CN111592594A - 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是新型冠状病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及抗新型冠状病毒的单克隆抗体，以及包含所述抗体的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体的用途。本发明的抗体可用于诊断、预防和/或治疗新型冠状病毒的感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，新型冠状病毒肺炎)。

Description

一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
技术领域
本发明涉及免疫学领域和分子病毒学领域，特别是新型冠状病毒的诊断、预防和治疗领域。具体而言，本发明涉及抗新型冠状病毒的单克隆抗体，以及包含所述抗体的组合物(例如，诊断剂和治疗剂)。此外，本发明还涉及所述抗体的用途。本发明的抗体可用于诊断、预防和/或治疗新型冠状病毒的感染和/或由所述感染引起的疾病(例如，新型冠状病毒肺炎)。
背景技术
新型冠状病毒SARS-CoV-2是导致新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的病原体，是一种单链RNA病毒，它与2002-2003年引发疫情的重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)以及2012年引发疫情的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)同属冠状病毒科。冠状病毒颗粒呈圆形或椭圆形，亦为多形性，直径50-200nm，属于尺寸较大的病毒。冠状病毒是包膜病毒，病毒衣壳外面包裹着脂质包膜，其上排列较宽的刺突蛋白 (Spike,S蛋白)，形状如太阳光环。已有研究证实，S蛋白位于新型冠状病毒SARS-CoV-2的病毒表面，其能够在病毒感染宿主的过程中通过其包含的受体结合结构域(RBD)结合宿主细胞受体血管紧张素转换酶2 (ACE2)分子，从而启动病毒膜与宿主细胞膜发生融合，导致宿主细胞感染病毒。
迄今为止，中和抗体已被证明是治疗病毒性疾病的有效方法。一般来说，患者体内的B淋巴细胞受到抗原的刺激后，会被活化，进而转变和分化成多种不同的细胞，并产生抗体。据现有的研究报道，新型冠状病毒肺炎康复者的外周血内抗新型冠状病毒的抗体，它们由经活化的B 细胞产生和分泌。然而，康复者血浆内存在着多种B细胞，并且不同的B细胞所产生的抗体的结合活性和中和效价也有所不同。到目前为止，尚无研究报道，具有高结合活性和/或高中和活性的抗新型冠状病毒的抗体。
因此，需要开发能够抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的具有高结合活性和/或高中和活性的抗体，以提供有效的诊断、预防和/或治疗新型冠状病毒感染的手段。
发明内容
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q) 的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区 (CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL) 分别形成抗体结合部位。氨基酸至各区域或结构域的分配遵循Kabat Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1987and 1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989) Nature 342:878-883的定义。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4 亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，Fundamental Immunology,Ch.7(Paul,W.,ed.,第2版， Raven Press,N.Y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。在一些情况下，抗原结合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、 Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。
在一些情况下，抗体的抗原结合片段是单链抗体(例如，scFv)，其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子(参见，例如,Bird等人,Science 242:423 426(1988)和Huston 等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879 5883(1988))。此类scFv 分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头，但也可使用其变体(Holliger 等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448)。可用于本发明的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi 等人(2001)，Eur.J.Immunol.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res. 56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和 Roovers等人(2001)，CancerImmunol.描述。
在一些情况下，抗体的抗原结合片段是双抗体，即，双价抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如,Holliger P.等人, Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444 6448(1993)，和Poljak R.J. 等人,Structure 2:1121 1123(1994))。
可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的单克隆抗体BD23)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。
在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。
如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”是指，来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片段，也即，除可能自发出现的自然突变外，一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的，其通常包含至少2 种或更多种的不同抗体，这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。单克隆抗体通常可采用Kohler等首次报道的杂交瘤技术获得(Nature, 256:495,1975)，但也可采用重组DNA技术获得(如参见Journal of virological methods,2009,158(1-2):171-179)。
如本文中所使用的，“中和抗体”是指，能清除或显著降低目标病毒的毒力(例如，感染细胞的能力)的抗体或抗体片段。
如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。
如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草芽孢杆菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，CHO细胞，COS细胞，NSO细胞，HeLa细胞，BHK细胞， HEK293细胞或人细胞等的动物细胞。
如本文中使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。在某些实施方式中，特异性结合某抗原的抗体(或对某抗原具有特异性的抗体)是指，抗体以小于大约10-5M，例如小于大约10-6M、10-7M、10-8M、10-9M或10-10M 或更小的亲和力(KD)结合该抗原。
如本文中所使用的，术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数，其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小，抗体-抗原结合越紧密，抗体与抗原之间的亲和力越高。通常，抗体以小于大约10-5M的解离平衡常数(KD)结合抗原。例如，本发明的单克隆抗体BD23能够以大约10-9M(nM水平)的解离平衡常数(KD)结合抗原 (例如，新型冠状病毒的S蛋白)。
在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用A或Ala表示。
如本文中所使用的，术语“中和活性”是指抗体或抗体片段具有与病毒上的抗原蛋白相结合，从而阻止病毒感染细胞和/或病毒子代的成熟和/或病毒子代的释放的功能活性，具有中和活性的抗体或抗体片段可以阻止病毒的扩增，从而抑制或消除病毒的感染。
如本文中所使用的，术语“新型冠状病毒肺炎”和“COVID-19”是指，因新型冠状病毒感染而导致的肺炎，二者具有相同的含义，可互换使用。
本申请发明人经过大量的实验研究后发现了一种抗体，其能够特异性识别和靶向新型冠状病毒的S蛋白，特别是S蛋白的受体结合结构域 (RBD)，并且显示出了高效的中和病毒的能力。因此，本发明的抗体特别适合用于诊断、预防和治疗新型冠状病毒感染或与新型冠状病毒感染相关的疾病(例如新型冠状病毒肺炎)。
在本申请的第一个方面，提供了一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的重链可变区(VH)互补决定区1-3(CDR1-3)；和/或，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的轻链可变区(VL)互补决定区1-3(CDR1-3)。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括如SEQ ID NO:7 所示的重链可变区(VH)。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括如SEQ ID NO:8 所示的轻链可变区(VL)。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包含：氨基酸序列分别如SEQ IDNO:1-3所示的VH CDR1-3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 4-6所示的VL CDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包括：如SEQ ID NO:7 所示的VH和如SEQ ID NO:8所示的VL。
在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自 Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如， scFv)、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体还包括重链恒定区。在某些优选的实施方案中，所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体还包括轻链恒定区。在某些优选的实施方案中，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10 所示。
在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够特异性结合新型冠状病毒的刺突蛋白(S蛋白)。在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够靶向新型冠状病毒的刺突蛋白(S蛋白)的受体结合域(RBD)。在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制S蛋白的受体结合域(RBD)介导的受体结合和/或膜融合过程，抑制病毒对细胞的感染。
在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段具有中和能力(例如，能够中和新型冠状病毒)。在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够抑制新型冠状病毒感染或进入宿主细胞。由此，所述单克隆抗体或其抗原结合片段能够中和新型冠状病毒，并由此预防和治疗新型冠状病毒的感染。
本申请还提供了分离的核酸分子，其编码本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。此类核酸分子不受限于其产生的方法，并且可以利用基因工程重组技术或化学合成方法获得。
