3， 9一トリメチルー 6 H— チエノ〔3, 2— f 〕〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ， 3 - a) 〔し 4〕ジァゼピン 5 0 gを炭酸ジェチル 5 0 0 m 1 に溶解し、室温で攪拌下、 6 0 %水素化ナトリウムを加えた。混合液を 2時間加熱還流した後、氷水で冷却し、ブロモ酢酸ェチル 2 0 m 1を加えた。室温で 4時間攪拌した後、反応液を冷 5 %酢酸水にあけ、クロ口ホルムで抽出した。水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、滤過さらに減圧濃縮を行い、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ一に付した後、目的画分を減濃縮し、得られた結晶 9 5 gをエタノール 9 1 Om 1 に懸濁させた。氷冷下 5 °Cで攪拌し、 1規定水酸化ナトリウム水溶液 5 7 Om 1を加え、室温で 7時間攪拌した後、 ^酸を 9 Om 1加え中和し、減 GE濃縮した。得られた粗結晶をエタノール 4 0 Om 1 —水 2 5 Om 1の混合溶媒で再結晶することにより (±) — 〔4一（ 4一クロ口フエニル）一 6—エトキンカルボ二ルー 2, 3, 9 一トリメチル一 6 H—チエノ（3, 2 - f ) 〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3 - a) 〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕酢酸 7 1 gを得た。融点 1 9 8〜2 0 2°C 原料調製例 3

CHzCOOH

(土）一〔4 一（4一クロ口フエニル）一 6—エトキンカルボ二ルー 2, 3, 9一トリメチル一 6 H—チエノ〔3, 2 - f ) 〔 1 , 2, 4 ) トリァゾロ〔4,

3— a〕〔 1， 4〕ジァゼピン— 6—ィル〕酢酸 4 3 gにエタノール 5 0 Om 1 を加え室温下撹拌した中に、 2規定水酸化ナトリウム 1 8 2m l を加え 5 0°Cで一夜撹拌した。反応終了後、エタノールを留去した後、酢酸を加えて pH 4〜5 にした。次にその物を 6 0°Cで 3 0分撹拌した。その後室温まで温度を下げた後、クロ口ホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。得られた結晶をクロ口ホルム—メタノールにて再結晶し、（±) — 〔4— ( 4一クロ oフエ二ル） — 2, 3. 9一トリメチル一 6 H—チエノ〔3, 2— f 〕〔し 2, 4〕トリァゾロ〔4 , 3 - a) 〔 1 ,

4〕ジァゼピン— 6—ィル〕酢酸 2 0 gを得た。融点 2 8 7〜 2 9 0 °C

原料調製例 4

(土）一〔4一（ 4—クロ口フエニル）一 6—エトキンカルボ二ルー 2, 3, 9一トリメチルー 6 H—チエノ [ 3, 2 - f ] [し 2, 4 ] トリァゾロ [4, 3 - a] [ 1 , 4 ] ジァゼピン一 6—ィル〕酢酸 8 2 gとシンコニジン 5 0 gをメタノール 1 リツトル中に加え完全に溶解した。その溶媒を留去し、ァモルファスとした後、酢酸ェチル 9 8 Om 1を加えて同様に溶解した。室温下一晚放置して、析出した塩を吸引濾過により除いた。濂液（7 6 %ee) を減圧下溶媒を留去し、残渣にクロ口ホルム 5 0 0 m lを加え 1 0 %塩酸で 2回洗浄し、硫酸マグネシゥ厶で乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣 6 2 gに酢酸ェチル 3 7 2 0 m l を加え完全に溶解した。その物を室温下ー晚放置して、析出するラセミ体を吸引滤過により除いた。濾液を減圧下、溶媒留去し、残渣 4 3 g ( 9 4 %ee) にエタノール 5 0 0 m 1を加え室温下撹拌した中に、 2規定水酸化ナトリウ厶水溶液 1 8 2m 1を加え 5 0^eCで一夜撹拌した。反応終了後、エタノールを留去した後、 ^酸を加えて pH 4に調整し、 6 0でで 3 0分撹拌した。反応液をクロ口ホルムで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣 3 2 g ( 9 2%ee) にエタノール 1 9 2 0 m lを加えて撹拌し、不溶物であるラセミ体を吸引濾過により除いた。滤液を減圧下、溶媒留去し、残渣をクロ口ホルムにより結晶化させ、融点 1 6 7〜 1 6 9°Cの S体〔（ S) — 〔4— (4一クロ口フエニル）一 2, 3. 9— トリメチル一 6 H—チエノ [3, 2 - f ] [ 1， 2, 4 ] トリァゾロ [4, 3— a ] [ 1 , 4 ] ジァゼピン一 6—ィル〕酢酸〕 2 0 gを白色粉末状結晶として得た (> 9 9 %ee) 。なお、 R体！；（R) — 〔4— (4一クロ口フエニル）一 2. 3. 9— トリメチルー 6 H —チエノ [ 3, 2 - f ] [ 1 , 2, 4 ] トリァゾロ [ 4, 3 - a] [ 1 , 4 ] ジァゼピン— 6—ィル〕酢酸、融点 1 6 6〜 1 7 0 °C〕はシンコニジン塩として析出した結晶を同様に反応処理することにより得た。

