CN112979795A - 抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医学领域,具体而言,涉及一种抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用。本发明所提供的组合产品具有高灵敏度,可识别新型冠状病毒N蛋白,用于开发新冠检测试剂。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学领域,具体而言,涉及一种抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用。
背景技术
冠状病毒(CoVs;冠状病毒科亚科,冠状病毒科,病毒目)是一组高度多样性,有包膜的,正义链,单链RNA病毒,在多种动物中引起不同严重程度的呼吸道,肠道,肝和神经系统疾病,包括人类。冠状病毒分为四个属:α冠状病毒,β冠状病毒(βCoV),γ冠状病毒和δ冠状病毒。在过去的12年中,出现了两种新型的β-冠状病毒,即严重的急性呼吸道综合症(SARS-CoV)和中东呼吸道综合症(MERS-CoV),这两种病毒会引起严重的人类疾病。
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)同源性与急性呼吸道综合症(SARS-CoV) 达到80%以上,其中的两者的结构蛋白Nucleocapsid protein同源性为94.1%,两者的Spike protein同源性为84.1%。感染新型冠状病毒后,人体会在约7天左右会产生针对病毒的IgM抗体,约14天左右会产生病毒的IgG抗体。产生的抗体是一种保护性的抗体,能促进人体从病毒感染中恢复和自愈。
新型冠状病毒IgM抗体的检测,同时结合新型冠状病毒IgG抗体的检测,可以用于辅助诊断新型冠状病毒疾病,是新冠核酸诊断试剂的有效补充。新冠 IgM和IgG检测试剂盒的开发,关键在于新型冠状病毒有效抗原的获得。新冠冠状病毒结构蛋白有刺突蛋白(Spike protein,跨膜蛋白,同源三聚体结构,如“冠状”分布于病毒表面,是介导病毒感染细胞的核心组分)、核衣壳蛋白 (Nucleoprotein,是新冠病毒结构蛋白中表达丰度最高的组分)、包膜蛋白 (Envelope Protein)和膜蛋白(Membrane Protein),其中根据蛋白的丰度和空间位置,用于IgM和IgG诊断的主要是核衣壳蛋白以及刺突蛋白。但由于核衣壳蛋白的保守性较强,且由于被包裹在病毒内,机体针对其产生的抗体特别是IgM 抗体比较晚。因此,新冠抗体诊断试剂特别是IgM抗体诊断,所使用的诊断抗原主要是刺突蛋白的相关片段。
现有的检测新型冠状病毒的方法有两种,其一是核酸检测,主要通过咽、鼻拭子样品提取基因组后,通过特定的探针和引物,使用qPCR的方法进行分析。虽然该方法时病原感染诊断的金标准,但是操作过程繁琐,涉及到基因提取、处理、分析的步骤,操作要求和时间较长。对操作人员操作水平要求较高,而且容易因为样本提取质量的影响等原因而造成假阴性。其二是通过重组表达新型冠状病毒结构蛋白如N抗原或者刺突蛋白,用于检测血液样本中的IgG、IgM 或者IgA抗体,以间接指示病毒的感染情况。但是检出时间相对较晚,IgM抗体一般需要在感染的7天后方可出测,IgG抗体一般需要在感染的14天后方可检出。
发明内容
本发明的第一方面涉及一种组合产品,其为两种新型冠状病毒N抗原的抗体或其抗原结合片段的组合,包含N-Ab-01和N-Ab-02;
所述N-Ab-01包含分别为SEQ ID NO:1、2或3所示氨基酸序列的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及分别为SEQ ID NO:4、5或6所示氨基酸序列的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3;
所述N-Ab-02包含分别为SEQ ID NO:7、8或9所示氨基酸序列的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及分别为SEQ ID NO:10、11或12所示氨基酸序列的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
可选的,如上所述的组合产品,所述N-Ab-01和N-Ab-02独立的选自鼠源抗体、人-鼠嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。
可选的,如上所述的组合产品,所述N-Ab-01进一步包含:
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:13、14、15或16所示的重链骨架区H-FR1、 H-FR2、H-FR3及H-FR4;
和/或
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:17、18、19或20所示的轻链骨架区L-FR1、 L-FR2、L-FR3及L-FR4;