因此，在另一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核苷酸序列，其中所述抗体重链可变区包含：氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1-3的VHCDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述VH CDR1-3分别由SEQ ID NO:11-13 所示的核苷酸序列编码。因此，在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO:11-13所示的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述抗体重链可变区具有如SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述核酸分子具有如SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列。
在另一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核苷酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含：氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4-6的VLCDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述述VL CDR1-3分别由SEQ ID NO: 14-16所示的核苷酸序列编码。因此，在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO:14-16所示的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述抗体轻链可变区具有如SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述核酸分子具有如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列。
在另一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含如上文所定义的能够编码抗体重链可变区的核苷酸序列，以及如上文所定义的能够编码抗体轻链可变区的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述抗体重链可变区具有如SEQ ID NO:7 所示的氨基酸序列。在某些优选的实施方案中，所述能够编码抗体重链可变区的核苷酸序列具有如SEQID NO:17所示的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述抗体轻链可变区包括如SEQ ID NO:8 所示的氨基酸序列。在某些优选的实施方案中，所述能够编码抗体轻链可变区的核苷酸序列具有如SEQID NO:18所示的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子包含如SEQ ID NO: 17所示的核苷酸序列和如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子还包含，能够编码抗体重链恒定区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述重链恒定区具有如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。在某些优选的实施方案中，所述能够编码抗体重链恒定区的核苷酸序列具有如SEQ ID NO:19所示的核苷酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子还包含，能够编码抗体轻链恒定区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述轻链恒定区具有如SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。在某些优选的实施方案中，所述能够编码抗体轻链恒定区的核苷酸序列具有如SEQ ID NO:20所示的核苷酸序列。
在另一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其编码如上文所定义的本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本发明提供了一种载体，其包含如上文所定义的分离的核酸分子。本发明的载体可以是克隆载体，也可以是表达载体。在某些优选的实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体等等。
在另一个方面，还提供了包含本发明的分离的核酸分子或载体的宿主细胞。此类宿主细胞包括但不限于，原核细胞例如大肠杆菌细胞，以及真核细胞例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。本发明的细胞还可以是细胞系，例如 HEK293细胞。
在另一个方面，还提供了制备本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在合适的条件下培养本发明的宿主细胞，和从细胞培养物中回收本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，本发明提供了一种组合物，其包含如上文所描述的单克隆抗体或其抗原结合片段、分离的核酸分子、载体或宿主细胞。
在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记。在某些优选的实施方案中，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。优选地，所述第二抗体还包括可检测的标记。此类可检测的标记是本领域技术人员熟知的，包括但不限于，放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶(例如辣根过氧化物酶)等。
在另一个方面，本发明提供了检测新型冠状病毒或其S蛋白或S蛋白的RBD在样品中的存在或其水平的方法，其包括，使用本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方法还包括，使用携带可检测的标记的第二抗体来检测本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。所述方法可以用于诊断目的(例如，所述样品是来自患者的样品)，或者非诊断目的(例如，所述样品是细胞样品，而非来自患者的样品)。
在另一个方面，本发明提供了诊断受试者是否感染了新型冠状病毒的方法，其包括：使用本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段检测新型冠状病毒或其S蛋白或S蛋白的RBD在来自所述受试者的样品中的存在。在某些优选的实施方案中，本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方法还包括，使用携带可检测的标记的第二抗体来检测本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面，提供了本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测新型冠状病毒或其S蛋白或S 蛋白的RBD在样品中的存在或其水平，或用于诊断受试者是否感染了新型冠状病毒。
在某些优选的实施方案中，所述样品包括但不限于来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的排泄物、口腔或鼻腔分泌物、肺泡灌洗液等。
在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体是这样的抗体，其包括：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的VH CDR1-3，和/或氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的VLCDR1-3；优选地，其包括：如SEQ ID NO:7所示的VH和/或如SEQ ID NO:8所示的VL。
使用抗体或其抗原结合片段来检测目标病毒或抗原(例如，新型冠状病毒或其S蛋白或S蛋白的RBD)在样品中的存在或其水平的一般方法是本领域技术人员所熟知的。在某些优选的实施方案中，所述检测方法可以使用酶联免疫吸附(ELISA)、酶免疫检测、化学发光免疫检测、放射免疫检测、荧光免疫检测、免疫色谱法、竞争法及类似检测方法。
在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体包括：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的VH CDR1-3，和/或氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的VL CDR1-3；优选地，所述单克隆抗体包括：如SEQ ID NO:7所示的VH和/或如SEQ ID NO:8所示的VL。
在另一个方面，本发明提供了用于中和样品中新型冠状病毒的毒力的方法，其包括，将包含新型冠状病毒的样品与本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段接触。此类方法可以用于治疗目的，或非治疗目的(例如所述样品是细胞样品，而不是患者或来自患者的样品)。
在另一个方面，提供了本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段用于制备药物的用途，所述药物用于中和样品中新型冠状病毒的毒力。在另一个方面，本发明提供了如上文所描述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其用于中和样品中新型冠状病毒的毒力。
在另一个方面，提供了本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于预防或治疗受试者的新型冠状病毒感染或与新型冠状病毒感染相关的疾病(例如新型冠状病毒肺炎)。在另一个方面，本发明提供了如上文所描述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其用于预防或治疗受试者的新型冠状病毒感染或与新型冠状病毒感染相关的疾病(例如新型冠状病毒肺炎)。
在另一个方面，本发明提供了用于预防或治疗受试者的新型冠状病毒感染或新型冠状病毒感染相关的疾病(例如新型冠状病毒肺炎)的方法，其包括，给有此需要的受试者施用预防或治疗有效量的本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段，或者本发明的药物组合物。
在某些优选的实施方案中，所述受试者是哺乳动物，例如人。
可通过任何适当的施用途径来将本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段或者本发明的药物组合物施用给受试者。此类施用途径包括但不限于，口服、口腔、舌下、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、或鼻腔途径。
在某些优选的实施方案中，所述单克隆抗体是这样的抗体，其包括：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的VH CDR1-3，和/或氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的VLCDR1-3；优选地，其包括：如SEQ ID NO:7所示的VH和/或如SEQ ID NO:8所示的VL。
本发明所提供的药物和药物组合物可以单独使用或联合使用，也可以与其他药学活性剂(例如抗病毒药物，如法匹拉韦、瑞德西韦和干扰素等)联合使用。在某些优选的实施方案中，所述药物组合物还含药学上可接受的载体和/或赋形剂。
序列信息
本申请所涉及的部分序列的信息如下面的表1所示。
表1.部分序列的信息
Figure RE-GDA0002589462810000121
Figure RE-GDA0002589462810000131
有益效果
本申请的单克隆抗体(例如BD23抗体)能够以高亲和力与新型冠状病毒S蛋白结合，并且对新型冠状病毒具有很强的中和活性。因此，本申请的单克隆抗体(例如BD23抗体)具有诊断、预防和治疗新型冠状病毒感染的临床应用价值。
附图说明
图1显示了重组表达的BD23抗体的SDS-PAGE检测结果，其中，“NR”表示非还原性SDS-PAGE；“R”表示还原性SDS-PAGE。图1的结果显示，在非还原性SDS-PAGE条件下，形成了约190.88KDa的单一条带；在还原性SDS-PAGE条件下，形成了约47.75KDa和25.70KDa的两个条带(分别对应于抗体的重链和轻链)；并且，所纯化的BD23抗体的纯度为97.7％。
图2显示了使用微量热泳动仪检测BD23抗体与S蛋白的亲和力的测定结果。
图3显示了BD23抗体对SARS-CoV-2假病毒的中和抑制活性的测定结果。
图4显示了BD23抗体对SARS-CoV-2真病毒的中和抑制活性的测定结果。
具体实施方式
现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。
除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照J.Sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及F.M.Ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，John Wiley&Sons,Inc.，1995中所述的方法进行；限制性内切酶的使用依照产品制造商推荐的条件。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。
实施例1：记忆B细胞的分离