光学純度（ee)の検定は HL P Cを用いて下記の条件で行った。

検定条件：使用カラム ' · ' ウルトロン E S— OVM (分折用カラム）

移動相 1 Z 1 5 リン酸 2水素力リウム水溶液：

1 / 1 5 リン酸水素 2ナトリウム水溶液：ァセトニトリル

= 3 3 3 : 5 0 0 : 1 2 0

流逑 . . • · 1 m 1 Z分

リテンションタイム • ·約 4. 5分（S体）

約 5. 5分（R体）

実施例 1

ジメチルホルムァミド 3 0m l、テトラヒドロフラン 1 5m lの混合溶媒に（ S) — 〔4— (4—クロ口フエニル）一 2, 3, 9— トリメチルー 6 H—チエノ [3, 2 - f ] [ 1， 2, 4 ] トリァゾロ [4， 3 - a ] [ 1 , 4] ジァゼピン — 6—ィル〕酢酸 3. O g、トリェチルァミン 1. 2m 1を加えた。一 1 0。Cに冷却し、ピバロイルク口ライド 1. Om 1を同温度にて滴下した。 3 0分後、 4 ーァミノフエノール 0. 9 9 gのジメチルホルムァミド 2 Om 1の混合溶液を同温度で滴下し、室温で 7. 5時間撹拌した。反応終了後、テトラヒドロフランを留去し飽和食塩水 2 0 0 m lを加え酢酸ェチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧下で濃縮した。残渣をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸ェチル：メタノール = 1 0 ： 1 ) で精製し、イソプロピルアルコールより結晶化させて、（S) — 2— C4 - ( 4一クロ口フエニル）一 2, 3. 9一トリメチルー 6 H—チエノ [ 3, 2 - f ] [ 1 , 2, 4 ] トリァゾロ [4, 3 - a ] [ 1 , 4 ] ジァゼピン一 6—ィル〕 —N— （4— ヒドロキシフヱニル）ァセトアミド 6 2 Omgを淡桃色粉末伏結晶として得た。融点 2 1 5〜 2 2 0で

実施例 2

(S) — 2— 〔4— (4—クロ口フエ二ル）一 2. 3. 9一トリメチルー 6 H —チエノ [ 3, 2 - f ] [ 1 , 2, 4] トリァゾロ [4， 3 - a] [ 1， 4] ジァゼピン— 6—ィル〕一 N— （4ーヒドロキシフエニル）ァセトアミド 5 gをェ夕ノール 2 5m 1 に溶解させ、 5 0°Cに加温下、水 2 5m 1を徐々に加えた。析出した結晶を濾取し、（S) — 2— 〔4一（4一クロ口フエニル）一 2, 3. 9 — トリメチルー 6 H—チエノ [3, 2 - f ] [ 1. 2, 4] トリアブ口 Γ4, 3 - a] [ 1 , 4 ] ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— ( 4—ヒドロキシフエニル）ァセトアミド ' 2水和物 4. 8 gを得た。融点 2 3 に。C