所述N-Ab-02进一步包含:
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:21、22、23或24所示的重链骨架区H-FR1、 H-FR2、H-FR3及H-FR4;
和/或
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:25、26、27或28所示的轻链骨架区L-FR1、 L-FR2、L-FR3及L-FR4。
可选的,如上所述的组合产品,所述N-Ab-01和N-Ab-02的重链恒定区独立的选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的恒定区;
轻链恒定区独立的选自κ或λ链。
可选的,如上所述的组合产品,所述重链恒定区和轻链恒定区的种属来源选自牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
本发明的第二方面涉及核酸,其编码如上所述的组合产品中的N-Ab-01和 N-Ab-02。
本发明的第三方面涉及载体,其包含如上所述的核酸。
本发明的第四方面涉及宿主细胞,其包含:如上所述的核酸;或如上所述的载体。
本发明的第五方面涉及新冠肺炎检测试剂盒,其含有如上所述的组合产品。
可选的,如上所述的试剂盒,其还包含固相支持物;且所述N-Ab-01和 N-Ab-02其中任一种包被于所述固相支持物上,另一种为游离抗体。
可选的,如上所述的试剂盒,所述游离抗体与信号物质缀合;
或;
所述试剂盒还包含针对所述游离抗体的二抗,且所述二抗与信号物质缀合。
可选的,如上所述的试剂盒,所述固相支持物为试管、EP管、多孔板、微量反应板凹孔、小珠或小圆片。
本发明的第六方面涉及新冠肺炎检测试纸条,包括样品垫、结合垫、反应膜和吸收垫,所述反应膜上设置有检测区和质检区;
如上所述N-Ab-01和N-Ab-02其中任一种包被于样品垫上,且与信号物质缀合;另一种与所述检测区缀合;
所述质检区缀合有能够特异性结合样品垫抗体的二抗或新冠N抗原。
可选的,如上所述的试剂盒,或如上所述的试纸条,所述信号物质是金属粒子、荧光标记、发色团标记、电子致密标记、化学发光标记、放射性标记或酶。
本发明的第七方面涉及如上所述的组合产品在制备SARS-CoV-2抗体检测试纸条或试剂盒中的应用。
可选的,如上所述的应用,所述检测的受试样品选自生物组织或其灌洗液、细胞、体液,进一步选自血液、血清、血浆、抗凝血、细胞培养上清、唾液、精液、羊水、绒毛、组织或组织裂解液、咽拭子、鼻拭子、眼结膜拭子、粪便标本、粪便、尿液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、痰液。
本发明的有益效果为:
本发明所提供的组合产品具有高灵敏度,可识别新型冠状病毒N蛋白,用于开发新冠检测试剂。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一个实施例中抗原的N抗原SDS-PAGE结果图;A.N抗原全长;B.N抗原RNA-binding结构域;C.N抗原Dimerization结构域;
图2为本发明一个实施例中所构建的pFUSE-CHIg-mG1表达载体图谱;
图3为本发明一个实施例中所构建的pFUSE2-CLIg-mk表达载体图谱;
图4为本发明一个实施例中制备的单克隆抗体SDS-PAGE电泳;A. N-Ab-01;B.N-Ab-02;
图5为本发明一个实施例中N-Ab-01亲和力检测结果;
图6为本发明一个实施例中N-Ab-02亲和力检测结果。
具体实施方式
现将详细地提供本发明实施方式的参考,其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上,对本领域技术人员而言,显而易见的是,可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如,作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中,来产生更进一步的实施方式。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明涉及组合产品,其为两种新型冠状病毒N抗原的抗体或其抗原结合片段的组合,包含N-Ab-01和N-Ab-02;
所述N-Ab-01包含分别为SEQ ID NO:1、2或3所示氨基酸序列的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及分别为SEQ ID NO:4、5或6所示氨基酸序列的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3;
所述N-Ab-02包含分别为SEQ ID NO:7、8或9所示氨基酸序列的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及分别为SEQ ID NO:10、11或12所示氨基酸序列的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