采集感染SARS-CoV-2病毒且痊愈出院的人员的血液(由北京佑安医院提供)，并在P2+生物安全实验室中，利用STEMCELL SepMateTM-15 (Stemcell Technologies，产品目录号：86415)进行PBMCs的提取。随后，根据制造商的说明书，使用STEMCELL EasySep HumanMemory B Cell Isolation Kit(Stemcell Technologies，产品目录号：17864)对提取的PBMCs进行记忆B细胞的富集。
实施例2：抗体序列的获得与鉴定
根据制造商的说明书，使用Chromium Single Cell V(D)J Reagent Kits(购自10X genomics，产品目录号：100006)对上述富集后的记忆 B细胞进行单细胞转录组的VDJ测序。对测序结果进行分析，获得一株抗体，命名为BD23。BD23抗体的序列信息如下：
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示(其编码基因如SEQ ID NO:17所示)，其中，重链可变区的CDR1-3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1-3所示(其编码基因分别如SEQ ID NO:11-13所示)；
轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示(其编码基因如SEQ ID NO:18所示)，其中，轻链可变区的CDR1-3的氨基酸序列如SEQ ID NO: 4-6所示(其编码基因分别如SEQ ID NO:14-16所示)；
重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示(其编码基因如SEQ ID NO:19所示)；
轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示(其编码基因如SEQ ID NO:20所示)。
实施例3：抗体BD23的制备和纯化
根据实施例2中鉴定的BD23抗体的序列信息，委托北京义翘神州有限公司表达和纯化BD23抗体，并检测BD23抗体的抗原反应性。
简言之，在体外合成编码抗体重链和轻链的核酸分子，然后分别克隆至表达载体中，从而得到分别编码抗体重链和轻链的重组表达载体。将上述得到的分别编码抗体重链和轻链的重组表达载体共转染HEK293 细胞。转染4-6小时后，将细胞培养液更换成无血清的培养基，并且继续在37℃下培养6天。培养结束后，通过亲和纯化柱从培养物中纯化细胞所表达的抗体蛋白。随后，通过还原性和非还原性SDS-PAGE检测所纯化的目的蛋白。结果如图1所示。图1的结果显示，获得了经纯化的BD23 抗体，其纯度为97.7％。
随后，使用重组表达的S蛋白RBD作为包被抗原，使用辣根过氧化物酶(HRP)标记的Goat anti-human IgG Fc作为二抗，通过ELISA实验，检测经纯化的BD23抗体的抗原反应性。简言之，用重组表达的S蛋白RBD(其氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，浓度为0.01μg/ml或1 μg/ml)包被96孔板，随后用封闭液对96孔板进行封闭。然后，分别加入待测单抗(无关对照抗体或BD23抗体；浓度为0.1μg/ml)，并孵育。用ELISA洗涤液进行洗涤后，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的 Goat anti-human IgG Fc作为二抗(以1:500稀释)，并继续孵育。然后，用PBST洗涤酶标板，并加入显色剂显色。随后在酶标仪上读取OD450 nm的吸收值。结果如表2所示。表2的结果显示，BD23抗体能够特异性识别并结合S蛋白RBD。
表2：通过ELISA检测的BD23抗体与S蛋白RBD的反应性(OD450 读数)
Figure RE-GDA0002589462810000161
实施例4：抗体BD23与S蛋白的结合能力的评估
本实施例采用高灵敏型微量热泳动分子互作分析系统，检测抗体 BD23与S蛋白的结合能力，所述分析系统能够直接在溶液中简单、快速、精确地定量分析生物分子相互作用的亲和力。
(1)用Cy5荧光染料标记带有组氨酸标签(his-tag)的S蛋白
根据制造商的说明书，使用Monolith His-tag标记试剂盒(Cat# MO-L018)，将重组表达的带有His-tag的S蛋白(其氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示)标记上Cy5荧光染料。简言之，使用1x PBS-T buffer，将Cy5荧光染料稀释至100nM。然后，取90μL带有His-tag的S蛋白 (浓度为200nM)，与90μL经稀释的染料(100nM)混匀，并在室温孵育 30分钟。随后，将经孵育的样品于4℃，以15000g离心10分钟。收集上清至新的管中，备用。
(2)检测抗体BD23与S蛋白结合的亲和力
根据制造商的说明书，使用微量热泳动仪(MO NT.115PICO)，检测BD23抗体与S蛋白的亲和力。具体步骤如下：
a.将抗体BD23连续倍比稀释(共计16个浓度)，稀释的起始浓度为1μM。稀释方式如下：准备16个PCR管，取10μl PBST buffer(PBS +0.005％Tween 20)加入2-16号PCR管；取20μl BD23抗体(浓度为 1μM)至1号管；然后，从1号管移液10μl到2号管，混匀；然后，从2号管移液10μl到3号管，混匀；顺次操作，最后从16号管取10 μl混匀液体，丢弃。
b.向每个PCR管(1-16号管)中加入10μl荧光分子(步骤(1) 中制备的标记有Cy5荧光染料的S蛋白)，混匀。
c.室温放置5分钟，然后使用毛细管(cat#MO-K025)将样品加载至微量热泳动仪。
d.使用Binding affinity模式，在微量热泳动仪中测量抗体BD23 与S蛋白相互作用的Kd值。
测量结果如图2所示。结果显示，BD23抗体与S蛋白相互作用的Kd 为4.344nM。这表明，BD23抗体与新型冠状病毒S蛋白具有极强的亲和力。
实施例5：BD23抗体中和SARS-CoV-2假病毒的能力的评估
在本实施例中，参照Temperton N J等人,Emerg Infect Dis,2005, 11(3),411-416的描述，利用微孔细胞中和实验法，检测单抗BD23对 SARS-CoV-2假病毒的中和活性。本实施例所应用的SARS-CoV-2假病毒由中国食品药品检定研究院提供，其具有与真病毒相似的细胞感染特点，能够模拟真病毒感染细胞的早期过程，并且携带报告基因luciferase,可以快速方便地进行检测分析。操作假病毒的安全性高，在P2级实验室内就可完成中和实验，检测抗体的中和活性(Neutralization titer)。
实验方法的具体步骤如下。
1.平衡试剂
将保存于2-8℃的试剂(0.25％胰酶-EDTA，DMEM完全培养基)取出，室温平衡30分钟以上。
2.试验操作
(1)取96孔板，按照表3所示，设置样品的排布方式；其中，A2-H2 的孔设置为细胞对照孔(CC)，其仅含有实验细胞；A3-H3的孔设置为病毒对照孔(VV)，其含有实验细胞和假病毒；A4-A11、B4-B11、C4-C11、 D4-D11、E4-E11、F4-F11、G4-G11、H4-H11的孔设置为实验孔，其含有实验细胞、假病毒以及不同浓度的待测抗体；其余的孔设置为空白。本实施例中所使用的实验细胞和假病毒分别为Huh-7细胞和SARS-CoV-2病毒(均由中国食品药品检定研究院提供)。
表3. 96孔板中样品的排布方式
Figure RE-GDA0002589462810000181
Figure RE-GDA0002589462810000191
(2)在细胞对照孔中加入100μl/孔的DMEM完全培养基(含有1％的抗生素，25mMHEPES，10％FBS)；在病毒对照孔中加入100μl/孔的DMEM 完全培养基；并且，在实验孔中加入50μl/孔的指定浓度的、稀释于DMEM 完全培养基中的待测抗体。表3中所使用的稀释度1-8的抗体浓度分别为1/30μg/μl,1/90μg/μl,1/270μg/μl,1/810μg/μl,1/2430μg/μl, 1/7290μg/μl,1/21870μg/μl,1/65610μg/μl。
(3)用DMEM完全培养基将SARS-CoV-2假病毒稀释至约1.3×104/ml (TCID50)；然后向病毒对照孔和实验孔中添加50μl/孔的SARS-CoV-2假病毒。
(4)将96孔板置于细胞培养箱中(37℃，5％CO2)孵育1小时。
(5)用DMEM完全培养基将预先培养好的Huh-7细胞稀释至2×105个 /ml。在前一步骤的孵育结束后，向细胞对照孔、病毒对照孔和实验孔中添加100μl/孔的细胞。
(6)将96孔板置于细胞培养箱中(37℃，5％CO2)培养20-28小时。
(7)从细胞培养箱中取出96孔板，从每个孔中吸弃150μl上清，然后加入100μl荧光素酶检测试剂，室温避光反应2min。
(8)反应结束后，用移液器将各个孔中的液体反复吹吸6～8次，使细胞充分裂解。然后，从每孔中吸出150μl液体，转移至对应的96孔化学发光检测板中，用化学发光检测仪(Perkinelmer EnSight多功能酶标仪)读取发光值。
(9)计算中和抑制率：
抑制率＝[1－(实验孔的发光强度均值－CC孔的发光强度均值)/ (VV孔的发光强度均值－CC孔的发光强度均值)]×100％。
(10)根据中和抑制率的结果，利用Reed-Muench法计算待测抗体的IC50。
实验结果如图3所示。结果显示，单抗BD23对SARS-CoV-2假病毒具有良好的中和活性，其IC50为8.78nM(即1.317μg/ml)。
实施例6：BD23抗体中和SARS-CoV-2真病毒的能力的评估
在本实施例中，所使用的SARS-CoV-2病毒由军事医学研究院提供，其滴度(TCID50)为105/ml，并且，所有实验操作均在BSL-3实验室内完成。中和实验方法的具体步骤如下。
(1)以5×104/ml的浓度，向96孔培养板的每孔中加入100μl Vero E6 细胞，并在37℃，5％CO2的条件下培养24小时。
(2)将待测抗体稀释成3个浓度：为50μg/ml；10μg/ml；2μg/ml。取100μl指定浓度的待测抗体，加入等体积的SARS-CoV-2真病毒(100 TCID50)，并在37℃，5％CO2的条件下孵育1h。
(3)在步骤(1)的培养结束后，弃去96孔培养板中的细胞培养液，加入步骤(2)制备的含有待测抗体和真病毒的混合液(200μl)，作为实验组。孵育1h后，从孔中吸出上清，每孔加入200μl DMEM培养基(含有 2％抗生素和16μg/ml胰蛋白酶)。
在实验过程中，平行设置细胞对照组和病毒对照组。在细胞对照组 (4个复孔)中，弃去孔中的细胞培养液后，每孔添加200μl DMEM培养基(含有2％抗生素和16μg/ml胰蛋白酶)。在病毒对照组(4个复孔)中，弃去孔中的细胞培养液后，每孔添加100TCID50的真病毒(100μl)，并在37℃孵育1h；孵育结束后，从孔中吸出上清，每孔加入200μl DMEM 培养基(含有2％抗生素和16μg/ml胰蛋白酶)。
(4)在37℃，5％CO2的条件下培养细胞4-5天。
(5)在光学显微镜下观察细胞病变(CPE)，并根据细胞病变情况，评估不同浓度的单抗BD23对CPE的抑制活性。
实验结果如图4所示。结果显示，单抗BD23对SARS-CoV-2真病毒具有良好的中和活性，能够有效抑制病毒感染和侵入细胞(IC50为20.4 μg/ml)。在50μg/ml的浓度下，单抗BD23对SARS-CoV-2真病毒的抑制率为大约70％。
序列表
<110> 北京大学
<120> 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
<130> IDC200087
<160> 22
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Ala
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 2
Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro
1 5
<210> 3
<211> 19
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Ala Arg Pro Gln Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 4
<211> 6
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 4
Gln Ser Ile Ser Ser Trp
1 5
<210> 5
<211> 3
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Lys Ala Ser
1
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 7
<211> 126
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gln Gly Phe
50 55 60
Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Gln Gly Gly Ser Ser Trp Tyr Arg Asp Tyr Tyr Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 10
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 11
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
ggctacacct tcacctccta tgct 24
<210> 12