〔ひ〕 D ^{2 5} = - 1 9. 2° ( 1 メタノール）

実施例 3

ジメチルホル厶ァミド 7 0m l、テトラヒドロフラン 3 0m l の混合溶媒に（ S) 一〔4一（4一クロ口フエニル）一 2, 3， 9一トリメチルー 6 H—チエノ〔 3, 2 - f ) 〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3 - a) 〔 1 , 4〕ジァゼピン — 6—ィル〕酢酸 7， 0 g、トリェチルァミン 2. 7 3m 1 を加えた。一 5。Cに冷却し、ピバロイルク口ライド 2. 3 8m 1を同温度にて滴下した。 1 0分後、メチルァミン 0. 6 9 gのジメチルホルムァミド 5m 1溶液を同温度で滴下し、室温で 2時間撹拌した。反応混合物に水を加え酢酸ェチルで抽出し、水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を留去し、残澄を水ノメタノールから再結晶することにより、（S) — 2— 〔4一（ 4一クロ口フエニル）一 2, 3, 9 一トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2— f 〕〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3 — a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N—メチルァセトアミド■ 1 /4水和物 2. 2 9 gを得た。融点 1 4 3— 1 4 5 °C la) _D ²⁶ = + 1 8. 4 ° (c = 1 メタノール）実施例 4

ジメチルホル厶ァミド 7 0m l、テトラヒドロフラン 3 0m lの混合溶媒に（ S) ― C4 - (4一クロ口フエニル）一 2, 3, 9— トリメチルー 6 H—チエノ

〔3， 2— f 〕〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕酔酸 7. 0 g、トリェチルァミン 2. 7 3m 1 を加えた。 — 5。Cに冷却し、ピバロイルク口ライド 2. 3 8m 1を同温度にて滴下した。 1 0分後、エタノールァミン 1. 1 7 gのテトラヒドロフラン 1 0m 1を同温度で滴下し、室温で 2時間撹拌した。反応混合物に水を加え酢酸ェチルで抽出し、水洗後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を留去し、残澄をカラムクロマトグラフィ一（クロ口ホルム：メタノール = 5 0 : 1 ) にて精製し、酢酸ェチルから再結晶することにより、（S) — 2— 〔4一（4—クロ口フエ二ル）一 2, 3, 9一トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2— f 〕（ 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔4， 3 - a〕 C 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （ 2—ヒドロキシルェチル）ァセトアミド . 1 Z 4水和物 2. 2 9 を得た。融点 2 5 4— 2 5 5 °C

〔ひ〕 D ²⁶ = + 2 4. 9 ° (c = 1 メタノール）実施例 5

ジメチルホルムァミド 3 Om 1中に、（S) — 〔4一 ( 4—クロ口フエニル） - 2, 3, 9— トリメチル一 6 H—チエノ [ 3， 2 - f ] [ 1 , 2, 4 ] トリアゾロ [4, 3 - a ] [ 1， 4 ] ジァゼピン— 6—ィル〕酢酸 3. 0 g、トリェチルァミン 1. 5 6m 1および p—フエ二レンジァミン 0. 9 7 gを溶解した。ベンゾトリアゾ一ルー 1 一ィル一ォキシ一トリス（ジメチルァミノ）ホスホニゥムへキサフルォロホスフヱ一ト 3. 6 gを加え、室温下 1 2時間撹拌した。反応終了後、水 2 0 Om 1を加え、酢酸ェチルで抽出し、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、得られる結晶をトルエンにて再結晶して、（S) -N- ( 4—ァミノフエ二ル）一 2— 〔4一（ 4—クロ口フエニル）一 2， 3， 9一トリメチル一 6 H—チエノ [ 3, 2 - f ] [ し 2, 4 ] 卜リアゾロ [4, 3— a] [ 1 , 4 ] ジァゼピン— 6—ィル〕ァセトアミドを 0. 5 6 g得た。融点 1 6 9— 1 7 3て実施例 6

(S) — 〔4一（4一クロ口フエニル）一 2. 3, 9一トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2— f 〕〔 1 , 2， 4 トリァゾロ〔4, 3— a〕〔 1， 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕酢酸 2. 6 4 gをジメチルホルムァミド 3 Om 1 に溶解させた _£ これに氷冷下、 1 ーヒドロキシベンズトリアブール 1. 0 8 g、 N—ジメチルァミノプロピル一N' —ェチルカルポジイミドハイド口クロライド 1. 5 1 g, トリエチルァミンし 0 8m 1を順次加え撹拌した。 5分後この反応混合物に 3— アミノビリジン 0. 6 6 gを加え、室温にて 1晚撹拌した。反応混合物を水にあけ、得られた結晶をカラムクロマトグラフィ一（クロ口ホルム：メタノール = 5 0 : 1 ) で精製した。酢酸ェチル中、エタノール/塩酸にて塩酸塩とし、ェタノ —ル Z酢酸ェチルから再結晶すると（S) — 2— 〔4— (4一クロ口フエニル）一 2, 3, 9—トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2 - f 〔し 2, 4〕トリァゾロ〔4， 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— ( 3—ピリジル）ァセトアミド ·塩酸塩 0. 8 8 gを得た。融点 1 9 8— 2 0 C