该组合产品中,N-Ab-01和N-Ab-02是通常分别包装的配对抗体,并且通常其中一种与固相支持物缀合。N-Ab-01和N-Ab-02配合使用时,灵敏度高,检测效果好,可作为新型冠状病毒抗原检测试剂的核心原材料应用。
在本发明中,“新型冠状病毒N抗原的抗体或其抗原结合片段”此技术术语是结合特定新型冠状病毒N抗原的蛋白,其泛指包含互补决定区(CDR区)的一切蛋白及蛋白片段,特别是全长抗体或抗体功能片段。“抗体”或“全长抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体,术语“新型冠状病毒N抗原结合片段”是包含抗体CDR的一部分或全部的物质,其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合至抗原。此类片段具生物活性,因为其结合至靶抗原,且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位,具体的,其可以为单链抗体或结构域抗体,进一步为F(ab’)2、Fab、scFv以及双特异抗体中的一种。
术语“互补性决定区”或“CDR”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区,如Kabat等人所定义(Kabat等人,Sequences of proteins of immunological interest,5th Ed"US Department of Health and Human Services,NIH,1991,和后来的版本)。本申请采用Kabat编号系统对CDR进行定义。有三种重链CDR和三种轻链CDR。此处,取决于情况,术语“CDR”和“CDRs”用于指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。在另一具体实施方式中,CDR区或CDR是指IMGT定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区。
在一些实施方式中,所述N-Ab-01和N-Ab-02独立的选自鼠源抗体、人-鼠嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。
在一些实施方式中,所述N-Ab-01进一步包含:
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:13、14、15或16所示的重链骨架区H-FR1、 H-FR2、H-FR3及H-FR4;
和/或
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:17、18、19或20所示的轻链骨架区L-FR1、 L-FR2、L-FR3及L-FR4。
在一些实施方式中,所述N-Ab-02进一步包含:
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:21、22、23或24所示的重链骨架区H-FR1、 H-FR2、H-FR3及H-FR4;
和/或
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:25、26、27或28所示的轻链骨架区L-FR1、 L-FR2、L-FR3及L-FR4。
本领域技术人员可通过本发明所提供的各种CDR与FR组装得到抗体的轻链和重链可变区,组装顺序为:FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
在一些实施方式中,所述N-Ab-01和N-Ab-02的重链恒定区独立的选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的恒定区;
在一些实施方式中,轻链恒定区独立的选自κ或λ链。
在一些实施方式中,所述重链恒定区和轻链恒定区的种属来源选自牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
本发明还涉及核酸,其编码如上所述组合产品中的N-Ab-01和N-Ab-02。
核酸通常是RNA或DNA,核酸分子可以是单链或双链的,但优选是双链 DNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时,核酸是“有效连接的”。例如,如果启动子或增强子影响编码序列的转录,那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。当其连入载体时优选采用DNA核酸。
核酸也可以是组合物,例如其为编码N-Ab-01轻链、重链,N-Ab-02轻链、重链核酸的组合物。此外,鉴于抗体为膜蛋白,所以核酸通常带有信号肽序列。
本发明还涉及载体,其包含如上所述的的核酸。