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
ataaacacca acacaggcaa ccca 24
<210> 13
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
gccagaccac agggaggctc ctcctggtac agggactact actatgggat ggatgtg 57
<210> 14
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 14
cagagcatct cctcctgg 18
<210> 15
<211> 9
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 15
aaggcatcc 9
<210> 16
<211> 27
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
caacaataca actcctaccc atacacc 27
<210> 17
<211> 378
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
caggtccaac ttgtccagtc tggctctgaa ctgaaaaagc ctggagcctc tgtgaaggtg 60
tcctgtaagg catctggcta caccttcacc tcctatgcta tgaactgggt gagacaggct 120
cctggacaag gattggagtg gatgggctgg ataaacacca acacaggcaa cccaacctat 180
gcccagggct tcacaggcag gtttgtgttc tccctggaca cctctgtgag cacagcctac 240
ctccaaatct cctccctgaa agcagaggac acagcagtct actactgtgc cagaccacag 300
ggaggctcct cctggtacag ggactactac tatgggatgg atgtgtgggg acaaggcacc 360
acagtgacag tgtcctct 378
<210> 18
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 18
gacatccaga tgacccagag cccaagcacc ctgtctgcct ctgtgggaga cagggtgacc 60
atcacttgta gggcaagcca gagcatctcc tcctggctgg cttggtatca acagaagcct 120
ggcaaggctc caaaactgct gatttacaag gcatcctcct tggagtctgg agtgccaagc 180
aggttctctg gctctggctc tggcacagag ttcaccctga ccatctcctc cctccaacct 240
gatgactttg ccacctacta ctgtcaacaa tacaactcct acccatacac ctttggacaa 300
ggcaccaaat tggagattaa g 321
<210> 19
<211> 990
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 19
gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420
gaggtcacgt gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcaa gttcaactgg 480
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 540
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 720
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 990
<210> 20
<211> 321
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 20
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaaca ggggagagtg t 321
<210> 21
<211> 223
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> coronavirus S蛋白RBD
<400> 21
Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn
1 5 10 15
Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser
35 40 45
Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val
50 55 60
Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln
85 90 95
Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr
100 105 110
Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly
115 120 125
Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys
130 135 140
Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr
145 150 155 160
Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser
165 170 175
Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val
180 185 190
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly
195 200 205
Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe
210 215 220
<210> 22
<211> 1273
<212> PRT
<213> artificial
<220>
<223> coronavirus S蛋白
<400> 22
Met Phe Val Phe Leu Val Leu Leu Pro Leu Val Ser Ser Gln Cys Val
1 5 10 15
Asn Leu Thr Thr Arg Thr Gln Leu Pro Pro Ala Tyr Thr Asn Ser Phe
20 25 30
Thr Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Lys Val Phe Arg Ser Ser Val Leu
35 40 45
His Ser Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Phe Ser Asn Val Thr Trp
50 55 60
Phe His Ala Ile His Val Ser Gly Thr Asn Gly Thr Lys Arg Phe Asp
65 70 75 80
Asn Pro Val Leu Pro Phe Asn Asp Gly Val Tyr Phe Ala Ser Thr Glu
85 90 95
Lys Ser Asn Ile Ile Arg Gly Trp Ile Phe Gly Thr Thr Leu Asp Ser
100 105 110
Lys Thr Gln Ser Leu Leu Ile Val Asn Asn Ala Thr Asn Val Val Ile
115 120 125
Lys Val Cys Glu Phe Gln Phe Cys Asn Asp Pro Phe Leu Gly Val Tyr
130 135 140
Tyr His Lys Asn Asn Lys Ser Trp Met Glu Ser Glu Phe Arg Val Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Ala Asn Asn Cys Thr Phe Glu Tyr Val Ser Gln Pro Phe Leu
165 170 175
Met Asp Leu Glu Gly Lys Gln Gly Asn Phe Lys Asn Leu Arg Glu Phe
180 185 190
Val Phe Lys Asn Ile Asp Gly Tyr Phe Lys Ile Tyr Ser Lys His Thr
195 200 205
Pro Ile Asn Leu Val Arg Asp Leu Pro Gln Gly Phe Ser Ala Leu Glu
210 215 220
Pro Leu Val Asp Leu Pro Ile Gly Ile Asn Ile Thr Arg Phe Gln Thr
225 230 235 240
Leu Leu Ala Leu His Arg Ser Tyr Leu Thr Pro Gly Asp Ser Ser Ser
245 250 255
Gly Trp Thr Ala Gly Ala Ala Ala Tyr Tyr Val Gly Tyr Leu Gln Pro
260 265 270
Arg Thr Phe Leu Leu Lys Tyr Asn Glu Asn Gly Thr Ile Thr Asp Ala
275 280 285
Val Asp Cys Ala Leu Asp Pro Leu Ser Glu Thr Lys Cys Thr Leu Lys
290 295 300
Ser Phe Thr Val Glu Lys Gly Ile Tyr Gln Thr Ser Asn Phe Arg Val
305 310 315 320
Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys
325 330 335
Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala
340 345 350
Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu
355 360 365
Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro
370 375 380
Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe
385 390 395 400
Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly
405 410 415
Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys
420 425 430
Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn
435 440 445
Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe
450 455 460
Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys
465 470 475 480
Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly
485 490 495
Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val
500 505 510
Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys
515 520 525
Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Cys Val Asn Phe Asn Phe Asn
530 535 540
Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Glu Ser Asn Lys Lys Phe Leu
545 550 555 560
Pro Phe Gln Gln Phe Gly Arg Asp Ile Ala Asp Thr Thr Asp Ala Val
565 570 575
Arg Asp Pro Gln Thr Leu Glu Ile Leu Asp Ile Thr Pro Cys Ser Phe
580 585 590
Gly Gly Val Ser Val Ile Thr Pro Gly Thr Asn Thr Ser Asn Gln Val
595 600 605
Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Glu Val Pro Val Ala Ile
610 615 620
His Ala Asp Gln Leu Thr Pro Thr Trp Arg Val Tyr Ser Thr Gly Ser
625 630 635 640
Asn Val Phe Gln Thr Arg Ala Gly Cys Leu Ile Gly Ala Glu His Val