Ca) D ²⁵ = - 2 2. 6 ° ( c = 1 メタノール）

上記実施例と同様の方法によって、次の化合物を得た。突施例 7

(S) — 2— 〔4一（4—クロ口フエニル）一 2, 3， 9—トリメチル一 6H —チエノ〔3， 2 - f ) 〔1, 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3— a〕〔し 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （2—メトキシー 3—ピリジル）ァセトアミド

Ή-NMR 270MHz (CDC1₃): 1.69(s.3H). 2.41(s,3H). 2.68(s，3H),

3.66(m,2H), 4.00(s.1H), 4.65(t.H). 6.88(dd, 1H), 7.39(dd, 4H), 7.85(dd.1H), 8.60(dd, 1H). 8.67(br. s, 1H)

実施例 8

(S) — 2— 〔4一（4一クロコフェニル）一 2， 3， 9— トリメチルー 6H ーチエノ〔3, 2 - f ) 〔し 2. 4〕トリァゾロ〔4, 3— a〕〔1, 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕 — N— （ 4—メトキシー 3—ピリジル）ァセトアミド融点 2 8 1〜 2 8 3 °C

実施例 9

(S) — 2— 〔4 — ( 4 一クロ口フエニル）一 2, 3， 9 一トリメチル一 6 H チエノ〔 3 , 2— f 〕〔 1， 2, 4〕卜リアゾロ〔 4， 3 — a〕〔し 4〕ジァゼピン— 6—ィル〕一 N—メトキシァセトアミド · 1ノ 4水和物融点 2 3 0— 2 3 1 °C. ία) D²⁶ = + 1 3. 7° ( c = 1. 0、メタノール）

製剤処方例 1

本化合物 0. 5部、乳糖 2 5部、結晶セルロース 3 5部およびコーンスターチ 3部とをよく混和したのち、コーンスターチ 2部で製した結合剤とよく練合した _c この練合物を 1 6 メッシュで篩過し、オーブン中 5 0°Cで乾燥後、 2 4 メッシュで篩過した。ここに得た練合粉体とコーンスターチ 8部、結晶セルロース 1 1部およびタルク 9部とをよく混合した後、圧搾打錠し、 1錠当たり有効成分 0. 5 mg含有の锭剤を得る。また、得られた錠剤に腸溶性コーティング剤を施して腸溶錠とし、さらに糖衣錠にすることもできる。

製剤処方例 2

本化合物 1部と乳糖 9 0部とをよく混和し、適当量のメチルセルロースより製した結合剤とよく練合する。これを 1 6メッシュで篩過し、オーブン中 5 0°Cで乾燥する。乾燥顆粒末を 3 2 メッシュで圧篩過し、適量のシリコンジォキシドとよく混和して、 1 %散剤を得る。以下に本化合物の薬理作用を示す。なお、試験には（S) — 2— 〔4一（4一クロ口フエニル）一 2, 3, 9一トリメチル一 6 H—チエノ〔3, 2 - f ) 〔 1，

2, 4〕トリァゾロ〔4, 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （ 4一ヒドロキシフヱニル）ァセトアミド（以下、化合物 1 と称する）と（S) ―

2— 〔4— ( 4—クロ口フエニル）一 2, 3 , 9— トリメチル一 6 H—チエノ（：

3, 2— f 〕〔し 2， 4 ) トリァゾロ〔4， 3— a〕〔し 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕 —N— （4ーヒドロキシフエニル）ァセ卜アミド ' 2水和物（以下、化合物 2と称する）を試験化合物として用いた。また、実験例 1、実験例 2における比較対照化合物として、前記式（A) で表される特開平 2— 2 4 3 6 9 1号公報の実施例 8 〔5— （ 2—クロ口フエニル）一 7— (モルホリノカルボニルェチル）一 1 0—メチル一 3， 4—ジヒドロ一 2 H, 7 H—シクロペン夕〔4， 5〕チエノ〔3， 2— f 〕〔 1， 2, 4〕トリァゾロ〔4, 3— a〕〔し 4〕ジァゼピン：以下、比較化合物という〕を用いた。