术语“载体(vector)”是指,可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时,载体称为表达载体。载体可以通过转化,转导或者转染导入宿主细胞,使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的,包括但不限于:质粒;噬菌粒;柯斯质粒;人工染色体,例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC) 或P1来源的人工染色体(PAC);噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于,逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。在一些实施方式中,本发明所述载体中包含基因工程中常用的调控元件,例如增强子、启动子、内部核糖体进入位点(IRES)和其他表达控制元件(例如转录终止信号,或者多腺苷酸化信号和多聚U序列等)。
载体也可以为组合物,例如,可以将抗体轻链和重链的不同核酸位于不同载体上。
本发明还提供细胞,其包含如上所述的核酸或如上所述的载体。
适用于表达本发明的抗原结合蛋白的宿主细胞或细胞系示例包括:哺乳动物细胞诸如NS0、Sp2/0、CHO、COS、HEK、成纤维细胞和骨髓瘤细胞。可以使用人细胞,因而允许分子用人糖基化模式来修饰。或者,可以采用其他真核细胞系。合适的哺乳动物宿主细胞的选择,以及用于转化、培养、扩增、筛选和产物产生和纯化的方法,是本领域已知的。
如果需要,本领域技术人员已知的原核细胞(如大肠杆菌),酵母细胞菌株以及昆虫细胞,例如果蝇和鳞翅目昆虫和病毒表达系统,也可用作宿主细胞。
本发明还涉及新冠肺炎检测试剂盒,其含有如上所述的组合产品。
在一些实施方式中,所述试剂盒还包含固相支持物;且所述N-Ab-01和 N-Ab-02其中任一种包被于所述固相支持物上,另一种为游离抗体。
多孔板优选为酶标板,其含有的孔位可以为8、16、32、48、64、96或更多。
在一些实施方式中,所述游离抗体与信号物质缀合;
在一些实施方式中,所述试剂盒还包含针对所述游离抗体的二抗,且所述二抗与信号物质缀合。
在一些实施方式中,所述二抗的种属来源与被检测样品的种属来源不同,常见的可以选择以下种属来源:大鼠、小鼠、犬、山羊、绵羊、马、驴、兔、鸡。
在一些实施方式中,所述固相支持物为试管、EP管、多孔板、微量反应板凹孔、小珠或小圆片。
在本发明中,术语“微粒”可以为球体、近球体、立方体、多面体或不规则形状。微球的直径优选为10nm~1mm,例如100nm、500nm、1μm、10μm、 100μm、500μm;优选为400nm~10μm。
微粒优选为磁微粒,其成分中含有磁性物质。磁性物质可以为金属(金属单质或合金)、非金属,或金属与非金属所形成的复合物。金属例如铁、铝镍钴金属等;非金属例如铁氧体非金属(优选为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子);金属与非金属所形成的复合物例如钕铁硼橡胶磁复合材料。
在一些实施方式中,所述新冠肺炎检测试剂盒中还可以包含样品预处理试剂(如样品纯化富集试剂,裂解液等)、清洗液(如PBS等)、缓冲液、针对信号物质的显色试剂(如信号物质为辣根过氧化物酶,则显色试剂为ECL)等。
本发明还涉及新冠肺炎检测试纸条,包括样品垫、结合垫、反应膜和吸收垫,所述反应膜上设置有检测区和质检区;
如上所述组合产品中所述N-Ab-01和N-Ab-02其中任一种包被于样品垫上,且与信号物质缀合;另一种与所述检测区缀合;
所述质检区缀合有能够特异性结合样品垫抗体的二抗或新冠N抗原。
在一些实施方式中,所述信号物质是胶体金、荧光素、荧光微球、吖啶酯、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶或β-半乳糖苷酶。下面非限定部分列出这些标记:
·产生可检测信号的酶,如通过比色法、荧光和发光来检测,如辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶,β-半乳糖苷酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
·发色团,如荧光、量子点、荧光微球、发光化合物和染料。
·具有能被电子显微镜或通过其电特性,如传导性、电流分析、电压测量和电阻等检测的电子密度的基团。
·可检测基团,如其分子大小足以诱导在其物理和/或化学特性上可检测的修饰;这种检测可通过光学方法(如衍射、表面胞质团共振,表面变异和接触变异角度)或物理方法(如原子力谱学和隧道效应)实现。
·电子致密物质,如放射性分子(如32P,35S或125I)。
本发明还涉及如上所述的组合产品在制备SARS-CoV-2抗体检测试纸条或试剂盒中的应用。
在一些实施方式中,所述检测的受试样品选自生物组织或其灌洗液、细胞、体液,进一步选自血液、血清、血浆、抗凝血、细胞培养上清、唾液、精液、羊水、绒毛、组织或组织裂解液、咽拭子、鼻拭子、眼结膜拭子、粪便标本、粪便、尿液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、痰液。