645 650 655
Asn Asn Ser Tyr Glu Cys Asp Ile Pro Ile Gly Ala Gly Ile Cys Ala
660 665 670
Ser Tyr Gln Thr Gln Thr Asn Ser Pro Arg Arg Ala Arg Ser Val Ala
675 680 685
Ser Gln Ser Ile Ile Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Glu Asn Ser
690 695 700
Val Ala Tyr Ser Asn Asn Ser Ile Ala Ile Pro Thr Asn Phe Thr Ile
705 710 715 720
Ser Val Thr Thr Glu Ile Leu Pro Val Ser Met Thr Lys Thr Ser Val
725 730 735
Asp Cys Thr Met Tyr Ile Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ser Asn Leu
740 745 750
Leu Leu Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Thr
755 760 765
Gly Ile Ala Val Glu Gln Asp Lys Asn Thr Gln Glu Val Phe Ala Gln
770 775 780
Val Lys Gln Ile Tyr Lys Thr Pro Pro Ile Lys Asp Phe Gly Gly Phe
785 790 795 800
Asn Phe Ser Gln Ile Leu Pro Asp Pro Ser Lys Pro Ser Lys Arg Ser
805 810 815
Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly
820 825 830
Phe Ile Lys Gln Tyr Gly Asp Cys Leu Gly Asp Ile Ala Ala Arg Asp
835 840 845
Leu Ile Cys Ala Gln Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu
850 855 860
Leu Thr Asp Glu Met Ile Ala Gln Tyr Thr Ser Ala Leu Leu Ala Gly
865 870 875 880
Thr Ile Thr Ser Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gln Ile
885 890 895
Pro Phe Ala Met Gln Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly Ile Gly Val Thr
900 905 910
Gln Asn Val Leu Tyr Glu Asn Gln Lys Leu Ile Ala Asn Gln Phe Asn
915 920 925
Ser Ala Ile Gly Lys Ile Gln Asp Ser Leu Ser Ser Thr Ala Ser Ala
930 935 940
Leu Gly Lys Leu Gln Asp Val Val Asn Gln Asn Ala Gln Ala Leu Asn
945 950 955 960
Thr Leu Val Lys Gln Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala Ile Ser Ser Val
965 970 975
Leu Asn Asp Ile Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln
980 985 990
Ile Asp Arg Leu Ile Thr Gly Arg Leu Gln Ser Leu Gln Thr Tyr Val
995 1000 1005
Thr Gln Gln Leu Ile Arg Ala Ala Glu Ile Arg Ala Ser Ala Asn
1010 1015 1020
Leu Ala Ala Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly Gln Ser Lys
1025 1030 1035
Arg Val Asp Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro
1040 1045 1050
Gln Ser Ala Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val
1055 1060 1065
Pro Ala Gln Glu Lys Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala Ile Cys His
1070 1075 1080
Asp Gly Lys Ala His Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Ser Asn
1085 1090 1095
Gly Thr His Trp Phe Val Thr Gln Arg Asn Phe Tyr Glu Pro Gln
1100 1105 1110
Ile Ile Thr Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val
1115 1120 1125
Val Ile Gly Ile Val Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu Gln Pro
1130 1135 1140
Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn
1145 1150 1155
His Thr Ser Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp Ile Ser Gly Ile Asn
1160 1165 1170
Ala Ser Val Val Asn Ile Gln Lys Glu Ile Asp Arg Leu Asn Glu
1175 1180 1185
Val Ala Lys Asn Leu Asn Glu Ser Leu Ile Asp Leu Gln Glu Leu
1190 1195 1200
Gly Lys Tyr Glu Gln Tyr Ile Lys Trp Pro Trp Tyr Ile Trp Leu
1205 1210 1215
Gly Phe Ile Ala Gly Leu Ile Ala Ile Val Met Val Thr Ile Met
1220 1225 1230
Leu Cys Cys Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Cys Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Gly Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro
1250 1255 1260
Val Leu Lys Gly Val Lys Leu His Tyr Thr
1265 1270

Claims (14)

1.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的重链可变区(VH)互补决定区1-3(CDR1-3)；和/或，氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的轻链可变区(VL)互补决定区1-3(CDR1-3)；
优选地，所述的单克隆抗体包括，如SEQ ID NO:7所示的重链可变区(VH)，和/或，如SEQID NO:8所示的轻链可变区(VL)；
优选地，所述的单克隆抗体包含：氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1-3所示的VH CDR1-3，和氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4-6所示的VL CDR1-3；
优选地，所述的单克隆抗体包括：如SEQ ID NO:7所示的VH和如SEQ ID NO:8所示的VL；
优选地，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体(例如，scFv)、人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体；
优选地，所述的单克隆抗体还包括重链恒定区；优选地，所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；
优选地，所述的单克隆抗体还包括轻链恒定区；优选地，所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
2.分离的核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中，所述抗体重链可变区包含：氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1-3的VH CDR1-3；
例如，所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO:11-13所示的核苷酸序列；
例如，所述抗体重链可变区具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
例如，所述核酸分子具有如SEQ ID NO:17所示的核苷酸序列。
3.分离的核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含：氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4-6的VL CDR1-3；
例如，所述分离的核酸分子包含SEQ ID NO:14-16所示的核苷酸序列；
例如，所述抗体轻链可变区具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；
例如，所述核酸分子具有如SEQ ID NO:18所示的核苷酸序列。
4.分离的核酸分子，其编码权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段。
5.一种载体，其包含权利要求2-4任一项的分离的核酸分子。
6.一种宿主细胞，其包含权利要求2-4任一项的分离的核酸分子或权利要求5的载体。
7.制备权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在合适的条件下培养权利要求6的宿主细胞，和从细胞培养物中回收所述单克隆抗体或其抗原结合片段。
8.一种组合物，其包含权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段，权利要求2-4任一项的分离的核酸分子，权利要求5的载体，权利要求6的宿主细胞。
9.试剂盒，其包括权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段；
例如，所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶；
例如，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述单克隆抗体或其抗原结合片段；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶。
10.用于检测新型冠状病毒或其S蛋白或S蛋白的RBD在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段；
例如，所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包括可检测的标记，例如放射性同位素，荧光物质，化学发光物质，有色物质和酶；
例如，所述方法还包括，使用携带可检测的标记(例如放射性同位素，荧光物质，发光物质，有色物质和酶)的第二抗体来检测所述单克隆抗体或其抗原结合片段。
11.权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测新型冠状病毒或其S蛋白或S蛋白的RBD在样品中的存在或其水平，或用于诊断受试者是否感染了新型冠状病毒；
优选地，所述样品为来自受试者(例如哺乳动物，优选人)的排泄物、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液。
12.一种药物组合物，其包含权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂；
优选地，所述药物组合物还包含其他药学活性剂，例如法匹拉韦，瑞德西韦，干扰素等。
13.用于中和样品中的新型冠状病毒的毒力的方法，其包括，将包含新型冠状病毒的样品与权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段接触。
14.权利要求1的单克隆抗体或其抗原结合片段用于制备药物的用途，所述药物用于中和样品中新型冠状病毒的毒力，或用于预防或治疗受试者的新型冠状病毒感染或与新型冠状病毒感染相关的疾病(例如新型冠状病毒肺炎)；
优选地，所述受试者是哺乳动物，例如人；
优选地，所述药物单独使用，或与其他药学活性剂(例如法匹拉韦，瑞德西韦，干扰素等)联合使用。