実験例 1 ：ヒト組織球性白血病細胞株 U 9 3 7の CD 1 1 b発現に対する作用白血球系細胞の表面に発現する接着分子の一"" ^である Ma c— 1 の鎖を構成する CD 1 1 b抗原の発現に対する作用を検討した。 U 9 3 7細胞を、牛胎児血清を 2 0 %含む R PM 1 1 6 4 0培地に浮遊させた後、フオルボール— 1 2, 1

3 -ジブチレィト（PDB、 1 0 n g/τη 1 ) および試験化合物と共に 9 6ゥェル滤過用プレートに添加した（ 3 0 0 0 0紬胞ノウエル）。 3 7°C、 5 %二酸化炭素存在下で 3日間培養した後、 RPM I 1 6 4 0培地にて 1回洗浄し、ラット抗ヒト CD 1 1 bモノクローナル抗体（2〃 g/m 1 ) を添加した。氷冷下で 1 時間放置した後、 2回洗浄し、パーォキシダーゼ標識抗ラットイムノグロブリン抗体（ 1 g/m 1 ) を添加した。氷冷下で 1時間放置した後、 3回洗浄し、パ一才キシダ一ゼ用発色基質（オルトフ X二レンジァミン）を添加した。室温で 1 5分放置した後、 9 6ゥルプレート用吸光度計を用いて 4 9 0 nmの吸光度を測定し、 CD 1 1 b抗原発現の指標とした。

PDB添加時の吸光度を 1 0 0 %、非添加時の吸光度を 0 %として算出した抑制率（）から得た I C_{5I 3}値（ M) を第 1表に示す。第 1 表化合物 CD 1 1 b発現抑制作用

( I C₅₀、 M) 化合物 2 < 0. 0 3

比較化合物 > 3

上記の第 1表のように、化合物 2は U 9 3 7細胞の CD 1 1 b発現を抑制することが明らかとなった。一方、比較化合物は化合物 2の 1 0 0分の 1以下の活性であった。

実験例 2 ：ヒ卜さい帯静脈由来血管内皮細胞（HUVE C) 上の V CAM— 1および E— s e 1 e c t i n発現抑制作用

HUVE Cを牛胎児血清（2 0 %) 、牛脳由来血管内皮細胞増殖因子（2 0 g/m 1 ) およびへパリン（ 1 0 0 g/m 1 ) を含む 1 9 9培地に浮遊させ、コラーゲンでコートされた 9 6ゥエル細胞培養用プレートに添加後、 3 7°C、 5 %二酸化炭素存在下で培養した。細胞がコンフルェン卜に達した時点で腫癌壊死因子な（V CAM— 1発現誘導時 20 U/m 1、 E— s e 1 e c t i n発現誘導時 1 0 O UZni 1 ) および試験化合物を添加し、さらに 5時間培養した。 1 9 9 培地にて 1回洗浄し、マウス抗ヒト VC AM— 1モノクロ一ナル抗体（ 2〃 gZ m l ) またはラット抗ヒト E— s e l e c t i nモノクロ一ナル抗体（2〃 gZ m l ) を添加した。室温で 1時間放置した後、 2回洗浄し、ペルォキシダーゼ標識抗マウスィ厶ノグロプリン抗体または抗ラットイムノグロプリン抗体を添加した。室温で 1時間放置した後、 3回洗浄し、ペルォキシダーゼ用基質として 2， 2 ' -a z i n o-b i s - (3-e t hy l b e n z o t h i a z o l i n e - 6 - s u f o n i c a c i d) を添加した。室温で 1 5分間放置した後、 9 6ゥヱルプレート用吸光度計を用いて 405 n/4 90 nmの吸光度を測定し、 VCAM— 1および E— s e l e c t i n発現の指標とした。

腫瘪壤死因子 α添加時の吸光度を 1 00%、非添加時の吸光度を 0%として算出した抑制率（％) から得た I C₅。値（； uM) を第 2表に示す。第 2 表発現抑制作用（ I C₆₀、 uM)

化合物

VCAM- 1発現 E— s e l e c t i n発現化合物 2 0. 1 1 0. 073

比較化合物 > 1 0 > 1 0

上記の第 2表のように、化合物 2は HUV EC上の VCAM— 1および E— s e 1 e c t i n発現を抑制することが明らかとなった。一方、比較化合物は VC AM— 1発現抑制は化合物 2の 90分の 1以下であり、また E— s e 1 e c t i n発現抑制は化合物 2の 1 30分の 1以下の活性しか認められなかった。