上述用途的受试者可以指患者或怀疑携带有SARS-CoV-2的动物,特别是哺乳动物,例如蝙蝠、果子狸;优选为灵长类动物,更优选为人。
使用本发明的组合产品,制备新型冠状病毒N抗原检测试剂盒或试纸条,可有效提高试剂的灵敏度和检出率。
本发明还涉及一种检测SARS-CoV-2的方法,包括:
使用如上所述的多肽、试剂盒或试纸条检测SARS-CoV-2N抗原。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。
实施例1免疫原制备
分别合成新型冠状病毒核衣壳抗原全长序列、RNA-binding结构域、Dimerization结构域,装载于pET28a载体中,并通过BL21(DE3)重组表达后,利用亲和层析和离子交换层析法制备,获得免疫原。
氨基酸序列组成如下:
(1)新型冠状病毒全长N抗原
MSDNGPQNQR NAPRITFGGP SDSTGSNQNG ERSGARSKQR RPQGLPNNTA
SWFTALTQHG KEDLKFPRGQ GVPINTNSSP DDQIGYYRRA TRRIRGGDGK
MKDLSPRWYF YYLGTGPEAG LPYGANKDGI IWVATEGALN TPKDHIGTRN
PANNAAIVLQ LPQGTTLPKG FYAEGSRGGS QASSRSSSRS RNSSRNSTPG
SSRGTSPARM AGNGGDAALA LLLLDRLNQL ESKMSGKGQQ QQGQTVTKKS
AAEASKKPRQ KRTATKAYNV TQAFGRRGPE QTQGNFGDQE LIRQGTDYKH
WPQIAQFAPS ASAFFGMSRI GMEVTPSGTW LTYTGAIKLD DKDPNFKDQV
ILLNKHIDAY KTFPPTEPKK DKKKKADETQ ALPQRQKKQQ TVTLLPAADL
DDFSKQLQQS MSSADSTQA
(2)新型冠状病毒N抗原RNA-binding结构域
RPQGLPNNTASWFTALTQHGKEDLKFPRGQGVPINTNSSPDDQIGYYRRATRRIRGGD GKMKDLSPRWYFYYLGTGPEAGLPYGANKDGIIWVATEGALNTPKDHIGTRNPANNAAIVLQLPQGTTLPKGFYAEGSRGGSQASSRS
(3)新型冠状病毒N抗原Dimerization结构域
PRQKRTATKAYNVTQAFGRRGPEQTQGNFGDQELIRQGTDYKHWPQIAQFAPSASAFF GMSRIGMEVTPSGTWLTYTGAIKLDDKDPNFKDQVILLNKHIDAYK
上述三个抗原的SDS-PAGE结果图如图1所示。
实施例2小鼠免疫及杂交瘤细胞筛选
使用制备的新型冠状病毒N抗原、N抗原RNA-binding结构域及N抗原Dimerization结构域分别免疫适龄BalB/C小鼠,使用各免疫原通过ELISA检测小鼠尾血,直至效价达到104时停止免疫,取出小鼠脾脏,处理后与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,并进而通过有限稀释法筛选阳性杂交瘤细胞株。
实施例3单克隆抗体制备
扩增相应的阳性杂交瘤细胞株,提取其mRNA后利用RT-PCR的方法扩增其可变区的基因序列,Sanger法测序确认后,将其分别构建至重链及轻链表达载体pFUSE-CHIg-mG1及pFUSE2-CLIg-mk(载体图谱分别如图2和图3所示),提取去内毒素质粒,轻链、重链按照适当的比例瞬时转染CHO细胞,约48h后收集培养上清物,经Protein A亲和层析和离子交换层析纯化,获得单克隆抗体。制备的单克隆抗体SDS-PAGE电泳图如图4所示。
实施例4亲和力检测
使用Biacore T200检测制备单克隆抗体的亲和力,CM5芯片上固定新型冠状病毒全长N蛋白,使用不同浓度的待测单克隆抗体,按照合适的时间与固相化的N蛋白进行反应,反应所得的动力学曲线通过软件进行拟合,亲和力检测结果如图5和图6所示。获得N-Ab-01抗体亲和力为1.694×10-10,其中Kd为 1.968×10-4,Ka为1.162×106;获得N-Ab-02抗体亲和力为1.646×10-10,其中Kd 为2.03×10-3,Ka为1.233×107。
实施例5灵敏度检测
将N-Ab-01按照适当的浓度包被至酶标板上,BSA封闭后,与不同浓度、不同片段及不同来源的N抗原反应后,加入合适浓度的HRP标记的N-Ab-02,使用TMB进行显色。结果显示,0.1ng/mL水平的抗原都能获得理想的信号,与阴性对照信噪比大于10。
表1单克隆抗体灵敏度检测结果(双抗夹心法)
抗原1:原核表达N抗原全长;抗原2:原核表达N抗原Dimerization结构域;抗原3:真核表达N抗原全长。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司