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Cited By (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111995674A (zh) * 2020-09-03 2020-11-27 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗COVID-19病毒中和抗体mhC3及其人源化抗体与应用
CN111995676A (zh) * 2020-05-15 2020-11-27 潍坊医学院 一种针对新冠病毒棘突蛋白非rbd区的单克隆抗体及其应用
CN112125973A (zh) * 2020-09-30 2020-12-25 上海市公共卫生临床中心 冠状病毒的特异性抗体或其抗原结合片段
CN112159469A (zh) * 2020-09-30 2021-01-01 上海市公共卫生临床中心 冠状病毒的抗体或其抗原结合片段
CN112225806A (zh) * 2020-11-13 2021-01-15 李亚峰 一种人源抗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的中和活性单克隆抗体
CN112341541A (zh) * 2020-11-23 2021-02-09 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 人源抗新冠病毒中和性抗体nCoV-163及其应用
CN112430265A (zh) * 2020-11-23 2021-03-02 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 人源抗新冠病毒中和性抗体nCoV-61及其应用
CN112500481A (zh) * 2020-11-29 2021-03-16 山西省人民医院 一种人源抗新型冠状病毒的中和活性单克隆抗体
CN112574299A (zh) * 2020-11-25 2021-03-30 苏州方科生物科技有限公司 新型冠状病毒特异性抗原肽的人源抗体、制备方法及用途
CN112625125A (zh) * 2021-01-18 2021-04-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一株中和新型冠状病毒感染的单抗
CN112661841A (zh) * 2020-12-04 2021-04-16 广州市第八人民医院 一种中和新冠病毒新表位的全人单克隆抗体17-2及其应用
CN112782401A (zh) * 2021-02-08 2021-05-11 聊城大学 一种体外快速检测新型冠状病毒的方法及应用
CN112794899A (zh) * 2021-03-16 2021-05-14 易康生物(苏州)有限公司 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆中和抗体及其应用
CN112794898A (zh) * 2021-03-16 2021-05-14 易康生物(苏州)有限公司 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其应用
CN112876568A (zh) * 2021-01-11 2021-06-01 上海勇鉴生物科技有限公司 一种可组装蛋白原件及其用途
CN112979795A (zh) * 2021-02-26 2021-06-18 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用
CN113045647A (zh) * 2021-03-22 2021-06-29 南京传奇生物科技有限公司 新冠病毒SARS-CoV-2的中和性抗体及其应用
CN113150129A (zh) * 2021-01-28 2021-07-23 四川大学华西医院 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S2蛋白的单链抗体及其应用
CN113150135A (zh) * 2021-04-14 2021-07-23 中山大学 抗新型冠状病毒受体结合区域中和抗体及其应用
CN113264998A (zh) * 2021-01-28 2021-08-17 四川大学华西医院 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用
WO2021163265A1 (en) * 2020-02-11 2021-08-19 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov- 2)
CN113388030A (zh) * 2021-08-17 2021-09-14 上海浙江大学高等研究院 单克隆抗体32c7及其制备方法和用途
WO2021180218A1 (zh) * 2020-03-13 2021-09-16 北京大学 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
WO2021194951A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 2dd8
WO2021194886A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 3bgf
WO2021194965A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Superhuman anti-sars-cov-2 antibodies and uses thereof
WO2021194891A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from cr3022
WO2021194896A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 2ghw
WO2021194985A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 6nb6
CN113484522A (zh) * 2021-06-03 2021-10-08 上海捷诺生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒及其制备方法
CN113501872A (zh) * 2021-06-22 2021-10-15 中国医学科学院病原生物学研究所 人源抗新型冠状病毒SARS-CoV-2中和性抗体SK1及其应用
CN113512114A (zh) * 2021-08-09 2021-10-19 北京大学 针对SARS-CoV-2突变株的抗体及其用途
CN113563463A (zh) * 2021-06-11 2021-10-29 中国医学科学院病原生物学研究所 一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的中和纳米抗体及其应用
WO2021218947A1 (zh) * 2020-04-28 2021-11-04 北京大学 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
CN113671184A (zh) * 2020-11-11 2021-11-19 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂盒及方法
CN113912709A (zh) * 2021-09-28 2022-01-11 深圳国家感染性疾病临床医学研究中心 新型冠状病毒单克隆抗体及其应用
CN113943368A (zh) * 2021-10-15 2022-01-18 中国科学院微生物研究所 一种新型冠状病毒及其突变体的单克隆抗体及其应用
WO2022048624A1 (en) * 2020-09-03 2022-03-10 Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. Antibodies against receptor binding domain of sars-cov-2 spike protein and uses thereof
WO2022048625A1 (en) * 2020-09-04 2022-03-10 Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. Multispecific antibodies targetting sars-cov-2 spike protein and uses thereof
CN114181301A (zh) * 2020-09-14 2022-03-15 复旦大学 针对SARS-CoV-2的无ADE效应的中和抗体
WO2022053056A1 (en) * 2020-09-14 2022-03-17 Vazyme Biotech Co., Ltd. Neutralizing antibodies against sars-cov-2
WO2022053054A1 (en) * 2020-09-14 2022-03-17 Vazyme Biotech Co., Ltd. Neutralizing antibodies against sars-cov-2
WO2022052968A1 (zh) * 2020-09-09 2022-03-17 信达生物制药(苏州)有限公司 针对冠状病毒刺突蛋白的单克隆抗体及其用途
AU2021209287B1 (en) * 2021-01-19 2022-03-24 Newsoara Biopharma Co., Ltd. Expression Vector for Anti-Sars-Cov-2 Neutralizing Antibodies
WO2022062803A1 (en) * 2020-09-24 2022-03-31 The University Of Hong Kong Neutralizing antibodies against covid-19 and methods of use thereof
WO2022068895A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07 南京金斯瑞生物科技有限公司 抗SARS-CoV-2刺突蛋白膜外区的单克隆抗体及其应用
CN114316040A (zh) * 2022-03-02 2022-04-12 南昌大学 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其用途
CN114426574A (zh) * 2020-10-29 2022-05-03 中国科学院武汉病毒研究所 新型冠状病毒中和性人源单克隆抗体及其应用
WO2022089045A1 (zh) * 2020-10-29 2022-05-05 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体和检测新型冠状病毒的试剂盒
CN114456259A (zh) * 2020-11-07 2022-05-10 上海科技大学 一种抗新冠病毒的抗体及其制备方法和应用
WO2022098173A1 (ko) * 2020-11-06 2022-05-12 주식회사 녹십자 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적인 항체 및 이의 용도
WO2022105772A1 (zh) * 2020-11-18 2022-05-27 三优生物医药(上海)有限公司 针对冠状病毒具有中和活性的双特异性抗体及其用途
WO2022110962A1 (zh) * 2020-11-25 2022-06-02 苏州大学 抗严重急性呼吸系统综合征ii型冠状病毒sars-cov-2的中和抗体
CN114573690A (zh) * 2020-12-02 2022-06-03 深圳先进技术研究院 抗sar-cov-2全人源单克隆抗体及其制法与应用
CN114605527A (zh) * 2020-12-04 2022-06-10 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和用途
US11359007B2 (en) 2020-09-04 2022-06-14 Newsoara Biopharma Co., Ltd. Anti-SARS-CoV-2 neutralizing antibodies
WO2022136505A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Xenothera Composition of pig polyclonal antibody for its use to treat and/or prevent antibody-dependent macrophage pro-inflammatory cytokine release in a passive anti-infectious immunotherapy
WO2022161346A1 (en) * 2021-01-27 2022-08-04 Bioduro (Jiangsu) Co., Ltd. Antibody against sars-cov-2
WO2022161491A1 (zh) * 2021-01-29 2022-08-04 中国科学院上海巴斯德研究所 一种针对SARS-CoV-2病毒的中和性抗体
CN115028715A (zh) * 2022-06-23 2022-09-09 生工生物工程（上海）股份有限公司 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用