実験例 3 ：チォグリコレート（TG) 培地誘発白血球浸潤に対する作用

B AL BZcマウス腹腔内に TG培地を 1 m 1注入した後、 4日目に腹腔内に浸潤した白血球を EDTA (0. 02 %) を含むリン酸緩衝生理食塩水 3m 1を用いて回収し、自動血球計数器を用いて白血球濃度（e e l 1 sZm l ) を測定した。浸潤した白血球は回収液中に均一に浮遊しているものとし、総浸潤白血球数 Xは白血球濃度（A c e 〗 1 sZm 1 ) から以下の式に従って算出した。 X= 3 A

試験化合物は 0. 5 %ヒドロキシプロピルメチルセルロース（メトローズ）に懸濁し、 TG培地注入後 0〜3日目に経口投与した（ 0. 1m lノ体重 1 0 g)。本化合物は TG培地誘発白血球浸潤を用量依存的に抑制し、 i n v i voにおいても細胞接着を阻害することによって炎症部への白血球浸潤を抑制する。実験例 4 ：リポボリサッカライド（LPS) 誘発白血球接着に対する作用

マウスに LPSを投与することにより、接着分子 Ma c - 1を介した白血球接着が誘導され、肺、肝臓などへの白血球浸潤が起こり、その結果として、末梢白血球数が減少すると報告されている（Mo r i s a k i ら、 C l i n. I mmu n o 1. I mm u n o p a t h o 1. , 6 1, 365 - 375, 1 99 1) 。そこで、 LPS誘発白血球接着に対する作用を末梢血白血球数の減少を指標として検 η"ϊした。

0. 5m 1の L PS溶液（生理食塩水溶液中 50 n g/m 1 ) を BALB/c マウスの腹腔内に注入した。 LPS注入 6時間後、自動血球計数器を用いて末梢白血球数を測定した。試験化合物は 0. 5 %ヒドロキンプロピルメチルセルロース（メトローズ）に懸濁し、 LPS注入の 4日前から L P S注入日まで経口投与した（ 0. 1m l Z体重 1 0 g) 。

本化合物は LPS誘発白血球接着による白血球減少を用量依存的に抑制し、 i n v i v oにおいても細胞接着を阻害する。

実験例 5 ： TNBS (トリニト口ベンゼンスルホン酸）誘発ラット腸炎モデルに対する作用

SDラットの腸内に TNBS溶液（50%エタノール中 6 OnigZm 1 ) 50 0 U 1を注入して、腸炎を誘発した。 7日目に解剖し、大腸を肛門側より 8 cm 切り出し、重量を測定した。また、腸組織中のミエロバ一ォキシダ一ゼ（MPO) 活性を測定し、浸潤している白血球数の指標とした。すなわち、腸をホモジナイズし、凍結融解を 3回繰り返した後、遠心により得た上清中の MPO活性をパーォキシダ一ゼ用基質（オルトフヱ二レンジアミン）を用いて则定した。市販の M P 0を標準品として上清中の M P 0のュニットを算出した。このようにして測定された大腸重量の増加および MP 0活性の増加を腸炎発症の指摞とした。試験化合物は 0. 5 %ヒドロキシプロピルメチルセルロース（メトロ一ズ）溶液に懸濁し、 TNBS注入当日から 5日間、経口投与（ 0. 4m 1 Z 1 0 Omg) または腸内投与した（0. 2m 1 Zラット）。腸重量の結果と MPO活性の結果を以下に示す。

( 1 ) 腸内投与による化合物 1の作用

第 3 表 A 処置化合物用量腸重量（mg) 有意差 * (TNBS) (mg/s i t e) (平均土 S. D. ) 未感作 0 431.3±47.2

感作 0 2304.2± 1375.0 対照群感作化合物 1 0. 0 1 501.5±78.3 P <0.01 感作 0： 1 472.0± 43.4 P <0.01 感作 1 460.8±52.3 P <0.01

* ：ダネッ卜の多重比較法により検定

第 3 表 B 処置化合物用量 MPO 活性 OJ/ml ) 有意差 * (TNBS) (mg/s i t e) (平均土 S. D. ) 未感作 0 0.457±0.079

感作 0 6.211±5.106 対照群感作化合物 1 0. 0 1 0.716±0.158 P < 0.05 感作 0. 1 0.654±0.109 P <0.05 感作 1 0.676 ±0.172 P < 0.05