<120> 抗体组合产品及其在新冠肺炎检测中应用
<160> 28
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<211> 23
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 25
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys
20
<210> 26
<211> 15
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 26
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 27
<211> 32
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 27
Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 28
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
Claims (10)
1.组合产品,其为两种新型冠状病毒N抗原的抗体或其抗原结合片段的组合,包含N-Ab-01和N-Ab-02;
所述N-Ab-01包含分别为SEQ ID NO:1、2或3所示氨基酸序列的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及分别为SEQ ID NO:4、5或6所示氨基酸序列的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3;
所述N-Ab-02包含分别为SEQ ID NO:7、8或9所示氨基酸序列的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及分别为SEQ ID NO:10、11或12所示氨基酸序列的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
2.根据权利要求1所述的组合产品,所述N-Ab-01进一步包含:
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:13、14、15或16所示的重链骨架区H-FR1、H-FR2、H-FR3及H-FR4;
和/或
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:17、18、19或20所示的轻链骨架区L-FR1、L-FR2、L-FR3及L-FR4;
所述N-Ab-02进一步包含:
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:21、22、23或24所示的重链骨架区H-FR1、H-FR2、H-FR3及H-FR4;
和/或
氨基酸序列分别为SEQ ID NO:25、26、27或28所示的轻链骨架区L-FR1、L-FR2、L-FR3及L-FR4。
3.核酸,其编码权利要求1或2中的N-Ab-01和N-Ab-02。
4.载体,其包含权利要求3所述的核酸。
5.宿主细胞,其包含:
根据权利要求3所述的核酸;或
权利要求4所述的载体。
6.新冠肺炎检测试剂盒,其含有权利要求1或2所述的组合产品;
可选的,所述试剂盒还包含固相支持物;且所述N-Ab-01和N-Ab-02其中任一种包被于所述固相支持物上,另一种为游离抗体;
可选的,所述游离抗体与信号物质缀合;
或;
所述试剂盒还包含针对所述游离抗体的二抗,且所述二抗与信号物质缀合;
可选的,所述固相支持物为试管、EP管、多孔板、微量反应板凹孔、小珠或小圆片。
7.新冠肺炎检测试纸条,包括样品垫、结合垫、反应膜和吸收垫,所述反应膜上设置有检测区和质检区;
权利要求1或2所述N-Ab-01和N-Ab-02其中任一种包被于样品垫上,且与信号物质缀合;另一种与所述检测区缀合;
所述质检区缀合有能够特异性结合样品垫抗体的二抗或新冠N抗原。
8.根据权利要求6所述的试剂盒,或权利要求7所述的试纸条,所述信号物质是金属粒子、荧光标记、发色团标记、电子致密标记、化学发光标记、放射性标记或酶。
9.权利要求1或2所述的组合产品在制备SARS-CoV-2抗体检测试纸条或试剂盒中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,所述检测的受试样品选自生物组织或其灌洗液、细胞、体液,进一步选自血液、血清、血浆、抗凝血、细胞培养上清、唾液、精液、羊水、绒毛、组织或组织裂解液、咽拭子、鼻拭子、眼结膜拭子、粪便标本、粪便、尿液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、痰液。
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