CN115177714A (zh) * 2021-02-04 2022-10-14 安域生物科技(杭州)有限公司 多靶点阻断肽在制备预防和治疗新冠病毒感染药物中的应用
WO2023002944A1 (ja) * 2021-07-19 2023-01-26 公立大学法人福島県立医科大学 新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）およびＳＡＲＳコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）に結合する抗体
CN115703829A (zh) * 2021-08-16 2023-02-17 厦门大学 针对SARS-CoV-2的单域抗体及其用途
CN115873103A (zh) * 2021-09-22 2023-03-31 东莞市朋志生物科技有限公司 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途
US11732030B2 (en) 2020-04-02 2023-08-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-SARS-CoV-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
WO2023190851A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 公立大学法人福島県立医科大学 新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に結合する抗体
WO2023190852A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 公立大学法人福島県立医科大学 新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に結合する抗体
WO2023246578A1 (zh) * 2022-06-24 2023-12-28 成都科伦精准生物科技有限公司 特异性结合gpc3的嵌合抗原受体及其应用
US11999777B2 (en) 2021-06-02 2024-06-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating or preventing SARS-CoV-2 infections and COVID-19 with anti-SARS-CoV-2 spike glycoprotein antibodies

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113735969B (zh) * 2021-09-20 2023-05-12 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种全人源抗新冠病毒广谱高中和活性单克隆抗体及应用
CN114044821B (zh) * 2022-01-10 2022-03-25 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种抗新冠病毒全人源广谱中和抗体zwc12及应用
CN115724955A (zh) * 2022-09-21 2023-03-03 武汉大学 靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体14B1及其应用
CN115960218B (zh) * 2022-09-30 2024-02-06 中国医学科学院病原生物学研究所 一种抗新型冠状病毒的抗体及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140206558A1 (en) * 2012-12-04 2014-07-24 Alexey Gennadievich Zdanovsky System for production of antibodies and their derivatives
CN104072592A (zh) * 2013-03-26 2014-10-01 复旦大学 对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染具有抑制作用的多肽及其应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109666070B (zh) * 2017-10-13 2021-02-19 清华大学 单克隆抗体mers-4v2及其编码基因和应用
CN111592594B (zh) * 2020-03-13 2022-05-10 北京大学 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140206558A1 (en) * 2012-12-04 2014-07-24 Alexey Gennadievich Zdanovsky System for production of antibodies and their derivatives
CN104072592A (zh) * 2013-03-26 2014-10-01 复旦大学 对新型冠状病毒HCoV-EMC 2012感染具有抑制作用的多肽及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SYED FARAZ AHMED,ET AL.: "Preliminary Identification of Potential Vaccine Targets for the COVID-19 Coronavirus (SARS-CoV-2) Based on SARS-CoV Immunological Studies", 《VIRUSES》 *
张茜等: "新型冠状病毒肺炎的抗体应对策略", 《南京医科大学学报（自然科学版）》 *

Cited By (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021163265A1 (en) * 2020-02-11 2021-08-19 Vanderbilt University Human monoclonal antibodies to severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov- 2)
WO2021180218A1 (zh) * 2020-03-13 2021-09-16 北京大学 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
WO2021194985A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 6nb6
WO2021194951A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 2dd8
WO2021194965A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Superhuman anti-sars-cov-2 antibodies and uses thereof
WO2021194891A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from cr3022
WO2021194896A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 2ghw
WO2021194886A1 (en) * 2020-03-23 2021-09-30 Centivax, Inc. Anti-sars-cov-2 antibodies derived from 3bgf
US11732030B2 (en) 2020-04-02 2023-08-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-SARS-CoV-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments
WO2021218947A1 (zh) * 2020-04-28 2021-11-04 北京大学 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用
CN111995676B (zh) * 2020-05-15 2021-03-09 潍坊医学院 一种针对新冠病毒棘突蛋白非rbd区的单克隆抗体及其应用
CN111995676A (zh) * 2020-05-15 2020-11-27 潍坊医学院 一种针对新冠病毒棘突蛋白非rbd区的单克隆抗体及其应用
CN111995674A (zh) * 2020-09-03 2020-11-27 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗COVID-19病毒中和抗体mhC3及其人源化抗体与应用
WO2022048624A1 (en) * 2020-09-03 2022-03-10 Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. Antibodies against receptor binding domain of sars-cov-2 spike protein and uses thereof
US11359007B2 (en) 2020-09-04 2022-06-14 Newsoara Biopharma Co., Ltd. Anti-SARS-CoV-2 neutralizing antibodies
WO2022048625A1 (en) * 2020-09-04 2022-03-10 Nanjing GenScript Biotech Co., Ltd. Multispecific antibodies targetting sars-cov-2 spike protein and uses thereof
WO2022052968A1 (zh) * 2020-09-09 2022-03-17 信达生物制药(苏州)有限公司 针对冠状病毒刺突蛋白的单克隆抗体及其用途
CN114181301B (zh) * 2020-09-14 2023-04-28 复旦大学 针对SARS-CoV-2的无ADE效应的中和抗体
WO2022053054A1 (en) * 2020-09-14 2022-03-17 Vazyme Biotech Co., Ltd. Neutralizing antibodies against sars-cov-2
WO2022053056A1 (en) * 2020-09-14 2022-03-17 Vazyme Biotech Co., Ltd. Neutralizing antibodies against sars-cov-2
CN114181301A (zh) * 2020-09-14 2022-03-15 复旦大学 针对SARS-CoV-2的无ADE效应的中和抗体
WO2022062803A1 (en) * 2020-09-24 2022-03-31 The University Of Hong Kong Neutralizing antibodies against covid-19 and methods of use thereof
WO2022068895A1 (zh) * 2020-09-30 2022-04-07 南京金斯瑞生物科技有限公司 抗SARS-CoV-2刺突蛋白膜外区的单克隆抗体及其应用
CN112159469A (zh) * 2020-09-30 2021-01-01 上海市公共卫生临床中心 冠状病毒的抗体或其抗原结合片段
CN112125973A (zh) * 2020-09-30 2020-12-25 上海市公共卫生临床中心 冠状病毒的特异性抗体或其抗原结合片段
CN112159469B (zh) * 2020-09-30 2022-08-02 上海市公共卫生临床中心 冠状病毒的抗体或其抗原结合片段
WO2022089045A1 (zh) * 2020-10-29 2022-05-05 东莞市朋志生物科技有限公司 抗新型冠状病毒的抗体和检测新型冠状病毒的试剂盒
CN114426574A (zh) * 2020-10-29 2022-05-03 中国科学院武汉病毒研究所 新型冠状病毒中和性人源单克隆抗体及其应用
WO2022098173A1 (ko) * 2020-11-06 2022-05-12 주식회사 녹십자 코로나바이러스 스파이크 단백질에 특이적인 항체 및 이의 용도
CN114456259B (zh) * 2020-11-07 2023-06-02 上海科技大学 一种抗新冠病毒的抗体及其制备方法和应用
CN114456259A (zh) * 2020-11-07 2022-05-10 上海科技大学 一种抗新冠病毒的抗体及其制备方法和应用
CN113671184B (zh) * 2020-11-11 2022-08-23 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂盒及方法
WO2022100303A1 (zh) * 2020-11-11 2022-05-19 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂盒及方法
CN113671184A (zh) * 2020-11-11 2021-11-19 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 一种检测SARS-CoV-2中和抗体的试剂盒及方法