* ：マンホイットニーの U検定法により検定 c

( 2 ) 腸内投与による化合物 2の作用

第 4 表 A 処置化合物用量腸重量（mg) 有意差 * (TNBS) (mg/s i t e) (平均土 S. D. ) 未感作 0 439.9± 37.0

感作 0 704.9±211.1 対照群感作化合物 2 0. 0 1 499.6±71.7 P <0.01 感作 0. 1 502.0±51.5 P <0,01 感作 1 536.0 ±62.2 Pく 0.05

* ：ダネッ卜の多重比較法により検定第 4 表 B 処置化合物用量 MPO 活性（U/ml ) 有意差 *

(TNBS) (mg/s i t e) (平均土 S. D. ) 未感作 0 0.428±0.100

感作 0 0.796±0.557 対照群感作化合物 2 0. 0 1 0.354±0.081 P <0.01 感作 0. 1 0.334± 0.069 Pぐ 0.01 感作 1 0.345±0.097 P <0.01

* ：マンホイットニーの U検定法により検定 _c

( 3) 経口投与による化合物 2の作用

第 5 表 A 処置化合物用量 i (m g) 有意差 *

(TNBS) (mg k g) (平均土 S. D. ) 未感作 0 402.3± 30.6

感作 0 804.3±381.9 対照群感作化合物 2 0. 0 3 699.3± 163.7 有意差なし感作 1 468.5±47.6 P <0.01 感作 3 458.0±34.7 Pく 0.01

* ：ダネットの多重比較法により検定第 5 表 B 処置化合物用量 MPO 活性（U/ml ) 有意差 *

(TNBS) (m g/k g) (平均土 S. D. ) 未感作 0 0.434 ±0.065

感作 0 1.434±0.651 対照群

感作化合物 2 0. 3 1.568 ±0.538 有意差なし感作 1 0.769 ±0.222 P <0.05 感作 3 0.740±0.142 Pぐ 0.05

* ：マンホイットニーの U検定法により検定。上記表のように、化合物 1および化合物 2はラット腸炎の発症による腸重量の増加および白血球浸潤の双方を有意に抑制した。本化合物はヒ卜においても炎症性腸疾患（滑瘪性大腸炎およびクローン病）に対する治療薬または予防薬として有用であることが示唆された。

実験例 6 ：カラゲニン誘発ゥサギ腸炎モデルに対する作用

ゥサギに 1 % 一 d e g r a d e d c a r r a g e e n a nと F r e u n d' s c omp l e t e a d j u v a n tの乳化混合液を皮下注射し、感作した。感作 7日目（d a y 0) より 8週間、 1羽当たり λ— d e g r a d e d c a r r a g e e n a n 250 - l 0 0 Omg/d a yを強制経口投与させて腸炎を誘発した。 λ— d e g r a d e d c a r r a g e e n a nの摂取終了翌日（d a y 5 6) に解剖を行い、大腸粘膜障害を大腸組織標本の坫膜上皮の異常所見、炎症細胞浸潤の程度などを指標にスコア化した。試験化合物は感作 7日目より 8週間連続投与した（ 1 OmgZk g) 。結果を以下に示す。第 6 表化合物スコアの平均値土 S E 有意差 * コントロール 1 0. 9 ± 2. 0

化合物 2 5. 3 ± 0. 6 P < 0. 05

* ：マンホイットニーの U検定法により検定。実験例 7 ：毒性試験

化合物 2を雌ラッ卜に 1 0日間反復経口投与したところ、 30 OmgZkgの投与量で死亡例はみられなかった。また、一般状態、体重、摂餌量、血液学的検査、血液生化学的検査、尿検査、臓器重量および剖検では、何れも異常は認められなかった。

上記実験例から明らかなように、本発明化合物は、（ 1 ) 白血球上の CD 1 1 b発現を抑制することによって血管内皮細胞（HUVEC) への白血球接着を阻害する作用、（2)血管内皮細胞（HUVEC) 上の V CAM— 1、 E— s e 1 e c t i n発現を抑制する作用、および（ 3 ) i n v i voにおいて白血球の浸潤を抑制する作用等を有している。この作用により、本発明化合物は紬胞接着がその発症、進行に関与する種々の疾患に対する予防 ·治療薬として有用であることが示唆された。また、腸炎モデル動物を用いた実験では炎症を有意に抑制することが明らかとなった。以上のようにして得られる一般式（ 1 ) の本発明化合物およびそれを含有する医薬は、ヒトをはじめとするサル、ゥシ、ゥマ、ィヌ、ネコ、ゥサギ、ラットなどの哺乳類における、細胞接着が関与する潰瘪性大腸炎やクローン病の炎症性腸疾患に対する治療薬、予防薬または再燃防止薬として有用である。また、本発明化合物は静脈不全および静脈瀵瘍の予防 ·治療または両者の寛解の維持に使用することができる。また、本発明化合物は動物を用いた実験で低毒性であることが証明されたので、安全性の高い医薬品として有用である。

本出願は、日本で出願された平成 8年特許願第 2 4 3 7 9 3号を基礎としており、それに記載された内容は本明細書に全て包含するものとする。

Claims

請求の範囲

1. 一般式（ 1 )

(CH₂)aCONH-R^: (1)

(式中、 Xはハロゲンを示す。 R¹ は炭素数 1〜4のアルキルを示す。 R² は炭素数 1〜4のアルキルを示す。 aは 1〜4の整数を示す。 R³ は炭素数 1〜4のアルキル、炭素数 1〜4のヒドロキシアルキル、炭素数 1〜 4のアルコキシ、置換基を有していてもよいフニル、または置換基を有していてもよいへテロァリ —ルを示す。）

により表されるチェノトリアゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

2. —般式（ 1 ) において、 Xが塩素であり、 R' 、 R² が共にメチル基である請求の範囲 1に記載のチエノトリアゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

3. 一般式（ 1 ) において、 aが 1である請求の範囲 1 または 2に記載のチエノトリアゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。 4. 一般式（ 1 ) の化合物が（S) - 2 - (4一（ 4—クロ口フエニル）一 2,

3, 9— トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2 - f ) 〔 1 , 2, 4〕トリァゾロ〔

4, 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一N— ( 4—ヒドロキシフエ二ル）ァセトアミドである請求の範囲 1に記載のチエノトリァゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物。

5. (S) — 2— 〔4— (4—クロ口フエ二ル）一 2， 3, 9— トリメチルー 6 H—チエノ（3, 2— f 〕〔し 2, 4 ) トリァゾロ〔4, 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— （ 4ーヒドロキシフエニル）ァセ卜アミド ' 2水和物。

6. 一般式（ 1 )

(式中、 Xはハロゲンを示す。 R' は炭素数 1〜4のアルキルを示す。 R² は炭素数 1〜4のアルキルを示す。 aは 1〜4の整数を示す。 R³ は炭素数 1〜4のアルキル、炭素数 1〜4のヒドロキジアルキル、炭素数 1〜4のアルコキシ、置換基を有していてもよいフヱニル、または置換基を有していてもよいへテロアリールを示す。）

7. 一般式（ 1 ) において、 Xが塩素であり、 R' 、 R² が共にメチル基であるチエノトリァゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有してなる請求の範囲 6に記載の医薬。

8. —般式（ 1 ) において、 aが 1であるチエノトリァゾロジァゼピン化合物、その医薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有してなる請求の範囲 6または 7に記載の医薬。

9. 一般式（ 1 ) の化合物が（S) - 2 - 〔4一（4—クロロフヱニル）一 2, 3, 9—トリメチルー 6 H—チエノ〔3, 2— f 〕 U , 2. 4〕トリァゾロ〔 4， 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン— 6—ィル〕一 N— ( 4—ヒドロキシフエ二ル）ァセトアミドである請求の範囲 6に記載の医薬。

1 0. 炎症性腸疾患治療薬である請求の範囲 6に記載の医薬。

1 1. 滑瘍性大腸炎治療薬である請求の範囲 6に記載の医薬。

1 2. クローン病治療薬である請求の範囲 6に記載の医薬。

1 3. (S) — 2— 〔4— (4—クロ口フエ二ル）一 2， 3, 9— トリメチルー

6 H—チエノ〔3, 2 - f 〔 1 , 2, 4〕トリアブ CJ 〔4, 3— a〕〔 1 , 4〕ジァゼピン一 6—ィル〕一 N— ( 4—ヒドロキシフエニル）ァセトアミド · 2水和物を含有してなる医薬。

1 . 炎症性腸疾患治療薬である請求の範囲 1 3に記載の医薬。

1 5. 潰瘪性大腸炎治療薬である請求の範囲 1 3に記載の医薬。

1 6. クローン病治療薬である請求の範囲 1 3に記載の医薬。