CN112851804B (zh) * 2020-11-13 2023-03-28 林国生 一种人源抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的中和活性单克隆抗体
CN112851804A (zh) * 2020-11-13 2021-05-28 李亚峰 一种人源抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的中和活性单克隆抗体
CN112225806A (zh) * 2020-11-13 2021-01-15 李亚峰 一种人源抗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的中和活性单克隆抗体
WO2022105772A1 (zh) * 2020-11-18 2022-05-27 三优生物医药(上海)有限公司 针对冠状病毒具有中和活性的双特异性抗体及其用途
CN112430265A (zh) * 2020-11-23 2021-03-02 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 人源抗新冠病毒中和性抗体nCoV-61及其应用
CN112341541A (zh) * 2020-11-23 2021-02-09 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 人源抗新冠病毒中和性抗体nCoV-163及其应用
WO2022110962A1 (zh) * 2020-11-25 2022-06-02 苏州大学 抗严重急性呼吸系统综合征ii型冠状病毒sars-cov-2的中和抗体
CN112574299A (zh) * 2020-11-25 2021-03-30 苏州方科生物科技有限公司 新型冠状病毒特异性抗原肽的人源抗体、制备方法及用途
CN112500481B (zh) * 2020-11-29 2021-08-20 山西省人民医院 一种人源抗新型冠状病毒的中和活性单克隆抗体
CN112500481A (zh) * 2020-11-29 2021-03-16 山西省人民医院 一种人源抗新型冠状病毒的中和活性单克隆抗体
CN114573690A (zh) * 2020-12-02 2022-06-03 深圳先进技术研究院 抗sar-cov-2全人源单克隆抗体及其制法与应用
CN114573690B (zh) * 2020-12-02 2023-12-12 深圳先进技术研究院 抗sar-cov-2全人源单克隆抗体及其制法与应用
CN114605527A (zh) * 2020-12-04 2022-06-10 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心 一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和用途
CN112661841A (zh) * 2020-12-04 2021-04-16 广州市第八人民医院 一种中和新冠病毒新表位的全人单克隆抗体17-2及其应用
WO2022136505A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Xenothera Composition of pig polyclonal antibody for its use to treat and/or prevent antibody-dependent macrophage pro-inflammatory cytokine release in a passive anti-infectious immunotherapy
CN112876568A (zh) * 2021-01-11 2021-06-01 上海勇鉴生物科技有限公司 一种可组装蛋白原件及其用途
CN112625125A (zh) * 2021-01-18 2021-04-09 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一株中和新型冠状病毒感染的单抗
US11312760B1 (en) 2021-01-19 2022-04-26 Newsoara Biopharma Co., Ltd. Expression vector for anti-SARS-CoV-2 neutralizing antibodies
AU2021209287B1 (en) * 2021-01-19 2022-03-24 Newsoara Biopharma Co., Ltd. Expression Vector for Anti-Sars-Cov-2 Neutralizing Antibodies
CN115427441A (zh) * 2021-01-27 2022-12-02 保诺生物科技(江苏)有限公司 针对sars-cov-2的抗体
WO2022161346A1 (en) * 2021-01-27 2022-08-04 Bioduro (Jiangsu) Co., Ltd. Antibody against sars-cov-2
CN115427441B (zh) * 2021-01-27 2023-09-05 保诺生物科技(江苏)有限公司 针对sars-cov-2的抗体
CN113150129B (zh) * 2021-01-28 2023-02-28 四川大学华西医院 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S2蛋白的单链抗体及其应用
CN113264998A (zh) * 2021-01-28 2021-08-17 四川大学华西医院 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用
CN113150129A (zh) * 2021-01-28 2021-07-23 四川大学华西医院 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S2蛋白的单链抗体及其应用
WO2022161491A1 (zh) * 2021-01-29 2022-08-04 中国科学院上海巴斯德研究所 一种针对SARS-CoV-2病毒的中和性抗体
CN115177714A (zh) * 2021-02-04 2022-10-14 安域生物科技(杭州)有限公司 多靶点阻断肽在制备预防和治疗新冠病毒感染药物中的应用
CN112782401A (zh) * 2021-02-08 2021-05-11 聊城大学 一种体外快速检测新型冠状病毒的方法及应用
CN112979795B (zh) * 2021-02-26 2022-07-08 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用
CN112979795A (zh) * 2021-02-26 2021-06-18 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用
CN112794899A (zh) * 2021-03-16 2021-05-14 易康生物(苏州)有限公司 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆中和抗体及其应用
CN112794898B (zh) * 2021-03-16 2021-08-03 易康生物(苏州)有限公司 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其应用
CN112794898A (zh) * 2021-03-16 2021-05-14 易康生物(苏州)有限公司 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其应用
CN113045647B (zh) * 2021-03-22 2022-04-26 南京传奇生物科技有限公司 新冠病毒SARS-CoV-2的中和性抗体及其应用
CN113045647A (zh) * 2021-03-22 2021-06-29 南京传奇生物科技有限公司 新冠病毒SARS-CoV-2的中和性抗体及其应用
CN113150135A (zh) * 2021-04-14 2021-07-23 中山大学 抗新型冠状病毒受体结合区域中和抗体及其应用
CN113150135B (zh) * 2021-04-14 2022-09-20 中山大学 抗新型冠状病毒受体结合区域中和抗体及其应用
US11999777B2 (en) 2021-06-02 2024-06-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating or preventing SARS-CoV-2 infections and COVID-19 with anti-SARS-CoV-2 spike glycoprotein antibodies
CN113484522B (zh) * 2021-06-03 2022-05-10 上海捷诺生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒及其制备方法
CN113484522A (zh) * 2021-06-03 2021-10-08 上海捷诺生物科技有限公司 SARS-CoV-2中和抗体检测试剂盒及其制备方法
CN113563463A (zh) * 2021-06-11 2021-10-29 中国医学科学院病原生物学研究所 一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的中和纳米抗体及其应用
CN113563463B (zh) * 2021-06-11 2022-05-17 中国医学科学院病原生物学研究所 一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的中和纳米抗体及其应用
CN113501872A (zh) * 2021-06-22 2021-10-15 中国医学科学院病原生物学研究所 人源抗新型冠状病毒SARS-CoV-2中和性抗体SK1及其应用
CN113501872B (zh) * 2021-06-22 2022-05-24 中国医学科学院病原生物学研究所 人源抗新型冠状病毒SARS-CoV-2中和性抗体SK1及其应用
WO2023002944A1 (ja) * 2021-07-19 2023-01-26 公立大学法人福島県立医科大学 新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）およびＳＡＲＳコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）に結合する抗体
CN113512114A (zh) * 2021-08-09 2021-10-19 北京大学 针对SARS-CoV-2突变株的抗体及其用途
CN115703829A (zh) * 2021-08-16 2023-02-17 厦门大学 针对SARS-CoV-2的单域抗体及其用途
CN113388030A (zh) * 2021-08-17 2021-09-14 上海浙江大学高等研究院 单克隆抗体32c7及其制备方法和用途
CN115873103A (zh) * 2021-09-22 2023-03-31 东莞市朋志生物科技有限公司 一种抗新型冠状病毒n蛋白的抗体及其制备方法和用途
CN113912709A (zh) * 2021-09-28 2022-01-11 深圳国家感染性疾病临床医学研究中心 新型冠状病毒单克隆抗体及其应用
CN113912709B (zh) * 2021-09-28 2022-06-17 深圳国家感染性疾病临床医学研究中心 新型冠状病毒单克隆抗体及其应用
CN113943368A (zh) * 2021-10-15 2022-01-18 中国科学院微生物研究所 一种新型冠状病毒及其突变体的单克隆抗体及其应用
CN114316040A (zh) * 2022-03-02 2022-04-12 南昌大学 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其用途
CN114316040B (zh) * 2022-03-02 2024-03-29 南昌大学 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其用途
WO2023190851A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 公立大学法人福島県立医科大学 新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に結合する抗体
WO2023190852A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 公立大学法人福島県立医科大学 新型コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に結合する抗体
CN115028715A (zh) * 2022-06-23 2022-09-09 生工生物工程（上海）股份有限公司 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用
CN115028715B (zh) * 2022-06-23 2023-08-18 生工生物工程（上海）股份有限公司 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用
WO2023246578A1 (zh) * 2022-06-24 2023-12-28 成都科伦精准生物科技有限公司 特异性结合gpc3的嵌合抗原受体及其应用

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